WO2015129812A1 - ステロイド剤投与で誘発される成長障害に対する医薬 - Google Patents

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Definitions

  • the present invention reduces growth disorders induced by administration of a steroid agent containing a natriuretic peptide receptor B (NPR-B) agonist represented by C-type natriuretic peptide (CNP) or CNP derivative as an active ingredient and / or Or, it relates to an improved medicine.
  • NPR-B natriuretic peptide receptor B
  • CNP C-type natriuretic peptide
  • steroidal agent is a generic term for a drug containing a steroid hormone or a modified chemically synthesized product thereof, and in many cases, means a pharmaceutical compound containing a glucocorticoid or a modified chemically synthesized product thereof.
  • Steroids have pharmacological actions such as anti-inflammatory action, immunosuppressive action, lymphocyte damage action, vasoconstriction action, bronchodilation action, etc., and are known to be dramatically effective against various diseases. On the other hand, treatment with steroids has been reported to have a risk of developing serious side effects.
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 2
  • steroids as described above is afraid of side effects and neglects to use as directed by the doctor, not only will the condition of the underlying disease be treated (rebound), but nausea
  • so-called “steroid withdrawal syndrome” such as headache, malaise, and blood pressure reduction has been pointed out (Non-patent Document 3).
  • Non-Patent Document 4 In children, in addition to these, there is a risk of growth failure due to long-term use of steroids. When treated with steroids for a long time in children, excessive glucocorticoids in the body prevent the production and secretion of growth hormone (GROWTH HORONE) and insulin-like growth factor (IGF-1). Or the sensitivity to these hormones may be reduced. As a result, the normal growth of the child is suppressed, so-called “growth disorder”, and it is diagnosed as a so-called “short stature” that is significantly shorter than the standard growth curve of a child of the same age. (Non-Patent Document 4).
  • Non-Patent Document 5 Growth disorders induced by administration of steroids are at least partially recovered by discontinuing or reducing subsequent doses (Non-Patent Document 5), while the growth period of children is limited. If the epiphyseal growth plate closes for puberty, further growth can no longer be expected, regardless of the use of steroids. For this reason, continuous treatment with steroids is necessary due to serious life-threatening diseases in childhood, and sufficient growth over the lifetime of subjects who cannot discontinue medication or reduce the dose over a long period of time. However, there is a possibility of becoming short stature without expectation.
  • the growth disorder caused by steroid treatment is reduced and / or without reducing the therapeutic effect of steroids and worsening side effects other than growth disorders. If there are drugs that can improve, or drugs that can promote the growth of children with short stature due to treatment with steroids and treat short stature, improvement in QOL over the lifetime of the subject can be expected. Furthermore, by reducing the risk of growth disorder, it becomes possible to treat a primary disease with a sufficient amount of a steroid, and as a result, it is expected to lead to an improvement in the treatment result for the primary disease.
  • Non-Patent Document 6 prophylactic or therapeutic administration of growth disorders induced by steroid administration is not recommended from the viewpoint of risk and benefit.
  • CNP C-type natriuretic peptide
  • C-Type Natururitic ePeptide hereinafter referred to as CNP
  • NPR-B guanylate cyclase
  • NPR-B guanylate cyclase
  • CNP acts on chondrocytes and plays an important role in bone growth (Non-Patent Document 7, Non-Patent Document 8, etc.).
  • Non-patent Documents 9 and 10 Bone elongation is promoted by continuous intravenous administration of CNP-22 to liver-specific CNP transgenic mice or normal mice.
  • early basic studies have reported effects on osteoblast expression and bone resorption in addition to cartilage tissue (Non-patent Documents 11 and 12).
  • the growth plate becomes thicker due to the expansion of the proliferating chondrocyte layer and hypertrophic chondrocyte layer, and 2) the extracellular matrix of the proliferating chondrocyte layer increases.
  • Non-patent Document 8 the expression of the differentiation traits of chondrocytes at each differentiation stage of the growth plate is promoted. Furthermore, the phenotype of the achondroplasia model mouse showing a short stature and limb long bone bone shortening expression system was rescued by mating with a cartilage-specific CNP transgenic mouse (Non-patent Document 8). Therefore, CNP is considered to be effective in improving cartilage dysfunction during development or growth and various symptoms associated therewith, and in particular, clinical application as a therapeutic agent for short stature including achondroplasia. Is expected (Non-patent Document 13).
  • Non-patent Document 14 NTproCNP, a marker of endogenous CNP secretion, was measured in bones when dexamethasone or prednisolone was administered to children with acute lymphoblastic leukemia (2-9 years old) for therapeutic purposes. It can be a biomarker of toxicity (Non-patent Document 14).
  • Non-patent Document 15 When dexamethasone is added to cultured mouse chondrocytes, the expression level of CNP increases, while the number of chondrocytes and the expression level of the GC-B receptor decrease (Non-patent Document 15). is there.
  • endogenous CNP and NTproCNP concentrations can be an indicator of growth failure caused by treatment with steroids.
  • bone metabolism markers that can originally serve as indicators of growth disorders, such as bone alkaline phosphatase, osteocalcin, type I collagen N-propeptide, and type I collagen C-propeptide.
  • An object of the present invention is to provide a medicament for reducing and / or improving a growth disorder induced by administration of a steroid, and a medicament for treating short stature caused by a growth disorder induced by administration of a steroid. To do.
  • the inventors of the present invention have confirmed that the growth disorders similar to those reported in humans are manifested by continuous subcutaneous administration of a medicinal dose of steroids to rats. Furthermore, the present inventors have found that a growth disorder caused by a steroid agent can be reduced and / or improved by coadministering a CNP derivative to a rat in which a growth disorder is caused by continuous subcutaneous administration of a steroid agent.
  • the alleviation effect of CNP derivatives on growth disorders caused by steroids was clearly stronger than the same dose of growth hormone, an existing short stature treatment. Furthermore, it was confirmed that the effect of reducing and / or improving the growth disorder of CNP derivatives is not observed only in the growth disorder induced by a specific steroid.
  • growth disorders already caused by administration of steroids can be alleviated by administration of CNP derivatives to treat short stature caused by growth disorders. Based on these findings, further studies have been made and the present invention has been completed.
  • the present invention provides the following inventions.
  • (1) Contains at least one natriuretic peptide receptor B (NPR-B) agonist as an active ingredient, characterized in that it is administered to a growing individual who needs continuous administration of a steroid A medicament for reducing and / or improving a growth disorder induced by administration of a steroid.
  • the NPR-B agonist is C-type natriuretic peptide (CNP), an active fragment thereof, a variant thereof, a derivative thereof or a modification thereof, or an anti-NPR-B antibody Medicine.
  • CNP C-type natriuretic peptide
  • the NPR-B agonist is hCNP-22 (SEQ ID NO: 1), hCNP6-22 (amino acids 6 to 22 of SEQ ID NO: 1) or hCNP-53 (SEQ ID NO: 2), a variant thereof, or a derivative thereof Or a modified product thereof (2).
  • At least one additional peptide selected from a peptide derived from an immunoglobulin Fc region, a serum albumin and a C-terminal partial peptide of ghrelin is an N-terminal, C-terminal or hCNP-22 or hCNP6-22,
  • the modified product is characterized in that PEG or a similar hydrophilic polymer thereof is bonded to the N-terminus, C-terminus, or both of hCNP-22, hCNP6-22, or hCNP-53 ( The medicament according to any one of 2) to (4). (9) The medicament according to any one of (1) to (8), which is administered at the start or during the period of steroid therapy, and reduces and / or improves growth disorders. (10) It is administered for the treatment of short stature caused by a growth disorder induced by administration of a steroid during or after completion of steroid therapy (1) to (8) Any of the medicines.
  • the NPR-B agonists of the present invention reduce and / or ameliorate growth disorders induced by administration of steroids and treat short stature resulting from the growth disorders. Furthermore, in the conventional steroid treatment, the NPR- of the present invention can be used for the steroid treatment for a child who has not been able to administer a sufficient dose or a period for which a therapeutic effect can be obtained due to the concern about the occurrence of the growth disorder.
  • Combining B agonists makes it possible to adopt a dose or administration period in which a therapeutic effect by a steroid agent can be sufficiently obtained by reducing and / or improving a growth disorder induced by administration of a steroid agent. Can improve results.
  • the first group ( ⁇ ) is a normal control group
  • the second group ( ⁇ ) is a dexamethasone solution at a concentration of 0.5 mg / ml
  • the third group ( ⁇ ) is a dexamethasone solution at a concentration of 1 mg / ml at 0.25 ⁇ l / ml.
  • Continuous subcutaneous administration at a rate of hr for 28 days.
  • FIG. 2 shows the distribution of femur length ( ⁇ is individual data, ⁇ ⁇ ⁇ is mean ⁇ standard deviation) after continuous subcutaneous administration of dexamethasone to 7-week-old male Crl: CD (SD) rats for 28 days. It is a graph.
  • the first group ( ⁇ ) is a normal control group
  • the second group ( ⁇ ) is a dexamethasone solution at a concentration of 0.5 mg / ml
  • the third group ( ⁇ ) is a dexamethasone solution at a concentration of 1 mg / ml, 0.25 ⁇ l / hr.
  • Data marked with “*” indicate that there was a significant difference from the normal control group (p ⁇ 0.05).
  • 3 shows that a 4-week-old male Crl: WI (Wistar) rat was administered subcutaneously with a 0.67 mg / ml solution of dexamethasone at a rate of 0.25 ⁇ l / hr for 28 days (the period of the black bar below the graph).
  • the continuous continuous subcutaneous administration of the CNP derivative (A) was started from the 14th day after the start of the administration when a clear growth disorder due to dexamethasone was confirmed, and continued for 28 days (the period of the gray bar below the graph).
  • the first group ( ⁇ ) is a normal control group
  • the second group ( ⁇ ) is a group administered with dexamethasone alone
  • the third group ( ⁇ ) is a group administered with dexamethasone and a CNP derivative (A) in combination.
  • the administration of dexamethasone was continued for 28 days, and the CNP derivative (A) was continuously administered subcutaneously for 28 days from the 14th day after the start of dexamethasone administration at a rate of 0.25 ⁇ l / hr.
  • the first group ( ⁇ ) is a normal control group
  • the second group ( ⁇ ) is a group administered with dexamethasone alone
  • the third group ( ⁇ ) is a group administered with dexamethasone and a CNP derivative (A) in combination.
  • the administration of dexamethasone was continued for 28 days, and the CNP derivative (A) was continuously administered subcutaneously for 28 days from the 14th day after the start of dexamethasone administration at a rate of 0.25 ⁇ l / hr.
  • Data with “**” indicate that there was a significant difference (p ⁇ 0.01) from the control group (second group).
  • FIG. 5 shows that a 4-week-old male Crl: WI (Wistar) rat was administered subcutaneously with a 0.67 mg / ml solution of dexamethasone at a rate of 0.25 ⁇ l / hr for 28 days, and the third group contained CNP.
  • Derivative (A) and human growth hormone in group 4 growth plate tissue image at the end of the femur at the end of the test when combined subcutaneously administered once a day for 28 days (toluidine blue staining) Is shown.
  • the normal group that was not administered was designated as group 1 and the dexamethasone-only administration group was designated as group 2.
  • the proliferated cartilage layer is indicated by a white double arrow
  • the enlarged cartilage layer is indicated by a gray double arrow.
  • the present invention is induced by administration of a steroid and a medicament containing at least one natriuretic peptide receptor B (NPR-B) agonist as an active ingredient, which reduces and / or ameliorates growth disorders induced by administration of the steroid.
  • the present invention relates to a medicament for treating short stature caused by a growth disorder.
  • the “natriuretic peptide receptor B agonist” refers to a B-type natriuretic peptide receptor NPR-B (Natururitic Peptide Receptor-B, aka guanylate cyclase B (GC-B), hereinafter simply “NPR- A substance having an action of activating guanylate cyclase (hereinafter referred to as “NPR-B agonist activity”). In the present specification, it is simply referred to as “NPR”. Sometimes referred to as “-B agonist”.
  • a typical NPR-B agonist includes, for example, C-type natriuretic peptide (CNP).
  • the NPR-B agonist of the present invention is not particularly limited as long as it is a substance having NPR-B agonist activity, and CNP, an active fragment thereof, a mutant thereof, a derivative thereof and a modified thereof can be used. .
  • CNP an active fragment thereof, a mutant thereof, a derivative thereof and a modified thereof
  • even peptides and low molecular weight compounds that do not have structural commonality with CNP are included in the agonist of the present invention as long as they have NPR-B agonist activity.
  • the CNP of the present invention includes human-derived CNP-22 consisting of 22 amino acids (hCNP-22: GLSKGCFGLK LDRIGSMSGL GC: SEQ ID NO: 1, which has a common amino acid sequence in mammals such as pigs and rats), human-derived CNP-53 (HCNP-53, amino acid sequence: DLRVDTKSRA AWARLLQEHP NARKYKGANK KGLSKGCFGL KLDLIGSMSG LGC: GID G4 GLS .
  • a ring structure formed by a disulfide bond between two C residues contained in the sequence (for example, in hCNP-22, a disulfide bond is formed between position 6 and position C of SEQ ID NO: 1).
  • Forming a ring structure is considered to be important for binding to NPR-B receptor and expression of activity (Furuya M et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1992), 183, No.3, 964- 969, Silver MA, Curr. Opin.Nephrol. Hypertens. (2006), 15, 14-21, Caldrone A, Minerva Endocrinol. (2004), 29, 113-127.
  • CNP6-22 (a peptide consisting of amino acids 6 to 22 of SEQ ID NO: 1), which is a peptide consisting only of a ring structure, and N of the ANP ring structure at the N-terminal and C-terminal of the ring structure, respectively. Even if the terminal and C-terminal sequences are added, it exhibits NPR-B agonist activity almost the same as that of hCNP-22, and it is active in peptides having mutations at 9-position L and 10-position K of hCNP-22.
  • Attenuated peptide having a mutation at other sites for example, S at position 16 and M at position 17
  • LKL LLL
  • a peptide substituted at positions 9 to 11 of SEQ ID NO: 1 exhibits NPR-B agonist activity almost the same as hCNP-22.
  • the amino acid sequence of the ring structure important for NPR-B agonist activity is CFGLKLDRIG -Xaa1 -Xaa2 -SGLGC (where Xaa1 represents S or A, Xaa2 represents M, F or E: SEQ ID NO: 5), and this arrangement is called “ring structure arrangement”.
  • the “active fragment” of a peptide or protein having biological activity consists of a site related to the biological activity of the peptide or protein, and retains at least part of the biological activity of the peptide or protein.
  • the active fragment of CNP in the present invention a peptide consisting of at least a part of the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 to 4 and having NPR-B agonist activity can be used.
  • a peptide comprising the above-mentioned ring structure sequence (amino acid sequence of SEQ ID NO: 5) can be mentioned, and specific examples thereof include hCNP6-22, amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, 3 or 4 A peptide in which a part or all of the consecutive amino acids including position 1 are deleted in positions 1 to 5 of the above; a part or all of the consecutive amino acids including position 1 in positions 1 to 31 of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 Examples thereof include, but are not limited to, a deficient peptide, and those having a ring structure sequence and having NPR-B agonist activity can be employed as an active fragment of the CNP of the present invention.
  • the NPR-B agonist of the present invention the above-mentioned active fragment itself can be adopted, and a peptide (active fragment) in which one or more amino acids are added to the N-terminus, C-terminus or both of the active fragment. Can be employed as long as they retain the desired agonist activity.
