WO2017194386A1 - Appareil pour le prélèvement de cellules souches adipeuses - Google Patents

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WO2017194386A1
WO2017194386A1 PCT/EP2017/060680 EP2017060680W WO2017194386A1 WO 2017194386 A1 WO2017194386 A1 WO 2017194386A1 EP 2017060680 W EP2017060680 W EP 2017060680W WO 2017194386 A1 WO2017194386 A1 WO 2017194386A1
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PCT/EP2017/060680
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Marc DAUVISTER
David Leleu
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Euromi
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    • A61M2202/08—Lipoids

Definitions

  • the invention relates to an apparatus for extracting fat cells and isolating stem cells in excellent condition and quickly.
  • the device pre-isolates a large volume of adipose-derived stem cells in a closed circuit isolated from the outside, thus reducing the risk of stem cell contamination.
  • Mesenchymal cells are stem cells present in the mesenchyme of the embryo. For example, they are present in the blood of umbilical cords They are able to differentiate into many types of cells such as osteoblasts (bone cells), chondrocytes (cartilage cells), myocytes (muscle cells), and adipocytes (fat cells) . They are also present in smaller amounts in various tissues of the adult organism such as bone marrow, adipose tissue, or the amniotic fluid. Other sources of stem cells in adults are explored. Adipose tissue appears to be one of the richest sources of stem cells. Unless stated otherwise in the text, when we speak of "stem cells” hereinafter, we refer to “mesenchymal stem cells of adipose origin. "
  • the adipose cells comprise numerous cells including unilocular white adipocytes, multilocular brown adipocytes, which together represent the parenchyma, as well as other cells constituting the stromal-vascular fraction of the adipose tissue, including fibroblasts, macrophages, blood and endothelial cells, and mesenchymal stem cells.
  • the white unilocular adipocytes constitute approximately 95% of the adipose tissue and are cells of diameter generally between 100 to 150 ⁇ . Their cytoplasm is entirely occupied by triglycerides while their nucleus is in periphery against the membrane.
  • White adipocytes secrete a large number of peptides ("adipokynes”) such as resistin, leptin, hormone regulating appetite and satiety (anorectic hormone) and apelin.
  • adipokynes such as resistin, leptin, hormone regulating appetite and satiety (anorectic hormone) and apelin.
  • the white adipocytes provide synthesis, storage and release of lipids.
  • Brown multilocular adipocytes are cells with a diameter of about 30 ⁇ . They contain many lipid droplets. It is hibernation cells that participate in thermogenesis that is accomplished by phosphorylation of fatty acids in many cytochrome-rich mitochondria, giving the cell its brown color. These cells are related to ⁇ -adrenergic nerve endings. The presence of brown adipocytes in adult humans has been highlighted since 2009 The isolation of stem cells present in adipose tissue is often long and complex, requiring many manipulations with many equipment, reagents or enzymes. Isolation techniques include for example a density gradient separation step, centrifugation, separation of non-adherent cells to specific substrates or enzymatic digestion (for example with collagenase). Once isolated, the stem cells can then be cultured to increase the number.
  • WO201 1 146924 describes a system for extracting fat cells through a canula subjected to ultrasonic vibration.
  • the fat cells thus collected in a container can be filtered to separate the larger fat cells from the rest of the sample.
  • filters of sizes between 200 and 800 ⁇ can be arranged in series to optimize the separation operation.
  • adipose cells and, in particular, white and brown adipocytes are often extracted in the form of large agglomerates composed of various cells, which are often damaged after extraction. , causing necrosis of many cells. D
  • WO2016015767 describes a method for isolating adipose tissue stem cells by filtering adipose tissue so as to recover a first fraction of liquid filtrate separated from a first retentate fraction comprising particles of sizes greater than a range of between 40. and 70 ⁇ , and then filtering the first liquid filtrate fraction so as to recover a second liquid filtrate fraction separated from a second retentate fraction comprising particles of sizes greater than a range between 8 and 20 ⁇ . Stem cells can then be recovered from the second liquid filtrate fraction. Stem cells can also be recovered from the first retentate fraction by a complex process.
  • WO2014033209 describes the use of a liposuction device of the type described in WO9844966 and US6336925 comprising a hollow cannula whose free end is subjected to a "nutation" type of oscillation movement comprising a component parallel to the axis of the cannula and an orbital component allowed to take adipose tissue substantially damaging the cells removed.
  • a liposuction device of the type described in WO9844966 and US6336925 comprising a hollow cannula whose free end is subjected to a "nutation" type of oscillation movement comprising a component parallel to the axis of the cannula and an orbital component allowed to take adipose tissue substantially damaging the cells removed.
  • the invention is as defined in the main claim and preferred embodiments are defined in the dependent claims.
  • the present invention comprises in particular a kit of elements intended to be used in the sampling and isolation of adipose stem cells, said kit of elements comprising:
  • a liposuction unit comprising:
  • a drive member preferably arranged in said handle and for transmitting to a coupling means reciprocal reciprocal reciprocal movement along a longitudinal axis, Z, at a frequency, f, and an amplitude, A ;
  • An elongated cannula having a length, L, and an outer diameter, D, and comprising a lumen extending from one or more inlet openings at a first end of the cannula, which is free at an orifice an outlet located at a second end adapted to be integrally coupled to the coupling means connected to the drive member, so that the cannula is substantially parallel to the longitudinal axis, Z;
  • a separation unit comprising a container containing a filtration unit for separating different phases of the extracted material
  • Dh is the average hydraulic diameter of openings
  • A is the average area of openings
  • P is the average perimeter of openings
  • the indices f and g refer to fine and coarse filters, respectively.
  • the movement transmitted by the drive member to the first free end of the cannula preferably defines a nutation movement comprising:
  • the frequency, f, of reciprocal periodic reciprocating movement along a longitudinal axis, Z, of the coupling means and of the longitudinal component of the first free end of the cannula is preferably between 1 and 40.degree. Hz, preferably between 5 and 20 Hz.
  • the amplitude, A, of this same component is preferably between 0.4 and 40 mm, preferably between 1.0 and 20.0 mm, more preferably between 2.0 and 10.0 mm, and even more preferably between 4.0 and 8.0 mm.
  • the orbital component of rotation of the first end of the cannula in the absence of external stresses is preferably substantially circular or elliptical and characterized by a large diameter, 2 ⁇ R, of length preferably between 1 and 20 mm.
  • the drive member may be pneumatic or electric.
  • An electrical member may include:
  • the coarse filter has a mean hydraulic diameter of openings, Dh g , between 50 and 100 ⁇ , preferably between 60 and 90 ⁇ .
  • Dhg is preferably greater than 70 ⁇ , still preferably greater than 75 ⁇ .
  • the coarse filter is preferably removable, allowing it to be removed from the container. Such a filter makes it possible to retain on the retentate side the adipocytes present in the adipose cells.
  • the fine filter preferably has a mean hydraulic diameter of openings, Dhf, between 4 and 20 ⁇ , preferably between 5 and 10 ⁇ .
  • Dhf is preferably less than 8 ⁇ , more than preferably less than 7 ⁇ .
  • the fine filter is preferably removable, allowing it to be removed from the container. Such a filter makes it possible to retain the stem cells on the retentate side.
  • the coarse filter (4f) may have openings of average hydraulic diameter, Dhg, between 70 and 100 ⁇ , preferably between 75 and 95 ⁇ , for retaining the white adipocytes;
  • the intermediate filter (4i) may have openings of average hydraulic diameter, Dhi, between 15 and 40 ⁇ , preferably between 20 and 35 ⁇ , for retaining the brown adipocytes; Dhi is preferably greater than 20 ⁇ and less than 40 ⁇ , for example Dhi can be between 21 and 38 ⁇ .
  • the fine filter (4f) may have openings of average hydraulic diameter, Dhf, between 4 and 12 ⁇ , preferably between 5 and 10 ⁇ , still preferably between 7 and 9 ⁇ , for retaining the stem cells.
  • a rinse solution to the retentate side of the coarse filter for rinsing the fat cells retained by the coarse filter and the stem cells retained by the fine filter.
  • a solution is preferably a physiological solution.
  • kit of the present invention are interconnected by tubes that allow the entire operation to isolate fat cells from the surrounding atmosphere.
  • tubes that allow the entire operation to isolate fat cells from the surrounding atmosphere.
  • the separation unit comprises an extraction tube fluidly connecting the lumen of the cannula to the retentate side of the coarse filter in the container; and the vacuum pump is fluidly connected by a vacuum tube to the container and, and by the container and the extraction tube, to the lumen of the cannula, which creates the depression necessary for the extraction of the fat cells. 'a patient.
  • the vacuum tube is preferably coupled to the container, either on the filtrate side, downstream of the fine filter or the retentate side, upstream of the coarse filter and preferably to a lid of the container.
  • the separation unit may further comprise an isolation unit comprising:
  • the first and second sealing plates can be rotatably mounted relative to the cylindrical container and trays supporting coarse and fine filters which are rigidly mounted relative to the cylindrical container. Conversely, the first and second sealing plates can be mounted rigidly with respect to the cylindrical container and the plates supporting the coarse and fine filters are rotatably mounted relative to the cylindrical container and the first and second sealing plates. .
  • An engine can induce a reciprocal rotational vibration to the rotatably mounted platens to promote the use of the filters by a sieving effect.
  • the present invention also relates to a method for isolating stem cells contained in a sample of fat cells, said method comprising the following operations:
  • the fat cells retained on the retentate side of the coarse filter are preferably rinsed with a rinsing liquid.
  • Small sized liquids and solids, including stem cells, thus detached from the fat cells are drawn through the openings of the coarse filter to the fine filter.
  • the present invention also relates to the use of, respectively, a kit and a separation unit as defined above for the isolation of adipose stem cells.
  • FIG.1 illustrates a variant of an apparatus according to the invention. illustrates an alternative variant of an apparatus according to the invention.
  • FIG. 3 represents three variants of separation units comprising two filters adapted to the present invention.
  • Fig.4 represents three variants of separation units comprising three filters adapted to the present invention.
  • Fig.5 shows two variants of separation units comprising (a) two filters and (b) three filters, adapted to the present invention and showing the principle of operation.
  • Fig. 6 illustrates a separation unit comprising a stem cell isolation unit (a) in the filtration position and (b) in a sealed position.
  • Fig. 7 illustrates a stem cell isolation unit (a) in the filtration position and (b) in a sealed position.
  • Fig. 8 illustrates two variants of nutation motions of the free end of the cannula.
  • Fig.9 shows an example of an electric drive member.
  • an apparatus according to the present invention consists of the assembly of several elements.
  • the apparatus comprises a liposuction unit (10) comprising:
  • a drive member (32) preferably arranged in said handle and for transmitting to a coupling means (2c) reciprocal reciprocal reciprocal movement along a longitudinal axis, Z, at a frequency, f , and an amplitude, A;
  • An elongated cannula (4) having a length, L, and an outer diameter, D, and comprising a lumen extending from one or more inlet openings (1 1) at a first end (41) of the cannula, which is free to an outlet located at a second end (42) adapted to be integrally coupled to the coupling means (2c) connected to the drive member (32), so that the cannula is substantially parallel to the longitudinal axis, Z.
