WO2015022962A1 - 脂質代謝促進剤 - Google Patents

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祥子 高井
啓輔 上田
悠一 津田
佳緒里 岩澤
峰彦 横山
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Definitions

  • the present invention relates to a lipid metabolism promoter containing arginine, alanine and / or phenylalanine as an active ingredient in a high concentration.
  • VAAM Vespa Amino Acid Mixture
  • Amino acid composition containing a specific molar ratio of alanine, arginine, aspartic acid, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine, valine and glutamine Is known to promote the process of using body fat under anaerobic exercise for kinetic energy production (Patent Document 4). Furthermore, it is also known that a composition containing an amino acid having an insulin secretion function is useful for stamina recovery and nutritional supplementation when physical strength is exhausted by exercise or the like (Patent Document 5).
  • an amino acid composition containing at least a certain amount of arginine, glutamine, and branched chain amino acids (Patent Document 6), a physical strength enhancer for infants and an athletic performance improver containing at least a certain amount of arginine and glutamine (Patent Document) 7) is also known.
  • An object of the present invention is to provide a lipid metabolism promoter capable of more effectively promoting lipid metabolism and efficiently reducing body fat.
  • the present inventors conducted extensive research on materials that promote fat metabolism and reduce body fat efficiently, and found that arginine, phenylalanine, and alanine, which are major amino acids with dietary experience, were increased.
  • the present inventors have found that the amino acid mixture contained in the concentration has a high lipid metabolism promoting action and an anti-obesity action, thereby completing the present invention.
  • the present invention includes the following aspects.
  • An amino acid mixture containing at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine is contained, and the total amount of the at least two amino acids is 60 mol with respect to 100 mol of the total amino acid amount.
  • a lipid metabolism promoter comprising the above molar ratio.
  • amino acid mixture further contains glycine and contains arginine, alanine, phenylalanine, and glycine in a molar ratio of 85 moles or more with respect to 100 moles of the total amino acid in total.
  • amino acid mixture further contains glycine and contains arginine, alanine, phenylalanine, and glycine in a molar ratio of 85 moles or more with respect to 100 moles of the total amino acid in total.
  • lipid metabolism promoter according to any one of [4].
  • amino acid mixture further contains only proline, lysine, tyrosine, threonine, leucine, valine, isoleucine, glutamic acid, tryptophan, histidine, serine, methionine, and aspartic acid as other amino acids. 4] and the lipid metabolism promoter according to any one of [6].
  • [11] Increased blood glycerol concentration, suppression of weight gain, increased blood free fatty acid concentration, increased blood glucagon concentration, decreased blood cortisol concentration, increased blood total ketone body concentration, increased blood 3-hydroxybutyric acid concentration, and The lipid metabolism promoter according to any one of the above [1] to [10], which is for promoting lipid metabolism accompanied by at least one selected from the group consisting of an increased expression level of UCP-1 in brown adipose tissue.
  • the present invention further includes the following aspects.
  • Lipid metabolism promoters [e] The lipid metabolism promoter according to the above [d], containing 8-30 mol of arginine, 18-30 mol of alanine, 10-20 mol of phenylalanine, and 20-27 mol of glycine, [f] The lipid metabolism promoter according to [d] or [e], wherein the total number of moles of arginine, alanine, phenylalanine, and glycine is 100 moles with respect to a total of 100 moles of all moles of amino acids.
  • the above [a] or [d] further contains only proline, lysine, tyrosine, threonine, leucine, valine, isoleucine, glutamic acid, tryptophan, histidine, serine, methionine, and aspartic acid as other amino acids.
  • the described lipid metabolism promoter [h] Furthermore, the lipid metabolism promoter according to [b] or [e] above, which contains only the following amino acids as other amino acids in the following molar ratio: 0.01-4 mol proline 0.01-2 mol lysine 0.01-2 mol tyrosine 0.01-2 mol threonine 0.01-2 mol leucine 0.01-2 mol valine 0.01-2 mol isoleucine 0.01 to 2 mol Glutamic acid 0.01 to 1 mol Tryptophan 0.01 to 1 mol Histidine 0.01 to 1 mol Serine 0.01 to 1 mol Methionine 0.01 to 0.2 mol Aspartic acid 0.01 to 0.1 mol [i] The lipid metabolism promoter according to any one of [a] to [h] above, wherein the lipid metabolism promoter is ingested in a state where secretion of adrenaline is enhanced, [j] The lipid metabolism promoter according to the above [i], wherein the state in which the secretion of adrenaline is
  • the lipid metabolism promoter of the present invention has an effect of promoting lipid metabolism, and can effectively exhibit an effect of promoting lipid metabolism particularly in the state of enhanced adrenaline secretion.
  • the change rate of the blood glycerol concentration obtained in Example 1 (glycerol AUC change rate; Glycerol AUC change (% of Vehicle group) is shown.
  • the transition of the amount of change in blood glycerol concentration ( ⁇ glycerol) obtained in Example 2 is shown.
  • the transition of the amount of change in blood glycerol concentration ( ⁇ glycerol) obtained in Example 3 is shown. Mean value ⁇ standard error.
  • * P ⁇ 0.05 (vs. Vehicle group, Fisher's PLSD test).
  • the transition of the body weight measured in Example 4 (FIG. 4A) and the amount of food intake / body weight during the test period (FIG. 4B) are shown.
  • concentration obtained in Example 9 is shown. *: P ⁇ 0.05 (vs. High-fat group, Fisher's PLSD test). The measurement result of the carnitine palmitoyltransferase activity in the liver obtained in Example 9 is shown. *: P ⁇ 0.05 (vs. High-fat group, Fisher's PLSD test). The measurement result of the acyl CoA oxidase activity in the liver obtained in Example 9 is shown. *: P ⁇ 0.05 (vs. High-fat group, Fisher's PLSD test). The amount of change in blood glycerol concentration ( ⁇ glycerol) obtained in Example 12 is shown.
  • Example 14 The measurement result of blood glycerol AUC (min ⁇ mg / L) obtained in Example 13 is shown. *: P ⁇ 0.05 (vs. control group, Fisher's PLSD test). The measurement result of blood glycerol AUC (min ⁇ mg / L) obtained in Example 14 is shown.
  • the present invention is not limited to the following preferred embodiments, and can be freely changed within a range in which the effects of the present invention are exhibited.
  • the present invention includes an amino acid mixture containing at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine, and the total amount of the at least two amino acids is 60 mol per 100 mol of the total amino acid.
  • the present invention relates to a lipid metabolism promoter comprising a molar ratio of at least a mole.
  • the present invention also relates to a lipid metabolism promoter further containing glycine as a component of an amino acid mixture in addition to at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention contains arginine, alanine, and phenylalanine, or arginine, alanine, phenylalanine, and glycine as active ingredients.
  • Arginine which is an active ingredient of the present invention, is one of the non-essential amino acids, and there are D-form and L-form.
  • L-Arginine Cas No. Is 74-79-3, and its alias is (S) -2-amino-5-guanidinopentanoic acid, (S) -2-amino-5- (amidinoamino) valeric acid, L-(+) -Arginine, Argi U.
  • Arg and R may be used as abbreviations for arginine.
  • Arginine is easily soluble in water and formic acid, soluble in dilute hydrochloric acid, and hardly soluble in ethanol (16th revised Japanese Pharmacopoeia).
  • Arginine is known to be contained in various materials and foods such as various proteins such as meat. Arginine is biosynthesized as an intermediate of the urea cycle, but it is rapidly degraded, making it an essential amino acid in children. Arginine is known to be involved in promoting secretion of growth hormone and improving immune function.
  • Alanine which is an active ingredient of the present invention, is one of the non-essential amino acids, and there are D-form and L-form.
  • L-alanine Cas No. Is 56-41-7, and aliases thereof are (S) -2-aminopropionic acid, (2S) -2-aminopropanoic acid, ⁇ -alanine, and L-(+)-alanine.
  • Ala and A may be used as abbreviations for alanine.
  • Alanine is easily soluble in water and formic acid and hardly soluble in ethanol (16th revised Japanese Pharmacopoeia).
  • Alanine is known to be contained in various materials such as various proteins and foods.
  • Alanine is a kind of amino acid constituting a protein and is known to be a material for connective tissue.
  • L-Phenylalanine Cas No. are 63-91-2, and their alias names are (S) - ⁇ -aminobenzenepropanoic acid, (2S) -2-amino-3-phenylpropanoic acid, (S) -3-phenyl-2-amino Propionic acid, L- ⁇ -phenylalanine, and L-( ⁇ )-phenylalanine.
  • Phe and F are used as abbreviations for phenylalanine.
  • Phenylalanine is easily soluble in formic acid, slightly insoluble in water, soluble in dilute hydrochloric acid, and hardly soluble in ethanol (16th revision Japanese Pharmacopoeia). It is known that phenylalanine is contained in various materials such as various proteins and foods.
  • Glycine is one of the non-essential amino acids.
  • Glycine Cas No. Is 56-40-6, and its alternative names are 2-aminoacetic acid, ⁇ -aminoacetic acid, glycolixyl, glycochol.
  • Gly and G may be used as abbreviations for glycine.
  • Glycine is easily soluble in water and formic acid and hardly soluble in ethanol (16th revision Japanese Pharmacopoeia).
  • Glycine is known to be contained in various materials and foods such as collagen, gelatin, and shellfish.
  • Glycine has glycogenic properties and is known to be a component such as hemoglobin and liver enzymes, and to be a neurotransmitter in the central nervous system.
  • arginine, phenylalanine, alanine, glycine or other amino acids may be free bases or hydrates, organic acids (acetic acid, tartaric acid, fatty acids, etc.), organic bases, inorganic acids (hydrochloric acid, Hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, perchloric acid, etc.) and inorganic bases (potassium, sodium, zinc, etc.) may form salts.
  • arginine, phenylalanine, alanine, and glycine may use any of D body and L body.
  • arginine, phenylalanine, alanine, glycine or other amino acids are squeezed, concentrated, purified, crystallized, or various solvents from materials and foods containing a large amount of arginine, phenylalanine, alanine, glycine or other amino acids. It can obtain by extracting with.
  • water or commonly used solvents such as alcohols, hydrocarbons, organic acids, organic bases, inorganic acids, inorganic bases, supercritical fluids, etc. may be used alone or in combination. Is possible.
  • a chemically synthesized product can also be used.
  • arginine, phenylalanine, alanine, glycine or other amino acids may be used in combination of those derived from a plurality of them.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention contains, as an active ingredient, a combination of at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine, for example, arginine, alanine, and phenylalanine.
  • the total number of moles of arginine, alanine and phenylalanine is 60 moles or more, 70 moles or more, 80 moles with respect to 100 moles of the total moles of all amino acids contained (total amino acid amount).
  • At least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine can be contained in an amount of 90 mol or more or 100 mol.
  • the total amount of arginine, alanine, and phenylalanine is 95 mol or less and 90 mol or less with respect to 100 mol of the total number of moles of all contained amino acids (total amino acid amount). , 80 mol or less, or 75 mol or less.
  • the molar ratio of 100 moles of the total number of moles of arginine, alanine, and phenylalanine to 100 moles of the total number of moles of all amino acids contained (total amino acid amount) is included in the lipid metabolism promoter.
  • the amino acids are only arginine, alanine, and phenylalanine, that is, the amino acid mixture contained in the lipid metabolism promoter is composed of arginine, alanine, and phenylalanine, but other similar descriptions in this specification are also included. It is understood as well.
  • Examples of the composition of the lipid metabolism promoter include lipid metabolism promoters (Production Example 1, Production Example 2, and Production Example 3) having the structures shown in Tables 2 and 3, but are not limited to this example. .
  • the molar ratio corresponding to the blending amounts of arginine, alanine, and phenylalanine contained in the lipid metabolism promoter of the present invention may be any value.
  • the molar ratio of arginine is 8 to 30 mol
  • alanine is 18 to 30 mol
  • phenylalanine is 10 to 20 mol with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention comprises 25 to 30 mol of arginine, 25 to 30 mol of alanine, and 10 to 15 mol of phenylalanine with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention comprises 8 to 50 mol of arginine, 18 to 50 mol of alanine, and 10 to 70 mol of phenylalanine with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein. You may contain by the molar ratio of.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention contains arginine, alanine, and phenylalanine, and the total amount thereof is in a molar ratio of 100 moles with respect to 100 moles of the total amino acid contained in the lipid metabolism promoter of the present invention.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention contains 8-50 mol of arginine and alanine with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein. 18 to 50 mol and phenylalanine can be contained in a molar ratio of 10 to 70 mol.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention may also contain arginine at a molar ratio of 8 to 30 mol, alanine at 20 to 35 mol, and phenylalanine at 10 to 55 mol with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein. Good.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention may contain a relatively large amount of phenylalanine.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can further contain glycine as an active ingredient in addition to at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine.
  • glycine as an active ingredient in addition to at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine.
  • arginine, alanine, phenylalanine, and glycine Can also be contained as an active ingredient.
  • the total number of moles of arginine, alanine, phenylalanine, and glycine is 85 moles or more, 90 moles or more with respect to 100 moles of the total number of moles of all contained amino acids (total amino acid amount), It can contain at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine and glycine in an amount of 95 moles or more, or a molar ratio of 100 moles.
  • the total amount of arginine, alanine, phenylalanine and glycine is 99 mol or less and 95 mol with respect to 100 mol of the total number of moles of all amino acids contained (total amino acid amount).
  • the amount may be 92 mol or less, or 90 mol or less.
  • the molar ratio corresponding to each blending amount of arginine, alanine, phenylalanine and glycine contained in the lipid metabolism promoter of the present invention may be any value.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention contains 8 to 30 mol of arginine, 18 to 30 mol of alanine, 10 to 20 mol of phenylalanine, and 20 to 20 mol of glycine with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein. It can be contained in a molar ratio of 27 mol.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention is, for example, 25 to 30 mol of arginine, 25 to 30 mol of alanine, 10 to 15 mol of phenylalanine, 22 to 27 mol of glycine, with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein. You may contain by the molar ratio of.
  • lipid metabolism promoter of the present invention As a composition example of the lipid metabolism promoter of the present invention, a lipid metabolism promoter (Production Example 3) having the structure shown in Table 3 can be exemplified, but the present invention is not limited to this example. Since arginine, alanine, phenylalanine, and glycine are suitable for eating and drinking and oral intake because of their taste and smell, the lipid metabolism promoter of the present invention containing these in a high concentration is excellent in flavor. Therefore, the lipid metabolism promoter of the present invention has an advantage that does not impair the flavor of foods and drinks and pharmaceuticals to which this is added.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention may further contain other amino acids.
  • the other amino acids may be 20 kinds of amino acids that usually constitute biological proteins.
  • the other amino acid may be a natural amino acid or a non-natural amino acid.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention further contains only proline, lysine, tyrosine, threonine, leucine, valine, isoleucine, glutamic acid, tryptophan, histidine, serine, methionine, and aspartic acid as other amino acids. It may be.
  • those that do not inhibit the lipid metabolism promoting effect of the lipid metabolism promoting agent of the present invention can be used preferentially.
  • the molar ratio corresponding to the amount of each of the other amino acids contained in the lipid metabolism promoter of the present invention may be any value.
  • 0.01 to 4 mol of proline, 0.01 to 2 mol of lysine, and 0.01 to 2 of tyrosine with respect to 100 mol of the total amino acid contained therein.
  • arginine is 25-30 mol
  • alanine is 25-30 mol
  • phenylalanine is 10-15 mol
  • glycine is 22-27 mol
  • proline is 0.1-4 mol
  • Aspartic acid can be contained in a molar ratio of 0.01 to 0.1 mol.
  • lipid metabolism promoter of the present invention 27-30 mol of arginine, 25-28 mol of alanine, 10-13 mol of phenylalanine, 23-26 mol of glycine, 2-3 mol of proline, and lysine 0.6 to 1.6 mol, tyrosine 0.1 to 1.1 mol, threonine 0.5 to 1.5 mol, leucine 0.3 to 1.3 mol, and valine 0.3 to 1.
  • fat refers to neutral fat.
  • Neutral fat catabolism is divided into neutral fat breakdown into glycerol and fatty acids and fatty acid combustion ( ⁇ oxidation).