  • peptides include peptides obtained by adding sequences derived from the C-terminus and N-terminus of ANP to the N-terminus, C-terminus and both of hCNP6-22 (Furuya M et al., Biochem. Biophys. Res. Commune). And (1992), 183, No. 3, pp. 964-969).
  • a "variant" of a peptide or protein having biological activity is one to several amino acid substitutions, deletions, insertions, and the like in one to several amino acid sequences of the peptide or protein. / Or means added (hereinafter referred to as “substitution etc.”) and retaining at least part of the biological activity of the peptide or protein. “Several places” are usually 3 places, preferably 2 places. “Several” is usually 10, preferably 5, more preferably 3, even more preferably 2. In the case of substitution at a plurality of locations, any one of substitution, deletion, insertion and addition may be used, or two or more may be combined.
  • the amino acid to be substituted may be a naturally occurring amino acid, a modified product such as an acylated product thereof, or an artificially synthesized amino acid analog.
  • the site to be substituted may be selected as long as a part of the activity of the original peptide or protein is retained, but the active site or receptor binding site of the original peptide or protein, Those other than the above are preferably substituted.
  • one substituted at a desired site can be adopted.
  • the ring structure sequence described above is retained, and at other sites.
  • a substituted peptide can be mentioned.
  • 1 to several amino acids are substituted at one or more desired positions in the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 1 to 4.
  • one to several amino acids are present at one to several positions in the amino acid other than the amino acid represented by SEQ ID NO: 5 in the amino acid sequence described in any of SEQ ID NOS: 1 to 4.
  • one to several amino acids are substituted in any one to several positions of positions 1 to 5 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, 3 or 4 Alternatively, one to several amino acids are substituted at any one to several positions in positions 1 to 31 of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the above-described mutant itself can be employed, and a peptide (mutant derivative) in which one or more amino acids are added to the N-terminus, C-terminus, or both. However, it can be employed as long as it retains the desired agonist activity.
  • CNP mutants include that peptides having mutations at positions 17 and 18 of hCNP-22 have the same NPR-B agonist activity as hCNP-22, A mutant derivative in which the N-terminal and C-terminal are replaced with an ANP-derived sequence also shows NPR-B agonist activity that is about 90% of the activity of hCNP-22, and a mutation occurs at any one of positions 9 to 11.
  • a peptide having a mutation at both positions 10 and 11 has an NPR-B agonist activity of 40% or more of hCNP-22, etc. (Furuya M et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., (1992), 183, No. 3, Pp. 964-969).
  • NEP neutral endopeptidase
  • the “derivative” of a peptide or protein having biological activity is a fusion peptide containing the amino acid sequence of the peptide or protein and further added with another peptide or protein, and the bioactive peptide or protein. It means a fusion peptide that retains at least part of the biological activity of a protein.
  • a fusion peptide having at least a part of such biological activity is also referred to as a derivative of a physiologically active peptide.
  • an additional peptide may be fused to one of the C-terminal or N-terminal of the original physiologically active peptide or protein, and the additional peptide is fused to both the C-terminal and N-terminal.
  • the peptide to be added is not particularly limited, but a peptide having no physiological activity is preferable.
  • the additional peptide may be directly bonded, or may be bonded via a linker sequence consisting of 1 to several amino acids. Various linker sequences are known, but those containing a large amount of G, S, etc. are often used.
  • Examples of such an additional peptide include an Fc site of an immunoglobulin (preferably IgG), serum albumin, a C-terminal partial sequence of ghrelin, and the like.
  • Examples of derivatives used as the NPR-B agonist of the present invention include CNP (preferably hCNP-22 or hCNP-53) derivatives, CNP active fragments (preferably hCNP6-22) derivatives, and the like. , Preferably a derivative of hCNP-22 or a derivative of hCNP6-22.
  • CNP derivatives include, for example, various CNP derivatives disclosed in US Patent Publication US2010-305031 (corresponding International Patent Publication WO2009 / 142C307) (SEQ ID NOs: 109 and 110 in the US Patent Publication). 124 to 130, 157 and 158: SEQ ID NOs: 6 to 14)) in the sequence listing of the present specification.
  • a derivative obtained by adding a partial sequence derived from the C-terminal side of ghrelin to a physiologically active peptide such as ANP, CNP, or motilin retention in blood was improved while maintaining the physiological activity of the original peptide. Has been reported.
  • Wk-Xl-Y-Zm-Wn (where W is a basic amino acid such as Lys, Arg, etc.) derived from the C-terminus of ghrelin at either the N-terminus or C-terminus of CNP and both.
  • Y may be an acidic amino acid such as Asp, Glu, etc.
  • X and Z may be the same or different, and may be any amino acid except an acidic amino acid or a basic amino acid.
  • 1 or 2 represents an integer
  • l and m each independently represent a natural number of 0, 1 or 2.
  • Such sequences are preferably RKESKK, RKDSKK, RKSEKK, RKSDKK, etc.)
  • NPR-B agonist activity was retained and its blood half-life was prolonged.
  • the CNP derivative (A) (SEQ ID NO: 13) and CNP derivative (C) (SEQ ID NO: 8) used in the examples of the present invention are both representative examples of the CNP derivative prepared in this publication. The descriptions in the publication are all included in the description of the present specification.
  • the NPR-B agonist activity comparable to that of hCNP-22 was also retained in the peptides (derivatives of CNP active fragments) (Furuya M et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., (1992), 183 volumes). , No. 3, pp. 964-969).
  • CNP-22 of the present invention in the amino acid sequence of humanCNP-53 (SEQ ID NO: 2), a peptide comprising an amino acid sequence from which 1 to 30 amino acids continuous from the N-terminus are deleted, Specific examples include CNP-36 (amino acid numbers 18 to 53 of SEQ ID NO: 2).
  • a derivative preferably 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 continuous from the N-terminus of hCNP-53 (SEQ ID NO: 2) , A peptide comprising an amino acid sequence from which 24 or 25 amino acids have been deleted, and more preferably hCNP-36 from which 17 consecutive amino acids have been deleted from the N-terminus of hCNP-53 (the amino acid number of SEQ ID NO: 2) A peptide having an amino acid sequence of 18 to 53).
  • CNP derivatives and derivatives of CNP active fragments can be preferably used as the NPR-B agonist of the present invention. More preferably, in SEQ ID NO: 2, a derivative comprising an amino acid sequence from which 1 to 30 (less than 25, more preferably 20 or less) consecutive amino acids have been deleted from the N-terminus, or SEQ ID NO: Any one of 6 to 15, more preferably a CNP derivative (A) (SEQ ID NO: 13), a CNP derivative (C) (SEQ ID NO: 8), or a CNP derivative (B) (SEQ ID NO: 15). ).
  • the “modified body” of a peptide or protein having biological activity is one in which one to several amino acids contained in the peptide or protein are modified by a chemical reaction with another chemical substance, In addition, it means one that retains at least a part of the biological activity of the peptide or protein.
  • the site to be modified may be selected as long as it retains the activity of the original peptide or protein.
  • the modification is preferably performed at a site other than the active site of the peptide or protein or the receptor binding site.
  • modification for preventing cleavage by a degrading enzyme it is preferable that a portion that undergoes the cleavage is modified.
  • the modified form of CNP may be modified at one or more desired positions in any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1 to 4, but preferably In the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 to 4, the amino acid other than the amino acid shown in SEQ ID NO: 5 is modified at one to several positions, more preferably the amino acid of SEQ ID NO: 1, 3, or 4 It is modified at any one to several positions of positions 1 to 5 of the sequence.
  • a modification that imparts resistance to cleavage by NEP it is known that cleavage is performed between 1-position C and 2-position F of SEQ ID NO: 5 in the ring structure contained in various CNP peptides. This bond can also be modified.
  • CNP active fragments, mutants, and modified derivatives thereof are also included in the present invention.
  • Such various modifications can also be used in the present invention as long as they retain NPR-B agonist activity.
  • a method of adding a high molecular polymer (pharmacologically used) used in pharmaceutical technology such as polyethylene glycol (PEG), polyvinyl alcohol (PVA), etc.
  • PEG polyethylene glycol
  • PVA polyvinyl alcohol
  • a method of adding a compound serving as a linker to a side chain amino group such as a K residue and binding it to another protein or the like is known, but is not limited thereto.
  • Various methods can be employed.
  • CNP CNP
  • Cys6-Phe7 which is the cleavage site by NEP in hCNP-22, is —CH2-NH— or —C ( ⁇ O) —N (R) — (R is a methyl group, ethyl
  • R is a methyl group, ethyl
  • a plurality of modified compounds substituted with a pseudo peptide bond such as a group, a propyl group, an isopropyl group, an n-butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, etc.
  • the ring structure is important for the binding of CNP and NPR-B receptor, especially in derivatives and modified products in which another sequence or substance is bound to the terminal part, the added peptide or modification affects the ring structure. It is highly expected to retain NPR-B agonist activity without inhibiting binding to the NPR-B receptor. This has been demonstrated by many documents mentioned above.
  • CNP CNP
  • active fragments thereof, mutants thereof, derivatives thereof and modifications thereof may be collected from natural cells or tissues, and were produced using genetic engineering and cell engineering techniques. It may be a product, a chemically synthesized product, or an enzyme treatment or a chemical treatment that modifies amino acid residues or removes part of the amino acid sequence. Such a substance can be appropriately produced according to a conventional method with reference to the description and cited documents in this specification.
  • NPR-B agonist activity can be easily measured by a person skilled in the art by a conventionally known method. Specifically, a substance is added to cultured cells in which NPR-B (SugagS et al., Endocrinology (1992), Vol. 130, No. 1, pp. 229-239) is forcibly expressed, and the intracellular cGMP level is measured. Is possible.
  • NPR-B Suddens syndrome et al., Endocrinology (1992), Vol. 130, No. 1, pp. 229-2309
  • the fact that a part of NPR-B agonist activity is retained means that when the NPR-B agonist substance and CNP are measured side by side using the same test system and the NPR-B agonist activity is measured, the peak of cGMP increasing activity is observed.
  • cGMP increasing activity peak exhibited by CNP is retained, preferably it is retained 30% or more, more preferably it is retained 50% or more, more preferably It means holding 70% or more. Moreover, even if the increase in activity is not large at the peak, those showing good results in activity duration and blood retention when administered to a living body can be used in the present invention.
  • a compound having a structure common to that of a natriuretic peptide (for example, a low molecular weight compound) can be used as long as a low molecular weight compound is added to such an evaluation system and the cGMP production ability is improved. Even so, it can be used in the present invention as an NPR-B agonist.
  • an antibody produced by immunizing an animal using a protein containing a ligand binding site of NPR-B as an antigen and having NPR-B agonist activity by the above-described method is a Can be implemented with normal knowledge.
  • the anti-NPR-B antibody having NPR-B agonist activity prepared as described above can also be used as the NPR-B agonist of the present invention.
  • the antibody used in this way can be prepared in various known forms such as an antibody produced by an immunoprotozoa, a chimeric antibody, a CDR-grafted antibody, a humanized antibody, and a fully human antibody.
  • Antibody fragments such as Fab and scFv produced based on these antibodies can also be used.
  • NPR-B agonist of the present invention is CNP, an active fragment having a ring structure sequence thereof, a variant substituted in other than the ring structure sequence, derivatives or modifications thereof, more preferably hCNP-22, hCNP-53, hCNP6-22, derivatives thereof or modifications thereof, and even more preferably, hCNP-53, CNP derivative (A): CNP (1-22) Ghrelin (12-28, E17D, SEQ ID NO: 13), CNP derivative (B): Pro-Gly-CNP-37 (SEQ ID NO: 15), CNP derivative (C): CNP (1-22) Ghrelin (12-28, SEQ ID NO: 8) and Such partial peptides are exemplified. ⁇ Subject of administration>
  • the NPR-B agonist of the present invention is administered to a growing individual in need of continuous administration of a steroid agent, thereby reducing and / or improving a growth disorder induced by administration of the steroid agent in the subject. It can be used as an active ingredient of a medicine for
  • an individual in a growth phase in which continuous administration of a steroid is required refers to a dose that can cause a disease that can be treated with a steroid and that can suppress or inhibit bone growth in normal growth and / or Alternatively, it means a growth phase subject who is scheduled to be taking or is completing administration of a steroid during the administration period.
  • the administration target of the medicament of the present invention is not particularly limited as long as it is a mammal, and examples thereof include humans, monkeys, dogs, cats, horses, etc., preferably humans.
  • the term “growth period” means a period in which the growth plate is maintained without closing the epiphyseal line of the long bone of the subject.
  • the medicament of the present invention reduces and / or improves growth disorders, its effects can be remarkably easily obtained when administered to a subject at a high growth rate.
  • the “steroidal agent” is a drug containing, as an active ingredient, glucocorticoids or their related compounds that are used for the treatment of diseases in the medical field.
  • Representative examples include drugs containing prednisolone, beclomethasone, betamethasone, fluticasone, dexamethasone, hydrocortisone and the like (Payne et al., Paediatr Respir Rev., (2001), 2, pp. 145-150, Pelia G et al. Written, Life Sci., (2003), Vol. 72, Vol. 14, No. 14, pages 1549-1561), but is not limited thereto.
  • the form of the steroid of the present invention is not limited, such as oral preparations, injections, and external preparations.
  • growth disorder induced by administration of a steroid means the whole occurrence and progression of the following events, and the phenotype expressed as a result thereof.
  • Long-term use of steroids for growing subjects is associated with the risk of developing growth disorders.
  • excessive glucocorticoids in the body prevent the production and secretion of growth hormone (GROWTH HORONE) and insulin-like growth factor (IGF-1) And sensitivity to these hormones may be reduced.
  • a disease requiring treatment with a steroid for a relatively long period of time in a growing subject i.e., a subject to whom the medicament of the present invention can be administered, or a disease affected in the past, for example, , Asthma, atopic dermatitis, systemic lupus erythematosus, rheumatic fever, juvenile idiopathic arthritis, ulcerative colitis, Crohn's disease, myasthenia gravis, Guillain-Barre syndrome, pulmonary hemosiderosis, childhood IgA nephropathy, idiopathic thrombocytopenia Purulent purpura, autoimmune hemolytic anemia, aplastic anemia, acute lymphoblastic leukemia, congenital adrenal hyperplasia and the like.
  • reducing means that at least one of the effects of suppressing the occurrence of the disorder, mitigating / delaying the progression of the disorder, reducing the degree of the disorder, etc.
  • it means that a short stature that may occur as a result of growth disorder does not occur, or that the degree of short stature is expected to be alleviated.
  • it is desirable to start administration of the medicament of the present invention immediately before the start of steroid treatment, simultaneously with the start of treatment, or during the treatment period, and at the end of steroid treatment or for a certain period thereof. It is preferable to administer continuously until after elapse.
  • “improving” the growth disorder means that the growth rate in the administration subject is improved to the same or higher than the standard growth rate of the same age, and does not cause short stature in the progression of the growth disorder. That at least one of the following effects is manifested, such as restoring the resulting short stature, and restoring the resulting disordered state closer to normal after the end of the event that induces the disorder. This means that the height of the subject is brought close to the standard height range (of the individual) of the same age.
  • the medicament of the present invention is a subject in a growth period that has been treated with a steroid agent for a certain period of time or who has completed the treatment and tends to be short or is short. Administration will begin for the subject. When administered during the period of steroid treatment, both a relief effect and an improvement effect are expected to appear.
