WO2017098073A1 - COMPUESTOS ESPIRANICOS DERIVADOS DE OXINDOL-PIRAZOLO [3,4-b] PIRIDINONA Y SUS USOS TERAPÉUTICOS - Google Patents

COMPUESTOS ESPIRANICOS DERIVADOS DE OXINDOL-PIRAZOLO [3,4-b] PIRIDINONA Y SUS USOS TERAPÉUTICOS Download PDF

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WO2017098073A1
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hydrogen
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pyrazole
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Ana Castro Morera
Pascual Sanz Bigorra
Sergio QUESADA SÁNCHEZ
María Adelaida GARCÍA GIMENO
Francisco Javier Luque Garriga
Axel BIDON-CHANAL BADIA
Original Assignee
Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic)
Centro De Investigación Biomédica En Red (Ciber)
Universitat De Barcelona
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/438—The ring being spiro-condensed with carbocyclic or heterocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to a series of compounds derived from oxindole-pyrazolo [3,4-b] pyridinone and their use for the treatment of inflammatory, autoimmune, cardiovascular, neurological and cancer diseases. It also refers to pharmaceutical compositions containing said compounds. Therefore, the invention belongs to the field of pharmaceutical chemistry.
  • AMPK serine / threonine protein kinase activated by AMP
  • AMPK a potential target to treat metabolic syndrome
  • thiazolidinediones rosiglitazone, troglitazone and pioglitazone
  • biguanides metalformin and fenformin
  • rosiglitazone is considered a PPARy agonist and exerts its antidiabetic effects through adipocyte differentiation.
  • AMPK could participate in the antidiabetic effects of rosiglitazone (Kadowaki T.
  • metformin could activate AMPK in vitro and in vivo by inhibiting complex I [Zhou G. et al., The Journal of Clinical Investigation 108: 1 167-1174, 2001], and the hypoglycemic effect could be completely blocked by the inactivation of LKB1 kinase, confirming the key role of AMPK in mediating the effect Metformin antidiabetic [Shaw RJ et al., Science (New York) NY 310: 1642-1646, 2005].
  • adipocyte-derived leptin hormone leads to a stimulation of AMPK and, therefore, an increase in the oxidation of fatty acids in skeletal muscles [Minokoshi Y. et al, 2002, Nature, 415, 339].
  • Adiponectin another hormone derived from adipocytes that leads to improved carbohydrate and lipid metabolism, stimulates AMPK in the liver and skeletal muscles [Yamanauchi T. et al., 2002, Nature Medicine, 8, 1288].
  • Activation of AMPK in these circumstances does not appear to be due to an increase in AMP cell levels, but rather to phosphorylation of the catalytic subunit by one or more upstream kinases.
  • AMPK participates in the regulation of the PI3k / Akt / mTOR route.
  • MTOR is a serine / threonine kinase enzyme that regulates protein synthesis.
  • AMPK negatively regulates the mTOR route at various levels.
  • AMPK phosphorylates and activates the tuberous sclerosis 2 (TSC2) protein, which is an mTOR inhibitor.
  • TSC2 tuberous sclerosis 2
  • AMPK phosphorylates and inactivates the raptor protein, a subunit of the complex in which mTOR is found, leading to inactivation of the complex.
  • AMPK activation inhibits cell growth and protects cells from glucose-induced apoptosis [Burkewitz K, Zhang Y and Mair W.B. 2014 Cell.
  • AMPK can also be a therapeutic target for many cancers that have constitutive action on the PI3K / Akt signaling pathway.
  • AICAR 5-amino-1 ⁇ -D-ribofuranosyl-imidazol-4-carboxamide
  • an AMP analogue capable of stimulating AMPK attenuates cell proliferation in both in vitro and in vivo studies [Rattan R, Giri S, Singh AK, Singh I. 2005 J. Biol. Chem. 280: 39582-39593].
  • AMPK Activation of AMPK by AICAR reduces the expression of lipogenic enzymes FAS and ACC, resulting in suppression of proliferation in prostate cancer cells.
  • Many cancer cells display a markedly increased rate of de novo fatty acid synthesis correlated with high levels of FAS.
  • FAS inhibition suppresses the proliferation of cancer cells and induces cell death.
  • the activation of AMPK and the inhibition of FAS activity is a target for pharmacological therapy of this type of cancer.
  • AICAR is an activator of AMPK that exerts an anti-inflammatory effect attenuating the production of cytokines and pro-inflammatory mediators.
  • AICAR attenuates the progression of experimental autoimmune encephalomyelitis, limiting the infiltration of leukocytes through the blood-brain barrier, so it has suggested that AMPK activating agents act as anti-inflammatory agents and may maintain therapeutic potential in Krabbe / Twitcher disease [Giri S et al. 2008, J. Neurochem., 105: 1820-1833].
  • the authors of the present invention have found a family of compounds characterized by being potent modulators of AMPK. Therefore, the compounds of the invention may be useful in the treatment or prophylaxis of diseases that are related to the regulation of said enzyme.
  • the present invention relates to a compound of general formula (I):
  • R ⁇ is selected from hydrogen, halogen, substituted or unsubstituted (C1-C1 0 ) alkyl, OR a , SR a , COO (R a ), CF 3 , N (R a ) 2 and an aryl group (C 6 - Ci 8 ) substituted or unsubstituted. Preferably, it is selected from chlorine, bromine and a substituted phenyl group.
  • R 2 is selected from hydrogen, substituted or unsubstituted (C1-C1 0 ) alkyl and COR a .
  • R 2 is hydrogen.
  • R 3 is selected from hydrogen, substituted or unsubstituted (C1-C1 0 ) alkyl and substituted or unsubstituted aryl (Cede).
  • R 3 is selected from hydrogen, a phenyl group and 4-methoxyphenyl.
  • R 4 and R 5 are independently selected from hydrogen, substituted or unsubstituted aryl (C 6 -Ci 8 ), halogen and nitro group (-N0 2 ).
  • R 4 is selected from hydrogen and fluorine
  • R 5 is selected from hydrogen, fluorine, a nitro group and a phenyl group.
  • X is a halogen, preferably fluorine.
  • R a is selected from hydrogen, substituted or unsubstituted (C1-C1 0 ) alkyl and substituted or unsubstituted (C 6 -Ci 8 ) aryl.
  • halogen includes fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • alkyl refers to a linear or branched, saturated hydrocarbon chain having 1 to 10, preferably 1 to 6 and more preferably 1 to 4 carbon atoms. Optionally it may be substituted by at least one substituent described above.
  • alkenyl refers to a hydrocarbon chain containing at least one carbon-carbon double bond, linear or branched, having from 2 to 10, preferably from 2 to 6 and more preferably from 2 to 4 carbon atoms. Optionally it may be substituted by at least one substituent described above.
  • alkynyl refers to a hydrocarbon chain containing at least one carbon-carbon, linear or branched triple bond, having 2 to 10, preferably 2 to 6 and more preferably 2 to 4 carbon atoms. Optionally it may be substituted by at least one substituent described above.
  • aryl refers to an aromatic, monocyclic or polycyclic ring, having 6 to 18 carbon atoms.
  • phenyl, naphthyl, anthranyl or phenanthryl are mentioned, with phenyl being preferred.
  • it may be substituted by at least one substituent described above.
  • the aryl radical carries 2 or more substituents, the substituents may be the same or different.
  • heteroaryl refers to a 5-18 membered aromatic ring, optionally substituted by at least one substituent described above, having one or more heteroatoms selected from N, O, and S as ring atoms.
  • the heteroaryl can be a mono-, bi- or tricyclic ring system.
  • substituted refers to the substitution by one or more substituents (for example 1, 2, 3 or 4) or any combination thereof from the list of substituents mentioned above. When two or more substituents are present, each substituent may be the same or different.
  • the hydroxyl groups, thiols, amines, acids can be optionally protected. There are a large number of protecting groups of these functional groups, and they are well known to those skilled in the art. As a guide, see Protecting groups, Kocienski, 2004, 3rd edition. According to the present specification, any of the compounds defined above, that is, those compounds that respond to the general formula (I), can also be referred to herein as "compound or compounds of the invention".
  • the present invention encompasses all isomers of the compounds of formula (I), that is, all geometric, tautomeric and optical forms, and mixtures thereof (eg, racemic mixtures).
  • the present invention includes within its scope all possible diastereomers, including mixtures thereof.
  • the different isomeric forms can be separated or resolved from one another by conventional methods, or any given isomer can be obtained by conventional synthetic methods or by stereospecific, stereoselective or asymmetric synthesis.
  • tautomer or “tautomeric form” refers to structural isomers of different energies that are interconvertible via a low energy barrier.
  • protonic tautomers also known as prototropic tautomers
  • interconversions by migration of a proton such as keto-enolic or imine-enamine isomerizations.
  • Valencia tautomers include interconversions by reorganization of some bond electrons.
  • the present invention also includes isotope-labeled compounds, which are identical to those cited in formula (I) except that one or more atoms have been replaced by an atom that has an atomic mass or mass number different from the atomic mass or number mass usually found in nature.
  • isotopes that can be incorporated into compounds of the invention include hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, fluorine, iodine and chlorine isotopes, such as 2 H, 3 H, 11 C, 14 C, 18 F, 123 l and 125 l .
  • isotopically labeled compounds of the present invention for example those into which radioactive isotopes such as 3 H or 14 C are incorporated, are useful in screening assays distribution of drugs and / or substrates in tissues.
  • radioactive isotopes such as 3 H or 14 C are incorporated
  • tritium isotopes ie 3 H, and carbon-14, that is, 14 C, for ease of preparation and detectability.
  • the 11 C and 18 F isotopes are particularly useful in PET (positron emission tomography), and 125 l isotopes are particularly useful in SPECT (single photon emission computed tomography), all useful in brain imaging .
  • replacement with heavier isotopes such as deuterium, that is, 2 H may provide some therapeutic advantages that result from increased metabolic stability, for example, longer half-life in vivo or lower dosage requirements, and therefore in Some cases may be preferred.
  • the isotopically labeled compounds of formula (I) can generally be prepared by performing the procedures described in the following examples, substituting an isotopically unlabeled reagent for an easily available isotopically labeled reagent.
  • salts mentioned above will be physiologically and pharmaceutically acceptable salts.
  • Pharmaceutically acceptable salts include those described by Berge, Bighley and Monkhouse, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19.