  • the mechanism of fat breakdown can be generally outlined as follows.
  • Adrenaline secretion increases due to exercise load, bathing, cold stimulation, and the like.
  • cyclic AMP (cAMP) is synthesized from ATP.
  • a hormone-sensitive lipase converts triacylglycerol into free fatty acid and monoacylglycerol.
  • Monoacylglycerol lipase converts monoacylglycerol into glycerol and free fatty acids.
  • ⁇ Combustion ( ⁇ oxidation) of the produced fatty acid is generally outlined as follows.
  • Fatty acids are transported to the liver and catalyzed and activated by the enzyme acyl CoA synthetase present on the cytoplasmic side of the mitochondrial outer membrane to become fatty acyl CoA.
  • the mitochondrial inner membrane does not directly permeate acyl-CoA, it temporarily binds to carnitine to produce fatty acyl carnitine.
  • Fatty acid acylcarnitines pass through the inner mitochondrial membrane and into the matrix by facilitated diffusion through the acylcarnitine / carnitine transporter.
  • the fatty acid acyl CoA is regenerated by being transferred from carnitine to coenzyme A present in mitochondria by the catalyst of the enzyme carnitine acyltransferase II.
  • Fatty acyl CoA that has entered mitochondria is oxidized by enzymes in the matrix.
  • the ⁇ -oxidation reaction consists of four stages of reaction, and 2 carbons are separated as acetyl CoA from the carboxy terminus of the fatty acyl chain each time.
  • Dehydrogenase desaturates ⁇ and ⁇ positions, and hydratase adds ⁇ OH, dehydrogenase binds ⁇ position to keto group, thiolase binds CoA to ⁇ position, and ⁇ and ⁇ positions are cleaved. This produces carbon chain fatty acyl-CoA and acetyl CoA.
  • acetoacetyl CoA A part of acetyl CoA becomes acetoacetyl CoA, and acetoacetic acid is produced via 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA (HMG-CoA). Acetoacetic acid is converted to acetone by decarboxylation or reduced to ⁇ -hydroxybutyric acid.
  • HMG-CoA 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA
  • Acetoacetic acid and ⁇ -hydroxybutyric acid produced in the liver are transported to cells in tissues other than the liver (central nervous system, cardiac muscle, skeletal muscle, kidney, adrenal gland, etc.) and ATP is produced in the mitochondrial TCA circuit and electron transport system. Used for.
  • fatty acids are decomposed in brown fat cells and converted to heat under the action of UCP-1 (Uncoupling protein 1, mitochondrial uncoupling protein). More specifically, when noradrenaline binds to the ⁇ 3 receptor on brown fat, UCP-1 also called thermogenin is opened, the membrane potential (mitochondrial proton concentration gradient) is eliminated, and ATP synthesis is not performed. Oxidation of a substrate such as a fatty acid is remarkably enhanced and heat production occurs. That is, ⁇ -oxidation of fatty acids is promoted and heat energy is released.
  • UCP-1 Uncoupling protein 1, mitochondrial uncoupling protein
  • ketone bodies acetoacetic acid, ⁇ -hydroxybutyric acid, acetone
  • the lipid metabolism promoter of the present invention containing arginine, phenylalanine, alanine and glycine at a high concentration, or a combination of two or more of arginine, phenylalanine and alanine. It was found that lipid metabolism promoters promote lipid metabolism.
  • the lipid metabolism promoting effect of the lipid metabolism promoting agent of the present invention could be confirmed in a state in which exercise load was actually applied and adrenaline secretion was enhanced ( Example 4 and Example 5).
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can metabolize fat more efficiently, particularly in a state where secretion of adrenaline is continuously increased.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can be suitably used for acting in a subject with an increased state of adrenaline secretion.
  • the adrenaline hypersecretion state is not particularly limited, it is preferably a state in which stimulation by exercise, stress, exposure to cold, bathing, eating, etc. is received.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention is administered to a subject in a state of increased adrenergic secretion, or increased adrenergic secretion. What is necessary is just to administer to the subject (For example, the subject before exercise
  • Example 4 the expression level of UCP-1 in brown adipose tissue increased in animals administered with the lipid metabolism promoter of the present invention. From this, it was found that the lipid metabolism promoter of the present invention increases the decomposition of fat and increases the conversion efficiency from fatty acid to heat.
  • ketone body formation and glucagon secretion during exercise increased.
  • Glucagon has a function of promoting the use of glycogen and the production of ketone bodies. From this, it was also found that the lipid metabolism promoter of the present invention increases the efficiency of conversion from fatty acid to energy when glucose-derived energy metabolism is insufficient. When attention is paid to the time course of the ketone body concentration, the production of ketone bodies is greatly increased after the exercise load (time 30 to time 90). From this, it was found that the conversion from fatty acid to energy increased during exercise continued to be high after the end of exercise.
  • the amount of change in the respiratory exchange ratio during aerobic exercise decreased in humans administered the lipid metabolism promoter of the present invention.
  • the respiratory exchange ratio is one index of energy metabolism, and a decrease in this value indicates that the contribution of lipids in energy metabolism has increased. This also indicates that the lipid metabolism promoter of the present invention increases the efficiency of conversion from fatty acid to energy (Example 5).
  • Cortisol is a kind of glucocorticoid, and is a hormone that increases secretion from the adrenal cortex when stressed. Since the increase in cortisol has a function of promoting the decomposition of glycogen and protein into sugar, the increase increases lipid metabolism. However, if the state of high cortisol secretion continues, muscle glycogen and liver glycogen are consumed early, and exercise performance decreases. In addition, there are adverse effects on the body such as decreased immune function and atrophy of muscles and organs. Therefore, during exercise, the cortisol level preferably returns to a steady value at an early stage.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention promotes lipid metabolism without affecting insulin secretion or blood glucose (Example 5). If exercise is performed with increased insulin secretion, hypoglycemia may occur during exercise. Since the lipid metabolism promoter of the present invention does not affect the secretion of insulin, it can efficiently produce lipid-derived energy without causing hypoglycemia during exercise.
  • lipid metabolism promoter of the present invention exerts a lipid metabolism promoting effect without affecting the secretion of growth hormone, adrenaline and noradrenaline (Example 5).
  • the lipid metabolism promoter of the present invention promotes all processes of decomposition from fat to fatty acid, conversion from fatty acid to heat, and conversion from fatty acid to energy.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can be used to promote both the decomposition of fat into fatty acids and the conversion of fatty acids into heat.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention is an index of lipid metabolism, such as blood glycerol concentration increase, weight gain suppression, blood free fatty acid concentration increase, blood glucagon concentration increase, blood cortisol concentration decrease, blood total Accompanied by at least one, preferably two or more, more preferably all selected from the group consisting of increased ketone body concentration, increased blood 3-hydroxybutyric acid concentration, and increased UCP-1 expression level in brown adipose tissue It can be used for promoting lipid metabolism.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can also be used as a further indicator for promoting lipid metabolism accompanied by increased carnitine palmitoyltransferase activity in the liver and / or increased acyl CoA oxidase activity in the liver.
  • These indicators can be measured by a conventional method, and for example, reference can be made to the description of Examples below.
  • the increase, decrease, or increase in these lipid metabolism indicators may be judged in comparison with a control group (for example, placebo group) under the same conditions except that the lipid metabolism promoter of the present invention is not administered or ingested. If a certain tendency is shown, it can be judged that there is an effect thereof, but it is more preferable that a statistically significant difference is shown.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can be used in any form, for example, as it is or added to a food or drink or a medicine for promoting lipid metabolism.
  • the amount of arginine, alanine, and phenylalanine added to the lipid metabolism promoter varies depending on the dosage form, symptom, body weight, use, etc., and is not particularly limited.
  • the total amount can be set to 0.2 to 100 w / w% (weight / weight%), preferably 0.3 to 100 w / w%, more preferably 0.4 to 100 w / w. % Can be set.
  • the present invention also provides a method of promoting lipid metabolism in a subject, comprising administering or ingesting the lipid metabolism promoter of the present invention to the subject.
  • the subject is preferably an animal desired to promote lipid metabolism, but is not limited to humans, domestic animals (pigs, horses, etc.), pets (dogs, cats, etc.), experimental (test) animals (mouse, Mammals including rodents such as rats and rabbits) are preferred.
  • preferred subjects include subjects with dyslipidemia or obesity, genetic predisposition to obesity, subjects with lifestyle or environmental risks, subjects in whom weight loss or weight maintenance is desired, or exercise, Examples include subjects that are or will be placed in a state of hyperadrenergic secretion due to stress or the like. Since the lipid metabolism promoter of the present invention has the effect of efficiently promoting lipid metabolism, fat can be efficiently consumed even in obese people who tend to degrade fat slowly and less than normal people. Can be used for burning.
  • the daily intake (dose) of the lipid metabolism promoter is not particularly limited because it varies depending on age, symptoms, body weight, use, etc.
  • the total intake can be set to 0.3 to 30 g, 0.8 to 8 g, 1 to 5 g, 1.3 to 3.5 g, 1.5 g or 3 g as a solid content.
  • the daily intake of arginine is 0.06 to 12 g (or 0.4 to 70 mmol), 0.2 to 4 g (or 1 to 21 mmol), 0.4 to 2 g (or 2 to 2 mmol). 11 mmol), 1.2 g (7 mmol), 1 g (6 mmol), or 0.6 g (4 mmol).
  • the daily intake of alanine is 0.03 to 10 g (or 0.3 to 112 mmol), 0.09 to 3 g (or 1 to 34 mmol), 0.2 to 2 g (or 2 to 2 mmol). 17 mmol), 1 g (11 mmol), 0.6 g (6 mmol), or 0.3 g (3 mmol).
  • the daily intake of phenylalanine is 0.02 to 10 g (or 0.1 to 61 mmol), 0.08 to 3 g (or 0.5 to 18 mmol), 0.2 to 2 g (or 0.9-9 mmol), 1 g (6 mmol), 0.5 g (3 mmol), or 0.2 g (1 mmol).
  • the daily intake of glycine is 4 g or less (or 59 mmol or less), 1.3 g or less (or 18 mmol or less), 0.7 g or less (or 9 mmol or less), 0.02 to 4 g ( Or 0.3-59 mmol), 0.07-1 g (or 1-18 mmol), 0.1-0.7 g (or 2-9 mmol), 0.4 g (6 mmol) or 0.2 g (3 Mmol).
  • lipid metabolism promoter of the present invention may be used simultaneously with or before and after intake of foods and beverages and pharmaceuticals having a conventionally known lipid metabolism promotion effect.
  • Examples of the actual form of the lipid metabolism promoter of the present invention include forms added to tablets (tablets), capsules, granules, powders, syrups, liquids, suspensions, drinks, foods and drinks, and the like. This can be taken or administered orally, by tube, intravenously and the like.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention is administered by adding it to a special-purpose food such as a food for specified health use, a nutritional functional food, a dietary supplement or a supplement, or by adding it to a pharmaceutical product. Therefore, it is expected to promote lipid metabolism.
  • a special-purpose foods such as foods for specified health use, functional nutritional foods, dietary supplements and supplements
  • consumers can expect to promote lipid metabolism while clearly distinguishing them from general foods.
  • the food and drink may be for consumption by non-human animals such as domestic animals and pets.
  • the present invention also provides foods and pharmaceuticals containing the lipid metabolism promoter of the present invention, such as foods and drinks and pharmaceuticals for promoting lipid metabolism.
  • an agent consisting only of the lipid metabolism promoter of the present invention and an auxiliary for formulation can also be produced.
  • adjuvants for formulation include excipients, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agents, solubilizers, suspension agents, and coating agents. These may be those that can be normally used in the field of food and beverage or pharmaceutical preparation technology. Further, an appropriate amount of vitamins, minerals, organic acids, sugars, peptides, amino acids not mentioned above, and the like may be added to these. As other components, those which do not inhibit the lipid metabolism promoting effect of the lipid metabolism promoting agent of the present invention can be used preferentially.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention includes various foods (milk, soft drinks, fermented milk, yogurt, cheese, bread, biscuits, crackers, pizza crusts, prepared powdered milk, liquid foods, foods for the sick, nutritional foods, frozen foods. , Processed foods and other commercially available foods) and may be ingested. These foods may be in the form of liquid, paste, gel, solid or powder.
  • the food containing the lipid metabolism promoter of the present invention can be produced using water, protein, carbohydrates, lipids, vitamins, minerals, organic acids, organic bases, fruit juices, flavors and the like.
  • the protein include whole milk powder, skim milk powder, partially skim milk powder, casein, whey powder, whey protein, whey protein concentrate, whey protein isolate, whey protein hydrolyzate, ⁇ -casein, ⁇ -casein, ⁇ - Casein, ⁇ -lactoglobulin, ⁇ -lactalbumin, lactoferrin, soy protein, chicken egg protein, meat protein and other animal and vegetable proteins, their degradation products, butter, whey minerals, cream, whey, non-protein nitrogen, sialic acid And various milk-derived components such as phospholipids and lactose.
  • a peptide such as casein phosphopeptide or an amino acid.
  • the saccharide include saccharides, processed starch (in addition to text phosphorus, soluble starch, British starch, oxidized starch, starch ester, starch ether, etc.), dietary fiber, and the like.
  • lipids for example, lard, fish oil, etc., these fractionated oils, hydrogenated oils, transesterified oils and other animal oils, palm oil, safflower oil, corn oil, rapeseed oil, coconut oil, etc.
  • vegetable oils such as oil, hydrogenated oil, and transesterified oil.
  • vitamins include vitamin A, carotene, vitamin B group, vitamin C, vitamin D group, vitamin E, vitamin K group, vitamin P, vitamin Q, niacin, nicotinic acid, pantothenic acid, biotin, inositol, choline,
  • examples include folic acid.
  • minerals include calcium, potassium, magnesium, sodium, copper, iron, manganese, zinc, selenium and the like.
  • examples of the organic acid include malic acid, citric acid, lactic acid, tartaric acid, erythorbic acid, and the like. These components can be used alone or in combination of a plurality of types, and a synthetic product and / or a food containing a lot of these may be used. These foods may be in the form of liquid, paste, gel, solid or powder.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention can efficiently promote lipid metabolism by ingesting before or during the state in which the secretion of adrenaline continuously increases, as well as during normal life and medical treatment. For example, it is known that adrenaline secretion is continuously increased in subjects who are subjected to exercise load, cold exposure, stress load, bathing, and eating a lot. Therefore, the lipid metabolism promoter of the present invention may be taken before exercise load, cold exposure, stress load, etc. or with exercise load, cold exposure, stress load, etc. Alternatively, the lipid metabolism promoter of the present invention may be taken before or during bathing. A person with a tendency toward multiple eating may take the quality metabolism promoter of the present invention.
  • the present invention relates to the use (use method) of a combination of at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine, for example, a combination of arginine, alanine, and phenylalanine, for producing a lipid metabolism promoter. Further, the present invention also provides a use in which the total number of moles of arginine, alanine, and phenylalanine is 60 moles or more with respect to 100 moles of the total number of moles of all amino acids.
  • the present invention also relates to a combination of at least two amino acids selected from the group consisting of arginine, alanine, and phenylalanine, for example, arginine, alanine, and phenylalanine, and the total number of moles of arginine, alanine, and phenylalanine contains amino acids.
  • a method of promoting lipid metabolism excluding medical practice, characterized by ingesting a composition containing a molar ratio of 60 moles or more with respect to 100 moles of all moles (total amino acid amount) ).
  • Example 1 Comparison of various amino acids and conventional amino acid composition (VAAM) in lipid metabolism promoting effect (1) Material and method [test sample] ⁇ V. A. A. M.M. : Amino acid mixture (VAAM) having the composition shown in Table 1 was prepared by suspending in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 1 g / 10 ml.
  • L-alanine (Ala), L-methionine (Met), L-phenylalanine (Phe), L-arginine (Arg), glycine (Gly) at a concentration of 1 g / 10 ml each for water for injection (Otsuka Pharmaceutical) ) And suspended.
  • VAAM group alanine group, methionine group, phenylalanine group, arginine group, glycine group
  • test sample dose 1 g / kg was orally
  • FIG. 1 shows the change rate of blood glycerol concentration (glycerol AUC change rate [Glycerol AUC change]). All of the alanine group, methionine group, phenylalanine group, arginine group and glycine group A. A. M.M. It was higher than the group.
