WO2019016492A1 - Composition comprenant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques - Google Patents

Composition comprenant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques Download PDF

Info

Publication number
WO2019016492A1
WO2019016492A1 PCT/FR2018/051883 FR2018051883W WO2019016492A1 WO 2019016492 A1 WO2019016492 A1 WO 2019016492A1 FR 2018051883 W FR2018051883 W FR 2018051883W WO 2019016492 A1 WO2019016492 A1 WO 2019016492A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
surfactants
composition
concentration
lipopeptides
iturinic
Prior art date
Application number
PCT/FR2018/051883
Other languages
English (en)
Inventor
François COUTTE
Arnaud DELECROIX
Abdelnasser EL GHAZOUANI
Philippe Jacques
Original Assignee
Lipofabrik
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lipofabrik filed Critical Lipofabrik
Priority to JP2020502168A priority Critical patent/JP2020527348A/ja
Priority to CA3069760A priority patent/CA3069760A1/fr
Priority to EP18758926.2A priority patent/EP3654945A1/fr
Priority to BR112020001291-2A priority patent/BR112020001291A2/pt
Priority to US16/632,061 priority patent/US20200147169A1/en
Priority to CN201880048741.3A priority patent/CN110944626A/zh
Priority to AU2018303287A priority patent/AU2018303287A1/en
Publication of WO2019016492A1 publication Critical patent/WO2019016492A1/fr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/195—Proteins from microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/10—General cosmetic use
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Definitions

