WO2017105295A1 - Блокаторы вируса гриппа - Google Patents

Блокаторы вируса гриппа Download PDF

Info

Publication number
WO2017105295A1
WO2017105295A1 PCT/RU2016/050080 RU2016050080W WO2017105295A1 WO 2017105295 A1 WO2017105295 A1 WO 2017105295A1 RU 2016050080 W RU2016050080 W RU 2016050080W WO 2017105295 A1 WO2017105295 A1 WO 2017105295A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
gly
sln
associate
influenza virus
human influenza
Prior art date
Application number
PCT/RU2016/050080
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Николай Владимирович БОВИН
Александр Борисович ТУЗИКОВ
Александр Александрович ЧИНАРЁВ
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр"
Publication of WO2017105295A1 publication Critical patent/WO2017105295A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof

Definitions

  • This invention relates to the chemistry of organic compounds, pharmacology and medicine, and relates to the development and preparation of co-associates consisting of various types of oligoglycine molecules that are highly effective in inhibiting influenza virus.
  • Influenza viruses can quickly change their own antigenic structure, sometimes even within one season. Due to this, they are able, firstly, to avoid the action of the body's immune defenses, and secondly, they become resistant to influenza drugs. This applies to all existing anti-flu drugs, no matter what mechanism they use.
  • the influenza virus has a strictly conserved region that can be a target for drugs - this is the receptor-binding region of hemagglutinin protein (HA).
  • HA hemagglutinin protein
  • the function of HA is to recognize and bind to the 6'SLN receptor (b'-Sialyl-N-acetyllactosamine, 6'-sialyl- (M-acetylactosamine) on the surface of human target cells.
  • the 6'SLN trisaccharide cannot be replaced with an analog or mimetic — it will not bind to all variants of HA; this is confirmed by the well-known fact that so far no one has been able to develop a drug that acts on the most attractive target for influenza virus therapy.
  • the molecule of the natural 6'SLN trisaccharide is an ideal blocker for HA, since all existing and future variants of HA must bind to it. The reason that the drug based on 6'SLN has not yet been created lies in the very low affinity of the 6'SLN trisaccharide for HA.
  • Tectomers are formed from several hundred or thousands of glycopeptide molecules, each of which consists of two sections: the first is 6'SLN, and the second is an oligoglycine peptide capable of association in water [3]. Tectomers block the influenza virus similarly to true polymers, but have two indisputable advantages: 1) they have a certain composition; 2) biodegradable and non-toxic.
  • the prototype of this invention are the tectomers described in PCT / EP2000 / 006139 (WO200102018). These tectomers did not achieve the high activity described for the true 6'SLN polymer derivatives; The reason for this, as we suggested, is the too close arrangement of the 6'SLN residues relative to each other in the associate (tectomeric particle), about 5 A, which complicates the interaction of HA with the trisaccharide.
  • the present invention is the creation of new effective inhibitors of human influenza viruses, promising for use in clinical practice.
  • the technical result of the invention is the development of inhibitors of human influenza viruses based on co-associates having a high blocking ability against influenza viruses and not having a toxic effect on the patient.
  • n is an integer from 4 to 6;
  • R represents H, NOOOCH 2 CH 2 CO—, or HOSH 2 CO—;
  • the molar ratio of compounds (I) and (II) in the co-associate is from 1: 10 to 1: 100.
  • the co-associates of the invention are characterized in that: the linker is —C 2 . 20 alkyl, optionally substituted with at least one of C (O), NH and / or at least one getoratome selected from O and / or S.
  • the number of O and / or S heteroatoms is 0-5.
  • co-associates are characterized in that:
  • Linker represents -0-C 2 - 3 alkyl-NH-C (0) -S1- 5 alkyl-C (0) -.
  • the linker is a -OCH 2 CH 2 CH 2 NHC (0) CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 C (0) -.
  • the technical result namely, the maximum virus-inhibitory activity of the co-associates of the invention, is also achieved by optimizing the structure of the inhibitor in two directions. The first is the ratio of the glycopeptide of general formula (I) and the peptide of general formula (II) in co-associates, the second is the values of n and m (the length of glycine fragments), which determine the ability to associate.
  • this technical result is achieved by developing a method for producing the above co-associates, comprising mixing aqueous solutions of a glycopeptide of general formula (I) and a peptide of general formula (II) at a temperature of 60-80 ° C in a molar ratio of glycopeptide and peptide from 1: 10 to 1: 100, followed by cooling to room temperature.
  • the present invention also relates to the use of the co-associates of the invention as inhibitors of human influenza viruses.
  • human influenza viruses are characterized in that the hemagglutinin of the virus binds to 6'SLN, in particular, the types of virus for which the co-associates of the invention can be used are A or B.
  • the subtype of human influenza virus Type A is H1 or NC.
  • the invention further relates to the use of the co-associates of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases associated with the human influenza virus.
  • the invention also includes pharmaceutical compositions for treating and / or preventing diseases associated with human influenza viruses, comprising a therapeutically effective amount of the co-associates of the invention.
  • a chaotropic agent is a substance capable of destroying hydrogen, for example, a thiocyanate anion or urea.
  • An associate (co-associate) is a physically stable (that is, one that can be reliably detected by physical methods) at the considered temperature, a complex of identical (associate) or different (co-associate) small molecules that are not interconnected by covalent bonds.
  • Tectomer is an associate (see above), formed from oligoglycines of a linear or branched structure.
  • a mixed tectomer is a co-associate (see above), formed from oligoglycines of a linear or branched structure.
  • alkyl refers to alkyl groups, usually having from two to twenty, preferably from two to five carbon atoms.
  • alkyl may mean ethyl, n-propyl, n-butyl, etc.
  • C 2 -4 alkyl means alkyl containing from 2 to 4 carbon atoms, and includes C 2 , C 3 , C 4 -alkyl groups.
  • alkyl as used herein means unbranched alkyl groups.
  • Influenza virus - as used herein means any strain of human influenza viruses whose hemagglutinin binds to 6'SLN. That is, any type of human influenza virus selected from types A or B. In particular, any type of human influenza virus type A that has a subtype of H1 or NS, determined by the antigenicity of the surface hemagglutinin protein; however, the virus subtype determined by the surface protein of neuraminidase can be any. Human influenza C viruses and avian viruses are not included in this document.
  • a linker is a molecular fragment connecting two functional fragments of a bioconjugate (glycopeptide), in this case the fragment responsible for binding to the virus, and the fragment responsible for association.
  • the linker does not significantly affect the properties of the bioconjugate, therefore, they strive to make it as simple as possible. Since the properties of the linker can be performed by an infinite variety of molecular fragments, it is difficult to define it in the form of a chemical formula, and therefore it is advisable to use the term “linker” as a substitute for the chemical formula.
  • pharmaceutically acceptable salts refers to those salts which, within the framework of a medical opinion, are suitable for use in contact with human and animal tissues without undue toxicity, irritation, allergic reaction, etc., and correspond to a reasonable balance of benefits and risk.
  • pharmaceutically acceptable non-toxic salts are those formed by inorganic acids, such as hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric and perchloric acids, or organic acids, such as acetic, oxalic, maleic, tartaric, succinic, citric or malonic acids.
  • Figure 1 Scheme of the formation of hypothetical associates (hypothetical glycotectomers) consisting of glycosylated derivatives of two-antenna oligoglyn peptides (glycopeptides) 6'SLN-nHHKep-Gly5-NH- (CH 2 ) 4-NH-Gly 5 -nHHKep- 6'SLN ;
  • Figure 3 Scheme of the formation of co-associates (mixed tectomers) consisting of 6'SLN-nHHKep-Gly5-NH- (CH 2 ) 4-NH-Gly 5 -nHHKep-6'SLN and Suc-Gly 5 -NH- ( CH 2) 4 - NH-Glys-Suc.
  • AFM mixed tectomer (co-associate) adsorbed on the surface of the mica; the composition of the co-associate is 6'SLN-nHHKep-Gly 6 -NH- (CH 2 ) 4 -NH-Gly 6 -nHHKep-6'SLN and Suc-Gly 6 -NH- (CH 2 ) 4 -NH-Gly 6 -Suc, ratio 1: 10; height - 85 A; diameter ⁇ 500 nm,
  • the co-associates of the invention are composed of different types of oligoglycine molecules.
  • the first co-associate molecule is a glycopeptide: oligoglycine with 6'SLN termination, which is responsible for binding to the influenza virus.
  • the second component of the co-associate according to the invention, the peptide with oligoglycine antennas, plays the role of a “diluent”, that is, it is able to form mixed associates with the first molecule, but does not contain a bulky substituent that interferes with the binding of the co-associate to HA ( Figure 3).
