WO2015065244A1 - 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин- 7(4н)-он, обладающий активностью в отношении вируса лихорадки западного нила - Google Patents

4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин- 7(4н)-он, обладающий активностью в отношении вируса лихорадки западного нила Download PDF

Info

Publication number
WO2015065244A1
WO2015065244A1 PCT/RU2014/000795 RU2014000795W WO2015065244A1 WO 2015065244 A1 WO2015065244 A1 WO 2015065244A1 RU 2014000795 W RU2014000795 W RU 2014000795W WO 2015065244 A1 WO2015065244 A1 WO 2015065244A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
methyl
methylmercapto
triazolo
pyrimidine
hydroxyethoxy
Prior art date
Application number
PCT/RU2014/000795
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Олег Николаевич ЧУПАХИН
Владимир Леонидович РУСИНОВ
Евгений Нарциссович УЛОМСКИЙ
Константин Валерьевич САВАТЕЕВ
Степан Сергеевич БОРИСОВ
Наталья Александровна НОВИКОВА
Светлана Яковлевна ЛОГИНОВА
Сергей Владимирович БОРИСЕВИЧ
Павел Владимирович СОРОКИН
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Уральский центр биофармацевтических технологий"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Уральский центр биофармацевтических технологий" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Уральский центр биофармацевтических технологий"
Priority to EA201600363A priority Critical patent/EA026783B1/ru
Publication of WO2015065244A1 publication Critical patent/WO2015065244A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the claimed invention relates to the development of a new substance - 4 - ((2-hydroxyethoxy) methyl) -5-methyl-2-methylmercapto-1, 2,4-triazolo [1,5-a] pyrimidine-7 (4H) -one having the formula
  • West Nile supported by the circulation of the pathogen among small mammals, birds, mosquitoes and confirmed by the presence of an immune response to West Nile virus in the population (see Measures to Combat West Nile Fever in the Russian Federation (epidemiological surveillance, diagnosis, clinic, treatment and prevention) Methodical recommendations. - M., 2001).
  • Ribavirin inhibits West Nile virus replication and cytopathic effect in neural cells // J. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 182. - P.1214-1217.
  • Shahar A. Lustig S., Akov Y. et al.
  • Low molecular weight compounds are known in the art for the treatment and prophylaxis of West Nile fever, in particular the use of heterocyclic compounds (see patents MX2010013269, MX2011008988, WO2008124550, WO2010039538, WO2012135402, WO201 1137447, WO201214559567, RUO2321655967, RU). WO2010027996), synthetic nucleosides (see patents NZ588670, NZ579880, MX2009002707, US2012245335).
  • the closest technical solution to the claimed invention is a compound - sodium salt of 2-methylthio-5-methyl-6-nitro-1, 2,4-triazolo [1, 5-a] pyrimidin-7 (ZAU) -one, which showed activity against causative agent of fever West Nile and other flaviviruses (see RF patent Ns 2365591 for the invention “A drug with antiviral effect and containing 2-methylthio-5-methyl-6-nitro-1, 2,4triazolo (1, 5-a) pyridin-7 ( ⁇ ) - ⁇ ”, filing date May 21, 2007, published August 27, 2009).
  • the technical result of this invention is the creation of a new effective chemical compound with antiviral activity, in particular, against the causative agent of West Nile Fever (hereinafter - LZN).
  • aprotic solvent for example, acetonitrile, methylene chloride, chloroform are used.
  • the inventive compound (I) is a white crystalline substance, soluble in water, polar solvents such as methanol, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, acetone, but sparingly soluble in benzene, hexane and most non-polar solvents.
  • polar solvents such as methanol, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, acetone, but sparingly soluble in benzene, hexane and most non-polar solvents.
  • a monolayer cell culture GMK-AH (1D) was infected with West Nile virus at a dose of 0.05 PFU / cell. Virus adsorption was carried out at a temperature of 37 ° C with 5% CO 2 for 60 minutes. At the end of incubation, the monolayer was washed three times with a support medium containing 100 units / ml of penicillin and streptomycin to remove the non-adsorbed virus and the test compounds were added at a concentration of LA A of the IPC. RVL-346 was dissolved in DMSO until final concentration of 10 ⁇ g / ⁇ l and then diluted to the desired concentration of the supporting nutrient medium. At least 10 tubes with a monolayer of cells were used for each compound.
  • Incubation was carried out at a temperature of 37 ° C, 5% C0 2 , for 48 hours.
  • cryodestruction of the cells was performed and the samples were combined.
  • the infectious titer in the pooled samples was determined by titration using the method of forming negative colonies under agar coating in a GMK-AN (1D) cell culture.
  • the new chemical compound is non-toxic in the concentrations used, has significant in vitro antiviral activity against West Nile Fever virus.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Заявляемое изобретение касается разработки нового вещества - 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-a]пирими-дин-7(4H)-она, имеющего формулу (I) и предназначенного для лечения лихорадки Западного Нила у людей и животных. Способ получения 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидин-7(4H)-она заключающийся в дезацетилировании 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидин-7(4H)-она (II) при действии раствора метилата щелочного металла в алифатическом одноатомном спирте, при этом 4-((2-Ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидин-7(4H)-он (II) получают при взаимодействии 5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидин-7(4H)-она (III) с (2-ацетоксиэтокси)метилацетатом (IV) в присутствии силицирующего средства, например, N,O-бис(триметилсилил)ацетамида (BSA) или гексаметилдисилиламина (ГМДС) и триметилсилилтрифторметилсульфоната (TMSOTf) в апротонном растворителе. Применение 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидин-7(4H)-она для лечения лихорадки Западного Нила (ЛЗН).