  • the invention relates to compositions having a high concentration of iturinic lipopeptides.
  • the compositions according to the invention have a concentration of iturinic lipopeptides of between 5 and 200 g / l, and are stable and homogeneous thanks to the presence of surfactants and / or hydrotropic molecules.
  • Iturinic lipopeptides are molecules produced by different strains of Bacillus sp. and more particularly the strains of Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus megaterium, Bacillus thermoamylovorans, Bacillus thermocloacae, Bacillus firmus, Bacillus mojavensis, Bacillus velenzensis, Bacillus valissmortis.
  • This family of molecules includes iturin A, AL and C, mojavensin, mycosubtillin and bacillomycins A, B, C, D, F, L and Le. These components are known mainly for their antifungal power but they also have antibacterial properties. These properties come from their amphiphilic nature which allows them to interact with different membrane constituents.
  • the iturinic molecules can be produced in solution in the fermentation broth by the various strains mentioned above, then they can be recovered according to methods known to those skilled in the art in order to extract, concentrate and purify them. from a culture supernatant. Nevertheless, their behavior in solution is dependent on their concentration. Indeed, it is known that above the critical micellar concentration (situated between 10 and 20 mg / L), iturinic compounds like the other lipopeptide-type molecules form more or less complex micelles.
  • these micelles will evolve to form increasingly complex structures when increasing their concentration, from an average size of 10 nm to concentrations below 500 mg / L (Jauregi et al., 2013), to vesicular structures with an average diameter of 150 nm above 1 g / L (Grau et al., 2001), then to lamellar bilayer-type superstructures at a concentration of 10 g / L (Hamley et al., 2013). As revealed by this work on mycosubtiline (Hamley et al., 2013) or iturin A (Grau et al., 2001), these superstructures are not found in other lipopeptide molecules of the surfactin family, for example. Moreover increasing the concentration of iturinic compounds both to increase their interaction with the proteins contained in the culture medium and thus to increase the size of the structures leading to make them insoluble (Jauregi et al., 2013).
  • the prior art has few compositions having a concentration of iturinic heptopeptides greater than 5 g / L and even less having a concentration greater than 20 g / L, mainly because it is known to those skilled in the art that iturinic itepopeptides tend to form miceiies at high concentration, making the compositions unstable due to the miceiies of iturine preventing their good solubility.
  • JP2003 128512 SHOWA DENKO
  • Cosmetic compositions including surfactants, in which are added iurine and surfactin for their antimicrobial properties, but stability and The homogeneity ofiturine in these compositions is not mentioned, since these are not the main compound of the various compositions.
  • the inventors have shown that it is possible to prepare a stable and homogeneous composition in which the concentration of iturinic lipopeptides is greater than 5 g / L by the addition of molecules having surfactant properties. Indeed, the inventors have demonstrated that the surfactants make it possible to improve the solubilization of iturinic lipopeptides beyond 5 g / l, in particular at 10 g / l and 20 g / l and up to 50, 100, even 200 g / L without appearance of precipitate or gel.
  • the present invention finds particular applications in the production of concentrated solutions of biopesticide antifungal, antibacterial or biosurfactant molecules for the phytosanitary industry, but also in the fields of the food, cosmetic, pharmaceutical and petroleum industries.
  • the general concept of the invention relates to a stable and homogeneous liquid composition
  • a lipopeptide mixture in which the concentration of iturinic lipopeptides is greater than 5 g / l.
  • the lipopeptides are associated with molecules having surface-active properties, by virtue of which the concentrated composition of iturinic lipopeptides remains stable and homogeneous.
  • a first subject of the invention relates to a stable and homogeneous composition
  • a stable and homogeneous composition comprising a concentration of iturinic lipopeptides greater than 20 g / l and one or more surfactants chosen from the families of anionic surfactants, nonionic surfactants or oils. .
  • stable and homogeneous composition is meant a composition which does not comprise a precipitate and which remains homogeneous at temperatures of between 4 ° C. and 40 ° C.
  • the absence of caking is also an important criterion, that is to say that the solution is liquid and not in gelled form.
  • liquid is understood in the sense of the invention as a fluid composition that is to say a composition whose viscosity (the ratio between the shear stress and the shear rate) is low.
  • the homogeneous term is understood as a mixture of which the various constituents can not be distinguished with the naked eye after stirring. Homogeneity can be assessed by the uniformity of the concentrations at any point in the mixture and the absence of structures or micro-structures (mass gain or precipitate) visible to the eye. Such homogeneity of the mixture is advantageous because it allows uniform concentrations of iturinic lipopeptides, which can then be diluted in aqueous solution.
  • a stable and homogeneous mixture is a mixture having a uniform concentration which remains constant over time.
  • the composition according to the invention comprises between 20 and 200 g / L of iturinic lipopeptides. It may comprise, for example, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 or 200 g / L of iturinic lipopeptides.
  • the concentration of iturinic lipopeptides of the composition is between 20 and 150 g / l, or between 20 and 100 g / l. Even more preferably, the concentration of iturinic lipopeptides of the composition is greater than 50 g / l, that is to say for example between 50 and 150 g / l, or between 50 and 100 g / l or between 50 and 80 g / L.
  • iturin family molecules is meant iturin A, AL and C, mojavensin, mycosubtilin and bacillomycins A, B, C, D, F, L and Le.
  • compositions of the present invention include molecules having surfactant properties.
  • molecules having surfactant properties also called “surfactants” or simply “surfactants” is meant especially amphiphilic molecules, surfactants, lipopeptides, such as, for example, surfactin, fengycin (or plipastatin), chemical surfactants and biological surfactants, such as rhamnolipids, polysaccharides, etc.
  • surfactants also called “surfactants” or simply “surfactants” is meant especially amphiphilic molecules, surfactants, lipopeptides, such as, for example, surfactin, fengycin (or plipastatin), chemical surfactants and biological surfactants, such as rhamnolipids, polysaccharides, etc.
  • surfactants also called “surfactants” or simply “surfactants” is meant especially amphiphilic molecules, surfactants, lipopeptides, such as, for example, surfactin, fengycin (or plipastatin), chemical surfactants and biological surfactants, such
  • surfactants mention may be made of heparin, hyaluronic acid, dextran, amylose, chitosan, anionic surfactants derived from amino acids, nonionic surfactants derived from poly-glycosides, surfactants, hydrotropic active agents, lipopeptides such as isomers of surfactin and / or the isomers of fengycin (or plipastatin), rhamnolipids and vegetable oils.
  • the invention relates to anionic surfactants, nonionic surfactants and oils.
  • the surfactants of the family of anionic surfactants are chosen from: surfactins, fengycins, or amino acid derivatives.
  • Surfactin means any molecule of the "family of surfactins", namely surfactins A, B, C, lichenysine and pumilacidine.
  • fengycin any molecule of the "fengycin family", is meant fengycins A and B, plipastatin A and B and agrastatin.
  • the surfactants of the family of nonionic surfactants are chosen from: fatty alcohol axalkylate, pentylene glycol and its derivatives, hydrotropic molecules of alkylpolyglycoside type (alkypolyglycoside and alkylethoxypolyglycoside, polyglycoside texturing agent-type molecules (xanthan gum , gum arabic, gum tragacanth, guar gum, locust bean gum, tamarind gum, pectin, gellan gum, carrageenates, agar-agar, alginates.)
  • the surfactants of the family of oils are chosen from: oils and extracts of modified oils (acifidies, methylated, esterified), especially derived from: almond, peanut, argan, avocado, rapeseed, lorenzo, neem, hazelnut, cashew nut, macadamia nut, olive, pistachio, rice, oleic sunflower, camelina, flax, borage, safflower, hemp, cotton, wheat germ, corn, nut, flaxseed, evening primrose, barley, pumpkin seeds, grape seeds, peas, sesame , soya, sunflower.
  • the iturinic lipopeptides will be micro-emulsified in these oily compounds or fats in order to obtain the surfactant effect of the oils and extracts of modified oils.
  • compositions of the invention may further contain adjuvants such as lipid sources, salts and solvents. These adjuvants can participate in the solubilization without being surfactants.
  • adjuvants such as lipid sources, salts and solvents.
  • solvents mention may be made of ethanol, methanol, acetonitrile, dimethyl sulfoxide, butanol, pentanol and acetone.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising between 5 and 50 g / l of iturinic lipopeptides and between 1 and 40 g / l of surfactin.
  • iturinic lipopeptides are mycosubtilines.
  • the amount of iturinic lipopeptides is preferably between 10 g / l and 50 g / l, preferably between 20 and 50 g / l, more preferably between 30 and 50 g / l.
  • the invention relates to a composition comprising between 5 and 100 g / l of iturinic lipopeptides, between 1 and 40 g / l of surfactin and between 1 and 100 g / l of fengycin (or plipastatin).
  • the amount of iturinic lipopeptides is preferably between 10 and 80 g / l, preferably between 20 and 80 g / l, most preferably between 30 and 80 g / l.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising between 5 and 100 g / l of iturinic lipopeptides, between 1 and 40 g / l of surfactin and between 1 and 30 g / l of chemical surfactants.
  • the amount of iturinic lipopeptides is preferably between 10 and 80 g / l, preferably between 20 and 80 g / l, preferably between 30 and 80 g / l.
  • the chemical surfactants may be nonionic surfactants of the family of polyglycosides or anionic surfactants derived from amino acids.
  • the chemical surfactants consist of a mixture of anionic surfactants and nonionic surfactants.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising between 5 and 100 g / l of iturinic lipopeptides, between 1 and 40 g / l of surfactin, between 1 and 100 g / l of fengycin (or plipastatin) and between 1 and 30 g / l of chemical surfactants.
  • the amount of iturinic lipopeptides is preferably between 10 and 80 g / l, preferably between 20 and 80 g / l, preferably between 30 and 80 g / l.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising between 5 and 100 g / L of micro-emulsified iturinic lipopeptides in oily compounds or fatty substances, for example vegetable oil.
  • the oil concentration is between 1% and 100%, preferably between 50% and 100%, particularly preferably between 80% and 100%.
  • corn oil but also modified almond, peanut, argan, avocado, rapeseed, lorenzo, neem, hazelnut, and cashew nut oils and extracts, macadamia nut, olive, pistachio, rice, oleic sunflower, camelina, flax, borage, safflower, hemp, cotton, wheat germ, corn, nut, flaxseed, evening primrose, barley, pumpkin seeds, grape seeds, peas, sesame , soy, and sunflower.
  • the oils used are derived from peanut, olive, oleic sunflower, flax, corn, nuts, soya and sunflower. Such oils present the advantage of being available in large quantities and having a low cost. Even more preferably, the oil used is derived from corn peanuts or sunflower.
