WO2018021838A1 - 신규한 aimp1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 조성물 - Google Patents

신규한 aimp1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2018021838A1
WO2018021838A1 PCT/KR2017/008077 KR2017008077W WO2018021838A1 WO 2018021838 A1 WO2018021838 A1 WO 2018021838A1 KR 2017008077 W KR2017008077 W KR 2017008077W WO 2018021838 A1 WO2018021838 A1 WO 2018021838A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
polypeptide
amino acid
seq
acid sequence
skin
Prior art date
Application number
PCT/KR2017/008077
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김성훈
박민철
Original Assignee
주식회사 큐어바이오
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 큐어바이오 filed Critical 주식회사 큐어바이오
Priority to CN201780058114.3A priority Critical patent/CN109715654A/zh
Priority to US16/320,431 priority patent/US10800824B2/en
Priority to JP2019527104A priority patent/JP7097084B2/ja
Priority to EP17834779.5A priority patent/EP3492489A4/en
Publication of WO2018021838A1 publication Critical patent/WO2018021838A1/ko

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702Regulators; Modulating activity
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18Peptides; Protein hydrolysates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]

Definitions

  • Skin protection composition containing novel fragment of AIMP1 protein and fish as an active ingredient.
  • the present invention relates to a fragment of the novel AIMP1 protein and a composition for preventing skin aging, improving wrinkles, enhancing skin softness or improving elasticity, comprising the same as an active ingredient, and more specifically, 9 to 9 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • Peptides are composed of about 50 amino acids or less, and it is known that the key to success as a peptide drug is to discover short sequences and activities. Long peptide lengths are expensive to synthesize, not easy to manufacture, and It is known that there is a problem.
  • Human skin on the other hand, is composed of two layers: the epidermis and the dermis. The epidermis is the thinnest layer on the outermost side of the skin and plays an important role in moisturizing and protecting the skin.
  • the epidermis prevents the substances in our body from escaping from the body and prevents the invasion of harmful substances such as ultraviolet rays, viruses, bacteria, etc. that enter from the outside.
  • the epidermis naturally emulsifies the oil of sebaceous glands and the water of sweat glands to make weakly acidic sebaceous membranes, protecting them from invading harmful substances and sterilizing germs.
  • the dermis nourishes the epidermis, supports the epidermis, protects the body from external damage, stores moisture, and regulates body temperature.
  • the dermis is composed of fibroblasts and their extracellular matrix, which contains nerves, blood vessels, lymphatic vessels, muscles and sebaceous glands, apocrine, and eccrine glands. Fibroblasts, the major component of the dermis, are collagen
  • collagen is a fibrous protein that accounts for 70% of the dermis, and it has functions such as mechanical firmness (elasticity) of skin, resistance of connective tissue and tissue binding, support of cell adhesion, induction of cell division and differentiation (Van der M) Rest et al., Biometerials., 11: 28-31, 1990; Shimokomaki M. et al., Ann. NY Acad. Sci., 580: 1-7, 1990; Van der Rest M. et al., Biochimie , 72 (6-7): 473-484, 1990). Human skin undergoes various physical and chemical changes through the aging process.
  • Skin aging is divided into two types according to the cause.
  • Intrinsic aging is a natural aging phenomenon in which the structure and physiological function of the skin continues to decline with age. Or extrinsic aging due to external factors such as environmental factors.
  • cellular components e.g. lipids in cell membranes
  • UV light e.g. UV light
  • their activity and biosynthesis are inhibited.
  • the skin becomes thinner in the epidermis, dehydrates the cells and tissues, becomes dry, wrinkles increase, and wrinkles gradually deepen.
  • the amount of collagen that makes up most of the dermis decrease also reduces the activity of the fibroblasts that synthesize collagen, thus reducing the synthesis of new collagen.
  • the thickness of the dermis decreases, resulting in wrinkles on the skin and inflexibility and elasticity. Therefore, by activating collagen metabolism by promoting fibroblast proliferation and collagen synthesis in the skin, the demand for safer wrinkles, better flexibility and elasticity, better skin aging, less side effects, and safer preparations continue to increase. It is a situation.
  • AIMPKARS-interacting mul t-funct ional protein 1 is a protein consisting of 312 amino acids, which binds to a multiple -tRNA synthetase complex and catalyzes the multiple -tRNA synthetase complex. It is a protein that promotes caticulate ic act ivi ty.
  • the present inventors have identified that the amino acid region 6 to 46 of the AIMP1 protein has an activity of promoting collagen synthesis (see Korean Patent Registration No. 10-0903984, Patent Registration Date: 15 June 2009). However, within the 6 to 46 amino acid region of the AIMP1 protein, an active site showing substantially collagen synthesis and fibroblast proliferation effects has not been identified until now.
  • an object of the present invention comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and It is to provide a polytide, characterized in that consisting of amino acid sequence having more than 70% sequence homology.
  • Another object of the present invention is a polypeptide comprising a amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3, or an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • Thing It is to provide a polypeptide characterized by. Still another object of the present invention is to provide a polynucleotide encoding the polytide. Still another object of the present invention is a polypeptide comprising 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, and comprising 4 to 17 amino acids in sequence, or To provide a cosmetic composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more as an active ingredient.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • Still another object of the present invention is a polypeptide comprising a ninth to twelfth amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, comprising 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and sequence It is to provide a cosmetic composition consisting of a polypeptide, characterized in that consisting of an amino acid sequence having at least 70% homology, wrinkle improvement, skin softening enhancement or elasticity enhancement.
  • KGAE ninth to twelfth amino acid
  • Still another object of the present invention is to provide a sequence .
  • a polypeptide comprising a 9th to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by the number 1 and consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide
  • KGAE 9th to 12th amino acid
  • Still another object of the present invention is a polypeptide comprising 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • SEQ ID NO: 1 amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and consisting of 4 to 17 consecutive amino acids
  • the polypeptide and
  • Still another object of the present invention is to include a ninth to twelfth amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 4 to 17 consecutive amino acids A polypeptide, or sequence homology with said polypeptide
  • Still another object of the present invention is a polypeptide comprising a 9th to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, and comprising 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and the sequence It is to provide a food composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, consisting essentially of a polypeptide comprising an amino acid sequence having at least 70% homology.
  • KGAE 9th to 12th amino acid
  • Still another object of the present invention is a polypeptide comprising 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and It is to provide a cosmetic composition for preventing skin aging comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more as an active ingredient.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • Still another object of the present invention is a polypeptide comprising a ninth to twelfth amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, and comprising 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and the sequence It is to provide a cosmetic composition for preventing skin aging, consisting of a polypeptide comprising an amino acid sequence having at least 70% homology.
  • KGAE ninth to twelfth amino acid
  • KGAE ninth to twelfth amino acid
  • Still another object of the present invention is a polypeptide comprising a ninth to twelfth amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, comprising 4 to 17 consecutive amino acids, or the polypeptide and sequence It is to provide a composition for preventing skin aging, consisting of a polypeptide comprising a amino acid sequence having at least 70% homology.
  • KGAE ninth to twelfth amino acid
  • Still another object of the present invention is to provide a use of the polypeptide for preparing an anti-aging agent for skin.
  • a further object of the present invention is to provide a method for the prevention of skin aging, characterized in that administered to a subject to an effective amount of said polypeptide in need. '
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids Or it provides a polypeptide comprising an amino acid sequence having at least 70% sequence homology with the polypeptide.
  • the present invention is SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: Provided is a polypeptide comprising an amino acid sequence represented by 3, or a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • the present invention provides a polynucleotide encoding the polypeptide.
  • the present invention comprises a polypeptide comprising 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids,
  • the present invention provides a cosmetic composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide as an active ingredient.
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids It provides a cosmetic composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, comprising a polypeptide or an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the present invention comprises a ninth to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acid
  • KGAE ninth to 12th amino acid
  • the present invention provides a cosmetic composition for wrinkle improvement, skin softness enhancement or elasticity enhancement, consisting essentially of a polypeptide, or a polypeptide comprising an amino acid sequence having sequence homology with the polypeptide.
  • the present invention comprises a polypeptide comprising 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids,
  • the present invention provides a cosmetic composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide as an active ingredient.
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids It provides a cosmetic composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, comprising a polypeptide, or a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the present invention provides a cosmetic composition, which is essentially composed of a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide or the polypeptide.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 amino acids consecutively, or
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • SEQ ID NO: 1 consisting of 4 to 17 amino acids consecutively
  • a food composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity comprising a polypeptide comprising an amino acid ' sequence having at least 70% sequence homology with a polypeptide as an active ingredient.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or Provided is a food composition comprising a polypeptide consisting of an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more with the polypeptide.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the polypeptide comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or Provided by the polypeptide composition comprising an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more with the polypeptide, it is necessary to provide a food composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the present invention comprises a polypeptide comprising 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids,
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing skin aging, comprising a polypeptide as an active ingredient, characterized by consisting of an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing skin aging, comprising a polypeptide, or a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids It provides a cosmetic composition for preventing skin aging, consisting essentially of a polypeptide, or a polypeptide comprising an amino acid sequence having a sequence homology 70% subphase with the polypeptide.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the present invention comprises a polypeptide comprising 9 to 12 th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, Or it provides a food composition for preventing skin aging comprising a polypeptide as an active ingredient, characterized in that consisting of an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more with the polypeptide.
  • KGAE 9 to 12 th amino acid
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • a composition for preventing skin aging comprising a polypeptide, or a polypeptide comprising an amino acid sequence having 70% or more of sequence homology with the polypeptide.
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids Polypeptide, or the pole
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • SEQ ID NO: 1 a 9 to 12th amino acid
  • polypeptide a 9 to 12th amino acid
  • the polypeptide to prepare a formulation for improving wrinkles, enhancing skin softness and enhancing elasticity.
  • a method for improving wrinkles, enhancing skin softness and enhancing elasticity comprising administering an effective amount of the polypeptide to an individual in need thereof.
  • a use of the polypeptide for the preparation of a skin anti-aging agent in order to achieve another object of the present invention, it provides a method for preventing skin aging, characterized in that the effective amount of the polypeptide is administered to a subject in need thereof.
  • the term 'KGAE residue', 'KGAE sequence' or 'KGAE region' may be used interchangeably, and in the full length amino acid sequence of AIMP1 protein represented by SEQ ID NO: 5, Refers to the 14th to 17th amino acid region, wherein the region is based on the polypeptide of AIMP1-derived SEQ ID NO: 1 (or Neo-Pep), which is an example of the hair growth promoting active fragment provided by the present invention. It corresponds to the 12th amino acid region.