  • alanine, methionine, phenylalanine, arginine, and glycine have a higher lipid metabolism promoting effect than conventional amino acid compositions.
  • Example 2 Comparison of Lipid Metabolism Promoter of the Present Invention (Production Example 1) and Single Amino Acid in Lipid Metabolism Promoting Effect (1) Materials and Methods [Test Sample] “Production Example 1”: An amino acid mixture having the composition shown in Table 2 (Production Example 1) was prepared by suspending in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 2.7 g / 10 ml. In 10 ml, 1.2 g of L-arginine, 0.57 g of L-alanine and 0.47 g of L-phenylalanine are contained.
  • Arginine L-arginine was prepared by suspending in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 1.2 g / 10 ml.
  • Alanine L-alanine was prepared by suspending in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 0.57 g / 10 ml.
  • Phenylalanine L-phenylalanine was prepared by suspending in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 0.47 g / 10 ml.
  • VAAM group “Production Example 1” group, arginine group, alanine group, phenylalanine group) or water for injection (vehicle group) was orally administered at 5 ml / kg. After 30 minutes, blood was collected again (time 0
  • Glycerol fluorescence assay kit (Glycerol Fluorometric Assay Kit; Cayman Chemical Company) was used to measure glycerol in plasma according to the attached protocol. A value obtained by subtracting the measured value of time-30 from the measured value at each measurement was calculated, and this was used as the amount of change in blood glycerol concentration.
  • FIG. 2 shows the amount of change in blood glycerol concentration ( ⁇ glycerol).
  • the amount of change in blood glycerol concentration was higher than that in the Vehicle group.
  • the “Production Example 1” group was significantly higher than the Vehicle group (p ⁇ 0.05) blood glycerol concentration change.
  • the amount of change in blood glycerol concentration was significantly higher in the phenylalanine group than in the Vehicle group only 30 minutes after adrenaline administration (time 30). The other groups were not significantly different from the Vehicle group.
  • alanine, phenylalanine, and arginine were more effective in promoting lipid metabolism when ingested in combination of three types than when ingested alone.
  • Example 3 Comparison of Lipid Metabolism Promoter of the Present Invention (Production Example 3) and Conventional Amino Acid Composition (VAAM) in Lipid Metabolism Promoting Effect (1) Materials and Methods [Test Sample] ⁇ V. A. A. M.M. An amino acid mixture (VAAM) having the composition shown in Table 1 was prepared by suspending it in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 3 g / 10 ml.
  • “Production Example 3” An amino acid mixture having the composition shown in Table 3 (Production Example 3) was prepared by suspending it in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a concentration of 3 g / 10 ml.
  • VAAM group “Production Example 3” group
  • Water for injection Vehicle for injection
  • Blood glycerol Glycerol Assay Kit (Cayman Chemical Company) was used to measure glycerol in plasma according to the attached protocol. A value obtained by subtracting the measured value of time-30 from the measured value at each measurement was calculated, and this was used as the amount of change in blood glycerol concentration.
  • FIG. 3 shows the amount of change in blood glycerol concentration.
  • the “Production Example 3” group includes V. A. A. M.M. The amount of change in blood glycerol concentration was higher than that in the group. At 30 minutes (time 30) and 45 minutes (time 45) after adrenaline administration, the “Production Example 3” group showed a significantly higher (p ⁇ 0.05) change in blood glycerol concentration than the Vehicle group. .
  • the lipid metabolism promoter of the present invention containing highly alanine, phenylalanine, and arginine has a higher lipid metabolism promoting effect than the conventional amino acid composition.
  • Example 4 Lipid metabolism promoting effect of lipid metabolism promoter of the present invention (Production Example 3) in animals fed with a high fat diet and subjected to exercise load (1) Materials and methods [Test sample and food] -0.1% CMC solution: Prepared by dissolving carboxymethylcellulose (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) in distilled water for injection at a concentration of 0.1 w / v%.
  • VAAM Amino acid mixture
  • V. A. A. M.M. + CoQ10 + L-Carnitine 1 g / 10 ml of the amino acid mixture (VAAM) having the composition shown in Table 1, Coenzyme Q10 (CoQ10, Taiyo Kagaku) as CoQ10, 10 mg / 10 ml, L-carnitine (San-Eigen F. was prepared by suspending in a 0.1% CMC solution to a concentration of 68 mg / 10 ml.
  • “Production Example 3” An amino acid mixture having the composition shown in Table 3 (Production Example 3) was prepared by suspending it in a 0.1% CMC solution at a concentration of 1 g / 10 ml.
  • AIN-93M Oriental Yeast Industry: The composition is shown in Table 5.
  • AIN-93 A standard purified feed for nutritional research using mice and rats published in 1993 (AIN-93) by the National Institute of Nutrition (AIN).
  • HFD-60 Oriental Yeast Industry
  • Test sample H + VAAM group, H + VAAM + CoQ10 + L-Carnitine group, H + "Production Example 3" group
  • 0.1% CMC solution Normal group, High-fat group
  • the test sample or 0.1% CMC solution was prepared and used once a week, and administered at the dose shown in Table 6 (dosing volume 10 mL / kg).
  • UCP-1 expression level in brown adipose tissue Using a mouse mitochondrial brown fat uncoupling protein 1 (UCP1) ELISA Kit (CUSABIO), UCP-1 expression level in brown adipose tissue was measured.
  • UCP1 ELISA Kit CUSABIO
  • FIG. 4 shows the results of body weight measurement and food intake / body weight during the test period.
  • the body weight was significantly increased from the third day (day 3) compared with the Normal group.
  • the “Production Example 3” group a significant body weight-suppressing effect was observed on the 3rd to 42nd day (day 3 to day 42) compared with the High-fat group.
  • the + CoQ10 + L-Carnitine group there was no difference in body weight compared to the High-fat group.
  • Food intake / body weight during the study period was lower in each group fed HFD-60 than in the group fed AIN-93M, but differed between groups fed HFD-60 Was not recognized.
  • FIG. 5 shows the fat weight around the kidney.
  • the weight increased significantly in the High-fat group compared to the Normal group.
  • the production example 3 group significantly suppressed the increase of the adipose tissue weight as compared with the high-fat group.
  • the + CoQ10 + L-Carnitine group showed no difference in adipose tissue weight compared to the High-fat group.
  • FIG. 6 shows the expression level of UCP-1 in brown adipose tissue. There was no change in UCP-1 expression level in the High-fat group compared to the Normal group. In the Production Example 3 group, the expression level of UCP-1 was significantly increased as compared with the High-fat group. On the other hand, V. A. A. M.M. Groups and V.A. A. A. M.M. In the + CoQ10 + L-Carnitine group, there was no difference in the expression level of UCP-1 compared to the High-fat group.
  • Example 5 Confirmation of the effect of the lipid metabolism promoter of the present invention on the effect of promoting lipid metabolism (1) Materials and methods [Test food] The following two types of test foods were prepared using capsules (Japanese Pharmacopoeia Cellulose White Capsule (vegetable) No. 00) whose appearance could not be identified from the appearance.
  • the subject was judged to be tired when two or more of the following criteria (1) to (4) were satisfied. Further, the maximum oxygen intake obtained immediately before it was determined that the patient was tired was defined as VO 2 max.
  • Bicycle exercise is performed using a bicycle ergometer, increasing the exercise intensity by 100 W at 0 to 1 minute after the start of exercise, and 25 W every minute after that, until the tiredness is exhausted. (Multi-step gradual exercise test).
  • a double-blind crossover comparison test was conducted on 12 male subjects 20.5 ⁇ 0.2 years old (average value ⁇ standard error) thus selected.
  • the first test (VS1) was performed with an interval of 14 days from VS0. In VS1, one of two kinds of test foods was ingested, and bicycle exercise, blood collection, collection and analysis of exhalation gas, and heart rate measurement were performed. Further, a second test (VS2) was performed with an interval of 7 days from VS1. In VS2, a test food different from VS1 was ingested, and bicycle exercise, blood sampling, collection and analysis of exhaled gas, and heart rate measurement were performed.
  • test VS1 and test VS2 Ingestion of test food: The test food was swallowed without chewing using water or white water.
  • Bicycle exercise VO 2 max measured at VS0 using a bicycle ergometer for 60 minutes from 30 minutes after intake of test food to 90 minutes after intake of test food (time 30 to 90) under conditions of 60 rpm. Of 50% exercise intensity.
  • Measurement of heart rate It was carried out continuously for 150 minutes immediately after taking test food to 150 minutes after taking test food (time 0 to time 150).
  • Respiration exchange ratio The collected exhalation was measured with a gas analyzer for each breath, and the concentration of O 2 and CO 2 in the exhalation and the flow rate of the exhalation were measured. Based on this measured value, oxygen uptake (VO 2 ) (ml / body weight kg / min)), carbon dioxide production (VCO 2 (ml / body weight kg / min)) and respiratory exchange ratio (VCO 2 / VO 2) ) was calculated. Furthermore, the amount of change in the respiratory exchange ratio ( ⁇ VCO 2 / VO 2 ) was determined by subtracting the group average value of the respiratory exchange ratio at time 0 from the respiratory exchange ratio at each time point.
  • Blood glycerol Serum glycerol was measured using an enzyme method according to the attached manual.
  • Blood free fatty acid The concentration of free fatty acid in serum was measured using an enzyme-UV method.
  • -Glucagon in blood The concentration of glucagon in plasma was measured using the RIA2 antibody (Double-antibody Radioimmunoassay) method.
  • Blood insulin Serum insulin concentration was measured using the CLIA (Chemiluminescent Immunoassay) method.
  • -Blood glucose The blood glucose level was measured using an enzyme method.
  • -Total ketone body in blood The total ketone concentration in serum (total of 3-hydroxybutyric acid and acetoacetic acid) was measured using an enzymatic method.
  • Serum acetoacetate concentration was measured using an enzymatic method.
  • -Blood growth hormone The concentration of growth hormone in serum was measured using the CLEIA method.
  • -Adrenaline in blood The adrenaline concentration in plasma was measured using HPLC (High Performance Liquid Chromatography) method.
  • Plasma noradrenaline concentration was measured using HPLC method.
  • FIG. 7 shows the results of changes in the respiratory exchange ratio over time ( ⁇ VCO 2 / VO 2 ).
  • ⁇ VCO 2 / VO 2 changed at a lower value in the active group from the start of exercise to after the end of exercise, and a significant decrease was observed at time 85 and 90 (min) compared to the placebo group during exercise.
  • both groups once increased at time 95 and 100 (min), but then decreased rapidly to time 135 (min).
  • time 125 and 135 (min) did not significant difference between time 125 and 135 (min)
  • the active group showed a lower average value.
  • FIG. 8 shows the measurement results of blood glycerol concentration and free fatty acid concentration over time.
  • the concentration of blood glycerol was higher in the active group than in the active group, although no significant difference was observed at time 45 and 90 (min) during exercise.
  • the blood free fatty acid shows a higher average value in the active group from the start of exercise (time 30 (minutes)) to the end of the test (time 150 (minutes)), and the highest average value in time 90 (minutes) during exercise. Indicated.
  • FIG. 9 shows the results of measurement of blood cortisol, glucagon, insulin concentration and blood glucose over time.
  • Cortisol rose to time 0-15 (min) before exercise, but decreased thereafter. In time 15 to 75 (min), the value of the active group was lower, and a significant difference was recognized in time 45 (min).
  • FIG. 10 shows the results of measuring the concentration of total ketone bodies, 3-hydroxybutyric acid, and acetoacetic acid in the blood over time.
  • Total ketone bodies and 3-hydroxybutyric acid decrease in both the active group and the placebo group until time 45 (min) during exercise (15 minutes after the start of exercise), but then begin to increase until time 45 to 150 (min) The amount of increase was larger in the active group, and the average value was maximum at time 120 (minutes). A significant difference was observed in the measured value of time 60 (min).
  • time 120 and time 150 the production of ketone bodies in the active group tended to increase greatly.
  • FIG. 11 shows the results of measuring the concentrations of growth hormone, adrenaline and noradrenaline in blood.
  • Growth hormone increased in both the active group and the placebo group from the start of the test (time 0), and showed almost the same transition. There was no significant difference between the active group and the placebo group.
  • the values of adrenaline and noradrenaline increased with the start of exercise (time 30) and decreased with the end of exercise (time 90). In both cases, there was no significant difference between the active group and the placebo group.
  • the lipid metabolism promoting agent of the present invention has a lipid metabolism promoting effect upon exercise load in humans. Furthermore, it was also found that the lipid metabolism promoter of the present invention exerts a lipid metabolism promoting effect without affecting the secretion of insulin, growth hormone, adrenaline and noradrenaline.
  • Example 6 Manufacture of beverages blended with the lipid metabolism promoter of the present invention
  • the production example 3 shown in Table 3 is 1.5 w / v%, sweetener 1.0 w / v%, acidulant 0.9 w / v%, and thickener.
  • a beverage was prepared according to a conventional method by blending at a concentration of 0.2 w / v%. Beverage 200 When ml is ingested, 3 g of Production Example 3 can be ingested.
  • Example 7 Manufacture of a tablet containing the lipid metabolism promoter of the present invention 50 wt / w% of the production example 3 shown in Table 3 was combined with 50 w / w% of excipient, binder, disintegrant, and lubricant, Tablets were manufactured according to a conventional method.
  • Example 8 Preparation of supplement containing the lipid metabolism promoter of the present invention L-arginine 1 g (5.7 mmol), L-alanine 1 g (11 mmol), L-phenylalanine 1 g (6.1 mmol) Excipients were added to and filled into capsules.
  • Example 9 Measurement of lipid metabolism index (1) Materials and methods [Test sample] The test sample was prepared by suspending an amino acid mixture having the composition shown in Table 3 (Production Example 3) and an amino acid mixture having the composition shown in Table 1 (VAAM) in distilled water. did.
  • test sample was forcibly orally administered to mice using a sonde every day for 4 days after the acclimation period, excluding the last day.
  • exercise force running
  • the exercise load by the treadmill was 40 minutes at a speed of 15 m / min.
  • the test sample was administered 30 minutes before the exercise load by the treadmill.
  • the animals were fasted for 18 hours from the 4th day to the 5th day after the start of administration.
  • Dissection was performed 5 days after the start of administration. On the day of the dissection, each group was divided into three groups in order to examine temporal changes from the time of administration. Specifically, a group dissected before administration (pre-administration (0)), a group dissected 30 minutes after administration (before exercise (30)), and a group dissected after 60 minutes of treadmill exercise (30 minutes after administration) ( After exercise (90)), the test sample was administered on the day of dissection and exercise exercise was performed, and blood collection and dissection were performed. The collected livers were weighed, immediately frozen in liquid nitrogen, and stored frozen at ⁇ 80 ° C. until ⁇ -oxidation-related enzymes were measured.
  • ⁇ -oxidation-related enzyme activity (carnitine palmitoyltransferase activity, acyl CoA oxidase activity) in the liver was measured by the following procedure. First, the liver was homogenized, centrifuged, and the supernatant was collected to obtain a total liver homogenate fraction. For this fraction, carnitine palmitoyltransferase activity was measured by using a partly modified method of Marlwell et al.
  • acyl CoA oxidase activity was measured for the liver homogenate fraction by partially modifying the method of Hashimoto et al. Specifically, 50 mM potassium phosphate buffer (final concentration 0.1 mM palmitoyl CoA, 10.6 mM phenol, 0.82 mM 4-aminoantipyrine, 10 ⁇ M FAD, 4 U peroxidase (horse radish) and 0.2 mg bovine albumin ( The total liver homogenate fraction obtained at pH 7.4) was added, and the absorbance was monitored at 30 ° C. and 500 nm for 11 minutes (total amount 200 ⁇ L).
  • the amount of protein in the obtained liver total homogenate fraction was measured using the BCA method.
  • TaKaRa BCA Protein Assay Kit T9300A was used and measured according to the attached manual.
  • FIG. 12 shows the measurement results of blood glucagon concentration.
  • the H + Production Example 3 group showed a significant increase in blood glucagon concentration before exercise (30 minutes after administration) compared to the High-fat group. That is, it was shown that the lipid metabolism promoter of the present invention can efficiently promote lipid metabolism during exercise by enhancing the secretion of glucagon having a lipolysis promoting action before exercise.
