WO2018116260A1 - Фармацевтическая композиция с противотуберкулезным действием - Google Patents

Фармацевтическая композиция с противотуберкулезным действием Download PDF

Info

Publication number
WO2018116260A1
WO2018116260A1 PCT/IB2017/058326 IB2017058326W WO2018116260A1 WO 2018116260 A1 WO2018116260 A1 WO 2018116260A1 IB 2017058326 W IB2017058326 W IB 2017058326W WO 2018116260 A1 WO2018116260 A1 WO 2018116260A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
agent
compound
pharmaceutical composition
patients
group
Prior art date
Application number
PCT/IB2017/058326
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Мыхайло Арсэнтийовыч ТУКАЛО
Галына Пэтривна ВОЛЫНЕЦЬ
Володымыр Грыгоровыч БДЖОЛА
Сэргий Мыхайловыч ЯРМОЛЮК
Наталия Мыколаивна ДЕРКАЧ
Мыкола Ивановыч ГУМЕНЮК
Дмытро Ивановыч ДЕРКАЧ
Галына Львивна ГУМЕНЮК
Original Assignee
Товарыство З Обмэжэною Видповидальнистю "Юрия-Фарм"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Товарыство З Обмэжэною Видповидальнистю "Юрия-Фарм" filed Critical Товарыство З Обмэжэною Видповидальнистю "Юрия-Фарм"
Publication of WO2018116260A1 publication Critical patent/WO2018116260A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/455—Nicotinic acids, e.g. niacin; Derivatives thereof, e.g. esters, amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the technical solution relates to the field of medicine, namely to means for the treatment of tuberculosis.
  • Tuberculosis (or TB for short) is a dangerous infectious disease that can be fatal, and which is widespread in the world today. Tuberculosis treatment is carried out using antibiotics to fight bacteria, the causative agents of tuberculosis, which are mycobacterium Mycobacterium (most often Mycobacterium tuberculosis).
  • tuberculosis Millions of people get tuberculosis every year, in particular, in 2015, tuberculosis was one of the ten most common causes of death worldwide, ahead of HIV / AIDS as the cause of death from infectious diseases. According to information disclosed in the 2016 WHO Annual Tuberculosis Report (Global Tuberculosis Report 2016), in 2015, there were 1.4 million deaths from tuberculosis and another 0.4 million deaths from tuberculosis among people living with HIV. Also in 2015, 10.4 million new cases of tuberculosis were reported worldwide.
  • Isoniazid is a derivative of isonicotinic acid, isonicotinic acid hydrazide (abbreviated as GINK).
  • GINK isonicotinic acid hydrazide
  • the pharmaceutical preparation isoniazid may have various forms of release, in particular:
  • multidrug-resistant tuberculosis Treatment of multidrug-resistant tuberculosis requires prolonged use of toxic and expensive drugs, and usually has bad consequences for the patient. Cases of multidrug-resistant TB are characterized, in particular, by high mortality (in only 60% of cases, treatment of multidrug-resistant TB is effective and successful) and the subsequent spread of resistant strains of Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) within the human community. In addition, to date, the optimal composition of pharmaceutical compositions for the treatment of multidrug-resistant TB and the duration of its treatment regimen remain uncertain. Due to the increase in the incidence of multidrug-resistant TB, an obvious need is the focus of modern anti-tuberculosis programs on the fight against tuberculosis, which is resistant to known drugs and treatment methods.
  • the objective of this technical solution is to create a pharmaceutical composition with anti-tuberculosis action on the basis of new active compounds that are active against bacteria of tuberculosis pathogens, in particular, show antimycobacterial activity against tuberculosis pathogens that are resistant to at least one known anti-tuberculosis drug; expanding the arsenal and range of medicines for treating tuberculosis, in particular expanding the arsenal and range of medicines for treating tuberculosis that is resistant to at least one known anti-tuberculosis drug; improving the treatment of tuberculosis, in particular tuberculosis, which is resistant to at least one known anti-tuberculosis drug; improving the quality of life of patients with tuberculosis, in particular patients with a form of tuberculosis resistant to at least one known anti-tuberculosis drug by reducing the duration of treatment of the disease, reduced toxicity of the pharmaceutical composition, reducing the possibility of relapse, improving the curability and survival of patients.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of tuberculosis which contains the active ingredient and at least one pharmaceutically acceptable excipient, and as the active ingredient contains a compound of formula I
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution may be intended for oral administration.
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution can be made in a dosage form suitable for oral administration, which can be selected from the group of dosage forms, which includes a tablet, capsule, powder, disk, caplet, granule, granule in a capsule, mini-tablet , mini-tablet in capsule, pellet, pellet in capsule, sachet, lozenges, chewable tablets, effervescent tablets, film for dissolving in the mouth, liquid form in hard gelatine capsules , liquid form in soft gelatin capsules, liquid form in hydroxypropyl methylcellulose capsules, semi-solid form in hard gelatin capsules, semi-solid form in soft gelatin capsules, semi-solid form in capsules of hydroxypropyl methylcellulose.
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution may contain at least one pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of substances including a filler, a binding agent, a lubricant, a disintegrant, glidant, an antioxidant, a sweetener, a coloring agent, a flavoring agent, preservative, chelating agent, taste masking agent.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of substances including a filler, a binding agent, a lubricant, a disintegrant, glidant, an antioxidant, a sweetener, a coloring agent, a flavoring agent, preservative, chelating agent, taste masking agent.
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution can be intended for inhalation administration.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain, as a pharmaceutically acceptable excipient, a pharmaceutically acceptable carrier in which the active ingredient is suspended or dissolved.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may additionally contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent to adjust the pH value.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent to adjust the pH value.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain, as an agent for adjusting the pH level, at least one substance which is selected from the group of such substances including a buffering agent, a pharmaceutically acceptable acid, a pharmaceutically acceptable base.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 90% by weight.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 90% by weight.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 50% by weight.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 50% by weight.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying an agent, a wetting agent, a mucoadhesive agent, an isotonizing agent, a preservative, an agent for adjusting the pH level, in an amount of from 0.001% to 25% by weight.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying an agent, a wetting agent, a mucoadhesive agent, an isotonizing agent, a preservative, an agent for adjusting the pH level, in an amount of from 0.001% to 25% by weight.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 10% by weight.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 10% by weight.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 1% by weight.
  • a pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including a suspending agent, emulsifying agent, wetting agent, mucoadhesive agent, isotonizing agent, preservative, agent for regulation of the pH level, in an amount of from 0.001% to 1% by weight.
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution can be intended for injection.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may contain, for pharmaceutically acceptable excipients, water for injection and at least one co-solvent or solubilizer.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may additionally contain at least one pharmaceutically acceptable excipient, which is selected from the group of such substances, including an isotonic agent, preservative, and an agent for adjusting the pH level.
  • at least one pharmaceutically acceptable excipient which is selected from the group of such substances, including an isotonic agent, preservative, and an agent for adjusting the pH level.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain, as an agent for adjusting the pH level, at least one substance which is selected from the group of such substances including a buffering agent, a pharmaceutically acceptable acid, a pharmaceutically acceptable base.
  • FIG. 1 is an image of a 1 H-NMR spectrum of Compound I.
  • FIG. 2 kinetics of the external bactericidal activity of Compound I.
  • FIG. 3 pharmacokinetics in a single administration of Compound I per os to uninfected mice.
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution contains, as an active ingredient, a compound of formula I
  • Compound I belongs to the class of compounds such as isoniazid derivatives, and can be obtained by the following method:
  • a recrystallization method in particular, recrystallization of a compound from 70% or pure isopropanol.
  • the structure of the synthesized Compound I was established using 1 H-NMR spectra recorded in DMSO-De on a Varian MercuryVRX-400 instrument with an operating frequency of 400 MHz and the internal TMS standard, which is shown in FIG. 1. The results obtained indicate the conformity of the synthesized low molecular weight organic compounds to the claimed Compound I.
  • composition according to the technical solution containing Compound I and an excipient, can be embodied in more than one dosage form.
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution can be administered orally or prepared for oral administration.
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution can be made in the form of tablets, capsules, powders, disk, caplets, granules, pellets, granules in a capsule, mini-tablets, mini-tablets in a capsule, pellets in a capsule, sachet, lozenges, chewable tablets, effervescent tablets, films for dissolving in the mouth, liquid or semi-rigid forms in hard gelatin capsules, soft gelatin capsules, HPMC capsules (hydroxypropyl methyl cellulose) and other oral dosage forms about application.
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution may contain pharmaceutically acceptable excipients, where one or more excipients can be selected from the group consisting of binders, fillers, lubricants, disintegrants, glidants, solubilizers and the like.
  • Suitable binders can be selected from the group consisting of povidone, starch, stearic acid, gums, cellulose and the like.
  • Suitable excipients may be selected from the group consisting of microcrystalline cellulose, calcium phosphate, calcium sulfate, kaolin, dry starch, powdered sugar and the like.
  • Suitable lubricants may be selected from the group consisting of magnesium stearate, zinc stearate, calcium stearate, stearic acid, sodium stearyl fumarate and the like.
  • Suitable disintegrants may be selected from the group consisting of starch, croscarmellose sodium, crospovidone, sodium starch glycolate and the like.
  • Suitable glidants may be selected from the group which includes colloidal silicon dioxide, talc, corn starch and the like.
  • Suitable solubilizers can be selected from the group of polymers, including hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC), hydroxyethyl cellulose (HEC), methyl cellulose, hydroxypropyl cellulose (HPC), eudragit, polyvinylpyrrolidone (PVP), etc.
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution may contain one or more other auxiliary agents known in the art, such as antioxidants, sweeteners, colorants, flavors, preservatives, chelating agents, taste masking agents, etc.
  • auxiliary agents such as antioxidants, sweeteners, colorants, flavors, preservatives, chelating agents, taste masking agents, etc.
  • Suitable sweeteners may be selected from the group which includes monosaccharides, disaccharides and polysaccharides, such as, for example, xylose, ribose, glucose, mannose, galactose, fructose, sucrose, maltose, invert sugar, partially hydrolyzed starch, concentrated corn syrup, mannitol xylitol, D-sorbitol, erythritol, pentitol, hexitol, maltitol, dihydrochalcones, moneline, steviosides or glycyrrhizin; free acid saccharin, soluble saccharin salts, for example sodium or calcium salts, cyclamate or acesulfame K salts; dipeptide-based sweeteners, such as sweeteners derived from L-aspartic acid, for example aspartame; water soluble sweeteners derived from natural water soluble sweeteners, for example sucra
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution may contain acceptable flavors that are known to those skilled in the art, such as natural, "identical to natural” and artificial flavors.
  • These flavors can be selected, for example, from synthetic aromatic oils, flavor and aroma enhancers, extraction essential oils obtained, for example, from plants, leaves, fruits, and the like.
  • Typical flavors can be selected from the group that includes curly peppermint, cinnamon, peppermint, clove, laurel, thyme, cedar leaf, nutmeg, sage, bitter almond, vanilla, coffee tree bean oil, cocoa beans and citrus, lemon , orange, cherry, grape, lime, grapefruit; fruit essences, for example apples, pears, peaches, strawberries, raspberries, cherries, plums, pineapples or apricots; peppermints such as peppermint (including menthol, in particular L-menthol) aldehydes and esters, for example cinnamate, cinnamaldehyde, citral, diethyl acetal, dihydrocarbyl acetate, p-methylanisole; alpha citral and beta citral decanal; ethyl vanillin; piperonal (heliotropin); vanillin; alpha-amylcinnamaldehyde; butyraldehyde; valeraldehyde; citr
  • Suitable chelating agents can be selected from the group consisting of citric acid, maleic acid, succinic acid, tartaric acid, EGTA (ethylene glycol bis ((3-aminoethyl ether) tetraacetic acid) and EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid).
  • EGTA ethylene glycol bis ((3-aminoethyl ether) tetraacetic acid)
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • Suitable antioxidants may be selected from the group consisting of tocopherol, tocopherol acetate, vitamin E polyethylene glycol succinate, propylgalate, butyl hydroxy toluene and butyl hydroxy anisole and the like.
  • the pharmaceutical composition for oral administration according to the technical solution may contain one or more other auxiliary agents known in the art, such as antioxidants, sweeteners, colorants, flavors, preservatives, chelating agents, taste masking agents and the like.
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution can be administered by inhalation or prepared for inhalation administration.
  • the pharmaceutical composition for inhalation according to the technical solution contains the active ingredient suspended in an appropriate pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutically acceptable carrier may be water, in particular water for injection.
  • Water for injection is commercially available, and, as is known to a person skilled in the art, can be obtained, for example, by distillation or reverse osmosis.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may additionally contain other ingredients, such as suspending agents, lubricants, mucoadhesive agents, isotonic agents, preservatives, buffering agents and / or pharmaceutically acceptable acids or bases for adjusting the pH of the solutions.
  • other ingredients such as suspending agents, lubricants, mucoadhesive agents, isotonic agents, preservatives, buffering agents and / or pharmaceutically acceptable acids or bases for adjusting the pH of the solutions.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution can be isotonic with respect to lung fluids.
  • the tonicity level of the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution can be adjusted by adding a compound suitable for this purpose, for example, sodium chloride, glucose or calcium chloride.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may have a pH value of from 6 to 8, in particular from 6.5 to 7.5, more specifically from 6.7 to 7.3.
  • the implementation of the pharmaceutical composition for inhalation according to the technical solution may contain a buffer system or buffer to set the pH level of the composition in the required range.
  • a buffer system or buffer to set the pH level of the composition in the required range.
  • any pharmaceutically acceptable buffer system can be used that is able to set the pH level of the composition in the required range.
  • buffers that may be used include phosphate, acetate, citrate, or mixtures thereof.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain a phosphate buffer.
  • This buffer can be prepared, for example, by dissolving monopotassium phosphate and sodium hydroxide in water.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration may contain from about 0.001% to 90%, from about 0.001% to 50%, from about 0.001% to 25%, from about 0.001% to 10%, from about 0.001% to 1 % of one or more auxiliary substances selected from the group of emulsifying agents, wetting agents or suspending agents.
  • Suitable excipients may be selected from the group that includes, but is not limited to: polysorbates, including but not limited to polyethylene sorbitan monooleate (polysorbate 80), polysorbate 20, polysorbate 65, polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate, polyoxyethylene (20) sorbitan monopalmitate, polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate; lecithins; alginic acid; sodium alginate; potassium alginate; ammonium alginate; calcium alginate; propan-1, 2-diol alginate; agar agar; carrageenan; locust bean gum; guar gum; tragacanth; acacia gum; xanthan gum; karaya gum; pectin; amidated pectin; ammonium phosphatides; microcrystalline cellulose; methyl cellulose; hydroxypropyl cellulose; hydroxypropyl methylcellulose; ethyl methyl cellulose; carboxymethyl cellulose;
  • the pH value of the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution can be adjusted by adding an acceptable acid or base, usually a dilute aqueous solution of hydrochloric acid is used for such purposes, where the content of hydrochloric acid is, for example, 10% by mass, or a dilute aqueous solution sodium hydroxide, where the content of sodium hydroxide is, for example, 4% of the mass.
  • an acceptable acid or base usually a dilute aqueous solution of hydrochloric acid is used for such purposes, where the content of hydrochloric acid is, for example, 10% by mass, or a dilute aqueous solution sodium hydroxide, where the content of sodium hydroxide is, for example, 4% of the mass.
  • Suitable mucoadhesive agents may be selected from the group which includes, but is not limited to: methyl, hydroxypropyl and sodium carboxymethyl cellulose, chitosan, polyvinyl pyrrolidone and hydrogels.
  • a pharmaceutical composition for inhalation administration according to a technical solution may comprise preservative.
  • Acceptable preservatives may be selected from the group that includes, but is not limited to: benzalkonium chloride, benzyl alcohol, chlorobutanol, chlorocresol, cresol, ethanol, phenol, phenylethanol, sulfites, thiomersal, parabens, propylene glycol, sodium benzoate, phenyl mercury borate or mercury nitrate.
  • the pharmaceutical composition according to the technical solution can be administered by injection or prepared for injection.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution contains the active ingredient suspended in an appropriate pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may contain water for injection and at least one co-solvent or solubilizer.
  • Water for injection is commercially available, and, as is known to a person skilled in the art, can be obtained, for example, by distillation or reverse osmosis.
  • Suitable cosolvents may be selected from the group consisting of, in general, non-aqueous agents mixed with water, which are suitable for parenteral administration.
  • the cosolvent is an alcohol, a polyhydric alcohol, or an ester.
  • the co-solvent can be selected from the group consisting of ethanol, 1, 3-butanediol (butylene glycol), glycerol, propylene glycol, 2-ethoxyethanol, glycerol formal and mixtures thereof.
  • the co-solvent is ethanol.
  • a suitable solubilizer of the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may be cyclodextrin.
  • Cyclodextrins are cyclic oligosaccharides with hydroxyl groups on the outer surface of the molecule and an empty cavity in the center. The outer surface is usually hydrophilic, so cyclodextrins are soluble in water. On the other hand, the cavity is usually hydrophobic. Cyclodextrins have the ability to form complexes with extraneous molecules such as ziprasidone.
  • Suitable cyclodextrins may be selected from the group that includes, but is not limited to: ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -cyclodextrins, methylated cyclodextrins, hydroxypropyl ⁇ -cyclodextrin, hydroxyethyl p-cyclodextrin, branched cyclodextrins in which one or two glucose or maltose attached to the cyclodextrin ring, ethyl or ethyl carboxymethyl cyclodextrins, dihydropropyl cyclodextrins and sulfoalkyl cyclodextrin esters such as sulfobutyl ether- ⁇ -cyclodextrin.
  • Cyclodextrins may be unsubstituted or fully or partially substituted, as is known in the art, mixtures of cyclodextrins are also useful.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may contain ⁇ -cyclodextrin, hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin, sulfobutyl ether-p-cyclodextrin or mixtures thereof, most preferred embodiments are sulfobutyl ether- ⁇ -cyclodextrin.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may additionally contain other excipients, for example, isotonic agents, preservatives, buffers and / or pharmaceutically acceptable acids or bases for adjusting the pH of the solutions.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may have an osmolarity of 200 to 380 mOsm / kg. If necessary, the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may additionally contain an isotonic agent to adjust the osmolarity of the solution to a value in this range.
  • Suitable isotonic agents may be selected from the group consisting of sodium chloride, potassium chloride, glucose, dextrose, and mixtures thereof.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may contain a buffer system or a buffer for setting the pH level of the composition in the required range.
  • a buffer system or a buffer for setting the pH level of the composition in the required range.
  • any pharmaceutically acceptable buffer system can be used that is able to set the pH level of the composition in the required range.
  • buffers that may be used include phosphate, acetate, citrate, or mixtures thereof.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may contain a phosphate buffer.
  • This buffer can be prepared, for example, by dissolving monopotassium phosphate and sodium hydroxide in water.
  • the pH value of the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution can be adjusted by adding an acceptable acid or base, usually a dilute aqueous solution of hydrochloric acid is used for such purposes, where the content of hydrochloric acid is, for example, 10% by mass, or a dilute aqueous solution sodium hydroxide, where the content of sodium hydroxide is, for example, 4% of the mass.
  • an acceptable acid or base usually a dilute aqueous solution of hydrochloric acid is used for such purposes, where the content of hydrochloric acid is, for example, 10% by mass, or a dilute aqueous solution sodium hydroxide, where the content of sodium hydroxide is, for example, 4% of the mass.
  • the pharmaceutical composition for inhalation administration according to the technical solution may contain a preservative.
  • Acceptable preservatives may be selected from the group which includes, but is not limited to: benzalkonium chloride, benzyl alcohol, chlorobutanol, chlorocresol, cresol, ethanol, phenol, phenylethanol, sulfites, thiomersal, parabens, propylene glycol, sodium benzoate, phenyl mercury borate or mercury nitrate.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor. Thereafter, 70 g of Compound I and 25 g of povidone are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. After this, a dry powder is sprayed from the resulting solution by spray drying. The resulting atomized dry powder is mixed with 2 g of croscarmellose sodium and 3 g of magnesium stearate, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor. After that, 70 g of Compound I, 20 g of povidone and 5 g of meglumine are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. After this, a dry powder is sprayed from the resulting solution by spray drying. The obtained atomized dry powder is mixed with 5 g of croscarmellose sodium, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor. After that, 70 g of Compound I, 10 g of povidone and 10 g of meglumine are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. After this, a dry powder is sprayed from the resulting solution by spray drying. The resulting atomized dry powder is mixed with 8 g of croscarmellose sodium and 2 g of magnesium stearate, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor.
  • 60 g of Compound I, 25 g of povidone and 10 g of meglumine are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained.
  • a dry powder is sprayed from the resulting solution by spray drying.
  • the resulting atomized dry powder is mixed with 2 g of croscarmellose sodium and 3 g of magnesium stearate, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor. After that, 60 g of Compound I, 25 g of povidone and 10 g of meglumine are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. After that, from the resulting solution get sprayed dry powder by spray drying. The obtained atomized dry powder is mixed with 4 g of croscarmellose sodium and 1 g of magnesium stearate, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor. Thereafter, 60 g of Compound I, 20 g of povidone and 10 g of meglumine are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. After this, a dry powder is sprayed from the resulting solution by spray drying. The obtained atomized dry powder is mixed with 7 g of croscarmellose sodium and 3 g of magnesium stearate, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • a mixture of isopropyl alcohol and water (in a ratio of 60:40) is placed in a reactor. Thereafter, 54 g of Compound I, 25 g of povidone and 10 g are added to the reactor to this mixture and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. After this, a dry powder is sprayed from the resulting solution by spray drying. The obtained atomized dry powder is mixed with 8 g of croscarmellose sodium and 3 g of magnesium stearate, the resulting mixture is placed in suitable capsules of the appropriate size.
  • the dry ingredients (65 g of Compound I, 10 g of microcrystalline cellulose, 5 g of hydroxypropyl methylcellulose, 5 g of croscarmellose sodium, 2 g of peptized starch, 3 g of colloidal silicon dioxide) are weighed and placed in a granulator. The resulting mixture of dry ingredients is pre-mixed in a granulator for 2 minutes. After that, the required amount of water is slowly added to the granulator over 2 minutes, and the granulator is turned on for an additional 4 minutes. Wet granulate is placed in a fluidized bed dryer and dried for about 30 minutes at an inlet air temperature of 60 ° C, to a final granulate moisture of 2.4%.
  • the resulting dry granulate is passed through a 30 mesh sieve and fine powder is obtained.
  • the parameters of the obtained powder for the formation of tablets are characterized as follows: humidity 2%, angle of repose 26 °, bulk density of 0.48 g / cm 3 .
  • the resulting powder is formed in the following way:
  • the resulting powder is formed into tablets using a press. Get oval tablets, mass (average) 349 mg with a good indicator of abrasion.
  • the finished tablets are further processed using standard procedures and ingredients known to the person skilled in the art: they are stamped, coated with film and polished.
  • the dry ingredients (65 g of Compound I, 18 g of microcrystalline cellulose, 5 g of hydroxypropyl methylcellulose, 3 g of croscarmellose sodium, 6 g of peptized starch, 2 g of colloidal silicon dioxide) are weighed and placed in a granulator. The resulting mixture of dry ingredients is pre-mixed in a granulator for 2 minutes. After that, the required amount of water is slowly added to the granulator over 2 minutes, and the granulator is turned on for an additional 4 minutes. Wet granulate is placed in a fluidized bed dryer and dried for about 30 minutes at an inlet air temperature of 60 ° C, to a final granulate moisture of 2.4%.
  • the resulting dry granulate is passed through a 30 mesh sieve and fine powder is obtained. After that, the resulting powder is mixed with 1 g of magnesium stearate and the resulting mixture is passed through a 30 mesh sieve.
  • the parameters of the obtained powder for the formation of tablets are characterized as follows: humidity 2%, angle of repose 26 °, bulk density of 0.48 g / cm 3 .
  • the formation of the obtained powder is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 8.
  • the dry ingredients (65 g of Compound I, 25 g of microcrystalline cellulose, 2 g of croscarmellose sodium, 8.5 g of peptized starch, 1.5 g of colloidal silicon dioxide) are weighed and placed in a granulator. The resulting mixture of dry ingredients is pre-mixed in a granulator for 2 minutes. After that, the required amount of water is slowly added to the granulator over 2 minutes, and the granulator is turned on for an additional 4 minutes. Wet granulate is placed in a fluidized bed dryer and dried for about 30 minutes at an inlet air temperature of 60 ° C, to a final granulate moisture of 2.4%.
  • the resulting dry granulate is passed through a 30 mesh sieve and fine powder is obtained. After that, the resulting powder is mixed with 2 g of magnesium stearate and the resulting mixture is passed through a 30 mesh sieve.
  • the parameters of the obtained powder for tablet formation are characterized as follows: humidity 2%, angle of repose 26 °, bulk density 0.48 g / cm3.
  • the formation of the obtained powder is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 8.
  • the dry ingredients (50 g of Compound I, 20 g of microcrystalline cellulose, 10 g of hydroxypropyl methylcellulose, 4 g of croscarmellose sodium, 10 g of peptized starch, 3 g of colloidal silicon dioxide) are weighed and placed in a granulator. The resulting mixture of dry ingredients is pre-mixed in a granulator for 2 minutes. After that, the required amount of water is slowly added to the granulator over 2 minutes, and the granulator is turned on for an additional 4 minutes. Wet granulate is placed in a fluidized bed dryer and dried for about 30 minutes at an inlet air temperature of 60 ° C, to a final granulate moisture of 2.4%.
  • the resulting dry granulate 30 mesh is passed through a sieve and fine powder is obtained. After that, the resulting powder is mixed with 3 g of magnesium stearate and the resulting mixture is passed through a 30 mesh sieve.
  • the parameters of the obtained powder for tablet formation are characterized as follows: humidity 2%, angle of repose 26 °, bulk density 0.48 g / cm3.
  • the formation of the obtained powder is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 8.
  • the dry ingredients (50 g of Compound I, 25 g of microcrystalline cellulose, 10 g of hydroxypropyl methylcellulose, 1, 5 g of croscarmellose sodium, 10 g of peptized starch, 0.5 g of colloidal silicon dioxide) are weighed and placed in a granulator. The resulting mixture of dry ingredients is pre-mixed in a granulator for 2 minutes. After that, the required amount of water is slowly added to the granulator over 2 minutes, and the granulator is turned on for an additional 4 minutes. Wet granulate is placed in a fluidized bed dryer and dried for about 30 minutes at an inlet air temperature of 60 ° C, to a final granulate moisture of 2.4%.
  • the resulting dry granulate is passed through a 30 mesh sieve and fine powder is obtained. After that, the resulting powder is mixed with 3 g of magnesium stearate and the resulting mixture is passed through a 30 mesh sieve.
  • the parameters of the obtained powder for the formation of tablets are characterized as follows: humidity 2%, angle of repose 26 °, bulk density of 0.48 g / cm 3 .
  • the formation of the obtained powder is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 8.
  • the dry ingredients (44 g of Compound I, 25 g of microcrystalline cellulose, 10 g of hydroxypropyl methylcellulose, 5 g of croscarmellose sodium, 10 g of peptized starch, 3 g of colloidal silicon dioxide) are weighed and placed in a granulator. The resulting mixture of dry ingredients is pre-mixed in a granulator for 2 minutes. After that, the required amount of water is slowly added to the granulator over 2 minutes, and the granulator is turned on for an additional 4 minutes. Wet granulate is placed in a fluidized bed dryer and dried for about 30 minutes at an inlet air temperature of 60 ° C, to a final granulate moisture of 2.4%.
  • compositions for inhalation administration can be obtained using methods for preparing compositions for nebulizers, which are known to a person skilled in the art:
  • the required amount of water is placed in the reactor. After that, 20 g of microcrystalline cellulose, 5 g of sodium carboxymethyl cellulose, 1.7 g of monopotassium phosphate are added to the reactor and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. Separately, 10 g of Compound I was mixed with 2 g of Polysorbate 80, after which the mixture was added to the reactor until a homogeneous solution. After that, the resulting mixture is continuously stirred until a homogeneous suspension is obtained. The pH value of the resulting homogeneous suspension, if necessary, can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compound I).
  • Packaging the resulting suspension is carried out in the following way:
  • the final suspension is sterilized, in particular a steam thermal sterilization method is suitable. Aliquots of the suspension after sterilization are placed in suitable sterile containers, for example, disposable containers, such as vials or ampoules, which are suitably formed from thermoplastic materials.
  • the required amount of water is placed in the reactor. After that, 20 g of microcrystalline cellulose, 5 g of sodium carboxymethyl cellulose, 1.7 g of monopotassium phosphate are added to the reactor and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. Separately, 20 g of Compound I was mixed with 2 g of polysorbate 80, after which the mixture was added to the reactor until a homogeneous solution. After that, the resulting mixture is continuously stirred until a homogeneous suspension is obtained. The pH value of the resulting homogeneous suspension, if necessary, can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compound I). Packaging the resulting suspension is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 14.
  • the required amount of water is placed in the reactor. After that, 20 g of microcrystalline cellulose, 5 g of sodium carboxymethyl cellulose, 1.7 g of monopotassium phosphate are added to the reactor and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. Separately, 30 g of Compound I was mixed with 2 g of polysorbate 80, after which the mixture was added to the reactor until a homogeneous solution. After that, the resulting mixture is continuously stirred to obtain homogeneous suspension. The pH value of the resulting homogeneous suspension, if necessary, can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compound I). Packaging the resulting suspension is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 14.
  • the required amount of water is placed in the reactor. After that, 20 g of microcrystalline cellulose, 5 g of sodium carboxymethyl cellulose, 1.7 g of monopotassium phosphate are added to the reactor and stirred until a homogeneous clear solution is obtained. Separately, 40 g of Compound I was mixed with 2 g of Polysorbate 80, after which the mixture was added to the reactor until a homogeneous solution. After that, the resulting mixture is continuously stirred until a homogeneous suspension is obtained. The pH value of the resulting homogeneous suspension, if necessary, can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compound I). Packaging the resulting suspension is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 14.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 100 g of ethanol are added to the reactor, and the resulting solution is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 5 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I).
  • the final solution can be sterilized, for example, by filtration. After that, the resulting solution can be distributed in suitable containers for use in a single dose of a standard dosage form, for example, in sterile vials or syringes.
  • the pharmaceutical composition for injection according to the technical solution may have a dosage of 5 ml solution in each dose, although you can use a single dose with a large volume, for example, up to 30 ml.
  • vials or syringes containing a pharmaceutical composition for injection by technical solution are autoclaved, for example, by treatment at a temperature of about 121 ° C. for about 15 minutes.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 100 g of ethanol are added to the reactor, and the resulting solution is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 25 g of Compound I are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 100 g of ethanol are added to the reactor, and the resulting solution is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 35 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 100 g of ethanol are added to the reactor, and the resulting solution is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required level value The pH of the solution is in the range of 6 to 8, 55 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compound I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 100 g of ethanol are added to the reactor, and the resulting solution is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 70 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 140 g of sulfobutyl ether-p-cyclodextrin are added to the reactor, and the resulting mixture is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 5 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 140 g of sulfobutyl ether-p-cyclodextrin are added to the reactor, and the resulting mixture is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 25 g of Compound I are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 140 g of sulfobutyl ether-p-cyclodextrin are added to the reactor, and the resulting mixture is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 35 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 140 g of sulfobutyl ether-p-cyclodextrin are added to the reactor, and the resulting mixture is stirred. After that, 1.7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g of sodium hydroxide are added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 55 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • the required amount of water is placed in a stirred reactor, after which 140 g of sulfobutyl ether-p-cyclodextrin are added to the reactor, and the resulting mixture is stirred. After that, 1, 7 g of monopotassium phosphate and 0.3 g sodium hydroxide is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until a homogeneous solution is formed.
