WO2018234603A1 - Procedimiento para la extracción de carotenoides utilizando fases líquidas nanoestructuradas - Google Patents

Procedimiento para la extracción de carotenoides utilizando fases líquidas nanoestructuradas Download PDF

Info

Publication number
WO2018234603A1
WO2018234603A1 PCT/ES2018/070434 ES2018070434W WO2018234603A1 WO 2018234603 A1 WO2018234603 A1 WO 2018234603A1 ES 2018070434 W ES2018070434 W ES 2018070434W WO 2018234603 A1 WO2018234603 A1 WO 2018234603A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
biomass
carotenoids
obtaining
liquid phase
phase
Prior art date
Application number
PCT/ES2018/070434
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Soledad RUBIO BRAVO
Mª Dolores CRIADO SICILIA
Carmen CABALLO LINARES
Noelia CABALLERO CASERO
Graciela Pavon-Djavid
Virginie GUEGUEN
Jorge Eduardo BASTIAS VENEGAS
Original Assignee
Universidad de Córdoba
Université Paris 13
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidad de Córdoba, Université Paris 13 filed Critical Universidad de Córdoba
Publication of WO2018234603A1 publication Critical patent/WO2018234603A1/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/02—Algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor

Definitions

  • the present invention falls within the general field of chemistry of natural products and in particular it relates to a process for obtaining carotenoids from biomass, and to the use of said products in the pharmaceutical and food industry where carotenoids are used as nutritional supplements and additives.
  • Carotenoids are pigments synthesized by photosynthetic organisms, some bacteria and fungi. They are used as food additives in aquaculture for coloring the meat of salmonids and as nutraceuticals and additives in food for human consumption.
  • benefits shown or attributed to the carotenoids are its antitumor activity, anti-inflammatory and antidiabetic properties, and protective effect of the heart, nervous system, eyes and skin ⁇ Microalgae Biotechnology, E. Forján Lozano, C. Vilchez Lobato, JM Vega Piqueres, Cepsa 2014, ISBN 974-84-617-2314-0).
  • the carotenes ⁇ -carotene and lycopene and the xanthophylls astaxanthin, lutein and canthaxanthin are the carotenoids of greatest commercial interest. It is estimated that the global carotenoid market will reach the figure of 1, 4 trillion dollars in 2019 with an annual growth rate of 3.5% since 2014 (http://www.bcresearch.com). Carotenoids are obtained by synthetic procedures or through natural sources. Although synthetic forms are cheaper, natural forms have better nutritional properties and the demand for these types of sources has experienced a great increase in recent years.
  • the main natural sources of carotenoids are microalgae (eg Dunaliella salina for ⁇ -carotene and Haematococcus pluvialis for astaxanthin), yeasts (eg Phaffia rhodozyma for astaxanthin) and flowers (eg petals of Tagetes erecta for lutein).
  • Xanthophylls are esterified in some sources (eg astaxanthin in Haematococcus pluvialis and lutein in Tagetes erecta).
  • the enrichment with organic solvents is carried out using polar solvents (eg acetone, methanol, ethanol, ethyl acetate, etc., US14420136, 04.19.2016, Roquette Freres, US20030087335 A1, 08.05.2003, Jacobson Holman PLLC, US8097761B2, 17.01 .2012, JX Nippon OH & Energy Corporation), non-polar (eg hexane, pentane, benzene, etc., US20070196383 A 1, 23.08.2007, Hyundai Hatsukoki Kabushiki Kaishá), or mixtures thereof to adjust the polarity and increase the extraction efficiency (eg isopropanohexane, ethanohexane, water: ethanol: hexane, alkane: methanol, etc.
  • polar solvents eg acetone, methanol, ethanol, ethyl acetate, etc.
  • EFS supercritical fluids
  • xanthophylls relatively polar and high molecular weight compounds, have low solubility in carbon dioxide, so it is necessary to work at very high pressures (above 50 MPa) to obtain acceptable yields and extraction times, which considerably increases the costs.
  • ethanol as a modifier (10-70%) allows to obtain yields of approximately 85% because it improves the humidification of the pores of the biomass and establishes hydrogen bonds with the xanthophylls (J. Supercritical Fluids, 2014, 92, 75-83, Eur. Food Res. Technol. 2006, 223, 787-790), however, it is necessary to eliminate it from the extract.
  • the extraction yield can be increased using supercritical fluids that establish hydrogen bonds with xanthophylls, such as dimethyl ether (US 7696396B2, 06.196.2008, Phasex Corporation, Lawrence, MA, US).
  • the product obtained is generally an oleoresin that contains the carotenoids and fatty acids present in the biomass while the polar components such as proteins and carbohydrates remain in the residue.
  • the present invention solves the problems described in the state of the art since it provides a method for the extraction and enrichment of carotenoids from biomass, based on the use of nanostructured liquid phases obtained by spontaneous processes of self-assembly and coacervation of amphiphilic molecules .
  • the type of nanostructures and components of these liquid phases maximizes the interaction energies with the carotenoids, avoids the extraction of the macromolecules present in the plant biomass through chemical and physical exclusion mechanisms and provides extracts enriched in carotenoids that can be used directly, or dilution with an oil vegetable, for the formulation of nutraceuticals and food additives.
  • the method is fast, simple and of low cost, develops at atmospheric pressure and room temperature, using non-toxic solvents and providing a quantitative extraction of carotenoids in a single stage of equilibrium between plant biomass and solvent.
  • the composition of the extracts enriched in carotenoids is similar to the oleoresins obtained by extraction with supercritical fluids without the requirement of special and expensive facilities.
  • the present invention relates to a process (hereinafter, process of the present invention) for obtaining carotenoids from biomass, comprising the following steps: a) dissolving an amphiphilic surfactant in an organic solvent and add water, in a ratio comprised between 1: 4: 2.6 and 1: 7: 13 (g: mL: ml_).
  • the amphiphilic surfactant comprises a hydrocarbon chain of between 6 and 18 carbon atoms and at least one polar group selected from carboxylic groups, alcohols, aldehydes, ketones, phosphates.
  • amphiphilic surfactant is selected from glycolipids, fatty acids, phospholipids, lipopeptides, neutral lipids, or any surfactant of natural origin.
  • the organic solvent is selected from tetrahydrofuran, ethylene glycol, dioxane, acetone, propanol, ethanol, acetonitrile and methanol.
  • the purification step f) is carried out by eliminating the organic solvent. More particularly, the elimination of the organic solvent is carried out by evaporation of the solvent by a stream of nitrogen.
  • the process of the present invention comprises an additional step of diluting the extract obtained in step f) with a vegetable oil.
  • the biomass is vegetable, fungal or yeast biomass.
  • the biomass comprises a pretreatment of drying and grinding.
  • the present invention relates to the use of the extract obtained by the process of the present invention as a food additive.
  • the present invention relates to the use of the extract obtained by the process of the present invention in pharmaceutical formulations.
  • FIGURES Figure 1 shows the chromatograms obtained by analyzing the extract of Haematococcus pluvialis samples produced by (A) extraction with supercritical fluids and (B) extraction with nanostructured liquid phases according to the procedure described in the invention.
  • the total content and distribution of carotenoids present in the plant biomass depends on the culture conditions and strains used.
  • the total content of astaxanthin generally varies between 3 and 5% of the weight of the biomass while the distribution of free astaxanthin, monoesters and diesters in Haematococcus pluvialis can vary in the ranges 1 -5%, 46-79% and 10%. -39%, respectively.
  • the distribution of free astaxanthin, monoesters and diesters in the analyzed extracts were: (A) 1.7%, 76.1% and 22.2% and (B) 1.7%, 78.8% and 19.5%.
  • the column used for the chromatographic analysis of the extracts was an Ultrabase C18 (5 ⁇ , 250 mm ⁇ 4.6 mm internal diameter) supplied by V ⁇ nicos Analysis (Tomelloso, Spain) and thermostatted at 20 e C.
  • a mobile phase was used for the elution constituted by acetone and water with an elution gradient from 83:17 to 98: 2 in 80 min at a flow rate of 0.8 mL / min.
  • the wavelength range measured in the diode detector in rows was 200 to 800 nm.
  • the nanostructured liquid phases were synthesized from amphiphilic molecules through spontaneous self-assembly and coacervation processes under experimental conditions in which aggregation between amphiphiles is more favorable than the interaction of the same with the solvent (The colloidal domain, where physics , chemistry, biology and technology meet, F. Evans, H. Wennnerstron, Wiley, BCH, 1999, 2nd edition).