  • the medicament of the present invention reduces or / or ameliorates growth disorders induced by steroid administration in a subject in need of continuous administration of steroids, or is caused by growth disorders
  • a drug containing the NPR-B agonist of the present invention as an active ingredient which is prescribed for the purpose of treating short stature
  • steroid drug therapy is described in a document attached to the drug.
  • Administration to a subject who is receiving it which may cause growth disorder due to administration of a steroid, or administration to a subject in which a growth disorder has occurred, and the pharmaceutical of the present invention reduces and / or improves the growth disorder Or administration for the purpose of treating or treating short stature resulting from the growth disorder.
  • the medicament of the present invention is induced by administration of a steroid agent in the administration subject immediately before the start of steroid therapy, at the same time as or during the period, and continued during the period of steroid therapy. Growth disorders may be reduced and / or ameliorated, or short stature caused by growth disorders may be treated.
  • the drug of the present invention is “continuously administered during the period of steroid therapy” means that the subject to be administered has all the active ingredients (steroid drug and Means that the NPR-B agonist) of the invention is taken into the body.
  • a formulation containing all active ingredients in a single formulation may be administered, or each active ingredient may be formulated separately and all of them may be administered separately.
  • the timing of administration is not particularly limited, and may be administered at the same time, and may be administered at different times or on different days.
  • “administered in combination” of a plurality of active ingredients or drugs includes administration of a plurality of active substances acting as NPR-B agonists alone.
  • the order of administration of the active ingredients is not particularly limited.
  • the administration may be the same number of times or may be different times.
  • the administration method (administration route) of each preparation may be the same, or may be administered by different administration methods (administration route).
  • the medicament of the present invention can be treated during or after completion of steroid therapy, thereby treating short stature caused by a growth disorder induced by administration of the steroid.
  • short stature generally refers to short stature when the stature is -2SD or less, or the growth rate for 2 years is -1.5SD or less, compared to the same-sex, same-age, Defined. Administration in this case is performed in a period in which the subject is in the growth phase and usually does not exceed the standard height + 2SD at the age of the subject.
  • the risk of growth disorder due to steroid administration is reduced, so that it is possible to increase the amount of steroid used for the treatment of the primary disease or to extend the treatment period. Therefore, there is a possibility of improving the treatment outcome of the primary disease, and the present invention also provides such a drug.
  • the substance that can be used as the active ingredient of the medicament of the present invention may be a pharmaceutically acceptable salt of the NPR-B agonist described above. That is, in the present invention, an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, or an organic acid such as formic acid, acetic acid, butyric acid, succinic acid, or citric acid is effectively used as the NPR-B agonist described above. It can also be used as an ingredient. Alternatively, in the present invention, metal salts such as sodium, potassium, lithium and calcium, and salts with organic bases of the above NPR-B agonist can be used as active ingredients.
  • an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, or an organic acid such as formic acid, acetic acid, butyric acid, succinic acid, or citric acid
  • metal salts such as sodium, potassium, lithium and calcium, and salts with organic bases of the above NPR-B agonist can be used as active ingredients.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be a free form of the substance relating to the active ingredient or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains an NPR-B agonist or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and further includes carriers and excipients used in normal formulation, other additives, diluents, etc. It is prepared using.
  • the carrier and excipient for the preparation include lactose, magnesium stearate, starch, talc, gelatin, agar, pectin, gum arabic, olive oil, sesame oil, cocoa butter, ethylene glycol, and other commonly used ones. be able to.
  • the solid composition for oral administration tablets, pills, capsules, powders, granules and the like are used.
  • at least one active ingredient is at least one inert diluent such as lactose, mannitol, glucose, hydroxypropylcellulose, microcrystalline cellulose, starch, polyvinylpyrrolidone, aluminate metasilicate.
  • the composition comprises additives other than inert diluents according to conventional methods, for example lubricants such as magnesium stearate, disintegrants such as calcium calcium glycolate, solubilizing agents such as glutamic acid or aspartic acid May be included.
  • the tablets or pills may be coated with a sugar coating such as sucrose, gelatin or hydroxypropylmethylcellulose phthalate or a film of a gastric or enteric substance, or may be coated with two or more layers. Also included are capsules of absorbable materials such as gelatin. *
  • Liquid compositions for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups, elixirs and the like, commonly used inert diluents such as purified water. , Ethanol and the like may be contained.
  • the composition may contain adjuvants such as wetting agents and suspending agents, sweeteners, flavors, fragrances, preservatives and the like.
  • the injection for parenteral administration includes sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions, and emulsions.
  • aqueous solutions and suspensions include water for injection and physiological saline for injection.
  • non-aqueous solution and suspension include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, alcohols such as ethanol, polysorbate 80 (registered trademark), and the like.
  • Such compositions may further contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers (eg lactose), solubilizers (eg glutamic acid, aspartic acid). .
  • the injection may be a solution preparation or may be lyophilized for dissolution and reconstitution before use.
  • a normal sterilization method such as filtration sterilization using a microfiltration membrane, heat sterilization such as high-pressure steam sterilization, or blending of a bactericide.
  • the injection may be a solution preparation or may be lyophilized for dissolution and reconstitution before use.
  • sugar alcohols and sugars such as mannitol and glucose can be used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered by an administration method generally used in medicine, for example, an oral administration method or a parenteral administration method such as transmucosal administration, intravenous administration, intramuscular administration, or subcutaneous administration. Is preferred.
  • an oral administration method or a parenteral administration method such as transmucosal administration, intravenous administration, intramuscular administration, or subcutaneous administration.
  • the active ingredient is an NPR-B agonist antibody
  • it is usually administered via a parenteral route, such as injection (subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, etc.), transdermal, transmucosal, nasal, transpulmonary.
  • parenteral route such as injection (subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, etc.), transdermal, transmucosal, nasal, transpulmonary.
  • oral administration is also possible.
  • the active ingredient is a peptidic substance
  • a ribosome such as a preparation that is not easily degraded in the digestive tract.
  • the administration method which absorbs from mucous membranes other than digestive tracts, such as a rectum, a nose, and a sublingual is also possible. In this case, it can be administered to an individual in the form of a suppository, a nasal spray, an inhalant, or a sublingual tablet.
  • the dose of a substance that can be used as an active ingredient of the pharmaceutical composition according to the present invention varies depending on the type of the primary disease, the age of the individual (subject), the body weight, the degree of symptoms, the route of administration, etc.
  • the upper limit of the daily dose is, for example, about 100 mg / kg or less, preferably about 50 mg / kg or less, and more preferably 5 mg / kg or less.
  • the lower limit of the daily dose is, for example, about 0.005 ⁇ g / kg or more, preferably 0.025 ⁇ g / kg or more, and more preferably 0.1 ⁇ g / kg or more.
  • the dose of CNP of the present invention varies depending on the body weight, indication disease, symptoms, etc. of the subject individual, but is locally about 10 ⁇ 15 M to 10 ⁇ 6 M, preferably 10 ⁇ 12 M to 10 for local administration. -8 M. In systemic administration, it is about 0.01 ⁇ g / head to 10,000 ⁇ g / head, preferably 1 ⁇ g / head to 5000 ⁇ g / head.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is used in combination with a steroid agent or administered to a subject who has been administered a steroid agent in the past.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be used in combination with other osteogenesis promoter, bone resorption inhibitor or therapeutic agent for short stature.
  • combination drugs include bisphosphonate preparations, bone morphogenetic protein (BMP) preparations, parathyroid hormone (PTH) preparations, basic fibroblast growth factor (bFGF) preparations, anti-osteoclast differentiation Factor (RANKL) antibody preparations, growth hormone (GROWTH HORMONE) preparations, insulin-like growth factor (IGF-1) preparations and the like can be mentioned, but are not limited thereto.
  • a viral vector preferably a lentiviral vector, an adeno-associated viral vector, more preferably an adenoviral vector, a chemically synthesized liposome, a viral envelope, or a viral envelope and a synthetic liposome.
  • An NPR-B agonist peptide amino acid sequence is encoded downstream of a promoter sequence that functions in a host cell, such as a cytomegalovirus promoter (CMV promoter), in a known medium suitable for gene therapy, such as a complex of A nucleic acid incorporating the nucleic acid to be used can be used.
  • CMV promoter cytomegalovirus promoter
  • a gene encoding CNP a gene containing a nucleotide sequence encoding any amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1 to 5 may be used.
  • the method described in Experimental Medicine, Vol. 12, p. 303, 1994, or the method of literature cited therein may be used.
  • CNP derivative (A) (SEQ ID NO: 13) and CNP derivative (C) (SEQ ID NO: 8) used in this example were prepared based on the description in US Patent Publication US2010-305031.
  • CNP derivative (B) (SEQ ID NO: 15) was prepared based on the description in the pamphlet of WO2009 / 067639.
  • Example 1> Preparation of dexamethasone-induced growth disorder model rat [Method] Dexamethasone at a concentration of 0.5 mg / ml (group 2) or 1 mg / ml (group 3) in an osmotic pump (MINI-OSMOTIC PUMP Model 2004, manufactured by DURECT, flow rate: 0.25 ⁇ l / hr, for 28 days) Dexamethasone injection “KS” (manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.) was filled and implanted one by one under the skin of the back of 7-week-old male Crl: CD (SD) rats (5 animals / group, 10 animals in total).
  • KS manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.
  • osmotic pumps (same as above) filled with physiological saline were implanted subcutaneously into the control group (first group, 5 animals) one by one. Thereafter, the animals were reared for 28 days, and their body weights were measured at a frequency of 2-3 times / week. On the final day, blood was lethal under isoflurane anesthesia, the right femur was removed, and the length was measured. The collected blood is made into plasma, then cholesterol E-Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is used to determine the cholesterol concentration, and Corticosterone, ELISA Kit, AssayMax (96well) (EC3001-1, manufactured by ASSAYPRO).
  • FIG. 1 shows the weight transition of the rats during the dexamethasone administration period
  • FIG. 2 shows the right femur length on the final day.
  • Continuous subcutaneous administration of dexamethasone reduced body weight in a dose-dependent manner and shortened femur length in a dose-dependent manner.
  • Table 1 shows the concentrations of corticosterone and cholesterol in the plasma collected on the last day.
  • Example 2 Co-administration test of CNP derivative (A) for rat growth disorder induced by dexamethasone [Method] 1 mg / ml dexamethasone (dexamethasone injection “KS”, manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd., second group) and osmotic pump (MINI-OSMOTIC PUMP Model 2004, manufactured by DURECT, flow rate: 0.25 ⁇ l / hr, for 28 days) (Group 3) Or saline (Group 1) was filled as a control, and implanted subcutaneously in the back of 7-week-old male Crlj: WI (Wistar) rats one by one.
  • the third group had a 20 mg / ml solution of the CNP derivative (A), the first group and the second group had medium 1 (0.03 mol / l acetate buffer (pH 4.0) / 1% benzyl alcohol.
  • the osmotic pump (same as above) filled with / 10% purified sucrose) was implanted subcutaneously in the back at the same time as the pump containing dexamethasone or physiological saline. Thereafter, the animals were reared for 28 days.
  • body weight, body length (length from the tip of the nose to the anus) and tail length were measured, blood was collected from the abdominal aorta under isoflurane anesthesia, and then the right femur and main tissues (spleen, thymus) , Liver, heart and lung).
  • the bone length and width were measured using calipers, and the weight was measured for the main tissue.
  • the collected blood is made into plasma and then cholesterol and IGF- using cholesterol E-test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and Quantikine® ELISA Mouse / Rat IGF-I Immunoassay (MG100, manufactured by R & D Systems). One concentration was measured.
  • Table 3 shows the body weight, body length and tail length of the final day when dexamethasone and CNP derivative (A) were administered by continuous subcutaneous administration for 28 days, and Table 4 shows the length and thickness of the femur.
  • the body weight on the final day was significantly lower in the second group and the third group administered with dexamethasone than in the first group (p ⁇ 0.01), and no effect of CNP derivative (A) combined administration was observed.
  • body length, tail length, and femur length were significantly shortened with dexamethasone alone (Group 2) (p ⁇ 0.01), and combined with CNP derivative (A) (Group 3). It recovered to the same level.
  • Table 5 shows the cholesterol concentration and IGF-1 concentration on the final day.
  • the cholesterol concentration in plasma collected on the last day was significantly increased (p ⁇ 0.01) by dexamethasone alone (group 2).
  • the third group showed variation among individuals, and there was no significant difference between the first group and the second group.
  • Plasma IGF-1 concentrations were significantly lower in the second and third groups administered dexamethasone than in the first group (p ⁇ 0.05).
  • Table 6 shows the main tissue weights on the final day.
  • the spleen and thymus weights (weight ratio (%)) in the second and third groups administered with dexamethasone were significantly lower than those in the first group, and there was no effect of the combined administration of the CNP derivative (A). From these results, it was considered that the immunosuppressive effect of dexamethasone was not inhibited by the combined administration of the CNP derivative (A). As described above, it was shown that the suppression of bone elongation induced by dexamethasone administration (Group 2 and 3) is obviously improved by the combined administration of CNP derivative (Group 3).
  • Example 3 Simultaneous combination administration test of human type CNP-53 or various CNP derivatives in dexamethasone-induced growth disorder model rats [Method] Fill the osmotic pump (MINI-OSMOTIC PUMP Model 2004, manufactured by DURECT, flow rate: 0.25 ⁇ l / hr, for 28 days) with dexamethasone (dexamethasone injection “KS”, manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 0.67 mg / ml. Then, one male subcutaneous Crlj: WI (Wistar) rat (5 mice / group, 2nd to 6th group, 25 animals in total) was implanted subcutaneously in the back.
  • WI Wistar
  • the third group had a CNP derivative (A)
  • the fourth group had a human CNP-53
  • the fifth group had a CNP derivative (B)
  • the sixth group had a CNP derivative (C) of 15 mg / kg.
  • One osmotic pump (same as above) filled with ml solution was implanted subcutaneously in the back part one by one. None was administered to the normal control group (Group 1, 5 animals). Thereafter, the animals were reared for 28 days, and body weight, body length and tail length transition were measured.
  • the femur length was significantly shortened by the administration of dexamethasone, and in the group (Groups 3 to 6) where human CNP-53, CNP derivative (A), (B) or (C) was administered in combination, There was a tendency to be longer than the group to which dexamethasone was administered alone (second group).
  • the plasma cholesterol concentration and the thymus weight were the group administered with dexamethasone alone (second group) and the human CNP-53, CNP derivative (A), (B) or (C) No obvious difference was observed between (Group 3 to Group 6) (Table 8).
  • Table 7 Body weight, height, tail length and right femur length at the end of administration when dexamethasone and various CNP derivatives were administered subcutaneously for 28 days to 5-week-old male Crlj: WI (Wistar) rats]
  • CNP derivative (A) for dexamethasone-induced rat growth disorder [Method] Fill the osmotic pump (MINI-OSMOTIC PUMP Model 2004, manufactured by DURECT, flow rate: 0.25 ⁇ l / hr, for 28 days) with dexamethasone (dexamethasone injection “KS”, manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 0.67 mg / ml. Then, 4 weeks old male Crlj: WI (Wistar) rats (5 mice / group, groups 2 and 3) were implanted one by one subcutaneously on the back and bred for 14 days.