  • the pH of the resulting homogeneous solution can be adjusted by adding dilute solutions of hydrochloric acid or sodium hydroxide. After setting the required pH value of the solution in the range from 6 to 8, 70 g of Compound I is added to the reactor, the resulting mixture is stirred until Compound I is completely dissolved. If necessary, water for injection is additionally added to the resulting final solution to obtain the desired concentration of the active ingredient (Compounds I). Sterilization and packaging of the resulting solution is carried out in a manner analogous to the method disclosed in Example 18.
  • mice were used (BALB / c, n 6).
  • test Compound I was evaluated both in nutrient broth and in blood serum by serial microdilution. The analysis was performed in 96-well plates. Serial double dilutions of Compound I were added to the wells at concentrations of 32 to 0.06 mg / ml. To determine the MIC in the broth, BASTEC 7H12B medium was used as a diluent, while the same amounts of 7H12B broth and calf fetal serum were used to determine the MIC in serum (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.). Each well was inoculated with a diluted washout of M. tuberculosis culture (5 ⁇ 105 CFU / ml), which was previously cultured on solid nutrient medium.
  • the plates were incubated at 37 ° C for 16-18 days, and the microwells were evaluated by the visible growth line. The lowest concentration at which there was no apparent turbidity was determined as MIC. It was found that the MIC of Compound I in the WASTES 7H12B liquid medium and blood serum are equal to 0.05 mg / ml.
  • the kinetics of the external bactericidal activity of Compound I was measured in WASTES broth. The medium was heated to recalculate the number of colony forming units (CFU) on tablets with Middlebrook 7H1 1 medium. It was found that Compound I exhibits a concentration dependence and is effective according to indicators of extracellular bactericidal activity against M. tuberculosis (Fig. 2).
  • Intracellular bactericidal activity was studied on cultures of murine macrophages J774A.1. It was shown that the growth of M. tuberculosis in macrophages of J774.A was inhibited by Compound I at 0.05 mg / ml. The maximum inhibition of CFU was achieved on day 4.
  • mice and guinea pigs were infected via an inhalation channel in an inhalation chamber.
  • mice and guinea pigs were given a dose of 0, 3, 5, 13, 30, 90 mg / kg daily for 6 days and 2 weeks.
  • the lungs were aseptically isolated and homogenized in a final volume of 2.0 ml.
  • MIC value is the most low concentration ( ⁇ g / ml) of a compound that inhibits the growth of microorganisms. Used the following controls:
  • results were considered correct if the positive control - rifampin was active in the range of MIC values from 0.05 to 0.2 ⁇ g / ml, and isoniazid - in the range of MIC values from 0.025 to 0.05 ⁇ g / ml.
  • the cytotoxicity of Compound I against eukaryotic cells was determined on the THP-1 human monocyte cell line.
  • Cells were differentiated into macrophage-like cells using 4-phorbol-12 myristate-13-acetate (PMA) (Sigma-Aldrich) and incubated with the compounds for three days and cell survival was determined.
  • the IC50 value was defined as the concentration, which leads to a decrease in cell survival by 50%.
  • THP-1 cells were cultured in RPMI medium (RPMI-1640 (Fisher), fetal bovine serum, pH 7.2 (10%) (Fisher), 2 mM GlutaMAX (Fisher), 1 mM sodium pyruvate) and differentiated into macrophage-like using 80 nM RMA overnight at 37 ° C, 5% CO 2 .
  • Compound I has a low cytotoxicity index, therefore it is safe to use for the treatment of TB.
  • test Compound I The binding of test Compound I to human plasma proteins was determined using equilibrium dialysis.
  • the compound was tested using a semipermeable membrane that separates two volumes that respectively contain protein (human plasma) and buffer. Molecules can penetrate freely, but proteins cannot pass through the membrane.
  • the test compound was mixed with human blood plasma and introduced into the device. After equilibration at 37 ° C with PBS, the test compound in each compartment was quantified using LC-MS / MS.
  • the compound was added to blood plasma at a fixed concentration of 5 ⁇ M.
  • the mixture was dialyzed in an RFD (Rapid Equilibrium Dialysis, Pierce) device against PBS and incubated on an orbital shaker for 4 hours at 37 ° C. Aliquots of plasma and PBS were collected; the same volume of PBS was added to the blood plasma samples and the same plasma volume was added to the PBS samples. Three volumes of methanol (containing internal binding standard propranolol (Sigma)) were added to precipitate the proteins and isolate the compound. The compound was tested twice. Samples were centrifuged, the supernatant was restored and analyzed using LC-MS / MS. Each sample included warfarin (Sigma) as a highly binding control. The percentage of binding to plasma proteins for Compound I are shown in table 3.
  • the permeability of Compound I was evaluated using a monolayer of Caco-2 cells. The permeability of the compounds was determined in both directions. To direct AB permeability, the compound was added to the apical side of the monolayer of Caco-2 cells and the transport of the compound to the basal side. To direct BA permeability, the compound was added to the basal side of the monolayer of Caco-2 cells and the transport of the compound to the apical side was determined. The study was carried out for 2 hours twice. The amount of compound that was present in each compartment was quantified using LC-MS / MS.
  • Caco-2 cells were trypsinized, resuspended in medium, and plated on a 96-well Millipore 96-well Caco-2 plate. Cells grew and differentiated for three weeks. Nutrients were added at two-day intervals.
  • Compound I was added to the apical (A) side and the permeability of the compound was determined on the basolateral (B) side;
  • Compound I was added to the basolateral (B) side and the permeability of the compound was determined on the apical (A) side.
  • Atenolol MP Biomedicals
  • propanolol Sigma
  • high permeability propanolol
  • TRC talinolol
  • Side A contained 100 ⁇ M Lucifer yellow (Sigma) dye in a transport buffer with a pH of 6.5 (1, 98 g / l glucose in 10 mM HEPES (Sigma), 1X Hank's Balanced Salt Solution (Lonza)), and side B contained a transport buffer with pH 7.4 (1, 98 g / l glucose in 10 mM HEPES (Sigma), 1X Hank's Balanced Salt Solution (Lonza)). Caco-2 cells were incubated with these buffers for 1 or 2 hours, the receiving side buffer was analyzed using LC-MS / MS.
  • Compound I was tested for its ability to inhibit six forms of the enzyme P450-CYP2B6, CYP2C8, 5CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 and CYP3A4.
  • human liver microsomes were incubated with a specific substrate of each CYP isoform in the presence of a compound.
  • the formation of metabolites for each isoform was quantified using LC- MS / MS as the degree of enzyme activity. Enzymatic activity was calculated and IC50 was determined.
  • Compound I was dissolved in a mixture of acetonitrile-DMSO (9: 1). The final DMSO content in the reaction mixture was the same in all solutions used in the analysis, and was ⁇ 0.2%. The experiments were repeated.
  • the compound was incubated with human liver microsomes in a buffer solution containing 2 mM NADPH (reduced form of the coenzyme nicotinamide adenine nucleotide phosphate) (Sigma) and a substrate in a final volume of 200 ml.
  • the reaction mixtures were incubated at 37 ° C for an optimal time (10-60 min), and stopped by the addition of methanol, which contained an internal standard (propranolol) for analytical determination.
  • Compound I was tested for microsomal stability using a pool of human liver S9 microsomes (Celsis). Microsomes were incubated with the test compound at 37 ° C in the presence of the cadactor NADPH (Sigma), the reaction was stopped, the supernatant was restored and the compound was quantified by LC-MS / MS. Fixed concentrations of the tested compounds were determined twice at 5 hour points, and the stability of the compounds was expressed as a function of time.
  • Compound I was tested with human liver microsomes at 37 ° C with repetition. Each sample contained 0.3 mg / ml of human microsomal protein in a buffer solution (2 mM NADPH, 3 mM MgCb (Sigma), 100 mM sodium phosphate buffer; pH 7.4). Samples were separated after 0, 5, 15, 30 and 45 minutes, mixed with an equal volume of solution (methanol), which stops the reaction (contains propranolol (Sigma) as an internal standard), and incubated> 10 minutes at -20 ° C. An additional volume of water was added, centrifuged to separate the precipitated protein, and the supernatant was analyzed using LC-MS / MS to quantify the remaining starting compound. A control reaction was carried out without NADPH (control buffer) in order to determine the degradation of the compound, which was independent of NADPH. Verapamil (Sigma) and dextromethopharm (Sigma) were introduced as control compounds.
  • the cytotoxicity of Compound I against eukaryotic cells was determined using human liver cells HepG2 (ATCC). HepG2 cells were incubated with the compound for 72 hours and cell viability was determined. IC50 was defined as the concentration of the compound, which leads to a 50% reduction in cell survival after 72 hours of incubation. The cytotoxicity of the compound was determined by measuring the viability of HepG2 cells after three days of incubation in the presence of the test compound. The compound was serially diluted in DMSO. The highest concentration of the compound was 100 ⁇ M, where Compound I was soluble in DMSO at 10 mM concentration.
  • HepG2 cells were cultured in DM EM (high glucose DMEM (Invitrogen), 1X penicillin-streptomycin solution (Fisher), 2 mM Corning Glutogro supplement (Fisher), 1 mM sodium pyruvate (Fisher), fetal bovine serum (10% ) (Fisher)) were plated in 384-well assay plates that contained the compound and incubated for 24 hours at 37 ° C, 5% CO2. After the addition of Compound I, the cells were incubated for another 72 hours. The final concentration of DMSO was 1%. Cell viability was determined using a CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega) by measuring relative luminescence units (RLU).
  • RLU relative luminescence units
  • IC50 was defined as the concentration of the compound, which leads to a decrease in cell viability by 50%.
  • stasporin Santa Cruz Biotechnology
  • Compound I was not cytotoxic (IC50> 100 ⁇ M), while the IC50 value of stasporin, which is a positive control, was 0.045 ⁇ M.
  • the concentration of Compound I in the blood plasma of infected mice was determined by HPLC analysis after deposition of TCA and chemical derivatization with cinnamaldehyde.
  • FC Compound I in uninfected mice were examined orally as a single dose of 10 ml / kg body weight. Doses used: 0, 1, 3, 10, 30, 90 and 120 mg of Compound I per kg in 0.25% (w / v) carboxymethyl cellulose. It was found that the Compound I FC in uninfected male mice (BALB / c) showed a linear dynamics of the FC curve between doses of 0.1 and 120 mg / kg.
  • the time to reach the maximum concentration (C max ) of Compound I ranged from 0, 16 to 0.5 hours, and the half-life was from 0.4 to 1, 6 hours (Fig. 3).
  • the second step was a comparison of the pharmacokinetics of Compound I with intragastric (iv) and intravenous (iv) routes of administration.
  • V.V. Administration Compound I was administered once at a dosage of 10 mg / kg.
  • One-time w. the introduction was carried out in dosages of 0.2, 0.5, 1, 5 and 25 mg / kg.
  • FC with repeated injections per os for 3 days at a dosage of 25 mg / kg (Fig. 4.) log-mKOE / ml
  • Compound I acts as an inhibitor of the liver microsome enzymes CYP2C19 and CYP3A4. Thus, this can increase the risk of increasing the concentration and effect on the body of drugs that are eliminated through any of these pathways.
  • a study of the combined use of Compound I with rifampicin showed a partial leveling of the hepatotoxic effect of Compound I.
  • the distribution of Compound I in the body is characterized by a volume of distribution of 0.57 to 0.76 l / kg. Binding to blood proteins is very low (0-10%).
  • Metabolism Compound I undergoes a significant metabolism that occurs in the cells of the mucous membrane of the small intestine and liver.
  • the first step in the metabolism of Compound I is inactivation via acetylation.
  • the second stage of metabolic transformation is the hydrolysis of the primary metabolic products.
  • the acetylation of Compound I depends on the genetically determined metabolic rate of the body, which is inherent in individuals called fast or slow acetylators (this is due to genetic polymorphism in the metabolic enzyme N-acetyltransferase). Different ethnic groups contain different proportions of acetylating phenotypes. Based on this, the status of the acetylator is the main determinant of the effect of Compound I in a certain dose.
  • a study of acute toxicity in a single administration was studied for 14 days.
  • the study of subacute, subchronic, and chronic toxicity under repeated administration was carried out in rats and rabbits by oral and intravenous administration for a total period of up to 9 months.
  • safety pharmacology indicators were additionally recorded: the state of the cardiovascular, nervous, respiratory and urinary systems.
  • LD50 semi-lethal dose
  • a study of acute toxicity in rats showed that a semi-lethal effect was achieved at a dose of 1250 mg / kg when administered orally. It has been established that the central nervous system is the target organ of acute toxicity.
  • the test compound when administered in a single lethal dose, caused generalized convulsions, coma, and metabolic acidosis. Death occurred as a result of acute respiratory failure or hypotension.
  • a study of subacute toxicity in daily oral administration of Compound I to rats showed that the NOAEL was 35 mg / kg.
  • a study of chronic toxicity over 26 weeks showed that the hepatobiliary system is the main target organ.
  • the mechanism of hepatotoxicity is associated with the acylation of acetylisoniside (a metabolic product) of the test compound, which leads to the formation of monoacetylhydrazine, which, as proved, is a powerful hepatotoxin in animals.
  • Microsomatic metabolism of monoacetylhydrazine in animals leads to the formation of reactive acylating forms that can covalently bind to tissue macromolecules (i.e., liver protein) and eventually cause liver necrosis. Toxicological changes in the liver were reversed when the use of Compound I was withdrawn.
  • Compound I exerted an effect on the genotoxic potential in standard in vitro tests, including studies on Salmonella typhimurium culture, mouse lymphoma cells, and evaluation of mutagenicity using the AMES test. At the same time, according to the results of chronic toxicity under conditions of administration of a concentration that exceeded the expected therapeutic dose by 3 times, studies of rat lung cell homogenate showed DNA damage to these organs.
  • Compound I exhibits high antimycobacterial activity against the pathogenic strain of Mycobacterium tuberculosis H37Rv under aerobic and anaerobic conditions, and has intracellular activity on macrophage-like cells.
  • Compound I is effective against isoniazid, rifampin, and moxifloxacin-resistant strains of mycobacteria and is characterized by good ADME properties (the level of binding to blood plasma proteins is 42, 1%, the compound is permeable through a monolayer of Caco-2 cells, inhibits only one of the studied isoforms of cytochrome P450-CYP2C19) and has low cytotoxicity against eukaryotic HepG2 cells (> 100 ⁇ ).
  • the listed properties will allow you to use this compound in pharmacy as a drug for the treatment of multidrug-resistant forms of tuberculosis.
  • the study for the inhaled form of the pharmaceutical composition included 4 groups of 6 healthy volunteers who received respectively doses of 25, 50, 100 and 300 mg of Compound I by using a simple inhaler to deliver the pharmaceutical composition.
  • composition in inhaled form contains the following components in the composition:
  • the concentration of the compound in the blood serum exceeded: 2.0 ⁇ g / ml (MIC for Mycobacterium tuberculosis) after the highest dose of Compound I;
  • the half-life (t1 / 2) was: 4.3 ⁇ 1, 1 h for Compound I.
  • the pharmaceutical composition in the form of an inhalation powder with microparticles of Compound I was well tolerated by patients.
  • a dose of 300 mg for all compounds quickly reached a serum concentration of the compound above the MIC for Mycobacterium tuberculosis, indicating the potential for inhalation therapy as part of a treatment regimen for multidrug-resistant pulmonary tuberculosis.
  • the preparation of an inhaled form of the pharmaceutical composition can strengthen and improve the treatment protocols for multidrug-resistant pulmonary tuberculosis.
  • Each subject received a single dose of an inhaled form of a pharmaceutical composition with Compound I in accordance with a group dose, which was independently administered using a portable inhaler.
  • Each group underwent a blood test to evaluate the pharmacokinetics of Compound I at 13 time points: before use; at 10, 20, 30 and 45 minutes after dose inhalation; as well as at 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 and 24 hours after inhalation of a dose of the studied pharmaceutical composition.
  • Concentrations of Compound I were determined using high sensitivity liquid chromatography (HPLC-MS / MS). The lower limit of the quantification of Compound I in human plasma was 74 ⁇ g / ml, with an accuracy of 85.2%.
  • Compound I was detected in serum within 18 minutes after inhalation in 18/24 (75%) patients. In five subjects, the initial detection of Compound I occurred between 1, 1 and 2.6 hours after inhalation. All of these subjects were in groups that were prescribed a dose of 25 mg (lowest).
  • a cough occurs, it begins after the introduction of the pharmaceutical composition and ends within 5 minutes, without requiring additional treatment and any action by medical personnel. Patients also noted such adverse reactions: headache, chest tightness, thirst, moderate weakness and fatigue.
  • composition in oral form in the form of tablets contains the following components in the composition:
  • the safety of the studied pharmaceutical composition was confirmed by physical examination, monitoring of vital functions, assessment of changes in the parameters of laboratory tests of blood, urine and documentation of adverse reactions.
  • the systemic level of Compound I was measured in each dose group.
  • Study 02 Phase I was a randomized, open-label study with the introduction of 300 mg and 900 mg of Compound I, the studied pharmaceutical compositions were intended for 7 days at a dose of 300 mg and 900 mg, and the condition of patients was studied within 7 days after taking the pharmaceutical composition. All patients received pharmaceutical compositions within 30 minutes after a standardized breakfast. Patients were divided into two groups. Group 1 included six patients who were randomized to the group that received a daily dose of Compound I 900 mg, and six patients were randomized to group 2 that received a dose of 300 mg.
  • the study for the injection form of the pharmaceutical composition in the form of a solution for injection included 3 groups of 4 healthy volunteers who received respectively doses of 100 mg, 300 300 mg and 900 mg of Compound I, which were administered intravenously using 200 ml of sodium chloride solution 0, 9% for infusions.
  • composition in injectable form as an injection contains the following components in the composition:
  • Systemic concentrations of Compound I were evaluated in each dose group for 10 min after the injection. The peak and average plasma concentrations of Compound I were proportional to the dose administered. Serum concentrations exceeded 2.7 ⁇ g / ml (MIC for Mycobacterium tuberculosis) after the highest dose. The half-life (t1 / 2) was 3.9 ⁇ 1, 4 hours. Injection administration of the pharmaceutical composition of Compound I was well tolerated. A single dose of 100 mg quickly reached a concentration of the compound in serum above the MIC for Mycobacterium tuberculosis, indicating the potential of the injectable form of Compound I in the treatment of multidrug-resistant pulmonary tuberculosis.
  • Each subject received one injection of Compound I in accordance with a group dose, which was administered under the supervision of qualified specialists.
  • Each group underwent a blood test to evaluate the pharmacokinetics of Compound I at 12 time points: before use; at 10, 30 and 45 minutes after injection; as well as at 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, and 24 hours after the dose.
  • Concentrations of Compound I were determined using high sensitivity liquid chromatography (HPLC-MS / MS).
  • the lower limit of the quantification of Compound I in human plasma was 83.2 ⁇ g / ml, with an accuracy of 86.2%.
  • a linear range of quantification was determined from 73 to 4123 ⁇ g / ml.
  • Compound I was found in serum in 100% of the subjects within 5 minutes.
  • the average concentration in the interval from 0 hours to the last measurement was 1623 min mcg / ml
  • the average AUC0-t was 28126 min mcg / ml
  • the average Stax values for each group were 1723 ⁇ g / ml, 2821 ⁇ g / ml and 5912 ⁇ g / ml
  • the average maximum concentration (Tmax) was 12.9 minutes (for the 100 mg group), 13.1 minutes (for the 300 mg group), 13.8 minutes (for the 900 mg group)
  • the t1 / 2 value was 2.3 ⁇ 1, 3 hours (for the 100 mg group), 2.5 ⁇ 1, 6 hours (for the 300 mg group) and 2.9 ⁇ 1, 6 hours (for the 900 mg group).
  • Phase II An open, randomized, comparative clinical trial of Phase II was conducted to study the efficacy and safety of the oral and injection forms of Compound I in combination with standard chemotherapy protocol drugs in patients with newly diagnosed multidrug resistant pulmonary tuberculosis compared with standard therapy.
  • the pharmaceutical composition for oral and injectable form had a composition identical to that in Phase I study.
  • the 1st group of patients included 102 people who were treated in a randomized way according to the developed regimes using first and second line anti-TB drugs and broad-spectrum antibiotics with antimycobacterial activity, including Compound I in tablet and injection form at a dosage of 300 mg to 900 mg per day.
  • patients Guided by the basic principle of chemotherapy for tuberculosis patients, patients were prescribed at least 3 drugs in the regimen to which M. tuberculosis was sensitive (one of the drugs was necessarily a pharmaceutical composition with Compound I), therefore, the number of drugs in the regimen depended on the drug resistance profile of mycobacterium tuberculosis (from 5 to 3 drugs).
  • Patients of the main group were divided into 2 subgroups by randomization.
  • the first subgroup included 52 patients who received medium therapeutic doses of Compound I (0.3-0.45 g / day) in combination with standard therapy drugs.
  • the second subgroup included 50 patients who received higher doses of Compound I (0.6-0.9 g / day) in combination with standard therapy drugs. Both subgroups had the same mode of administration.
  • patients received a pharmaceutical composition with Compound I in an injectable form, subsequently, patients received a pharmaceutical composition with Compound I in a tablet form.
  • MIC minimum inhibitory concentration
  • the bacteriostatic effect was evaluated on the basis of growth retardation of the film of mycobacteria.
  • Biologically active concentrations of Compound I were studied by the maximum bacteriostatic activity of blood 1, 5-2 hours after administration of the composition, when Compound I reached a maximum concentration.
  • Bacteriostatic activity of blood was studied by the standard microbiological method of serial dilutions in a liquid nutrient medium of Proskauer-Beck, evaluated by the highest dilution of blood, at which M. tuberculosis growth retardation was still observed. Growth retardation in 1: 2 and 1: 4 dilutions was regarded as low activity, in 1: 8 and 1: 16 dilutions as average, and in 1: 32, 1: 64 dilutions and above, as high.
  • Compound I has a dose-dependent effect in relation to the frequency of healing, regression of caverns, infiltrative and caseous changes in the lungs.
  • Compound I at a dose of 5 mg / kg (0.3-0.45 g), healing, regression of caverns, infiltrative and caseous changes in the lungs were observed in 53.6% of patients, and at a dose of 10-15 mg / kg ( 0.6-0.9 g) - in 84.6%, respectively, the indicators differ significantly, p ⁇ 0.05.
  • gastrointestinal in 19.5% and 24.8% of patients were observed: gastrointestinal in 19.5% and 24.8% of patients, respectively (p> 0.05); neurological - in 1, 5% and 1, 4% (p> 0.05); vestibulo-ototoxic - in 6, 1% and 15.3% (p> 0.05); hepatotoxic - in 2, 1% and 5.3% (p> 0.05); allergic - in 1, 5% and 1, 3% (p> 0.05); cardiovascular - in 1, 5% and 1, 1% (p> 0.05); crystalluria - y0.3% and 0.9% (p> 0.05); Candidamycosis - in 1, 7% and 1, 8% (p> 0.05).
  • moderate lymphopenia allows the use of Compound I preparations for patients with reduced immunity, including in patients with positive HIV status.
  • the results of treatment using chemotherapy regimens which included the injection and tablet form of Compound I, made it possible to achieve rapid clinical and radiological dynamics with the cessation of bacterial excretion mainly up to 6 months of treatment, healing of caverns up to 8 months. This will reduce the duration of treatment for patients with pulmonary tuberculosis caused by multiresistant strains of M. tuberculosis from 24 months to 12 months.
  • composition with Compound I in injectable and tablet form increases the effectiveness of treatment in patients with multidrug-resistant tuberculosis. Higher daily doses allow for additional clinical and radiological effects due to the regression of infiltrative, caseous and destructive changes in the lungs in patients.
  • Phase II An open, randomized, comparative clinical trial of Phase II was conducted to study the efficacy and safety of the inhaled and oral forms of Compound I in combination with the standard chemotherapy protocol in patients with newly diagnosed multidrug-resistant pulmonary tuberculosis compared with standard therapy.
  • the pharmaceutical composition for inhaled and oral form had a composition identical to that in Phase I study.
  • the 1st group of patients included 53 people who were treated in a randomized way according to the developed regimes using 1st and 2nd line anti-TB drugs and broad-spectrum antibiotics with antimycobacterial activity, including Compound I in an inhaled form in a dosage of 50 to 300 mg a day.
  • patients Guided by the basic principle of chemotherapy for tuberculosis patients, patients were prescribed at least 3 drugs in the regimen to which M. tuberculosis was sensitive (one of the drugs was necessarily a pharmaceutical composition with Compound I), therefore, the number of drugs in the regimen depended on the drug resistance profile of mycobacterium tuberculosis (from 5 to 3 drugs).
  • Patients of the main group were divided into 2 subgroups by randomization.
  • the first subgroup included 24 patients who received medium therapeutic doses of Compound I (25-100 mg / day) in combination with standard therapy drugs.
  • the second subgroup included 29 patients who received higher doses of Compound I (300 mg / day) in combination with standard therapy drugs. Both groups had the same mode of administration.
  • patients received a pharmaceutical composition with Compound I in an inhaled form, and subsequently, patients received a pharmaceutical composition with Compound I in a tablet form at a dose of 900 mg per day.
  • MIC minimum inhibitory concentration
  • the bacteriostatic effect was evaluated on the basis of growth retardation of the film of mycobacteria.
  • Biologically active concentrations of Compound I were studied by the maximum bacteriostatic activity of blood 1 -1, 5-2 hours after administration of the composition, when Compound I reached a maximum concentration.
  • Bacteriostatic activity of blood was studied by the standard microbiological method of serial dilutions in a liquid nutrient medium of Proskauer-Beck, evaluated by the highest dilution of blood, at which M. tuberculosis growth retardation was still observed. Growth retardation in 1: 2 and 1: 4 dilutions was regarded as low activity, in 1: 8 and 1: 16 dilutions as average, and in 1: 32, 1: 64 dilutions and above, as high.
  • the inhaled form of Compound I is characterized by a dose-dependent effect with respect to the healing frequency, regression of caverns, and infiltrative and caseous changes in the lungs.
  • the indicators significantly differ. p ⁇ 0.05. It should be especially noted that the use of the inhaled form of Compound I significantly improves the effect of treatment, based on a more pronounced local effect, in contrast to the oral and injection routes of administration.
  • moderate lymphopenia allows the use of Compound I drugs for patients with reduced immunity, including in patients with positive HIV status.
  • results of treatment using chemotherapy regimens which included the inhaled and tablet form of Compound I, made it possible to achieve rapid clinical and radiological dynamics with the cessation of bacterial excretion mainly up to 5 months of treatment, healing of caverns up to 7 months. This will reduce the duration of treatment of patients with pulmonary tuberculosis caused by multiresistant multiresistant strains of M. tuberculosis from 24 months to 12 months.
  • the second group consisted of 40 patients with newly diagnosed multidrug resistant pulmonary tuberculosis with damage to the hepatopancreatobiliary system, who received injectable forms of rifampicin and Compound I in the intensive phase of chemotherapy. There were 60 men (75%), 20 women (25%).
  • the average age was (40, 1 ⁇ 1, 2) years. Lesions of the hepatopancreatic-biliary system were established according to ultrasound examination of the abdominal organs and laboratory results (total protein, bilirubin, AsAL, AlAT, urea, creatinine, thymol test). Bacterial isolators accounted for 100% of all cases, destruction of the lungs was found in 100% of the subjects, which were determined by generally accepted research methods.
  • Patients of group 2 in the intensive phase of chemotherapy which includes taking 4 anti-tuberculosis drugs, were given intravenous drops of rifampicin 30 mg / ml (600 mg) per 100 ml of physiological saline NaCI and Compound I intravenously 100 mg / ml (instead of the tablet forms of Compound I and rifampicin) 300 mg), patients also received tablet forms of ethambutol (1200 mg) and pyrazinamide (2000 mg). In response to the use of injectable drugs in the examined patients, 2 groups of adverse reactions were not observed in any of the cases.
  • composition of the tablet and injection forms of Compound I did not differ from the composition in the corresponding Phase I studies.
  • the main criterion for the effectiveness of treatment of tuberculosis patients in accordance with the unified clinical protocol of primary, secondary and tertiary care for tuberculosis patients is the cessation of bacterial excretion. After 60 doses of the intensive phase, all patients underwent microscopic examination of sputum.
  • the study confirmed significantly higher efficiency when using intensive phase chemotherapy programs in patients with newly diagnosed destructive multidrug resistant pulmonary tuberculosis with bacterial excretion and concomitant pathology of the hepatopancreatobiliary system of injection and tablet form Compounds I.
  • the obtained data show that the bacteriostatic and bactericidal action of Compound I in different forms against tuberculosis mycobacteria depends on the concentration of Compound I and the duration of its contact with tuberculosis mycobacteria, the higher the concentration of Compound I in the blood, the longer it remains at high levels and higher bactericidal effect.
  • endogenous intoxication syndrome in patients with newly diagnosed multiresistant pulmonary tuberculosis with concomitant damage to the hepatobiliary system, since endogenous intoxication is one of the most important criteria that determine not only the severity of the general condition of the patient, but also the prevalence of a specific inflammatory reaction and its systemic effects.
  • cytolysis syndrome occurred in 13.2% among patients of the 1st group and in 1 1, 2% of patients in group 2.
  • the proposed scheme with the use of a tablet and injection form of Compound I in the intensive phase for the treatment of patients with newly diagnosed advanced multidrug resistant pulmonary tuberculosis with concomitant damage to the hepatopancreatobiliary system is based on the possibility of quickly creating high concentrations of drugs in the pulmonary artery.
  • Gastrointestinal tract lesions were determined according to the ultrasound examination of the abdominal organs and the results of laboratory tests (total protein, bilirubin, ASaL, AlAT, urea, creatinine, thymol test).
  • Bacterial isolators accounted for 100% of all cases of lung destruction found in 100% of the subjects, which were determined by generally accepted research methods.
  • Patients of group 1 in the intensive phase of chemotherapy which included taking 4 anti-TB drugs, included an inhalation form of Compound I at a dosage of 300 mg per day. Patients also took rifampicin (600 mg), ethambutol (1200 mg) and pyrazinamide (2000 mg).
  • the main adverse reaction was a mild or moderate cough, which was transient in nature, and also did not need additional treatment, nausea, weakness, weight loss, and headache were also recorded among the adverse reactions. pain.
  • composition of the inhalation and injection form of Compound I did not differ from the composition in the corresponding Phase I studies.
  • Symptoms such as febrile or subfebrile body temperature, weight loss, excessive sweating and general weakness were taken into account for intoxication syndrome, and cough for bronchopulmonary syndrome dry or sputum, chest pain associated with breathing, hemoptysis, pulmonary hemorrhage.
  • the main criterion for the effectiveness of treatment of tuberculosis patients in accordance with the unified clinical protocol of primary, secondary and tertiary care for tuberculosis patients is the cessation of bacterial excretion.
  • all patients underwent microscopic examination of sputum.
  • group 1 after taking 60 doses of drugs, including the inhaled form of Compound I, bacterial excretion stopped in 73.7% of patients, while in patients receiving injectable forms of anti-TB drugs, including Compound I, bacterial excretion was performed at 60 doses of the intensive phase stopped in 62% of cases (p ⁇ 0.05).
  • the intensive phase was extended to all patients to 90 doses.
  • the study confirmed significantly higher efficacy when using intensive phase chemotherapy programs in patients with newly diagnosed destructive multidrug resistant pulmonary tuberculosis with bacterial excretion and concomitant gastrointestinal pathology of the injectable and inhaled forms of Compound I.
  • Obtained data show that the bacteriostatic and bactericidal action of Compound I in different forms against M. tuberculosis depend on the concentration of compounds I and the duration of its exposure to Mycobacterium tuberculosis, the greater the concentration of compound I in the blood, the longer it is retained at high levels and higher bactericidal action.
  • endogenous intoxication syndrome in patients with newly diagnosed multidrug resistant pulmonary tuberculosis with concomitant lesions of the gastrointestinal tract, since endogenous intoxication is one of the most important criteria that determine not only the severity of the general condition of the patient, but also the prevalence of a specific inflammatory reaction, and its systemic effects.
  • Bilirubin, ( ⁇ mol / L) Group 1 14.7 ⁇ 0.48 17.4 ⁇ 0.91
  • cytolysis syndrome occurred in 10.2% among patients of the 1st group and in 1 1, 3% of patients in group 2.
  • hepatomegaly - an increase in the maximum oblique size of the right lobe of the liver in 70.0% of patients by (0.8 ⁇ 0.75) cm, the indicator was (15 5 ⁇ 1, 18) cm; the length of the left lobe - increased in 75% of patients - by (0.86 ⁇ 0, 15) cm and amounted to (1 1, 8 ⁇ 2.7) cm; signs of diffuse damage to the structure of the hepatic parenchyma due to small echo signals of various densities, decreased sound conductivity and increased echogenicity of the liver parenchyma, an increase in the diameter of the lumen of the portal vein in 55% of patients.
  • the proposed treatment regimen using the inhaled and injection form of Compound I in the intensive phase for the treatment of patients with newly diagnosed advanced multidrug-resistant pulmonary tuberculosis with concomitant lesions of the gastrointestinal tract is based on the possibility of quickly creating high concentrations of medications in the pulmonary artery.
  • concentration of drugs significantly exceeds the bacteriostatic level, which gives oral administration of drugs orally and even intramuscularly.
  • a high, albeit short-lived, concentration of Compound I in the blood enhances diffusion in the lesion, and direct delivery of the drug to the lesion site by administration of the pharmaceutical composition of Compound I in an inhaled form provides significant advantages in the formation of an appropriate concentration of the anti-TB agent directly in the lesion. This method allows you to create a sufficient bacteriostatic concentration even in caseous lesions that are inaccessible to drugs.
  • the results of the analysis showed the need for a differentiated approach in prescribing program chemotherapy for advanced pulmonary tuberculosis and comorbidity with gastrointestinal tract pathology using the inhaled and injectable form of Compound I in the intensive phase of treatment.
  • the results of the study showed that the use of Compound I in patients with newly diagnosed advanced multidrug-resistant pulmonary tuberculosis and concomitant lesions of the gastrointestinal tract contributes to a significant clinical and radiological effect, namely: intoxication and bronchopulmonary syndromes after 2 months of the intensive phase were significantly absent or were easily expressed in both groups, and resorption of focal-infiltrative changes and healing of decay cavities was observed most often in a population of patients with a similar diagnosis; cessation of bacterial excretion after receiving 60 doses in the intensive phase was noted significantly more often, which significantly reduces the length of hospital stay (hospital days), improves compliance and is economically viable.
  • the claimed pharmaceutical composition is effective in the treatment of TB, in particular for the treatment of TB, which was caused by pathogens that are resistant to known anti-TB drugs.
  • embodiments of the claimed pharmaceutical composition for oral, inhalation and injectable administration have a reliable antimycobacterial effect.
  • composition according to the claimed technical solution exhibits antimycobacterial activity against strain M. tuberculosis H37Rv under aerobic conditions.
  • the pharmaceutical composition according to the claimed technical solution shows a significantly high antimycobacterial effect on five resistant strains of M. tuberculosis: INH-R1, INH-R2, RIF-R1, RIF-R2, FQ-R1.
  • the pharmaceutical composition of the claimed technical solution is not cytotoxic, has a relatively small indicator associated with blood proteins TM, easily penetrates tissues and cells and is easily excreted, which contributes to greater efficiency and safety when used in the treatment of TB, in particular, treatment of resistant TB