  • glycopeptides with oligoglycine antennas with the termination 6'SLN, 6'SLN-nHHKep-Gly m -NH- (CH 2 ) 4 -NH- Gly m -nnHKep-6'SLN are not capable of the formation of tectomers in an individual form. This is explained by steric barriers to association on the part of the bulky carbohydrate group ( Figure 1), which is confirmed by analytical gel chromatography ( Figure 4 A — only individual monomers are detected).
  • the maximum virus-inhibitory activity can be achieved by optimizing the structure of the inhibitor in two directions.
  • the first is the peptide / glycopeptide ratio
  • the second is the n and t values (the length of the glycine fragment), which determine the ability to associate.
  • the peptide / glycopeptide ratio of 100 given the flat architecture of the associates, means that the 6'SLN residues are spaced about 10 times apart compared to the hypothetical “undiluted” glycopeptide associate.
  • This arrangement corresponds to a distance between adjacent ligand residues (6'SLN) of about 50 A (10 x 5, where 5 A is the distance between the chains in the polyglycine-N package).
  • the distance of 50 A corresponds to the distance between the carbohydrate-binding centers in the hemagglutinin trimer.
  • the “dilution” of a glycopeptide with a peptide increases the distance between the 6'SLN residues in the co-associate, due to which hemagglutinin freely binds to its ligand.
  • the optimal distance i.e., peptide / glycopeptide ratio
  • hemagglutinin binding is consistent with the natural process.
  • “diluting” 100 times the expensive component with cheap reduces the cost per unit mass of the drug.
  • m and n according to the invention make it possible to obtain optimal co-associate structures with the highest inhibitory activity.
  • the subject of the invention also includes the administration to a subject in need of appropriate treatment or prophylaxis of a therapeutically effective amount of a co-associate of the invention.
  • a therapeutically effective amount is meant that amount of co-associate administered or delivered to the patient in which the patient is most likely to exhibit the desired response to treatment (prophylaxis).
  • the exact amount required can vary from subject to subject, depending on the age, body weight and general condition of the patient, the severity of the disease, the method of administration of the drug, combined treatment with other drugs, etc.
  • the co-associate of the invention or a pharmaceutical composition comprising the co-associate may be administered to the patient in any amount and by any route of administration effective for treating or preventing a disease.
  • compositions comprising the essence of the invention can be administered orally, parenterally, topically, and the like to the human or other animals.
  • the introduction can be carried out both once and several times a day, week (or any other time interval), or from time to time.
  • the co-associate can be introduced into the patient's body daily for a certain period of days (for example, 2-10 days), and then a period without taking the co-associate (for example, 1-30 days) follows.
  • compositions When the co-associate of the invention is used as part of a combination therapy regimen, a dose of each of the components of the combination therapy is administered during the required treatment period.
  • the compounds that make up the combination therapy can be administered into the patient's body both at a time, in the form of a dosage containing all the components, and in the form of individual dosages of the components.
  • the invention also relates to pharmaceutical compositions that contain the compounds of the invention (or a prodrug or other pharmaceutically acceptable derivative) and one or more pharmaceutically acceptable carriers, adjuvants, solvents and / or excipients, such as can be administered to the patient in conjunction with -associates constituting the essence of the present invention, and which do not destroy the pharmacological activity of this co-associate, and are also non-toxic when administered in doses sufficient for accurate delivery of a therapeutic amount of the compound.
  • compositions of this invention contain co-associates with pharmaceutically acceptable carriers, which may include any solvents, diluents, dispersions or suspensions, surfactants, isotonic agents, thickeners and emulsifiers, preservatives, astringents, lubricants materials, etc., suitable for a particular dosage form.
  • pharmaceutically acceptable carriers may include any solvents, diluents, dispersions or suspensions, surfactants, isotonic agents, thickeners and emulsifiers, preservatives, astringents, lubricants materials, etc.
  • Materials that may serve as pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, mono- and oligosaccharides, as well as their derivatives; gelatin; talc; excipients such as cocoa butter and suppository wax; oils such as peanut, cottonseed, safrole, sesame, olive, corn and soybean oil; glycols such as propylene glycol; esters such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic solution, Ringer's solution; ethyl alcohol and phosphate buffers.
  • excipients such as cocoa butter and suppository wax
  • oils such as peanut, cottonseed, safrole, sesame, olive, corn and soybean oil
  • glycols such as propylene glycol
  • esters such as ethyl oleate and ethyl laur
  • composition of the composition may be other non-toxic compatible lubricants, such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as dyes, release fluids, film-forming agents, sweeteners, flavors and fragrances, preservatives and antioxidants.
  • non-toxic compatible lubricants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • dyes such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • release fluids such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • film-forming agents such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • sweeteners such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • flavors and fragrances such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • preservatives and antioxidants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • the subject of this invention is also dosage forms — a class of pharmaceutical compositions whose composition is optimized for a particular route of administration into the body in a therapeutically effective dose, for example, for administration to the body orally, topically, pulmonally, for example, as an inhalation spray, or intravascularly, intranasally , subcutaneously, intramuscularly, as well as by the infusion method, in recommended dosages.
  • a therapeutically effective dose for example, for administration to the body orally, topically, pulmonally, for example, as an inhalation spray, or intravascularly, intranasally , subcutaneously, intramuscularly, as well as by the infusion method, in recommended dosages.
  • Dosage forms of the present invention may contain formulations prepared using liposome methods, microencapsulation methods, methods for preparing nanoforms of the preparation, or other methods known in the pharmaceutical art.
  • the active principle is mixed with one or more pharmaceutical excipients such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, silica, gum arabic, mannitol, microcrystalline cellulose, hypromellose or the like.
  • Tablets may be coated with sucrose, a cellulosic derivative, or other suitable coating materials. Tablets can be prepared in various ways, such as direct compression, dry or wet granulation, or hot fusion.
  • a pharmaceutical composition in the form of a gelatin capsule can be prepared by mixing the active principle with a solvent and filling the mixture with soft or hard capsules.
  • aqueous suspensions, isotonic saline solutions or sterile injectable solutions are used that contain pharmacologically compatible agents, for example propylene glycol or butylene glycol.
  • Table 1 shows the results of inhibitory activity with glycopeptide-associates 6'SLN-nHHKep-Gly 6 -NH- (CH 2) 4 -NH- Gly 6 -nnHKep-6'SLN and peptide Suc-Gly 6 - NH- (CH 2 ) 4-NH-Gly 6 -Suc with different peptide to glycopeptide ratios.
  • linker -OCH 2 CH 2 CH 2 NHC (0) CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 C (0) -.
  • the antiviral activity of co-associates is much higher: they inhibit the interaction of fetuin with the influenza virus already in micromolar concentrations (1C 50 ⁇ 0.1 -10 ⁇ mol), being 2-3 orders of magnitude more powerful inhibitors than monomeric 6'SLN, and also an order of magnitude more active than the tetraantenic analogue [3], capable of association without the presence of a “diluent”.
  • Polymeric inhibitor of influenza virus attachment protects mice from experimental influenza infection. Antiviral Res., 55, 201-205 (2002). ABTuzikov, AAChinarev, ASGambaryan, VAOIeinikov, DVKIinov, NBMatsko, VAKadykov, MAErmishov, IVDemin, VVDemin, PDRye, NVBovin. Polyglycine II nanosheets: Supramolecular antivirals? ChemBioChem, 4, 147-154 (2003). NVBovin, ABTuzikov, AAChinarev, ASGambaryan. Multimeric glycotherapeutics: new paradigm. Glycoconjugate J., 21, 471 -478 (2004).
  • Polymer-bound 6 'sialyl-N-acetyllactosamine protects mice infected by influenza virus.
  • ABTuzikov, ASGambaryan, LRJuneja, NVBovin Conversion of complex oligosaccharides into polymeric conjugates and their anti-influenza virus inhibitory potency. J. Carbohydr. Chem., 19, 1 191-1200 (2000).

