WO2017005950A1 - Compuestos heterocíclicos como antagonistas de canales trpm8 y sus usos - Google Patents

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oxoazetidine
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Rosario GONZÁLEZ MUÑIZ
Mª Jesús PÉREZ DE VEGA
Mª Ángeles BONACHE DE MARCOS
Antonio Ferrer Montiel
Asia Fernández Carvajal
Roberto De La Torre
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Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Universidad Miguel Hernandez de Elche UMH
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Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Universidad Miguel Hernandez de Elche UMH
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/397—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having four-membered rings, e.g. azetidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams

Definitions

  • the present invention relates to heterocyclic compounds, which are ⁇ -lactam derivatives, capable of blocking the activation of thermoreceptors, in particular TRPM8 channels.
  • Thermosensory channels a subfamily within transient potential receptors (TRP), are activated by changes in temperature, voltage, pressure, acids, endogenous ligands and different products of natural origin. These channels, known as thermoTRPs, cover the entire temperature spectrum, from harmful cold ( ⁇ 15 ° C) to harmful heat (> 42 ° C). In addition, alterations in these channels contribute to the thermal hypersensitivity associated with certain painful episodes, in addition to being involved in the pathophysiology of various diseases, such as inflammation, lung disorders, gastrointestinal hypersensitivity, skin sensitivity, neurodegeneration and cancer.
  • TRPM8 receptors are Ca 2+ permeable channels that were initially identified in prostate tumor cells, but are also present along the male urogenital tract, arteries, and pulmonary epithelial cells. These channels are expressed in primary sensory neurons of the skin and mucous membranes, acting as low temperature sensors (10-33 ° C) and chemicals such as menthol and icilin. Under pathological conditions, there is increasing evidence to confirm abnormal over-expression of TRPM8 channels in sensory neurons after injury or inflammation, as well as their participation in allodynia and cold hyperalgesia TRPM8 is also expressed in corneal afferent neurons involved in the regulation of ocular surface moisture.
  • TRPM8 antagonists different families have been reported to have benzothiophene, benzimidazole and arylglycine residues as the central skeleton (Calvo et al 2012 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22: 1903-1907; Matthews et al 2012 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22: 2922-2926; Parks et al 201 1 Journal of Medicinal Chemistry 54: 233-247; Zhu et al 2013 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 23: 2234-2237.). Some of these compounds have shown excellent "in vitro" and "in vivo" activities in animal models of inflammatory and neuropathic pain.
  • the compound JNJ41876666 derived from benzothiophene, has been used, together with another antagonist, AMTB, and RNAi to determine that inhibition of both the expression and function of the TRPM8 channels reduces the rate of prostate tumor cell proliferation (Valero et al., 2012 PLoS ONE 7 (12): e51825).
  • the commercial antagonist N- (3-aminopropyl) -2 - [(3- methylphenyl) methoxy] -N- (2-thienylmethyl) benzamide AMTB has also served to demonstrate that blocking of TRPM8 channels is a new therapeutic opportunity for treatment of overactive and painful bladder syndromes (Lashinger et al. 2008 American Journal of Physiology-Renal Physiology 295: F803-F810).
  • the present invention provides heterocyclic compounds with very significant activity as blockers of thermoreceptors, in particular TRPM8.
  • the blocking activity of the aforementioned channels, which these compounds present allows them to be used as therapeutic agents for the treatment of diseases of the respiratory system (cough, asthma, etc.), of the skin (pruritus, atopic dermatitis, allergen, psoriasis, etc.) , of the eye (dry eye syndrome and excessive tearing) of chemotherapy cancer (cold allodynia), as well as cancer (melanoma, prostate, kidney, breast, pancreas, osteosarcoma, etc.).
  • a first aspect of the present invention relates to a compound of formula (I) or any of its pharmaceutically acceptable salts or stereoisomer thereof (hereinafter compound of the invention):
  • R 1 is selected from (Ci-C 4 ) alkyl, substituted or unsubstituted, aralkyl (Ci-C 4 ), substituted or unsubstituted, heteroaralkyl (Ci-C 4 ), substituted or unsubstituted, aryl, substituted or not substituted, and heteroaryl, substituted or unsubstituted;
  • R 2 is selected from a group -OR 6 and -NR 7 R 8 ;
  • R 3 is selected from hydrogen and (Ci-C 4 ) alkyl, substituted or unsubstituted;
  • R 4 is selected from hydrogen, (Ci-C 4 ) alkyl, substituted or unsubstituted, aralkyl (Ci-C 4 ), substituted or unsubstituted, heteroaralkyl (Ci-C 4 ), substituted or unsubstituted, aryl, substituted or unsubstituted, and -COR 9 ;
  • R 5 is selected from -NR 11 R 10 ;
  • R 8 is selected from hydrogen, alkyl (Ci-Ce) and aralkyl (Ci-C 4 ), heteroaryl, heteroarylalkyl (Ci-C) and -CH (R 13 ) COOR 12 ;
  • R 6 , R 11 , R 13 and R 14 are independently selected from hydrogen, (Ci-Ce) alkyl, substituted or unsubstituted, aralkyl (Ci-C 4 ), substituted or unsubstituted, heteroaralkyl (Ci-C 4 ) , substituted or unsubstituted, and aryl, substituted or unsubstituted;
  • R 7 and R 12 are selected from hydrogen and alkyl ( ⁇ - ⁇ - ⁇ ), substituted or unsubstituted;
  • R 9 is selected from -OR 6 and -NR 7 R 8 ;
  • R 10 is selected from hydrogen, ( ⁇ - ⁇ - ⁇ ), substituted or unsubstituted aralkyl and (C1-C4), substituted or unsubstituted, COOR 14; Y
  • n 1, 2, 3 or 4.
  • alkyl refers, in the present invention, to saturated, linear or branched hydrocarbon chains having 1 to 6 carbon atoms, for example, methyl, ethyl, n-propyl, / -propyl, n-butyl , ferc-butyl, sec-butyl, n-pentyl, n-hexyl, etc.
  • the alkyl group has between 1 and 4 carbon atoms, for example, without being limited, to methyl, ethyl, n-propyl, / -propyl, n-butyl, ferc-butyl, isobutyl or sec -butyl.
  • the alkyl groups may be optionally substituted by one or more substituents such as alkynyl, alkenyl, halogen, hydroxy, alkoxy, carboxyl, cyano, carbonyl, acyl, alkoxycarbonyl, carbamoyl, amino or nitro.
  • substituents such as alkynyl, alkenyl, halogen, hydroxy, alkoxy, carboxyl, cyano, carbonyl, acyl, alkoxycarbonyl, carbamoyl, amino or nitro.
  • aryl refers, in the present invention, to aromatic rings, single or multiple, having between 6 and 18 carbon atoms in the ring part, such as but not limited to, phenyl, naphthyl, diphenyl, indenyl, phenanthryl, fluorenyl or anthracil.
  • the aryl group has 6 to 12 carbon atoms and more preferably the aryl group is a phenyl.
  • aryl radicals can be optionally substituted in any of their positions by one or more substituents or two substituents forming a condensed aryl cycle and are independently selected from among them such as alkyl, alkenyl, alkynyl, O-alkyl, O-aryl, halogen, hydroxyl , amino, substituted amino, carboxylic acid, carboxylic ester or carboxamide.
  • heteroaryl refers to an aryl, which contains between 5 and 12 carbon atoms and at least one non-carbon atom, such as S, N, or O, forming part of the aromatic ring.
  • Heteroaryl radicals may be optionally substituted in any of their positions by one or more substituents or two substituents forming a condensed aryl cycle and are independently selected from among them such as alkyl, alkenyl, alkynyl, O-alkyl, O-aryl, halogen, hydroxyl, amino, substituted amino, carboxylic acid, carboxylic ester or carboxamide.
  • aralkyl in the present invention an aryl group, as defined above, linked to the rest of the molecule by a d-C 4 alkyl group, as defined above.
  • a non-limiting example of aralkyl is a benzyl or phenethyl group.
  • the aralkyl radicals may be optionally substituted in any of their positions by one or more substituents or two substituents forming an aryl fused cycle and are independently selected from such as alkyl, alkenyl, alkynyl, O-alkyl, O-aryl, halogen, hydroxyl , amino, substituted amino, carboxylic acid, carboxylic ester or carboxamide
  • heteroaralkyl refers, in the present invention, to a heteroaryl group, as defined above, linked to the rest of the molecule by a Ci-C 4 alkyl group, as defined above.
  • the heteroaralkyl radicals can be optionally substituted in any of their positions by one or more substituents or two substituents forming an aryl fused cycle and are independently selected from such as alkyl, alkenyl, alkynyl, O-alkyl, O-aryl, halogen, hydroxyl , amino, substituted amino, carboxylic acid, carboxylic ester or carboxamide.
  • stereoisomers of the compounds of the present invention may include racemic mixture, pure enantiomers, diastereoisomeric mixtures, pure diastereoisomers, depending on the presence of one or more stereogenic elements, or isomers, depending on the presence of multiple links (for example, Z, E). Individual isomers, enantiomers or diastereomers and mixtures thereof are included within the scope of the application of the present invention.
  • R 1 is (Ci-C 4 ) alkyl or aralkyl (Ci-C 4 ), more preferably R 1 is (Ci-C2) alkyl, benzyl or phenethyl, even more preferably R 1 is methyl or benzyl.
  • R 6 is hydrogen, (C 1-4 ) alkyl or benzyl, more preferably hydrogen, methyl, ferc-butyl or benzyl.
  • R 2 is -NR 7 R 8 ;
  • R 8 is selected from hydrogen, alkyl (Ci-Ce), aralkyl (Ci-C 4 ), heteroaryl, heteroaralkyl (Ci-C 4 ) and -CH (R 13 ) COOR 12 and / or R 7 is selected from hydrogen and (Ci-C 4 ) alkyl, more preferably R 7 is hydrogen or methyl and / or R 8 is selected from benzyl, heteroaryl, heteroaralkyl (Ci) and -CH (R 13 ) COOR 12 ;
  • R 13 is preferably hydrogen, methyl or benzyl and / or R 12 is preferably hydrogen or methyl.
  • R 3 is hydrogen or methyl.
  • R 4 is aralkyl (Ci-C 4 ) or -COR 9 . More preferably, R is benzyl, -COOR 1 or -CONR 7 R 8 .
  • R 14 is hydrogen, (Ci-C 4 ) alkyl or benzyl, more preferably hydrogen, methyl, ferc-butyl or benzyl.
  • R is -CONR 7 R 8 ; preferably R 7 is selected from hydrogen and (Ci-C 4 ) alkyl, more preferably hydrogen or methyl and even more preferably hydrogen, and / or R 8 is selected from hydrogen, (C-C e ) alkyl and aralkyl (Ci -C), heteroaryl, heteroaralkyl (Ci-C) and -CH (R 13 ) COOR 12 , more preferably benzyl or -CH (R 13 ) COOCH 3 , where R 13 is preferably selected from benzyl, methyl, heteroaralkyl (d) or heteroaryl, and even more preferably between benzyl, methyl, pyridinmethyl or pyridine.
  • R 5 is -NR 11
  • R 10 and R 11 are selected from hydrogen, methyl and benzyl
  • / or R 10 is selected from hydrogen, methyl, benzyl and COOR 14 ; where R 14 is methyl, tere-butyl or benzyl.
  • the compound of the invention is selected from the list consisting of:
  • Another aspect of the present invention relates to the process for obtaining the compound of formula (III), that is to say the compound of formula (I) when R 2 is -OR 6 , which comprises the delation in basic medium of the compound of formula ( II):
  • Another aspect of the present invention relates to the process for obtaining the compound of formula (IV), that is to say the compound of formula (I) when R 2 is -NR 7 R 8 , which comprises the reaction of amines R 8 R 7 NH with a carboxylic acid derivative of the compound of formula (III), ie the compound of formula (I) when R 2 is -OH, in the presence of a coupling agent:
  • the coupling agent that can be used is any known to one skilled in the art from among those typically used in the synthesis of peptides such as carbodiimides, phosphonium salts or uronium salts.
  • the present invention further provides pharmaceutical compositions comprising at least one compound of formula (I), acceptable pharmaceutical salts or stereoisomers thereof, together with an acceptable pharmaceutical carrier, adjuvant or vehicle for administration to a patient.
  • said composition also comprises another active ingredient with synergistic or complementary effect.
  • another aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of general formula (I), in addition to at least one pharmaceutically acceptable carrier.
  • compositions suitable for oral administration include any solid composition (tablets, pills, capsules, granulated forms, etc.) or liquid (solutions, suspensions, emulsions, syrups, etc.) and may contain conventional excipients known in the art, such as binding agents, for example syrup, acacia, gelatin, sorbitol, tragacanth, or polyvinylpyrrolidone; fillers, for example lactose, sugar, starch, corn, calcium phosphate, sorbitol or glycine, lubricants for the preparation of tablets, for example magnesium stearate, disintegrants such as starch, polyvinyl pyrrolidone, sodium starch glycolate or microcrystalline cellulose, or pharmaceutically acceptable wetting agents, such as sodium lauryl sulfate.
  • binding agents for example syrup, acacia, gelatin, sorbitol, tragacanth, or polyvinylpyrrolidone
  • fillers for example lactose, sugar
  • Solid oral compositions may be prepared by conventional methods of mixing, filling or tabletting. Repeated mixing operations can be used to evenly distribute the active ingredient using large amounts of fillers. These operations are conventional in the art of this invention.
  • the tablets may be prepared, for example, through wet or dry granulation and may optionally be coated by methods well known in normal pharmaceutical practice, particularly with an enteric coating.
  • compositions can also be adapted for parenteral administration, such as sterile solutions, suspensions or lyophilized products in the appropriate pharmaceutical form.
  • Suitable excipients such as bulk agents, neutralizers or surfactants may be mentioned.
  • the compounds or compositions described in the present invention can be administered by any suitable method, such as intravenous infusion, oral preparations and intraperitoneal or intravenous administration.
  • suitable method such as intravenous infusion, oral preparations and intraperitoneal or intravenous administration.
  • the preferred route of administration will depend on the condition of the patient.
  • a compound of formula (I) can be administered one or more times a day, for example, 1, 2, 3 or 4 times a day in a typical total daily amount between 1 and 200 mg / kg body weight / day, preferably 1 -10 mg / kg body mass / day.
  • the compounds described in this invention, their pharmaceutically acceptable salts and / or stereoisomers, as well as the pharmaceutical compositions containing them can be used together with other additional drugs to provide a combination therapy.
  • additional drugs may be part of the same pharmaceutical composition or, alternatively, be provided in a form of a separate composition for simultaneous or not administration, with the pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable stereoisomer or Get out of it.
  • Another aspect of the invention relates to the use of the compound of formula (I) for the preparation of a medicament.
  • Another aspect of the present invention relates to the use of the compound of formula (I) for the preparation of a medicament for the treatment and / or prevention of a disease associated with alterations of the thermosensory channels, preferably of the TRPM8 channels, preferably said diseases are selected from inflammation; pulmonary disorders for example problems of the respiratory system selected between cough and asthma; eye diseases such as dry eye syndrome or excessive tearing; gastrointestinal hypersensitivity such as irritable bowel syndrome; skin sensitivity such as pruritus, atopic dermatitis, allergen or psoriasis; neurodegeneration and cancer such as melanoma, leukemia, prostate, kidney, breast, pancreas, ovary, lung, colon, central nervous system, particularly the brain, or osteosarcoma.
  • treatment refers to eliminating, reducing or decreasing the cause or effects of the disease.
  • treatment includes, but is not limited to, alleviating, reducing or eliminating one or more symptoms of the disease; reduce the degree of disease, stabilize (that is, not worsen) the state of the disease, delay or slow the progression of the disease, alleviate or improve the state of the disease and remit the disease (either totally or partially).
  • the word "comprises” and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps.
  • other objects, advantages and features of the invention will be derived partly from the description and partly from the practice of the invention.
  • the following examples and figures are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.
  • FIG. 1 Response dose curves, representative of the blocking effect of some compounds, of examples 3, 6 and 17 (FIGs. 1A, 1 B and 1 C, respectively).
  • the percentage of activity of the TRPM8 channel is represented in the presence of increasing concentrations of the compounds tested.
  • the activity is normalized against the activity of the channel in the absence of compound.
  • Solid lines show the adjustment to the Hill equation from where IC50 values are obtained.
  • the results represent the mean ⁇ SD for n> 6 measurements.
  • Nosil amino acid derivatives (2) are coupled with alcohols (3), by Mitsunobu reaction, to give rise to N-nosyl-N-alkyl derivatives0 (4).
  • the elimination of the nosyl group gives rise to the amino derivatives (5), which are reacted with chloroalkanoyl chlorides to give rise to the intermediates (6).
  • the delation in basic medium of the intermediates (6) gives rise to the corresponding ⁇ -lactam compounds (EXAMPLES 1-32), which are subsequently transformed into the amide analogs (EXAMPLES 35-51) by coupling the amines R 8 NH 2 to the precursor carboxylates (among others, EXAMPLES 33-34).
  • reaction crude is extracted with AcOEt and washed with citric acid (10%), NaHC0 3 (10%) and saturated NaCl solution, successively. Finally, the organic residue is dried over anhydrous Na 2 S0 4 , filtered and evaporated to dryness.
  • the reaction crude is purified on a silica gel column using the eluent system indicated in each case.
  • Ns-L-Phe-OMe (2a) (Albanese, D .; Lardini, D .; Lupi, V .; Pensó, M. Eur. J. Org. Chem. 2000, 1443-1449)
  • Ns-L-Ala-OMe (2d) (Biron, E .; Kessler, HJ Org. Chem. 2005, 70, 5183-5189) Ns-L-Ala-OBn (2e) Simpe Rdto: 62%.
  • HPLC: t R 13.04 min (gradient from 5% to 100% of A, in 20 min).
  • H 2 0 300 mL
  • AcOEt 600 mL
  • the organic phase is washed successively with citric acid (10%), NaHC0 3 (10%) and saturated NaCl, successively dissolved.
  • the organic residue is dried over anhydrous Na 2 S0 4 , filtered and evaporated to dryness.
  • the reaction crude is purified on a silica gel column using the eluent system indicated in each case.
  • reaction is added to a solution of the corresponding N-alkyl derivative of amino acids (0.635 g, 1.16 mmol) and propylene oxide (17.4 mmol, 1.22 ml_) in dry THF (2 ml_) at 0 ° C. It is allowed to react at room temperature for 12h. After this time, the solvent is evaporated and the resulting residue is dissolved in AcOEt and washed successively with citric acid (10%), NaHC0 3 (10%) and saturated NaCl solution. Finally, the organic residue is dried over anhydrous Na 2 S0 4 , filtered and evaporated to dryness. The reaction crude is purified on a silica gel column using the eluent system indicated in each case.
  • Example 30 The compound of Example 30 (0.19 mmol, 0.08 g) is dissolved in anhydrous dichloromethane and TEA (0.19 mmol, 0.02 g) is added. The solution is cooled to 0 ° C and propylene oxide (2.90 mmol, 0.17 g) is added, followed by benzyl chloroformate (0.39 mmol, 0.02 g). The reaction advances to room temperature for 1 h 40min. The solvent is evaporated under reduced pressure, the residue is dissolved in AcOEt and washed with water and a saturated NaCl solution. The organic phase is dried over Na 2 S0 4 and evaporated under reduced pressure. The residue is purified using silica gel column chromatography. Simpe Rdto: 69%.
  • Method A A solution of the corresponding substituted 4-benzyloxycarbonyl derivative (0.2 mmol) in MeOH (17 ml_) is added 20% by weight of Pd-C and hydrogenated at room temperature and 30 psi for 3h. The corresponding carboxylated derivative (0.143 mmol) is then dissolved in dry CH2CI2 (4 ml_) and the desired amine (0.286 mmol), PyBOP (benzotriazol-1-i! -N-oxy hexafluorophosphate is added consecutively -tris (pirro! idin) phosphonium) (0.286 mmol, 149 mg) and ASD (0.286 mmol, 40 ⁇ _).
  • the measures of the efficacy of the compounds example 1 -example 51 have been carried out using the Chinese hamster ovary (CHO) cell line that stably expresses the TRPM8 protein.
  • the cells were cultured in monolayer in EMEM medium (Earle's minimum essential medium with Earle's salts, Invitrogen) supplemented with 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 1% penicillin-streptomycin solution and 0.4 pg / mL of the antibiotic Geneticin (Sigma) and maintained at 37 ° C in a humidified atmosphere with 5% CO2.
  • EMEM medium Earle's minimum essential medium with Earle's salts, Invitrogen
  • the cells are seeded in 96-well plates at a density of 25,000 cells / well, after 3 days after planting, the medium is removed and 100 ⁇ of the Fluo-4NW fluorescent probe is added at a concentration of 5 ⁇ in the presence 0.02% pluronic acid, after 60 minutes of incubation at 37 ° C in a humidified atmosphere with 5% CO2, fluorescence is measured in a microplate reader (POLARstar Omega) with a 485 nm configuration for excitation and 520 nm for emission, for 20 cycles.
  • POLARstar Omega microplate reader
  • electrophysiological techniques were used using the "patch-clamp" method with the "whole-cell” configuration.
  • the cells were seeded at a density of 250,000 cells / well on round glass covers (18 mm in diameter, thickness 0) in 12-well plates (Costar) and cultured in EMEM. After 24 hours, the covers were mounted in a recording chamber (WPI) and were continuously perfused (1 mL / min) with HBSS (140 mM NaCI, 4 mM KCI, 1 mM MgCI2, 1, 8 mM CaCI2, D-glucose 5 mM, 10 mM Hepes (all from Sigma), pH 7.4) at ⁇ 22 ° C.
  • WPI recording chamber
  • the activity of the TRPM8 channels was evoked by applying short pulses of 10 s of 100 ⁇ 100 menthol, using a gravity-activated perfusion system.
  • the compounds dissolved in the HBSS buffer at different concentrations were applied in the recording chamber near the cells, keeping the same distance between the cells and the perfusion system under all measurement conditions.
  • Pipette tips for the realization of Measurements were prepared from borosilicate capillaries (World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA), using a pipette stretcher (P-97, Sutter Instruments, Novato, CA, USA) to obtain a resistance between 2-4 ⁇ when They are filled with internal solution (144 mM KCI, 2mM MgCI2, 5mM EGTA, and 10 mM HEPES, (all from Sigma), pH 7.2).
  • the currents and voltages were recorded using the total current configuration with a frequency of 10 kHz (EPC10 amplifier with Pulse software; HEKA Electronics, Lambrecht, Germany) and analyzed using PulseFit 8.54 software (HEKA, Molecular Devices; WinASCD, G Droogmans, Katholieke Universiteit Leuven, Leuven, Belgium) and Origin 7.5 (OriginLab Corp., Southampton MA, USA).
  • the compounds of examples 20 and 28 were tested on 60 human tumor cell lines, which include leukemia, melanoma and lung, colon, brain, ovary, breast, prostate and kidney lines.
  • Human tumor cell lines of the cancer detection panel are cultured in RPMI 1640 medium containing 5% fetal bovine serum and 2 mM L-glutamine.
  • the cells are inoculated in 96-well microtiter plates at densities ranging from 5,000 to 40,000 cells / well depending on the doubling time of the cell lines. After cell inoculation, the plates are incubated at 37 ° C, 5% CO2, 95% air and 100% relative humidity, for 24 h before the addition of the experimental drugs. After 24 h, two plates of each cell line are fixed in situ with trichloroacetic acid (TCA), to have a measure of the cell population for each cell line at the time of drug addition (Tz).
  • TCA trichloroacetic acid
  • the compounds to be tested are solubilized in dimethylsulfoxide at 400 times the maximum desired final test concentration and stored frozen before use. At the time of drug addition, an aliquot of the frozen concentrate is thawed and the desired final maximum test concentration is diluted to twice with complete medium containing 50 g / ml_ of gentamicin. Additionally, dilutions are made to provide a total of five concentrations of compound plus control. 100 ⁇ otas aliquots of the different compound dilutions are added to the appropriate wells that already contain 100 ⁇ of medium, resulting in the required final concentrations.
  • the plates are incubated for an additional period of 48 h at 37 ° C, 5% CO2, 95% air, and 100% relative humidity.
  • the test is terminated by the addition of cold TCA.
  • the cells are fixed in situ by the gentle addition of 50 ⁇ of 50% (w / v) cold TCA (final concentration, 10% TCA) and incubated for 60 minutes at 4 ° C. The supernatant is discarded, and the plates are washed five times with tap water and air dried.
  • a solution of sulphordamine B (SRB) in 1% acetic acid, (100 ⁇ ) at 0.4% (w / v) is added to each well, and the plates are incubated for 10 minutes at room temperature.
  • SRB sulphordamine B
  • the unbound dye is washed five times with 1% acetic acid and the plates are air dried.
  • the bound dye is subsequently solubilized with 10 mM Trizma base, and the absorbance is read in an automated plate reader at a wavelength of 515 nm.
  • the methodology is the same except that the assay is terminated by fixing sedimented cells at the bottom of the wells by slowly adding 50 ⁇ de of 80% TCA (final concentration, 16% TCA).
  • Tz zero-time absorbance measurements
  • C growth control
  • Ti growth inhibition

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  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
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  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
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  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

La invención se refiere a compuestos derivados β-lactámicos, capaces de bloquear la activación de termorreceptores, en particular canales TRPM8 y a sus usos como agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades del sistema respiratorio (tos, asma, etc.), de la piel (prurito, dermatitis atópica, alergénica, psoriasis, etc.), del ojo (síndrome de ojo seco y lagrimeo excesivo), derivadas de la quimioterapia del cáncer (alodinia al frío), así como el cáncer (melanoma, próstata, riñón, mama, páncreas, osteosarcoma, etc.), entre otras.

Description

COMPUESTOS HETEROCÍCLICOS COMO ANTAGONISTAS DE CANALES
TRPM8 Y SUS USOS
DESCRIPCIÓN
La presente invención se refiere a compuestos heterocíclicos, que son derivados β-lactámicos, capaces de bloquear la activación de termorreceptores, en particular canales TRPM8. ESTADO DE LA TÉCNICA
Los canales termosensoriales, una subfamilia dentro de los receptores de potencial transitorio (TRP), se activan por cambios de temperatura, voltaje, presión, ácidos, ligandos endógenos y diferentes productos de origen natural. Estos canales, conocidos como termoTRPs, cubren todo el espectro de temperaturas, desde el frío nocivo (<15°C) hasta el calor perjudicial (>42°C). Además, las alteraciones en estos canales contribuyen a la hipersensibilidad térmica asociada a ciertos episodios dolorosos, además de estar implicados en la fisiopatología de varias enfermedades, como la inflamación, trastornos pulmonares, hipersensibilidad gastrointestinal, sensibilidad en la piel, neurodegeneración y cáncer.
Los receptores TRPM8 son canales permeables a Ca2+ que se identificaron inicialmente en células tumorales de próstata, pero que también están presentes a lo largo del tracto urogenital masculino, las arterias y las células epiteliales pulmonares. Estos canales se expresan en neuronas sensoriales primarias de la piel y las mucosas, actuando como sensores de temperaturas bajas (10-33°C) y de productos químicos como mentol e icilina. En condiciones patológicas, cada vez hay más evidencias experimentales que confirman la sobre-expresión anómala de los canales TRPM8 en neuronas sensoriales después de lesión o inflamación, así como su participación en la alodinia y la hiperalgesia al frío. TRPM8 está también expresado en neuronas aferentes corneales implicadas en la regulación de la humedad de la superficie ocular.
Entre los antagonistas TRPM8, se han reportado diferentes familias que tienen restos de benzotiofeno, bencimidazol y arilglicina como el esqueleto central (Calvo et al 2012 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22: 1903-1907; Matthews et al 2012 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22: 2922-2926; Parks et al 201 1 Journal of Medicinal Chemistry 54: 233-247;. Zhu et al 2013 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 23: 2234-2237.). Algunos de estos compuestos han mostrado actividades excelentes "in vitro" e "in vivo" en modelos animales de dolor inflamatorio y neuropático. El compuesto JNJ41876666, derivado de benzotiofeno, se ha utilizado, junto con otro antagonista, AMTB, y RNAi para determinar que la inhibición tanto de la expresión como de la función de los canales TRPM8 reduce la tasa de proliferación de células tumorales de próstata (Valero et al., 2012 PLoS ONE 7(12): e51825). El antagonista comercial N-(3-aminopropil)-2-[(3- metilfenil)metoxi]-N-(2-tienilmetil)benzamida AMTB también ha servido para demostrar que el bloqueo de canales TRPM8 es una nueva oportunidad terapéutica para el tratamiento de los síndromes de vejiga hiperactiva y dolorosa (Lashinger et al. 2008 American Journal of Physiology-Renal Physiology 295: F803-F810).
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona unos compuestos heterociclícos con actividad muy significativa como bloqueadores de los termorreceptores, en particular el TRPM8. La actividad bloqueadora de los mencionados canales, que presentan estos compuestos permite utilizarlos como agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades del sistema respiratorio (tos, asma, etc.), de la piel (prurito, dermatitis atópica, alergénica, psoriasis, etc.), del ojo (síndrome de ojo seco y lagrimeo excesivo) de la quimioterapia del cáncer (alodinia al frío), así como el cáncer (melanoma, próstata, riñon, mama, páncreas, osteosarcoma, etc.).
Por tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o cualquiera de sus sales farmacéuticamente aceptables o estereoisómero de los mismos (a partir de ahora compuesto de la invención):
Figure imgf000004_0001
(I)
donde:
R1 se selecciona de entre alquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, aralquilo (Ci-C4), sustituido o no sustituido, heteroaralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, arilo, sustituido o no sustituido, y heteroarilo, sustituido o no sustituido,;
R2 se selecciona de entre un grupo -OR6 y -NR7R8;
R3 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido,;
R4 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, aralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, heteroaralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, arilo, sustituido o no sustituido, y -COR9;
R5 se selecciona de -NR11R10;
R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce) y aralquilo (Ci-C4), heteroarilo, heteroarilalquilo(Ci-C ) y -CH(R13)COOR12;
R6, R11, R13 y R14 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce), sustituido o no sustituido, aralquilo (Ci-C4), sustituido o no sustituido, heteroaralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, y arilo, sustituido o no sustituido;
R7 y R12 se seleccionan de entre hidrógeno y alquilo (Ο-ι-Οβ), sustituido o no sustituido; R9 se selecciona de entre -OR6 y -NR7R8;
R10 se selecciona entre hidrógeno, alquilo (Ο-ι-Οβ), sustituido o no sustituido, y aralquilo (C1-C4), sustituido o no sustituido, COOR14; y
n es 1 , 2, 3 o 4.