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения туберкулеза, которая содержит активный ингредиент и по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, причем как активный ингредиент содержит соединение формулы I.

Description

ΜΠΚ Α61 Κ 31/00
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ С ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫМ
ДЕЙСТВИЕМ
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Техническое решение относится к области медицины, а именно к средствам для лечения туберкулеза.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Туберкулез (или сокращенно ТБ) - опасное инфекционное заболевание, которое может привести к летальному исходу, и которое широко распространено в мире на сегодняшний день. Лечение туберкулеза осуществляется с использованием антибиотиков для борьбы с бактериями возбудителями туберкулеза, которыми являются микобактерии рода Mycobacterium (чаще всего Mycobacterium tuberculosis).
Туберкулезом заболевают миллионы людей каждый год, в частности, в 2015 году туберкулез был одним из десяти самых распространенных факторов, вызывающих смерть по всему миру, опередив ВИЧ/СПИД в качестве причины смерти от инфекционных заболеваний. Согласно информации, раскрытой в ежегодном отчете ВОЗ о туберкулезе от 2016 Году (Global Tuberculosis Report 2016), в 2015 году было зафиксировано 1 ,4 миллиона случаев смерти от туберкулеза и еще 0,4 миллиона случаев смерти от туберкулеза среди людей, живущих с ВИЧ. Также в 2015 году по всему миру было зарегистрировано 10,4 миллионов новых случаев заболевания туберкулезом.
Как известно, первые успешные разработки противотуберкулезных препаратов приходятся на 40-е годы XX столетия.
Согласно Сопроводительному пособию ВОЗ по лечению резистентного туберкулеза (Companion handbook to the WHO guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis. WHO 2014), выделяют следующие группы препаратов с противотуберкулезным действием:
I группа. Пероральные препараты первой линии с соединениями:
- Изониазид;
- Рифампицин;
- Этамбутол;
- Пиразинамид;
- Рифабутин;
- Рифапентин.
II группа. Инъекционные противотуберкулезные препараты (инъекционные агенты или парентеральные агенты) с соединениями:
- Стрептомицин;
- Канамицин;
- Амикацин;
- Капреомицин.
III группа. Препараты с соединениями из группы фторхинолонов:
- Левофлоксацин; - Моксифлоксацин;
- Гатифлоксацин.
IV группа. Пероральные бактериостатические противотуберкулезные препараты второй линии с соединениями:
- Этионамид;
- Протионамид;
- Циклосерин;
- Теризидон;
- Пара-аминосалициловая кислота;
- Натрий пара-аминосалицилат.
V группа. Противотуберкулезные препараты с ограниченными данными об эффективности и/или безопасности при лечении резистентного ТВ (в эту группу входят новые противотуберкулезные препараты) с соединениями:
- Бедаквилин;
- Деламанид;
- Линезолид;
- Клофазимин;
- Амоксициллин/клавуланат;
- Имипенем/циластатин;
- Меропенем;
- Изониазид в повышенных дозах
- Тиоацетазон;
- Кларитромицин;
Одним из наиболее эффективных противотуберкулезных препаратов, который на сегодняшний день широко используется в клинической практике, является такое химическое соединение как изониазид. Изониазид - это производное изоникотиновой кислоты, гидразид изоникотиновой кислоты (сокращенно ГИНК). ГИНК был впервые получен в начале XX века, а с 50-х годов XX века началось активное клиническое применение противотуберкулезных препаратов на основе ГИНК.
Фармацевтический препарат изониазид может иметь различные формы выпуска, в частности:
- Таблетки и порошки, содержащие ГИНК по 0, 1 г (100 мг), по 0,2 г (200 мг), по 0,3 г (300 мг) соответственно, которые дополнительно содержат фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
- Раствор для инъекций, содержащий 10% ГИНК соответственно, который дополнительно содержит фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
- Дополнительно, из уровня техники является известным ингаляционный путь введения изониазида.
Преимущества изониазида состоят в том, что соединение:
- имеет очень мощный бактерицидный эффект, может использоваться для лечения всех форм и локализаций активного туберкулеза;
- имеет наибольший эффект в случаях впервые выявленного туберкулеза с острым течением; - в связи с высокой эффективностью терапевтическая доза изониазида небольшая;
- относительно редко вызывает побочные реакции, пригодно для лечения туберкулеза у взрослых и детей;
- является сравнительно дешевым.
Вместе с этим, в связи с длительной историей использования изониазида для лечения ТБ на протяжении нескольких десятилетий, в частности, в виде монотерапии, все чаще стали наблюдаться случаи развития устойчивости возбудителей туберкулеза к изониазиду. В частности, из открытых данных ВОЗ известно, что в 2015 году примерно 480 тысячам человек был поставлен диагноз мультирезистентный туберкулез.
Лечение мультирезистентного туберкулеза требует длительного применения токсичных и дорогостоящих препаратов, и имеет, как правило, плохие последствия для пациента. Случаи мультирезистентного ТБ характеризуются, в частности высокой смертностью (только в 60% случаев лечение мультирезистентного ТВ является эффективным и успешным) и последующим распространением резистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis (М. tuberculosis) в пределах человеческого сообщества. Кроме того, на сегодняшний день, оптимальный состав фармацевтических композиций для лечения мультирезистентного ТБ и продолжительность режима его лечения остаются неопределенными. В связи с увеличением частоты случаев мультирезистентного ТБ, очевидной необходимостью является направленность современных противотуберкулезных программ на борьбу именно с туберкулезом, который является резистентным к известным лекарственным средствам и способам лечения.
Таким образом, на сегодняшний день актуальной проблемой является разработка новых лекарственных средств для лечения ТБ и способов лечения ТБ (новые лекарственные препараты, новые режимы и подходы лечения и т.д.), которые будут более эффективными по отношению к возбудителям туберкулеза, в том числе по отношению к возбудителям туберкулеза, резистентных к известным противотуберкулезным препаратам, которые на данный момент используются в терапевтической практике.
В связи с этим возникает необходимость в поиске новых активных соединений, которые способны проявлять противотуберкулезную активность и являются безопасными для использования в лечении ТБ, в частности, в лечении резистентного ТБ, и создании новых фармацевтических композиций и фармацевтических препаратов для использования в лечении туберкулеза, в том числе, в лечении резистентного ТБ.
Одним из наиболее перспективных направлений является исследование противотуберкулезной активности производных известных соединений, которые имеют клинически подтвержденное противотуберкулезное действие. Известно, что противотуберкулезную активность способны проявлять соединения различных химических классов: производные ГИНК или изоникотиновой кислоты, производные тиосемикарбазона, соединения таких классов как аминогликозиды, з фторхинолоны, тиоамиды и тому подобных. В частности, особый интерес вызывают соединения, являющиеся производными изониазида.
Задачей данного технического решения является создание фармацевтической композиции с противотуберкулезным действием на основе новых активных соединений, которые проявляют активность в отношении бактерий возбудителей туберкулеза, в частности, проявляют антимикобактериальную активность в отношении возбудителей туберкулеза, резистентных к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; расширение арсенала и ассортимента лекарственных средств для лечения туберкулеза, в частности, расширение арсенала и ассортимента лекарственных средств для лечения туберкулеза, который является резистентным к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; повышение эффективности лечения туберкулеза, в частности, туберкулеза, который является резистентным к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; улучшение качества жизни больных туберкулезом, в частности, больных формой туберкулеза, резистентного к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату, за счет уменьшения срока лечения болезни, пониженной токсичности фармацевтической композиции, уменьшение возможности рецидива заболевания, улучшение показателей излечиваемости и выживаемости больных.
СУТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задача решается фармацевтической композицией для лечения туберкулеза, которая содержит активный ингредиент и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, причем как активный ингредиент содержит соединение формулы I
Figure imgf000005_0001
Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для перорального введения.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может быть изготовлена в лекарственной форме, пригодной для перорального введения, которая может быть выбрана из группы лекарственных форм, которая включает таблетку, капсулу, порошок, диск, каплету, гранулу, гранулу в капсуле, минитаблетку, минитаблетку в капсуле, пеллету, пеллету в капсуле, саше, таблетку для рассасывания, жевательную таблетку, шипучие таблетки, пленку для растворения во рту, жидкую форму в твердых желатиновых капсулах, жидкую форму в мягких желатиновых капсулах, жидкую форму в капсулах из гидроксипропилметилцеллюлозы, полутвердую форму в твердых желатиновых капсулах, полутвердую форму в мягких желатиновых капсулах, полутвердую форму в капсулах из гидроксипропилметилцеллюлозы.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы веществ, включающих наполнитель, связывающий агент, смазочный агент, дезинтегратор, глидант, антиоксидант, подсластитель, краситель, ароматизатор, консервант, хелатирующий агент, агент для маскировки вкуса.
Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для ингаляционного введения.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать в качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества фармацевтически приемлемый носитель, в котором суспендируют или растворяют активный ингредиент.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включая суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивный агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать как агент для регулирования значения уровня рН, по меньшей мере, одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемое основание.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивный агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 90% по массе.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивный агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 50% по массе.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивный агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 25% по массе.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивный агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 10% по массе.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивный агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 1 % по массе.
Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для инъекционного введения.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать как фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества воду для инъекций и, по меньшей мере, один сорастворитель или солюбилизатор.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать как агент для регулирования значения уровня рН, по меньшей мере, одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемую основание.
Некоторые данные объекта изобретения показаны с помощью чертежей, которые предоставлены на Фигурах 1 -4.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения I.
Фиг. 2 - кинетика внешней бактерицидной активности Соединения I.
Фиг. 3 - фармакокинетика в условиях однократного введения Соединения I per os неинфицированным мышам.
Фиг.4 - сравнение фармакокинетики Соединения I при внутривенном и внутрижелудочном введении. СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Фармацевтическая композиция согласно техническому решению содержит как активный ингредиент соединение формулы I
Figure imgf000008_0001
В дальнейшем в тексте соединение формулы I
Figure imgf000008_0002
будем для сокращения называть Соединение I.
Соединение I принадлежит к классу таких соединений как производные изониазида, и может быть получено следующим способом:
5 г (36 ммоль) гидразида изоникотиновой кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 50 мл изопропанола растворяют 4 г (36 ммоль) 1\1-метил-пиррол-2-карбальдегида при температуре 60°С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 0,5-1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры, кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 63%. Чистота продукта не ниже 95%.
Figure imgf000008_0003
Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения из 70%-го или чистого изопропанола. Структуру синтезированного Соединения I устанавливали с помощью спектров 1 Н-ЯМР, записанных в ДМСО-De на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом-ТМС, который представлен на Фиг.1 . Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленному Соединению I.
Фармацевтическая композиция по техническому решению, содержащая Соединение I и вспомогательное вещество, может быть воплощена в более чем одной лекарственной форме.
Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена перорально или приготовлена для перорального введения. Фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может быть изготовлена в форме таблеток, капсул, порошков, диска, каплет, гранул, пеллет, гранул в капсуле, минитаблеток, минитаблеток в капсуле, пеллет в капсуле, саше, таблеток для рассасывания, жевательных таблеток, шипучих таблеток, пленки для растворения во рту, жидкой или полужесткой формах в твердых желатиновых капсулах, мягких желатиновых капсул, капсулах ГПМЦ (гидроксипропилметилцеллюлоза) и других лекарственных формах, пригодных для перорального применения.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, где одно или более вспомогательное вещество может быть выбрано из группы, которая включает связующие агенты, наполнители, смазочные агенты, дезинтеграторы, глиданты, солюбилизаторы и тому подобное.
Приемлемые связующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает повидон, крахмал, стеариновую кислоту, камеди, целлюлозу и тому подобное.
Приемлемые наполнители могут быть выбраны из группы, которая включает микрокристаллическую целлюлозу, фосфат кальция, сульфат кальция, каолин, сухой крахмал, сахарную пудру и тому подобное.
Приемлемые смазочные агенты могут быть выбраны из группы, которая включает стеарат магния, стеарат цинка, стеарат кальция, стеариновую кислоту, стеарилфумарат натрия и тому подобное.
Приемлемые дезинтеграторы могут быть выбраны из группы, которая включает крахмал, кроскармеллозу натрия, кросповидон, крахмалгликолят натрия и тому подобное.
Приемлемые глиданты могут быть выбраны из группы, которая включает коллоидный диоксид кремния, тальк, кукурузный крахмал и тому подобное.
Приемлемые солюбилизаторы могут быть выбраны из группы полимеров, включая гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), гидроксиэтилцеллюлозу (ГЭЦ), метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу (ГПЦ), эудрагит, поливинилпирролидон (ПВП) и др.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать один или несколько других вспомогательных агентов, известных в данной области, таких как антиоксиданты, подсластители, красители, ароматизаторы, консерванты, хелатирующие агенты, маскирующие вкус агенты и др.
Приемлемые подсластители могут быть выбраны из группы, которая включает моносахариды, дисахариды и полисахариды, такие как, например, ксилоза, рибоза, глюкоза, манноза, галактоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, инвертный сахар, частично гидролизованный крахмал, концентрированный кукурузный сироп, маннитол, ксилит, D-сорбит, эритрит, пентитол, гекситол, мальтитол, дигидрохальконы, монелин, стевиозиды или глицирризин; сахарин в форме свободной кислоты, растворимые соли сахарина, например соли натрия или кальция, цикламатные или соли ацесульфама К; подсластители на основе дипептида, такие как подсластители, полученные из L-аспарагиновой кислоты, например аспартам; водорастворимые подсластители, полученные из природных водорастворимых подсластителей, например сукралоза; и белковые подсластители, например Thaumatococcus danielli (Тауматин I и II) и др.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать приемлемые ароматизаторы, которые известны для специалиста в данной области, такие как натуральные, "идентичные натуральным" и искусственные ароматизаторы. Эти ароматизаторы могут быть выбраны, например, из синтетических ароматических масел, усилителей вкуса и аромата, экстракционных эфирных масел, полученных, например, из растений, листьев, фруктов и тому подобное.
Типичные ароматы могут быть выбраны из группы, которая включает масла мяты курчавой, корицы, мяты перечной, гвоздики, лавра, чабреца, кедровых листьев, мускатного ореха, шалфея, горького миндаля, ванили, масла бобов кофейного дерева, какао-бобов и цитрусовых, лимона, апельсина, вишни, винограда, лайма, грейпфрута; фруктовые эссенции, например яблоки, груши, персика, клубники, малины, вишни, сливы, ананаса или абрикоса; мяты, такие как перечная мята (включая ментол, в частности L-ментол) альдегиды и эфиры, например циннамилацетат, циннамальдегид, цитраль, диэтилацеталь, дигидрокарвилацетат, п-метиланизол; альфа-цитраль и бета-цитраль деканаль; этилванилин; пиперональ (гелиотропин); ванилин; альфа-амилциннамальдегид; бутиральдегид; валеральдегид; цитронеллаль; деканаль; альдегиды С-8; альдегиды С-9; альдегиды С-12; 2-этилбутирадегид; гексенали, например, транс- 2-гексеналь; толилальдегид; вератральдегид; 2,6-диметил-5-гептеналь (мелональ) 2-6-диметилоктаналь; 2-додеканаль и тому подобное.
Приемлемые хелатирующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает лимонную кислоту, малеиновую кислоту, янтарную кислоту, винную кислоту, ЕГТА (этиленгликоль-бис ((3-аминоэтиловий эфир) тетрауксусной кислоты) и ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота). Такие хелатирующие агенты являются коммерчески доступными в различных формах, например, в формах солей натрия или калия, или свободных кислот и тому подобное.
Приемлемые антиоксиданты могут быть выбраны из группы, которая включает токоферол, токоферолацетат, витамина Е полиэтиленгликоль сукцинат, пропилгалат, бутилгидрокситолуол и бутилгидроксианизол и тому подобное. Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать один или несколько других вспомогательных агентов, известных в данной области, таких как антиоксиданты, подсластители, красители, ароматизаторы, консерванты, хелатирующие агенты, маскирующие вкус агенты и тому подобное.
Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена ингаляционно или приготовлена для ингаляционного введения. Фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению содержит активный ингредиент, суспендированный в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе.
Преимущественно, фармацевтически приемлемым носителем может быть вода, в частности, вода для инъекций. Вода для инъекций является коммерчески доступной, и, как известно специалисту в данной области, может быть получена, например, методом дистилляции или обратного осмоса.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать другие ингредиенты, такие как суспендирующие агенты, смазочные агенты, мукоадгезивные агенты, изотонирующие агенты, консерванты, буферные агенты и/или фармацевтически приемлемые кислоты или основания для регулирования значения уровня рН растворов.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть изотонической по отношению к жидкостям легких. Уровень тоничности фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулирован путем добавления приемлемого для этих целей соединения, например, хлорида натрия, глюкозы или хлорида кальция.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может иметь значение уровня рН от 6 до 8, в частности от 6,5 до 7,5, более точно от 6,7 до 7,3.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать буферную систему или буфер для установления значения уровня рН композиции в необходимом интервале. Для этого может быть использована любая фармацевтически приемлемая буферная система, которая способна установить значение уровня рН композиции в необходимом интервале. Например, буферы, которые могут быть использованы, включают фосфатный, ацетатный, цитратный буфер или их смеси.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать фосфатный буфер. Этот буфер может быть приготовлен, например, путем растворения монокалий фосфата и гидроксида натрия в воде.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать от примерно 0,001 % до 90%, от примерно 0,001 % до 50%, от примерно 0,001 % до 25%, от примерно 0,001 % до 10%, от примерно 0,001 % до 1 % одного или более вспомогательных веществ, выбранных из группы эмульгирующих агентов, увлажняющих агентов или суспендирующих веществ.
Приемлемые вспомогательные вещества могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: полисорбаты, включая, но не ограничиваясь веществами полиэтиленсорбитан моноолеат (полисорбат 80), полисорбат 20, полисорбат 65, полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат, полиоксиэтилен (20) сорбитан монопальмитат, полиоксиэтилен (20) сорбитан моностеарат; лецитины; альгиновая кислота; натрий альгинат; калий альгинат; аммоний альгинат; кальций альгинат; пропан-1 ,2-диол альгинат; агар-агар; каррагинан; камедь рожкового дерева; гуаровая камедь; трагакант; камедь акации; ксантановая камедь; камедь карайи; пектин; амидированный пектин; фосфатиды аммония; микрокристаллическая целлюлоза; метилцеллюлоза; гидроксипропилцеллюлоза; гидроксипропилметилцеллюлоза; этилметилцеллюлоза; карбоксиметилцеллюлоза; соли жирных кислот натрия, калия и кальция; моно- и диглицериды жирных кислот; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и уксусной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и молочной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и лимонной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и винной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и диацетилвинной кислоты; смешанные сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и уксусной и винной кислот; сложные эфиры сахарозы и жирных кислот; сахароглицериды; сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот; сложные эфиры полиглицерина и поликонденсированных жирных кислот рицинового масла; сложные эфиры пропан-1 ,2-диола и жирных кислот; стеароил-2-лактилат натрия; стеароил-2- лактилат кальция; стеарилтартрат; сорбитан моностеарат; сорбитан тристеарат; сорбитан монолаурат; сорбитан моноолеат; сорбитан монопальмитат; экстракт квиллайи; сложные эфиры полиглицерина и димерных жирных кислот соевого масла; оксидативно полимеризованное соевое масло; и экстракт пектина. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению содержит полисорбат 80, микрокристаллическую целлюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу и/или декстрозу.
Преимущественно, значение уровня рН фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулировано путем добавления приемлемой кислоты или основания, обычно для таких целей используют разбавленный водный раствор соляной кислоты, где содержание соляной кислоты составляет, например, 10% масс, или разбавленный водный раствор гидроксида натрия, где содержание гидроксида натрия составляет, например, 4% масс.
Приемлемые мукоадгезивные агенты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: метил-, гидроксипропил- и натрий карбоксиметилцеллюлоза, хитозан, поливинилпирролидон и гидрогели.
В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать консервант. Приемлемые консерванты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: бензалкония хлорид, бензиловый спирт, хлорбутанол, хлорокрезол, крезол, этанол, фенол, фенилэтанол, сульфиты, тиомерсал, парабены, пропиленгликоль, бензоат натрия, фенил меркурий борат или фенил меркурий нитрат.
Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена путем инъекции или приготовлена для инъекционного введения. Фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению содержит активный ингредиент, суспендированный в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать воду для инъекций и, по меньшей мере, один сорастворитель или солюбилизатор. Вода для инъекций является коммерчески доступной, и, как известно специалисту в данной области, может быть получена, например, методом дистилляции или обратного осмоса.
Приемлемые сорастворители могут быть выбраны из группы, которая включает, в общем, неводные агенты, смешанные с водой, которые являются пригодными для парентерального введения. Преимущественно, сорастворитель представляет собой спирт, многоатомный спирт или сложный эфир. Например, сорастворитель может быть выбран из группы, которая включает этанол, 1 ,3- бутандиол (бутиленгликоль), глицерин, пропиленгликоль, 2-этоксиэтанол, глицеринформаль и их смеси.
В предпочтительном варианте осуществления сорастворителем является этанол.
Приемлемым солюбилизатором фармацевтической композиции для инъекционного введения согласно техническому решению может быть циклодекстрин. Циклодекстрины являются циклическими олигосахаридами с гидроксильными группами на внешней поверхности молекулы и пустой полостью в центре. Внешняя поверхность, как правило, является гидрофильной, поэтому циклодекстрины растворимы в воде. С другой стороны, полость, как правило, является гидрофобной. Циклодекстрины обладают способностью образовывать комплексы с посторонними молекулами, такими как зипразидон.
Приемлемые циклодекстрины могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: α-, β-, γ-циклодекстрины, метилированные циклодекстрины, гидроксипропил- β-циклодекстрин, гидроксиэтил-р-циклодекстрин, разветвленные циклодекстрины, в которых одна или две глюкозы или мальтозы присоединены к циклодекстриновому кольцу, этил- или этилкарбоксиметилциклодекстрины, дигидропропилциклодекстрины и сульфоалкил-циклодекстриновые эфиры, такие как сульфобутиловый эфир-β- циклодекстрин. Циклодекстрины могут быть незамещенными или полностью, или частично замещенными, как известно в данной области техники, смеси циклодекстринов также являются полезными. Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать γ-циклодекстрин, гидроксипропил-β- циклодекстрин, сульфобутиловый эфир-р-циклодекстрин или их смеси, в наиболее предпочтительных вариантах реализации - сульфобутиловый эфир-β- циклодекстрин.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать другие вспомогательные вещества, например, изотонирующие агенты, консерванты, буферы и/или фармацевтически приемлемые кислоты или основания для регулирования значения уровня рН растворов. Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может иметь осмолярность от 200 до 380 мОсм/кг. В случае необходимости, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать изотонирующий агент для регулировки осмолярности раствора до значения в этом интервале.