  • FIG. 13 shows the measurement results of carnitine palmitoyltransferase activity.
  • the H + Production Example 3 group showed a significant increase in carnitine palmitoyltransferase activity before administration and before exercise (30 minutes after administration) compared to the High-fat group.
  • FIG. 14 shows the measurement results of acyl CoA oxidase activity.
  • the H + Production Example 3 group showed a significant increase in acyl CoA oxidase activity before administration compared to the High-fat group.
  • Carnitine palmitoyltransferase and acyl-CoA oxidase which are liver ⁇ -oxidation-related enzymes, are known to be rate-determining stages of lipid metabolism. Therefore, the lipid metabolism promoter of the present invention can enhance the activity of these ⁇ -oxidation-related enzymes. Has also been shown to promote lipid metabolism.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention containing highly alanine, phenylalanine and arginine exhibits a high lipid metabolism promoting effect.
  • blood was collected from the tail vein (30 minutes before administration; time-30), and the test sample was immediately orally administered (5 ml / kg) at a dose of 1 g / kg to the body weight of the rat.
  • blood was collected again (time 0) and immediately followed by intraperitoneal administration of adrenaline ((R)-( ⁇ )-epinephrine, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at a dose of 0.2 mg / kg (8 ml / kg). kg). Thereafter, blood was collected over time every 15 minutes (time 15, 30, 45, 60, 75, 90) until 90 minutes after administration of adrenaline. Plasma was obtained from the collected blood, and blood glycerol was measured.
  • Glycerol was measured in plasma using a glycerol assay kit (Cayman Chemical Company) according to the attached protocol. A value obtained by subtracting the measured value of time 0 from the measured value at each measurement was calculated, and this was used as the amount of change in blood glycerol concentration.
  • blood was collected from the tail vein (time-30), and the test sample was immediately orally administered (5 ml / kg) at a dose of 1 g / kg relative to the rat body weight.
  • blood was collected again (time 0) and immediately followed by intraperitoneal administration of adrenaline ((R)-( ⁇ )-epinephrine, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at a dose of 0.2 mg / kg (8 ml / kg). kg). Thereafter, blood was collected over time every 15 minutes (time 15, 30, 45, 60, 75, 90) until 90 minutes after administration of adrenaline. Plasma was obtained from the collected blood and the blood glycerol concentration was measured.
  • Glycerol was measured in plasma using a glycerol assay kit (Cayman Chemical Company) according to the attached protocol. A value obtained by subtracting the measured value of time 0 from the measured value at each measurement was calculated, and this was used as the amount of change in blood glycerol concentration.
  • blood was collected from the tail vein (time-30), and the test sample was immediately orally administered (5 ml / kg) at a dose of 1 g / kg relative to the rat body weight.
  • blood was collected again (time 0) and immediately followed by intraperitoneal administration of adrenaline ((R)-( ⁇ )-epinephrine, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at a dose of 0.2 mg / kg (8 ml / kg). kg). Thereafter, blood was collected over time every 15 minutes (time 15, 30, 45, 60, 75, 90) until 90 minutes after administration of adrenaline. Plasma was obtained from the collected blood and the blood glycerol concentration was measured.
  • Glycerol was measured in plasma using a glycerol assay kit (Cayman Chemical Company) according to the attached protocol. A value obtained by subtracting the measured value of time 0 from the measured value at each measurement was calculated, and this was used as the amount of change in blood glycerol concentration.
  • FIG. 15 shows the amount of change in blood glycerol concentration ( ⁇ glycerol).
  • Arginine (Arg): Phenylalanine (Phe) 2.5: 7.5 group and 5: 5 group had a higher level of change in blood glycerol concentration than the control group. It was also found that arginine and phenylalanine showed the highest lipid metabolism promoting effect when mixed at 1: 3.
  • Example 13 Measurement of lipid metabolism index (1) Materials and methods [Test sample] As test samples, (i) a 1: 1 weight ratio mixture of alanine and arginine, (ii) a 1: 3 weight ratio mixture of alanine and phenylalanine, which showed high lipolytic ability in each of Examples 10 to 12, iii) A 1: 3 weight ratio mixture of arginine and phenylalanine, and (iv) an amino acid mixture (Production Example 3) having the composition shown in Table 3 were each prepared by suspending in water for injection (Otsuka Pharmaceutical).
  • blood was collected from the tail vein (time-30), and the test sample was immediately orally administered (5 ml / kg) at a dose of 1 g / kg relative to the rat body weight.
  • blood was collected again (time 0) and immediately followed by intraperitoneal administration of adrenaline ((R)-( ⁇ )-epinephrine, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at a dose of 0.2 mg / kg (8 ml / kg). kg). Thereafter, blood was collected over time every 15 minutes (time 15, 30, 45, 60, 75, 90) until 90 minutes after administration of adrenaline. Plasma was obtained from the collected blood, and blood glycerol was measured.
  • Glycerol was measured in plasma using a glycerol assay kit (Cayman Chemical Company) according to the attached protocol. Based on the value obtained by subtracting the measured value of time 0 from the measured value at each measurement, blood glycerol AUC (area under the blood concentration-time curve) of time 0 to time 90 was calculated.
  • FIG. 16 shows the calculated blood glycerol AUC (min ⁇ mg / L).
  • Arg 1: 1 group
  • Ala: Phe 1: 3 group
  • Arg: Phe 1: 3 group
  • Production Example 3 group blood glycerol AUC was higher than that in the control group .
  • Example 14 Measurement of lipid metabolism index (1) Materials and methods [Test sample] As test samples, (i) a 1: 1 weight ratio mixture of alanine and arginine, which showed the highest lipolytic ability in Example 13, and a mixing ratio was determined based on the results of Examples 10-12 (ii) alanine and A mixture prepared by suspending a 1: 1: 3 weight ratio mixture of arginine and phenylalanine and (iii) a 1: 1: 6 weight ratio mixture of alanine, arginine and phenylalanine in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was used.
  • blood was collected from the tail vein (time-30), and the test sample was immediately orally administered (5 ml / kg) at a dose of 1 g / kg relative to the rat body weight.
  • blood was collected again (time 0) and immediately followed by intraperitoneal administration of adrenaline ((R)-( ⁇ )-epinephrine, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at a dose of 0.2 mg / kg (8 ml / kg). kg). Thereafter, blood was collected over time every 15 minutes (time 15, 30, 45, 60, 75, 90) until 90 minutes after administration of adrenaline. Plasma was obtained from the collected blood, and blood glycerol was measured.
  • Glycerol was measured in plasma using a glycerol assay kit (Cayman Chemical Company) according to the attached protocol. A value obtained by subtracting the measured value of time 0 from the measured value at each measurement was calculated, and this was used as the amount of change in blood glycerol concentration. Based on the value obtained by subtracting the measured value of time 0 from the measured value at each measurement, blood glycerol AUC (area under the blood concentration-time curve) of time 0 to time 90 was calculated.
  • FIG. 17 shows the calculated blood glycerol AUC (min ⁇ mg / L).
  • the blood glycerol AUC was high.
  • the lipid metabolism promoter of the present invention containing a combination of two or three of alanine, phenylalanine, and arginine exhibits a high lipid metabolism promoting effect.
  • lipid metabolism promoter According to the lipid metabolism promoter according to the present invention, a lipid metabolism promoter that can effectively promote fat consumption and can bring about a higher body fat reduction effect even at the same amount of exercise. Development of products using it becomes possible.

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Abstract

　アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸を含むアミノ酸混合物を含有し、かつ前記少なくとも２つのアミノ酸をそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤。

Description

脂質代謝促進剤
　本発明は、アルギニン、アラニン、及び／又はフェニルアラニンを有効成分として高濃度に含有する脂質代謝促進剤に関する。
　食生活やライフスタイルの欧米化に伴い、肥満人口は増加の一途をたどっている。厚生労働省「国民健康・栄養調査結果の概要（２０１０）」によると、日本人の肥満の割合は男性３０．４％、女性２１．１％となっている。さらに、推計２３００万人に達している肥満人口のうち約半分にあたる１１００万人が、高血糖や高脂血症、高血圧症、といったメタボリックシンドローム（生活習慣病）を合併しており、生活の質（ＱＯＬ）を大きく低下させている。これらの疾患の予防・改善には、食事量の制限を介した摂取カロリーのコントロールだけではなく、食品中の栄養素による生体調節機能と運動によるエネルギー消費が、近年大いに注目されている（非特許文献１）。
　近年、アミノ酸の機能性が注目されている。例えば、スズメバチ成虫のエネルギー源となる幼虫の分泌する唾液中のアミノ酸組成を再現したアミノ酸組成物である「Ｖｅｓｐａ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ　Ｍｉｘｔｕｒｅ（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）」は、摂取後に運動すると、血中リパーゼ活性が上昇して、血中遊離脂肪酸が上昇することなどが知られている（特許文献１～３及び非特許文献２）。また、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン及びグルタミンを特定のモル比で含有するアミノ酸組成物については、無酸素運動下での体脂肪を運動エネルギー生産に利用するプロセスを促進することなどが知られている（特許文献４）。さらに、インスリン分泌機能を有するアミノ酸を含有する組成物が、運動等による体力の消耗時におけるスタミナ回復や栄養補給に有用であることも知られている（特許文献５）。その他に、アルギニン、グルタミン、及び分岐鎖アミノ酸を一定量以上含有するアミノ酸組成物（特許文献６）や、アルギニン及びグルタミンを一定量以上含有する、乳幼児用体力増強剤及び運動能力向上剤（特許文献７）も知られている。
特開平４－１１２８２５号公報 特開平６－２４９７７号公報 特開平５－１２７２５８号公報 特開２００４－３５２６９６号公報 特開昭６１－２１５３２３号公報 特開２００５－２７５２４号公報 特許第４５２６０４７号公報
河田照雄ら編集、日本栄養・食料学会監修　「肥満と脂肪エネルギー代謝－メタボリックシンドロームへの戦略－」、建帛社、ｐｐ．２１７－２３８（２００８） Ｔｓｕｃｈｉｔａ　Ｈ　ｅｔ　ａｌ、Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａ　Ｖｅｓｐａ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｃａｌ　ｔｏ　ｈｏｒｎｅｔ　ｌａｒｖａｌ　ｓａｌｉｖａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｉｎｄｉｃｅｓ　ｏｆ　ｒｕｎｎｉｎｇ　ｒａｔｓ．、Ｎｕｔｒ　Ｒｅｓ、１７（６）、ｐｐ．９９９－１０１２（１９９７）
　本発明の課題は、より効果的に脂質代謝を促進して体脂肪を効率的に減少させることができる脂質代謝促進剤を提供することである。
　本発明者らは、脂肪の代謝を促進し、体脂肪を効率的に減少させるような素材について鋭意研究を行ったところ、食経験のある主要なアミノ酸である、アルギニン、フェニルアラニン、及びアラニンを高濃度に含有するアミノ酸混合物に高い脂質代謝促進作用及び抗肥満作用があることを見出し、本発明を完成させた。
　具体的には、アドレナリンを投与した動物の血中グリセロール変化量をモニターしたところ、従来のアミノ酸組成物よりも、アルギニン、フェニルアラニン、及びアラニンの２つ以上の組合せを高濃度に含有する組成物が脂肪の分解を顕著に促進することを見出した。さらに、高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物、及び運動負荷をかけたヒトにおいても、脂質代謝促進効果を確認することができた。
　すなわち、本発明は、以下の態様を包含する。
［１］　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸を含むアミノ酸混合物を含有し、かつ前記少なくとも２つのアミノ酸をそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤。
［２］　前記アミノ酸混合物がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを含有する、上記［１］に記載の脂質代謝促進剤。
［３］　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝８～３０モル：１８～３０モル：１０～２０モルのモル比で含有する、上記［１］又は［２］に記載の脂質代謝促進剤。
［４］　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量が、（ｉ）アルギニン：アラニン＝１．５：１～１：１．５、（ｉｉ）アラニン：フェニルアラニン＝４：１～１：４、及び（ｉｉｉ）アルギニン：フェニルアラニン＝１：１～１：４の少なくとも１つの重量比を満たす、上記［１］～［３］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。
［５］　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して１００モルのモル比で含む、上記［１］～［４］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。