  • the polypeptide provided by the present invention is an AIMP1 protein-derived fragment, including the 9th to 12th amino acid (KGAE) region in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to improve wrinkles, enhance skin softness, improve elasticity and prevent skin aging. It is characterized by remarkably excellent. It is the first time in the present invention that the KGAE region of AIMP1 is key to wrinkle improvement, skin suppleness, elasticity enhancement and skin anti-aging effect (use). To the public.
  • KGAE 9th to 12th amino acid
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70%
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the polypeptide is characterized by consisting of 10 to 15 amino ' acids in series.
  • the polypeptide is a polypeptide comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3, or an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more with the polypeptide May be a polypeptide.
  • polypeptide As used herein, the terms “polypeptide”, “peptide " and “protein” are used interchangeably and refer to polymers of amino acid residues as commonly found in natural proteins, for example.
  • the one letter (three letter) of amino acid means the following amino acids according to standard abbreviation definitions in the field of biochemistry: A (Ala): alanine; C (Cys): cysteine; D (Asp): aspartic acid; E (Glu): glutamic acid; F (Phe): phenylalanine; G (Gly): glycine; H (His): histidine; I (IIe): isoleucine; K (Lys): lysine; L (Leu): leucine; M (Met): methionine; N (Asn): asparagine; O (Ply): pylysine; P (Pro): plin; Q (Gln): glutamine; R (Arg): arginine; S (Ser): serine; T (Thr): threonine; U (Sec): sal lenocysteine, V (Val): valine; W (Ala):
  • 'AIMPKARS-interacting multi-functional protein 1 protein' was first known as the p43 protein and subsequently renamed AIMP1 (Kim SH et al., Trends in Biochemical Sciences, 30: 569-574, 2005). .
  • AIMPl binds to the multiple -tRNA synthetase complex to enhance the catalytic activity of the multiple -tRNA synthetase.
  • the specific sequence is not particularly limited, and may be preferably human AIMP1.
  • AIMP1 protein SNPs of branches are known (see NCBI SNP database): 79th alanine (Ala) in the amino acid sequence of full length AIMP1 (see SEQ ID NO: 7 herein) for proline (Pro) (SNP Accession No. rs3133166 , SEQ ID NO: 11); 104th threonine (Thr) is substituted with alanine (Ala) (SNP Accession No. rs 17036670, SEQ ID NO: 12); 117 th threonine (Thr) is substituted with alanine (Ala) (SNP Accession No. rs2230255, SEQ ID NO: 13).
  • Polypeptides of the invention i.e., polypeptides comprising the 9th to 12th amino acids (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and characterized by consisting of 4 to 17 consecutive amino acids include functional equivalents thereof.
  • functional equivalent is at least 70% (70.0% to 99.9%), preferably at least 80% (80.0% to 99.9%), more preferably at least 90% (90.0) of the amino acid sequence of the polypeptide of the invention % To 99.9%) of the polypeptides having sequence homology (or identity).
  • the functional equivalent is at least 70%, preferably at least 80%, more preferably at least 90% of the amino acid sequence of the polypeptide of the invention, with the KGAE region (sequence) constant. It may be a polypeptide having the above sequence homology (or identity).
  • polypeptide having sex it refers to a polypeptide that exhibits substantially the same physiological activity as the polypeptide of the present invention.
  • substantially means a state that exhibits a whole or about the same degree of nature of a specific property.
  • substantially homogeneous physiological activity means anti-aging, wrinkle improvement, skin softening and elasticity promoting activity through collagen synthesis promoting and / or fibroblast proliferation inducing effects and the like.
  • identity is meant herein the overall relatedness between polymer molecules, such as polypeptide molecules.
  • the calculation of homology / identity (%) between two polypeptide sequences can be performed by arranging two sequences for optimal comparison.
  • the length of the sequences arranged for comparison purposes is at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 603 ⁇ 4>, at least 703 ⁇ 4>, at least 30% of the length of the reference sequence. 80% or more, at least 90% Or substantially 100%.
  • the amino acids of the corresponding amino acid sites are compared with each other.
  • the amino acid located at the site of the first sequence is the same as the amino acid at the site of the second sequence
  • the two sequences have the same identity at that site.
  • the percent identity of two sequences is a function of the number of sites with amino acids common in the two sequences, taking into account the length and length of the gaps that must be introduced for optimal alignment between the two sequences. to be. Comparison between two sequences and determination of identity (3 ⁇ 4>) can be accomplished through mathematical algorithms.
  • ClustalW can be used to determine sequence identity values using the following parameters: Paired Array Parameters-Method: Accurate, Matrix: PAM, Gap open penalty penalty: 10.00, Gap extension penalty: 0.10; multiple array parameters-matrix: PAM, gap open penalty: 10.00, delay equality (>): 30 , penalize end gaps ): on, Gap separation distance: 0, negative matrix: no, gap extension penalty: 0.20, residue-specific gap penalties: on, hydrophilic gap penalty: on, hydrophilic residues: GPSNDQEKR. Sequence identity at a particular residue simply includes the same residue being derivatized.
  • the term “substantially” means a state that exhibits a whole or about the same degree of nature of a particular property.
  • the term “substantially the same” is used herein in connection with comparisons between amino acid or nucleic acid sequences.
  • BLASTN For amino acid sequence comparison, computer programs such as BLASTP, Gapped BLAST, PSI-BLAST can be used Examples of such computer programs are described in Altschul et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215 (3): 403-410, 1990; Altschul et al., Methods in Enzymology) Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389—3402, 1997; Baxevanis et al., Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; and Misener et al. (Eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol.
  • the program usually provides a degree of identity.
  • at least 70% preferably at least 80%, at least 853 ⁇ 4>, at least 90%, at least 91%, at least ⁇ Substantially the same '' when at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% are the same Is considered to be a sequence.
  • the above-mentioned "constant length residues"' are at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 , 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125 , 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300 or more residues.
  • the term "coming" is often used to determine the position / identity of amino acid residues of a given polypeptide. It is often specified using a canonical numbering system based on related polypeptides, so that, for example, an amino acid "completing" at a residue at position 190 is necessarily at position 190 in a particular amino acid chain. It is not necessary for a person skilled in the art to easily understand how to identify an amino acid that is "complied with.”
  • the “functional equivalent” means that a part of the amino acid sequence of the polypeptide of the present invention is added, substituted or deleted. It may be generated as a result of. Substitution of amino acids in the above is preferably a conservative substitution.
  • amino acids examples include aliphatic amino acids (Gly, Ala, Pro), hydrophobic amino acids (lie, Leu, Val), aromatic amino acids (Phe, Tyr, Trp), acidic amino acids (Asp , Glu), basic amino acids (His, Lys, Arg, Gin, Asn) and sulfur containing amino acids (Cys, Met).
  • the functional equivalents also include variants in which some of the amino acids are deleted on the amino acid sequence of the polypeptide of the invention. Deletion or substitution of these amino acids is preferably located in a region not directly related to the physiological activity of the polypeptides of the invention.
  • a region directly related to physiological activity is a KGAE region, and the deletion or substitution is performed by the 'zero'. It may be located in a part other than the station.
  • the deletion of the amino acid is preferably located at a portion not directly involved in the physiological activity of the polypeptide of the present invention.
  • variants in which some amino acids are added to both ends or sequences of the amino acid sequence of the polypeptide of the present invention are also included.
  • the scope of functional equivalents of the present invention also includes proteins or polypeptide derivatives in which some chemical structures of the protein are modified while maintaining the basic backbone of the protein and its physiological activity. For example, structural changes to alter the stability, storage, volatility or solubility of the protein of the present invention.
  • Sequence homology and identity herein are defined as the percentage of amino acid residues in the candidate sequence relative to the amino acid sequence of the polypeptide of the invention after aligning the amino acid sequence and the candidate sequence of the polypeptide of the invention and introducing a gap. . If necessary, conservative substitutions as part of sequence homogeneity are not considered in order to obtain maximum percentage sequence identity.
  • the N-terminus, C-terminus or internal extension, deletion or insertion of the amino acid sequence of a polypeptide of the invention is not to be interpreted as a sequence affecting sequence homology or homology.
  • sequence homogeneity can be determined by general standard methods used to compare similar portions of the amino acid sequences of two proteins or polypeptides.
  • BLAST or such a computer program aligns two proteins or polypeptides such that each amino acid is optimally matched (along the full length sequence of one or two sequences or along the predicted portion of one or two sequences).
  • the program provides a default opening penalty and a default gap penalty and can be used in conjunction with a computer program PAM250 (Standard Scoring Matrix; Dayhoff et al., In At las of Protein) Scoring matrix such as Sequence and Structure, vol 5, supp 3, 1978).
  • PAM250 Standard Scoring Matrix; Dayhoff et al., In At las of Protein
  • Scoring matrix such as Sequence and Structure, vol 5, supp 3, 1978.
  • percentage homogeneity can be calculated as follows. The total number of ident ical matches is multiplied by 100 and then the sum of the length of the longer sequence in the matched span and the number of gaps introduced into the longer sequence to align the two sequences. Divide by.
  • Polypeptides of the invention can be constructed by genetic engineering methods.
  • a polynucleotide sequence encoding a polypeptide of the present invention is constructed according to conventional methods.
  • the polynucleotide sequence may, for example, encode a human AIMP1 gene.
  • Polynucleotides can be constructed by PCR amplification using appropriate primers as templates.
  • DNA sequences may be synthesized by standard methods known in the art, for example using an automated DNA synthesizer (available from Biosearch or Applied Biosys terns).
  • the constructed polynucleotide sequence may be operatively linked to one or more expression control sequences (e.g., promoters, enhancers) that operably linked to that polynucleotide sequence.
  • substantially pure polypeptide or protein means that it is substantially free of any other protein derived from the protein host cell according to the present invention.
  • polypeptides of the invention can also be chemically synthesized by techniques known in the art (Creighton, Proteins: Structures and Molecular Principles, WH Freeman and Co., NY (1983)). ).
  • polypeptide of the present invention can be prepared using conventional stepwise liquid or solid phase synthesis, fragment expansion, F-M0C or T-B0C chemistry (Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et al. , Eds., CRC Press, Boca Raton Florida, (1997); A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., IRL Press, Oxford, England, (1989).
  • a preferred manufacturing method is to use solid phase synthesis.
  • Polypeptides of the present invention can be synthesized by condensation reaction between protected amino acids (condensation react ion) in a conventional solid phase process, starting from the C-terminus and proceeding sequentially according to the identified amino acid sequence.
  • the linked carrier can be removed by known methods such as acid decomposi- tion or aminolysi s.
  • the above-mentioned peptide synthesis methods are described in detail in related books (Gross and Meienhofer's, The Peptides, vol 2., Academi c Press, 1980).
  • Proteins prepared by genetic engineering methods or chemically synthesized proteins are, for example, extracted, recrystallized, various chromatographies (gel filtration, ion exchange, precipitation, adsorption, reverse phase), electrophoresis, countercurrent distribution, etc. It can be separated and purified by methods known in the art.
  • the present invention also encodes a polypeptide of the present invention, i.e., a polypeptide comprising a ninth to twelveth amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and consisting of four to seventeen amino acids consecutively ( to provide polynucleotides for coding.
  • the polynucleotide is not particularly limited as long as it encodes the polypeptide of the present invention described above.
  • the polynucleotide encoding the polypeptide of the present invention comprises a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 7 (coding for S1200 polypeptide of SEQ ID NO: 2) or SEQ ID NO: 8 (encoding S1300 polypeptide of SEQ ID NO: 3).
  • polynucleotide“ nucleic acid ” refers to deoxyribonucleotides (DNAs) or ribonucleotides (RNAs) in the form of single-stranded or double-stranded strands.
  • Similar analogues include known analogues of natural nucleotides that are common to nucleic acids: collagen (col lagen) is a fibrous protein produced by f ibrobl ast and accounts for 70% of the dermis. Therefore, when collagen synthesis decreases, the skin ages, the elasticity and flexibility of the skin decreases rapidly, and the skin contracts or wrinkles.
  • the polypeptide fragment of the AIMP1 protein of the present invention has an activity of promoting collagen synthesis and fibroblast proliferation (see Examples 1 and 2, FIGS. 1 and 2). . Therefore, the AIMP1 polypeptide fragment according to the present invention can be used for the prevention of skin aging, wrinkle improvement, skin softening and elasticity promotion by promoting collagen synthesis and / or fibroblast proliferation.