  • solvents eg organic solvents, ionic liquids and supercritical fluids
  • amphiphilic substances of natural and synthetic origin for the development of nanostructured liquid phases, although up to now they have not been used in industrial extraction processes.
  • nanostructured liquid phases are obtained with suitable characteristics for the extraction of carotenoids and the development of a process for obtaining extracts enriched from biomass that can be used directly, or after dilution with a vegetable oil, for the formulation of nutraceuticals and food additives.
  • amphiphilic substances used in the present invention for the synthesis of liquid phases were preferably amphiphiles that allowed the formation of hydrogen bonds, and the establishment of polar interactions, in addition to dispersion interactions, with xanthophylls.
  • amphiphilic substances for the synthesis of the nanostructured liquid phases are those containing polar groups consisting of carboxylic groups, alcohols, aldehydes, ketones, phosphates, etc.
  • the amphiphilic substance used in the present invention must be compatible and legally accepted for use in pharmaceutical formulations and food additives. In addition, it must have low solubility in water and high solubility in organic solvents miscible in water.
  • organic solvents examples include tetrahydrofuran, ethylene glycol, dioxane, acetone, propanol, ethanol, acetonitrile, methanol, etc.
  • Solvents included in category 3 are preferred by the US Food and Drug Administration, FDA (eg ethanol, acetone, etc.).
  • the amphiphilic substance must produce, in the selected hydro-organic medium, at room temperature and through spontaneous self-assembly and coacervation processes, the nanostructured liquid phase.
  • the percentage of organic solvent in the organic medium was between 5 and 40% (v / v).
  • the spatial arrangement of the amphiphilic substances in the nanostructures maximizes the interactions by hydrogen, polar and dispersion bridges with the carotenoids.
  • the nanostructures were reversible and adapted to the environment, that is to say to the hydro-organic medium in which they self-assemble and coacervate, in such a way that they allow the easy modification of them according to the extraction requirements.
  • the formed nanostructures effectively solubilize the carotenoids excluding the extraction of polar macromolecules (proteins, carbohydrates, etc.) through chemical and physical mechanisms.
  • the process developed in the present invention is applicable to the extraction of carotenoids and xanthophylls from vegetable biomass, including microalgae (eg Dunaliella salina, Haematococcus pluvialis, Chlorella, Scenedemus almeriensis, etc.) and plants ⁇ ex. Tagetes erecta and Tagetes patula). It can also be extended to other sources of carotenoids such as yeasts (eg Phaffia rhodozyma), after optimization of experimental extraction conditions.
  • microalgae eg Dunaliella salina, Haematococcus pluvialis, Chlorella, Scenedemus almeriensis, etc.
  • yeasts eg Phaffia rhodozyma
  • the plant biomass is preferably dry and crushed.
  • the nanostructured liquid phase was synthesized and separated from the hydro-organic solution in equilibrium with it, by centrifugation.
  • a volume of nanostructured liquid phase and equilibrium solution was added to the dried and ground vegetable biomass.
  • the function of the equilibrium solution is to rehydrate the plant biomass, thus decreasing the need to use the nanostructured liquid phase for this purpose.
  • the ratio biomass: equilibrium solution: nanostructured liquid phase (p / v / v; g / mL / mL) varies in the range 1: 0: 2 and 1: 10: 1 and preferably in the interval 1: 2: 1 and 1: 3: 1.
  • the mixture was stirred in the range 2-15 min and preferably for 5 min.
  • the mixture was centrifuged until obtaining three phases; a solid phase that contains the residue of the plant biomass constituted fundamentally by proteins, carbohydrates and mineral substances; an intermediate liquid phase which is the hydro-organic equilibrium solution and the nanostructured liquid phase containing the carotenoids and the fatty acids of the biomass, in addition to the constituents of the nanostructured liquid phase.
  • the process allowed the extraction of free and esterified carotenoids from the plant biomass with a percentage of recovery over 90% using a single stage of equilibrium between the biomass and the nanostructured liquid phase.
  • the equilibrium was reached in a short time interval using a ratio of biomass to nanostructured liquid phase of 1: 1 (m: v).
  • the hydro-organic equilibrium solution can be recycled for the synthesis of new nanostructured phases while the residue of the plant biomass can find other applications related to the use of proteins and carbohydrates.
  • the present invention could be part of the process flow diagram of a biorefinery. Obtaining oleoresins enriched in carotenoids
  • the extract obtained in the process described above can be transformed into an oleoresin, similar to that obtained with EFS, after elimination of the organic solvent contained therein with a nitrogen stream or similar procedure that maintains the integrity of the carotenoids.
  • the weight of the extract is reduced approximately 2.5 times, obtaining a carotenoid enrichment factor in the oleoresin equivalent to this weight reduction. This enrichment factor is similar to that obtained with EFS.
  • the distribution of carotenoids in the extract obtained in the present invention is similar to that of the vegetable biomass and that obtained with EFS ( Figure 1).
  • the extract has a higher concentration of lipids than plant biomass, but this is irrelevant since the oleoresin is diluted with vegetable oils for commercialization as a nutraceutical or for use as a food additive.
  • the obtained extract therefore, is similar to the products already existing in the market obtained by EFS, but its obtaining is done with a simple procedure that does not require large installations or high investments. The consumption of energy and materials is very low compared to current processes and, therefore, the process proposed in this invention is more economical.
  • the amphiphilic substance was dissolved in ethanol (12%, w / v) and the solution was diluted with water by a factor of 1.5. The mixture was homogenized by magnetic stirring for 5 min. The nanostructured liquid phase, produced spontaneously, was separated from the hydro-organic solution in equilibrium with it by centrifugation at 3500 rpm for 10 min and transferred to another vessel. Both phases were kept in hermetically sealed containers until use.
  • Example 2 Extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis
  • the mixture was magnetically stirred for 5 min at 900 rpm and then centrifuged for 10 min at 3500 rpm for physical separation of three phases.
  • the organic solvent was evaporated by a stream of nitrogen to obtain an extract that can be used directly, or after dilution with vegetable oil, for pharmaceutical formulations or as a food additive.
  • the recommended daily dose of astaxanthin intake for humans is around 4 mg, equivalent to the consumption of a 100 g serving of sockeye salmon.
  • the recovery of carotenoids from Haematococcus pluvialis is greater than 90% and the enrichment factor in them is at least 2.5.
  • the hydro-organic phase is recycled for the preparation of new nanostructured liquid phases, while the Haematococcus pluvialis residue, which contains proteins, carbohydrates and minerals, can be used for other applications.
  • Example 3 Extraction of lutein from Scenedesmus almeriensis
  • the ratio biomass: hydro-organic equilibrium solution: nanostructured liquid phase recommended is 1: 2: 1 (w / v / v).
  • the lutein present in Scenedesmus almeriensis (approximately 0.5%, w / w, in free form), was extracted with percentages of recovery greater than 90% and the extract, enriched by a factor of 2.5 times, contains the carotenoids in an acid matrix fatty and nanostructured liquid phase.
  • the residue of the biomass is basically constituted by proteins and carbohydrates.
  • the Dunaliella salina microalgae is one of the organisms with the highest production of ⁇ -carotene, being able to reach up to 10% in dry weight. It also contains lutein and zeaxanthin in smaller proportion.
  • the extraction of the carotenoids present in it is carried out from the dry and crushed biomass, using the ratio biomass: hydro-organic equilibrium solution: nanostructured liquid phase 1: 2.5: 1 (w / v / v).
  • the recovery percentage of ⁇ -carotene is greater than 98%.
  • the extraction procedure, as well as the products obtained, are similar to those described in example 2 for Haematococcus pluvialis.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere a un procedimiento para la obtención y enriquecimiento de carotenoides a partir de biomasa, basado en el uso de fases líquidas nanoestructuradas, y al uso de los carotenoides así obtenidos como aditivos alimentarios y en la industria farmacéutica.