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к химии органических соединений, фармакологии и медицине, а именно, к разработке и получению нового лекарственного средства для лечения заболеваний, вызванных вирусом гриппа человека. Для этого используют со- ассоциаты, состоящие из олигоглициновых молекул разного вида, а именно гликопептида, выбранного из гликопептидов общей формулы (I): 6'SLN-линкер-Glym-NH-(CH2)4-NH-Glym-линкер-6'SLN, и пептида, выбранного из пептидов общей формулы (II): R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-R в которых m, n, R и линкер имеют значения, указанные в описании. Причем молярное соотношение гликопептида и пептида в со-ассоциате составляет от 1:10 до 1:100. Данные со-ассоциаты обладают высокой эффективностью в ингибировании вирусов гриппа и являются перспективными для применения в клинической практике. Высокая ингибирующая активность достигается посредством оптимизации структуры со- ассоциата по двум направлениям – соотношение пептид/гликопептид, а также длина глицинового фрагмента, определяющие способность к ассоциации. Данное изобретение относится также к способу получения указанных со- ассоциатов и к фармацевтическим композициям, содержащим терапевтически эффективное количество со-ассоциатов по изобретению.

Description

Блокаторы вируса гриппа
Область техники
Данное изобретение относится к химии органических соединений, фармакологии и медицине и касается разработки и получения со-ассоциатов, состоящих из олигоглициновых молекул разного вида, обладающих высокой эффективностью в отношении ингибирования вируса гриппа.
Уровень техники
Вирусы гриппа способны быстро изменять собственную антигенную структуру, иногда даже в течение одного сезона. Благодаря этому они способны, во-первых, избегать действия иммунной защиты организма, а во-вторых, становятся резистентными к противогриппозным препаратам. Это касается всех существующих средств против гриппа, по какому бы механизму они ни действовали. В то же время, у вируса гриппа есть строго консервативный участок, который может быть мишенью для лекарственных средств - это рецептор-связывающий участок белка гемагглютинина (НА). Функция НА - узнавать и связываться с рецептором 6'SLN (б'-Sialyl-N-acetyllactosamine, 6'сиалил-(М- ацетиллактозамин)) на поверхности клеток-мишеней человека. Вирусу необходимо сохранять эту способность, в противном случае развитие инфекции не состоится. Важно отметить, что замены аминокислотных остатков в б'БЬЫ-узнающем участке гемагглютинина все-таки происходят, но только такие, которые не отменяют его связывание с трисахаридом 6'SLN. Когда с помощью рентгеноструктурного анализа с атомарным разрешением были изучены комплексы 6'SLN с разными НА вирусов гриппа человека, оказалось, что рецептор-связывающие участки белка гемагглютинина (НА) узнают не идентичные фрагменты трисахарида. Из этого следует два важных вывода. Во- первых, трисахарид 6'SLN нельзя заменить аналогом или миметиком - он не будет связываться со всеми вариантами НА; это подтверждается хорошо известным фактом, что до сих пор никому не удалось разработать препарат, действующий на самую привлекательную для терапии мишень вируса гриппа. Во-вторых, молекула природного трисахарида 6'SLN является идеальным блокатором для НА, так как все существующие и будущие варианты НА обязаны с ней связываться. Причина того, что лекарство на основе 6'SLN до сих пор не было создано, кроется в очень низком сродстве трисахарида 6'SLN к НА. В реальности, одна частица вируса связывается одновременно (кооперативно) с несколькими остатками 6'SLN на поверхности клетки, в результате чего сродство из слабого становится очень сильным. Поэтому полимерная форма 6'SLN (когда трисахарид ковалентно привязан к истинному полимеру в качестве боковой цепи) блокирует вирусы гриппа в -100-10000 раз сильнее, чем мономер 6'SLN [1 , 2, 4, 6]. Показана эффективность такого полимера для лечения зараженных мышей [5, 7]. В то же время, очевидно, что применение такого полимера для лечения людей невозможно. Поэтому вместо истинных полимеров были использованы молекулярные ассоциаты, так называемые тектомеры. Тектомеры формируются из нескольких сотен или тысяч молекул гликопептидов, каждая из которых состоит из двух участков: первый - это 6'SLN, а второй - олигогли иновый пептид, способный к ассоциации в воде [3]. Тектомеры блокируют вирус гриппа аналогично истинным полимерам, но обладают двумя неоспоримыми достоинствами: 1) имеют определенный состав; 2) биодеградируемы и нетоксичны.
Прототипом данного изобретения являются тектомеры, описанные в заявке РСТ/ЕР2000/006139 (WO200102018). Данные тектомеры не достигали той высокой активности, которая описана для истинных полимерных производных 6'SLN; причиной этого, как мы предположили, является слишком тесное расположение остатков 6'SLN относительно друг друга в ассоциате (тектомерной частице), около 5 А, что затрудняет взаимодействие НА с трисахаридом.
Поэтому существует необходимость создания новых эффективных ингибиторов вируса гриппа.
Раскрытие изобретения
Задачей настоящего изобретения является создание новых эффективных ингибиторов вирусов гриппа человека, перспективных для применения в клинической практике.
Техническим результатом изобретения является разработка ингибиторов вирусов гриппа человека на основе со-ассоциатов, обладающих высокой блокирующей способностью в отношении вирусов гриппа и не оказывающих токсического воздействия на пациента.
Указанный технический результат достигается путем получения со-ассоциатов двух типов соединений, а именно, соединения общей формулы (I):
6'SLN-nHHKep-Glym-NH-(CH2)4-NH-Glym-nHHKep-6'SLN (I), где m - целое число от 5 до 8;
и соединения общей формулы (II):
R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-R (II),
где п - целое число от 4 до 6;
R представляет собой Н, НООССН2СН2СО-, или НОСН2СО-;
или их фармацевтически приемлемых солей,
причем молярное соотношение соединений (I) и (II) в со-ассоциате составляет от 1 : 10 до 1 :100.
В части вариантов изобретения со-ассоциаты характеризуются тем, что т=6, п=6. В некоторых других вариантах воплощения изобретения со-ассоциаты по изобретению характеризуются тем, что: линкер представляет собой -С2.20алкил-, необязательно замещенный, по меньшей мере, одной из групп С(О), NH и/или, по меньшей мере, одним геторатомом, выбранным из О и/или S.
В некоторых наиболее предпочтительных варинатах воплощения изобретения количество гетероатомов О и/или S составляет 0-5.
