WO2018097642A1 - 바리셀라 조스터 바이러스 백신 - Google Patents

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WO2018097642A1
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surface protein
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vaccine
zoster virus
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남효정
김은미
지가영
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재단법인 목암생명과학연구소
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    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16771—Demonstrated in vivo effect

Definitions

  • a vaccine composition comprising the surface protein (gE) of Varicella Zoster Virus of the present invention as an antigen.
  • VZV Varicella Zoster Virus
  • VZV is a virus that causes chickenpox, mainly in children and adolescents. It is latent in the ganglion cells of sensory nerves and cranial nerves for many years after an infection, and when the adult's immunity decreases, It is a virus that is activated and causes shingles. Chickenpox is highly contagious. Once infected, it causes bullous erythema throughout the body with a fever and malaise. In normal children, most cases rarely progress seriously and eventually progress to self-limiting disease. However, many cases of severe transplantation occur in patients undergoing organ transplantation or chemotherapy.
  • shingles The initial symptoms of shingles are painful, painful, severe itching and tingling, burning, stinging, and severe pain, such as stabbing, and blisters develop after a few days. Patients tend to complain of more severe pain. Shingles, even when cured, leaves a sequelae of neuralgia, which is relatively rare for adults under 40, but over 60 years of age sleep, chronic fatigue, severe pain in small contacts or friction, It is known to cause depression.
  • Chickenpox vaccines include VARIVAX (Merck) and VARILRIX (Glaxos Mickline) developed using Oka, an attenuated strain developed in 1970. MAV / Products such as chicken pox boxes (green cross) using 06 strains are commercially available. The commercialized live vaccine has an average protective effect of 80%, and 20% of the vaccinates are infected after the vaccine, and stability problems such as chickenpox and shingles due to live virus included in the vaccine have been pointed out.
  • the herpes zoster vaccine Oka's live attenuated vaccine, ZOSTAVAX (Merck Co., Ltd.), was developed. Due to the large amount of virus included in the vaccine, the US vaccine is intended for use in adults over 50 years of age, not children or adolescents. It is licensed and sold in South Korea and Korea. Recently, a vaccine consisting of gE and an adjuvant, a virus surface protein, was developed by Glaxo Smithkline for adults over 50 years of age, and has been proven to be effective in clinical trials.
  • Antigens used in the early stages of vaccine development mainly used attenuated live bacteria or dead bacteria, but due to stability problems, there is a tendency to shift to the development of protein antigens with a clear structure and composition.
  • protein antigens are generally compared with conventional vaccines. There is a problem of low immunogenicity.
  • the vaccine When using low-immunogenic antigens, the vaccine is intended for those who are chronically ill or elderly who have poor immunity and are not fully vaccinated. And if a sudden epidemic outbreak like influenza requires a large amount of vaccine, and antigen reduction is necessary, by using an adjuvant mixed with the antigen, the immune response can be improved and the cross-reactivity of the vaccine can be increased. It can increase the protective effect against serotype strains that are not included in the vaccine (Na Nakyung, Special Contribution Molecular Cell Biology Newsletter, May 2015, 2015).
  • the vaccine containing aluminum is freeze-dried. It must be refrigerated because it cannot be produced, and there is a disadvantage that quality control of vaccines is not easy because the production quality is not reproducible and the difference occurs for each production lot in the vaccine manufacturing process.
  • Typhoid vaccine influenza haemagglutinin antigen, and tetanus toxin-bound influenza type b (Hib) capsular polysaccharide are not known to function as an adjuvant (RK Gupta et al., 32 (3): 155, Adv Drug Deliv Rev , 1998).
  • An object of the present invention is to provide a vaccine composition for preventing or treating chickenpox or shingles, including the surface protein (gE) and adjuvant of Varicella Zoster Virus.
  • a vaccine composition for preventing or treating chickenpox or shingles including the surface protein (gE) and adjuvant of Varicella Zoster Virus.
  • the present invention is to prevent chickenpox or shingles including surface protein (gE) and adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 Or a therapeutic vaccine composition.
  • the present invention also provides for the prevention of chickenpox or shingles using a vaccine composition comprising a surface protein (gE) and an adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Or provide a method of treatment.
  • a vaccine composition comprising a surface protein (gE) and an adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • the present invention also prevents or treats chickenpox or shingles of a vaccine composition comprising a surface protein (gE) and an adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Serves the purpose.
  • a vaccine composition comprising a surface protein (gE) and an adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • varicella zoster virus Varicella Zoster Virus
  • the surface protein GE
  • the content ratio of the aluminum cations Al 3 +
  • a vaccine composition for preventing or treating shingles.
  • varicella zoster virus (Varicella Zoster Virus) the surface protein (gE) and the aluminum cations (Al 3 +) content ratio is 9 of: a vaccine composition, characterized in that 1000 (by weight): 10 to 22 Provides a method for preventing or treating chickenpox or shingles.
  • varicella zoster virus (Varicella Zoster Virus) the surface protein (gE) and the aluminum cations (Al 3 +) content ratio is 9 of: a vaccine composition, characterized in that 1000 (by weight): 10 to 22 Provides for the prevention or treatment of chicken pox or shingles.
  • Fig. 1 is a graph confirming the antibody inducing ability according to the aluminum cation (Al3 +) concentration to 5 ⁇ g of the surface protein (gE) of the varicella zoster virus in mice.
  • Figure 2 is a graph confirming the antibody induction according to the concentration of aluminum cation (Al3 +) for 10 ⁇ g of surface protein (gE) in mice.
  • Fig. 3 is a graph showing the result of ELISA of antibody titers in serum after induction of surface protein (gE) and aluminum salt against guinea pigs.
  • Figure 4 shows the analysis of neutralizing antibodies by Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) to determine whether neutralizing antibodies against varicella zoster virus are produced by surface protein (gE) and aluminum salt immunization in guinea pigs.
  • PRNT Plaque Reduction Neutralization Test
  • Figure 5 shows the antibody produced after administration of surface protein (gE) and aluminum salts to guinea pigs through the Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen (FAMA) test to confirm the antibody titer against virus-infected cells. This is a graph confirming that the virus can bind to infected cells.
  • FAMA Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen
  • Figure 6 is a graph confirming the immune induction by the vaccine composition containing different kinds of aluminum salts.
  • the surface protein (gE) of the barista zoster virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 as an antigen, and mixed with an adjuvant (varjuella zoster virus (Varicella Zoster) Virus) Vaccine compositions were prepared and administered to animals to confirm antigen specific immunity.
  • the present invention provides for the prevention of chickenpox or shingles, including the surface protein (gE) and adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • a therapeutic vaccine composition including the surface protein (gE) and adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • the present invention provides chickenpox or shingles prevention using a vaccine composition
  • a vaccine composition comprising a surface protein (gE) and an adjuvant of Varicella Zoster Virus having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Or to a method of treatment.
  • the present invention provides chickenpox or shingles prevention of a vaccine composition
  • a vaccine composition comprising a surface protein (gE) and an adjuvant of Varicella Zoster Virus having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. Or to therapeutic uses.
  • the surface protein (gE) of the present invention is derived from a glycoprotein constituting the envelope of Varicella Zoster Virus derived from Clade 1, and is a 537 amino acid from which a part of the C terminus is removed. As a constructed peptide fragment, it may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • amino acid sequence used in the present invention is to be interpreted to include sequences that exhibit substantial identity with the sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the substantial identity above is at least 70% homology when the sequences of the invention are aligned with each other as closely as possible and the aligned sequences are analyzed using algorithms commonly used in the art. , More specifically 80% homology, even more specifically 90% homology, most specifically 95% homology.
