WO2017052322A1 - 아데노신 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

아데노신 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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WO2017052322A1
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purin
dihydroxy
carboxamide
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정낙신
이상국
유진하
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퓨쳐메디신 주식회사
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    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention relates to an adenosine derivative, a method for preparing the same, and a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the same as an active ingredient.
  • Cancer is one of the incurable diseases that civilization has to solve, and huge capital is invested in the development to cure it all over the world.In Korea, it is the number one disease death cause and more than 100,000 people a year It is diagnosed and about 60,000 or more die.
  • Carcinogens that cause cancer are smoking, ultraviolet rays, chemicals, foods, and other environmental factors.
  • the causes of various cancers are difficult to develop the therapeutic agents, and the effects of the therapeutic agents also vary depending on the site of occurrence.
  • the materials used as therapeutic agents have considerable toxicity, and do not selectively remove only cancer cells. Therefore, there is an urgent need for the development of low-toxic and effective anti-cancer agents to prevent the development of cancer as well as its treatment after the occurrence of cancer.
  • Cancer also called neoplasia, is generally characterized by "uncontrolled cell growth.” These abnormal cell growths form cell masses called tumors that penetrate into surrounding tissues and, in severe cases, metastasize to other organs in the body. Cancer is an intractable chronic disease that, even if treated with surgery, radiation, and chemotherapy, in many cases does not heal fundamentally, suffers the patient, and ultimately leads to death. There are many factors that cause cancer, but they can be divided into internal and external factors. The mechanism by which normal cells undergo transformation into cancer cells has not been precisely identified, but at least 80-90% is known to be influenced by external factors such as environmental factors. Internal factors include genetic factors, immunological factors, and external factors include chemicals, radiation, and viruses.
  • cancer cells Genes involved in the development of cancer include oncogenes and tumor suppressor genes, which occur when the balance between them is broken down by these internal or external factors. Because cancer cells have many similar properties to normal cells, it is not easy to remove cancer cells without damaging normal cells. However, cancer cells have some characteristics that distinguish them from several normal cells. First, cancer cells are not regulated in cell proliferation. Second, they are relatively lacking in differentiation. Third, they penetrate and spread to surrounding tissues. . Normal cells proliferate by receiving signals from growth factors as needed, whereas cancer cells have low dependence on growth factors and have no contact inhibition, which inhibits growth by contact with surrounding cells. Secrete angiogenic factor to promote metastasis.
  • cancer cells are not differentiated, do not cause apoptosis or programmed cell death, and have genetically unstable characteristics. Genetic instability of cancer cells is very important in cancer progression and is known to induce resistance to chemotherapeutic agents (Folksman et al., Science, 235, 442-447, 1987).
  • Cancer is classified into blood cancer and solid cancer, and it occurs in almost every part of the body such as lung cancer, stomach cancer, breast cancer, colon cancer, oral cancer, liver cancer, uterine cancer, esophageal cancer, and skin cancer.
  • the cancer with the highest mortality rate compared to 1996 is gastric cancer, followed by liver cancer.
  • liver cancer is one of the most common cancers in the world. In Korea, the incidence rate is decreasing due to HBV vaccination, but the mortality rate from cancer is still high.
  • the 2005 National Cancer Center data among the seven largest cancers in Korea, the direct medical expenditure of liver cancer is the second highest after lung cancer, but the death loss is the largest among all cancers. Liver cancer is most common among men in their 50s who are actively engaged in economic activity. The incidence of liver cancer is fifth among all cancers, but mortality is second.
  • Adenosine receptors are G-protein-coupled receptors with four subtypes of A1, A2A, A2B and A3.
  • A2A and A2B increase cyclic adenosine monophosphate (cAMP), while A1 and A3 increase cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Because it reduces cAMP, intracellular signaling is affected by which receptors are expressed.
  • Adenosine receptors are widely expressed in various cells, and among the adenosine derivatives, A3AR agonists that are selective for A3 adenosine receptors (A3AR) activate endogenous A3 adenosine receptors than other subtype receptor-related agonists. It is considered that the development potential as a drug is high because it is better. In addition, since the activation of A3AR is involved in inflammatory or immune responses, agonists for A3AR are known to be effective in inhibiting inflammatory diseases such as cardiovascular disease, immune disease, rheumatoid arthritis and colitis and cancer cell suppression.
  • the adenosine derivative according to the present invention has a high affinity and selectivity as an agonist of the A3 adenosine receptor, and cancer cells using liver cancer cell SK-HEP-1.
  • the present invention was completed by confirming that the transplanted nude mouse experimental animal model shows a remarkably superior tumor growth inhibitory effect as compared with a conventionally known agonist of A3 adenosine receptor.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing the adenosine derivative.
  • Another object of the present invention is to prevent or prevent any one disease selected from the group consisting of cancer, cardiovascular disease and immune disease containing the adenosine derivative, its stereoisomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. It provides a therapeutic pharmaceutical composition.
  • Another object of the present invention is to prevent or improve any one disease selected from the group consisting of cancer, cardiovascular disease and immune disease containing the adenosine derivative, its stereoisomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • any one disease selected from the group consisting of cancer, cardiovascular disease and immune disease containing the adenosine derivative, its stereoisomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a compound represented by Formula 1, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 and R 2 are independently —H or C 1-10 straight or branched alkyl
  • R 3 and R 4 are independently —H, C 1-5 straight or branched chain alkyl, unsubstituted or substituted 3-6 membered cycloalkyl, unsubstituted or substituted C 6-14 aryl C 1-5 straight chain Or branched alkyl or straight or branched chain alkyl of unsubstituted or substituted 5-14 membered heteroaryl C 1-5 comprising one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S,
  • substituted 3-6 membered cycloalkyl, straight or branched chain alkyl of substituted C 6-14 aryl C 1-5 and straight or branched chain alkyl of substituted 5-14 membered heteroaryl C 1-5 are independently C 1-5 straight or branched alkoxy, halogen or phenyl is substituted;
  • X is -H or halogen.
  • Step 1 Preparing a compound represented by Chemical Formula 3 by reacting a compound represented by Chemical Formula 2 with a compound represented by Chemical Formula 13 (step 1);
  • Step 2 Preparing a compound represented by Chemical Formula 4 by adding tetrabutylammonium fluoride to the compound represented by Chemical Formula 3 prepared in Step 1 (Step 2);
  • Step 3 Preparing a compound represented by Chemical Formula 5 by adding 4-nitrobenzoyl chloride or benzoyl chloride to the compound represented by Chemical Formula 4 prepared in Step 2 (Step 3);
  • Step 4 Preparing a compound represented by Chemical Formula 6 by adding trifluoroacetic acid to the compound represented by Chemical Formula 5 prepared in Step 3 (Step 4);
  • Step 5 Preparing a compound represented by Chemical Formula 7 by adding tert-butyldimethylsilyl trifluoromethane to the compound represented by Chemical Formula 6 prepared in Step 4 (Step 5);
  • Step 6 Preparing a compound represented by Chemical Formula 8 by adding sodium hydroxide to the compound represented by Chemical Formula 7 prepared in Step 5 (Step 6);
  • Step 7 Preparing a compound represented by Chemical Formula 9 by adding dimethyl sulfoxide and acetic anhydride to the compound represented by Chemical Formula 8 prepared in Step 6 (Step 7);
  • Step 8 Preparing a compound represented by Chemical Formula 10 by adding a Tolene reagent to the compound represented by Chemical Formula 9 prepared in Step 7 (Step 8);
  • Step 11 Preparing a compound represented by Chemical Formula 1 by reacting the compound represented by Chemical Formula 15 with the compound represented by Chemical Formula 12 prepared in Step 10 (step 11); To provide.
  • R 1 , R 2 and X are as defined above;
  • TBDPSO is ego; BzO ego; TBSO- to be.
  • the present invention is directed to any one of the diseases selected from the group consisting of cancer, cardiovascular disease and immune disease containing the compound represented by the formula (1), its stereoisomer, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a prophylactic or therapeutic pharmaceutical composition is provided.
  • the present invention is any one of the diseases selected from the group consisting of cancer, cardiovascular diseases and immune diseases containing the compound represented by the formula (1), stereoisomers thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention is any one of the diseases selected from the group consisting of cancer, cardiovascular diseases and immune diseases containing the compound represented by the formula (1), stereoisomers thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the adenosine derivative according to the present invention has a high affinity and selectivity as an agonist of the A3 adenosine receptor, and agonists of the A3 adenosine receptor known in cancer cell transplanted nude mouse experimental animal models using liver cancer cell SK-HEP-1. Compared with the significantly superior tumor growth inhibitory effect can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancer.
  • Example 1 is a subcutaneous administration of SK-HEP-1 cells, which are liver cancer cells, to nude mice (Balb / c-nu / nu mouse), and Example 1 compound and Comparative Example 1-4 compound 2 mg / kg orally, respectively After administration, it is a graph observing the change in tumor volume over time.
  • Example 2 is a subcutaneous administration of SK-HEP-1 cells, which are liver cancer cells, to nude mice (Balb / c-nu / nu mouse), and Example 1 compound and Comparative Example 1-4 compound each at 2 mg / kg orally After administration, it is a graph showing the volume of tumor after 37 days.
  • Figure 3 is administered to the nude mouse (Balb / c-nu / nu mouse) subcutaneously administered SK-HEP-1 cells, liver cancer cells, Example 1 compound, Comparative Example 1-4 compound 2 mg / kg orally each After administration, the graph showing the weight of the tumor after 37 days.
  • the present invention provides a compound represented by Formula 1, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 and R 2 are independently —H or C 1-10 straight or branched alkyl
  • R 3 and R 4 are independently —H, C 1-5 straight or branched chain alkyl, unsubstituted or substituted 3-6 membered cycloalkyl, unsubstituted or substituted C 6-14 aryl C 1-5 straight chain Or branched alkyl or straight or branched chain alkyl of unsubstituted or substituted 5-14 membered heteroaryl C 1-5 comprising one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S,
  • substituted 3-6 membered cycloalkyl, straight or branched chain alkyl of substituted C 6-14 aryl C 1-5 and straight or branched chain alkyl of substituted 5-14 membered heteroaryl C 1-5 are independently C 1-5 straight or branched alkoxy, halogen or phenyl is substituted;
  • X is -H or halogen.
  • R 1 and R 2 are independently —H or C 1-5 straight or branched alkyl
  • R 3 and R 4 are independently —H, C 1-3 straight or branched chain alkyl, unsubstituted or substituted 3-5 membered cycloalkyl, unsubstituted or substituted C 6-10 aryl C 1-3 straight chain Or branched alkyl or straight or branched chain alkyl of unsubstituted or substituted 5-10 membered heteroaryl C 1-3 including at least one heteroatom selected from the group consisting of N, O and S,
  • substituted 3-5 membered cycloalkyl, straight or branched chain alkyl of substituted C 6-10 aryl C 1-3 and straight or branched chain alkyl of substituted 5-10 membered heteroaryl C 1-3 are independently C 1-3 straight or branched alkoxy, halogen or phenyl is substituted;
  • X is -H or halogen.