  • pharmaceutically acceptable salts refers to salts prepared from non-toxic pharmaceutically acceptable bases including inorganic bases and organic bases. Salts derived from inorganic bases include aluminum, ammonium, calcium, copper, ferric, ferrous, lithium, magnesium, manganic, manganous, potassium, sodium, zinc, and the like salts.
  • Salts derived from pharmaceutically acceptable non-toxic organic bases include salts of primary, secondary and tertiary amines, substituted amines including natural substituted amines, cyclic amines, and basic ion exchange resins, such as arginine, betaine, caffeine, choline, ⁇ , ⁇ '- dibenzylethylenediamine, diethylamine, 2-diethylaminoethanol, 2-dimethylaminoethanol, ethanolamine, ethylenediamine, N-ethyl-morpholine, N-ethylpiperidine, glucamine, glucosamine, histidine, hydrabamine, isopropylamine, lysine, methylglucaine, morpholine, pipeline, morpholine, resins polyamine, procaine, purines, theobromine, triethylamine, trimethylamine, tripropylamine, tromethamine, and the like.
  • basic ion exchange resins such as
  • salts can be prepared from pharmaceutically acceptable non-toxic acids, including inorganic and organic acids.
  • acids include acetic acid, benzenesulfonic, benzoic, camphorsulfonic, citric, ethanesulfonic, fumaric, gluconic, glutamic, hydrobromic, hydrochloric, isethionic, lactic, maleic, metallic, mandelic, methanesulfonic, mucic, nitric, pamoic, pantothenic, phosphoric, succinic, sulfuric, tartaric, p-toluenesulfonic and the like.
  • Preferred examples of pharmaceutically acceptable salts include ammonium, calcium, magnesium, potassium and sodium salts, and those formed from maleic, fumaric, benzoic, ascorbic, pamoic, succinic, hydrochloric, sulfuric, bismethylenesalicylic, methanesulfonic, ethanedisulfonic, propionic acids. , tartaric, salicylic, citric, gluconic, aspartic, stearic, palmitic, itaconic, glycolic, p-aminobenzoic, glutamic, benzenesulfonic, cyclohexylsulfamic, phosphoric and nitric.
  • the compounds of formula (I) may be in crystalline form as free compounds or as solvates and both forms are within the scope of the present invention.
  • Solvation methods are generally known within the art. Suitable solvates are pharmaceutically acceptable solvates. In a particular embodiment, solvates are hydrates.
  • the compounds of formula (I) or their salts or solvates are preferably in a pharmaceutically acceptable or substantially pure form.
  • pharmaceutically acceptable form is meant, among others, that they have a pharmaceutically acceptable level of purity excluding normal pharmaceutical additives such as diluents and carriers, and not including material considered toxic at normal dosage levels.
  • the purity levels for the active ingredient are preferably greater than 50%, more preferably, greater than 70%, more preferably, greater than 90%. In a preferred embodiment, they are greater than 95% of the compound of formula (I) or its salts, or solvates.
  • the compound of general formula (I) is selected from the list comprising: 3 '- (4-chlorophenyl) -5'-fluoro-2,6'-dioxo-1', 5 ', 6' , 7'-tetrahydrospiro [indoline-3,4'-pyrazol [3,4- b] pyridine] -5'-carbonitrile;
  • compositions comprising a compound of formula (I), its pharmaceutically acceptable isomers, salts or solvates.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one pharmaceutically acceptable carrier.
  • vehicle refers to a diluent, adjuvant or excipient with which the active substance is administered.
  • Such pharmaceutical vehicles may be sterile liquids, such as water and oils, including those of petroleum, animal, vegetable or synthetic origin, such as peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil and the like.
  • water or aqueous solutions of saline solution and aqueous solutions of dextrose and glycerol are used as vehicles, particularly for injectable solutions.
  • Suitable pharmaceutical vehicles are described in "Remington's Pharmaceutical Sciences” by EW Martin, 1995.
  • the vehicles of the invention are approved by the regulatory agency of a state government or a federal government, or are listed in the United States Pharmacopoeia, in the European Pharmacopoeia or other pharmacopoeia generally recognized for use in animals, and more particularly in humans.
  • the compounds and pharmaceutical compositions of this invention can be used alone or together with other drugs or active ingredients to provide a combination therapy.
  • the other drugs or active ingredients may be part of the same pharmaceutical composition, or be provided as a separate pharmaceutical composition, for administration at the same time or at a different time.
  • Examples of pharmaceutical compositions include any composition. solid (tablets, pills, capsules, granules, etc.) or liquid (solutions, suspensions or emulsions) for oral, topical or parenteral administration.
  • the invention relates to the use of a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament, preferably for the prevention or treatment of diseases related to the activation of AMPK, and even more preferably for the treatment or prevention of cardiovascular, inflammatory, autoimmune diseases. , neurological, metabolic syndrome and cancer.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament for the treatment of type 1 and 2 diabetes, obesity, inflammation, dyslipidemia, hypertension, hyperglycemia, hypertriglycerimidemia, insulin resistance, epilepsy and Krabbe diseases / Twitcher, Alzheimer, Parkinson and Huntington.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament for the treatment of type 1 and type 2 diabetes.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I), as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament for the treatment of epilepsy.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament for the treatment of Krabbe / Twitcher disease.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament for the treatment of Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's diseases.
  • the present invention relates to the use of a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable tautomer, prodrug, salt or solvate, or of a pharmaceutical composition containing at least one compound of formula (I), as defined above, for the manufacture of a medicament for the treatment of prostate and breast cancer.
  • Another aspect of the invention relates to a method of treating a disorder or disease related to the activation of AMPK, preferably selected from the metabolic syndrome and inflammatory, autoimmune, cardiovascular, neurological and cancer diseases, and more preferably type diabetes. 1 and 2, hyperglycemia, obesity, inflammation, epilepsy, prostate cancer, breast cancer and Krabbe / Twitcher Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's diseases, which comprises administering to a subject the compound of the invention in a therapeutically effective amount, or a pharmaceutical composition of the invention comprising the compound of the invention in a therapeutically effective amount.
  • the amount of compound of the invention, its pharmaceutically acceptable isomers, salts or solvates thereof, therapeutically effective to be administered (also referred to herein as therapeutically effective or effective amount), as well as its dosage to treat a condition pathological with said compounds, will depend on numerous factors, among which are the age, the patient's condition, the severity of the disease, the route and frequency of administration, the modulating compound to be used, etc.
  • Another aspect of the invention relates to a process for obtaining the compounds of general formula (I) comprising the following steps:
  • step (a) of formula (III) is a compound obtained in step (a) of formula (III) for 12-24 hours at 60-120 ° C
  • step (c) reaction of the compound obtained in step (b) of formula (la) with a halogenating agent
  • R1-R5 are defined above.
  • the present invention relates to the compounds of general formula (la) or their corresponding pharmaceutically acceptable isomers, salts or solvates
  • R1-R5 are defined above, with the proviso that when it is hydrogen R 4 is not hydrogen.
  • FIG. 1 Effect of AMPK activation of compound 1.
  • Example of Western Blot analysis showing that compound 1 activates AMPK in a dose-dependent manner. This effect is confirmed by the increased dose-dependent phosphorylation of its ACC substrate, in a range of concentrations between 7.5-120 ⁇ .
  • Hek293 cells are treated with 30 ⁇ g of compound 1 for 1 hour. The lysed cells are analyzed by Western Blot using anti-phosphoThr172 AMPK alpha, anti-AMPKbl (used as load control), anti-phosphoSer79ACC and anti-ACC (used as load control). Molecular weight markers are indicated to the right of the figure.
  • FIG. 2 Effect of AMPK activation of compounds 11 and 13.
  • Example of Western Blot analysis showing that compounds 1 1 and 13 activate AMPK in a dose-dependent manner. This effect is confirmed by the increased dose-dependent phosphorylation of its ACC substrate, in a concentration range between 5 - 100 ⁇ .
  • Hek293 cells are treated with 30 ⁇ g of compounds 1 1 and 13 for 1 hour.
  • the lysed cells are analyzed by Western Blot using anti-phosphoThr172 AMPK alpha, anti-AMPKbl (used as load control), anti-phosphoSer79ACC and anti-ACC (used as load control). Molecular weight markers are indicated to the right of the figure.
  • FIG. 3 Effect of AMPK activation of compound 12.
  • Hek293 cells are treated with 30 ⁇ g of compound 12 for 1 hour. The lysed cells are analyzed by Western Blot using anti-phosphoThr172 AMPK alpha, anti-AMPKbl (used as load control), anti-phosphoSer79ACC and anti-ACC (used as load control). Molecular weight markers are indicated to the right of the figure.
  • FIG. 4 Effect of AMPK activation of compound 15. Example of Western Blot analysis showing that compound 15 activates AMPK in a dose-dependent manner.
  • Hek293 cells are treated with 30 ⁇ g of compound 15 for 1 hour.
  • the lysed cells are analyzed by Western Blot using anti-phosphoThr172 AMPK alpha, anti-AMPKbl (used as load control), anti-phosphoSer79ACC and anti-ACC (used as load control). Molecular weight markers are indicated to the right of the figure.
  • the cell line used for the treatments with the different reagents tested was HEK293T (human kidney embryonic cells).
  • the cells were grown in DMEM medium (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) with 25 mM glucose supplemented with 10% inactivated fetal bovine serum, 2 mM glutamine 100 units / ml penicillin and 100 ⁇ g / ml streptomycin in a humid atmosphere at 37 ° C with 5% of C0 2 .
  • DMEM medium Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • the cells were seeded on 60 mm plates (p.60) to obtain 70-80% confluence and washed in Krebs Ringer buffer (KRB: 12.5 mM NaCI, 15 mM CaCI 2 , KH 2 2P0 4 0, 5 mM, 3 mM KCI, 2.5 mM NaHC0 3 , 0.5 mM MgSO 4 , 10 mM HEPES pH 7.4, 95: 5 0 2 / C0 2 ) at 37 ° C.
  • KRB 12.5 mM NaCI, 15 mM CaCI 2 , KH 2 2P0 4 0, 5 mM, 3 mM KCI, 2.5 mM NaHC0 3 , 0.5 mM MgSO 4 , 10 mM HEPES pH 7.4, 95: 5 0 2 / C0 2
  • the plates were processed one by one, and kept on ice, first adding the cold lysis buffer.