  • WI Wistar
  • Example 5 Simultaneous administration of various steroids and CNP derivative (A) in rats [Method] Dexamethasone (dexamethasone injection “KS”, manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd., diluted with physiological saline) at a concentration of 0.3 mg / ml, prednisolone succinate suspended in saline containing 0.1% polysorbate (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 4 mg, 5 mg / ml concentration as prednisolone) or betamethasone dipropionate suspended in 0.1% polysorbate-containing saline (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 0.3 mg / ml concentration as betamethasone)
  • Male Crlj: WI (Wistar) rats were subcutaneously administered to the back of 10 rats each at a volume of 1 mL / kg once a day for 28 days.
  • CNP derivative (A) reduces and / or improves not only dexamethasone but also growth disorders induced by the administration of other steroids such as prednisolone and betamethasone.
  • Table 10 Body weight, body length, tail length and right femur length after repeated subcutaneous administration of dexamethasone, prednisolone or betamethasone once daily for 28 days to male Crlj: WI (Wistar) rats]
  • Example 6 Comparative test of CNP derivative (A) and human growth hormone against dexamethasone-induced rat growth disorder [Method] Fill the osmotic pump (MINI-OSMOTIC PUMP Model 2004, manufactured by DURECT, flow rate: 0.25 ⁇ l / hr, for 28 days) with dexamethasone (dexamethasone injection “KS”, manufactured by Kyoritsu Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 0.67 mg / ml. Then, 4 weeks old male Crlj: WI (Wistar) rats (5 animals / group, 2nd to 4th groups, 15 animals in total) were implanted subcutaneously one by one.
  • WI Wistar
  • the third group contains a 1 mg / ml solution of the CNP derivative (A) (medium is 0.03 mol / l acetate buffer (pH 4.0) / 1% benzyl alcohol / 10% purified sucrose).
  • a solution of human growth hormone preparation (somatropin BS subcutaneous injection 10 mg “sand”) diluted to 1 mg / ml with phosphate buffer was subcutaneously administered once a day at a volume of 2 mL / kg on the back of 5 rats. Administered for 1 day. None was administered to the normal control group (5 animals, 1 group).
  • the body weight, body length and tail length were measured, blood was lethal from the abdominal aorta under isoflurane anesthesia, the left femur was removed, the bone length was measured, and a histopathological specimen at the end of the bone was prepared.
  • Table 11 shows the body weight, body length, tail length, and left femur length when dexamethasone and CNP derivative (A) or human growth hormone were administered in combination.
  • dexamethasone single administration group group 2
  • body weight gain and body length and tail length elongation were significantly suppressed (p ⁇ 0.01).
  • group (Group 3) administered with the CNP derivative (A) in combination the length and tail length elongation disorders were significantly improved as compared to the group (Group 2) administered dexamethasone alone (p ⁇ 0.01 and p ⁇ 0.05).
  • the growth plate cartilage layer at the epiphysis of the left femur was narrowed by dexamethasone alone, and it was confirmed that the dexamethasone tends to be thickened by the combined administration of CNP derivative (A) or human growth hormone.
  • FIG. 5 [Table 11: Weight, height, tail length and right femur length at the end of administration of dexamethasone subcutaneously for 28 days in 4-week-old male Crlj: WI (Wistar) rats and the CNP derivative (A) or Effects of repeated subcutaneous administration with human growth hormone

Abstract

成長期におけるステロイドの投与により誘発される成長障害を軽減及び／又は改善するための医薬であり、少なくとも一種類のナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲ－Ｂ）アゴニストを有効成分として含有するステロイド剤投与で誘発される成長障害の軽減及び／又は改善剤等を提供する。

Description

ステロイド剤投与で誘発される成長障害に対する医薬
　本発明は、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）またはＣＮＰ誘導体に代表されるナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲ－Ｂ）アゴニストを有効成分として含有するステロイド剤投与で誘発される成長障害を軽減及び／または改善する医薬に関する。
「ステロイド剤」とは、ステロイドホルモンあるいはその改変型の化学合成品を配合した薬品を示す総称であり、多くの場合は糖質コルチコイドまたはその改変型の化学合成品を配合した医薬品を意味する。ステロイド剤には、抗炎症作用、免疫抑制作用、リンパ球障害作用、血管収縮作用、気管支拡張作用などの薬理作用があり、多様な病気に対して劇的に奏功することが知られている。一方で、ステロイド剤による治療には重大な副作用の発現リスクが報告されており、代表的なものとしては、過剰な免疫抑制作用による感染症の発症または悪化、クッシング症候群、副腎皮質機能不全、糖尿病、骨粗しょう症及び消化性潰瘍などが知られている（非特許文献１、非特許文献２など）。加えて、前述したようなステロイド剤治療による副作用の発現を恐れるあまりに、医師の指示通りの使用を怠った場合には、治療対象となる原疾患の病状を悪化（リバウンド）させるのみでなく、吐き気、頭痛、倦怠感、血圧低下などのいわゆる「ステロイド離脱症候群」を発症する危険性が指摘されている（非特許文献３）。
　小児においては、それらに加えてステロイド剤の長期使用による成長障害発生のリスクが伴う。小児において長期間に亘ってステロイド剤による治療を行うと、体内で過剰になった糖質コルチコイド類により、成長ホルモン（ＧＲＯＷＴＨ　ＨＯＲＭＯＮＥ）やインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）の生成及び分泌が妨げられたり、それらホルモンに対する感受性も低下したりする。その結果、小児の正常な発育が抑制された状態、いわゆる「成長障害」を引き起こし、同年齢の児童の標準成長曲線と比較して有意に背が低い状態、いわゆる「低身長症」と診断されるに至る可能性がある（非特許文献４）。小児において比較的長期間に亘ってステロイド剤での治療が必要となる疾患には、喘息、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱 、若年性特発性関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症、ギランバレー症候群、肺ヘモジデローシス、小児 IgA 腎症、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、再生不良性貧血、急性リンパ性白血病、先天性副腎過形成などがある。これらの少なくとも一部は、ステロイド剤での治療を中止することがむずかしく、重症化した場合は死に至る可能性も想定される重篤な疾患である。そのため、目的とする効果が十分に得られる範囲の中でステロイド剤を使用し続けながら、尚且つ、種々の副作用の発現を最小限に抑えることが求められる。
　ステロイド剤投与で誘発される成長障害は、その後の投薬を中止したり減量したりすることにより、少なくとも一部は回復するが（非特許文献５）、その一方で、小児の成長期間は限られており、思春期をむかえて骨端の成長板が閉鎖してしまえば、ステロイド剤の使用の有無に関わらず、もはやそれ以上の成長は期待できない。そのため、小児期に生命に関わるような重篤な疾患のため、ステロイド剤による継続治療が必要となり、長期間に亘って投薬中止や投与量の減量ができない対象では、生涯に亘って十分な成長が期待できずに低身長症となる可能性が生じる。
　以上のことから、ステロイド剤での治療を必要とする小児において、ステロイド剤の治療効果を減弱したり、成長障害以外の副作用を悪化させることなく、ステロイド剤治療によって生じる成長障害を軽減及び／または改善しうる薬剤、あるいは、ステロイド剤の治療により低身長をきたした小児の成長を促進し、低身長症を治療しうる薬剤があれば、対象の生涯に渡るＱＯＬ向上が期待できる。さらに、成長障害のリスクが軽減することで原疾患に対して十分量のステロイド剤による治療ができるようになり、結果として原疾患に対する治療成績の向上にもつながるものと期待される。
　現在、一部の疾患に起因する低身長症の治療薬として、ＧＲＯＷＴＨ ＨＯＲＭＯＮＥやＩＧＦ－１等が使用されているが、これらの薬剤は非常に高価であると共に、種々の副作用の発現が懸念される（非特許文献６）。そのため、ステロイド剤投与で誘発される成長障害に対して予防的にあるいは治療的に投与することはリスクとベネフィットの考えからも推奨されていない。
　Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（Ｃ-Ｔｙｐｅ Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ: 以後、ＣＮＰと記載する）は、グアニレートサイクレースを含むナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｂ、略称：ＮＰＲ－Ｂ、別称：ＧＣ－Ｂ）に特異的に結合して、グアニレートサイクレースを活性化させ、細胞内ｃＧＭＰレベルを調整することで様々な生理活性を発現するＮＰＲ－Ｂのアゴニストである。ＣＮＰは、軟骨細胞に作用して骨成長において重要な役割を担う（非特許文献７、非特許文献８など）。肝臓特異的ＣＮＰトランスジェニックマウス、あるいは正常マウスに対するＣＮＰ－２２の持続静脈内投与によって、骨伸長が促進される（非特許文献９、非特許文献１０）。また、初期の基礎的な研究では、軟骨組織以外にも骨芽細胞における発現や骨吸収に対する作用が報告されている（非特許文献１１、非特許文献１２）。成長板の組織化学的解析により、ＣＮＰトランスジェニックマウスでは、１）増殖軟骨細胞層及び肥大軟骨細胞層の伸長により成長板が厚くなる、２）増殖軟骨細胞層の細胞外マトリクスが増大する、３）成熟肥大軟骨細胞の大きさが増大することが確認されている。同マウスの成長板にある肥大軟骨細胞層において、ＢｒｄＵ染色で示される軟骨細胞の増殖には明らかな変化が観察されなかったことから、ＣＮＰは成長板の軟骨細胞の分化あるいは増殖に寄与するというよりは、成長板の各分化段階における軟骨細胞の分化形質の発現を促進していると考えられている（非特許文献８）。さらに、低身長及び四肢長管骨短縮の表現系を示す軟骨無形成症モデルマウスのフェノタイプが、軟骨特異的ＣＮＰトランスジェニックマウスとの交配によりレスキューされた（非特許文献８）。このことから、ＣＮＰは発生又は成長過程における軟骨形成不全とそれに伴う諸症状を改善する効果があると考えられ、中でも軟骨無形成症をはじめとした低身長症の治療薬としての臨床応用の可能性が期待されている（非特許文献１３）。
　これまで、ステロイド剤投与で誘発される成長障害に対するＣＮＰの有用性に関してはあきらかではなかった。加えて、ステロイド剤がＣＮＰの生成、分泌及びそのシグナル伝達経路にどのような影響を及ぼすかはほとんど解明されていない。これまでに為された報告としては、内因性ＣＮＰの分泌マーカーであるＮＴｐｒｏＣＮＰの血漿中濃度が、急性リンパ性白血病の小児（２-９歳）に治療目的でデキサメタゾンあるいはプレドニゾロンを投与したときの骨毒性のバイオマーカーとなりうること（非特許文献１４）。デキサメタゾンを培養されたマウスの軟骨細胞に添加すると、ＣＮＰの発現量が増加する一方で、軟骨細胞数及びＧＣ－Ｂ受容体の発現量は低下すること（非特許文献１５）、等の報告がある。しかしながら、これらの報告はいずれも、内因性ＣＮＰやＮＴｐｒｏＣＮＰ濃度がステロイド剤による治療によって成長障害が発生したことの指標となりうることを示しているのみである。もともと成長障害の指標となりうる骨代謝マーカーはこれら以外にも、骨型アルカリフォスファターゼ、オステオカルシン、Ｉ型コラーゲンＮ－プロペプチド及びＩ型コラーゲンＣ－プロペプチド等、複数存在する。生理的・病理的現象に伴う遺伝子／タンパク質の発現変動が、必ずしも当該遺伝子／タンパク質の薬理効果を示唆するものではないことはこれまで数多くの分子において確立された通りであり、これらの報告からステロイド剤の投与により誘発される成長障害に対する医薬としてのＣＮＰあるいはＮＰＲ－Ｂ受容体アゴニストの有用性を推定することはできない。
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　本発明は、ステロイド剤投与で誘発される成長障害を軽減及び／または改善する医薬、及びステロイド剤投与で誘発された成長障害によって生じた低身長症を治療する医薬、を提供することを課題とする。
　本発明者等は、ラットに薬効用量のステロイド剤を持続皮下投与することで、ヒトで報告されているのと同様の成長障害が発現する事を確認した。さらに、ステロイド剤を持続皮下投与して成長障害を発生させたラットに、ＣＮＰ誘導体を併用投与することでステロイド剤によって引き起こされた成長障害を軽減及び／または改善することを見出した。ステロイド剤によって引き起こされた成長障害に対するＣＮＰ誘導体の軽減効果は、既存の低身長治療薬である成長ホルモンの同量投与よりも明らかに強力なものであった。さらに、ＣＮＰ誘導体の成長障害を軽減及び／または改善する作用が、特定のステロイド剤によって誘発される成長障害に限り認められるものではないことを確認した。また、すでにステロイド剤投与によって生じた成長障害をＣＮＰ誘導体の投与によって軽減し、成長障害によって生じた低身長症をも治療しうることを確認した。これらの知見に基づきさらに研究を重ね、本発明を完成するに至った。
　本発明は、以下の発明を提供するものである。
（１）ステロイド剤の継続的な投与が必要な成長期の個体に対して投与されることを特徴とする、少なくとも一種類のナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲ－Ｂ）アゴニストを有効成分として含有する、ステロイド剤投与により誘発される成長障害を軽減及び／または改善するための医薬。