Description

4-((2-ГИ РОКСИЭТОКСИ)МЕТИЛ)-5-МЕТИЛ-2-МЕТИЛМЕРКАПТО-1,2,4- ТРИАЗОЛО[1,5-А]ПИРИМИ ИН-7(4Н)-ОН, ОБЛАДАЮЩИЙ АКТИВНОСТЬЮ В
ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА
Заявляемое изобретение касается разработки нового вещества - 4-((2- гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1,5-а]пирими-дин- 7(4Н)-она, имеющего формулу
Figure imgf000003_0001
(I)
и предназначенного для лечения лихорадки Западного Нила у людей и животных.
Изобретение относится к области новых биологически-активных веществ и касается соединений, активных против возбудителя лихорадки Западного Нила
Расширение ареалов распространения арбовирусных инфекций привели к ухудшению эпидемической обстановки в Российской Федерации.
С 1999 года на юге России сформировался устойчивый активный очаг лихорадки
Западного Нила, поддерживаемый циркуляцией возбудителя среди мелких млекопитающих, птиц, комаров и подтверждаемый наличием иммунного ответа к вирусу Западного Нила у населения (см. Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации (эпидемиологический надзор, диагностика, клиника, лечение и профилактика) Методические рекомендации. - М., 2001).
Ежегодно до 2008 года в Южном федеральном округе (ЮФО) зарегистрировались крупные вспышки этой инфекции, сопровождаемые в половине случаев неврологическими проявлениями: энцефалитами и менингоэнцефалитами (см. Борисевич СВ., Бондарев В. П. Лихорадка Западного Нила: прошлое и настоящее // Молекул, медицина. - 2008. - Ns 5. - С.47-51).
Увеличение заболеваемости ЛЗН стимулирует поиск новых и оценку эффективности уже имеющихся противовирусных препаратов. До начала вспышек лихорадки Западного Нила в 1999 году в России отсутствовали этиотропные и неспецифические препараты, а основу терапии ЛЗН составляли патогенетические средства (см. Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации (эпидемиологический надзор, диагностика, клиника, лечение и профилактика). Методические рекомендации. - М., 2001).
Анализ данных, опубликованных в зарубежных источниках информации, в отношении этиотропных, эффективных неспецифических препаратов в отношении ЛЗН свидетельствует лишь о наличии единичных препаратов, в частности, рибавирина, а- 2Ь интерферона, а- и β- интерферонов (мышиных)), эффективность которых показана in vivo (см. Odelola Н.А. Antiviral activity of Virazole on replication of viruses isoleted in Nigeria. In: Siegenthaler W., Lathy R. editors. Current chemotherapy. Vol.1. Washington: American Society of Microbiology. - 1978. - Vol.1. - P.3343-3345) и vitro (см. Jordan I., Briese Т., Fisher N. et al. Ribavirin inhibits West Nile virus replication and cytopathic effect in neural cells // J. Infect. Dis. - 2000. - Vol.182. - P.1214-1217. Shahar A., Lustig S., Akov Y. et al. Different pathogenicity of encephalitic togaviruses in organotypic cultures of spinal cord slices // J. Neurosci. Res. - 1990. - Vol.25. - P.345-352. Anderson J.F., J.J. Rahal. Efficacy of Interferon alpha-2b and Ribavirin against West Nile virus in vitro // Emerg. Inf. Dis. - 2002. - Vol.8, n. 1. - P.107-108).
Израильскими исследователями сконструирован гомологичный иммуноглобулин, обеспечивающий эффективное лечение тяжелых случаев ЛЗН (см. Z.Shimoni, V.J.Niven, S.Pitlick, S.Bulvic. Treatment of West Nile virus enchephalitis with intraveenous immunoglobulin II Emerg. Inf. Dis. - 2001. - Vol.7, n. 4. - P.759).
Отечественными специалистами также была выявлена умеренная эффективность амиксина в отношении вируса Западного Нила и высокая эффективность рибавирина (см. Логинова С.Я., Ковальчук А.В., Борисевич СВ. и др. Противовирусная эффективность индуктора интерферона амиксина в отношении экспериментальной формы лихорадки Западного Нила // Вопр. вирусол. - 2004. - N° 2. - С. 14-17). Однако высокая токсичность рибавирина не позволяет его использовать в равноэквивалентных дозах для человека (см. Логинова С.Я., Борисевич СВ., Пащенко Ю.И., Бондарев В.П. Профилактика и терапия экспериментальной формы лихорадки Западного Нила // Антибиот. и химиотер. - 2009. - Том. 54, N°Ns 11-12. - С. 17-20; Логинова С.Я., Борисевич СВ., Максимов В.А., Бондарев В.П. Оценка токсичности неспецифических медицинских противовирусных средств, предназначенных для профилактики и лечения опасных и особо опасных вирусных инфекций // Антибиот. и химиотер. - 2009. - Том. 54, NsNs 3-4. - С. 11-14).