В части вариантов изобретения со-ассоциаты характеризуются тем, что:
линкер представляет собой -0-С2-3алкил-МН-С(0)-С1-5алкил-С(0)-.
В некоторых конкретных вариантах изобретения линкер представляет собой -OCH2CH2CH2NHC(0)CH2CH2CH2CH2C(0)-. Технический результат, а именно, максимальная вирус-ингибирующая активность со-ассоциатов по изобретению, достигается также посредством оптимизации структуры ингибитора по двум направлениям. Первое - это соотношение гликопептида общей формулы (I) и пептида общей формулы (II) в со-ассоциатах, второе - величины п и т (длина глициновых фрагментов), определяющие способность к ассоциации. Кроме того, указанный технический результат достигается посредством разработки способа получения вышеуказанных со-ассоциатов, включающего смешивание водных растворов гликопептида общей формулы (I) и пептида общей формулы (II) при температуре 60-80 °С в молярном соотношении гликопептида и пептида от 1 : 10 до 1 : 100, с последующим охлаждением до комнатной температуры.
Настоящее изобретение также относится к применению со-ассоциатов по изобретению в качестве ингибиторов вирусов гриппа человека. Причем вирусы гриппа человека характеризуются тем, что гемагглютинин вируса связывается с 6'SLN, в частности, типы вируса, в отношении которых могут использоваться со-ассоциаты по изобретению, представляют собой А или В. Причем, в некоторых вариантах изобретения, подтип вируса гриппа человека типа А представляет собой Н1 или НЗ.
Кроме того, изобретение относится к применению со-ассоциатов по изобретению для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, ассоциированных с вирусом гриппа человека.
Изобретение также включает фармацевтические композиции для лечения и/или профилактики заболеваний, ассоциированных с вирусами гриппа человека, содержащие терапевтически эффективное количество со-ассоциатов по изобретению.
Подробное описание изобретения
Определения (термины)
Хаотропный агент - вещество, способное разрушать водородные например роданид-анион или мочевина. Ассоциат (со-ассоциат) - физически устойчивый (то есть, тот, который можно надежно обнаруживать физическими методами) при рассматриваемой температуре комплекс одинаковых (ассоциат) или разных (со-ассоциат) малых молекул, не соединенных между собой ковалентными связями.
Тектомер - ассоциат (см. выше), сформированный из олигоглицинов линейной или разветвленной структуры.
Смешанный тектомер - со-ассоциат (см. выше), сформированный из олигоглицинов линейной или разветвленной структуры.
Термин «алкил» в настоящем документе относится к алкильным группам, обычно имеющим от двух до двадцати, предпочтительно от двух до пяти атомов углерода. Например, «алкил» может означать этил, н-пропил, н-бутил и т.д. Термин С2-4 алкил означает алкил, содержащий от 2 до 4 атомов углерода, и включает С2, С3, С4-алкильные группы. Термин «алкил» в настоящем документе означает неразветвленные алкильные группы.
Вирус гриппа - в настоящем документе означает любой штамм вирусов гриппа человека, гемагглютинин которых связывается с 6'SLN. То есть любой тип вирусов гриппа человека, выбранного из типов А или В. В частности, любой тип вируса гриппа человека типа А, который имеет подтип Н1 или НЗ, определяющийся антигенностью поверхностного белка гемагглютинина; при этом подтип вируса, определяющийся поверхностным белком нейраминидаза, может быть любым. Вирусы человеческого гриппа С и птичьи вирусы не имеются в виду в настоящем документе.
Линкер - молекулярный фрагмент, соединяющий два функциональных фрагмента биоконъюгата (гликопептида), в данном случае фрагмента, ответственного за связывание с вирусом, и фрагмента, ответственного за ассоциацию. Линкер существенно не влияет на свойства биоконъюгата, поэтому его стремятся сделать максимально простым. Так как свойства линкера может выполнять бесконечное разнообразие молекулярных фрагментов, его сложно дефинировать в виде химической формулы, и поэтому целесообразно использовать термин "линкер" как заменитель химической формулы.
Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к таким солям, которые, в рамках проведенного медицинского заключения, пригодны для использования в контакте с тканями человека и животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.д., и отвечают разумному соотношению пользы и риска. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных солей могут служить соли, образованные неорганическими кислотами, такими как соляная, бромоводородная, фосфорная, серная и хлорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, щавелевая, малеиновая, винная, янтарная, лимонная или малоновая кислоты.. Описание рисунков
Рисунок 1 - Схема образования гипотетических ассо иатов (гипотетических гликотектомеров), состоящих из гликозилированных производных двухантенных олигогли иновых пептидов (гликопептидов) 6'SLN-nHHKep-Gly5-NH-(CH2)4-NH-Gly5-nHHKep- 6'SLN;
Рисунок 2 - Схема образования ассоциатов (тектомеров), состоящих из сукцинильных производных двухантенных олигоглициновых пептидов Suc-Gly5-NH-(CH2)4- NH-Gly5-Suc;
Рисунок 3 - Схема образования со-ассоциатов (смешанных тектомеров), состоящих из 6'SLN-nHHKep-Gly5-NH-(CH2)4-NH-Gly5-nHHKep-6'SLN и Suc-Gly5-NH-(CH2)4- NH-Glys-Suc.
Рисунок 4. Профили элюции растворов, содержащих 6'SLN-nHHKep-Gly6-NH-(CH2)4-
NH-Gly6-nnHKep-6'SLN (А) и смесь 6'SLN-nHHKep-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-nHHKep-6'SLN с
Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc в соотношении 1 : 10 (В);
наполнитель TSK-4000, колонка 7.5x300 мм, элюция - 0.2 М NaCI, 1 мл/мин,
линкер -OCH2CH2CH2NHC(0)CH2CH2CH2CH2C(0)-.
Рисунок 5. Изображение, полученное с помощью атомно-силовой микроскопии
(АСМ): смешанный тектомер (со-ассоциат), адсорбированной на поверхности слюды; состав со-ассоциата - 6'SLN-nHHKep-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-nHHKep-6'SLN и Suc-Gly6-NH- (CH2)4-NH-Gly6-Suc, соотношение 1 :10; высота - 85 А; диаметр ~ 500 нм,
линкер -OCH2CH2CH2NHC(0)CH2CH2CH2CH2C(0)-.
Подробное раскрытие изобретения
Со-ассоциаты по изобретению состоят из олигоглициновых молекул разного вида. Первая молекула со-ассоциата - это гликопептид: олигоглицин с терминацией 6'SLN, отвечающий за связывание с вирусом гриппа. Второй компонент со-ассоциата по изобретению - пептид с олигоглициновыми антеннами - играет роль «разбавителя», то есть способен образовывать смешанные ассоциаты с первой молекулой, но не содержит объемного заместителя, мешающего связыванию со-ассоциата с НА (Рисунок 3).