  • the apparatus also comprises, on the one hand, a vacuum pump (5a) intended to create a vacuum in the lumen of the cannula for the removal of adipose tissue and, on the other hand, a separation unit comprising a container (4) containing a filtration unit for separating different phases of adipose tissue thus extracted.
  • a tube assembly fluidly connects the lumen of the cannula to the container through an extraction tube (3t), and the container to the vacuum pump through a vacuum tube (5t).
  • the vacuum pump is actuated, creating a depression in the lumen of the cannula (4) which, when the cannula is inserted through an incision under the skin of a patient, allows aspiration of adipose tissue through the lumen , the extraction tube (3t) to finish in the container (4) through the filtration unit.
  • the apparatus of the present invention is distinguished from known devices, including that described in WO201 1 146924, in that the filters used are much thinner.
  • the filtration unit of an apparatus according to the present invention comprises a coarse filter (4g), having hydraulic diameter openings.
  • Dh g coarse means, Dh g , between 30 and 120 ⁇ , preferably between 50 and 100 ⁇ , still preferably between 60 and 90 ⁇ , and is preferably greater than 70 ⁇ , for example greater than 75 ⁇
  • a fine filter (4f) having average hydraulic diameter openings, Dhf 4Af / Pf, which is at least two times smaller than the average hydraulic diameter, Dhg, where Dh is the average hydraulic diameter of openings, A is the average area openings, P is the average perimeter of the openings, and the indices f and g refer to the fine and coarse filters, respectively.
  • the fine filter has openings of average hydraulic diameter, Dhf, preferably between 4 and 20 ⁇ , preferably between 5 and 10 ⁇ .
  • Dhf is preferably less than 8 ⁇ , still preferably less than 7 ⁇ .
  • the coarse filter (4g) has a retentate side for retaining adipose cells and a filtrate side where liquids and other solids smaller than the average coarse hydraulic diameter, Dhg, passed through the coarse filter.
  • the fine filter (4f) is located downstream, on the filtrate side of the coarse filter and, like the coarse filter, it has a retentate side to retain stem cells that have passed through the filter coarse and filtrate side where liquids and other smaller solids passing through the fine filter pass.
  • the frequency, f, of reciprocal periodic reciprocal movement along a longitudinal axis, Z, the coupling means (2) and therefore the cannula of a liposuction unit according to the present invention is preferably between 1 and 40 Hz, preferably between 5 and 20 Hz.
  • the amplitude, A, of this movement can be between 0.4 and 40 mm, preferably between 1.0 and 20.0 mm, more preferably between 2.0 and 10.0 mm, and still more preferably between 4.0 and 8.0 mm (see Figures 8 and 9). It has been observed that ultrasonic frequencies can create more damage to aspirated fat tissue than lower frequencies.
  • the movement transmitted by the drive member at the first free end (41) of the cannula defines a nutation movement such that shown in Figure 8, comprising:
  • a longitudinal component of reciprocal periodic reciprocal translation along a longitudinal axis, Z preferably having a frequency, f, and an amplitude, A, as described above, and
  • the orbital component of the first end of the cannula in the absence of external stresses is substantially elliptical characterized by a large diameter, 2 ⁇ R, of length between 1 and 20 mm.
  • this type of liposuction unit guarantees the best integrity of the extracted cells, because the nutation movement of the first free end of the cannula seems to gently separate the various cells forming the adipose tissues and allows to suck individual cells or small cell clusters through the lumen that are collected in the container with a very high level of integrity, avoiding the necrosis of many cells that is not always detectable because intervening only after a few days.
  • FIG. 2 illustrates a preferred variant of the invention which is similar to the variant of FIG. 1 further comprising a source of a rinsing solution (6) directly fluidly coupled by means of a tube rinse (6t) at the retentate side of the coarse filter (4g).
  • the rinsing solution (6) makes it possible to rinse the adipose tissue cells as they enter the container (4) and, in particular, the adipose cells retained by the coarse filter and the stem cells retained by the fine filter (4f).
  • the flow of the rinsing solution may be controlled by a valve (6v) or a pump (not shown) located between the rinsing liquid source and the container (4).
  • the rinsing solution may simply be a physiological solution or any other solution allowing the separation of a fraction of the stem cells present among the adipocytes to drive them through the coarse filter (4g) (see Figure 5 (a)).
  • Figure 3 (a) to (c) illustrates three examples of separation units that may be used in the present invention.
  • the elements of the unit are shown separately and in the lower part, the elements are shown assembled, forming each time a variant of a separation unit.
  • the coarse (4g) and thin (4f) filters are removable, allowing them to be easily removed from the container (4).
  • Coarse and fine filters can be introduced into the container which is hermetically sealed by a lid (4c). This may include coupling means (43, 45, 46) of the container to a tube (3t, 5t, 6t).
  • the cover (4c) includes three coupling means.
  • the cover (4c) does not include coupling means (45) for connecting the container to a vacuum pump, because such means is arranged at a wall of the same container, preferably downstream, so the filtrate side, the fine filter (4f).
  • the vacuum pump sucks adipose tissue cells through coarse and fine filters.
  • the coupling means (45) to a vacuum pump corresponds to the discharge opening (4o) allowing the discharge of the very fine liquids and solids (53) passed through the fine filter and located on the filtrate side of it.
  • the discharge opening (4o) in the variant (c) need not include an exhaust valve (4v).
  • the separation unit in addition to a coarse filter (4g) and a fine filter (4f), the separation unit comprises an intermediate filter (4i) positioned between the coarse filter (4g) and the fine filter (4f).
  • the presence of an intermediate filter makes it possible to use a coarse filter having openings of larger dimensions than in the case of a system with two filters and thus to optimize the separation of the cells according to their sizes.
  • the coarse filter (4g) can be sized to retain retentate side including white adipocytes (52).
  • the intermediate filter (4i) can be sized to retain retentate side including brown adipocytes (51).
  • the fine filter (4f) serves to retain the stem cells (50) which are smaller than the adipocytes, while allowing the fines and liquids to pass (53).
  • the coarse filter (4f) may have openings with a mean hydraulic diameter, Dhg, of between 70 and 100 ⁇ , preferably between 75 and 95 ⁇ , so that retain the white adipocytes (52) and let the brown adipocytes, liquids and other finer solids pass.
  • the intermediate filter (4i) can then have openings of average hydraulic diameter, Dhi, between 15 and 40 ⁇ , preferably between 20 and 35 ⁇ in order to retain the brown adipocytes (51) and pass liquids and other solids more purposes.
  • Dhi is preferably greater than 20 ⁇ and less than 40 ⁇ , for example Dhi can be between 21 and 38 ⁇ .
  • the fine filter (4f) may have openings of average hydraulic diameter, Dhf, of between 4 and 12 ⁇ , preferably between 5 and 10 ⁇ , still preferably between 7 and 9 ⁇ in order to retain the stem cells (50 ) and passing liquids and other finer solids (53), which can be discharged through the discharge opening (4o) located at the bottom of the container, downstream of the fine filter.
  • Dhf average hydraulic diameter
  • the frequency and amplitude of the vibrations must be such that such a layer does not form, while ensuring that the cells are not damaged.
  • Flat filters are shown in the figures. It is clear that other geometries are possible.
  • the filters may form an upstream surface that is convex, for example cone-shaped or inverted dome or, conversely, that is concave, for example dome-shaped. Locating the coupling means (45) to a vacuum pump (5a) downstream of the fine filter also stimulates the passage of the cells through the filters (see Figures 2, 3 (b) & (c), 4 (b). ) & (c), 5 and 6).
  • this simple separation process by filtration makes it possible to perform isolation or pre-isolation of the stem cells which greatly facilitates their cultivation and / or subsequent uses.
  • the terms "isolation”, “pre-isolation” and “(pre-) isolation” and their derivatives are used interchangeably to designate an operation for isolating a fraction of stem cells by filtration of a sample. of adipose tissue.
  • the presence of the "pre” prefix depends on whether subsequent purification operations are necessary or not for the stem cell applications thus removed and (pre-) isolated.
  • stem cells remain in the adipocytes retained on the retentate side of the coarse filter (4g) and optionally the intermediate filter (4i), but as large volumes of adipose tissue can easily be collected from a patient, large amounts of stem cells can thus be (pre-) isolated extremely easily.
  • the advantage of the (pre) stem cell isolation system according to the present invention is that not only the pre-isolation operation by rinsing and filtering the stem cells, but also any other subsequent operations considered necessary, depending on the degree desired stem cell purity, can be done without ever exposing the stem cells to the ambient atmosphere by any of the following means.
  • a syringe (13p) or other pumping system can be connected to the retentate side of the fine filter (4f) by a recovery tube (13t).
  • the recovery tube (13t) can enter the container through the lid (4c) or it can be provided with a coupling means to the recovery tube (13t) and have a hollow lance extending to the inside the container, to the retentate surface of the fine filter (4f).
  • the stem cells on the retentate side can then be aspirated by the recovery syringe or piston (13t) without ever being exposed to the ambient atmosphere.
  • the separation unit comprises an isolation unit (40) of the stem cells comprising a container (47) cylindrical closed to a upstream end by a sealing plate (41g) of the coarse filter and at the other end down by a sealing plate (41f) of the fine filter.
  • the sealing trays (41f, 41g) comprise apertures (42f, 42g) connecting an outer surface to an inner surface of each tray and are rotatably mounted relative to the cylindrical container about its axis.
  • inner surface and “outer surface” are defined relative to the inside and outside of the cylindrical container (47).
  • the housing defined inside the cylindrical container (47), between the sealing plates (41f, 41g) comprises the coarse filter and the fine filter, each being mounted in openings arranged in sealed plates mounted parallel to the sealing plates (41f, 41g) and rigidly with respect to the cylindrical container (i.e. the filters can not rotate relative to the cylindrical container).
  • the coarse filter (4g) is in sealing contact with the inner surface of the sealing plate (41g) of the coarse filter
  • the fine filter (4f) is in sealing contact with the inner surface of the filter plate. sealing (41f) of the fine filter. Seals are provided for sealing between the sealing plates and the filters even when rotating the sealing plates with respect to the filters.
  • the openings (42f, 42g) of the sealing plates and the openings supporting the filters are such that, in a first filtration configuration illustrated in FIGS. 6 (a) and 7 (a), they face each other creating a fluidic passage between the outer surface of the sealing plate (41g) of the coarse filter to the outer surface of the sealing plate (41f) of the fine filter, allowing the filtering operation of the cells of the extracted adipose tissue, such as described above.
  • Figure 7 illustrates an example of such an insulation unit (40) exploded (without the cover (4c)), the coarse filter (4g) being separated from the sealing plate (41g) of the filter coarse, and the fine filter being separated from the sealing plate (41f) of the fine filter in order to show the relative movements of the sealing plates with respect to the filters.
  • the braces schematically indicate that the filters are in sealing contact with the sealing plates as shown in Figure 6.
  • the openings supporting the filters and the openings of the sealing plates are in the form of pie wedges separated from one another by neighborhoods tart of size at least equal, preferably a little larger.
  • the sealing plates in Figure 7 (a) are in their filtration configuration, with their openings (42f, 42g) facing the filters (4f, 4g) of corresponding geometry.