С учетом изложенного, поиск и разработка эффективных средств профилактики и лечения этого вирусного заболевания являются актуальными.
Из уровня техники известны низкомолекулярные соединения, используемые для лечения и профилактики лихорадки Западного Нила, в частности, применение гетероциклических соединений (см. патенты МХ2010013269, МХ2011008988, WO2008124550, WO2010039538, WO2012135402, WO201 1137447, WO2012145567, RU2365591), производные Сахаров (см. патент WO2010027996), синтетические нуклеозиды (см. патенты NZ588670, NZ579880, МХ2009002707, US2012245335).
Наиболее близким техническим решением к заявляемому изобретению является соединение - натриевая соль 2-метилтио-5-метил-6-нитро-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(ЗАУ)-она, проявившее активность против возбудителя лихорадки Западного Нила и других флавивирусов ( см. патент РФ Ns 2365591 на изобретение «Лекарственное средство, обладающее противовирусным действием и содержащее 2- метилтио-5-метил-6-нитро-1 ,2,4триазоло(1 ,5-а)пиридин-7(ЗН)-ОН», дата подачи 21.05.2007 г., опубликовано 27.08.2009 г.).
Техническим результатом данного изобретения является создание нового эффективного химического соединения, обладающего противовирусной активностью, в частности, против возбудителя Лихорадки Западного Нила (далее - ЛЗН).
Указанный технический результат достигается тем, что предложено новое соединение - 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4Я)-он, обладающее противовирусной активностью против возбудителя Лихорадки Западного Нила и имеющее о мулу
Figure imgf000005_0001
Указанный результат достигается тем, что способ получения 4-((2- гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин- 7(4А7)-она заключается в дезацетилировании 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она (II) при действии раствора метилата щелочного металла в алифатическом одноатомном спирте, при этом 4-((2- Ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин- 7(4H)-OH (II) получают при взаимодействии 5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она (III) с (2-ацетоксиэтокси)метилацетатом (IV) в присутствии силицирующего средства, например, Л/,0-бис(триметилсилил)ацетамида (BSA) или гексаметилдисилиламин (ГМДС ) и триметилсилилтрифторметилсульфоната (TMSOTf) в апротонном растворителе.
В качестве апротонного растворителя применяют, например, ацетонитрил, хлористый метилен, хлороформ.
Применение 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она для лечения лихорадки Западного Нила (ЛЗН).
Технических решений, совпадающих с совокупностью существенных признаков заявляемого изобретения, не выявлено, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого изобретения такому условию патентоспособности как «новизна».
Заявляемые существенные признаки, предопределяющие получение указанного технического результата, явным образом не следуют из уровня техники, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого изобретения такому условию патентоспособности как «изобретательский уровень».
з Условие патентоспособности «промышленная применимость» подтверждено на примерах конкретного применения.
4-((2-Гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4Н)-он (I) получают путем дезацетилирования 4-((2- ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин- 7(4Н)-она (II) раствором метилата щелочного металла в присутствии алифатического одноатомного спирта
Figure imgf000006_0001
(II) О)
При этом получение 4-((2-ацетоксизтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4/-/)-она осуществляют путем взаимодействия 5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4/-/)-она (III) с (2- ацетоксиэтокси)метилацетатом (IV) в присутствии Л/, 0-бис(триметилсилил)ацетамида (BSA или или гексаметилдисилиламин (ГМДС ) и триметилсилилтрифторметилсульфоната (T SOTf) в апротонном растворителе, в качестве которого может быть использован или ацетонитрил, или хлористый метилен, или хлороф
Figure imgf000006_0002
(III) (II)