  • R 1 and R 2 are independently —H or methyl
  • R 3 and R 4 are independently -H, methyl, , , , , , , , , or ego;
  • X is -H or -Cl.
  • the compound represented by Chemical Formula 1 is a compound, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, characterized in that any one selected from the following compound groups.
  • stereoisomer is preferably an optical isomer.
  • the compound represented by Chemical Formula 1 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid and aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • non-toxic organic acids such as dioate, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid.
  • Such pharmaceutically nontoxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, and iodide.
  • the acid addition salt according to the present invention is produced by dissolving the compound represented by the formula (1) of the present invention in an organic solvent, for example, methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, and adding an organic or inorganic acid.
  • the precipitate may be prepared by filtration and drying, or may be prepared by distillation under reduced pressure of the solvent and excess acid, followed by drying or crystallization in an organic solvent.
  • the present invention includes not only the compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof, but also solvates, stereoisomers, hydrates, and the like that can be prepared therefrom.
  • Step 1 Preparing a compound represented by Chemical Formula 3 by reacting a compound represented by Chemical Formula 2 with a compound represented by Chemical Formula 13 (step 1);
  • Step 2 Preparing a compound represented by Chemical Formula 4 by adding tetrabutylammonium fluoride to the compound represented by Chemical Formula 3 prepared in Step 1 (Step 2);
  • Step 3 Preparing a compound represented by Chemical Formula 5 by adding 4-nitrobenzoyl chloride or benzoyl chloride to the compound represented by Chemical Formula 4 prepared in Step 2 (Step 3);
  • Step 4 Preparing a compound represented by Chemical Formula 6 by adding trifluoroacetic acid to the compound represented by Chemical Formula 5 prepared in Step 3 (Step 4);
  • Step 5 Preparing a compound represented by Chemical Formula 7 by adding tert-butyldimethylsilyl trifluoromethane to the compound represented by Chemical Formula 6 prepared in Step 4 (Step 5);
  • Step 6 Preparing a compound represented by Chemical Formula 8 by adding sodium hydroxide to the compound represented by Chemical Formula 7 prepared in Step 5 (Step 6);
  • Step 7 Preparing a compound represented by Chemical Formula 9 by adding dimethyl sulfoxide and acetic anhydride to the compound represented by Chemical Formula 8 prepared in Step 6 (Step 7);
  • Step 8 Preparing a compound represented by Chemical Formula 10 by adding a Tolene reagent to the compound represented by Chemical Formula 9 prepared in Step 7 (Step 8);
  • Step 11 Preparing a compound represented by Chemical Formula 1 by reacting the compound represented by Chemical Formula 15 with the compound represented by Chemical Formula 12 prepared in Step 10 (step 11); To provide.
  • R 1 , R 2 and X are as defined above;
  • TBDPSO is ego; BzO ego; TBSO- to be.
  • Step 1 is a step of preparing a compound represented by Formula 3 by reacting the compound represented by Formula 2 with the compound represented by Formula 13.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 2 is to prepare a compound represented by Formula 4 by adding tetrabutylammonium fluoride to the compound represented by Formula 3 prepared in Step 1 Step.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 3 is a compound represented by Formula 5 by adding 4-nitrobenzoyl chloride or benzoyl chloride to the compound represented by Formula 4 prepared in Step 2 To prepare a step.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 4 is a step of preparing a compound represented by Chemical Formula 6 by adding trifluoroacetic acid to the compound represented by Chemical Formula 5 prepared in Step 3 to be.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 5 is represented by Chemical Formula 7 by adding tert-butyldimethylsilyl trifluoromethane to the compound represented by Chemical Formula 6 prepared in Step 4. Preparing a compound.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • step 6 is a step of preparing a compound represented by Chemical Formula 8 by adding sodium hydroxide to the compound represented by Chemical Formula 7 prepared in Step 5.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 7 is a compound represented by Formula 9 by adding dimethyl sulfoxide and acetic anhydride to the compound represented by Formula 8 prepared in Step 6 Manufacturing step.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 8 is a step of preparing a compound represented by Formula 10 by adding a tolens reagent to the compound represented by Formula 9 prepared in Step 7. .
  • the toll lances reagent is preferably used in the Ag (NH 3) 2 OH.
  • solvents that can be used include triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), and dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE diphenyl ether
  • DIPE diisopropyl ether
  • DMF dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • chlorobenzene toluene
  • benzene and the like can be used.
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • the step 9 is prepared by the reaction of the compound represented by the formula (10) prepared in step 8 with the amine represented by the formula (14) to prepare a compound represented by the formula (11) It's a step.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • the step 10 is to prepare a compound represented by Chemical Formula 12 by adding tetrabutylammonium fluoride to the compound represented by Chemical Formula 11 prepared in Step 9 Step.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • Step 11 is a compound represented by Chemical Formula 1 by reacting the compound represented by Chemical Formula 15 with the compound represented by Chemical Formula 12 prepared in Step 10 to prepare a compound represented by Chemical Formula 1 It's a step.
  • the solvent may be used as triethylamine (TEA), tetrahydrofuran (THF), diethyl ether, diphenyl ether, diisopropyl ether (DIPE), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide ( DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), dichloromethane (DCM), chlorobenzene, toluene, benzene and the like can be used.
  • TAA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • DIPE dimethylformamide
  • DMA dimethylacetamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DCM dichloromethane
  • reaction temperature is preferably carried out between the boiling point of the solvent at 0 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-10 hours.
  • the present invention is any one of the diseases selected from the group consisting of cancer, cardiovascular diseases and immune diseases containing the compound represented by the formula (1), stereoisomers thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a prophylactic or therapeutic pharmaceutical composition is provided.
  • stereoisomer is preferably an optical isomer.
  • the present invention is directed to any one of the diseases selected from the group consisting of cancer, cardiovascular disease and immune disease containing the compound represented by the formula (1), its stereoisomer, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the diseases selected from the group consisting of cancer, cardiovascular disease and immune disease containing the compound represented by the formula (1), its stereoisomer, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • stereoisomer is preferably an optical isomer.
  • the pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (1), its stereoisomer, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient may be prepared by various oral or It may be formulated and administered in a parenteral dosage form, but is not limited thereto.
  • Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard / soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, elixirs, troches, and the like. , Dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and / or glycine), lubricants such as silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salts and / or polyethylene glycols. Tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and / or polyvinylpyrrolidine, and optionally such as starch, agar, alginic acid or its sodium salt. Disintegrants or boiling mixtures and / or absorbents, colorants, flavors and sweeteners.
  • compositions comprising the compound represented by Formula 1 as an active ingredient may be administered parenterally, and parenteral administration may be by injecting subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, or intrathoracic injection.
  • the compound represented by the formula (1), stereoisomers thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof are mixed with water together with a stabilizer or a buffer to prepare a formulation for parenteral administration, to prepare a solution or suspension, and ampoule Or in vial unit dosage forms.
  • the composition may contain sterile and / or auxiliaries such as preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifying accelerators, salts and / or buffers for the control of osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, which are conventional methods of mixing, granulating Or according to a coating method.
  • the dosage of the pharmaceutical composition containing the compound represented by Formula 1 as an active ingredient to the human body may vary depending on the age, weight, sex, dosage form, health condition and degree of disease of the patient, preferably 0.01 From a dose of from 1000 mg / kg / day may be administered by oral or parenteral route by dividing a predetermined time interval several times a day, preferably once to three times a day at the discretion of the doctor or pharmacist.
  • the example compounds according to the present invention have a higher binding affinity to the A3 adenosine receptor as compared to the A1 and A2A adenosine receptors.
  • the compound of Example 1 was found to have a significantly higher binding affinity (see Table 2 of Experimental Example 1).
  • the compound according to the present invention is known as AB adenosine receptor agonist, IB-MECA (Comparative Example 1), Thio-IB-MECA. Compared with (Comparative Example 2), Cl-IB-MECA (Comparative Example 3) and Thio-Cl-IB-MECA (Comparative Example 4), it was found to have significantly anticancer activity (FIGS. 1, 2 and 2 of Experimental Example 2). 3).
  • Step 1 9- (6-(( tert-butyldiphenylsilyl ) oxy ) methyl ) 2,2-dimethyltetrahydro dronelenenopheno [3,4-d] dioxo-4-yl) -6- Preparation of Chloro-9H-Purine
  • Step 2 (( 3aS, 4R, 6R, 6aR ) -6- (6 -chloro- 9H-purin-9-yl) -2,2 -dimethyltetra hydroselenopheno [3,4-d] diosol Preparation of -4-yl) methanol
  • Step 3 (( 3aS, 4R, 6R, 6aR ) -6- (6 -chloro- 9H-purin-9-yl) -2,2 -dimethyltetra hydroselenopheno [3,4-d] dioxol Preparation of -4-yl) methyl benzoate
  • Step 4 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -5- (6 -chloro- 9H-purin-9-yl) -3,4 -dihydroxytetrahydro selenophen-2-yl) methyl benzoate
  • Step 5 ((2R, 3S, 4R, 5R) -3,4- bis ((tert-butyl-dimethyl-silyl) oxy) -5- (6-furnace large -9H- purin-9-yl) tetrahydro-selenide Preparation of nofen-2-yl) methyl benzoate
  • Step 6 ((2R, 3S, 4R, 5R) -3,4- bis ((tert-butyl-dimethyl-silyl) oxy) -5- (6-furnace large -9H- purin-9-yl) tetrahydro-selenide Preparation of nofen-2-yl) methanol
  • Step 7 ((2R, 3S, 4R, 5R) -3,4- bis ((tert-butyl-dimethyl-silyl) oxy) -5- (6-furnace large -9H- purin-9-yl) tetrahydro-selenide Preparation of Nofen-2-Carbaldehyde
  • Step 8 ((2R, 3S, 4R, 5R) -3,4- bis ((tert-butyl-dimethyl-silyl) oxy) -5- (6-furnace large -9H- purin-9-yl) -N- Preparation of Methyltetrahydroselenophen-2-carboxamide
  • Step 9 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -5- (6 -Chloro- 9H-purin-9-yl) -3,4 -dihydroxy- N -methyltetrahydro selenophen-2-carbox Manufacture of amide
  • Step 1 9- (6-(( tertiarybutyldiphenylsilyl ) oxy ) methyl ) 2,2-dimethyltetrahydro dronelenenopheno [3,4-d] dioxo-4-yl) 2,6 Preparation of -dichloro-9H-purine
  • Step 2 (( 3aS, 4R, 6R, 6aR ) -6- (2,6 -dichloro- 9H-purin-9-yl) -2,2 -dimethyl tetrahydro selenopheno [3,4-d ] Dioxol-4-yl) methanol
  • Step 3 (( 3aS, 4R, 6R, 6aR ) -6- (2,6 -dichloro- 9H-purin-9-yl) -2,2 -dimethyl tetrahydro selenopheno [3,4-d ] Dioxol-4-yl) methyl 4-nitrobenzoate
  • Step 5 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -3,4- bis (( tertarybutyldimethylsilyl ) oxy ) -5- (2,6 -dichloro-9H-purin-9-yl) tetra Preparation of Hydroselenophen-2-yl) methyl 4-nitrobenzoate
  • Step 6 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -3,4- bis (( tertarybutyldimethylsilyl ) oxy ) -5- (2,6 -dichloro-9H-purin-9-yl) tetra Preparation of Hydroselenophen-2-yl) methanol
  • Step 7 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -3,4- bis (( tertiarybutyldimethylsilyl ) oxy ) -5- (2,6 -dichloro-9H-purin-9-yl) tetra Preparation of Hydroselenophen-2-carbaldehyde
  • Step 8 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -3,4- bis (( tertarybutyldimethylsilyl ) oxy ) -5- (2,6 -dichloro-9H-purin-9-yl)- Preparation of N-methyltetrahydroselenophen-2-carboxamide
  • Step 9 (( 2R, 3S, 4R, 5R ) -5- (2,6 -dichloro- 9H-purin-9-yl) -3,4 -dihydroxy -N-methyltetrahydroselenophen-2 Preparation of Carboxamide
  • Step 10 ( 2R, 3S, 4R, 5R ) -5- (2 -Chloro- 6-((3- iodobenzyl ) amino) -9H-purin- 9-yl) -3,4-dihydroxy- Preparation of N-methyltetrahydroselenophen-2-carboxamide
  • Comparative Example 1 The compound was prepared by purchasing from Sigma-Aldrich.