El término "alquilo" se refiere, en la presente invención, a cadenas hidrocarbonadas saturadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, ferc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, etc. Prefenblemente y de manera particular para algunos radicales el grupo alquilo tiene entre 1 y 4 átomos de carbono, por ejemplo, sin limitarse, a metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, ferc-butilo, isobutilo o sec-butilo. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como alquinilo, alquenilo, halógeno, hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, ciano, carbonilo, acilo, alcoxicarbonilo, carbamoilo, amino o nitro.
El término "arilo", se refiere, en la presente invención, a anillos aromáticos, sencillos o múltiples, que tienen entre 6 a 18 átomos de carbono en la parte del anillo, tales como pero sin limitarse a, fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo, fluorenilo o antracilo. Prefenblemente el grupo arilo tiene de 6 a 12 átomos de carbono y más preferiblemente el grupo arilo es un fenilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos en cualquiera de sus posiciones por uno o más sustituyentes o dos sustituyentes formando un ciclo condensado al arilo y se seleccionan independientemente entre tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, O-alquilo, O-arilo, halógeno, hidroxilo, amino, amino sustituido, ácido carboxílico, éster carboxílico o carboxamida.
El término "heteroarilo" se refiere a un arilo, que contiene entre 5 y 12 átomos de carbono y al menos un átomo distinto de carbono, tales como S, N, ó O, formando parte del anillo aromático. Por ejemplo, sin limitarse a piridina, pirazina, pirimidina ó piridazina. Los radicales heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos en cualquiera de sus posiciones por uno o más sustituyentes o dos sustituyentes formando un ciclo condensado al arilo y se seleccionan independientemente entre tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, O-alquilo, O-arilo, halógeno, hidroxilo, amino, amino sustituido, ácido carboxílico, éster carboxílico o carboxamida.
Por "aralquilo" se entiende en la presente invención a un grupo arilo, como se ha definido anteriormente, unido al resto de la molécula por un grupo alquilo d- C4, como se ha definido anteriormente. Un ejemplo, no limitante, de aralquilo es un grupo bencilo o fenetilo. Los radicales aralquilo pueden estar opcionalmente sustituidos en cualquiera de sus posiciones por uno o más sustituyentes o dos sustituyentes formando un ciclo condensado al arilo y se seleccionan independientemente entre tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, O-alquilo, O- arilo, halógeno, hidroxilo, amino, amino sustituido, ácido carboxílico, éster carboxílico o carboxamida
El término "heteroaralquilo" se refiere, en la presente invención, a un grupo heteroarilo, como se ha definido anteriormente, unido al resto de la molécula por un grupo alquilo Ci-C4, como se ha definido anteriormente. Los radicales heteroaralquilo pueden estar opcionalmente sustituidos en cualquiera de sus posiciones por uno o más sustituyentes o dos sustituyentes formando un ciclo condensado al arilo y se seleccionan independientemente entre tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, O-alquilo, O-arilo, halógeno, hidroxilo, amino, amino sustituido, ácido carboxílico, éster carboxílico o carboxamida. Los esteroisomeros de los compuestos de la presente invención, representados por la fórmula (I) descrita anteriormente, pueden incluir mezcla racémica, enantiómeros puros, mezclas diastereoisoméricas, diastereoisómeros puros, dependiendo de la presencia de uno o más elementos estereogénicos, o isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E). Los isómeros individuales, enantiómeros o diastereómeros y las mezclas de los mismos se incluyen dentro del ámbito de la aplicación de la presente invención. En una realización preferida, R1 es alquilo(Ci-C4) o aralquilo(Ci-C4), más preferiblemente R1 es alquilo(Ci-C2), bencilo o fenetilo, aún más preferiblemente R1 es metilo o bencilo.
En otra realización preferida, cuando R2 es -OR6, R6 es hidrógeno, alquilo(Ci- C4) o bencilo, más preferiblemente hidrógeno, metilo, ferc-butilo o bencilo.
En otra realización preferida, cuando R2 es -NR7R8; R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce), aralquilo(Ci-C4), heteroarilo, heteroaralquilo(Ci-C4) y -CH(R13)COOR12 y/o R7 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-C4), más preferiblemente R7 es hidrógeno o metilo y/o R8 se selecciona entre bencilo, heteroarilo, heteroaralquilo(Ci) y -CH(R13)COOR12; R13 es preferiblemente hidrógeno, metilo o bencilo y/o R12 es preferiblemente hidrógeno o metilo.
En otra realización preferida, R3 es hidrógeno o metilo.
En otra realización preferida, R4 es aralquilo(Ci-C4) o -COR9. Más preferiblemente, R es bencilo, -COOR1 o -CONR7R8.
Cuando R4 es -COOR14, preferiblemente R14 es hidrógeno, alquilo(Ci-C4) o bencilo, más preferiblemente hidrógeno, metilo, ferc-butilo o bencilo.
Cuando R es -CONR7R8; preferiblemente R7 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-C4), más preferiblemente hidrógeno o metilo y aún más preferiblemente hidrógeno, y/o R8 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo(C-i- Ce) y aralquilo(Ci-C ), heteroarilo, heteroaralquilo(Ci-C ) y -CH(R13)COOR12, más preferiblemente bencilo o -CH(R13)COOCH3, donde R13 se selecciona preferiblemente entre bencilo, metilo, heteroaralquilo(d) o heteroarilo, y aún más preferiblemente entre bencilo, metilo, piridinmetil o piridina. En una realización preferida, R5 es -NR11R10 y R11 se seleccionan de entre hidrógeno, metilo y bencilo; y/o R10 se selecciona entre hidrógeno, metilo, bencilo y COOR14; donde R14 es metilo, tere-butilo o bencilo. En otra realización preferida el compuesto de la invención se selecciona de la lista que consiste en:
4R,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benziloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- metiloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-(3R,SJ-metil-2-oxoazetidina
4R,S-Metil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-benciloxicarbonilamino-3'-ierc- butoxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Metil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-benciloxicarbonilamino-3'-ierc- butoxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-1 -[4'S-(/V-Benciloxicarbonil-/V-metil)amino-4'-metoxicarbonil]but-1 - il]-4-ferc-butoxicarbonil-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-1 -[4'S-[(/V-metil)amino-4'-metoxicarbonil]but-1 '-il]-4-ierc- butoxicarbonil-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(4'S-ierc-butoxicarbonilamino-4'- benciloxicarbonil)but-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-N-[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-ierc- butoxicarbonil-2-oxoazetidina 4'S-N-[(4'-Benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4R;S-ierc- butiloxicarbonil-4-metil-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'-fenil)prop-1 '- il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'-fenil)prop-1 '- il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-3R-metil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-3R-metil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-4-Bencil-4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Benciloxicarbonil-3S,4S-dimetil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-]-(4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '- il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-3R-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]- 2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-3S-metil-4-metoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '- il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-bencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]- 2-oxoazetidina 4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-amino-3'-fenil)prop-1 -il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-ierc-butoxicarbonilamino-3- fenil)prop-1 '-il]-4-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-carboxi-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-carboxi)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4R,S-Bencil-1 -[4'S-tert-butoxicarbonilamino-4'-carboxi)but-1 '-il]-4-carboxi-2- oxoazetidina
4S-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[(N- bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-1 -[4'S-tert-butoxicarbonilamino-4'-[(N-bencil)carbamoil]but-1 '-il]-4- [(N-bencil)carbamoil]-2-oxoazetidina
4S-4-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-3S-metil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- [(N-bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2 -oxoazetidina
4R-4-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-3R-metil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- [(N-bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2 -oxoazetidina
4S-Bencil-4-[N-[(pindin-4''-il)metil]carbamoil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- [N-[(pindin-4"-il)metil]carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-[N-[(pindin-4''-il)metil]carbamoil]-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-
[N-[(pindin-4"-il)metil]carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-[(N-pindin-3-il)carbamoil]-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[(N- piridin-3-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-[(N-pindin-4-il)carbamoil]-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-[(N- piridin-4-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-[(N-(pindin-4-il)carbamoil]-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-[(N- piridin-4-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-1 -[3'S-ferc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina 4R-Bencil-1 -[3'S-ferc-butoxicarbonilamino-3'-[/\/-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 ''S-metoxicarbonil-2'- fenil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S-metoxicarbonil-2'fenil)etil]carbamoil]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 ''S-metoxicarbonil-2'- fenil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '''S-metoxicarbonil-2 enil)etil]carbamoil]-2- oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[4'S-[(/V-benciloxicarbonil-/V-m
4-[N-[(1 "S-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-1 -[(4'S-metilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina, y
4R;S-Bencil-1 -[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N- [(1 "R-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina.
Otro aspecto de la presente invención se refiere al procedimiento para la obtención del compuesto de fórmula (III), es decir el compuesto de fórmula (I) cuando R2 es -OR6, que comprende la delación en medio básico del compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000011_0001
(II) (III)
Otro aspecto más de la presente invención se refiere al procedimiento de obtención del compuesto de fórmula (IV), es decir el compuesto de fórmula (I) cuando R2 es -NR7R8, que comprende la reacción de aminas R8R7NH con un derivado ácido carboxílico del compuesto de fórmula (III), es decir el compuesto de fórmula (I) cuando R2 es -OH, en presencia de un agente de acoplamiento:
Figure imgf000012_0001
(IV)
El agente de acoplamiento que se puede utilizar es cualquiera conocido por un experto en la materia de entre los típicamente utilizados en la síntesis de péptidos como por ejemplo carbodiimidas, sales de fosfonio o sales de uronio.
La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de fórmula (I), sales farmacéuticas aceptables o estereoisómeros de los mismos, junto con un transportador farmacéutico aceptable, adyuvante o vehículo para la administración a un paciente. Preferiblemente, dicha composición también comprende otro principio activo con efecto sinérgico o complementario.
Por tanto, otro aspecto de la presente invención se refiere a composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula general (I), además de al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Las formas farmacéuticas adecuadas para la administración oral incluyen cualquier composición sólida (tabletas, pastillas, cápsulas, formas granuladas, etc.) o líquida (soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, etc.) y pueden contener excipientes convencionales conocidos en la materia, tales como agentes de unión, por ejemplo jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto, o polivinilpirrolidona; agentes de relleno, por ejemplo lactosa, azúcar, almidón, maíz, fosfato cálcico, sorbitol o glicina, lubricantes para la preparación de comprimidos, por ejemplo estearato de magnesio, desgregantes como almidón, polivinilpirrolidona, glicolato sódico de almidón o celulosa microcristalina, o egentes humectantes farmacéuticamente aceptables, tal como laurilsulfato de sodio.
Las composiciones sólidas orales se pueden preparar por métodos convencionales de mezclado, llenado o preparación de comprimidos. Las operaciones repetidas de mezclado se pueden utilizar para distribuir de forma uniforme el principio activo utilizando grandes cantidades de agentes de relleno. Estas operaciones son convencionales en el arte de esta invención. Los comprimidos se pueden preparar, por ejemplo a través de granulación húmeda o seca y pueden ser opcionalmente recubiertos por métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal, particularmente con un recubrimiento entérico.
Las composiciones farmacéuticas también pueden ser adaptadas para la administración parenteral, tal como soluciones estériles, suspensiones o productos liofilizados en la forma farmacéutica adecuada. Excipientes adecuados, tales como agentes a granel, neutralizantes o surfactantes pueden ser mencionados.
Los compuestos o composiciones descritos en la presente invención pueden ser administrados por cualquier método adecuado, como infusión intravenosa, preparaciones orales y administración intraperitoneal o intravenosa. Sin embargo, la vía de administración preferida dependerá de la condición del paciente.
La cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) para ser administrado en general, dependerá, entre otros factores, de la persona que se va tratar, de la severidad de la enfermedad, de la forma de administración elegida, etc. Por este motivo, las dosis mencionadas en esta invención deben ser consideradas como guías para el especialista en la materia, y este último debe ajustar la dosis de acuerdo a las variables mencionadas anteriormente. Sin embargo, un compuesto de fórmula (I) se puede administrar una o más veces al día, por ejemplo, 1 , 2, 3 ó 4 veces al día en una cantidad típica total diaria entre 1 y 200 mg/kg de peso corporal/día, preferiblemente 1 -10 mg/kg de masa corporal/día.
Los compuestos descritos en esta invención, sus sales farmacéuticamente aceptables y/o estereoisómeros, así como las composiciones farmacéuticas que los contienen se pueden utilizar junto con otros fármacos adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, ser provistos en una forma de una composición separada para su administración simultanea o no, con la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o un estereoisómero farmacéuticamente aceptable o sal del mismo.
Otro aspecto de la invención se refiere al uso del compuesto de fórmula (I) para la elaboración de un medicamento. Otro aspecto más de la presente invención se refiere al uso del compuesto de fórmula (I) para la elaboración de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad asociada a alteraciones de los canales termosensoriales, preferiblemente de los canales TRPM8, preferiblemente dichas enfermedades se seleccionan de entre inflamación; trastornos pulmonares por ejemplo problemas del sistema respiratorio seleccionado entre tos y asma; enfermedades oculares por ejemplo síndrome de ojo seco o lagrimeo excesivo; hipersensibilidad gastrointestinal como por ejemplo síndrome del intestino irritable; sensibilidad en la piel por ejemplo prurito, dermatitis atópica, alergénica o psoriasis; neurodegeneración y cáncer por ejemplo melanoma, leucemia, próstata, riñon, mama, páncreas, ovario, pulmón, colon, del sistema nervioso central, en particular del cerebro, o osteosarcoma. A lo largo de la presente descripción, el término "tratamiento" se refiere a eliminar, reducir o disminuir la causa o efectos de la enfermedad. Para los propósitos de esta invención, tratamiento incluye, aunque sin quedar limitados a los mismos, aliviar, disminuir o eliminar uno o más síntomas de la enfermedad; reducir el grado de enfermedad, estabilizar (es decir, no empeorar) el estado de la enfermedad, retrasar o ralentizar la progresión de la enfermedad, aliviar o mejorar el estado de la enfermedad y remitir la enfermedad (ya sea total o parcialmente). A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS FIG. 1 Curvas dosis respuesta, representativas del efecto bloqueador de algunos compuestos, de los ejemplos 3, 6 y 17 (FIGs. 1A, 1 B y 1 C, respectivamente). Se representa el porcentaje de actividad del canal TRPM8 en presencia de concentraciones crecientes de los compuestos ensayados. La actividad está normalizada frente a la actividad del canal en ausencia de compuesto. Las líneas solidas muestran el ajuste a la ecuación de Hill de donde se obtienen los valores de IC50. Los resultados representan la media ± DS para n>6 medidas.
EJEMPLOS
SINTESIS DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCION Los compuestos de la presente invención, derivados de β-lactamas, se han preparado siguiendo el esquema general de síntesis 1 .
Figure imgf000016_0001
5 Esquema 1 . Procedimiento general para la preparación de derivados β- lactámicos a partir de aminoácidos.
Los Nosil derivados de aminoácidos (2) se acoplan con los alcoholes (3), mediante reacción de Mitsunobu, para dar lugar a los N-nosil-N-alquil derivados0 (4). La eliminación del grupo nosilo da lugar a los amino derivados (5), que se hacen reaccionar con cloruros de cloroalcanoilo para dar lugar a los intermedios (6). La delación en medio básico de los intermedios (6) da lugar a los compuestos β-lactámicos correspondientes (EJEMPLOS 1 -32), que se transforman posteriormente en los análogos amida (EJEMPLOS 35-51 ) por5 acoplamiento de las aminas R8NH2 a los carboxilatos precursores (entre otros, EJEMPLOS 33-34).
SÍNTESIS DE PRODUCTOS DE PARTIDA E INTERMEDIOS DE REACCIÓN 0 Síntesis de Nosil derivados de aminoácidos (Ns-L-Xaa-OR6) (2) A una disolución de H-L-Xaa-ORb HCI (17, 15 mmol) en CH2CI2 seco (1 15 mL) se le añade trietilamina (TEA) (17, 15 mmol, 2.4 mL) y se deja en agitación durante 20 min. Transcurrido este tiempo se le añade, a 0o C, TEA (22,25 mmol, 3, 1 mL) y cloruro de 2-nitrobencenosulfonilo (22,25 mmol, 4,9 g) dejándose en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Al día siguiente se evapora el disolvente hasta sequedad y el crudo de reacción se extrae con AcOEt y se lava con ácido cítrico (10%), NaHC03 (10%) y disolución saturada de NaCI, sucesivamente. Finalmente, el residuo orgánico se seca sobre Na2S04 anhidro, se filtra y se evapora a sequedad. El crudo de reacción se purifica en columna de gel de sílice utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
Ns-L-Phe-OMe (2a) (Albanese, D.; Lardini, D.; Lupi, V.; Pensó, M. Eur. J. Org. Chem. 2000, 1443-1449)
Ns-L-Phe-O'Bu (2b) (Turner, J.J.; Wilschut, N.; Overkleft, H. S.; Klaffke, W.; Van der Marel, G.A.; Van Boom, J.H. Tetrahedron Lett. 1999, 40, 7039-7042) -L-Phe-OBn (2c)
Figure imgf000017_0001
Simpe. Rdto: 89%. Eluyente: AcOEt: Hexano (3:1 ). HPLC: tR=15.33 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 8.00- 6.91 (m, 14H, Ar), 6.07 (d, 1 H, J=9.0 Hz, NH), 4.92 (d, 1 H, J=12.1 Hz, OCH2), 4.87 (d, 1 H, J=12.1 Hz, OCH2), 4.52 (m, 1 H, a-Phe), 3.13 (m, 2H, β-Phe). 13C RMN (CDCIs): δ 171.5 (COO), 147.2, 136.6, 136.1 , 135.1 , 134.4, 132.8, 128.9, 128.6, 128.2, 127.7, 127.6, 127.1 , 125.9, 124.2 (Ar), 66.4 (OCH2), 58.7 (Ca), 35.9 (Οβ). MS (ES)+: 441.21 [M+H]+.
Ns-L-Ala-OMe (2d) (Biron, E.; Kessler, H. J. Org. Chem. 2005, 70, 5183-5189) Ns-L-Ala-OBn (2e)
Figure imgf000017_0002
Simpe. Rdto: 62%. Eluyente: AcOEtHexano (2:1 ). HPLC: tR=13.04 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.00 (dd, 1 H, J=7.7, 1 .6 Hz, Ar), 7.81 (dd, 1 H, J=7.7, 1 .6 Hz, Ar), 7.34-7.31 (m, 3H, Ar), 7.20-7.17 (m, 2H, Ar), 6.18 (d, 1 H, J=8.6 Hz, NH), 4.96 (d, 1 H, J=12.2 Hz, OCH2), 4.91 (d, 1 H, J=12.1 Hz, OCH2), 4.31 (m, 1 H, a-H), 1 .50 (d, 3H, J=7.2 Hz, CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.4 (COO), 147.6, 134.8, 134.1 , 133.7, 132.9, 130.4, 128.7, 128.6, 128.3, 125.7 (C, Ar), 67.4 (OCH2), 52.6 (Ca), 19.8(CH3). MS (ES)+: 365.09 [M+H]+.
Ns-L-Ala-O'Bu (2f) (Chapman R. N; Dimartino, G.; Arora, P. S. J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 12252-12253)
Reducción de derivados de aminoácido a los correpondientes alcoholes (3)
A una disolución del correspondiente derivado de aminoácido (12,38 mmol) en THF seco (12 mL) se le añade sucesivamente, a -15°C, /V-metilmorfolina (12,38 mmol, 1 ,36 mL) y el cloroformiato de isobutilo (12,38 mmol, 1 ,60 mL). Al cabo de 10 min el precipitado de clorhidrato de /V-metilmorfolinio formado se elimina por filtración, precediéndose a su lavado con THF (2x60 mL). La disolución así obtenida se enfria a -15°C y a continuación se le añade una disolución de NaBH4 (18,57 mmol, 0,7 g) en H20 (6 mL).
Finalizado el desprendimiento de H2 se le adicionan H20 (300 mL) y AcOEt (600 mL) precediéndose a la separación de las dos fases. La fase orgánica se lava sucesivamente con ácido cítrico (10%), NaHC03 (10%) y disolución saturada de NaCI, sucesivamente. Finalmente, el residuo orgánico se seca sobre Na2S04 anhidro, se filtra y se evapora a sequedad. El crudo de reacción se purifica en columna de gel de sílice utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
Boc-L-Hse-OBn (3a) (comercial)
Z-L-Hse-O'Bu (3b) (comercial)
(2S)-2-(N-Benciloxicarbonil-N-metil)amino-5-hidroxipentanoato de metilo (3c)
Figure imgf000019_0001
Simpe. Rdto: 58%. Eluyente: AcOE Hexano (1 : 1 ). Proporción de rotámeros M,m =2: 1 . 1H RMN (300 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.40 (s, 5H, Ph), 5.20 (s, 2H, OCH2), 4.90 (dd, 1 H, J=10.5, 4.9 Hz, 2-H), 4.41 (m, 2H, 5-H), 3.75 (s, 3H, OMe), 2.92 (s, 3H, NMe), 2.08 (m, 2H, 3-H), 1 .85 (m, 1 H, 4-H), 1 .62 (m, 1 H, 4-H). MS (ES)+: 318.14 [M+Na]+.
(2S)-2-ferc-Butoxicarbonilamino-5-hidroxipentanoato de bencilo (3d)
(Jiang, S.; Li, P.; Lai, C.C.; Kelley, J.A.; Roller, P.P. J. Org. Chem. 2006, 71 , 7307-7314.)
(2S)-2- Benciloxicarbonilamino-5-hidroxipentanoato de metilo (3e)
(Feichtinger, K.; Sings, H. L.; Baker, T.J.;Mathews, K.; Goodman, M. J. Org. Chem. 1998, 63, 8432-8439)
Z-S-fenilalaninol (3f) (comercial)
Z- ?-fenilalaninol (3g) (comercial)
(2S)-dibencilaminofenilalaninol (3h) (comercial)
Síntesis de /V-alquil-M-nosN derivados de aminoácidos
A una disolución del alcohol derivado correspondiente (7,60 mmol), Ns-L-Xaa- OR6 (7,60 mmol) y trifenilfosfina (7,60 mmol, 2g) en THF seco (66 mL), bajo atmósfera de Ar y a 0°C, se le adiciona diisopropil azodicarboxilato (7,60 mmol, 1 ,50 mL). Se retira el baño de hielo y se deja en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Al día siguiente se evapora el disolvente hasta sequedad y el crudo de reacción se purifica en columna de gel de sílice utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
yV-[(3S-íerc-Butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1 -il]-Ns-L-Phe- OMe (4a)
Figure imgf000020_0001
Simpe. Rdto: 50% [a partir de Ns-L-Phe-OMe (2a) y Boc-L-Hse-OBn (3a)]. Eluyente: AcOEtHexano (1:2). HPLC: tR=16.80 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.76- 7.18 (m, 14H, Ar), 5.20 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 5.16 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 5.15 (brs, 1H, NH Boc), 4.93 (t, 1H, J=7.7 Ηζ,α-Phe), 4.26 (m, 1H.3-H), 3.54 (m, 1H, 1-H), 3.53 (s, 3H, OMe), 3.40 (m, 1H, 1-H), 3.33 (dd, 1H, J= 14.5, 7.1 Hz, β-Phe), 2.92 (dd, 1H, J=14.5, 8.4 Hz, β-Phe), 2.17 (m, 1H, 2-H), 1.99 (m, 1H, 2-H), 1.45 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.8 (COO), 170.9 (COO), 155.6 (CON), 148.3, 136.0, 135.3, 133.7, 132.9, 131.7, 131.0, 129.1, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 127.2, 124.2 (C, Ar), 80.3 (C, 'Bu), 67.6 (OCH2), 61.5 (Ca-Phe), 52.5 (OMe), 52.00 (C3), 43.0 (C1), 36.6 (β-Phe), 33.3 (C2), 28.5 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 656.38 [M+H]+. /V-[(3S-íerc-Butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1 -il]-Ns-L-Phe-
Figure imgf000020_0002
Simpe. Rdto: 38% [a partir de Ns-L-Phe-OMe (2c) y Boc-L-Hse-OBn (3a)]. Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=18.23 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.72-7.12 (m, 19H, Ar), 5.17 (s, 2H, OCH2), 5.12 (d, 1H, J=7.7 Hz, NH, Boc), 4.98 (d, 1H, J=13.8 Hz, OCH2), 4.91 (d, 1H, J=13.8 Hz, OCH2), 4.90 (m, 1H, a-Phe), 4.25 (m, 1H, 3-H), 3.55 (m, 1H, 1-H), 3.37 (m, 2H, β-Phe, 1-H), 2.94 (dd, 1H, J=14.8, 8.0 Hz, β-Phe), 2.16 (m, 1H, 2-H), 1.96 (m, 1H, 2-H), 1.45 (s, 9H, CH3 ¾u).13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.7 (COO), 170.1 (COO), 155.5 (CON), 148.1, 135.9, 135.3, 134.9, 133.6, 132.7, 131 .5, 130.8, 129.2, 128.9, 128,85, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 128.5, 127.1 , 124.1 (C, Ar), 80.2 (C, ¾u), 67.52 (OCH2), 67.5 (OCH2), 61.5 (Ca- Phe), 52.00 (C3), 43.0 (C1 ), 36.8 (Οβ-Phe), 33.2 (C2), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 732.33 [M+H]+.
/V-[(3S-ierc-Butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1 -il]-Ns-L-Ala- Me (4c)
Figure imgf000021_0001
Sirupe. Rdto: 6% [a partir de Ns-L-Ala-OMe (2d) y Boc-L-Hse-OBn (3a)]. Eluyente: AcOEtHexano (1 :2). HPLC: tR=17.03 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.96 (d, 1 H, J= 7.8 Hz, Ns), 7.86-7.56 (m, 3H, Ns), 7.36 (s, 5H, Ph), 5.21 (d, 1 H, J= 12.3 Hz, OCH2), 5.18 (sa, 1 H, NHBoc), 5.16 (d, 1 H, J= 12.3 Hz, OCH2), 4.76 (m, 1 H, a-Ala), 4.27 (m, 1 H, 3-H), 3.57 (s, 3H, OMe), 3.51 (m, 1 H, 1 -H), 3.22 (m, 1 H, 1 -H), 2.23 (m, 1 H, 2-H), 2.09 (m, 1 H, 2-H), 1 .47 (d, 3H, J= 7.4 Hz, CH3, Ala), 1 .43 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): 171.8 (COO), 165.2 (COO), 155.5 (CON), 148.1 , 135.3, 133.7, 131 .7, 131 .1 , 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 124.2 (Ar), 80.3 (C 'Bu), 67.6 (OCH2), 56.2 (Ca-Ala), 52.5 (OMe), 51.9 (C3), 42.7 (C1 ), 33.7 (C2), 28.4 (CH3 ¾u), 16.8 (CH3 Ala). MS (ES)+: 602.41 [M+Na]+.
W-[(3S-Benciloxicarbonilamino-3-íerc-butoxicarbonil)prop-1 -il]-Ns-L-Phe-
Figure imgf000021_0002
Simpe. Rdto: 52% [a partir de Ns-L-Phe-OMe (2a) y Z-L-Hse-O'Bu (3b)]. Eluyente: AcOEtHexano (1 :2). HPLC: tR=16.97 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.77 (d, 1 H, J=7.8 Hz, Ar), 7.66- 7.49 (m, 3H, Ar), 7.39-7.21 (m, 10H, Ph, Z), 5.43 (d, 1 H, J=7.7 Hz, NH, Z), 5.17 (d, 1H, J=12.3 Hz, OCH2), 5.10 (d, 1H, J=12.3 Hz, OCH2), 4.93 (t, 1H, J=7.7 Hz, a-Phe), 4.18 (m, 1H, 3-H), 3.54 (s, 3H, OMe), 3.51 (dd, 1H, J= 11.8, 3.8 Hz, 1-H), 3.42 (dd, 1H, J= 11.8, 5.4 Hz, 1-H), 3.36 (m, 1H, β-Phe), 2.95 (dd, 1H, J=14.4, 8.4, Hz, β-Phe), 2.15 (m, 1H, 2-H), 1.98 (m, 1H, 2-H), 1.47 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 170.8 (COO), 170.6 (COO), 156.0 (CON), 148.2, 135.9, 133.7, 131.9, 130.9, 129.1, 128.7, 128.6, 128.2, 128.1, 127.1, 124.1 (C, Ar), 82.8 (C, ¾u), 67.0 (OCH2), 61.3 (Ca-Phe), 52.8 (C3), 52.5 (OMe), 42.9 (C1), 36.5 (Cp-Phe), 33.4 (C2), 28.0 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 678.51 [M+Na]+.
/V-[(3S-Benciloxicarbonilamino-3-ierc-butoxicarbonil)prop-1-il]-Ns-L-Ala- Me (4e)
Figure imgf000022_0001
Sirupe. Rdto: 58% [a partir de Ns-L-Ala-OMe (2d) y Z-L-Hse-O'Bu (3b)]. Eluyente: AcOEtHexano (1:2). HPLC: tR=15.49 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.00 (dd, 1 H, J= 7.9, 1.4 Hz, Ar- Ns), 7.67 (dd, 1H, J= 7.6, 1.4 Hz, Ar-Ns), 7.63-7.58 (m, 2H, Ar-Ns), 7.37-7.31 (m, 5H, Ph, Z), 5.40 (d, 1H, J=7.1 Hz, NH, Z), 5.15 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.09 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.76 (q, 1H, J=7.4 Hz, a-Ala), 4.19 (m, 1H, 3-H), 3.58 (s, 3H, OMe), 3.48 (m, 1H, 1-H), 3.23 (m, 1H, 1-H), 2.14 (m, 2H, 2-H), 1.47 (m, 12H, CH3 *Bu, CH3 Ala). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.7 (COO), 170.6 (COO), 156.0 (CON), 148.0, 136.4, 133.7, 131.7, 131.0, 128.6, 128.3, 128.1, 124.2 (C, Ar), 82.8 (C, ¾u), 67.0 (OCH2), 56.1 (Ca-Ala), 52.8 (C3), 52.5 (OMe), 42.7 (C1), 33.8 (C2), 28.0 (CH3 ¾u), 16.8 (CH3 Ala). MS (ES)+: 602.48 [M+Na]+.