  • skin aging refers to intrinsic aging, which is a natural aging phenomenon in which the structure and physiological function of the skin causes continual decay with age, sunlight, ultraviolet rays, drug side effects, stress, and environment. It has a wide range of meanings, including all extreme insic aging due to various kinds of external factors such as factors and wounds. Thus, "anti-aging of skin” herein has a wide range of meanings including inhibiting, lowering, preventing, improving or preventing skin aging conditions due to various causes including intrinsic aging and external aging.
  • Polypeptide fragments of the AIMP1 protein of the present invention can be used as active ingredients in pharmaceutical, dermatological and cosmetic compositions for the uses described above. The composition may be prepared in any formulation commonly prepared in the art.
  • compositions according to the invention can be prepared in injectable formulations for mesotherapy.
  • injectable formulations may be prepared according to techniques known in the art using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents.
  • the polypeptides of the invention may be formulated for injection by dissolving in saline or serous solution.
  • the composition of the present invention may be prepared in a formulation for oral administration.
  • the polypeptide according to the present invention is mixed with excipients to intake tablets, buccal It can be formulated in the form of tablets, troches, capsuls, elixirs, suspensions, syrups and wafers.
  • These formulations, in addition to the active ingredients can be made from gray crab (e.g. lactose, dextrose, sucrose, manny, solbi, celrose and / or glycine) and suspending agents (e.g.
  • the tablet may include binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellose, sodium carboxymethylcellose and / or polyvinylpyridine, and optionally starch, agar, Disintegrants, absorbents, colorants, flavors and / or sweeteners, such as alginic acid or its sodium salt.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellose, sodium carboxymethylcellose and / or polyvinylpyridine, and optionally starch, agar, Disintegrants, absorbents, colorants, flavors and / or sweeteners, such as alginic acid or its sodium salt.
  • the formulations may be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70 It provides a cosmetic composition for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity, comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having a% or more as an active ingredient.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the polypeptide comprising a ninth to twelfth amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide
  • KGAE ninth to twelfth amino acid
  • a cosmetic composition composed of a polypeptide comprising an amino acid sequence having h or more, for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the polypeptide comprising a 9th to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide It provides a cosmetic composition for wrinkle improvement, skin softening enhancement or elasticity enhancement, consisting essentially of a polypeptide comprising an amino acid sequence having more than 70%.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70 More than% It provides a cosmetic composition for preventing skin aging comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having an active ingredient.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12 th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70 It provides a skin anti-aging cosmetic composition, consisting of a polypeptide comprising an amino acid sequence having a% or more.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12 th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70 It provides a cosmetic composition for preventing skin aging, consisting essentially of a polypeptide comprising an amino acid sequence having a% or more.
  • the polar peptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • composition of the present invention in order to further enhance the effect of the present invention, such as promoting collagen synthesis, promoting fibroblast proliferation, skin aging inhibition / improvement, skin moisturizing, skin elasticity / suppleness, wrinkle improvement, skin function enhancement
  • It may further include a known material having a.
  • the material include, but are not limited to, retinoic acid, trans-forming growth factor, TGF, betul inic acid, cinnamic acids, and hydrost i lbene.
  • Vitamin A, vitamin E, vitamin C, red grape extract powder can be used.
  • the cosmetic composition of the present invention may further contain other pharmacological, dermatological and / or cosmetically acceptable media or substrates such as substances which promote the absorption of proteins into the skin, preservatives, hydrating agents, emulsifiers, and laxatives.
  • the content of the polypeptide of the present invention contained in the cosmetic composition of the present invention may be contained in the range of 0.0001 to 50% by weight, preferably 0.01 to 10% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition.
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 9 to 12 amino acids containing, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids
  • the present invention provides a food composition for improving wrinkles, enhancing skin elasticity or enhancing elasticity, comprising a polypeptide or an amino acid sequence having a sequence homology of 70% or more.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the present invention also provides a polypeptide comprising a 9th to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and consisting of 4 to 17 consecutive amino acids: or sequence homology 70
  • KGAE 9th to 12th amino acid
  • sequence homology 70 Provided is a food composition for wrinkle improvement, skin softening or elasticity enhancement, comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having a% or more.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the present invention also provides a polypeptide comprising a 9th to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide. It provides a composition for food, consisting essentially of a polypeptide comprising an amino acid sequence having a% or more, for improving wrinkles, enhancing skin softness or enhancing elasticity.
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the polypeptide comprising a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70 It provides a composition for preventing skin aging comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence having a% or more as an active ingredient.
  • the polypeptide SEQ ID NO: 2 may be SEQ ID NO: 3.
  • the present invention comprises a 9 to 12th amino acid (KGAE) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, characterized in that consisting of 4 to 17 consecutive amino acids, or sequence homology with the polypeptide 70%
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • KGAE 9 to 12th amino acid
  • the polypeptide may be SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3.
  • the food composition according to the present invention includes all forms such as funct ional food, nutr it ional supplement, health food and food additives. These types can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • the composition for food itself of the present invention may be prepared in the form of tea, juice and drink for drinking, or granulated, encapsulated and powdered.
  • the food composition of the present invention can be prepared in the form of a composition by mixing with known substances or active ingredients known to have the effect of promoting hair growth or preventing or improving hair loss.
  • Functional foods include beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (females): canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc., fish, meat and processed foods (e.g. Etc.), breads and noodles (e.g.
  • the food composition of the present invention can be produced by participating in the food composition of the present invention.
  • a preferable content of the food composition of the polypeptide of this invention it is although it is not limited to this, Preferably it is 0.01-50 weight in the finally manufactured food.
  • it may be prepared and used in powder or concentrate form.
  • the present invention provides the use of the polypeptide to prepare an agent for improving wrinkles, enhancing skin softness and enhancing elasticity.
  • the present invention provides a method for improving wrinkles, enhancing skin softness and enhancing elasticity, comprising administering an effective amount of the polypeptide to a subject in need thereof.
  • the present invention provides a use of the polypeptide for the preparation of an anti-aging agent for skin.
  • the present invention provides a method for preventing skin aging, comprising administering an effective amount of the polytide to a subject in need thereof.
  • the 'effective amount' of the present invention when administered to an individual, refers to the amount of wrinkles, skin suppleness, elasticity or skin aging improvement, treatment, prevention, detection or diagnostic effect
  • the 'individual' is an animal, preferably It may be a mammal, particularly an animal including a human, or may be a cell, tissue, organ, or the like derived from the animal. The subject may be a patient in need of such an effect.
  • the term 'treatment' of the present invention broadly refers to improving the symptoms of wrinkles, skin suppleness, elasticity or skin aging or related diseases, which can cure, substantially prevent, or ameliorate such diseases. It may include, but is not limited to, alleviating, healing or preventing one or most of the symptoms, including wrinkles, skin suppleness, elasticity or skin aging or diseases associated therewith.
  • the term 'compr i sing' of the present invention is used in the same way as 'containing' or 'characteristic', and any additional ingredient element or method step not mentioned in the composition or method, etc. Does not exclude The term 'consi sting of' means to exclude additional elements, steps or components, etc., unless otherwise noted.
  • the term 'essent i al ly consi st ing of' means, in the scope of a composition or method, that component element or step, together with any component element or step that does not substantially affect its basic properties, etc. It means to include.
  • the present invention provides a novel fragment of AIMP1 protein and a composition for preventing skin aging, wrinkle improvement, skin softening or elasticity enhancement comprising the same as an active ingredient.
  • the novel polypeptide according to the invention and a composition comprising the same as an active ingredient It can be useful for preventing skin aging, wrinkle improvement, skin softening or elasticity.
  • Neo-Pep polypeptide SEQ ID NO: 1, 10 ⁇
  • peptide fragments thereof SEQ ID NOs: 2 to 4, 10 ⁇
  • Figure 2 is a cell proliferation assay (Cell Counting Kit-8 Assay) to confirm whether the induction of human fibroblast proliferation of Ne Pep polypeptide (SEQ ID NO: 1, 10 yM) and peptide fragments thereof (SEQ ID NO: 2 to 4, 10 ⁇ ) ) Graph of results.
  • FIG. 3 shows cytotoxicity assay confirming the presence of cytotoxicity in normal epidermal cells (vero) of Neo-Pep polypeptide (SEQ ID NO: 1, 10 ⁇ ) and peptide fragments thereof (SEQ ID NOS: 2-4, 10 ⁇ ) Cell Counting Kit-8 Assay).
  • Figure 4 shows the results of TNF- ⁇ EL ISA assay confirming the TNF- ⁇ secretion in Raw 264.7 cells of Neo-Pep polypeptide (SEQ ID NO: 1, 10 ⁇ ) and peptide fragments thereof (SEQ ID NOS: 2 to 4, 10 ⁇ ) It is a graph.
  • Promocell was incubated for 12 hours in DMEM medium containing 103 ⁇ 4> serum in a 24 well plate and then incubated for about 3 hours in serum-free medium. Then, Neo-Pep polypeptide (SEQ ID NO: 1, GL Biochem synthesis) and fragments thereof (SEQ ID NOs: 2 to 4, GL Biochem synthesis) were each added to the DMEM medium by 10 ⁇ , and then incubated for 12 hours. .
  • the CCK-8 assay (Cell Counting Kit-8 assay) from Technologies (Japan) was performed according to the manufacturer's instructions.
  • human foreskin fibroblasts C12300 foreskin fibroblast; 3,000 cells / well; Promocell
  • normal epithelial cells vero; 3,000 cells / well
  • CCK-8 solution (Dojindo Molecular Technologies, Japan) was added to each well of the medium, and the absorbance was analyzed at 450 nm using a microplate reader according to the manufacturer's instructions.
  • Neo-Pep polypeptide SEQ ID NO: 1
  • fragments thereof SEQ ID NOs: 2 to 4
  • the present inventor the fragment S1200 (SEQ ID NO: 15) of Neo—Pep polypeptide consisting of 15 amino acids to confirm the effect of preventing the skin aging, wrinkle improvement, skin softening, elasticity enhancing effect of the polypeptide of the present invention through the induction of collagen synthesis No. 2), S1300 (SEQ ID NO: 3) and S1400 SEQ ID NO: 4) were prepared.
  • polypeptide Ne Pep corresponds to the 6-46th amino acid residue in the AIMP1 protein (SEQ ID NO: 5).
  • Neo- Pep polypeptide SEQ ID No.
  • S1400 (SEQ ID NO: 4), which is a fragment of polypeptide Neo-Pep (SEQ ID NO: 1) consisting of 15 consecutive amino acids that do not contain the 9th to 12th amino acids (KGAE) of Pep (SEQ ID NO: 1) of the polypeptide Ne.
  • Collagen synthesis induction effect was slightly better than the control, but as can be seen in Figure 2 below fibroblasts (f ibrobl ast) proliferation induction effect was lower than the control.
  • Example 2 Fibroblast Proliferation Induction Effect of Polypeptides of the Present Invention As can be seen in FIG. 2, the polypeptide Neo was used as a result of using the CCK-8 Assay method described in the above experimental method.
  • Neo-Pep polypeptide SEQ ID NO: 1 corresponding to amino acid region 6 to 46 of the amino acid sequence of Neo-Pep polypeptide (SEQ ID NO: 1), as in S1200 SEQ ID NO: 2) and S1300 (SEQ ID NO: 3)
  • Polypeptide fragments consisting of the 9th to 12th amino acids (KGAE) as active amino acid residues and consisting of consecutive amino acids induce collagen synthesis and fibroblast proliferation, thereby preventing skin aging, improving wrinkles, and enhancing skin elasticity. Confirmed that it has.
  • Example 3 Cytotoxicity and Inflammation of Polypeptides of the Invention
  • Neo-Pep polypeptide SEQ ID NO: 1 and S1200 belonging to the polypeptide of the present invention ( In case of using SEQ ID NO: 2) and S1300 (SEQ ID NO: 3), the viability of epithelial cells was maintained as it was in the control group, and the safety was high.
  • S1400 SEQ ID NO: 4 which does not contain, slightly decreased the viability of epithelial cells.
  • doxorubucin (10 ⁇ g / ml), a potent cytotoxic agent, was used to compare the degree of cytotoxicity.
  • Neo-Pep polypeptide SEQ ID NO: 1
  • S1200 SEQ ID NO: 2 belonging to the polypeptide of the present invention
  • TNF- ⁇ levels secreted from S1300 SEQ ID NO: 3 and S1400 SEQ ID NO: 4 which do not include the 9th to 12th amino acids (KGAE) of Neo-Pep polypeptide (SEQ ID NO: 1)
  • KGAE 9th to 12th amino acids
  • LPS l ipopolysaccharide, 10 ng / ml