Было показано, что производные пептида с олигоглициновыми антеннами по изобретению (R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-R) ассоциируют в водных растворах (Рисунок 2), что подтверждается данными аналитической гель-хроматографии. Образующиеся ассоциаты (тектомеры) могут быть обратимо разрушены при нагревании, под действием кислот и хаотропных агентов (данные светорассеяния). Методом Раман-спектроскопии продемонстрировано, что ассоциация сопровождается образованием структуры полиглицин -II: спектр водного раствора Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc содержит характерные полосы поглощения (884, 1 382, 1 424, 1 654 см"1). Методом атомно-силовой микроскопии (ACM) было показано, что адсорбированные на поверхности слюды тектомеры Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc представляют собой плоские двумерные образования с планарными размерами 50-500 нм и высотой 50 А.
В отличие от производных пептида с олигоглициновыми антеннами, гликопептиды с олигоглициновыми антеннами с терминацией 6'SLN, 6'SLN-nHHKep-Glym-NH-(CH2)4-NH- Glym-nnHKep-6'SLN, не способны к образованию тектомеров в индивидуальной форме. Это объясняется стерическими препятствиями ассоциации со стороны объемной углеводной группы (Рисунок 1), что подтверждается данными аналитической гель-хроматографии (Рисунок 4 А - детектируются только отдельные мономеры). Однако неожиданно оказалось возможным получить тектомеры смешанного состава, состоящие из молекул 6'SLN-nHHKep-Glym-NH-(CH2)4-NH-Glym-nHHKep-6'SLN и R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-R. Для этого водный раствор R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-R в течение короткого времени нагревают при 70°С с целью разрушения содержащихся в нем тектомеров. К нагретому раствору добавляют раствор, содержащий расчетное количество 6'SLN-nHHKep-Glym-NH-(CH2)4-NH- Glym-nnHKep-6'SLN, после чего полученный раствор охлаждают до комнатной температуры. В результате смешивания указанных выше растворов происходит процесс реассоциации R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn, в ходе которого молекулы гликопептидов включаются в состав вновь образующихся тектомеров (Рисунок 3). Образование смешанных тектомеров (со-ассоциатов) подтверждается данными аналитической гель- хроматографии (Рисунок 4 В, - большая часть соединений детектируется в составе со- ассоциатов) и АСМ (Рисунок 5 - видна обширная плоская супрамолекулярная структура в одну молекулу толщиной и в несколько сотен молекул в латеральных направлениях).
Как уже отмечалось выше, максимальная вирус-ингибирующая активность может быть достигнута посредством оптимизации структуры ингибитора по двум направлениям. Первое - это соотношение пептид/гликопептид, второе - величины п и т (длина глицинового фрагмента), определяющие способность к ассоциации. Так в частности, соотношение пептид/гликопептид равное 100, учитывая плоскую архитектуру со- ассоциатов, означает дистанцирование остатков 6'SLN примерно в 10 раз по сравнению с гипотетическим «неразбавленным» ассоциатом гликопептида. Такое расположение соответствует расстоянию между соседними остатками лиганда (6'SLN) примерно 50 А (10 x 5, где 5 А - это расстояние между цепями в упаковке «полиглицин-Н»). Расстояние 50 А соответствует расстоянию между углевод-связывающими центрами в тримере гемагглютинина. Таким образом, «разбавление» гликопептида пептидом увеличивает расстояние между остатками 6'SLN в со-ассоциате, благодаря чему гемагглютинин беспрепятственно связывается со своим лигандом. Более того, при оптимальном расстоянии (то есть соотношении пептид/гликопептид) между лигандами, связывание гемагглютинина соответствует природному процессу. Кроме того, «разбавление» в 100 раз дорогого компонента дешевым уменьшает стоимость единицы массы препарата. Помимо этого, указанные значения m и п по изобретению (то есть длина олигоглицинового фрагмента в молекулах пептида и гликопептида в со-ассоциатах) позволяют получить оптимальные структуры со-ассоциатов, обладающие наибольшей ингибирующей активностью.
Возможность объективного проявления технического результата при использовании изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, содержащих сведения экспериментального характера, полученных в процессе проведения исследований по методикам, принятым в данной области. Сущность изобретения поясняется рисунками.
Следует понимать, что эти и все приведенные в материалах заявки примеры не являются ограничивающими и приведены только для иллюстрации настоящего изобретения.
Получение соединений по изобретению
Общая схема синтеза компонентов со-ассоциатов
Прежде всего, синтезируют пептиды, состоящие из тетраметилендиамина и двух присоединенных к нему олигоглициновых антенн, H-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-H, п = 2, 4 и 6. Далее получают производные пептидов, у которых с концами олигоглициновых антенн связаны полярные группы, такие как остатки янтарной кислоты (Sue), либо трисахаридные группы, такие как Νβυ5Αοα2-6Θ8ΐβ1 -4ΘΙοΝΑοβ- (6'SLN). Синтез указанных соединений осуществлялся в соответствии со Схемой 1.
Figure imgf000010_0001
Схема 1. Общая схема синтеза двухантенных олигогли инов, сук инильных производных и гликопептидов на их основе (Вое- mpem-бутилпероксикарбонил, ONp - 4- нитрофенил, ONSu - Ν-гидроксисук инимидил, Sue - сук инил, ДМСО - диметилсульфоксид, NEt3 - триэтиламин, многоточие на схеме означает, что данная совокупность операций проводится несколько раз).
Синтез индивидуальных гликопептидов, содержащих 6'SLN, подробно описан в [8, 9].
Примеры синтеза индивидуальных пептидов по изобретению, а также получения со-ассоцатов приведены ниже.
Пример 1. Синтез Suc-GIVfi-NH-fCHpb-NH-GIVg-Suc, ди-литиевая соль.
К интенсивно перемешиваемой суспензии 100 мг (92 мкмоль) диамина TFAx H-Gly6-NH-(CH2)2-NH-Gly6-HxTFA в 5 мл 6М LiCI порциями (3 χ 20 мг), через интервалы ~ 12 ч, добавляли янтарный ангидрид. Через 48 ч реакционную смесь разбавили водой в два раза, нанесли на колонку с гелем Sephadex LH-20 (25- χ 400 мм) и хроматографировали, элюируя смесью 0.05 М ΝΗ3 в MeCN/H20, 1 : 1. Фракции, содержащие продукт, упарили, остаток суспендировали в 10 мл Н20 и лиофилизовали. Продукт получили в виде бесцветного порошка.
Выход продукта - 85,8 мг (87%); м.п. >250 °С (с разл.), ТСХ: Я, 0.3 (MeOH/MeCN/1 М Ру АсОНводн., 2:1 :1 ). 1 H ЯМР (CF3COOD, 30 °С): 4.56-4.40 (м, 24Н, 12хСН2 Gly), 3.84 (с, 4Н, 2xCH2NH кор), 3.20-3.12, 3.10-3.02(2м, 2х2Н, 2хСН2СО).