A/-[4S-[(A/-Benciloxicarbonil-N-metil)amino-4-metoxicarbonil]but-1-il]-Ns-L- Phe-O'Bu (4f)
Figure imgf000023_0001
Simpe. Rdto: 91% [a partir de Ns-L-Phe-O'Bu (2b) y (3c)]. Eluyente: AcOEtHexano (1:1). HPLC: tR=17.61 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =2:1. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.87 (dd, 1H, J = 7.8, 1.2 Ar-Ns), 7.60 (m, 1H, Ar-Ns), 7.53 (m, 2H, Ar-Ns), 7.26 (m, 10H, Ph, Z), 5.16 (d, 1H, J=12.5 Hz, OCH2), 5.12 (d, 1H, J=12.5 Hz, OCH2), 4.79 (t, 1H, J=7.8 Hz, a-Phe), 4.74 (dd, 1H, J = 10.5, 4.8, 4- H), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.55 (m, 1H, 1-H), 3.31(dd, 1H, J=14.3, 7.9 Hz, β-Phe), 3.24 (m, 1H, 1-H), 2.97 (dd, 1H, J=14.3, 7.9 Hz, β-Phe), 2.83 (s, 3H, NMe), 1.92 (m, 1H, 3-H), 1.71 (m, 3H, β-Η, 2-H), 1.21 (s, 9H, CH3 'Bu).13C RMN (75 MHz, CDCIs): 171.8 (COO), 169.2 (COO), 157.0 (CON), 148.3, 136.7, 133.5, 131.7, 129.2, 128.7, 128.6, 127.9, 126.9, 123.9 (C, Ar), 82.4 (C, 'Bu), 67.6 (OCH2), 61.8 (Οβ-Phe), 57.9 (C4), 52.3 (OMe), 45.8 (C1), 36.9 (Οβ-Phe), 30.6 (NMe), 27.7 (CH3'Bu), 27.1 (C3), 26.1 (C2). MS (ES)+: 706.68 [M+Na]+.
/V-[(4S-íerc-Butoxicarbonilamino-4-benciloxicarbonil)but-1 -il]-Ns-L-Phe-
Figure imgf000023_0002
Sirupe. Rdto: 62% [a partir de Ns-L-Phe-OBn (2c) y 3d]. Eluyente: AcOEt:Hexano (1:2). tR=18.60 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.87-6.84 (m, 19H, Ar), 5.11 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.06 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.93 (m, 1H, NH), 4.90 (d, 1H, J=12.1 Hz , OCH2), 4.85 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 4.81 (m, 1H, a-Phe), 4.21 (m, 1H, 4-H), 3.40 (ddd, 1H, J=15.3, 9.9, 5.2 Hz, 1-H), 3.27 (dd, 1H, J=14.1, 8.0 Hz, β- Phe), 3.17 (m, 1 H, 1 -H), 2.92 (dd, 1 H, J=14.0, 7.1 Hz, β-Phe), 1.60 (m, 4H, 3-H, 2-H), 1 .44 (s, 9H, CH3 *Bu). 13C RMN (CDCI3): δ 172.4, 170.1 (COO), 155.5 (OCON), 148.2, 136.3, 135.4, 134.9, 133.5, 133.0, 131.5, 131 .0, 129.3, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 127.1 , 124.1 (Ar), 80.1 (C, *Bu), 67.5, 67.3 (OCH2), 61 .5 (Ca-Phe), 53.1 (C4), 46.1 (C1 ), 36.9 (Οβ-Phe), 30.1 (C3), 28.4 (CH3 *Bu), 26.4 (C2). MS (ES)+: 746.29 [M+H]+.
A/-[(4S-benciloxicarbonilamino-4-metiloxicarbonil)-but-1 -il]-Ns-L-Phe-OtBu
Figure imgf000024_0001
Simpe. Rdto: 68% [a partir de Ns-L-Phe-O'Bu (2b) y (2S)-2- Benciloxicarbonilamino-5-hidroxipentanoato de metilo (3e)]. HPLC-MS: tR=8.53 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.84 (d, 1 H, J=7.8 Hz, 3-H Nos), 7.63 (m, 1 H, 6-H Nos), 7.56 (m, 2H, 4,5-H Nos), 7.36-7.20 (m, 10H, Ar), 5.33 (d, 1 H, J=8.2 Hz, 4-NH), 5.1 1 (s, 2H, OCH2), 4.75 (t, 1 H, J=7.6 Hz, β-Phe), 4.33 (m, 1 H, 4-H), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.55-3.48 (m, 1 H, 1 -H), 3.35-3.27 (m, 2H, 1 -H, β-Phe), 3.99 (dd, 1 H, J= 14.5, 7.1 Hz, β- Phe), 1 .87-1 .80 (m, 1 H, 3-H), 1 .79-1 .58 (m, 3H, 3-H, 2-H), 1.23 (s, 9H, CH3 ¾u). MS (ES)+: 670.48 [M+H]+.
A/-[(4S-benciloxicarbonilamino-4-metiloxicarbonil)-but-1 -il]-Ns-L-Ala-OtBu
Figure imgf000024_0002
Simpe. Rdto: 63% [a partir de Ns-L-Ala-OMe (2d) y (2S)-2- Benciloxicarbonilamino-5-hidroxipentanoato de metilo (3e)]. HPLC-MS: tR=7.62 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.05 (d, 1 H, J=6.5 Hz, 3-H Nos), 7.64 (m, 2H, 4,5-H Nos), 7.57 (m, 1 H, 6-H Nos), 7.36-7.30 (m, 5H, Ar), 5.34 (d, 1H, J=7.9 Hz, 4-NH), 5.11 (s, 2H, OCH2), 4.62 (q, 1H, J=7.2 Hz, a-Ala), 4.35 (q, 1H, J = 7.2 Hz, 4-H), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.52-3.44 (m, 1H, 1-H), 3.16-3.09 (m, 1H, 1-H), 1.86-1.64 (m, 4H, 3-H, 2-H), 1.45 (d, 3H, J=7.3 Hz, β-Ala), 1.32 (s, 9H, ClVBu). MS (ES)+: 594.32 [M+H]+. / -[(2S-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1 -il]-Ns-L-Phe-OBn (4j)
Figure imgf000025_0001
Simpe. Rdto: 51% [a partir de Ns-L-Phe-OBn (2c) y 3f] Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=18.52 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.79-7.02 (m, 24H, Ar), 5.42 (d, 1H, J=7.4 Hz, 2-NH), 5.10 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 5.00 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.84 (s, 2H, OCH2), 4.82 (dd, 1H, J=8.4, 6.6 Hz, a-Phe), 4.14 (m, 1H, 2-H), 3.55 (dd, 1H, J=15.5, 10.1 Hz, 1-H), 3.43 (dd, 1H, J=15.5, 4.9 Hz, 1-H), 3.24 (dd, 1H, J=13.9, 8.5 Hz, β-Phe), 3.11 (dd, 1H, J=13.9, 6.6 Hz, β-Phe), 2.89 (dd, 1H, J=14.0, 6.0 Hz, 3-H), 2.81 (dd, 1H, J=14.0, 7.2 Hz, 3-H). 13C RMN (75 MHz, CDCIs): δ 170.0 (COO), 156.0 (CON), 147.8, 137.3, 136.1, 134.7, 133.6, 133.0, 131.9, 131.1, 129.5, 129.4, 128.6, 128.7, 128.66, 128.65, 128.63, 128.62, 128.5, 128.1, 127.9, 127.1, 126.8, 124.4 (Ar), 67.5, 66.5 (OCH2), 62.0 (Ca-Phe), 52.2 (C2), 48.7 (C1), 39.6 (Cp-Phe), 37.3 (C3). MS (ES)+: 708.43 [M+H]+.
-[(2R-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-Ns-L-Phe-OBn (4k)
Figure imgf000025_0002
Simpe. Rdto: 57% [a partir de Ns-L-Phe-OBn (2c) y 3g]. Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=18.64 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.69-6.88 (m, 24H, Ar), 5.22 (d, 1H, J=7.4 Hz, NH, Z), 5.01 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 5.00 (s, 2H, OCH2), 4.97 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 4.83 (t, 1H, J=7.6 Hz, a-Phe), 4.06 (m, 1H, 2-H), 3.64 (dd, 1 H, J=15.8, 9.3 Hz, 1 -H), 3.45 (dd, 1 H, J=15.8, 4.5 Hz, 1 -H), 3.23 (dd, 1 H, J=14.5, 7.6 Hz, β-Phe), 2.99 (dd, 1 H, J=13.9, 6.9 Hz, 3-H), 2.79 (m, 2H, β-Phe, 3-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.1 (COO), 156.1 (CON), 148.0, 137.8, 135.8, 135.1 , 133.7, 132.6, 131 .6, 131.1 , 129.4, 129.0, 128.75, 128.7, 128.6, 128.5, 128.05, 127.0, 126.8, 124.2 (Ar), 67.7, 66.5 (OCH2), 61 .0 (Ca-Phe), 52.4 (C2), 48.4 (C1 ), 39.2 (C3), 35.6 (Cp-Phe). MS (ES)+: 708.42 [M+H]+.
/V- 2 ?-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1 -il]-Ns-L-Ala-OBn (41)
Figure imgf000026_0001
Simpe. Rdto: 57% [a partir de Ns-L-Ala-OBn (2e) y 3g]. Eluyente: AcOEtHexano (1 :3). HPLC: tR=16.91 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.76 (d, 1 H, J=7.9 Hz, Ar), 7.58-7.14 (m, 13H, Ar), 5.15 (d, 1 H, J=7.4 Hz NH, Z), 5.00 (m, 4H, OCH2), 4.69 (q, 1 H, J=7.3 Hz, a-Ala), 3.99 (m, 2H, 2-H), 3.46 (m, 2H, 1 -H), 2.97 (dd, 1 H, J=13.8, 6.3 Hz, 3-H), 2.89 (dd, 1 H, J=13.8, 7.4 Hz, 3-H), 1 .36 (d, 1 H, J=7.3 Hz, CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCIs): δ 171.1 (COO), 156.0 (CON), 148.0, 137.7, 135.2, 133.7, 131 .7, 131.2, 129.4, 129.3, 128.7, 128.6, 128.5, 128.45, 128.4, 128.3, 128.1 , 128.0, 126.7, 124.2 (Ar), 67.5, 66.6 (OCH2), 56.4 (Ca-Phe), 52.7 (C2), 48.2 (C1 ), 38.7 (C3), 16.01 (CH3). MS (ES)+: 632.33 [M+H]+.
y -[2S-(3-Fenil-2-dibencilamino)prop-1 -il]-Ns-L-Phe-OBn (4m)
Figure imgf000026_0002
Simpe. Rdto: 63% (a partir de 2c y 3h). Eluyente: AcOE Hex (1 :5). HPLC: tR= 18.40 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.52-6.77 (m, 29H, Ar), 4.66 (s, 2H, OCH2), 4.54 (dd, 1 H, J=9.7, 5.5 Hz, a-Phe), 3.83 (dd, 1 H, J=14.8, 5.7 Hz, 1 -H), 3.68 (d, 2H, J=13.7 Hz, N-CH2), 3.53 (d, 2H, J=13.7 Hz, N-CH2), 3.32 (dd, 1 H, J=14.8, 8.5 Hz, 1 -H), 3.20 (m, 1 H, 2-H), 2.81 (dd, 1 H, J=13.9, 8.5 Hz, 3-H), 2.67 (m, 3H, β-Phe, 3-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 169.7 (COO), 148.0, 139.9, 139.8, 136.4, 135.0, 134.0, 133.3, 131 .9, 131.8, 129.7, 129.4, 129.1 , 128.6, 128.55, 128.5, 128.4, 128.3, 128.2, 127.0, 126.9 (Ar), 67.1 (OCH2), 62.0 (Ca-Phe), 57.8 (C2), 53.2 (N- CH2), 47.1 (C1 ), 36.7 (Οβ-Phe), 34.4 (C3). MS (ES)+: 754.35 [M+H]+.
-[(2S-Dibencilamino-3-fenil)propil]-Ns-L-Phe-OMe (4n)
Figure imgf000027_0001
Simpe. Rdto: 35% (a partir de 2a y 3h). Eluyente: AcOEtHexano (1 :5). HPLC: tR=3.60min (gradiente de 80% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (300 MHz, CDCIs): δ 7.63 (m, 2H, Ar), 7.41 (m, 1 H, Ar), 7.29-7.13 (m, 17H, Ar), 7.02 (m, 2H, Ar), 6.93 (m, 2H, Ar), 4.54 (dd, 1 H, J = 10.0, 5.4 Hz, a-Phe), 3.91 (dd, 1 H, J = 15.0, 5.6 Hz, 1 -H), 3.80 (dd, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.63 (dd, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.49 (dd, 2H, J = 15.0, 8.7 Hz, 1 -H), 3.34 (s, 3H, OCH3), 3.30 (m, 1 H, 2-H), 2.89 (dd, 1 H, J = 14.0, 8.8 Hz, 3-H), 2.80 (dd, 1 H, J = 13.5, 6.3 Hz, 3- H), 2.75 (dd, 1 H, J = 13.2, 10.0 Hz, β-Phe), 2.66 (dd, 1 H, J = 13.3, 5.4 Hz, β- Phe). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.4 (COO), 140.0-124.5 (C, Ar), 61.8 (a- Phe), 57.8 (C2), 53.3 (NCH2), 52.2 (OCH3), 47.1 (C1 ), 36.6 (β-Phe), 34.7 (C3). MS (ES)+: 679.51 [M+H]+.
yV-[(2S-Dibencilamino-3-fenil)propil]-Ns-L-Phe-OíBu (4o)
Figure imgf000027_0002
Simpe. Rdto: 82% (a partir de 2b y 3h). Eluyente: AcOEtHexano (1 :6). HPLC: tR=5.00 min (gradiente del 80% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (300 MHz, CDCIs): δ 7.59 (m, 2H, Ar), 7.37 (m, 1 H, Ar), 7.26-7.16 (m, 16H, Ar), 7.08 (m, 3H, Ar), 6.86 (m, 2H, Ar), 4.51 (t, 1 H, J = 7.7 Hz, a-Phe), 4.01 (dd, 1 H, J = 15.0, 5.6 Hz, 1 -H), 3.81 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.63 (dd, 2H, J = 13.8 Hz, NCH2), 3.45 (dd, 1 H, J = 15.0, 8.8 Hz, 1 -H), 3.29 (ddd, 1 H, J = 8.6, 5.8, 2.8 Hz, 2-H), 2.83 (m, 2H, 3-H), 2.75 (m, 2H, β-Phe), 1.1 1 (s, 9H, 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 169.0 (COO), 148.2, 140.1 , 139.9, 136.8, 134.6, 133.3, 132.0, 129.7, 129.5, 128.4, 121.3, 128.2, 127.0, 126.9, 126.1 , 124.4 (C, Ar), 82.0 (C, 'Bu), 62.6 (a-Phe), 57.9 (C2), 53.3 (NCH2), 47.0 (C1 ), 37.1 (β-Phe), 34.7 (C3), 27.7 (CH3, ¾u). MS (ES)+: 721.38 [M+H]+.
Eliminación del grupo Nosilo (Ns)
A una disolución del /V-Nosil-alquil aminoácido denvado correspondiente (4,87 mmol, 3,57 g) en CH3CN seco (82 mL) se le adiciona sucesivamente K2CO3 (14,49 mmol, 2,02 g) y tiofenol (9,74 mmol, 0,99 mL) y se agita a temperatura ambiente durante una noche. Transcurrido este tiempo, se evapora el disolvente hasta sequedad y el residuo resultante se disuelve en AcOEt:H20 (1 : 1 ) y se separan las fases. El extracto orgánico se lava con disolución saturada de NaCI, se seca sobre Na2S04 anhidro y se evapora a sequedad. El crudo de reacción obtenido se purifica en columna de gel de sílice, utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
yV-[(3S-íerc-Butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1 -il]-L-Phe-OMe
Figure imgf000028_0001
Simpe. Rdto: 85% (a partir de 4a). Eluyente: AcOEtHexano (1 : 1 ). HPLC:
tR=1 1 .98 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.38-7.16 (m, 10H, Ar), 5.81 (d, 1 H, J=7.6 Hz, NHBoc), 5.22 (d, 1 H, J=12.5 Hz, OCH2), 5.14 (d, 1 H, J=12.5 Hz, OCH2), 4.41 (m, 1 H, 3-H), 3.66 (s, 3H, OMe), 3.50 (t, 1 H, J=6.7 Hz, α-Phe) , 2.94 (m, 2H, β-Phe), 2.75 (m, 1 H, 1 - H), 2.51 (m, 1 H, 1 -H), 1 .96 (m, 1 H, 2-H), 1 .82 (m, 1 H, 2-H), 1 .48 (s, 9H, CH3 ¾u).13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.9 (COO), 170.7 (COO), 155.9 (OCON), 136.1 , 128.7, 128.5, 127.4, 127.1 , 126.9 (C, Ar), 79.9 (C ¾u), 65.1 (OCH2), 55.2 (Ca-Phe), 52.5 (OMe), 52.0 (C3), 41 .5 (C1 ), 35.1 (Οβ-Phe), 28.6 (C2), 28.3 (ClVBu). MS (ES)+: 471.02 [M+H]+.
W-[(3S-ierc-Butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil-)prop-1 -il]-L-Phe-OBn
Figure imgf000029_0001
Simpe. Rdto: 90% (a partir de 4b). Eluyente: AcOEtHexano (1 :1 ). HPLC: tR=15.47 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCIs): δ 7.33-7.07 (m, 15H, Ar), 5.75 (d, 1 H, J=7.7 Hz, NH, Boc), 5.17 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.10 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.04 (s, 2H, OCH2), 4.37 (m, 1 H, 3-H), 3.50 (t, 1 H, J = 6.7 Hz, a-Phe), 2.94 (dd, 1 H, J=13.5, 6.6 Hz , β-Phe), 2.86 (dd, 1 H, J=13.5, D7.3 Hz, β-Phe), 2.72 (m, 1 H, 1 -H), 2.47 (m, 1 H, 1 -H), 1 .92 (m, 1 H, 2-H), 1 .79 (m, 1 H, 2-H), 1 .44 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 174.2 (COO), 172.6 (COO), 155.6 (CON), 137.0, 135.62, 135.6, 129.3, 128.7, 128.6, 128.55, 128.5, 128.4, 126.8 (C, Ar), 79.8 (C, 'Bu), 67.0, 66.6 (OCH2), 62.7 (a-Phe), 52.5 (C3), 44.2 (C1 ), 39.8 (β-Phe), 31.7 (C2), 28.5 (CH3 'Bu). MS (ES)+: 547.92 [M+H]+.
/V-[(3S-íerc-Butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1 -il]-L-Ala-OMe (5c)
Figure imgf000029_0002
Simpe. Rdto: 43% (a partir de 4c). Eluyente: AcOEtHexano (2: 1 ). HPLC: tR=12.15 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.34 (s, 5H, Ph), 5.76 (d, 1 H, J=6.0 Hz, 3-NH), 5.18 (d, 1 H, J=16.0 Hz, OCH2), 5.11 (d, 1H, J=16.0 Hz, OCH2), 4.39 (m, 1H, 3-H), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.28 (q, 1H, J=7.0 Hz, a-Ala), 2.71 (m, 1H, 1-H), 2.49 (m, 1H, 1-H), 1.87 (m, 2H, 2-H), 1.43 (s, 9H, CH3 Bu,), 1.24 (d, 1H, J=7.0 Hz, CH3,Ala). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): 175.9 (COO), 172.6 (COO), 155.69 (CON), 135.6, 128.7. 128.4, 128.3, 127.1 (C, Ar), 79.9 (C, ¾u), 67.0 (OCH2), 56.7 (Ca-Ala), 52.5 (C3), 51.9 (OMe), 43.9 (C1), 31.9 (C2), 28.4 (CH3 ¾u), 19.1 (CH3 Ala). MS (ES)+: 395.35 [M+H]+.
W-[(3S-Benciloxicarbonilamino-3-ierc-butoxicarbonil)prop-1-il]-L-Phe-OMe
Figure imgf000030_0001
Simpe. Rdto: 78% (a partir de 4d). Eluyente: AcOEtHexano (1:1). HPLC: tR=10.73 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.36-7.14 (m, 10H, Ph, Z), 5.95 (d, 1H, J=7.5 Hz, NH, Z), 5.10 (s, 2H, OCH2), 4.27 (m, 1H, 3-H), 3.63 (s, 3H, OMe), 3.51 (t, 1H, J=6.5 Hz, a-Phe), 2.95 (m, 2H, β-Phe), 2.73 (m, 1H, 1-H), 2.53 (m, 1H, 1-H), 1.97 (m, 1H, 2-H), 1.77 (m, 2H, 2-H), 1.44 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 174.5 (COO), 171.3 (COO), 156.0 (OCON), 136.9, 136.4, 129.0, 128.3, 127.9, 126.6 (Ar), 81.7 (C 'Bu), 66.6 (OCH2), 62.6 (Ca-Phe), 53.2 (C3), 51.5 (OMe), 44.1 (C1 ), 39.5 (Cp-Phe), 31.7 (C2), 27.8 (CH3 'Bu). MS (ES)+: 471.37 [M+H]+.
W-[(3S-Benciloxicarbonilamino-3-íerc-butoxicarbonil)prop-1-il]-L-Ala-OMe
Figure imgf000030_0002
Simpe. Rdto: 78% (a partir de 4e). Eluyente: AcOEtHexano (2:1). HPLC: tR=9.14 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.33 (m, 5H, Z), 5.97 (d, 1H, J=7.6 Hz, NH, Z), 5.12 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.06 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.30 (m, 1 H, 3-H), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.32 (q, 1 H, J=7.0 Hz, a-Ala), 2.73 (m, 1 H, 1 -H), 2.53 (m, 1 H, 1 -H), 1 .97 (m, 1 H, 2-H), 1 .79 (m, 1 H, 2-H, NH), 1 .44 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .26 (d, 3H, J=7.0 Hz, CH3 Ala). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 175.9 (COO), 171.5 (COO), 156.2 (OCON), 136.6, 128.6, 128.15, 128.1 (Ar), 82.0 (C ¾u), 66.8 (OCH2), 56.4 (Ca- Ala), 53.4 (C3), 51.9 (OMe), 44.0 (C1 ), 32.1 (C2), 28.0 (CH3 ¾u), 19.0 (CH3 Ala). MS (ES)+: 395.42 [M+H]+.
A/-[4S-[(N-Benciloxicarbonil-N-metil)amino-4-metoxicarbonil]but-1 -il]-L- -O'Bu (5f)
Figure imgf000031_0001
Simpe. Rdto: 88% (a partir de 4f). Eluyente: AcOEtHexano (1 : 1 ). HPLC: tR=10.85 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =2: 1 . 1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.37- 7.19 (m, 10H, Ph, Z), 5.15 (s, 2H, OCH2), 4.78 (dd, 1 H, J=10.8, 5.1 Hz, 3-H), 3.70 (s, 3H, OMe), 3.41 (t, 1 H, J=7.0 Hz, a-Phe), 2.93 (m, 2H, β-Phe), 2.83 (s, 3H, NMe), 2.63 (m, 2H, 1 -H), 1 .94 (m, 2H, 3-H), 1 .73 (m, 2H, 2-H), 1 .33 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 173.8 (COO), 172.1 (COO), 157.1 (CON), 137.5, 129.5, 128.6, 128.3, 128.1 , 127.9, 127.8, 126.6 (C, Ar), 81.3 (C 'Bu), 67.6 (OCH2), 63.3 (Ca-Phe), 58.4 (C4), 52.2 (OMe), 47.4 (C1 ), 36.8 (Cp-Phe), 30.4 (NMe), 28.1 (CH3 *Bu), 26.6 (C2), 26.4 (C3). MS (ES)+: 499.44 [M+H]+. W-[(4S-íerc-Butoxicarbonilamino-4-benciloxicarbonil)but-1 -il]-H-L-Phe-
Figure imgf000031_0002
Sirupe. Rdto: 81 % (a partir de 4g). Eluyente: AcOEtHexano (1 :2). HPLC: tR=17.63 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.74-6.87 (m, 15H, Ar), 5.62 (d, 1H, J=8.4 Hz, NH), 5.22 (d, 1H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.16 (d, 1H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.09 (s, 2H, OCH2), 4.34 (m, 1H, 4-H), 3.55 (t, 1H, J=7.5 Hz, a-Phe), 3.00 (m, 2H, β-Phe), 2.64 (m, 1H, 1-H), 2.44 (m, 1H, 1-H), 1.77 (m, 2H, 3-H), 1.46 (m, 9H, (Bu). 13C RMN (CDCI3): δ 174.5, 172.7 (COO), 155.6 (CON), 137.1, 135.6, 129.4, 128.9, 128.7, 128.6, 128.55, 128.5, 128.4, 128.35, 126.8 (Ar), 79.9 (C ¾u), 67.0, 66.6 (OCH2), 62.9 (Ca-Phe), 53.5 (C4), 47.5 (C1), 39.8 (Cp-Phe), 30.4 (C2), 28.5 (CH3 ¾u), 25.8 (C3). MS (ES)+: 561 [M+H]+.
-[(4S-Benziloxicarbonilamino-4-metoxicarbonil)but-1-il]-L-Phe-OtBu (5h)
Figure imgf000032_0001
Simpe. Rdto: 89% (a partir de 4h). HPLC: tR= 5.29 min (gradiente de 15% a 95% de A, en 10 min). HPLC-MS: tR=6.77 (gradiente de 15% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.26-7.08 (m, 10H, Ar), 6.03 (d, 1H, J=7.8 Hz, 4-NH), 5.03 (s, 2H, OCH2), 4.05 (m, 1H, 4-H), 3.66 (s, 3H, OMe), 3.25 (dd, 1H, J=7.7, 6.5 Hz, a-Phe), 2.87 (dd, 1H, J=13.4, 6.4 Hz, β-Phe), 2.75 (dd, 1H, J=13.4, 7.7 Hz, β-Phe), 2.56 (m, 1H, 1-H), 2.35 (m, 1H, 1-H), 1.71 (m, 1H, 3-H), 1.48-1.38 (m, 3H, 3 y 2-H), 1.25 (s, 9H, CH3 ¾u). MS (ES)+: 485.32 [M+H]+.
-[(4S-Benziloxicarbonilamino-4-metoxicarbonil)but-1-il]-L-Ala-OtBu (5i)
Figure imgf000032_0002
Simpe. Rdto: 77% (a partir de 4i). HPLC-MS: tR= 5.20 min (gradiente de 15% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.26 (s, 5H, Ph), 6.15 (d, 1H, J=7.7 Hz, 4-NH), 5.01 (s, 2H, OCH2), 4.28 (q, 1H, J=7.7 Hz, 4-H), 3.65 (s, 3H, OMe), 3.06 (q, 1H, J=6.9 Hz, a-Ala), 2.58 (m, 1H, 1'-H), 2.33 (dd, 1H, 1'-H), 1.76 (m, 2H, 3'-H), 1.45 (m, 2H, 2'-H), 1.37 (s, 9H, CH3'Bu), 1.14 (d, 3H, J = 6.9 Hz, β-Ala). MS (ES)+: 409.33 [M+H]+. -[(2S-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Phe-OBn (5j)
Figure imgf000033_0001
Simpe. Rdto: 99% (a partir de 4j). Eluyente: AcOEtHexano (1:1). HPLC: tR=15.41 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCIs): δ 7.39-7.00 (m, 20H, Ar), 5.09 (s, 4H, OCH2), 5.08 (m, 1H, NH, Z), 3.87 (m, 1H, 2-H), 3.49 (dd, 1H, J=7.9, 6.0 Hz, a-Phe), 2.99 (dd, 1H, J=13.5, 6.0 Hz, 3-H), 2.86 (dd, 1H, J=13.5, 7.9 Hz, 3-H), 2.79 (m, 1H, β-Phe), 2.70 (m, 2H, β- Phe, 1-H), 2.40 (dd, 1H, J=12.3, 5.6 Hz, 1-H), 1.50 (sa, 1H, NH).13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 173.7 (COO), 156.2 (CON), 137.7, 137.0, 136.7, 135.5, 129.4, 128.7, 128.6, 128.55, 128.5, 128.1, 127.0, 126.5 (Ar), 66.9, 66.7 (OCH2), 63.1 (Ca-Phe), 52.2 (C2), 49.8 (C1), 39.2 (C3), 37.5 (Οβ-ΡΙιβ). MS (ES)+: 523.28 [M+H]+.
-[(2?-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Phe-OBn (5k)
Figure imgf000033_0002
Simpe. Rdto: 93% (a partir de 4k). Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=15.53 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.37-7.09 (m, 20H, Ar), 5.06 (s, 2H, OCH2), 5.04 (s, 2H, OCH2), 4.99 (sa, 1H, 2-NH), 3.87 (m, 1H, 2-H), 3.45 (t, 1H, J=6.9 Hz, a-Phe), 2.92 (dd, 1H, J=13.5, 6.6 Hz, 3-H), 2.85 (m, 2H, 3-H, β-Phe), 2.64 (m, 2H, 1-H, β-Phe), 2.40 (dd, 1H, J=12.3, 4.7 Hz, 1-H), 1.59 (sa, 1H, a-NH).13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 174.5 (COO), 156.0 (CON), 137.8, 137.3, 136.8, 135.6, 129.5, 129.4, 128.7, 128.6, 128.55, 128.5, 128.1, 126.8, 126.5 (Ar), 66.7, 66.65 (OCH2), 63.4 (Ca- Phe), 52.1 (C2), 49.8 (C1), 40.0 (C3), 39.0 (Οβ-ΡΙηβ). MS (ES)+: 523.05 [M+H]+. /V-[(2?-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Ala-OBn (51)
Figure imgf000034_0001
Simpe. Rdto: 90% (a partir de 41). Eluyente: AcOEtHexano (1 :3). HPLC: tR=10.25 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCIs): δ 7.36-7.16 (m, 15H, Ar), 5.15 (d, 1 H, J=12.3 Hz, OCH2), 5.1 1 (m, 3H, NH, Z, OCH2), 5.10 (d, 1 H, J=12.3 Hz, OCH2), 3.92 (m, 1 H, 2-H), 3.30 (q, 1 H, J=7.0 Hz, a-Ala), 2.89 (dd, 1 H, J=13.9, 5.6 Hz, 3-H), 2.70 (dd, 1 H, J=13.9, 7.8 Hz, 3-H), 2.82 (dd, 1 H, J=12.0, 6.1 Hz, 1 -H), 2.70 (dd, 1 H, J=12.0, 4.5 Hz, 1 -H), 1 .27 (d, 3H, J=6.9 Hz, CH3 Ala). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 175.6 (COO), 156.1 (CON), 137.8, 136.7, 135.8, 129.5, 128.9, 128.7, 128.65, 128.6, 128.5, 128.3, 128.2, 126.6 (Ar), 66.7, 66.6 (2C, OCH2), 57.0 (Ca-Ala), 52.2 (C2), 49.9 (C1 ), 39.2 (C3), 19.4 (CH3 Ala). MS (ES)+: 447.36 [M+H]+.