  • Varicella Zoster Virus surface protein (gE) of the present invention is a protein antigen, and since the immune response is usually weakly induced by the protein antigen alone, the effect of the vaccine composition by mixing an adjuvant Characterized in that to represent.
  • the adjuvant used in the present invention is an aluminum salt, specifically, may be aluminum hydroxide or aluminum phosphate, but is not limited thereto.
  • Al (aluminum) refers to an aluminum salt anionic inorganic salt, or a trivalent aluminum salt in an organic cation other than a (Al + 3) itself.
  • aluminum content in the composition means the content of aluminum cations, not the entire aluminum salt.
  • Al (OH) 3 aluminum hydroxide
  • AlPO 4 Aluminum phosphate
  • the term "immune enhancer” is a substance that promotes the immune response to the antigen in the specific process of the initial activation of immune cells, agents, molecules that enhance immunity by increasing the activity of the cells of the immune system, but not immunogen to the host (Warren et al., Annu . Rev. Immunol, 4: 369, 1986).
  • Immunostimulators that can enhance the immune response used in the present invention can be administered simultaneously with the vaccine composition or sequentially at intervals of time.
  • the vaccine composition of the present invention may have a content of the surface protein (gE) of 1 to 125 ⁇ g, specifically 1 to 30 ⁇ g, and more specifically 5 to 25 ⁇ g. Most specifically, the content may be any one selected from 5, 10, 15, 20, and 25 ⁇ g.
  • GE surface protein
  • prevention means not inhibiting the occurrence of a disease or a disease in a subject who has not been diagnosed as having a disease or a disease, but is likely to have such a disease or a disease.
  • the term “treatment” means (a) inhibiting the development of a disease, disorder or condition; (b) alleviation of a disease, illness or condition; Or (c) eliminating a disease, condition or symptom.
  • the composition of the present invention inhibits, eliminates or alleviates the development of symptoms by activating an immune response against varicella zoster virus in a subject with chickenpox or shingles, a disease caused by varicella zoster virus infection. Play a role.
  • the composition of the present invention may itself be a therapeutic composition of chickenpox or shingles, or may be administered together with other pharmacological components to be applied as a therapeutic aid for the disease.
  • treatment or “therapeutic agent” in this specification includes the meaning of “therapeutic assistant” or “therapeutic assistant”.
  • the vaccine composition of the present invention may additionally include calcium phosphate hydroxide, mineral oil, squalene, toll-like receptor (TLR), antagonist, and surfactant ( It may contain an adjuvant composed of a detergent, a liposome, a saponin, a cytokine, or a combination thereof.
  • the term 'effective amount' refers to inducing / increasing the immune response to the varicella zoster virus in a patient, or to a patient infected with the varicella zoster virus or receiving a live vaccine of the varicella zoster virus. Preventing, alleviating or eliminating reactivation, preventing herpes zoster (HZ) and / or post-herpetic neuralgia (PHN), and reducing the severity or duration of HZ and / or PHN. It means a vaccine composition sufficient to produce a desired effect, including but not limited to reducing. Those skilled in the art recognize that these levels can vary.
  • the aluminum cation (Al 3 +) represents an optimum of the antibody-forming ability in the 0.5 mg ( Figure 1
  • the concentration of the surface protein (gE) was fixed to 10 ⁇ g and the amount of aluminum was sequentially increased, it was confirmed that the optimum amount of antibody formation was obtained when the content of aluminum cation (Al 3 + ) was 1 mg (Fig. 2), the optimum content ratio between the surface protein (gE) and the aluminum cation (Al 3+ ) described above was derived.
  • the experimental results disclosed in FIGS. 1 and 2 in the present invention are derived from different animal and immune schedules, and the ratio of antigen (gE) to aluminum cation (Al 3+ ) of the vaccine composition according to the present invention is increased. Regardless of the conditions of administration, it is typically interpreted in multiple ways to prove that it is the optimal ratio that can be used as a vaccine composition against varicella zoster virus.
  • the present invention is a composition
  • a composition comprising the surface protein (gE) and aluminum salt (aluminum salt) of Varicella Zoster Virus as an active ingredient, the surface protein (gE) in the composition And the content ratio of aluminum is 9: 1000 to 22: 1000 (weight ratio), and relates to a vaccine composition for preventing or treating chickenpox or shingles.
  • the content ratio of surface protein (gE) and aluminum in the vaccine composition of the present invention may be more specifically 9: 1000 to 13: 1000 (weight ratio), and even more specifically 9: 1000 to 11: 1000 (weight ratio) It may be, and most specifically 1: 100 (weight ratio).
  • the content ratio of the surface protein (gE) and aluminum in the vaccine composition of the present invention may be 18: 1000 to 22: 1000 (weight ratio), more specifically 19: 1000 to 21: 1000 (weight ratio), Most specifically, it may be 20: 1000 (weight ratio).
  • the present invention is a composition
  • a composition comprising the surface protein (gE) and aluminum salt (variumella Zoster Virus) of the varicella Zoster Virus as an active ingredient, the content of the surface protein (gE) and aluminum in the composition
  • the ratio relates to a method for preventing or treating chickenpox or shingles using the vaccine composition, characterized in that from 9: 1000 to 22: 1000 (weight ratio).
  • the present invention is a composition
  • a composition comprising the surface protein (gE) and aluminum salt (variumella Zoster Virus) of the varicella Zoster Virus as an active ingredient, the content of the surface protein (gE) and aluminum in the composition
  • the ratio relates to the use of preventing or treating chickenpox or shingles of a vaccine composition, characterized in that from 9: 1000 to 22: 1000 (weight ratio).
  • the aluminum salt used in the present invention may be specifically aluminum hydroxide or aluminum phosphate, but is not limited thereto.
  • the content ratio of the surface protein (gE) and the adjuvant included in the composition is 3: 1000 to 30: 1000 (weight ratio), specifically, 5: 1000 to 15 : 1000, and more specifically, the content ratio of the surface protein (gE) and aluminum may be 9: 1000 to 13: 1000 (weight ratio), and more specifically 9: 1000 to 11: 1000 (weight ratio). And most specifically, 1: 100 (weight ratio).
  • the content ratio of surface protein (gE) and aluminum may be 18: 1000 to 22: 1000 (weight ratio), and more specifically 19 : 1000 to 21: 1000 (weight ratio), and most specifically 20: 1000 (weight ratio).
  • the aluminum content is 0.025 to 5 mg, specifically 0.2 to 5 mg, more specifically 0.2 to 1.0 mg, and most specifically 0.5 to 1.0 mg, but is not limited thereto. no.
  • the surface protein (gE) of the present invention is derived from a glycoprotein constituting the envelope of Varicella Zoster Virus derived from Clade 1, and 537 amino acids from which a part of the C terminus is removed.
  • a peptide fragment consisting of a truncated protein it may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • the content of the surface protein (gE) may be 1 to 125 ⁇ g, specifically 1 to 30 ⁇ g, more Specifically, it may be 5 to 25 ⁇ g. Most specifically, the content may be any one selected from 5, 10, 15, 20, and 25 ⁇ g.
  • the vaccine composition of the present invention induces or increases an immune response against Varicella Zoster virus in a subject to be administered; Preventing, alleviating, eliminating or reducing the likelihood of reactivation of the virus in a patient infected with or given a live vaccine; And / or prevent or reduce the likelihood of developing other diseases or complications such as PHN associated with reactivation of the virus.