（２）ＮＰＲ－Ｂアゴニストが、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、その活性断片、それらの変異体、それらの誘導体又はそれらの修飾体、或いは、抗ＮＰＲ－Ｂ抗体である、（１）の医薬。
（３）ＮＰＲ－Ｂアゴニストが、ｈＣＮＰ－２２（配列番号１）、ｈＣＮＰ６－２２（配列番号１のアミノ酸番号６乃至２２）又はｈＣＮＰ－５３（配列番号２）、それらの変異体、それらの誘導体又はそれらの修飾体であることを特徴とする（２）の医薬。
（４）ＮＰＲ－Ｂアゴニストが、ｈＣＮＰ－２２またはｈＣＮＰ６－２２の誘導体又は修飾体であることを特徴とする（２）の医薬。
（５）誘導体が、免疫グロブリンＦｃ部由来のペプチド、血清アルブミン及びグレリンのＣ末端側部分ペプチド、から選択される少なくとも一つの付加ペプチドが、ｈＣＮＰ－２２またはｈＣＮＰ６－２２のＮ末端、Ｃ末端またはその両方に結合したペプチドであることを特徴とする（２）～（４）のいずれかの医薬。
（６）誘導体が、配列番号６乃至１５から選択されるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドであることを特徴とする（２）～（５）のいずれかの医薬。
（７）誘導体が、配列番号８、１３又は１５のアミノ酸配列からなるペプチドであることを特徴とする（６）の医薬。
（８）修飾体が、ＰＥＧまたはその類縁物質親水性ポリマーが、ｈＣＮＰ－２２、ｈＣＮＰ６－２２、またはｈＣＮＰ－５３のＮ末端、Ｃ末端またはその両方に結合したものであることを特徴とする（２）～（４）のいずれかの医薬。
（９）　ステロイド剤療法の開始時又は期間中に投与され、成長障害を軽減、及び／又は、改善することを特徴とする、（１）～（８）のいずれかの医薬。
（１０）　ステロイド剤療法の期間中又は終了後において、ステロイド剤投与で誘発された成長障害によって生じた低身長症の治療のために投与されることを特徴とする、（１）～（８）のいずれかの医薬。
本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストは、ステロイド剤の投与で誘発される成長障害を軽減及び／または改善し、当該成長障害の結果生じる低身長症を治療する。さらに、従来のステロイド剤治療において、当該成長障害の発生の懸念から治療効果が得られる十分な用量、又は、期間での投与ができなかった小児に対して、ステロイド剤治療に本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストを組み合わせることで、ステロイド剤投与で誘発される成長障害を軽減及び／または改善することで、ステロイド剤による治療効果が十分に得られる用量または投与期間の採用を可能とし、原疾患の治療成績を向上しうる。
図１は、７週齢の雄性Ｃｒｌ：ＣＤ(ＳＤ)ラットにデキサメタゾンを２８日間持続皮下投与したときの体重推移（○△◇は平均値±標準偏差、n=4～5）を示したグラフである。第１群（○）は正常対照群、第２群（△）は、０．５ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン溶液を、第３群（◇）は１ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン溶液をそれぞれ０．２５μｌ／ｈｒの速度で２８日間持続皮下投与した。正常対照群（第１群）との間で有意差があった場合、p<0.05であれば「＊」を、p<0.01であれば「**」を、それぞれ示す。 図２は、７週齢の雄性Ｃｒｌ：ＣＤ(ＳＤ)ラットにデキサメタゾンを２８日間持続皮下投与後に大腿骨の長さの分布（×は個別データ、○△◇は平均値±標準偏差）を示したグラフである。第１群（○）は正常対照群、第２群（△）は０．５ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン溶液を、第３群（◇）は１ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン溶液をそれぞれ０．２５μｌ／ｈｒの速度で２８日間持続皮下投与した。「＊」を付したデータは、正常対照群との間で有意差があった（p<0.05）ことを示す。 図３は、４週齢の雄性Ｃｒｌ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾンの０．６７ｍｇ／ｍｌ溶液を０．２５μｌ／ｈｒの速度で２８日間（グラフ下の黒のバーの期間）持続皮下投与し、尚且つ、デキサメタゾンによる明確な成長障害が確認された投与開始１４日目からはＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用持続皮下投与を開始し、28日間（グラフ下の灰色のバーの期間）継続したときの体重（図３Ａ）、体長（図３Ｂ）及び尾長（図３Ｃ）の推移（各データは、平均値±標準偏差、n=5）を示したグラフである。第１群（○）は正常対照群、第２群（△）はデキサメタゾン単独投与群、第３群（▲）はデキサメタゾンとＣＮＰ誘導体（Ａ）を併用投与した群である。デキサメタゾンの投与は２８日間継続し、ＣＮＰ誘導体（Ａ）は１５ｍｇ／ｍｌ溶液を０．２５μｌ／ｈｒの速度でデキサメタゾン投与開始１４日目から２８日間持続皮下投与した。 図４は、４週齢の雄性Ｃｒｌ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾンの０．６７ｍｇ／ｍｌ溶液を０．２５μｌ／ｈｒの速度で２８日間持続皮下投与し、尚且つ、デキサメタゾンによる明確な成長障害が確認された投与開始１４日目からはＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用持続皮下投与を開始したときの試験終了時の大腿骨長の分布（×は個別データ、◇△▲は平均値±標準偏差）を示したものである。第１群（○）は正常対照群、第２群（△）はデキサメタゾン単独投与群、第３群（▲）はデキサメタゾンとＣＮＰ誘導体（Ａ）を併用投与した群である。デキサメタゾンの投与は２８日間継続し、ＣＮＰ誘導体（Ａ）は１５ｍｇ／ｍｌ溶液を０．２５μｌ／ｈｒの速度でデキサメタゾン投与開始１４日目から２８日間持続皮下投与した。「**」を付したデータは、対照群（第２群）との間で有意差があった（p<0.01）ことを示す。 図５は、４週齢の雄性Ｃｒｌ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾンの０．６７ｍｇ／ｍｌ溶液を０．２５μｌ／ｈｒの速度で２８日間持続皮下投与し、尚且つ、第３群にはＣＮＰ誘導体（Ａ）を、第４群にはヒト型成長ホルモンを、それぞれ一日一回２８日間併用反復皮下投与したときの試験終了時の大腿骨骨端部の成長板組織像（トルイジンブルー染色）を示したものである。投与を施さなかった正常群を第１群、デキサメタゾン単独投与群を第２群とした。組織像中、増殖軟骨層を白の両矢印で、肥大化軟骨層を灰色の両矢印で、それぞれ示した。
　以下、本発明について、詳細に説明する。
　本発明は、少なくとも一種類のナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲ－Ｂ）アゴニストを有効成分として含有する、ステロイド剤投与で誘発される成長障害を軽減及び／または改善する医薬及びステロイド剤投与で誘発された成長障害によって生じた低身長症を治療する医薬に関する。
＜ＮＰＲ－Ｂアゴニスト＞
　本発明において、「ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂアゴニスト」とは、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド受容体ＮＰＲ－Ｂ（Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｂ、別称：Ｇｕａｎｙｌａｔｅ　Ｃｙｃｌａｓｅ　Ｂ（ＧＣ－Ｂ），以下、単に「ＮＰＲ－Ｂ」と表記する場合もある）に結合し、そのグアニレートシクラーゼを活性化する作用（以下、「ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性」）を有する物質、を意味し、本明細書においては単に「ＮＰＲ－Ｂアゴニスト」と表記される場合もある。代表的なＮＰＲ－Ｂアゴニストとしては、例えば、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（Ｃ-Ｔｙｐｅ Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ: ＣＮＰ）が挙げられる。本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストは、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有する物質であれば特に限定されず、ＣＮＰ、その活性断片及びそれらの変異体、それらの誘導体並びにそれらの修飾体などを用いることができる。また、ＣＮＰとは構造上の共通性を有しないペプチドや低分子化合物であっても、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有するものであれば、本発明のアゴニストに包含される。
本発明におけるＣＮＰとしては、２２個のアミノ酸よりなるヒト由来ＣＮＰ－２２（ｈＣＮＰ－２２：ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬ ＧＣ：配列番号１、ブタ及びラット等哺乳類では共通のアミノ酸配列を有する）、ヒト由来ＣＮＰ－５３（ｈＣＮＰ－５３、アミノ酸配列：ＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡ　ＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰ　ＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫ　ＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬ　ＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧ　ＬＧＣ：配列番号２）、ニワトリ由来ＣＮＰ－２２（ＧＬＳＲＳＣＦＧＶＫ ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬ ＧＣ：配列番号３）、カエル由来ＣＮＰ－２２（ＧＹＳＲＧＣＦＧＶＫ ＬＤＲＩＧＡＦＳＧＬ ＧＣ：配列番号４）など、が挙げられる。
　各種のＣＮＰにおいて、配列中に含まれる２つのＣ残基間のジスルフィド結合により形成されるリング構造（例えば、ｈＣＮＰ－２２では、配列番号１の６位Ｃと22位Ｃの間でジスルフィド結合しリング構造を形成）がＮＰＲ－Ｂ受容体への結合と活性発現に重要と考えられている（Ｆｕｒｕｙａ　Ｍ　ら著,　Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｂｉｏｐｈｙｓ. Ｒｅｓ. Ｃｏｍｍｕｎ. （１９９２）, １８３巻,　３号,　９６４-９６９頁、　Ｓｉｌｖｅｒ　 ＭＡ 著,　Ｃｕｒｒ. Ｏｐｉｎ.　Ｎｅｐｈｒｏｌ. Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ. （２００６）,　１５巻,　１４-２１頁、　Ｃａｌｄｅｒｏｎｅ　Ａ 著,　Ｍｉｎｅｒｖａ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ.（２００４）, ２９巻,　１１３-１２７頁）。Ｆｕｒｕｙａらの報告によれば、リング構造のみからなるペプチドであるＣＮＰ６－２２（配列番号１のアミノ酸番号６乃至２２からなるペプチド）やリング構造のＮ末端とＣ末端に夫々ＡＮＰのリング構造のＮ末端側、Ｃ末端側の配列を付加しても、ｈＣＮＰ－２２とほぼ同程度のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を示すこと、ｈＣＮＰ－２２の９位Ｌと１０位Ｋに変異を有するペプチドでは活性が減弱するが、それ以外の部位（例えば、１６位Ｓ、１７位Ｍ）に変異を有するペプチドやＡＮＰの１０乃至１２位のアミノ酸配列を対応するｈＣＮＰ－２２の配列であるＬ－Ｋ－Ｌ（配列番号１の９位乃至１１位）に置換したペプチドは、ｈＣＮＰ－２２とほぼ同程度のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を示すこと、などが報告されている。これらの知見から、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性に重要なリング構造のアミノ酸配列は、ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧ -Ｘａａ１ -Ｘａａ２ -ＳＧＬＧＣ（ここで、Ｘａａ１は、ＳまたはＡ、Ｘａａ２はＭ、ＦまたはＥを示す：配列番号５）であり、この配列を「リング構造配列」という。
　本発明において、生物活性を有するペプチド又はタンパク質の「活性断片」とは、当該ペプチド又はタンパク質の生物活性に関連する部位からなり、且つ、当該ペプチド又はタンパク質の有する生物活性の少なくとも一部を保持するもの、を意味する。本発明におけるＣＮＰの活性断片として、配列番号１乃至４の何れかのアミノ酸配列の少なくとも一部のアミノ酸配列からなり、且つ、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有するペプチドを用いることができる。そのような活性断片としては、上述のリング構造配列（配列番号５のアミノ酸配列）からなるペプチドを挙げることができ、その具体例としては、ｈＣＮＰ６－２２、配列番号１、３又は４のアミノ酸配列の1位乃至５位において、1位を含む連続するアミノ酸が一部又は全て欠損したペプチド、配列番号２のアミノ酸配列の1位乃至３１位において、1位を含む連続するアミノ酸が一部又は全て欠損したペプチド、などが挙げられるが、これに限定されず、リング構造配列を有し、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有するものは、本発明のＣＮＰの活性断片として採用することができる。
　本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストとしては、上述した活性断片そのものを採用することもでき、また、活性断片のＮ末端、Ｃ末端又はその両方に１乃至複数のアミノ酸が付加したようなペプチド（活性断片の誘導体）であっても、所望のアゴニスト活性を保持する限り、採用することができる。このようなペプチドとしては、ｈＣＮＰ６－２２のＮ末端、Ｃ末端及びその両方に、ＡＮＰのＣ末端、及びＮ末端に由来する配列を付加したペプチド（Ｆｕｒｕｙａ　Ｍ ら著, Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｂｉｏｐｈｙｓ. Ｒｅｓ. Ｃｏｍｍｕｎ., （１９９２）,　１８３巻,　３号, ９６４-９６９頁）などを挙げることができる。
　本発明において、生物活性を有するペプチド又はタンパク質の「変異体」とは、当該ペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列の一箇所から数箇所において、一つから数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び/又は、付加（以下、「置換等」という）されたものであって、且つ、当該ペプチド又はタンパク質の有する生物活性の少なくとも一部を保持するもの、を意味する。「数箇所」とは、通常３箇所、好ましくは２箇所である。「数個」とは、通常１０個、好ましくは５個、より好ましくは３個、さらに好ましくは２個である。複数箇所で置換等される場合には、置換、欠失、挿入及び付加の何れか一つであっても良く、二つ以上が組み合わされていても良い。また、置換等されるアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸であってもよく、そのアシル化体等の修飾物であってもよく、人工的に合成されたアミノ酸類似体であってもよい。また、置換等される部位は、元となるペプチド又はタンパク質の活性の一部が保持される限り、どの部位を選択してもよいが、当該元ペプチド又はタンパク質の活性部位又は受容体結合部位、以外の箇所が置換等されたものが好ましい。
　例えばＣＮＰの変異体としては、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性が保持される限り、所望の部位において置換等されたものが採用できるが、好ましくは、上述したリング構造配列が保持され、それ以外の部位で置換等されたペプチドを挙げることができる。具体的なＣＮＰの変異体としては、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有する限り、配列番号１乃至４に記載のアミノ酸配列中の所望の1つから複数の箇所において１から数個のアミノ酸が置換等されていても良いが、好ましくは、配列番号１乃至４の何れかに記載のアミノ酸配列中の配列番号５に表示されたアミノ酸以外のアミノ酸において1箇所～数箇所で一つ～数個のアミノ酸が置換等されたものであり、より好ましくは配列番号１、３又は４に記載のアミノ酸配列の１乃至５位の何れか1箇所～数箇所で一つから数個のアミノ酸が置換等されたもの、または、配列番号２に記載のアミノ酸配列の１乃至３１位の何れか1箇所～数箇所で一つから数個のアミノ酸が置換等されたものである。
　本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストとしては、上述した変異体そのものを採用することもでき、またそのＮ末端、Ｃ末端又はその両方に１乃至複数のアミノ酸が付加したようなペプチド（変異体の誘導体）であっても、所望のアゴニスト活性を保持する限り、採用することができる。　
　ＣＮＰの変異体の具体例としては、ｈＣＮＰ－２２の１７位と１８位に変異を有するペプチドがｈＣＮＰ－２２と同一のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有すること、そのような変異体のリング構造部分のＮ末端とＣ末端をＡＮＰ由来の配列におきかえた変異体の誘導体でもｈＣＮＰ－２２の活性の９０％程度のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を示すこと、９位から１１位の何れか一箇所に変異を有するペプチドがｈＣＮＰ－２２の５０％以上のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を示すこと、１０位と１１位の両方に変異を有するペプチドがｈＣＮＰ－２２の４０％以上のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有することなどが報告されている（Ｆｕｒｕｙａ  Ｍら著, Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｂｉｏｐｈｙｓ. Ｒｅｓ. Ｃｏｍｍｕｎ.,（１９９２）, １８３巻,　３号, ９６４-９６９頁）。また、別の文献では、ｈＣＮＰ－２２の各種変異体が、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を保持することや、その中にはさらに、ＣＮＰの分解酵素である中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）による切断への耐性を有することなどが記載されている（ＷＯ２００９／０６７６３９号パンフレット）。