Заявляемое соединение (I) представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, полярных растворителях, таких как метанол, диметилформамид, диметилсульфоксид, ацетон, но малорастворимое в бензоле, гексане и большинстве неполярных растворителей.
Данные элементного анализа, ЯМР-, УФ- и ИК-спектроскопии, а также масс- спектрометрии полностью соответствуют приписываемому строению.
Осуществление заявляемого изобретения подтверждается примерами конкретного выполнения.
Пример 1.
Синтез 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(47-/)-она (II)
В 30 мл хлористого метилена суспендируют 7, г (35,7 ммоль) 5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она (III), после чего добавляют 12,9 мл (52,5 ммоль) BSA и 0,63 мл (3,57 ммоль) TMSOTf и перемешивают в течение 30 минут до полного растворения исходного гетероцикла. К полученному раствору при перемешивании и охлаждении на ледяной бане добавляют (2- ацетоксиэтокси)метилацетат (IV) и выдерживают реакционную смесь при комнатной температуре 8 часов, после чего разбавляют 20 мл хлористого метилена и 10%-ным раствором Na2C03 (50 мл) и перемешивают в течение 10 минут. После разделения фаз водный слой экстрагируют хлористым метиленом (3x50 мл), экстракт высушивают над Na2S04 и продукты алкилирования делят хроматографически.
Получено 3,3 г 3-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(47-/)-она (34%) и 4,0 г 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил- 2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4 У)-она (41%). Тпл. 1 18-123°С; Вычислено для C12H16N404S, М=312,34, С: 46.14; Н: 5.16; N: 17.94, Найдено, С: 46.10; Н: 5.11 ; N: 18.10. ЯМР 1Н, δ, м.д.: 1.98 (с, ЗН, СОСН3), 2.53 (с, ЗН, SCH3), 2.61 (с, ЗН, СН3), 3.78-3.80 (м, 2Н, СН2), 4.01-4.12 (м, 2Н, СН2), 5.66 (с, 2Н, СН2), 5.92 (с, 1 Н, Н6); ЯМР 13С, б, м.д.: 13.4 (SCH3), 17.5 (С5СН3), 20.5 (СО-СНЗ), 62.7 (С4'), 67.1 (СЗ'), 76.5 (С ), 101.2 (С6), 151.6 (С5), 153.0 (СЗа), 153.9 (С7), 162.9 (С2), 170.2 (СО-СНЗ); Масс- спектрометрия (электроспрей) m/z: 313.14 [М+Н]+; ИК: 1458, 1567, 1714, 1733, 2935, 3012. Пример 2.
Синтез 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4 -/)-она (II)
К суспензии 5,0 г (25,2 ммоль) 5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4А7)-она в 25 мл хлористого метилена последовательно добавляют 9,3 мл (37,8 ммоль) BSA и 0,44 мл (2,52 ммоль) TMSOTf и перемешивают в течение 20 минут до полного растворения исходного вещества. К образовавшемуся раствору при комнатной температуре добавляют (2-ацетоксиэтокси)метилацетат и выдерживают 4 часа, после чего разбавляют 30 мл хлористого метилена и 10%-ным раствором Na2C03 (50 мл) и перемешивают в течение 10 минут. После разделения фаз водный слой экстрагируют хлористым метиленом (3x50 мл), экстракт высушивают над Na2S04. Изомеры делят так же как показано в примере 1.
Получено 3,0 г 3-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4/-/)-она (38%) и 3,2 г 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил- 2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она (40%).
Пример 3.
Синтез 4-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4 У)-она (II) Смешивают 10 мл ГМДС, 0,5 мл ДМФА и 2 г (10 ммоль) 5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она (III), кипятят в течение 16 часов, после чего досуха испаряют летучие вещества в вакууме. К полученному остатку синильного производного добавляют 10 мл хлороформа, 1 ,7 мл (10 ммоль) (2- ацетоксиэтокси)метилацетата (IV) и 0,3 мл (2 ммоль) TMSOTf, после чего реакционную смесь кипятят в течение 1 часа, охлаждают до комнатной температуры, разбавляют 10 мл хлороформа, добавляют 10%-ный раствор Na2C03 (10 мл), перемешивают в течение 10 минут. Водный слой экстрагируют хлороформом (3x20 мл), после объединения экстракты высушивают Mg2S04 и продукты алкилирования делят так же как в примере 1. Получено 1 , 1 г 3-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2- метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(ЗН)-она (35%) и 1.1 г 4-((2- ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин- 7(4Н)-она (35%). Пример 4.
Синтез 4-((2-Гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4Н)-она (I)