  • immune response in the present invention refers to a cell-mediated (T-cell) immune response and / or an antibody (B-cell) response.
  • Optimal dosages of the vaccine compositions of the invention can be ascertained by standard studies involving the observation of a suitable immune response in a subject. After initial vaccination, subjects may be subjected to one or several booster immunizations at appropriate intervals.
  • Appropriate dosages of the vaccine compositions of the invention can be determined in various ways by factors such as formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity of the patient, food, time of administration, route of administration, rate of excretion and response to response. have.
  • Vaccine compositions of the invention include, but are not limited to, subcutaneous injection, intradermal introduction, imprinting through the skin, or other routes of administration, for example, intravenous, intramuscular or inhaled delivery, specifically through subcutaneous or intramuscular administration. It can be administered to.
  • Vaccine compositions of the invention include healthy patients and immune-limited patients who have undergone hematopoietic stem cell transplantation (HCT) or solid organ transplantation (SOT), HIV-infected patients, patients with autoimmune diseases, individuals with blood cancer; Individuals undergoing chemotherapy over a wide range of solid malignancies; In the population of immunocompetent and immunocompromised patients, including but not limited to patients undergoing chronic immunosuppressive therapy over a wide range of conditions including rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus (SLE), Crohn's disease, psoriasis, and multiple sclerosis And / or to prevent HZ and / or PHN, or to reduce the severity or duration of chickenpox and / or HZ and / or PHN.
  • HCT hematopoietic stem cell transplantation
  • SOT solid organ transplantation
  • HIV-infected patients patients with autoimmune diseases, individuals with blood cancer
  • the vaccine composition of the present invention is prepared in unit dose form by formulating with a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to a method which can be easily carried out by those skilled in the art. Or may be prepared by incorporation into a multi-dose container.
  • the formulations may be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral formulations, suppositories, and sterile injectable solutions according to a conventional method.
  • Suitable formulations known in the art can be used as disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, EastonPA.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, and such solid preparations are prepared by mixing at least one or more excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups. In addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • aqueous solutions include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • a fragment of SEQ ID NO: 1 (537 aa) was selected as the most efficient fragment for inducing an immune response among gene fragments encoding the surface protein (gE) of the varicella zoster virus.
  • the nucleic acid encoding the fragment of SEQ ID NO: 1 was inserted into the expression vector pMSID2 described in Korean Patent Application Publication No. 2015-0076772 to prepare a pMSID2-MGgE plasmid, and then transformed into CHO (Chinese hamster ovary) cells and expressed gE. Stable cell lines were prepared.
  • the culture supernatant was collected and filtered, followed by anion exchange chromatography and hydrophobic interaction chromatography, followed by UF / DF, nano filtration and sterile filtration to purify the gE protein. .
  • the surface protein (gE) of the varicella zoster virus prepared in Example 1 was used as an antigen.
  • a vaccine composition containing gE antigen and aluminum salt (aluminum hydroxide, Alhydrogel®, Invivogen) for each group, as shown in Table 1, 0.1 Ml was injected intramuscularly into the left femoral muscle (IM), and at the 6th week, the mice were sacrificed, and 100 ⁇ l or more of blood collected from the mouse was left at room temperature for 20 minutes, and then in a 5 ⁇ 3 ° C. centrifuge. After centrifugation at 10,000 rpm for 10 minutes, supernatant serum was obtained. The obtained serum was stored below -15 ° C.
  • Antibody formation via the following ELISA method on serum obtained from Example 2 in a vaccine composition comprising the surface protein (gE) of the varicella zoster virus as an antigen to determine an optimized mixing ratio of alum to antigen The reaction efficiency was confirmed.
  • the mouse serum obtained and stored in Example 2 was diluted 1: 1000, 1: 10,000, 1: 100,000 times, and 100 ⁇ l of each well. After dispensing, the reaction was allowed to occur at room temperature for at least 2 hours. After the reaction, the plate was completely removed by turning the plate upside down and tapping hard on several layers of paper towels.
  • the plate was washed four times using a multipipette with 300 ⁇ l of each well with ELISA washing buffer. At this time, the plate was turned upside down to be completely removed so that the solution was completely removed from each plate.
  • Goat anti-mouse IgG (H + L) -HRP (Southern Biotech) used as a secondary antibody was prepared by diluting 1: 5,000 in ELISA assay buffer, and 100 ⁇ l of all wells was reacted at room temperature for 1 hour. After the reaction was completed, the plate was turned over and the solution was discarded. Then, the solution remaining on the plate was strongly removed by tapping strongly on a plurality of paper towels. Then, 300 ⁇ l of each well was washed with ELISA washing buffer using multipipette five times.
  • TMB 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, KPL
  • a substrate of HRP 100 ⁇ l
  • 100 ⁇ L of TMB Stop solution (KPL) 100 ⁇ L was added to each well to stop the enzyme reaction, and the absorbance was measured at 450 nm using an ELISA microplate reader (Spectramax 250, Molecular Device). The amount of was confirmed.
  • the antigen of the surface protein (gE) was fixed at 10 ⁇ g under different immunization conditions, and the amount of aluminum mixed was changed, 1.0 mg of aluminum was added, that is, the ratio of the antigen and the aluminum cation. In the case of 1: 100, it was confirmed that the highest immune response was induced. In addition, when the ratio of the antigen and the aluminum cation exceeds 1: 100, it was confirmed that the immune response is reduced (Fig. 2).
  • Immunity-inducing ability was observed using a mixed composition of surface protein (gE) + aluminum salt and live attenuated Varicella Zoster Virus vaccine (chickenpox box, Green Cross).
  • gP ELISA Plaque Reduction Neutralization Test
  • FAMA Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen
  • VZV gP protein VZV ELISA glycoprotein antigen; QED BIO, Cat No. BA104GVS
  • QED BIO QED BIO, Cat No. BA104GVS
  • Serum samples diluted on antigen-coated ELISA plates were added to each well, incubated at room temperature for 2 hours, and washed with PBST.
  • HRP-conjugated rabbit anti-guineapig IgG antibody (Abcam, Cat No. ab6771) was added and re-incubated for 1 hour at room temperature, and washed in the same manner as above.
  • TMB was added as a substrate to induce a color reaction by the enzyme bound to the secondary antibody.
  • the stop solution was added to stop the reaction, and then the optical density was measured at 450 nm using a spectrometer.
  • anti-gP IgG ELISA assay was performed by endpoint titration method to confirm the increase of VZV glycoprotein-specific antibody value induced after immunization of surface protein (gE) antigen.
  • VZV induced by live vaccine (approximately 15,000 PFU) gP specific antibody confirmed the gE than 5 ⁇ g and aluminum cations (Al + 3) the antibody is a High significantly induced by the combination of 0.5 mg (FIG. 3).
  • PRNT confirmed whether neutralizing antibodies against VZV are induced by immunization of surface protein (gE) as follows.
  • Serum immobilized at 56 ° C. was serially diluted and mixed in the same amount with 1000 PFU / mL of virus and incubated at 37 ° C. for 1 hour.
  • the PRNT50 was calculated by calculating the dilution factor showing 50% neutralization rate.
  • FAMA which can identify antibody titers against virus-infected cells, was used to evaluate whether antibodies produced by gE immunity can bind to infected cells.