　本発明において、生物活性を有するペプチド又はタンパク質の「誘導体」とは、当該ペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み、さらに別のペプチド又はタンパク質が付加された融合ペプチドであり、且つ、当該生理活性ペプチド又はタンパク質の有する生物活性の少なくとも一部を保持する融合ペプチドを意味する。このような生物活性（本発明においては、ＮＰＲ－Ｂに結合し、そのグアニレートシクラーゼを活性化する作用）の少なくとも一部を有する融合ペプチドを、生理活性ペプチドの誘導体ともいう。本発明の誘導体において、元となる生理活性ペプチド又はタンパク質の、Ｃ末端又はＮ末端の一方に付加ペプチドが融合されていてもよく、Ｃ末端及びＮ末端の両方に付加ペプチドが融合されたものであっても良い。付加されるペプチドとしては、特に限定されないが、そのペプチド自身が生理活性を有さないものが好ましい。また、付加ペプチドは直接結合していてもよく、１から数個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して結合していても良い。リンカー配列としては、様々なものが知られているが、Ｇ、Ｓ等を多く含むものが良く使用される。そのような付加ペプチドとしては、免疫グロブリン（好ましくはＩｇＧ）のＦｃ部位、血清アルブミン、グレリンのＣ末端側部分配列などを挙げることができる。本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストとして用いられる誘導体としては、ＣＮＰ（好ましくはｈＣＮＰ－２２又はｈＣＮＰ－５３）の誘導体、ＣＮＰの活性断片（好ましくは、ｈＣＮＰ６－２２）の誘導体などを例示することができ、好ましくはｈＣＮＰ－２２の誘導体またはｈＣＮＰ６－２２の誘導体である。
　ＣＮＰの誘導体の具体例としては、例えば、米国特許公開ＵＳ２０１０－３０５０３１号公報（対応国際特許公開ＷＯ２００９／１４２Ｃ３０７号）に開示された各種のＣＮＰ誘導体（当該米国特許公開公報における配列番号１０９、１１０、１２４から１３０、１５７及び１５８：本明細書の配列表における配列番号６～１４））などを挙げることができる。ここでは、ＡＮＰ、ＣＮＰ、モチリンなどの生理活性ペプチドに、グレリンのＣ末端側に由来する部分配列を付加した誘導体において、元ペプチドの生理活性を保持したまま、血中滞留性が改善されたことが報告されている。この報告では、ＣＮＰのＮ末端又はＣ末端の何れか一方及びそれらの両方にグレリンのC末端に由来するWk-Xl-Y-Zm-Wn（ここで、WはLys、Arg等の塩基性アミノ酸、YはAsp、Glu等の酸性アミノ酸、XとZは同一でも、異なっていてもよく、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸を除くどのようなアミノ酸であっても良い。K及びｎは互いに独立して、１又は２の整数を示し、ｌ及びｍは、互いに独立して０、１又は２の自然数を示す。このような配列として、好ましくは、RKESKK、RKDSKK、RKSEKK、RKSDKK等が挙げられる）を含むペプチドを付加した多様な誘導体のいずれにおいても、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性が保持され、その血中半減期が延長された。本発明の実施例に用いられるＣＮＰ誘導体（Ａ）（配列番号１３）、ＣＮＰ誘導体（Ｃ）（配列番号８）は、いずれも当該公報において作成されたＣＮＰ誘導体の代表例である。当該公報の記載は、全て本明細書の記載に含まれるものである。
　また、ＣＮＰまたはその活性断片の誘導体として、ｈＣＮＰ－２２のＣ末端にＡＮＰのＣ末端部分が付加したペプチドや、ｈＣＮＰ６－２２のＮ末端及びＣ末端にＡＮＰのＮ末端部分及びＣ末端部分が付加したペプチド（ＣＮＰ活性断片の誘導体）においても、ｈＣＮＰ－２２と同程度のＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性が保持されていた（Ｆｕｒｕｙａ　Ｍ　ら著, Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｂｉｏｐｈｙｓ. Ｒｅｓ. Ｃｏｍｍｕｎ., （１９９２）, １８３巻, ３号, ９６４－９６９頁）。さらに、別の文献において、ｈＣＮＰ－２２及びｈＣＮＰ－５３の各種誘導体が、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を保持することや、その中の複数の誘導体がさらにＮＥＰ分解耐性を有することなどが記載されている（ＷＯ２００９／０６７６３９号パンフレット）。この国際公開公報に記載された誘導体の中でも本明細書においてＣＮＰ誘導体（Ｂ）と定義される、Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－ＣＮＰ－３７（配列番号１５）のアミノ酸配列からなる誘導体の軟骨無形成症モデルマウスに対する薬理効果が報告されている（Ｆｌｏｒｅｎｃｅ　Ｌら著，　Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，　（２０１２），　９１巻，６号，　１１０８－１１１４頁、本文：http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S000292971200537X: Supplement：：http://download.cell.com/AJHG/mmcs/journals/0002-9297/PIIS000292971200537X.mmc1.pdf）。
　さらにまた、本発明のＣＮＰ－２２の誘導体としては、ｈｕｍａｎＣＮＰ－５３のアミノ酸配列（配列番号２）において、Ｎ末端から連続する１個以上３０個以下のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、具体的には、ＣＮＰ－３６（配列番号２のアミノ酸番号１８～５３）など、を挙げることができる。このような誘導体として、好ましくは、ｈＣＮＰ－５３（配列番号２）のＮ末端から連続する１０、１１、１２、１３、１４、１５，１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチドであり、より好ましくは、ｈＣＮＰ－５３のＮ末端から連続する１７個のアミノ酸が欠失したｈＣＮＰ－３６（配列番号２のアミノ酸番号１８～５３のアミノ酸配列からなるペプチド）である。
　これらの様々なＣＮＰ誘導体及びＣＮＰ活性断片の誘導体は、本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストとして好ましく利用することができる。より好ましくは、配列番号２において、Ｎ末端から1個以上３０個以下（好ましくは２５個以下、さらに好ましくは２０個以下）の連続するアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなる誘導体、又は、配列番号６乃至１５から選択されるいずれかの誘導体であり、さらに好ましくはＣＮＰ誘導体（Ａ）（配列番号１３）、ＣＮＰ誘導体（Ｃ）（配列番号８）、又は、ＣＮＰ誘導体（Ｂ）（配列番号１５）である。
　本発明において、生物活性を有するペプチド又はタンパク質の「修飾体」とは、当該ペプチド又はタンパク質に含まれるアミノ酸の１箇所から数箇所が、別の化学物質との化学反応により修飾されたもので、且つ、当該ペプチド又はタンパク質の有する生物活性の少なくとも一部を保持するもの、を意味する。修飾を受ける部位は、元となるペプチド又はタンパク質の活性を保持する限り、いずれの部位を選択してもよい。
　例えばポリマーのようなある程度大きな化学物質を付加する修飾では、ペプチド又はタンパク質の活性部位、又は、受容体結合部位以外の箇所において修飾されることが好ましい。また、分解酵素による切断を防止するための修飾の場合、当該切断を受ける箇所が修飾されるのが好ましい。
　例えば、ＣＮＰの修飾体は、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有する限り、配列番号1乃至４の何れかのアミノ酸配列中の所望の1つから複数の箇所において修飾されていても良いが、好ましくは、配列番号１乃至４の何れかのアミノ酸配列中の配列番号５に表示されたアミノ酸以外のアミノ酸において1箇所から数箇所で修飾されたものであり、より好ましくは配列番号１、３又は４のアミノ酸配列の１乃至５位の何れか1箇所～数箇所で修飾されたものである。また、ＮＥＰによる切断への耐性を付与する修飾の場合は、各種ＣＮＰペプチドに含まれる、リング構造において配列番号５の1位Ｃと２位Ｆの間で切断されることが知られている為、この結合を修飾することもできる。
　さらに、上述したＣＮＰの活性断片、変異体及びそれらの誘導体の修飾体も本発明に含まれる。このような各種修飾体もＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を保持する限り、本発明に用いることができる。　
　化学修飾の方法としては、様々な方法が知られているが、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）など製薬技術において利用される（薬理上用いられる）高分子ポリマーを付加する方法や、Ｋ残基等の側鎖のアミノ基にリンカーとなる化合物を付加させ、それを介して別のタンパク質等（例えば血清アルブミン）と結合させる方法などが知られているが、これらに限定されず、様々な方法を採用することができる。
　このようなＣＮＰ、その活性断片、それらの変異体及びそれらの誘導体の修飾体の具体例としては、例えばＷＯ２００９／０６７６３９号パンフレットにおいて、ｈＣＮＰ－２２及びｈＣＮＰ－５３にＰＥＧ等の各種親水性ポリマーを結合させた修飾体や、ｈＣＮＰ－２２においてＮＥＰによる切断部位であるＣｙｓ６-Ｐｈｅ７のペプチド結合が－ＣＨ２－ＮＨ－や－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ）－（Ｒは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec－ブチル基、tert-ブチル基などの低級アルキル基）などの偽ペプチド結合に置換された修飾体の複数が、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を保持し、また、その多くがｈＣＮＰ－２２よりも改善された血中滞留性を有することが開示されている。また、様々な生理活性ペプチドの修飾体の製造方法については、例えば、米国特許公開ＵＳ２００９-０１７５８２１号などを参考に、適宜作製することができる。
　ＣＮＰとＮＰＲ－Ｂ受容体との結合は、リング構造が重要であるため、特に末端部に別の配列又は物質が結合した誘導体や修飾体は、その付加ペプチドや修飾物がリング構造に影響を与えることが少なく、ＮＰＲ－Ｂ受容体との結合を阻害することなくＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を保持することが十分に期待される。このことは、上述の多くの文献により実証されている。
　上記のＣＮＰ、その活性断片、それらの変異体、それらの誘導体及びそれらの修飾体は、天然の細胞又は組織から採取されたものでもよく、遺伝子工学的、細胞工学的な手法を用いて生産したものであってもよく、化学合成されたものであってもよく、さらにはそれらを酵素処理や化学処理してアミノ酸残基を修飾又はアミノ酸配列の一部を除去したものであってもよい。このような物質は、本明細書の記載、引用文献を参考に、常法に従って適宜製造する事ができる。
　ある物質が、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有するか否かについては、当業者であれば従来知られている方法により容易に測定することができる。具体的には、ＮＰＲ－Ｂ（Ｓｕｇａ Ｓ　ら著, Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（１９９２）, １３０巻，１号,　２２９－２３９頁）を強制発現させた培養細胞に物質を添加し、細胞内ｃＧＭＰレベルを測定することで可能である。ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性の一部が保持されるとは、同一の試験系を用いて、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト物質とＣＮＰとを並べてＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を測定した場合に、ｃＧＭＰ上昇活性のピークが、少なくともＣＮＰが示すｃＧＭＰ上昇活性ピークの１０％以上を保持することを意味するが、好ましくは３０％以上を保持することであり、より好ましくは５０％以上を保持することであり、さらに好ましくは７０％以上を保持することを意味する。また、ピークにおいて活性の上昇が大きくなくても、生体に投与した場合の活性持続時間・血中滞留性において良好な結果を示すものは、本発明に用いることができる。
　また、このような評価系に対して、低分子の化合物を添加し、ｃＧＭＰ産生能が向上するような化合物であれば、ナトリウム利尿ペプチドと共通する構造を有しないもの（例えば、低分子化合物）であっても、ＮＰＲ－Ｂアゴニストとして、本発明に用いることができる。
　さらに、ＮＰＲ－Ｂのリガンド結合部位を含むタンパク質を抗原として用い、動物を免疫して作製された抗体について、上述の方法でＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有するものを選別することは、本技術分野の通常の知識により実施することができる。このようにして作製される、ＮＰＲ－Ｂアゴニスト活性を有する抗ＮＰＲ－Ｂ抗体も、本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストとして利用することができる。また、このように使用される抗体は、免疫原動物が産生する抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体など、公知の様々な形態で作製することができる。またそれら抗体に基づき作製された、Ｆａｂ、ｓｃＦｖなどの抗体断片を利用することもできる。
　本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストとして好ましいものは、ＣＮＰ、そのリング構造配列を有する活性断片、若しくは、そのリング構造配列以外において置換等された変異体、それらの誘導体又は修飾体であり、より好ましくはｈＣＮＰ－２２、ｈＣＮＰ－５３、ｈＣＮＰ６－２２、それらの誘導体又はそれらの修飾体であり、さらにより好ましくは、ｈＣＮＰ－５３、ＣＮＰ誘導体（Ａ）：ＣＮＰ（１－２２）Ｇｈｒｅｌｉｎ(１２－２８,Ｅ１７Ｄ、配列番号１３)、ＣＮＰ誘導体（Ｂ）：Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－ＣＮＰ－３７（配列番号１５）、びＣＮＰ誘導体（Ｃ）：ＣＮＰ（１－２２）Ｇｈｒｅｌｉｎ(１２－２８、配列番号８)及びそれらの部分ペプチドなどがあげられる。
＜投与対象＞
　本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストは、ステロイド剤の継続的な投与が必要な成長期の個体に対して投与されることで、当該対象におけるステロイド剤投与により誘発される成長障害を軽減及び／又は改善するための医薬の有効成分として用いることができる。
　本発明において、「ステロイド剤の継続的な投与が必要な成長期の個体」とは、ステロイド剤により治療され得る疾患を罹患し、正常な成長における骨伸長を抑制若しくは阻害しうる投与量及び／又は投与期間でのステロイド剤の投与を予定する、投与中である、または、投与を完了した成長期の対象を意味する。本発明の医薬の投与対象は、哺乳動物であれば、特に限定されず、例えばヒト、サル、イヌ、ネコ、ウマなどであり、好ましくはヒトである。本発明において、「成長期」とは、対象の長骨の骨端線が閉鎖されずに成長板が維持されている時期を意味し、ヒトである場合は、個人差があるものの、通常は１８歳以下であり、好ましくは１５歳以下であり、より好ましくは１２歳以下である。本発明の医薬は、成長障害を軽減及び／または改善することから、成長速度が速い時期の対象に投与されることで、その効果が顕著に得られ易い。
　本発明において、「ステロイド剤」とは、医療の現場において、疾患の治療を目的に利用される糖質コルチコイド類又はそれらの類縁化合物を有効成分とする薬剤である。代表的なものとしては、プレドニゾロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、フルチカゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾンなどを有効成分とする薬剤（Ｐａｙｎｅ ら著、Ｐａｅｄｉａｔｒ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｒｅｖ．，（２００１），２巻，１４５－１５０頁、　　Ｐｅｌａｉａ Ｇ ら著、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．，（２００３）， ７２巻， １４号、１５４９－１５６１頁)があるが、これらに限定されるものではない。本発明のステロイド剤は、経口剤、注射剤、外用剤など製剤形態は限定されない。