Description

PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN DE CAROTENOIDES UTILIZANDO FASES LÍQUIDAS NANOESTRUCTURADAS
Sector de la técnica
La presente invención se encuadra en el campo general de la química de productos naturales y en particular se refiere a un procedimiento para la obtención de carotenoides a partir de biomasa, y al uso de dichos productos en la industria farmacéutica y alimentaria donde los carotenoides se utilizan como suplementos nutricionales y aditivos.
Estado de la técnica
Los carotenoides (carotenos y xantofilas) son pigmentos sintetizados por organismos fotosintéticos, algunas bacterias y hongos. Se utilizan como aditivos alimentarios en acuicultura para la coloración de la carne de los salmónidos y como nutracéuticos y aditivos en alimentos para consumo humano. Entre los beneficios demostrados o atribuidos a los carotenoides destacan su actividad antitumoral, propiedades antiinflamatorias y antidiabéticas, y efecto protector del corazón, sistema nervioso, ojos y piel {Biotecnología de Microalgas, E. Forján Lozano, C. Vílchez Lobato, J.M Vega Piqueres, Cepsa 2014, ISBN974-84-617-2314-0).
Los carotenos β-caroteno y licopeno y las xantofilas astaxantina, luteína y cantaxantina son los carotenoides de mayor interés comercial. Se estima que el mercado global de carotenoides alcanzará la cifra de 1 ,4 billones de dólares en 2019 con una tasa de crecimiento anual del 3.5% desde 2014 (http://www.bcresearch.com). Los carotenoides se obtienen mediante procedimientos sintéticos o a través de fuentes naturales. Aunque las formas sintéticas son más baratas, las formas naturales presentan mejores propiedades nutricionales y la demanda de este tipo de fuentes ha experimentado un gran incremento en los últimos años. Las principales fuentes naturales de obtención de carotenoides son las microalgas (ej. Dunaliella salina para β- caroteno y Haematococcus pluvialis para astaxantina), levaduras (ej. Phaffia rhodozyma para astaxantina) y flores (ej. pétalos de Tagetes erecta para luteína). Las xantofilas se encuentran esterificadas en algunas fuentes (ej. astaxantina en Haematococcus pluvialis y luteína en Tagetes erecta).
Se han descrito muchos procedimientos para la obtención de carotenoides a partir de microalgas (EP1808483B1, 05. 10.2011, Cognis IP Management GmbH/Universidad de Sevilla; Mar. Drugs, 201 1, 9, 625-644). En general, la biomasa se separa del medio de cultivo mediante centrifugación, sedimentación o filtración y el concentrado (5-10% peso seco) se deshidrata i mediante aspersión o liofilización. La rotura de las células de las microalgas con homogeneizadores, ultrasonidos, molino de perlas de vidrio, congelación, shock osmótico, etc., es fundamental para liberar los carotenoides intracelulares, y así aumentar su digestibilidad para humanos y animales. Esta operación se realiza en presencia de antioxidantes para evitar la degradación de los carotenoides ( WO0277105, 10.03.2002, Fuji Chemical Industry Co.,). La biomasa seca, empaquetada al vacío y almacenada a temperaturas de -20eC, se comercializa para su uso en acuicultura y como aditivo en alimentos para consumo humano. Parte de esta biomasa se somete a procesos de enriquecimiento de los carotenoides presentes en la misma mediante extracción con disolventes orgánicos o fluidos supercríticos, para su posterior uso como nutracéutico en forma de cápsulas, tabletas, etc. (Current Anal. Chem., 2014, 10, 29-66; Anal. Methods, 2013, 5, 2916-2924, Recent Patents on Food, Nutrition and Agriculture, 2010, 2, 75-82).
El enriquecimiento con disolventes orgánicos se realiza usando disolventes polares (ej. acetona, metanol, etanol, acetato de etilo, etc., US14420136, 19.04.2016, Roquette Freres; US20030087335 A 1, 08.05.2003, Jacobson Holman PLLC; US8097761B2, 17.01.2012, JX Nippon OH & Energy Corporation), no polares (ej. hexano, pentano, benceno, etc., US20070196383 A 1, 23.08.2007, Yamaha Hatsukoki Kabushiki Kaishá), o mezclas de ellos para ajustar la polaridad y aumentar la eficacia de extracción (ej. isopropanohhexano, etanohhexano, agua:etanol:hexano, alcano:metanol, etc. 1/1/02009063/00-47, 22.05.2009, Universidad de Almería; US20070196894 A 1, 23.08.2007, Sungkyunkwan University, Chin. J. Chem. Eng. 2013, 21, 776-780). La principal desventaja del uso de disolventes orgánicos es que se requieren múltiples etapas de extracción para obtener rendimientos aceptables, elevadas relaciones de biomasa a disolvente (generalmente 1 :10), altas temperaturas y tiempos de extracción comprendidos entre 24 y 48 h. Además, es necesario evaporar elevados volúmenes de disolvente en el extracto, proceso en el que los carotenoides pueden degradarse. Por otro lado, la legislación relativa a nutracéuticos y aditivos alimentarios es muy restrictiva con respecto a los residuos de disolventes, por lo que se recomienda el uso de disolventes incluidos en la categoría 3 por la US Food and Drug Administration, FDA (ej. etanol, acetona, acetato de etilo, etc) y que el producto final contenga una cantidad de disolvente inferior al 0.5% {Guidance for Industry Q3C, FDA, 2012). Estas restricciones, junto con la presión de la normativa legal acerca del control, prevención y remediación de la contaminación ambiental, han potenciado el uso de disolventes menos tóxicos como los aceites vegetales, aunque la extracción con los mismos requiere 48 h para alcanzar un rendimiento de extracción del 88% y no se han desarrollado aplicaciones industriales (Biotechnol. Letter 2008, 30, 441-444). El enriquecimiento con fluidos supercríticos (EFS) se lleva a cabo principalmente con dióxido de carbono, sólo o en la presencia de modificadores polares, ya que es inocuo, no inflamable y relativamente inerte {Int. J. Mol. Sci. 2014, 15, 6725-6740). La principal ventaja del uso de EFS es que disminuye el consumo de disolventes orgánicos y los fluidos supercríticos utilizados pueden reciclarse. Sin embargo, los costes de operación son muy elevados y se necesita una inversión inicial alta, además de existir baja disponibilidad de equipos y reducido desarrollo de diseños. Por otro lado, las xantofilas, compuestos relativamente polares y de alto peso molecular, tienen baja solubilidad en dióxido de carbono, por lo que se requiere trabajar a presiones muy elevadas (superiores a 50 MPa) para obtener rendimientos y tiempos de extracción aceptables, lo que aumenta de forma considerable los costes. La adición de etanol como modificador (10-70%) permite obtener rendimientos de aproximadamente el 85% debido a que mejora la humidificación de los poros de la biomasa y establece puentes de hidrógeno con las xantofilas (J. Supercritical Fluids, 2014, 92, 75-83, Eur. Food Res. Technol. 