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

본 발명은 AIMP1 단백질의 단편 및 이를 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 조성물에 관한 것이다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭]
신규한 AIMP1 단백질의 단편과 어를 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 조 성물 【기술분야】
본 출원은 2016년 7월 28일에 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2016-0096240 호를 우선권으로 주장하고, 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다. 본 발명은 신규한 AIMP1 단백질의 단편 및 이를 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노 산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미 노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드; 상기 폴리펩티드를 암호화 하는 폴리뉴클레오티드; 이들 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방 지용, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
제약 산업이 과거의 천연물 의약품이나 화학적 합성 의약품에서 단백질 또는 펩티드 의약품의 개발로 바뀌어가고 있는 추세이다. 단백질은 생명체의 기능 및 구 조에 있어 기본물질이며, 인체를 구성하는 단백질은 약 100만종이 넘을 것으로 추 정된다. 이는 질병과도 직접적인 관련성이 있어, 치료제 개발에 중요한 연구대상이 되고 있으며, 이들을 이용한 단백질 또는 펩티드 의약품은 합성 의약품에 비해 부 작용이 적고 약효가 빨라 의약품의 혁신분야로 평가되고 있다. 현재 주요 제약사의 파이프라인에 있어 바이오의약품의 중요성이 점차 증가하고 있으나 펩티드 (Pept ides)와 같은 특정 바이오의약품이 출시되기까지 주요 기술적 문제가 존재한 다. 구체적으로 전달 기술 향상, 안정성 및 반감기를 늘린 펩티드 개발, 긴 ( long- chain) 펩티드 합성 등이 상업화의 걸림돌로 작용하고 있다. 펩티드는 약 50개 이 하의 아미노산으로 구성되어 있는 것을 말하며 펩티드 약물로 성공하기 위해서는 짧은 서열이면서 활성을 나타내는 것올 발굴하는 것이 관건인 것으로 알려져 있다. 펩티드 길이가 길면 합성 비용이 많이 들고 제조가 용이하지 않으며, 인체 흡수상 의 문제가 있는 것으로 알려져 있다. 한편 , 인간의 피부는 표피 (epidermis)와 진피 (dermis)의 2층으로 구성되어 있다. 표피 (epidermis)는 피부의 맨 바깥쪽에 위치한 가장 얇은 층으로 피부의 보 습 및 보호를 담당하는 중요한 기능을 한다. 보다 상세하게, 표피는 우리 몸 안에 있는 물질이 몸 밖으로 빠져나갈 수 없도특 막아주고, 외부로부터 침입해 들어오는 자외선, 바이러스, 세균 등 유해물질의 침입을 막아준다. 또한, 표피는 피지샘의 기름과 땀샘의 물을 자연적으로 유화시켜 약산성의 피지막올 만들어 유해물질 침입 으로부터 보호해 주고, 세균을 살균시킨다. 피부에서 진피 (dermis)는 표피에 영양분을 공급하며 표피를 지지하고 외부의 손상으로부터 몸을 보호하고, 수분을 저장하는 능력과 체온조절의 기능을 한다. 진 피는 섬유아세포 (fibroblast)와 그의 세포외 기질 (extracellular matrix)로 이루 어져 있으며, 그 속에 신경, 혈관, 림프관, 근육과 피지선, 아포크린, 에크린선 등 피부 부속 기관을 포함하고 있다. 진피의 주요 구성 요소인 섬유아세포는 콜라겐
(collagen), 프로테오글리칸 및 다른 구조적 당단백질 등 세포외 기질을 합성한다. 그 중에서도 콜라겐은 진피의 70%를 차지하는 섬유 단백질로서 피부의 기계적 견 고성 (탄력성), 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포분할과 분화 유도 등의 기능을 한다 (Van der M. Rest et al. , Biometerials., 11:28-31, 1990; Shimokomaki M. et al . , Ann. N. Y. Acad. Sci . , 580:1-7, 1990; Van der Rest M. et al . , Biochimie. , 72(6-7) :473-484, 1990). 인간의 피부는 노화 과정을 통해 다양한 물리, 화학적인 변화가 일어난다. 피부 노화는 원인에 따라 크게 2가지로 구별되는 데, 내재적 노화 (Intrinsic aging)는 피부의 구조와 생리적인 기능이 나이를 먹으면서 계속적인 감퇴를 일으키 는 자연적인 노화현상이고, 태양광 자외선, 약물 부작용 또는 환경 인자 등과 같은 외적 요소에 기인한 외재적 노화 (extrinsic aging)로 크게 구분된다. 인간의 피부 가 노화 과정을 거치면서, 피부세포의 대사과정이나 자외선에 의해 생성되는 활성 산소 등에 의해 세포 구성성분들 (예: 세포막에 있는 지질 등)이 산화되고, 이들의 활성 및 생합성이 저해된다. 따라서, 피부 노화가 진행되면서, 피부는 표피의 두께 가 전체적으로 얇아지고 세포와 조직에 탈수현상이 일어나 건조해지며 잔주름이 늘 어나고 점차적으로 주름이 깊어진다. 또한, 진피의 대부분을 차지하는 콜라겐의 양 이 감소하고 콜라겐을 합성하는 섬유아세포의 활성 또한 감소하여 새로운 콜라겐의 합성도 줄어든다. 진피 내 콜라겐의 양이 감소함에 따라 진피의 두께도 감소하고, 결국 피부에 주름이 생기고 유연성과 탄력성이 떨어진다. 따라서, 피부내 섬유아세 포 증식 및 콜라겐 합성 촉진에 의해 콜라겐 대사를 활성화킴으로써 피부 주름 개 선, 유연성 및 탄력 증진, 피부노화 방지효과가 우수하고 부작용이 적고 안전한 제 재에 대한수요는 계속 증가하고 있는 상황이다. 한편, AIMPKARS-interact ing mul t i-funct ional protein 1) 단백질은 312개 의 아미노산으로 이루어진 단백질로서, 다중 -tRNA 합성효소 복합체 (mult i-tRNA synthetase complex)에 결합하여 다중 -tRNA 합성효소의 촉매적 활성 (catalyt ic act ivi ty)을 증진시키는 단백질이다. AIMP1 단백질의 활성과 관련하여, AIMP1 단백 질의 6 내지 46번 아미노산 영역이 콜라겐 합성을 촉진하는 활성이 있음을 본 발명 자가 규명한 바 있다 (참조: 국내 특허등록번호 제 10-0903984호, 특허등록일: 2009 년 6월 15일) . 그러나, AIMP1 단백질의 6 내지 46번 아미노산 영역 내에서, 실질적 으로 콜라겐 합성 및 섬유아세포 증식 효과를 나타내는 활성부위는 지금까지 규명 된 바 없다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
이에, 본 발명자들은 AIMP1 단백질의 6 내지 46번 아미노산 영역 내에서 실 질적으로 피부 노화 방지, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진 효과를 나타 내는 활성 부위를 확인하여 본 발명을 완성하였다. 따라서, 본 발명의 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내 지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루 어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와서열 상동성 70% 이 상을 가지는 아미노산서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리템티드를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은, 본 발명의 다른 목적은, 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 상기 폴리템티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 를 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내 지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루 어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와서열 상동성 70% 이 상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분 으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제 공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구 성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열.번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것올 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필 수적으로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내 지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루 어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와서열 상동성 70% 이 상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분 으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제 공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성
70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구 성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필 수적으로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내 지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루 어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이 상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분 으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구 성되는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필 수적으로 구성되는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내 지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루 어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70¾ 이 상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분 으로 포함하는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공하는 것이다. 또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구 성되는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필 수적으로 구성되는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진용 제제 를 제조하기 위한상기 폴리펩티드의 용도를 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 상기 폴리펩티드의 유효량올 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진 방 법을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 피부 노화방지용 제제를 제조하기 위한 상기 폴 리펩티드의 용도를 제공하는 것이다. ' 본 발명의 또 다른 목적은, 상기 폴리펩티드의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 피부 노화방지 방법을 제공하는 것이다.'
[기술적 해결방법】
따라서, 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1로 표시되 는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩 티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 상기 폴리펩티드를 암 호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17 개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티 드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하 는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증 진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화 장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을툭징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17 개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티 드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하 는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증 진용 화장료 조성물을 제공한다. 또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해 , 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화 장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리템티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미 노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산'서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티 드를 유효성분으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 서열번호 1로 표시되는 아미 노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물 을 제공한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 서열번호 1로 표시되는 아미 노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드로 필수적으로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식 품용 조성물을 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17 개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티 드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것올 특징으로 하 는 폴리템티드를 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공 한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 아상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구성되는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제 공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17 개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티 드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하 는 폴리템티드를 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공 한다.