  • the composition of the buffer was as follows: 10 mM Tris pH 7.4, 15 mM EDTA pH 8.0, 50 mM NaF, 15 mM 4 P 2 0 7 , 0.6 M sucrose, 15 mM 2-Mercaptoethanol, a mixture of protease inhibitors without EDTA (Roche) and 1 mM PMSF.
  • the cells were collected in lysis buffer with the help of a scraper and lysed by syringes of 24 Gx5 / 8 "4 times each sample.
  • Protein analysis by Western Blot Protein extracts were analyzed by SDS-PAGE on gels of 8 or 10% acrylamide and 1.5 mm thick. 30 ⁇ g of protein was loaded and transferred to a PVDF (Millipore) membrane for 1.5 h at 100 V. The blocking was done with 5% skim milk in TBS-T for 1 h at room temperature. Immunodetection was performed by incubating the primary antibody overnight at 4 ° C. After three washes at room temperature with TBS-T of 10 min each, they were incubated with their corresponding secondary antibody conjugated to HRP.
  • PVDF Micropore
  • the membranes were developed with ECL plus (Pierce) and processed with a FUJI LAS 3000 (Fujifilm).
  • the antibodies used were: Anti-pAMPKaThr172, 8 ⁇ - ⁇ 1 / ⁇ 2, anti-ACC and anti-pACCser79 from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA) diluted 1/1000.
  • the secondary goat anti-rabbit HRP antibody from Santa Cruz Technology at a dilution 1/5000 or 1/10000. Detection of bands with the Anti-pAMPKaThr172 and anti-pACCser79 antibodies (AMPK substrate) with respect to their respective loading controls (anti-1 ⁇ 1 / ⁇ 2 and anti-ACC) was taken as indicative of AMPK activation.
  • the activation status of the AMPK complex correlates with the levels of the phosphorylated form of the catalytic subunit ⁇ pT172.
  • both the treatment of HEK293T cells with increasing doses of compounds 1, 11, 12, 13 and 15 increased the endogenous levels of ⁇ pT172, being indicative of the increased status of activation of the AMPK complex.
  • the activation achieved in some cases was similar to that achieved with fenformin, a compound with recognized AMPK activating capacity.
  • the second panel shows the analysis of the endogenous level of ⁇ , which was included as a load control to demonstrate that the increase in AMPKa pT172 levels were not due to an increase in the total levels of the enzyme complex.
  • the third panel shows the phosphorylation status of the enzyme acetyl CoA carboxylase (ACC), which is a substrate of the AMPK protein kinase, so an increase in AMPK activity increases the phosphorylation state of this substrate (ACC pS79). As can be seen, the phosphorylation status of ACC increases in parallel with the levels of AMPKa pT172.
  • ACC acetyl CoA carboxylase
  • the fourth panel indicates the total ACC levels as a load control, to validate that the change in ACC levels pS79 are due to the phosphorylation of the protein and not to an increase in its total levels.

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Abstract

La presente invención se refiere a derivados de oxindol-pirazolo[3,4-b]piridinona, que actúan como moduladores de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK) y de su uso para el tratamiento y prevención de enfermedades o trastornos regulados por AMPK. Por tanto, estos compuestos pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, autoinmunes, cardiovasculares, neurológicas y cáncer.

Description

COMPUESTOS ESPIRANICOS DERIVADOS DE OXINDOL-PIRAZOLO T3,4-b1 PIRIDINONA Y SUS USOS TERAPÉUTICOS
DESCRIPCIÓN
La presente invención se refiere a una serie de compuestos derivados de oxindol- pirazolo[3,4-b]piridinona y su uso para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, autoinmunes, cardiovasculares, neurológicas y cáncer. También hace referencia a las composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. Por tanto, la invención pertenece al campo de la química farmacéutica.
ESTADO DE LA TÉCNICA
Obesidad, diabetes de tipo 2, hipertensión, cáncer y enfermedades cardiovasculares comportan graves alteraciones del metabolismo de glucosa o lípidos y afectan severamente a la salud y calidad de vida de los individuos afectados. La creciente prevalencia de estas enfermedades hace que el hallazgo de nuevas dianas farmacológicas para su tratamiento sea una tarea urgente. En este contexto, la serina/treonina proteína quinasa activada por AMP (AMPK) es una diana biológica relevante para este tipo de patologías, ya que actúa como un sensor clave del estado energético celular, coordinando rutas metabólicas y procesos no metabólicos con el objetivo de equilibrar el nivel de suministro de nutrientes y la demanda energética. AMPK responde a cambios en los niveles de AMP intracelular, estimulando rutas asociadas con la generación de ATP y/o inhibiendo procesos que consumen ATP. En consecuencia, la síntesis de glucosa, lípidos y proteínas así como el crecimiento celular se inhiben, mientras que la oxidación de ácidos grasos y la recaptación de glucosa se activan. [Hardie DG; Ross FA et al. 2012 Nature Reviews 13: 251-262]. Así, compuestos capaces de regular el metabolismo energético a través de la modulación de AMPK constituyen una estrategia prometedora para la prevención y el tratamiento de este tipo de enfermedades.
A nivel farmacológico, el concepto de AMPK como diana potencial para tratar el síndrome metabólico se ha visto apoyado por el descubrimiento de dos clases principales de fármacos antidiabéticos, tiazolidindionas (rosiglitazona, troglitazona y pioglitazona) y biguanidas (metformina y fenformina), que activan AMPK en células en cultivo e in vivo. Tradicionalmente rosiglitazona es considerada un agonista de PPARy y ejerce sus efectos antidiabéticos a través de la diferenciación de adipocitos. AMPK podría participar en los efectos antidiabéticos de rosiglitazona (Kadowaki T. et al., The Journal of Clinical Investigation 116: 1784-1792, 2006]. A su vez, metformina podría activar AMPK in vitro e in vivo mediante la inhibición del complejo I [Zhou G. et al., The Journal of Clinical Investigation 108:1 167-1174, 2001], y el efecto hipoglucémico podría ser completamente bloqueado por la inactivación de la quinasa LKB1 , confirmando el papel clave de AMPK en la mediación del efecto antidiabético de metformina [Shaw R.J. et al., Science (New York) N.Y. 310:1642-1646, 2005].
De igual manera, la acción de AMPK sobre el metabolismo energético sería responsable de los efectos beneficiosos que la activación de esta quinasa tiene en el corazón, especialmente en la protección contra daños producidos en isquemia- reperfusión. También se ha visto que la activación de AMPK disminuye la hipertrofia cardíaca y el riesgo de fallo cardíaco, por lo que la administración de activadores de AMPK estaría recomendada en estas patologías [Zaha VG y Young LH. 2012 Circ. Res. 1 11 : 800-814]. Más recientemente se ha hecho evidente la participación de AMPK en la regulación del metabolismo, no solamente celular sino también corporal. Se ha demostrado que la hormona leptina derivada de los adipocitos lleva a una estimulación de AMPK y, por tanto, a un incremento en la oxidación de ácidos grasos en músculos esqueléticos [Minokoshi Y. et al, 2002, Nature, 415, 339]. La adiponectina, otra hormona derivada de adipocitos que lleva a un metabolismo mejorado de carbohidratos y lípidos, estimula AMPK en hígado y en músculos esqueléticos [Yamanauchi T. et al., 2002, Nature Medicine, 8, 1288]. La activación de AMPK en estas circunstancias no parece ser debida a un incremento de los niveles celulares de AMP, sino más bien a la fosforilación de la subunidad catalítica por una o más quinasas corriente arriba.
En base a las consecuencias metabólicas antes mencionadas de la activación de AMPK, cabe esperar efectos beneficiosos profundos de la activación in vivo de AMPK. Así, en hígado la expresión génica de enzimas gluconeogénicas estaría disminuida, con lo que se reduciría la producción de glucosa hepática y se mejoraría la homeostasis global de glucosa. Por otra parte, la inhibición directa y/o la expresión reducida de enzimas clave en el metabolismo de lípidos reduciría la síntesis de los mismos y además se incrementaría la oxidación de ácidos grasos. Esto comportaría una mejora de la homeostasis de glucosa y, debido a una reducción en la acumulación de triglicéridos en músculo esquelético, también una acción mejorada de insulina. Por tanto, la combinación de estos efectos en síndrome metabólico debería reducir significativamente el riesgo de adquisición de enfermedades cardiovasculares.
AMPK participa en la regulación de la ruta PI3k/Akt/mTOR. La mTOR es una enzima serina/treonina quinasa que regula la síntesis de proteínas. AMPK regula negativamente la ruta mTOR a varios niveles. Primero, AMPK fosforila y activa la proteína de la esclerosis tuberosa 2 (TSC2), que es un inhibidor de mTOR. En segundo lugar, AMPK fosforila e inactiva a la proteína raptor, una subunidad del complejo en el que se encuentra mTOR, dando lugar a la inactivación del complejo. De esta manera, la activación de AMPK inhibe el crecimiento celular y protege a las células de la apoptosis inducida por ayuno de glucosa [Burkewitz K, Zhang Y and Mair W.B. 2014 Cell. Metabolism. 20: 10-25] La AMPK también puede ser una diana terapéutica para muchos cánceres que tienen acción constitutiva sobre la ruta de señalización PI3K/Akt. El tratamiento de diversas líneas celulares de cáncer mediante AICAR (5-amino-1^-D-ribofuranosil-imidazol-4-carboxamida), un análogo de AMP capaz de estimular AMPK, atenúa la proliferación celular tanto en estudios in vitro como in vivo [Rattan R, Giri S, Singh AK, Singh I. 2005 J. Biol. Chem. 280:39582- 39593].
La activación de AMPK por AICAR reduce la expresión de las enzimas lipogénicas FAS y ACC, dando como resultado la supresión de la proliferación en células cancerosas prostáticas. Muchas células cancerosas despliegan una velocidad marcadamente incrementada de síntesis de ácidos grasos de novo correlacionada con altos niveles de FAS. La inhibición de FAS suprime la proliferación de células cancerosas e induce la muerte celular. Así, la activación de AMPK y la inhibición de la actividad de FAS es una diana para la terapia farmacológica de este tipo de cáncer.
Por otra parte, AICAR es un activador de AMPK que ejerce un efecto antiinflamatorio atenuando la producción de citoquinas y mediadores proinflamatorios. Asimismo, AICAR atenúa la progresión de la encefalomielitis autoinmune experimental, limitando la infiltración de leucocitos a través de la barrera hematoencefálica, por lo que se ha sugerido que los agentes activadores de AMPK actúan como agentes antiinflamatorios y pueden mantener un potencial terapéutico en la enfermedad de Krabbe/Twitcher [Giri S et al. 2008, J. Neurochem., 105: 1820-1833].