-[(2S-Dibencilamino-3-fenil)prop-1 -il]-H-L-Phe-OBn (5m)
Figure imgf000034_0002
Simpe. Rdto: 77% (a partir de 4m). Eluyente: AcOE Hex (1 :7). HPLC: tR=7.23 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.28-6.87 (m, 25H, Ar), 4.96 (s, 2H, OCH2), 3.60 (d, 2H, J=13.7 Hz, N-CH2), 3.43 (d, 2H, J=13.7 Hz, N-CH2), 3.35 (dd, 1 H, J=7.8, 5.9 Hz, a-Phe), 2.87 (m, 2H, 3-H, 2-H), 2.85 (dd, 1 H, J=13.5, 5.8 Hz, β-Phe), 2.73 (dd, 1 H, J=13.5, 7.8 Hz, β-Phe), 2.50 (m, 2H, 1 -H), 2.38 (dd, 1 H, J=14.9, 10.1 Hz Hz, 3-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 174.0 (COO), 140.2, 139.9, 137.6, 135.8, 129.5, 129.4, 128.8, 128.6, 128.55, 128.5, 128.4, 127.0, 126.8, 126.0 (Ar), 66.5 (OCH2), 63.4 (Ca-Phe), 60.0 (C2), 53.9 (NCH2), 47.7 (C1 ), 39.5 (Cp-Phe), 34.2 (C3). MS (ES)+: 569.27 [M+H]+.
yV-[(2S-Dibencilamino-3-fenil)propil]]-L-Phe-OMe (5n)
Figure imgf000035_0001
Simpe. Rdto: 85% (a partir de 4n). Eluyente: AcOEtHexano (1 :4). HPLC: tR=4.15 min (gradiente de 15% a 95% de A, en 5 min). 1H RMN (300 MHz, CDCIs): δ 7.36-6.99 (m, 20H, Ar), 3.71 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.56 (s, 3H, OCH3), 3.50 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.38 (dd, 1 H, J = 8.2, 5.4 Hz, a-Phe), 3.30 (m, 2H, 2-H, 3-H), 2.93 (dd, 1 H, J = 13.3, 5.4 Hz, 1 -H), 2.78 (dd, 1 H, J = 13.4, 8.2 Hz, 1 -H), 2.55 (m, 2H, β-Phe), 2.42 (m, 1 H, 3-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 174.8 (COO), 140.5, 140.2, 138.0, 129.8, 129.6, 129.1 , 128.9, 128.7, 127.3, 127.2, 126.3 (C, Ar), 63.8 (a-Phe), 60.5 (C2), 54.2 (NCH2), 52.0 (OCH3), 48.0 (C1 ), 39.8 (β-Phe), 34.2 (C3). MS (ES)+: 494.10 [M+H]+.
-[(2S-Dibencilamino-3-fenil)propil]-L-Phe-OíBu (5o)
Figure imgf000035_0002
Simpe. Rdto: 88% (a partir de 4o). Eluyente: AcOEtHexano (1 : 10). HPLC: tR=4.50 min (gradiente del 15% a 95% de A, en 5 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.37-7.17 (m, 18H, Ar), 7.02 (m, 2H, Ar), 3.75 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.57 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.30 (dd, 1 H, J = 7.9, 5.8 Hz, a-Phe), 3.00 (m, 2H, 2-H, 3-H), 2.90 (dd, 1 H, J = 13.5, 5.8 Hz, 1 -H), 2.80 (dd, 1 H, J = 13.5, 8.0 Hz, 1 -H), 2.61 (m, 2H, β-Phe), 2.51 (m, 1 H, 3-H), 1 .33 (s, 9H, ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 173.5 (COO), 140.4, 140.0, 138.0, 129.6, 129.4, 128.9, 128.5, 128.4, 126.9, 126.7, 125.9 (C, Ar), 81.0 (C, 'Bu), 64.0 (a-Phe), 60.3 (C2), 53.9 (NCH2), 47.5 (C1 ), 39.4 (β-Phe), 34.1 (C3), 28.1 (CH3, ¾u). MS (ES)+: 536.16 [M+H]+. Síntesis de /v-alquil-/v-cloroacetil derivados de aminoácidos
A una disolución del correspondiente derivado de aminoácido (1,39 mmol, 0,765 g) en THF seco (5 mL) se le adiciona óxido de propileno (20,85 mmol, 1,5 mL) y cloruro de cloroacetilo (1,67 mmol, 0,13 mL). Tras 1-2 h de agitación a temperatura ambiente, el disolvente orgánico se evapora a sequedad. El residuo resultante se purifica en columna de gel de sílice, utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
N-Cloroacetil-/V-[(3S-íerc-butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1- -L-Phe-OMe (6a)
Figure imgf000036_0001
Simpe. Rdto: 92% (a partir de 5a). Eluyente: AcOE Hexano (1:1). HPLC: tR=15.70 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =9:1.1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.35- 7.09 (m, 10H, Ph), 5.18 (m, 1H, 3-NH), 5.16 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.07 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.16 (m, 1H, 3-H), 3.92 (m, 1H, a-Phe), 3.91 (d, 1H, J=12.5 Hz, CH2CI), 3.86 (d, 1H, J=12.5 Hz, CH2CI), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.30 (m, 2H, β-Phe), 3.13 (m, 1H, 1-H), 2.70 (m, 1H, 1-H), 1.90 (m, 1H, 2-H), 1.52 (m, 1H, 2-H), 1.41 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): 171.6 (COO), 170.4 (COO), 166.7 (CON), 155.4 (OCON), 137.8, 135.1, 129.4, 128.9, 128.75, 128.7, 127.0 (C, Ar), 80.5 (C ¾u), 67.6 (OCH2), 63.3 (Ca -Phe), 52.6 (OMe), 51.8 (C3), 47.0 (C1), 41.0 (CH2CI), 34.4 (Cp-Phe), 31.6 (C2), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: MS (ES)+: 569.30 [M+Na]+.
N-Cloroacetil-/V-[(3S-íerc-butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1- il]-L-Phe-OBn (6b)
Figure imgf000037_0001
Simpe. Rdto: 99% (a partir de 5b). Eluyente: AcOEtHexano (1:2). HPLC: tR=17.80 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =5:2.1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.35- 7.08 (m, 15H, Ar), 5.30 (d, 1H, J=8.0 Hz, 3-NH), 5.15 (m, 2H, OCH2), 5.13 (d, 1H, J=12.1 Hz, OCH2), 5.04 (d, 1H, J=12.1 Hz, OCH2), 4.11 (m, 1H, a-Phe), 3.95 (m, 1H, 3-H), 3.88 (d, 1H, J=12.4 Hz, CH2CI), 3.83 (d, 1H, J=12.4 Hz, CH2CI), 3.31 (m, 2H, 1-H), 3.10 (dd, 1H, J=15.6, 5.3 Hz, β-Phe), 2.73 (m, 1H, β- Phe), 1.86 (m, 2H, 2-H), 1.40 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.5 (COO), 169.7 (COO), 166.6 (CON), 155.4 (OCON), 137.7, 135.6, 135.0, 129.4, 128.9, 128.7, 128.6, 128.4, 127.0 (C Ar), 80.5 (C 'Bu), 67.6 (OCH2), 67.4 (OCH2), 63.5 (Ca-Phe), 51.7 (C3), 47.0 (CH2CI), 41.0 (C1), 34.4 (Οβ -Phe), 31.6 (C2), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 624.42 [M+H]+.
N-Cloroacetil-/V-[(3S-íerc-butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1- il]-L-Ala-OMe (6c)
Figure imgf000037_0002
Simpe. Rdto: 80% (a partir de 5c). Eluyente: AcOEtHexano (1:2). HPLC: tR=13.15 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =5:3.1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.36 (s, 5H, Ph), 5.47 (d, 1H, J=7.6 Hz, 3-NH), 5.26 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.14 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.35 (m, 1H, 3-H), 4.16 (q, 1H, J = 7.0 Hz, a-Ala), 4.09 (s, 2H, CH2CI), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.55 (m, 1H, 1-H), 3.39 (t, 1H, J=8.0 Hz, 1-H), 2.00 (m, 2H, 2-H), 1.44 (d, 3H, J=7.0 Hz, CH3,Ala), 1.43 (s, 9H, CH3 Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.55, 171.5 (COO), 166.5 (CON), 155.6 (OCON), 135.0, 129.0. 128.9, 128.8 (C Ar), 80.8 (C ¾u), 67.8 (OCH2), 55.5 (Ca-Ala), 53.0 (C3), 52.5 (OMe), 44.7 (C1), 41.1 (CH2CI), 30.7 (C2), 28.4 (CH3 ¾u), 14.5 (CH3 Ala). MS (ES)+: 493.35 [M+Na]+.
N-Cloroacetil-/V-[(3S-benciloxicarbonilamino-3-ierc-butoxicarbonil)prop-1- -L-Phe-OMe (6d)
Figure imgf000038_0001
Simpe. Rdto: 90% (a partir de 5d). Eluyente: AcOEt:Hexano (1:1). HPLC: tR=15.66 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =3:1.1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.37- 7.13 (m, 10H, Ph), 5.46 (d, 1H, J=7.2 Hz, 3-NH), 5.13 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.04 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.09 (m, 1H, 3-H), 3.99 (m, 1H, a-Phe), 3.99 (d, 1H, J=12.0 Hz, CH2CI), 3.91 (d, 1H, J=12.0 Hz, CH2CI), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.30 (m, 2H, -Phe), 3.20 (m, 1H, 1-H), 2.74 (m, 1H, 1-H), 1.88 (m, 1H, 2- H), 1.59 (m, 1H, 2-H), 1.42 (s, 9H, CH3 ¾u).13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.3, 170.3 (COO), 167.7 (CON), 156.0 (OCON), 137.6, 129.3, 128.7, 128.6, 128.4, 128.2, 126.9 (Ar), 83.0 (C 'Bu), 67.2 (OCH2), 63.2 (Ca-Phe), 52.9 (OMe), 52.6 (C3), 47.0 (CH2CI), 40.9 (C1), 34.3 (Cp-Phe), 31.5 (C2), 28.3 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 569.51 [M+Na]+.
N-Cloroacetil-/V-[(3S-benciloxicarbonilamino-3-íerc-butoxicarbonil)prop-1- il -L-Ala-OMe (6e)
Figure imgf000038_0002
Simpe. Rdto: 92% (a partir de 5e). Eluyente: AcOE Hexano (1:1). HPLC: tR=13.54 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =2:1.1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.35 (m, 5H, Ph), 5.58 (d, 1H, J=7.0 Hz, 3-NH), 5.14 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.08 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.24 (m, 2H, 3-H, a-Ala), 4.12 (d, 1H, J=12.5 Hz, CH2CI), 4.02 (d, 1 H, J=12.5 Hz, CH2CI), 3.70 (s, 3H, OMe), 3.42 (m, 2H, 1 -H), 2.22 (m, 1 H, 2-H), 1 .99 (m, 1 H, 2-H), 1 .48 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .47 (d, 3H, J=6.4 Hz, CH3 Ala). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171 .4 (COO), 170.4 (COO), 166.6 (CON), 156.0 (OCON), 136.1 , 133.2, 130.0, 128.6, 128.5, 128.3, 128.2, 128.0 (Ar), 83.1 (C 'Bu), 67.1 (OCH2), 55.4 (CD-Ala), 52.8 (C3), 52.4 (OMe), 44.6 (CH2CI), 41 .0 (C1 ), 32.5 (C2), 27.9 (CH3 ¾u), 14.4 (CH3 Ala). MS (ES)+: 493.42 [M+Na]+.
A/-[4S-(N-Benciloxicarbonil-N-metil)amino-4-metoxicarbonil]but-1 -il]-N- cloroacetil-L-Phe-O'Bu (6f)
Figure imgf000039_0001
Simpe. Rdto: 94% (a partir de 5f). Eluyente: AcOEt:Hexano (1 : 1 ). HPLC: tR=16.21 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =5:2. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.38- 7.12 (m, 10H, Ph), 5.16 (s, 2H, OCH2), 4.68 (dd, 1 H, J=10.9, 5.2 Hz, a-Phe), 4.39 (m, 1 H, 4-H), 3.99 (d, 1 H, J=12.2 Hz, CH2CI), 3.94 (d, 1 H, J=12.5 Hz, CH2CI), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.28 (m, 2H, 1 -H), 2.89 (m, 1 H, β-Phe), 2.77 (s, 3H, NCH3), 2.52 (m, 1 H, β-Phe), 1 .75-1 .60 (m, 4H, 2-H, 3-H), 1 .44 (s, 9H, CH3 ¾u).13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171 .5 (COO), 168.9 (COO), 166.2 (CON), 157.1 (OCON), 138.4, 136.5, 129.4, 128.77, 128.7, 128.0, 126.8 (Ar), 82.0 (C ¾u), 67.8 (OCH2), 64.2 (Ca-Phe), 57.6 (C4), 52.4 (OMe), 50.1 (C1 ), 41 .1 (CH2CI), 34.4 (Cp-Phe), 30.4 (NCH3), 28.0 (CH3 ¾u), 25.6 (C2), 24.9 (C3). MS (ES)+: 576.42 [M+H]+.
/V-[(4S-íerc-butoxicarbonilamino-4-benciloxicarbonil)but-1 -il]-N- cloroacetil-L-Phe-OBn (6g)
Figure imgf000039_0002
Simpe. Rdto: 64% (a partir de 5g). Eluyente: AcOE Hexano (1 :3). Proporción de rotámeros M/m=6: 1 . HPLC: tR=17.68 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.38-7.12 (m, 15H, Ar), 5.18-5.04 (m, 4H, OCH2), 4.86 (d, 1 H, J=8.4 Hz, 4-NH), 4.18 (m, 1 H, 4-H), 3.94 (d, 1 H, J=12.5 Hz, CH2CI), 3.87 (d, 1 H, J=12.5 Hz, CH2CI), 3.82 (dd, 1 H, J = 8.3, 6.9 Hz, a-Phe), 3.36 (m, 2H, β-Phe), 3.12 (dt, 1 H, J=15.4, 7.9 Hz, 1 -H), 2.51 (dt, 1 H, J=15.3, 8.1 Hz, 1 -H), 1 .61 (m, 1 H, 3H), 1 .43 (m, 10H, 'Bu, 3-H), 1 .24 (m, 2H, 2-H). 13C (CDCI3): 172.0, 169.7 (COO), 166.5 (CON), 155.4 (OCON), 137.9, 135.6, 135.5, 129.5, 129.6, 128.9, 128.8, 128.75, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 127.0 (Ar), 80.3 (C 'Bu), 67.4, 67.3 (OCH2), 63.5 (Ca-Phe), 52.7 (C4), 50.1 (CH2CI), 41 .2 (C1 ), 34.4 (Cp-Phe), 29.7 (C3), 28.4 (CH3 ¾u), 24.3 (C2). MS (ES)+: 637.27 [M+H]+.
N-[(4S-Benziloxicarbonilamino-4-metoxicarbonil)but-1'-il]-N-cloroacetil-L- -O'Bu (6h)
Figure imgf000040_0001
Sirupe. Rdto: 94% (a partir de 5h). HPLC: tR=7.68 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 10 min). Proporción de rotámeros M:m = 2: 1 . 1H RMN (300 MHz, CDCIs): Rotámero mayoritario δ 7.36-7.13 (m, 10H, Ar), 5.27 (d, 1 H, J=8.3 Hz, 4-NH), 5.10 (s, 2H, OCH2), 4.27 (m, 1 H, 4-H), 3.98 (m, 2H, CH2CI), 3.80 (m, 1 H, a-Phe), 3.71 (s, 3H, OMe), 3.30 (m, 2H, β-Phe), 3.17 (m, 2H, 1 '-Η), 3.61 (m, 1 H, 1 '-H), 1.85 (m, 1 H, 3'-H), 1 .68 (m, 3H, 3',-H 2'-H), 1 .45 (s, 9H, CH3 ¾u). MS (ES)+: 561.23 [M+H]+.
N-[(4S-Benziloxicarbonilamino-4-metoxicarbonil)but-1 -il]-N-Cloroacetil-L- Ala-O'Bu (6i)
Figure imgf000040_0002
Simpe. Rdto: 70% (a partir de 5i). HPLC: tR=6.18 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 10 min). Proporción de rotámeros M:m = 2:1 1H RMN (300 MHz, CDCIs): rotámero mayoritario δ 7.35 (s, 5H, Ph), 5.44 (sa, 1H, 4-NH), 5.11 (s, 2H, OCH2), 4.40 (m, 1H, 4-H), 4.12 (s, 2H, CH2CI), 4.04 (m, 1H, a-Ala), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.46 (m, 1H, 1'-H), 3.28 (m, 1H, 1'-H), 1.86 (m, 1H, 3'-H), 1.72 (m, 3H, 3'-H, 2'-H), 1.43 (s, 9H, CH3 ¾u), 1.28 (d, 3H, J=6.3 Hz, β-Ala). MS (ES)+: 485.16 [M+H]+.
N-Cloroacetil-W-[(2S-benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Phe-OBn
Figure imgf000041_0001
Simpe. Rdto: 86% (a partir de 5j). Eluyente: AcOE Hexano (1:2). HPLC: tR= 22.50 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 30 min). Proporción de rotámeros M ,m =16:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 7.33-6.97 (m, 20H, Ar), 5.10 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 5.08 (sa, 1H, 2-NH), 5.02 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.87 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.78 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.50 (d, 1H, J=13.2 Hz, CH2CI), 4.33 (d, 1H, J=13.2 Hz, CH2CI), 4.30 (dd, 1H, J = 9.4, 5.3 Hz, a-Phe), 3.72 (m, 1H, 2-H), 3.27 (dd, 1H, J=13.8, 5.2 Hz, β-Phe), 3.19 (dd, 1H, J=15.5, 6.4 Hz, 1-H), 3.10 (dd, 1H, J=13.8, 9.4 Hz, β- Phe), 2.84 (dd, 1H, J=13.5, 4.7 Hz, 3-H), 2.46 (m, 1H, 1-H), 2.40 (dd, 1H, J=13.4, 6.8 Hz, 3-H). 13C RMN (75 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 169.4 (COO), 165.5 (CON), 155.7 (OCON), 138.2, 137.6, 136.9, 136.0, 129.3, 128.9, 128.5, 128.4, 128.3, 128.1, 127.8, 127.7, 127.6, 127.45, 126.4, 126.0 (Ar), 66.1, 65.2 (OCH2), 63.3 (Ca-Phe), 53.5 (C1), 52.8 (C2), 41.3 (CH2CI), 37.4 (C3), 34.0 (Cp-Phe). MS (ES)+: 599.24 [M+H]+.
N-Cloroacetil-W-[(2?-benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Phe-OBn (6k)
Figure imgf000042_0001
Simpe. Rdto: 83% (a partir de 5k). Eluyente: AcOEtHexano (1:2). HPLC: tR=22.71 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =5:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 7.32-7.06 (m, 20H, Ar), 5.11 (sa, 1H, 2-NH), 5.11 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 5.07 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.88 (s, 2H, OCH2), 4.37 (m, 1H, a-Phe), 4.28 (s, 2H, CH2CI), 3.85 (m, 1H, 2-H), 3.39 (m, 1H, D-Phe), 3.30 (m, 1H, 1-H), 3.07 (dd, 1H, J=13.8, 7.7 Hz, β-Phe), 2.80 (dd, 1H, J=13.7, 4.5 Hz, 3-H), 2.75 (m, 1H, 1-H), 2.54 (m, 1H, 3-H). 13C RMN (75 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 169.5 (COO), 166.1 (CON), 155.6 (OCON), 138.4, 138.1, 137.1, 135.9, 129.4, 129.0, 128.3, 128.2, 128.0, 127.8, 127.6, 127.35, 126.3, 126.0 (Ar), 66.1, 64.9 (OCH2), 62.3 (Ca-Phe), 53.5 (C1), 51.7 (C2), 41.5 (CH2CI), 37.3 (C3), 34.5 (Cp-Phe). MS (ES)+: 599.15 [M+H]+.
N-Cloroacetil-/V-[(2?-benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Ala-OBn
Figure imgf000042_0002
Simpe. Rdto: 86% (a partir de 51). Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=15.50 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =6:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 7.35- 7.12 (m, 15H, Ar), 5.14 (sa, 1H, 2-NH), 5.09 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 5.06 (d, 1H, J=12.2 Hz, OCH2), 4.92 (d, 1H, J=12.9 Hz, OCH2), 4.87 (d, 1H, J=12.9 Hz, OCH2), 4.45 (d, 1H, J=13.4 Hz, CH2CI), 4.28 (d, 1H, J=13.4 Hz, CH2CI), 4.20 (q, 1H, J=6.8 Hz, a-Ala), 3.95 (m, 1H, 2-H), 3.48 (dd, 1H, J=15.1, 9.2 Hz, 1-H), 3.40 (dd, 1H, J=15.1, 5.0 Hz, 1-H), 2.82 (dd, 1H, J=13.5, 4.2 Hz, 3-H), 2.58 (dd, 1H, J=13.5, 10.3 Hz, 3-H), 1.38 (d, 3H, J=6.8 Hz, CH3).13C RMN (75 MHz, DMSO-de, rotámero mayoritario): δ 171 .0 (COO), 166.4 (CON), 156.3 (OCON), 138.6, 137.5, 136.3, 129.5, 128.75, 128.7, 128.5, 128.3, 128.0, 127.9, 127.4, 126.6 (Ar), 66.3, 65.3 (OCH2), 57.0 (Ca-Ala), 53.5 (C1 ), 51.8 (C2), 42.3 (CH2CI), 38.1 (C3), 14.5 (CH3). MS (ES)+: 523.28 [M+H]+.
-Cloroacetil-/V-[(2S-dibencilamino-3-fenil-)prop-1 -il]-L-Phe-OBn (6m)
Figure imgf000043_0001
Simpe. Rdto: 92% (a partir de 5m). Eluyente: AcOE Hex (1 :9). Proporción de rotámeros, M/m=5: 1 HPLC: tR=7.79 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.57-6.52 (m, 25H, Ar), 5.10 (d, 1 H, J=12.2 Hz, OCH2), 4.95 (d, 1 H, J=12.2 Hz, OCH2), 4.17 (d, 1 H, J=12.2 Hz, CH2CI), 3.86 (d, 1 H, J=12.2 Hz, CH-CI), 3.56 (m, 4H, NCH2), 3.41 (dd, 1 H, J=15.8, 4.8 Hz, 1 '-H), 3.1 1 (m, 4-H, a-Phe, β-Phe, 2-H), 2.74 (dd, 1 H, J=13.2, 6.9Hz, 3'-H), 2.54 (dd, 1 H, J=13.3, 8.2 Hz, 3'-H), 2.31 (dd, 1 H, J=15.7, 5.8 Hz, 1 '-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 169.4 (COO), 167.1 (CON), 138.9, 137.8, 134.4, 133.6, 129.7, 129.3, 128.9, 128.8, 128.6, 128.4, 127.4, 126.6 (Ar), 67.3 (OCH2), 64.3 (a-Phe), 61.7 (C2'), 54.0 (NCH2), 52.6 (CH2CI), 50.0 (C1 '), 41 .6 (C3'), 34.8 (β-Phe). MS (ES)+: 646.23 [M+H]+.
-Cloroacetil-W-[(2S-dibencilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Phe-OMe (6n)
Figure imgf000043_0002
Simpe. Rdto: 64% (a partir de 5n). Eluyente: AcOE Hexano (1 :6). HPLC: tR=8.52 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): mezcla de rotámeros 7: 1 δ rotámero mayoritario 7.29-6.89 (m, 20H, Ar), 4.33 (d, 1 H, J = 1 1 .7 Hz, CH2CI), 3.87 (d, 1 H, J = 12.0 Hz, CH2CI), 3.64 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.51 (d, 2H, J = 13.7 Hz, NCH2), 3.47 (m, 1 H, 1 -H), 3.45 (s, 3H, OCH3), 3.14 (m, 1 H, 2-H), 3.01 (m, 2H, β-Phe), 2.89 (dd, 1 H, J = 13.2, 5.9 Hz, 3-H), 2.76 (dd, 1 H, J = 9.8, 5.1 Hz, a-Phe), 2.46 (dd, 1 H, J = 13.2, 9.0 Hz, 3-H), 2.25 (dd, 1 H, J = 15.8, 4.9 Hz, 1 -H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 169.8 (COO), 166.8 (CON), 138.8, 138.6, 137.6, 129.7, 129.5, 128.7, 128.5, 128.4, 127.3, 126.6 (C, Ar), 63.6 (a-Phe), 61.7 (C2), 54.0 (NCH2), 52.7 (C1 ), 52.0 (OMe), 41.4 (CH2CI), 34.1 (β-Phe), 33.9 (C3). MS (ES)+: 570.16 [M+H]+.
-Cloroacetil-yV-[(2S-dibencilamino-3-fenil)prop-1-il]-L-Phe-OiBu (60)
Figure imgf000044_0001
Simpe. Rdto: 78% (a partir de 5o). Eluyente: AcOEtHexano (1 :6). HPLC: tR=8.76 min (gradiente del 30% a 95% de A, en 10 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): mezcla de rotámeros 4: 1 δ rotámero mayoritario 7.36-7.21 (m, 12H, Ar), 7.10-6.95 (m, 8H, Ar), 4.03 (d, 1 H, J = 12.0 Hz, CH2CI), 3.78 (d, 1 H, J = 12.0 Hz, CH2CI), 3.55 (d, 2H, J = 14, 1 Hz, NCH2), 3.50 (d, 2H, J = 14, 1 Hz, NCH2),3.43 (dd, 1 H, J = 15.4, 4.3 Hz, 1 -H), 3.34 (m, 1 H, a-Phe), 3.06 (m, 3H, 2-
H, β-Phe), 2.76 (d, 2H, J=7.5 Hz, 3-H), 2.54 (dd, 1 H, J = 15.5, 7.2 Hz, 1 -H),
I .39 (s, 9H, 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 168.4 (COO), 167.1 (CON), 139.2, 139.0, 138.3, 129.9, 129.5, 129.3, 128.8, 128.5, 128.2, 127.4, 126.7, 126.6 (C, Ar), 81 .8 (C, 'Bu), 65.0 (Ca-Phe), 60.6 (C2), 53.9 (NCH2), 52.3 (C1 ), 41 .4 (CH2CI), 35.2 (C3), 34.7 (Cp-Phe), 28.1 (CH3, ¾u). MS (ES)+: 612.14 [M+H]+.
Síntesis de /v-alquil-/v-cloropropil derivados de aminoácidos
A una disolución de ácido (R)- o (S)-2-cloropropiónico (1 ,74 mmol, 0, 15 mL) en THF seco (5 mL) se le añade tricloroacetonitrilo (2,32 mmol, 0,23 mL ). A continuación se enfria a 0°C con un baño de hielo y se añade lentamente trifenilfosfina (1 ,96 mmol, 0,513 g) y se deja en agitación a temperatura ambiente durante 1 h. Transcurrido este tiempo, se adiciona la reacción a una disolución del correspondiente N-alquil derivado de aminoácidos (0,635 g, 1 , 16 mmol) y óxido de propileno (17,4 mmol, 1 ,22 ml_) en THF seco (2 ml_) a 0°C. Se deja reaccionar a temperatura ambiente durante 12h. Pasado este tiempo, se evapora el disolvente y el residuo resultante se disuelve en AcOEt y se lava sucesivamente con ácido cítrico (10%), NaHC03 (10%) y disolución saturada de NaCI. Finalmente, el residuo orgánico se seca sobre Na2S04 anhidro, se filtra y se evapora a sequedad. El crudo de reacción se purifica en columna de gel de sílice utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
/V-[(3S-íerc-butoxicarbonilamino-3-benciloxicarbonil)prop-1 -il]-N-(2'S- cloropropanoil)-L-Phe-OBn (7a)
Figure imgf000045_0001
Simpe. Rdto: 68% (a partir de 5b). Eluyente: AcOE Hexano (1 :3). HPLC: tR=10.64 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =5:2. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.35- 7.04 (m, 15H, Ar), 5.14 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.13 (s, 2H, OCH2), 5.03 (d, 1 H, J=12.1 Hz, OCH2), 4.93 (d, 1 H, J=6.5 Hz, 3-NH), 4.31 (q, 2H, J=6.5 Hz, V- H), 4.06 (m, 1 H, 3-H), 3.95 (m, 1 H, a-Phe), 3.33 (dd, 1 H, J=14.1 , 5.3, β-Phe), 3.26 (m, 1 H, β-Phe), 3.00 (m, 2H, 1 -H), 1 .73 (m, 2H, 2-H), 1 .59 (d, 3H, J=6.4 Hz, 2'-H), 1 .41 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.8 (COO), 170.0 (COO), 169.4 (CON), 155.4 (OCON), 138.1 , 135.8, 135.4, 129.6, 129.1 , 129.0, 128.9, 128.7, 127.4, 127.2 (Ar), 80.8 (C 'Bu), 67.8, 67.7 (2C, OCH2), 63.8 (Ca- Phe), 51 .7 (C3), 49.7 (CHCI), 46.6 (C1 ), 34.8 (Cp-Phe), 31.8 (C2), 28.6 (CH3 'Bu), 21 .6 (C2'). MS (ES)+: 637.45 [M+H]+.
/V-[(2S-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1 -il]-N-(2'S-cloropropanoil)-L- Phe-OBn (7b)
Figure imgf000046_0001
Simpe. Rdto: 51% (a partir de 5j). Eluyente: AcOEtHexano (1:4). HPLC: tR=16.54 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =10:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 7.33-6.96 (m, 20H, Ar), 5.10 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 5.04 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 5.01 (q, 1H, J=6.3 Hz, 1'-H), 4.87 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.81 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.39 (dd, 1H, J=9.0, 5.8 Hz, a-Phe), 3.74 (m, 1H, 2-H), 3.33 (m, 1H, β-Phe), 3.13 (m, 2H, β-Phe, 1-H), 2.90 (dd, 1H, J=13.5, 4.5 Hz, 3- H), 2.64 (m, 1H, 1-H), 2.50 (m, 1H, 3-H), 1.51 (d, 3H, J=6.4 Hz, 2'-H).13C RMN (75 MHz, DMSO-de, rotámero mayoritario): δ 169.4 (COO, CON), 155.7 (OCON), 138.3, 137.1, 136.8, 135.7, 129.2, 128.9, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 128.0, 127.9, 127.7, 127.45, 126.4, 126.1 (Ar), 66.2, 65.2 (OCH2), 63.6 (Ca- Phe), 53.6 (C1), 52.9 (C2), 50.3 (CHCI), 36.8 (C3), 34.2 (Cp-Phe), 21.7 (C2'). MS (ES)+: 613.29 [M+H]+.
/V-[(2S-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1 -il]-N-(2'?-cloropropanoil)-L- -OBn (7c)
Figure imgf000046_0002
Simpe. Rdto: 50% (a partir de 5j). Eluyente: AcOEtHexano (1:4). HPLC: tR=17.39 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =5:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 7.29-6.94 (m, 20H, Ar), 5.18 (d, 1H, J=12.5 Hz, OCH2), 5.07 (q, 1H, J=6.3 Hz, 1'-H), 4.91 (d, 1H, J=12.5 Hz, OCH2), 4.84 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.74 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.21 (dd, 1H, J=10.1, 4.7 Hz, a-Phe), 3.66 (m, 1H, 2-H), 3.23 (m, 2H, β-Phe, 1-H), 3.10 (dd, 1H, J=13.6, 10.1 Hz, β-Phe), 2.75 (dd, 1H, J=13.5, 5.1 Hz, 3-H), 2.48 (m, 1H, 3-H), 2.22 (dd, 1H, J=15.5, 5.9 Hz1-H), 1.42 (d, 3H, J=6.3 Hz, 2'-H).13C RMN (75 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 169.2 (COO), 168.7 (CON), 155.7 (OCON), 138.1, 137.4, 136.9, 136.1, 129.5, 128.9, 128.3, 128.2, 128.1, 127.9, 127.7, 127.4, 126.4, 126.1 (Ar), 65.9, 65.2 (OCH2), 63.2 (Ca-Phe), 53.2 (C1), 53.0 (C2), 40.0 (C1'), 37.6 (C3), 33.9 (Οβ- Phe), 20.7 (C2'). MS (ES)+: 613.36 [M+H]+.