  • Comparative Example 2 The compound was prepared by a method known in Bioorganic & Medicinal Chemistry 17 (2009) 8003-8011.
  • Comparative Example 3 The compound was prepared by purchasing from Sigma-Aldrich.
  • Comparative Example 4 The compound was prepared by a method known in Korean Patent No. 10-2009-0126195.
  • Table 1 below shows the chemical structural formulas of the compounds prepared in Examples 1-20.
  • Example Chemical structure Example Chemical structure One 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20
  • the example compounds according to the present invention were found to have a higher binding affinity to the A3 adenosine receptor, compared to the A1 and A2A adenosine receptors. It was found to have.
  • Example 1 On the basis of the binding affinity evaluation results performed in ⁇ Experimental Example 1>, a compound of Example 1 having the most affinity was selected, and anticancer activity was measured through animal experiments.
  • IB-MECA Comparative Example 1
  • Thio-IB-MECA Comparative Example 2
  • Cl-IB-MECA Comparative Example 3
  • Thio-Cl-IB-MECA Comparative Example 3
  • the anticancer activity measurement of Example 4 was performed simultaneously.
  • SK-HEP-1 cells (Orient Co., LTD.), which are liver cancer cells, were prepared, and 5 x 10 6 cells / 0.1 mL (DMEM) of the prepared cells were purchased from Orient Co., LTD.
  • Balb / c-nu / nu mouse were administered subcutaneously to the right flank of males.
  • mice having almost the same tumor size were separated into a total of 10 groups of 5 mice in each group.
  • the compound of Example 1 and Comparative Example 1-4 were orally administered for 37 days at 9 days after cancer cell transplantation. Tumors were isolated 37 days after inoculation. Each diameter was measured using a caliper every 3-5 days to measure the size of the tumor, and the body weight of the mouse was measured for toxicity.
  • the volume of the tumor was measured by the following equation. The results are shown in FIGS. 1, 2 and 3.
  • Tumor volume abc ⁇ ⁇ / 6
  • a is the long side diameter of the tumor
  • c is the height of the tumor
  • Example 1 is a subcutaneous administration of SK-HEP-1 cells, which are liver cancer cells, to nude mice (Balb / c-nu / nu mouse), and Example 1 compound and Comparative Example 1-4 compound 2 mg / kg orally, respectively After administration, it is a graph observing the change in tumor volume over time.
  • Example 2 is a subcutaneous administration of SK-HEP-1 cells, which are liver cancer cells, to nude mice (Balb / c-nu / nu mouse), and Example 1 compound and Comparative Example 1-4 compound each at 2 mg / kg orally After administration, it is a graph showing the volume of tumor after 37 days.
  • Figure 3 is administered to the nude mouse (Balb / c-nu / nu mouse) subcutaneously administered SK-HEP-1 cells, liver cancer cells, Example 1 compound, Comparative Example 1-4 compound 2 mg / kg orally each After administration, the graph showing the weight of the tumor after 37 days.
  • the example compounds according to the present invention are IB-MECA (Comparative Example 1), Thio-IB-MECA (Comparative Example 2), Cl-IB known as A3 adenosine receptor agonists. Compared with -MECA (Comparative Example 3) and Thio-Cl-IB-MECA (Comparative Example 4), it was found to have significantly anticancer activity.
  • the adenosine derivative according to the present invention has a high affinity and selectivity as an agonist of the A3 adenosine receptor, and has been previously known in cancer cell transplanted nude mouse experimental animal models using liver cancer cell SK-HEP-1. Compared with an agonist, there is a remarkably excellent effect of inhibiting tumor growth, and thus it may be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer.

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Abstract

본 발명은 아데노신 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 아데노신 유도체는 A3 아데노신 수용체의 효능제(agonist)로서 높은 친화력 및 선택성을 갖고, 간암 세포 SK-HEP-1을 이용한 암세포 이식 누드마우스 실험 동물 모델에서 종래에 알려진 A3 아데노신 수용체의 효능제와 비교하여 현저히 우수한 종양 성장 억제효능이 있어 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

아데노신 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 아데노신 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
암은 인류가 해결해야 할 난치병 중의 하나로, 전 세계적으로 이를 치유하기 위한 개발에 막대한 자본이 투자되고 있는 실정이며, 우리나라의 경우, 질병 사망 원인 중 제 1위의 질병으로서 연간 약 10만 명 이상이 진단되고, 약 6만 명 이상이 사망하고 있다. 이러한 암의 유발 인자인 발암물질로는 흡연, 자외선, 화학 물질, 음식물, 기타 환경인자들이 있으나, 그 유발 원인이 다양하여 치료제의 개발이 어려울 뿐만 아니라 발생하는 부위에 따라 치료제의 효과 또한 각기 다르다. 현재 치료제로 사용되는 물질들은 상당한 독성을 지니고 있으며, 암세포만을 선택적으로 제거하지 못하므로, 암의 발생 후 이의 치료뿐 아니라, 암의 발생을 예방하기 위한 독성이 적고 효과적인 항암제의 개발이 절실히 필요하다.
암이란 신생물(neoplasia)이라고도 불리며, 일반적으로 “제어되지 않은 세포성장”으로 특징지어진다. 이러한 비정상적인 세포성장에 의해 종양(tumor)이라고 불리는 세포 덩어리가 형성되어 주위의 조직으로 침투하고 심한 경우에는 신체의 다른 기관으로 전이되기도 한다. 암은 수술, 방사선 및 화학요법으로 치료를 하더라도 많은 경우에 근본적인 치유가 되지 못하고 환자에게 고통을 주며 궁극적으로는 죽음에 이르게 하는 난치성 만성질환이다. 암의 발생요인으로는 여러 가지가 있으나, 내적 요인과 외적 요인으로 구분하기도 한다. 정상세포가 어떠한 기전을 거처 암세포로 형질전환이 되는지에 대해서는 정확하게 규명되지 않았으나, 적어도 80 내지 90%가 환경요인 등 외적 인자에 의해 영향을 받아 발생하는 것으로 알려져 있다. 내적 요인으로는 유전 인자, 면역학적 요인 등이 있으며, 외적 요인으로는 화학물질, 방사선, 바이러스 등이 있다.
암의 발생에 관련되는 유전자에는 종양형성유전자(oncogenes)와 종양억제유전자(tumor suppressor genes)가 있는데, 이들 사이의 균형이 상기 내적 혹은 외적 요인들에 의해 무너질 때 암이 발생하게 된다. 암세포는 정상세포와 많은 면에서 그 성질이 유사하므로 정상세포에는 피해를 주지 않고 암세포만을 제거하는 것은 쉬운 일이 아니다. 그러나 암세포에는 몇 가지 일반 세포와 구분되는 특징이 있는데, 첫째는 암세포는 세포 증식이 조절되지 않는다는 것이고, 둘째는 분화의 특징이 비교적 결여되어 있다는 것이며, 셋째는 주위의 조직에 침투하여 전이를 한다는 것이다. 정상세포는 필요에 따라 성장인자에 의해 신호를 전달받아 증식을 하는 반면 암세포는 성장인자에 대한 의존도가 낮고 주변의 세포와 접촉에 의해 성장이 저해되는 접촉성 저해(contact inhibition)가 없으며, 안지오제닉 인자(angiogenic factor)를 분비하여 전이를 활발히 한다. 또한 암세포는 분화가 되지 않고, 세포사멸(apoptosis or programmed cell death)이 일어나지 않으며, 유전적으로 불안정한 특징이 있다. 암세포의 유전적인 불안정은 암의 진행에 있어서 매우 중요하며 화학요법제에 대한 내성을 유도하기도 하는 것으로 알려져 있다(Folksman et al., Science, 235, 442-447, 1987.).
암은 혈액암과 고형암으로 크게 분류되며, 폐암, 위암, 유방암, 대장암, 구강암, 간암, 자궁암, 식도암, 피부암 등 신체의 거의 모든 부위에서 발생한다. 국가 암 발생 통계 산출 결과, 1996년 대비 사망률이 가장 높은 암은 위암이며, 그 다음이 간암이다. 특히 간암은 전 세계적으로 가장 흔한 암 중의 하나로, 우리나라에서는 HBV 백신 접종으로 인해 발생률은 줄어들고 있는 추세지만, 여전히 암으로 인한 사망률은 높은 상황이다. 2005년 국립암센터 자료를 보면 국내에서 다수 발생하는 7대 암 가운데 간암의 직접의료비 지출은 폐암 다음으로 많은 두 번째이지만, 사망손실금은 전체 암 가운데 가장 많다. 간암은 경제활동이 활발한 50대 남성에서 가장 많이 발생하고 있고, 사망률이 높기 때문에 이로 인한 경제적 손실은 가장 크다. 간암 발생률은 전체 암 가운데 5위이지만, 사망률은 2위이다.