2006, 223, 787-790), sin embargo, es necesario eliminarlo del extracto. El rendimiento de extracción puede aumentarse utilizando fluidos supercríticos que establezcan puentes de hidrógeno con las xantofilas, como por ejemplo dimetil éter (US 7696396B2, 19.06.2008, Phasex Corporation, Lawrence, MA, US). El producto obtenido es generalmente una oleorresina que contiene los carotenoides y ácidos grasos presentes en la biomasa mientras que los componentes polares como las proteínas y los carbohidratos permanecen en el residuo. Dadas las limitaciones de los procesos anteriores, existe la necesidad de desarrollar métodos de extracción y enriquecimiento de carotenoides a partir de fuentes naturales utilizando procesos rápidos, eficaces, económicos y seguros, que no requieran instalaciones especiales u operaciones complicadas y proporcionen productos que no contengan residuos tóxicos y, por lo tanto, puedan utilizarse en aplicaciones farmacéuticas y alimentarias. Breve descripción de la invención
La presente invención soluciona los problemas descritos en el estado de la técnica ya que proporciona un método para la extracción y enriquecimiento de carotenoides a partir de biomasa, basado en el uso de fases líquidas nanoestructu radas obtenidas mediante procesos espontáneos de autoensamblaje y coacervación de moléculas anfifílicas. El tipo de nanoestructuras y componentes de estas fases líquidas maximiza las energías de interacción con los carotenoides, evita la extracción de las macromoléculas presentes en la biomasa vegetal mediante mecanismos químicos y físicos de exclusión y proporciona extractos enriquecidos en carotenoides que pueden utilizarse directamente, o previa dilución con un aceite vegetal, para la formulación de nutracéuticos y aditivos alimentarios. El método es rápido, simple y de bajo coste, se desarrolla a presión atmosférica y temperatura ambiente, utilizando disolventes no tóxicos y proporcionando una extracción cuantitativa de carotenoides en una única etapa de equilibrio entre la biomasa vegetal y el disolvente. La composición de los extractos enriquecidos en carotenoides es similar a las oleorresinas obtenidas mediante extracción con fluidos supercríticos sin el requerimiento de instalaciones especiales y costosas.
Así pues, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento (de aquí en adelante, procedimiento de la presente invención) para la obtención de carotenoides a partir de biomasa, que comprende las siguientes etapas: a) disolver un tensioactivo anfifílico en un disolvente orgánico y adicionar agua, en una relación comprendida entre 1 :4:2.6 y 1 :7:13(g:mL:ml_). b) centrifugar la mezcla obtenida en a), a al menos 3000 rpm durante 10 min, obteniendo una fase hidro-orgánica y una fase líquida nanoestructurada, c) separar las dos fases obtenidas en la etapa b) d) mezclar la biomasa con la fase hidro-orgánica y la fase líquida obtenidas en la etapa b) en una relación comprendida entre 1 :0:2 y 1 :10:1 (g:mL:ml_) e) centrifugar la mezcla obtenida en d) durante al menos 10 minutos a al menos 2500 rpm, obteniendo 3 fases diferenciadas: fase líquida, fase sólida y una fase intermedia, f) purificar la fase líquida obtenida en e) para obtener el extracto de carotenos. En un aspecto particular de la presente invención, el tensioactivo anfifílico comprende una cadena hidrocarbonada de entre 6 y 18 átomos de carbono y al menos un grupo polar seleccionado de entre grupos carboxílicos, alcoholes, aldehidos, cetonas, fosfatos.
En otro aspecto particular de la presente invención, el tensioactivo anfifílico se selecciona de entre glicolípidos, ácidos grasos, fosfolípidos, lipopéptidos, lípidos neutros, o cualquier tensioactivo de origen natural.
En otro aspecto particular de la presente invención, el disolvente orgánico es seleccionado de entre tetrahidrofurano, etilenglicol, dioxano, acetona, propanol, etanol, acetonitrilo y metanol. En otro aspecto particular de la presente invención, la etapa f) de purificación, se realiza mediante la eliminación del disolvente orgánico. Más en particular, la eliminación del disolvente orgánico se realiza mediante evaporación del disolvente mediante corriente de nitrógeno.
En otro aspecto particular, el procedimiento de la presente invención comprende una etapa adicional de dilución del extracto obtenido en la etapa f) con un aceite vegetal.
En un aspecto particular de la presente invención, la biomasa es biomasa vegetal, fúngica o de levadura.
En otro aspecto particular de la presente invención, la biomasa comprende un pretratamiento de secado y triturado. En un segundo aspecto, la presente invención se refiere al uso del extracto obtenido mediante el procedimiento de la presente invención como aditivo alimentario.
En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso del extracto obtenido mediante el procedimiento de la presente invención en formulaciones farmacéuticas.