W-[(2?-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-N-(2'S-cloropropanoil)-L- -OBn (7d)
Figure imgf000047_0001
Simpe. Rdto: 50% (a partir de 5k). Eluyente: AcOEtHexano (1:4). HPLC: tR=16.65 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =10:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 7.31-7.09 (m, 20H, Ar), 5.07 (s, 2H, OCH2), 4.97 (q, 1H, J=6.4 Hz, 1'-H), 4.90 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.86 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.40 (dd, 1H, J=7.7, 5.9 Hz, a-Phe), 3.93 (m, 1H, 2-H), 3.44 (m, 2H, β-Phe, 1-H), 3.13 (dd, 1H, J=15.2, 8.4 Hz, 1-H), 3.00 (dd, 1H, J=14.0, 5.9 Hz, β-Phe), 2.84 (dd, 1H, J=13.6, 4.2 Hz, 3-H), 2.56 (m, 1H, 3-H), 1.43 (d, 3H, J=6.3 Hz, 2'-H).13C RMN (75 MHz, DMSO-de, rotámero mayoritario): δ 169.7 (COO), 168.7 (CON), 155.7 (OCON), 138.6, 138.4, 137.1, 135.8, 129.4, 128.9, 128.3, 128.2, 128.1, 127.9, 127.8, 127.7, 127.35, 127.3, 126.2, 126.1 (Ar), 66.1, 65.0 (OCH2), 62.2 (Ca- Phe), 53.5 (C1), 51.8 (C2), 49.7 (C1'), 37.5 (C3), 35.0 (Cp-Phe), 21.3 (C2'). MS (ES)+: 613.43 [M+H]+.
W-[(2?-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-N-(2'?-cloropropanoil)-L- -OBn (7e)
Figure imgf000047_0002
Simpe. Rdto: 50% (a partir de 5k). Eluyente: AcOE Hexano (1:3). HPLC: tR=17.23 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 20 min). Proporción de rotámeros M,m =10:1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, major rotamer): δ 7.32- 7.01 (m, 20H, Ar), 5.21 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.97 (d, 1H, J=12.6 Hz, OCH2), 4.88 (s, 2H, OCH2), 4.54 (q, 1H, J=6.4 Hz, 1'-H), 4.35 (dd, 1H, J=9.5, 5.1 Hz, a-Phe), 3.75 (m, 1H, 2-H), 3.34 (m, 3H, β-Phe, 1-H), 3.14 (m, 1H, β- Phe), 2.66 (m, 1H, 3-H), 2.44 (dd, 1H, J=15.9, 6.4 Hz, 3-H), 1.36 (d, 3H, J=6.3 Hz, 2'-H).13C RMN (75 MHz, DMSO-d6, rotámero mayoritario): δ 169.37 (COO), 168.34 (CON), 155.5 (OCON), 138.3, 137.6, 137.1, 135.9, 129.6, 129.0, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.7, 127.4, 126.5, 126.1 (Ar), 66.1, 65.1 (OCH2), 62.6 (Ca-Phe), 52.9 (C1), 52.2 (C2), 49.5 (C1'), 37.1 (C3), 34.05 (Οβ-Phe), 20.7 (C2'). MS (ES)+: 613.29 [M+H]+.
yV- 2S-dibencilamino-3-fenil-)prop-1-il]-N-(2'S-cloropropanoil)-L-Phe-OBn
Figure imgf000048_0001
Simpe. Rdto: 25% (a partir de 5m). Eluyente: AcOE Hex (1:6). Proporción de rotámeros M/m=2:1. HPLC: tR=7.93 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). MS (ES)+: 659.19 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, Rotámero mayoritario): δ 7.28-6.79 (m, 25H, Ar), 5.11 (d, 2H, J=12.9 Hz, OCH2), 4.32 (q, 1H, J=6.6 Hz, 1'-H), 3.62 (dd, 1H, J=9.5, 5.7 Hz, a-Phe), 3.55 (d, 2H, J=13.9 Hz, NCH2), 3.47 (d, 2H, J=13.9 Hz, NCH2), 3.07 (m, 1H, 2-H), 3.31-3.16 (m, 4H, 3-H, 1-H, β-Phe), 2.90 (dd, 1H, J=15.4, 8.4 Hz, 1-H), 2.65 (d, 2H, J=13.2, 7.5 Hz, 3-H), 1.54 (d, 3H, J=6.5 Hz, 2'-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.2 (COO), 169.6 (CON), 139.1, 138.9, 138.0, 135.7, 129.8, 129.4, 128.8, 128.75, 128.7, 128.5, 128.3, 127.3, 126.8, 126.5 (Ar), 67.4 (OCH2), 64.0 (a-Phe), 59.1 (C2), 53.7 (NCH2), 52.0 (C1'), 50.3 (C1), 34.8 (C3) 34.5 (β-Phe), 21.4 (C2'). MS (ES)+: 659.35 [M+H]+. yV-[(2S-Dibencilamino-3-fenil-)prop-1-il]-N-(2' ?-cloropropanoil)-L-Phe-OBn
Figure imgf000049_0001
Simpe. Rdto: 52% (a partir de 5m). Eluyente: AcOE Hex (1:6). Proporción de rotámeros M/m=7:1. HPLC: tR=7.25 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3, Rotámero mayoritario): δ 7.26-6.76 (m, 25H, Ar), 4.93 (s, 2H, OCH2), 4.58 (q, 1H, J=6.5 Hz, 1'-H), 3.53 (dd, 1H, J=15.9, 4.7 Hz, 1-H), 3.45 (m, 4H, NCH2), 3.09 (dd,1H, J=13.8, 10.1 Hz, β-Phe), 3.03 (dd, 1H, J=13.8, 4.6 Hz, β-Phe), 3.00 (m, 1H, 2-H), 2.89 (dd, 1H, J=10.1, 4.7 Hz, a- H), 2.68 (dd, 1H, J=13.2, 6.6 Hz, 3-H), 2.50 (dd, 1H, J=13.1, 8.4, 3-H), 2.04 (dd, 1H, J=15.9, 5.7 Hz, 1-H), 1.34 (d, 3H, J=6.4 Hz, 2'-H). 13C RMN (75 MHz, CDCIs): δ 169.3 (COO), 169.2 (CON), 138.9, 137.8, 135.9, 129.9, 129.8, 128.75, 128.7, 128.5, 128.3, 127.4, 126.7, 126.6 (Ar), 67.1 (OCH2), 64.8 (a- Phe), 62.4 (C2), 53.9 (NCH2), 52.5 (C1'), 49.6 (C1), 35.5 (C3), 34.4 (β-Phe), 20.7 (C2'). MS (ES)+: 659.21 [M+H]+.
/V-[(2?-Benciloxicarbonilamino-3-fenil)prop-1-il]-(2'S-cloropropanoil)-L- -OBn (7h)
Figure imgf000049_0002
Simpe. Rdto: 55% (a partir de 51). Eluyente: AcOE Hexano (1:4). HPLC: tR=15.50 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.35- 7.10 (m, 15H, Ar), 5.10 (d, 1H, J=12.8 Hz, OCH2), 5.03 (d, 1H, J=12.8 Hz, OCH2), 5.06 (sa, 1H, 2-NH), 5.01 (q, 1H, J = 6.3 Hz, 1'-H), 4.90 (d, 1H, J=12.9 Hz, OCH2), 4.85 (d, 1H, J=12.9 Hz, OCH2), 4.20 (q, 1H, J=6.7 Hz, a- Ala), 3.97 (m, 1H, 2-H), 3.64 (dd, 1H, J=14.9, 10.5 Hz, 1-H), 3.40 (m, 1H, 1-H), 3.36 (s, 3H, OMe), 2.83 (dd, 1H, J=13.6, 4.0 Hz, 3-H), 2.58 (dd, 1H, J=13.6, 10.5 Hz, 3-H), 1.40 (d, 3H, J=6.9 Hz, 2'-H), 1.37 (d, 3H, J=6.3 Hz, CH3). 1áC RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.6 (COO), 168.1 (CON), 155.8 (OCON), 138.3, 137.2, 136.0, 129.1, 128.2, 128.1, 127.8, 127.6, 127.2, 126.1 (Ar), 65.8, 64.8 (OCH2), 56.8 (Ca-Ala), 53.8 (C1), 51.2 (C2), 49.5 (C1'), 37.9 (C3), 20.8 (CH3) 14.5 (C2'). MS (ES)+: 537.05 [M+H]+.
W-[(2S-Dibencilamino-3-fenil)prop-1-il]-yV-(2'S-cloropropanoil)-L-Phe-OMe
Figure imgf000050_0001
Simpe. Rdto: 49% (a partir de 5n). Eluyente: AcOEtHexano (1:8). HPLC: tR=7.92 min (gradiente del 50% al 95% de A en 10 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): mezcla de rotámeros 5:1, δ rotámero mayoritario 7.31-6.84 (m, 20H, Ar), 4.43 (q, 1H, J=6.6 Hz, 1'-H), 3.64 (s, 3H, OCH3), 3.59 (m, 5H, a-Phe, NCH2), 3.34 (dd, 1H, J=15,3, 3,9 Hz, 1-H), 3.23 (dd, 1H, J=14.1, 5.8 Hz, β-Phe), 3.15 (dd, 1H, , J=14.1, 9.4 Hz, β-Phe), 3.90 (m, 1H, 2-H), 2.99 (dd, 1H, , J=15.3, 8.1 Hz, 1-H), 2.77 (dd, 1H, , J=13.4, 8.6 Hz, 3-H), 2.65 (dd, 1H, J=13.4, 6.4 Hz, 3-H), 1.56 (d, 3H, J=6.5 Hz, 2'-H).13C RMN (75 MHz, CDCI3): □ 170.3 (COO), 170.1 (CON), 139.07, 139.03, 137.9, 129.8, 129.3, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 127.3, 126.7, 126.6 (C, Ar), 63.6 (a-Phe), 59.0 (C2), 53.6 (NCH2), 52.4 (OCH3), 51.8 (C1), 50.4 (C1'), 34.9 (H3), 34.8 (β-Phe), 21.4 (C2'). MS(ES)+: 584.39 (M+H+).
W-[(2S-dibencilamino-3-fenil)prop-1-il]-yV-(2'S-cloropropanoil)-L-Phe-OíBu (7j)
Figure imgf000051_0001
Simpe. Rdto: 80% (a partir de 5o). Eluyente: AcOEtHexano (1 :8). HPLC: tR=5.61 min (gradiente del 60% al 95% de A en 10 min). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): mezcla de rotámeros 12: 1 , δ rotámero mayoritario 7.30-6.93 (m, 20H, Ar), 4.09 (q, 1 H, J=6.5 Hz, 1 '-H), 3.64 (dd, 1 H, J=9.5, 5.6 Hz, a-Phe), 3.56 (d, 2H, J=13.8 Hz, NCH2), 3.45 (d, 2H, J=13.8 Hz, NCH2), 3.25 (dd, 1 H, J=14.2 Hz, 1 -H), 3.19 (dd, 1 H, J=14.2, 9.6 Hz, 1 -H), 3.04 (m, 3H, β-Phe, 2-H), 2.82 (dd, 1 H, J=13.6, 4.9, 3-H), 2.65 (dd, 1 H, J=13.6, 9.3, 3-H), 1.54 (d, 3H, J=6.5 Hz, 2'- H), 1 .44 (s, 9H, CH3, ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 169.9 (COO), 168.8 (CON), 139.3, 139.2, 139.1 , 138.6, 129.8, 129.4, 128.8, 128.7, 128.3, 127.3, 126.7, 126.4 (C, Ar), 82.0 (C, 'Bu), 64.9 (a-Phe), 58.3 (C2), 53.7 (NCH2), 52.3 (C1 ), 49.9 (C1 '), 35.5 (β-Phe), 34.8 (C3), 28.1 (C2'), 21 .3 (CH3, ¾u). MS(ES)+: 626.35 (M+H+). PREPARACIÓN DE DERIVADOS β-LACTÁMICOS
Ciclación intramolecular de los precursores clorados, asistida por base
A una disolución del correspondiente derivado /V-alquil-/V-cloroacetilo o N- cloropropionilo (1 ,22 mmol, 0,764 g) en CH3CN seco (3 mL), bajo atmósfera de Ar, se le adiciona BTPP (1 ,83 mmol, 0,56 mL) ó Cs2CO3 (2,44 mmol, 0,793 g) y se agita a temperatura ambiente. Cuando la reacción se completa el disolvente se evapora hasta sequedad y el residuo resultante se disuelve en AcOEt:H2O (1 : 1 ) y se separan las fases. El extracto orgánico se lava con disolución saturada de NaCI, se seca sobre Na2SO4 anhidro y se evapora a sequedad. El crudo de reacción obtenido se purifica en columna de gel de sílice, utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
EJEMPLO 1 4 ?,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- benziloxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000052_0001
Simpe. Rdto: 56% (a partir de 6a, B:BTPP). Eluyente: AcOEt:Hexano (1 :1 ). HPLC: tR=17.22 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). HPLC (Chiral): tR= 19.02, 22.12 min (Isocrático 9/91 (Acetona/Hexano). Proporción de diastereoisómeros M,m =80:20. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario ): δ 7.36-7.08 (m, 10H, Ph), 5.15 (sa, 3H, 3-NH, OCH2), 4.26 (m, 1 H, 3'-H), 3.71 (s, 3H, OMe), 3.26 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.20 (m, 2H, 1 '-H), 3.13 (d, 1 H, J=14.5 Hz. 4-CH2), 3.12 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 3-H), 2.88 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 3-H), 2.23 (m, 1 H, 2'-H), 1 .97 (m, 1 H, 2'-H), 1 .43 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): 171 .9 (COO), 166.4 (CON), 155.5 (OCON), 135.4, 134.5, 129.7, 128.9, 128.7, 128.6, 127.6 (C Ar), 80.1 (C 'Bu), 67.4 (OCH2), 63.0 (C4), 52.8 (OMe), 52.0 (C3'), 45.7 (C3), 39.7 (C1 '), 38.7 (4-CH2), 31.0 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u).MS (ES)+: 51 1 .25 [M+H]+. Masa exacta calculada para C28H34N2O7: 510.2366; encontrada: 510.2382.
EJEMPLO 2
4 ?,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- metiloxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000052_0002
Simpe. Rdto: 5% (a partir de 6a, B:BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 :1 ). HPLC: tR=12.52, 12.65 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). HPLC (Chiral): tR= 17.17, 18.55 min (Isocratico 9/91 (Acetona/Hexano). Proporción de diastereo-isómeros M,m =86: 14. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario ): δ 7.33-7.12 (m, 5H, Ph), 5.19 (sa, 1 H, 3-NH), 4.26 (m, 1 H, 3'-H), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.15 (d, 1 H, J=13.9 Hz, 4-CH2), 3.23 (m, 2H, 1 '-H), 3.18 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.14 (d, 1 H, J=15.0 Hz, 3-H), 2.90 (d, 1 H, J=15.0 Hz, 3-H), 2.24 (m, 1 H, 2'-H), 2.02 (m, 1 H, 2'-H), 1 .45 (s, 9H, CH3, *Bu). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): 172.0 (COO), 166.5 (CON), 155.4 (OCON), 134.6, 129.8, 128.9, 128.8, 127.8 (C Ar), 80.3 (C 'Bu), 63.1 (C4), 52.9 (OMe), 52.7 (OMe), 51 .9 (C3'), 45.8 (C3), 40.0 (4-CH2), 38.9 (C1 '), 31 .0 (C2'), 28.5 (CH3 ¾u).MS (ES)+: 435.32 [M+H]+. Masa exacta calculada para C22H3oN2O7: 434.20530; encontrada: 434.20662. EJEMPLO 3
4 ?,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1-[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000053_0001
Simpe. Rdto: 4% (a partir de 6a, B:BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 :1 ). HPLC: tR=17.22 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). HPLC (Chiralpak): tR= 20.15, 22.18 min (Isocrático 9/91 (Acetona /Hexano). Proporción de diastereoisómeros M,m= 53:47. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 1 H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.35-7.02 (m, 30H, Ar), 5.17 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2, M), 5.16 (s, 2H, OCH2, M ), 5.14 (s, 4H, OCH2, m), 5.1 1 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2, M), 5.03 (d, 1 H, J=6.6 Hz, 3-NH, m), 5.01 (m, 1 H, 3-NH, M), 4.25 (m, 1 H, 3'-H, M), 4.21 (m, 1 H, 3'-H, m), 3.25(d, 2H, J=14.2 Hz, 4-CH2, M, m), 3.24 (m, 2H, 1 '-H, M), 3.15 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H, M), 3.14 (d, 1 H, J=14.2 Hz, 4- CH2, M), 3.13 (m, 3H, 1 '-H, 4-CH2, m), 2.88 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H, M), 2.86 (d, 1 H, J=14.8 Hz , 3-H, m), 2.20 (m, 1 H, 2'-H, m), 2.18 (m, 1 H, 2'-H, M), 1 .97 (m, 1 H, 2'-H, M), 1 .92 (m, 1 H, 2'-H, m), 1 .44 (s, 18H, CH3 ¾u, M, m). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.0 (COO, M), 171 .9 (COO, m), 171.2 (COO, M,m), 166.5 (COM, M), 166.4 (CON, m), 155.6 (OCON; M), 135.5, 135.4134.9, 134.8134.5, 134.4, 129.8, 129.0, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 127.7, 127.6 (Ar), 80.3 (C ¾u, M), 80.2 (C ¾u, m), 67.9 (OCH2, M), 67.8 (OCH2, m), 67.5 (OCH2, M), , 67.4 (OCH2, m), 63.3 (C4, M), 63.1 (C4, m), 52.1 (C3\ M), 51 .9 (C3\ m), 46.0 (C3, M), 45.8 (C3, m), 40.1 (C1 \ M), 39.8 (C1 ', m), 39.0 (4-CH2, M), 38.9 (4- CH2, m), 31 .1 (C2', M), 30.8 (C2\ m), 28.5 (CH3 ¾u, M), 28.4 (CH3 ¾u, m). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): 172.0 (COO), 171.9 (COO), 171.2 (COO), 166.5 (CON), 166.4 (CON), 155.9 (OCON), 155.6 (OCON), 135.5, 135.4, 134.9, 134.8, 134.5 , 134.4, 129.8, 129.0, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 127.7, 127.6 (Ar), 80.3 (C ¾u), 80.2 (C ¾u), 67.9, 67.8, 67.5, 67.4 (OCH2), 63.3 (C4), 63.1 (C4), 52.1 (C3'), 51 .9 (C3'), 46.0 (C3), 45.8 (C3), 40.1 (C1 '), 39.8 (C1 '), 39.0 (4- CH2), 8.9 (4-CH2), 31 .1 (C2'), 30.8 (C2'), 28.5 (CH3 ¾u), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 587.43 [M+H]+. Masa exacta calculada para C34H38N2O7: 586.26790; encontrada: 586.26869.
EJEMPLO 4
4S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1-[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000054_0001
Simpe. Rdto: 29% (a partir de 6b, B:BTPP). Purificación HPLC semipreparativo (Chiral C). Eluyente: Acetona: Hexano (13:87, tR=9.78 min). HPLC: tR=17.22 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.35- 7.02 (m, 15H, Ar), 5.17 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.16 (s, 2H, OCH2), 5.1 1 (d, 1 H, J=12.4 Hz, OCH2), 5.01 (m, 1 H, 3-NH), 4.25 (m, 1 H, 3'-H), 3.25(d, 1 H, J=14.2 Hz, 4-CH2), 3.24 (m, 2H, 1 '-H), 3.15 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.14 (d, 1 H, J=14.2 Hz, 4-CH2), 2.88 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.18 (m, 1 H, 2'-H), 1 .97 (m, 1 H, 2'-H), 1 .44 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.0 (COO), 171 .2 (COO), 166.5 (CON), 155.6 (OCON), 135.5, 134.94, 134.5, 129.8, 129.0, 128.9, 128.8, 128.7, 128.5, 127.7 (C Ar), 80.3 (C ¾u), 67.9, 67.5 (OCH2), 63.3 (C4), 52.1 (C3'), 46.0 (C3), 40.1 (C1 '), 39.0 (4-CH2), 31 .1 (C2'), 28.5 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 587.46 [M+H]+. Masa exacta calculada para C34H38N2O7: 586.26790; encontrada: 586.26869.
EJEMPLO 5
4 ?-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000055_0001
Simpe. Rdto: 15% (a partir de 6b, B:BTPP). Purificación HPLC semipreparativo (Chiral C). Eluyente: Acetona: Hexano (13:87, tR=10.75 min). HPLC: tR=17.22 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.35-7.03 (m, 15H, Ar), 5.14 (s, 4H, OCH2), 5.03 (d, 1 H, J=6.6 Hz, 3-NH), 4.21 (m, 1 H, 3'-H), 3.25 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.14 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.13 (m, 3H, 1 '-H, 4-CH2), 2.86 (d, 1 H, J=14.8 Hz , 3-H), 2.20 (m, 1 H, 2'-H), 1 .92 (m, 1 H, 2'-H), 1 .44 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171 .9 (COO), 171 .2 (COO), 166.4 (CON), 155.9 (OCON), 135.4, 134.8, 134.4, 129.8, 129.0, 128.9, 128.7, 128.6, 128. 5. 127.6 (Ar), 80.2 (C ¾u), 67.8, 67.4 (OCH2), 63.1 (C4), 51 .9 (C3'), 45.8 (C3), 39.8 (C1 '), 38.9 (4-CH2), 30.8 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 587.46 [M+H]+.
EJEMPLO 6 4 ?,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1-[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1'-il]-(3 ?,SJ-metil-2-oxoazetidina
Figure imgf000056_0001
Simpe. Rdto: 61 % (a partir de 7a, B:BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 :2). HPLC: tR=17.58 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de diastereoisómeros M,m =58:42. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.37-7.04 (m, 15H, Ar), 5.22 (s, 2H, OCH2, M), 5.12 (s, 2H, OCH2, m), 5.03 (d, 1 H, J=6.6 Hz, 3-NH, M), 4.98 (d, 1 H, J=6.6 Hz, 3-NH, m), 4.14 (m, 1 H, 3'-H), 3.51 (d, 1 H, J=15.1 Hz, 4-CH2), 3.45 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.03 (m, 4H, 4-CH2, 1 '-H, 3- H), 2.24 (m, 1 H, 2'-H), 1 .97 (m, 1 H, 2'-H), 1 .43 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .08 (d, 3H, J=7.6 Hz, 3-CH3, M), 1 .07 (d, 3H, J=7.6 Hz, 3-CH3, m).13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.0 (COO), 171.2 (COO), 171.1 (COO), 169.7 (CON), 169.6 (CON), 155.5 (OCON), 135.5, 135.0, 134.9, 134.8, 129.8, 129.15, 129.1 , 129.00, 128.95, 128.9, 128.8, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 127.7, 127.6 (Ar), 79.9 (C 'Bu), 69.0 (C4), 67.7 (C4), 67.2, 67.1 (OCH2), 54.0 (C3), 53.8 (C3), 52.1 (C3'), 40.9 (4-CH2), 40.7 (4-CH2), 40.1 (C1 '), 40.0 (C1 '), 30.8 (C2'), 30.7 (C2'), 28.4 (CHs 'Bu), 10.4 (3-CH3), 10.3 (3-CH3). MS (ES)+: 601.52 [M+H]+. Masas exactas calculada para C35H4oN2O7: 600.28355; encontrada: 600.28432. EJEMPLO 7
4 ?,S-Metil-4-metoxicarbonil-1-[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000056_0002
Simpe. Rdto: 25% (a partir de 6c, B:BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 : 1 ). HPLC: tR=12.64 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de diastereoisómeros M,m =91 :9. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario ): δ 7.35 (s, 5H, Ph), 5.24 (d, 1 H, J=7.8 Hz, 3-NH), 5.17 (s, 2H, OCH2), 4.30 (m, 1 H, 3'-H), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.26 (t, 2H, J=7.9 Hz, 1 '-H), 3.18 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.79 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.20 (m, 1 H, 2'-H), 2.00 (m, 1 H, 2'-H), 1 .43 (s, 12H, 4-CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.8 (COO), 172.0 (COO), 166.3 (OCON), 135.4, 128.8. 128.6, 128.5 (Ar), 80.3 (C 'Bu), 67.4 (OCH2), 59.0 (C4), 58.9 (C3'), 52.8 (OMe), 48.9 (C3), 37.9 (C1 '), 30.9 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u), 20.5 (4-CH3). MS (ES)+: 435.32 [M+H]+.
EJEMPLO 8
4 ?,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-benciloxicarbonilamino-3'-íerc- butoxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000057_0001
Simpe. Rdto: 52% (a partir de 6d, B:Cs2CO3). Eluyente: AcOEtHexano (1 : 1 ). HPLC: tR= 9.06, 9.31 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). HPLC (Chiral): tR= 22.22, 26.12 min (Isocrátic 9/91 (Acetona/ Hexano). Proporción de diastereoisómeros M,m =90: 10. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario ): δ 7.37-7.1 1 (m, 10H, Ph ), 5.44 (brs, 1 H, 3-NH), 5.13 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.09 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.20 (m, 1 H, 3'-H), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.22 (m, 3H, 1 '-H, 4-CH2), 3.16 (d, 1 H, J=12.0 Hz, 4-CH2), 3.14 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.89 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.23 (m, 1 H, 2'-H), 2.04 (m, 1 H, 2'-H), 1 .46 (s, 9H, CHs 'Bu).1^ RMN (75 MHz, CDCI3): 171 .9 (COO), 170.8 (COO), 166.9 (CON), 156.0 (OCON), 136.4, 129.75, 129.7, 128.9, 128.6, 128.3, 128.2, 127.7 (Ar), 82.6 (C ¾u), 67.0 (OCH2), 63.1 (C4), 52.9 (OMe, C3'), 45.8 (C3), 39.9 (4-CH2), 38.7 (C1 '), 31.1 (C2'), 28.1 (CH3 *Bu). MS (ES)+: 51 1 .55 [M+Na]+. Masa exacta calculada para C28H34N2O7: 510.23660; encontrada: 510.23824.
EJEMPLO 9
4 ?,S-Metil-4-metoxicarbonil-1-[(3'S-benciloxicarbonilamino-3'-íerc- butoxicarbonil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000058_0001
Simpe. Rdto: 31 % (a partir de 6e, B:Cs2CO3). Eluyente: AcOE Hexano (2:1 ). HPLC: tR=7.84 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de diastereoisómeros M,m= 69:31 . 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario ): δ 7.35 (s, 5H, Ph), 5.48 (d, 1 H, J=7.9 Hz, 3-NH), 5.29 (s, 2H, OCH2), 4.24 (m, 1 H, 3'-H), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.50 (m, 1 H, 1 '-H), 3.26 (m, 1 H, 1 '-H), 3.18 (d, 1 H, J=14.9 Hz, 3-H), 2.78 (d, 1 H, J=14.9 Hz, 3-H), 2.16 (m, 1 H, 2'-H), 1 .99 (m, 1 H, 2'-H), 1 .46 (s, 12H, CH3 ¾u, 4-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.7 (COO), 170.7 (COO), 166.1 (CON), 156.0 (CON), 136.4, 128, 128.7, 128.25, 128.2 (C, Ar), 82.7 (C, 'Bu), 67.1 (OCH2), 59.0 (C4), 52.9 (OMe, C3'), 48.9 (C3), 37.9 (C1 '), 31 .3 (C2'), 28.1 (CH3 *Bu), 20.8 (4-CH3). MS (ES)+: 457.44 [M+Na]+. Masa exacta calculada para C30H30N2O7: 434.20530; encontrada: 434.20506.
EJEMPLO 10
4 ?,S-Bencil-1 -[4'S-(yV-Benciloxicarbonil-yV-metil)amino-4'- metoxicarbonil]but-1 -il]-4-íerc-butoxicarbonil-2-oxoazetidina
Figure imgf000059_0001
Simpe. Rdto: 77% (a partir de 6f, B: BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 :1 ). HPLC: tR=16.26 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). HPLC (Chiral): tR= 16.82, 17.83 min (Isocratico 10/90 (Acetona/Hexano). Proporción de rotámeros M,m =60:40. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, rotámero mayoritario): δ 7.36-7.13 (m, 10H, Ph, Z), 5.15 (s, 2H, OCH2), 4.79 (dd, 1 H, J=10.1 , 4.4 Hz , 4'- H), 3.71 (s, 3H, OMe), 3.29 (d, 1 H, J=15.1 Hz, 4-CH2), 3.25-3.10 (m, 4H, 1 '-H, 3-H, 4-CH2), 3.06 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 3-H), 2.85 (s, 3H, NMe), 1 .94-1 .71 (m, 4H, 2'-H, 3'-H), 1 .41 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171.8 (COO), 170.3 (COO), 166.9 (CON), 157.1 (OCON), 136.7, 135.1 , 129.8, 128.7, 128.6, 128.1 , 128.0, 127.9, 127.5 (Ar), 83.0 (C 'Bu), 67.6 (OCH2), 63.4 (C4), 58.4 (C4'), 52.3 (OMe), 45.8 (C3), 41 .4 (C1 '), 40.0 (4-CH2), 30.7 (NMe), 27.9 (CH3 ¾u), 26.6 (C3'), 25.5 (C2'). MS (ES)+: 539.67 [M+H]+. Masa exacta calculada para C30H38N2O7: 538.26790; encontrada: 538.26910.