  • the simultaneous rotation of the sealing plates can for example be done by rotating an axis rigidly fixed to both of the sealing plates and rotating relative to the trays supporting the filters (for example by bearings as illustrated in FIG.
  • Other means known to those skilled in the art are possible and are not critical to the present invention [0046] It is clear that an insulation unit equivalent to that described above and illustrated in FIG. Figure 7 can be obtained by mounting the sealing trays rigidly with respect to the cylindrical container (47) and mounting the trays supporting the coarse and fine rotating filters with respect to the sealing trays.
  • the rotatably mounted trays can be connected to a motor causing a reciprocal rotation of controllable frequency and amplitude of the trays rotatably mounted relative to the rigidly mounted trays.
  • This reciprocal rotation keeps the mass of fat cells in the retentate portion of a filter in motion, which makes it possible to promote the passage of fluids and particles of smaller size, preventing the formation of a quasi-tight layer of fat cells. resting on the surface of a filter that prevents access to cells located upstream.
  • the filtration operation of the cells can take place with the sealing plates in their filtration configuration.
  • the sealing plates can be rotated to their sealed configuration.
  • the stem cells are then stored in the pre-isolation unit and sealed in the ambient atmosphere.
  • the pre-isolation unit can then be removed from the container (4) and transported for further manipulation or use of stem cells and (pre-) isolated without risk of contamination.
  • a nutation movement can be transmitted to the first free end (41) of a cannula by a drive member (32) of electrical or pneumatic type, preferably arranged in a handle (1) for handling the device.
  • a drive member (32) of electrical or pneumatic type preferably arranged in a handle (1) for handling the device.
  • An example of an electric drive member allowing such a movement is shown in Figure 8.
  • a hollow tube is mounted in a cavity of the handle allowing the translation in both directions of the hollow tube along its axis.
  • the coupling means (2c) which is mounted a cannula (2) is rigidly coupled to the upstream end of the hollow tube.
  • the hollow tube At its end downstream the hollow tube is inserted into a cylindrical cavity in fluid communication with a coupling means to the extraction tube (3t).
  • upstream and downstream are defined with respect to the direction of flow of the fat cells in the hollow tube during extraction (in the direction of the extraction tube (3t)).
  • Magnets (62) are mounted rigidly over the length of the hollow tube. Coils (61) surrounding the hollow tube are arranged in the handle so as to reciprocate the hollow tube back and forth in the cylindrical cavity at a frequency, f, passing an alternating current in the coils at the same frequency, f. Return springs (63) arranged around the hollow tube make it possible on the one hand to reduce the noise of the apparatus by preventing the hollow tube or the coupling means to the cannula (2c) from striking a wall of the handle at each end of travel of the hollow tube and, secondly, to push the hollow tube in the opposite direction.
  • a pneumatic drive member is used.
  • a pneumatic driver adapted to transmit a nutation movement to the first free end of a cannula is described in detail in WO2014033209 and can be used in the present invention.
  • the apparatus of the present invention is ideal for the removal of adipose tissue, and the separation of the cells taken according to their size in order to (pre-) isolate mesenchymal stem cells of adipose origin.
  • the process begins with the extraction of adipose tissue from a patient using the liposuction unit (10).
  • the liposuction unit is such that it transmits to the first free end of the cannula a nutation movement as explained above and illustrated in FIG. 8. Such a movement makes it possible to dislocate the adipose tissue agglomerates and to suck cells already strongly separated from each other.
  • the adipose tissue thus extracted are collected in the receptacle of the separation unit, on the retentate (or upstream) side of the coarse filter (4g).
  • the larger cells are retained by the coarse filter, such as white adipocytes and, in the absence of an intermediate filter, also brown adipocytes, while liquids and finer solids pass through the coarse filter and reach the side. filtrate of the coarse filter. If there is an intermediate filter (4i) the filtrate reaches the retentate (or upstream) side of said intermediate filter. In the absence of an intermediate filter, the filtrate reaches the retentate side of the fine filter (4f).
  • the intermediate filter (4i) makes it possible to retain cells of intermediate sizes, which are greater than that of the stem cells.
  • the fine filter makes it possible to retain the cells of the size of the stem cells.
  • the judicious choice of the size of the openings of the fine filter and the filter directly upstream of it makes it possible to optimize the pre-isolation operation of the stem cells.
  • the very fine liquids and solids having passed through the fine filter can be discharged through an evacuation opening (4o) located on the container (4) downstream of the fine filter.
  • the cells collected on the retentate side of the coarse filter are preferably rinsed with a rinsing solution, in order to further promote the detachment of the finer cells, including stem cells, cells of larger size. size such as brand and brown adipocytes.
  • the rinse solution creates a flow of particles flowing through the separation unit. If the connection means (45) to a vacuum pump (5a) is downstream of the fine filter, flow through the separation unit is favored. Vibrations may be applied to the filters, or to the entire separation unit.
  • Such a method does not claim to isolate all the stem cells present in a sample, as it would be necessary for bone marrow samples, available in small volumes only. Since the volumes of adipose tissue that can be extracted by liposuction are abundant in most patients, and adipose tissue contains a large amount of stem cells, the volume of stem cells that can be taken with this method is important. This method is more efficient than that proposed in WO201 1 146924 for two reasons. First, the size of the openings of the filters used is better suited to stem cell isolation.
  • a liposuction unit inducing a nutation movement at the free end of its cannula at frequencies of three to four orders of magnitude allows the cells of adipose tissue to be disaggregated into individual cells or agglomerates. small size, which can then be separated by substantially thinner filters than those used in WO201 1 146924.
  • the ultrasonic liposuction unit used in WO201 1 146924 sucks agglomerates from large sizes that would quickly clog the coarse filters (intermediate) and end of an apparatus according to the present invention, reason why, it is described in this document to use filters having openings of diameter greater than 200 ⁇ .

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Abstract

La présente invention concerne un appareil pour le prélèvement et l'isolation de cellules souches adipeuses, ledit kit d'éléments comprenant une unité de liposuccion(10) comprenant une canule (4) allongée soumise à un mouvement vibrationnel particulier dont le lumen est relié à une unité de séparation par l'intermédiaire d'une pompe à vide (5a), ladite unité de séparation comprenant une unité de filtration comprenant: (A) Un filtre grossier (4g), ayant des ouvertures de diamètre moyen compris entre 30 et 120µm, et, (B) Un filtre fin (4f) situé en aval, du côté filtrat du filtre grossier, ayant des ouvertures de diamètre moyen au moins deux fois plus petit que le diamètre moyen du filtre grossier.

Description

APPAREIL POUR LE PRÉLÈVEMENT DE CELLULES SOUCHES ADIPEUSES
DOMAINE DE L'INVENTION
[0001] L'invention se rapporte à un appareil permettant d'extraire des cellules adipeuses et d'en isoler des cellules souches en excellent état et rapidement. L'appareil permet une pré- isolation d'un volume important de cellules souches d'origine adipeuse dans un circuit fermé et isolé de l'extérieur, diminuant ainsi les risques de contamination des cellules souches.
ARRIÈRE-PLAN TECHNOLOGIQUE
[0002] Les cellules mésenchymateuses sont des cellules souches présentes dans le mésenchyme de l'embryon. Par exemple, elles sont présentes dans le sang des cordons ombilicaux Elles sont capables de se différencier en de nombreux types cellulaires comme les ostéoblastes (cellules osseuses), les chondrocytes (cellules cartilagineuses), myocytes (cellules musculaires), et adipocytes (cellules graisseuses). Elles sont également présentes en plus faibles quantités dans divers tissus de l'organisme adulte tels que la moelle osseuse, les tissus adipeux, ou encore le fluide amniotique. D'autres sources de cellules souches chez l'adulte sont explorées. Les tissus adipeux semblent être une des sources les plus riches de cellules souches. Sauf indiqué autrement dans le texte, lorsqu'on parle de « cellules souches » ci-après, on se réfère à des « cellules souches mésenchymateuses d'origine adipeuse. »
[0003] Les cellules adipeuses comprennent de nombreuses cellules incluant des adipocytes blancs uniloculaires, des adipocytes bruns multiloculaires qui, ensemble représentent le parenchyme, ainsi que d'autres cellules constituant la fraction stroma-vasculaire du tissu adipeux incluant des fibroblastes, des macrophages, des cellules sanguines et endothéliales, et des cellules souches mésenchymateuses. Les adipocytes blancs uniloculaires constituent environ 95% du tissu adipeux et sont des cellules de diamètre généralement compris entre 100 à 150 μιτι. Leur cytoplasme est entièrement occupé par des triglycérides tandis que leur noyau se trouve en périphérie contre la membrane. Les adipocytes blancs sécrètent un grand nombre de peptides (des « adipokynes ») comme la résistine, la leptine, hormone régulant l'appétit et la satiété (hormone anorexigène) et l'apeline. Les adipocytes blancs assurent la synthèse, le stockage et la libération des lipides.
[0004] Les adipocytes bruns multiloculaires sont des cellules de diamètre de l'ordre de 30 μιτι. Ils contiennent de nombreuses gouttelettes lipidiques. Ce sont les cellules de l'hibernation qui participent à la thermogenèse qui est accomplie par phosphorylation d'acide gras dans les nombreuses mitochondries riches en cytochrome, donnant sa couleur brune à la cellule. Ces cellules sont en rapport avec des terminaisons nerveuses β-adrénergique. La présence d'adipocytes bruns chez l'homme adulte a été mise en évidence depuis 2009 [0005] L'isolation des cellules souches présentes dans les tissus adipeux est souvent longue et complexe, nécessitant de nombreuses manipulations avec de nombreux équipements, réactifs ou enzymes. Les techniques d'isolation comprennent par exemple une étape de séparation par gradient de densité, par centrifugation, séparation des cellules non adhérentes à des substrats spécifiques ou digestion enzymatique (par exemple avec de la collagénase). Une fois isolées, les cellules souches peuvent alors être cultivées afin d'en augmenter le nombre.
[0006] WO201 1 146924 décrit un système d'extraction de cellules adipeuses à travers une canule soumise à une vibration ultrasonique. Les cellules adipeuses ainsi prélevées dans un récipient peuvent être filtrées pour séparer les adipocytes de plus grosse taille du reste du prélèvement. Plusieurs filtres successifs de tailles comprises entre 200 et 800 μιτι peuvent être agencés en série pour optimiser l'opération de séparation. Lors de l'extraction de tissus adipeux par liposuccion, y compris ultrasonique, les cellules adipeuses et, en particulier les adipocytes blancs et bruns, sont souvent extraits sous forme d'agglomérats de taille importante composés de diverses cellules, qui sont souvent endommagées après extraction, provoquant la nécrose de nombreuses cellules. D
[0007] WO2016015767 décrit un procédé pour isoler des cellules souches de tissus adipeux en filtrant des tissus adipeux de sorte à récupérer une première fraction de filtrat liquide séparée d'une première fraction de rétentat comprenant des particules de tailles supérieures à une plage comprises entre 40 et 70 μιτι, et ensuite en filtrant la première fraction de filtrat liquide de sorte à récupérer une seconde fraction de filtrat liquide séparée d'une seconde fraction de rétentat comprenant des particules de tailles supérieures à une plage comprises entre 8 et 20 μιτι. Des cellules souches peuvent alors être récupérées de la seconde fraction de filtrat liquide. Des cellules souches peuvent également être récupérées de la première fraction de rétentat par un procédé complexe. [0008] WO2014033209 décrit que l'utilisation d'un appareil de liposuccion du type décrit dans W09844966 et US6336925 comprenant une canule creuse dont l'extrémité libre est soumise à un mouvement d'oscillation de type « nutation » comprenant une composante parallèle à l'axe de la canule et une composante orbitale permettait de prélever des tissus adipeux en endommageant sensiblement moins les cellules prélevées. [0009] Qu'un appareil de liposuccion ultrasonique ou de nutation soit utilisé dans le procédé décrit dans WO201 1 146924, il n'en demeure pas moins que le niveau d'isolement des cellules ainsi obtenu reste souvent fort grossier et insuffisant et les cellules ainsi séparées doivent ensuite être traitées par des méthodes d'isolation conventionnelles et longues.