  • Infected cells infected with the VZV virus were prepared, and 3 ⁇ 10 5 were added to serial dilution serum and allowed to react for 30 minutes. At the end of the reaction time, the infected cells were washed with PBS, then reacted with Alexa488 conjugated anti-guinea pig IgG (molecular probes, Cat No. D2650) for 20 minutes, washed again with PBS, and plated on 14 well slides. After drying, it was examined under a fluorescence microscope. Cells stained with fluorescence by Alexa488 were observed at a visual field with a total number of cells of 30 or more per field, and the final dilution factor at which fluorescence was observed was determined by FAMA titer.
  • 0.1 mL and 5 ⁇ g of antigen (gE) were mixed in various aluminum immunoadjuvant products by 0.1 mL in 5 week-old female Balb / c mice (Orient Bio Co., Korea). Muscle was administered to the left thigh muscles. Details of the types of aluminum salts administered are shown in Table 4.
  • the vaccine composition according to the present invention uses a protein antigen, it is safer than a live vaccine, and the mixing ratio of the immune enhancer is optimized, so that the antibody-inducing ability can effectively occur, therefore, Varicella Zoster Virus (Varicella Zoster Virus) It is useful as a vaccine for preventing or treating chickenpox or shingles.

Abstract

본 발명은 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)로서, 구체적으로는 알루미늄 염(aluminum salt)으로 구성된 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 단백질 항원을 사용하기 때문에, 생균 백신보다 안전성이 우수하며, 면역 증강제의 혼합비율이 최적화되어 있어, 항체 유도능이 효과적으로 일어날 수 있기 때문에, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)에 의한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신으로 유용하다.

Description

바리셀라 조스터 바이러스 백신
본 발명의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE)을 항원으로 하는 백신 조성물에 관한 것이다.
바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus, VZV)는 주로 아동 및 청소년에서 수두를 일으키는 바이러스로, 한번 감염 후 수년 동안 감각신경근 및 뇌신경의 신경절 세포에 잠복해 있다가, 성인이 되어 면역력이 떨어지면, 재활성화 되어 대상포진을 유발하는 바이러스이다. 수두는 전염성이 강한데 일단 감염되면 열감 및 권태감을 동반한 전신에 수포성 홍반을 나타내게 된다. 정상 소아에서는 대부분의 경우 심각하게 진행되는 경우가 드물고 최종적으로 자기 한정 질환 (self-limiting disease)로 진행 하지만, 장기이식, 항암치료를 받은 환자에서 심각한 증상으로 진행하는 경우가 많이 발생하는 것으로 알려져 있다(Adriana Weinberg et al., J Infectious Diseases, 200(7):1068, 2009; Judith Breuer et al., Expert Review of Vaccines, 2017 , DOI:10.1080/14760584.2017.1394843).
대상포진의 초기 증상은 몸살처럼 온몸이 쑤시고 아프거나 심한 가려움증과 따끔거림, 화끈거림, 칼로 찌르는 듯한 심한 통증이 수반되며, 수일이 지나면 수포가 발생하게 되는데, 피부 병변이 많을수록 통증이 커지며, 고령의 환자일수록 더 심각한 통증을 호소하는 경향이 있는 질병이다. 대상포진은 완치가 돼도 신경통증의 후유증을 남기는데, 40세 이하의 성인에게는 비교적 드물지만, 60세 이상에서는 잠을 설치거나, 만성피로를 호소하기도 하고, 작은 접촉이나 마찰에도 심한 통증을 느끼거나, 우울증까지 유발할 수 있는 것으로 알려져 있다.
수두 예방 백신으로는 1970년도에 개발된 약독화 균주인 Oka 주를 사용하여 개발된 VARIVAX(머크사), VARILRIX(글락소스미스클라인사) 등의 제품이 대표적으며, 국내에서는 1980년도에 개발된 MAV/06주를 사용한 수두박스(녹십자) 등의 제품이 상용화 되어 있다. 해당 상용화 생백신은 평균 80%의 방어 효능을 보여 백신 접종자 중 20%에서 백신 후에도 질병에 감염되고 있으며, 백신에 포함된 살아있는 바이러스로 인한 수두 및 대상포진 발병 등의 안정성 문제가 꾸준히 지적되어 왔다.
대상포진 예방 백신으로는 Oka 주의 약독화 생백신인 ZOSTAVAX(머크사)가 개발되었으며, 백신에 포함된 바이러스의 양이 많기 때문에, 어린이나 청소년이 아닌 50세 이상 성인을 대상으로 사용하는 것을 조건으로 미국과 한국에서 허가되어 판매되고 있다. 최근에는 글락소 스미스클라인사에 의하여 50세 이상의 성인을 대상으로 하는 바이러스 표면 단백질인 gE 및 면역증강제로 구성된 백신이 개발되어, 임상시험에서 예방효과가 입증되었다.
백신 개발 초기에 사용된 항원은 주로 약독화 생균 또는 사균을 사용하였으나, 안정성 문제로 인하여, 구조와 성분이 명확한 단백질 항원으로의 개발로 전환되는 추세이다 그러나, 단백질 항원은 일반적으로 기존의 백신에 비하여 면역원성이 낮은 문제가 있다.
면역원성이 낮은 항원을 사용할 경우, 면역이 저하되어 백신접종의 효과가 충분히 나타나지 않는 만성 질환자나 고령자를 접종대상으로 할 경우. 그리고 인플루엔자와 같이 갑작스러운 전염병 창궐로 다량의 백신이 필요하여 항원 절감이 필요한 경우, 면역증강제(adjuvant)를 항원과 혼합 사용함으로써, 면역반응을 향상시킬 수 있으며, 백신의 교차반응성을 증가시킬 수 있어 백신에 포함되지 않은 혈청형 균주에 대한 방어효과의 증가시킬 수 있다(이나경, 특별기고 분자세포생물학뉴스레터 5월호, 2015).
임상적으로 안정성과 효능이 검증되어, 현재 시판되는 대부분의 백신에 사용되고 있는 면역증강제로는 수산화알루미늄(aluminum hydroxide) 또는 인산화(aluminum phosphate) 등의 알루미늄 염(aluminum salt)이 대표적이다. 면역증강 반응에 있어서, 알루미늄의 명확한 작용 기전은 밝혀져 있지 않으나, 단백질과 흡착하여 단백질 항원의 안정성을 증가시고, 항원을 서서히 방출되도록 하기 때문에, 면역세포를 지속적으로 활성화하는 역할을 하는 것으로 여겨지고 있으며, 또한 알루미늄이 세포에 위험신호(danger signal)로 작용하여 IL-1β 분비를 유도한다는 보고가 있다(Kool M et al., 205(4):869, J Exp Med, 2008).
반면, 알루미늄은 홍반, 피하결절, 접촉성 과민반응, 육아종성 염증 등의 부작용을 수반하기 때문에, 함량을 감소시키는 방법 등으로 이를 해결하고자 노력하고 있으며, 그 밖에도 알루미늄이 함유된 백신은 동결건조를 할 수 없어 냉장보관해야 하고, 생산 품질 재현성이 떨어져 백신 제조과정에서 생산 로트마다 차이가 나타나기 때문에 백신의 품질관리가 쉽지 않은 단점이 있다.
알루미늄과 항원과의 흡착으로 면역반응이 상승하는 것으로 알려진 통상의 기대와는 달리, 최근에는 면역증강제의 양과 면역반응의 효과는 반드시 비례적으로 나타나지 않는 것으로 알려졌다, 또한 백신 내 함유된 알루미늄의 용량을 증가시키면 일정 범위까지 면역효과가 증가하지만, 과량을 사용하면 항원을 완전히 은폐 시키거나 대식세포에 대해 독성 효과를 야기하기 때문에 오히려 면역원성을 억제하는 단점이 있는 것으로 확인되었으며. 오히려, 단백질 항원과 알루미늄의 흡착으로 인하여, 면역반응의 상승효과보다는 열안정성이 높아지는 것으로 최근 확인되었다(Amber Haynes Fradkin et al., 100(11):4953, J Pharm Sci, 2011).