　本発明において、「ステロイド剤投与により誘発される成長障害」とは、以下のような事象の発生、進行、その結果として発現される表現形、の全体を意味する。成長期の対象に対するステロイド剤の長期使用には成長障害発生のリスクが伴う。成長期において長期間に亘ってステロイド剤による治療を行うと、体内で過剰になった糖質コルチコイド類により、成長ホルモン（ＧＲＯＷＴＨ　ＨＯＲＭＯＮＥ）やインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）の生成及び分泌が妨げられたり、それらホルモンに対する感受性も低下したりする。その結果、正常な発育が抑制された状態、いわゆる「成長障害」を引き起こし、その結果として、同年齢の対象の標準成長曲線と比較して有意に背が低い状態、いわゆる「低身長症」と診断されるに至る可能性がある（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ　Ｈら著，Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ　Ｒｅｓ． （２００１），２５巻，１２号，２７３５－２７４３頁）。
　成長期の対象において比較的長期間に亘ってステロイド剤での治療が必要となる疾患、すなわち、本発明の医薬が投与されうる対象が罹患している、又は、過去に罹患した疾患として、例えば、喘息、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱 、若年性特発性関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症、ギランバレー症候群、肺ヘモジデローシス、小児 ＩｇＡ腎症、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、再生不良性貧血、急性リンパ性白血病、先天性副腎過形成などが挙げられる。これらの少なくとも一部は、ステロイド剤での治療を中止することがむずかしく、重症化した場合は死に至る可能性も想定される重篤な疾患である。そのため、目的とする効果が十分に得られる範囲の中でステロイド剤を使用し続けながら、尚且つ、種々の副作用の発現を最小限に抑えることが求められる。
　本発明において、当該成長障害を「軽減する」とは、障害の発生を抑制すること、障害の進行を緩和・遅延させること、障害の程度を軽減させること、などの効果の少なくとも一つ以上が発現されることにより、成長障害の結果として生じうる低身長が生じない、又は、低身長の程度が緩和されることが期待される経過を辿ることを意味する。成長障害を軽減させる目的において、本発明の医薬は、ステロイド剤治療の開始直前、開始と同時、又は、治療期間中に投与を開始することが望ましく、さらにステロイド剤治療の終了時又はその一定期間経過後まで継続的に投与されることが好ましい。
　本発明において、当該成長障害を「改善する」とは、投与対象における成長率を同年齢の標準成長率と同程度又はそれ以上に改善させること、成長障害の進行過程において低身長を生じさせないこと、生じた低身長を回復させること、障害を誘発する事象の終了後において、結果として生じた障害状態を正常状態に近づける方向に回復させること、などの効果の少なくとも一つ以上が発現されることにより、対象の身長を同年齢の（個体の）標準身長域に近づけることを意味する。成長障害を改善する目的において、本発明の医薬は、ステロイド剤治療を一定期間受けた、又は、当該治療を終了した対象で、低身長の傾向がある、又は、低身長症である成長期の対象に対して、投与を開始することとなる。ステロイド剤治療の期間中に投与される場合は、軽減効果と改善効果の両方が現れることが期待される。
　本発明の医薬は、ステロイド剤の継続的な投与が必要な成長期の対象に対して、当該対象におけるステロイド剤投与で誘発される成長障害を軽減する及び／または改善する、または成長障害によって生じた低身長症を治療することを目的として処方される、本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニストを有効成分として含有する医薬であれば、特に限定されないが、医薬品に添付された文書に、ステロイド剤療法を受けている対象に投与できること、それによってステロイド剤投与により成長障害が発生する恐れがある対象、若しくは成長障害が発生した対象に投与すること、本発明の医薬が当該成長障害を軽減及び／又は改善し、または当該成長障害の結果生じた低身長症の・治療を目的として投与されること、などが記載されていることが好ましい。
＜医薬の形態＞
　本発明の医薬は、本投与対象において、ステロイド剤療法の開始直前、開始と同時又は期間中に投与が開始され、ステロイド剤療法の期間中投与が継続されることで、ステロイド剤投与により誘発される成長障害を軽減及び／又は改善し、若しくは、成長障害によって生じた低身長症を治療し得る。この場合において、本発明において、本発明の医薬が、「ステロイド剤療法の期間中継続して投与される」とは、ある一定期間において、被投与対象が、全ての有効成分（ステロイド剤及び本発明のＮＰＲ－Ｂアゴニスト）をその体内に取り込むことを意味する。全ての有効成分が単一製剤中に含まれた製剤が投与されてもよく、またそれぞれの有効成分が別々に製剤化され、別々にそれらの全てが投与されても良い。別々に製剤化される場合、その投与の時期は特に限定されず、同時に投与されてもよく、時間を置いて異なる時間に、又は、異なる日に、投与されても良い。なお、複数の有効成分又は薬剤が「組み合わせて投与される」には、ＮＰＲ－Ｂアゴニストとして作用する複数の活性物質が単独で投与されることも含まれる。複数の有効成分が、それぞれ異なる時間又は日に投与される場合、有効成分の投与の順番は特に限定されない。通常、それぞれの製剤は、それぞれの投与方法に従って投与されるため、それらの投与は、同一回数となる場合もあり、異なる回数となる場合もある。また、それぞれの有効成分が別々に製剤化される場合、各製剤の投与方法（投与経路）は同じであってもよく、異なる投与方法（投与経路）で投与されてもよい。また、全ての有効成分が同時に体内に存在する必要は無く、ある一定期間（例えば一ヶ月間、好ましくは１週間、さらに好ましくは数日間、さらにより好ましくは１日間）の間に、全ての有効成分が体内に取り込まれていればよく、一つの有効成分の投与時に別の有効成分が体内から消失していてもよい。
　また、本発明の医薬は、ステロイド剤療法の期間中または終了後において投与されることで、ステロイド剤投与で誘発される成長障害によって生じた低身長症を治療し得る。「低身長症」とは、一般的には同人種同性同年齢の身長に比して、標準身長－２ＳＤ以下、もしくは２年間の成長速度が－１．５ＳＤ以下である場合に低身長症と定義される。この場合の投与は、対象が成長期の期間中であって、通常は、当該対象の年齢における標準身長+２ＳＤを超えない範囲でおこなわれる。また、上記の低身長症の定義に合致しない場合であっても、継続的なステロイド治療を受けえている又は治療歴のある成長期の患者であって、同人種同性同年齢の標準身長より明らかに低い身長である場合、又は、成長速度が顕著に低下している場合には、成長障害が疑われるため、本発明の医薬の投与対象となりうる。
　さらに、上述したような本発明の医薬の作用によって、ステロイド剤投薬による成長障害のリスクが低減した結果、原疾患の治療に要するステロイド剤の使用量の増加または治療期間の延長が可能になることで、原疾患の治療成績を向上させる可能性があり、本発明はこのような薬剤をも提供するものである。
　本発明の医薬の有効成分として用い得る物質は、上述したＮＰＲ－Ｂアゴニストの薬学的に許容される塩であってもよい。すなわち、本発明においては、上述したＮＰＲ－Ｂアゴニストの、無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、又は有機酸、例えばギ酸、酢酸、酪酸、コハク酸、クエン酸等の酸付加塩を、有効成分として使用することもできる。あるいは、本発明においては、上述したＮＰＲ－Ｂアゴニストの、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム等の金属塩、有機塩基による塩の形態を有効成分として使用することもできる。また、本発明に係る医薬組成物は、その有効成分に係る物質の遊離形としても、又はその薬学上に許容し得る塩であってもよい。
本発明の医薬組成物は、ＮＰＲ－Ｂアゴニストまたはその薬学上許容される塩を有効成分として含み、さらに通常の製剤化の際に用いられる担体や賦形剤、その他の添加剤、希釈剤などを用いて調製される。製剤用の担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげることができる。
　経口投与のための固体組成物としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などが用いられる。このような固体組成物においては、少なくともひとつの有効成分が少なくともひとつの不活性な希釈剤、例えば、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどと混合される。組成物は、常法にしたがって不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤を含んでいてもよい。錠剤又は丸剤は、必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣や胃溶性又は腸溶性物質のフィルムで被覆してもよいし、２つ以上の層で被覆してもよい。さらに、ゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも含まれる。　
　経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などを含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールなどを含んでいてもよい。この組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤などを含んでいてもよい。　
　非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤が含まれる。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば、注射用水及び注射用生理食塩液が含まれる。非水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（登録商標）などが含まれる。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、乳糖）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。これらは、例えば、精密ろ過膜によるろ過滅菌、高圧蒸気滅菌のような加熱滅菌、あるいは、殺菌剤の配合などの通常の滅菌方法によって無菌化することが可能である。注射剤は溶液製剤であっても、使用前に溶解再構成するために凍結乾燥したものであってもよい。凍結乾燥のための賦形剤としては例えばマンニトール、ブドウ糖などの糖アルコールや糖類を使用することが出来る。　
　本発明の医薬組成物は、医薬に一般に使用されている投与方法、例えば、経口投与方法、又は、経粘膜投与、静脈内投与、筋肉内投与もしくは皮下投与等の非経口投与方法によって投与するのが好ましい。有効成分がＮＰＲ－Ｂアゴニスト抗体である場合には通常非経口投与経路で、例えば注射剤（皮下注、静注、筋注、腹腔内注など）、経皮、経粘膜、経鼻、経肺などで投与されるが、経口投与も可能である。
　有効成分がペプチド性物質の場合、消化管内で分解を受けにくい製剤、例えば活性成分であるペプチドをリボゾーム中に包容したマイクロカプセル剤として経口投与することも可能である。また、直腸、鼻内、舌下などの消化管以外の粘膜から吸収せしめる投与方法も可能である。この場合は坐剤、点鼻スプレー、吸入薬、舌下錠といった形態で個体に投与することができる。
　本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質の投与量は、原疾患の種類、個体（対象）の年齢、体重、症状の程度及び投与経路などによっても異なるが、ヒトに対しては、一般的に１日当りの投与量の上限としては、例えば約１００ｍｇ／ｋｇ以下であり、好ましくは約５０ｍｇ／ｋｇ以下であり、さらに好ましくは５ｍｇ／ｋｇ以下である。また、一日あたりの投与量の下限としては、例えば約０．００５μｇ／ｋｇ以上であり、好ましくは０．０２５μｇ／ｋｇ以上であり、より好ましくは、０．１μｇ／ｋｇ以上である。
　本発明のＣＮＰの投与量は、対象個体の体重、適応疾患、症状などにより異なるが、局所投与では組織レベルで１０-15Ｍから１０-6Ｍ程度であり、好ましくは１０-12Ｍから１０-8Ｍ程度である。全身投与では０．０１μｇ／ｈｅａｄから１００００μｇ／ｈｅａｄ程度であり、好ましくは１μｇ／ｈｅａｄから５０００μｇ／ｈｅａｄである。
　本発明の医薬組成物は、ステロイド剤との併用、あるいは、過去にステロイド剤を投薬された対象へ投与されるものである。また、本発明の医薬組成物は、他の骨形成促進剤、骨吸収抑制剤または低身長症治療薬と併用してもよい。このような併用相手の薬剤としては、例えばビスフォスフォネート製剤、骨形成タンパク質(ＢＭＰ)製剤、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）製剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）製剤、抗破骨細胞分化因子（ＲＡＮＫＬ）抗体製剤、成長ホルモン（ＧＲＯＷＴＨ　ＨＯＲＭＯＮＥ）製剤やインスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）製剤などを挙げることができるが、これに限定されるものではない。
　また、本発明の治療剤を遺伝子治療に用いる場合にはウイルスベクター、好ましくはレンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、更に好ましくはアデノウイルスベクター、又は化学合成リポソーム、ウイルスエンベロープ、若しくはウイルスエンベロープと合成リポソームの複合体等公知の遺伝子治療に適した媒体に、宿主細胞内で機能するようなプロモーター配列、例えばサイトメガロウイルスプロモーター(ＣＭＶ　ｐｒｏｐｏｔｅｒ)等、の下流に、ＮＰＲ－Ｂアゴニストペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸を組み込んだものを用いることができる。ＣＮＰをコードする遺伝子としては、配列番号１乃至５の何れかのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子を用いればよい。具体的な遺伝子治療の方法については、実験医学，１２巻，３０３頁，１９９４年に記載の方法又はそれに引用されている文献の方法等を用いればよい。
以下に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は、本発明の実施態様の一例を示すものであって、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
　なお、本実施例において用いるＣＮＰ誘導体（Ａ）（配列番号１３）及びＣＮＰ誘導体（Ｃ）（配列番号８）は、米国特許公開ＵＳ２０１０－３０５０３１号公報の記載に基づき調製された。また、ＣＮＰ誘導体（Ｂ）（配列番号１５）は、ＷＯ２００９／０６７６３９号パンフレットの記載に基づき調製された。
＜実施例１＞：デキサメタゾン誘発成長障害モデルラットの作製
［方法］
浸透圧ポンプ（ＭＩＮＩ－ＯＳＭＯＴＩＣ ＰＵＭＰ Ｍｏｄｅｌ２００４、ＤＵＲＥＣＴ社製、流量：０．２５μｌ／ｈｒ、２８日用)に０．５ｍｇ／ｍｌ（第２群）または１ｍｇ／ｍｌ（第３群）濃度のデキサメタゾン（デキサメタゾン注「ＫＳ」、共立製薬株式会社製）を充填し、７週齢の雄性Ｃｒｌ：ＣＤ(ＳＤ)ラット（５匹／群、合計１０匹）の背部皮下に１つずつ埋め込んだ。加えて、コントロール群(第１群、５匹)には、生理食塩水を充填した浸透圧ポンプ（同上) を背部皮下に１つずつ埋め込んだ。その後２８日間飼育し、２-３回／週の頻度で体重を測定した。また、最終日には、イソフルラン麻酔下で採血致死させてから右大腿骨を摘出し、長さを測量した。採取した血液は血漿としたのち、コレステロールＥ－テストワコー(和光純薬工業株式会社製) を用いてコレステロール濃度を、及びＣｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ、ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ、ＡｓｓａｙＭａｘ（９６ｗｅｌｌ）（ＥＣ３００１－１、ＡＳＳＡＹＰＲＯ社製）を用いて血漿中のコルチコステロン濃度をそれぞれ測定した。
［結果］　
デキサメタゾン投与期間中のラットの体重推移を図１に、最終日の右大腿骨長を図２に示した。デキサメタゾンの持続皮下投与により、体重が用量依存的に低下すると共に大腿骨長が用量依存的に短縮した。また、最終日に採取した血漿中のコルチコステロン及びコレステロール濃度を表１に示した。デキサメタゾンの持続皮下投与により、第２群及び第３群においてコルチコステロン濃度が第１群と比べて有意に低下し、第３群においてはコルチコステロンの生合成に利用されるコレステロール濃度の上昇が認められた。
本試験において、デキサメタゾンの投与量は０．００９～０．０２７ｍｇ／ｋｇ／日であり（表２)、デキサメタゾン注「ＫＳ」の添付文書に記載されている犬・猫への投与量（体重１ｋｇ当たりデキサメタゾンとして、０．０５～０．１ｍｇを１日１回皮下又は筋肉内に注射する）よりも低かった。デキサメタゾンは、ラットにおいても薬効用量で成長障害を誘発することを確認した。
［表１：雄性Ｃｒｌ：ＣＤ(ＳＤ)ラットにデキサメタゾンの２８日間持続皮下投与終了時の血漿中コルチコステロン及びコレステロール濃度］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
［表２：各群のデキサメタゾンの平均投与量］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
  
＜実施例２＞デキサメタゾンで誘発されたラット成長障害に対するＣＮＰ誘導体（Ａ）の同時併用投与試験
［方法］