Приемлемые изотонирующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает хлорид натрия, хлорид калия, глюкозу, декстрозу и их смеси.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать буферную систему или буфер для установления значения уровня рН композиции в необходимом интервале. Для этого может быть использована любая фармацевтически приемлемая буферная система, которая способна установить значение уровня рН композиции в необходимом интервале. Например, буферы, которые могут быть использованы, включают фосфатный, ацетатный, цитратный буфер или их смеси.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать фосфатный буфер. Этот буфер может быть приготовлен, например, путем растворения монокалий фосфата и гидроксида натрия в воде.
Преимущественно, значение уровня рН фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулировано путем добавления приемлемой кислоты или основания, обычно для таких целей используют разбавленный водный раствор соляной кислоты, где содержание соляной кислоты составляет, например, 10% масс, или разбавленный водный раствор гидроксида натрия, где содержание гидроксида натрия составляет, например, 4% масс.
В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать консервант. Приемлемые консерванты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: бензалкония хлорид, бензиловый спирт, хлорбутанол, хлорокрезол, крезол, этанол, фенол, фенилэтанол, сульфиты, тиомерсал, парабены, пропиленгликоль, бензоат натрия, фенил меркурий борат или фенил меркурий нитрат.
Способ изготовления фармацевтической композиции согласно техническому решению в заявленных лекарственных формах показано далее в примерах 1 -27. Получение композиций для перорального введения
Пример 1
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I и 25 г повидона добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 2 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 2
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I, 20 г повидона и 5 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 5 г кроскармеллозы натрия, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 3
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I, 10 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 8 г кроскармеллозы натрия и 2 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 4
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 2 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 5
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 4 г кроскармеллозы натрия и 1 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 6
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 20 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 7 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 7
Получение капсулы
Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 54 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 8 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.
Пример 8
Получение таблетки, покрытой оболочкой
Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 10 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 5 г кроскармеллозы натрия, 2 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60°С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/см3.
Формование полученного порошка осуществляется следующим способом: Полученный порошок формуют в таблетки с помощью пресса. Получают таблетки овальной формы, массы (в среднем) 349 мг с хорошим показателем истираемости. Готовые таблетки в дальнейшем обрабатывают с использованием стандартных процедур и известных специалисту в данной области ингредиентов: ставят печать, покрывают таблетки пленкой и полируют.
Пример 9 Получение таблетки, покрытой оболочкой
Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 18 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 3 г кроскармеллозы натрия, 6 г пептизированного крахмала, 2 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60°С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 1 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/см3. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.
Пример 10
Получение таблетки, покрытой оболочкой
Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 2 г кроскармеллозы натрия, 8,5 г пептизированного крахмала, 1 ,5 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60°С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 2 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.
Пример 1 1
Получение таблетки, покрытой оболочкой
Сухие ингредиенты (50 г Соединения I, 20 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 4 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60°С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.
Пример 12
Получение таблетки, покрытой оболочкой
Сухие ингредиенты (50 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 1 ,5 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 0,5 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60°С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/см3. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.
Пример 13
Получение таблетки, покрытой оболочкой
Сухие ингредиенты (44 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 5 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60°С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/см3. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8. Композиции для ингаляционного введения могут быть получены с помощью способов получения композиций для небулайзеров, которые известны для специалиста в данной области:
Пример 14
Получение композиции для ингаляционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 10 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I).
Упаковка полученной суспензии осуществляется следующим способом:
Конечную суспензию стерилизуют, в частности, подходящим является метод термической стерилизации с использованием пара. Аликвоты суспензии после стерилизации помещают в пригодные стерильные контейнеры, например, одноразовые контейнеры, такие как флаконы или ампулы, которые соответствующим образом формируют из термопластичных материалов.
Пример 15
Получение композиции для ингаляционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 20 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.
Пример 16
Получение композиции для ингаляционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 30 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.
Пример 17
Получение композиции для ингаляционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 40 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.
Пример 18
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 5 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I).
Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется следующим способом:
Конечный раствор может быть стерилизован, например, путем фильтрации. После этого, полученный раствор может быть распределен в приемлемые контейнеры для применения в единичной дозе стандартной лекарственной формы, например, в стерильных флаконах или шприцах.
Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения по техническому решению может иметь дозировку в количестве 5 мл раствора в каждой дозе, хотя можно использовать единичную дозу с большим объемом, например, до 30 мл.
В определенных вариантах осуществления, флаконы или шприцы, содержащие фармацевтическую композицию для инъекционного введения по техническому решению, стерилизуются в автоклаве, например, путем обработки при температуре примерно 121 °С в течение примерно 15 минут.
Пример 19
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 25 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 20
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 35 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 21
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня pH раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 55 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 22
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 70 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 23
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 5 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 24
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 25 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 25
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 35 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 26
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 55 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Пример 27
Получение композиции для инъекционного введения
Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 70 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.
Объем данного технического решения не должен ограничиваться конкретными вариантами реализации, описанными в примерах, которые предназначены только для иллюстрации нескольких вариантов реализации заявленного технического решения. Различные модификации данного технического решения дополнительно к представленным и описанных в данной заявке очевидны для специалиста в данной области, и, предполагается, что они подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.
Для изучения фармацевтической эффекта от применения предложенной фармацевтической композиции по техническому решению, был проведен ряд исследований.
1 . Исследование антимикобактериальной активности Соединения I in vitro.
Для изучения антимикробной активности Соединения I в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv при аэробных условиях, штамм культивировали в бульоне Middlebrook 7Н9 при 37 °С в течение 7-10 дней, и оценивали путем определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) соединения. Для изучения антибактериальной активности исследуемого соединения в условиях гипоксии (внутриклеточная активность), использовали культуру мышиных макрофагов J774A.1. Для исследования фармакокинетики и эффективности исследуемого соединения использовались мыши (BALB/c, п=6).
МИК исследуемого Соединения I оценивали как в питательном бульоне, так и в сыворотке крови методом серийных микроразведений. Анализ проводили в 96- луночных планшетах. Серийные двойные разведения Соединения I вносили в лунки, при концентрациях от 32 до 0,06 мг/мл. Для определения МИК в бульоне, в качестве разбавителя использовали среду ВАСТЕС 7Н12В, тогда как для определения МИК в сыворотке использовались одинаковые количества бульона 7Н12В и сыворотки плода телят (Sigma-Aldrich, St.Louis, Mo.). Каждую лунку инокулировали разведенным смывом культуры М. tuberculosis (5х 105 КОЕ/мл), которая предварительно была культивирована на твердой питательной среде. Планшеты инкубировали при 37 °С в течение 16-18 дней, а микролунки оценивали по видимой линии роста. Наименьшую концентрацию, на которой не было видимого помутнения, определяли как МИК. Установлено, что МИК Соединения I в жидкой среде ВАСТЕС 7Н12В и сыворотке крови одинаково составляют 0,05 мг/мл. Кинетику внешней бактерицидной активности Соединения I измеряли в бульоне ВАСТЕС. Среду нагревали для пересчета количества колониеобразующих единиц (КОЕ) на планшетах со средой Middlebrook 7Н1 1 . Установлено, что Соединение I проявляет концентрационную зависимость и является эффективным согласно показателям внеклеточной бактерицидной активности по отношению к М. tuberculosis (Фиг. 2).
Внутриклеточная бактерицидная активность исследовалась на культурах мышиных макрофагов J774A.1. Показано, что рост М. tuberculosis в макрофагах J774.A ингибировался Соединением I при 0,05 мг/мл. Максимальное ингибирование КОЕ было достигнуто на 4 день.
1 .2 Исследование антимикобактериальной активности Соединения I in vivo. Использовалась аэрозольная модель инфекции (с низким числом туберкулезных бацилл) мышей и морских свинок. Мышей инфицировали через ингаляционный канал в ингаляционной камере. Через четыре недели после инфицирования, мышам и морским свинкам давали дозу 0, 3, 5, 13, 30, 90 мг/кг ежедневно на протяжении 6 дней и 2 недель. После умерщвления, у животных под действием СОг, асептически изолировали легкие и гомогенизировали в конечном объеме 2,0 мл. 10-кратные разведения переносили на агарную среду Middlebrook, дополненную 10% альбумин-декстрозо-каталазой, и инкубировали при 37 °С при 5% СО2 на протяжении 3 недель. Как показатель степени заражения, использовали оценку количества КОЕ.
Установлено, что при старте лечения и при достижении в легких животных концентрации М. tuberculosis 106 КОЕ/легкие, эффективной оказалась доза 5 мг/кг для морских свинок (р<0,05) и 13 мг/кг для мышей (р<0,05). Кроме того, снижение КОЕ при введении на протяжении 12 дней статистически не отличалось от 6- дневного курса (р<0,05 для каждой дозы на протяжении двух периодов).
1 .3 Исследование активности Соединения I по отношению к резистентным штаммам М. tuberculosis.
Исследование Соединения I по отношению к резистентным штаммам М. tuberculosis проводили в 96-луночных планшетах. В лунки добавляли по 100 мкл питательной среды Middlebrook 7Н12 (0,47 г питательного бульона 7Н9, 0, 1 катизона, 100 мл дистиллированной воды, 0,1 мл пальмитиновой кислоты (5,6 мг/мл свободной кислоты в этаноле), 0,5 раствора БСА (50 мг/мл в воде), 0, 1 мл раствора каталазы (4 мг/мл в воде)). Соединение I растворяли в ДМСО и разводили в среде Middlebrook 7Н12 до концентрации 100 мкг/мл в 7Н12. В лунки со средой добавляли 100 мкл раствора соединения и делали двукратное разведение вдоль ряда лунок планшета. Из последней лунки отбирали 100 мкл раствора и выливали. Потом к лункам добавляли по 100 мкл раствора микроорганизмов. Концентрация клеток М. tuberculosis в планшете составляла 5,0 Ч 105 КОЕ/мл. Использовали изониазид-резистентный штамм (SRI 1367) (INH-R), рифампин-резистентный штамм (SRI 1369) (RIF-R) и моксифлоксацин- резистентный штамм (SRI 4000) (OFX-R). Планшеты инкубировали 7 дней при 37 °С (с влажностью). На 7 день планшеты анализировали визуально и определяли абсорбцию с помощью планшетного ридера EnVision. Значение МИК - это самая низкая концентрация (мкг/мл) соединения, которая ингибирует рост микроорганизмов. Использовали следующие контроли:
1 ) Только среда (контроль на стерильность);
2) Микроорганизм в среде (негативный контроль);
3) Позитивный контроль (вместо исследуемого соединения добавляли рифампин и изониазид).
Результаты считали корректными, если позитивный контроль - рифампин проявлял активность в диапазоне значений МИК от 0,05 до 0,2 мкг/мл, а изониазид - в диапазоне значений МИК от 0,025 до 0,05 мкг/мл.
Минимальная ингибирующая концентрация Соединения I (МИК, мкМ) в отношении штаммов М. tuberculosis приводится в таблице 1 .
Таблица 1
МИК Соединения I в отношении штаммов М. tuberculosis (мкг/мл)
Figure imgf000026_0001
INH-R- изониазид-резистентный штамм М. tuberculosis (SRI 1367)
RIF-R - рифампин-резистентный штамм М. tuberculosis (SRI 1369)
OFX-R - моксифлоксацин-резистентный штамм М. tuberculosis (SRI 4000) 2. Исследование цитотоксичности
Цитотоксичность Соединения I в отношении эукариотических клеток определяли на клеточной линии моноцитов человека ТНР-1 . Клетки дифференцировали в макрофагоподобные клетки с использованием 4-форбол-12 миристат-13-ацетата (ФМА) (Sigma-Aldrich) и инкубировали с соединениями в течение трех дней и определяли выживаемость клеток. Значение IC50 определяли как концентрацию, которая приводит к снижению уровня выживания клеток на 50%.
Соединение I растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем трехкратного уменьшения концентрации. Самая высокая концентрация тестируемого соединения составляла 50 мкМ, где Соединение I было растворимым в ДМСО в 10 мМ концентрации. Клетки ТНР-1 культивировали в среде RPMI (RPMI-1640 (Fisher), эмбриональная бычья сыворотка, рН 7,2 (10%) (Fisher), 2 мМ GlutaMAX (Fisher), 1 мМ пирувата натрия) и дифференцировали в макрофагоподобные, используя 80 нМ РМА в течение ночи при 37 °С, 5% СО2.
Клетки культивировали в планшетах в течение 24 часов перед добавлением раствора Соединения I (финальная концентрация ДМСО составляла 0,5%). В качестве контроля использовали стауроспорин. Затем клетки инкубировали в течение 3 дней при 37 °С, 5% СО2; рост измеряли с помощью CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega), использующий АТФ как индикатор роста клеток. Относительные единицы люминесценции измеряли, используя планшетный ридер Biotek Synergy 4. Дозозависимую кривую генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрацию, при которой наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% (значение IC50) (таблица 2).
Таблица 2
Цитотоксичность Соединения I (IC50, мкМ)
Figure imgf000027_0001
По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I, имеет низкий показатель цитотоксичности, поэтому является безопасным в использовании для лечения ТБ.
3. Исследование связывания Соединения I с белками плазмы крови
Связывание исследуемого Соединения I с белками плазмы крови человека определяли с помощью равновесного диализа. Соединение тестировали с использованием полупроницаемой мембраны, которая разделяет два объема, которые соответственно содержат белок (плазма крови человека) и буфер. Молекулы могут проникать свободно, но белки не могут проходить сквозь мембрану. Исследуемое соединение смешивали с плазмой крови человека и вносили в устройство. После уравновешивания при 37°С с PBS, исследуемое соединение в каждом компартменте определяли количественно с помощью LC- MS/MS.
Соединение добавляли к плазме крови при фиксированной концентрации 5 мкМ. Смесь подвергали диализу в устройстве RFD (Rapid Equilibrium Dialysis, Пирс) против PBS и инкубировали на орбитальном шейкере в течение 4 ч при 37°С. Собирали аликвоты плазмы и PBS; одинаковый объем PBS добавляли к образцам плазмы крови и одинаковый объем плазмы добавляли к образцам PBS. Три объема метанола (содержит внутренний стандарт связывания - пропранолол (Sigma)) добавляли для осаждения белков и выделения соединения. Соединение тестировали два раза. Образцы центрифугировали, супернатант восстанавливали и анализировали с помощью LC-MS/MS. Каждый образец включал варфарин (Sigma) как высокосвязывающий контроль. Процент связывания с белками плазмы крови для Соединения I приведен в таблице 3.
Таблица 3
Связывание с белками плазмы крови Соединения I, %
Figure imgf000027_0002
4. Исследование проницаемости Соединения I через монослой клеток Сасо-2
Проницаемость Соединения I оценивали с использованием монослоя клеток Сасо-2. Проницаемость соединения определяли в обоих направлениях. Для направления проницаемости А-Б соединение добавляли к апикальной стороне монослоя клеток Сасо-2 и определяли транспорт соединения к базальной стороне. Для направления проницаемости Б-А, соединение добавляли к базальной стороне монослоя клеток Сасо-2 и определяли транспорт соединения к апикальной стороне. Исследование проводили в течение 2 часов два раза. Количество соединения, которое присутствовало в каждом компартменте, определяли количественно с помощью LC-MS/MS.
Сасо-2 клетки трипсинизировали, ресуспендировали в среде и наносили на 96-луночный планшет Millipore 96-well Сасо-2 plate. Клетки росли и дифференцировались на протяжении трех недель. Добавление питательных веществ проводили с интервалом в два дня. Для исследования проницаемости от апикальной (А) стороны к базолатеральной (А— >Б) стороне, Соединение I добавляли к апикальной (А) стороне и проницаемость соединения определяли на базолатеральной (Б) стороне; для исследования проницаемости от базолатеральной к апикальной (Б— >А) стороне, Соединение I добавляли к базолатеральной (Б) стороне и проницаемость соединения определяли на апикальной (А) стороне. В каждом эксперименте как контроль использовали атенолол (MP Biomedicals) (низкая проницаемость), пропанолол (Sigma) (высокая проницаемость) и талинолол (TRC) (P-gp-зависимый транспорт).
Качественный контроль. Сторона А содержала 100 мкМ красителя Lucifer yellow (Sigma) в транспортном буфере с рН 6,5 (1 ,98 г/л глюкозы в 10 мМ HEPES (Sigma), 1Х Hank's Balanced Salt Solution (Lonza)), а В сторона содержала транспортный буфер с рН 7,4 (1 ,98 г/л глюкозы в 10 мМ HEPES (Sigma), 1Х Hank's Balanced Salt Solution (Lonza)). Сасо-2 клетки инкубировали с этими буферами 1 или 2 часа, буфер принимающей стороны анализировали с помощью LC-MS/MS.
Аликвоты клеточных буферов анализировали по уровню флуоресценции для использования транспорта непроницаемого красителя Lucifer yellow с целью подтверждения того, что монослой клеток Сасо-2 правильно сформировался.
В таблице 4 данные представлены как проницаемость соединения Papp=(dQ/dt) /(C0A
dQ/dt - уровень проницаемости
СО - начальная концентрация соединения
А - площадь монослоя
Таблица 4
Проницаемость через монослой клеток Сасо-2 Соединения I
Figure imgf000028_0001
5. Исследование ингибирующей активности Соединения I по отношению к шести формам цитохрома Р450.
Соединение I тестировали на способность ингибировать шесть форм энзима P450-CYP2B6, CYP2C8, 5CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 i CYP3A4. Для каждого анализа микросомы печени человека инкубировали со специфическим субстратом каждой изоформы CYP в присутствии соединения. Формирование метаболитов для каждой изоформы определяли количественно с помощью LC- MS/MS как степень активности энзима. Рассчитывали ферментативную активность и определяли IC50.
Соединение I растворяли в смеси ацетонитрил-ДМСО (9:1 ). Конечное содержание ДМСО в реакционной смеси было одинаковым во всех растворах, которые использовали в анализе, и составляло <0,2 %. Эксперименты проводили с повтором. Соединение инкубировали с микросомами печени человека в буферном растворе, который содержал 2 мМ НАДФН (восстановленая форма кофермента никотинамидадениннуклеотидфосфата) (Sigma) и субстрата в конечном объеме 200 мл. Реакционные смеси инкубировали при 37°С в течение оптимального времени (10-60 мин), и прекращали добавлением метанола, который содержал внутренний стандарт (пропранолол) для аналитического определения. Образцы инкубировали при 4°С в течение 10 мин и центрифугировали при 4°С в течение 10 мин. Супернатант удаляли и метаболиты субстрата анализировали с помощью LC-MS/MS. Снижение количества метаболита в сравнении с контролем использовали для расчета значения IC50 (значение концентрации, которая приводит к ингибированию на 50%).
Было установлено, что Соединение I ингибирует одну форму цитохрома P450-CYP2C19 со значением 1С50=15 мкМ.
6. Исследование микросомной стабильности Соединения I
Соединение I тестировали на микросомную стабильность с использованием пула микросом S9 печени человека (Celsis). Микросомы инкубировали с исследуемым соединением при 37°С в присутствии кофактора НАДФН (Sigma), реакцию останавливали, супернатант восстанавливали и соединение количественно определяли с помощью LC- MS/MS. Фиксированные концентрации тестированного соединения определяли два раза в 5 часовых точках, а стабильность соединения выражали как функцию времени.
Соединение I тестировали с микросомами печени человека при 37°С с повтором. Каждый образец содержал 0,3 мг/мл микросомного белка человека в буферном растворе (2 мМ НАДФН, 3 мМ MgCb (Sigma), 100 мМ натрий фосфатный буфер; рН 7,4). Образцы отделяли через 0, 5, 15, 30 и 45 минут, перемешивали с равным объемом раствора (метанол), который останавливает реакцию (содержит пропранолол (Sigma) как внутренний стандарт), и инкубировали >10 минут при -20°С. Вносили дополнительный объем воды, центрифугировали для отделения преципитированного белка и супернатант анализировали с помощью LC-MS/MS для количественного определения оставшегося исходного соединения. Проводили контрольную реакцию без НАДФН (контрольный буфер), для того, чтобы определить деградацию соединения, которая не зависит от НАДФН. Верапамил (Sigma) и декстрометофарм (Sigma) вносили как контрольные соединения.
Анализ данных. Данные конвертировали в % соединения, которое оставалось по сравнению с нулевой точкой времени. Данные были установлены на модели распада первого порядка для определения времени полураспада соединения. Характеристический клиренс (CLint.) рассчитывали, исходя из времени полураспада и концентрации белка:
CLint. = Ιη(2)/(Τι/2 [микросомный белок]) Τ1 2=0,693/-κ
CLint- = характеристический клиренс; Τ-ι/2 = время полураспада; к = смещение
Данные касательно микросомной стабильности для Соединения I приведены в таблице 5.
Таблица 5
Figure imgf000030_0001
Таким образом, метаболизм Соединения I происходит по НАДФН- зависимому пути.
7. Исследование цитотоксичности Соединения I в отношении эукариотических клеток HepG2
Цитотоксичность Соединения I в отношении эукариотических клеток определяли с использованием клеток печени человека HepG2 (АТСС). Клетки HepG2 инкубировали с соединением в течение 72 часов и определяли жизнеспособность клеток. IC50 определяли как концентрацию соединения, которая приводит к снижению выживания клеток на 50 % через 72 часа инкубации. Цитотоксичность соединения определяли путем измерения жизнеспособности клеток HepG2 через три дня инкубации в присутствии исследуемого соединения. Соединение серийно разводили в ДМСО. Наибольшая концентрация соединения составляла 100 мкМ, где Соединение I было растворимым в ДМСО при 10 мМ концентрации. Клетки HepG2 культивировали в среде DM ЕМ (среда DMEM с высоким уровнем глюкозы (Invitrogen), 1Х раствор пенициллина-стрептомицина (Fisher), 2 мМ Corning Glutogro supplement (Fisher), 1 мМ пирувата натрия (Fisher), эмбриональная бычья сыворотка (10 %) (Fisher)), высевали в 384-луночные планшеты для анализа, которые содержали соединение и инкубировали на протяжении 24 часов при 37°С, 5 % СО2. После добавления Соединения I клетки инкубировали еще на протяжении 72 часов. Конечная концентрация ДМСО составляла 1 %. Жизнеспособность клеток определяли с помощью CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega), измеряя относительные единицы люминесценции (RLU). Дозо-зависимую кривую отклика строили с использование алгоритма Левенберга-Марквардта. IC50 определяли как концентрацию соединения, которая приводит к снижению жизнеспособности клеток на 50 %. Как контроль использовали стауспорин (Santa Cruz Biotechnology).
Соединение I оказалось не цитотоксичным (IC50 >100 мкМ), тогда как значение IC50 стауспорина, который является позитивным контролем, составляет 0,045 мкМ.
7. Фармакокинетика (ФК) Соединения I
Концентрацию Соединения I в плазме крови зараженных мышей определяли методом HPLC анализа после осаждения ТСА и химической дериватизации с коричным альдегидом. ФК Соединения I у неинфицированных мышей исследовали при пероральном приеме в виде одноразовой дозы 10 мл/кг массы тела. Используемые дозы: 0, 1 , 3, 10, 30, 90 и 120 мг Соединения I на кг в 0,25 % (масса/об.) карбоксиметилцеллюлозы. Установлено, что ФК Соединения I у неинфицированных самцов мышей (BALB/c) показала линейную динамику ФК кривой между дозами 0,1 и 120 мг/кг. Время для достижения максимальной концентрации (Стах) Соединения I колебалось от 0, 16 до 0,5 часа, а период полувыведения составлял от 0,4 до 1 ,6 часа (Фиг. 3).
Вторым этапом было проведено сравнение фармакокинетики Соединения I при внутрижелудочном (в.ж.) и внутривенном (в.в.) путях введения. При в.в. введении Соединение I вводилось разово в дозировке 10 мг/кг. Разовое в.ж. введение проводилось в дозировках 0,2, 0,5, 1 ,5 и 25 мг/кг. Дополнительно ФК при повторных введениях per os на протяжении 3 дней в дозировке 25 мг/кг (Фиг. 4.) log-mKOE/мл.
При исследовании взаимодействия лекарств, в условиях in vitro, было установлено, что Соединение I действует как ингибитор CYP2C19 и CYP3A4 ферментов микросом печени. Таким образом, это может увеличить риск повышения концентрации и влияния на организм лекарств, которые ликвидируются через любой из этих путей. Тем не менее, изучение комбинированного применения Соединения I с рифампицином показало частичное нивелирование гепатотоксического действия Соединения I.