  • such a composition comprises between 10 and 80 g / l, preferably between 20 and 80 g / l of mycosubtiline, preferably between 30 and 80 g / l and very preferably between 50 and 80 g / l. g / L of mycosubtilin.
  • composition according to the invention comprises:
  • the composition comprises about 3% of lipopeptides (1.25% of mycosubtilin and 1.85% of surfactin), 1.5% of a non-surfactant. ionic derivative derived from poly-glycosides and 1.5% of anionic surfactant derived from amino acids.
  • the composition comprises about 5% lipopeptides (2.45% mycosubtiline and 2.65% surfactin) and 3-8% fengycin (or plipastatin).
  • the composition comprises between 30 and 80 g / l of mycosubtiline and 30 to 80 g / l of fengycin (or plipastatin).
  • the composition comprises a concentration of iturinic lipopeptides is between 20 and 100g / l and the surfactants are a vegetable oil extract, derivatives of polyglycosides and surfactin.
  • the composition comprises a concentration of iturinic lipopeptides is between 20 and 100g / l and the surfactants are an extract of methylated vegetable seed oil and polyglycerol ester of coconut oil (Synergen OS TM) .
  • the composition comprises a concentration of iturinic lipopeptides of between 20 and 100 g / l and the surfactants are a mixture of alkylpolyglucoside (Simulsol TM) amino acid derivative (Proteol TM) and surfactin.
  • the surfactants are a mixture of alkylpolyglucoside (Simulsol TM) amino acid derivative (Proteol TM) and surfactin.
  • composition comprises a concentration of iturinic lipopeptides is between 20 and 100g / l and the surfactants are a mixture of fatty alcohol oxalkylate (Emulsogen TM) and surfactin.
  • surfactants are a mixture of fatty alcohol oxalkylate (Emulsogen TM) and surfactin.
  • composition comprises a concentration of iturinic lipopeptides is between 20 and 100g / l and the surfactants are a mixture of vegetable oil, xanthan gum and surfactin.
  • compositions according to the invention may be ready for use or in concentrated form; concentrated solutions can be diluted before use.
  • a second object according to the invention relates to a dehydrated composition comprising a lipopeptide mixture in which the concentration of iturinic lipopeptides is greater than 0.5%. In a preferred embodiment, the concentration of iturinic lipopeptides is greater than 2%.
  • compositions are in the form of powder or lyophilizate and are "ready to use”; indeed, it is sufficient to rehydrate in 100 ml of solution to obtain a composition whose concentration of iturinic lipopeptides is at least 5 g / l. In a preferred embodiment, such compositions have a concentration of iturinic lipopeptides of at least 20 g / L.
  • the concentrations by dry weight of the various components of these dehydrated solutions make it possible to obtain liquid compositions whose concentration of iturinic lipopeptides is greater than 5 g / l which are stable and homogeneous in accordance with the invention. In a preferred embodiment, the concentration of iturinic lipopeptides is greater than 20 g / l.
  • a third subject of the invention relates to a method for preparing a composition comprising a lipopeptide mixture in which the concentration of iturinic lipopeptides is greater than 5 g / l. In a preferred embodiment, the concentration of iturinic lipopeptides in the mixture is 20 g / l.
  • the iturinic lipopeptides of the composition can be obtained by fermentation of a strain of Bacillus sp. and harvested and concentrated from the culture supernatant.
  • the compositions according to the invention can be prepared using lipopeptide preparations commercially available in powder form. These starting powders contain a variable amount of iturinic lipopeptides which may range from 10 to more than 80%, for example 15% or 75%. These powders may contain a mixture of mycosubtilin and surfactin in a ratio of 30/70 to 70/30, or even 95/5, for example 35/65, 40/60, 45/55 or 50/50. .
  • At least one surfactant must be added to a solution containing a high content of iturinic lipopeptides.
  • the process for preparing such compositions may include an additional dehydration step so as to provide a ready-to-use powder form composition, the characteristics of which are in accordance with the compositions of the present invention when rehydrated.
  • the method makes it possible to prepare liquid or solid solutions (in the form of powder or lyophilisate). Such concentrated solutions are particularly suitable for storage and distribution. They are to be diluted before use. As a result, a composition according to the invention can be obtained by dissolving a powder allowing the reconstitution of a liquid composition as defined above.
  • compositions according to the invention find their applications in the field of agri-food, phytosanitary and cosmetic as well as in the medical and pharmaceutical field.
  • the lipopeptides are obtained from an aerobic fermentation process of a Bacillus strain derived from the strain Bacillus subtilis ATCC 6633 for the production of lipopeptides iturinic and strains derived from the Bacillus subtilis 168 strain for the production of surfactin and / or fengycin (or plipastatin).
  • the culture is carried out in a medium containing a source of carbon (glucose, sucrose, etc.), a source of nitrogen (ammonium sulphate, peptone, free amino acids, yeast extract, etc.) and trace elements and salts with stirring at 30 ° C.
  • the pH is maintained at a value of 7.
  • the crop is harvested after 48 to 72 hours. It is then centrifuged or filtered to remove the cells.
  • the culture supernatant is then concentrated.
  • compositions with a high content of iturinic lipopeptides from culture supernatants
  • the culture supernatants can be concentrated.
  • concentration of the culture supernatant can be obtained by any method known to those skilled in the art, in particular:
  • the supernatant is concentrated by evaporation under vacuum. For example 20L are introduced into a rotavapor and concentrated to 1 to 2L.
  • the percentage of lipopeptides obtained at the end of these two examples of preparation is of the order of 0.5 to 20% (weight / volume).
  • composition 1 which contains only iturinic lipopeptides.
  • the surfactants added in the compositions 2 to 13 are:
  • composition 2 10% fengycins (composition 2)
  • soybean lecithin (4%) and poly-glycoside derivatives (0.1%) (Elvis TM / Xanthan Gum) (composition 4)
  • composition 5 of methyl vegetable seed oil extract and polyglycerol ester derived from coconut oil (0.2%) (Synergen OS TM) (composition 5)
  • nonionic surfactant of the fatty alcohol oxalkylate (0.2%) type (Emulsogen TM) (composition 6)
  • nonionic surfactant pentylene glycol 50%) (composition 7)
  • composition 10 surfactines at 4% and fengycins at 10% (composition 10)
  • composition 11 vegetable oil extract (30%) and derivatives of poly-glycosides (0.1%) and surfactin (4%) (corn oil / Xanthan Gum / Surfactin) (composition 11)
  • Figure 1 shows the solubility of iturinic lipopeptides (in this case mycosubtiline) in aqueous solution at room temperature as a function of their concentration
  • FIG. 2 shows the analysis of the solubility of various compositions comprising an iturinic lipopeptide (in this case mycosubtilin) and various compounds making it possible to obtain high and soluble concentrations of iturinic lipopeptide after 15 days of storage at ambient temperature. The measurement is made on the supernatant after a centrifugation step to eliminate the insolubles
  • nonionic compounds such as penthylene glycol and alkylethoxyglycoside also make it possible to obtain a solubility of greater than 30 g / l.
  • the composition allowing a maximum solubility of the iturinic compound (112 g / L) is that containing an anionic lipopeptide (surfactin) and a nonionic surfactant (Emulsogen TM).
  • compositions with a high content of iturinic lipopeptides can be prepared from lipopeptide powder, as illustrated in the following two examples of compositions:
  • Composition 1 A composition comprising approximately 3.1% (w / v) of lipopeptides (ie 1.25% mycosubtiline and 1.85% surfactin) was obtained by resuspending a lipopeptide powder comprising a mycosubtilin / surfactin mixture in proportions of 40%. 60 and a purity of about 15% in aqueous phase (pH between 7.5 and 8.5).
  • Composition 2 A composition comprising approximately 5.1% (w / v) of lipopeptides (ie 2.45% mycosubtiline and 2.65% surfactin) was obtained by resuspending a lipopeptide powder comprising a mycosubtilin / surfactin mixture in proportions 45/55 and a purity of about 75% in aqueous phase (pH between 7.5 and 8.5).
  • lipopeptides ie 2.45% mycosubtiline and 2.65% surfactin
  • compositions with a high content of iturinic lipopeptides comprising surfactants Preparation of compositions with a high content of iturinic lipopeptides comprising surfactants.
  • compositions 1 and 2 were added to compositions 1 and 2 described above so as to evaluate the effect of such molecules on the properties of the compositions.
  • composition 2A 3 to 8% (w / v) fengycin (or plipastatin) was added to composition 2.
  • compositions with and without surfactants has been studied at ambient temperature, here at about 21 ° C.
  • composition 1 The addition of the two surfactants made it possible to obtain a homogeneous composition (composition 1A) and to avoid any phenomenon of precipitation or sedimentation.
  • composition 1A containing surfactants has a cloudy but homogeneous appearance.
  • Composition 2 The addition of fengycin (or plipastatin) made it possible to obtain a homogeneous composition and to avoid any phenomenon of setting in mass (which takes place in the absence of fengycin or plipastatin).
  • Composition 2A with fengycin (or plipastatin) has a clear and homogeneous appearance.
  • Concentrated lipopeptide solutions (Compositions 1, 2 and 1A, 2A) were placed at 4 ° C for a period of 1 to 30 days. Only solutions supplemented with surfactants or fengycin (or plipastatin) (namely 1A and 2A) remained homogeneous and no deposit was observed. Without these additions, concentrated lipopeptide solutions are likely to set in bulk or to have a large insoluble deposit.
  • compositions described above (1 and 2) and those containing adjuvants (1A and 2A) were stored for 15 days at 21 ° C and for 15 days at 54 ° C (to simulate accelerated aging).
  • the preservation of compositions at elevated temperature (54 ° C.) is a method known to those skilled in the art, which makes it possible to mimic accelerated aging of the compositions by increasing the Brownian motion, accelerating the destabilization of the compositions.
  • FIG. 3 shows the analysis of the minimum viscosity of the various concentrated iturin compositions without or with additions of surfactants and other adjuvants (A), after storage at 21 ° C. or at 54 ° C.
  • FIG. 4 presents the analysis of the maximum viscosity shear stress of the various lipopeptide compositions concentrated without or with additions of surfactants and other adjuvants (A), after storage at 21 ° C. or at 54 ° C.
  • composition 1A makes it possible to solubilize the iturinic compounds avoiding the formation of precipitate and / or gel and this is characterized by a significant decrease in the minimum viscosity and the shear stress at maximum viscosity, whether after storage at 21 ° C. or even more importantly when aging.
  • Compositions 1 and 1A are related to non-Newtonian fluids of the Casson type
  • composition 2A makes it possible to solubilize the iturinic compounds avoiding the formation of precipitate and / or gel at the end of a long storage period and this is characterized by a significant decrease in the minimum viscosity and the shear stress at the viscosity. maximum after storage at 54 ° C.
  • Compositions 2 and 2A are related to non-Newtonian fluids of rheofluidifying type initially, but the unformulated composition 2 becomes very thick during aging.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)