EJEMPLO 1 1
4 ?,S-Bencil-1 -[4'S-[(W-metil)amino-4'-metoxicarbonil]but-1'-il]-4-íerc- butoxi carbón i I -2-oxoazeti dina
Figure imgf000059_0002
Una disolución del correspondiente compuesto del Ejemplo 10 (0, 15 mmol, 82 mg) en MeOH (15 mL) se hidrogena a temperatura ambiente y 15 psi de presión durante 4 h, utilizando como catalizador Pd-C (16 mg, 20%). Una vez separado el catalizador por filtración, se evapora el disolvente a sequedad, el crudo de reacción se purificó por cromatografía en columna usando como eluyentes MeOH:DCM en proporción (1 : 10), obteniéndose un sirupe de 48 mg (78%) del producto que se describe a continuación. HPLC: tR=8.87 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). Proporción de diastereoisómeros M,m=73:27. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario ): δ 7.31 - 7.17 (m, 5H, Ph), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.32 (d, 1 H, J=13.9 Hz, 4-CH2), 3.21 (m, 3H, 1 '-H, 4'-H), 3.16 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.10 (d, 1 H, J=13.9 Hz, 4-CH2), 2.86 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.39 (s, 3H, NMe), 1 .69 (m, 4H, 3'-H, 2'-H), 1 .42 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): 174.8 (COO), 169.8 (COO), 166.4 (CON), 134.6, 129.3, 128.2, 127.0 (Ar), 82.5 (C 'Bu), 62.9 (C4), 62.3 (C4'), 51.4 (OMe), 45.3 (C3), 41 .2 (C1 '), 39.7 (4-CH2), 34.3 (NMe), 30.3 (C3'), 27.5 (CH3 *Bu), 24.7 (C2'). MS (ES)+: 405.49 [M+Na]+. Masa exacta calculada para C22H32N2O5: 404.231 12; encontrada: 404.23245. EJEMPLO 12
4 ?,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1-[(4'S-íerc-butoxicarbonilamino-4'- benciloxicarbonil)but-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000060_0001
Sirupe. Rdto: 71 % (a partir de 6g). Proporción de diastereoisómeros, M/m= 5: 1 . Eluyente: AcOE Hexano (1 :4). HPLC: tR=17.18 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.40-6.90 (m, 15H, Ar), 5.17-4.95 (m, 5H, OCH2, 4-NH), 4.22 (m, 1 H, 4'-H), 3.24 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.23 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.1 1 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.04 (m, 2H, 1 '-H), 2.82 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 1 .60 (m, 2H, 3'-H), 1 .52 (m, 2H, 2'-H), 1 .36 (s, 9H, ¾u). 13C RMN (CDCI3): δ 1725, 171 .1 (COO), 166.4 (C2), 155.5 (OCON), 135.5, 134.9, 134.6, 129.7, 128.9, 128.8, 128.7, 128.7, 128.5, 128.4, 127.6 (Ar), 80.0 (C ¾u), 67.7, 67.2 (OCH2), 63.0 (C4), 53.4 (C4'), 45.8 (C3), 41 .7 (C3), 40.1 (4-CH2), 30.3 (C3'), 28.5 (CH3 *Bu), 24.6 (C2'). MS (ES)+: 623 [M+Na]+.
EJEMPLO 13
4 ?,S-Bencil-N-[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4- ferc-butoxicarbonil-2-oxoazetidina
Figure imgf000061_0001
Simpe. Rdto: 78% (a partir de 6h). HPLC-MS: tR=5.51 min (gradiente de 50% a 95% de A, en 15 min). HPLC (quiral): tR=19.85, 22.39 min (¡socrático: 1 1/89: acetona/hexano), proporción de diastereoisómeros (4R, 4'S):(4S, 4'S), M:m = 5: 1 . 1H RMN (300 MHz, CDCI3): isómero mayoritario δ 7.35-7.07 (m, 10H, Ar), 5.46 (d, 1 H, J=7.8, 4-NH), 5.04 (s, 2H, OCH2), 4.30 (m, 1 H, 4'-H), 3.67 (m, 3H, OCH3), 3.22 (d, 1 H, J=14.0, 4-CH2), 3.13-3.01 (m, 3H, 1 '-H, 4-CH2, 3-H), 3.80 (d, 1 H, J=14.7, 3-H), 1 .80-1 .56 (m, 4H, 2'-H, 3'-H), 1 .35 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): isómero mayoritario 172.7 (COO), 170.4 (COO), 166.9 (C2), 156.1 (OCON), 136.4, 135.0, 129.8, 128.8, 128.6, 128.3, 128.2, 127.5 (Ar), 83.1 (C 'Bu), 67.1 (OCH2), 63.5 (C4), 53.7 (C4'), 52.6 (OMe), 45.9 (C3), 41 .5 (C1 '), 40.0 (4-CH2), 29.8 (C3'), 28.0 ('Bu), 24.6 (C2'). MS (ES)+: 525.24 [M+H]+.
EJEMPLO 14
4'S-N-[(4'-Benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1'-il]-4 ?,S-íerc- buti I oxi carbón i I -4-meti I -2-oxoazeti dina
Figure imgf000061_0002
Simpe. Rdto: 58% (a partir de 6i). HPLC-MS: tR=3,06 min (gradiente de 50% a 95% de A, en 15 min). Proporción de diastereoisómeros (4R,4'S):(4S,4'R), M:m = 2:1.1H RMN (300 MHz, CDCI3): isómero mayoritario δ 7.37-7.31 (m, 5H, Ph), 5.54 (d, 1H, J= 7.1 Hz, 4-NH), 5.11 (s, 2H, OCH2), 4.37 (m, 1H, 4'-H), 3.75 (s, 3H, OMe), 3.20 (m, 2H,1'-H), 3.14 (d, 1H, J=14.5 Hz, 3-H), 2.76 (d, 1H, J=14.5 Hz, 3-H), 1.90 (m, 1H, 3'-H), 1.80-1.63 (m, 3H, 3'-H, 2'-H), 1.59 (s, 3H, 4-CH3), 1.45 (s, 9H, CH3 ¾u). MS (ES)+: 449.16 [M+H]+, 471.46 [M+Na]+ .
EJEMPLO 15
4?,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000062_0001
Simpe. Rdto: 11% (a partir de 6j, B:Cs2CO3). Eluyente: AcOEt:Hexano (1:3). HPLC: tR=20.74 min (gradiente de 30% to 95% de A, en 30 min). Proporción de diastereoisómeros (4S,2'S)/(4R,2'S)M/m=83:17. 1H RMN (500 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.34-6.98 (m, 20H, Ar), 5.48 (d, 1H, J=8.5 Hz, 2-NH), 5.15 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.09 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.06 (d, 1H, J=12.5 Hz, OCH2), 5.02 (d, 1H, J=12.5 Hz, OCH2), 4.15 (m, 1H, 2'-H), 3.37 (dd, 1H, J=14.5, 8.1 Hz, 1'-H), 3.27 (d, 1H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.22 (d, 1H, J=14.9 Hz, 3-H), 3.18 (dd, 1H, J=14.5, 4.3 Hz, 1'-H), 2.98 (d, 1H, J=14.0 Hz, 4- CH2), 2.90 (d, 1H, J=14.9 Hz, 3-H), 2.85 (dd, 1H, J=14.1, 7.6 Hz, 3'-H), 2.76 (dd, 1H, J=14.1, 6.8 Hz, 3'-H). 13C RMN (125 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 170.8 (COO), 167.4 (C2), 156.1 (OCON), 137.4, 134.9, 134.2, 129.7, 129.4, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.1, 128.0, 127.6, 126.8 (Ar), 67.9, 67.8 (OCH2), 63.2 (C4), 51.6 (C2'), 45.4 (C3), 45.2 (C1'), 39.7 (4-CH2), 39.1 (C3'). MS (ES)+: 563.46 [M+H]+. Masa exacta calculada para C35H34N2O5: 562.24677; encontrada: 562.24804. EJEMPLO 16
4 ?,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1-[(2' ?-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000063_0001
Sirupe. Rdto: 1 1 % (a partir de 6k, B:Cs2CO3). Eluyente: AcOE Hexano (1 :3). HPLC: tR=20.70 min (gradiente de 30% to 95% de A, en 30 min). Proporción de diastereoisómeros (4S,2'S)/(4R,2'S)M/m=91 :9. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.34-6.99 (m, 20H, Ar), 5.54 (d, 1 H, J=8.5 Hz, 2-NH), 5.14 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.06 (s, 2H, OCH2), 5.04 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.16 (m, 1 H, 2'-H), 3.29 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.22 (m, 3H, 3- H, 1 '-H), 3.15 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 2.89 (d, 1 H, J=14.9 Hz, 3-H), 2.78 (dd, 1 H, J=14.0, 5.5 Hz, 3'-H), 2.72 (dd, 1 H, J=14.0, 6.8 Hz, 3'-H). 13C RMN (75 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 170.9 (COO), 167.1 (C2), 156.2 (OCON), 137.2, 134.8, 134.5, 129.6, 129.4, 128.9, 128.8, 128.6, 128.5, 128.1 , 127.5, 126.7 (Ar), 67.8, 66.6 (OCH2), 63.3 (C4), 51 .5 (C2'), 45.8 (C3), 45.7 (C1 '), 40.3 (4-CH2), 39.1 (C3'). MS (ES)+: 563.46 [M+H]+. Masa exacta calculada para C35H34N2O5: 562.24677; encontrada: 562.24834. EJEMPLO 17
4S-Bencil-4-benciloxicarbonil-3S-metil-1-[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000064_0001
Simpe. Rdto: 65% (a partir de 7b, B: BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 :2). HPLC: tR=16.20 min (gradiente de 30% to 95% de A, en 20 min). Proporción de isómeros M(3S,4S,2'S):m(3R,4R,2'S)= 97:3. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, isómero mayoritario): δ 7.35-6.96 (m, 20H, Ar), 5.75 (d, 1 H, J=7.4 Hz, 2-NH), 5.24 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.14 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.05 (s, 2H, OCH2), 4.17 (m, 1 H, 2'-H), 3.43 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.23 (dd, 1 H, J=14.5, 8.0, 1 '-H), 3.1 1 (q, 1 H, J=7.6 Hz, 3-H), 3.05 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.00 (dd, 1 H, J=14.5, 4.0 Hz, 1 '-H), 2.86 (dd, 1 H, J=14.0, 8.0 Hz, 3'-H), 2.72 (dd, 1 H, J=14.0, 7.0 Hz, 3'-H), 1 .08 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3).13C RMN (75 MHz, CDCIs, isómero mayoritario): δ 171.01 (COO), 170.57 (C2), 156.03 (OCON), 137.8, 137.0, 134.9, 134.8, 129.7, 129.2, 128.9, 128.85, 128.8, 128.7, 128.5, 128.45, 127.9, 127.8, 127.5, 126.5 (Ar), 68.68 (C4), 67.67, 66.27 (OCH2), 53.84 (C3), 51.89 (C2'), 46.06 (C1 '), 40.69 (4-CH2). 39.10 (C3'), 10.60 (3-CH3). MS (ES)+: 577.3 [M+H]+.
EJEMPLO 18
4 ?-Bencil-4-benciloxicarbonil-3 ?-metil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000064_0002
Simpe. Rdto: 10% (a partir de 7c, B: BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=16.36 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 20 min). Proporción de isómeros M(3R,4R,2'S):m(3S,4S,2'S)= 85:15. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, isómero mayoritario): δ 7.37-6.99 (m, 20H, Ar), 5.83 (d, 1H, J=8.1 Hz, 2-NH), 5.27 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.17 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.05 (s, 2H, OCH2), 4.07 (m, 1H, 2'-H), 3.56 (d, 1H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.43 (q, 1H, J=7.6 Hz, 3-H), 3.03 (d, 1H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 2.99 (m, 2H, 1'-H), 2.71 (dd, 1H, J=13.5, 7.4 Hz, 3'-H), 2.64 (dd, 1H, J=13.4, 6.6 Hz, 3'-H), 1.08 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (100 MHz, CDCI3, isómero mayoritario): δ 171.3 (COO), 170.3 (C2), 156.3 (OCON), 137.5, 137.1, 135.1, 134.8, 129.8, 129.5, 129.45, 129.4, 129.2, 129.1, 128.95, 128.9, 128.85, 128.8, 128.6, 128.55, 128.5, 128.0, 127.6, 126.6 (Ar), 69.1 (C4), 67.9, 66.4 (OCH2), 54.2 (C3), 51.6 (C2'), 47.1 (C1'), 41.3 (4-CH2).39.4 (C3'), 10.6 (3-CH3). MS (ES)+: 577.3 [M+H]+. EJEMPLO 19
4?-Bencil-4-benciloxicarbonil-3?-metil-1-[(2'?-benciloxicarbonilamino-^^ fenil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000065_0001
Simpe. Rdto: 44% (a partir de 7e, B: BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1:3). HPLC: tR=16.20 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 20 min). Proporción de isómeros M(3R,4R,2'R):m(3S,4S,2'R) =77:23. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.35-6.96 (m, 20H, Ar), 5.75 (d, 1H, J=7.4 Hz, 2-NH), 5.24 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.14 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.05 (s, 2H, OCH2), 4.17 (m, 1H, 2'-H), 3.43 (d, 1H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.23 (dd, 1H, J=14.5, 8.0, 1'-H), 3.11 (q, 1H, J=7.6 Hz, 3-H), 3.05 (d, 1H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.00 (dd, 1H, J=14.5, 4.0 Hz, 1'-H), 2.86 (dd, 1H, J=14.0, 8.0 Hz, 3'-H), 2.72 (dd, 1H, J=14.0, 7.0 Hz, 3'-H), 1.08 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3).13C RMN (75 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 171.01 (COO), 170.57 (C2), 156.03 (OCON), 137.8, 137.0, 134.9, 134.8, 129.7, 129.2, 128.9, 128.85, 128.8, 128.7, 128.5, 128.45, 127.9, 127.8, 127.5, 126.5 (Ar), 68.68 (C4), 67.67, 66.27 (OCH2), 53.84 (C3), 51 .89 (C2'), 46.06 (C1 '), 40.69 (4-CH2). 39.10 (C3'), 10.60 (3-CH3). MS (ES)+: 577.18 [M+H]+. Masa exacta calculada para C36H36N2O5: 576.26242; encontrada:576.26364.
EJEMPLO 20
4S-4-Bencil-4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2' ?-benciloxicarbonilamino- '-fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000066_0001
Simpe. Rdto: 39% (a partir de 7d, B:BTPP). Eluyente: AcOEtHexano (1 :3). HPLC: tR=16.36 min (gradiente de 30% a 95% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.37-6.99 (m, 20H, Ar), 5.83 (d, 1 H, J=8.1 Hz, 2-NH), 5.27 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.17 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 5.05 (s, 2H, OCH2), 4.07 (m, 1 H, 2'-H), 3.56 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.43 (q, 1 H, J=7.6 Hz, 3-H), 3.03 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 2.99 (m, 2H, 1 '-H), 2.71 (dd, 1 H, J=13.5, 7.4 Hz, 3'- H), 2.64 (dd, 1 H, J=13.4, 6.6 Hz, 3'-H), 1 .08 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): δ 171.3 (COO), 170.3 (C2), 156.3 (OCON), 137.5, 137.1 , 135.1 , 134.8, 129.8, 129.5, 129.45, 129.4, 129.2, 129.1 , 128.95, 128.9, 128.85, 128.8, 128.6, 128.55, 128.5, 128.0, 127.6, 126.6 (Ar), 69.1 (C4), 67.9, 66.4 (OCH2), 54.2 (C3), 51 .6 (C2'), 47.1 (C1 '), 41 .3 (4-CH2). 39.4 (C3'), 10.6 (3-CH3). MS (ES)+: 577.25 [M+H]+. EJEMPLO 21
4S-Benciloxicarbonil-3S,4S-dimetil-1-[(2' ?-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000067_0001
Simpe. Rdto: 30% (a partir de 7h, B:BTPP). Eluyente: AcOE Hexano (1:2). HPLC: tR=17.49 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCIs): δ 7.35- 7.15 (m, 15H, Ar), 5.36 (d, 1H, J=8.4 Hz, 2-NH), 5.18 (d, 1H, J=12.1 Hz, OCH2), 5.12 (d, 1H, J=12.1 Hz, OCH2), 5.03 (s, 2H, OCH2), 4.10 (m, 1H, 2'-H), 3.32 (dd, 1H, J=14.6, 8.1 Hz, 1'-H), 3.22 (dd, 1H, J=14.6, 5.1 Hz, 1'-H), 2.96 (q, 1H, J=7.5 Hz, 3-H), 2.87 (dd, 1H, J=13.8, 6.2 Hz, 3'-H), 2.81 (m, 1H, 3'-H), 1.58 (s, 3H, CH3), 1.06 (d, 3H, J=7.5 Hz, CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 171.5 (COO), 170.0 (C2), 156.2 (OCON), 137.3, 136.8, 135.1, 129.5, 128.85, 128.8, 128.7, 128.5, 128.1, 126.7 (Ar), 67.5, 66.6 (OCH2), 64.8 (C4), 56.1 (C3), 51.7 (C2'), 44.6 (C1'), 39.2 (C3'), 20.8 (4-CH3), 10.4 (CH3). MS (ES)+: 501.37 [M+H]+. Masa exacta calculada para C30H32N2O5: 500.23112; encontrada: 500.23117. EJEMPLO 22
4?,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1-[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1'-in oxoazetidina
Figure imgf000067_0002
Simpe. Rdto: 10% (a partir de 6m). Eluyente: AcOE Hex (1:4). Proporción de diastereoisómeros, M/m= 5:1. HPLC: tR=7.55 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min).1H RMN (400 MHz, CDCI3): isómero mayoritario δ 7.40-6.73 (m, 25H, Ar), 5.03 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.93 (d, 1H, J=12.0 Hz, OCH2), 3.69 (d, 2H, J=13.8 Hz, NCH2), 3.52 (d, 2H, J=13.8 Hz, NCH2), 3.45 (m, 2H, 1'-H), 3.28 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.21 (m, 1 H, 2'-H), 3.00 (d, 1 H, J=13.5 Hz, 4- CH2), 2.92 (dd, 1 H, J=14.2, 8.1 Hz, 3'-H), 2.82 (d, 1 H, J=14.8 Hz 3-H), 2.81 (m, 1 H, 3'-H), 2.38 (d, 1 H, J=13.4 Hz, 4-CH2). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.0 (COO), 167.1 (C2), 140.2, 139.6, 135.0, 134.7, 129.55, 129.5, 129.1 , 128.9, 128.8, 128.3, 127.4, 127.0, 126.1 (Ar), 67.6 (OCH2), 63.9 (C4), 58.5 (C2'), 53.4 (NCH2), 45.3 (C3), 41 .6 (C1 '), 40.6 (4-CH2), 36.5 (C3'). MS (ES)+: 608.88 [M+H]+.
EJEMPLO 23
4S-Bencil-]-(4-benciloxicarbonil-3S-metil-1-[(2'S-dibencilamino-3'- fenil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000068_0001
Simpe. Rdto: 25% (a partir de 7f). Eluyente: AcOEt:Hex (1 :4). HPLC: tR=7.19 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.46-6.89 (m, 25H, Ar), 5.23 (d, 1 H, J=1 1 .9 Hz, OCH2), 5.01 (d, 1 H, J=1 1 .9 Hz, OCH2), 3.64 (d, 2H, J=13.9 Hz, NCH2), 3.49 (m, 1 H, 2'-H), 3.44 (d, 2H, J=13.9 Hz, NCH2), 3.41 (dd, 1 H, J=13.9, 4.0 Hz, 1 '-H), 3.22 (dd, 1 H, J=13.8, 9.8 Hz, V- H), 3.10 (q, 1 H, J=7.5 Hz, 3-H), 2.99 (d, 1 H, J=14.2 Hz, 4-CH2), 2.93 (d, 1 H, J=14.2 Hz, 4-CH2), 2.86 (dd, 1 H, J=14.4, 5.0 Hz, 3'-H), 2.75 (dd, 1 H, J=14.4, 9.1 Hz, 3'-H), 1 .07 (d, 3H, J=7.5 Hz, CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.8 (COO), 179.1 (C2), 140.4, 139.7, 135.2, 135.0, 130.0, 129.6, 129.2, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.2, 128.1 , 127.3, 126.9, 125.9 (Ar), 68.4 (OCH2), 67.2 (C4), 57.9 (C2'), 57.8 (C3), 53.3 (NCH2), 43.0 (C1 '), 40.9 (4-CH2), 36.2 (C3'), 10.6 (CH3). MS (ES)+: 623.01 [M+H]+.
EJEMPLO 24
4/?-Bencil-4-benciloxicarbonil-3/?-metil^
1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000069_0001
Simpe. Rdto: 57% (a partir de 7g). Eluyente: AcOE Hex (1 :4). HPLC: tR=7.29 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.37-6.93 (m, 25H, Ar), 5.06 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 4.84 (d, 1 H, J=12.0 Hz, OCH2), 3.56 (d, 2H, J=13.8 Hz, NCH2), 3.47 (d, 2H, J=13.9 Hz, NCH2), 3.46 (m, 1 H, 3-H), 3.37 (m, 1 H, 2'-H), 3.14 (dd, 1 H, J=14.2, 8.1 Hz, 1 '-H), 3.08 (m, 2H, 3'-H, 4-CH2), 2.81 (m, 3H, 4-CH2, 1 '-H, 3'-H), 1 .00 (d, 3H, J=7.5 Hz, CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.9 (COO), 169.9 (C2), 140.3, 140.0, 135.5, 135.1 , 129.9, 129.7, 129.1 , 129.0, 128.8, 128.75, 128.7, 128.2, 127.5, 126.9, 126.0 (Ar), 68.6 (C4), 67.3 (OCH2), 58.7 (C2'), 54.4 (C3), 53.2 (NCH2), 42.1 (C1 '), 40.6 (4-CH2), 35.9 (C3'), 10.5 (CH3). MS (ES)+: 622.95 [M+H]+.
EJEMPLO 25
4 ?,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
Figure imgf000069_0002
Sirupe. Rdto: 71 % (a partir de 6n). Eluyente: AcOE Hexano (1 :6). HPLC: tR=6.49, 8.00 min (gradiente del 30% al 95% de A en 10 min). Proporción de diastereoisómeros, M:m=1 .8:1 . 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.34-6.89 (m, 20H, Ar), 3.72 (m, 4H, NCH2), 3.62 (m, 1 H, 1 '-H), 3.45 (s, 3H, OCH3), 3.43 (dd, 1 H, J=14.3, 8.3 Hz, 1 '-H), 3.27 (m, 1 H, 2'-H), 3.25 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.02 (d, 1 H, J=13.4 Hz, 4-CH2), 2.82 (d, 1 H, J=14.9 Hz, 3-H), 3.02 (m, 1 H, 3'-H), 2.80 (m, 1 H, 3'-H), 2.45 (d, 1 H, J=13.4 Hz, 4-CH2). 1 áC RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.6 (COO), 166.9 (CON), 140.2, 140.1 , 139.9, 134.6, 129.5, 129.4, 129.2, 128.8, 128.7, 128.5, 128.3, 127.5, 127.0, 127.1 (Ar), 63.7 (C4), 58.8 (NCH2), 53.4 (C2'), 52.3 (OCH3), 45.1 (C3), 41 .4 (CT), 40.6 (4- CH2), 36.1 (C3'). MS(ES)+: 533.27 (M+H+).
EJEMPLO 26
4 ?,S-Bencil-4-íerc-butoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3-fenil)prop-1'-¡n -oxoazetidina
Figure imgf000070_0001
Simpe. Rdto: 41 % (a partir de 6o). Eluyente: AcOEtHexano (1 :6). HPLC: tR=7.28, 8.27 min (gradiente del 50% al 95% de A en 10 min). Proporción de diastereoisómeros, M:m=1 .8: 1 . 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.39-6.89 (m, 20H, Ar), 3.81 (d, 2H, J = 13.4, NCH2), 3.57 (m, 2H, 1 '-H), 3.51 (d, 4H, J=13.4, NCH2), 3.30 (m, 1 H, 2'-H), 3.24 (d, 1 H, J=14.8, 3-H), 3.09 (d, 1 H, J=13.6, 4-CH2), 2.94 (m, 2H, 3'-H), 2.82 (d, 1 H, J=14.8, 3-H), 2.40 (d, 1 H, J=13.5 Hz, 4-CH2), 1 .39 (s, 9H, CH3, ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 169.3 (COO), 167.4 (CON), 140.0, 139.6, 135.2, 129.6, 129.5, 128.8, 128.5, 128.3, 128.2, 127.3, 127.1 , 126.1 (Ar), 83.0 (C 'Bu), 64.2 (C4), 58.6 (C2'), 53.5 (NCH2), 45.6 (C3), 41.8 (CT), 40.9 (4-CH2), 36.8 (C3'), 28.1 (CH3, ¾u). MS(ES)+: 576.40 (M+H+).
EJEMPLO 27
4S-Bencil-3S-metil-4-metoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1'- il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000071_0001
Simpe. Rdto: 51 % (a partir de 7i). Eluyente: AcOEtHexano (1 :8). HPLC: tR=8.1 1 min (gradiente del 15% al 95% de A en 10 min). 1H RMN (400 MHz, CDCIs): δ 7.30-7.02 (m, 20H, Ar), 3.73 (d, 2H, J=14.2 Hz, NCH2), 3.69 (d, 2H, J = 14.2 Hz, NCH2), 3.59 (dd, 1 H, J=13.7, 5.1 Hz, 1 '-H), 3.51 (m, 4H, 2'-H, OCH3), 3.19 (dd, 1 H, J=13.7, 7.6 Hz, 1 '-H), 3.10 (q, 1 H, J=7.5 Hz, 3-H), 3.04 (d, 2H, J=13.6 Hz, 4-CH2), 2.99 (d, 2H, J=13.6 Hz, 4-CH2), 2.97 (dd, 1 H, J=14.1 , 7.7 Hz, 3'-H), 2.81 (dd, 1 H, J=14.1 , 6.2 Hz, 3'-H), 1 .14 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 171.4 (COO), 169.9 (CON), 140.3, 139.9, 135.1 , 130.0, 129.6, 128.8, 128.7, 128.2, 127.4, 126.9, 126.0 (Ar), 68.6 (C4), 58.7 (C2'), 53.5 (NCH2), 53.2 (C3), 51 .9 (OCH3), 42.7 (C1 '), 40.6 (4-CH2), 36.0 (C3'), 10.5 (3-CH3). MS(ES)+: 548.34 (M+H+).
EJEMPLO 28
4S-Bencil-4-íerc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'- fenil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000071_0002
Simpe. Rdto: 77% (a partir de 7j). Eluyente: AcOEt:Hexano (1 :8). HPLC: tR=2.33 min (gradiente del 50% al 95% de A en 5 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.31 -7.04 (m, 20H, Ar), 3.76 (d, 2H, J=13.9 Hz, NCH2), 3.56 (m, 4H, NCH2, 1 '-H, 2'-H), 3.42 (m, 1 H, 1 '-H), 3.14 (q, 1 H, J=7.5 Hz, 3-H), 2.95 (m, 4H, 3'-H, 4-CH2), 1 .46 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .19 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.2 (COO), 169.7 (CON), 140.2, 139.6, 135.6, 129.8, 129.5, 128.6, 128.3, 128.1 , 127.9, 127.0, 126.8, 125.7 (Ar), 82.8 (C ¾u), 68.3 (C4), 58.0 (C2'), 53.3 (NCH2), 53.1 (C3), 42.7 (C1 '), 41 .3 (4-CH2), 36.4 (C3'), 28.0 (ClVBu), 10.7 (3-CH3). MS(ES)+: 590.20 (M+H+). Desbencilación por hidrogenólisis de la β-lactama del Ejemplo 28.
Se disuelve 16 (0, 17 mmol, 0, 10 g) en 20 mL de metanol y se enfría la disolución a 0 °C. Se añade una proporción de 20% de Pd(OH)2 (0,02 g) a la mezcla, junto con HCI (1 eq). Se hidrogena la mezcla a 40 psi y a temperatura ambiente durante 22h para intentar desbencilar completamente. Se filtra el catalizador y se evapora el disolvente a presión reducida. Se lava con AcOEt y una solución al 10% de NaHC03. La fase orgánica se seca sobre Na2S04 y se evaporara a presión reducida. El residuo se purifica utilizando cromatografía en columna de gel de sílice. EJEMPLO 29
4S-Bencil-4-íerc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-bencilamino-3'-fenil)prop- '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000072_0001
Simpe. Rdto: 29% (a partir del compuesto del Ejemplo 28). Eluyente: AcOEt: Hexano (1 :2). HPLC: tR=3.62 min (gradiente del 15% al 95% de A en 5 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.32-7.12 (m, 15H, Ar), 3.79 (d, 1 H, J = 13.1 Hz, NCH2), 3.73 (d, 1 H, J=13.1 Hz, NCH2), 3.43 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.29 (m, 1 H, 2'-H), 3.16 (m, 1 H, 1 '-H), 3.09 (m, 3H, 3-H, 1 '-H, 4-CH2), 2.80 (dd, 1 H, J=13.9, 6.4 Hz, 3'-H), 2.73 (dd, 1 H, J=13.9, 6.7 Hz, 3'-H), 1 .39 (s, 9H, CH3, ¾u), 1 .21 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.5 (COO), 170.1 (CON), 140.6, 138.9, 135.6, 130.0, 129.5, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 127.3, 126.9, 126.3 (C, Ar), 83.2 (C 'Bu), 68.5 (C4), 57.6 (C2'), 53.4 (C3), 51 .4 (NCH2), 47.5 (C1 '), 41.0 (4-CH2), 39.5 (C3'), 28.1 (CH3, ¾u), 10.7 (3-CH3). MS(ES)+: 499.07 (M+H+). EJEMPLO 30
4S-Bencil-4-íerc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-amino-3'-fenil)prop-1 -il]-2- oxoazetidina
Figure imgf000073_0001
Simpe. Rdto: 29% (a partir del compuesto del Ejemplo 28). Eluyente: MeOH:AcOEt (1 :3). HPLC: tR=3.22 min (gradiente del 15% al 95% de A en 5 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.29-7.09 (m, 10H, Ar), 3.47 (d, 1 H, J=14.6 Hz, 4-CH2), 3.42 (m, 1 H, 2'-H), 3.10 (d, 1 H, J=14.6 Hz, 4-CH2), 3.08 (q, 1 H, J=7.6 Hz, 3-H), 3.02 (m, 2H, 1 '-H), 2.66 (dd, 1 H, J=13.5, 5.7 Hz, 3'-H), 2.53 (dd, 1 H, J=13.5, 8.1 Hz, 3'-H), 1 .47 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .21 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.5 (COO), 170.4 (CON), 138.7, 135.5, 130.1 , 129.4, 128.7, 128.6, 127.5, 126.5 (Ar), 83.4 (C 'Bu), 68.6 (C4), 53.6 (C3), 51 .5 (C2'), 50.1 (C1 '), 42.1 (C3'), 40.7 (4-CH2), 28.3 (CH3, ¾u), 10.8 (3-CH3). MS(ES)+: 409.09 (M+H+).