9. Изучение показателей ADME
Абсорбция. После введения животным Соединение I быстро всасывается. Биодоступность Соединения I составляет >80%, а пиковая концентрация в сыворотке крови достигается через 1 -2 часа. Скорость и степень поглощения снижались, когда Соединение I вводили с едой. Исследуемое соединение подвергается заметному метаболическому обмену в стенке тонкой кишки и печени.
Распределение. Распределение Соединения I в организме характеризуется объемом распределения от 0,57 до 0,76 л/кг. Связывание с белками крови очень низкое (0-10%).
Метаболизм. Соединение I подвергается значительному метаболизму, который происходит в клетках слизистой оболочки тонкого кишечника и печени. Первым этапом метаболизма Соединения I является инактивация через ацетилирование. Вторым этапом метаболического превращения идет гидролиз первичных продуктов метаболизма. Ацетилирование Соединения I зависит от генетически определенной скорости метаболизма организма, что присуще лицам, которые называются быстрыми или медленными ацетиляторами (это связано с генетическим полиморфизмом в метаболическом ферменте N- ацетилтрансферазы). Разные этнические группы содержат разные пропорции ацетилирующих фенотипов. Исходя из этого, статус ацетилятора является основным детерминантом влияния Соединения I в определенной дозе.
Экскреция. До 95% Соединения I выделяется с мочой на протяжении 24 часов преимущественно в виде неактивных метаболитов. Менее 10% дозы выводится с фекалиями. 10. Исследование безопасности
10.1 Острая токсичность и токсичность при повторных введениях
Исследование острой токсичности в условиях однократного ведения изучалось на протяжении 14 дней. Изучение подострой, субхронической и хронической токсичности в условиях повторных введений, было проведено на крысах и кроликах путем перорального и внутривенного введения общим сроком до 9 месяцев. В рамках исследования токсичности при повторных введениях дополнительно фиксировались показатели фармакологии безопасности: состояние сердечно-сосудистой, нервной, дыхательной и мочевыделительной систем. Так, исследование острой токсичности при разовом внутривенном введении кроликам показало, что полулетальная доза (LD50) у исследуемых животных составляла 94 мг/кг. Исследование острой токсичности на крысах показало, что полулетальный эффект достигался при дозировке 1250 мг/кг при пероральном введении. Установлено, что центральная нервная система является целевым органом острой токсичности. Исследуемое соединение при разовом введении в полулетальной дозе вызывало генерализированные судороги, кому и метаболический ацидоз. Смерть возникала вследствие острой дыхательной недостаточности или гипотензии.
Исследование подострой токсичности в условиях ежедневного перорального введения Соединения I крысам показало, что показатель NOAEL был на уровне 35 мг/кг. Исследование хронической токсичности на протяжении 26 недель показало, что гепатобилиарная система является главным органом- мишенью. Механизм гепатотоксического действия связан с ацилированием ацетилизонизида (продукта метаболизма) исследуемого соединения, что приводит к образованию моноацетилгидразина, который, как доказано, является мощным гепатотоксином у животных. Микросоматический обмен моноацетилгидразина у животных приводит к образованию реактивных ацилирующих форм, способных ковалентно связываться с макромолекулами ткани (т.е. белком печени), а со временем вызывать некроз печени. Токсикологические изменения печени имели обратный характер при отмене использовании Соединения I.
10.2. Генотоксичность
Соединение I проявляло влияние на генотоксический потенциал в стандартных тестах in vitro, включая исследования на культуре Salmonella typhimurium, клетках лимфомы мышей и оценку мутагенного воздействия с помощью AMES test. В то же время по результатам хронической токсичности при условиях введения концентрации, которая превышала ожидаемую терапевтическую дозу в 3 раза, исследования гомогената клеток легких крыс показали повреждение ДНК данных органов.
10.3 Канцерогенность.
Для оценки возможного канцерогенного воздействия молодым половозрелым самцам Sprague Dawley крыс перорально (0,020-0,035%) и подкожно 17 и 83 мг/кг) вводили Соединение I на протяжении 87 недель. Установлено отсутствие желудочно-кишечных поражений, а также присутствие несистематических и незначительных раздражений кожи. Исследования канцерогенное™ на крысах Sprague-Dawley продолжаются. В то же время, учитывая то, что соединения данного класса веществ относятся к 3 группе канцерогенности - неканцерогенные для людей (по версии International agency for research on cancer), и отсутствие мутагенного эффекта, можно ожидать отсутствие канцерогенного действия в условиях приема человеком.
10.4 Репродуктивная токсичность
Потенциал репродуктивной токсичности Соединения I исследовался у крыс и кроликов в исследованиях, охватывающих все стадии репродуктивного процесса. Было показано отсутствие влияния Соединения I на фертильность у самок крыс в условиях введения доз, которые в 2-5 раз превышали ожидаемые дозы для клинического применения. На следующем этапе исследований, на крысах и кроликах, показано частичный эмбриоцидный эффект, но тератогенного действия Соединения I выявлено не было.
10.5. Исследования местно-раздражающего действия
В исследовании на кроликах Соединение I легко проникало в слизистую оболочку глаза после местного или системного введения, но заметного токсического эффекта не проявляло. При подкожном введении значительных доз (>1500 мг/кг) исследуемого соединения у кроликов, показано возникновение кровоизлияний в мозговых ядрах и в области зрительных нервов, но дегенеративных изменений самих нервов не наблюдалось. Интратекальная инъекция Соединения I у кроликов была более повреждающей, и считается критическим фактором при инициации оптического неврита.
По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I проявляет высокую антимикобактериальную активность по отношению к патогенному штамму Mycobacterium tuberculosis H37Rv в аэробных и анаэробных условиях, и обладает внутриклеточной активностью на макрофагоподобных клетках. Кроме того, Соединение I является эффективным по отношению к изониазид-, рифампин- и моксифлоксацин-резистентным штаммам микобактерий и характеризуется хорошими ADME свойствами (уровень связывания с белками плазмы крови составляет 42, 1 %, соединение является проницаемым через монослой клеток Сасо-2, ингибирует только одну из исследуемых изоформ цитохрома P450-CYP2C19) и имеет низкую цитотоксичность в отношении эукариотических клеток HepG2 (>100 μΜ). Перечисленные свойства позвоялют использовать это соединение в фармации как препарат для лечения мультирезистентных форм туберкулеза.
На втором этапе проводили клинические исследования с целью изучения безопасности, фармакокинетики и токсичности фармацевтической композиции согласно техническому решению.
Клинические исследования пероральной, инъекционной и ингаляционной формы фармацевтической композиции с Соединением I по техническому решению проводились как на здоровых добровольцах, так и на пациентах с подтвержденным диагнозом туберкулез.
А. Изучение безопасности, фармакокинетики и токсичности Соединения I в пероральной, инъекционной и ингаляционной форме фармацевтической композиции по техническому решению у здоровых добровольцев. 1 . Дизайн клинических исследований
Изучение влияния пероральной, инъекционной, ингаляционной формы фармацевтической композиции по техническому решению с Соединением I было проведено путем трех или четырех последовательных клинических исследований Фазы I, II, III.
В течение исследований Фазы I, в которых изучалась безопасность, переносимость и фармакокинетика Соединения I в пероральной, инъекционной форме, и в виде порошка для ингаляции у здоровых добровольцев, были проведены исследования для каждой формы фармацевтической композиции с соединением.
1 ) В исследования для ингаляционной формы фармацевтической композиции включены 4 группы по 6 здоровых добровольцев, получавших соответственно дозы 25, 50, 100 и 300 мг Соединения I путем использования простого ингалятора для доставки фармацевтической композиции.
Фармацевтическая композиция в ингаляционной форме содержит следующие компоненты в составе:
Соединение I (25 мг; 50 мг; 100 мг; 300 мг)
Микрокристаллическая целлюлоза
Натрий карбоксиметилцеллюлоза
Полисорбат 80
Двухосновный фосфат калия
Гидрохлорид натрия
Соляная кислота
Вода для инъекций
Исследование ингаляционной формы Соединения I проводилось согласно стандартам проведения исследований I Фазы для лекарственных средств.
Следует отметить, что ингаляции хорошо переносились всеми субъектами в ходе исследования. Наиболее частой побочной реакцией был легкий или умеренный преходящий кашель у всех пациентов, при том что пациенты не претерпели изменений при проведении объективного осмотра, не было изменений в функции легких или лабораторных параметров. Соединение I быстро всасывается после аспирации. Была проведена оценка системных концентраций в каждой группе доз в течение 20 мин после аспирации. Пиковая и средняя концентрация Соединения I в плазме крови была пропорциональна принятой дозе.
Концентрация соединения в сыворотке крови превышала: 2,0 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы Соединения I; период полураспада (t1/2) составил: 4,3 ± 1 , 1 ч для Соединения I. Фармацевтическая композиция в ингаляционной форме порошка с микрочастицами Соединения I хорошо переносилась пациентами. Доза в 300 мг для всех соединений быстро достигла концентрацию соединения в сыворотке выше МИК для Mycobacterium tuberculosis, что свидетельствует о потенциале ингаляционной терапии как части режима лечения мультирезистентного туберкулеза легких. зз С учетом того, что доклинические исследования инъекционных препаратов с Соединением I обнаружили низкий уровень распределения препаратов в легких животных, получение ингаляционной формы фармацевтической композиции позволяет усилить и улучшить протоколы лечения мультирезистентного туберкулеза легких.
В исследование включали пациентов обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет, которые в течение последних 6 месяцев не употребляли табака, не использовали лекарств, без патологических изменений в лабораторных анализах крови и мочи. Жизненный объем легких и другие параметры спирографии должны были соответствовать возрастной норме. В исследование не включались беременные женщины и женщины, кормящие грудью, пациенты с известной аллергией на любые антибиотики.
Во всех исследованиях была проведена оценка функции легких в начале исследования и после 24-х часов после получения исследуемой фармацевтической композиции. После включения в исследование пациентам была последовательно назначена одна из четырех доз Соединения I (25 мг, 50 мг, 100 мг и 300 мг Соединения I).
Каждый субъект получал одну дозу ингаляционной формы фармацевтической композиции с Соединением I в соответствии с групповой дозой, которую самостоятельно вводил с помощью портативного ингалятора. Каждая группа проходила анализ крови для оценки фармакокинетики Соединения I в 13 часовых точках: перед применением; на 10, 20, 30 и 45 минуте после ингаляции дозы; а также на 1 , 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часов после ингаляции дозы исследуемой фармацевтической композиции. Концентрации Соединения I были определены с помощью высокочувствительной жидкостной хроматографии (HPLC-MS/MS). Нижняя граница количественного определения Соединения I в плазме человека составляла 74 мкг/мл, с точностью 85,2 %.
Кроме того, испытуемым субъектам были проведены анализ крови и мочи, аускультация и рентген грудной клетки через 24 часа после получения дозы соединения и для оценки безопасности фармацевтической композиции.
Клинические и демографические данные о субъектах исследования были оценены с использованием итоговых мероприятий. Оценка фармакокинетики состояла из параметров всех субъектов исследований, которые получили полную дозу исследуемого Соединения I и завершили исследование.
Анализ фармакокинетики проводился с помощью стандартных методов, которые используют в исследованиях на людях.
Далее приведены фармакокинетические данные Соединения I.
Соединение I было обнаружено в сыворотке крови в течение 18 мин после ингаляции у 18/24 (75 %) пациентов. У пяти субъектов первоначальное выявление Соединения I произошло в промежуток от 1 , 1 до 2,6 часов после ингаляции. Все эти субъекты были в группах, которым была назначена доза 25 мг (самая низкая).
Для Соединения I: в группе, получившей дозу 25 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составило 738 мин мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 300 мг, среднее значение AUC0-t составило 21 845 мин- мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 1 12 мкг/мл, 738 мкг/мл, 1468 мкг/мл и 2731 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 ,5 ч (для группы 25 мг), 2, 1 ч (для группы 50 мг), 2,5 ч (для группы 100 мг), и 2,85 ч (для группы 300 мг); значения t1/2 составляли 6,14 ± 1 ,2 ч (для группы 25 мг), 4,3 ± 1 ,2 ч (для группы 50 мг), 4,7 ± 1 ,5 ч (для группы 100 мг) и 4,9 ± 1 , 1 ч (для группы 300 мг).
Данные о безопасности фармацевтической композиции с Соединением I.
Вдыхание Соединения I не было связано со значительными изменениями клинических или лабораторных параметров. Легочная функция не изменилась после ингаляции. Функции почек и печени не изменялись после введения препарата, также не наблюдалось изменений общего анализа крови и мочи. Аускультативная картина не изменялась после приема препарата во всех группах пациентов.
Данные касательно побочных реакций после введения фармацевтической композиции с Соединением I.
В этом исследовании не наблюдалось тяжелых или серьезных нежелательных реакций, однако у всех субъектов наблюдались легкие или умеренные побочные реакции, наиболее распространенным был кашель, который встречался у всех включенных в исследование пациентов.
При возникновении кашля он начинался после введения фармацевтической композиции и заканчивался в течение 5 мин, не требуя дополнительного лечения и каких-либо действий со стороны медицинского персонала. Также пациенты отмечали такие побочные реакции: головная боль, ощущение сжатия в груди, жажду, умеренную слабость и утомляемость.
2) В клиническом исследовании Фазы I было проведено изучение влияния однократной дозы Соединения I в пероральной форме фармацевтической композиции в виде таблеток, покрытых оболочкой, на здоровых волонтеров. Были оценены безопасность и фармакокинетика у здоровых пациентов натощак.
Фармацевтическая композиция в пероральной форме в виде таблеток содержит следующие компоненты в составе:
Соединение I (100 мг, 300мг, 900 мг)
Микрокристаллическая целлюлоза
Гид рокси п роп ил мети л цел юл оза
Кроскармеллоза натрия
Крахмал прежепатинизированный
Коллоидный диоксид кремния
Стеарат магния
Вода очищенная
3 исследовании 01 для пероральной формы фармацевтической композиции для Соединения I были созданы 3 группы по пять субъектов в каждой, которые получали однократно дозу 100 мг, 300 мг и 900 мг. Результаты этих исследований показали небольшую разницу в возникновении побочных реакций у добровольцев, получавших 100 мг дозы относительно пациентов, которые получали дозу 900 мг Соединения I. Второе клиническое исследование Фазы 1-02 проводилось с повторным введением Соединения I в дозировке 300 мг и 900 мг, клиническое исследование было разработано для дальнейшей оценки безопасности Соединения I у здоровых добровольцев.
Безопасность исследуемой фармацевтической композиции подтверждалась физикальным осмотром, мониторингом функций жизнедеятельности, оценкой изменений параметров лабораторных анализов крови, мочи и документации побочных реакций. Системный уровень Соединения I измеряли в каждой группе доз.
Исследование 02 Фазы I было рандомизированным, открытым исследованиям с введением 300 мг и 900 мг Соединения I, исследуемые фармацевтические композиции предназначались в течение 7 дней в дозе 300 мг и 900 мг, а также изучалось состояние пациентов в течение 7 дней после приема фармацевтической композиции. Все пациенты получали фармацевтические композиции в течение 30 минут после стандартизированного завтрака. Пациенты были разделены на две группы. В группу 1 были включены шесть пациентов, которые были рандомизированы в группу, получавшую ежедневную дозу Соединения I 900 мг, и шесть пациентов были рандомизированы в группу 2, получавшую дозу 300 мг.
Исследования 02 Фазы I включали 7-дневный период наблюдения после последней дозы Соединения I, в течение которого пациенты не принимали никаких лекарств, предназначенный для оценки количества и тяжести побочных реакций, а также оценки временного промежутка, в течение которого исчезало подавляющее количество побочных реакций. Безопасность подтверждалась физикальным осмотром, мониторингом функций жизнедеятельности, оценкой изменений параметров лабораторных анализов крови, мочи и документации побочных реакций.
Побочные реакции, которые наблюдались после введения Соединения I у здоровых добровольцев.
Наиболее распространенными побочными реакциями, выявленными при проведении обследований пациентов клинических исследований Фазы I, были тошнота и снижение аппетита. Другими распространенными побочными реакциями были головная боль, головокружение, сердцебиение, нарушение сна, рвота, слабость, сухость кожи.
Жизненно важные функции и данные физикальной оценки находились в пределах возрастной нормы и не имели существенных различий в исследованиях. Все изменения, выявленные при обследовании, были расшифрованы как клинически незначительные и ограничивались возрастными нормами.
В клинических исследованиях Фазы I были обнаружены побочные реакции, изменения лабораторных показателей, и проводилось изучение фармакокинетики Соединения I у здоровых добровольцев, принимавших исследуемое соединение в дозах 100 мг, 300 300 мг и 900 мг.
Большее количество побочных реакций наблюдалась у пациентов, получавших дозу в 900 мг. Тяжесть побочных реакций, частота распространения побочных реакций, распределение побочных реакций по отношению к органам и системам организма для исследований 01 и 02 предоставлены в таблице 6. На основании данных таблицы 6 можно сделать вывод, что количество побочных реакций, их тяжесть напрямую зависит от дозы введения, а также продолжительности введения Соединения I.
Таблица 6
Тяжесть побочных реакций в исследованиях 01 и 02 для Соедине
Figure imgf000038_0001
Показатели фармакокинетики введения Соединения I в клинических исследованиях Фазы I в цельной крови были схожими с концентрациями введения Соединения I в плазме крови. По сравнению с данными, полученными при исследованиях на животных, можно сделать вывод о том, что у людей Соединение I при введении достигает более высокой концентрации в сыворотке крови (1 ,68: 1 ). Проведенные исследования фармакокинетики были направлены на изучение концентраций Соединения I в плазме крови.
Измерение концентрации введения Соединения I в плазме непосредственно и его трех основных метаболитов (IN-2301 , IN-2503 и IS-1221 ), а также 5 других метаболитов (IS-2201 , 2612, 2913-22915) проводили с использованием специфической и чувствительной методики HPLC-MS/MS. Исследование показало линейную зависимость концентрации в диапазоне 1 -499 нг/мл для Соединения I в плазме, и 1 -120 нг/мл для Соединения I для концентраций метаболитов. Концентрация Соединения I в моче не определялись из-за низкой экскреции, продемонстрированной результатами хроматографии.
Абсолютная оральная биодоступность Соединения I у человека не определена. Предполагая, что Соединение I не выделяется без изменений у людей (исходя из отсутствия экскреции системой желчеотделения в доклинических исследованиях), было проведено наблюдение, что 32,6-47,8 % дозы Соединения I в неизменном виде выводится с калом, и это свидетельствует о том, что от 52,2 до 80,4 % дозы Соединения I всасывается в желудочно- кишечном тракте.
В исследовании с однократным введением Соединения I было обнаружено дозозависимое увеличение Соединения I и его первичных метаболитов. При применении единичных доз 100-900 мг натощак была выявлена разница в Стах или AUC0-00 между группами, получавшими 100 мг и группами, которые получали 900 мг. Стах и AUC0-°° на 100 мг, 300 300 мг и 900 мг увеличились при увеличении дозы, увеличение было пропорциональным введенной дозе.
Введение одиночных доз Соединения I для субъектов исследования 01 показало линейность для коэффициентов накопления Стах или AUC, значения коэффициентов накопления Cmax, AUC 0-12, AUC 0-24, С12 и С24 у здоровых добровольцев при введении дозы в 300 мг и 900 мг для Соединения I, предоставлены в таблице 7.
Таблица 7
Коэффициенты накопления Cmax, AUC 0-12, AUC 0-24, С12 и С24 у
Figure imgf000039_0001
Исходя из предыдущих исследований фармакокинетики на животных и результатов исследований Фазы I, был сделан вывод, что Соединение I удовлетворительно всасывается в желудочно-кишечном тракте, легко проникает сквозь гематоэнцефалический барьер, равномерно распределяется в различных тканях и жидкостях организма. После приема внутрь максимальная концентрация Соединения I в крови определяется в среднем на 2,4-3, 1 часа, концентрация в крови после приема одной дозы сохраняется до 24 часов. Выведение фармацевтической композиции с Соединением I происходит в основном с почками в виде неактивных метаболитов, часть выделяется с фекалиями.
3) В исследование для инъекционной формы фармацевтической композиции в виде раствора для инъекций включены 3 группы по 4 здоровых волонтера, которые получали соответственно дозы 100 мг, 300 300 мг и 900 мг Соединения I, которые вводились внутривенно, используя 200 мл раствора натрия хлорида 0,9 % для инфузий.
Фармацевтическая композиция в инъекционной форме в виде раствора для инъекций содержит следующие компоненты в составе:
Соединение I (100 мг, 300 мг, 900 мг)
Этанол
Двухосновный фосфат калия
Гидроксид натрия
Соляная кислота
Вода для инъекций
Инъекции хорошо переносились всеми субъектами исследования. Наиболее распространенной побочной реакцией была легкая или умеренная тошнота, которая наблюдалась во всех группах пациентов. У пациентов не было выявлено изменений в функции внутренних органов или лабораторных параметров. Соединение I быстро распространяется по органам и системам после введения.
Была проведена оценка системных концентраций Соединения I в каждой группе доз в течение 10 мин после инъекции. Пиковая и средняя концентрация Соединения I в плазме крови была пропорциональна введенной дозе. Концентрации в сыворотке крови превышали 2,7 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы. Период полураспада (t1/2) составил 3,9 ± 1 ,4 часов. Инъекционное введение фармацевтической композиции Соединения I хорошо переносилось. Одноразовая доза в 100 мг быстро достигла концентрации соединения в сыворотке выше МИК для Mycobacterium tuberculosis, что свидетельствует о потенциале инъекционной формы Соединения I в терапии лечения мультирезистентного туберкулеза легких.
Во все исследования включали пациентов обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет, которые в течение последних 6 месяцев не употребляли табак, не использовались лекарств, без патологических изменений в лабораторных анализах крови и мочи. В исследование не включались беременные женщины и женщины, кормящие грудью, пациенты с известной аллергией на любые антибиотики. Во всех исследованиях была проведена оценка функции внутренних органов в начале исследования и после 24-х часов после получения исследуемой фармацевтической композиции. После включения в исследование пациентам была последовательно назначена одна из трех доз (100 мг, 300 мг и 900 мг) Соединения I.
Каждый субъект получал одну инъекцию Соединения I в соответствии с групповой дозой, которая вводилась под наблюдением квалифицированных специалистов. Каждая группа проходила анализ крови для оценки фармакокинетики Соединения I в 12 временных точках: перед применением; на 10, 30 и 45 минут после инъекции; а также на 1 , 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часов после введения дозы. Концентрации Соединения I были определены с помощью высокочувствительной жидкостной хроматографии (HPLC-MS/MS). Нижняя граница количественного определения Соединения I в плазме человека составляла 83,2 мкг/мл, с точностью 86,2 %. Линейный диапазон количественной оценки был определен от 73 до 4123 мкг/мл.
Кроме того, испытуемым субъектам были проведены анализ крови и мочи, оценка состояния внутренних органов через 24 ч после получения дозы для оценки безопасности препарата.
Клинические и демографические данные о субъектах исследования были оценены с использованием итоговых мероприятий. Оценка фармакокинетики состояла из параметров всех субъектов исследования, которые получили полную дозу исследуемого Соединения I и завершили исследование.
Анализ фармакокинетики проводился с помощью стандартных методов, которые используют в исследованиях на людях.
Далее приведены фармакокинетические данные Соединения I.
Соединение I было обнаружено в сыворотке крови у 100 % исследуемых в течении 5 минут.
У двух субъектов первоначальное выявление Соединения I произошло в промежуток от 1 ,5 до 2,7 минут после инъекции. Эти субъекты были в группе, которым была назначена доза 100 мг (наименьшая).
В группе, получившей дозу 100 мг— среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составило 1623 мин мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 300 мг, среднее значение AUC0-t составляло 28126 мин мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 1723 мкг/мл, 2821 мкг/мл и 5912 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) составляла 12,9 минут (для группы 100 мг), 13,1 минут (для группы 300 мг), 13,8 минут (для группы 900 мг); значение t1/2 составило 2,3 ± 1 ,3 часа (для группы 100 мг), 2,5 ± 1 ,6 часа (для группы 300 мг) и 2,9 ± 1 ,6 часа (для группы 900 мг).
Данные о безопасности фармацевтической композиции с Соединением I.
Введение фармацевтической композиции с Соединением I в инъекционной форме не было связано с изменениями клинических или лабораторных параметров. Функция почек осталась без изменений после введения препарата. Также не наблюдалось изменений в анализах функций печени, общему анализу крови и мочи. Данные касательно побочных реакций после введения фармацевтической композиции с Соединением I.
В этом исследовании не было тяжелых или серьезных нежелательных реакций. У нескольких субъектов наблюдались легкие и умеренные побочные реакции, наиболее распространенными явлениями были тошнота и головная боль, которые встречалась у 5 субъектов из 12 включенных в исследование в целом. Также пациенты отмечали следующие побочные реакции: жажду, умеренную слабость, утомляемость, сухость во рту.
В. Эффективность лечения фармацевтической композицией с Соединениям I у больных туберкулезом.
После проведения клинических исследований у здоровых добровольцев следующим шагом было провести исследования у пациентов с подтвержденным мультирезистентным туберкулезом, индуцированным М. tuberculosis.
1 ) Исследование таблетированной и инъекционной формы фармацевтической композиции с Соединением I.