浸透圧ポンプ（ＭＩＮＩ－ＯＳＭＯＴＩＣ ＰＵＭＰ Ｍｏｄｅｌ２００４、ＤＵＲＥＣＴ社製、流量：０．２５μｌ／ｈｒ、２８日用)に１ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン（デキサメタゾン注「ＫＳ」、共立製薬株式会社製、第２群及び第３群）または、コントロールとして生理食塩水（第１群）を充填し、７週齢の雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットの背部皮下に１つずつ埋め込んだ。その際、第３群にはＣＮＰ誘導体（Ａ）の２０ｍｇ／ｍｌ溶液、第１群及び第２群には媒体１(０．０３ ｍｏｌ/ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）／１％ベンジルアルコール／１０％精製白糖)を充填した浸透圧ポンプ（同上)を、デキサメタゾンまたは生理食塩水を含有したポンプと同時に背部皮下に１つずつ埋め込んだ。その後２８日間飼育し、最終日に、体重、体長（鼻の先から肛門までの長さ）及び尾長を測定し、イソフルラン麻酔下で腹大動脈より採血後に、右大腿骨及び主要組織（脾臓、胸腺、肝臓、心臓及び肺）を摘出した。大腿骨については、ノギスを用いて骨長及び骨幅を測定し、主要組織については重量を測定した。採取した血液は血漿としたのち、コレステロールＥ－テストワコー（和光純薬工業株式会社製）及びＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ(R) ＥＬＩＳＡ　Ｍｏｕｓｅ/Ｒａｔ ＩＧＦ-Ｉ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＭＧ１００，Ｒ&Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製）を用いてコレステロール及びＩＧＦ－１濃度を測定した。
［結果］　
デキサメタゾン及びＣＮＰ誘導体（Ａ）を２８日間持続皮下投与したときの最終日の体重、体長及び尾長を表３に、大腿骨の長さと太さを表４にそれぞれ示した。最終日の体重はデキサメタゾンを投与した第２群及び第３群で第１群よりも有意に低下し(ｐ＜０．０１)、ＣＮＰ誘導体（Ａ）併用投与の影響は認められなかった。一方で、体長、尾長及び大腿骨長はデキサメタゾンの単独投与（第２群）で有意に短縮し (ｐ＜０．０１)、ＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用（第３群）で第１群と同レベルまで回復した。大腿骨幅に関しては、デキサメタゾン投与で短縮する傾向はあったが、有意差はなく(ｐ＞０．０５)、ＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用の影響も認められなかった。最終日のコレステロール濃度、IGF-1濃度を表５に示した。最終日に採取した血漿中のコレステロール濃度は、デキサメタゾンの単独投与（第２群）により有意に上昇した(ｐ＜０．０１)。第３群は個体間でばらつきが認められ、第１及び第２群のどちらとも有意差はなかった。血漿中ＩＧＦ-１濃度は、デキサメタゾンを投与した第２群及び第３群で第１群よりも有意に低下していた(ｐ＜０．０５）。
最終日の主要組織重量を表６に示した。デキサメタゾンを投与した第２及び第３群の脾臓及び胸腺重量（体重比（％））は第１群と比べて有意に低下し、ＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用投与の影響は認められなかったことから、デキサメタゾンの免疫抑制効果はＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用投与により阻害されないものと考えられた。
以上のように、デキサメタゾン投与（第２、３群）によって誘発された骨伸長抑制はＣＮＰ誘導体の併用投与(第３群)により明らかに改善することが示された。一方で、ラットにデキサメタゾンを投与すると、体重減少、血漿中コレステロール濃度上昇、ＩＧＦ－１濃度低下、脾臓及び胸腺重量低下等の症状が観察されたが、それらについてＣＮＰ誘導体（Ａ）を併用投与した影響は認められなかった。
［表３：雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン及びＣＮＰ誘導体（Ａ）を２８日間持続皮下投与終了時の体重、体長及び尾長］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
［表４  雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン及びＣＮＰ誘導体（Ａ）を２８日間持続皮下投与終了時の右大腿骨の長さ及び太さ］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
［表５  雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン及びＣＮＰ誘導体（Ａ）を２８日間持続皮下投与終了時の血漿中コレステロール及びＩＧＦ－１濃度］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
［表６   雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン及びＣＮＰ誘導体（Ａ）を２８日間持続皮下投与終了時の主要組織重量］　　　　 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
＜実施例３＞デキサメタゾン誘発成長障害モデルラットにおけるヒト型ＣＮＰ－５３または各種ＣＮＰ誘導体の同時併用投与試験
［方法］
浸透圧ポンプ（ＭＩＮＩ－ＯＳＭＯＴＩＣ ＰＵＭＰ Ｍｏｄｅｌ２００４、ＤＵＲＥＣＴ社製、流量：０．２５μｌ／ｈｒ、２８日用)に０．６７ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン（デキサメタゾン注「ＫＳ」、共立製薬株式会社製）を充填し、５週齢の雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラット（５匹／群、第２～第６群、計２５匹）の背部皮下に１つずつ埋め込んだ。その際、第３群にはそれぞれＣＮＰ誘導体（Ａ）、第４群にはヒト型ＣＮＰ－５３、第５群にはＣＮＰ誘導体（Ｂ）及び第６群にはＣＮＰ誘導体（Ｃ）の１５ｍｇ／ｍｌ溶液を充填した浸透圧ポンプ（同上)をそれぞれ同時に背部皮下に１つずつ埋め込んだ。正常対照群（第１群、５匹）には、何も投与しなかった。その後、２８日間飼育して体重、体長及び尾長推移を測定した。最終日に、イソフルラン麻酔下で腹大動脈より採血致死させ、採取した血液は血漿としたのちにラボアッセイTMコレステロール（和光純薬工業株式会社製）を用いてコレステロール濃度を測定した。また、採血致死後に右大腿骨及び胸腺を摘出し、右大腿骨長及び胸腺重量を測定した。
［結果］　
デキサメタゾンの持続皮下投与と同時期に、ヒト型ＣＮＰ－５３、ＣＮＰ誘導体（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）のいずれかを２８日間併用持続皮下投与したときの最終日の体重、体長尾長及び大腿骨長を表７に示した。デキサメタゾンの単独投与群(第２群)では、ラットの体重の増加、並びに体長及び尾長の伸長が有意に抑制され、ヒト型ＣＮＰ－５３、ＣＮＰ誘導体（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）のいずれかを併用投与した群（第３～第６群）では、デキサメタゾンを単独投与した群（第２群）と比べて体長及び尾長の伸長が有意に促進した（ｐ＜０．０５または０．０１）。大腿骨長はデキサメタゾンの投与で有意に短縮し、ヒト型ＣＮＰ－５３、ＣＮＰ誘導体（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）のいずれかを併用投与した群（第３～第６群）では、デキサメタゾンを単独投与した群（第２群）よりも長くなる傾向が認められた。一方で血漿中コレステロール濃度や胸腺重量は、デキサメタゾンを単独投与した群(第２群)とヒト型ＣＮＰ－５３、ＣＮＰ誘導体（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）のいずれかを併用投与した群（第３群～第６群）の間で、明らかな差は認められなかった（表８)。
［表７：　５週齢の雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン及び各種ＣＮＰ誘導体を２８日間持続皮下投与したときの投与終了時の体重、身長、尾長及び右大腿骨長］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
［表８：　５週齢の雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン及び各種ＣＮＰ誘導体を２８日間持続皮下投与したときの投与終了時の血漿中コレステロール濃度及び胸腺重量］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
＜実施例４＞デキサメタゾンで誘発されたラット成長障害に対するＣＮＰ誘導体（Ａ）の後追い投与試験
［方法］
浸透圧ポンプ（ＭＩＮＩ－ＯＳＭＯＴＩＣ ＰＵＭＰ Ｍｏｄｅｌ２００４、ＤＵＲＥＣＴ社製、流量：０．２５μｌ／ｈｒ、２８日用)に０．６７ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン（デキサメタゾン注「ＫＳ」、共立製薬株式会社製）を充填し、４週齢の雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラット（５匹／群、第２及び第３群）の背部皮下に１つずつ埋め込み、１４日間飼育した。デキサメタゾンの投与により有意な矮小化（体重低下、体長及び尾長縮小）を確認した後に第３群のみにＣＮＰ誘導体（Ａ）の１５ｍｇ／ｍｌ溶液を充填した浸透圧ポンプ（同上)を追加で背部皮下に埋め込み、さらに２８日間飼育した。飼育期間中の体重、体長及び尾長推移を測定するとともに、最終日に、イソフルラン麻酔下で腹大動脈より採血致死させて右大腿骨を摘出し、長さを測定した。
［結果］　
試験期間中のラットの体重、体長及び尾長の推移を図３に示した。デキサメタゾンの投与開始１４日後には、第１群と比べて第２群で有意な体重低下、体長及び尾長の縮小を観察した(表９)。その後、第３群のみでＣＮＰ誘導体（Ａ）の投与を開始したところ、投与しない群（第２群）に比べて、体長及び尾長の伸びが大きくなり、ＣＮＰ誘導体（Ａ）投与開始２８日後の体長及び尾長は、第３群で第２群よりも有意に長かった（ｐ＜０．０１）。また、ＣＮＰ誘導体（Ａ）投与開始２８日後の大腿骨も、併用しなかった群よりも有意に長く（ｐ＜０．０１）（図４）、体重推移にはＣＮＰ誘導体（Ａ）の併用投与による有意な変化は認められなかった。
［表９  デキサメタゾンの持続皮下投与により成長障害を誘発した雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにＣＮＰ誘導体（Ａ）を２８日間持続皮下投与したときの体重、体長尾長及び大腿骨長］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
＜実施例５＞ラットにおける各種ステロイド剤とＣＮＰ誘導体（Ａ）の同時併用投与試験
［方法］
０．３ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン（デキサメタゾン注「ＫＳ」、共立製薬株式会社製を生理食塩水で希釈）、０．１％ポリソルベート含有食塩水に懸濁したこはく酸プレドニゾロン（和光純薬工業株式会社製、プレドニゾロンとして５ｍｇ／ｍｌ濃度）、または０．１％ポリソルベート含有食塩水に懸濁した二プロピオン酸ベタメタゾン（和光純薬工業株式会社製、ベタメタゾンとして０．３ｍｇ／ｍｌ濃度）を、４週齢の雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラット　各１０匹の背部皮下に１ｍＬ／ｋｇの容量で１日１回２８日間投与した。コントロール群(５匹、１群)には、何も投与しなかった。その際、各１０匹のうち５匹（第２、第４、第６群）には、媒体（０．０３ ｍｏｌ/ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）／１％ベンジルアルコール／１０％精製白糖）を、残りの５匹（第３、第５、第７群）にはＣＮＰ誘導体（Ａ）の１ｍｇ／ｍｌ溶液を背部皮下に１ｍＬ／ｋｇの容量で１日１回２８日間併用投与した。最終投与翌日にイソフルラン麻酔下で体重、体長及び尾長を測定後、腹大動脈より採血致死させ、右大腿骨を摘出し、大腿骨長を測定した。
［結果］　
デキサメタゾン、プレドニゾロン及びベタメタゾンのいずれにおいても、２８日間の反復投与により、ラットの体重の増加の有意な抑制、並びに体長、尾長及び大腿骨の伸長の有意な低下が観察された（ｐ＜０．０５または０．０１）（表１０）ことより、これらのステロイド剤は、ラットにおいて成長障害を誘発するものと考えられた。これらのステロイド剤を反復投与したのと同じ時期にＣＮＰ誘導体（Ａ）を１ｍｇ／ｋｇの用量で併用反復皮下投与した結果、ＣＮＰ誘導体（Ａ）を投与しなかった群と比較して、体長、尾長及び大腿骨の有意な伸長が確認された（ｐ＜０．０５または０．０１）。これらのことから、ＣＮＰ誘導体（Ａ）はデキサメタゾンのみでなく、プレドニゾロンやベタメタゾンのような他のステロイド剤の投薬によって誘発された成長障害を軽減及び／又は改善することが示された。
［表１０   雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾン、プレドニゾロンまたはベタメタゾンを一日１回２８日間反復皮下投与した後の体重、体長、尾長及び右大腿骨長］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
＜実施例６＞デキサメタゾンで誘発されたラット成長障害に対するＣＮＰ誘導体（Ａ）とヒト成長ホルモンの作用比較試験
［方法］
浸透圧ポンプ（ＭＩＮＩ－ＯＳＭＯＴＩＣ ＰＵＭＰ Ｍｏｄｅｌ２００４、ＤＵＲＥＣＴ社製、流量：０．２５μｌ／ｈｒ、２８日用)に０．６７ｍｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾン（デキサメタゾン注「ＫＳ」、共立製薬株式会社製）を充填し、４週齢の雄性Ｃｒlｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラット（５匹／群、第２～第４群、計１５匹）の背部皮下に１つずつ埋め込んだ。また、第３群にはＣＮＰ誘導体（Ａ）の１ｍｇ／ｍｌ溶液（媒体は０．０３ ｍｏｌ/ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）／１％ベンジルアルコール／１０％精製白糖）を、第４群にはヒト型成長ホルモン製剤（ソマトロピンＢＳ皮下注１０ｍｇ「サンド」）をリン酸緩衝液で１ｍｇ／ｍｌに希釈した溶液をラット　各５匹の背部皮下に２ｍＬ／ｋｇの容量で１日１回２８日間投与した。正常対照群(５匹、１群)には、何も投与しなかった。最終日に、体重、体長及び尾長を測定後、イソフルラン麻酔下で腹大動脈より採血致死させた後に左大腿骨を摘出して骨長を計測後、骨端部の病理組織標本を作製した。
　［結果］　
デキサメタゾンとＣＮＰ誘導体（Ａ）またはヒト型成長ホルモンを併用投与したときの体重、体長、尾長及び左大腿骨長を表１１に示した。デキサメタゾンの単独投与群(第２群)では、体重の増加、並びに体長及び尾長の伸長が有意に抑制された（ｐ＜０．０１）。ＣＮＰ誘導体（Ａ）を併用投与した群（第３群）では、デキサメタゾンを単独投与した群（第２群）と比べて、体長及び尾長の伸長障害が有意に改善した（ｐ＜０．０１及びｐ＜０．０５）。ヒト型成長ホルモンを併用投与した群（第４群）では、デキサメタゾンを単独投与した群（第２群）と比べて体長及び尾長の伸長に有意な差は認められなかった（ｐ＞０．０５）。最終日の左大腿骨長は、第１群と比較して、デキサメタゾンの投与（第２群）で有意に短く（ｐ＜０．０１）、ＣＮＰ誘導体（Ａ）を併用投与した群（第３群）では、デキサメタゾンを単独投与した群（第２群）よりも有意に長かった（ｐ＜０．０１）。ヒト型成長ホルモンを併用投与した群（第４群）とデキサメタゾンを単独投与した群（第２群）との間で有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。左大腿骨の骨端部の成長板軟骨層は、デキサメタゾンの単独投与により狭小化し、ＣＮＰ誘導体（Ａ）またはヒト型成長ホルモンの併用投与により、デキサメタゾンを単独投与時にくらべて肥厚する傾向が確認された（図５）。
［表１１：　４週齢の雄性Ｃｒｌｊ：ＷＩ(Ｗｉｓｔａｒ)ラットにデキサメタゾンを２８日間持続皮下投与したときの投与終了時の体重、身長、尾長及び右大腿骨長とそれに対するＣＮＰ誘導体（Ａ）またはヒト型成長ホルモン併用反復皮下投与の影響
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011

Claims (10)

  1. ステロイド剤の継続的な投与が必要な成長期の個体に対して投与されることを特徴とする、少なくとも一種類のナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲ－Ｂ）アゴニストを有効成分として含有する、ステロイド剤投与により誘発される成長障害を軽減及び/又は改善するための医薬。
  2. ＮＰＲ－Ｂアゴニストが、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、その活性断片、それらの変異体、それらの誘導体又はそれらの修飾体、或いは、抗ＮＰＲ－Ｂ抗体である、請求項１の医薬。
  3. ＮＰＲ－Ｂアゴニストが、ｈＣＮＰ－２２（配列番号１）、ｈＣＮＰ６－２２（配列番号１のアミノ酸番号６乃至２２）又はｈＣＮＰ－５３（配列番号２）、それらの変異体、それらの誘導体又はそれらの修飾体であることを特徴とする請求項１の医薬。
  4. ＮＰＲ－Ｂアゴニストが、ｈＣＮＰ－２２またはｈＣＮＰ６－２２の誘導体又は修飾体であることを特徴とする請求項１の医薬。
  5. 誘導体が、免疫グロブリンＦｃ部由来のペプチド、血清アルブミン及びグレリンのＣ末端側部分ペプチド、から選択される少なくとも一つの付加ペプチドが、ｈＣＮＰ－２２またはｈＣＮＰ６－２２のＮ末端、Ｃ末端またはその両方に結合したペプチドであることを特徴とする請求項２～４のいずれかの医薬。
  6. 誘導体が、配列番号６乃至１５から選択されるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドであることを特徴とする請求項２～４のいずれかの医薬。
  7. 誘導体が、配列番号８、１３又は１５のアミノ酸配列からなるペプチドであることを特徴とする請求項６の医薬。
  8. 修飾体が、ＰＥＧまたはその類縁物質親水性ポリマーが、ｈＣＮＰ－２２、ｈＣＮＰ６－２２、またはｈＣＮＰ－５３のＮ末端、Ｃ末端またはその両方に結合したものであることを特徴とする請求項２～４のいずれかの医薬。
  9. 　ステロイド剤療法の開始時又は期間中に投与され、成長障害を軽減及び／又は改善することを特徴とする、請求項１～８のいずれかの医薬。
  10. 　ステロイド剤療法の期間中又は終了後において、ステロイド剤投与で誘発される成長障害によって生じた低身長症の治療のために投与されることを特徴とする、請求項１～８のいずれかの医薬。
     
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