MALDI-TOF: 1070.8 [М+]; Найдено, %: С 42.54, Н 5.37, N 20.82; Рассчитано для СзбНйгЫгМмОго, %: С 42.62, Н 5.27, N 20.93.
Пример 2. Получение со-ассоциата
6'SLN-nHHKep-GlvR-NH-(CH?)4-NH-GlvR-nHHKep-6'SLN и Suc-GlyR-NH-(CH?)4-NH-GlyR-Suc. соотношение 1 :5, линкер = -OCH?CH?CH?NHC(0)CH?CH?CH?CH?C(Q)-. Раствор 100 мкмоль Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc в 1 мл дистиллированной воды (рН около 6) или в буфере PBS (натрий-фосфатный буфер) (рН около 7) в течение 1 - 2 мин нагревают до температуры +60 °С (результат был одинаковым в температурных пределах 60-80 °С). К полученному нагретому раствору добавляют раствор 20 мкмоль 6'SLN-nHHKep-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-nHHKep-6'SLN в дистиллированной воде (1 мл) при температуре от +60 °С (результат был одинаковым в температурных пределах +60-80 °С), после чего полученный раствор охлаждают до комнатной температуры в течение 10-20 минут; полученный со-ассо иат хранят при +4 °С и используют без дальнейших манипуляций, кроме разбавления.
Пример 3. Получение со-ассоциата
6'SLN-nHHKep-GlvR-NH-(CH -NH-GlvR-nHHKep-6'SLN и Suc-GlyR-NH-(CH -NH-GlyR-Suc. соотношение 1 :10. линкер = -OCH?CH?CH?NHC(0)CH?CH?CH?CH?C(Q)-. Раствор 200 мкмоль Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc в 1 мл дистиллированной воды (рН около 6) или в буфере PBS (рН около 7) в течение 1 -2 мин нагревают до температуры +60 °С (результат был одинаковым в температурных пределах 60-80°С). К полученному нагретому раствору добавляют раствор 20 мкмоль 6'SLN-nnHKep-Gly6-NH- (CH2)4-NH-Gly6-nHHKep-6'SLN в дистиллированной воде (1 мл) при температуре от +60 °С (результат был одинаковым в температурных пределах +60-80 °С), после чего полученный раствор охлаждают до комнатной температуры в течение 10-20 минут; полученный со-ассоциат хранят при +4 °С и используют без дальнейших манипуляций, кроме разбавления.
Пример 4. Получение со-ассоциата
6'SLN-nHHKep-GlvR-NH-(CH -NH-GlvR-nHHKep-6'SLN и Suc-GlyR-NH-(CH -NH-GlyR-Suc. соотношение 1 :20. линкер = -OCH?CH?CH?NHC(0)CH?CH?CH?CH?C(Q)-. Раствор 200 мкмоль Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc в 1 мл дистиллированной воды (рН около 6) или в буфере PBS (рН около 7) в течение 1-2 мин нагревают до температуры +60 °С (результат был одинаковым в температурных пределах 60-80 °С). К полученному нагретому раствору добавляют раствор 10 мкмоль 6'SLN-nnHKep-Gly6-NH- (CH2)4-NH-Gly6-nMHKep-6'SLN в дистиллированной воде (1 мл) при температуре от +60 °С (результат был одинаковым в температурных пределах +60-80 °С), после чего полученный раствор охлаждают до комнатной температуры в течение 10-20 минут; полученный со-ассоциат хранят при +4 °С и используют без дальнейших манипуляций, кроме разбавления.
Способ терапевтического применения со-ассоциатов
Предмет данного изобретения также включает введение субъекту, нуждающемуся в соответствующем лечении или профилактике, терапевтически эффективного количества со-ассоциата по изобретению. Под терапевтически эффективным количеством подразумевается такое количество со-ассоциата, вводимого или доставляемого пациенту, при котором у пациента с наибольшей вероятностью проявится желаемая реакция на лечение (профилактику). Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от возраста, массы тела и общего состояния пациента, тяжести заболевания, методики введения препарата, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п.
Со-ассоциат по изобретению или фармацевтическая композиция, содержащая со- ассоциат, может быть введен в организм пациента в любом количестве и любым путем введения, эффективным для лечения или профилактики заболевания.
После смешения со-ассоциата с конкретным подходящим фармацевтически допустимым носителем в желаемой дозировке, композиции, составляющие суть изобретения, могут быть введены в организм человека или других животных перорально, парентерально, местно и т.п.
Введение может осуществляться как разово, так и несколько раз в день, неделю (или любой другой временной интервал), или время от времени. Кроме того, со-ассоциат может вводиться в организм пациента ежедневно в течение определенного периода дней (например, 2-10 дней), а затем следует период без приема со-ассоциата (например, 1 -30 дней).
В том случае, когда со-ассоциат по изобретению используется как часть режима комбинированной терапии, доза каждого из компонентов комбинированной терапии вводится в течение требуемого периода лечения. Соединения, составляющие комбинированную терапию, могут вводиться в организм пациента как единовременно, в виде дозировки, содержащей все компоненты, так и в виде индивидуальных дозировок компонентов. Фармацевтические композиции
Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат соединения по изобретению (или пролекарственную форму или другое фармацевтически приемлемое производное) и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, адъювантов, растворителей и/или наполнителей, таких, которые могут быть введены в организм пациента совместно с со-ассоциатами, составляющими суть данного изобретения, и которые не разрушают фармакологической активности этого со-ассоциата, а также являются нетоксичными при введении в дозах, достаточных для доставки терапевтического количества соединения.
Фармацевтические композиции, заявляемые в данном изобретении, содержат со- ассоциаты совместно с фармацевтически приемлемыми носителями, которые могут включать в себя любые растворители, разбавители, дисперсии или суспензии, поверхностно-активные вещества, изотонические агенты, загустители и эмульгаторы, консерванты, вяжущие вещества, смазочные материалы и т.д., подходящие для конкретной формы дозирования. Материалы, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают, но не ограничиваются, моно- и олигосахариды, а также их производные; желатин; тальк; эксципиенты, такие как какао-масло и воск для суппозиториев; масла, такие как арахисовое, хлопковое, сафроловое, кунжутное, оливковое, кукурузное и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновая кислота; апирогенная вода; изотонический раствор, раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатные буферные растворы. Также в составе композиции могут быть другие нетоксичные совместимые смазочные вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, разделительные жидкости, пленкообразователи, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы, консерванты и антиоксиданты.