［６］　前記アミノ酸混合物が、グリシンをさらに含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して８５モル以上のモル比で含む、上記［１］～［４］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。
［７］　前記アミノ酸混合物が他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみをさらに含有する、上記［１］～［４］及び［６］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。
［８］　前記アミノ酸混合物が、他のアミノ酸を、全アミノ酸量１００モルに対して下記のモル比で含む、上記［７］に記載の脂質代謝促進剤。
　プロリン　０．０１～４モル
　リジン　０．０１～２モル
　チロシン　０．０１～２モル
　スレオニン　０．０１～２モル
　ロイシン　０．０１～２モル
　バリン　０．０１～２モル
　イソロイシン　０．０１～２モル
　グルタミン酸　０．０１～１モル
　トリプトファン　０．０１～１モル
　ヒスチジン　０．０１～１モル
　セリン　０．０１～１モル
　メチオニン　０．０１～０．２モル
　アスパラギン酸　０．０１～０．１モル
［９］　アドレナリン分泌亢進状態で作用させるための、上記［１］～［８］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。
［１０］　アドレナリン分泌亢進状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食による刺激を受けた状態である、上記［９］に記載の脂質代謝促進剤。
［１１］　血中グリセロール濃度上昇、体重増加抑制、血中遊離脂肪酸濃度上昇、血中グルカゴン濃度上昇、血中コルチゾール濃度低減、血中総ケトン体濃度上昇、血中３－ヒドロキシ酪酸濃度上昇、及び褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量増加からなる群から選択される少なくとも１つを伴う脂質代謝促進用の、上記［１］～［１０］のいずれかに記載の脂質代謝促進剤。
　本発明はさらに、以下の態様も包含する。
[ａ]　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である、脂質代謝促進剤、
[ｂ]　アルギニンを８～３０モル、アラニンを１８～３０モル、フェニルアラニンを１０～２０モル、のモル比で含有する、前記[ａ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｃ]　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、前記[ａ]又は[ｂ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｄ]　アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して８５モル以上である、脂質代謝促進剤、
[ｅ]　アルギニンを８～３０モル、アラニンを１８～３０モル、フェニルアラニンを１０～２０モル、グリシンを２０～２７モル、のモル比で含有する、前記[ｄ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｆ]　アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、前記[ｄ]又は[ｅ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｇ]　さらに、他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみを含有する、前記[ａ]又は[ｄ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｈ]　さらに、他のアミノ酸として下記のアミノ酸のみを、下記のモル比で含有する、前記[ｂ]又は[ｅ]に記載の脂質代謝促進剤、
　プロリンを０．０１～４モル
　リジンを０．０１～２モル
　チロシンを０．０１～２モル
　スレオニンを０．０１～２モル
　ロイシンを０．０１～２モル
　バリンを０．０１～２モル
　イソロイシンを０．０１～２モル
　グルタミン酸を０．０１～１モル
　トリプトファンを０．０１～１モル
　ヒスチジンを０．０１～１モル
　セリンを０．０１～１モル
　メチオニンを０．０１～０．２モル
　アスパラギン酸を０．０１～０．１モル
[ｉ]　アドレナリンの分泌が亢進する状態で摂取することを特徴とする、前記[ａ]～[ｈ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｊ]　アドレナリンの分泌が亢進する状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食による刺激を受ける状態である、前記[ｉ]に記載の脂質代謝促進剤、
[ｋ]　褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１の発現量を増加することを特徴とする、前記[ａ]～[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｌ]　脂肪から脂肪酸への分解を促進することを特徴とする、前記[ａ]～[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｍ]　脂肪酸から熱への変換を促進することを特徴とする、前記[ａ]～[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[ｎ]　脂肪酸からエネルギーへの変換を促進することを特徴とする、前記[ａ]～[ｊ]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤。
　本発明の脂質代謝促進剤は、脂質代謝を促進する効果があり、とりわけアドレナリン分泌亢進状態で効率よく脂質代謝促進効果を示すことができる。
　本明細書は本願の優先権主張の基礎となる日本国特許出願特願2013-168690号の開示内容を包含する。
実施例１で得られた血中グリセロール濃度の変化率（グリセロールＡＵＣ変化率；Ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ＡＵＣ　ｃｈａｎｇｅ　（％　ｏｆ　Ｖｅｈｉｃｌｅ　ｇｒｏｕｐ）を示す。 実施例２で得られた血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）の推移を示す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例３で得られた血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）の推移を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例４で測定した体重の推移（図４Ａ）及び試験期間中の摂餌量／体重（図４Ｂ）を示す。平均値±標準誤差を表す。Ｎｏｒｍａｌ群：３日目（ｄａｙ３）～４２日目（ｄａｙ４２）で体重に有意差あり。製造例３群：３日目（ｄａｙ３）～３９日目（ｄａｙ３９）で体重に有意差あり。（ｖｓ．　Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、ｐ＜０．０５、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例４で測定した腎周囲の脂肪重量を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例４で測定した褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例５で得られた経時的な呼吸交換比の測定結果（図７Ａ）及び呼吸交換比の変化量（Δ呼吸交換比）の結果（図７Ｂ）を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　プラセボ群、１標本ｔ検定）。 実施例５で得られた、血中グリセロール濃度（図８Ａ）及び血中遊離脂肪酸濃度（図８Ｂ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。 実施例５で得られた、血中コルチゾール濃度（図９Ａ）、血中グルカゴン濃度（図９Ｂ）、血中インスリン濃度（図９Ｃ）、及び血糖（図９Ｄ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５、＃＃：ｐ＜０．０１（ｖｓ．　プラセボ群、１標本ｔ検定）。 実施例５で得られた、血中総ケトン体濃度（図１０Ａ）、血中３－ヒドロキシ酪酸濃度（図１０Ｂ）、及び血中アセト酢酸濃度（図１０Ｃ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　プラセボ群、１標本ｔ検定）。 実施例５で得られた、血中成長ホルモン濃度（図１１Ａ）、血中アドレナリン濃度（図１１Ｂ）、及び血中ノルアドレナリン濃度（図１１Ｃ）の経時的な測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。 実施例９で得られた、血中グルカゴン濃度の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例９で得られた、肝臓中のカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例９で得られた、肝臓中のアシルＣｏＡオキシダーゼ活性の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例１２で得られた、血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）を示す。 実施例１３で得られた、血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）の測定結果を示す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．　コントロール群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。 実施例１４で得られた、血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）の測定結果を示す。
　以下、本発明を詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施態様に限定されず、本発明の効果を発揮する範囲内で自由に変更できるものである。
　本発明は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸を含むアミノ酸混合物を含有し、かつ前記少なくとも２つのアミノ酸をそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤に関する。本発明は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸に加えて、アミノ酸混合物の成分としてグリシンをさらに含有する脂質代謝促進剤にも関する。本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニン、又はアルギニン、アラニン、フェニルアラニン及びグリシンを、有効成分として含有する。
　本発明の有効成分であるアルギニン（Ａｒｇｉｎｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ－アルギニンのＣａｓ　Ｎｏ．は、７４－７９－３であり、その別名は、（Ｓ）－２－アミノ－５－グアニジノペンタン酸、（Ｓ）－２－アミノ－５－（アミジノアミノ）吉草酸、Ｌ－（＋）－アルギニン、アルギＵである。アルギニンの略号として、Ａｒｇ、Ｒを用いる場合もある。アルギニンは、水や蟻酸に溶けやすく、希塩酸に溶け、エタノールにはほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。アルギニンは、肉類等の多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。アルギニンは、尿素回路の中間体として生合成されるが、速やかに分解されるため子供では必須アミノ酸とされている。アルギニンは、成長ホルモンの分泌促進、免疫機能の向上に関与することが知られている。
　本発明の有効成分であるアラニン（Ａｌａｎｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ－アラニンのＣａｓ　Ｎｏ．は、５６－４１－７であり、その別名は、（Ｓ）－２－アミノプロピオン酸、（２Ｓ）－２－アミノプロパン酸、α－アラニン、Ｌ－（＋）－アラニンである。アラニンの略号として、Ａｌａ、Ａを用いる場合もある。アラニンは、水や蟻酸に溶けやすく、エタノールには、ほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。アラニンは、多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。アラニンは、タンパク質の構成アミノ酸の一種であり、結合組織の材料であることが知られている。
　本発明の有効成分であるフェニルアラニン（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）は、必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ－フェニルアラニンのＣａｓ　Ｎｏ．は、６３－９１－２であり、その別名は、（Ｓ）－α－アミノベンゼンプロパン酸、（２Ｓ）－２－アミノ－３－フェニルプロパン酸、（Ｓ）－３－フェニル－２－アミノプロピオン酸、Ｌ－β－フェニルアラニン、Ｌ－（－）－フェニルアラニンである。フェニルアラニンの略号として、Ｐｈｅ、Ｆを用いる場合もある。フェニルアラニンは、蟻酸に溶けやすく、水にやや溶けにくく、希塩酸に溶け、エタノールにはほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。フェニルアラニンは、多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。
　グリシン（Ｇｌｙｃｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つである。グリシンのＣａｓ　Ｎｏ．は、５６－４０－６であり、その別名は、２－アミノ酢酸、α－アミノ酢酸、グリコリキシル、グリココールである。グリシンの略号として、Ｇｌｙ、Ｇを用いる場合もある。グリシンは、水や蟻酸に溶けやすく、エタノールには、ほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。グリシンは、コラーゲン、ゼラチン、魚貝類などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。グリシンは、糖原性を持ち、ヘモグロビン、肝臓中の酵素などの構成成分であることや、中枢神経における神経伝達物質であることが知られている。
　本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸は、フリーベースや水和物であってもよく、また、有機酸（酢酸、酒石酸、脂肪酸など）、有機塩基、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸など）、無機塩基（カリウム、ナトリウム、亜鉛など）と塩を形成していても構わない。そして、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシンは、Ｄ体とＬ体のいずれを用いてもよい。
　本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸は、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸を多く含む素材や食品などから、搾汁、濃縮、精製、結晶化又は各種の溶媒で抽出するなどして得ることができる。各種の溶媒として、水や通常に用いられる溶媒、例えば、アルコール類、炭化水素類、有機酸、有機塩基、無機酸、無機塩基、超臨界流体等を単独で、あるいは複数を組み合わせて用いることが可能である。また、微生物で生産したものを用いることも可能である。そして、化学的に合成されたものを用いることも可能である。本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン又は他のアミノ酸は、それらの複数の由来のものを組み合わせて用いてもよい。
　本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸の組合せ、例えばアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを有効成分として含有する。本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して６０モル以上、７０モル以上、８０モル以上、９０モル以上、又は１００モルのモル比となる量で、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸を含有することができる。一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤において、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの合計量は、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して９５モル以下、９０モル以下、８０モル以下、又は７５モル以下のモル比となる量であってもよい。なお「アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して１００モルのモル比」とは、その脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのみであること、すなわちその脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸混合物がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなることを意味するが、本明細書中の他の類似の記載も同様に理解される。このような脂質代謝促進剤の組成例として、表２及び表３に示す構成の脂質代謝促進剤（製造例１、製造例２、製造例３）を挙げることができるが、この例に限定されない。
　また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれるアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのそれぞれの配合量に相当するモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、本発明の脂質代謝促進剤には、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８～３０モル、アラニンを１８～３０モル、フェニルアラニンを１０～２０モル、のモル比で含有せしめることができる。より好ましい一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤は、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを２５～３０モル、アラニンを２５～３０モル、フェニルアラニンを１０～１５モル、のモル比で含有してもよい。あるいは、好ましい別の実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤は、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８～５０モル、アラニンを１８～５０モル、フェニルアラニンを１０～７０モル、のモル比で含有してもよい。例えば、本発明の脂質代謝促進剤が、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを含み、かつそれらの合計量が本発明の脂質代謝促進剤に含まれる全アミノ酸量１００モルに対して１００モルのモル比に相当する場合（すなわち、含有アミノ酸がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのみからなる場合）、本発明の脂質代謝促進剤に、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８～５０モル、アラニンを１８～５０モル、フェニルアラニンを１０～７０モル、のモル比で含有せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤はまた、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８～３０モル、アラニンを２０～３５モル、フェニルアラニンを１０～５５モル、のモル比で含有してもよい。
　本発明の脂質代謝促進剤中のアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量は、以下に限定するものではないが、（ｉ）アルギニン：アラニン＝３：１～１：３、より好ましくは１．５：１～１：１．５、例えば１：１、（ｉｉ）アラニン：フェニルアラニン＝７：１～１：７、より好ましくは４：１～１：４、例えば１：３及び（ｉｉｉ）アルギニン：フェニルアラニン＝７：１～１：７、より好ましくは１：１～１：４、例えば１：３、のうち少なくとも１つの重量比を満たすことが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤は、フェニルアラニンを相対的に多く含んでいてもよい。一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤中のアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量は、以下に限定するものではないが、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝１：１：１～１：１：１０、より好ましくは１：１：１～１：１：６、例えば１：１：１～１：１：３となる重量比を満たすものでもよい。別の一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤中のアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量は、以下に限定するものではないが、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝２～４：１～２：１～２、例えば２～３：１～１．５：１となる重量比を満たすものでもよい。
　本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸に加えてさらにグリシンを有効成分として含有することもでき、例えばアルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを有効成分として含有することもできる。本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して８５モル以上、９０モル以上、９５モル以上、又は１００モルのモル比となる量でアルギニン、アラニン、フェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸及びグリシンを含有することができる。一実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤において、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン及びグリシンの合計量は、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して９９モル以下、９５モル以下、９２モル以下、又は９０モル以下のモル比となる量であってもよい。
　また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれるアルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンのそれぞれの配合量に相当するモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、本発明の脂質代謝促進剤には、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを８～３０モル、アラニンを１８～３０モル、フェニルアラニンを１０～２０モル、グリシンを２０～２７モル、のモル比で含有せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤は、例えば、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニンを２５～３０モル、アラニンを２５～３０モル、フェニルアラニンを１０～１５モル、グリシンを２２～２７モル、のモル比で含有してもよい。