К 30 мл метанольного раствора 3,0 г 3-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она добавляют раствор 10 мг металлического натрия в 1 мл метанола. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре 8 часов, после чего охлаждают и отфильтровывают образовавшиеся кристаллы 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто- 1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она. Масса 2, 1 г (7,78 ммоль, 82%) Тпл. 151-154 °С; Вычислено для doH^I^S, М=270,31 , С: 44.43; Н: 5.22; N: 20.73, Найдено, С: 44.53; Н: 5.18; N: 20.70. ЯМР 1Н, δ, м.д.: 2.52 (с, ЗН, SCH3), 2.61 (с, ЗН, СН3), 3.48-3.51 (м, 2Н, СН2), 3.59-3.62 (м, 2Н, СН2), 4.44-4.47 (м, 1 Н, ОН), 5.66 (с, 2Н, СН2), 5.89 (с, 1 Н, Н6); ЯМР 13С, б, м.д.: 13.4 (Me), 17.6 (SCH3), 59.9 (С4"), 71.1 (СЗ'), 76.8 (СГ), 101.1 (С6),
151.8 (С5), 153.0 (С7), 153.9 (СЗа), 162.9 (С2); Масс-спектрометрия (электроспрей) m/z:
271.09 [М+Н]+; ИК: 1269, 1456, 1566, 1705, 2954, 3477;
Пример 5.
Синтез 4-((2-Гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5- а]пиримидин-7(4Н)-она (I)
В изопропаноле (35 мл) растворяют 15 мг металлического калия, после чего при перемешивании добавляют 2,5 г 3-((2-ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4/-/)-она и оставляют реакционную смесь при комнатной температуре на 8 часов, затем охлаждают и отфильтровывают образовавшиеся кристаллы 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто- 1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4/- )-она. Масса 1 ,8 г (6,48 ммоль, 80%) Определение биологического действия заявляемого соединения
Пример 6.
Оценка цитотоксичности исследуемого соединения с использованием постоянной культуры клеток G K-AH (1 Д)
Для формирования сплошного монослоя в пробирки вносили по 1 мл суспензии клеток с плотностью 200тыс./мл, инкубировали при температуре (37,0±0,5)°С, 5% С02. Затем ростовую среду удаляли и вносили свежую питательную среду, содержащую различные концентрации исследуемого препарата (от 1000 до 6,25 мкг/мл). Затем пробирки инкубировали в течение 5 суток при температуре (37,0±0,5)°С, 5% С02. С использованием светового микроскопа наблюдали за состоянием монослоя клеток: частичная или полная деструкция монослоя клеток, повреждение отдельных клеток, образование клеточного синцития. Контролем являлись пробирки с монослоем, в которые внесена поддерживающая среда без препарата.
Результаты оценки цитотоксичности исследуемого препарата свидетельствуют, что субстанция в концентрации 50 мкг/мл не вызывает видимых изменений в культуре клеток GMK-AH (1Д). Полученные данные приведены в Таблице 1.
Таблица 1
Изучение цитотоксичности заявляемого соединения
в культуре клеток GMK-AH (1 Д)
Figure imgf000009_0001
Пример 7.
Изучение эффективности заявляемого соединения в отношении вируса Западного Нила проводили в культуре клеток GMK-AH (1Д).
Монослой культуры клеток GMK-AH (1Д) инфицировали вирусом Западного Нила в дозе 0,05 БОЕ/клетку. Адсорбцию вируса проводили при температуре 37°С 5%-ным С02, в течение 60 мин. По окончании инкубирования монослой трижды промывали поддерживающей средой, содержащей по 100 ед./мл пенициллина и стрептомицина, для удаления не адсорбировавшегося вируса и вносили исследуемые соединения в концентрации, составляющей ЛА МПК. Препарат RVL-346 растворяли в DMSO до конечной концентрации 10 мкг/мкл и далее разводили до нужной концентрации поддерживающей питательной средой. На каждое соединение использовали не менее 10 пробирок с монослоем клеток. Инкубирование проводили при температуре 37°С, 5% С02, в течение 48 часов. Далее проводили криодеструкцию клеток и объединяли пробы. Инфекционный титр в объединенных пробах определяли титрованием методом формирования негативных колоний под агаровым покрытием в культуре клеток GMK- АН (1Д).
Результаты изучения противовирусной активности азолового соединения выявили, что субстанция подавляет репродукцию вируса ЛЗН на 1 ,5 Ig. Коэффициент ингибирования для исследованного препарата составил 96,7 % (см. Таблицу 2).
Таблица 2
Изучение эффективности заявляемого соединения в культуре клеток GMK-
АН (1Д) в отношении вируса Западного Нила
Figure imgf000010_0001
Таким образом, новое химическое соединение не токсично в используемых концентрациях, обладает значимой противовирусной активностью in vitro в отношении вируса Лихорадки Западного Нила.

