WO2014178448A1 - 당귀 추출물과 삼지구엽초 추출물을 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물 - Google Patents

당귀 추출물과 삼지구엽초 추출물을 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물 Download PDF

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male infertility
angelica
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황성연
정종문
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주식회사 한국전통의학연구소
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    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing or improving male infertility, including a Angelica extract and Trichophytaxis extract, and a combination of compositions effective for male infertility through an increase in sperm count, sperm motility, and an increase in testosterone content.
  • a composition for preventing or improving male infertility including a Angelica extract and Trichophytaxis extract, and a combination of compositions effective for male infertility through an increase in sperm count, sperm motility, and an increase in testosterone content.
  • the incidence rate of infertile patients is about 15% of married couples, and male infertility accounts for about half, and the incidence of infertile patients is increasing.
  • Male infertility is increasing due to frequent drinking, smoking, environmental pollution, nutrient intake, excessive drug use, exposure to environmental toxins, and stress.
  • Erectile dysfunction is a problem before sexual intercourse, it is more important to solve the problem of male infertility through the improvement of sex hormones, the number of sperm and improved activity.
  • Sperm formation is not normal due to the cause, or a high rate of malformed sperm production (The Korean Urological Association.Textbook of Urology.3rd.Seoul Goryeouihak.507-22. (2001)).
  • Sperm motility is essential in the process of fertilization in combination with eggs (Tienthai P. Anim Reprod Sci. 80, 131-46. (2004)).
  • Sperm motility begins to acquire fertility as it passes through the woman's womb and induces hyperactivation motility and acrosome reactions (Guzick DS et. Al., N Engl J Med. 345, 1388-93. (2001).
  • sperm disorders As a cause of male infertility, there are major causes of infertility, sperm disorders, spermatogenesis disorders and sperm motility (The Korean Urological Association.Textbook of Urology. 3rd. Seoul Goryeouihak. 507-22. (2001)).
  • Spermatogenic disorders include oligozoospermia, which are produced in the testicles, and then produce less sperm (asalnozoospermia). (Saleh RA and Agarwal A. J Androl. 23, 737-52. 2002)).
  • the condition of sperm that can be conceived includes 60 million to 100 million sperm in 1 ml of semen, the number of abnormal sperm should be 20-30% or less, and 50% or more activity for 4-8 hours after ejaculation.
  • the amount of semen should be 2 to 5 ml, but sperm deficiency is a symptom that causes infertility because the number of sperm in 1 ml of semen is less than 30 million.
  • the present inventors first screened various herbal medicine samples for screening and selected candidate groups that can be expected to be effective in infertility by conducting experiments on the effects of NO secretion, which is basically related to penile erection, and ACE enzyme inhibition. It was. The characteristics of the candidates were determined by the extraction conditions, and the mixtures of the extracts were further analyzed for basic NO concentration, ACE (Angiotensin converting enzyme) inhibition effect, and PDE (Phosphodiesterase) -5 inhibition effect. The present invention was completed by confirming the effectiveness of treatment of infertility through the change of testosterone in serum, measurement of organ weight (testia, spermatozoa, seminal vesicle), in vivo testing of sperm count and sperm motility.
  • NO secretion which is basically related to penile erection, and ACE enzyme inhibition. It was.
  • the characteristics of the candidates were determined by the extraction conditions, and the mixtures of the extracts were further analyzed for basic NO concentration, ACE (Angioten
  • the present invention is to provide a composition for the prevention or improvement of male infertility by using the extracts of Angelica and Trigeminal vinegar.
  • the present invention provides a male infertility prevention or improvement composition
  • a male infertility prevention or improvement composition comprising a hot water or ethanol extract of Angelica gigas, and an ethanol extract of trichophytic herb.
  • ethanol is preferably at a concentration of 50% or less, and in the case of the ethanol extract of the trigeminal leaf, ethanol is preferably at a concentration of 50% or more, and more preferably, the ethanol extract of trigeminal leaf is It is preferable that the extract of 90% ethanol, and the extract of Angelica dulcimus is 30% ethanol extract or hot water extract.
  • the extract may be a composition characterized in that it further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, including a food acceptable additive food supplement, containing the extracts for preventing or improving male food infertility
  • a pharmaceutically acceptable carrier including a food acceptable additive food supplement, containing the extracts for preventing or improving male food infertility
  • the present inventors selected the basic candidate group by measuring the NO concentration, ACE inhibition rate, etc. in order to select candidate herbal medicines that can prevent or improve male infertility. It may not be a direct factor for improving male infertility, but the erection of the penis also has a secondary effect.
  • the targets were Angelica, Astragalus, Trichophytium, Cornus, Schisandra chinensis, Gugija, Red ginseng, Tea, and Tosa. It is a preliminary work to further reduce the scope because those with basic effects are more likely to be those with actual infertility effects.
  • NO nitric oxide
  • cGMP cyclic GMP
  • HUVEC cells were used to measure the NO production efficacy involved in eNOS and closely involved in erection. 1 to 3 show the results of NO production for candidate herbal extracts. In general, Trilobite, Angelica, Cornus and Red Ginseng showed good results. Trilobite vinegar showed production of 13.22 ⁇ mol / L at 500 ppm.
  • ACE inhibition was further measured to select candidate groups. Inhibiting the action of ACE involved in the synthesis of angiotensin II, a potent vasoconstrictor, is essential to maintain the relaxation of vascular muscle, the key to maintaining erection. It has been proposed as a candidate.
  • ACE is an enzyme that plays an important role in regulating blood pressure. It increases blood pressure by hydrolyzing angiotensin I, which consists of 10 amino acids, to angiotensin II.