　本発明の脂質代謝促進剤の組成例として、表３に示す構成の脂質代謝促進剤（製造例３）を挙げることができるが、この例に限定されない。アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンは、味や臭いが飲食や経口摂取に適しているため、これらを高濃度に含有する本発明の脂質代謝促進剤は風味に優れる。よって、本発明の脂質代謝促進剤には、これを添加した飲食品や医薬品の風味を損なわない利点がある。
　さらに、本発明の脂質代謝促進剤は、さらに他のアミノ酸を含有してもよい。他のアミノ酸は、生体のタンパク質を通常構成する２０種のアミノ酸であってもよい。他のアミノ酸は、天然型アミノ酸であっても非天然型アミノ酸であってもよい。好ましい実施形態では、本発明の脂質代謝促進剤は、さらに他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみを含有していてもよい。他のアミノ酸は、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を阻害しないものを優先的に使用することもできる。
　また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれる他のアミノ酸のそれぞれの配合量に相当するモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、本発明の脂質代謝促進剤には、それに含まれる全アミノ酸量１００モルに対し、プロリンを０．０１～４モル、リジンを０．０１～２モル、チロシンを０．０１～２モル、スレオニンを０．０１～２モル、ロイシンを０．０１～２モル、バリンを０．０１～２モル、イソロイシンを０．０１～２モル、グルタミン酸を０．０１～１モル、トリプトファンを０．０１～１モル、ヒスチジンを０．０１～１モル、セリンを０．０１～１モル、メチオニンを０．０１～０．２モル、アスパラギン酸を０．０１～０．１モル、のモル比で含有せしめることができる。
　本発明の脂質代謝促進剤のより好ましい例では、アルギニンを２５～３０モル、アラニンを２５～３０モル、フェニルアラニンを１０～１５モル、グリシンを２２～２７モル、プロリンを０．１～４モル、リジンを０．１～２モル、チロシンを０．１～２モル、スレオニンを０．１～２モル、ロイシンを０．１～２モル、バリンを０．１～２モル、イソロイシンを０．１～２モル、グルタミン酸を０．１～１モル、トリプトファンを０．１～１モル、ヒスチジンを０．１～１モル、セリンを０．１～１モル、メチオニンを０．０１～０．２モル、アスパラギン酸を０．０１～０．１モル、のモル比で含有せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤のさらに好ましい例では、アルギニンを２７～３０モル、アラニンを２５～２８モル、フェニルアラニンを１０～１３モル、グリシンを２３～２６モル、プロリンを２～３モル、リジンを０．６～１．６モル、チロシンを０．１～１．１モル、スレオニンを０．５～１.５モル、ロイシンを０．３～１．３モル、バリンを０．３～１．３モル、イソロイシンを０．１～２．１モル、グルタミン酸を０．１～１モル、トリプトファンを０．１～０．５モル、ヒスチジンを０．１～０．６モル、セリンを０．１～０．６モル、メチオニンを０．０１～０．１５モル、アスパラギン酸を０．０１～０．０５モル、のモル比で含有せしめてもよい。
　本発明でいう「脂肪」は、中性脂肪を指す。中性脂肪の異化は、中性脂肪のグリセロールと脂肪酸への分解と脂肪酸の燃焼（β酸化）に分けられる。脂肪の分解メカニズムは、一般に、以下のように概説できる。
（１）運動負荷、入浴、寒冷刺激などによってアドレナリンの分泌が亢進する。
（２）アドレナリンが脂肪細胞膜上のβレセプターに結合すると、細胞膜内面に存在するアデニル酸シクラーゼが活性化されて、ＡＴＰからサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）が合成される。
（３）細胞内ｃＡＭＰ濃度が上昇した結果、ｃＡＭＰ依存性のプロテインキナーゼＡが活性化され、このプロテインキナーゼＡにより脂肪細胞の中で、ホルモン感受性リパーゼがリン酸化されて活性化する。
（４）ホルモン感受性リパーゼが、トリアシルグリセロールを遊離脂肪酸とモノアシルグリセロールに変換する。
（５）モノアシルグリセロールリパーゼが、モノアシルグリセロールをグリセロールと遊離脂肪酸に変換する。
　生成された脂肪酸の燃焼（β酸化）は、一般に以下のように概説される。
（１）脂肪酸は、肝臓に運ばれ、ミトコンドリア外膜の細胞質側に存在する酵素アシルＣｏＡシンテターゼにより触媒され活性化し、脂肪酸アシルＣｏＡとなる。
（２）生成した脂肪酸アシルＣｏＡはミトコンドリア内膜に運搬される。
（３）ミトコンドリア内膜はアシルＣｏＡを直接透過しない為、カルニチンと一時的に結合し、脂肪酸アシルカルニチンを生成する。脂肪酸アシルカルニチンはアシルカルニチン／カルニチントランスポーターを介する促進拡散によりミトコンドリア内膜を通過し、マトリックス内に移行する。そして酵素カルニチンアシルトランスフェラーゼＩＩの触媒により、カルニチンからミトコンドリア内に存在する補酵素Ａに転移されることで、脂肪酸アシルＣｏＡが再生する。
（４）ミトコンドリア内に入った脂肪酸アシルＣｏＡはマトリックス内の酵素によって酸化を受ける。β酸化反応は４段階の反応の繰り返しからなり、一順する毎に脂肪酸アシル鎖のカルボキシ末端から２炭素がアセチルＣｏＡとして分離していく。デヒドロゲナーゼによるα位とβ位の不飽和化、ヒドラターゼによるβ位のＯＨ付加が起こり、デヒドロゲナーゼによりβ位がケト基に、チオラーゼによってＣｏＡがβ位に結合し、α位とβ位が切断され短炭素鎖脂肪酸アシル－ＣｏＡとアセチルＣｏＡを生じる。
（５）アセチルＣｏＡの一部はアセトアセチルＣｏＡになり、３－ヒドロキシ３－メチルグルタリルＣｏＡ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）を経てアセト酢酸が生成される。アセト酢酸は脱炭酸によってアセトンへ、あるいは還元されてβヒドロキシ酪酸へと変換される。
（６）肝臓で生成されたアセト酢酸・βヒドロキシ酪酸は肝臓以外の組織（中枢神経系、心筋、骨格筋、腎、副腎など）の細胞に運ばれミトコンドリアのＴＣＡ回路と電子伝達系でＡＴＰ産生に使われる。
　さらに、脂肪酸は、褐色脂肪細胞内で分解を受け、ＵＣＰ－１（Ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１、ミトコンドリア脱共役タンパク質）の働きを受けて熱に変換される。より具体的には、ノルアドレナリンが褐色脂肪上のβ３受容体に結合すると、サーモゲニンとも呼ばれるＵＣＰ－１が開き、膜電位（ミトコンドリアのプロトンの濃度勾配）が解消され、ＡＴＰ合成は行われない一方、脂肪酸などの基質の酸化が著しく亢進して、熱産生が起こる。すなわち、脂肪酸のβ酸化が促進され、熱エネルギーが放出される。また、遊離脂肪酸は、体内でグルコース由来のエネルギーの代謝が不足すると、主として肝臓のミトコンドリア内でケトン体（アセト酢酸、β－ヒドロキシ酪酸、アセトン）に変換され、エネルギー源として代謝されるようになる。
　後述の実験例（実施例２、実施例３及び実施例１０）では、アドレナリンを投与して人為的にアドレナリン分泌が亢進した状態にした動物を用い、血中グリセロール変化量をモニターすることにより、従来のアミノ酸組成物と比較して、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン及びグリシンを高濃度に含有する本発明の脂質代謝促進剤や、アルギニン、フェニルアラニン、及びアラニンのうちの２つ以上を組み合わせた本発明の脂質代謝促進剤が脂質代謝を促進することがわかった。
　さらに、高脂肪食を給餌した動物やヒトを使用し、実際に運動負荷を与えてアドレナリン分泌が亢進した状態で、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を確認することができた（実施例４、実施例５）。
　つまり、本発明の脂質代謝促進剤は、特にアドレナリンの分泌が継続的に亢進した状態において、より効率的に脂肪を代謝せしめることができる。本発明の脂質代謝促進剤は、被験体においてアドレナリン分泌亢進状態で作用させるために好適に用いることができる。アドレナリン分泌亢進状態は、特に限定されないが、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食等による刺激を受けた状態であることが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤を被験体にアドレナリン分泌亢進状態で作用させるためには、本発明の脂質代謝促進剤を、アドレナリン分泌亢進状態となっている被験体に投与するか、又はアドレナリン分泌亢進状態となることが予想される被験体（例えば、運動前の被験体）に投与すればよい。
　実施例４に示すように、本発明の脂質代謝促進剤を投与した動物では、褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１の発現量が増加した。このことから、本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪の分解を高めると共に、脂肪酸から熱への変換効率を高めることがわかった。
　また、実施例５に示すように、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、運動時のケトン体生成やグルカゴンの分泌が高まった。グルカゴンには、グリコーゲンの利用を促進すると共に、ケトン体の産生を促進する働きがある。このことから、本発明の脂質代謝促進剤は、グルコース由来のエネルギーの代謝が不足したときに脂肪酸からエネルギーへ変換する効率を高めることもわかった。ケトン体濃度の経時的推移に注目すると、運動負荷（ｔｉｍｅ３０～ｔｉｍｅ９０）の後に、ケトン体の生成が大きく高まっている。このことから、運動中に亢進した脂肪酸からエネルギーへの変換が、運動終了後も引き続き高い状態を維持していることがわかった。
　さらに、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、有酸素運動時の呼吸交換比の変化量が低下した。呼吸交換比はエネルギー代謝の指標の１つであり、この値が低下することは、エネルギー代謝における脂質の貢献が高まったことを示す。このことからも、本発明の脂質代謝促進剤が、脂肪酸からエネルギーへ変換する効率を高めることがわかった（実施例５）。
　コルチゾールは糖質コルチコイドの一種であり、ストレスを受けると副腎皮質からの分泌が亢進されるホルモンである。コルチゾールの上昇は、グリコーゲンやタンパク質から糖への分解を促進する働きがあることから、その上昇は脂質代謝を亢進する。しかし、コルチゾールの高い分泌状態が続くと、筋グリコーゲンや肝グリコーゲンを早期に消耗し、運動パフォーマンスが低下する。さらに、免疫機能の低下や筋肉・臓器の萎縮といった体への悪影響を伴う。よって、運動時において、コルチゾールのレベルは早期に定常値に戻ることが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤を摂取したヒト（アクティブ群）において、血中のコルチゾールは摂取直後（ｔｉｍｅ０）から上昇したが、摂取１５分後（ｔｉｍｅ１５）から速やかに下降し、その速度はプラセボ群より速やかであった。このことから、本発明の脂質代謝促進剤を摂取することによって、同じ運動負荷を与えても、より体に負担をかけずに運動を行なえることが明らかになった（実施例５）。
　その一方で、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、血中のインスリン濃度や血糖に変化を認めなかった。よって、本発明の脂質代謝促進剤は、インスリンの分泌や血糖に影響を与えずに脂質代謝を促進することがわかった（実施例５）。インスリンの分泌が亢進した状態で運動を行うと、運動時中に低血糖を生じることがある。本発明の脂質代謝促進剤は、インスリンの分泌に影響を及ぼさないので、運動時に低血糖を来すことなく、脂質由来のエネルギーを効率的に産生することができる。
　また、本発明の脂質代謝促進剤は、成長ホルモン、アドレナリン及びノルアドレナリンの分泌にも影響を与えずに、脂質代謝促進効果を奏することもわかった（実施例５）。
　これらの結果から、本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪から脂肪酸への分解、脂肪酸から熱への変換、及び脂肪酸からエネルギーへの変換のいずれの過程も促進することがわかった。
　したがって本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪の脂肪酸への分解、及び脂肪酸から熱への変換の両方を促進するために用いることができる。本発明の脂質代謝促進剤は、それらの脂質代謝の指標である、血中グリセロール濃度上昇、体重増加抑制、血中遊離脂肪酸濃度上昇、血中グルカゴン濃度上昇、血中コルチゾール濃度低減、血中総ケトン体濃度上昇、血中３－ヒドロキシ酪酸濃度上昇、及び褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量増加からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは２つ以上、より好ましくはその全てを伴う脂質代謝促進用に用いることができる。本発明の脂質代謝促進剤はまた、さらなる指標として、肝臓中カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性上昇及び／又は肝臓中のアシルＣｏＡオキシダーゼ活性上昇を伴う脂質代謝促進用にも用いることができる。これらの指標は、常法により測定することができ、例えば後述の実施例の記載を参照することができる。なおこれらの脂質代謝の指標の上昇、低減、又は増加等は、本発明の脂質代謝促進剤を投与又は摂取しない点以外は同様の条件のコントロール群（例えば、プラセボ群）と比較して判断すればよく、一定の傾向が示されればそれらの効果があるものと判断できるが、統計学的に有意な差が示されることがより好ましい。
　本発明の脂質代謝促進剤は、そのまま、あるいは、脂質代謝促進するための飲食品又は医薬品に添加するなど、いずれの態様で利用することもできる。
　本発明において、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの脂質代謝促進剤への配合量は、剤型、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの合計で０．２～１００ｗ／ｗ％（重量／重量％）の配合量に設定することができ、好ましくは０．３～１００ｗ／ｗ％の配合量、さらに好ましくは０．４～１００ｗ／ｗ％の配合量に設定することができる。
　本発明はまた、本発明の脂質代謝促進剤を被験体に投与又は摂取させることを含む、被験体の脂質代謝を促進する方法も提供する。被験体としては、脂質代謝の促進が望まれる動物が好ましく、限定するものではないが、ヒト、家畜（ブタ、ウマなど）、愛玩動物（イヌ、ネコなど）、実験（試験）動物（マウス、ラットなどの齧歯動物やウサギなど）を含む哺乳動物が好ましい。好ましい被験体の例としては、脂質代謝異常若しくは肥満症の被験体、肥満の遺伝的素因、生活習慣的リスク若しくは環境リスクを有する被験体、体重低下若しくは体重維持が望まれる被験体、又は運動、ストレス等に起因するアドレナリン分泌亢進状態に置かれているか若しくは置かれる予定である被験体などが挙げられる。本発明の脂質代謝促進剤は、脂質代謝を効率よく促進する効果があるため、正常の人と比べて脂肪の分解が遅くかつ少ない傾向にある肥満気味の人であっても、脂肪を効率的に燃焼させるために用いることができる。
　本発明において、脂質代謝促進剤の一日当たりの摂取量（投与量）は、年齢、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸の合計が固形分として０．３～３０ｇ、０．８～８ｇ、１～５ｇ、１．３～３．５ｇ、１．５ｇ又は３ｇとなる摂取量に設定することができる。
　本発明において、アルギニンの一日当たりの摂取量は、０．０６～１２ｇ（又は０．４～７０ミリモル）、０．２～４ｇ（又は１～２１ミリモル）、０．４～２ｇ（又は２～１１ミリモル）、１．２ｇ（７ミリモル）、１ｇ（６ミリモル）、又は０．６ｇ（４ミリモル）を例示することができる。
　本発明において、アラニンの一日当たりの摂取量は、０．０３～１０ｇ（又は０．３～１１２ミリモル）、０．０９～３ｇ（又は１～３４ミリモル）、０．２～２ｇ（又は２～１７ミリモル）、１ｇ（１１ミリモル）、０．６ｇ（６ミリモル）、又は０．３ｇ（３ミリモル）を例示することができる。
　本発明において、フェニルアラニンの一日当たりの摂取量は、０．０２～１０ｇ（又は０．１～６１ミリモル）、０．０８～３ｇ（又は０．５～１８ミリモル）、０．２～２ｇ（又は０．９～９ミリモル）、１ｇ（６ミリモル）、０．５ｇ（３ミリモル）、又は０．２ｇ（１ミリモル）を例示することができる。
　本発明において、グリシンの一日当たりの摂取量は、４ｇ以下（又は５９ミリモル以下）、１．３ｇ以下（又は１８ミリモル以下）、０．７ｇ以下（又は９ミリモル以下）、０．０２～４ｇ（又は０．３～５９ミリモル）、０．０７～１ｇ（又は１～１８ミリモル）、０．１～０．７ｇ（又は２～９ミリモル）、０．４ｇ（６ミリモル）又は０．２ｇ（３ミリモル）を例示することができる。
　例えば、後述の表２に示す脂質代謝促進剤（製造例１）を２．７ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計２．７ｇ（２２ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、それぞれ１．２ｇ（７．０ミリモル）、０．５７ｇ（６．４ミリモル）、及び０．４７ｇ（２．９ミリモル）の量で摂取したことになる。
　例えば、表２に示す脂質代謝促進剤（製造例２）を３．０ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計３．０ｇ（２３ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、それぞれ１．０ｇ（５．７ミリモル）、１．０ｇ（１１ミリモル）、及び１．０ｇ（６．１ミリモル）の量で摂取したことになる。
　例えば、表３に示す脂質代謝促進剤（製造例３）を３ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計３ｇ（２４ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを、それぞれ１．２ｇ（７．０ミリモル）、０．５７ｇ（６．４ミリモル）、０．４７ｇ（２．９ミリモル）、及び０．４５ｇ（５．９ミリモル）の量で摂取したことになる。
　また、表３に示す脂質代謝促進剤（製造例３）を１．５ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計１．５ｇ（２４ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンを、それぞれ０．６１ｇ（３．５ミリモル）、０．２８ｇ（３．２ミリモル）、０．２４ｇ（１．４ミリモル）、及び０．２２ｇ（３．０ミリモル）の量で摂取したことになる。
　なお、本発明の脂質代謝促進剤は、従来公知の脂質代謝促進効果がある飲食品や医薬品の摂取と同時又は、それらの摂取の前後に併せて用いてもよい。
　本発明の脂質代謝促進剤の実際の形態は、例えば、錠剤（タブレット）、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、水剤、懸濁剤、ドリンク、飲食品などに添加する形態を挙げることができ、これを経口、経管、経静脈などにより摂取あるいは投与することができる。本発明の脂質代謝促進剤は、例えば、特定保健用食品などの特別用途食品、栄養機能食品、栄養補助食品やサプリメントに添加してそれを摂取することにより、又は医薬品に添加して投与することにより、脂質代謝を促進することが期待される。なお、特定保健用食品などの特別用途食品、栄養機能食品、栄養補助食品やサプリメントに添加した場合、消費者にとって、一般食品と明確に区別しながら、脂質代謝の促進を期待することができる。ここで飲食品は、家畜や愛玩動物等の非ヒト動物による摂取用であってもよい。本発明は、本発明の脂質代謝促進剤を含む食品や医薬品、例えば脂質代謝促進用の飲食品や医薬品も提供する。
　本発明の脂質代謝促進剤を用いて、本発明の脂質代謝促進剤及び製剤化のための補助剤のみからなる剤を製造することもできる。製剤化のための補助剤として、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などを挙げることができる。なお、これらは飲食品あるいは医薬品の製剤技術の分野において通常で用いうるものであればよい。また、これらに適当量のビタミン、ミネラル、有機酸、糖類、ペプチド類、前記に挙げられていないアミノ酸などを配合してもよい。他の構成成分は、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を阻害しないものを優先的に使用することができる。
　本発明の脂質代謝促進剤は、各種の食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品など）に配合して、これを摂取してもよい。これらの食品の形態として、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状などを問わない。
　本発明の脂質代謝促進剤を配合する食品は、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を用いて製造することができる。タンパク質として、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、ホエイタンパク質加水分解物、α－カゼイン、β－カゼイン、κ－カゼイン、β－ラクトグロブリン、α－ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これらの分解物、バター、乳清ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種の乳由来成分等が挙げられる。カゼインホスホペプチド等のペプチドやアミノ酸を含んでいてもよい。糖質として、例えば、糖類、加工澱粉（テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維等が挙げられる。脂質として、例えば、ラード、魚油等に、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油等に、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂等が挙げられる。ビタミン類として、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸等が挙げられる。ミネラル類として、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン等が挙げられる。有機酸として、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、エリソルビン酸等が挙げられる。これらの成分は、単独で、あるいは複数種類を組み合わせて用いることができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。これらの食品の形態として、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状などを問わない。
　本発明の脂質代謝促進剤は、普段の生活や療養中はもとより、アドレナリンの分泌が継続して亢進する状態の前や途中に摂取することで、効率的に脂質代謝を促進することができる。例えば、運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷が加えられた時、入浴の時、多食の者などにおいて、アドレナリンの分泌が継続して亢進することが知られている。従って、本発明の脂質代謝促進剤は、運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷などが加わる前、又は運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷などが加わると共に摂取してもよい。あるいは、本発明の脂質代謝促進剤は、入浴の前や途中に摂取してもよい。多食傾向のある者が本発明の質代謝促進剤を摂取してもよい。