Breve descripción de las figuras La figura 1 muestra los cromatogramas obtenidos mediante análisis del extracto de muestras de Haematococcus pluvialis producido mediante (A) extracción con fluidos supercríticos y (B) extracción con fases líquidas nanoestructuradas de acuerdo al procedimiento descrito en la invención. El contenido total y distribución de carotenoides presentes en la biomasa vegetal depende de las condiciones de cultivo y cepas usadas. Así, el contenido total de astaxantina generalmente varía entre el 3 y el 5% del peso de la biomasa mientras la distribución de astaxantina libre, monoésteres y diésteres en Haematococcus pluvialis puede variar en los intervalos 1 -5%, 46-79% y 10-39%, respectivamente. La distribución de astaxantina libre, monoésteres y diésteres en los extractos analizados fueron: (A) 1 .7%, 76.1 % y 22.2% y (B) 1 .7%, 78.8% y 19.5%. La columna utilizada para el análisis cromatográfico de los extractos fue una Ultrabase C18 (5 μηι, 250 mmx 4.6 mm de diámetro interno) suministrada por Análisis Vínicos (Tomelloso, España) y termostatada a 20 eC. Para la elución se utilizó una fase móvil constituida por acetona y agua con un gradiente de elución desde 83:17 a 98:2 en 80 min a una velocidad de flujo de 0.8 mL/min. El intervalo de longitudes de onda medido en el detector de diodos en filas fue de 200 a 800 nm. Descripción detallada de la invención
Las fases líquidas nanoestructu radas se sintetizaron a partir de moléculas anfifílicas mediante procesos espontáneos de autoensamblaje y coacervación bajo condiciones experimentales en las que es energéticamente más favorable la agregación entre los anfifilos que la interacción de los mismos con el disolvente ( The coloidal domain, where physics, chemistry, biology and technology meet, F. Evans, H. Wennnerstrón, Wiley, BCH, 1999, 2nd edition). La característica diferencial más importante de estas fases líquidas con respecto a otros disolventes (ej. disolventes orgánicos, líquidos iónicos y fluidos supercríticos) es que los componentes que lo integran forman nanoestructuras sensibles a estímulos ambientales y éstas pueden diseñarse para que cumplan funciones específicas. Existen multitud de sustancias anfifílicas de origen natural y sintético para el desarrollo de fases líquidas nanoestructuradas, aunque hasta el momento no se han utilizado en procesos de extracción industriales.
Mediante el procedimiento de la presente invención, se obtienen fases líquidas nanoestructuradas con características adecuadas para la extracción de carotenoides y el desarrollo de un proceso para la obtención de extractos enriquecidos a partir de biomasa que puedan utilizarse directamente, o previa dilución con un aceite vegetal, para la formulación de nutracéuticos y aditivos alimentarios.
Diseño y síntesis de fases líquidas nanoestructuradas
Las sustancias anfifílicas usadas en la presente invención para la síntesis de fases líquidas, fueron preferentemente anfifilos que permitieron la formación de puentes de hidrógeno, y el establecimiento de interacciones polares, además de interacciones de dispersión, con las xantofilas. Ejemplos de sustancias anfifílicas para la síntesis de las fases líquidas nanoestructuradas son aquellas que contengan grupos polares constituidos por grupos carboxílicos, alcoholes, aldehidos, cetonas, fosfatos, etc. La sustancia anfifílica usada en la presente invención, debe ser compatible y aceptada legalmente para uso en formulaciones farmacéuticas y aditivos alimentarios. Además, debe tener baja solubilidad en agua y alta solubilidad en disolventes orgánicos miscibles en agua. Ejemplos de disolventes orgánicos que pueden utilizarse para la síntesis de las fases líquidas nanoestructuradas son tetrahidrofurano, etilenglicol, dioxano, acetona, propanol, etanol, acetonitrilo, metanol, etc. Se prefieren disolventes incluidos en la categoría 3 por la US Food and Drug Administration, FDA (ej. etanol, acetona, etc.). La sustancia anfifílica debe producir en el medio hidro-orgánico seleccionado, a temperatura ambiente y mediante procesos espontáneos de autoensamblaje y coacervación, la fase líquida nanoestructurada.
El porcentaje de disolvente orgánico en el medio orgánico estabacomprendido entre el 5 y 40% (v/v).
La disposición espacial de las sustancias anfifílicas en las nanoestructuras maximiza las interacciones por puentes de hidrógeno, polares y de dispersión con los carotenoides.
Las nanoestructuras fueron reversibles y se adaptaron al ambiente, es decir al medio hidro- orgánico en el que se autoensamblan y coacervan, de tal forma que permiten la fácil modificación de las mismas de acuerdo a los requerimientos de extracción.
Las nanoestructuras formadas solubilizan eficazmente los carotenoides excluyendo la extracción de macromoléculas polares (proteínas, carbohidratos, etc.) a través de mecanismos químicos y físicos.
Proceso de extracción de carotenoides en biomasa vegetal El proceso desarrollado en la presente invención es aplicable a la extracción de carotenos y xantofilas a partir de biomasa vegetal, incluyendo microalgas (ej. Dunaliella salina, Haematococcus pluvialis, Chlorella, Scenedemus almeriensis, etc) y plantas {ej. Tagetes erecta y Tagetes patula). También puede extenderse a otras fuentes de carotenoides tales como levaduras (ej. Phaffia rhodozyma), previa optimización de las condiciones experimentales de extracción.
La biomasa vegetal preferentemente está seca y triturada.
La fase líquida nanoestructurada se sintetizó y se separó de la disolución hidro-orgánica en equilibrio con la misma, mediante centrifugación.
Se adicionó un volumen de fase líquida nanoestructurada y de disolución de equilibrio a la biomasa vegetal seca y triturada. La función de la disolución de equilibrio es rehidratar la biomasa vegetal disminuyendo así la necesidad de usar la fase líquida nanoestructurada para este fin. La relación biomasa:disolución de equilibrio:fase líquida nanoestructurada (p/v/v; g/mL/mL) varía en el intervalo 1 :0:2 y 1 :10:1 y preferentemente en el intervalo 1 :2:1 y 1 :3:1 .