В связи с тем, что в терапии мультирезистентного туберкулеза рутинно используются схемы, которые комбинируют пероральные и инъекционные схемы лечения туберкулеза, было принято решение о проведении одновременных исследований для фармацевтической композиции с Соединением I, которые будут исследовать последовательное лечение пациентов инъекционными и пероральными формами фармацевтической композиции.
Было проведено открытое рандомизированное сравнительное клиническое исследование Фазы II по изучению эффективности и безопасности пероральной и инъекционной формы Соединения I в сочетании с препаратами стандартного протокола химиотерапии у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких по сравнению с лечением препаратами стандартной терапии.
Фармацевтическая композиция для пероральной и инъекционной формы имела состав, идентичный составу в исследовании I Фазы.
Всего в исследование были включены 180 больных мультирезистентным туберкулезом легких.
1 группа больных (основная) включала 102 человека, у которых рандомизированным способом проводилось лечение по разработанным режимам с использованием противотуберкулезных препаратов 1 -й и 2-й линии и антибиотиков широкого спектра действия с антимикобактериальной активностью, в том числе Соединения I в таблетированной и инъекционной форме в дозировке от 300 мг до 900 мг в сутки. Руководствуясь основным принципом химиотерапии больных туберкулезом, больным назначали не менее 3-х препаратов в режиме, к которым М. tuberculosis были чувствительны (одним из препаратов обязательно была фармацевтическая композиция с Соединением I), поэтому количество препаратов в режиме зависело от профиля медикаментозной резистентности микобактерии туберкулеза (от 5-ти до 3-х препаратов). Пациенты основной группы были разделены на 2 подгруппы путем рандомизации. В первую подгруппу были включены 52 пациента, которые получали среднетерапевтические дозы Соединения I (0,3-0,45 г/сут) в комбинации с препаратами стандартной терапии. Во вторую подгруппу были включены 50 пациентов, получавших более высокие дозы Соединения I (0,6-0,9 г/сут) в сочетании с препаратами стандартной терапии. Обе подгруппы имели одинаковый режим введения. В течение первых 2-х недель пациенты получали фармацевтическую композицию с Соединением I в инъекционной форме, в дальнейшем пациенты получали фармацевтическую композицию с Соединением I в таблетированной форме.
Контролем эффективности их лечения были 78 пациентов, терапия которых проводилась с привлечением только противотуберкулезных препаратов 1 -й и 2-й линии - канамицин, этамбутол, пиразинамид, этионамид, ципрофлоксацин.
Больные в группах были сопоставимы по полу, возрасту, типу и форме туберкулеза, профилю медикаментозной резистентности, преобладали: мужчины - 80 %; в возрасте 20-59 лет - 82 %.
Обследование больных проводили по единому протоколу с определением клинических, рентгенологических, иммунологических, микробиологических признаков туберкулеза. Все исследования выполнялись в начале, в процессе (каждые 2 месяца) и в конце лечения.
Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) Соединения I и бактериостатической активности крови проводили in vitro со стандартным штаммом М. tuberculosis H37Rv и мультирезистентными штаммами М. tuberculosis, выделенными от больных, в жидкой среде Проскауэра-Бека и плотной среде Левенштейна-Йенсена.
Бактериостатический эффект оценивали на основании задержки роста пленки микобактерий. Биологически активные концентрации Соединения I изучали по максимальной бактериостатической активностью крови через 1 ,5-2 часа после введения композиции, когда Соединение I достигало максимума концентрации. Бактериостатическую активность крови изучали общепринятым микробиологическим методом серийных разведений в жидкой питательной среде Проскауэра-Бека, оценивали по наибольшему разведению крови, при котором еще наблюдалась задержка роста М. tuberculosis. Задержку роста в разведениях 1 :2 и 1 :4 расценивали как низкую активность, в разведениях 1 :8 и 1 : 16 - как среднюю, а в разведениях 1 :32, 1 :64 и выше - как высокую.
Данные обследований рассчитывались по методикам вариационной статистики. Сравнение средних значений и оценка достоверности различий изучались по параметрическими статистическими методами - t-критерий Фишера- Стьюдента.
В исследовании у 180 больных туберкулезом установлено, что режимы химиотерапии с привлечением Соединения I у больных с одинаковым по форме и тяжести процессом и профилем резистентности микобактерий туберкулеза более эффективны, чем без него. При лечении с использованием фармацевтической композиции Соединения I прекращение бактериовыделения было отмечено у 84,6 % пациентов, заживление каверн у 50,0 %, а при лечении без дополнительного использования Соединения I - у 59,9 % и 33,3 % больных соответственно, показатели достоверно отличаются, р<0,05.
У больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентными штамами М. tuberculosis бактериовыделение прекращалось чаще при применении более высоких доз Соединения I, чем среднетерапевтических. При применении Соединения I в дозе 5 мг/кг (0,3-0,45 г) в 1 -й подгруппе основной группы прекращение бактериовыделения было отмечено у 44,8 % больных, а в дозе 10- 15 мг/кг (0,6-0,9 г) во 2-й подгруппе основной группы-у 56,3 % пациентов соответственно, показатели достоверно отличаются, р<0,05.
Установлено, что для Соединения I свойственен дозозависимый эффект в отношении частоты заживления, регрессии каверн, инфильтративных и казеозных изменений в легких. При применении Соединения I в дозе 5 мг/кг (0,3-0,45 г) заживление, регрессия каверн, инфильтративных и казеозных изменений в легких были отмечены у 53,6 % больных, а в дозе 10-15 мг/кг (0,6-0,9 г) - у 84,6 % соответственно, показатели достоверно отличаются, р<0,05.
В результате исследования были получены данные, что при лечении препаратами Соединения I представляется возможным расширить перспективы химиотерапии у больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентнымимультирезистентными штаммами М. tuberculosis, установление оптимального режима дозирования позволило повысить эффективность лечения за счет улучшения переносимости химиотерапии.
Данные о переносимости разработанного режима химиотерапии с включением Соединения I в инъекционной и таблетированной форме по сравнению со стандартными режимами лечения.
Среди побочных реакций на химиотерапию у больных основной и контрольных групп встречались следующие: желудочно-кишечные у 19,5 % и 24,8 % пациентов соответственно ( р>0,05); неврологические - у 1 ,5 % и 1 ,4 % ( р>0,05); вестибуло-ототоксические - у 6, 1 % и 15,3 % ( р>0,05); гепатотоксичные - у 2, 1 % и 5,3 % ( р>0,05); аллергические - у 1 ,5 % и 1 ,3 % ( р>0,05); сердечно- сосудистые - у 1 ,5 % и 1 , 1 % ( р>0,05); кристаллурия - у0,3 % и 0,9 % ( р>0,05); кандидамикоз - у 1 ,7 % и 1 ,8 % (р>0,05). В большинстве случаев побочные реакции были умеренными и не приводили к отмене препарата, который вызывал эти проявления у больных основной группы у 45,1 % пациентов, контрольной - 45,7 % соответственно, р>0,05. Из выше приведенных данных можно сделать вывод, что количество и тяжесть побочных реакций, связанных с назначением препаратов Соединения I не несло различия по сравнению с контрольной группой.
Влияние режима химиотерапии с привлечением фармацевтической композиции с Соединением I на состояние иммунитета больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентными штаммами М. tuberculosis. При исследовании иммунологической реактивности больных основной, контрольной групп и больных с мультирезистентными штаммами М. tuberculosis, которые получали различные режимы химиотерапии и имели разную эффективность лечения, какого-либо характерного влияния химиотерапии на состояние иммунитета не обнаружено. В течение 6 месяцев сохранялись характерные для туберкулеза умеренные нарушения со стороны Т, В- и фагоцитарного звеньев иммунитета, которые заключались в снижении числа Т-лимфоцитов, напряженных аутоиммунных реакциях, повышении уровня кислородозависимого метаболизма фагоцитов. Но, несмотря на результаты лечения при котором у больных туберкулезом сохранялись нарушения Т, В- и фагоцитарных звеньев иммунитета, подлежащих иммунокоррекции, умеренная лимфопения позволяет применять препараты Соединения I для больных с пониженным иммунитетом, в т.ч. у больных с положительным ВИЧ-статусом.
Полученные результаты лечения с применением режимов химиотерапии, которые включали инъекционную и таблетированную форму Соединения I, позволили достичь быстрой клинико-рентгенологической динамики с прекращением бактериовыделения в основном до 6 месяцев лечения, заживлением каверн до 8 месяцев. Это позволит сократить срок лечения больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентными штаммами М. tuberculosis с 24 месяцев до 12 месяцев.
В исследовании у 30 больных первой группы установлено, что 12-ти месячные режимы химиотерапии столь же эффективны, как и 24-х месячные, количество обострений и рецидивов туберкулеза не несет отличий от общих статистических данных, полученных от больных туберкулезом, и составляет соответственно 14,2 % и 15,0 %. Контролем эффективности 12-ти месячной химиотерапии, которая применялась у 22 больных, был 24-х месячный курс непрерывной химиотерапии у таких же больных. Установлено, что 24-х месячные режимы химиотерапии не дают дополнительного терапевтического эффекта у больных с бактериовыделением после года лечения. Напротив, результаты лечения при применении 24-х месячных режимов химиотерапии у бактериовыделителей хуже, чем при применении 12-ти месячных режимов - распространяется резистентность к противотуберкулезным препаратам - у 20,0 % пациентов против 5 % при 12-ти месячном курсе.
Вывод: Фармацевтическая композиция с Соединением I в инъекционной и таблетированной форме повышает эффективность лечения у больных мультирезистентным туберкулезом. Высшие суточные дозы позволяют получить дополнительный клинический и рентгенологический эффект вследствие регрессии инфильтративных, казеозных и деструктивных изменений в легких у больных.
2) Исследование ингаляционной фармацевтической композиции с Соединением I.
Было проведено открытое рандомизированное сравнительное клиническое исследование Фазы II по изучению эффективности и безопасности ингаляционной и пероральной формы Соединения I в сочетании с препаратами стандартного протокола химиотерапии, у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких по сравнению с лечением препаратами стандартной терапии.
Фармацевтическая композиция для ингаляционной и пероральной формы имела состав, идентичный состав в исследовании I Фазы.
Всего в исследование были включены 1 10 больных мультирезистентным туберкулезом легких.
1 группа больных (основная) включала53 человека, у которых рандомизированным способом проводилось лечение по разработанным режимам с использованием противотуберкулезных препаратов 1 -й и 2-й линии и антибиотиков широкого спектра действия с антимикобактериальной активностью, в том числе Соединения I в ингаляционной форме в дозировке от 50 до 300 мг в сутки. Руководствуясь основным принципом химиотерапии больных туберкулезом, больным назначали не менее 3-х препаратов в режиме, к которым М. tuberculosis были чувствительны (одним из препаратов обязательно была фармацевтическая композиция с Соединением I), поэтому количество препаратов в режиме зависела от профиля медикаментозной резистентности микобактерии туберкулеза (от 5-ти до 3-х препаратов). Пациенты основной группы были разделены на 2 подгруппы путем рандомизации. В первую подгруппу были включены 24 пациента, которые получали среднетерапевтические дозы Соединения I (25-100 мг/сут) в комбинации с препаратами стандартной терапии. Во вторую подгруппу были включены 29 пациентов, получавших более высокие дозы Соединения I (300 мг/сут) в сочетании с препаратами стандартной терапии. Обе группы имели одинаковый режим введения. В течение первых 2-х месяцев исследования пациенты получали фармацевтическую композицию с Соединением I в ингаляционной форме, в дальнейшем пациенты получали фармацевтическую композицию с Соединением I в таблетированной форме в дозе 900 мг в сутки.
Контролем эффективности их лечения были 57 пациентов, терапия которых проводилась с привлечением только противотуберкулезных препаратов 1 -й и 2-й линии - канамицин, этамбутол, пиразинамид, этионамид, ципрофлоксацин.
Больные в группах были сопоставимы по полу, возрасту, типу и форме туберкулеза, профилю медикаментозной резистентности, преобладали: мужчины - 84 %; в возрасте 20-59 лет - 86 %.
Обследование больных проводили по единому протоколу с определением клинических, рентгенологических, иммунологических, микробиологических признаков туберкулеза. Все исследования выполнялись в начале, в процессе (каждые 2 месяца) и в конце лечения.
Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) Соединения I и бактериостатической активности крови проводили in vitro со стандартным штаммом М. tuberculosis H37Rv и мультирезистентными штаммами М. tuberculosis, выделенными от больных, в жидкой среде Проскауэра-Бека и плотной среде Левенштейна-Йенсена.
Бактериостатический эффект оценивали на основании задержки роста пленки микобактерий. Биологически активные концентрации Соединения I изучали по максимальной бактериостатической активности крови через 1 -1 ,5-2 часа после введения композиции, когда Соединение I достигало максимума концентрации. Бактериостатическую активность крови изучали общепринятым микробиологическим методом серийных разведений в жидкой питательной среде Проскауэра-Бека, оценивали по наибольшему разведению крови, при котором еще наблюдалась задержка роста М. tuberculosis. Задержку роста в разведениях 1 :2 и 1 :4 расценивали как низкую активность, в разведениях 1 :8 и 1 : 16 - как среднюю, а в разведениях 1 :32, 1 :64 и выше - как высокую.
Данные обследований рассчитывались по методикам вариационной статистики. Сравнение средних значений и оценка достоверности различий изучались параметрическими статистическими методами - t-критерий Фишера- Стьюдента. В исследовании у 1 10 больных туберкулезом установлено, что режимы химиотерапии с привлечением Соединения I у больных с одинаковым по форме и тяжести процессом и профилем резистентности микобактерий туберкулеза более эффективны, чем без него. При применении лечения с привлечением фармацевтической композиции Соединения I прекращение бактериовыделения было отмечено у 85,7 % пациентов, заживление каверн у 52,0 %, а при лечении без дополнительного использования Соединения I - у 57,3 % и 34,7 % больных соответственно, показатели достоверно отличаются, р < 0, 05.
У больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентнымимультирезистентными штаммами М. tuberculosis бактериовыделение прекращалось чаще при применении более высоких доз Соединения I, чем среднетерапевтических. При применении Соединения I в дозе 25-100 мг/сут в 1 -й подгруппе основной группы прекращение бактериовыделения было отмечено у 44,8 % больных, а в дозе 300 мг/сут во 2-й подгруппе основной группы - у 57,3 % пациентов, показатели достоверно отличаются, р<0,05.
Установлено, что для ингаляционной формы Соединения I свойственен дозозависимый эффект в отношении частоты заживления, регрессии каверн, инфильтративных и казеозных изменений в легких. При применении Соединения I в дозе 25-100 мг/сут заживление, регрессия каверн, инфильтративных и казеозных изменений в легких были отмечены у 76,6 % больных, а в дозе 300 мг/сут-у 89,6 %, показатели достоверно отличаются, р<0,05. Особо следует отметить что применение ингаляционной формы Соединения I значительно улучшает эффект от лечения, основываясь на более выраженном местном действии, в отличие от перорального и инъекционного пути введения.
В результате исследования были получены данные, что при лечении препаратами Соединения I представляется возможным расширить перспективы химиотерапии у больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентнымимультирезистентными штаммами М. tuberculosis, установление оптимального режима дозирования позволило повысить эффективность лечения за счет улучшения переносимости химиотерапии и относительного уменьшения системного действия.
Данные о переносимости разработанного режима химиотерапии с включением Соединения I в инъекционной и таблетированной форме по сравнению со стандартными режимами лечения.
Среди побочных реакций на химиотерапию у больных основной и контрольных групп встречались следующие: легкий и умеренный кашель у 75 % и 1 % пациентов соответственно ( р<0,05); желудочно-кишечные - у 20,1 % и 23,9 % соответственно ( р>0,05); неврологические - у 1 ,7 % и 2,4 % ( р>0,05); вестибуло- ототоксические - у 7,3 % и 18,5 % ( р>0,05);; гепатотоксичные в 1 , 3 % и 6,4 % ( р>0,05); аллергические - у 2,5 % и 2,3 % ( р>0,05); сердечно-сосудистые - у 1 ,1 % и 1 ,6 % ( р>0,05);, кристаллурия - у 0,7 % и 0,8 % ( р>0,05);, кандидамикоз - у 1 ,9 % и 2, 1 % ( р>0,05);. Следует отметить, что легкий и умеренный кашель, который был найболее частой побочной реакцией в основной группе, был вызван местнораздражающим действием фармацевтической композиции Соединения I в ингаляционной форме, носил преходящий характер и не требовал внесения каких- либо изменений в лечение. В большинстве случаев побочные реакции были умеренными и не приводили к отмене препарата, который вызывал эти проявления у больных основной группы у 46,2 % пациентов, контрольной - 47,8 % соответственно, р>0,05. Из выше приведенных данных можно сделать вывод, что количество и тяжесть побочных реакций, связанных с назначением препаратов Соединения I не несло различия по сравнению с контрольной группой, исключая легкий и умеренный кашель.
Влияние режима химиотерапии с привлечением фармацевтической композиции с Соединением I на состояние иммунитета больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентнымимультирезистентными штаммами М. tuberculosis. При исследовании иммунологической реактивности больных основной, контрольной групп и больных с мультирезистентными штаммами М. tuberculosis, получавших различные режимы химиотерапии и имели разную эффективность лечения, какого-либо характерного влияния химиотерапии на состояние иммунитета не обнаружено. В течение 6 месяцев сохранялись характерные для туберкулеза умеренные нарушения со стороны Т, В- и фагоцитарного звеньев иммунитета, которые заключались в снижении числа Т- лимфоцитов, напряженных аутоиммунных реакциях, повышении уровня кислородозависимого метаболизма фагоцитов. Но, несмотря на результаты лечения при котором у больных туберкулезом сохранялись нарушения Т, В- и фагоцитарных звеньев иммунитета, подлежащих иммунокоррекции, умеренная лимфопения позволяет применять препараты Соединения I для больных с пониженным иммунитетом, в т.ч. у больных с положительным ВИЧ-статусом.
Полученные результаты лечения с применением режимов химиотерапии, которые включали ингаляционную и таблетированную форму Соединения I, позволили достичь быстрой клинико-рентгенологической динамики с прекращением бактериовыделения в основном до 5 месяцев лечения, заживлением каверн до 7 месяцев. Это позволит сократить срок лечения больных туберкулезом легких, вызванным мультирезистентнымимультирезистентными штаммами М. tuberculosis с 24 месяцев до 12 месяцев.
В исследовании у 24 больных первой группы установлено, что 12-ти месячные режимы химиотерапии столь же эффективны, как и 24-х месячные, количество обострений и рецидивов туберкулеза не несет отличий от общих статистических данных, полученных от больных туберкулезом, и составляет соответственно 13, 1 % и 12,9 %. Контролем эффективности 12-ти месячной химиотерапии, которая применялась у 29 больных, был 24-х месячный курс непрерывной химиотерапии у таких же больных. Установлено, что 24-х месячные режимы химиотерапии не дают дополнительного терапевтического эффекта у больных с бактериовыделением после года лечения. Напротив, результаты лечения при применении 24-х месячных режимов химиотерапии у бактериовыделителей хуже, чем при применении 12-ти месячных режимов - распространяется резистентность к противотуберкулезным препаратам - у 19,7 % пациентов против 9, 1 % при 12-ти месячном курсе.
Вывод: Фармацевтическая композиция с Соединением I в ингаляционной и таблетированной форме повышает эффективность лечения у больных мультирезистентным туберкулезом. Более высокие суточные дозы позволяют получить дополнительный клинический и рентгенологический эффект вследствие регрессии инфильтративных, казеозных и деструктивных изменений в легких у больных.
3) Исследование III Фазы инъекционной и таблетированной формы Соединения I
Открытое исследование Фазы III по изучению эффективности и безопасности применения инъекционной и таблетированной формы Соединения I и рифампицина в интенсивной фазе химиотерапии при мультирезистентном туберкулезе с сопутствующей патологией гепато-панкреато-билиарной системы.
В исследование были включены 80 больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких и сопутствующим поражением гепато- панкреато-билиарной системы, которые были разделены на 2 группы. В первую группу вошли 40 больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких с поражением гепато-панкреато-билиарной системы, которые получали таблетированные противотуберкулезные препараты первой линии в сочетании с Соединением I в интенсивную фазу химиотерапии. Вторую группу составили 40 больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких с поражением гепато-панкреато-билиарной системы, получавших инъекционные формы рифампицина и Соединения I в интенсивную фазу химиотерапии. Мужчин было 60 (75 %), женщин - 20 (25 %). Средний возраст составил (40, 1 ± 1 ,2) года. Поражения гепато-панкреато-билиарной системы устанавливались по данным ультразвукового обследования органов брюшной полости и результатам лабораторного исследования (общий белок, билирубин, АсАЛ, АлАТ, мочевина, креатинин, тимоловая проба). Бактериовыделители составляли 100 % от всех случаев, деструкции в легких обнаружены у 100 % обследуемых, которые определялись по общепринятым методикам исследования.
Статистическую обработку материалов проводили с использованием пакета программного обеспечения IBM SPSS Statistics для Windows. Достоверными считали результаты с погрешностью р<0,05.
Длительный и непрерывный прием противотуберкулезных препаратов, кроме лечебного эффекта, нередко оказывает отрицательное влияние на организм человека в целом. Это затрудняет лечение, заставляет прерывать его, продлевать сроки пребывания больных в стационаре, а иногда и отказываться от него.
При несвоевременной диагностике сопутствующей патологии у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких и надлежащем программном лечении туберкулеза у пациентов с коморбидностью часто развивается непереносимость к противотуберкулезным препаратам и развитие побочных реакций, как следствие, это приводит к неэффективному лечению и рецидивам.
Пациентам 1 группы в интенсивную фазу химиотерапии, включающей прием 4-х противотуберкулезных препаратов, включали таблетированные формы Соединения I в дозировке 300 мг в сутки. Также пациенты принимали рифампицин (600 мг), этамбутол (1200 мг) и пиразинамид (2000 мг). В ответ на применение таблетированных форм препаратов у обследуемых пациентов 1 группы побочных реакций ни в одном из случаев не наблюдалось.
Пациентам 2 группы в интенсивную фазу химиотерапии, включающей прием 4-х противотуберкулезных препаратов, вместо таблетированных форм Соединения I и рифампицина вводили внутривенно капельно рифампицин 30 мг/мл (600 мг) на 100 мл физиологического раствора NaCI и Соединение I внутривенно 100 мг/мл (300 мг), также больные получали таблетированные формы этамбутола (1200 мг) и пиразинамида (2000 мг). В ответ на применение инъекционных форм препаратов у обследуемых пациентов 2 группы побочных реакций ни в одном из случаев не наблюдалось.
Состав таблетированной и инъекционной формы Соединения I не отличался от состава в соответствующих исследованиях I Фазы.
Общее состояние пациентов после получения 60 доз в интенсивную фазу лечения оценивали по таким показателям, как состояние сознания, положение пациента в постели, функции жизненно важных органов по результатам объективного обследования. Для определения выраженности интоксикационного и бронхолегочного синдромов собранные жалобы пациентов систематизировались по специально разработанным шкалам, которые позволили количественно охарактеризовать каждую жалобу и состояние пациента в целом.
Для оценки интоксикационного синдрома учитывали такие симптомы, как фебрильная или субфебрильная температура тела, похудение, повышенная потливость и общая слабость, а для оценки бронхолегочного синдрома - кашель сухой или с мокротой, боль в грудной клетке, связанная с дыханием, кровохарканье, легочное кровотечение.
Таблица 8
Оценка выраженности интоксикационного синдрома через 2 месяца интенсивной фазы по различным схемам лечения
Figure imgf000050_0001
Примечание: * - показатель достоверно отличается от такового в группе 1 (р<0,05), п-число наблюдений.
В результате анализа оценки интоксикационного синдрома (Табл.8) было установлено, что у больных группы 2 в 63,4 % больных наблюдался легкий интоксикационный синдром, который достоверно отличается от данного показателя в 1 -й группе (52,5 %). Средняя температура тела пациентов группы 1 была (37,3 ± 1 ,2)°С против (37,4 ± 0,5) °С у больных 2-й группы. Таким образом, было установлено, что у больных 1 -й группы интоксикационный синдром был более выраженным (р<0,05), чем у обследуемых больных группы 2 на конец интенсивной фазы лечения.
Таблица 9
Характеристика выраженности бронхолегочного синдрома у обследуемых больных через 2 месяца интенсивной фазы по различным схемам лечения
Figure imgf000051_0001
Примечание: η-число наблюдений.
Как видно из результатов, приведенных в таблице 9, после получения 60 доз в интенсивную фазу бронхолегочной синдром у больных, получавших инъекционные формы противотуберкулезных препаратов в большинстве случаев отсутствовал или был легким, однако, у половины пациентов 1 -й группы отмечался легко и умеренно выраженный бронхолегочной синдром.
Основным критерием эффективности лечения больных туберкулезом в соответствии с унифицированным клиническим протоколом первичной, вторичной и третичной медицинской помощи больным туберкулезом является прекращение бактериовыделения. После 60 доз интенсивной фазы всем больным было проведено микроскопическое исследование мокроты.
Таблица 10
Динамика прекращение бактериовыделения у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких на конец
интенсивной фазы по различным схемам лечения
Figure imgf000051_0002
Примечание:
η-число наблюдений.
Как видно из результатов, приведенных в таблице 10, в группы 1 после приема 60 доз препаратов, в том числе таблетированной формы Соединения I бактериовыделение прекратилось у 53,7 % больных, в то время как у пациентов, получавших инъекционные формы противотуберкулезных препаратов, в том числе Соединения I, бактериовыделение на 60 дозе интенсивной фазы прекратилось в 61 % случаев (р<0,05). У 41 больного интенсивная фаза была продлена до 90 доз. После проведения мониторинга мокроты на 90 дозе, было установлено, что в 12,3 % случаев, у пациентов, получавших лечение таблетированными формами, в том числе Соединением I, продолжилось бактериовыделения, что указывает на большую эффективность инъекционного пути введения противотуберкулезных препаратов. У больных 2-й группы после 90 доз в интенсивную фазу наблюдалась значительно лучшая динамика показателей, бактериовыделение продолжилось только у 8 % пациентов.