Claims

Формула изобретения
1. 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а] пиримидин-7(4Н)-он, обладающий противовирусным действием в отношении возбудителя лихорадки Западного Нила и имеющий формулу
Figure imgf000011_0001
(I)
2. Способ получения 4-((2-гидро сиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она заключающийся в дезацетилировании 4-((2- ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин- 7(4Н)-она (II) при действии раствора метилата щелочного металла в алифатическом одноатомном спирте, при этом 4-((2-Ацетоксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто- 1 ,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин-7(4/-/)-он (II) получают при взаимодействии 5-метил-2- метилмеркапто-1 ,2,4-триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она (III) с (2- ацетоксиэтокси)метилацетатом (IV) в присутствии силицирующего средства, например, Л/,0-бис(триметилсилил)ацетамида (BSA) или гексаметилдисилиламина (Г ДС) и триметилсилилтрифторметилсульфоната (TMSOTf) в апротонном растворителе.
3. Применение 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1 ,2,4- триазоло[1 ,5-а]пиримидин-7(4Н)-она для лечения лихорадки Западного Нила (ЛЗН).
PCT/RU2014/000795 2013-11-01 2014-10-21 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин- 7(4н)-он, обладающий активностью в отношении вируса лихорадки западного нила WO2015065244A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201600363A EA026783B1 (ru) 2013-11-01 2014-10-21 4-((2-ГИДРОКСИЭТОКСИ)МЕТИЛ)-5-МЕТИЛ-2-МЕТИЛМЕРКАПТО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7(4H)-OH - ВЕЩЕСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013148985/04A RU2537295C1 (ru) 2013-11-01 2013-11-01 4-(2-ГИДРОКСИЭТОКСИ)МЕТИЛ)-5-МЕТИЛ-2-МЕТИЛМЕРКАПТО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7(4Н)-ОН - ВЕЩЕСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА
RU2013148985 2013-11-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015065244A1 true WO2015065244A1 (ru) 2015-05-07

Family

ID=53004694

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2014/000795 WO2015065244A1 (ru) 2013-11-01 2014-10-21 4-((2-гидроксиэтокси)метил)-5-метил-2-метилмеркапто-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин- 7(4н)-он, обладающий активностью в отношении вируса лихорадки западного нила

Country Status (3)

Country Link
EA (1) EA026783B1 (ru)
RU (1) RU2537295C1 (ru)
WO (1) WO2015065244A1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0183848A1 (en) * 1984-03-12 1986-06-11 Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. Polyazaheterocyclic derivatives, process for their preparation, and pharmaceutical composition
RU2296766C2 (ru) * 1999-12-06 2007-04-10 Бристол-Маерс Сквибб Компани Гетероциклические дигидропиримидиновые соединения
RU2365591C2 (ru) * 2007-05-21 2009-08-27 Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской академии наук ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ И СОДЕРЖАЩЕЕ 2-МЕТИЛТИО-5-МЕТИЛ-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7(3Н)-ОН