La mezcla se agitó en el intervalo 2-15 min y preferentemente durante 5 min. La mezcla se centrifugó hasta la obtención de tres fases; una fase sólida que contiene el residuo de la biomasa vegetal constituida fundamentalmente por proteínas, carbohidratos y sustancias minerales; una fase líquida intermedia que es la disolución de equilibrio hidro-orgánica y la fase líquida nanoestructurada que contiene los carotenoides y los ácidos grasos de la biomasa, además de los constituyentes de la fase líquida nanoestructurada.
El proceso permitió la extracción de carotenoides libres y esterificados a partir de la biomasa vegetal con un porcentaje de recuperación superior al 90% utilizando una única etapa de equilibrio entre la biomasa y la fase líquida nanoestructurada. El equilibrio se alcanzó en un corto intervalo de tiempo utilizando una relación de biomasa a fase líquida nanoestructurada de 1 :1 (m:v).
La disolución de equilibrio hidro-orgánica puede reciclarse para la síntesis de nuevas fases nanoestructuradas mientras el residuo de la biomasa vegetal puede encontrar otras aplicaciones relacionadas con el aprovechamiento de proteínas y carbohidratos. Así la presente invención podría formar parte del diagrama de flujo de proceso de una biorefinería. Obtención de oleorresinas enriquecidas en carotenoides
El extracto obtenido en el proceso descrito anteriormente puede transformarse en una oleorresina, semejante a la obtenida con EFS, previa eliminación del disolvente orgánico que contiene el mismo con una corriente de nitrógeno o procedimiento similar que mantenga la integridad de los carotenoides. Mediante la eliminación del disolvente orgánico, que puede reciclarse, se reduce el peso del extracto aproximadamente 2.5 veces, obteniéndose un factor de enriquecimiento de carotenoides en la oleorresina equivalente a esta reducción de peso. Este factor de enriquecimiento es similar al obtenido con EFS.
La distribución de carotenoides en el extracto obtenido en la presente invención es similar a la de la biomasa vegetal y al obtenido con EFS (Figura 1 ).
Como ocurre con la oleorresina obtenida con EFS, el extracto tiene mayor concentración de lípidos que la biomasa vegetal, pero esto es irrelevante puesto que la oleorresina se diluye con aceites vegetales para su comercialización como nutracéutico o para su uso como aditivo alimentario. El extracto obtenido, por tanto, es semejante a los productos ya existentes en el mercado obtenidos por EFS, pero su obtención se realiza con un procedimiento simple que no requiere grandes instalaciones ni elevadas inversiones. El consumo de energía y materiales es muy bajo comparado con los procesos actuales y, por tanto, el proceso propuesto en esta invención es más económico.
EJEMPLOS DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN
Ejemplo 1: Síntesis de fases líquidas nanoestructuradas
La sustancia anfifílica se disolvió en etanol (12%, p/v) y la disolución se diluyó con agua por un factor de 1 .5. La mezcla se homogenizó mediante agitación magnética durante 5 min. La fase líquida nanoestructurada, producida espontáneamente, se separó de la disolución hidro-orgánica en equilibrio con la misma mediante centrifugación a 3500 rpm durante 10 min y se transfirió a otro recipiente. Ambas fases se mantuvieron en recipientes herméticamente cerrados hasta su uso.
Ejemplo 2. Extracción de astaxantina a partir de Haematococcus pluvialis La cantidad apropiada de biomasa de Haematococcus pluvialis, seca y triturada, se mezcló con la disolución de equilibrio hidro-orgánica y la fase líquida nanoestructurada, sintetizada de acuerdo al procedimiento descrito en el ejemplo anterior, en una proporción 1 :2.5:1 (p/v/v). La mezcla se agitó magnéticamente durante 5 min a 900 rpm y a continuación se centrifugó durante 10 min a 3500 rpm para la separación física de tres fases. En la fase líquida nanoestructurada, que contiene los carotenoides, se evaporó el disolvente orgánico mediante una corriente de nitrógeno para obtener un extracto que puede utilizarse directamente, o previa dilución con aceite vegetal, para formulaciones farmacéuticas o como aditivo alimentario. Como ejemplo, la dosis diaria recomendada de ingesta de astaxantina para humanos es de alrededor de 4 mg, cantidad equivalente al consumo de una ración de 100 g de salmón rojo. La recuperación de carotenoides a partir de la Haematococcus pluvialis es superior al 90% y el factor de enriquecimiento en los mismos es al menos de 2.5. La fase hidro-orgánica se recicla para la preparación de nuevas fases líquidas nanoestructuradas, mientras el residuo de Haematococcus pluvialis, que contiene proteínas, carbohidratos y minerales puede utilizarse para otras aplicaciones.
Ejemplo 3. Extracción de luteína a partir de Scenedesmus almeriensis El procedimiento de extracción de luteína a partir de Scenedesmus almeriensis, seca y triturada, así como los productos obtenidos, son similares a los descritos en el ejemplo 2 para Haematococcus pluvialis. La relación biomasa: disolución de equilibrio hidro-orgánica:fase líquida nanoestructurada recomendada es 1 :2:1 (p/v/v). La luteína presente en Scenedesmus almeriensis (aproximadamente 0.5%, p/p, en forma libre), se extrajo con porcentajes de recuperación superiores al 90% y el extracto, enriquecido por un factor de 2.5 veces, contiene los carotenoides en una matriz de ácidos grasos y fase líquida nanoestructurada. El residuo de la biomasa está fundamentalmente constituido por proteínas y carbohidratos.
Ejemplo 4. Extracción de β-caroteno a partir de Dunaliella salina
La microalga Dunaliella salina es uno de los organismos con mayor producción de β-caroteno, pudiendo alcanzar hasta 10% en peso seco. Contiene además luteína y zeaxantina en menor proporción. La extracción de los carotenoides presentes en la misma se realiza a partir de la biomasa seca y triturada, utilizando la relación biomasa: disolución de equilibrio hidro- orgánica:fase líquida nanoestructurada 1 :2.5:1 (p/v/v). El porcentaje de recuperación del β- caroteno es superior al 98%. El procedimiento de extracción, así como los productos obtenidos, son similares a los descritos en el ejemplo 2 para Haematococcus pluvialis.