Предметом данного изобретения являются также лекарственные формы - класс фармацевтических композиций, состав которых оптимизирован для определённого пути введения в организм в терапевтически эффективной дозе, например, для введения в организм орально, местно, пульмональным, например, в виде ингаляционного спрея, или внутрисосудистым способом, интраназально, подкожно, внутримышечно, а также инфузионным способом, в рекомендованных дозировках.
Лекарственные формы данного изобретения могут содержать составы, полученные методами использования липосом, методами микрокапсулирования, методами приготовления наноформ препарата, или другими методами, известными в фармацевтике. При получении композиции, например в форме таблетки, активное начало смешивают с одним или несколькими фармацевтическими эксципиентами, такими как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, кремнезем, аравийская камедь, маннит, микрокристаллическая целлюлоза, гипромеллоза или аналогичные соединения.
Таблетки можно покрыть сахарозой, целлюлозным производным или другими веществами, подходящими для нанесения оболочки. Таблетки могут быть получены различными способами, такими как непосредственное сжатие, сухое или влажное гранулирование или горячее сплавление в горячем состоянии.
Фармацевтическую композицию в форме желатиновой капсулы можно получить, смешивая активное начало с растворителем и заполняя полученной смесью мягкие или твердые капсулы.
Для введения парентеральным путем используются водные суспензии, изотонические солевые растворы или стерильные растворы для инъекций, которые содержат фармакологически совместимые агенты, например пропиленгликоль или бутиленгликоль.
Характеристика биологической активности со-ассоциатов
Противовирусная активность индивидуального гликопептида 6'SLN-nnHKep-Gly6- NH-(CH2)4-NH-Gly6-nnHKep-6'SLN, а также со-ассоциатов (смешанных тектомерных форм) различного состава по изобретению была изучена in vitro в тесте по ингибированию связывания фетуина с вирусом гриппа, адсорбированным на поверхности полистирольных планшетов (методика проведения данного эксперимента описана в US5571836, W098/14215). Так, в частности, в таблице 1 представлены результаты ингибирующей активности со-ассоциатов гликопептида 6'SLN-nHHKep-Gly6-NH-(CH2)4-NH- Gly6-nnHKep-6'SLN и пептида Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc с различным соотношением пептида и гликопептида.
Таблица 1. Относительная активность ингибиторов вируса гриппа A/H1 N1/NIB/23/98M-MA.
Figure imgf000014_0001
со-ассоциат 6'SLN-nMHKep*-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-nMHKep*-6'SLN и 700 Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc, соотношение 1 :10
со-ассоциат 6'SLN-nHHKep*-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-nHHKep*-6'SLN и 1 000 Suc-Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-Suc, соотношение 1 :20
Suc-Gly6-NH-(CH2)2-NH-Gly6-Suc 0
[6'SLN- nMHKep*-Gly7-NHCH2]4C 100
* линкер = -OCH2CH2CH2NHC(0)CH2CH2CH2CH2C(0)-.
Как следует из данных, приведенных в таблице, антивирусная активность неассоциирующего в водных растворах индивидуального гликопептида б'БЬЫ-линкер- Gly6-NH-(CH2)4-NH-Gly6-nnHKep-6'SLN лишь ненамного превышает активность мономерного 6'SLN. Наблюдавшееся увеличение активности, по-видимому, определяется возможностью бидентантного взаимодействия молекул гликопептида с поверхностью вируса. В то же время, антивирусная активность со-ассоциатов гораздо выше: они подавляют взаимодействие фетуина с вирусом гриппа уже в микромолярных концентрациях (1С50 ~0.1 -10 мкмоль), являясь на 2-3 порядка более мощными ингибиторами, чем мономерный 6'SLN, а также на порядок активнее тетраантенного аналога [3], способного к ассоциации без наличия "разбавителя".
Следует обратить внимание на необычный характер зависимости антивирусной активности со-ассоциатов от их состава, а именно на увеличение активности при формальном снижении содержания гликопептида в со-ассоциате. Этот эффект связан с тем, что при "разбавлении" гликопептидов негликозилированными пептидами уменьшаются стерические препятствия для включения молекул 6'SLN-nnHKep-Gly6-NH- (CH2)4-NH-Gly6-nnHKep-6'SLN в состав ассоциата (тектомера). Кроме того, при "разбавлении" достигаются более благоприятные плотность и распределение 6'SLN-rpynn на поверхности частицы со-ассоциата с точки зрения взаимодействия с вирусом. Дальнейшее "разбавление" (когда соотношение мономеров гликопептид/пептид в составе со-ассоциата превышает 1 : 100) приводит к снижению активности, отнесенной как к мольной, так и к весовой концентрации со-ассоциатов.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения. Библиографический список: N.V.Bovin, A.S.Gambaryan. Rational Design of an Anti-Adhesion Drug for Influenza. In: Combating the Threat of Pandemic Influenza: Drug Discovery Approaches Paul F. Torrence (Editor) Wiley, ISBN: 978-0-470-1 1879-5 October 2007. A.S.Gambaryan, A.B.Tuzikov, A.A.Chinarev, L.R.Juneja, N.V.Bovin, M.N.Matrosovich. Polymeric inhibitor of influenza virus attachment protects mice from experimental influenza infection. Antiviral Res., 55, 201 -205 (2002). A.B.Tuzikov, A.A.Chinarev, A.S.Gambaryan, V.A.OIeinikov, D.V.KIinov, N.B.Matsko, V.A.Kadykov, M.A.Ermishov, I.V.Demin, V.V.Demin, P.D.Rye, N.V.Bovin. Polyglycine II nanosheets: Supramolecular antivirals? ChemBioChem, 4, 147-154 (2003). N.V.Bovin, A.B.Tuzikov, A.A.Chinarev, A.S.Gambaryan. Multimeric glycotherapeutics: new paradigm. Glycoconjugate J., 21 , 471 -478 (2004). A.S.Gambaryan, E.Y.Boravleva, T.Y.Matrosovich, M.N.Matrosovich, H.D.KIenk, E.V.Moiseeva, A.B.Tuzikov, A.A.Chinarev, G.V.Pazynina, N.V.Bovin. Polymer-bound 6' sialyl-N-acetyllactosamine protects mice infected by influenza virus. Antiviral Res., 68, 1 16-123 (2005). A.B.Tuzikov, A.S.Gambaryan, L.R.Juneja, N.V.Bovin. Conversion of complex oligosaccharides into polymeric conjugates and their anti-influenza virus inhibitory potency. J. Carbohydr. Chem., 19, 1 191 -1200 (2000). G.Pazynina, A.Tuzikov, A.Chinarev, P.Obukhova, N.Bovin. Simple stereoselective synthesis of a2-6 sialooligosaccharides. Tetrahedron Lett., 43, 801 1 -8013 (2002). P.A.Chugunov, A.A.Chinarev, A.B.Tuzikov, A.A.Formanovsky, V.V.Prokhorov, A.S.Gambaryan, N.V.Bovin. Monosialoside with multimer-like anti-influenza potency. Mendeleev Communs., 19, 62-63 (2009). S.V.Tsygankova, A.A.Chinarev, A.B.Tuzikov, N.Severin, A.A.Kalachev, J.P.Rabe, A.S.Gambaryan, N.V.Bovin. Biantennary oligoglycines and glyco-oligoglycines self- associating in aqueous medium. Beilstein J. Org. Chem., 10, 1372-1382 (2014). Doi 10.3762bjoc. 10. 140.