También se ha descrito que la activación de AMPK juega un papel neuroprotector en diferentes enfermedades neurodegenerativas. Así, su activación puede ejercer un efecto neuroprotector a través de la regulación de los niveles de PGC-1 y UCP2 frente al daño cerebral inducido durante estados de epilepsia [Han et al., 201 1 , Neurosci Lett 500: 133-138] o a través de su papel en procesos de excitoxicidad y apoptosis en neuronas de hipocampo [Ullah et al., 2014, CNS Neurosci. Ther. 20: 327-338].
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Los autores de la presente invención han encontrado una familia de compuestos caracterizados por ser potentes moduladores de AMPK. Por tanto, los compuestos de la invención pueden resultar útiles en el tratamiento o profilaxis de enfermedades que se relacionan con la regulación de dicha enzima.
En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general (I):
Figure imgf000005_0001
(i) o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables correspondientes, la que R1-R5 y X se definen a continuación. R† se selecciona entre hidrógeno, halógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido, ORa, SRa, COO(Ra), CF3, N(Ra)2 y un grupo arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido. Preferiblemente se selecciona entre cloro, bromo y un grupo fenilo sustituido. R2 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido y CORa. Preferiblemente R2 es hidrógeno.
R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido y arilo (Cede) sustituido o no sustituido. Preferiblemente R3 se selecciona entre hidrógeno, un grupo fenilo y 4-metoxifenilo.
R4 y R5 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido, halógeno y grupo nitro (-N02). Preferiblemente R4 se selecciona entre hidrógeno y flúor, y R5 se selecciona entre hidrógeno, flúor, un grupo nitro y un grupo fenilo.
X es un halógeno, preferiblemente flúor.
Ra se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido y arilo (C6- Ci8) sustituido o no sustituido.
Donde los sustituyentes se seleccionan de entre OR', =0, SR', SOR', S02R', N02, NHR', N(R')2, =N-R\ NHCOR', N(COR')2, NHS02R', NR'C(=NR')NHR', CN, halógeno, C(0)R', COOR', OC(0)R', CONHR', CON(R')2, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido, alquenilo (C2-Ci0) sustituido o no sustituido, alquinilo (C2-Ci0) sustituido o no sustituido, arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido y heterociclo (C5-Ci8) sustituido o no sustituido, donde cada grupo R' es seleccionado independientemente entre H, OH, N02, NH2, SH, CN, halógeno, O, C(0)H, C(0)alquilo, COOH, alquilo (C C10) sustituido o no sustituido, alquenilo (C2-Ci0) sustituido o no sustituido, alquinilo (C2-Ci0) sustituido o no sustituido, arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido y heterociclo (C5-Ci8) sustituido o no sustituido.
El término "halógeno", tal como se entiende en la presente invención, incluye flúor, cloro, bromo y yodo.
El término "alquilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo lineal o ramificada, saturada, que tiene de 1 a 10, preferiblemente de 1 a 6 y más preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono. Opcionalmente puede estar sustituido por al menos un sustituyente descrito anteriormente. El término "alquenilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo que contiene al menos un enlace doble carbono-carbono, lineal o ramificada, que tiene de 2 a 10, preferiblemente de 2 a 6 y más preferiblemente de 2 a 4 átomos de carbono. Opcionalmente puede estar sustituido por al menos un sustituyente descrito anteriormente.
El término "alquinilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo que contiene al menos un enlace triple carbono-carbono, lineal o ramificada, que tiene de 2 a 10, preferiblemente de 2 a 6 y más preferiblemente de 2 a 4 átomos de carbono. Opcionalmente puede estar sustituido por al menos un sustituyente descrito anteriormente.
El término "arilo" se refiere a un anillo aromático, monocíclico o policíclico, que tiene de 6 a 18 átomos de carbono. Como ejemplos, se citan fenilo, naftilo, antranilo o fenantrilo, siendo preferido el fenilo. Opcionalmente puede estar sustituido por al menos un sustituyente descrito anteriormente. Cuando el radical arilo lleva 2 o más sustituyentes, los sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
El término "heteroarilo" se refiere a un anillo aromático de 5 a 18 miembros, opcionalmente substituido por al menos un sustituyente descrito anteriormente, que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O, y S como átomos en el anillo. El heteroarilo puede ser un sistema de anillo mono-, bi- o tricíclico.
El término "sustituido" a menos que se especifique lo contrario, se refiere a la sustitución por uno o más sustituyentes (por ejemplo 1 , 2, 3 o 4) o cualquier combinación de los mismos de la lista de sustituyentes anteriormente mencionada. Cuando hay presentes dos o más sustituyentes, cada sustituyente puede ser igual o diferente. Los grupos hidroxilos, tioles, aminas, ácidos pueden hallarse opcionalmente protegidos. Existe un gran número de grupos protectores de estos grupos funcionales, y son bien conocidos por el experto en la materia. A modo de guía, ver Protecting groups, Kocienski, 2004, 3rd edition. Según la presente memoria, cualquiera de los compuestos definidos anteriormente, es decir, aquellos compuestos que responden a la fórmula general (I), pueden ser igualmente referidos en esta memoria como "compuesto o compuestos de la invención".
Asimismo, hay que entender que la presente invención abarca todos los isómeros de los compuestos de fórmula (I), es decir, todas las formas geométricas, tautoméricas y ópticas, y sus mezclas (por ejemplo, mezclas racémicas). Cuando hay más centros quirales en los compuestos de fórmula (I), la presente invención incluye dentro de su alcance todos los posibles diastereómeros, incluidas sus mezclas. Las diferentes formas isómeras pueden separarse o resolverse entre sí por métodos convencionales, o cualquier isómero dado puede obtenerse por métodos sintéticos convencionales o por síntesis estereoespecífica, estereoselectiva o asimétrica. El término "tautómero" o "forma tautomérica", tal y como se usa en la presente invención, se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles vía una barrera de baja energía. Por ejemplo, tautómeros protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) que incluyen interconversiones mediante la migración de un protón, como por ejemplo isomerizaciones ceto-enólicas o imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos electrones de enlace.
La presente invención también incluye compuestos marcados con isótopos, que son idénticos a los citados en las fórmula (I) salvo en que uno o más átomos se han reemplazado por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico encontrado habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, flúor, yodo y cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 14C, 18F, 123l y 125l.
En este sentido, dentro del alcance de la presente invención se encuentran las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos que contienen los isótopos mencionados anteriormente y/u otros isótopos de otros átomos. Los compuestos marcados con isótopos de la presente invención, por ejemplo aquéllos en que se incorporan isótopos radioactivos tales como 3H o 14C, son útiles en ensayos de distribución de fármacos y/o sustratos en tejidos. Se prefieren particularmente los isótopos tritio, es decir 3H, y carbono-14, es decir, 14C, por su facilidad de preparación y detectabilidad. Los isótopos 11C y 18F son particularmente útiles en PET (tomografía de emisión de positrones), y los isótopos 125l son particularmente útiles en SPECT (tomografía computerizada de emisión de un solo fotón), todos útiles en la formación de imágenes del cerebro. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar algunas ventajas terapéuticas que resultan de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, mayor vida media in vivo o menores requisitos de dosificación, y por lo tanto en algunos casos pueden ser preferidos. Los compuestos isotópicamente marcados de fórmula (I) se pueden preparar generalmente llevando a cabo los procedimientos descritos en los siguientes ejemplos, sustituyendo un reactivo no marcado isotópicamente por un reactivo isotópicamente marcado fácilmente disponible. Por otro lado, para uso farmacéutico, las sales mencionadas anteriormente serán sales fisiológica y farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las descritas por Berge, Bighley y Monkhouse, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Así, la expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases farmacéuticamente aceptables no tóxicas incluyendo bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre, férricas, ferrosas, de litio, de magnesio, sales mangánicas, manganosas, de potasio, de sodio, de cinc y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas incluidas aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas, y resinas de intercambio iónico básicas, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, Ν,Ν'- dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etil-morfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina, y similares. Cuando el compuesto de la presente invención es básico, pueden prepararse sales a partir de ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluyendo ácidos inorgánicos y orgánicos. Tales ácidos incluyen el ácido acético, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, mélico, mandélico, metanosulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenosulfónico y similares.
Los ejemplos preferidos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio, y las formadas a partir de ácidos maleico, fumárico, benzoico, ascórbico, pamoico, succínico, clorhídrico, sulfúrico, bismetilensalicílico, metanosulfónico, etanodisulfónico, propiónico, tartárico, salicílico, cítrico, glucónico, aspártico, esteárico, palmítico, itacónico, glicólico, p-aminobenzoico, glutámico, bencenosulfónico, ciclohexilsulfámico, fosfórico y nítrico.
Asimismo, los compuestos de fórmula (I) pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos y ambas formas están dentro del alcance de la presente invención. Los métodos de solvatación se conocen generalmente dentro de la técnica. Los solvatos adecuados son solvatos farmacéuticamente aceptables. En una realización particular, los solvatos son hidratos.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales o solvatos están preferiblemente en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura. Por "forma farmacéuticamente aceptable" se entiende, entre otros, que tienen un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente, superiores al 70%, más preferiblemente, superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% del compuesto de fórmula (I) o de sus sales, o solvatos.
En una realización preferida, el compuesto de formula general (I) se selecciona de la lista que comprende: 3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-1 ',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5,5'-difluoro-2,6'-dioxo-1 ',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5-fluoro-2,6'-dioxo-5-nitro-1 ',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo; 3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-5-fenil-1\5\6\7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
5-cloro-3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5 6-difluor-2,6'-dioxo-1\5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-bromofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-1\5\6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b]piridina]-5'-carbonitrilo; y
3'-(4-bromofenil)-5',6-difluoro-2,6'-dioxo-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo.