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0183848A1 (en) * 1984-03-12 1986-06-11 Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. Polyazaheterocyclic derivatives, process for their preparation, and pharmaceutical composition
RU2296766C2 (ru) * 1999-12-06 2007-04-10 Бристол-Маерс Сквибб Компани Гетероциклические дигидропиримидиновые соединения
RU2365591C2 (ru) * 2007-05-21 2009-08-27 Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской академии наук ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ И СОДЕРЖАЩЕЕ 2-МЕТИЛТИО-5-МЕТИЛ-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7(3Н)-ОН

Also Published As

Publication number Publication date
EA201600363A8 (ru) 2016-12-30
EA201600363A1 (ru) 2016-08-31
RU2537295C1 (ru) 2014-12-27
EA026783B1 (ru) 2017-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020200692B2 (en) Heterocyclic amides useful as protein modulators
WO2022222994A1 (zh) 一种核苷类化合物及其在治疗猫传染性腹膜炎中的应用
JP2590248B2 (ja) 抗ウイルス・抗腫瘍・抗転移・免疫系増強ヌクレオシド類およびヌクレオチド類
CN105682655B (zh) 抗微生物化合物
MX2014015249A (es) Derivados de segunda generacion del antibiotico antifungico anfotericina b de n-sustiduidos y metodos de su preparacion y aplicacion.
KUMAR PANDEY et al. Synthesis and biological activity of substituted 2, 4, 6-s-triazines
CN111936136A (zh) 新咪唑并嘧啶化合物及其用途
RU2453553C1 (ru) 5-о-сукциноилавермектин, способ его получения и антипаразитарное средство на его основе
WO2015153653A1 (en) Arylnaphthalene lactone derivatives and methods of making and using thereof
RU2404182C2 (ru) НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-ЭТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ
RU2330036C1 (ru) НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 5-МЕТИЛ-6-НИТРО-1,2,4,-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7-ОНА ДИГИДРАТ
RU2472801C1 (ru) 5-о-производные авермектина, способ их получения и антипаразитарные средства на их основе
RU2537295C1 (ru) 4-(2-ГИДРОКСИЭТОКСИ)МЕТИЛ)-5-МЕТИЛ-2-МЕТИЛМЕРКАПТО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7(4Н)-ОН - ВЕЩЕСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ПРОТИВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА
RU2365591C2 (ru) ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ И СОДЕРЖАЩЕЕ 2-МЕТИЛТИО-5-МЕТИЛ-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИН-7(3Н)-ОН
Khan et al. Synthesis of 5-arylidene barbiturates: a novel class of DPPH radical scavengers
RU2402552C2 (ru) НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-ПРОПИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ И НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-БУТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ
CN103304569B (zh) 一种埃罗替尼-酞菁轭合物及其制备方法
RU2634731C1 (ru) Комплексное соединение 5-гидрокси-1,3,6-триметилурацила с янтарной кислотой, проявляющее антидотную активность, и способ его получения
EP0272810A2 (en) Antitumor and antiviral alkaloids
RU2024546C1 (ru) ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ДИБУТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ
RU2631238C1 (ru) Комплексное соединение 5-гидрокси-3,6-диметилурацила с янтарной кислотой, проявляющее мембраностабилизирующую активность, и способ его получения
FI60710C (fi) Analogifoerfarande foer framstaellning av 9-(2-acyloxietoximetyl)purinfoereningar anvaendbara saosom antivirala medel
Botta et al. 6-Alkyl-2-hethoxy-4-(3h)-pyrimidinones in the transformation of pyrimidines: regiospecific preparation, antitumor and antimicrobial activity of 4-O-acylated pyrimidine derivatives. New agents for selective acylation of amines
RU2493158C2 (ru) НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-МЕТИЛ-6-ФТОР-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4Н)-ОНА ДИГИДРАТ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
RU2723897C2 (ru) 2-Гидрокси-N-(6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксо-4-фенилбут-2-енамид, обладающий гастропротекторным и иммуномодулирующим действием

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14857210

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201600363

Country of ref document: EA

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 20/09/2016)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 14857210

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1