본 발명자들은 다양한 암의 예방 또는 치료에 대한 아데노신 수용체 및 그 효능제의 역할에 대하여 오랜 기간 연구를 계속해 왔다. 아데노신 수용체는 G-단백질-결합 수용체로 A1, A2A, A2B 그리고 A3의 총 4가지 서브타입이 존재하는데 A2A, A2B는 환형 아데노신 모노인산(cyclic adenosine monophosphate: cAMP)을 증가시키는 반면, A1와 A3는 cAMP를 감소시키기 때문에 어떤 수용체가 발현하느냐에 따라 세포 내 신호전달이 영향을 받게 된다. 아데노신 수용체는 다양한 세포에서 많이 발현하고 있는 수용체이고 여러 아데노신 유도체 중 A3 아데노신 수용체 (A3AR)에 선택적인 A3AR 효능제(agonist)가 다른 서브타입 수용체 관련 효능제 보다 A3 아데노신 수용체를 활성화시키는 내인적 활성이 좀 더 우수하므로 약물로서의 개발 가능성이 높다고 여겨진다. 또한, A3AR의 활성화는 염증 반응이나 면역 반응에 관여하기 때문에 A3AR에 대한 효능제는 심혈관계 질환, 면역 질환, 류마티스 관절염, 대장염과 같은 염증관련 질환과 암세포 억제 등에 효능이 있다고 알려져 있다.
이에 A3AR 효능제의 항암 효과에 대하여 다년간 실험을 수행하던 중, 본 발명에 따른 아데노신 유도체가 A3 아데노신 수용체의 효능제(agonist)로서 높은 친화력 및 선택성을 갖고, 간암 세포 SK-HEP-1을 이용한 암세포 이식 누드마우스 실험 동물 모델에서 종래에 알려진 A3 아데노신 수용체의 효능제와 비교하여 현저히 우수한 종양 성장 억제효능을 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 A3 아데노신 수용체의 효능제(agonist)로 사용 가능한 아데노신 유도체, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 아데노신 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 아데노신 유도체, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 아데노신 유도체, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2016010746-appb-I000001
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
R3 및 R4는 독립적으로 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 비치환 또는 치환된 3-6 원자 사이클로알킬, 비치환 또는 치환된 C6-14의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-14 원자 헤테로아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
여기서, 상기 치환된 3-6 원자 사이클로알킬, 치환된 C6-14의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 5-14 원자 헤테로아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬은 독립적으로 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 할로겐 또는 페닐이 치환되고;
X는 -H 또는 할로겐이다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물을 화학식 13으로 표시되는 화합물과 반응시켜 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물에 4-니트로벤조일 클로라이드 또는 벤조일 클로라이드를 첨가하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);
상기 단계 3에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물에 트리플루오르아세트 산을 첨가하여 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 4);
상기 단계 4에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물에 tert-부틸다이메틸실릴 트라이플루오르메탄을 첨가하여 화학식 7로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 5);
상기 단계 5에서 제조한 화학식 7로 표시되는 화합물에 수산화나트륨을 첨가하여 화학식 8로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 6);
상기 단계 6에서 제조한 화학식 8로 표시되는 화합물에 다이메틸술폭사이드 및 무수아세트산을 첨가하여 화학식 9로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 7);
상기 단계 7에서 제조한 화학식 9로 표시되는 화합물에 톨렌스 시약을 첨가하여 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 8);
상기 단계 8에서 제조한 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 14로 표시되는 아민을 반응시켜 화학식 11로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 9);
상기 단계 9에서 제조한 화학식 11로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 12로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 10); 및
상기 단계 10에서 제조한 화학식 12로 표시되는 화합물에 화학식 15로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 11);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2016010746-appb-I000002
상기 반응식 1에서,
R1, R2 및 X는 상기 정의한 바와 같고;
TBDPSO는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000003
이고; BzO는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000004
이고; TBSO-는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000005
이다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 따른 아데노신 유도체는 A3 아데노신 수용체의 효능제(agonist)로서 높은 친화력 및 선택성을 갖고, 간암 세포 SK-HEP-1을 이용한 암세포 이식 누드마우스 실험 동물 모델에서 종래에 알려진 A3 아데노신 수용체의 효능제와 비교하여 현저히 우수한 종양 성장 억제효능이 있어 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse)에 간암 세포인 SK-HEP-1 세포를 피하로 투여하고, 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 경구투여한 후, 시간 경과에 따른 종양 부피의 변화를 관찰한 그래프이다.
도 2는 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse)에 간암 세포인 SK-HEP-1 세포를 피하로 투여하고, 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 경구투여한 후, 37일 경과 후 종양의 부피를 나타내는 그래프이다.
도 3은 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse)에 간암 세포인 SK-HEP-1 세포를 피하로 투여하고, 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 경구투여한 후, 37일 경과 후 종양의 무게를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2016010746-appb-I000006
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
R3 및 R4는 독립적으로 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 비치환 또는 치환된 3-6 원자 사이클로알킬, 비치환 또는 치환된 C6-14의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-14 원자 헤테로아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
여기서, 상기 치환된 3-6 원자 사이클로알킬, 치환된 C6-14의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 5-14 원자 헤테로아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬은 독립적으로 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 할로겐 또는 페닐이 치환되고;
X는 -H 또는 할로겐이다.
바람직하게는,
R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
R3 및 R4는 독립적으로 -H, C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 비치환 또는 치환된 3-5 원자 사이클로알킬, 비치환 또는 치환된 C6-10의 아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-10 원자 헤테로아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
여기서, 상기 치환된 3-5 원자 사이클로알킬, 치환된 C6-10의 아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 5-10 원자 헤테로아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬은 독립적으로 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 할로겐 또는 페닐이 치환되고;
X는 -H 또는 할로겐이다.
더욱 바람직하게는,
R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 메틸이고;
R3 및 R4는 독립적으로 -H, 메틸,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000007
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000008
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000009
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000010
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000011
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000012
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000013
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000014
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000015
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000016
,
Figure PCTKR2016010746-appb-I000017
또는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000018
이고;
X는 -H 또는 -Cl이다.
가장 바람직하게는,
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
(1) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(6-((3-아이오도벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(2) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-((3-아이오도벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(3) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-브로모벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(4) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-브로모벤질)아미노)-2-클로로-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(5) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-클로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
*(6) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-((3-클로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(7) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-플로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(8) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-((3-플로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(9) (2R,3S,4R,5R)-5-((6-사이클로펜틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(10) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-(사이클로펜틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(11) (2R,3S,4R,5R)-5-((6-사이클로부틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(12) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-(사이클로부틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(13) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-(사이클로프로필아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(14) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-(사이클로프로필아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(15) (2R,3S,4R,5R)-5-((6-(2-클로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(16) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-((나프탈렌-1-일메틸)아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(17) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-(((1R,2R)-2-페닐사이클로프로필)아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(18) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
(19) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-(비스(피리딘-2-일메틸)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드; 및
(20) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(6-((2-메톡시벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸-테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드.
여기서, 상기 입체 이성질체는 바람직하게 광학 이성질체이다.
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻었다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물을 유기용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조하여 제조되거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용하는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 입체 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
나아가, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물을 화학식 13으로 표시되는 화합물과 반응시켜 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물에 4-니트로벤조일 클로라이드 또는 벤조일 클로라이드를 첨가하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);
상기 단계 3에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물에 트리플루오르아세트 산을 첨가하여 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 4);
상기 단계 4에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물에 tert-부틸다이메틸실릴 트라이플루오르메탄을 첨가하여 화학식 7로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 5);
상기 단계 5에서 제조한 화학식 7로 표시되는 화합물에 수산화나트륨을 첨가하여 화학식 8로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 6);
상기 단계 6에서 제조한 화학식 8로 표시되는 화합물에 다이메틸술폭사이드 및 무수아세트산을 첨가하여 화학식 9로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 7);
상기 단계 7에서 제조한 화학식 9로 표시되는 화합물에 톨렌스 시약을 첨가하여 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 8);
상기 단계 8에서 제조한 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 14로 표시되는 아민을 반응시켜 화학식 11로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 9);
상기 단계 9에서 제조한 화학식 11로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 12로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 10); 및
상기 단계 10에서 제조한 화학식 12로 표시되는 화합물에 화학식 15로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 11);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2016010746-appb-I000019
상기 반응식 1에서,
R1, R2 및 X는 상기 정의한 바와 같고;
TBDPSO는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000020
이고; BzO는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000021
이고; TBSO-는
Figure PCTKR2016010746-appb-I000022
이다.
이하, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 2로 표시되는 화합물을 화학식 13으로 표시되는 화합물과 반응시켜 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물에 4-니트로벤조일 클로라이드 또는 벤조일 클로라이드를 첨가하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 4는 상기 단계 3에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물에 트리플루오르아세트 산을 첨가하여 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 5는 상기 단계 4에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물에 tert-부틸다이메틸실릴 트라이플루오르메탄을 첨가하여 화학식 7로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 6은 상기 단계 5에서 제조한 화학식 7로 표시되는 화합물에 수산화나트륨을 첨가하여 화학식 8로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 7은 상기 단계 6에서 제조한 화학식 8로 표시되는 화합물에 다이메틸술폭사이드 및 무수아세트산을 첨가하여 화학식 9로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 8은 상기 단계 7에서 제조한 화학식 9로 표시되는 화합물에 톨렌스 시약을 첨가하여 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 톨렌스 시약은 Ag(NH3)2OH를 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 9는 상기 단계 8에서 제조한 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 14로 표시되는 아민을 반응시켜 화학식 11로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 10은 상기 단계 9에서 제조한 화학식 11로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 12로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 11은 상기 단계 10에서 제조한 화학식 12로 표시되는 화합물에 화학식 15로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 사용 가능한 용매로는 트리에틸아민(TEA), 테트라하이드로퓨란(THF), 다이에틸에테르, 다이페닐에테르, 다이이소프로필에테르(DIPE), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 다이클로로메탄(DCM), 클로로벤젠, 톨루엔, 벤젠 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
여기서, 상기 입체 이성질체는 바람직하게 광학 이성질체이다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
여기서, 상기 입체 이성질체는 바람직하게 광학 이성질체이다.
본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예 : 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오즈 및/또는 글리신), 활택제(예 : 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달리질 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 1000 mg/kg/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간 간격을 1일 수회, 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 실시예 화합물의 아데노신 수용체에 대한 결합 친화도를 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 A1, A2A 아데노신 수용체에 비하여, A3 아데노신 수용체에 결합 친화도가 높은 것으로 나타났으며, 이중 특히 실시예 1 화합물은 현저히 높은 결합 친화도를 갖는 것으로 나타났다(실험예 1의 표 2 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 항암활성을 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 화합물은 A3 아데노신 수용체 효능제로 알려진 IB-MECA(비교예 1), Thio-IB-MECA(비교예 2), Cl-IB-MECA(비교예 3) 및 Thio-Cl-IB-MECA(비교예 4)와 비교하여 현저히 항암활성이 있는 것으로 나타났다(실험예 2의 도 1, 도 2 및 도 3 참조).