또한, 모든 항원에 대하여 동일하게 면역증강 효과가 나타나지 않는다. 장티푸스백신, 인플루엔자 haemagglutinin 항원, 파상풍 독소 결합형 인플루엔자 b형(Hib) 캡슐 다당체 등에 대해서는 면역증강제로서의 기능을 발휘하지 못하는 것으로 알려져 있다(RK Gupta et al., 32(3): 155, Adv Drug Deliv Rev, 1998).
이에 본 발명자들은 단백질 항원을 포함하는 수두 및 대상포진 백신을 개발하는데 있어서, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 유래의 단백질 항원에 의한 면역 유도능을 향상시키기 위하여 예의 노력한 결과, 특정 비율의 알루미늄을 면역증강제로 혼합 사용할 경우, 면역 유도능이 현저하게 향상되는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 배경기술 부분에 기재된 상기 정보는 오직 본 발명의 배경에 대한 이해를 향상시키기 위한 것이며, 이에 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자에게 있어 이미 알려진 선행기술을 형성하는 정보를 포함하지 않을 수 있다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 백신 조성물을 이용한 수두 또는 대상포진의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 백신 조성물의 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명은 또한, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물을 이용한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 양이온 (Al3 +)의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물의 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
Fig 1은 마우스에서 바리셀라 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE) 5 μg에 대한 알루미늄 양이온(Al3+) 농도에 따른 항체 유도능을 확인한 그래프이다.
Fig 2는 마우스에서 표면 단백질(gE) 10 μg에 대한 알루미늄 양이온(Al3+) 농도에 따른 항체 유도능을 확인한 그래프이다.
Fig 3은 기니피그에 대해 표면 단백질(gE)과 알루미늄 염에 의한 면역유도 후, 혈청에 포함된 항체가를 ELISA로 확인한 결과 그래프이다.
Fig 4는 기니피그에서 표면 단백질(gE)과 알루미늄 염의 면역에 의해 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 중화항체가 생성되는지를 확인하기 위하여 Plaque Reduction Neutralization Test(PRNT)에 의한 중화항체가 분석 그래프이다.
Fig 5는 바이러스 감염 세포에 대한 항체가를 확인하기 위하여 Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen(FAMA) Test를 통해 기니피그에 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염을 투여한 후 생성된 항체가 바리셀라 조스터 바이러스에 감염된 세포에 결합할 수 있는지를 확인한 그래프이다.
Fig 6은 서로 다른 종류의 알루미늄 염을 포함하는 백신 조성물에 의한 면역유도능을 확인한 그래프이다.
발명의 상세한 설명 및 구체적인 구현예
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명의 일 실시예에서는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리스타 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE)을 항원으로 하고, 이를 면역증강제(adjuvant)와 혼합하여 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 백신 조성물을 제조하여 동물에 투여한 후 항원 특이적 면역을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 다른 관점에서 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 백신 조성물을 이용한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 백신 조성물의 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.
본 발명의 표면 단백질(gE)은 Clade 1 유래의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 외피(envelop)를 구성하는 당 단백질(glycoprotein) 유래이며, C 말단의 일부가 제거된 537개의 아미노산으로 구성된 펩티드 단편(truncated protein)으로서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
생물학적으로 균등한 아미노산 변이를 고려한다면, 본 발명에서 사용되는 아미노산 서열은 서열번호 1의 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 정렬하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 정렬된 서열을 분석한 경우에, 최소 70%의 상동성, 보다 구체적으로는 80%의 상동성, 보다 더 구체적으로는 90%의 상동성, 가장 구체적으로는 95%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다.
본 발명의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 표면 단백질(gE)은 단백질 항원이며, 통상적으로 단백질 항원 단독으로는 면역 반응이 약하게 유도되기 때문에, 면역증강제(adjuvant)를 혼합하여 백신 조성물의 효과를 나타내도록 한 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 사용하는 면역증강제(adjuvant)는 알루미늄 염(aluminum salt)이며, 구체적으로는 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)일 수 있으며, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명에서 용어 “알루미늄(aluminum)”은, 알루미늄 염에서 음이온성 무기염 또는 유기염을 제외한 3가의 알루미늄 양이온(Al3 +) 자체를 의미한다. 따라서, “조성물 내 알루미늄 함유량”은 알루미늄 염 전체가 아닌 알루미늄 양이온의 함유량을 의미한다.
알루미늄 양이온의 질량과 특정 형태의 알루미늄 염 전체 질량 간의 관계는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 알루미늄 하이드록사이드[Al(OH)3] 2.890 mg 내에 1mg의 Al3 +가 존재하고, 알루미늄 포스페이트(AlPO4)의 경우 4.533 mg 내에 1mg의 Al3+가 존재한다[Simone Vecchi et al., J Pharm Sci. 101(1): 17-20(2012)].
본 발명에서, 용어 "면역증강제"는 면역세포의 초기 활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대한 면역 반응을 촉진하는 물질로, 숙주에게 면역원은 아니지만 면역계의 세포의 활성을 증대 시킴으로써 면역을 강화하는 제제, 분자 등을 의미한다(Warren et al., Annu.Rev.Immunol, 4:369, 1986). 본 발명에서 사용되는 면역 반응을 증강할 수 있는 면역증강제는 백신 조성물과 동시에 투여되거나 시간 간격을 두고 순차적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 상기 표면 단백질(gE)의 함유량이 1 ~ 125 ㎍일 수 있으며, 구체적으로는 1 ~ 30 ㎍일 수 있고, 보다 구체적으로는 5 ~ 25 ㎍일 수 있다. 가장 구체적으로는 5, 10, 15, 20 및 25 ㎍ 중에서 선택되는 어느 하나의 함량일 수 있다.
본 발명에서, 용어 “예방”은 질환 또는 질병을 보유하고 있다고 진단된 적은 없으나, 이러한 질환 또는 질병에 걸릴 가능성이 있는 대상체에서 질환 또는 질병의 발생을 억제하는 것을 의미한다.
본 발명에서 용어 “치료”는 (a) 질환, 질병 또는 증상의 발전의 억제; (b) 질환, 질병 또는 증상의 경감; 또는 (c) 질환, 질병 또는 증상을 제거하는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물은 바리셀라 조스터 바이러스 감염을 원인으로 하는 질환인 수두 또는 대상포진에 걸린 개체에서 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 면역반응을 활성화시킴으로써 증상의 발전을 억제하거나, 이를 제거하거나 또는 경감시키는 역할을 한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 그 자체로 수두 또는 대상포진의 치료 조성물이 될 수도 있고, 혹은 다른 약리성분과 함께 투여되어 상기 질환에 대한 치료 보조제로 적용될 수도 있다.
이에, 본 명세서에서 용어 “치료” 또는 “치료제”는 “치료 보조” 또는 “치료 보조제”의 의미를 포함한다.
본 발명의 백신 조성물은 추가적으로 칼슘 포스페이트 하이드록사이드(calcium phosphate hydroxide), 미네랄 오일(mineral oil), 스쿠알렌(squalene), 톨유사수용체(Toll-like receptor, TLR)의 길항제(agonist), 계면 활성제(detergent), 리포좀(liposome), 사포닌(Saponin), 사이토카인(cytokine) 또는 이의 조합으로 구성된 면역증강제(Adjuvant)을 함유할 수 있다.