[0010] Il demeure donc un besoin d'un système permettant le prélèvement de tissus adipeux et d'isolation ou, en tout cas de pré-isolation, des cellules souches présentes dans les tissus prélevés en un temps court, ne nécessitant pas de nombreuses manipulations et pouvant être effectuées en circuit fermé. La présente invention propose une solution à ce problème. Les caractéristiques et avantages de la présente invention sont décrits dans la suite.
RÉSUMÉ DE L'INVENTION
[0011] L'invention est telle que définie dans la revendication principale et des variantes préférées sont définies dans les revendications dépendantes. La présente invention comporte notamment un kit d'éléments destiné à être utilisé dans le prélèvement et l'isolation de cellules souches adipeuses, ledit kit d'éléments comprenant :
(A) Une unité de liposuccion comprenant :
(a) Une poignée permettant la manipulation de l'appareil,
(b) Un organe d'entraînement agencé préférablement dans ladite poignée et permettant de transmettre à un moyen de couplage un mouvement réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, à une fréquence, f, et une amplitude, A;
(c) Une canule allongée ayant une longueur, L, et un diamètre extérieure, D, et comprenant un lumen s'étendant d'une ou plusieurs ouvertures d'entrée situées à une première extrémité de la canule, qui est libre à un orifice de sortie situé à une deuxième extrémité adaptée pour être couplée solidairement au moyen de couplage relié à l'organe d'entraînement, de sorte que la canule soit sensiblement parallèle à l'axe longitudinal, Z ;
(B) Une pompe à vide destinée à créer un vide dans le lumen de la canule pour le prélèvement de matière extraite comprenant des cellules adipeuses,
(C) Une unité de séparation comprenant un récipient contenant une unité de filtration permettant de séparer différentes phases de la matière extraite,
(D) Un ensemble de tubes permettant de connecter par voie fluide le lumen de la canule au récipient, et le récipient à la pompe à vide ;
Caractérisé en ce que, l'unité de filtration comprend :
(E) Un filtre grossier, ayant des ouvertures de diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg= 4Ag / Pg, compris entre 30 et 120 μιτι, et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules adipeuses et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de taille plus petite que le diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg, ayant traversé le filtre grossier et,
(F) Un filtre fin situé en aval, du côté filtrat du filtre grossier, ayant des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf = 4Af / Pf, qui est au moins deux fois plus petit que le diamètre hydraulique moyen, Dhg, des ouvertures du filtre grossier et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules souches ayant traversé le filtre grossier et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre fin et, dans lequel
Dh est le diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, A est l'aire moyenne des ouvertures, P est le périmètre moyen des ouvertures, et les indices f et g se réfèrent aux filtres fin et grossier, respectivement.
[0012] Le mouvement transmis par l'organe d'entraînement à la première extrémité libre de la canule définit de préférence un mouvement de nutation comprenant :
• une composante longitudinale de translation réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, et
• une composante orbitale de rotation autour de l'axe longitudinal, Z
[0013] La fréquence, f, du mouvement réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, du moyen de couplage et de la composante longitudinale de la première extrémité libre de la canule est de préférence comprise entre 1 et 40 Hz, de préférence entre 5 et 20 Hz. L'amplitude, A, de cette même composante est de préférence comprise entre 0.4 et 40 mm, de préférence entre 1.0 et 20.0 mm, de manière plus préférée entre 2.0 et 10.0 mm, et encore plus préférablement entre 4.0 et 8.0 mm. La composante orbitale de rotation de la première extrémité de la canule en l'absence de contraintes externes est de préférence sensiblement circulaire ou elliptique et caractérisée par un grand diamètre, 2 x R, de longueur comprise de préférence entre 1 et 20 mm.
[0014] L'organe d'entraînement peut être pneumatique ou électrique. Un organe électrique peut comprendre :
(a) un tube creux comprenant le moyen de couplage à la canule et monté en translation le long de son axe dans une cavité de la poignée et comprenant un ou plusieurs aimants distribués le long du tube creux,
(b) une ou plusieurs bobines entourant le tube creux et le ou les aimants, lesdites bobines étant reliées à un générateur de courant alternatif dont la fréquence est de préférence variable.
[0015] Dans une forme de réalisation préférée de l'invention, le filtre grossier a un diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, Dhg, compris entre 50 et 100 μιτι, de préférence entre 60 et 90 μιτι. Dhg est de préférence supérieur à 70 μιτι, encore de préférence supérieur à 75 μιτι. Le filtre grossier est de préférence amovible, permettant de le retirer du récipient. Un tel filtre permet de retenir du côté rétentat les adipocytes présents dans les cellules adipeuses. Le filtre fin a lui de préférence un diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, Dhf, compris entre 4 et 20 μιτι, de préférence entre 5 et 10 μιτι. Dhf est de préférence inférieur à 8 μιτι, encore de préférence inférieur à 7 μιτι. Le filtre fin est de préférence amovible, permettant de le retirer du récipient. Un tel filtre permet de retenir du côté rétentat les cellules souches.
[0016] Dans une variante préférée, l'unité de filtration comprend de plus un filtre intermédiaire) positionné entre le filtre grossier et le filtre fin, et ayant des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhi = 4Ai / Pi, caractérisé en ce que Dhf < Dhi < Dhg, et où l'indice i se réfère au filtre intermédiaire. Un tel filtre permet d'utiliser un filtre grossier d'ouvertures plus grandes, afin de retenir principalement les adipocytes blancs qui sont de plus grande taille, alors que les adipocytes bruns, ayant passé le filtre grossier, sont alors retenus par le filtre intermédiaire. Par exemple,
• Le filtre grossier (4f) peut avoir des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhg, compris entre 70 et 100 μιτι, de préférence entre 75 et 95 μιτι, permettant de retenir les adipocytes blancs ;
• Le filtre intermédiaire (4i) peut avoir des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhi, compris entre 15 et 40 μιτι, de préférence entre 20 et 35 μιτι, permettant de retenir les adipocytes bruns ; Dhi est de préférence supérieur à 20 μιτι et inférieur à 40 μιτι, par exemple Dhi peut être compris entre 21 et 38 μιτι.
• Le filtre fin (4f) peut avoir des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf, compris entre 4 et 12 μητι, de préférence entre 5 et 10 μιτι, encore de préférence entre 7 et 9 μιτι, permettant de retenir les cellules souches.
[0017] L'opération de séparation des différents types de cellules adipeuses est facilitée si les cellules à séparer sont entraînées par un fluide à travers les divers filtres. Pour cette raison, il est préférable de coupler fluidiquement une solution de rinçage au côté rétentat du filtre grossier permettant de rincer les cellules adipeuses retenues par le filtre grossier et les cellules souches retenues par le filtre fin. Une telle solution est de préférence une solution physiologique.
[0018] Les différents éléments du kit de la présente invention sont reliés entre eux par des tubes qui permettent lors de toute l'opération d'isoler les cellules adipeuses de l'atmosphère environnant. En particulier,
• l'unité de séparation comprend un tube d'extraction reliant par voie fluide le lumen de la canule au côté rétentat du filtre grossier dans le récipient ; et la pompe à vide est reliée par voie fluide par un tube de vide au récipient et, et par le récipient et le tube d'extraction, au lumen de la canule, ce qui crée la dépression nécessaire à l'extraction des cellules adipeuses d'un patient. [0019] Le tube de vide est de préférence couplé au récipient, soit du côté filtrat, en aval du filtre fin soit du côté rétentat, en amont du filtre grossier et de préférence à un couvercle du récipient.
[0020] Afin de ne jamais exposer les cellules adipeuses extraites et séparées, en particulier les cellules souches ainsi isolées, l'unité de séparation peut comprendre de plus une unité d'isolation comprenant :
(a) un récipient cylindrique fermé à une extrémité amont par un plateau d'étanchéité du filtre grossier et à l'autre extrémité avale par un plateau d'étanchéité du filtre fin formant ainsi un logement, les plateaux d'étanchéité comprenant des ouvertures reliant une surface externe à une surface interne de chaque plateau ;
(b) un premier plateau situé dans le logement et soutenant le filtre grossier dans des ouvertures agencées dans celui-ci et un second plateau situé dans le logement et soutenant le filtre fin dans des ouvertures agencées dans celui-ci, le premier plateau étant en contact étanche avec le plateau d'étanchéité du filtre grossier et le second plateau étant en contact étanche avec le plateau d'étanchéité du filtre fin, de sorte qu'une rotation des premier et second plateaux relative aux plateaux d'étanchéité des filtres grossier et fin, respectivement permette d'amener l'unité d'isolation alternativement:
(c) dans une configuration de filtration, dans laquelle les ouvertures des plateaux d'étanchéité des filtres grossier et fin fassent face aux ouvertures contenant les filtres grossier et fin, respectivement, et
(d) dans une configuration étanche, dans laquelle le logement est isolé de l'atmosphère ambiant et dans lequel aucune des ouvertures des plateaux d'étanchéité des filtres grossier et fin ne fasse face à aucune des ouvertures contenant les filtres grossier et fin, respectivement.
[0021] Les premier et second plateaux d'étanchéité peuvent être montés à rotation par rapport au récipient cylindrique et aux plateaux supportant les filtres grossier et fin qui sont eux montés rigidement par rapport au récipient cylindrique. A l'inverse, les premier et second plateaux d'étanchéité peuvent être montés rigidement par rapport au récipient cylindrique et les plateaux supportant les filtres grossier et fin sont eux montés à rotation par rapport au récipient cylindrique et aux premier et second plateaux d'étanchéité. Un moteur peut induire une vibration de rotation réciproque aux plateaux montés à rotation afin de favoriser l'utilisation des filtres, par un effet de tamisage. [0022] La présente invention concerne également un procédé pour isoler des cellules souches contenues dans un prélèvement de cellules adipeuses, ledit procédé comprenant les opérations suivantes :
(a) Recueillir un prélèvement de cellules adipeuses comprenant des cellules souches dans un filtre grossier dont les ouvertures ont un diamètre hydraulique moyen, Dhg = 4Ag / Pg, compris entre 30 et 120 μιτι, agencé dans un récipient et ayant un côté rétentat permettant de retenir les cellules adipeuses de taille supérieure à Dhg et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre grossier,
(b) Recueillir les liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre grossier dans un filtre fin positionné en aval du filtre grossier et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules souches et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre fin dont les ouvertures ont un diamètre hydraulique moyen, Dhf = 4Af / Pf, qui est au moins deux fois plus petit que le diamètre hydraulique moyen, DHg, des ouvertures du filtre grossier, dans lequel Dh est le diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, A est l'aire moyenne des ouvertures, P est le périmètre moyen des ouvertures, et les indices f et g se réfèrent aux filtres fin et grossier, respectivement, et
(c) Récupérer les cellules souches retenues dans le coté rétentat du filtre fin.