이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제조예 또는 실시예를 통해 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 방법의 일례로서, 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 한정하지 않는다. 하기 실시예에 의해 설명되는 제조방법은 유기합성 분야에서 잘 알려진 합성조건, 적절한 시약 등을 사용하여 얻을 수 있다.
< 제조예 1> ( 3aS,4R,6R,6aR )-6-(( tert - 부틸다이페닐실릴옥시 ) 메틸 )-2,2-디메틸-테트라하이드로셀레노페노[3,4-d][1,3]디옥솔-4-일 아세테이트의 준비
Figure PCTKR2016010746-appb-I000023
제조예 1 화합물은 Chem. Eur J (2013) 19, 5528-5532에 기재된 공지의 방법을 수행하여 준비하였다.
< 실시예 1> ( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 다이하이드록시 -5-(6-((3- 아이오도벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000024
단계 1 : 9 -(6-(( 터셔리부틸다이페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )2,2-다이메틸테트라하이드로넬레노페노[3,4-d]다이옥소-4-릴)-6-클로로-9H-퓨린의 제조
건조 톨루엔에 용해된 6-클로로퓨린 (1.2 eq) 및 N,O-비스(트리메틸실릴)아세트아미드 (2 eq) 현탁액을 질소 분위기 하 95℃에서 1시간 동안 교반하였다. 건조 톨루엔에 용해된 아세테이트 (1 eq) 용액과 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트 (0.5 eq)를 95℃에서 첨가하고, 동일한 온도에서 10시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3 용액을 첨가한 후, 10분 동안 교반하여 두 개의 층으로 분리하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수집된 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하되, 헥산:에틸 아세테이트 = 4:1를 이동상으로 사용하여 표제 화합물 노란색의 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.66-7.61 (m, 4H), 7.43-7.32 (m, 6H), 6.27 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 5.04 (dd, 1H, J = 3.2, 5.6 Hz), 4.97 (dd, 1H, J = 2.8, 5.6 Hz), 4.13 (td, 1H, J = 2.9, 7.3Hz), 4.10-3.96 (m, 1H) 1.61 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.06 (s, 9H).
단계 2 : (( 3aS,4R,6R,6aR )-6-(6- 클로로 -9H-퓨린-9-일)-2,2- 다이메틸테트라하이드로셀레노페노 [3,4-d]다이옥솔-4-릴)메탄올의 제조
테트로하이드로퓨란에 용해된 상기 단계 1에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 테트라부틸암모늄플루오라이드(HF·TEA (2 eq))를 첨가하고 상온에서 10분 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 모두 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트로 희석한 후, 물로 두 차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 2차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후 감압 하에 증류하였다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 4:1)로 정제하여 표제 화합물을 노란색의 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.1 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 6.35 (d, 1 H, J = 2.8 Hz), 5.27 (bs, 1 H), 5.12 (dd, 1 H, J = 2.8, 4.8 Hz), 5.03 (dd, 1 H, J = 1.2, 5.2 Hz), 4.25 (dd, 1 H, J = 3.4, 11 Hz), 4.18 (bs, 1 H), 4.07 (dd, 1 H, J = 2.6, 11 Hz), 1.62 (s, 3 H), 1.31 (s, 3 H).
단계 3 : (( 3aS,4R,6R,6aR )-6-(6- 클로로 -9H-퓨린-9-일)-2,2- 다이메틸테트라하이드로셀레노페노 [3,4-d]다이옥솔-4-릴)메틸 벤조에이트의 제조
MC에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 벤조일 클로라이드(2 eq), 트리에틸아민 (2 eq) 및 DMAP (0.1 eq)를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 에탄올을 첨가한 후, 10분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에 용해시킨 후, 물로 2차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 2차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후, 감압 하에 증류하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 3:1)로 정제하여 표제 화합물을 노란색의 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.82 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 8.00-7.70 (m, 2 H), 7.6-7.56 (m, 1 H), 7.44-7.40 (m, 2 H), 6.36 (d, 1 H, J = 3.2 Hz), 5.42 (dd, 1 H, J = 3.2, 5.6 Hz), 5.21 (dd, 1 H, J = 3.0, 5.4 Hz), 4.93 (dd, 1 H, J = 7.2, 11.6 Hz), 4.66 (dd, 1 H, J = 6.8, 11.6 Hz), 4.32 (td, 1 H, J = 3.2, 7.050% Hz), 1.65 (s, 3 H), 1.37 (s, 3 H).
단계 4 : (( 2R,3S,4R,5R )-5-(6- 클로로 -9H-퓨린-9-일)-3,4- 다이하이드록시테트라하이드로 셀레노펜-2-일)메틸 벤조에이트의 제조
50%의 트리플루오로아세트산 및 테트라하이드로퓨란에 용해된 상기 단계 3에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 에틸 아세테이트를 첨가한 후, NaHCO3로 2차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 3차례에 걸쳐 추출하였다. 수집한 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하에 증류하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1 내지 1:5)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1 H), 8.48 (s, 1 H), 7.97-7.94 (m, 2 H), 7.54-7.5 (m, 1 H), 7.41-7.37 (m, 2 H), 6.17 (d, 1 H, J = 6.4 Hz), 4.85-4.8 (m, 2 H), 4.58 (q, 1 H, J = 6.6, 11.8 Hz), 4.41 (t, 1 H, J = 3.8 Hz), 3.95 (td, 1 H, J = 4.2, 7 Hz).
단계 5 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(6- 클로로-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-일)메틸 벤조에이트의 제조
건조 디클로로메탄에 용해된 상기 단계 4에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 TBSOTf (6 eq), 트리에틸아민 (9 eq) 및 DMAP (0.1 eq)를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 디클로로메탄층 및 수용액 층으로 층 분리를 유도한 후, 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 5:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.08-8.06 (m, 2 H), 7.64-7.6 (m, 1 H), 7.51-7.48 (m, 2 H), 6.12 (d, 1 H, J = 6.8 Hz), 5.03 (dd, 1 H, J = 8.2, 11.8 Hz), 4.97 (bs, 1 H), 4.63 (dd, 1 H, J = 6, 11.6 Hz), 4.37 (t, 1 H, J = 3.2 Hz), 3.89 (bs, 1 H), 0.94 (s, 9 H), 0.74 (s, 9 H), 0.08 (s, 3 H), 0.04 (s, 3 H), -0.05 (s, 3 H), -0.34 (s, 3 H).
단계 6 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(6- 클로로-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-일)메탄올의 제조
1,4-디옥산에 용해된 상기 단계 5에서 제조한 화합물 용액 (4.51 g)에, 물에 용해된 25% NaOH 용액을 0℃에서 첨가하고, 상온에서 15시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 중화를 수행한 후, 혼합물을 증류하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 5:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 5.97 (d, 1 H, J = 7.2 Hz), 5.18 (bs, 1 H), 4.29 (t, 1 H, J = 2.8 Hz), 4.06-3.95 (m, 2 H), 3.67 (d, 1 H, J = 0.8 Hz), 0.95 (s, 9 H), 0.73 (s, 9 H), 0.12 (s, 3 H), 0.1 (s, 3 H), -0.13 (s, 3 H), -0.61 (d, 3 H, J = 1.2 Hz).
단계 7 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(6- 클로로-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르발데하이드의 제조
DMSO에 용해된 상기 단계 6에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 Ac2O (20 eq)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상온으로 냉각한 후, 메틸렌 클로라이드로 희석하였다. 물로 2차례에 걸쳐 DMSO 및 아세트산을 제거하였다. 수용액 층을 메틸렌 클로라이드로 2차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후, 감압 하 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 4:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.76 (d, 1 H, J = 2.4 Hz), 8.78 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 6.24 (d, 1 H, J = 7.2 Hz), 4.86 (dd, 1 H, J = 2.6, 7 Hz), 4.68 (t, 1 H, J = 3 Hz), 4.12 (dd, 1 H, J = 2.4, 2.8 Hz), 0.95 (s, 9 H), 0.71 (s, 9 H), 0.12 (s, 6 H), -0.05 (s, 3 H), -0.4 (s, 3 H).
단계 8 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(6- 클로로-9H-퓨린-9-일)-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
THF에 용해된 상기 단계 7에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 AgNO3 (5 eq) 및 1N NaOH (5 eq)를 상온에서 첨가하였다. Ag2O가 침전되면, 24 내지 28%의 NH4OH 수용액을 혼합물이 투명해질 때까지 첨가하였다. 톨렌스 시약(Ag(NH3)2OH)을 0℃에서 첨가하고, 30분 동안 상온에서 교반하였다. 아세트산(5 방울)을 첨가하여 반응을 종결시키고, 디클로로메탄으로 희석하였다. 물로 두 차례에 걸쳐 세척하고, 수용액 층을 디클로로메탄으로 두 차례에 걸쳐 추출하였다. 수집한 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하 농축하였다. 잔여물을 건조한 후, 잔여물의 THF 용액에 HATU (1.1 eq), 메틸아민 하이드로클로라이드 (2 eq) 및 디이소프로필에틸아민 (3 eq)을 상온에서 첨가하였다. 상온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 두 차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 두 차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후, 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 3:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.77 (s, 1 H), 8.4 (bs, 1 H), 6.06 (d, 1 H, J = 7.6 Hz), 4.1 (bs, 1 H), 4.55 (t, 1 H, J = 2.4 Hz), 3.96 (d, 1 H, J = 2.8 Hz), 2.98 (d, 3 H, J = 4.8 Hz), 0.94 (s, 9 H), 0.7 (s, 9 H), 0.16 (s, 3 H), -0.17 (s, 3 H), -0.53 (s, 3 H).
단계 9 : (( 2R,3S,4R,5R )-5-(6- 클로로 -9H-퓨린-9-일)-3,4- 다이하이드록시 -N-메틸테트라하이드로 셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
THF (3 mL)에 용해된 상기 단계 8에서 제조한 화합물 용액 (78 mg)에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 하이드레이트 (34 mg)을 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 100:1 내지 10:1)를 통해 정제하여 표제 화합물을 흰색 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 6.35 (d, 1 H, J = 6.4 Hz), 4.95 (dd, 1 H, J = 3.6, 6 Hz), 4.60 (t, 1 H, J = 3.6 Hz), 4.12 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 2.81 (s, 3 H).
단계 10 : ( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 다이하이드록시 -5-(6-((3- 아이오도벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
에탄올에 용해된 상기 단계 9에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 3-아이오도벤질아민 하이드로클로라이드 (3 eq) 및 트리에틸아민 (6 eq)를 첨가하고, 95℃에서 15 내지 30시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 100:1 내지 10:1)를 통해 정제하여 표제 화합물을 흰색 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (bs, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 7.58 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 7.36 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 7.11 (t, 1 H, J = 7.8 Hz), 6.02 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 5.72 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 5.50 (d, 1 H, J = 5.2 Hz), 4.78 (td, 1 H, J = 3.0, 6.0 Hz), 4.66 (bs, 1 H), 4.44 (q, 1 H, J = 4.6, 7.8 Hz), 3.95 (d, 1 H, J = 4.0 Hz), 2.64 (d, 3 H, J = 4.4 Hz);
HRMS (FAB) found 574.98 [calcd for C18H19IN6O3Se (M+H)+ 574.9807].