본 발명에서의 용어, '유효량'은 환자에서 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 면역 반응을 유도/증가시키는 것, 바리셀라 조스터 바이러스로 감염되거나 바리셀라 조스터 바이러스 생백신을 투여받은 환자에서 해당 바이러스의 재활성화를 예방, 완화 또는 제거하는 것, 대상포진 (Herpes Zoster, HZ) 및/또는 대상포진 후 통증 (Post-herpetic neuralgia, PHN)을 예방하는 것, HZ 및/또는 PHN의 중증도 또는 지속기간을 감소시키는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않으며, 목적하는 효과를 낳기에 충분한 백신 조성물을 의미한다. 당업자는 이러한 수준이 달라질 수 있음을 인식하고 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 표면 단백질(gE)의 농도를 5 μg로 고정하고, 알루미늄의 농도를 순차적으로 증가했을 때, 알루미늄 양이온(Al3 +) 0.5 mg에서 최적의 항체 형성능을 나타내며(도 1), 또한 표면 단백질(gE)의 농도를 10 μg으로 고정시키고 알루미늄의 양을 순차적으로 증가시킬 경우, 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함유량이 1 mg 일 때 최적의 항체 형성능을 나타내는 것을 확인(도 2)함으로써, 상술한 표면 단백질(gE) 대 알루미늄 양이온(Al3+)간의 최적의 함량비를 도출하였다.
특히, 본 발명에서의 도 1 및 도 2에 개시된 실험결과는 서로 다른 동물 및 면역 스케줄로 도출된 결과로서, 본 발명에 따른 백신 조성물의 항원(gE) 대 알루미늄 양이온(Al3+)의 비율이 투여 조건에 상관없이 통상적으로 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 백신 조성으로 사용할 수 있는 최적의 비율이라는 것을 다각적으로 입증하는 것으로 해석된다.
따라서, 본 발명은 또 다른 관점에서, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염(aluminum salt)을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 상기 조성물 내 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 백신 조성물에서 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 보다 구체적으로는 9:1000 내지 13:1000(중량비)일 수 있고, 보다 더 구체적으로는 9:1000 내지 11:1000(중량비)일 수 있으며, 가장 구체적으로는 1:100(중량비)일 수 있다.
또는 본 발명의 백신 조성물에서 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 18:1000 내지 22:1000(중량비)일 수 있으며, 보다 구체적으로는 19:1000 내지 21:1000(중량비)일 수 있으며, 가장 구체적으로는 20:1000(중량비)일 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염(aluminum salt)을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 조성물 내 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물을 이용한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료방법에 관한 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염(aluminum salt)을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 조성물 내 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물의 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.
본 발명에서 사용하는 상기 알루미늄 염(aluminum salt)은 구체적으로는 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)일 수 있으며, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명의 치료방법 및 용도에 있어서, 조성물에 포함된 상기 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)의 함량비는 3:1000 내지 30:1000(중량비)이며, 구체적으로는 5:1000 내지 15:1000이고, 보다 구체적으로는 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 9:1000 내지 13:1000(중량비)일 수 있고, 보다 더 구체적으로는 9:1000 내지 11:1000(중량비)일 수 있으며, 가장 구체적으로는 1:100(중량비)일 수 있다.
또는 본 발명의 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 방법, 및 용도에서의 백신 조성물은 표면 단백질(gE) 및 알루미늄의 함량비는 18:1000 내지 22:1000(중량비) 일 수 있고, 보다 구체적으로는 19:1000 내지 21:1000(중량비)일 수 있으며, 가장 구체적으로는 20:1000(중량비)일 수 있다.
본 발명에서 상기 알루미늄의 함유량은 0.025 ~ 5 mg이며, 구체적으로는 0.2 ~ 5 mg이고, 보다 구체적으로는 0.2 ~1.0 mg이며, 가장 구체적으로는 0.5 ~ 1.0mg 인 것을 특징으로 하나, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명의 상기 표면 단백질(gE)은 Clade 1 유래의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 외피(envelop)를 구성하는 당단백질(glycoprotein) 유래이며, C 말단의 일부가 제거된 537개의 아미노산으로 구성된 펩티드 단편(truncated protein)으로서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
본 발명의 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료 방법, 및 용도에서의 백신 조성물에 있어서, 상기 표면 단백질(gE)의 함유량은 1 ~ 125 μg일 수 있으며, 구체적으로는 1 ~ 30 ㎍일 수 있고, 보다 구체적으로는 5 ~ 25 ㎍일 수 있다. 가장 구체적으로는 5, 10, 15, 20 및 25 ㎍ 중에서 선택되는 어느 하나의 함량일 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 투여 대상에서 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster virus)에 대한 면역 반응을 유도 또는 증가; 상기 바이러스에 감염되거나, 생백신을 투여 받은 환자에서 상기 바이러스의 재활성화 가능성을 예방, 완화, 제거 또는 감소; 및/또는 상기 바이러스의 재활성화와 관련된 다른 질환 또는 합병증, 예컨대 PHN이 발생할 가능성을 예방 또는 감소할 수 있다.
본 발명에서의 용어 "면역 반응"은 세포-매개된 (T-세포) 면역 반응 및/또는 항체 (B-세포) 반응을 지칭한다.
본 발명의 백신 조성물의 최적의 투여량은 피검체에서 적합한 면역 반응의 관찰을 포함하는 표준 연구에 의해 확인될 수 있다. 초기 백신화 후, 피검체는 적당한 간격을 두고 1회 또는 수 차례의 부스터 면역화 처리될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 결정될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 피하 주사, 피내 도입, 피부를 통한 각인, 또는 다른 투여경로, 예를 들어, 정맥, 근육 또는 흡입 전달을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 구체적으로는 피하 또는 근육 투여를 통해 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 건강한 환자 및 조혈모세포 이식(HCT) 또는 고형 기관 이식(SOT)을 받은 면역 제한된 환자, HIV-감염된 환자, 자가면역 질환에 걸린 환자, 혈액 암을 갖는 개체; 광범위한 고형 악성 종양에 걸쳐 화학요법을 받는 개체; 류마티스 관절염(RA), 전신성 루푸스(SLE), 크론병, 건선 및 다발성 경화증을 비롯한 광범위한 상태에 걸쳐 만성 면역억제 요법을 받는 환자를 포함하나 이에 제한되지 않는 면역적격 및 면역저하된 환자 집단에서, 수두 및/또는 HZ 및/또는 PHN을 예방하거나, 수두 및/또는 HZ 및/또는 PHN의 중증도 또는 지속기간을 감소시키는데 유용하다.
본 발명의 백신 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제형화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때의 제형은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, EastonPA)에 개시되어 있는 것을 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 단백질 항원(gE)의 제조
바리셀라 조스터 바이러스의 표면단백질 (gE)을 코딩하는 유전자 단편 중 면역반응 유도에 가장 효율적인 단편으로써 서열번호 1의 단편(537 aa)을 선정하였다. 상기 서열번호 1의 단편을 코딩하는 핵산을 대한민국 공개공보 제2015-0076772호에 기재된 발현 벡터 pMSID2에 삽입하여 pMSID2-MGgE 플라스미드를 제작한 후, CHO(Chinese hamster ovary) 세포에 형질전환 후 gE를 발현하는 안정적인 세포주를 제작하였다. 상기 세포주를 14일간 배양 후, 배양 상층액을 채취하여 여과한 후 음이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피를 수행한 후 UF/DF를 실시하고 나노 여과 및 멸균 여과를 수행하여 gE 단백질을 정제하였다.