Otro aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. En una realización preferida la composición farmacéutica comprende además al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante o excipiente con el que se administra el principio activo. Tales vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo aquellos de origen del petróleo, animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Se emplean preferiblemente como vehículos agua o disoluciones acuosas de solución salina y disoluciones acuosas de dextrosa y glicerol, particularmente para las disoluciones inyectables. Vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E. W. Martin, 1995. Preferiblemente, los vehículos de la invención están aprobados por la agencia reguladora de un gobierno de estado o un gobierno federal, o están enumerados en la Farmacopea Estadounidense, en la Farmacopea Europea u otra farmacopea reconocida en general para su uso en animales, y más particularmente en humanos. Los compuestos y composiciones farmacéuticas de esta invención pueden ser empleados solos o junto con otros fármacos o principios activos para proporcionar una terapia combinada. Los otros fármacos o principios activos pueden formar parte de la misma composición farmacéutica, o ser proporcionados como una composición farmacéutica separada, para su administración al mismo tiempo o en un momento diferente. Ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier composición sólida (comprimidos, pildoras, cápsulas, gránulos, etc.) o líquida (disoluciones, suspensiones o emulsiones) para la administración oral, tópica o parenteral.
En una realización preferida, la invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento, preferiblemente para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con la activación de AMPK, y aún más preferentemente para el tratamiento o la prevención de enfermedades cardiovasculares, inflamatorias, autoinmunes, neurológicas, síndrome metabólico y cáncer.
En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de diabetes de tipo 1 y 2, obesidad, inflamación, dislipidemia, hipertensión, hiperglucemia, hipertriglicerimidemia, resistencia a la insulina, epilepsia y enfermedades de Krabbe/Twitcher, Alzhéimer, Parkinson y Huntington.
En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de diabetes de tipo 1 y tipo 2.
En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la epilepsia. En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Krabbe/Twitcher.
En otra realización preferida, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades de Alzhéimer, Parkinson y Huntington. En una realización más preferida, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido anteriormente, o un tautómero, profármaco, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, o de una composición farmacéutica que contenga al menos un compuesto de fórmula (I), según se ha definido anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de próstata y de mama.
Otro aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento de un trastorno o enfermedad relacionadas con la activación de AMPK, preferentemente seleccionado entre el síndrome metabólico y las enfermedades inflamatorias, autoinmunes, cardiovasculares, neurológicas y el cáncer, y más preferentemente diabetes de tipo 1 y 2, hiperglucemia, obesidad, inflamación, epilepsia, cáncer de próstata, cáncer de mama y las enfermedades de Krabbe/Twitcher Alzhéimer, Parkinson y Huntington, que comprende administrar a un sujeto el compuesto de la invención en una cantidad terapéuticamente efectiva, o una composición farmacéutica de la invención que comprenda el compuesto de la invención en una cantidad terapéuticamente efectiva.
La cantidad de compuesto de la invención, sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, terapéuticamente eficaz que debe administrarse (también referida en la presente descripción como cantidad terapéuticamente eficaz o efectiva), así como su dosificación para tratar un estado patológico con dichos compuestos, dependerá de numerosos factores, entre los que se encuentra la edad, el estado del paciente, la severidad de la enfermedad, la ruta y frecuencia de administración, el compuesto modulador a utilizar, etc. Otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento de obtención de los compuestos de fórmula general (I) que comprende los siguientes pasos:
(a) reacción de condensación entre compuesto de fórmula (II) y un compuesto NH2- NHR3
Figure imgf000014_0001
donde y R3 están definidos anteriormente;
(b) reacción de condensación del compuesto de fórmula (IV)
Figure imgf000014_0002
IV
con el compuesto obtenido en el paso (a) de fórmula (III) durante 12-24 horas a 60- 120°C
Figure imgf000014_0003
(c) reacción del compuesto obtenido en el paso (b) de fórmula (la) con un agente halogenante
Figure imgf000015_0001
la
donde R1-R5 están definidos anteriormente.
En un último aspecto, la presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general (la) o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables correspondientes
Figure imgf000015_0002
la
en la que R1-R5 están definidos anteriormente, con la condición de que cuando es hidrógeno R4 no es hidrógeno.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
FIG. 1. Efecto de activación de AMPK del compuesto 1. Ejemplo del análisis de Western Blot que muestra que el compuesto 1 activa AMPK de una manera dosis dependiente. Este efecto se confirma por el aumento de fosforilación también dependiente de dosis de su sustrato ACC, en un rango de concentraciones comprendido entre 7,5 - 120 μΜ. Las células Hek293 son tratadas con 30 μg del compuesto 1 durante 1 hora. Las células lisadas son analizadas mediante Western Blot usando anti-phosphoThr172 AMPK alfa, anti-AMPKbl (usado como control de carga), anti-phosphoSer79ACC y anti-ACC (usado como control de carga). Los marcadores moleculares de peso están indicados a la derecha de la figura.
FIG. 2. Efecto de activación de AMPK de los compuestos 11 y 13. Ejemplo del análisis de Western Blot que muestra que los compuestos 1 1 y 13 activan AMPK de una manera dosis dependiente. Este efecto se confirma por el aumento de fosforilación también dependiente de dosis de su sustrato ACC, en un rango de concentraciones comprendido entre 5 - 100 μΜ. Las células Hek293 son tratadas con 30 μg de los compuestos 1 1 y 13 durante 1 hora. Las células lisadas son analizadas mediante Western Blot usando anti-phosphoThr172 AMPK alfa, anti-AMPKbl (usado como control de carga), anti-phosphoSer79ACC y anti-ACC (usado como control de carga). Los marcadores moleculares de peso están indicados a la derecha de la figura.
FIG. 3. Efecto de activación de AMPK del compuesto 12. Ejemplo del análisis de Western Blot que muestra que el compuesto 12 activa AMPK de una manera dosis dependiente. Este efecto se confirma por el aumento de fosforilación también dependiente de dosis de su sustrato ACC, en un rango de concentraciones comprendido entre 5 - 100 μΜ. Las células Hek293 son tratadas con 30 μg del compuesto 12 durante 1 hora. Las células lisadas son analizadas mediante Western Blot usando anti-phosphoThr172 AMPK alfa, anti-AMPKbl (usado como control de carga), anti-phosphoSer79ACC y anti-ACC (usado como control de carga). Los marcadores moleculares de peso están indicados a la derecha de la figura. FIG. 4. Efecto de activación de AMPK del compuesto 15. Ejemplo del análisis de Western Blot que muestra que el compuesto 15 activa AMPK de una manera dosis dependiente. Este efecto se confirma por el aumento de fosforilación también dependiente de dosis de su sustrato ACC, en un rango de concentraciones comprendido entre 5 - 50 μΜ. Las células Hek293 son tratadas con 30 μg del compuesto 15 durante 1 hora. Las células lisadas son analizadas mediante Western Blot usando anti-phosphoThr172 AMPK alfa, anti-AMPKbl (usado como control de carga), anti-phosphoSer79ACC y anti-ACC (usado como control de carga). Los marcadores moleculares de peso están indicados a la derecha de la figura.
EJEMPLOS
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de manifiesto la efectividad del producto de la invención.
Ejemplo 1
Procedimiento general de síntesis de los compuestos de fórmula general (I)
Los compuestos de fórmula general (I) fueron sintetizados de acuerdo con la ruta sintética que se recoge en el siguiente esquema de reacción:
Figure imgf000017_0001
a) Hidrazina (1 eq.), EtOH, 12h; b) Cianoacetato de etilo (1 eq.), cat., agua, 90
°C, 12h; c) Selectfluor (2 eq.), MeOH, 3h
Procedimiento general de síntesis de 5-amino-3-fenil-1 H-pirazoles (III)
A una disolución del correspondiente benzoilacetonitrilo (100 mg, 1 eq.) en 10 mL de EtOH a reflujo se añade la correspondiente hidrazina (1 ,5 eq.). La mezcla se deja agitar a reflujo una noche. Una vez terminada la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida y el residuo seco se tritura en Et20, apareciendo un precipitado que se filtra, se lava con Et20 frío y se deja secar al aire.
3-amino-5-(4-clorofenil)-1H-pirazol (111-1)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5-amino-3-fenil-1 /-/-pirazoles, se obtienen 150 mg (66 %) de un sólido blanco. P.f. 169 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO- d6) δ (ppm): 7,65 (d, J = 8,2 Hz, 2H, H2'), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 2H, H3'), 5,73 (s, 1 H, H4), 4,90 (s, 2H, NH2). HPLC: tR= 4,49 (99,9%). EM (ES, modo positivo) m/z 194,0 [M+H]+.
3-amino-5-(4-bromofenil)- 1H-pirazol (II 1-2)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5-amino-3-fenil-1 /-/-pirazoles, se obtienen 74 mg (71 %) de un sólido blanco. P.f. 160 - 162 °C 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1 1 ,72 (s, 1 H, NH), 7,55 (m, 4H, H-Ar), 5,73 (s, 1 H, H4), 4,89 (s, 2H, NH2). HPLC: t = 2,98 (99,9%). EM (ES, modo positivo) m/z 239,8 [M]+.
Procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-í)]piridina}-5'-carbonitrilos (la)
Se suspende la correspondiente ¡satina (1 eq.) en agua (0,05 mL/mg) y a la mezcla se añade cianoacetato de etilo (1 eq.) y el catalizador indicado en cada caso, agitándose a 80 °C durante 1 h. Transcurrido este tiempo, se añade el correspondiente 3-amino-5- fenil-pirazol (1 eq), y se agita una noche a 90 °C. Una vez finalizada la reacción, el crudo se purifica según el procedimiento indicado en cada caso. 3'-(4-clorofenil)-2fi'-dioxo-1 5 6 7'-tetrahidm^
5'-carbonitrilo (la-1)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 340 mg de ¡satina, 581 ,94 mg de 3-amino-5-(4-clorofenil)-1 /-/-pirazol y trietilamina (10 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, el crudo se deja enfriar a ta., apareciendo un precipitado marrón que se filtra y lava con agua y Et20, obteniéndose 666 mg (75 %) de un sólido marrón. Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,92 (s, 1 H, NH), 12,79 (s, 1 H, NH), 11 ,44 (s, 1 H, NH), 11 , 19 (s, 1 H, NH), 1 1 ,02 (s, 1 H, NH), 10,95 (s, 1 H, NH), 7,44 - 7,28 (m, 1 H), 7, 17 - 6,76 (m, 8H, H-Ar), 6,73 - 6,61 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 5,38 - 5,25 (s, 1 H, H5'), 4,96 - 4,89 (s, 1 H, H5'). HPLC (H2015 ^ 95 % MeCN, 0,2% HCOOH durante 10 min): tR= 7,44 (99,9 %). EM (ES, modo positivo): m/z 390,4 [M+H+].