EJEMPLO 31
4S-Bencil-4-íerc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000073_0002
Se disuelve el compuesto del Ejemplo 30 (0, 19 mmol, 0,08 g) en diclorometano anhidro y se le añade TEA (0, 19 mmol, 0,02 g). Se enfría la disolución a 0 °C y se le añade óxido de propileno (2,90 mmol, 0.17 g), seguido de cloroformiato de bencilo (0,39 mmol, 0,02 g). La reacción avanza a temperatura ambiente durante 1 h 40min. Se evapoa el disolvente a presión reducida, se disuelve el residuo en AcOEt y se lava con agua y una solución saturada de NaCI. La fase orgánica se seca sobre Na2S04 y se evaporara a presión reducida. El residuo se purifica utilizando cromatografía en columna de gel de sílice. Simpe. Rdto: 69%. Eluyente: Hexano (1 :4). HPLC: tR=9.05 min (gradiente del 30% al 95% de A en 10 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.36- 7.04 (m, 15H, Ar), 6,00 (d, 1 H, J=8.3 Hz, NH), 4.98 (s, 2H, OCH2), 4.1 1 (m, 1 H, 2'-H), 3.35 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 3.16 (dd, 1 H, J=14.5, 6.9 Hz, 1 '-H), 3.07 (m, 2H, 1 '-H, 3-H), 2.99 (d, 1 H, J=14.5 Hz, 4-CH2), 2.87 (dd, 1 H, J=13.9, 7.7 Hz, 3'-H), 2.75 (dd, 1 H, J=14.1 , 6.9 Hz, 3'-H), 1 .40 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .15 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.9 (COO), 170.4 (CON), 156.1 (NCOO), 138.0, 137.0, 135.2, 129.9, 129.4, 128.5, 128.4, 127.9, 127.5, 126.5 (Ar), 83.7 (C 'Bu), 68.6 (C4), 66.3 (OCH2), 53.5 (C3), 51 .8 (C2'), 46.6 (C1 '), 40.7 (4-CH2), 38.9 (C3'), 28.2 (CH3 ¾u), 10.8 (3-CH3). MS(ES)+: 543.16 (M+H+).
EJEMPLO 32
4S-Bencil-4-íerc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-íerc-butoxicarbonilamino- -fenil)prop-1 '-il]-4-oxoazetidina
Figure imgf000074_0001
Se añade dicarbonato de di-ferc-butilo (0,08 mmol, 0,02 g) a una disolución de del compuesto del Ejemplo 30 (0,05 mmol, 0,02 g) en diclorometano anhidro. La mezcla de reacción se deja agitando 24h a temperatura ambiente, se evapora a presión reducida y se purifica por cromatografía en columna flash de gel de sílice. Simpe. Rdto: 38%. Eluyente: AcOE Hexano (1 :4). HPLC: tR=9.31 min (gradiente del 50% al 95% de A en 10 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.28-7.10 (m, 10H, Ar), 5.62 (d, 1 H, J=7.7 Hz, NH), 4.13 (m, 1 H, 2'-H), 3.38 (d, 1 H, J=14.3 Hz, 4-CH2), 3.15 (m, 5H, 3-H, 1 '-H, 4-CH2), 2.90 (m, 1 H, 3'-H), 2.80 (dd, 1 H, J=13.9, 6.7 Hz, 3'-H), 1 .47 (s, 9H, CH3 O'Bu ), 1 .36 (s, 9H, 3-CH3, Boc), 1 .21 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): δ 170.8 (COO), 170.4 (CON), 155.6 (NCOO), 138.3, 135.3, 130.0, 129.5, 128.7, 128.5, 127.5, 126.4 (Ar), 83.5 (C, O¾u), 79.0 (C, Boc), 68.6 (C4), 53.3 (C3), 51.1 (C2'), 46.6 (C1 '), 40.6 (4-CH2), 39.0 (C3'), 28.5 (CH3, O¾u), 28.3 (CH3, Boc), 10.8 (3-CH3). MS(ES)+: 509.36 (M+H+).
Síntesis de β-lactamas dicarboxilato
Una disolución del correspondiente derivado 4-benciloxicarbonil sustituido (0,2 mmol) en MeOH (17 mL) se hidrogena a temperatura ambiente y 15 psi de presión durante 7 h, utilizando como catalizador Pd-C (10%). Una vez separado el catalizador por filtración, se evapora el disolvente a sequedad.
EJEMPLO 33
4 ?,S-Bencil-4-carboxi-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-carboxi)prop-1'- -2-oxoazetidina
Figure imgf000075_0001
Simpe. Rdto: 99% (a partir del compuesto del Ejemplo 3). Proporción de diastereoisómeros, M/m=6: 1. HPLC: tR=9.17 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 9.40 (s, 2H, OH), 7.38-7.06 (m, 5H, Ph), 5.68 (d, 1 H, J=8.5 Hz, NH), 4.24 (m, 1 H, 3'-H), 3.54-2.73 (m, 6H, 1 '-H, 3-H, 4-CH2), 2.17 (m, 2H, 2'-H), 1 .43 (s, 9H, ¾u). 13C RMN (CDCI3): δ 175.7, 174.6 (COO), 168.3 (C2), 156.3 (OCON), 134.1 , 130.0, 128.9, 127.7, (Ar), 80.8 (C ¾u), 63.4 (C4), 51 .8 (C3'), 44.8 (C3), 38.8 (Cr, 4-CH2), 30.6 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 407.20 [M+H]+.
EJEMPLO 34 4 ?,S-Bencil-1 -[4'S-tert-butoxicarbonilamino-4'-carboxi)but-1'-il]-4-carboxi- -oxoazetidina
Figure imgf000076_0001
Simpe. Rdto: 74% (a partir del compuesto del Ejemplo 12). Proporción de diastereoisómeros, M/m= 3:2. HPLC: tR = 9.46 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (300 MHz, CDCI3, Diastereoisómero mayoritario): δ 10.09 (s, 2H, OH), 7.24-7.07 (m, 5H, Ar), 5.41 (d, 1 H, J=8.1 Hz, NH), 4.18 (m, 1 H, 4'-H), 3.50-2.62 (m, 6H, 1 '-H, 3-H, 4-CH2), 1 .88-1 .56 (m, 4H, 3'-H, 2'-H), 1 .36 (s, 9H, ¾u). 13C RMN (CDCI3, Diastereoisómero mayoritario): δ 176.2, 174.5 (COO), 168.1 (C2), 156.1 (OCON), 134.6, 129.9, 128.8, 127.5 (Ar), 80.6 (C 'Bu), 63.1 (C4), 53.1 (C4'), 45.1 (C3), 41.9 (C1 '), 38.9 (4-CH2), 29.9 (C3'), 28.4 (ClVBu), 24.0 (C2'). MS (ES)+: 421 .26 [M+H]+.
Síntesis de β-lactamas amídicas
Método A. Una disolución del correspondiente derivado 4-benciloxicarbonil sustituido (0,2 mmol) en MeOH (17 ml_) se le añade 20% en peso de Pd-C y se hidrogena a temperatura ambiente y 30 psi durante 3h. A continuación se disuelve el correspondiente derivado carboxilado (0, 143 mmol) en CH2CI2 seco (4 ml_) y se le adiciona de forma consecutiva la amina deseada (0,286 mmol), PyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -i!-N-oxi-tris(pirro!idin)fosfonio) (0,286 mmol, 149 mg) y TEA (0,286 mmol, 40 μΙ_). Al cabo de 24 h de agitación a temperatura ambiente se evapora el disolvente a sequedad. El crudo obtenido se disuelve en AcOEt y se lava sucesivamente con disolución de ácido cítrico al 10%, disolución de NaHCO3 al 10%, H2O y disolución saturada de NaCI. La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 y se evapora, purificándose el residuo resultante por cromatografía en columna de gel de sílice usando el sistema de eluyentes indicado en cada caso. Método B. A una disolución del correspondiente derivado carboxi sustituido (0, 155 mmol) en CH2CI2 seco (2 ml_) o DMF anhidra (2 ml_) se le adiciona de forma consecutiva la amina deseada (0,62 mmol), PyBOP (0,62 mmol) y TEA (0,62 mmol). Al cabo de 24 h de agitación a temperatura ambiente se evapora el disolvente a sequedad. El crudo obtenido se disuelve en AcOEt y se lava con disolución de HCI 0, 1 N. La disolución acuosa se basifica con NaOH 1 M y se extrae con AcOEt. La fase orgánica se lava con disolución saturada de NaCI, se seca sobre Na2SO4 anhidro y se evapora, purificándose el residuo resultante por cromatografía en columna de gel de sílice, usando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
EJEMPLO 35
4S-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-1 -[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'-[(N- bencil)carbamoil]prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000077_0001
Simpe. Rdto: 80% (a partir del compuesto del Ejemplo 33, Método A). Eluyente: AcOEt: Hexano (2:1 ). HPLC: tR=13.79 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.62 (sa, 1 H, NHCO), 7.31 -7.12 (m, 15H, Ar), 6.1 1 (sa, 1 H, NHCO), 5.33 (sa, 1 H, NHCO), 4.44 (m, 2H, NCH2), 4.40 (dd, 1 H, J=14.4, 5.7 Hz, NCH2), 4.30 (dd, 1 H, J=14.4, 5.7 Hz, NCH2Ph), 4.23 (m, 1 H, 3'-H), 3.47 (m, 1 H, 1 '-H), 3.39 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.32 (m, 2H, 1 '-H, 4-CH2), 3.04 (d, 1 H, J=14.6 Hz, 3-H), 2.95 (d, 1 H, J=14.6 Hz, 3-H), 2.05 (m, 1 H, 2'-H), 1 .94 (m, 1 H, 2'-H), 1 .42 (s, 9H, CHs 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 171 .5 (CON), 170.8 (CON), 167.4 (C2), 155.5 (OCON), 138.1 , 137.4, 129.8, 128.95, 128.9, 128.8, 128.3, 127.95, 127.9, 127.6 (Ar), 81 .0 (C ¾u), 64.2 (C4), 52.4 (C3'), 46.4 (C3), 44.0, 43.7 (NHCH2), 40.6 (C1 '), 39.3 (4-CD D), 29.9 (C2'), 28.5 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 585.55 [M+H]+. Masa exacta calculada para C34H40N4O5: 584.29987; encontrada: 584.30012.
EJEMPLO 36
4 ?,S-Bencil-1 -[4'S-tert-butoxicarbonilamino-4'-[(N-bencil)carbamoil]but-1 '- -4-[( N -ben ci I )carbamoi I] -2-oxoazeti dina
Figure imgf000078_0001
Simpe. Rdto: 27% (a partir del compuesto del Ejemplo 34, Método B). Eluyente: AcOE Hex (4: 1 ). Proporción de diastereoisómeros, M/m= 3:2. HPLC: tR=13.80 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3, Diastereoisómero mayoritario): δ 7.27-6.88 (m, 15H, Ar), 5.95 (m, 1 H, CONH), 5.32 (m, 1 H, CONH), 4.52-4.06 (m, 5H, NCH2, 4'-NH), 3.58 (m, 1 H, 4'- H), 3.51 -2.86 (m, 6H, 1 '-H, 3-H, 4-CH2), 1 .91 -1 .62 (m, 4H, 3'-H, 2'-H), 1 .35 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CDCI3, Diastereoisómero mayoritario): δ 172.3, 171.0 (CONH), 167.2 (C2), 156.1 (OCON), 138.3, 137.3, 135.0, 129.9, 129.8, 128.9, 128.8, 128.7, 128.1 , 128.0, 127.7, 127.5, (Ar), 80.0 (C 'Bu), 63.8 (C4), 52.5 (C4'), 46.2 (C3), 43.9, 43.5 (NHCH2), 41 .1 (C1 '), 39.6 (4-CH2), 30.9 (C3'), 28.5 (CH3 ¾u), 24.6 (C2'). MS (ES)+: 599.43 [M+H]+. EJEMPLO 37
4S-4-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-3S-metil-1 -[3'S-íerc- butoxicarbonilamino-3'-[(N-bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000079_0001
Simpe. Rdto: 55% (a partir del compuesto del Ejemplo 6, Método A). Eluyente: Acetona: DCM (1 :25). HPLC: tR=14.18 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.32 (m, 1 H, NHCO), 8.20 (m, 1 H, NHCO), 7.45-7.19 (m, 15H, Ar), 5.99 (d, 1 H, J=6.6 Hz, 3'-NH), 4.53 (m, 5H, NCH2, 3'-H), 3.69 (d, 1 H, J=14.9 Hz, 4-CH2), 3.35 (m, 2H, 1 '-H, 4-CH2), 3.10 (m, 1 H, 1 '-H ), 3.04 (q, 1 H, J=7.5 Hz, 3-H), 2.30 (m, 1 H, 2'-H), 1 .94 (m, 1 H, 2'-H), 1 .39 (s, 9H, CH3 'Bu), 1 .01 (d, 3H, J=7.5 Hz, 3-CH3).13C RMN (75 MHz, CDCI3): 173.2 (CON), 171.0 (CON), 170.0 (CON), 156.5 (OCON), 138.9, 138.2, 135.7, 130.2, 128.9, 128.7, 128.4, 128.2, 127.7, 127.4, 127.3, 127.1 (Ar), 80.2 (C 'Bu), 69.1 (C4), 53.5 (C3), 51 .9 (C3'), 43.8, 43.6 (NCH2), 41 .4 (C1 '), 38.6 (4-CH2), 34.1 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u), 9.6 (CH3). MS (ES)+: 599.31 [M+H]+. Masa exacta calculada para C35H42N4O5: 598.31552; encontrada: 598.31608. EJEMPLO 38
4 ?-4-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-3 ?-metil-1 -[3'S-íerc- butoxicarbonilamino-3'-[(N-bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000079_0002
Simpe. Rdto: 37% (a partir del compuesto del Ejemplo 6, Método A). Eluyente: Acetona: DCM (1 : 15). HPLC: tR=14.40 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.96 (sa, 1 H, NHCO), 7.30-7.20 (m, 15H, Ar), 6.81 (sa, 1 H, NHCO), 5.17 (d, 1 H, J=6.6 Hz, 3'-NH), 4.58 (dd, 1 H, J= 14.9, 6.1 Hz, NCH2), 4.35 (m, 3H, J=14.9, 6.1 Hz, NCH2), 4.14 (m, 1 H, 3'-H), 3.76 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 4-CH2), 3.1 1 (m, 4H, 1 '-H, 4-CH2, 3-H), 1 .84 (m, 2H, 2'-H), 1.40 (s, 9H, CH3 ¾u), 1 .10 (d, 3H, J=7.5 Hz, CH3). 3C RMN (75 MHz, CDCI3): 171 .9 (CON), 170.0 (CON), 155.5 (OCON), 138.0, 136.0, 130.2, 129.9, 128.9, 128.8, 128.7, 128.4, 128.3, 127.8, 127.6, 127.4 (Ar), 78.8 (C ¾u), 69.7 (C4), 54.6 (C3), 52.7 (C3'), 44.0, 43.6 (NCH2), 40.7 (4-CH2), 40.1 (C1 '), 32.1 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u), 10.2 (3-CH3). MS (ES)+: 599.31 [M+H]+. Masa exacta calculada para C35H42N4O5: 598.31552; encontrada: 598.31608.
EJEMPLO39
4S-Bencil-4-[N-[(piridin-4"-il)metil]carbamoil-1 -[(3'S-íerc- butoxicarbonilamino-3'-[N-[(piridin-4''-il)metil]carbamoil]prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
Figure imgf000080_0001
(19a) Simpe. Rdto: 37% (a partir del compuesto del Ejemplo 33, Método B). Eluyente: CH2CI2:MeOH (9: 1 ). HPL: tR=1 .67 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.65 (t, 1 H, J=5.9 Hz, CONH), 8.46 (t, 1 H, J=5.9 Hz, CONH), 8.43 y 7.31 -7.04 (m, 14H, Ar, 3'-NH), 4.36-4.22 (m, 4H, NCH2,), 3.94 (m, 2H, 3'-H), 3.42 (d, 1 H, J= 13.7 Hz, 4-CH2), 3.30-3.18 (m, 2H, 1 '-H), 3.13 (d, 1 H, J= 13.7 Hz, 4-CH2), 3.12 (d, 1 H, J= 14.7 Hz, 4-CH2), 2.89 (d, 1 H, J= 14.7 Hz, 4-CH2), 2.07 (m, 1 H, 2'-H), 1 .88 (m, 1 H, 2'-H), 1 .39 (s, 9H, CHs 'Bu). 13C RMN (75 Mz, DMSO-d6): δ 173.1 , 170.1 (CONH), 167.0 (C2), 156.3 (OCON), 149.8, 149.7, 149.4, 148.9, 135.6, 130.5, 129.0, 127.8, 122.9, 122.6 (Ar), 79.5 (C ¾u), 63.9 (C4), 53.6 (C3), 45.1 (C3'), 42.2, 41 .7 (NCH2), 39.5 (Cr, 4-CH2), 30.9 (C2'), 28.7 (CH3 'Bu). MS (ES)+: 587.40 [M+H]+. EJEMPLO 40
4 ?-Bencil-4-[N-[(piridin-4"-il)metil]carbamoil]-1 -[3'S-íerc- butoxicarbonilamino-3'-[N-[(piridin-4''-il)metil]carbamoil]prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
Figure imgf000081_0001
(19b) Simpe. Rdto: 20% (a partir del compuesto del Ejemplo 33, Método B). Eluyente: CH2CI2:MeOH 10%. HPLC: tR=1 .67 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.46 y 7.30-6.97 (m, 13H, Ar), 7.76 (m, 1 H, CONH), 7.10 (m, 1 H, CONH), 5.43 (d, 2H, J=7.9 Hz, 3'-NH), 4.48-4.21 (m, 4H, NCH2), 3.57-3.17 (m, 7H, 1 '-H, 3'-H, 3-H, 4-CH2), 1 .50 (m, 2H, 2'-H), 1 .41 (s, 9H, *Bu). 13C RMN (CDCI3): δ 172.2, 171 .3 (CONH), 167.5 (C2), 155.7 (OCON), 149.9, 149.8, 147.5, 146.9, 135.2, 129.8, 129.0, 127.7, 122.8, 122.4 (Ar), 80.4 (C ¾u), 64.2 (C4), 52.6 (C3), 45.6 (C3'), 42.7, 42.4 (NCH2), 40.2 (4- CH2), 39.5 (C1 '), 32.4 (C3'), 28.4 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 587.33 [M+H]+.
EJEMPLO 41
4 ?,S-Bencil-4-[(N-piridin-3-il)carbamoil]-1 -[(3'S-íerc-butoxicarbonilamino- '-[(N-piridin-3-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000081_0002
Simpe. Rdto: 26% (a partir del compuesto del Ejemplo 33, Método B). Eluyente: CH2CI2:MeOH 10%. Proporción de diastereoisómeros, M/m= 5:2. HPLC: tR=3.27 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3, Diastereoisómero mayoritario): δ 9.60 (s, 1 H, CONH), 9.13 (s, 1 H, CONH), 8.74 (d, 1 H, J=2.5 Hz, 2-Py), 8.62 (d, 1 H, J=2.7 Hz, 2-Py), 8.36 (dd, 1 H, J=4.8, 1 .5 Hz, Py), 8.32,7.29 (m, 5H, Py), 7.33-7.14 (m, 5H, Ph), 5.82 (d, 1 H, J=7.6 Hz, 3'-NH), 4.68 (m, 1 H, 3'-H), 3.58-3.18 (m, 4H, 4-CH2, 1 '-H), 3.10 (d, 1 H, J=15.2 Hz, 3-H), 3.00 (d, 1 H, J=15.0 Hz, 3-H), 2.39 (m, 1 H, 2'-H), 1 .99 (m, 1 H, 2'-H), 1 .17 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (300 MHz, CDCI3): δ 170.3, 169.0 (CONH), 167.6 (C2), 156.5 (OCON), 146.4, 145.9, 144.7, 141 .4, 134.7, 133.9, 130.6, 130.2, 129.9, 129.2, 127.9, 126.9, 123.8, 123.4 (Ar), 80.8 (C 'Bu), 63.9 (C4), 52.6 (C3'), 47.2 (C3), 41.8 (C1 '), 37.3 (4-CH2), 33.8 (C2'), 28.13 (CH3 'Bu). MS (ES)+: 559.40 [M+H]+.
EJEMPLO 42
4S-Bencil-4-[(N^iridin-4-il)carbamoil]-^
-piridin-4-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000082_0001
(23a) Simpe. Rdto: 21 % (a partir del compuesto del Ejemplo 33, Método B). Eluyente: CH2CI2:MeOH 10%. HPLC: tR=3.26 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.41 (s, 1 H, CONH), 10.20 (s, 1 H, CONH), 8.44 (m, 8H, Py), 7.61 -7.20 (m, 6H, Ph, 3'-NH), 4.10 (m, 1 H, 3'-H), 3.42 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.32 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 4-CH2), 3.22 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.01 (m, 2H, 1 '-H), 2.98 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.24 (m, 1 H, 2'-H), 2.06 (m, 1 H, 2'-H), 1 .39 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CD3OD): δ 173.6, 172.7 (CONH), 169.0 (C2), 157.9 (OCON), 150.8, 150.7, 147.8, 147.5, 135.6, 131.3, 129.7, 128.6, 1 15.7, 1 15.2 (Ar), 80.8 (C ¾u), 66.4 (C4), 55.1 (C3'), 47.3 (C1 '), 45.4 (C3), 40.5 (4-CH2), 32.1 (C2'), 28.7 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 559.40 [M+H]+. EJEMPLO 43
4/?-Bencil-4-[(N-(piridin-4-il)carbam
-piridin-4-il)carbamoil]prop-1'-il]-2-oxoazetidina
Figure imgf000083_0001
(23b) Simpe. Rdto: 23% (a partir del compuesto del Ejemplo 33, Método B). Eluyente: CH2CI2:MeOH 10%. HPLC: tR=3.26 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.42 (s, 1 H, CONH), 10.26 (s, 1 H, CONH), 8.49 (m, 4H, Py), 7.65 (m, 2H, Py), 7.62 (m, 2H, Py), 7.36-7.26 (m, 6H, Ph, 3'-NH), 4.18 (m, 1 H, 3'-H), 3.47 (d, 1 H, J=14.1 Hz, 4-CH2), 3.37 (d, 1 H, J=14.1 Hz, 4-CH2), 3.27 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 3.08 (m, 2H, 1 '-H), 2.96 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.15 (m, 2H, 2'-H), 1 .45 (s, 9H, CH3 ¾u). 13C RMN (75 MHz, CD3OD): δ 173.7, 172.9 (CONH), 168.7 (C2), 158.0 (OCON), 150.8, 150.7, 147.9, 147.5, 131 .7, 131 .2, 129.7, 128.6, 1 15.9, 1 15.2 (Ar), 80.9 (C ¾u), 66.2 (C4), 54.9 (C3'), 45.3 (C3), 40.7 (C3'), 40.5 (4-CH2), 31 .8 (C2'), 28.7 (CH3 ¾u). MS (ES)+: 559.40 [M+H]+.
Síntesis de derivados dipeptídicos
Una disolución del correspondiente derivado dibenciloxicarbonil sustituido (0,2 mmol) en MeOH (17 mL) se hidrogena a temperatura ambiente y 15 psi de presión durante 7 h, utilizando como catalizador Pd-C (10%). Una vez separado el catalizador por filtración, se evapora el disolvente a sequedad. A continuación la correspondiente azetidinona dicarboxi sustituida (0,33 mmol) se disuelve en THF seco (4 mL) y se le adiciona de forma consecutiva H-L-Ala- OMe HCI ó H-L-Phe-OMe HCI (0,66 mmol), PyBOP (0,66 mmol, 336 mg) y TEA (1 ,32 mmol, 0.18 mL). Al cabo de 24-48 h de agitación a temperatura ambiente, se analiza por HPLC con objeto de determinar la proporción de los diastereoisómeros formados. Seguidamente se evapora el disolvente a sequedad. El crudo obtenido se disuelve en AcOEt y se lava con disolución de ácido cítrico al 10%, disolución de NaHCO3 al 10%, H2O y disolución saturada de NaCI. La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 y se evapora, purificándose el residuo resultante por cromatografía en columna de gel de sílice utilizando el sistema de eluyentes indicado en cada caso.
EJEMPLO 44
4S-Bencil-1 -[3'S-ferc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S- metoxicarbon i I )eti IJcarbamoi I] -2-oxoazetidi na
Figure imgf000084_0001
Simpe. Rdto: 28% (a partir del compuesto del Ejemplo 3). Eluyente: MeOH:DCM (1 :30). HPLC: tR=4.30 min (gradiente de 15% a 95% de A, en 5 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.38 (d, 1 H, J=7.3 Hz, 1 "'-NH), 7.53 (d, 1 H, J= 7.5 Hz, 1 "-NH), 7.31 -7.18 (m, 15H, Ar), 5.67 (d, 1 H, J=7.4 Hz, 3'-NH), 4.70 (q, 1 H, J= 7.5 Hz, 1 "'-H), 4.52 (q, 1 H, J=7.3 Hz, 1 "-H), 4.34 (m, 1 H, 3'-H), 3.72 (s, 4H, OMe, 1 '-H), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.48 (d, 1 H, J=14.8 Hz, 4-CH2), 3.38 (d, 1 H, J=14.8 Hz ,4-CH2), 3.18 (m, 1 H, 1 '-H), 2.98 (d, 1 H, J=15.1 Hz, 3-H), 2.90 (d, 1 H, J=15.1 Hz, 3-H), 2.22 (m, 1 H, 2'-H), 2.04 (m, 1 H, 2'-H), 1 .52 (d, 3H, J=7.2 Hz, 2"'-H), 1 .38 (d, 3H, J=7.3 Hz, 2"-H), 1 .37 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCIs): 173.4 (COO), 172.9 (COO), 171.1 (CON'"), 170.8 (CON"), 169.6 (C2), 155.7 (OCON), 135.0, 130.4, 128.9, 127.5 (Ar), 79.9 (C, 'Bu), 63.6 (C4), 52.6 (OMe), 52.55 (OMe), 52.5 (C3'), 48.7 (CT), 48.3 (C1 "), 46.9 (C3), 40.3 (C1 '), 37.2 (4-CH2), 33.6 (C2'), 28.5 (CH3 *Bu), 17.7 (C2"), 17.1 (C2'"). MS (ES)+: 577.47 [M+H]+. Masa exacta calculada para C28H 0N O9: 576.27953; encontrada: 576.27722. EJEMPLO 45
4 ?-Bencil-1 -[3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'-[yV-[(1
metoxi carbón i I )eti IJcarbamoi I] prop-1 ' -i I] -4-[/V-[( 1 " ' S
metoxicarbon i I )eti IJcarbamoi I] -2-oxoazetidi na
Figure imgf000085_0001
Simpe. Rdto: 12% (a partir del compuesto del Ejemplo 3). Eluyente: MeOH:DCM (1 :30). HPLC: tR=4.28 min (gradiente de 15% a 95% de A, en 5 min). Proporción de diastereoisómeros M,m =1 :0.7. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, diastereoisómero mayoritario): δ 7.62 (sa, 1 H, NHCO), 7.31 -7.15 (m, 15H, Ar), 7.04 (sa, 1 H, NHCO), 5.43 (d, 1 H, J= 6.6 Hz, 3'-NH), 4.52 (m, 2H, 1 "-H, 1 "'-H), 4.34 (m, 1 H, 3'-H), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.71 (s, 3H, OMe), 3.52 (m, 1 H, 1 '-H), 3.38 (m, 2H, 4-CH2), 3.25 (m, 1 H, 1 '-H), 3.17 (m, 1 H, 1 '-H), 3.02 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 3-H), 2.97 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 3-H), 2.05 (m, 1 H, 2'-H), 1 .84 (m, 1 H, 2'-H), 1 .41 (s, 9H, CH3 'Bu), 1 .40 (d, 3H, J=6.8 Hz, CH3), 1 .32 (d, 3H, J=7.2 Hz, CH3). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 173.6 (COO), 173.1 (COO), 171.2 (CON), 171 .1 (CON), 167.4 (C2), 155.7 (OCON), 134.9, 130.0, 128.9, 127.5 (Ar), 80.2 (C, ¾u), 63.6 (C4), 52.8 (OMe), 52.5 (OMe), 52.4 (C3'), 48.5 (C1 '"), 48.3 (C1 "), C1 '"), 47.1 (C3), 39.1 (C1 '), 37.1 (4-CH2), 32.1 (C2'), 28.4 (CH3 ¾u), 18.1 (C2"), 17.6 (C2'"). MS (ES)+: 577.47 [M+H]+.
EJEMPLO 46
4 ?-Bencil-1 -[3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'-[yV-[(1"S-metoxicarbonil-2'- fenil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S-metoxicarbonil- 2'fenil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
Figure imgf000086_0001
Simpe. Rdto: 12% (a partir del compuesto del Ejemplo 3). Purificación HPLC sem ¡preparativo (gradiente de 50% a 60% de A, en 30 min). HPLC: tR=15.13 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.49 (m, 2H, NHCO), 7.28-7.14 (m, 15H, Ar), 5.38 (d, 1 H, J= 6.6 Hz, NHBoc), 4.91 (m, 1 H, 1 "-H), 4.83(m, 1 H, 1 "'-H), 4.33 (m, 1 H, 3'-H), 3.75 (s, 3H, OMe), 3.69 (s, 3H, OMe), 3.34 (m, 2H, 1 '-H), 3.31 (m, 2H, 2"-H), 3.17 (m, 2H, D 2"'-H, 4-CH2), 3.07 (m, 2H, 2"'-H, 4-CH2), 2.93 (m, 1 H, 1 '-H), 2.76 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 3-H), 2.46 (d, 1 H, J=14.7 Hz, 3-H), 1 .86 (m, 1 H, 2'-H), 1 .60 (m, 1 H, 2'-H), 1.43 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.7 (COO), 171 .8 (COO), 171 .6 (2C, CON), 167.4 (CON), 155.8 (CON), 136.3, 136.2, 130.1 , 129.4, 129.3, 128.85, 128.8, 128.7, 127.4, 127.3, 127.2 (C, Ar), 80.3 (C, 'Bu), 63.3 (C4), 53.6 (2C, C1 " y C1 '"), 52.8 (OMe), 52.4 (OMe), 52.0 (C3'), 47.5 (C3), 38.7 (4-CH2), 38.1 (C1 '), 37.9, 37.3 (2C, C2" y C2'"), 31.3 (C2'), 28.4 (CH3 *Bu). MS (ES)+: 729.53 [M+H]+. Masa exacta calculada para C40H48N4O9: 728.34213; encontrada: 728.34342.