[0023] Les cellules adipeuses retenues du côté rétentat du filtre grossier, sont de préférence rincées par un liquide de rinçage. Les liquides et solides de petites tailles, y compris des cellules souches, ainsi détachés des cellules adipeuses sont entraînées à travers les ouvertures du filtre grossier, vers le filtre fin.
[0024] La présente invention concerne également l'utilisation de, respectivement, un kit et une unité de séparation tels que définis supra pour l'isolation de cellules souches adipeuses.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES
[0025] Ces aspects ainsi que d'autres aspects de l'invention seront clarifiés dans la description détaillée de modes de réalisation particuliers de l'invention, référence étant faite aux dessins des figures, dans lesquelles :
Fig.1 illustre une variante d'un appareil selon l'invention. illustre une variante alternative d'un appareil selon l'invention. Fig.3 représente trois variantes d'unités de séparation comprenant deux filtres adaptées à la présente invention.
.Fig.4 représente trois variantes d'unités de séparation comprenant trois filtres adaptées à la présente invention.
Fig.5 représente deux variantes d'unités de séparation comprenant (a) deux filtres et (b) trois filtres, adaptées à la présente invention et montrant le principe de fonctionnement.
Fig.6 illustre une unité de séparation comprenant une unité d'isolation des cellules souches (a) en position de filtration et (b) en position étanche.
Fig.7 illustre une unité d'isolation des cellules souches (a) en position de filtration et (b) en position étanche.
Fig.8 illustre deux variantes de mouvements de nutation de l'extrémité libre de la canule.
Fig.9 montre un exemple d'organe d'entraînement électrique.
DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS
[0026] Tel que représenté aux Figures 1 & 2, un appareil selon la présente invention consiste en l'assemblage de plusieurs éléments. L'appareil comprend une unité de liposuccion (10) comprenant :
(a) Une poignée (1 ) permettant la manipulation de l'appareil,
(b) Un organe d'entraînement (32) agencé préférablement dans ladite poignée et permettant de transmettre à un moyen de couplage (2c) un mouvement réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, à une fréquence, f, et une amplitude, A; et
(c) Une canule (4) allongée ayant une longueur, L, et un diamètre extérieure, D, et comprenant un lumen s'étendant d'une ou plusieurs ouvertures d'entrée (1 1 ) situées à une première extrémité (41 ) de la canule, qui est libre à un orifice de sortie situé à une deuxième extrémité (42) adaptée pour être couplée solidairement au moyen de couplage (2c) relié à l'organe d'entraînement (32), de sorte que la canule soit sensiblement parallèle à l'axe longitudinal, Z.
[0027] L'appareil comprend également, d'une part, une pompe à vide (5a) destinée à créer un vide dans le lumen de la canule pour le prélèvement de tissus adipeux et, d'autre part, une unité de séparation comprenant un récipient (4) contenant une unité de filtration permettant de séparer différentes phases des tissus adipeux ainsi extraits. Un ensemble de tubes permet de connecter fluidiquement le lumen de la canule au récipient par un tube d'extraction (3t), et le récipient à la pompe à vide par un tube de vide (5t). Lorsque l'unité de liposuccion, la pompe à vide et le récipient sont reliés les uns aux autres par le tube d'extraction et le tube de vide, l'appareil est opérationnel. La pompe à vide est actionnée, créant une dépression dans le lumen de la canule (4) ce qui, lorsque la canule est insérée à travers une incision sous la peau d'un patient, permet d'aspirer des tissus adipeux à travers le lumen, le tube d'extraction (3t) pour finir dans le récipient (4) à travers l'unité de filtration.
[0028] L'appareil de la présente invention se distingue des appareils connus, notamment celui décrit dans WO201 1 146924, en ce que les filtres utilisés sont beaucoup plus fins. En particulier, alors que dans WO201 1 146924 des filtres successifs de tailles comprises entre 200 et 800 μιτι sont utilisés, l'unité de filtration d'un appareil selon la présente invention comprend un filtre grossier (4g), ayant des ouverture de diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg, compris entre 30 et 120 μιτι, de préférence entre 50 et 100 μιτι, encore de préférence entre 60 et 90 μιτι, et est de préférence supérieur à 70 μιτι, par exemple supérieur à 75 μιτι, et un filtre fin (4f) ayant des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf = 4Af / Pf, qui est au moins deux fois plus petit que le diamètre hydraulique moyen, Dhg, où Dh est le diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, A est l'aire moyenne des ouvertures, P est le périmètre moyen des ouvertures, et les indices f et g se réfèrent aux filtres fin et grossier, respectivement. Le filtre fin a des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf, compris de préférence entre 4 et 20 μιτι, encore de préférence entre 5 et 10 μιτι. Dhf est de préférence inférieur à 8 μιτι, encore de préférence inférieur à 7 μητι. [0029] Le filtre grossier (4g) a un côté rétentat permettant de retenir des cellules adipeuses et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de taille plus petite que le diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg, ayant traversé le filtre grossier. Comme illustré aux Figures 3 et 5(a), le filtre fin (4f) est situé en aval, du côté filtrat du filtre grossier et, comme le filtre grossier, il a un côté rétentat permettant de retenir des cellules souches ayant traversé le filtre grossier et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre fin.
[0030] Contrairement à l'appareil décrit dans WO201 1 146924 qui fait vibrer l'extrémité libre de la canule à des fréquences ultrasoniques, la fréquence, f, du mouvement réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, du moyen de couplage (2) et donc de la canule d'une unité de liposuccion selon la présente invention est de préférence comprise entre 1 et 40 Hz, de préférence entre 5 et 20 Hz. L'amplitude, A, de ce mouvement peut être comprise entre 0.4 et 40 mm, de préférence entre 1.0 et 20.0 mm, de manière plus préférée entre 2.0 et 10.0 mm, et encore plus préférablement entre 4.0 et 8.0 mm (voir Figures 8 et 9). Il a été observé que les fréquences ultrasoniques peuvent créer plus de dommages aux tissus adipeux aspirés que des fréquences plus basses. [0031] Afin de préserver encore mieux l'intégrité des cellules extraites des tissus adipeux, il est préférable que le mouvement transmis par l'organe d'entraînement à la première extrémité (41 ) libre de la canule définisse un mouvement de nutation tel qu'illustré à la Figure 8, comprenant :
• une composante longitudinale de translation réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, ayant de préférence une fréquence, f, et une amplitude, A, telle que décrite supra, et
• une composante orbitale de rotation autour de l'axe longitudinal, Z.
[0032] Dans un mode de réalisation préféré, la composante orbitale de la première extrémité de la canule en l'absence de contraintes externes est sensiblement elliptique caractérisée par un grand diamètre, 2 x R, de longueur comprise entre 1 et 20 mm
[0033] Sur base de tests effectués, ce type d'unité de liposuccion garantit la meilleure intégrité des cellules extraites, car le mouvement de nutation de la première extrémité libre de la canule semble désolidariser de manière douce les différentes cellules formant les tissus adipeux et permet d'aspirer des cellules individuelles ou des agglomérats de cellules de petite taille à travers le lumen qui sont recueillies dans le récipient avec un niveau d'intégrité très élevé, permettant d'éviter la nécrose de nombreuses cellules qui n'est pas toujours détectable car n'intervenant qu'après quelques jours.
[0034] La Figure 2 illustre une variante préférée de l'invention qui est semblable à la variante de la Figure 1 comprenant de plus, une source d'une solution de rinçage (6) directement couplée fluidiquement à l'aide d'un tube de rinçage (6t) au côté rétentat du filtre grossier (4g). Comme illustré à la Figure 5(a), la solution de rinçage (6) permet de rincer les cellules des tissus adipeux alors qu'ils pénètrent dans le récipient (4) et, en particulier, les cellules adipeuses retenues par le filtre grossier et les cellules souches retenues par le filtre fin (4f). Le flux de la solution de rinçage peut être contrôlé par une valve (6v) ou une pompe (non illustrée) située entre la source de liquide de rinçage et le récipient (4). La solution de rinçage peut simplement être une solution physiologique ou toute autre solution permettant la séparation d'une fraction des cellules souches présente parmi les adipocytes pour les entraîner à travers le filtre grossier (4g) (voir Figure 5(a)).
[0035] La Figure 3(a) à (c) illustre trois exemples d'unités de séparation susceptibles d'être utilisées dans la présente invention. Dans la partie supérieure, les éléments de l'unité sont illustrés séparément et dans la partie inférieure, les éléments sont représentés assemblés, formant chaque fois une variante d'une unité de séparation. Dans les trois exemples illustrés à la Figure 3, les filtres grossier (4g) et fin (4f) sont amovibles, permettant de les retirer facilement du récipient (4). Les filtres grossier et fin peuvent être introduits dans le récipient qui est fermé hermétiquement par un couvercle (4c). Celui-ci peut comprendre des moyens de couplages (43, 45, 46) du récipient à un tube (3t, 5t, 6t). Dans la Figure 3(a) le couvercle (4c) comprend trois moyens de couplages. Un premier moyen de couplage (43) pour coupler le récipient à un tube d'extraction (3t) et à l'unité d'extraction, un second moyen (45) pour coupler le récipient à un tube de vide (5t) et à une pompe à vide pour créer une dépression dans le récipient et dans la canule de l'unité d'extraction, et un troisième moyen (46) pour coupler le récipient à un tube de rinçage et à une source de liquide de rinçage (6). Dans les variantes (b) et (c) de la Figure 3, le couvercle (4c) ne comprend pas de moyen de couplage (45) pour connecter le récipient à une pompe à vide, car un tel moyen est agencé à une paroi du récipient même, de préférence en aval, donc du côté filtrat, du filtre fin (4f). Ainsi, la pompe à vide aspire les cellules des tissus adipeux à travers les filtres grossier et fin. Dans la Figure 3(c), le moyen de couplage (45) à une pompe à vide correspond à l'ouverture d'évacuation (4o) permettant l'évacuation des liquides et solides très fins (53) ayant traversé le filtre fin et se trouvant du côté filtrat de celui-ci. Contrairement aux variantes (a) et (b) de la Figure 3, l'ouverture d'évacuation (4o) dans la variante (c) ne doit pas nécessairement comprendre une valve d'évacuation (4v).