Claims

Формула изобретения
1. Со-ассоциат двух типов молекул, а именно
гликопептида, выбранного из гликопептидов общей формулы (I):
6'SLN-nHHKep-Glym-NH-(CH2)4-NH-Glym-nHHKep-6'SLN (I), или их фармацевтически приемлемых солей,
где m = 5 + 8;
и пептида, выбранного из пептидов общей формулы (II):
R-Glyn-NH-(CH2)4-NH-Glyn-R (II)
или их фармацевтически приемлемых солей, где
п = 4 + 6;
R представляет собой Н, НООССН2СН2СО- или НОСН2СО-;
причем молярное соотношение гликопептида и пептида в со-ассоциате составляет от 1 : 10 до 1 : 100.
2. Со-ассоциат по п.1 , в котором т=6, п=6.
3. Со-ассоциат по п.1 , в котором линкер представляет собой -С2.20алкил- необязательно замещенный, по меньшей мере, одной из групп С(О), NH и/или, по меньшей мере, одним геторатомом, выбранным из О и/или S.
4. Со-ассоциат по п.З, в котором линкер представляет собой -0-С2.3алкил-МН- С(0)-С1-5алкил-С(0)-;
5. Со-ассоциат по п.4, в котором линкер представляет собой
-OCH2CH2CH2NHC(0)CH2CH2CH2CH2C(0)-.
6. Способ получения со-ассоциата по п.1 , включающий смешивание водных растворов гликопептида общей формулы (I) и пептида общей формулы (II) при температуре 60-80 °С в молярном соотношении гликопептида и пептида от 1 : 10 до 1 : 100, с последующим охлаждением до комнатной температуры.
7. Применение со-ассоциата по п. 1 в качестве ингибитора вируса гриппа человека.
8. Применение по п.7, в котором вирус гриппа человека характеризуется тем, что гемагглютинин вируса связывается с 6'SLN.
9. Применение по п.8, в котором тип вируса гриппа человека представляет собой А или В.
10. Применение по п.9, в котором подтип вируса гриппа человека типа А представляет собой Н1 или НЗ.
11. Применение со-ассоциата по п.1 для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболевания, ассоциированного с вирусом гриппа человека.
12. Применение по п.1 1 , в котором вирус гриппа человека характеризуется тем, что гемагглютинин вируса связывается с 6'SLN.
13. Применение по п.12, в котором тип вируса гриппа человека представляет собой А или В.
14. Применение по п.13, в котором подтип вируса гриппа человека типа А представляет собой Н1 или НЗ.
15. Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики заболевания, ассоциированного с вирусом гриппа человека, характеризующаяся тем, что она содержит терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного из со-ассоциатов по п.1.
16. Фармацевтическая композиция по п.15, в котором вирус гриппа человека характеризуется тем, что гемагглютинин вируса связывается с 6'SLN.
17. Фармацевтическая композиция по п.16, в котором тип вируса гриппа человека представляет собой А или В.
18. Фармацевтическая композиция по п.17, в котором подтип вируса гриппа человека типа А представляет собой Н1 или НЗ.
19. Фармацевтическая композиция по п.15, характеризующая тем, что заболевание представляет собой грипп.
PCT/RU2016/050080 2015-12-16 2016-12-01 Блокаторы вируса гриппа WO2017105295A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015154030 2015-12-16
RU2015154030A RU2612221C1 (ru) 2015-12-16 2015-12-16 Блокаторы вируса гриппа

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017105295A1 true WO2017105295A1 (ru) 2017-06-22

Family

ID=58459292

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2016/050080 WO2017105295A1 (ru) 2015-12-16 2016-12-01 Блокаторы вируса гриппа

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2612221C1 (ru)
WO (1) WO2017105295A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019182466A1 (ru) * 2018-03-21 2019-09-26 Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр" Метод специфического выявления вируса гриппа человека

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998014215A2 (de) * 1996-10-02 1998-04-09 Syntesome Gesellschaft Für Med. Biochemie M.B.H. Glycokonjugate als inhibitoren der viralen zelladhäsion
WO2000055149A1 (en) * 1999-03-12 2000-09-21 Biota Scientific Management Pty. Ltd. Dimeric compounds and as inhibitors of neuraminidase
WO2001002018A2 (de) * 1999-06-30 2001-01-11 Syntesome Gesellschaft Für Medizinische Biochemie Mbh Intermolekular assoziierende verbindungen und diese umfassende aggregate

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998014215A2 (de) * 1996-10-02 1998-04-09 Syntesome Gesellschaft Für Med. Biochemie M.B.H. Glycokonjugate als inhibitoren der viralen zelladhäsion
WO2000055149A1 (en) * 1999-03-12 2000-09-21 Biota Scientific Management Pty. Ltd. Dimeric compounds and as inhibitors of neuraminidase
WO2001002018A2 (de) * 1999-06-30 2001-01-11 Syntesome Gesellschaft Für Medizinische Biochemie Mbh Intermolekular assoziierende verbindungen und diese umfassende aggregate

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
???RA?KAPPAO?A C.B.: "«Cpio??a??a? ? pi?o?o ???o?a??a? acco??? ? ?po?o??po?a??a? acco??a??? o??????o???x ?e????o? ? ???kappao?e????o? ???kappao?e????o?».", A??OP?EPA? ??CCEP?A??? ?A CO?CKAPPAA??E Y?E?O? C?E?E?? KAPPAA????A?A X???ECKAPPA?X ?AYKAPPA, M., 2013 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019182466A1 (ru) * 2018-03-21 2019-09-26 Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр" Метод специфического выявления вируса гриппа человека

Also Published As

Publication number Publication date
RU2612221C1 (ru) 2017-03-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chabre et al. Design and creativity in synthesis of multivalent neoglycoconjugates
AU2021201085B2 (en) Peptide compounds and peptide conjugates for the treatment of cancer through receptor-mediated chemotherapy
Gajbhiye et al. Synthesis, characterization and targeting potential of zidovudine loaded sialic acid conjugated-mannosylated poly (propyleneimine) dendrimers
TW409058B (en) Method for preparation of a drug complex
JP6977059B2 (ja) マンヌロン二酸の組成物
TW200536861A (en) Hyaluronic acid/methotrexate compound
JP2009514856A (ja) 医薬品ガリウム組成物及び方法
CN103502319B (zh) 包含含有硼酸化合物的嵌段共聚物的医药组合物
WO2001079302A1 (fr) Combinaison d'acide folique et de polysaccharide, son procede de preparation et composition pharmaceutique contenant cette combinaison agissant comme principe actif
JPH07505371A (ja) 免疫調節活性を有する新規親油性オリゴペプチド
RU2612221C1 (ru) Блокаторы вируса гриппа
US9328141B2 (en) Polypeptides for the treatment or prevention of cancer and uses thereof
KR102066768B1 (ko) C4s 프로테오글리칸 특이적 트랜스포터 분자
WO2023109618A1 (zh) 抗胰腺癌多肽药物偶联物及其无载体自组装纳米药物和制备方法及应用
KR100348380B1 (ko) 항종양미토크산트론중합체조성물
JP6910043B2 (ja) ヘマグルチニン結合ペプチド、および、これを含むインフルエンザウイルス感染症の予防・治療薬
Ma et al. Design, characterization, and in vitro antiproliferative efficacy of gemcitabine conjugates based on carboxymethyl glucan
JP7337342B2 (ja) Ｐｅｇ化ホウ素クラスター化合物、およびｐｅｇ化ホウ素クラスター化合物を含む抗腫瘍剤、およびｐｅｇ化ホウ素クラスターを含む増感剤
WO2004080455A1 (ja) 抗菌剤と抗ガン剤
NZ533849A (en) Polypeptide, the conjugate thereof containing doxorubicine and a pharmaceutical composition based thereon
WO2015002078A1 (ja) ボロン酸化合物の新規製剤
JP4601309B2 (ja) 抗ｃ型肝炎ウイルス剤と抗ｈｉｖ剤
WO2018199798A1 (ru) Пептидные производные противовирусного препарата занамивира
KR20240009388A (ko) 체내 독성 없이 항암 효과를 갖는 도세탁셀 아코니틱 무수물 결합체
CN105949277B (zh) 一种抗肿瘤化合物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16876137

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 16876137

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1