3'-(4-clorofenil)-5-fluoro-2^' lioxo-1 56 7'-tetrahidro
b]pyridina]-5'-carbonitrilo (la-2)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 200 mg de 5-fluoroisatina, 234,53 mg de 3-amino-5-(4-clorofenil)-1/-/-pirazol y ácido acético (40 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, el crudo se deja enfriar a ta. Se filtra el precipitado resultante, se lava con agua y se deja secar, obteniéndose 290 mg (58 %) de un sólido marrón. Pf. > 350 °C.1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,97 (s, 1H), 12,84 (s, 1H), 11,45 (s, 1H), 11,25 (s, 1H), 11,06 (s, 1H), 11,00 (s, 1H), 7,68 - 6,85 (m, 9H, H-Ar), 5,38 (s, 1H, H5'), 4,97 (s, 1H, H5') HPLC: t = 3,80 (95 %). EM (ES, modo positivo): m/z 407,8 [M+H+]. 3'-(4-clorofen¡l)-2^'-d¡oxo-5-n¡tro-1 56 7'-tetraN
b Jpiridina ]-5 '-carbonitrilo (la-3)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 200 mg de 5-nitroisatina, 197,53 mg de 3-amino-5-(4-clorofenil)-1/-/-pirazol y trietilamina (40 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, se elimina parte del disolvente a presión reducida hasta dejar un volumen aproximadamente igual a la mitad del inicial. Al enfriar a t.a., se observa la aparición de un precipitado que se filtra y lava con agua y DCM, obteniéndose 140 mg (31 %) de un sólido rojo. Pf. > 350 °C.1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,05 (s, 1H), 12,91 (s, 1H), 11,76 (s, 1H), 11,67 (s, 1H), 11,60 (s, 1H), 11,33 (s, 1H), 8,34-6,81 (m, 9H), 5,62 (s, 1H, H5'), 5,11 (s, 1H, H5'). HPLC: tR= 3,80 (97 %). EM (ES, modo positivo): m/z 435,4 [M+H+].
3'-(4-clorofen¡l)-2^'-d¡oxo-5-fen¡l-1 56 7'-tetraN
b]piridina]-5'-carbonitrilo (la-4)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 35 mg de 5-fenilisatina, 30,36 mg de 3-amino-5-(4-clorofenil)-1/-/-pirazol y ácido acético (10 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, se elimina parte del disolvente a presión reducida hasta dejar un volumen aproximadamente igual a la mitad del inicial. Se deja enfriar a t.a y el sólido resultante se filtra y se lava con agua y DCM, obteniéndose 21 mg (25 %) de un sólido blanco. Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,96 (s, 1 H), 12,83 (s, 1 H), 11 ,45 (s, 1 H) 11 ,23 (s, 1 H), 1 1 ,03 (s, 1 H), 7,36 - 6,86 (m, 14H, H-Ar), 5,40 (s, 1 H, H5'), 4,96 (s, 1 H, H5'). HPLC: tR= 4,36 (96%). EM (ES, modo positivo): m/z 465,6 [M+H+].
5-cloro-3'-(4-clorofenil)-2^'-dioxo-1',5',6' '-tetrahidrospiro[indolin
b Jpiridina ]-5 '-carbonitrilo (la-5)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 200 mg de 5-cloroisatina, 213,27 mg de 3-amino-5-(4-clorofenil)-1 /-/-pirazol y ácido acético (40 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida y el residuo se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo: hexano), obteniéndose 80 mg (17 %) de un sólido blanco. Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10,36 (s, 1 H), 10,14 (s, 1 H), 10, 10 (s, 1 H), 9,99 (s, 1 H), 7,59 - 6,98 (m, 14H, H-Ar), 5,00 (s, 1 H, H5'), 4,73 (s, 1 H, H5'). HPLC: tR= 3,98 (98 %). EM (ES, modo positivo): m/z 424,4 [M+].
3'-(4-clorofenil)-6-fluor-2, 6'-dioxo- 1 ', 5', 6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b Jpiridina ]-5 '-carbonitrilo (la-6)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 90 mg de 6-fluoroisatina, 66,97 mg de 3-amino-5-(4-clorofenil)-1 /-/-pirazol y piperidina (10 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, el crudo se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo: hexano), obteniéndose 50 mg (36 %) de un sólido blanco. Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,95 (s, 1 H), 12,83 (s, 1 H), 1 1 ,47 (s, 1 H), 1 1 ,23 (s, 1 H), 1 1 ,20 (s, 1 H), 11 ,13 (s, 1 H), 7,45 - 6,48 (m, 14H, H-Ar), 5,39 (s, 1 H, H5'), 4,95 (s, 1 H, H5'). HPLC: tR= 3,86 (96 %). EM (ES, modo positivo): m/z 408,3 [M+H+].
3 '-(4-bromofenil) -2, 6 '-dioxo- 1',5',6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3, 4 '-pirazol[3, 4-b Jpiridina ]- 5' -carbonitrilo (la-7) Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 200 mg de ¡satina, 317 mg de 3-amino-5-(4-bromofenil)-1 /-/-pirazol y piperidina (10 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, el crudo se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo: hexano), obteniéndose 336 mg (57 %) de un sólido beige. Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,95 (s, 1 H), 12,81 (s, 1 H), 1 1 ,20 (s, 1 H), 1 1 ,04 (s, 1 H), 10,95 (s, 1 H), 10,44 (s, 1 H), 7,55 - 6,75 (m, 10H, H-Ar), 6,50 - 6,46 (t, J = 7,29 Hz, 4H), 5,34 (s, 1 H, H5'), 4,92 (s, 1 H, H5'). HPLC (H20 15 ^ 95 % MeCN, 0,2% HCOOH durante 10 min): tR= 7,44 (99,9 %). EM (ES, modo positivo): m/z 390,0 [M+H+].
3'-(4-bromofenil)-6-fluoro-2, 6'-dioxo- 1 ', 5', 6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b Jpiridina ]-5 '-carbonitrilo (la-8)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 100 mg de 6-fluoroisatina, 144,19 mg de 3-amino-5-(4-bromofenil)-1 /-/-pirazol y ácido acético (40 %mol) como catalizador. Una vez finalizada la reacción, el crudo se deja enfriar a t.a. Se filtra el precipitado marrón resultante, se lava con agua y se deja secar, obteniéndose 158 mg (58 %) de un sólido marrón. Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,97 (s, 1 H), 12,84 (s, 1 H), 1 1 ,45 (s, 1 H), 1 1 ,25 (s, 1 H), 1 1 ,06 (s, 1 H), 1 1 ,00 (s, 1 H), 7,68 - 6,85 (m, 9H), 5,38 (s, 1 H, H5'), 4,97 (s, 1 H, H5'). HPLC: tR= 3,92 (98%). EM (ES, modo positivo): m/z 454,1 [M+2H+].
Procedimiento general de síntesis de 5'-fluoro-2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-í)]piridina}-5'-carbonitrilos (I)
Se disuelven en un matraz el derivado de 2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-b]piridina}-5'-carbonitrilo correspondiente (1 eq.) y Selectfluor (2 eq.) en MeOH y se agita a reflujo durante 3 h. Una vez finalizada la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida. El residuo se filtra sobre gel de sílice (DCM:MeOH 10: 1) para eliminar los restos inorgánicos y el producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo realizados con una columna Sunfire C18 de tamaño de partícula 5 mieras y de dimensiones 19x150 mm, usando el gradiente de elución indicado en cada caso. 3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2^'-dioxo-1 5 6 7'-tetrahidrospiro[in^
b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 1 y 2)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5'-fluoro-2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 200 mg de la-1 y 181 ,2 mg de Selectfluor, obteniéndose 60 mg (29 %) de un sólido blanco. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución ¡socrático H20-MeCN 31 %-69%, 0, 1 % HCOOH durante 60 min.
Figure imgf000022_0001
1 : Resultaron 12,5 mg (6 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7,23 (t, J = 7,8 Hz, 1 H, H4), 7,12 (d, J = 8, 1 Hz, 2H, H3"), 6,93 (t, J = 7,70 Hz, 2H, H5, H6), 6,82 (d, J = 8,17 Hz, 2H, H2"), 6,70 (t, J = 7,63 Hz, 1 H, H7). HPLC (Isocrático H20-MeCN 31-69 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): tR= 38,62 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 408,2 [M+H+]. 2: Resultaron 4 mg (2 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7,26 (t, J = 7,5 Hz, 1 H, H4), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H3"), 6,98 (d, J = 7,9 Hz, 1 H, H6), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, 3H, H2", H5), 6,76 (t, J = 7,6 Hz, 1 H, H7). HPLC (Isocrático H20-MeCN 31-69%, 0,1 % HCOOH durante 60 min): tR= 41 ,47 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 408,2 [M+H+]. 3'-(4-clorofenil)-5, 5'-difluoro-2, 6'-dioxo- 1',5',6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3, 4- b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 3 y 4)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5'-fluoro-2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 50 mg de la-2 y 86,87 mg de Selectfluor, obteniéndose 40 mg (77 %) de un sirope marrón. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución ¡socrático H20-MeCN 31%-69%, 0,1% HCOOH durante 40 min.
Figure imgf000023_0001
3: Pf. > 350 °C.1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,94 (s, 1H, NH), 11,51 (s, 1H, NH), 7,20 (d, J= 8,3 Hz, 2H, H3"), 7,12 (td, J= 9,1, 2,8 Hz, 1H, H7), 6,96 (dd, J = 8,7, 4,4 Hz, 1H, H4), 6,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H2"), 6,69 (dd, J = 8,2, 2,7 Hz, 1H, H6). HPLC (Isocrático H20-MeCN 31-69 %, 0,1% HCOOH durante 60 min): tR= 31,39 (99,9 %). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 426,4 [M+H+].4: Pf. > 350 °C.1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,12 (s, 1H, NH), 11,98 (s, 1H, NH), 11,44 (s, 1H, NH), 7,24 (d, J= 8,5 Hz, 2H, H3"), 7,14 (td, J = 8,5, 2,3 Hz, 1H, H7), 7,00 (dd, J= 8,6, 4,4 Hz, 1H, H4), 6,91 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H2"), 6,72 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H6). HPLC (Isocrático H20-MeCN 31-69 %, 0,1% HCOOH durante 60 min): tR= 36,34 (99,9 %). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 426,4 [M+H+].