실시예 2: 동물 면역화(immunization)
실시예 1에서 제조된 바리셀라 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE)을 항원으로 하고, 이에 대한 알루미늄 염혼합 조성물의 백신 효능을 확인하기 위하여, 마우스에 대한 다음의 실험을 실시하였다.
5주령의 암컷 C57BL/6 마우스(오리엔트 바이오(주), 한국)에 대해, Table 1에 나타난 바와 같이, 각 그룹별 gE 항원 및 알루미늄 염 (aluminium Hydroxide, Alhydrogel®, Invivogen) 을 포함하는 백신 조성물 0.1 ml를 좌측 대퇴부 근육에 근육 주사(intramuscular injection, IM)하였으며, 6주차에 마우스를 희생하고, 이로부터 채취한 100 ㎕ 이상의 혈액을 상온에서 20분 정도 방치한 다음, 5±3℃의 원심분리기에서 10,000 rpm으로 10분간 원심분리 후 상청액인 혈청을 얻었다. 얻은 혈청은 -15℃ 이하에 보관하였다.
Figure PCTKR2017013511-appb-T000001
또한, immunization과 동물에 차이를 두어 조건에 따른 함량비를 파악하기 위하여, 표면 단백질(gE)와 알루미늄 염(aluminium Hydroxide, Alhydrogel®, Invivogen)을 표 2에 나타난 비율로 혼합하고, 5주령의 암컷 Balb/c 마우스(오리엔트 바이오㈜, 한국)에 근육당 0.1 mL씩 좌우측 대퇴부 내외 근육에 근육 투여하고, 3주차에 마우스의 안와정맥으로부터 혈액 100 ㎕를 채취하여 상온에서 20분 정도 방치한 다음, 5±3℃의 원심분리기에서 10,000 rpm으로 10분간 원심분리 후 상청액인 혈청을 얻었다. 얻은 혈청은 -15℃ 이하에 보관하였다.
Figure PCTKR2017013511-appb-T000002
실시예 3: 표면 단백질(gE) 및 Alum의 면역원성 평가에 의한 비율 최적화
바리셀라 조스터 바이러스의 표면 단백질(gE)을 항원으로 포함하는 백신 조성물에, 항원 대비 alum의 최적화된 혼합 비율을 결정하기 위하여, 실시예 2로부터 수득한 혈청에 대한 다음의 ELISA 방법을 통한 항체형성반응 효율을 확인하였다.
1. 플레이트 코팅 (Plate coating)
표면 단백질(gE)인 항원을 PBS(Lonza)에 1 ㎍/mL 농도로 혼합한 후, ELISA immunoplate(Corning, 미국)의 각 well당 100 ㎕씩 분주하고, plate sealer를 이용하여 플레이트를 밀봉한 상태로 5 ± 3℃에서 overnight(16시간 이상)동안 코팅하도록 반응시켰다.
2. Blocking 과정
코팅 반응이 완료되면 plate 상의 용액을 완전히 제거하고, 0.05% Tween20를 포함한 PBS인 ELISA washing buffer를 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 분주하고 2회 세척 후 2% BSA(Bovine serum albumin, Sigma)가 혼합된 PBS를 200 ㎕씩 각 well에 가하여, plate sealer로 다시 밀봉한 후, 실온(25 ± 5℃)에서 1 시간동안 반응시켰다. BSA에 의한 Blocking 반응이 종료되면, ELISA washing buffer를 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 분주하고 2회 세척하였다. 이 때 각 회당 plate 내에 용액이 완전히 제거되도록, plate를 뒤집어 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다.
3. 표면 단백질(gE)에 대한 항원-항체반응
실시예 2에서 수득하여 보관하였던 마우스 혈청을 ELISA washing buffer에 2% BSA를 혼합하여 제조한 ELISA assay buffer를 사용하여, 1:1000, 1:10,000, 1:100,000 배로 희석하여 각 well 당 100 ㎕씩 분주한 다음, 상온에서 2 시간 이상 항원-항체반응이 일어나도록 반응시켰다. 반응이 종료된 plate는 plate를 뒤집어 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다.
그런 다음, ELISA washing buffer로 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 4 회 세척하고, 이 때 각 회 당 plate 내에 용액이 완전히 제거되도록, plate를 뒤집어 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다.
4. 2nd antibody 반응 및 흡광도 측정
이차 항체로 사용한 Goat anti-mouse IgG(H+L)-HRP(Southern Biotech)은 ELISA assay buffer에 1:5,000으로 희석하여 준비하고, 모든 well에 100 ㎕씩 분주하여 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 반응이 종료되면 플레이트를 뒤집어 용액을 버린 후 plate에 남아 있는 용액을 여러 겹의 종이타올 위에 강하게 두드려 완전히 제거하였다. 그런 다음, ELISA washing buffer로 각 well 당 300 ㎕씩 multipipette을 사용하여 5 회 세척하였다.
세척이 완료된 plate에 HRP의 기질인 TMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, KPL)를 각 well에 100 ㎕씩 첨가하고, 15 분간 빛을 차단한 상태에서 상온에서 반응시켰다. 그런 다음, TMB Stop solution(KPL)을 각 well에 100 μL씩 첨가하여 효소 반응을 정지시키고, ELISA microplate reader(Spectramax 250, Molecular Device)를 사용하여 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정하여, 생성된 항체의 양을 확인하였다.
그 결과, 표면 단백질(gE)인 항원을 5 ㎍/으로 고정하고, 알루미늄의 농도를 변화시켰을 경우, 알루미늄 양이온을 0.5 mg 첨가했을 때, 가장 높은 면역반응이 유도되는 것으로 확인하였다(도 1).
또한, 상기 결과와 서로 다른 면역화 조건하에서 표면 단백질(gE)인 항원을 10 ㎍로 고정하고, 혼합되는 알루미늄의 양을 변화시켰을 때, 알루미늄 1.0 mg을 첨가한 경우, 즉, 항원과 알루미늄 양이온의 비율이 1:100인 경우에 가장 높은 면역반응이 유도되는 것으로 확인하였다. 또한 항원과 알루미늄 양이온의 비율이 1:100을 초과한 경우, 오히려 면역반응이 저하되는 것을 확인할 수 있었다(도 2).
실시예 4: 바리셀라 조스터 바이러스 생백신과의 면역유도능 비교
표면 단백질(gE)+ 알루미늄 염의 혼합 조성물과 약독화 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 생백신(수두박스주, (주)녹십자)을 사용하여 면역 유도능을 다음과 같이 관찰하였다.
1. 동물 면역화(immunization)
5 ㎍의 표면 단백질(gE) 단독; 5 ㎍의 표면 단백질(gE) 및 0.5 mg의 알루미늄 양이온(Al3+)을 포함하는 혼합물; 및 약독화 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 생백신(15000 PFU/0.5 mL)을 준비하여 Hartely guinea pig에 3주 간격으로 2회 피하 혹은 근육 투여하였고, 이에 대한 음성대조군으로는 PBS를 사용하였다. 최종 투여일로부터 3주 후 혈액을 채취해서 혈청을 분리하였다.
Figure PCTKR2017013511-appb-T000003
상기 혈청에 포함된 항체의 역가를 확인하기 위하여, gP ELISA와 Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) 및 Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen (FAMA) test 를 하기와 같이 실시하였다.