[0036] Dans un mode de réalisation de l'invention, illustré aux Figures 4 et 5(b), outre un filtre grossier (4g) et un filtre fin (4f), l'unité de séparation comprend un filtre intermédiaire (4i) positionné entre le filtre grossier (4g) et le filtre fin (4f). Le filtre intermédiaire (4i) a des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhi = 4Ai / Pi, caractérisé en ce que Dhf < Dhi < Dhg, et où l'indice i se réfère au filtre intermédiaire. La présence d'un filtre intermédiaire permet d'utiliser un filtre grossier ayant des ouvertures de plus grandes dimensions que dans le cas d'un système à deux filtres et donc d'optimiser la séparation des cellules selon leurs tailles. Par exemple, comme illustré à la Figure 5(b), le filtre grossier (4g) peut être dimensionné pour retenir de son côté rétentat notamment les adipocytes blancs (52). Le filtres intermédiaire (4i) peut être dimensionné pour retenir de son côté rétentat notamment les adipocytes bruns (51 ). Enfin, le filtre fin (4f) sert à retenir les cellules souches (50) qui sont de plus petite taille que les adipocytes, tout en laissant passer les fines et les liquides (53).
[0037] Par exemple dans le cas d'une unité de séparation comprenant trois filtres, le filtre grossier (4f) peut avoir des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhg, compris entre 70 et 100 μιτι, de préférence entre 75 et 95 μιτι afin de retenir les adipocytes blancs (52) et laisser passer les adipocytes bruns, les liquides et autres solides plus fins. Le filtre intermédiaire (4i) peut alors avoir des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhi, compris entre 15 et 40 μιτι, de préférence entre 20 et 35 μιτι afin de retenir les adipocytes bruns (51 ) et laisser passer les liquides et autres solides plus fins. Dhi est de préférence supérieur à 20 μιτι et inférieur à 40 μιτι, par exemple Dhi peut être compris entre 21 et 38 μιτι. Enfin, le filtre fin (4f) peut avoir des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf, compris entre 4 et 12 μητι, de préférence entre 5 et 10 μιτι, encore de préférence entre 7 et 9 μιτι afin de retenir les cellules souches (50) et laisser passer les liquides et autres solides plus fins (53), qui peuvent être évacués par l'ouverture d'évacuation (4o) située au bas du récipient, en aval du filtre fin. [0038] Afin d'éviter qu'une couche compacte de cellules ne se forme à la surface d'un filtre grossier ou fin, qui empêcherait tout passage à travers ledit filtre à des particules plus fines mais séparées du filtre par une telle couche, il est possible d'appliquer une vibration à l'unité de séparation. Une telle vibration permet de disloquer toute couche compacte se formant ainsi. La fréquence et amplitude des vibrations doit être telle qu'une telle couche ne se forme pas, tout en s'assurant que les cellules ne soient pas endommagées. Des filtres plats sont représentés sur les Figures. Il est clair que d'autres géométries sont envisageables. Par exemple, les filtres peuvent former une surface amont qui est convexe, par exemple en forme de cône ou de dôme inversés ou, au contraire, qui est concave, par exemple en forme de dôme. Situer le moyen de couplage (45) vers une pompe à vide (5a) en aval du filtre fin permet également de stimuler le passage des cellules à travers les filtres (voir Figures 2, 3(b)&(c), 4(b)&(c), 5 et 6).
[0039] De manière surprenante, ce simple procédé de séparation par filtration permet d'effectuer une isolation ou pré-isolation des cellules souches qui permet de grandement faciliter leur culture et/ou utilisations ultérieures. Dans le présent document, les termes « isolation », « pré-isolation » et « (pré-) isolation » et leurs dérivés sont utilisés indifféremment pour désigner une opération d'isolation d'une fraction de cellules souches par filtration d'un prélèvement de tissus adipeux. La présence du préfixe « pré » dépend de si des opérations de purification ultérieures sont nécessaires ou pas pour les applications des cellules souches ainsi prélevées et (pré-) isolées. Au terme de l'opération de filtration, des cellules souches demeurent dans les adipocytes retenus du côté rétentat du filtre grossier (4g) et le cas échéant du filtre intermédiaire (4i), mais comme de grands volumes de tissus adipeux peuvent facilement être prélevés d'un patient, des quantités importantes de cellules souches peuvent ainsi être (pré-) isolées extrêmement facilement. L'avantage du système de (pré-) isolation des cellules souches selon la présente invention est que non seulement l'opération de pré-isolation par rinçage et filtration des cellules souches, mais également toutes autres opérations ultérieures considérées comme nécessaires, selon le degré de pureté des cellules souches désiré, peuvent se faire sans jamais exposer les cellules souches à l'atmosphère ambiante par l'un des moyens suivants.
[0040] Par exemple, tel qu'illustré à la Figure 2, une seringue (13p) ou autre système de pompage peut être relié au côté rétentat du filtre fin (4f) par un tube de récupération (13t). Le tube de récupération (13t) peut pénétrer dans le récipient à travers le couvercle (4c) ou celui-ci peut être muni d'un moyen de couplage au tube de récupération (13t) et avoir une lance creuse s'étendant à l'intérieur du récipient, jusqu'à la surface rétentat du filtre fin (4f). Les cellules souches se trouvant du côté rétentat peuvent alors être aspirées par la seringue ou piston de récupération (13t), sans jamais être exposées à l'atmosphère ambiant.
[0041] Dans un autre exemple, illustré aux Figures 6 et 7, l'unité de séparation comprend une unité d'isolation (40) des cellules souches comprenant un récipient (47) cylindrique fermé à une extrémité amont par un plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier et à l'autre extrémité avale par un plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin. Les plateaux d'étanchéité (41f, 41g) comprennent des ouvertures (42f, 42g) reliant une surface externe à une surface interne de chaque plateau et sont montés de sorte à pouvoir tourner par rapport au récipient cylindrique autour de son axe. Les expressions « surface interne » et « surface externe » sont définies par rapport à l'intérieur et à l'extérieur du récipient cylindrique (47).
[0042] Le logement défini à l'intérieur du récipient cylindrique (47), entre les plateaux d'étanchéité (41f, 41g) comprend le filtre grossier et le filtre fin, chacun étant montés dans des ouvertures agencées dans des plateaux étanches montés parallèles aux plateaux d'étanchéité (41f, 41g) et de manière rigide par rapport au récipient cylindrique (c'est-à-dire que les filtres ne peuvent entrer en rotation par rapport au récipient cylindrique). Corne illustré à la Figure 6, le filtre grossier (4g) est en contact étanche avec la surface interne du plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier et le filtre fin (4f) est en contact étanche avec la surface interne du plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin. Des joints d'étanchéité sont prévus permettant d'assurer l'étanchéité entre les plateaux d'étanchéité et les filtres même lors de la rotation des plateaux d'étanchéité par rapport aux filtres.
[0043] Les ouvertures (42f, 42g) des plateaux d'étanchéité et les ouvertures supportant les filtres sont telles que, dans une première configuration de filtration illustrée aux Figures 6(a) et 7(a), elles se font face créant un passage fluidique entre la surface externe du plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier jusqu'à la surface externe du plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin, permettant l'opération de filtration des cellules des tissus adipeux extraits, tels que décrits plus haut.
[0044] Dans une seconde configuration étanche, illustrée aux Figures 6(b) et 7(b), la rotation des plateaux d'étanchéité (41f, 41g) par rapport aux filtres, entraîne les ouvertures (42f, 42g) des plateaux d'étanchéité hors alignement avec l'une quelconque des ouvertures supportant les filtres. Grâce à des joints d'étanchéité, tout passage de fluide entre la surface externe du plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier jusqu'à la surface externe du plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin, isolant de manière étanche le logement défini par le récipient cylindrique de l'atmosphère environnant. [0045] La Figure 7 illustre un exemple d'une telle unité d'isolation (40) de manière explosée (sans le couvercle (4c)), le filtre grossier (4g) étant séparé du plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier, et le filtre fin étant séparé du plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin afin de montrer les mouvements relatifs des plateaux d'étanchéité par rapport aux filtres. Les accolades indiquent schématiquement que les filtres sont en contact étanche avec les plateaux d'étanchéité comme illustré à la Figure 6. Les ouvertures soutenant les filtres et les ouvertures des plateaux d'étanchéité ont la forme de quartiers de tarte séparés les uns des autres par des quartiers de tarte de taille au moins égale, de préférence un peu plus grandes. Les plateaux d'étanchéité à la Figure 7(a) sont dans leur configuration de filtration, avec leurs ouvertures (42f, 42g) faisant face aux filtres (4f, 4g) de géométrie correspondante. La rotation des plateaux d'étanchéité à l'aide d'un moyen de rotation (48) par rapport aux filtres qui restent statiques, entraîne les ouvertures (42f, 42g) face aux plateaux supportant les filtres grossier et fin. La rotation simultanée des plateaux d'étanchéité peut par exemple se faire par la rotation d'un axe fixé rigidement aux deux du plateaux d'étanchéité et à rotation par rapport aux plateaux supportant les filtres (par exemple par des roulements tels qu'illustrés à la Figure 6. D'autres moyens connus de l'homme du métier sont possibles et ne sont pas critiques à la présente invention. [0046] Il est clair qu'une unité d'isolation équivalente à celle décrite ci-dessus et illustrée dans la Figure 7 peut être obtenue en montant les plateaux d'étanchéité rigidement par rapport au récipient cylindrique (47) et en montant les plateaux soutenant les filtres grossier et fin à rotation par rapport aux plateaux d'étanchéité.
[0047] De plus, les plateaux montés à rotation peuvent être reliés à un moteur entraînant une rotation réciproque de fréquence et amplitude contrôlables des plateaux montés à rotation par rapport aux plateaux montés rigidement. Cette rotation réciproque maintient en mouvement la masse de cellules adipeuses se trouvant dans la partie rétentat d'un filtre ce qui permet de favoriser le passage des fluides et particules de plus petite taille en empêchant la formation d'une couche quasi-étanche de cellules adipeuses reposant sur la surface d'un filtre qui empêche l'accès aux cellules se trouvant en amont.
[0048] Avec une unité d'isolation (40) telle que discutée ci-dessus, l'opération de filtration des cellules peut avoir lieu avec les plateaux d'étanchéité dans leur configuration de filtration. Une fois l'opération de pré-isolation des cellules souches est terminée, les plateaux d'étanchéité peuvent être amenés par rotation à leur configuration étanche. Les cellules souches sont alors stockées dans l'unité de pré-isolation et protégées de manière étanche de l'atmosphère ambiante. L'unité de pré-isolation peut alors être retirée du récipient (4) et transportée pour d'autres manipulations ou utilisations des cellules souches ainsi (pré-) isolées sans risque de contamination.
[0049] On a vu plus haut que les meilleurs résultats d'isolation de cellules souches adipeuses a été obtenu avec un appareil de liposuccion dont l'extrémité libre de la canule était soumise à un mouvement de nutation. Un mouvement de nutation peut être transmis à la première extrémité libre (41 ) d'une canule par un organe d'entraînement (32) de type électrique ou pneumatique, de préférence agencé dans une poignée (1 ) permettant la manipulation de l'appareil. Un exemple d'organe d'entraînement électrique permettant un tel mouvement est illustré à la Figure 8. Un tube creux est monté dans une cavité de la poignée permettant la translation dans les deux sens du tube creux le long de son axe. Le moyen de couplage (2c) auquel vient se monter une canule (2) est couplé de manière rigide à l'extrémité amont du tube creux. A son extrémité avale le tube creux est inséré dans une cavité cylindrique en communication fluidique avec un moyen de couplage au tube d'extraction (3t). Les expressions « amont » et « avale » sont définies par rapport au sens d'écoulement des cellules adipeuses dans le tube creux lors de l'extraction (soit en direction du tube d'extraction (3t)).