　本発明は、脂質代謝促進剤を製造するための、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸の組合せ、例えばアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの組合せの使用（使用方法）であって、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である使用、も提供する。
　また、本発明は、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸の組合せ、例えばアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンのモル数の合計が、含有アミノ酸全てのモル数の合計（全アミノ酸量）１００モルに対して６０モル以上のモル比になるような量で含む組成物を摂取させることを特徴とする、脂質代謝の促進方法（医療行為を除く）、も提供する。
　以下、本発明に関して、実施例を挙げて説明するが、本発明は、これにより限定されるものではない。
（実施例１）
　脂質代謝促進効果における、各種アミノ酸と従来のアミノ酸組成物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）の比較
（１）材料及び方法
［被検試料］
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・各種アミノ酸：Ｌ－アラニン（Ａｌａ）、Ｌ－メチオニン（Ｍｅｔ）、Ｌ－フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、Ｌ－アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）を、それぞれ１ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群の７群、各ｎ＝６）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。
　尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を１０ｍｌ／ｋｇ（被検試料の用量１ｇ／ｋｇ）経口投与した。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の７５分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
［測定］
　血中グリセロール：グリセロールアッセイキット（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ；Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ－３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。次いで、血中グリセロール濃度の変化量について、ｔｉｍｅ０～７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。さらに、各アミノ酸群のＡＵＣについて、Ｖｅｈｉｃｌｅ群のＡＵＣに対する変化率（％）を算出した。
（２）結果
　図１に血中グリセロール濃度の変化率（グリセロールＡＵＣ変化率［Ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ＡＵＣ　ｃｈａｎｇｅ］）を示す。アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群はいずれも、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群より高い値を示した。
　このことから、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン、グリシンは、従来のアミノ酸組成物よりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
　しかし、各種アミノ酸の風味を確認したところ、メチオニンは、味や臭いが経口摂取に適しないことがわかった。
（実施例２）
　脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例１）と単独のアミノ酸の比較
（１）材料及び方法
［被検試料］
・「製造例１」：表２に示す組成のアミノ酸混合物（製造例１）を、２．７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。１０ｍｌ中に、Ｌ－アルギニン１．２ｇ、Ｌ－アラニン０．５７ｇ及びＬ－フェニルアラニン０．４７ｇが含まれる。
・アルギニン：Ｌ－アルギニンを１．２ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・アラニン：Ｌ－アラニンを０．５７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・フェニルアラニン：Ｌ－フェニルアラニンを０．４７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、「製造例１」群、アルギニン群、アラニン群、フェニルアラニン群の５群、各ｎ＝６）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。
　尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例１」群、アルギニン群、アラニン群、フェニルアラニン群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を５ｍｌ／ｋｇ経口投与した。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
［測定］
　血中グリセロール：グリセロール蛍光アッセイキット（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ　Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ；Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ－３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
［統計学的処理方法］
　測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ　Ｖｉｅｗ　５．０－Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
（２）結果
　図２に血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）を示す。「製造例１」群は、Ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。アドレナリン投与後１５分、３０分、４５分、６０分、及び７５分（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５）において、「製造例１」群はＶｅｈｉｃｌｅ群と比較して有意に高い（ｐ＜０．０５）な血中グリセロール濃度の変化量を示した。フェニルアラニン群はアドレナリン投与後３０分（ｔｉｍｅ３０）のみ、Ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも血中グリセロール濃度の変化量が有意に高くなった。他の群はＶｅｈｉｃｌｅ群と有意な差を認めなかった。
　このことから、アラニン、フェニルアラニン、アルギニンは、３種を併用して摂取した方が、単独で摂取するよりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
（実施例３）
　脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例３）と従来のアミノ酸組成物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）の比較
（１）材料及び方法
［被検試料］
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、３ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・「製造例３」：表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、３ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例３」群の３群、各ｎ＝７）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。
　尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例３」群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を５ｍｌ／ｋｇ経口投与した（表４）。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
［測定］
　血中グリセロール：Ｇｌｙｃｅｒｏｌ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ　（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ－３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
［統計学的処理方法］
　測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ　Ｖｉｅｗ　５．０－Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
（２）結果
　図３に血中グリセロール濃度の変化量を示す。「製造例３」群は、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。アドレナリン投与後３０分（ｔｉｍｅ３０）及び４５分（ｔｉｍｅ４５）において、「製造例３」群はＶｅｈｉｃｌｅ群と比較して有意に高い（ｐ＜０．０５）な血中グリセロール濃度の変化量を示した。
　以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、及びアルギニンを高度に含有する本発明の脂質代謝促進剤は、従来のアミノ酸組成物よりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
（実施例４）
　高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例３）の脂質代謝促進効果
（１）材料及び方法
［被検試料及び餌］
・０．１％ＣＭＣ溶液：カルボキシメチルセルロース（和光純薬）を０．１ｗ／ｖ％の濃度で注射用蒸留水に溶解して調製した。
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を１ｇ／１０ｍｌ、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０、太陽化学）をＣｏＱ１０として１０ｍｇ／１０ｍｌ、Ｌ－カルニチン（三栄源エフ・エフ・アイ）を６８ｍｇ／１０ｍｌの濃度になるように、０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。
・「製造例３」：表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。
・ＡＩＮ－９３Ｍ（オリエンタル酵母工業）：組成を表５に示す。米国国立栄養研究所（ＡＩＮ）から１９９３年（ＡＩＮ－９３）に発表されたマウス・ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料である。
・ＨＦＤ－６０（オリエンタル酵母工業）：組成を表５に示す。脂肪分６０％カロリー比高脂肪飼料である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
［動物実験］
　３週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系雄性マウス（クレア社）を１週間予備飼育及び１週間のトレッドミルへの馴化をした後に試験に用いた。体重に基づいて群分けし（ｄａｙ０）（Ｎｏｒｍａｌ群（ｎ＝９）、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群（ｎ＝１０）、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群（ｎ＝９）、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群（ｎ＝１０）、Ｈ＋「製造例３」群（ｎ＝１０）の５群）、以降、群分けから４２日後の試験最終日（ｄａｙ４２）までＡＩＮ－９３Ｍ（Ｎｏｒｍａｌ群）又はＨＦＤ－６０（Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群、Ｈ＋「製造例３」群）を自由摂取させた（ただし、水は自由摂取とした）。
［被験試料の投与］
　被検試料（Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群、Ｈ＋「製造例３」群）又は０．１％ＣＭＣ溶液（Ｎｏｒｍａｌ群、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群）を、試験最終日を除く４２日間毎日（ｄａｙ０～ｄａｙ４１）、ゾンデを用いて強制経口投与した。被験試料又は０．１％ＣＭＣ溶液は１週間に１度調製して使用し、表６に示す用量（投与容量１０ｍＬ／ｋｇ）で投与した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
［トレッドミルによる運動負荷］
　群分け～試験最終日（ｄａｙ０～ｄａｙ４２）の期間中、１週間に３回の頻度で、トレッドミルによる運動負荷（１５ｍ／分～２０ｍ／分、４０分間）を行った。
［体重測定］
　群分け～試験最終日（ｄａｙ０～ｄａｙ４２）の期間中、３日に１回の頻度で、体重測定を行った。
［組織採取］
　試験最終日（ｄａｙ４２）に解剖して腎周囲脂肪組織及び褐色脂肪組織の重量を測定し、褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量を測定した。
［測定］
　褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量：Ｍｏｕｓｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｂｒｏｗｎ　ｆａｔ　ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１　（ＵＣＰ１）　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ　（ＣＵＳＡＢＩＯ）を用い、付属の手順書に従って、褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量を測定した。
［統計学的処理方法］
　測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ　Ｖｉｅｗ　５．０－Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
（２）結果
　図４に、体重測定及び試験期間中の摂餌量／体重の結果を示す。Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群において、Ｎｏｒｍａｌ群と比較して投与３日目（ｄａｙ３）より有意に体重増加が見られた。「製造例３」群では、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して投与３～４２日目（ｄａｙ３～ｄａｙ４２）にかけて有意な体重抑制効果が見られた。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群及びＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して体重に差異を認めなかった。試験期間中の摂餌量／体重は、ＡＩＮ－９３Ｍを給餌した群よりもＨＦＤ－６０を給餌した各群の方が低い値を示したが、ＨＦＤ－６０を給餌した各群の間に差異は認められなかった。
　図５に、腎周囲の脂肪重量を示す。Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群ではＮｏｒｍａｌ群と比較して有意に重量が増加した。製造例３群はＨｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して有意に脂肪組織重量の増加を抑制した。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群及びＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して脂肪組織重量に差異を認めなかった。
　図６に、褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量を示す。Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群ではＮｏｒｍａｌ群と比較してＵＣＰ－１発現量に変化を認めなかった。製造例３群はＨｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して有意にＵＣＰ－１発現量が増加した。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群及びＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ－Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ－ｆａｔ群と比較してＵＣＰ－１発現量に差異を認めなかった。
　以上の結果から、本発明の脂質代謝促進剤について運動負荷時の脂質代謝促進効果を確認することができた。
（実施例５）
　脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤の効果確認
（１）材料及び方法
［試験食品］
　内容物の有無を外観上識別不能なカプセル（日本薬局方セルロースホワイトカプセル（植物性）００号）を用い、下記２種類の試験食品を調製した。
・プラセボ：内容物を含まないカプセル。
・アクティブ：表３に記載の製造例３を３ｇ封入したカプセル。
［被験者］
　被験者の選別をするために、２０歳以上の男性に対し、事前の血液生化学検査、血液学的検査及び自転車運動を実施した（ＶＳ０）。自転車運動では、運動開始から疲労困憊するまでに要する時間及び最大酸素摂取量（ＶＯ2ｍａｘ）の測定を行なった。さらに事前アンケートで生活習慣の確認を行い、これらの結果に基づいて、健康でかつ運動開始から疲労困憊するまでに要する時間とＶＯ2ｍａｘに偏りのないことを条件に、被験者の選抜を行なった。
　今回の試験では、下記（１）～（４）の判定基準を２つ以上満たしたときに、被験者が疲労困憊したと判断した。さらに、疲労困憊であると判断された直前に得られた最大の酸素摂取量をＶＯ2ｍａｘとした。
（１）酸素摂取量（ＶＯ2）の増加でプラトーの現象が出現した。
（２）呼吸交換比（ＶＣＯ2／ＶＯ2）が１．１以上に達した。
（３）心拍数（ＨＲ）が、２０歳で予想されている最高心拍数（ＨＲｍａｘ）である２００に達した。
（４）Ｂｏｒｇ　ｓｃａｌｅ日本語版（小野寺ら、全身持久性運動における主観的強度と客観的強度の対応性：Ｒａｔｉｎｇ　ｏｆ　ｐｅｒｃｅｉｖｅｄ　ｅｘｅｒｔｉｏｎの観点から、体育學研究、２１（４）、ｐ．１９１－２０３（１９７６））を用いた主観的運動強度（ＲＰＥ）が１９（非常にきつい（ｖｅｒｙ　ｖｅｒｙ　ｈａｒｄ））以上となった。
　自転車運動は、自転車エルゴメータを使用し、回転数６０回転／分の条件で、運動開始０～１分後は１００Ｗ、それ以降は１分経過毎２５Ｗずつ運動強度を上げ、疲労困憊となるまで運動を行った（多段階漸増運動負荷試験）。
　こうして選抜された２０．５±０．２歳（平均値±標準誤差）、の被験者男性１２名にて、二重盲験クロスオーバー比較試験を行った。
［試験スケジュール］
　ＶＳ０から１４日の間隔をあけて１回目の試験（ＶＳ１）を実施した。ＶＳ１では２種類の試験食品のうち一方を摂取し、自転車運動、採血、呼気ガスの採取・分析、及び心拍数の測定を行なった。さらに、ＶＳ１から７日の間隔をあけて２回目の試験（ＶＳ２）を行った。ＶＳ２ではＶＳ１とは異なる試験食品を摂取し、自転車運動、採血、呼気ガスの採取・分析、及び心拍数の測定を行なった。
　なお、試験開始日（ＶＳ０）以降、検査終了時（ＶＳ２）まで、日常範囲を大きく逸脱する過度な運動、摂食や過食の制限するよう指導した。さらに、本試験に影響を及ぼす可能性があるサプリメント、健康食品、医薬品（一般用医薬品を含む）の使用、及び喫煙は禁止した。さらに、試験（ＶＳ０、ＶＳ１、ＶＳ２）前日は禁酒し、食事は２２時までに終え、深夜０時までに就寝するように指導し、当日は、自転車運動を開始する２時間前までに食事を終え、それ以降は検査が終了するまで飲食を禁止した（飲水は可）。また、検査当日は同じ時刻に起床し、試験の実施はできる限り同じ時間帯で行うように指導した。
［試験ＶＳ１及び試験ＶＳ２の実施］
・試験食品の摂取：前記の試験食品を、水又は白湯を用いて噛まずに飲み込んで摂取させた。
・自転車運動：自転車エルゴメータを使用して、試験食品摂取３０分後～試験食品摂取９０分後（ｔｉｍｅ３０～９０）の６０分間、回転数６０回転／分の条件で、ＶＳ０で測定したＶＯ2ｍａｘの５０％の運動強度にて継続的に実施した。
・採血：試験食品摂取前及び試験食品摂取の１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０分後（ｔｉｍｅ０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０）に実施した。
・呼気ガスの採取・分析：ブレス・バイ・ブレス法を用い、試験食品摂取直後～試験食品摂取１５０分後（ｔｉｍｅ０～ｔｉｍｅ１５０）までの１５０分間、継続的に実施した。
・心拍数の測定：試験食品摂取直後～試験食品摂取１５０分後（ｔｉｍｅ０～ｔｉｍｅ１５０）の１５０分間、継続的に実施した。
［測定］
・呼吸交換比：採取した呼気を呼吸毎にガス分析装置で測定し、呼気中のＯ2及びＣＯ2の濃度、呼気の流量を測定した。この測定値に基づいて、酸素摂取量（ＶＯ2）（ｍｌ／体重ｋｇ／ｍｉｎ））、二酸化炭素産生量（ＶＣＯ2（ｍｌ／体重ｋｇ／ｍｉｎ））及び呼吸交換比（ＶＣＯ2／ＶＯ2）を算出した。さらに、各時点の呼吸交換比からｔｉｍｅ０の呼吸交換比の各群平均値を差し引いて、呼吸交換比の変化量（ΔＶＣＯ2／ＶＯ2）を求めた。
・血中グリセロール：酵素法を用い、付属の手順書に従って、血清中のグリセロールを測定した。
・血中遊離脂肪酸：酵素－ＵＶ法を用いて、血清中の遊離脂肪酸濃度を測定した。
・血中コルチゾール：ＣＬＥＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血漿中のコルチゾール濃度を測定した。
・血中グルカゴン：ＲＩＡ２抗体（Ｄｏｕｂｌｅ‐ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血漿中のグルカゴン濃度を測定した。
・血中インスリン：ＣＬＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血清中のインスリン濃度を測定した。
・血糖：酵素法を用いて、血糖値を測定した。
・血中総ケトン体：酵素法を用いて、血清中の総ケトン濃度（３－ヒドロキシ酪酸及びアセト酢酸の合計）を測定した。
・血中３－ヒドロキシ酪酸：酵素法を用いて、血清中の３－ヒドロキシ酪酸濃度を測定した。
・血中アセト酢酸：酵素法を用いて、血清中のアセト酢酸濃度を測定した。
・血中成長ホルモン：ＣＬＥＩＡ法を用いて、血清中の成長ホルモン濃度を測定した。
・血中アドレナリン：ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）法を用いて、血漿中のアドレナリン濃度を測定した。
・血中ノルアドレナリン：ＨＰＬＣ法を用いて、血漿中のノルアドレナリン濃度を測定した。
［統計学的処理方法］
　試験で得た各測定値、算出値又は換算値は１標本ｔ検定で評価した。
（２）結果
　図７に、経時的な呼吸交換比の変化量（ΔＶＣＯ2／ＶＯ2）の結果を示す。ΔＶＣＯ2／ＶＯ2は、運動開始から運動終了後までアクティブ群の方が低い値で推移し、運動時ではｔｉｍｅ８５、９０（分）でプラセボ群に比べて有意な低下が認められた。運動終了時ではｔｉｍｅ９５、１００（分）に両群とも一旦上昇するが、その後ｔｉｍｅ１３５（分）まで急激に低下した。特にｔｉｍｅ１２５～１３５（分）の間では、有意な差は見られなかったものの、アクティブ群の方が低い平均値を示した。