2. gP 특이적 항원-항체반응(ELISA)
VZV gP 단백질(VZV ELISA glycoprotein antigen; QED BIO, Cat No. BA104GVS)을 한 well당 0.1 ㎍이 되도록 ELISA plate에 분주하고, 4℃에서 overnight incubation하여 단백질 항원이 코팅되도록 하였다. 항원이 코팅된 ELISA plate에 희석된 혈청 샘플을 각 well에 첨가하고 2시간 동안 상온에서 incubation 하고 PBST로 세척하였다. 항원-항체 반응이 종료되면, HRP-conjugated rabbit anti-guineapig IgG항체(Abcam, Cat No. ab6771)를 첨가하여 상온에서 1시간 동안 다시 incubation하고 상기와 동일한 방법으로 세척하였다. 세척 후 TMB를 기질로 첨가하여 이차 항체에 결합된 효소에 의한 발색 반응을 유도하고, 최종적으로 stop solution을 첨가하여 반응을 중지시킨 후 분광기를 이용하여 450nm 파장에서 optical density를 측정하였다.
결론적으로 표면 단백질(gE) 항원을 면역 후 유도되는 VZV glycoprotein 특이적인 항체가의 증가를 확인하고자 anti-gP IgG ELISA assay를 endpoint titration 방법으로 수행한 결과, 생백신(약 15,000 PFU)에 의해 유도되는 VZV gP 특이적인 항체가보다 gE 5 ㎍ 및 알루미늄 양이온 (Al3 +) 0.5 mg 조합에 의해 유도되는 항체가가 유의적으로 높음을 확인하였다(도 3).
3. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT)
표면 단백질(gE)의 면역에 의해 VZV에 대한 중화항체가 유도되는지 PRNT로 다음과 같이 확인하였다.
56℃에서 비동화한 혈청을 순차 희석하여 1000 PFU/mL의 바이러스와 동량 혼합하고 37℃에서 1시간 인큐베이션하였다. MRC-5 세포(ECACC, Cat No.05G007)를 단일층이 되도록 준비한 6 well 플레이트를 PBS로 세척 한 후, 상기 혈청과 바이러스 혼합액을 well당 200 ㎕씩 접종하고 1시간 30분 후 바이러스 접종배지(MEM (Gibco, Cat No. 11095-098) + 2% FBS (Gibco, Cat No. 11360-070)를 넣어 6 ~ 7일간 37℃에서 인큐베이션한 후, 0.5% 크리스탈 바이올렛(Sigma, Cat No. C-3886)으로 염색하여 플라크를 계수하였다. 50% 중화율을 보이는 희석배수를 계산하여 PRNT50을 구하였다.
그 결과, gE 5 ㎍ 및 알루미늄 양이온(Al3+) 0.5 mg 조합에 의해 유도되는 중화항체가가 생백신(약 15000 PFU)보다 유의적으로 높음을 확인하였다(도 4).
4. Fluorescent-antibody-to-membrane-antigen (FAMA) test
바이러스 감염 세포에 대한 항체가를 확인할 수 있는 FAMA를 이용하여 gE 면역에 의해 생성된 항체가 감염세포에 binding 할 수 있는지를 평가하였다.
VZV 바이러스를 감염시킨 감염세포를 준비하여 serial dilution한 혈청에 3×105개씩 첨가한 후 30분간 반응시켰다. 반응시간이 종료되면 감염세포를 PBS로 세척 후, Alexa488 conjugated anti-guinea pig IgG(molecular probes, Cat No. D2650)를 첨가하여 20분간 반응시키고 PBS로 다시 세척한 다음, 14 well slide에 세포를 도말하고 건조시킨 후 형광현미경으로 검경하였다. 한 시야당 총 세포 수가 30개 이상 되는 시야에서 Alexa488에 의한 형광으로 염색된 세포를 관찰하고 형광이 관찰되는 마지막 희석 배수를 FAMA titer로 결정하였다.
그 결과, Anti-gP ELISA, PRNT50 결과와 유사하게 gE 5 ㎍ 및 알루미늄 양이온(Al3+) 0.5 mg 조합에 의해 유도되는 중화항체가는 생백신(약 15000 PFU)에 의해 유도되는 항체가보다 높은 것으로 나타났다(도 5).
실시예 5: Alum 염 종류에 따른 면역유도능 비교
본 발명의 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) 백신 조성물에 의한 면역 유도효과에 있어, 알루미늄 염의 종류에 따른 면역유도반응의 차이를 확인하기 위하여 다음의 실험을 실시하였다.
표 4에 나타난 바와 같이, 다양한 알루미늄 면역증강제 제품을 알루미늄 양이온 기준으로 0.1 mg과 5 μg의 항원(gE)를 각각 혼합하여 5주령의 암컷 Balb/c 마우스(오리엔트 바이오㈜, 한국)에 0.1 mL씩 좌측 대퇴부 근육에 근육 투여하였다. 투여된 알루미늄 염의 종류에 대한 세부정보는 표 4에 나타난 바와 같다.
Figure PCTKR2017013511-appb-T000004
3주차에 마우스의 안와정맥으로 부터 혈액 100 μL를 채취하여 상온에서 20분 정도 방치한 다음, 5±3℃의 원심분리기에서 10,000 rpm으로 10분간 원심분리 후 상청액인 혈청을 얻었다. 얻은 혈청은 -15℃ 이하에 보관하였으며, 보관 중인 시료(혈청)는 실시예 3에 개시된 gE ELISA법에 따라 면역원성을 확인하였다.
그 결과, 제품별 미미한 차이가 있긴 하나 aluminum hydroxide 이든 aluminum phosphate이든 항원 단독 투여 시 보다 높은 면역원성을 유도하는 것을 확인할 수 있었다. 또한 상기 제제의 완충액을 PBS 및 0.9% NaCl로 변화시킴에 관계없이 항원 단독에 비해 면역원성 유도능이 우월하게 유지되는 것을 확인하였다(도 6).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명에 따른 백신 조성물은 단백질 항원을 사용하기 때문에, 생균 백신보다 안전성이 우수하며, 면역 증강제의 혼합비율이 최적화되어 있어, 항체 유도능이 효과적으로 일어날 수 있기 때문에, 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)에 의한 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신으로 유용하다.
전자파일 첨부하였음.

Claims (12)

  1. 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 면역증강제(adjuvant)를 포함하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역증강제(adjuvant)는 알루미늄 염(aluminum salt)을 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 알루미늄 염(aluminum salt)은 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 칼슘 포스페이트 하이드록사이드(calcium phosphate hydroxide), 미네랄 오일(mineral oil), 스쿠알렌(squalene), 톨유사수용체(Toll-like receptor)의 길항제(agonist), 계면 활성제(detergent), 리포좀(liposome), 사포닌, 및 사이토카인으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 면역증강제(adjuvant)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 조성물 내 알루미늄의 함유량은 0.2 ~ 5 mg인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 내 표면 단백질(gE)의 함유량은 5 ~ 25 ㎍인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 수두 또는 대상포진의 예방 또는 치료 방법.
  8. 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 염(aluminum salt)을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 상기 조성물 내 표면 단백질(gE) 및 알루미늄 양이온(Al3 +)의 함량비는 9:1000 내지 22:1000(중량비)인 것을 특징으로 하는 수두 또는 대상포진 예방 또는 치료용 백신 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 알루미늄 염(aluminum salt)은 알루미늄 하이드록사이드(aluminum hydroxide) 또는 알루미늄 포스페이트(aluminum phosphate)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus)의 표면 단백질(gE)는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  11. 제8항에 있어서, 상기 표면 단백질(gE)의 함유량은 5 ~ 25 ㎍인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
  12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 수두 또는 대상포진의 예방 또는 치료 방법.
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