3'-(4-clorofenil)-5'-difluoro-5-nitro-2, 6'-dioxo- 1 ', 5', 6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 5 y 6)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5'-fluoro-2,6'-dioxo-3'-fenil-1',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 50 mg de la-3 y 81,48 mg de Selectfluor, obteniéndose 40 mg (77 %) de un sirope naranja. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución isocrático H20-MeCN 33%-70%, 0,1% HCOOH durante 60 min.
Figure imgf000024_0001
5: Resultaron 4 mg (8 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,22 (s, 1 H, NH), 12,27 (s, 1 H, NH), 8,24 (dd, J = 8,1 , 1 ,5 Hz, 1 H, H4), 7,54 (s, 1 H, H1), 7,21 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H3"), 7,05 (m, 1 H, H7), 6,92 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H2"), 6,55 (m, 1 H, H6). HPLC (Isocrático H20-MeCN 30-70 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): t = 32,41 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 453,3 [M+H+]. 6: Resultaron 2 mg (4 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 12,86 (s, 1 H, NH), 1 1 ,65 (s, 1 H, NH) 8,65 (dd, J = 8, 1 , 1 ,5 Hz, 1 H, H4), 7,68 (s, 1 H, H 1), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H3"), 7,28 (m, 1 H, H7), 6,83 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H2"), 6,77 (m, 1 H, H6). HPLC (Isocrático H20-MeCN 30-70 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): t = 36,74 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 453,3 [M+H+].
3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2, 6'-dioxo-5-fenil- 1 ', 5', 6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 7 y 8)
Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5'-fluoro-2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 50 mg de la-4 y 76,04 mg de Selectfluor, obteniéndose 50 mg (97 %) de un aceite naranja. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución isocrático H20-MeCN 40%-60%, 0, 1 % HCOOH durante 60 min.
Figure imgf000025_0001
7: Resultaron 4 mg (8 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,21 (s, 1 H, NH), 1 1 ,40 (s, 1 H, NH), 7,47 (d, J = 8,2 Hz, 1 H, H4), 7,41 - 7,25 (m, 3H, H3", H7), 7,08 (dd, J = 17,8, 8,8 Hz, 6H, Ph, H6), 6,88 (d, J = 8,2 Hz, 2H, H2"). HPLC (Isocrático H20-MeCN 40-60 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): t = 22,73 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 484,2 [M+H+]. 8: Resultaron 2 mg (4 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,65 (s, 1 H, NH), 1 1 ,35 (s, 1 H, NH), 7,88 (d, J = 8,2 Hz, 1 H, H4), 7,61 - 7,40 (m, 3H, H3", H7), 7,12 (dd, J = 17,8, 8,8 Hz, 6H, Ph, H6), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 2H, H2"). HPLC (Isocrático H20-MeCN 40-60 %, 0,1 % HCOOH durante 60 min): tR= 25,31 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 484,2 [M+H+].
5-cloro-3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2, 6'-dioxo- 1 ', 5', 6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 9 y 10) Siguiendo el procedimiento general de síntesis de 5'-fluoro-2,6'-dioxo-3'-fenil-1 ',5',6',7'- tetrahidrospiro{indolina-3,4'-pirazol[3,4-£)]piridina}-5'-carbonitrilos, se partió de 60 mg de la-5 y 100,2 mg de Selectfluor, obteniéndose 60 mg (96 %) de un aceite naranja. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución isocrático H20-MeCN 36%-64%, 0, 1 % HCOOH durante 60 min.
Figure imgf000026_0001
9: Resultaron 4 mg (6 %). Pf. > 350 °C.1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,24 (s, 1H, NH), 11,94 (s, 1H, NH), 11,38 (s, 1H, NH), 7,31 (dd, J= 8,4, 2,2 Hz, 1H, H6), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H3"), 6,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H7), 6,88 (d, J = 8,5 Hz, 2H, H2"), 6,79 (d, J = 2,2 Hz, 1H, H4). HPLC (Isocrático H20-MeCN 36-64 %, 0,1% HCOOH durante 60 min): tR= 21,93 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 443,4 [M+H+].10: Resultaron 4 mg (6 %). Pf. > 350 °C.1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,16 (s, 1H, NH), 12,10 (s, 1H, NH), 11,57 (s, 1H, NH), 7,34 (dd, J= 8,4, 1,9 Hz, 1H, H6), 7,25 (d, J= 8,5 Hz, 1H, H7), 7,01 (d, J= 8,4 Hz, 2H, H3"), 6,90 (d, J= 8,4 Hz, 2H, H2"), 6,81 (s, 1H, H4). HPLC (Isocrático H20-MeCN 36-64 %, 0,1% HCOOH durante 60 min): tR= 25,42 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 443,4 [M+H+].
3'-(4-clorofenil)-56-difluor-2^'-dioxo-1 56 7'-tetrahidrospi
b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 11 y 12) Se disuelven en un matraz la-6 (50 mg, 0,123 mmol) y Selectfiuor (86,87 mg, 0,246 mmol) en unos 50 mL de MeOH y se agita a reflujo durante 2 h. Una vez finalizada la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo:hexano), obteniéndose 12 mg (23 %) de un sólido blanco. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución isocrático H20-MeCN 33%-67%, 0,1% HCOOH durante 60 min. Compuesto Estructura MS (ES+) /HPLC
MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 425,6 [M+H+].
1 1
HPLC (Isocrático H20-MeCN 33-67 %, 0,1 % HCOOH durante 60 min): tR= 38,27 (99,9%).
MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 425,6 [M+H+].
12
HPLC (Isocrático H20-MeCN 33-67 %, 0,1 % HCOOH durante 60 min): tR= 40,95 (99,9%). o
11 : Resultaron 7,8 mg (15 %). Pf. 270 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 13,17 (s, 1 H, NH), 1 1 ,92 (s, 1 H, NH), 1 1 ,38 (s, 1 H, NH), 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 2H, H3"), 6,93 (dd, J = 8,5, 5,3 Hz, 1 H, H4), 6,87 (d, J = 8,5 Hz, 2H, H2"), 6,81 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1 H, H7), 6,60 - 6,50 (m, 1 H, H5). HPLC (Isocrático H20-MeCN 33-67 %, 0,1 % HCOOH durante 60 min): tR= 38,27 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 425,6 [M+H+]. 12: Resultaron 4,0 mg (7 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ (ppm):7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H2"), 7,22 - 7, 14 (m, 1 H), 7,09 - 6,99 (m, 1 H), 6,88 (d, J = 8,5 Hz, 2H, H3"), 6,61 - 6,50 (m, 1 H). HPLC (Isocrático H20-MeCN 33- 67 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): tR= 40,95 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 425,6 [M+H+].
3'-(4-bromofen¡l)-5'-fluoro-2fi'-d¡oxo-1 5 6 7'-tetraN
b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 13 y 14)
Se disuelven en un matraz la-7 (100 mg, 0,230 mmol) y Selectfiuor (81 ,58 mg, 0,238 mmol) en 50 mL de MeOH y se agita a reflujo durante 2 h. Una vez finalizada la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo: hexano), obteniéndose 20 mg (19 %) de un sólido beige. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución isocrático H20-MeCN 33-67%, 0,1 % HCOOH durante 50 min.
Figure imgf000028_0001
13: Resultaron 4,5 mg (4 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7,22 (m, 3H, H-Ar), 6,93 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 2H, H2"), 6,70 (dt, J = 7,6, 1 ,1 Hz, 1 H, H5). HPLC (Isocrático H20-MeCN 33-67 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): tR= 31 ,50 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 452,0 [M+]. 14: Resultaron 4,2 mg (4 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN. (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2H, H2"), 7,27 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,02 - 6,91 (m, 1 H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H3"), 6,49 - 6,35 (m, 1 H). HPLC (Isocrático H20-MeCN 33- 67 %, 0, 1 % HCOOH durante 60 min): tR= 33,18 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 452,0 [M+]. 3'-(4-bromofenil)-5', 6-difluoro-2, 6'-dioxo- 1 ', 5', 6', 7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo (Compuestos 15 y 16)
Se disuelven en un matraz esférico la-8 (70 mg, 0, 155 mmol) y Selectfluor (82,25 mg, 0,232 mmol) en unos 50 mL de MeOH y se agita a reflujo durante unas 4 h. Una vez finalizada la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo: hexano), obteniéndose 30 mg (41 %) de un sólido blanco. El producto final se separa en sus parejas diastereoméricas mediante HPLC semipreparativo usando un gradiente de elución isocrático H20-MeCN 35%-40%, 0, 1 % HCOOH durante 60 min.
Figure imgf000029_0001
13,14 (s, 1 H, NH), 1 1 ,85 (s, 1 H, NH), 1 1 ,40 (s, 1 H, NH), 7,33 (d, J = 8,4 Hz, 2H, H3"), 6,91 (dd, J = 8,5, 5,3 Hz, 1 H, H4), 6,85 - 6,74 (m, 3H, H2", H7), 6,53 (ddd, J = 9,8, 8,4, 2,5 Hz, 1 H, H5). HPLC (Isocrático H20-MeCN 35-40 %, 0,1 % HCOOH durante 60 min): fR=30,7 (99,9%). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 471 ,1 [M+H+]. 16: Resultó 1 mg (1 %). Pf. > 350 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,49 - 7,07 (m, 4H), 7,06 - 6,66 (m, 3H). HPLC (Isocrático H20-MeCN 35-40%, 0,1 % HCOOH durante 60 min): t = 33,5 (99,9 %). MS (ES+): MS (ES, modo positivo): m/z 471 , 1 [M+H+]. Ejemplo 2
Medidas de la activación de AMPK en células en cultivo por los compuestos de fórmula general (I)
Línea celular y tratamientos. La línea celular utilizada para los tratamientos con los diferentes reactivos ensayados fue HEK293T (células embrionarias de riñon humano). Las células crecieron en medio DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Médium) con 25 mM de glucosa suplementado con un 10% de suero bovino fetal inactivado, 2 mM glutamina 100 unidades/ml de penicilina y 100 μg/ml de estreptomicina en una atmósfera húmeda a 37°C con un 5% de C02. Las células se sembraron en placas de 60 mm (p.60) para obtener un 70-80% de confluencia y se lavaron en tampón Krebs Ringer (KRB: NaCI 12,5 mM, CaCI2 15 mM, KH22P04 0,5 mM, KCI 3 mM, NaHC03 2,5 mM, MgSO4 0,5 mM, HEPES 10 mM pH 7,4, 95:5 02 /C02) a 37°C. A continuación, se trataron durante 1 h a 37°C en la estufa de cultivos, añadiendo a cada una de ellas las cantidades adecuadas de los compuestos de fórmula general (I) 1 , 11, 12, 13, y 15, (stock 5 mM en DMSO) disueltos en KRB/25 mM glucosa para alcanzar las concentraciones finales indicadas en la Figuras. Como control de activación se usó fenformina 5 mM.