Abstract

L'invention a trait à des compositions présentant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques. En particulier, les compositions selon l'invention présentent une concentration en lipopeptides ituriniques comprise entre 20 et 150 g/L; elles sont stables et homogènes grâce à la présence de tensioactifs.

Description

COMPOSITION COMPRENANT UNE CONCENTRATION ELEVEE
EN LIPOPEPTIDES ITURINIQUES
L'invention a trait à des compositions présentant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques. En particulier, les compositions selon l'invention présentent une concentration en lipopeptides ituriniques comprise entre 5 et 200 g/L, et sont stables et homogènes grâce à la présence de tensioactifs et/ou de molécules hydrotropes.
Les lipopeptides ituriniques sont des molécules produites par différentes souches de Bacillus sp. et plus particulièrement les souches de Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus megaterium, Bacillus thermoamylovorans, Bacillus thermocloacae, Bacillus firmus, Bacillus mojavensis, Bacillus velenzensis, Bacillus valissmortis. On citera en exemple et de manière non exhaustive, les souches Bacillus subtilis ATCC6633, W23, ATCC19659, DSM23117, QST713 ou AQ713, FMBJ, 3-10, RB14 , BH072 et leurs dérivées, les souches Bacillus amyloliquefaciens FZB42, KB3, SYBC H47, GAI et leurs dérivés.
Cette famille de molécules comprend l'iturine A, AL et C, la mojavensine, la mycosubtilline et les bacillomycines A, B, C, D, F, L et Le. Ces composants sont connus essentiellement pour leur pouvoir antifongique mais ils présentent également des propriétés antibactériennes. Ces propriétés proviennent de leur nature amphiphile qui leur permet d'interagir avec différents constituants membranaires.
Les molécules ituriniques peuvent être produites en solution dans le bouillon de fermentation par les différentes souches mentionnées ci-dessus, puis elles peuvent être récupérées selon des méthodes connues de l'homme du métier afin de les extraire, de les concentrer et de les purifier à partir d'un surnageant de culture. Néanmoins, leur comportement en solution est dépendant de leur concentration. En effet, il est connu qu'au-dessus de la concentration micellaire critique (située entre 10 et 20 mg/L), les composés ituriniques comme les autres molécules de types lipopeptides forment des micelles plus ou moins complexes. Par ailleurs, la taille de ces micelles va évoluer pour former des structures de plus en plus complexes quand on augmente leur concentration, passant d'une taille moyenne de 10 nm à des concentrations en dessous de 500 mg/L (Jauregi et al., 2013), à des structures vésiculaires d'un diamètre moyen de 150 nm au- dessus d'1 g/L (Grau et al. 2001), puis à des superstructures de type bicouche lamellaire à une concentration de 10 g/L (Hamley et al., 2013). Comme le révèlent ces travaux sur la mycosubtiline (Hamley et al., 2013) ou sur l'iturine A (Grau et al. 2001), ces superstructures ne sont pas retrouvées chez les autres molécules lipopeptidiques de la famille des surfactines par exemple. Par ailleurs l'augmentation de la concentration en composés ituriniques tant à augmenter leur interaction avec les protéines contenues dans le milieu de culture et ainsi à augmenter la taille des structures conduisant à les rendre insolubles (Jauregi et al. 2013) .
Ces propriétés physico-chimiques des composés ituriniques posent donc des problèmes de solubilité, donnant lieu à des compositions instables et ayant tendance à précipiter ou à gélifier lorsque l'on augmente la concentration en iipopeptides ituriniques des compositions.
État de la technique le plus proche de l'invention .
L'art antérieur présente peu de compositions ayant une concentration en Iipopeptides ituriniques supérieure à 5g/L et encore moins ayant une concentration supérieure à 20g/L, principalement car il est connu de l'homme du métier que les iipopeptides ituriniques tendent à former des miceiies à haute concentration, rendant les compositions instables du fait des miceiies d'iturine empêchant leur bonne solubilité. On connaît cependant dans l'art antérieur le brevet JP2003 128512 (SHOWA DENKO) qui présente des compositions cosmétiques, comprenant des tensio-actifs, dans lesquelles sont ajoutées de i'iturine et de la surfactine pour leurs propriétés antimicrobiennes, mais la stabilité et l'homogénéité de I'iturine dans ces compositions ne sont pas évoquées, celles-ci n'étant pas le composé principal des différentes compositions.
On connaît également le brevet US 2016/183537 qui décrit une composition issue de Bacillus amyioiiquefaciens contenant de I'iturine, de la surfactine et de la fengycine pour améliorer la croissance des plantes ou protéger les plantes. Ce document ne mentionne pas les concentrations des molécules contenues dans cette composition, il n'est pas fait mention de concentrations en iturine élevées.
On connaît aussi la publication de Choukri HBID et. ai. décrivant l'influence d'extraits de Iipopeptides sur le transfert d'oxygène lors de la fermentation. Ces extraits correspondant à un mélange iturine/surfactine à des concentrations allant jusqu'à 4 g/L la possibilité d'une concentration d'iturine plus élevée n'est pas décrite dans le document.
Ainsi, aucun des documents de l'art antérieur n'incite l'homme du métier à réaliser des compositions à concentration élevée en Iipopeptides ituriniques, car il sait que celles-ci ne seront pas stables et homogènes et donc n'auront que peu d'applications. Problèmes résolus par la présente invention
Les inventeurs ont montré qu'il est possible de préparer une composition stable et homogène dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 5g/L grâce à l'ajout de molécules ayant des propriétés tensioactives. En effet, les inventeurs ont mis en évidence que les agents tensioactifs permettent d'améliorer la solubilisation des lipopeptides ituriniques au-delà de 5g/L, en particulier à 10 g/L et à 20g/L et jusqu'à 50, 100 voire 200 g/L sans apparition de précipité ou de gel.
La présente invention trouve notamment des applications dans la production de solutions concentrées de molécules biopesticides antifongiques, antibactériennes ou biosurfactants pour l'industrie phytosanitaire, mais également dans les domaines des industries alimentaire, cosmétique, pharmaceutique et pétrolière.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Le concept général de l'invention concerne une composition liquide stable et homogène comprenant un mélange de lipopeptides dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 5 g/L.
Dans une telle composition, les lipopeptides sont associés à des molécules ayant des propriétés tensioactives, grâce auxquelles la composition concentrée en lipopeptides ituriniques reste stable et homogène.
Un premier objet de l'invention concerne une composition stable et homogène comprenant une concentration en lipopeptides ituriniques supérieure à 20g/L et un ou plusieurs tensio- actifs choisis parmi les familles des tensio-actifs anioniques, des tensio-actifs non ioniques ou des huiles.
Par composition « stable et homogène », on entend une composition qui ne comprend pas de précipité, et qui reste homogène à des températures comprises entre 4°C et 40°C. L'absence de prise en masse est également un critère important, c'est-à-dire que la solution est liquide et non sous forme gélifiée. Le terme liquide se comprend au sens de l'invention comme une composition fluide c'est- à-dire une composition dont la viscosité (le rapport entre la contrainte de cisaillement et la vitesse de cisaillement) est faible.
Le terme homogène se comprend comme un mélange dont on ne peut distinguer les différents constituants à l'oeil nu après agitation. L'homogénéité peut s'apprécier à l'uniformité des concentrations en tout point du mélange et à l'absence de structures ou micro-structures (prise de masse ou précipité) visible à l'oeil. Une telle homogénéité du mélange est avantageuse car elle permet des concentrations uniformes en lipopeptides ituriniques, qui peuvent être diluée ensuite en solution aqueuse
Le terme stable se comprend comme le fait que la composition reste homogène dans le temps. Ainsi, un mélange stable et homogène est un mélange ayant une concentration uniforme qui reste constante dans le temps.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l'invention comprend entre 20 et 200 g/L de lipopeptides ituriniques. Elle peut comprendre par exemple 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ou 200 g/L de lipopeptides ituriniques. De manière préférée la concentration en lipopeptides ituriniques de la composition est comprise entre 20 et 150 g/L, ou entre 20 et 100 g/L. De manière encore plus préférée, la concentration en lipopeptides ituriniques de la composition est supérieure à 50 g/L, c'est-à-dire comprise par exemple entre 50 et 150 g/L, ou entre 50 et 100 g/L ou entre 50 et 80 g/L. Par « molécules de la famille des iturines », on entend l'iturine A, AL et C, la mojavensine, la mycosubtiline et les bacillomycines A, B, C, D, F, L et Le.
Les compositions de la présente invention comprennent des molécules ayant des propriétés tensioactives.
Par « molécules ayant des propriétés tensioactives », aussi appelées « agents tensioactifs » ou plus simplement « tensioactifs », on entend notamment les molécules amphiphiles, les surfactants, les lipopeptides, comme par exemple, la surfactine, la fengycine (ou plipastatine), les tensioactifs chimiques et les tensioactifs biologiques, comme par exemple les rhamnolipides, les polysaccharides, etc.... Ces molécules peuvent être utilisées seules ou en association dans les compositions de l'invention.
Parmi les agents tensioactifs, on peut citer l'héparine, l'acide hyaluronique, le dextrane, l'amylose, le chitosane, des tensioactifs anioniques dérivés d'acides aminés, des tensioactifs non-ioniques dérivés des poly-glycosides, des tensio-actifs hydrotropes, des lipopeptides tels que les isomères de surfactine et/ou les isomères de fengycine (ou plipastatine), les rhamnolipides et les huiles végétales.
Plus particulièrement l'invention concerne les tensio-actifs anioniques, non ioniques et des huiles. Les tensioactifs de la famille des tensio-actifs anioniques sont choisis parmi : les surfactines, les fengycines, ou des dérivés d'acide aminés. Par surfactine on entend toute molécule de la « famille des surfactines », à savoir les surfactines A, B, C, la lichenysine et la pumilacidine.