또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공한다. 또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1로 표 시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴 리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으 로 하는 폴리템티드로 필수적으로 구성되는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제 공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄 력 증진용 제제를 제조하기 위한상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 상기 폴리펩티드의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 피부 노화방지용 제제를 제조하기 위한 상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다. 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해, 상기 폴리펩티드의 유효량을 이 를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 피부 노화방지 방법을 제공한 다. 이하본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명에서 용어 'KGAE 잔기' , 'KGAE서열' 또는 'KGAE 영역' 은 상호 호 환적으로 사용될 수 있으며, 서열번호 5로 표시되는 AIMP1 단백질 전장 아미노산 서열 (ful l length amino acid sequence of AIMP1 protein)에서 14 내지 17번째 아 미노산 영역을 의미하는 것으로, 상기 영역은 본 발명에서 제공하는 발모촉진 활성 단편의 일례인 AIMP1 유래 서열번호 1의 폴리펩티드 (또는 Neo-Pep으로 칭함)를 기 준으로 할 때 9 내지 12번째 아미노산 영역에 해당한다. 아하 본 발명에서 제공하는 폴리펩타이드는 AIMP1 단백질 유래 단편으로서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE) 영역을 포함하여 주름 개선, 피부 유연 증진, 탄력 증진 및 피부 노화방지 효과가 현저히 우수한 것을 특징으로 한다. AIMP1의 KGAE 영역이 주름 개선, 피부 유연 증진, 탄 력 증진 및 피부 노화방지 효과 (용도)에 핵심적이라는 사실은 본 발명에서 최초로 공개하는 것이다. 따라서, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 제공한다. 바람직 하게는, 상기 폴리펩티드는 연속되는 10 내지 15개의 아미노'산으로 이루어진 것을 특징으로 한다.
바람직하게는, 상기 폴리펩티드는, 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시되 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티 드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하 는 폴리펩티드일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "폴리펩티드 (polypeptide)", "펩티드 (peptide)" '및 "단 백질"은 상호 호환성 있게 사용되며, 예컨 , 자연 상태의 단백질에서 일반적으로 발견되는 바와 같이 아미노산 잔기의 중합체를 말한다.
본 명세서에 사용된 아미노산의 일문자 (삼문자)는 생화학 분야에서의 표준 약어 규정에 따라 다음의 아미노산을 의미한다: A(Ala): 알라닌; C(Cys): 시스테 인; D(Asp): 아스파르트산; E(Glu): 글루탐산; F(Phe): 페닐알라닌; G(Gly): 글라 이신; H(His): 히스티딘; I(IIe): 이소류신; K(Lys): 라이신; L(Leu): 류신; M(Met): 메티오닌; N(Asn): 아스파라진; O(Ply): 피를라이신; P(Pro): 프를린; Q(Gln): 글루타민; R(Arg): 아르지닌; S(Ser): 세린; T(Thr): 쓰레오닌; U(Sec):샐 레노시스테인, V(Val): 발린; W(Trp): 트립토판; Y(Tyr): 타이로신. 본 발명에서 'AIMPKARS-interacting multi-functional protein 1) 단백질 ' 은 p43 단백질이라는 이름으로 먼저 알려졌으며 이후 AIMP1으로 재명명되었다 (Kim S.H. et al . , Trends in Biochemical Sciences, 30:569-574, 2005) . AIMPl은 다중 -tRNA 합성효소 복합체 (mult i-tRNA synthetase complex)에 결합하여 다중 -tRNA 합성효소의 촉매 활성 (catalytic activity)을 증진시킨다. 본 발명의 AIMP1 단백질은 당업계에 알려진 것이라면 그 구체적 서열이 특 별히 제한되지 않으며, 바람직하게 인간 AIMP1일 수 있다. 상기 AIMP1 단백질의 3 가지의 SNP가 알려져 있다 (NCBI SNP 데이터베이스 참조): 전장 AIMP1의 아미노산 서열 (참조: 본원 명세서의 서열번호 7) 중에서 79번째 알라닌 (Ala)이 프를린 (Pro)으로 치환 (SNP Accession No. rs3133166, 서열번호 11); 104번째 트레오닌 (Thr)이 알라닌 (Ala)으로 치환 (SNP Accession No. rs 17036670, 서열번호 12); 117번째 트레오닌 (Thr)이 알라닌 (Ala)으로 치환 (SNP Accession No. rs2230255, 서열번호 13). 본 발명의 폴리펩티드, 즉 서열번호 1로 표시되는 아미노산서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어 진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드는 이의 기능적 동등물을 포함한다. "기능적 동 등물" 이란, 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 적어도 70% 이상 (70.0% 내지 99.9%), 바람직하게는 80% 이상 (80.0% 내지 99.9%), 보다 바람직하게는 90% 이상 (90.0% 내지 99.9%)의 서열 상동성 (또는, 동일성)을 갖는 폴리펩티드를 말한다. 더 욱 바람직하게 상기 기능적 동등물은 KGAE 영역 (서열)은 불변 (constant)인 상태에 서 상기 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상의 서열 상동성 (또는, 동일성)을 갖는 폴 리펩티드일 수 있다. 예를 들면, 70%, 71%, 72%, .73% , 74%, 75%, 76%, 77 %, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 상동 성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 것으로, 본 발명의 폴리펩티드와 실질적으로 동 질의 생리활성을 나타내는 폴리펩티드를 말한다. 여기서, 용어 "실질적으로 "는 특 정 성질의 전체 또는 거의 동일한 정도의 성질을 나타내는 상태를 의미한다. 따라 서, 본원에서 "실질적으로 동질의 생리활성"이란, 콜라겐 합성 촉진 및 /또는 섬유 아세포 증식 유도 효과 등을 통한 피부 노화 방지, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진 활성을 의미한다. 본원에서 "상동성 (homology) 또는 동일성 (identity)"은, 폴리펩티드 분자와 같은 중합체 분자간의 전체적인 관련성 (relatedness)을 의미한다. 예를 들면, 2개 폴리펩티드 서열간의 상동성 /동일성 (%)의 계산은, 최적의 비교를 위해 2개의 서열 을 배열하여 수행할 수 있다. 바람직하게는, 비교 목적으로 배열된 서열의 길이는, 기준 서열 (reference sequence)의 길이의 적어도 30% 이상, 적어도 40% 이상, 적 어도 50% 이상, 적어도 60¾> 이상, 적어도 70¾> 이상, 적어도 80% 이상, 적어도 90% 이상, 또는 실질적으로 100%일 수 있다. 그리고 나서, 상응하는 아미노산 부위의 아미노산을 서로 비교한다. 제 1 서열의 부위에 위치한 아미노산이 제 2 서열의 상웅 하는 부위의 아미노산과 동일한 경우, 2개의 서열은 당해 부위에서는 동일성올 가 지는 것이다. 2개 서열의 동일성 (%)은, 2개 서열간의 최적 배열 (optimal alignment)을 위해 도입해야 하는 갭 (gap)의 슷자와 길이를 고려한, 2개 서열에서 공통되는 아미노산을 가지는 부위의 숫자의 함수이다. 2개 서열간의 비교 및 동일 성 (¾>)의 결정은 수학적인 알고리즘을 통해 수행할 수 있다. 예를 들면, ClustalW (Thompson 외, 1994)를 사용하여 다음의 파라미터를 사용하여 서열 동일성 수치를 측정할 수 있다: 쌍 배열 파라미터 - 방법: 정확성 (accurate), 매트릭스: PAM, 갭 개방 페널티 (Gap open penalty): 10.00, 갭 연장 페널티 (Gap extension penalty): 0.10; 다중 배열 파라미터 - 매트릭스: PAM, 갭 개방 페널티 (Gap open penalty): 10.00, delay 동일성 ( >): 30, 엔드 페널티 부여 (penalize end gaps): on, 갭 분리 거리 (Gap separation distance): 0, 네가티브 매트릭스: no, 갭 연장 페널티: 0.20, 잔기 -특정 갭 페널티 (residue-specific gap penalties): on, 친수성 갭 페널티 : on, 친수성 잔기: GPSNDQEKR. 특정 잔기에서의 서열 동일성 은 단순히 유도체화된 동일한 잔기를 포함한다. 본원에서 용어 "실질적으로 "는 특정 성질의 전체 또는 거의 동일한 정도의 성질을 나타내는 상태를 의미한다. 본원에서 용어 "실질적으로 동일한' '은, 아미노 산 또는 핵산 서열간의 비교와 관련하여 사용되고 있다. 본원 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는, 상웅하는 부위에 동일한 잔기를 가지는 경 우에 2개의 서열은 "실질적으로 동일한" 것으로 이해될 것이다. 당업계에서 잘 알 려져 있는 바와 같이', 아미노산 또는 핵산 서열은 다양한 종류의 알고리즘을 사용 하여 비교할 수 있는 데, 예를 들면 핵산 서열 비교를 위해서는 BLASTN을, 아미노 산 서열 비교를 위해서는 BLASTP, 갭 (gapped) BLAST, PSI-BLAST와 같은 컴퓨터 프 로그램을 사용할 수 있다. 상기한 컴퓨터 프로그램의 예는 아래 문헌에 기재되어 있다: Altschul 외 , Basic local alignment search tool , J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul 외, Methods in Enzymology) Altschul et al. , Nucleic Acids Res. 25:3389—3402, 1997; Baxevanis 외, Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 및 Misener 외, (eds. ) , Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. 동일한 서열을 검색하는 것 이외에, 상기한 컴퓨 터 프로그램에서는 통상적으로 서열 동일성의 정도 (degree of identity)를 제공해 준다. 2개의 서열에 있어서, 일정 길이의 잔기에 걸쳐 상웅하는 부위의 잔기 (residue) 중 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80% 이상, 적어도 85¾> 이상, 적어 도 90% 이상, 적어도 91% 이상, 적어도 92% 이상, 적어도 93% 이상, 적어도 94% 이 상, 적어도 95% 이상, 적어도 96% 이상, 적어도 97% 이상, 적어도 98% 이상, 적어 도 99% 이상이 동일한 경우에 "실질적으로 동일한'' 서열인 것으로 간주된다. 바람 직하게는, 상기한 "일정 길이의 잔기' '는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37,38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300 또는 그 이상의 잔기일 수 있다. 본원에서 상기 용어 "상웅하는' '은 소정의 폴리펩티드의 아미노산 잔기의 위 치 (position)/정체 (identity)를 결정하는 데에 종종 사용된다. 통상의 기술자라면, 폴리펩티드 내의 잔기는 기준 펩티드 (reference-related polypept ide)에 기초한 원형 숫자 시스템 (canonical numbering system)을 사용하여 종종 지정된다. 따라 서, 예를 들어 게 190번째 위치의 잔기에 "상웅하는'' 아미노산은 특정 아미노산 쇄 에서 반드시 제 190번째 위치에 있을 필요는 없으며, 통상의 기술자라면 "상웅하는'' 아미노산을 확인하는 방법에 대해서 쉽게 이해할수 있다. 상기 "기능적 동등물' '은 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열 중 일부가 부가, 치환 또는 결실의 결과로 생성된 것일 수 있다. 상기에서 아미노산의 치환은 바람직하게는 보존적 치환이다. 천연에 존재하는 아미노산의 보존적 치환의 예는 다음과 같다: 지방족 아미노산 (Gly, Ala, Pro), 소수성 아미노산 (lie, Leu, Val), 방향족 아미노산 (Phe, Tyr, Trp), 산성 아미노산 (Asp, Glu), 염기성 아미노산 (His, Lys, Arg, Gin, Asn) 및 황 함유 아미노산 (Cys, Met). 또한 상기 기능적 동등물에 는 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열상에서 아미노산의 일부가 결실된 변형체 도 포함된다. 상기 아미노산의 결실 또는 치환은 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티 드의 생리활성에 직접적으로 관련되지 않은 영역에 위치해 있다. 본 발명에서 생리 활성에 직접적으로 관련된 영역은 KGAE 영역이며, 상기 결실 또는 치환은 상기 '영 역 이외의 부분에 위치하는 것일 수 있다. 또한, 아미노산의 결실은 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드의 생리활성에 직접 관여하지 않는 부분에 위치한다. 아울러 상기 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열의 양 말단 또는 서열 내에 몇몇의 아 미노산이 부가된 변형체도 포함된다. 또한, 본 발명의 기능적 동등물의 범위에는 본 발명에 따른 단백질의 기본 골격 및 이의 생리활성을 유지하면서 단백질의 일부 화학 구조가 변형된 단백질 또는 폴리펩티드 유도체도 포함된다. 예를 들어, 본 발 명의 단백질의 안정성, 저장성, 휘발성 또는 용해도 등을 변경시키기 위한 구조변 경이 이에 포함된다. 본 명세서에서 서열 상동성 및 동질성은 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 후보 서열을 정렬하고 갭 (gap)을 도입한 후 본 발명의 폴리펩티드의 아미노 산 서열에 대한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 필요한 경우, 최대 백분율 서열 동질성을 수득하기 위하여 서열 동질성의 부분으로서 보존적 치 환은 고려하지 않는다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열의 N-말단, C- 말단 또는 내부 신장, 결손 또는 삽입은 서열 동질성 또는 상동성에 영향을 주는 서열로서 해석되지 않는다. 또한, 상기 서열 동질성은 두 개의 단백질 또는 폴리펩 티드의 아미노산 서열의 유사한 부분을 비교하기 위해 사용되는 일반적인 표준 방 법에 의해 결정할 수 있다. BLAST또는 이와 같은 컴퓨터 프로그램은 두 개의 단백 질 또는 폴리펩티드를 각각의 아미노산이 최적으로 매칭되도록 정렬한다 (하나 또는 두 서열의 전장 서열을 따라 또는 하나 또는 두 서열의 예측된 부분을 따라) . 상기 프로그램은 디폴트 오프닝 페널티 (default opening penalty) 및 디폴트 갭 페널티 (default gap penalty)를 제공하며 컴퓨터 프로그램과 함께 연계되어 사용될 수 있 는 PAM250 (표준 스코링 매트릭스; Dayhoff et al . , in At las of Protein Sequence and Structure, vol 5, supp 3, 1978)와 같은 스코링 매트릭스를 제공한다. 예를 들어, 백분율 동질성은 다음과 같이 계산할 수 있다. 일치하는 서열 ( ident ical matches)의 총 수에 100을 곱한 다음 대응되는 스팬 (matched span) 내의 보다 긴 서열의 길이와 두 서열을 정렬하기 위해 보다 긴 서열 내로 도입된 갭 (gaps)의 수 의 합으로 나눈다. 본 발명의 폴리펩티드는 유전공학적 방법에 의해 작제될 수 있다. 우선, 통 상적인 방법에 따라 본 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 작제한다. 폴리뉴클레오티드 서열은 예를 들면, 인간 AIMP1 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 주형으로 적절한 프라이머를 사용하여 PCR 증폭함으로써 작제 할 수 있다. 다른 방법으로 당업계에 공지된 표준 방법에 의해, 예컨대, 자동 DNA 합성기 (Biosearch 또는 Applied Biosys terns 사에서 판매하는 것)를 사용하여 DNA 염기서열을 합성할 수도 있다. 