Claims

REIVINDICACIONES
1 . Procedimiento para la obtención de carotenoides a partir de biomasa que comprende las siguientes etapas: a) disolver un tensioactivo anfifílico en un disolvente orgánico y adicionar agua, en una proporción de cada componente en la mezcla comprendida entre 1 :4:2.6 y 1 :7:13(g:mL:ml_). b) centrifugar la mezcla obtenida en a), a al menos 3000 rpm durante 10 min, obteniendo una fase hidro-orgánica y una fase líquida nanoestructurada, c) separar las dos fases obtenidas en la etapa b) d) mezclar la biomasa con la fase hidro-orgánica y la fase líquida obtenidas en la etapa b) en una relación comprendida entre 1 :0:2 y 1 :10:1 (g:mL:ml_), e) centrifugar la mezcla obtenida en d) durante al menos 10 minutos a al menos 2500 rpm, obteniendo 3 fases diferenciadas: fase líquida, fase sólida y una fase intermedia, f) purificar la fase líquida obtenida en e) para obtener el extracto de carotenos.
2. Procedimiento para la obtención de carotenoides según la reivindicación 1 , donde el tensioactivo anfifílico comprende una cadena hidrocarbonada de entre 6 y 18 átomos de carbono y al menos un grupo polar seleccionado de entre grupos carboxílicos, alcoholes, aldehidos, cetonas, fosfatos...
3. Procedimiento para la obtención de carotenoides según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2, donde el tensioactivo anfifílico se selecciona de entre glicolípidos, ácidos grasos, fosfolípidos, lipopéptidos, lípidos neutros, o cualquier tensioactivo de origen natural
4. Procedimiento para la obtención de carotenoides según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el disolvente orgánico es seleccionado de entre tetrahidrofurano, etilenglicol, dioxano, acetona, propanol, etanol, acetonitrilo y metanol.
5. Procedimiento para la obtención de carotenoides según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde la etapa f) de purificación se realiza mediante la eliminación del disolvente orgánico.
6. Procedimiento para la obtención de carotenoides según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende una etapa adicional de dilución del extracto obtenido en la etapa f) con un aceite vegetal.
7. Procedimiento para la obtención de carotenoides según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la biomasa es biomasa vegetal, fúngica o de levadura.
8. Procedimiento para la obtención de carotenoides según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde la biomasa comprende un pretratamiento de secado y triturado.
9. Uso del extracto obtenido mediante el procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 -8 como aditivo alimentario.
10. Uso del extracto obtenido mediante el procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 -8 en formulaciones farmacéuticas.
PCT/ES2018/070434 2017-06-21 2018-06-20 Procedimiento para la extracción de carotenoides utilizando fases líquidas nanoestructuradas WO2018234603A1 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ESP201730822 2017-06-21
ES201730822A ES2694600B2 (es) 2017-06-21 2017-06-21 Procedimiento para la extracción de carotenoides utilizando fases líquidas nanoestructuradas