Par fengycine on entend toute molécules de la « famille des fengycines », on entend les fengycines A et B, les plipastatines A et B et l'agrastatine.
Les tensioactifs de la famille des tensio-actifs non ioniques sont choisis parmi : les fatty alcohol axalkylate, le pentylène glycol et ses dérivés, les molécules hydrotropes de type alkylpolyglycoside (alkypolyglycoside et alkylethoxypolyglycoside, les molécules de type agent de texture polyglycoside (gomme de xanthane, gomme arabique, gomme adragante, gomme guar, gomme de caroube, gomme de tamarin, pectine, gomme gellane, carraghénates, agar-agar, alginates.)
Les tensioactifs de la famille des huiles sont choisis parmi : les huiles et extraits d'huiles modifiés (acifidiés, méthylés, esterifiés) notamment issus de : amande, arachide, argan, avocat, colza, lorenzo, neem, noisette, noix de cajou, noix de macadamia, olive, pistache, riz, tournesol oléique, cameline, lin, bourrache, carthame, chanvre, coton, germe de blé, mais, noix, oeillette, onagre, orge, pépins de courge, pépins de raisin, pois, sésame, soja, tournesol. Les lipopeptides ituriniques seront micro-émulsionnés dans ces composés huileux ou corps gras afin d'obtenir l'effet tensioactif des huiles et extraits d'huiles modifiés.
Les compositions de l'invention peuvent, en outre, contenir des adjuvants tels que des sources lipidiques, des sels et des solvants. Ces adjuvants peuvent participer à la solubilisation sans pour autant être des tensioactifs. A titre d'exemple de solvants, on peut citer l'éthanol, le méthanol, l'acétonitrile, le dimethyl sulfoxide, le butanol, le pentanol, l'acétone.
Selon un premier aspect, l'invention concerne une composition comprenant entre 5 et 50 g/L de lipopeptides ituriniques et entre 1 et 40 g/L de surfactine.
Dans une composition particulière, les lipopeptides ituriniques sont des mycosubtilines. Dans une autre composition particulière, la quantité de lipopeptides ituriniques est de préférence comprise entre 10 g/L et 50g/L, préférentiellement entre 20 et 50 g/L, de manière encore préférée entre 30 et 50 g/L. Selon un second aspect, l'invention concerne une composition comprenant entre 5 et 100 g/L de lipopeptides ituriniques, entre 1 et 40 g/1 de surfactine et entre 1 et 100 g/1 de fengycine (ou plipastatine,).
Dans une composition particulière, la quantité de lipopeptides ituriniques est de préférence comprise entre 10 et 80 g/L, préférentiellement entre 20 et 80 g/L, de manière la plus préférée entre 30 et 80 g/L.
Selon un troisième aspect, l'invention concerne une composition comprenant entre 5 et 100 g/L de lipopeptides ituriniques, entre 1 et 40 g/1 de surfactine et entre 1 et 30 g/1 de tensioactifs chimiques.
Dans une composition particulière, la quantité de lipopeptides ituriniques est de préférence comprise entre 10 et 80 g/L, préférentiellement entre 20 et 80 g/L, de manière préférée entre 30 et 80 g/L. Dans un mode de réalisation particulier, les tensioactifs chimiques peuvent être des tensioactifs non ioniques de la famille des polyglycosides ou des tensioactifs anioniques dérivés d'acides aminés. De manière préférée, les tensioactifs chimiques consistent en un mélange de tensioactifs anioniques et de tensioactifs non ioniques. Selon un quatrième aspect, l'invention concerne une composition comprenant entre 5 et 100 g/L de lipopeptides ituriniques, entre 1 et 40 g/1 de surfactine, entre 1 et 100 g/1 de de fengycine (ou plipastatine) et entre 1 et 30 g/1 de tensioactifs chimiques.
Dans une composition particulière, la quantité de lipopeptides ituriniques est de préférence comprise entre 10 et 80 g/L, préférentiellement entre 20 et 80 g/L, de manière préférée entre 30 et 80 g/L.
Selon un cinquième aspect, l'invention concerne une composition comprenant entre 5 et 100 g/L de lipopeptides ituriniques micro-émulsionnée dans des composés huileux ou corps gras, comme par exemple de l'huile végétale. Dans une telle composition, la concentration en huile est comprise entre 1% et 100%, de préférence entre 50% et 100%, de manière particulièrement préférée entre 80% et 100%. Parmi les huiles végétales qui peuvent être utilisées, on peut citer l'huile de maïs, mais aussi les huiles et extraits d'huile modifiés d'amande, arachide, argan, avocat, colza, lorenzo, neem, noisette, noix de cajou, noix de macadamia, olive, pistache, riz, tournesol oléique, cameline, lin, bourrache, carthame, chanvre, coton, germe de blé, mais, noix, oeillette, onagre, orge, pépins de courge, pépins de raisin, pois, sésame, soja, et tournesol.
Préférentiellement les huiles utilisées sont issues de l'arachide, de l'olive, du tournesol oléique, du lin, du maïs, des noix, du soja et du tournesol. De telles huiles présentent l'avantage d'être disponibles en grandes quantités et d'avoir un faible coût. De manière encore plus préférée, l'huile utilisée est issue de l'arachide du maïs ou du tournesol.
Dans un mode de réalisation préféré, une telle composition comprend entre 10 et 80 g/L, préférentiellement entre 20 et 80 g/L de mycosubtiline, de manière préférée entre 30 et 80g/L et de manière tout à fait préférée entre 50 et 80 g/L de mycosubtiline.
Ainsi, une composition particulière selon l'invention comprend :
2 à 8 % de lipopeptides ituriniques
- 3 % de tensioactifs chimiques constitués d'un mélange de tensioactifs non-ioniques et anioniques à hauteur de 1,5 % chacun
2 à 4 % de surfactines
0 à 10% de fengycines ou de plipastatines Dans un mode de réalisation particulier, la composition comprend environ 3% de lipopeptides (1,25% de mycosubtiline et 1,85% de surfactine), 1,5% d'un tensioactif non- ionique dérivé des poly-glycosides et 1,5% d'un tensio-actif anionique dérivé d'acides aminés. Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprend environ 5% de lipopeptides (2,45% de mycosubtiline et 2,65% de surfactine) et 3 à 8% de fengycine (ou de plipastatine).
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition comprend entre 30 et 80 g/L de mycosubtiline et 30 à 80g/L de fengycine (ou de plipastatine).
Dans un mode de réalisation particulier la composition comprend une concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un extrait d'huile végétale, des dérivés de polyglycosides et de la surfactine. Dans un autre mode de réalisation particulier la composition comprend une concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un extrait d'huile de graine végétale méthylée et du polyglycérol ester d'huile de coco (Synergen OS™).
Dans un autre mode de réalisation particulier la composition comprend une concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un mélange d'alkylpolyglucoside (Simulsol™) de dérivé d'acide aminé (Protéol™) et de surfactine.
Dans un autre mode de réalisation particulier la composition comprend une concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un mélange de fatty alcohol oxalkylate (Emulsogen™) et de surfactine.
Dans un autre mode de réalisation particulier la composition comprend une concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un mélange d'huile végétale, de gomme de xanthane et de surfactine.
Les compositions selon l'invention peuvent être prêtes à l'emploi ou sous forme concentrée ; les solutions concentrées peuvent être diluées avant emploi. Un deuxième objet selon l'invention concerne une composition déshydratée comprenant un mélange de lipopeptides dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 0,5%. Dans un mode de réalisation préféré, la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 2%.
De telles compositions déshydratées se présentent sous forme de poudre ou de lyophilisât et sont « prêtes à l'emploi » ; en effet, il suffit de les réhydrater dans 100 ml_ de solution pour obtenir une composition dont la concentration en lipopeptides ituriniques est au minimum de 5 g/L. Dans un mode de réalisation préféré, de telles compositions ont une concentration en lipopeptides ituriniques au minimum de 20g/L.
Les ingrédients et leurs quantités relatives dans ces compositions solides sont les mêmes que celles décrites ci-dessus pour les compositions liquides. En effet, les concentrations en poids sec des différents composants de ces solutions déshydratées permettent d'obtenir des compositions liquides dont la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 5 g/L qui sont stables et homogènes conformément à l'invention. Dans un mode de réalisation préféré la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 20g/L.
Un troisième objet de l'invention concerne un procédé de préparation d'une composition comprenant un mélange de lipopeptides dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est supérieure à 5 g/L. Dans un mode de réalisation préféré, la concentration en lipopeptides ituriniques dans le mélange est de 20g/L.
Les lipopeptides ituriniques de la composition peuvent être obtenus par fermentation d'une souche de Bacillus sp. et récoltés et concentrés depuis le surnageant de culture. Les compositions selon l'invention peuvent être préparées en utilisant des préparations de lipopeptides disponibles dans le commerce sous forme de poudre. Ces poudres de départ contiennent une quantité de lipopeptides ituriniques variable pouvant aller de 10 à plus de 80%, par exemple 15% ou 75%. Ces poudres peuvent contenir un mélange de mycosubtiline et de surfactine dans un rapport de 30/70 à 70/30, voire de 95/5, par exemple de 35/65, de 40/60, de 45/55 ou de 50/50.
Pour préparer une composition selon l'invention, il faut ajouter au moins un tensioactif à une solution contenant une teneur élevée en lipopeptides ituriniques.
Le procédé de préparation de telles compositions peut comporter une étape supplémentaire de déshydratation de sorte à proposer une composition « prête à l'emploi » sous forme de poudre, dont les caractéristiques sont conformes aux compositions de la présente invention une fois réhydratée.
Ainsi le procédé permet de préparer des solutions liquides ou solides (sous forme de poudre ou de lyophilisât). De telles solutions concentrées sont particulièrement adaptées pour le stockage et la distribution. Elles sont à diluer avant utilisation. De ce fait, une composition selon l'invention peut être obtenue par dissolution d'une poudre permettant la reconstitution d'une composition liquide telle que définie précédemment.
Les compostions selon l'invention trouvent leurs applications dans le domaine de l'agroalimentaire, des phytosanitaires et de la cosmétique ainsi que dans le domaine médical et pharmaceutique.