[0050] Des aimants (62) sont montés de manière rigide sur la longueur du tube creux. Des bobines (61 ) entourant le tube creux sont agencées dans la poignée de sorte à provoquer un mouvement réciproque de va-et-vient du tube creux dans la cavité cylindrique à une fréquence, f, en passant un courant alternatif dans les bobines à la même fréquence, f. Des ressorts de retour (63) agencés autour du tube creux permettent, d'une part de réduire le bruit de l'appareil en évitant que le tube creux ou le moyen de couplage à la canule (2c) ne heurtent une paroi de la poignée à chaque fin de course du tube creux et, d'autre part de repousser le tube creux dans la direction opposée.
[0051] Dans un mode de réalisation alternatif, un organe d'entraînement pneumatique est utilisé. Par exemple un organe d'entraînement pneumatique adapté à transmettre un mouvement de nutation à la première extrémité libre d'une canule est décrit en détails dans WO2014033209 et peut ère utilisé dans la présente invention.
[0052] L'appareil de la présente invention est idéal pour le prélèvement de tissus adipeux, et la séparation des cellules prélevées en fonction de leur taille afin de (pré-) isoler des cellules souches mésenchymateuses d'origine adipeuse. Le procédé commence par l'extraction de tissus adipeux d'un patient à l'aide de l'unité de liposuccion (10). De préférence l'unité de liposuccion est telle qu'elle transmette à la première extrémité libre de la canule un mouvement de nutation tel qu'expliqué plus haut et illustré à la Figure 8. Un tel mouvement permet de disloquer les agglomérats de tissus adipeux et d'aspirer des cellules déjà fortement désolidarisées les unes des autres. Les tissus adipeux ainsi extraits sont recueillis dans le récipient de l'unité de séparation, du côté rétentat (ou amont) du filtre grossier (4g). Les cellules de taille supérieure sont retenues par le filtre grossier, telles les adipocytes blancs et, en l'absence d'un filtre intermédiaire, également les adipocytes bruns, alors que les liquides et les solides plus fins traversent le filtre grossier et atteignent le côté filtrat du filtre grossier. S'il y a un filtre intermédiaire (4i) le filtrat atteint le côté rétentat (ou amont) dudit filtre intermédiaire. En l'absence d'un filtre intermédiaire, le filtrat atteint le côté rétentat du filtre fin (4f). Le filtre intermédiaire (4i) permet de retenir des cellules de tailles intermédiaires, supérieures à celle des cellules souches. Le filtre fin permet de retenir les cellules de la taille des cellules souches. Le choix judicieux de la taille des ouvertures du filtre fin et du filtre directement en amont de celui-ci permet d'optimiser l'opération de pré-isolation des cellules souches. Les liquides et solides très fins ayant traversé le filtre fin peuvent être évacués par une ouverture d'évacuation (4o) située sur le récipient (4) en aval du filtre fin. [0053] Les cellules recueillies du côté rétentat du filtre grossier sont de préférence rincées à l'aide d'une solution de rinçage, afin de favoriser d'avantage le détachement des cellules plus fines, comprenant les cellules souches, des cellules de plus grosse taille telles les adipocytes brands et bruns. La solution de rinçage crée un flux de particules s'écoulant à travers l'unité de séparation. Si le moyen de connexion (45) à une pompe à vide (5a) se trouve en aval du filtre fin, l'écoulement à travers l'unité de séparation est favorisé. Des vibrations peuvent être appliquées aux filtres, ou à l'ensemble de l'unité de séparation.
[0054] Un tel procédé ne prétend pas isoler la totalité des cellules souches présentes dans un prélèvement, comme il serait nécessaire pour des prélèvements de la moelle osseuse, disponible en petits volumes uniquement. Comme les volumes de tissus adipeux qui peuvent être extraits par liposuccion sont abondants chez la plupart des patients, et que les tissus adipeux contiennent une quantité importante de cellules souches, le volume de cellules souches qu'on peut prélever avec cette méthode est important. Cette méthode est plus performante que celle proposée dans WO201 1 146924 pour deux raisons. Premièrement, la taille des ouvertures des filtres utilisés est mieux adaptée à l'isolation de cellules souches. Deuxièmement, l'utilisation d'une unité de liposuccion induisant un mouvement de nutation à l'extrémité libre de sa canule à des fréquences inférieures de trois à quatre ordres de magnitude permet de désagglomérer les cellules des tissus adipeux en cellules individuelles ou en agglomérats de petite taille, qui peuvent alors être séparés par les filtres sensiblement plus fins que ceux utilisés dans WO201 1 146924. Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, il est présumé que l'unité de liposuccion ultrasonique utilisée dans WO201 1 146924 aspire des agglomérats de grosses tailles qui engorgeraient rapidement les filtres grossier (intermédiaire) et fin d'un appareil selon la présente invention, raison pour laquelle, il est décrit dans ce document d'utiliser des filtres ayant des ouvertures de diamètre supérieur à 200 μιτι. Il ne suffit donc pas de réduire la taille des filtres décrits dans WO201 1 146924 pour arriver à la présente invention, car un tel appareil ne permettrait pas la séparation des gros agglomérats. D'un autre côté, l'utilisation d'une unité de liposuccion induisant un mouvement de nutation dans le procédé décrit dans WO201 1 146924 ne donnerait pas de bons résultats non plus, car les filtres trop grossiers laisseraient passer toutes les cellules et petits agglomérats ainsi recueillis. [0055] L'utilisation d'un appareil selon la présente invention est donc particulièrement avantageuse pour l'isolation de cellules souches adipeuses. REF DESCRIPTION
1 canule
1 i Extrémité libre de la canule
1o Sortie du lumen de la canule
2 Poignée de l'appareil de liposuccion
2c Moyen de couplage de la canule à l'organe d'entraînement
3t tube d'extraction
3v Valve de récupération 3b
4 Récipient
4c Couvercle du récipient
4f Filtre fin
4g Filtre grossier
4o Ouverture d'évacuation
4v Valve d'évacuation contrôlant l'ouverture d'évacuation
5a Pompe à vide
5t Tube de vide
6 Liquide de rinçage
6t Tube de rinçage
10 Unité de liposuccion
1 1 Ouvertures d'entrée du lumen de la canule
13p Seringue ou piston de récupération
13t Tube de récupération
40 Unité d'isolation des cellules souches
41f Plateau d'étanchéité du filtre fin
41g Plateau d'étanchéité du filtre grossier
42f Ouverture dans le plateau d'étanchéité du filtre fin
42g Ouverture dans le plateau d'étanchéité du filtre grossier
43 Moyen de couplage du récipient au tube d'extraction 3t
44 Moyen de couplage du récipient à l'ouverture d'évacuation 4o
45 Moyen de couplage du récipient au tube de vide 5t
46 Moyen de couplage du récipient au tube de rinçage 6t
47 Récipient pour cellules souches
48 Moyen de rotation des plateaux d'étanchéité.
50 Cellules souches
51 Adipocytes bruns
52 Adipocytes blancs
53 Liquides et solides très fins
61 Bobine
62 Aimant
63 Ressort de retour
A Amplitude du mouvement réciproque périodique selon un axe longitudinal Z
Af, Ag Aire moyenne des ouvertures du filtre grossier / fin
D Diamètre extérieur de la canule
Dhf, Dhg Diamètre hydraulique moyen des ouvertures du filtre grossier / fin f Fréquence
L Longueur de la canule
Pf, Pg Périmètre moyen des ouvertures du filtre grossier / fin
R Demi grand diamètre de la composante orbitale du mouvement de la canule
Z Axe longitudinal

Claims

REVENDICATIONS
1. Un kit d'éléments destiné à être utilisé dans le prélèvement et l'isolation de cellules souches adipeuses, ledit kit d'éléments comprenant :
(A) Une unité de liposuccion (10) comprenant :
(a) Une poignée (2) permettant la manipulation de l'appareil,
(b) Un organe d'entraînement (32) agencé préférablement dans ladite poignée et permettant de transmettre à un moyen de couplage (2c) un mouvement réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, à une fréquence, f, et une amplitude, A;
(c) Une canule (4) allongée ayant une longueur, L, et un diamètre extérieure, D, et comprenant un lumen s'étendant d'une ou plusieurs ouvertures d'entrée (1 1 ) situées à une première extrémité (41 ) de la canule, qui est libre à un orifice de sortie situé à une deuxième extrémité (42) adaptée pour être couplée solidairement au moyen de couplage (2c) relié à l'organe d'entraînement (32), de sorte que la canule soit sensiblement parallèle à l'axe longitudinal, Z;
(B) Une pompe à vide (5a) destinée à créer un vide dans le lumen de la canule pour le prélèvement de matière extraite comprenant des cellules adipeuses,
(C) Une unité de séparation comprenant un récipient (4) contenant une unité de filtration permettant de séparer différentes phases de la matière extraite, (D) Un ensemble de tubes (3t, 5t) permettant de connecter par voie fluide le lumen de la canule au récipient, et le récipient à la pompe à vide ;
Caractérisé en ce que, l'unité de filtration comprend :
(E) Un filtre grossier (4g), ayant des ouvertures de diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg= 4Ag / Pg, compris entre 30 et 120 μιτι, et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules adipeuses et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de taille plus petite que le diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg, ayant traversé le filtre grossier et,
(F) Un filtre fin (4f) situé en aval, du côté filtrat du filtre grossier, ayant des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf = 4Af / Pf, qui est au moins deux fois plus petit que le diamètre hydraulique moyen, Dhg, des ouvertures du filtre grossier et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules souches ayant traversé le filtre grossier et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre fin et, dans lequel
Dh est le diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, A est l'aire moyenne des ouvertures, P est le périmètre moyen des ouvertures, et les indices f et g se réfèrent aux filtres fin et grossier, respectivement.
2. Le kit selon la revendication 1 , dans lequel le mouvement transmis par l'organe d'entraînement à la première extrémité (41 ) libre de la canule définit un mouvement de nutation comprenant :
• une composante longitudinale de translation réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, et
• une composante orbitale de rotation autour de l'axe longitudinal, Z, et dans lequel la fréquence, f, du mouvement réciproque périodique de va-et-vient selon un axe longitudinal, Z, du moyen de couplage (2c) et de la composante longitudinale de la première extrémité libre de la canule est de préférence comprise entre 1 et 40 Hz, de préférence entre 5 et 20 Hz, et/ou son amplitude, A, est de préférence comprise entre 0.4 et 40 mm, de préférence entre 1.0 et 20.0 mm, de manière plus préférée entre 2.0 et 10.0 mm, et encore plus préférablement entre 4.0 et 8.0 mm.
3. Le kit selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le filtre grossier a un diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, Dhg, compris entre 50 et 100 μιτι, de préférence entre 60 et 90 μιτι et est de préférence amovible, permettant de le retirer du récipient.
4. Le kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le filtre fin a un diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, Dhf, compris entre 4 et 20 μιτι, de préférence entre 5 et 10 μιτι et est de préférence amovible, permettant de le retirer du récipient.