< 실시예 2> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-((3- 아이오도벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000025
단계 1 : 9 -(6-(( 터셔리부틸다이페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )2,2-다이메틸테트라하이드로넬레노페노[3,4-d]다이옥소-4-릴)2,6-다이클로로-9H-퓨린의 제조
건조 톨루엔에 용해된 2,6-디클로로-7H-퓨린 (1.2 eq) 및 N,O-비스(트리메틸실릴)아세트아미드 (2 eq) 현탁액을 질소 분위기 하 95℃에서 1시간 동안 교반하였다. 건조 톨루엔에 용해된 아세테이트 (1 eq) 용액과 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트 (0.5 eq)를 95℃에서 첨가하고, 동일한 온도에서 10시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3 용액을 첨가한 후, 10분 동안 교반하여 두 개의 층으로 분리하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수집된 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하되, 헥산:에틸 아세테이트 = 2:1를 이동상으로 사용하여 표제 화합물을 노란색의 형태로 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.22 (s, 1 H), 7.65-7.61 (m, 4 H), 7.42-7.31 (m, 6 H), 6.24 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 5.01-5.00 (m, 1 H), 4.94-4.92 (m, 1 H), 4.13-4.09 (m, 2 H), 3.97 (dd, J = 10.5, 12.8 Hz, 1 H), 1.59 (s, 3 H), 1.28 (s, 3 H), 1.05 (s, 9 H).
단계 2 : (( 3aS,4R,6R,6aR )-6-(2,6- 다이클로로 -9H-퓨린-9-일)-2,2- 다이메틸테트라하이드로 셀레노페노[3,4-d]다이옥솔-4-릴)메탄올의 제조
테트로하이드로퓨란에 용해된 상기 단계 1에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 테트라부틸암모늄플루오라이드(HF·TEA (2 eq))를 첨가하고 상온에서 10분 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 모두 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트로 희석한 후, 물로 두 차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 2차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후 감압 하에 증류하였다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 4:1)로 정제하여 표제 화합물을 노란색의 형태로 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.79 (s, 1 H), 6.28 (d, J = 3.2 Hz, 1 H), 5.15 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.03 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 4.22-4.19 (m, 2 H), 4.13-4.12 (m, 1 H), 4.07-4.04 (m, 1 H), 1.63 (s, 3 H), 1.33 (s, 3 H).
단계 3 : (( 3aS,4R,6R,6aR )-6-(2,6- 다이클로로 -9H-퓨린-9-일)-2,2- 다이메틸테트라하이드로 셀레노페노[3,4-d]다이옥솔-4-릴)메틸 4-니트로벤조에이트의 제조
MC에 용해된 상기 단계 2에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 p-메톡시벤조일 클로라이드(2 eq), 트리에틸아민 (2 eq) 및 DMAP (0.1 eq)를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 에탄올을 첨가한 후, 10분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에 용해시킨 후, 물로 2차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 2차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후, 감압 하에 증류하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 3:1)로 정제하여 표제 화합물을 노란색의 형태로 제조하였다.
*1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 8.24 (s, 1H), 8.18 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 6.31 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 5.33-5.31 (m, 1 H), 5.27-5.25 (m, 1 H), 4.98 (dd, J = 8.3, 11.4 Hz, 1 H), 4.74 (dd, J = 7.2, 11.4 Hz, 1 H), 1.60 (s, 3 H), 1.33 (s, 3 H).
단계 4 : (( 2R,3S,4R,5R )-5-(2,6- 클로로 -9H-퓨린-9-일)-3,4- 다이하이드록시테트라하이드로 셀레노펜-2-일)메틸 4-니트로벤조에이트의 제조
50%의 트리플루오로아세트산 및 테트라하이드로퓨란에 용해된 상기 단계 3에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 에틸 아세테이트를 첨가한 후, NaHCO3로 2차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 3차례에 걸쳐 추출하였다. 수집한 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하에 증류하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1 내지 1:5)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.40 (s, 1 H), 8.30 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 8.20 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 6.19 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 4.97-4.91 (m, 2 H), 4.77-4.71 (m, 1 H), 4.63-4.61 (m, 1 H), 4.13-4.05 (m, 1 H), 3.63 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 3.08 (d, J = 4.8 Hz, 1 H).
단계 5 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(2,6-다이클로로-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-일)메틸 4-니트로벤조에이트의 제조
건조 디클로로메탄에 용해된 상기 단계 4에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 TBSOTf (6 eq), 트리에틸아민 (9 eq) 및 DMAP (0.1 eq)를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 디클로로메탄층 및 수용액 층으로 층 분리를 유도한 후, 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 5:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.35 (s, 1 H), 8.27 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 8.18 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 5.98 (s, 1 H), 5.06 (dd, J = 8.2, 11.7 Hz, 1 H), 4.88 (broad s, 1 H), 4.62 (dd, J = 6.5, 11.5 Hz, 1 H), 4.30-4.29 (m, 1 H), 3.88 (broad s, 1 H), 0.87 (s, 9 H), 0.73 (s, 9 H), 0.015 (s, 3 H), -0.018 (s, 3 H), -0.061 (s, 3 H), -0.30 (s, 3 H).
단계 6 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(2,6-다이클로로-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-일)메탄올의 제조
1,4-디옥산에 용해된 상기 단계 5에서 제조한 화합물 용액 (4.51 g)에, 물에 용해된 25% NaOH 용액을 0℃에서 첨가하고, 상온에서 15시간 동안 교반하였다. 아세트산으로 중화를 수행한 후, 혼합물을 증류하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 5:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.17 (s, 1 H), 5.79 (d, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.98 (broad s, 1 H), 4.15 (t, J = 2.7 Hz, 1 H), 3.88-3.84 (m, 2 H), 3.56 (broad s, 1 H), 0.83 (s, 9 H), 0.70 (s, 9 H), 0.00 (s, 3 H), -0.030 (s, 3 H), -0.21 (s, 3 H), -0.64 (s, 3 H).
단계 7 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(2,6-다이클로로-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르발데하이드의 제조
DMSO에 용해된 상기 단계 6에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 Ac2O (20 eq)를 첨가하고 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상온으로 냉각한 후, 메틸렌 클로라이드로 희석하였다. 물로 2차례에 걸쳐 DMSO 및 아세트산을 제거하였다. 수용액 층을 메틸렌 클로라이드로 2차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후, 감압 하 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 4:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.73 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 6.13 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.74-4.73 (m, 1 H), 4.63 (t, J = 2.9 Hz, 1 H), 4.11 (s, 1 H), 0.91 (s, 9 H), 0.71 (s, 9 H), 0.090 (s, 6 H), -0.043 (s, 3 H), -0.38 (s, 3 H).
단계 8 : (( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 비스 (( 터셔리부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )-5-(2,6-다이클로로-9H-퓨린-9-일)-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
THF에 용해된 상기 단계 7에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 AgNO3 (5 eq) 및 1N NaOH (5 eq)를 상온에서 첨가하였다. Ag2O가 침전되면, 24 내지 28%의 NH4OH 수용액을 혼합물이 투명해질 때까지 첨가하였다. 아세트산(5 방울)을 첨가하여 반응을 종결시키고, 디클로로메탄으로 희석하였다. 물로 두 차례에 걸쳐 세척하고, 수용액 층을 디클로로메탄으로 두 차례에 걸쳐 추출하였다. 수집한 유기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조한 후, 필터하고, 감압 하 농축하였다. 잔여물을 건조한 후, 잔여물의 THF 용액에 HATU (1.1 eq), 메틸아민 하이드로클로라이드 (2 eq) 및 디이소프로필에틸아민 (3 eq)을 상온에서 첨가하였다. 상온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 두 차례에 걸쳐 세척하였다. 수용액 층을 에틸 아세테이트로 두 차례에 걸쳐 추출하고, 수집한 유기층을 브라인으로 세척한 후, MgSO4로 건조하고, 필터한 후, 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 3:1)로 정제하여 표제 화합물을 흰색의 고체 형태로 제조하였다.
단계 9 : (( 2R,3S,4R,5R )-5-(2,6- 다이클로로 -9H-퓨린-9-일)-3,4- 다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
THF (3 mL)에 용해된 상기 단계 8에서 제조한 화합물 용액 (78 mg)에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 하이드레이트 (34 mg)을 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 100:1 내지 10:1)를 통해 정제하여 표제 화합물을 흰색 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.03 (s, 1 H), 6.23 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.88 (dd, J = 3.2, 5.9 Hz, 1 H), 4.58 (t, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.11 (d, J = 4.4 Hz, 1 H), 2.81 (s, 3 H).
단계 10 : ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-((3- 아이오도벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
에탄올에 용해된 상기 단계 9에서 제조한 화합물 용액 (1 eq)에 3-아이오도벤질아민 하이드로클로라이드 (3 eq) 및 트리에틸아민 (6 eq)를 첨가하고, 95℃에서 15 내지 30시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 100:1 내지 10:1)를 통해 정제하여 표제 화합물을 흰색 고체 형태로 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.48 (s, 1 H), 7.77 (s, 1 H), 7.60 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.39 (d, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.09 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.10 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 4.79 (dd, J = 3.3, 5.8 Hz, 1 H), 4.75 (broad s, 1 H), 4.56 (t, J = 3.9 Hz, 1 H), 4.09 (d, J = 4.5 Hz, 1 H), 2.82 (s, 3 H);
HRMS (ESI) found 608.9481 [calcd for C18H19ClIN6O3Se (M+H)+ 608.9417].
하기 실시예 3 내지 20 화합물은 상기 실시예 1-2를 참조하여 제조하였다.
< 실시예 3> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(6-((3- 브로모벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000026
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ CDCl3) δ 8.54 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 7.56 (s, 1 H), 7.41-7.35 (m, 2 H), 7.24 (t, 1 H, J = 7.6 Hz), 6.21 (d, 1 H, J = 5.6 Hz), 4.89-4.85 (m, 1 H), 4.58 (t, 1 H, J = 3.8 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.0 Hz), 2.82 (s, 3 H);
HRMS (FAB) found 526.9947 [calcd for C18H19BrN6O3Se (M+H)+ 526.9945].
< 실시예 4> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(6-((3- 브로모벤질 )아미노)-2- 클로로 -9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000027
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 8.16 (s, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 7.32 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.22 (d, J = 6.9 Hz, 1 H), 7.12 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 5.91 (d, J = 5.8 Hz, 1 H), 4.67 (s, 2 H), 4.65-4.63 (m, 1 H), 4.43 (t, J = 4.7 Hz, 1 H), 2.84 (s, 3 H);
HRMS (ESI) found 560.9463 [calcd for C18H19BrClN6O3Se (M+H)+ 560.9556].