L'invention est illustrée à l'aide des exemples qui suivent.
EXEMPLES
A. Préparation de solutions contenant des lipopeptides à partir de surnageant de cultures de souches Bacillus 1 - Obtention des surnageants de culture
Les lipopeptides sont obtenus à partir d'un procédé de fermentation aérobie d'une souche Bacillus dérivée de la souche Bacillus subtilis ATCC 6633 pour la production de lipopeptides ituriniques et de souches dérivées de la souche de Bacillus subtilis 168 pour la production de surfactine et/ou de fengycine (ou de plipastatine). La culture est réalisée dans un milieu contenant une source de carbone (glucose, saccharose...), une source d'azote (sulfate d'ammonium, peptone, acides aminés libres, extrait de levures,...) et des oligoéléments et des sels sous agitation à 30°C. Le pH est maintenu à une valeur de 7. La culture est récoltée après 48 à 72h. Elle est ensuite centrifugée ou filtrée pour éliminer les cellules. Le surnageant de culture est ensuite concentré.
2 - Préparation de compositions à teneur élevée en lipopeptides ituriniques à partir de surnageants de culture
Pour obtenir des compositions à teneur élevée en lipopeptides ituriniques, les surnageants de culture peuvent être concentrés. La concentration du surnageant de culture peut être obtenue par toute méthode connue de l'homme du métier, en particulier :
- Par ultrafiltration tangentielle en utilisant une membrane dont le seuil de coupure peut être de lKDa à 300 KDa. Pour exemple, 1000L de surnageant de culture obtenu comme décrit précédemment sont concentrés par passage sur la membrane d'ultrafiltration pour obtenir un retentât d'un volume de 10 à 100L. Les petites molécules sont ensuite éliminées par une ou des étapes de diafiltration. La solution ainsi obtenue peut être séchée par lyophilisation, atomisation ou utilisée telle quelle.
Par précipitation à pH acide : une diminution du pH dans le but de précipiter sélectivement les lipopeptides est réalisée. Une addition d'acide sulfurique concentré est réalisée sur le surnageant obtenu. Après l'obtention d'un pH final aux alentours de 1, la solution est laissée sous agitation de 2 à 12h. Une centrifugation permet de récupérer un culot de matière contenant les lipopeptides. Ce culot est ensuite dissout par addition d'eau et de soude afin d'obtenir une valeur de pH comprise entre 7 et 8,5. La solution ainsi obtenue peut être séchée par lyophilisation, atomisation ou utilisée telle quelle.
- Par évaporation : le surnageant est concentré par évaporation sous vide. Par exemple 20L sont introduits dans un rotavapor et concentrés à 1 à 2L.
Le pourcentage de lipopeptides obtenu à l'issue de ces deux exemples de préparation est de l'ordre de 0,5 à 20% (poids/volume). B- Préparation de compositions concentrées en lipopeptides ituriniques
1 - Etude de l'effet de différents tensioactifs sur la solubilité d'un lipopeptide iturinique et dans une composition à haute concentration Un lipopeptide iturinique (ici la mycosubtiline), ayant une pureté (sur matière sèche) comprise entre 45% et 80%, a été solubilisée seule dans l'eau à différente concentration et cette composition témoin a été comparée à différentes compositions dans lesquelles ont été ajoutés différents composés tensioactifs comme décrit dans la demande. Après 15 jours de stockage à 21°C, seules les compositions ayant un comportement rhéologique de type fluide et un aspect homogène (ne présentant pas de prise en masse empêchant un écoulement et/ou de déphasage et/ou de précipité) sont sélectionnées, mélangées par agitation, puis ces compositions sont centrifugées pendant 10 minutes à 10 000 g et le surnageant est analysé par la méthode de référence en RP-HPLC. Cette méthode permet de vérifier la solubilité des composés ituriniques qui se retrouvent alors dans le surnageant après centrifugation.
La solubilité du lipopeptide iturinique (ici la mycosubtiline) seul dans une solution aqueuse en fonction de sa concentration est présentée dans la Figure 1.
La concentration maximale de lipopeptides ituriniques soluble dans les différentes compositions est présentée en Figure 2.
Aucun tensioactif n'est ajouté dans la composition 1 qui ne contient que des lipopeptides ituriniques. Les tensioactifs ajoutés dans les compositions 2 à 13 sont :
-des fengycines à 10% (composition 2)
- des alkylpolyglucoside et des dérivés d'acide aminé (Simulsol™/Protéo M) à raison de 10% chacun (composition 3)
-de la lécithine de soja à (4%) et des dérivés de poly-glycosides (0,1%) (Elvis™/Xanthane Gum) (composition 4)
- d'extrait d'huile de graine végétale méthylée et de polyglycerol ester issu d'huile de coco (de 0,2%) (Synergen OS™) (composition 5)
- de tensioactif non ionique de type fatty alcool oxalkylate (0,2%)(Emulsogen™) (composition 6)
- de tensioactif non ionique de type pentylène glycol (50%) (composition 7)
-de dérivés des poly-glycosides à 0.4% (AlkylEthoxyGlycoside = AEG) (composition 8) -des surfactines à 4% (composition 9)
- des surfactines à 4% et des fengycines à 10% (composition 10)
- d'extrait d'huile végétale (30%) et des dérivés des poly-glycosides (0,1%) et de la surfactine (4%) (Huile de maïs/Xanthane Gum/Surfactine) (composition 11)
- des alkylpolyglucoside et des dérivés d'acide aminé (Simulsol™/Protéo M) à raison de 10% chacun et de la surfactine à 4% (composition 12) - de tensioactif non ionique de type fatty alcool oxalkylate à 0,2%(Emulsogen™) et de la surfactine à 4% (composition 13)
Analyse des résultats
La figure 1 présente la solubilité des lipopeptides ituriniques (ici la mycosubtiline) en solution aqueuse à température ambiante en fonction de leur concentration
Dans la figure 1, il peut être observé que la mycosubtiline seule se solubilise très bien dans une solution aqueuse à une concentration maximale de 2 g/L, mais au-delà de cette concentration (par exemple entre 5 et 25 g/L) un précipité qui décante peut être observé et seule une petite partie reste soluble.
La figure 2 présente l'analyse de la solubilité de différentes compositions comprenant un lipopeptide iturinique (ici la mycosubtiline) et différents composés permettant d'obtenir des concentrations élevées et solubles en lipopeptide iturinique après 15 jours de stockage à température ambiante. La mesure est faite sur le surnageant après une étape de centrifugation permettant d'éliminer les insolubles
Dans la figure 2, il peut être observé que l'ajout de différents tensioactifs permet d'augmenter de façon significative la solubilité de la mycosubtiline, en particulier avec des composés anioniques seul ou en mélange avec des tensioactifs non-ioniques. La présence de fengycine ou de surfactine permet d'obtenir une solubilité de la mycosubtiline proche de 30 g/L. De façon surprenante et originale la combinaison de ces deux composés lipopeptides anioniques permet d'atteindre une solubilité du composé iturinique encore supérieure. On notera également que l'utilisation de certains tensioactifs malgré une composition homogène et stable ne permet pas d'obtenir une solubilisation au-dessus de 20 g/L. C'est le cas de la lécithine de soja couplée à la gomme de Xanthane (max= l,5g/L), le cas du composé non ionique Emulsogen™ (Clariant) (max= 11,6 g/L) mais également des composés non ionique Simulsol™ et anionique Protéol™ (Ceppic) (max= 15,3 g/L). Il a été remarqué pour ces compositions la présence d'un précipité important après l'étape de centrifugation. En revanche quand ces compositions sont complétées par un autre composé lipopeptidique anionique comme la surfactine la solubilité de la mycosubtiline augmente alors pour atteindre des valeurs entre 55 et 120 g/L. D'autres composés non ioniques tels que le penthylène glycol et l'alkylethoxyglycoside permettent également d'obtenir une solubilité supérieure à 30 g/L. La composition permettant un maximum de solubilité du composé iturinique (112 g/L) est celle contenant un lipopeptide anionique (surfactine) et un tensioactif non ionique (Emulsogen™). 2 - Préparation de compositions à teneur élevée en lipopeptides ituriniques à partir de poudres de lipopeptides Une composition à teneur élevée en lipopeptides ituriniques peut être préparée à partir de poudre de lipopeptides, comme illustré dans les deux exemples de compositions ci-après : Composition 1 : Une composition comprenant environ 3,1% (m/v) de lipopeptides (soit 1,25% de mycosubtiline et 1,85% de surfactine) a été obtenue en resuspendant une poudre de lipopeptides comprenant un mélange mycosubtiline/surfactine en proportions 40/60 et d'une pureté environ égale à 15% en phase aqueuse (pH compris entre 7,5 et 8,5).
Composition 2 : Une composition comprenant environ 5,1% (m/v) de lipopeptides (soit 2,45% de mycosubtiline et 2,65% de surfactine) a été obtenue en resuspendant une poudre de lipopeptides comprenant un mélange mycosubtiline/surfactine en proportions 45/55 et d'une pureté environ égale à 75 % en phase aqueuse (pH compris entre 7,5 et 8,5).
3 - Préparation de compositions à teneur élevée en lipopeptides ituriniques comprenant des tensioactifs.
Des tensioactifs ont été ajoutés aux compositions 1 et 2 décrites précédemment de sorte à évaluer l'effet de telles molécules sur les propriétés des compositions.
Composition 1A : Deux tensioactifs ont été ajoutés à la composition 1 chacun dans une proportion de 10% (v/v), à savoir un tensioactif hydrotrope non-ionique dérivé des poly- glycosides (Nom commercial = Simulsol™ SL 7C commercialisé par la société Seppic) et un tensio-actif anionique dérivé d'acides aminés (Nom commercial = Proteol™ APL commercialisé par la société Seppic).
Composition 2A : 3 à 8% (m/v) de fengycine (ou de plipastatine) ont été ajoutés à la composition 2.
4 - Caractérisation des compositions obtenues : homogénéité et stabilité dans le temps.
Essai de stabilité à température ambiante
L'aspect des compositions avec et sans tensioactifs a été étudié à température ambiante, ici à environ 21°C.
Composition 1 : L'ajout des deux tensioactifs a permis d'obtenir une composition homogène (composition 1A) et d'éviter tout phénomène de précipitation ou de sédimentation. La composition 1A contenant des tensioactifs présente un aspect trouble mais homogène.
Composition 2 : L'ajout de fengycine (ou de plipastatine) a permis d'obtenir une composition homogène et éviter tout phénomène de prise en masse (qui a lieu en absence de fengycine ou de plipastatine). La composition 2A avec fengycine (ou de plipastatine) présente un aspect limpide et homogène. b. Essais de stabilité à basse température