Все пациенты 1 -й и 2-й группы, которым была продлена схему лечения до 120 доз, были обезбацилены и переведены в поддерживающую фазу химиотерапии.
Лучшие показатели обезбациления у больных, получавших инъекционные формы Соединения I и рифампицина, можно объяснить преимуществом парентерального пути введения препаратов, который имеет психологическую составляющую, что является неотъемлемой в длительном лечении больных туберкулезом.
Весомым критерием эффективности лечения больных распространенными, деструктивными процессами в легких является положительная рентгенологическая динамика. Согласно требованиям протокола, рентгенологический контроль проводился при поступлении в стационар, на конец интенсивной фазы лечения и при завершении основного курса лечения.
Таблица 1 1
Эффективность программы стандартной химиотерапии с применением инъекционной и таблетированной формы Соединения I по результатам динамики рентгенологического исследования
Figure imgf000052_0001
Примечание:
η-число наблюдений.
Рентгенконтроль на 60 дозе интенсивной фазы показал, что у больных, получавших инъекционные формы Соединения I и рифампицина рассасывание очагово-инфильтративных изменений наблюдалось чаще, чем в группе 1 (Табл. 1 1 ) (р<0,05). Заживление полостей распада отмечалось у 18,5 % пациентов 2-й группы против 17,3 % 1 -й группы соответственно (р<0,05). По результатам рентгенологического исследования (через 3 месяца), рассасывание очагово- инфильтративных изменений встречалось чаще в группе 2, чем у пациентов 1 -й группы. Заживление полостей распада наблюдалось в группе 1 - у 51 ,3 % пациентов и в группе 2 - у 52,5 % соответственно.
Таким образом, по результатам комплексного обследования согласно протоколу, проведенное исследование подтвердило достоверно более высокую эффективность при применении в программах химиотерапии интенсивной фазы у больных с впервые диагностированным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с бактериовыделением и сопутствующей патологией гепато- панкреато-билиарной системы инъекционной и таблетированной форм Соединения I. Полученные данные показывают, что бактериостатическое и бактерицидное действие Соединения I в разных формах против микобактерий туберкулеза зависит от концентрации Соединения I и продолжительности его контакта с микобактериями туберкулеза, чем больше концентрация Соединения I в крови, тем дольше оно сохраняется на высоких уровнях и тем выше бактерицидное действие.
Важной составляющей является определение синдрома эндогенной интоксикации у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких с сопутствующим поражением гепато-билиарной системы, поскольку эндогенная интоксикация является одним из наиболее важных критериев, определяющих не только тяжесть общего состояния пациента, но и распространенность специфической воспалительной реакции и ее системные эффекты.
Косвенным критерием тяжести общего состояния больных с различными патологическими процессами является тяжесть эндогенной интоксикации. После окончания интенсивной фазы лечения у подавляющего большинства больных ТБ легких и коморбидностью с патологией пищеварительной системы наблюдались улучшения общего состояния, положительная динамика со стороны легочного процесса. Однако, отмечается тенденция к ухудшению отдельных биохимических показателей крови, в частности, имеет место рост уровня билирубина, показателей АлАТ, АсАТ, креатинина, тимоловой пробы, свидетельствует о токсическом влиянии химиотерапии на метаболические процессы в печени (Табл. 12)
Таблица 12
Динамика биохимических показателей крови у больных с впервые диагностированным распространенным мультирезистентным туберкулезом легких с сопутствующим поражением гепато-панкреато-билиарной системы на конец интенсивной фазы химиотерапии в зависимости от схемы лечения
Figure imgf000053_0001
Достоверно установлено, что у больных, получавших таблетированные формы противотуберкулезных препаратов, изменения в биохимическом анализе крови были значительно выразительнее и росли до завершения основного курса химиотерапии в случае продолжения интенсивной фазы до 90 и 120 доз. Установлено, что после получения 120 доз в интенсивной фазе у больных группы 1 показатель общего белка был ниже, а билирубина выше, чем в группе 2, весомый вклад имеет то, что у пациентов группы 1 сроки пребывания в интенсивной фазе лечения были продлены по сравнению с группой 2.
Одним из весомых синдромов нарушения функционального состояния печени является цитолитический синдром. Результатами анализа установлено, что синдром цитолиза встречался у 13,2 % среди пациентов 1 -й группы и у 1 1 ,2 % пациентов группы 2.
Через 2 месяца антимикобактериальной терапии при проведении ультразвукового обследования пищеварительной системы в обеих группах, отмечались следующие изменения: гепатомегалия - увеличение максимального косого размера правой доли печени у 75,0 % больных (0,7 ± 0,73) см, показательсоставил(15,2 ± 1 ,15) см; длина левой доли у 72 % больных - на (0,81 ± 0, 13) см и составила (1 1 ,3 ± 2,5) см; признаки диффузного поражения структуры печеночной паренхимы за счет мелких эхосигналов различной плотности, снижение звукопроводности и повышение эхогенности паренхимы печени, увеличение диаметра просвета портальной вены - у 70 % больных.
В целом, как показали результаты исследования, применение парентеральной и таблетированной форм Соединения I имеет клиническое и эпидемиологическое значение, поскольку сокращает резервуар инфекции, предотвращает развитие токсического поражения печени и формирование побочных реакций на химиотерапию.
Установлено, что у больных распространенным туберкулезом легких с выраженными симптомами интоксикации имеют место нарушения белкового обмена и функции пищеварительной системы, а именно, снижение уровня общего белка, повышение показателей АлАТ, АсАТ, тимоловой пробы. Нарушения циркуляции крови в печени возникают уже на ранних стадиях токсического повреждения органа и предшествуют биохимическим и клиническим сдвигам. Изменения показателей биохимических тестов и патологические признаки при ультразвуковом исследовании гепато-билиарной системы, свидетельствуют о наличии гепатотоксического, холестатического или смешанного побочного действия антимикобактериальных препаратов, в т.ч. Соединения I.
Таким образом, в основе предложенной схемы с применением в интенсивную фазу таблетированной и инъекционной формы Соединения I для лечения больных с впервые диагностированным распространенным мультирезистентным туберкулезом легких с сопутствующим поражением гепато- панкреато-билиарной системы лежит возможность быстрого создания высоких концентраций медикаментов в легочной артерии.
При внутривенном введении концентрация препаратов значительно превышает бактериостатический уровень, который дает прием препаратов перорально и даже внутримышечно. Высокая, хотя и непродолжительная, концентрация Соединения I в крови способствует усилению диффузии в очаги поражения. Такой метод позволяет создать достаточную бактериостатическую концентрацию даже в малодоступных для препаратов казеозных очагах. Результаты проведенного анализа показали необходимость дифференцированного подхода в назначении программной химиотерапии при распространенном туберкулезе легких и коморбидностью с патологией гепато- панкреато-билиарной системы с применением таблетированной и инъекционной формы Соединения I в интенсивной фазе лечения. Результаты исследования показали, что применение Соединения I у больных с впервые диагностированным распространенным мультирезистентным туберкулезом легких и сопутствующим поражением гепато-панкреато-билиарной системы способствует достижению значительного клинико-рентгенологического эффекта, а именно: интоксикационный и бронхолегочной синдромы через 2 месяца интенсивной фазы отсутствовали или бти легко выраженными в обеих группах, а рассасывание очагово-инфильтративных изменений и заживление полостей распада наблюдалось чаще всего в популяции больных с подобным диагнозом; прекращение бактериовыделения после получения 60 доз в интенсивную фазу отмечалось достоверно чаще, что существенно сокращает сроки пребывания больных в стационаре (койко-дни), улучшает комплаентность и является экономически обоснованным.
При впервые диагностированном распространенном мультирезистентном туберкулезе легких с сопутствующим поражением гепато-панкреато-билиарной системы в динамике оптимизированного лечения отмечалось достоверное улучшение клинической, рентгенологической картины при относительно небольшом количестве побочных реакций.
4) Исследование III Фазы ингаляционной и инъекционной формы Соединения I
Открытое исследование Фазы III по изучению эффективности и безопасности применения ингаляционной и инъекционной формы Соединения I и рифампицина в интенсивную фазу химиотерапии при мультирезистентном туберкулезе с сопутствующей патологией желудочно-кишечного тракта.
В исследование были включены 60 больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких и сопутствующим поражением желудочно-кишечного тракта, которые были разделены на 2 группы. В первую группу вошли 30 больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких с поражением желудочно-кишечного тракта, которые получали таблетированные противотуберкулезные препараты первой линии в сочетании с Соединением I в виде ингаляций в интенсивную фазу химиотерапии. Вторую группу составили 30 больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких с поражением желудочно-кишечного тракта, которые получали инъекционные формы рифампицина и Соединения I в интенсивную фазу химиотерапии. Мужчин было 30 (50 %), женщин - 30 (50 %). Средний возраст составил 39, 1 ± 1 ,6 года. Поражения желудочно-кишечного тракта устанавливались по данным ультразвукового обследования органов брюшной полости и результатам лабораторного исследования (общий белок, билирубин, АСаЛ, АлАТ, мочевина, креатинин, тимоловая проба). Бактериовыделители составляли 100 % от всех случаев, деструкции в легких обнаружены у 100 % обследуемых, которые определялись по общепринятым методикам исследования.
Статистическую обработку материалов проводили с использованием пакета программного обеспечения IBM SPSS Statistics для Windows. Достоверными считали результаты с погрешностью р<0,05.
Длительный и непрерывный прием противотуберкулезных препаратов, кроме лечебного эффекта, нередко оказывает отрицательное влияние на организм человека в целом. Это затрудняет лечение, заставляет прерывать его, продлевать сроки пребывания больных в стационаре, иногда и отказываться от него.
При несвоевременной диагностике сопутствующей патологии у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких и надлежащем программном лечении туберкулеза у пациентов с коморбидностью часто развивается непереносимость к противотуберкулезным препаратам и развитие побочных реакций, как следствие, это приводит к неэффективному лечению и рецидивам.
Пациентам 1 группы в интенсивную фазу химиотерапии, которая включала прием 4-х противотуберкулезных препаратов, включали ингаляционную форму Соединения I в дозировке 300 мг в сутки. Также пациенты принимали рифампицин (600 мг), этамбутол (1200 мг) и пиразинамид (2000 мг). В ответ на лечение у обследуемых пациентов 1 группы выявлены следующие побочные реакции: основной побочной реакцией был легкий или умеренный кашель, который носил преходящий характер, а также не нуждался в дополнительном лечении, также среди побочных реакций были зарегистрированы тошнота, слабость, потеря веса, головная боль.
Пациентам 2 группы в интенсивную фазу химиотерапии, включающей прием 4-х противотуберкулезных препаратов, вместо ингаляционной формы Соединения I и рифампицина вводили внутривенно капельно рифампицин 30 мг/мл (600 мг) на 100 мл физиологического раствора NaCI и Соединение I внутривенно 100 мг/мл (300 мг), также больные получали таблетированные формы этамбутола (1200 мг) и пиразинамида (2000 мг). В ответ на применение инъекционных форм препаратов у обследуемых пациентов 2 группы побочных реакций ни в одном из случаев не наблюдалось.
Состав ингаляционной и инъекционной формы Соединения I не отличался от состава в соответствующих исследованиях I Фазы.
Общее состояние пациентов после получения 60 доз в интенсивную фазу лечения оценивали по таким показателям, как состояние сознания, положение пациента в постели, функции жизненно важных органов по результатам объективного обследования. Для определения выраженности интоксикационного и бронхолегочного синдромов собранные жалобы пациентов систематизировались по специально разработанным шкалам, которые позволили количественно охарактеризовать каждую жалобу и состояние пациента в целом.
Для оценки интоксикационного синдрома учитывали такие симптомы, как фебрильная или субфебрильная температура тела, похудение, повышенная потливость и общая слабость, а для оценки бронхолегочного синдрома - кашель сухой или с мокротой, боль в грудной клетке, связанная с дыханием, кровохарканье, легочное кровотечение.
Таблица 13
Оценка выраженности интоксикационного синдрома через 2 месяца интенсивной фазы по различным схемам лечения
Figure imgf000057_0001
Примечание: * - показатель достоверно отличается от такового в группе 1 (р<0,05), п-число наблюдений.
В результате анализа оценки интоксикационного синдрома (Табл.13) было установлено, что у больных группы 2 у 62,5 % больных наблюдался легкий интоксикационный синдром, показатель достоверно отличается от данного показателя в 1 -й группе (52,6 %). Средняя температура тела пациентов группы 1 была (37,4 ± 1 ,3) °С против (37,2 ± 0,8) °С у больных 2-й группы. Таким образом, было установлено, что у больных 1 -й группы интоксикационный синдром был более выраженным (р<0,05), чем у обследуемых больных группы 2 на конец интенсивной фазы лечения.
Таблица 14
Характеристика выраженности бронхолегочного синдрома у обследуемых больных через 2 месяца интенсивной фазы по различным схемам лечения
Figure imgf000057_0002
Примечание: η-число наблюдений.
Как видно из результатов, приведенных в таблице 14, после получения 60 доз в интенсивную фазу лечения, бронхолегочной синдром у группы больных, которые в т.ч. получали ингаляционную форму Соединения I противотуберкулезных препаратов, в подавляющем большинстве случаев был легким или умеренным, но это напрямую связано с местнораздражающим действием ингаляционной формы Соединения I, и требует отдельной оценки в течение запланированных последующих исследований, однако, у большинства пациентов 2-й группы отмечался легко выраженный бронхолегочной синдром.
Основным критерием эффективности лечения больных туберкулезом в соответствии с унифицированным клиническим протоколом первичной, вторичной и третичной медицинской помощи больным туберкулезом является прекращение бактериовыделения. После 60 доз интенсивной фазы всем больным было проведено микроскопическое исследование мокроты. У группы 1 после приема 60 доз препаратов, в том числе ингаляционной формы Соединения I бактериовыделение прекратилось у 73,7 % больных, в то время как у пациентов, получавших инъекционные формы противотуберкулезных препаратов, в том числе Соединения I, бактериовыделение на 60 дозе интенсивной фазы прекратилось в 62 % случаев (р<0,05). Всем больным была продлена интенсивная фаза до 90 доз. После проведения мониторинга мокроты на 90 дозе, установлено, что в 7,5 % случаев, у пациентов, группы 1 продолжилось бактериовыделение, что указывает на большую эффективность ингаляционного пути введения противотуберкулезных препаратов. У больных 2-й группы после 90 доз в интенсивную фазу бактериовыделение продолжилось у 9,1 % пациентов.
Все пациенты 1 -й и 2-й группы (6 пациентов), которым была продлена схема лечения до 120 доз, были обезбацилены и переведены в поддерживающую фазу химиотерапии.
Лучшие показатели обезбациления у больных, получавших ингаляционную фармацевтическую композицию с Соединением I, можно объяснить преимуществом ингаляционного пути введения препаратов для получения ярко выраженного местного действия.
Весомым критерием эффективности лечения больных с распространенными, деструктивными процессы в легких является положительная рентгенологическая динамика. Согласно требованиям протокола, рентгенологический контроль проводился при поступлении в стационар, на конец интенсивной фазы лечения и при завершении основного курса лечения.
Таблица 15
Эффективность программы стандартной химиотерапии с использованием инъекционной и ингаляционной формы Соединения I по результатам динамики рентгенологического исследования.
Figure imgf000058_0001
Примечание:
η-число наблюдений.
Рентгенконтроль на 60 дозе интенсивной фазы показал, что у больных группы 1 рассасывание очагово-инфильтративных изменений наблюдалось чаще, чем в группе 1 (Табл. 15) (р<0,05). Заживление полостей распада отмечалось у 18,7 % пациентов 2-й группы против 20,1 % 1 -й группы соответственно (р<0,05). По результатам рентгенологического исследования (через 3 месяца), рассасывание очагово-инфильтративных изменений встречалось чаще в группе 1 , чем у пациентов 2-й группы. Заживление полостей распада наблюдалось в группе 1 - у 66,6 % пациентов и в группе 2-у 51 ,9%.
Таким образом, по результатам комплексного обследования согласно протоколу, проведенное исследование подтвердило достоверно более высокую эффективность при применении в программах химиотерапии интенсивной фазы у больных с впервые диагностированным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с бактериовыделением и сопутствующей патологией желудочно-кишечного тракта инъекционной и ингаляционной формы Соединения I. Полученные данные показывают, что бактериостатическое и бактерицидное действие Соединения I в разных формах против микобактерий туберкулеза зависит от концентрации Соединения I и продолжительности его контакта с микобактериями туберкулеза, чем больше концентрация Соединения I в крови, тем дольше оно сохраняется на высоких уровнях и выше бактерицидное действие.
Важной составляющей является определение синдрома эндогенной интоксикации у больных с впервые диагностированным мультирезистентным туберкулезом легких с сопутствующим поражением желудочно-кишечного тракта, так как эндогенная интоксикация является одним из самых важных критериев, определяющих не только тяжесть общего состояния пациента, но и распространенность специфической воспалительной реакции, и ее системные эффекты.
Косвенным критерием тяжести общего состояния больных с различными патологическими процессами является тяжесть эндогенной интоксикации. После окончания интенсивной фазы лечения у подавляющего большинства больных ТБ легких и коморбидностью с патологией желудочно-кишечного тракта наблюдались улучшения общего состояния, положительная динамика со стороны легочного процесса. Однако, отмечается тенденция к ухудшению отдельных биохимических показателей крови, в частности, имеет место рост уровня билирубина, показателей АлАТ, АсАТ, креатинина, тимоловой пробы, что свидетельствует о токсическом влиянии химиотерапии на метаболические процессы в печени (Табл. 16)
Таблица 16
Динамика биохимических показателей крови у больных с впервые диагностированным распространенным мультирезистентным туберкулезом легких с сопутствующим поражением гепато-панкреато-билиарной системы на конец интенсивной с эазы химиотерапии в зависимости от схемы лечения.
Биохимический Группы больных До лечения В конце интенсивной показатель (п=60) фазы лечения
Общий белок, (г/л) Группа 1 70,5 ± 0,68 63,9 ± 0,44
Группа 2 72,3 ± 0,1 1 65,8 ± 0,89
Билирубин, (мкмоль/л) Группа 1 14,7 ± 0,48 17,4 ± 0,91
Группа 2 13,5 ± 0,41 17,3 ± 0,46
АсАТ, ммоль/(ч л) Группа 1 0,44 ± 0,018 0,58 ± 0,019
Группа 2 0,43 ± 0,016 0,59 ± 0,013
Ал AT, ммоль/(ч л) Группа 1 0,47 ± 0,012 0,63 ± 0,014
Группа 2 0,43 ± 0,01 1 0,54 ± 0,017
Мочевина, (ммоль/л) Группа 1 5,3 ± 0,24 5,7 ± 0,13 Группа 2 5,4 ± 0,18 5,8 ± 0,13
Креатинин, (кмоль/л) Группа 1 82,4 ± 0,87 93,8 ± 1 ,22
Группа 2 83,6 ± 0,55 91 ,4 ± 1 ,13
Тимоловая проба, (ед.) Группа 1 3,48 ± 0,20 5,22 ± 0,24
Группа 2 3,53 ± 0,22 5,75 ± 0,32
Достоверно установлено, что у больных группы 2, изменения в биохимическом анализе крови были значительно выразительнее и росли до завершения основного курса химиотерапии в случае продолжения интенсивной фазы до 90 и 120 доз. Установлено, что после получения 120 доз в интенсивной фазе у больных группы 2 показатель общего белка и билирубина был выше, чем в группе 1 .
Одним из весомых синдромов нарушения функционального состояния печени является цитолитический синдром. Результатами анализа установлено, что синдром цитолиза встречался у 10,2 % среди пациентов 1 -й группы и у 1 1 ,3 % пациентов группы 2.
Через 2 месяца антимикобактериальной терапии при проведении ультразвукового обследования пищеварительной системы в обеих группах, отмечались следующие изменения: гепатомегалия - увеличение максимального косого размера правой доли печени у 70,0 % больных на (0,8 ± 0,75) см, показатель составил (15,5 ± 1 , 18) см; длина левой доли - увеличилась у 75 % больных - на (0,86 ± 0, 15) см и составила (1 1 ,8 ± 2,7) см; признаки диффузного поражения структуры печеночной паренхимы за счет мелких эхосигналов различной плотности, снижение звукопроводности и повышение эхогенности паренхимы печени, увеличение диаметра просвета портальной вены у 55 % больных.
В целом, как показали результаты исследования, применение парентеральной и ингаляционной формы Соединения I имеет клиническое и эпидемиологическое значение, поскольку сокращает резервуар инфекции, предотвращает развитие токсического поражения печени и формирование побочных реакций на химиотерапию.
Установлено, что у больных распространенным туберкулезом легких с выраженными симптомами интоксикации имеет место нарушение белкового обмена и функции пищеварительной системы, а именно, снижение уровня общего белка, повышение показателей АлАТ, АсАТ, тимоловой пробы. Нарушения циркуляции крови в печени возникает уже на ранних стадиях токсического повреждения органа и предшествует биохимическим и клиническим сдвигам. Изменение показателей биохимических тестов и патологические признаки при ультразвуковом исследовании гепато-билиарной системы, свидетельствуют о наличии гепатотоксического, холестатического или смешанного побочного действия антимикобактериальных препаратов, в т.ч. Соединения I.
Таким образом, в основе предложенной схемы лечения с применением в интенсивную фазу ингаляционной и инъекционной формы Соединения I для лечения больных с впервые диагностированным распространенным мультирезистентным туберкулезом легких с сопутствующим поражением желудочно-кишечного тракта лежит возможность быстрого создания высоких концентраций медикаментов в легочной артерии. При внутривенном и ингаляционном введении концентрация препаратов значительно превышает бактериостатический уровень, который дает прием препаратов внутрь перорально и даже внутримышечно. Высокая, хотя и непродолжительная, концентрация Соединения I в крови способствует усилению диффузии в очаге поражения, а непосредственная доставка препарата в место поражения путем введения фармацевтической композиции Соединения I в ингаляционной форме дает существенные преимущества в формировании надлежащей концентрации противотуберкулезного агента непосредственно в очаге. Такой метод позволяет создать достаточную бактериостатическую концентрацию даже в малодоступных для препаратов казеозных очагах.
Результаты проведенного анализа показали необходимость дифференцированного подхода в назначении программной химиотерапии при распространенном туберкулезе легких и коморбидностью с патологией желудочно-кишечного тракта с применением ингаляционной и инъекционной формы Соединения I в интенсивную фазу лечения. Результаты исследования показали, что применение Соединения I у больных с впервые диагностированным распространенным мультирезистентным туберкулезом легких и сопутствующим поражением желудочно-кишечного тракта способствует достижению значительного клинико-рентгенологического эффекта, а именно: интоксикационный и бронхолегочной синдромы через 2 месяца интенсивной фазы достоверно отсутствовали или были легко выраженными в обеих группах, а рассасывание очагово-инфильтративных изменений и заживление полостей распада наблюдалось чаще всего в популяции больных с подобным диагнозом; прекращение бактериовыделения после получения 60 доз в интенсивную фазу отмечалось достоверно чаще, что существенно сокращает сроки пребывания больных в стационаре (койко-дни), улучшает комплаентность и есть экономически обоснованным.
При впервые диагностированном распространенном мультирезистентном туберкулезе легких и сопутствующим поражением желудочно-кишечного тракта в динамике оптимизированного лечения отмечалось достоверное улучшение клинической, рентгенологической картины при относительно небольшом количестве побочных реакций.
Таким образом, согласно приведенных выше результатов клинических исследований, можно сделать вывод о том, что заявленная фармацевтическая композиция является эффективной в использовании для лечения ТБ, в частности для лечения ТБ, который был вызван возбудителями, резистентными по отношению к известным противотуберкулезным препаратам. В частности, достоверным антимикобактериальным действием обладают варианты осуществления заявленной фармацевтической композиции, предназначенные для перорального, ингаляционного и инъекционного введения.
Суммируя данные доклинического и клинического исследований можно сделать вывод, о том, что использование фармацевтической композиции согласно техническому решению, которая содержит как активный ингредиент Соединение I или Соединение II, повышает эффективность лечения туберкулеза, в частности, туберкулеза, который был вызван возбудителями, резистентными по отношению к известным противотуберкулезным препаратам, улучшает качество жизни больных за счет уменьшения срока лечения болезни, пониженной токсичности фармацевтической композиции, уменьшения возможности рецидива заболевания, улучшения показателей излечимости и выживаемости больных ТБ, в частности, больных резистентным ТБ.
Из приведенных результатов исследований видно, что:
1 ) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет антимикобактериальную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv при аэробных условиях.
2) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет достоверную внутриклеточную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv.
3) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет достоверно большое антимикобактериальное действие по пяти резистентных штаммах М. tuberculosis: INH-R1 , INH-R2, RIF-R1 , RIF-R2, FQ- R1 .
4) Фармацевтическая композиция заявленным техническим решением не является цитотоксичной, имеет относительно небольшой показатель связываемое™ с белками крови, легко проникает в ткани и клетки и легко выводится из организма, что способствует большей эффективности и безопасности при использовании в лечении ТБ, в частности, лечении резистентного ТБ.
Приведенное выше свидетельствует о том, что фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению является высокоэффективной и перспективной для внедрения в медицинскую практику в качестве средства для лечения ТБ, в частности, резистентного ТБ.
Приведенные примеры осуществления технического решения только иллюстрируют его и никак не ограничивают.