EJEMPLO 47
4S-Bencil-1 -[3'S-íerc-butoxicarbonilamino-3'-[yV-[(1"S-metoxicarbonil-2'- fenil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S-metoxicarbonil- 2'fenil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
Figure imgf000087_0001
Simpe. Rdto: 12% (a partir del compuesto del Ejemplo 3). Purificación HPLC sem ¡preparativo (gradiente de 50% a 60% de A, en 30 min). HPLC: tR=15.47 min (gradiente de 5% a 100% de A, en 20 min). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8.44 (d, 1 H, J= 7.6 Hz, NHCO), 7.56 (d, 1 H, J= 7.6 Hz, NHCO), 7.32-7.14 (m, 15H, Ar), 5.66 (d, 1 H, J= 7.1 Hz, NHBoc), 5.04 (m, 1 H, 1 "-H), 4.76 (m, 1 H, 1 "- H), 4.29 (m, 1 H, 3'-H), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.70 (s, 3H, OMe), 3.63 (m, 2H, 1 '-H), 3.38 (m, 2H, 4-CH2), 3.35 (m, 2H, 2"-H), 3.16 (dd, 1 H, J=13.9, 5.8 Hz, 2"'-H), 3.04 (m, 1 H, 1 '-H), 2.96 (dd, 1 H, J=13.5, 8.2 Hz, 2"'-H), 2.60 (dd, 1 H, J=14.8 Hz, 3-H), 2.10 (dd, 1 H, J=14.8 Hz 3-H), 1 .92 (m, 2H, 2'-H), 1 .41 (s, 9H, CH3 'Bu). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 172.22 (COO), 171.79 (COO), 171.34 (CON), 171 .09 (CON), 169.69 (CON), 155.65 (CON), 137.59, 136.41 , 135.00, 130.33, 129.44, 129.26, 128.85, 128.71 , 128.68, 127.42, 127.15, 126.98 (C, Ar), 79.86 (C, *Bu), 63.45 (C4), 54.23, 53.41 (2C, C1 " y C1 '"), 52.46 (OMe), 52.41 (OMe), 51 .87 (C3'), 46.88 (C3), 40.22 (C1 '), 37.87 (4-CH2), 36.61 , 36.40 (2C, C2" y C2'"), 33.43 (C2'), 28.49 (CH3 *Bu). MS (ES)+: 729.53 [M+H]+. Masa exacta calculada para C40H48N4O9: 728.34213; encontrada: 728.34220.
EJEMPLO 48
4 ?-Bencil-1 -[4'S-[(yV-benciloxicarbonil-yV-metil)amino-4'- metoxicarbonil]but-1'-il]-4-[N-[(1"S-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2- oxoazetidina
Figure imgf000088_0001
A una disolución del derivado 4-ferc-butoxicarbonil sustituido del Ejemplo 10 (0, 10 mmol, 55 mg) en CH2CI2 (1 ml_) se le adiciona TFA (0,3 ml_). Tras 2 h de reacción a temperatura ambiente se evapora el disolvente a sequedad, coevaporando varias veces con CH2CI2. A continuación la correspondiente azetidinona 4-carbox¡ sustituida (0, 1 1 mmol, 52 mg) se disuelve en THF seco (1 ,2 ml_) y se le adiciona de forma consecutiva H-L-Ala-OMe HCI (0,22 mmol, 30 mg), PyBOP (0,22 mmol, 1 12 mg) y TEA (0,44 mmol, 61 μΙ_). Al cabo de 24 h de agitación a temperatura ambiente, se analiza la proporción de diastereoisómeros formados por HPLC. Seguidamente se evapora el disolvente a sequedad. El crudo obtenido se disuelve en AcOEt y se lava con disolución de ácido cítrico al 10%, disolución de NaHCO3 al 10%, H2O y disolución saturada de NaCI. La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 y se evapora, purificándose el residuo resultante por HPLC semipreparativo (gradiente de 50% a 60% de A, en 30 min) obteniéndose 20 mg (33%) de un simpe con las características que se describen a continuación. HPLC: tR = 9.51 min (gradiente de 50% a 60% de A, en 15 min). Proporción de rotámeros M,m= 2: 1 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7.35-7.15 (m, 10H, Ph, Z), 6.31 (d, 1 H, J=7.4 Hz, NHCO, M), 6.20 (d, 1 H, J=7.4 Hz, NHCO, m), 5.14 (s, 2H, OCH2), 4.81 (dd, 1 H, J=9.8, 5.0 Hz, 4'-H), 4.56 (m, 1 H, 1 "-H), 3.72 (s, 3H, OMe, M), 3.71 (s, 3H, OMe, M), 3.64 (s, 3H, OMe, m), 3.37 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 3-H), 3.25 (m, 2H, 4-CH2), 3.20 (d, 1 H, J=14.0 Hz, 3-H), 2.98 (s, 2H, 1 '-H), 2.86 (s, 3H, NCH3), 1 .94 (m, 1 H, 2Ή), 1.76 (m, 3H, 3'-H, 2'-H), 1 .32 (d, 3H, J=7.1 Hz, CH3, M), 1 .29 (d, 3H, J=7.1 Hz, CH3, m). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 173.1 (COO), 171.9 (COO, M), 171 .2 (COO, m), 170.65 (CON, m), 170.6 (CON, m), 166.5 (C2, M), 166.3 (C2, m), 157.0 (OCON, M), 156.9 (OCON, m), 136.7, 135.2, 135.1 , 130.0, 129.9, 129.0, 128.9, 128.7, 128.6, 128.2, 128.1 , 127.9, 127.7, 127.6 (Ar), 67.7 (OCH2, M), 67.6 (OCH2, m), 63.7 (C4), 58.7 (C4\ m), 58.3 (C4', M), 52.8 (OMe, m) 52.7 (OMe, M), 52.3 (OMe, M), 52.2 (OMe, m), 48.4 (C1 ", M), 48.3 (C1 ", m), 46.9 (C3, m), 46.7 (C3, M), 42.05 (C1 \ m), 42.0 (C1 ', M), 39.9 (4-CH2, m), 39.8 (4- CH2, M), 31 .4 (NMe, m), 30.6 (NMe, M), 26.9 (C3', m), 26.5 (C3', M), 25.4 (C2\ m), 25.2 (C2', M), 18.0 (CH3, Ala). MS (ES)+: 590.40 [M+Na]+.
EJEMPLO 49
4 ?,S-Bencil-1 -[(4'S-metilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N-[(1 "S- metoxicarbon i I )eti IJcarbamoi I] -2-oxoazetidi na
Figure imgf000089_0001
Una disolución del correspondiente derivado 4-benciloxicarbonil sustituido del Ejemplo 48 (0,2 mmol) en MeOH (17 mL) se hidrogena a temperatura ambiente y 15 psi de presión durante 7 h, utilizando como catalizador Pd-C (10%). Una vez separado el catalizador por filtración, se evapora el disolvente a sequedad obteniéndose un simpe con estas características. Rdto: 78%. HPLC: tR=7.81 , 7.95 min (gradiente de 2% a 95% de A, en 15 min). Proporción de diastereoisómeros (4S,4'S, 1 "S):(4R,4'S, 1 "S)= 27:73. 1H RMN (400 MHz, CDCIs): δ 7.31 -7.17 (m, 5H, Ph), 6.64 (d, 1 H, J=7.4 Hz, NHCO, M), 6.55 (d, 1 H, J=7.4 Hz, NHCO, m), 4.56 (m, 2H, 4'-H, 1 "-H,), 3.75 (s, 3H, OMe, M), 3.74 (s, 3H, OMe, m), 3.73 (s, 6H, OMe), 3.40 (d, 1 H, J=14.2 Hz, 4-CH2 M), 3.26 (m, 3H, 1 '-H, 4-CH2), 3.23 (d, 1 H, J=14.1 Hz, 4-CH2 M), 3.17 (m, 1 H, 1 '-H), 3.08 (d, 1 H, J = 14.7 Hz, 3-H m), 2.96 (s, 2H, 3-H M), 2.93 (d, 1 H, J = 14.7 Hz, 3-H m), 2.36 (s, 3H, NCH3, m), 2.35 (s, 3H, NCH3, M), 1 .85-1 .73 (m, 2H, 2'-H), 1 .71 -1.58 (m, 2H, 3'-H), 1 .41 (d, 3H, J=7.2 Hz, 2"-H, m), 1 .33 (d, 3H, J=7.2 Hz, 2"-H, M). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): 175.1 (COO, M), 174.9 (COO, m), 173.1 (COO, M), 171 .0 (COO, m), 171 .0 (CON, m), 170.8 (CON, M), 166.8 (C2, m), 166.6 (C2, M), 135.0, 129.9, 129.8, 128.7, 128.6, 127.4 (Ar), 63.6 (C4, m), 63.5 (C4, M), 62.6 (C4\ m), 62.4 (C4\ M), 52.7 (OMe), 52.0 (OMe, m), 51 .9 (OMe, M), 48.6 (C1", m), 48.4 (C1", M), 46.9 (C3, M), 46.8 (C3, m), 42.0 (C1\ m), 41.9 (C1', M), 39.3 (4-CH2, m), 39.3 (4-CH2, M), 34.7 (NMe, m), 34.6 (NMe, M), 30.7 (C3', M), 30.5 (C3', m), 25.0 (C2\ m), 24.9 (C2',M), 18.1 (CH3, m), 18.0 (CH3, M). MS (ES)+: 434.38 [M+H]+.
EJEMPLO 50
4/?-Bencil-1-[(4'S-benziloxicarbonilami
"S-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
Figure imgf000090_0001
Simpe. Rdto: 27% (a partir del compuesto del Ejemplo 13). HPLC-MS: tR=13.02 min (gradiente de 2% a 95% de A, en 15 min). Proproción de isómeros (4R,4'S,1"S):(4S,4'S,1"S)=16:1. 1H RMN (300 MHz, CDCI3, isómero mayoritario): δ 7.10-7.27 (m, 10H, Ar), 6.30 (d, 1H, J=7.1 Hz, 4'-NH), 5.56 (d, 1H, J=8.0 Hz, 1"-NH), 5.03 (s, 2H, OCH2), 4.48 (quint, 1H, J=7.1 Hz , 4'-H), 4.30 (m, 1H, 1"-H), 3.67 (m, 3H, OCH3), 3.63 (m, 3H, OCH3), 3.22-3.07 (m, 4H, 4-H, 1'-H), 2.91 (s, 2H, 4-CH2), 1.79-1.60 (m, 4H, 2'-H, 3'-H), 1.38 (d, 3H, J=7.2 Hz , 2"-H, m), 1.25 (d, 3H, J=7.2 Hz , 2"-H, M). MS (ES)+: 554.19 [M+H]+.
EJEMPLO 51
4?,S-Bencil-1 -[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4- [N-[(1"?-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
Figure imgf000090_0002
Simpe. Rdto: 44% (a partir del compuesto del Ejemplo 13). HPLC-MS: tR=12.98 min (gradiente de 2% a 95% de A, en 15 min). Proproción de isómeros (4R,4'S, 1 "R):(4S,4'S, 1 "R)=2: 1 . 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7.27- 7.09 (m, 10H, Ar), 6.44 (d, 1 H, J=6.9 Hz, 4'-NH, M), 6.36 (d, 1 H, J=7.0 Hz, 4'- NH, m), 5.50 (d, 1 H, J=8.1 Hz, 1 "-NH), 5.03 (s, 2H, OCH2), 4.45 (m, 1 H, 4'-H), 4.29 (m, 1 H, 1 "-H), 3.67 (s, 3H, OCH3), 3.64 (s, 3H, OCH3), 3.84-3.34 (m, 6H, 1 '-H, 3-H, 4-CH2), 1 .90-1 .50 (m, 4H, 2'-H, 3'-H), 1 .32 (d, 3H, J=7.2 Hz , 2"-H, M), 1 .31 (d, 3H, J=7.2 Hz , 2"-H, m). MS (ES)+: 554.1 1 [M+H]+. Bloqueo de Canales TRPM8
Las medidas de la eficacia de los compuestos ejemplo 1 -ejemplo 51 se han llevado a cabo empleando la línea celular de ovario de hámster chino (CHO) que expresa de forma estable la proteína TRPM8. Las células fueron cultivadas en monocapa en medio EMEM (Earle's mínimum essential médium with Earle's salts, Invitrogen) suplementado con FBS al 10%, L-glutamina 2 mM, solución de penicilina-estreptomicina al 1 % y 0,4 pg/mL del antibiótico Geneticina (Sigma) y mantenidas a 37 °C en una atmósfera humidificada con 5% de CO2. Para determinar la eficacia de los compuestos sobre el canal TRPM8 se han llevado a cabo ensayos de fluorimetria de Ca2+. Las células se siembran en placas de 96 pocilios a una densidad de 25.000 células/pocilio, transcurridos 3 días a partir de la siembra, se retira el medio y se añaden 100 μΙ de la sonda fluorescente Fluo-4NW a una concentración de 5μΜ en presencia de 0,02 % de ácido plurónico, tras 60 minutos de incubación a 37 °C en una atmósfera humidificada con 5% de CO2 se mide la fluorescencia en un lector de microplacas (POLARstar Omega) con una configuración de 485 nm para la excitación y 520 nm para la emisión, durante 20 ciclos. Durante los primeros 3 ciclos se mide la fluorescencia basal y a continuación se añade 1 μΙ de los distintos compuestos (ejemplos 1 -51) a una concentración final de 5 μΜ, tras 7 ciclos de medida de fluorescencia, se añade a todos los pocilios 10 μΙ de mentol para obtener una concentración final de 100 μΜ. En los pocilios que son utilizados como controles negativos se añade 1 μΙ de AMTB (Λ/-(3- Aminopropyl)-2-[(3-methylphenyl)methoxy]-/V-(2-thienylmethyl)benzamide hydrochloride; Tocris Bioscience) para obtener una concentración final de 10 μΜ, para bloquear los canales TRPM8. Tabla 1. Resultados de la actividad de los compuestos sobre TRPM8
Ejemplo % Bloqueo a 50 μΜ % Bloqueo a 5 μΜ
EJEMPLO 1 - 1,01±1,68
EJEMPLO 2 - 0,88±0,21
EJEMPLO 3 90,26±1,58 75,40±9,93
EJEMPLO 4 89,34±2,27 71,44±2,48
EJEMPLO 5 91,02±3,34 73,32±2,13
EJEMPLO 6 122,25±4,64 74,15±17,04
EJEMPLO 8 82,17±29,00 36,86±10,85
EJEMPLO 9 - 8,16±13,90
EJEMPLO 10 88,94±13,13 19,39±16,99
EJEMPLO 11 - 1,99±7,00
EJEMPLO 12 - 50,40±17,82
EJEMPLO 13 - 24,91±17,80
EJEMPLO 14 - 4,37±23,85
EJEMPLO 15 - 95,55±2,48
EJEMPLO 16 - 87,91 ±6,97
EJEMPLO 17 - 88,66±20,12
EJEMPLO 19 25,69±17,41 8,87±7,12
EJEMPLO 20 - 103,64±3,13
EJEMPLO 21 100,38±3,50 56,89±3,55
EJEMPLO 22 91,78±5,09 86,49±5,17
EJEMPLO 23 76,89±12,62 50,32±8,34
EJEMPLO 24 75,31±13,52 66,23±17,90
EJEMPLO 25 - 97,48±5,83
EJEMPLO 26 - 93,79±7,97
EJEMPLO 27 - 85,81±16,16
EJEMPLO 28 - 77,79±13,44
EJEMPLO 29 - 68,73±12,78
EJEMPLO 30 99,11±4,15 60,08±23,35
EJEMPLO 31 - 85,23±7,01
EJEMPLO 32 84,16±8,74 37,84±12,33 EJEMPLO 33 - 29,88±18,48
EJEMPLO 34 - 7,39±8,37
EJEMPLO 35 69,98±18,60 41 , 10±8,87
EJEMPLO 36 70,38±15,23 46,49±10, 18
EJEMPLO 37 103,79±4,93 5,05±3,84
EJEMPLO 38 108,06±2,33 4,74±3,45
EJEMPLO 39 42, 17±1 1 ,71 35,31 ±8,70
EJEMPLO 40 39,28±14,67 15,91 ±22,29
EJEMPLO 41 64,56±13, 16 43,62±10,44
EJEMPLO 42 52,32±7,59 43,05±14,29
EJEMPLO 43 43,52±9,82 38,54±12,36
EJEMPLO 44 - 3,82±15,23
EJEMPLO 46 99,32±3,36 58,91 ±6,24
EJEMPLO 47 - 2,28±4,71
EJEMPLO 50 - 1 1 ,20±9,30
EJEMPLO 51 - 7,80±14,99
Ensayos de "Patch-Clamp"
Para la determinación de la IC50 de los ejemplos seleccionados se emplearon técnicas electrofisiológicas empleando el método de "patch-clamp" con la configuración "whole-cell". Las células fueron sembradas a una densidad de 250000 células/pocilio sobre cubres redondos de vidrios (18 mm de diámetro, grosor 0) en placas de 12 pocilios (Costar) y cultivadas en EMEM. Transcurridas 24 horas, los cubres se montaron en una cámara de registro (WPI) y fueron continuamente perfundidos (1 mL/min) con HBSS (NaCI 140 mM, KCI 4 mM, MgCI2 1 mM, CaCI2 1 ,8 mM, D-glucosa 5 mM, Hepes 10 mM (todos de Sigma), pH 7,4) a ~ 22 °C. La actividad de los canales TRPM8 fue evocada mediante la aplicación de pulsos cortos de 10 s de mentol 100 μΜ, usando un sistema de perfusión activado por gravedad. Los compuestos disueltos en el tampón HBSS a distintas concentraciones (de 0,1 a 100 μΜ) fueron aplicados en la cámara de registro cerca de las células conservando la misma distancia entre las células y el sistema de perfusión en todas las condiciones de medida. Las puntas de pipeta para la realización de las medidas se prepararon a partir de capilares de borosilicato (World Precisión Instruments, Sarasota, FL, USA), utilizando un estirador de pipetas (P-97, Sutter Instruments, Novato, CA, USA) para obtener una resistencia entre 2-4 ΜΩ cuando se rellenan con solución interna (KCI 144 mM, MgCI2 2mM, EGTA 5mM, y 10 mM HEPES, (todos de Sigma), pH 7.2).
Las corrientes y los voltajes fueron registrados utilizando la configuración de corriente total con una frecuencia de 10 kHz (EPC10 amplifier with Pulse software; HEKA Electronics, Lambrecht, Germany) y analizados utilizando el software PulseFit 8.54, (HEKA, Molecular Devices; WinASCD, G. Droogmans, Katholieke Universiteit Leuven, Leuven, Belgium) y Origin 7.5 (OriginLab Corp., Southampton MA, USA).
Las distintas corrientes, causadas por la estimulación de las células con 100 μΜ de mentol en presencia de las distintas concentraciones de los compuestos son sustraídas de la corriente causada por la aplicación con 100 μΜ de mentol en ausencia de compuestos. Los resultados obtenidos se ajustaron a una sigmoide con el paquete de software del programa informático GraphPad Prism. Los resultados se muestran en la FIG. 1 .
Actividad antitumoral
Los compuestos de los ejemplos 20 y 28 se ensayaron en 60 líneas celulares tumorales humanas, que incluyen líneas de leucemia, melanoma y tumores de pulmón, colon, cerebro, ovario, mama, próstata y riñon.
Las líneas celulares de tumores humanas del panel de detección del cáncer se cultivan en medio RPMI 1640 que contiene suero bovino fetal al 5% y 2 mM L-glutamina. Para un experimento de selección típico, las células se inoculan en placas de microtitulación de 96 pocilios a densidades que van desde 5.000 a 40.000 células / pocilio dependiendo del tiempo de duplicación de las líneas celulares. Después de la inoculación de células, las placas se incuban a 37 °C, 5% CO2, 95% de aire y humedad relativa del 100%, durante 24 h antes de la adición de los fármacos experimentales. Después de 24 h, dos placas de cada línea celular se fijan in situ con ácido tricloroacetico (TCA), para tener una medida de la población de células para cada línea celular en el momento de la adición del fármaco (Tz). Los compuestos a ensayar se solubilizan en dimetilsulfóxido a 400 veces la concentración de prueba máxima final deseada y se almacenan congelados antes de su uso. En el momento de la adición del fármaco, una alícuota del concentrado congelado se descongela y se diluye hasta dos veces la concentración de prueba máxima final deseada con medio completo que contiene 50 g /ml_ de gentamicina. Adicionalmente, se hacen diluciones para proporcionar un total de cinco concentraciones de compuesto más el control. Alícuotas de 100 μΙ de las diferentes diluciones de compuesto se añaden a los pocilios adecuados que ya contienen 100 μΙ de medio, dando lugar a las concentraciones finales requeridas.
Después de la adición de los compuestos, las placas se incuban durante un período adicional de 48 h a 37 °C, 5% CO2, 95% de aire, y humedad relativa del 100%. El ensayo se termina mediante la adición de TCA frío. Las células se fijan in situ por la adición suave de 50 μΙ de 50% (w/v) TCA frío (concentración final, 10% TCA) y se incuban durante 60 minutos a 4 °C. Se desecha el sobrenadante, y las placas se lavan cinco veces con agua del grifo y se secan al aire. Se añade una disolución de sulforodamina B (SRB) en 1 % de ácido acético, (100 μΙ) a 0,4% (w/v) a cada pocilio, y las placas se incuban durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de la tinción, el tinte no unido se elimina por lavado cinco veces con ácido acético 1 % y las placas se secan al aire. El colorante unido se solubiliza posteriormente con 10 mM de Trizma base, y se lee la absorbancia en un lector de placas automatizado a una longitud de onda de 515 nm. Para las células en suspensión, la metodología es la misma excepto que el ensayo se termina mediante fijación de células sedimentadas en el fondo de los pocilios mediante la adición lenta de 50 μΙ de 80% TCA (concentración final, 16% TCA). Utilizando las siete mediciones de absorbancia a tiempo cero, (Tz), como control del crecimiento, (C), y el crecimiento en presencia de las cinco concentraciones de los compuestos (Ti)], se calcula el porcentaje de crecimiento final para cada una de las concentraciones de compuesto y el porcentaje de inhibición del crecimiento tumoral.
Tabla 2. Inhibición del crecimiento de células tumorales
Linea celular tumoral Inhibición del cecimiento celular (%)
Figure imgf000096_0001
inhibición del crecimiento de las células tumorales indicadas, tras adición del compuesto a una concentración de 10 μΜ. bSolo se indican inhibiciones superiores al 70%.

Claims

REIVINDICACIONES
1 . Compuesto de fórmula (I)
Figure imgf000097_0001
(I)
donde:
R1 se selecciona de entre alquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, aralquilo (Ci-C4), sustituido o no sustituido, heteroaralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, arilo, sustituido o no sustituido, y heteroarilo, sustituido o no sustituido,;
R2 se selecciona de entre un grupo -OR6 y -NR7R8;
R3 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido,; R4 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, aralquilo (Ci-C4), sustituido o no sustituido, heteroaralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, arilo, sustituido o no sustituido, y -COR9;
R5 se selecciona de -NR11R10;
R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce) y aralquilo (Ci-C4), heteroarilo, heteroarilalquilo(Ci-C ) y -CH(R13)COOR12;
R6, R11, R13 y R14 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce), sustituido o no sustituido, aralquilo (Ci-C4), sustituido o no sustituido, heteroaralquilo(Ci-C4), sustituido o no sustituido, y arilo, sustituido o no sustituido,;
R7 y R12 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-Ce), sustituido o no sustituido,;
R9 se selecciona de entre -OR6 y -NR7R8;
R10 se selecciona entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce), sustituido o no sustituido, y aralquilo (Ci-C4), sustituido o no sustituido, COOR14; y
n es 1 , 2, 3 o 4; o cualquiera de sales farmacéuticamente aceptables o esteroisómeros de los mismos.
2. Compuesto según la reivindicación 1 , donde R1 es alquilo(Ci-C4) o aralquilo
3. Compuesto según la reivindicación 2, donde R1 es metilo o bencilo.
4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R2 es - OR6 y R6 es hidrógeno, alquilo(Ci-C4) o bencilo, preferiblemente hidrógeno, metilo, tere-butilo o bencilo.
5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R2 es - NR7R8; R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce), aralquilo (Ci-C4), heteroarilo, heteroaralquilo(Ci-C4) y -CH(R13)COOR12 y/o R7 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-C4).
6. Compuesto según la reivindicación anterior, donde R7 es hidrógeno o metilo.
7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6, donde R8 se selecciona entre bencilo, heteroarilo, heteroaralquilo (d) y - CH(R13)COOR12; R13 es metilo o bencilo y/o R12 es metilo.
8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde R3 es hidrógeno o metilo.
9. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde R4 es aralquilo(Ci-C ) o -COR9
10. Compuesto según la reivindicación 9, donde R es bencilo.
11. Compuesto según la reivindicación 9, donde R4 es -COOR14, R14 es hidrógeno, alquilo(Ci-C4) o bencilo, preferiblemente hidrógeno, metilo, tere- butilo o bencilo.
12. Compuesto según la reivindicación 9, donde R4 es -CONR7R8; R7 se selecciona de entre hidrógeno y alquilo(Ci-C4), preferiblemente R7 es H, y/o R8 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo(Ci-Ce), aralquilo(Ci-C4), heteroarilo, heteroaralquilo(Ci-C ) y -CH(R13)COOR12 y, preferiblemente R8 es bencilo o -CH(R13)COOCH3, con R13 seleccionado entre bencilo, metilo, heteroaralquilo(d) y heteroarilo.
13. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde R5 es -NR11R10, donde R11 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, metilo y bencilo; y/o R10 se selecciona entre hidrógeno, metilo, bencilo y COOR14; donde R14 es metilo, tere-butilo o bencilo.
14. Compuesto según la reivindicación 1 , seleccionados de la lista que consiste en:
4R,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1-[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benziloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetid¡na
4R,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1-[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- metiloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-(3R,SJ-metil-2-oxoazetidina
4R,S-Metil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- benciloxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina 4R,S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-benciloxicarbonilamino-3'-ierc- butoxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Metil-4-metoxicarbonil-1 -[(3'S-benciloxicarbonilamino-3'-ierc- butoxicarbonil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-1 -[4'S-(/V-Benciloxicarbonil-/V-metil)amino-4'- metoxicarbonil]but-1 -il]-4-ierc-butoxicarbonil-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-1 -[4'S-[(/V-metil)amino-4'-metoxicarbonil]but-1 '-il]-4-ierc- butoxicarbonil-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(4'S-ierc-butoxicarbonilamino-4'- benciloxicarbonil)but-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-N-[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4- ferc-butoxicarbonil-2-oxoazetidina
4'S-N-[(4'-Benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4R;S-ierc- butiloxicarbonil-4-metil-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-3R-metil-1 -[(2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-3R-metil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-4-Bencil-4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Benciloxicarbonil-3S,4S-dimetil-1 -[(2'R-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-benciloxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-]-(4-benciloxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina 4R-Bencil-4-benciloxicarbonil-3R-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-metoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-terc-butoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3-fenil)prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-3S-metil-4-metoxicarbonil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop-1 '- il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-dibencilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-bencilamino-3'-fenil)prop- 1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-ferc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-amino-3'-fenil)prop-1 -il]-2- oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[2'S-benciloxicarbonilamino-3'- fenil)prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-ierc-butoxicarbonil-3S-metil-1 -[(2'S-ierc-butoxicarbonilamino-3- fenil)prop-1 '-il]-4-oxoazetidina
4R,S-Bencil-4-carboxi-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-carboxi)prop-1 '-il]- 2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-1 -[4'S-tert-butoxicarbonilamino-4'-carboxi)but-1 '-il]-4-carboxi-2- oxoazetidina
4S-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[(N- bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R;S-Bencil-1 -[4'S-tert-butoxicarbonilamino-4'-[(N-bencil)carbamoil]but-1 '- il]-4-[(N-bencil)carbamoil]-2-oxoazetidina
4S-4-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-3S-metil-1 -[3' S-ferc- butoxicarbonilamino-3'-[(N-bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina 4R-4-Bencil-4-[(N-bencil)carbamoil]-3R-metil-1 -[3'S-ierc- butoxicarbonilamino-3'-[(N-bencil)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina 4S-Bencil-4-[N-[(pindin-4"-il)metil]carbamoil-1 -[(3'S-ierc- butoxicarbonilamino-3'-[N-[(pindin-4''-il)metil]carbamoil]prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4R-Bencil-4-[N-[(pindin-4"-il)metil]carbamoil]-1 -[3'S-ierc- butoxicarbonilamino-3'-[N-[(pindin-4''-il)metil]carbamoil]prop-1 '-il]-2- oxoazetidina
4R;S-Bencil-4-[(N-pindin-3-il)carbamoil]-1 -[(3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'- [(N-piridin-3-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-4-[(N-pindin-4-il)carbamoil]-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-[(N- piridin-4-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-4-[(N-(pindin-4-il)carbamoil]-1 -[3'S-tert-butoxicarbonilamino-3'-
[(N-piridin-4-il)carbamoil]prop-1 '-il]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[/\/-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 "S-metoxicarbonil-2'- fenil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S-metoxicarbonil- 2'fenil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4S-Bencil-1 -[3'S-ierc-butoxicarbonilamino-3'-[/V-[(1 "S-metoxicarbonil-2'- fenil)etil]carbamoil]prop-1 '-il]-4-[/V-[(1 '"S-metoxicarbonil- 2'fenil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[4'S-[(/V-benciloxicarbonil-/V-metil)amino-4'-metoxicarbonil]but- 1 '-il]-4-[N-[(1 "S-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R,S-Bencil-1 -[(4'S-metilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N-[(1 "S- metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina
4R-Bencil-1 -[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N- [(1 "S-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina, y 4R;S-Bencil-1 -[(4'S-benziloxicarbonilamino-4'-metoxicarbonil)but-1 '-il]-4-[N- [(1 "R-metoxicarbonil)etil]carbamoil]-2-oxoazetidina.
15. Procedimiento de obtención del compuesto de fórmula (I) cuando R2 es - OR6, descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 14, que comprende la delación en medio básico del compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000103_0001
(II)
donde: R1, R3, R4, R5, R6 y n se han descrito en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 14.
16. Procedimiento de obtención del compuesto de fórmula (I), cuando R2 es - NR7R8, descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 5 a 14, que comprende la reacción de aminas de fórmula R8R7NH con un derivado de ácido carboxílico del compuesto de fórmula (I) junto con un agetne de acoplamiento, donde el derivado de ácido carboxílico es un compuesto de fórmula (I) cuando R2 es -OH y R7 y R8 se han descrito en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 5 a 14.
17. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
18. Uso del compuesto de fórmula (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para la elaboración de un medicamento.
19. Uso del compuesto de fórmula (I) descrito según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad asociada a alteraciones de los canales termosensoriales, preferiblemente de los canales TRPM8.
20. Uso según la reivindicación 19, donde dichas enfermedades se seleccionan de entre inflamación, trastornos pulmonares, enfermedades oculares, hipersensibilidad gastrointestinal, sensibilidad en la piel, neurodegeneración y cáncer.
21 . Uso según la reivindicación 20, donde los trastornos pulmonares son problemas del sistema respiratorio seleccionado entre tos y asma.
22. Uso según la reivindicación 20, donde la sensibilidad en la piel se selecciona entre prurito, dermatitis atópica, alergénica y psoriasis.
23. Uso según la reivindicación 20, donde el cáncer se puede seleccionar de entre melanoma, leucemia, próstata, riñon, mama, páncreas, ovario, pulmón, colon, sistema nervioso central y osteosarcoma.
24. Uso según la reivindicación 20, donde las enfermedades oculares se seleccionan de entre síndrome de ojo seco y lagrimeo excesivo.
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