Ejemplo3
Obtención de extractos de células HEK293T
Tras los correspondientes tratamientos, se eliminó el sobrenadante y se congelaron rápidamente en N2 líquido. Las placas fueron procesadas una por una, y mantenidas en hielo, añadiendo en primer lugar el tampón de lisis frío. La composición del tampón era la siguiente: Tris 10 mM pH 7,4, EDTA 15 mM pH 8,0, NaF 50 mM, Na4P207 15 mM, sacarosa 0,6 M, 2-Mercaptoetanol 15 mM, una mezcla de inhibidores de proteasas sin EDTA (Roche) y PMSF 1 mM. Las células se recogieron en tampón de lisis con la ayuda de un rascador y fueron lisadas pasándolas por jeringas de 24 Gx5/8" 4 veces cada muestra. Se reservó una pequeña cantidad para medir la cantidad de proteína mediante Bradford y al resto se le añadió tampón de carga para electroforesis y se hirvió durante 5 min, manteniéndose a -20°C hasta su uso. La concentración de proteínas se determinó por el método de Bradford, con el Bio-Rad Bradford Protein Assay Reagent (BioRad).
Ejemplo4
Análisis de proteínas mediante Western Blot Los extractos de proteínas se analizaron por SDS-PAGE en geles del 8 o del 10% de acrilamida y de 1 ,5 mm de grosor. Se cargaron 30 μg de proteína y se transfirieron a una membrana de PVDF (Millipore) durante 1 ,5 h a 100 V. El bloqueo se hizo con 5% de leche desnatada en TBS-T durante 1 h a temperatura ambiente. La inmunodetección se realizó incubando el anticuerpo primario durante toda la noche a 4°C. Tras tres lavados a temperatura ambiente con TBS-T de 10 min cada uno, se incubaron con su correspondiente anticuerpo secundario conjugado a HRP. Después de tres lavados de 10 min a temperatura ambiente con TBS-T, las membranas se revelaron con ECL plus (Pierce) y se procesaron con un equipo FUJI LAS 3000 (Fujifilm). Los anticuerpos utilizados fueron: Anti-pAMPKaThr172, 8ηίί-ΑΜΡΚβ1/β2, anti-ACC y anti-pACCser79 de la casa Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA) diluidos 1/1000. El anticuerpo secundario goat anti-rabbit HRP de la casa Santa Cruz Technology a una dilución 1/5000 ó 1/10000. La detección de bandas con los anticuerpos Anti-pAMPKaThr172 y anti-pACCser79 (sustrato de AMPK) respecto de sus controles de carga respectivos (anti- ΑΜΡΚβ1/β2 y anti-ACC) se tomó como indicativo de activación de AMPK.
Ejemplo 6
Resultados. Descripción efecto dosis-respuesta de los compuestos de fórmula general (I)
El estado de activación del complejo AMPK se correlaciona con los niveles de la forma fosforilada de la subunidad catalítica ΑΜΡΚα pT172. Como se observa en el primer panel de las Figuras 1-4, tanto el tratamiento de las células HEK293T con dosis crecientes de los compuestos 1 , 11 , 12, 13 y 15 aumentó los niveles endógenos de ΑΜΡΚα pT172, siendo indicativo del aumento del estado de activación del complejo AMPK. La activación alcanzada en algunos casos fue similar a la que se consiguió con fenformina, un compuesto con reconocida capacidad activadora de AMPK.
El segundo panel muestra el análisis del nivel endógeno de ΑΜΡΚβΙ , que se incluyó como control de carga para demostrar que el aumento en los niveles de AMPKa pT172 no eran debidos a un aumento de los niveles totales del complejo enzimático.
En el tercer panel se muestra el estado de fosforilación de la enzima acetil CoA carboxilasa (ACC), que es un sustrato de la proteína quinasa AMPK, por lo que un aumento de la actividad de AMPK incrementa el estado de fosforilación de este sustrato (ACC pS79). Como se observa, el estado de fosforilación de ACC aumenta de manera paralela a los niveles de AMPKa pT172.
El cuarto panel indica los niveles totales de ACC como control de carga, para validar que el cambio en los niveles de ACC pS79 son debidos a la fosforilación de la proteína y no a un aumento de los niveles totales de la misma.
Todos estos datos indican que los compuestos de fórmula general (I) 1 , 11, 12, 13 y 15 son capaces de inducir in vivo la activación del complejo AMPK, a las dosis indicadas.

Claims

REIVINDICACIONES
Compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000032_0001
(I)
o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, en la que:
se selecciona entre hidrógeno, halógeno, alquilo (C Ci0) sustituido o no sustituido, ORa, SRa, COO(Ra), CF3, N(Ra)2, y un grupo arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido;
R2 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C Ci0) sustituido o no sustituido, y CORa;
R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C Ci0) sustituido o no sustituido, y arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido;
R4 y R5 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido, halógeno, y grupo nitro;
X es un halógeno; y
Ra se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C Ci0) sustituido o no sustituido, y arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido.
Compuesto según la reivindicación 1 , donde X es flúor.
Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R^ es cloro, bromo, o un grupo arilo (C6-Ci8) sustituido o no sustituido.
Compuesto según la reivindicación 3, donde R^ es cloro, bromo, o un grupo fenilo sustituido.
Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R2 es hidrógeno.
- Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R3 es hidrógeno, un grupo fenilo, o 4-metoxifenilo.
- Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R4 se selecciona de entre hidrógeno y flúor.
- Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde R5 se selecciona de entre hidrógeno, flúor, un grupo nitro, y un grupo fenilo.
- Compuesto según la reivindicación 1 , donde el compuesto se selecciona de la lista que consiste en:
3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-1 ',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'-pirazol[3,4- b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5,5'-difluoro-2,6'-dioxo-1 ',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5-fluoro-2,6'-dioxo-5-nitro-1 ',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-5-fenil-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
5-cloro-3'-(4-clorofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-clorofenil)-5',6-difluor-2,6'-dioxo-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo;
3'-(4-bromofenil)-5'-fluoro-2,6'-dioxo-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo; y
3'-(4-bromofenil)-5',6-difluoro-2,6'-dioxo-1',5',6',7'-tetrahidrospiro[indolina-3,4'- pirazol[3,4-b]piridina]-5'-carbonitrilo.
D.- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
1 1.- Uso de un compuesto de fórmula (I), o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables tal como se define en las reivindicaciones 1 a 9, para la elaboración de un medicamento. 12.- Uso de un compuesto de fórmula (I), o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables tal como se define en las reivindicaciones 1 a 9, para la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento de enfermedades relacionadas con la activación de AMPK. 13.- Uso según la reivindicación 12, donde las enfermedades se seleccionan de entre enfermedades cardiovasculares, inflamatorias, autoinmunes, neurológicas, síndrome metabólico y cáncer.
14. - Uso según la reivindicación 13, donde las enfermedades se seleccionan de entre diabetes de tipo 1 y tipo 2, obesidad, inflamación, dislipidemia, hipertensión, hiperglucemia, hipertriglicerimidemia, resistencia a la insulina, epilepsia y las enfermedades de Krabbe/Twitcher, Alzhéimer, Parkinson y Huntington.
15. - Uso según la reivindicación 14, donde la enfermedad es diabetes de tipo 1 , epilepsia, enfermedad de Krabbe/Twitcher, Alzhéimer, Parkinson o Huntington.
16. - Uso según la reivindicación 13, para la elaboración de un medicamento para la prevención o el tratamiento del cáncer de próstata y de mama. 17.- Procedimiento para la obtención del compuesto de fórmula general (I) tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 que comprenden los siguientes pasos:
(a) reacción de condensación entre compuesto de fórmula (II) y un compuesto NH2-
NHR3
Figure imgf000034_0001
II donde y R3 están definida en la reivindicación 1 ; reacción de condensación del compuesto de fórmula (IV)
Figure imgf000035_0001
con el compuesto obtenido en el paso (a) de fórmula (III)
Figure imgf000035_0002
durante 12-24 horas a 60-120°C;
donde R1 f R2, R3, R4 y R5 están definidos en la reivindicación 1 ; y (c) reacción del compuesto obtenido en el paso (b) de fórmula (I
Figure imgf000035_0003
la
con un agente halogenante;
donde R1 f R2, R3, R4 y R5 están definidos en la reivindicación 1. - Procedimiento según la reivindicación 17, donde el agente halogenante de la etapa (c) es selectfluor. - Compuesto de fórmula (la)
Figure imgf000036_0001
la
o sus isómeros, sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, en la que:
se selecciona entre hidrógeno, halógeno, alquilo (C1-C10) sustituido sustituido, ORa, SRa, COO(Ra), CF3, N(Ra)2, y un grupo arilo sustituido sustituido
R2 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido, y CORa; R3 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido, y arilo sustituido o no sustituido;
R4 y R5 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, arilo, halógeno, y grupo nitro;
Ra se selecciona entre hidrógeno, alquilo (C1-C10) sustituido o no sustituido, y arilo sustituido o no sustituido;
con la condición de que cuando R^ es hidrógeno, R4 no es hidrógeno. 20.- Compuesto según la reivindicación 19, donde X es flúor.
21.- Compuesto según las reivindicaciones 19 y 20, donde R^ es cloro, bromo, o un grupo arilo sustituido o no sustituido. 22.- Compuesto según la reivindicación 21 , donde R^ es cloro, bromo, o un grupo fenilo sustituido.
23.- Compuesto según las reivindicaciones 19 a 22, donde R2 es hidrógeno.
24.- Compuesto según las reivindicaciones 19 a 23, donde R3 es hidrógeno, un grupo fenilo, o 4-metoxifenilo.
25. - Compuesto según las reivindicaciones 19 a 24, donde R4 se selecciona de entre hidrógeno y flúor.
26. - Compuesto según las reivindicaciones 19 a 25, donde R5 se selecciona de entre hidrógeno, flúor, un grupo nitro, y un grupo fenilo.
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