Claims

ФОРМУЛА
1 . Фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза, которая содержит активный ингредиент и по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит соединение формулы I:
Figure imgf000063_0001
I
2. Фармацевтическая композиция по пункту 1 , отличающаяся тем, что предназначена для перорального введения.
3. Фармацевтическая композиция по пункту 2, отличающаяся тем, что может быть изготовлена в лекарственной форме, пригодной для перорального применения, которая выбранная из группы таких лекарственных форм, включая таблетку, капсулу, порошок, диск, каплету, гранулу, гранулу в капсуле, минитаблетку, минитаблетку в капсуле, пеллету, пеллету в капсуле, саше, таблетку для рассасывания, жевательную таблетку, шипучую таблетку, пленку для растворения во рту, жидкую форму в твердых желатиновых капсулах, жидкую форму в мягких желатиновых капсулах, жидкую форму в капсулах с гидроксипропилметилцелюлозы, полутвердую форму в твердых желатиновых капсулах, полутвердую форму в мягких желатиновых капсулах, полутвердую форму в капсулах с гидроксипропилметилцеллюлозы.
4. Фармацевтическая композиция по пункту 2, отличающаяся тем, что содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включая наполнитель, связывающий агент, смазочный агент, дезинтегратор, глидант, антиоксидант, подсластитель, краситель, ароматизатор, консервант, хелатирующий агент, агент для маскировки вкуса.
5. Фармацевтическая композиция по пункту 1 , отличающаяся тем, что предназначена для ингаляционного введения.
6. Фармацевтическая композиция по пункту 5, отличающаяся тем, что как фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество содержит фармацевтически приемлемый носитель, в котором суспендируют или растворяют активный ингредиент.
7. Фармацевтическая композиция по пункту 6, отличающаяся тем, что дополнительно содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.
8. Фармацевтическая композиция по пункту 7, отличающаяся тем, что в качестве агента для регулирования значения уровня рН содержит по крайней мере одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемую основу.
9. Фармацевтическая композиция по пункту 7, которая отличается тем, что содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значение уровня рН, в количестве от 0,001 % до 90% по массе.
10. Фармацевтическая композиция по пункту 9, отличающаяся тем, что содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значение уровня рН, в количестве от 0,001 % до 50% по массе.
1 1 . Фармацевтическая композиция по пункту 10, отличающаяся тем, что содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значение уровня рН, в количестве от 0,001 % до 25% по массе.
12. Фармацевтическая композиция по пункту 1 1 , отличающаяся тем, что содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значение уровня рН, в количестве от 0,001 % до 10% по массе.
13. Фармацевтическая композиция по пункту 12, отличающаяся тем, что содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значение уровня рН, в количестве от 0,001 % до 1 % по массе.
14. Фармацевтическая композиция по пункту 1 , отличающаяся тем, что предназначена для инъекционного введения.
15. Фармацевтическая композиция по пункту 14, отличающаяся тем, что как фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества содержит воду для инъекций и по крайней мере один сорастворитель или солюбилизатор.
16. Фармацевтическая композиция по пункту 15, отличающаяся тем, что дополнительно содержит по крайней мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.
17. Фармацевтическая композиция по пункту 16, отличающаяся тем, что в качестве агента для регулирования значения уровня рН содержит по крайней мере одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемую основу.
PCT/IB2017/058326 2016-12-22 2017-12-22 Фармацевтическая композиция с противотуберкулезным действием WO2018116260A1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU201613112 2016-12-22
UA201613112 2016-12-22
UA201712732 2017-12-21
UAA201712732 2017-12-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018116260A1 true WO2018116260A1 (ru) 2018-06-28

Family

ID=62626098

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/IB2017/058326 WO2018116260A1 (ru) 2016-12-22 2017-12-22 Фармацевтическая композиция с противотуберкулезным действием

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2018116260A1 (ru)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1987006127A1 (en) * 1986-04-07 1987-10-22 The Upjohn Company Anthelmintic acylhydrazones, method of use and compositions

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1987006127A1 (en) * 1986-04-07 1987-10-22 The Upjohn Company Anthelmintic acylhydrazones, method of use and compositions

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Elucidation of physiology of non-replicating", DRUG-TOLERANT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS [???EP?E?-?Y????A???, 25 October 2010 (2010-10-25), Retrieved from the Internet <URL:https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/bioassay/488890> *
"Изoниaзид [Интepнeт-пyбликaция", ??O??A??? [???EP?E?-?Y????A???, 4 May 2009 (2009-05-04), Retrieved from the Internet <URL:https://web.archive.org/web/2009010100000/www.rlsnet.ru/mnn_indexid_627.htm> [retrieved on 20180404] *
ABID HUSSAIN ET AL.: "N'-[(E)-( 1 -Methyl-1 H-pyrrol-2-yl)methylidene]pyridine-4-carbohydrazide", ACTA CRYSTALLOGRAPHICA, 2010 *
L. MITU ET AL.: "Synthesis and characterization of Cu(II), Ni(II), Co(II), Mn(II), Zn(II), Cd (II) complexes of Isonicotinoylhydrazone-l-methyl-2-aldehydepyrrole", ASIAN JOURNAL OF CHEMISTRY, vol. 19, no. 7, 2007, pages 5666 - 5674 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230172862A1 (en) Extended release pharmaceutical compositions of levetiracetam
CA3188794A1 (en) Methods of treating coronavirus infections by co-administering an fkbp ligand and an antiviral agent
KR20080046673A (ko) 피르페니돈 및 약학적으로 허용가능한 부형제의 캡슐 제제
US11534416B2 (en) Hepatotoxicity-free pharmaceutical composition containing acetaminophen drugs
RU2663289C2 (ru) Производные фенотиазина и их применение против туберкулеза
AU2004208617B2 (en) Stable solid medicinal composition for oral administration
BR112013033008B1 (pt) formulação farmacêutica líquida compreendendo nitisinona
DK169607B1 (da) Anvendelse af acyloxyalkanoylcholinsalt til fremstilling af lægemiddel til behandling af neuropsykiatriske tilstande, såsom demens
KR20210053948A (ko) 겸상 세포 질환의 치료를 위한 pde9 억제제
JP2023058513A (ja) ９－アミノメチルミノサイクリン化合物及び市中感染型細菌性肺炎（ｃａｂｐ）の治療におけるその使用
CN109417016A (zh) 用于治疗缺血-再灌注损伤的戊二酸化合物
TWI606826B (zh) 艾拉莫德或其鹽之用途
CA2763894A1 (en) Use of rifaximin to maintain remission of hepatic encephalopathy
WO2018116260A1 (ru) Фармацевтическая композиция с противотуберкулезным действием
EP2853261B1 (en) Agent for improving vesicourethral dyssynergia
AU2016301689B2 (en) Ameliorating agent for detrusor hyperactivity with impaired contractility
EP3229820A1 (en) A mouth freshener
WO2018092077A1 (ru) Фармацевтическая композиция с противотуберкулезным действием
EP3297611B1 (en) Extended release pharmaceutical compositions of levetiracetam
WO2018092085A1 (ru) Фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза
BR112020016033A2 (pt) Métodos para prevenir, reduzir ou erradicar a toxicidade e nefrotoxicidade causada pelo acetaminofeno ou seu derivado e para administrar acetaminofeno, uso de um composto, composições para uso na prevenção, redução ou erradicação da toxicidade e da nefrotoxicidade causada pelo acetaminofeno ou seu derivado, e, combinação.
CN111700898B (zh) 巴戟甲素的应用
RU2363475C2 (ru) Таблетка противотуберкулезного действия
US20080139668A1 (en) Pharmaceutical composition for obovatol for the prevention and treatment of restenosis
CN111840272A (zh) 牡荆素的新应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17883538

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17883538

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1