작제된 폴리뉴클레오티드 서열은 이 폴리뉴클레오티 드와 작동가능하게 연결되어 (operatively linked) 그 폴리뉴클레오티드 염기 서열 의 발현올 조절하는 하나 또는 그 이상의 발현 조절 서열 (expression control sequence) (예: 프로모터, 인핸서 등)을 포함하는 백터에 삽입시키고, 이로부터 형 성된 재조합 발현 백터로 숙주세포를 형질전환시킨다. 생성된 형질전환체를 상기 DNA 서열이 발현되도록 하기에 적절한 배지 및 조건 하에서 배양하예 배양물로부 터 상기 DNA서열에 의해 코딩된 실질적으로 순수한 단백질을 회수한다. 상기 회수 는 당업계에 공지된 방법 (예컨대, 크로마토그래피)을 이용하여 수행할 수 있다. 상기에서 "실질적으로 순수한 폴리펩티드 또는 단백질 "이라 함은 본 발명에 따른 단백질 숙주세포로부터 유래된 어떠한 다른 단백질도 실질적으로 포함하지 않 는 것을 의미한다. 본 발명의 단백질 합성을 위한 유전공학적 방법은 다음의 문헌 '을 참고할 수 있다: Maniatis et al . , Molecular Cloning; A laboratory Manual , Cold Spring Harbor laboratory, 1982; Sambrook et al., supra; Gene Expression Technology, Method in Enzymology, Genetics and Molecular Biology, Method in Enzymology, Guthrie & Fink (eds. ) , Academic Press, San Diego, Calif, 1991; 및 Hitzeman et al . , J. Biol. Chem. , 255:12073-12080, 1990. 또한, 본 발명의 폴리펩티드는 해당분야에 공지된 기술로 화학적으로 합성할 '수 있다 (Creighton, Proteins: Structures and Molecular Principles, W.H. Freeman and Co., NY (1983)). 즉, 본 발명의 폴리펩티드는 통상의 단계적인 액체 또는 고체상 합성, 단편 웅축, F-M0C 또는 T-B0C 화학법을 이용하여 제조할 수 있 다 (Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et al., Eds. , CRC Press, Boca Raton Florida, (1997); A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., IRL Press, Oxford, England, (1989)). 바람직한 제 조방법은 고체상 합성방법 (solid phase synthesis)을 이용하는 것이다. 본 발명의 폴리펩티드는 보호된 아미노산간의 응축반응 (condensation react ion)에 의하여 통 상의 고체상 방법으로, C-말단으로부터 시작하여 규명된 아미노산 서열에 따라 순 차적으로 진행하면서 합성할 수 있다. 웅축 반웅 후 보호기 및 C-말단 아미노산이 연결된 담체를 산분해 (acid decomposi t ion) 또는 아미놀리시스 (aminolysi s)와 같 은 공지의 방법에 의해 제거할 수 있다. 상기 언급된 펩티드 합성법은 관련 서적에 상세히 기술되어 있다 (Gross and Meienhofer ' s , The Pept ides , vol 2. , Academi c Press , 1980) . 유전공학적 방법에 의해 제조된 단백질 또는 화학적으로 합성된 단백질은 예 를 들면 추출법, 재결정법, 다양한 크로마토크래피 (겔 여과법, 이온 교환, 침전, 흡착, 역전상), 전기영동, 역류 분배법 등 당업계에 공지된 방법으로 분리 및 정제 할 수 있다. 또한, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드, 즉 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미 노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 암호화 (coding)하는 폴리뉴클 레오티드를 제공한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 전술한 본 발명의 폴리펩티드를 암 호화하는 것이라면 그 염기 구성이 특별히 제한되지 않는다. 바람직하게는, 본 발 명의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는, 서열번호 7(서열번호 2의 S1200 폴리펩티드를 암호화) 또는 서열번호 8(서열번호 3의 S1300 폴리펩티드를 암 호화)로 표시되는 염기 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 본 명세서에서 "폴리뉴클레오티드 "핵산" 은 단일 -가닥 또는 이중-가닥의 형태로 된 데옥시리보뉴클레오티드 (DNA) 또는 리보뉴클레오티드 (RNA)를 말한다. 다 른 제한이 없는 한, 자연적으로 생성되는 뉴클레오티드와 비슷한 방법으로 핵산에 흔성화되는 자연적 뉴클레오티드의 공지된 아날로그도 포함된다. 콜라겐 (col lagen)은 진피의 섬유아세포 ( f ibrobl ast )에서 생산되고, 진피의 70%를 차지하는 섬유상 단백질로서, 피부의 유연과 탄력을 담당한다. 따라서, 콜 라겐의 합성이 감소되면 피부가 노화되어 피부의 탄력성과 유연성이 급격히 감소하 고, 결국 피부가 축 늘어지거나 주름이 생긴다. 반대로, 피부 내 콜라겐 합성 촉진 에 의해 콜라겐 대사가 활발해지면, 진피 기질의 성분이 증가되어 주름 개선, 탄력 증진, 피부 강화 등의 효과가 나타난다. 아래 실시예 및 도면을 통해 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 AIMP1 단 백질의 폴리펩티드 단편은 콜라겐 합성 및 섬유아세포 증식을 촉진시키는 활성을 가진다 (참조: 실시예 1 및 2, 도 1 내지 도 2) . 따라서, 본 발명에 따른 AIMP1 폴 리펩티드 단편은, 콜라겐 합성 및 /또는 섬유아세포 증식을 촉진시킴으로써 피부 노 화의 방지, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진의 용도로사용될 수 있다. 본 명세서에서 "피부 노화" 는 피부의 구조와 생리적인 기능이 나이를 먹으 면서 계속적인 감퇴를 일으키는 자연적인 노화현상인 내재적 노화 ( Intr insi c aging)와, 태양광 자외선, 약물 부작용, 스트레스, 환경 인자, 상처 등과 같은 다 양한 종류의 외적 요소에 기인한 외재적 노화 (extr insic aging) 모두를 포함하는 광범위한 의미를 가진다. 따라서, 본 명세서에서 "피부 노화 방지" 는 내재적 노 화 및 외재적 노화를 포함한 다양한 원인에 기인한 피부 노화 상태를 억제, 저하, 방지 , 개선 또는 예방을 포함하는 광범위한 의마를 가진다. 본 발명의 AIMP1 단백질의 폴리펩티드 단편은 상기 기재된 용도를 위한 약학 적, 피부학적 , 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다. 상기 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 바람직하게는 피부 도포용 제형으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 -함유 클렌 징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등 으로 제조될 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 보다 바람직하게는 유연 화장 수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림 , 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌 징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 형태로 제조될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 조성물은 메조테라피 (mesotherapy)를 위한 주사용 제 형으로 제조될 수 있다. 상기 주사용 제형은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화 제를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 본 발명 의 폴리펩티드를 식염수 또는 완층액에 용해시켜 주사용으로 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 경구 투여용 제형으로도 제조될 수 있다. 경구 투 여용의 경우, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 부형제와 흔합되어 섭취형 정제, 협측 정제, 트로키, 캡술, 엘릭시르, 서스펜션, 시럽 및 웨이퍼 등의 형태로 제형화될 수 있다. 이들 제형은 유효성분 이외에 회석게 (예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니를, 솔비를, 셀를로즈 및 /또는 글리신)와 활탁제 (예 : 실리카, 탈크, 스테아르 산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 /또는 폴리에틸렌 글리콜)를 포함할 수 있다. 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀를로즈, 나트륨 카복시메틸셀를로즈 및 /또는 폴리비닐피를리딘과 같은 결합 제를 포함할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제 및 /또는 감미제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 흔합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에서는, 서열번호 1로 표시되는 아미노산서열에서 9 내지 12번째 아 미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특 징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하 는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공한다. 바람 직하게는, 상기 폴리펩티드는서열번호 2 또는 서열번호 3일 수 있다.
또한 본 발명에서는, 서열번호 1로 표시되는 아미노산서열에서 9 내지 12번 째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것 을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 h 이상을 가 지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3일 수 있다.
또한 본 발명에서는, 서열번호 1로 표시되는 아미노산서열에서 9 내지 12번 째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것 을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가 지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구성 되는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공한다. 바 람직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2또는서열번호 3일 수 있다. 또한, 본 발명에서는, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12 번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리 펩티드는서열번호 2또는 서열번호 3일 수 있다.
또한, 본 발명에서는, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12 번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 피 부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열 번호 2또는 서열번호 3일 수 있다.
또한, 본 발명에서는, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12 번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구 성되는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴라펩 티드는 서열번호 2또는 서열번호 3일 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 본 발명의 효과를 더욱 강화시키기 위해 콜라겐 합성 촉진, 섬유아세포 증식 촉진, 피부 노화 억계 /개선, 피부 보습, 피부의 탄력 / 유연 증진, 주름 개선, 피부 기능 강화 등의 효과를 갖는 공지의 물질을 추가로 포 함할 수 있다. 상기 물질로는, 이에 제한되지는 않으나, 레티노인산 (ret inoic acid) , TGF( trans-forming growth factor) , 베를린산 (betul inic acid) , 신남산 (cinnamic acids) , 하이드로스틸벤 (hydrost i lbene) , 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 적포도 추출 분말 등을 사용할 수 있다. 이외 피부로의 단백질의 흡수를 촉진하 는 물질, 방부제, 수화제, 유화 촉진제, 완층제 등 기타 약학적, 피부학적 및 /또는 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기재를 더욱 함유할수 있다. 상기 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 본 발명의 폴리펩티드의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 50 중량 %, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량 % 범위로 함유될 수 있다. 또한, 본 발명은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함 하는 주름 개선 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제공한다. 바 람직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3일 수 있다.
또한, 본 발명은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드: 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 주름 개 선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2또는 서열번호 3일 수 있다.
또한, 본 발명은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구성되 는, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 식품용 조성물을 제공한다. 바람 직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2또는 서열번호 3일 수 있다. 또한, 본 발명은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함 하는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티 드는 서열번호 2 는 서열번호 3일 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 구성되는, 피부 노 화 방지용 식품용 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3일 수 있다.