　図８に、経時的な血中グリセロールの濃度及び遊離脂肪酸の濃度を測定した結果を示す。血中グリセロールの濃度は、運動時のｔｉｍｅ４５及び９０（分）において、有意な差は見られなかったものの、アクティブ群の方が高い平均値を示した。
　血中遊離脂肪酸は、運動開始時（ｔｉｍｅ３０（分））から試験終了時（ｔｉｍｅ１５０（分））までアクティブ群の方が高い平均値を示し、運動時のｔｉｍｅ９０（分）において最も高い平均値を示した。
　図９に、経時的な血中のコルチゾール、グルカゴン、インスリンの濃度、及び血糖を測定した結果を示す。
　コルチゾールは、運動前のｔｉｍｅ０～１５（分）まで上昇したが、その後減少した。ｔｉｍｅ１５～７５（分）において、アクティブ群の値の方が低く、ｔｉｍｅ４５（分）で有意な差が認められた。
　グルカゴンは、ｔｉｍｅ３０（分）の運動開始後から値が上昇し、運動時のｔｉｍｅ７５（分）ではアクティブ群は有意に高い値を示した。また、運動後のｔｉｍｅ１２０（分）においても、アクティブ群は有意に高い値を示した。
　インスリン及び血糖は、アクティブ群とプラセボ群の間に差を認めなかった。
　図１０に、経時的な血中の総ケトン体、３－ヒドロキシ酪酸、及びアセト酢酸の濃度を測定した結果を示す。総ケトン体及び３－ヒドロキシ酪酸は、運動時のｔｉｍｅ４５（分）（運動開始から１５分後）までアクティブ群、プラセボ群共に一旦低下するが、その後上昇を始め、ｔｉｍｅ４５～１５０（分）まではアクティブ群の方が上昇量は大きく、ｔｉｍｅ１２０（分）で平均値が最大となった。ｔｉｍｅ６０（分）の測定値に有意な差が認められた。経時的推移に注目すると、運動負荷の後（ｔｉｍｅ１２０及びｔｉｍｅ１５０）に、アクティブ群のケトン体の生成が大きく高まっている傾向がみられた。
　アセト酢酸は、両群に有意な差を認めなかったものの、総ケトン体と同様の推移を示した。
　図１１に、血中の成長ホルモン、アドレナリン及びノルアドレナリンの濃度を測定した結果を示す。成長ホルモンは、試験開始時（ｔｉｍｅ０）から、アクティブ群とプラセボ群共に上昇し、ほぼ同様の推移を示した。アクティブ群とプラセボ群の間に有意な差は認められなかった。アドレナリン及びノルアドレナリンは、運動開始（ｔｉｍｅ３０）と共に値は上昇し、運動終了（ｔｉｍｅ９０）と共に値は低下した。いずれもアクティブ群とプラセボ群の間に有意な差は認められなかった。
　以上の結果から、本発明の脂質代謝促進剤について運動負荷時の脂質代謝促進効果をヒトで確認することができた。さらに、本発明の脂質代謝促進剤は、インスリン、成長ホルモン、アドレナリン及びノルアドレナリンの分泌に影響を与えずに、脂質代謝促進効果を奏することもわかった。
（実施例６）
　本発明の脂質代謝促進剤を配合した飲料の製造
　表３に示す製造例３を１．５ｗ／ｖ％、甘味料１．０ｗ／ｖ％、酸味料０．９ｗ／ｖ％、及び増粘剤０．２ｗ／ｖ％の濃度で配合し、常法に従って飲料を製造した。飲料２００
ｍｌを摂取すると、製造例３を３ｇ摂取することができる。
（実施例７）
　本発明の脂質代謝促進剤を配合したタブレットの製造
　表３に示す製造例３を５０ｗ／ｗ％、賦形剤、結合剤、崩壊剤、及び滑沢剤を合わせて５０ｗ／ｗ％配合し、常法に従ってタブレットを製造した。
（実施例８）
　本発明の脂質代謝促進剤を配合したサプリメントの製造
　Ｌ－アルギニン１ｇ（５．７ミリモル）、Ｌ－アラニン１ｇ（１１ミリモル）、Ｌ－フェニルアラニン１ｇ（６．１ミリモル）の割合で混合し、これに賦形剤を添加して、カプセルに充填した。
（実施例９）
　脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
　被検試料は、表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）、及び表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、それぞれ蒸留水に懸濁することにより調製した。
［動物実験］
　３週齢の雄マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ（日本クレア社）を５日間予備飼育し、さらに２日間トレッドミルへの馴化を行った後、実験に用いた。馴化期間終了後、体重を測定し各群の平均体重が同様となるように群分け（Ｎｏｒｍａｌ群、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、及びＨ＋製造例３群）を行った。水は自由摂取とした。
　試験系の概略及び群構成を以下の表７に示す。高脂肪食摂取下では脂質代謝が低下することに基づき、Ｎｏｒｍａｌ群以外の３群には高脂肪飼料ＨＦＤ－６０を摂取させた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　被検試料は、馴化期間終了後より最終日を除く４日間毎日、ゾンデを用いてマウスに強制経口投与した。４日間の投与期間中は２日に一回の割合でトレッドミルにて強制的に運動（強制走行）を行わせた。トレッドミルによる運動負荷は１５　ｍ／分の速度で４０分間とした。トレッドミルによる運動負荷の３０分前に被検試料を投与した。投与開始後４日目から５日目にかけて１８時間絶食させた。
　投与開始後５日目に解剖を行った。解剖日当日、投与時からの継時的変化を調べるため、各群を３つのグループに分けた。具体的には、投与前に解剖する群（投与前（０））、投与３０分後に解剖する群（運動前（３０））、投与３０分後から６０分間のトレッドミル運動後に解剖する群（運動後（９０））に分けて解剖日当日の被検試料の投与及び運動負荷を実施し、採血と解剖を行った。採取した肝臓は、重量を測定した後、直ちに液体窒素で凍結し、β酸化関連酵素の測定を行うまで－８０℃にて凍結保存した。
［測定］
　得られた血液について、血清中のグルカゴン濃度（血中グルカゴン濃度）を、グルカゴン比色定量ＥＬＩＳＡキット Ｍｅｒｃｏｄｉａ　Ｇｌｕｃａｇｏｎ　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）を用いて付属の手順書に従って測定した。
　また、肝臓のβ酸化関連酵素活性（カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性、アシルＣｏＡオキシダーゼ活性）は、以下の手順で測定を行った。まず、肝臓をホモジナイズし、遠心分離して上清を分取することにより、肝臓総ホモジネート画分を得た。この画分について、Ｍａｒｌｗｅｌｌらの方法を一部変更して用いることにより、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性を測定した。具体的には、最終濃度０．０４ｍＭ　パルミトイルＣｏＡ、０．２５ｍＭ　ＤＴＮＢ（イールマン試薬）、１．２５ｍＭ　ＥＤＴＡ及び０．１％　Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を含む５８ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に得られた肝臓総ホモジネート画分を添加し、３０℃、４１２ｎｍでの吸光度測定により５分間反応を追跡し、その後、Ｌ－カルニチン（終濃度１．２５ｍＭ）を添加し、ＣｏＡの生成を５分間追跡し（総量２００μＬ）、それによりカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性を測定した。
　また、肝臓総ホモジネート画分について、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏらの方法を一部改変して用いることにより、アシルＣｏＡオキシダーゼ活性を測定した。具体的には、最終濃度０．１ｍＭ　パルミトイルＣｏＡ、１０．６ｍＭ　フェノール、０．８２ｍＭ　４－アミノアンチピリン、１０μＭ　ＦＡＤ、４Ｕペルオキシダーゼ（ホースラディッシュ）及び０．２ｍｇ　ウシアルブミンを含む５０ｍＭ　リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に得られた肝臓総ホモジネート画分を添加し、３０℃、５００ｎｍで１１分間、吸光度を追跡した（総量２００μＬ）。
　さらに、得られた肝臓総ホモジネート画分中のタンパク質量を、ＢＣＡ法を用いて測定した。測定にはＴａＫａＲａ　ＢＣＡ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ　Ｔ９３００Ａを用い、付属の手順書に従って測定した。
［統計学的処理方法］
　各種測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ　Ｖｉｅｗ　５．０－Ｊを使用し、各群の分散の等質性をＦ検定にて確認後、多群の検定をＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって行った。有意水準は両側５％とした。
（２）結果
　図１２に、血中グルカゴン濃度の測定結果を示す。Ｈ＋製造例３群は、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して運動前（投与後３０分）において血中グルカゴン濃度の有意な上昇を示した。すなわち本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪分解促進作用を有するグルカゴンの分泌を運動前に亢進させることにより、運動時の脂質代謝を効率的に促進できることが示された。
　図１３に、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性の測定結果を示す。Ｈ＋製造例３群は、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して投与前及び運動前（投与後３０分）においてカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ活性の有意な上昇を示した。
　図１４に、アシルＣｏＡオキシダーゼ活性の測定結果を示す。Ｈ＋製造例３群は、Ｈｉｇｈ－ｆａｔ群と比較して投与前においてアシルＣｏＡオキシダーゼ活性の有意な上昇を示した。
　肝臓β酸化関連酵素であるカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼやアシルＣｏＡオキシダーゼは、脂質代謝の律速段階となる酵素として知られていることから、本発明の脂質代謝促進剤が、これらβ酸化関連酵素活性の増強によっても脂質代謝を促進できることが示された。
　以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、及びアルギニンを高度に含有する本発明の脂質代謝促進剤が、高い脂質代謝促進効果を示すことが示された。
（実施例１０）
　脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
　被検試料として、（ｉ）アラニン（アラニン：アルギニン＝１０：０）、（ｉｉ）アラニンとアルギニンの７．５：２．５混合物、（ｉｉｉ）アラニンとアルギニンの５：５混合物、（ｉｖ）アラニンとアルギニンの２．５：７．５混合物、（ｖ）アルギニン（アラニン：アルギニン＝０：１０）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。
　試験当日、尾静脈より採血を行い（投与３０分前；ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ　１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロールを測定した。
［測定］
　グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
（２）結果
　アラニン（Ａｌａ）：アルギニン（Ａｒｇ）＝２．５：７．５群、５：５群、７．５：２．５群、１０：０群は、コントロール群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。また、アラニンとアルギニンは、１：１で混合すると最も高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
（実施例１１）
　脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
　被検試料として、（ｉ）アラニン（アラニン：フェニルアラニン＝１０：０）、（ｉｉ）アラニンとフェニルアラニンの７．５：２．５混合物、（ｉｉｉ）アラニンとフェニルアラニンの５：５混合物、（ｉｖ）アラニンとフェニルアラニンの２．５：７．５混合物、（ｖ）フェニルアラニン（アラニン：フェニルアラニン＝０：１０）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。
　試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ　１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロール濃度を測定した。
［測定］
　グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
（２）結果
　アラニン（Ａｌａ）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）＝２．５：７．５群、５：５群、７．５：２．５群、１０：０群は、ｃｏｎｔｒｏｌ群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。また、アラニンとフェニルアラニンは、１：３で混合すると最も高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
（実施例１２）
　脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
　被検試料として、（ｉ）アルギニン（アルギニン：フェニルアラニン＝１０：０）、（ｉｉ）アルギニンとフェニルアラニンの７．５：２．５混合物、（ｉｉｉ）アルギニンとフェニルアラニンの５：５混合物、（ｉｖ）アルギニンとフェニルアラニンの２．５：７．５混合物、（ｖ）フェニルアラニン（アルギニン：フェニルアラニン＝０：１０）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表１０に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。
　試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ　１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロール濃度を測定した。
［測定］
　グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
（２）結果
　図１５に血中グリセロール濃度の変化量（Δグリセロール）を示す。アルギニン（Ａｒｇ）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）＝２．５：７．５群と５：５群は、コントロール群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。また、アルギニンとフェニルアラニンは、１：３で混合すると最も高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
（実施例１３）
　脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
　被検試料として、実施例１０～１２の中でそれぞれ高い脂肪分解能を示した、（ｉ）アラニンとアルギニンの１：１重量比混合物、（ｉｉ）アラニンとフェニルアラニンの１：３重量比混合物、（ｉｉｉ）アルギニンとフェニルアラニンの１：３重量比混合物、（ｉｖ）表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表１１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。
　試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ　１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロールを測定した。
［測定］
　グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値に基づいて、ｔｉｍｅ０～ｔｉｍｅ９０の血中グリセロールＡＵＣ（血中濃度－時間曲線下面積）を算出した。
［統計学的処理方法］
　測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ　Ｖｉｅｗ　５．０－Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
（２）結果
　図１６に算出された血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）を示す。Ａｌａ：Ａｒｇ＝１：１群、Ａｌａ：Ｐｈｅ＝１：３群、Ａｒｇ：Ｐｈｅ＝１：３群、及び製造例３群の全てにおいて、コントロール群と比較して、血中グリセロールＡＵＣが高かった。
（実施例１４）
　脂質代謝指標の測定
（１）材料及び方法
［被検試料］
　被検試料として、実施例１３で最も高い脂肪分解能を示した（ｉ）アラニンとアルギニンの１：１重量比混合物、実施例１０～１２の結果を踏まえて配合比を定めた（ｉｉ）アラニンとアルギニンとフェニルアラニンの１：１：３重量比混合物、（ｉｉｉ）アラニンとアルギニンとフェニルアラニンの１：１：６重量比混合物を、それぞれ注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製したものを使用した。
［動物実験］
　６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を予備飼育後、試験に用いた。試験前日の朝、ラットの体重を測定し、平均体重が同様となるように群分けした。試験系の概略及び群構成を以下の表１２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　試験前日の夕方より１８時間の絶食を行った。ただし水は自由摂取とした。
　試験当日、尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ－３０）、直ちに被検試料をラット体重に対し１ｇ／ｋｇの用量で経口投与（５ｍｌ／ｋｇ）した。採血の３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）－（－）－エピネフリン、和光純薬工業社）を０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与（８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的に採血（ｔｉｍｅ　１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中グリセロールを測定した。
［測定］
　グリセロールアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。各測定時における測定値からｔｉｍｅ０の測定値を差し引いた値に基づいて、ｔｉｍｅ０～ｔｉｍｅ９０の血中グリセロールＡＵＣ（血中濃度－時間曲線下面積）を算出した。
（２）結果
　図１７に算出された血中グリセロールＡＵＣ（ｍｉｎ・ｍｇ／Ｌ）を示す。アラニン（Ａｌａ）：アルギニン（Ａｒｇ）＝１：１群と、アラニン（Ａｌａ）：アルギニン（Ａｒｇ）：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）＝１：１：３群と１：１：６群は、コントロール群と比較して、血中グリセロールＡＵＣが高かった。
　以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、及びアルギニンのうちの２つ又は３つの組み合わせを含む本発明の脂質代謝促進剤は、高い脂質代謝促進効果を示すことがさらに示された。
　本発明に係る脂質代謝促進剤によれば、効果的に脂肪消費を促進し、また同じ運動量においてもより高い体脂肪減少効果をもたらすことができ、そのような効果が期待できる脂質代謝促進剤やそれを用いた製品の開発が可能となる。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願の全体を参照により本明細書に取り入れるものとする。

Claims (11)

  1. 　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸を含むアミノ酸混合物を含有し、かつ前記少なくとも２つのアミノ酸をそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して６０モル以上のモル比で含む、脂質代謝促進剤。
  2. 　前記アミノ酸混合物がアルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを含有する、請求項１に記載の脂質代謝促進剤。
  3. アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンを、全アミノ酸量１００モルに対し、アルギニン：アラニン：フェニルアラニン＝８～３０モル：１８～３０モル：１０～２０モルのモル比で含有する、請求項１又は２に記載の脂質代謝促進剤。
  4. 　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンの配合量が、（ｉ）アルギニン：アラニン＝１．５：１～１：１．５、（ｉｉ）アラニン：フェニルアラニン＝４：１～１：４、及び（ｉｉｉ）アルギニン：フェニルアラニン＝１：１～１：４の少なくとも１つの重量比を満たす、請求項１～３のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
  5. 　アルギニン、アラニン、及びフェニルアラニンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して１００モルのモル比で含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
  6. 　前記アミノ酸混合物が、グリシンをさらに含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、及びグリシンをそれらの合計量で全アミノ酸量１００モルに対して８５モル以上のモル比で含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
  7. 　前記アミノ酸混合物が他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、及びアスパラギン酸のみをさらに含有する、請求項１～４及び６のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
  8. 　前記アミノ酸混合物が、他のアミノ酸を、全アミノ酸量１００モルに対して下記のモル比で含む、請求項７に記載の脂質代謝促進剤。
    　プロリン　０．０１～４モル
    　リジン　０．０１～２モル
    　チロシン　０．０１～２モル
    　スレオニン　０．０１～２モル
    　ロイシン　０．０１～２モル
    　バリン　０．０１～２モル
    　イソロイシン　０．０１～２モル
    　グルタミン酸　０．０１～１モル
    　トリプトファン　０．０１～１モル
    　ヒスチジン　０．０１～１モル
    　セリン　０．０１～１モル
    　メチオニン　０．０１～０．２モル
    　アスパラギン酸　０．０１～０．１モル
  9. 　アドレナリン分泌亢進状態で作用させるための、請求項１～８のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
  10. 　アドレナリン分泌亢進状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、又は多食による刺激を受けた状態である、請求項９に記載の脂質代謝促進剤。
  11. 　血中グリセロール濃度上昇、体重増加抑制、血中遊離脂肪酸濃度上昇、血中グルカゴン濃度上昇、血中コルチゾール濃度低減、血中総ケトン体濃度上昇、血中３－ヒドロキシ酪酸濃度上昇、及び褐色脂肪組織中のＵＣＰ－１発現量増加からなる群から選択される少なくとも１つを伴う脂質代謝促進用の、請求項１～１０のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
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