Des solutions lipopeptidiques concentrées (Compositions 1, 2 et 1A, 2A) ont été placées à 4°C pour une période de 1 à 30 jours. Seules les solutions complémentées en tensioactifs ou en fengycine (ou de plipastatine) (à savoir 1A et 2A) sont restées homogènes et aucun dépôt n'a été observé. Sans ces ajouts, les solutions lipopeptidiques concentrées sont susceptibles de prendre en masse ou de présenter un dépôt insoluble important.
5 - Caractérisation de la rhéologie des compositions obtenues : impact de la conservation à température ambiante et d'un vieillissement accéléré
a. Méthodes d'analyses
Les 2 compositions décrites précédemment (1 et 2) et celles contenant des adjuvants (1A et 2A) ont été conservées pendant 15 jours à 21°C et pendant 15 jours à 54°C (afin de simuler un vieillissement accéléré). La conservation des compositions à à température élevée (54°C) est une méthode connue de l'homme du métier, qui permet de mimer un vieillissement accéléré des compositions en augmentant le mouvement brownien, accélérant la déstabilisation des compositions.
A l'issue de ces périodes la rhéologie des compostions a été étudiée en utilisant un rhéomètre compact modulaire Anton PAAR MCR102. La méthode a consisté au suivi de la vitesse de cisaillement lorsque la contrainte de cisaillement augmentait progressivement entre 1 et 100 Pa (durée du test de 500 s). La viscosité (le rapport entre la contrainte de cisaillement et la vitesse de cisaillement) a été aussi exprimée en fonction de la contrainte de cisaillement. Cela permettait de visualiser l'évolution de la viscosité au cours du test. Ces essais ont été réalisés à partir de trilplicat d'échantillons.
Deux paramètres rhéologiques ont été étudiés sur ces compositions après stockage à 21°C ou à 54°C à savoir :
La viscosité minimale (Pa.s) La contrainte de cisaillement à la viscosité maximale (Pa) b. Résultats
L'ensemble des échantillons ont montré des comportements de fluides non- newtoniens (la viscosité n'a pas été constante au cours des tests). Avec l'augmentation de la contrainte de cisaillement la viscosité diminuait en se rapprochant à une viscosité minimale. La diminution de la viscosité avec l'agitation peut être expliquée par un alignement progressif des unités structurelles (ou molécules) dans le sens de l'écoulement au fur et à mesure que la vitesse de cisaillement augmente, favorisant ainsi l'écoulement des différentes couches de liquides. Les fluides sont alors qualifiés de rhéfluidifiants et peuvent être caractérisés par leurs viscosités minimales (dans le cas des tests appliqués il s'agissait de la viscosité à la fin du test) et par la contrainte de cisaillement à la viscosité maximale (Pa).
Etude de la viscosité minimale
La figure 3 présente l'analyse de la viscosité minimale des différentes compositions ituriniques concentrées sans ou avec ajouts de tensioactifs et autres adjuvants (A), après stockage à 21°C ou à 54°C
Les résultats présentés dans la figure 3 montrent que la viscosité minimale de la composition 1A après stockage à 21°C est significativement différente et inférieure à la celle de la composition non formulée (1). Pas de différence significative est observée entre les compostions 2 et 2A après stockage à 21°C. Néanmoins, lors du test de vieillissement à 54°C la viscosité minimale de la composition 2 a très nettement augmenté alors que celle de la composition 2A est restée proche de 0. Ceci montre l'effet très important de l'ajout de fengycine (plipastatine) dans cette dernière pour faciliter la solubilité des lipopeptides ituriniques. On notera un effet similaire entre la composition 1 et 1A après stockage à 54°C, montrant l'intérêt de la formulation de la composition 1A.
Etude de la contrainte cisaillement à la viscosité maximale
La figure 4 présente l'analyse de la contrainte de cisaillement à la viscosité maximale des différentes compositions lipopeptidiques concentrées sans ou avec ajouts de tensioactifs et autres adjuvants (A), après stockage à 21°C ou à 54°C.
Les résultats présentés dans la figure 4 montrent que les contraintes de cisaillement à la viscosité maximale après stockage 15 jours à 21°C de la composition 1A est inférieure à celles obtenues avec la composition non formulée 1. Pas de différence significative n'est observée entre les compositions 2 et 2A. Néanmoins lorsque l'on étudie l'impact d'un vieillissement accéléré à 54°C sur ce paramètre les résultats de la figure 4 montrent que la contrainte de cisaillement augmente très fortement dans les compostions non formulées 1 et 2, alors que celles des compositions formulées (1A et 2A) sont restées quasiment identiques à celles obtenues à 21°C. Ces résultats montrent l'impact très positif des formulations selon l'invention pour faciliter la solubilisation dans le temps et à haute concentration des composées ituriniques. En conclusion de ces études, il peut être établi que :
La composition 1A permet de solubiliser les composés ituriniques évitant la formation de précipité et/ou de gel et ceci est caractérisé par une diminution significative de la viscosité minimale et de la contrainte cisaillement à la viscosité maximale que ce soit après un stockage à 21°C ou de façon encore plus importante lors de son vieillissement. Les compositions 1 et 1A sont apparentées à des fluides non newtoniens de type Casson
La composition 2A permet de solubiliser les composés ituriniques évitant la formation de précipité et/ou de gel à l'issu d'une période de conservation longue et ceci est caractérisé par une diminution significative de la viscosité minimale et de la contrainte cisaillement à la viscosité maximale après un stockage à 54°C. Les compositions 2 et 2A sont apparentées à des fluides non newtoniens de type rhéofluidifiant au départ, mais la composition 2 non formulée devient très épaisse lors du vieillissement.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition stable et homogène caractérisée en ce qu'elle comprend une concentration en lipopeptides ituriniques supérieure à 20g/L et un ou plusieurs tensio-actifs choisis parmi les familles des tensio-actifs anioniques, des tensio-actifs non ioniques ou des huiles.
2. Composition selon la revendication 1 dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 150 g/L.
3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisée en ce que lesdits tensioactifs de la famille des tensio-actifs anioniques soient choisis parmi : les molécules de la famille des surfactines, les molécules de la famille des fengycines, ou des dérivés d'acide aminés.
4. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisée en ce que lesdits tensioactifs de la famille des tensio-actifs non ioniques soient choisis parmi les fatty alcohol axalkylate, le pentylène glycol et ses dérivés, les molécules hydrotropes de type alkylpolyglycoside (alkypolyglycoside et alkylethoxypolyglycoside, les molécules de type agent de texture polyglycoside (gomme de xanthane, gomme arabique, gomme adragante, gomme guar, gomme de caroube, gomme de tamarin, pectine, gomme gellane, carraghénates, agar-agar, alginates.)
5. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisée en ce que lesdits tensioactifs de la famille des huiles soient choisis parmi : les huiles et extraits d'huiles modifiés (acifidiés, méthylés,esterifiés) notamment issus de : amande, arachide, argan , avocat, colza, lorenzo, neem, noisette, noix e cajou, noix de macadamia, olive, pistache, riz, tournesol oléique, cameline, lin , bourrache, carthame, chanvre, coton, germe de blé, mais, noix, oeillette, onagre, orge, pépins de courge, pépins de raisin, pois, sésame, soja, tournesol.
6. Composition selon l'une des revendications précédentesdans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 50 g/1 et les tensioactifs sont la surfactine, la concentration de la surfactine dans la composition étant comprise entre 1 et 40 g/L
7. Composition selon l'une des revendications précédentesdans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 50 g/1 et les tensioactifs sont la fengycine, la concentration de la fengycine dans la composition étant comprise entre 1 et 100 g/L
8. Composition selon l'une des revendications précédentesdans laquelle la concentration en lipopeptides iturinique est comprise entre 20 et 100 g/1 et les tensioactifs sont la surfactine et la fengycine, la concentration de la surfactine étant comprise entre 1 et 40 g/L et la concentration de la fengycine étant comprise entre 1 et 100g/L.
9. Composition selon l'une des revendications précédentes dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un extrait d'huile végétale, des dérivés de polyglycosides et de la surfactine.
10. Composition selon l'une des revendications précédentes dans laquelle la concentration en lipopeptides ituriniques est comprise entre 20 et 100g/l et les tensioactifs sont un extrait d'huile de graine végétale méthylée et du polyglycérol ester d'huile de coco.
11. Procédé de préparation d'une composition telle que définie à l'une des revendications précédentes comprenant les étapes de préparation d'une solution à teneur élevée en lipopeptides ituriniques et d'ajout de tensioactifs.
12. Procédé de préparation selon la revendication 11 comprenant en outre une étape de déshydratation.
13. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 10 dans des applications agroalimentaires, phytosanitaires ou cosmétiques.
14. Composition selon l'une des revendications 1 à 10 pour son utilisation dans le domaine médical ou pharmaceutique.
PCT/FR2018/051883 2017-07-21 2018-07-23 Composition comprenant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques WO2019016492A1 (fr)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2020502168A JP2020527348A (ja) 2017-07-21 2018-07-23 高濃度のイツリン系リポペプチドを含む組成物
CA3069760A CA3069760A1 (fr) 2017-07-21 2018-07-23 Composition comprenant une concentration elevee en lipopeptides ituriniques
EP18758926.2A EP3654945A1 (fr) 2017-07-21 2018-07-23 Composition comprenant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques
BR112020001291-2A BR112020001291A2 (pt) 2017-07-21 2018-07-23 composição compreendendo uma alta concentração de lipopeptídeos iturínicos
US16/632,061 US20200147169A1 (en) 2017-07-21 2018-07-23 Composition comprising a high concentration of iturin lipopeptides
CN201880048741.3A CN110944626A (zh) 2017-07-21 2018-07-23 包含高浓度伊枯草菌素脂肽的组合物
AU2018303287A AU2018303287A1 (en) 2017-07-21 2018-07-23 Composition comprising a high concentration of iturin lipopeptides