또한, 본 발명은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지 는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드로 필수적으로 구성되 는, 피부 노화 방지용 식품용 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드 는 서열번호 2 또는 서열번호 3일 수 있다. 본 발명에 따른 식품용 조성물은 기능성 식품 ( funct ional food) , 영양 보조 제 (nutr i t ional supplement ) , 건강식품 (health food) 및 식품 첨가제 ( food addi t ives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형들은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 식품용 조성물 자체를 차, 쥬스 및 드 링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 식품용 조성물은 발모 촉진 또는 탈모 예방이나 개선의 효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 흔합하여 조성물의 형태 로 제조할 수 있다. 또한, 기능성 식품으로는 음료 (알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품 ( 여) : 과일 통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품 (예: 햄, 소시지콘비이프 등) , 빵류 및 면류 (예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카 로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품 (예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 넁동식품, 각종 조미료 (예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 식품용 조성물을 참가하여 제조할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드의 식품용 조성물의 바람직한 함유량으로는, 이에 한정 되지 않지만, 바람직하게는 최종적으로 제조된 식품 중 0.01 내지 50 중량 이다. 본 발명의 식품용 조성물을 식품첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농 축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 본 발명은 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진용 제제를 제조하기 위한 상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다. 본 발명은 상기 폴리펩티드의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진 방법을 제공한다. 본 발명은 피부 노화방지용 제제를 제조하기 위한 상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다. 본 발명은 상기 폴리템티드의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특징으로 하는 피부 노화방지 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 '유효량' 이란 개체에게 투여하였을 때, 주름, 피부 유연, 탄력 또는 피부 노화의 개선, 치료, 예방, 검출 또는 진단 효과를 나타내는 양을 말하며, 상기 '개체' 란 동물, 바람직하게는 포유동물, 특히 인간을 포함하는 동물 일 수 있으며, 동물에서 유래한 세포, 조직, 기관 등일 수도 있다. 상기 개체는 상 기 효과가 필요한 환자 (pat ient ) 일 수 있다.
본 발명의 상기 '치료' 는 주름, 피부 유연, 탄력 또는 피부 노화 또는 이 와 관련한 질환의 증상을 개선시키는 것을 포괄적으로 지칭하고, 이는 이러한 질환 을 치유하거나, 실질적으로 예방하거나, 또는 상태를 개선시키는 것을 포함할 수 있으며, 주름, 피부 유연, 탄력 또는 피부 노화 또는 이와 관련한 질환으로부터 비 롯된 한 가지 증상 또는 대부분의 증상을 완화시키거나, 치유하거나 예방하는 것을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 용어 '〜을 포함하는 (compr i sing) ' 이란 '함유하는' 또는 '특징 으로 하는' 과 동일하게 사용되며, 조성물 또는 방법에 있어서, 언급되지 않은 추 가적인 성분 요소 또는 방법 단계 등을 배제하지 않는다. 용어 ' 로 구성되는 (consi st ing of ) ' 이란 별도로 기재되지 않은 추가적인 요소, 단계 또는 성분 등을 제외하는 것을 의미한다. 용어 '필수적으로 구성되는 (essent i al ly consi st ing of ) ' 이란 조성물 또는 방법의 범위에 있어서, 기^된 성분 요소 또는 단계와 더불어 이의 기본적인 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 성분 요소 또는 단계 등을 포함하는 것을 의미한다.
【유리한 효과】
따라서, 본 발명은 신규한 AIMP1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하 는 피부 노화 방지, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용 조성물을 제공한 다. 본 발명에 따른 신규한 폴리펩티드 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 피부 노화 방지, 주름 개선, 피부 유연 증진 또는 탄력 증진용도에 유용하게 이용 될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1, 10 μΜ) 및 이의 펩티드 단편 (서 열번호 2 내지 4, 10 μΜ)의 콜라겐 합성 유도 여부를 확인한 Procollagen Type I EL ISA Assay 결과 그래프이다. [대조군 (Con): 20% Glycerol /PBS (10 ug/ml); Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1), S1200 (서열번호 2), S1300 (서열번호 3), S1400 (서열번호 4)]
도 2는 Ne으 Pep 폴리펩티드 (서열번호 1, 10 yM) 및 이의 펩티드 단편 (서 열번호 2 내지 4, 10 μΜ)의 인간 섬유아세포 증식유도 여부를 확인한 세포증식 어 세이 (Cell Counting Kit-8 Assay) 결과 그래프이다. [대조군 (Con): 20% Glycerol /PBS (10 ug/ml); Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1), S1200 (서열번호 2), S1300 (서열번호 3), S1400 (서열번호 4)]
도 3은 Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1, 10 μΜ) 및 이의 펩티드 단편 (서 열번호 2 내지 4, 10 μΜ)의 정상적인 표피 세포 (vero)에서의 세포독성 유무를 확 인한 세포독성 어세이 (Cell Counting Kit-8 Assay) 결과 그래프이다. [대조군 (Con): 20% Glycerol /PBS (10 ug/ml); Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1), S1200 ( 서열번호 2), S1300 (서열번호 3), S1400 (서열번호 4); Doxo (독소루비신, 10 μ g/ml)]
도 4는 Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1, 10 μΜ) 및 이의 펩티드 단편 (서 열번호 2 내지 4, 10 μΜ)의 Raw 264.7 세포에서의 TNF- α 분비량을 확인한 TNF- α EL ISA 어세이 결과 그래프이다. [대조군 (Con): 20% Glycerol /PBS (10 ug/ml); Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1), S1200 (서열번호 2), S1300 (서열번호 3), S1400 (서열번호 4); LPS (lipopolysaccharide, 10 ng/ml)]
【발명의 실시를 위한 형태】
이하본 발명을 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실 시예에 한정되는 것은 아니다.
[실험 방법] 콜라겐 E SA어세이 인간의 포피 섬유아세포 C12300 (foreskin fibroblast; Ι.δχΐθ' cells/well;
Promocell)를 24 well plate에 있는 10¾> 혈청 함유 DMEM 배지에서 12시간 배양한 후, 다시 무혈청 배지에서 약 3시간 동안 배양하였다. 그리고 나서, Neo-Pep 폴리 펩티드 (서열번호 1, GL Biochem 합성) 및 이의 단편 (서열번호 2 내지 4, GL Biochem 합성)을 각각 10 μΜ씩 상기 DMEM 배지에 첨가한 후, 12시간 동안 배양하 였다.
이후, 상기 배지를 회수하여, l,000g에서 10분간 원심분리한 후, Procollagen Type I EL ISA 킷트 (Takara, 일본)를 이용하여 제조업자의 설명에 따라 분비된 콜라겐을 검출하였다. 세포증식 및 세포독성 어세이 (Cell Counting Kit-8어세이)
섬유아세포의 증식 및 세포독성 여부를 확인하기 위해, Dojindo Molecular
Technologies (일본)의 CCK-8 어세이 (Cell Counting Kit-8 assay)를 제조업자의 설 명에 따라 수행했다.
우선, 인간의 포피 섬유아세포 C12300( foreskin fibroblast; 3,000 cells/well; Promocell) 및 정상 상피세포 (vero; 3,000 cells/well)를 96 well plate에 있는 10% 혈청 함유 DMEM 배지에서 12시간 동안 각각 배양한 후, 다시 무 혈청 배지에서 약 3시간 동안 배양하였다. 그리고 나서, Neo-Pep 폴리펩티드 (서열 번호 1) 및 이의 단편 (서열번호 2 내지 4)을 각각 10 μΜ씩 상기 DMEM 배지에 첨가 한후, 24시간동안 배양하였다.
이후, CCK-8 용액 (Dojindo Molecular Technologies, 일본) 10 μ 1을 상기 배 지의 각 well에 첨가한 후, 제조업자의 설명에 따라 마이크로플레이트 리더 (microplate reader)를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 분석하였다.
TNF-α EL ISA어세이
Raw 264.7 세포 (ATCC® TIB-71; 3,000 eel ls/well)을 96 well plate에 있는 10% 혈청 함유 DMEM 배지에서 12시간 동안 각각 배양한 후, 다시 무혈청 배지에서 약 3시간 동안 배양하였다. 그리고 나서, Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1) 및 이의 단편 (서열번호 2 내지 4)을 각각 10 μΜ씩 상기 DMEM 배지에 첨가한 후, 6시간 동 안 배양하였다.
이후, 상기 배지를 회수하여, l,000g에서 10분간 원심분리한 후, TNF-a EL ISA 어세이 킷트 (BD Biosciences , 미국)를 이용하여 제조업자의 설명에 따라 분 비된 TNF- ύ를 검출하였다. 실시예 1 :본 발명의 폴리펩티드의 콜라겐 ( co l l agen) 합성 유도 효과
본 발명자는, 콜라겐 합성 유도여부를 통해 본 발명의 폴리펩티드의 피부노 화 방지, 주름 개선, 피부 유연증진, 탄력 증진효과를 확인하기 위해, 15개의 아미 노산으로 이루어진 Neo— Pep 폴리펩티드의 단편 S1200(서열번호 2), S1300(서열번호 3) 및 S1400서열번호 4)을 제조하였다.
아래 표 1에서, 본 명세서에 기재되어 있는 Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1) 와 이의 펩티드 단편 S1200 서열번호 2), S1300서 ^번호 3) 및 S1400(서열번호 4) 의 아미노산서열, PI 및 Tm 정보를 보여준다.
【표 1】
Figure imgf000027_0001
참고로, 폴리펩티드 Ne으 Pep (서열번호 1)은 AIMP1 단백질 (서열번호 5)에서 6-46번째 아미노산 잔기에 해당한다.
MANNDAVLKRLEQ GAEADQ 11 EYLKQQVSLLKEKA I LQATLREEKKLRV
ENAKLKKEIEELKQELIQAEIQNGVKQIPFPSGTPLHANSMVSENVIQST AV VSSGTKEQIKGGTGDEKKAKEKIEKKGEKKEKKQQSIAGSADSKPI DVSRLDLRIGCI ITARKHPDADSLYVEEVDVGEIAPRTWSGLVNHVPLE QMQNRMVILLCNLKPAKMRGVLSQAMVMCASSPEKIEILAPPNGSVPGDR ITFDAFPGEPDKELNPKKKIWEQIQPDLHTNDECVATYKGVPFEVKGKGV CRAQTMSNSGIK 도 1에서' 확인할 수 있는 바와 같이, 상기 실험방법에 기재되어 있는 Procol l agen type I EL ISA Assay 방법을 사용한 결과, Neo— Pep 폴리펩티드 (서열번 호 1)와, 폴리펩티드 Ne으 Pep (서열번호 1)의 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함 하고 연속되는 15개의 아미노산으로 이루어진 본 발명의 폴리펩티드 단편 S1200서 열번호 2) 및 S1300 서열번호 3)의 콜라겐 (col l agen) 합성 유도효과가 대조군 (Con) 에 비해 우수하였다.
그리고, 폴리펩티드 Ne으 Pep (서열번호 1)의 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하지 않는 연속되는 15개의 아미노산으로 이루아진 폴리펩티드 Neo-Pep (서열번 호 1)의 단편인 S1400(서열번호 4)의 콜라겐 합성 유도효과는 대조군에 비해 약간 우수하였으나, 아래의 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이 섬유아세포 ( f ibrobl ast ) 증식 유도효과는 대조군보다 떨어졌다. 실시예 2 : 본 발명의 폴리펩티드의 섬유아세포 (Fibroblast ) 증식 유도 효과 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 상기 실험방법에 기재되어 있는 세포증 식 어세이 (CCK-8 Assay) 방법을 사용한 결과, 폴리펩티드 Neo-Pep (서열번호 1)와, 폴리펩티드 Neo-Pep (서열번호 1)의 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고 연속 되는 15개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩티드 단편 S1200 (서열번호 2) 및 S1300 (서열번호 3)의 섬유아세포 증식유도 효과가 대조군 (Con)에 비해 우수하였다.
이에 반해, 폴리펩티드 Neo-Pep (서열번호 1)의 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하지 않는 연속되는 15개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩티드 Ne으 Pep 서열번호 1)의 단편인 S1400C서열번호 4)의 섬유아세포 증식 유도효과는 대조 군보다 떨어졌다. 상기 실시예 1 및 2의 결과를 통해, 기존의 국내 특허 (특허등록번호 제 10- 0903984호, 등록일: 2009년 6월 15일)를 통해 본 발명자에 의해 콜라겐 합성 효과 가 이미 공지되어 있던 AIMP1 단백질의 6 내지 46번 아미노산 영역에 해당하는 Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1의 폴리펩티드)에서, S1200서열번호 2) 및 S1300( 서열번호 3)과 같이, Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1)의 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 활성 아미노산 잔기로 포함하고 연속되는 아미노산으로 이루어진 폴리펩티드 단편이 콜라겐 합성 유도 및 섬유아세포 증식을 유도함으로 써, 피부노화 방지, 주름 개선, 피부 유연증진 탄력 증진효과를 가진다는 것을 확 인하였다. 실시예 3: 본 발명의 폴리펩티드의 세포독성 (Cvtotoxicitv) 및 염증 유발 여부
도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 상기 실험방법에 기재되어 있는 세포독 성 어세이 (CCK-8 Assay) 방법을 사용한 결과, Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1)와 본 발명의 폴리펩티드에 속하는 S1200(서열번호 2) 및 S1300 (서열번호 3)을 사용한 경우, 대조군과 마찬가지로 상피세포의 생존능이 그대로 유지되어 안전성이 컸으 나, Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1)의 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하지 않는 S1400서열번호 4)은 상피세포의 생존능이 약간 떨어졌다. 참고로, 세포독성 의 정도를 비교하기 위해 강력한 세포독성제제인 독소루비신 (Doxorubucin, 10 ιι g/ml )을사용하였다.
또한, 도 4에서 볼 수 있는 바와 같이, 상기 실험방법에 기재되어 있는 TNF- α EL ISA 어세이 방법을 사용한 결과, Neo-Pep 폴리펩티드 (서열번호 1), 본 발명의 폴리펩티드에 속하는 S1200 서열번호 2) 및 S1300 서열번호 3), 및 Neo-Pep 폴리펩 티드 (서열번호 1)의 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하지 않는 S1400 서열번 호 4)에서 분비된 TNF- α 수치가 대조군 (Con)과 마찬가지 수준으로 매우 미미한 것으로 관찰되어 염증 등 면역반응을 거의 일으키지 않아서 체내 사용 시 안전할 수 있음을 시사하였다. 참고로, 염증 등 면역반웅 유발 정도를 비교하기 위해 강력 한 엔도특신으로서 면역반응을 일으키는 LPS ( l ipopolysaccharide, 10 ng/ml )를 사 용하였다.