< 실시예 5> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(6-((3- 클로로벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000028
1H NMR (400 MHz, CD3OD+ CDCl3) δ 8.54 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 7.43-7.23 (m, 4 H), 6.21 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.89-4.88 (m, 1 H), 4.85 (bs, 1 H), 4.58 (q, 1 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.0 Hz), 4.06 (s, 1 H), 2.82 (s, 3 H);
HRMS (FAB) found 483.0456 [calcd for C18H19ClN6O3Se (M+H)+ 483.0451].
< 실시예 6> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-((3- 클로로벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000029
1H NMR (500 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 8.14 (s, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 7.21 (s, 3 H), 5.92 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 4.71 (s, 2 H), 4.68-4.67 (m, 1 H), 4.46 (t, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.05-4.04 (m, 1 H), 3.32 (s, 1 H), 2.88 (s, 3 H);
HRMS (ESI) found 517.0049 [calcd for C18H19Cl2N6O3Se (M+H)+ 517.0061].
< 실시예 7> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(6-((3- 플로로벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000030
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.54 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 7.35-7.30 (m, 1 H), 7.20 (d, 1 H, J = 7.6 Hz), 7.11 (d, 1 H, J = 10.0 Hz), 6.97 (td, 1 H, J = 2.6, 8.2 Hz), 6.21 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.87 (dd, 1 H, J = 5.4, 7.8 Hz), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.1 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 2.82 (s, 3 H);
HRMS (FAB) found 467.0754 [calcd for C18H19FN6O3Se (M+H)+ 467.0746].
< 실시예 8> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-((3- 플로로벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000031
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.92 (s, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.31-7.27 (m, 1 H), 7.13-7.12 (m, 1 H),7.07-7.05 (m, 1 H), 6.98-6.95 (m, 1 H), 6.27 (s, 1 H), 6.03 (d, J = 6.5 Hz, 1 H), 4.99 (s, 1 H), 4.79 (s, 2 H), 4.72 (s, 1 H), 4.15 (s, 1 H), 2.98 (d, J = 4.3 Hz, 3 H);
HRMS (ESI) found 501.0349 [calcd for C18H19ClFN6O3Se (M+H)+ 501.0356].
< 실시예 9> ( 2R,3S,4R,5R )-5-((6- 사이클로펜틸아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4- 다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000032
1H NMR (400 MHz, CD3OD + CDCl3) δ 8.50 (s, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 6.17 (d, 1 H, J = 5.6 Hz), 4.83 (dd, 1 H, J = 3.2, 6.0 Hz), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.2, 4.4 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.8 Hz), 2.82 (s, 3 H), 2.16-2.05 (m, 2 H), 1.83-1.79 (m, 2 H), 1.73-1.59 (m, 4 H);
HRMS (FAB) found 427.0993 [calcd for C16H22N6O3Se (M+H)+ 427.0997].
< 실시예 10> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-( 사이클로펜틸아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000033
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 6.29 (s, 1 H), 6.11 (d, J = 4.3 Hz, 1 H), 5.88 (s, 1 H), 5.02 (s, 1 H), 4.76 (s, 1 H), 4.42 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 4.17 (s, 1 H), 2.88 (d, J = 3.7 Hz, 3 H), 2.37 (s, 1 H), 2.02 (s, 2 H), 1.66 (s, 2 H), 1.59 (s, 2 H), 1.43 (s, 2 H);
HRMS (ESI) found 461.0607 [calcd for C16H22ClN6O3Se (M+H)+ 461.0607].
< 실시예 11> ( 2R,3S,4R,5R )-5-((6- 사이클로부틸아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000034
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.53 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 6.19 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.57 (dd, 1 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 2.81 (s, 3 H), 2.49-2.41 (m, 2 H), 2.12-2.04 (m, 2 H), 1.86-1.79 (m, 2 H);
HRMS (FAB) found 413.0841 [calcd for C15H20N6O3Se (M+H)+ 413.084].
< 실시예 12> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-( 사이클로부틸아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000035
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 8.16 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 5.92 (d, J = 6.1 Hz, 1 H), 5.74 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 5.51 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 4.71 (s, 1 H), 4.62-4.58 (m, 1 H), 4.41-4.40 (m, 1 H), 3.95 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 2.64 (d, J = 4.5 Hz, 3 H), 2.30-2.22 (m, 2 H), 2.13-2.05 (m, 2 H), 1.70-1.63 (m, 2 H);
HRMS (ESI) found 447.0443 [calcd for C15H20ClN6O3Se (M+H)+ 447.0451].
< 실시예 13> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(6-( 사이클로프로필아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000036
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.53 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 6.21 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 2.81 (s, 3 H), 0.92-0.87 (m, 2 H), 0.67-0.63 (m, 2 H);
HRMS (FAB) found 399.0685 [calcd for C14H18N6O3Se (M+H)+ 399.0684].
< 실시예 14> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(2- 클로로 -6-( 사이클로프로필아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000037
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.47 (s, 1 H), 6.10 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 4.83-4.78 (m, 1 H, partially merged with H2O), 4.56 (t, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.09 (d, J = 4.5 Hz, 1 H), 2.82 (s, 3 H), 0.89-0.85 (m, 3 H), 0.65-0.62 (m, 2 H);
HRMS (ESI) found 433.0268 [calcd for C14H18ClN6O3Se (M+H)+ 433.0294].
< 실시예 15> ( 2R,3S,4R,5R )-5-((6-(2- 클로로벤질 )아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000038
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.55 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 7.44-7.41 (m, 2 H), 7.28-7.23 (m, 2 H), 6.21 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.92 (bs, 0 H), 4.88 (dd, 2 H, J = 3.2, 6.0 Hz), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.4 Hz);
HRMS (FAB) found 483.0458 [calcd for C18H19ClN6O3Se (M+H)+ 483.0451].
< 실시예 16> ( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 다이하이드록시 -N- 메틸 -5-(6-((나프탈렌-1-일메틸)아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000039
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.51 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 7.92-7.89 (m, 1 H), 7.83 (d, 1 H, J = 8.4 Hz), 7.56-7.48 (m, 2 H), 7.44 (t, 1 H, J = 7.8 Hz), 6.22 (d, 1 H, J = 5.6 Hz), 5.29 (bs, 2 H), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.2, 4.0 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.0 Hz);
HRMS (FAB) found 499.0992 [calcd for C22H22N6O3Se (M+H)+ 499.0997].
< 실시예 17> (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-(((1R,2R)-2-페닐사이클로프로필)아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000040
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.53 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 7.30-7.15 (m, 6 H), 6.21 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.59-4.57 (m, 2 H), 4.10 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 2.82 (s, 3 H), 2.23-2.16 (m, 1 H), 1.40-1.29 (m, 2 H);
HRMS (FAB) found 475.0998 [calcd for C20H22N6O3Se (M+H)+ 475.0997].
< 실시예 18> ( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 다이하이드록시 -N- 메틸 -5-(6-( 메틸아미노 )-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000041
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.51 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 6.20 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.6, 4.0 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 3.12 (bs, 3 H), 2.82 (s, 3 H);
HRMS (FAB) found 373.0527 [calcd for C12H16N6O3Se (M+H)+ 373.0527].
< 실시예 19> ( 2R,3S,4R,5R )-5-(6-( 비스(피리딘-2-일메틸)아미노 )-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000042
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.46-8.44 (m, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 7.74 (td, 2 H, J = 1.9, 7.7 Hz), 7.36 (d, 2 H, J = 8.0 Hz), 7.30-7.26 (m, 2 H), 6.24 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.89 (dd, 1 H, J = 3.6, 6.0 Hz), 4.57 (dd, 2 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.09 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 2.8 (s, 3 H);
HRMS (FAB) found 541.1221 [calcd for C23H24N8O3Se (M+H)+ 541.1215].
< 실시예 20> ( 2R,3S,4R,5R )-3,4- 다이하이드록시 -5-(6-((2-메톡시벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸-테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드의 제조
Figure PCTKR2016010746-appb-I000043
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.53 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 7.30-7.23 (m, 2 H), 6.99 (d, 1 H, J = 7.6 Hz), 6.88 (dd, 1 H, J = 6.8, 7.2 Hz), 6.20 (d, 1 H, J = 6.0 Hz), 4.58 (dd, 1 H, J = 3.4, 4.2 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 4.4 Hz), 3.89 (s, 3 H), 2.81 (s, 3 H);
HRMS (FAB) found 479.0945 [calcd for C19H22N6O4Se (M+H)+ 479.0946].
< 비교예 1> IB - MECA의 준비
Figure PCTKR2016010746-appb-I000044
비교예 1 화합물은 Sigma-Aldrich에서 구매하여 준비하였다.
< 비교예 2> Thio - IB - MECA의 준비
Figure PCTKR2016010746-appb-I000045
비교예 2 화합물은 Bioorganic & Medicinal Chemistry 17 (2009) 8003-8011에 공지된 방법을 통해 준비하였다.
< 비교예 3> Cl- IB - MECA의 준비
Figure PCTKR2016010746-appb-I000046
비교예 3 화합물은 Sigma-Aldrich에서 구매하여 준비하였다.
< 비교예 4> Thio -Cl- IB - MECA의 준비
Figure PCTKR2016010746-appb-I000047
비교예 4 화합물은 대한민국 특허 제10-2009-0126195에 공지된 방법을 통해 준비하였다.
하기 표 1에 실시예 1-20에서 제조한 화합물의 화학구조식을 정리하여 나타내었다.
실시예 화학구조식 실시예 화학구조식
1
Figure PCTKR2016010746-appb-I000048
 11
Figure PCTKR2016010746-appb-I000049
2
Figure PCTKR2016010746-appb-I000050
 12
Figure PCTKR2016010746-appb-I000051
3
Figure PCTKR2016010746-appb-I000052
 13
Figure PCTKR2016010746-appb-I000053
4
Figure PCTKR2016010746-appb-I000054
 14
Figure PCTKR2016010746-appb-I000055
5
Figure PCTKR2016010746-appb-I000056
 15
Figure PCTKR2016010746-appb-I000057
6
Figure PCTKR2016010746-appb-I000058
 16
Figure PCTKR2016010746-appb-I000059
7
Figure PCTKR2016010746-appb-I000060
 17
Figure PCTKR2016010746-appb-I000061
8
Figure PCTKR2016010746-appb-I000062
 18
Figure PCTKR2016010746-appb-I000063
9
Figure PCTKR2016010746-appb-I000064
 19
Figure PCTKR2016010746-appb-I000065
10
Figure PCTKR2016010746-appb-I000066
 20
Figure PCTKR2016010746-appb-I000067
<실험예 1> 결합 친화도 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 아데노신 수용체에 대한 결합 친화도를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
상기 실시예 1-20에서 제조한 화합물들의 인간 아데노신 수용체(hAR) 중의 A1, A2A 및 A3 아데노신 수용체들에 대한 결합 친화도(Binding affinity) 및 선택성을 평가하기 위하여 인간 A1 및 A3 아데노신 수용체의 안정된 발현을 나타내는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포와, 인간 A2A 아데노신 수용체의 안정된 발현을 나타내는 HEK-293 세포를 사용하였다.