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR17/56909 2017-07-21
FR1756909A FR3069155B1 (fr) 2017-07-21 2017-07-21 Composition comprenant une concentration elevee en lipopeptides ituriniques

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019016492A1 true WO2019016492A1 (fr) 2019-01-24

Family

ID=60450766

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2018/051883 WO2019016492A1 (fr) 2017-07-21 2018-07-23 Composition comprenant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20200147169A1 (fr)
EP (1) EP3654945A1 (fr)
JP (1) JP2020527348A (fr)
CN (1) CN110944626A (fr)
AU (1) AU2018303287A1 (fr)
BR (1) BR112020001291A2 (fr)
CA (1) CA3069760A1 (fr)
FR (1) FR3069155B1 (fr)
WO (1) WO2019016492A1 (fr)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003128512A (ja) 2001-10-18 2003-05-08 Showa Denko Kk 化粧料用抗菌性組成物
CN101948682A (zh) * 2010-08-20 2011-01-19 中国石油天然气股份有限公司 一种反相堆积的油井防偏磨、缓蚀清防垢剂
US20160183537A1 (en) 2014-12-29 2016-06-30 Fmc Corporation Bacillus amyloliquefaciens rti472 compositions and methods of use for benefiting plant growth and treating plant disease

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59212416A (ja) * 1983-05-19 1984-12-01 Ajinomoto Co Inc 農業用殺菌剤
WO1998050422A1 (fr) * 1997-05-09 1998-11-12 Agraquest, Inc. Nouvelle souche de bacillus destinee a lutter contre les maladies vegetales et la larve nuisible aux racines du mais
JP2003113040A (ja) * 2001-10-04 2003-04-18 Showa Denko Kk 抗菌性化粧料組成物
JP2005053867A (ja) * 2003-08-07 2005-03-03 Showa Denko Kk フケ抑制組成物
WO2012162412A2 (fr) * 2011-05-24 2012-11-29 Agraquest, Inc., A Delaware Corporation Combinaisons synergiques de fongicides de type polyène et de peptides non ribosomaux et procédés d'utilisation associés

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003128512A (ja) 2001-10-18 2003-05-08 Showa Denko Kk 化粧料用抗菌性組成物
CN101948682A (zh) * 2010-08-20 2011-01-19 中国石油天然气股份有限公司 一种反相堆积的油井防偏磨、缓蚀清防垢剂
US20160183537A1 (en) 2014-12-29 2016-06-30 Fmc Corporation Bacillus amyloliquefaciens rti472 compositions and methods of use for benefiting plant growth and treating plant disease

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHOUKRI HBID ET AL: "Influence of the production of two lipopeptides, Iturin a and Surfactin S1, on oxygen transfer duringfermentation", APPLIED BIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGY ; PART A: ENZYME ENGINEERING AND BIOTECHNOLOGY, HUMANA PRESS INC, NEW YORK, vol. 57 - 58, no. 1, 1 March 1996 (1996-03-01), pages 571 - 579, XP035175765, ISSN: 1559-0291, DOI: 10.1007/BF02941737 *
See also references of EP3654945A1

Also Published As

Publication number Publication date
US20200147169A1 (en) 2020-05-14
FR3069155A1 (fr) 2019-01-25
BR112020001291A2 (pt) 2020-07-21
JP2020527348A (ja) 2020-09-10
EP3654945A1 (fr) 2020-05-27
CN110944626A (zh) 2020-03-31
CA3069760A1 (fr) 2019-01-24
AU2018303287A1 (en) 2020-02-13
FR3069155B1 (fr) 2020-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2002005780A1 (fr) Emulsion eau-dans-huile et ses utilisations notamment dans le domaine cosmetique
FR3017292A1 (fr) Base de formulation cosmetique d'origine naturelle ou vegetale et composition cosmetique
EP0658596B1 (fr) Composition à base de biopolymères à hydratation rapide
WO2019016492A1 (fr) Composition comprenant une concentration élevée en lipopeptides ituriniques
FR3048851B1 (fr) Concentre comprenant un mel, un alkylpolyglucoside et du monopropylene glycol
EP0299961A1 (fr) Compositions herbicides a base de biscarbamate et procede de traitement herbicide les utilisant.
EP3595625B1 (fr) Concentre comprenant au moins un lipide de mannosylerythritol et au moins un ester d'acide gras et de polyglycerol
EP1051079B1 (fr) Composition a usage alimentaire sous forme d'une emulsion seche, son procede de fabrication et son utilisation
RU2801578C1 (ru) Композиция, имеющая высокую концентрацию итуриновых липопептидов
EP0652763B1 (fr) Extraits bruts d'algues bleues, leurs procedes de preparation et leurs applications en cosmetologie et en dermatologie
EP3429349B1 (fr) Concentre comprenant un mel et un ester d'acide gras et de polyethylene glycol de hlb superieur ou egal a 12
EP1952687B1 (fr) Emulsion comprenant un polysaccharide et son utilisation dans des compositions liquides pulvérisables
EP1603393B1 (fr) Nouveau procede pour la potentialisation et la stimulation des defenses naturelles des plantes
EP0127214B1 (fr) Compositions contenant des produits pesticides biosynthétiques et au moins un phosphate et procédés pour leur fabrication et leur utilisation
EP4185656B1 (fr) Agent mouillant comprenant au moins un monoglycéride d'acide gras
FR3123656A1 (fr) Utilisation de mélasse fermentée comme émulsifiant
WO2022238661A1 (fr) Co-extraction de composés actifs à caractères hydrophiles et hydrophobes issus de microalgues et macroalgues
EP0765184B1 (fr) Nouveau procede de traitement d'une emulsion
FR2631976A1 (fr) Polyglycannes hydrosolubles possedant notamment des proprietes viscosantes
EP0688848A1 (fr) Système concentré à base d'un agent épaississant, ledit système étant dispersable et épaississable par dilution en milieu aqueux
FR2978013A1 (fr) Composition liquide pour la nutrition et/ou la protection des vegetaux

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18758926

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3069760

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020502168

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112020001291

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018303287

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20180723

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018758926

Country of ref document: EP

Effective date: 20200221

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112020001291

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20200121