Claims

【청구의 범위】
【청구항 1]
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12변째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드, 또는 상기 폴리펠티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열 로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
【청구항 2】
제 1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 1로 표시되는 아미노산서열에 서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 10 내지 15개의 아미노산 으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
[청구항 3】
제 1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시되 는 아미노산.서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
【청구항 4】
계 1항의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
【청구항 5】
제 4항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 7 또는 서열번호 8로 표 시되는 염기 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
【청구항 6】 ,
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열 로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진용 화장료 조성물.
【청구항 7】
제 6항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시되 는 아미노산서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
【청구항 8】 '
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열 로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진용 식품용 조성물.
【청구항 9]
거 18항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시되 는 아미노산서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 식품용 조성물.
【청구항 10】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 70% 이상을 가지는 아미노산 서열 로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리템티드를 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
【청구항 11】
제 10항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시 되는 아미노산서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
【청구항 12】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열에서 9 내지 12번째 아미노산 (KGAE)을 포함하고, 연속되는 4 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴 리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 서열 상동성 h 이상을 가지는 아미노산 서열 로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리템티드를 유효성분으로 포함하는, 피부노화 방지용 식품용 조성물.
【청구항 13] 제 12항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 서열번호 3으로 표시 되는 아미노산서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 식품용 조성물.
【청구항 14】
주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진용 제제를 제조하기 위한 게 1항의 폴리펩티드의 용도.
【청구항 15】
제 1항의 폴리펩티드의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특 징으로 하는 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진 방법.
【청구항 16]
피부 노화방지용 제제를 제조하기 위한 제 1항의 폴리펩티드의 용도. [청구항 17】
제 1항의 폴리펩티드의 유효량을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 특 징으로 하는 피부 노화방지 방법 .
PCT/KR2017/008077 2016-07-28 2017-07-27 신규한 aimp1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 조성물 WO2018021838A1 (ko)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201780058114.3A CN109715654A (zh) 2016-07-28 2017-07-27 Aimp1蛋白的新片段和包含该片段的用于保护皮肤的组合物
US16/320,431 US10800824B2 (en) 2016-07-28 2017-07-27 AIMP1 protein fragment and skin-protecting composition containing same as active ingredient
JP2019527104A JP7097084B2 (ja) 2016-07-28 2017-07-27 新規なaimp1タンパク質の断片とこれを有効成分として含む皮膚保護用組成物
EP17834779.5A EP3492489A4 (en) 2016-07-28 2017-07-27 NOVEL AIMP1 PROTEIN FRAGMENT AND SKIN PROTECTION COMPOSITION CONTAINING THE SAME AS ACTIVE INGREDIENT

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2016-0096240 2016-07-28
KR1020160096240A KR102336341B1 (ko) 2016-07-28 2016-07-28 신규한 aimp1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018021838A1 true WO2018021838A1 (ko) 2018-02-01

Family

ID=61016300

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2017/008077 WO2018021838A1 (ko) 2016-07-28 2017-07-27 신규한 aimp1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하는 피부 보호용 조성물

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10800824B2 (ko)
EP (1) EP3492489A4 (ko)
JP (1) JP7097084B2 (ko)
KR (1) KR102336341B1 (ko)
CN (1) CN109715654A (ko)
WO (1) WO2018021838A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021514344A (ja) * 2019-01-25 2021-06-10 ネオミックス カンパニー リミテッド 美白活性を有する新規ポリペプチド及びその使用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102017796B1 (ko) * 2016-07-28 2019-09-03 주식회사 큐어바이오 신규한 aimp1 단백질의 단편과 이를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070100329A (ko) * 2005-02-01 2007-10-10 주식회사 이매진 콜라겐 합성 및/또는 kgf 발현의 촉진 방법
KR101020658B1 (ko) * 2006-01-23 2011-03-09 주식회사 이매진 신규한 펩타이드 및 이의 용도

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2873852A1 (en) 2011-06-08 2012-12-13 Indiana University Research And Technology Corporation Monoclonal antibody and antigens for diagnosing and treating lung disease and injury

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070100329A (ko) * 2005-02-01 2007-10-10 주식회사 이매진 콜라겐 합성 및/또는 kgf 발현의 촉진 방법
KR101020658B1 (ko) * 2006-01-23 2011-03-09 주식회사 이매진 신규한 펩타이드 및 이의 용도

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM, SEO YOON ET AL.: "ARS-interacting Multi-functional Protein 1 Induces Proliferation of Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells by Accumulation of R-catenin via Fibroblast Growth Factor Receptor 2-mediated Activation of Akt", STEM CELLS AND DEVELOPMENT, vol. 22, no. 19, 14 May 2013 (2013-05-14), pages 2630 - 2640, XP055442125, DOI: doi:10.1089/scd.2012.0714 *
PARK, SANG GYU ET AL.: "Aminoacyl-tRNA Synthetase-interacting Multifunctional Proteins (AIMPs): A Triad for Cellular Homeostasis", IUBMB LIFE, vol. 62, no. 4, April 2010 (2010-04-01), pages 296 - 302, XP055459426 *
See also references of EP3492489A4 *
TATOA0222: "Get Rid of Wrinkles and Keep Your Skin Resilient Through Our Elasticity Care at TATOA CLINIC, the Dermatologist's Office at SINSA Station!", BEAUTY'S WONDER DRUG, 5 June 2014 (2014-06-05), Korea, XP009513682, Retrieved from the Internet <URL:http://blog.naver.com/tatoa0222/220021300464> *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021514344A (ja) * 2019-01-25 2021-06-10 ネオミックス カンパニー リミテッド 美白活性を有する新規ポリペプチド及びその使用
JP7064795B2 (ja) 2019-01-25 2022-05-11 ネオミックス カンパニー リミテッド 美白活性を有する新規ポリペプチド及びその使用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20180013089A (ko) 2018-02-07
JP7097084B2 (ja) 2022-07-07
KR102336341B1 (ko) 2021-12-08
EP3492489A4 (en) 2020-01-22
US20200010524A1 (en) 2020-01-09
US10800824B2 (en) 2020-10-13
EP3492489A1 (en) 2019-06-05
CN109715654A (zh) 2019-05-03
JP2019526276A (ja) 2019-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102436084B1 (ko) 신규 펩티드 및 이를 포함한 조성물
KR100903984B1 (ko) Aimp1 폴리펩티드 또는 이의 단편을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지, 주름 개선, 피부 유연 증진 및 탄력 증진용 화장료 조성물
CN107667112B (zh) 新型肽和含有其的组合物
CN111647043B (zh) 含有Hyp-Gly序列的一类抗血小板和抗血栓功能的寡肽
JP7039052B2 (ja) 新規なaimp1タンパク質の断片と、これを有効成分として含む発毛促進用組成物
KR20190101990A (ko) 펩티드 wkdeagkplvk를 포함하는 조성물
JP6259209B2 (ja) コラーゲン産生促進剤
JP5890100B2 (ja) 皮膚コラーゲン産生促進剤
JP2021526383A (ja) 細胞透過ペプチドと結合した融合タンパク質、および融合タンパク質または細胞透過ペプチドと上皮細胞成長因子を有効成分として含む組成物
CN111518164B (zh) Ace抑制肽p2、其应用及其制备方法
JP6877924B2 (ja) 表皮細胞間機能強化剤
US10800824B2 (en) AIMP1 protein fragment and skin-protecting composition containing same as active ingredient
KR100980352B1 (ko) 피부 콜라겐 생성 촉진제
JP6259208B2 (ja) ヒアルロン酸産生促進剤
JP2015000860A (ja) エラスチン産生促進剤
JP2012232915A (ja) 老化防止用皮膚外用剤
CN109415422B (zh) 超低分子角蛋白肽的制备方法及其的利用
EP2036922A1 (en) Novel antihypertensive peptide and use thereof
KR102622616B1 (ko) 유청 단백질 가수분해물 유래 활성 펩타이드를 포함하는 항산화, 항염 또는 노화억제용 조성물
US20240139291A1 (en) Collagen hydrolysate comprising gpcr ligand peptide
KR102107914B1 (ko) 메기 껍질로부터 정제된 항균 펩타이드
TW201019943A (en) A composition from chlorella pyrenoidosa extract and preparation method thereof
Tian et al. Anti-skin-aging effect of fish gelatin from Cynoscion acoupa by maintaining collagen matrix homeostasis on D-galactose induced aging mice
배인영 et al. Convergence Study on Preparation of Anti-aging Peptides from Fish Collagen Hydrolysates
KR102077984B1 (ko) 피부 주름 예방 및 개선용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17834779

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019527104

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017834779

Country of ref document: EP

Effective date: 20190228