상기 A1, A2A 및 A3 아데노신 수용체에 선택적으로 결합하는 표지 리간드인 1 nM [3H]CCPA(2-Chloro-N6-[3H]cyclopentyladenosine), 10 nM [3H]CGS21680 및 0.5 nM [125I]IAB-MECA를 사용하였으며, 데이터는 평균±SEMs (n=3,4)를 나타내며, 데이터 값의 퍼센트(%)는 10μM에서 특이적 표지 리간드 결합의 % 억제를 나타낸다. 또한, 비특이적 결합은 비표지 리간드인 10 μM 5'-N-에틸카복사미도마데노신(5'-N-ehylcarboxamidoadenosine; NECA)를 사용하여 분석하였고, 특이적 결합은 전체 결합에서 비특이적 결합을 감산하여 산출하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
실시예 친화도(Affinity, Ki) nM±SEM(또는 억제활성 %)
hA1 hA2A hA3
1 480±94.3 1080±140 0.570±0.100
2 N.T. N.T. N.T.
3 220±39 560±72 0.901±0.327
4 N.T. N.T. N.T.
5 570±160 555±108 3.45±2.46
6 N.T. N.T. N.T.
7 3310±520 1350±210 2.30±0.61
8 N.T. N.T. N.T.
9 25.2±6.7 1090±100 7.07±2.06
10 N.T. N.T. N.T.
11 37.5±5.0 1080±190 1.39±0.01
12 N.T. N.T. N.T.
13 83.5±16.6 54%±4 2.49±0.49
14 N.T. N.T. N.T.
15 1090±190 1160±340 4.41±0.82
16 440±75 195±31 1.76±0.40
17 420±66 2480±1040 3.93±0.22
18 2060±510 18%±12 1.49±0.54
19 15%±5 20%±10 590±84
20 1880±410 1260±270 3.75±0.71
상기 표 2에서,
N.T.는 실험을 수행하지 않았음을 나타낸다.
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물들은 A1, A2A 아데노신 수용체에 비하여, A3 아데노신 수용체에 결합 친화도가 높은 것으로 나타났으며, 이중 특히 실시예 1 화합물은 현저히 높은 결합 친화도를 갖는 것으로 나타났다.
< 실험예 2> 항암활성 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 항암활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
먼저, 상기 <실험예 1>에서 수행한 결합친화도 평가 결과를 바탕으로 가장 친화도가 우수한 실시예 1 화합물을 선택하여 동물 실험을 통하여 항암활성을 측정하였다. 또한, 대조군으로 A3 아데노신 수용체 효능제로 알려진 IB-MECA(비교예 1), Thio-IB-MECA(비교예 2), Cl-IB-MECA(비교예 3) 및 Thio-Cl-IB-MECA(비교예 4)의 항암 활성 측정을 동시에 수행하였다.
간암 세포인 SK-HEP-1 세포(Orient Co., LTD.)를 준비하고, 준비된 세포 5 x 106 세포/0.1 mL (DMEM)를, Orient Co., LTD으로부터 구입한 6주령의 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse) 수컷의 우측 옆구리 (right flank)에 피하로 투여하였다. 칼리퍼(caliper)로 종양 크기를 측정한 뒤, 종양크기가 약 105-100 mm3 되었을 때, 종양 크기가 거의 동일한 마우스를 각 그룹당 5마리씩 총 10그룹으로 분리하였다. 5군의 시료 처리군에는 암세포를 이식한 지 9일 후부터 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 37일간 경구 투여하였다. 접종 37일 후 종양을 분리하였다. 종양의 크기를 측정하기 위해서 매 3-5일 간격으로 칼리퍼를 이용해 각 지름을 측정하였고, 독성 확인을 위하여 마우스의 체중을 측정하였다. 종양의 부피는 하기 수학식 1을 통해 측정하였다. 그 결과를 도 1, 도 2 및 도 3에 나타내었다.
[수학식 1]
종양의 부피 = abc × π/6
(상기 수학식 1에서,
a는 종양의 긴 쪽 직경이고;
b는 종양의 짧은 쪽 직경이고; 및
c는 종양의 높이이다).
도 1은 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse)에 간암 세포인 SK-HEP-1 세포를 피하로 투여하고, 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 경구투여한 후, 시간 경과에 따른 종양 부피의 변화를 관찰한 그래프이다.
도 2는 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse)에 간암 세포인 SK-HEP-1 세포를 피하로 투여하고, 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 경구투여한 후, 37일 경과 후 종양의 부피를 나타내는 그래프이다.
도 3은 누드마우스(Balb/c-nu/nu mouse)에 간암 세포인 SK-HEP-1 세포를 피하로 투여하고, 실시예 1 화합물, 비교예 1-4 화합물을 각각 2 mg/kg씩 경구투여한 후, 37일 경과 후 종양의 무게를 나타내는 그래프이다.
도 1, 도 2 및 도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 화합물은 A3 아데노신 수용체 효능제로 알려진 IB-MECA(비교예 1), Thio-IB-MECA(비교예 2), Cl-IB-MECA(비교예 3) 및 Thio-Cl-IB-MECA(비교예 4)와 비교하여 현저히 항암활성이 있는 것으로 나타났다.
따라서, 본 발명에 따른 아데노신 유도체는 A3 아데노신 수용체의 효능제(agonist)로서 높은 친화력 및 선택성을 갖고, 간암 세포 SK-HEP-1을 이용한 암세포 이식 누드마우스 실험 동물 모델에서 종래에 알려진 A3 아데노신 수용체의 효능제와 비교하여 현저히 우수한 종양 성장 억제효능이 있으므로 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000068
    (상기 화학식 1에서,
    R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
    R3 및 R4는 독립적으로 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 비치환 또는 치환된 3-6 원자 사이클로알킬, 비치환 또는 치환된 C6-14의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-14 원자 헤테로아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
    여기서, 상기 치환된 3-6 원자 사이클로알킬, 치환된 C6-14의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 5-14 원자 헤테로아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬은 독립적으로 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 할로겐 또는 페닐이 치환되고;
    X는 -H 또는 할로겐이다).
  2. 제1항에 있어서,
    R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
    R3 및 R4는 독립적으로 -H, C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 비치환 또는 치환된 3-5 원자 사이클로알킬, 비치환 또는 치환된 C6-10의 아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-10 원자 헤테로아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고,
    여기서, 상기 치환된 3-5 원자 사이클로알킬, 치환된 C6-10의 아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 5-10 원자 헤테로아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬은 독립적으로 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 할로겐 또는 페닐이 치환되고;
    X는 -H 또는 할로겐인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    R1 및 R2는 독립적으로 -H 또는 메틸이고;
    R3 및 R4는 독립적으로 -H, 메틸,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000069
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000070
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000071
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000072
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000073
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000074
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000075
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000076
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000077
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000078
    ,
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000079
    또는
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000080
    이고;
    X는 -H 또는 -Cl인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    (1) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(6-((3-아이오도벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (2) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-((3-아이오도벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (3) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-브로모벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (4) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-브로모벤질)아미노)-2-클로로-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (5) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-클로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (6) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-((3-클로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (7) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-((3-플로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (8) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-((3-플로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (9) (2R,3S,4R,5R)-5-((6-사이클로펜틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (10) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-(사이클로펜틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (11) (2R,3S,4R,5R)-5-((6-사이클로부틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (12) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-(사이클로부틸아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (13) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-(사이클로프로필아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (14) (2R,3S,4R,5R)-5-(2-클로로-6-(사이클로프로필아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (15) (2R,3S,4R,5R)-5-((6-(2-클로로벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (16) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-((나프탈렌-1-일메틸)아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (17) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-(((1R,2R)-2-페닐사이클로프로필)아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (18) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-N-메틸-5-(6-(메틸아미노)-9H-퓨린-9-일)테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드;
    (19) (2R,3S,4R,5R)-5-(6-(비스(피리딘-2-일메틸)아미노)-9H-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-N-메틸테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드; 및
    (20) (2R,3S,4R,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(6-((2-메톡시벤질)아미노)-9H-퓨린-9-일)-N-메틸-테트라하이드로셀레노펜-2-카르복사마이드.
  5. [규칙 제91조에 의한 정정 16.01.2017]　
    하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
    화학식 2로 표시되는 화합물을 화학식 13으로 표시되는 화합물과 반응시켜 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
    상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
    상기 단계 2에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물에 4-니트로벤조일 클로라이드 또는 벤조일 클로라이드를 첨가하여 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);
    상기 단계 3에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물에 트리플루오르아세트 산을 첨가하여 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 4);
    상기 단계 4에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물에 tert-부틸다이메틸실릴 트라이플루오르메탄을 첨가하여 화학식 7로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 5);
    상기 단계 5에서 제조한 화학식 7로 표시되는 화합물에 수산화나트륨을 첨가하여 화학식 8로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 6);
    상기 단계 6에서 제조한 화학식 8로 표시되는 화합물에 다이메틸술폭사이드 및 무수아세트산을 첨가하여 화학식 9로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 7);
    상기 단계 7에서 제조한 화학식 9로 표시되는 화합물에 톨렌스 시약을 첨가하여 화학식 10으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 8);
    상기 단계 8에서 제조한 화학식 10으로 표시되는 화합물과 화학식 14로 표시되는 아민을 반응시켜 화학식 11로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 9);
    상기 단계 9에서 제조한 화학식 11로 표시되는 화합물에 테트라부틸암모늄플루라이드를 첨가하여 화학식 12로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 10); 및
    상기 단계 10에서 제조한 화학식 12로 표시되는 화합물에 화학식 15로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 11);를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
    [반응식 1]
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000081

    (상기 반응식 1에서,
    R1, R2 및 X는 제1항에서 정의한 바와 같고;
    TBDPSO는
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000082
    이고; BzO는
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000083
    이고; TBSO-는
    Figure PCTKR2016010746-appb-I000084
    이다).
  6. 제5항에 있어서,
    상기 단계 8의 톨렌스 시약은 Ag(NH3)2OH인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  7. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 암은 간암, 대장암, 전립선암, 위암 또는 유방암이고;
    상기 심혈관계 질환은 뇌경색 또는 뇌졸증이고; 및
    상기 면역 질환은 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 심혈관계 질환 및 면역 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 암은 간암, 대장암, 전립선암, 위암 또는 유방암이고;
    상기 심혈관계 질환은 뇌경색 또는 뇌졸증이고; 및
    상기 면역 질환은 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
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