5. Le kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant de plus un filtre intermédiaire (4i) positionné entre le filtre grossier (4g) et le filtre fin (4f), et ayant des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhi = 4Ai / Pi, caractérisé en ce que Dhf < Dhi < Dhg, et où l'indice i se réfère au filtre intermédiaire.
6. Le kit selon la revendication 4, dans lequel :
• Le filtre grossier (4f) a des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhg, compris entre 70 et 100 μιτι, de préférence entre 75 et 95 μιτι ;
• Le filtre intermédiaire (4i) a des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhi, compris entre 15 et 40 μιτι, de préférence entre 20 et 35 μιτι ;
• Le filtre fin (4f) a des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf, compris entre 4 et 12 μητι, de préférence entre 5 et 10 μιτι, encore de préférence entre 7 et 9 μιτι.
7. Le kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel une solution de rinçage (6) est couplée fluidiquement au côté rétentat du filtre grossier (4g) permettant de rincer les cellules adipeuses retenues par le filtre grossier et les cellules souches retenues par le filtre fin (4f), la solution étant de préférence une solution physiologique.
8. Le kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel
• l'unité de séparation comprend un tube d'extraction (3t) reliant par voie fluide le lumen de la canule au côté rétentat du filtre grossier dans le récipient ; et
• la pompe à vide (5a) est reliée par voie fluide par un tube de vide (5t) au récipient et, et par le récipient et le tube d'extraction (3t), au lumen de la canule.
9. Le kit selon la revendication 7, dans lequel le tube de vide (5t) est couplé au récipient dans le côté filtrat, en aval du filtre fin ou, alternativement, du côté rétentat, en amont du filtre grossier, de préférence à un couvercle (4c) du récipient.
10. Le kit selon l'une quelconque des revendications 2 à 9, dans lequel la composante orbitale de rotation de la première extrémité de la canule en l'absence de contraintes externes est sensiblement elliptique caractérisée par un grand diamètre, 2 x R, de longueur comprise entre 1 et 20 mm.
1 1. Le kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant de plus une unité d'isolation (40) comprenant : (a) un récipient cylindrique (47) fermé à une extrémité amont par un plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier et à l'autre extrémité avale par un plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin formant ainsi un logement, les plateaux d'étanchéité (41f, 41g) comprenant des ouvertures (42f, 42g) reliant une surface externe à une surface interne de chaque plateau ; (b) un premier plateau situé dans le logement et soutenant le filtre grossier dans des ouvertures agencées dans celui-ci et un second plateau situé dans le logement et soutenant le filtre fin dans des ouvertures agencées dans celui-ci, le premier plateau étant en contact étanche avec le plateau d'étanchéité (41g) du filtre grossier et le second plateau étant en contact étanche avec le plateau d'étanchéité (41f) du filtre fin, de sorte qu'une rotation des premier et second plateaux relative aux plateaux d'étanchéité (41g,
41f) des filtres grossier et fin, respectivement permette d'amener l'unité d'isolation alternativement:
(c) dans une configuration de filtration, dans laquelle les ouvertures des plateaux d'étanchéité
(41g, 41f) des filtres grossier et fin fassent face aux ouvertures contenant les filtres grossier et fin, respectivement, et
(d) dans une configuration étanche, dans laquelle le logement est isolé de l'atmosphère ambiant et dans lequel aucune des ouvertures des plateaux d'étanchéité (41g, 41f) des filtres grossier et fin ne fasse face à aucune des ouvertures contenant les filtres grossier et fin, respectivement.
12. Le kit selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'organe d'entraînement (32) est un organe électrique comprenant :
(a) un tube creux comprenant le moyen de couplage (2c) à la canule et monté en translation le long de son axe dans une cavité de la poignée et comprenant un ou plusieurs aimants distribués le long du tube creux,
(b) une ou plusieurs bobines entourant le tube creux et le ou les aimants, lesdites bobines étant reliées à un générateur de courant alternatif dont la fréquence est de préférence variable.
13. Procédé pour isoler des cellules souches contenues dans un prélèvement de cellules adipeuses, ledit procédé comprenant les opérations suivantes :
(a) Recueillir un prélèvement de cellules adipeuses comprenant des cellules souches dans un filtre grossier (4g) dont les ouvertures ont un diamètre hydraulique moyen, Dhg = 4Ag / Pg, compris entre 30 et 120 μιτι, agencé dans un récipient (4) et ayant un côté rétentat permettant de retenir les cellules adipeuses de taille supérieure à Dhg et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre grossier,
(b) Recueillir les liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre grossier dans un filtre fin (4f) positionné en aval du filtre grossier et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules souches et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre fin dont les ouvertures ont un diamètre hydraulique moyen, Dhf = 4Af / Pf, qui est au moins deux fois plus petit que le diamètre hydraulique moyen, Dhg, des ouvertures du filtre grossier, dans lequel Dh est le diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, A est l'aire moyenne des ouvertures, P est le périmètre moyen des ouvertures, et les indices f et g se réfèrent aux filtres fin et grossier, respectivement, et
(c) Récupérer les cellules souches retenues dans le coté rétentat du filtre fin (4f).
14. Le procédé de la revendication 13, dans lequel les cellules adipeuses retenues du côté rétentat du filtre grossier (4g), sont rincées par un liquide de rinçage (6) et les liquides et solides de petites tailles, y compris des cellules souches, ainsi détachés des cellules adipeuses sont entraînées à travers les ouvertures du filtre grossier, vers le filtre fin (4f).
15. Utilisation d'une unité de filtration pour l'isolation de cellules souches adipeuses dans un côté rétentat d'un filtre fin (4f) de ladite unité de filtration, dans laquelle l'unité de filtration comprend :
(A) Un filtre grossier (4g), ayant des ouvertures de diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg= 4Ag / Pg, compris entre 30 et 120 μιτι et de préférence supérieur à 70 μιτι, et ayant un côté rétentat permettant de retenir des cellules adipeuses et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de taille plus petite que le diamètre hydraulique grossier moyen, Dhg, ayant traversé le filtre grossier et,
(B) Un filtre fin (4f) situé en aval, du côté filtrat du filtre grossier, ayant des ouvertures de diamètre hydraulique moyen, Dhf = 4Af / Pf, qui est au moins deux fois plus petit que le diamètre hydraulique moyen, Dhg, des ouvertures du filtre grossier et est de préférence inférieur à 8 μιτι et comprenant ledit côté rétentat permettant de retenir des cellules souches ayant traversé le filtre grossier et un côté filtrat où passent des liquides et autres solides de plus petite taille ayant traversé le filtre fin et, dans lequel Dh est le diamètre hydraulique moyen d'ouvertures, A est l'aire moyenne des ouvertures, P est le périmètre moyen des ouvertures, et les indices f et g se réfèrent aux filtres fin et grossier, respectivement.
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108949522A (zh) * 2018-07-19 2018-12-07 重庆医科大学附属第三医院(捷尔医院） 整形美容用自体脂肪活性细胞过滤装置
WO2020085688A1 (fr) * 2018-10-22 2020-04-30 엑셀 메디컬 센드리안 버허드 Dispositif de séparation de cellules souches adipeuses
CN112457967A (zh) * 2020-11-30 2021-03-09 天津迪安医学检验实验室有限公司 细胞分离装置及细胞分离方法
CN112892023A (zh) * 2021-01-19 2021-06-04 熊顺功 一种整形美容科用自体脂肪过滤箱
WO2021144602A1 (fr) 2020-01-17 2021-07-22 Plascere Pièce à main alimentée légère pour un dispositif de liposuccion et dispositif médical la comprenant
IT202000002599A1 (it) * 2020-02-10 2021-08-10 Promoitalia Group Spa “siringa dotata di mezzi per la separazione selettiva dei componenti di una miscela eterogenea multifase, in particolare delle cellule staminali derivate da tessuto adiposo, kit relativo, e metodo per il suo impiego”
US20210369943A1 (en) * 2018-10-17 2021-12-02 Stemcis Vessel and device for recovering and preparing adipose tissues
EP3928723A1 (fr) * 2020-06-24 2021-12-29 Avister-Medical Dispositif, dispositif de commande, système et procédé de liposuccion

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024114898A1 (fr) 2022-11-30 2024-06-06 Euromi Classificateur de tailles d'adipocytes et système de liposuccion le comprenant

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011146924A2 (fr) * 2010-05-21 2011-11-24 Sound Surgical Technologies, Llc Dispositif ultrasonore de récolte de tissu adipeux
WO2014033209A1 (fr) * 2012-08-29 2014-03-06 Euromi S.A. Appareil d'extraction et de réinjection de tissu adipeux
US20140081237A1 (en) * 2012-09-20 2014-03-20 Tissue Genesis, Inc. Hand-held micro-liposuction adipose harvester, processor, and cell concentrator
WO2016015767A1 (fr) * 2014-07-31 2016-02-04 Ivona Piergiuseppe Procédé et ensemble servant à l'extraction de composants cellulaires régénératifs de tissues adipeux

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011146924A2 (fr) * 2010-05-21 2011-11-24 Sound Surgical Technologies, Llc Dispositif ultrasonore de récolte de tissu adipeux
WO2014033209A1 (fr) * 2012-08-29 2014-03-06 Euromi S.A. Appareil d'extraction et de réinjection de tissu adipeux
US20140081237A1 (en) * 2012-09-20 2014-03-20 Tissue Genesis, Inc. Hand-held micro-liposuction adipose harvester, processor, and cell concentrator
WO2016015767A1 (fr) * 2014-07-31 2016-02-04 Ivona Piergiuseppe Procédé et ensemble servant à l'extraction de composants cellulaires régénératifs de tissues adipeux

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108949522A (zh) * 2018-07-19 2018-12-07 重庆医科大学附属第三医院(捷尔医院） 整形美容用自体脂肪活性细胞过滤装置
CN108949522B (zh) * 2018-07-19 2022-02-08 重庆医科大学附属第三医院(捷尔医院） 整形美容用自体脂肪活性细胞过滤装置
US20210369943A1 (en) * 2018-10-17 2021-12-02 Stemcis Vessel and device for recovering and preparing adipose tissues
WO2020085688A1 (fr) * 2018-10-22 2020-04-30 엑셀 메디컬 센드리안 버허드 Dispositif de séparation de cellules souches adipeuses
WO2021144602A1 (fr) 2020-01-17 2021-07-22 Plascere Pièce à main alimentée légère pour un dispositif de liposuccion et dispositif médical la comprenant
IT202000002599A1 (it) * 2020-02-10 2021-08-10 Promoitalia Group Spa “siringa dotata di mezzi per la separazione selettiva dei componenti di una miscela eterogenea multifase, in particolare delle cellule staminali derivate da tessuto adiposo, kit relativo, e metodo per il suo impiego”
EP3928723A1 (fr) * 2020-06-24 2021-12-29 Avister-Medical Dispositif, dispositif de commande, système et procédé de liposuccion
WO2021259558A1 (fr) 2020-06-24 2021-12-30 Avister-Medical Dispositif, dispositif de commande, système et procédé de liposuccion
CN112457967A (zh) * 2020-11-30 2021-03-09 天津迪安医学检验实验室有限公司 细胞分离装置及细胞分离方法
CN112892023A (zh) * 2021-01-19 2021-06-04 熊顺功 一种整形美容科用自体脂肪过滤箱

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