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018234603A1 true WO2018234603A1 (es) 2018-12-27

Family

ID=64735532

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2018/070434 WO2018234603A1 (es) 2017-06-21 2018-06-20 Procedimiento para la extracción de carotenoides utilizando fases líquidas nanoestructuradas

Country Status (2)

Country Link
ES (1) ES2694600B2 (es)
WO (1) WO2018234603A1 (es)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112795485A (zh) * 2019-10-28 2021-05-14 中国石油化工股份有限公司 一种提高微藻油脂含量的方法
WO2023222937A1 (es) * 2022-05-18 2023-11-23 Universidad De Cordoba Procedimiento para la extracción de mezclas de carotenos a partir de residuos agroalimentarios

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009063100A1 (es) * 2007-11-13 2009-05-22 Universidad De Almería Extracción de carotenoides mediante el uso de la mezcla ternaria en una sola fase de etanol:hexano:agua.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009063100A1 (es) * 2007-11-13 2009-05-22 Universidad De Almería Extracción de carotenoides mediante el uso de la mezcla ternaria en una sola fase de etanol:hexano:agua.

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CABALLO CARMEN ET AL: "Determination of supplemental feeding needs for astaxanthin and canthaxanthin in salmonids by supramolecular solvent-based microextraction and liquid chromatography-UV/VIS spectroscopy", FOOD CHEMISTRY, vol. 134, no. 2, 19 March 2012 (2012-03-19), pages 1244 - 1249, XP028417827, ISSN: 0308-8146, DOI: 10.1016/j.foodchem.2012.03.051 *
GONG, MENGYUE: "Carotenoids from microalgae: A review of recent developments", BIOTECHNOLOGY ADVANCES, vol. 34, no. 8, 2 November 2016 (2016-11-02), pages 1396 - 1412, XP055652224, ISSN: 0734-9750, DOI: 10.1016/j.biotechadv.2016.10.005 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112795485A (zh) * 2019-10-28 2021-05-14 中国石油化工股份有限公司 一种提高微藻油脂含量的方法
CN112795485B (zh) * 2019-10-28 2022-09-09 中国石油化工股份有限公司 一种提高微藻油脂含量的方法
WO2023222937A1 (es) * 2022-05-18 2023-11-23 Universidad De Cordoba Procedimiento para la extracción de mezclas de carotenos a partir de residuos agroalimentarios
ES2956661A1 (es) * 2022-05-18 2023-12-26 Univ Cordoba Procedimiento para la extraccion de mezclas de carotenos a partir de residuos agroalimentarios

Also Published As

Publication number Publication date
ES2694600A1 (es) 2018-12-21
ES2694600B2 (es) 2019-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9315434B2 (en) Method for preparing a composition rich in lutein produced by microalgae
Palavra et al. Supercritical carbon dioxide extraction of bioactive compounds from microalgae and volatile oils from aromatic plants
Wu et al. Supercritical fluid extraction and determination of lutein in heterotrophically cultivated Chlorella pyrenoidosa
Alam et al. Extraction of natural pigments from marine algae.
Zielinski et al. High-pressure fluid technologies: Recent approaches to the production of natural pigments for food and pharmaceutical applications
JP2015530083A5 (es)
ES2694600B2 (es) Procedimiento para la extracción de carotenoides utilizando fases líquidas nanoestructuradas
ES2731342T3 (es) Un procedimiento para el aislamiento de cristales de luteína y zeaxantina a partir de fuentes vegetales
JP2021045127A (ja) カロテノイドの大量生産方法
Martins et al. Recovery of pigments from Ulva rigida
Castillo et al. Matrix solid-phase dispersion as a greener alternative to obtain bioactive extracts from Haematococcus pluvialis. Characterization by UHPLC-QToF
JPWO2011058773A1 (ja) 油性組成物
US9109120B2 (en) Process for isolation and purification of carotenoids
CN113260709A (zh) 从微藻萃取颜料的方法
ES2319950B1 (es) Extraccion de carotenoides mediante el uso de mezclas ternarias.
Wu et al. Microalgae cultivation and purification of carotenoids using supercritical anti-solvent recrystallization of CO2+ acetone solution
Braga et al. Microencapsulation by lyophilization of natural carotenoids using different wall materials/Microencapsulação por liofilização de carotenoides naturais utilizando diferentes materiais de parede
Morowvat et al. Spray-drying microencapsulation of β-carotene contents in powdered Dunaliella salina biomass
Al-Muhteseb et al. Producing natural mixed carotenoids from Dunaliella salina
KR20110117454A (ko) 클로렐라로부터 아임계 용매를 이용하여 카로티노이드 및 클로로필을 생산하는 방법
Kumari et al. Extraction and estimation of provitamin A carotenoids from carrot
RU2648452C1 (ru) Способ получения индивидуальных каротиноидов
Bose et al. A systematic review on carotenoids: Its health benefits, extraction and fortifications in food
Mishra et al. Bioactive Compounds synthesized by Algae: current development and prospects as Biomedical Application in the Pharmaceutical Industry
AU2011326945A1 (en) Extraction of oil-soluble pigment from micro-organisms

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18821173

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 18821173

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1