  • Angiotensin II a potent vasoconstrictor, promotes the release of aldosterone, which results in increased retention of Na + and water in the kidneys and increased arterial blood pressure.
  • Angelica is known for a variety of pharmacological effects, such as anemia treatment, sedation, analgesic effect, tonic, dysmenorrhea treatment, menopausal symptoms treatment, abdominal pain treatment, wound treatment, arthritis treatment, diabetic hypertension treatment Turned out. It is known that there is a variety of substances of coumarin type, and representatively, a large amount of decursin and decursinol angelate has been reported long ago (1967), and recently, dihydropyrano coumarin series has been reported to have anti-cancer effects. did. Deckerin is also known for artificially synthesizing methods, but it is difficult to secure it in such a way because of complicated process methods and low yield. The inventors noted the rate of inhibition of ACE of Angelica gigas.
  • the present inventors based on the results of the basic examination, the trigeminal leaf vinegar and the part showing the excellent characteristics of the Angelica excels in the characteristics showing the excellent properties and tested whether the effect of the improvement or prevention of male infertility. In general, it is a separate question whether the properties of individual substances are expressed even in the state of the mixture, and whether a synergistic or rather ineffective effect is needed.
  • the content of deckerin was high in the ethanol extract of about 50% or more. Therefore, more than 50% ethanol extract was considered to be preferable.
  • sperm water, sperm activity, and testosterone concentrations were tested using a mixture of ethanol extracts from Trichophytaceae, hot water from Angelica gigas, and ethanol extracts at different concentrations. Hot water extraction was more effective than that. Due to the results other than that, the Angelica extract was considered that the content of deckerin is not a factor that affects fertility improvement, or a result that the effect is rather inhibited when mixed.
  • the present invention provides a composition for preventing or improving male infertility, comprising a hot water or ethanol extract of Angelica vulgaris, and an ethanol extract of trilobite leaf.
  • a composition for preventing or improving male infertility comprising a hot water or ethanol extract of Angelica vulgaris, and an ethanol extract of trilobite leaf.
  • the case of Angelica gigas showed no room to understand that the relationship between the content and the infertility improvement.
  • ethanol extract of Angelica gigas ethanol is preferably at a concentration of 50% or less, and in the case of the ethanol extract of the trigeminal leaf, ethanol is preferably at a concentration of 50% or more, and more preferably ethanol extract of trigeminal leaf Silver 90% ethanol extract may be good, and the extract of Angelica dulcimus is preferably 30% ethanol extract or hot water extract.
  • the effect is not high when the concentration of ethanol is high.
  • the expression of less than 50% ethanol in the present invention is because the effect is relatively good in less than 50% ethanol, it means that the hot water extract containing at least ethanol and the concentration is preferably 0 to 50% or less.
  • the concentration of more than 50% in the case of the trigeminal vinegar is because the effect of the three trifoliate vinegar in the case of higher than the higher ethanol concentration. For trilobite vinegar, about 60 to 95% of ethanol is considered to be preferred.
  • the extract may be a composition characterized in that it further comprises a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a method of preparing an extract of the herbal medicine according to the extraction method and then adding it to the pharmaceutical composition will be possible.
  • pharmaceutically acceptable means a physiologically acceptable and, when administered to a human, usually does not cause an allergic reaction or the like.
  • the pharmaceutical compositions according to the invention may further contain one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may further include, for example, carriers for oral administration or carriers for parenteral administration.
  • Carriers for oral administration may include lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid and the like.
  • carriers for parenteral administration may include water, suitable oils, saline, aqueous glucose and glycols, and the like, and may further include stabilizers and preservatives.
  • Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium hydrogen sulfite, sodium sulfite or ascorbic acid.
  • Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol.
  • Other pharmaceutically acceptable carriers may be referred to those described in the following documents (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
  • the male infertility prevention or amelioration composition of the present invention can be administered to any mammal, including humans.
  • it can be administered orally or parenterally.
  • Parenteral administration methods include, but are not limited to, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intestinal, topical, sublingual or rectal administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into a preparation for oral or parenteral administration according to the route of administration as described above.
  • compositions of the present invention may be formulated using methods known in the art as powders, granules, tablets, pills, dragees, capsules, solutions, gels, syrups, slurries, suspensions and the like.
  • oral formulations can be obtained by tablets or dragees by combining the active ingredients with solid excipients, milling them, adding suitable auxiliaries and then processing them into granule mixtures.
  • excipients examples include sugars including lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol and maltitol and starch, cellulose, including starch, corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch, etc. Fillers such as celluloses, gelatin, polyvinylpyrrolidone, and the like, including methyl cellulose, sodium carboxymethylcellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, and the like. In addition, crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid or sodium alginate and the like may optionally be added as a disintegrant. Furthermore, the pharmaceutical composition of the present invention may further include an anticoagulant, a lubricant, a humectant, a perfume, an emulsifier, a preservative, and the like.
  • Formulations for parenteral administration may be formulated by methods known in the art in the form of injections, creams, lotions, external ointments, oils, humectants, gels, aerosols and nasal inhalants. These formulations are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a prescription generally known in all pharmaceutical chemistries.
  • the food composition may be prepared by preventing or improving male infertility by including the extract, including food acceptable additives.
  • the food composition of the present invention includes all forms such as functional foods, nutritional supplements, health foods and food additives.
  • Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • functional foods include beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. ham, sausage cornebipe) Etc.), breads and noodles (e.g. udon, soba noodles, ramen, spaghetti, macaroni, etc.), fruit juices, various drinks, cookies, syrups, dairy products (e.g. butter, cheese, etc.), edible vegetable oils, margarine, vegetable protein, It can be prepared by adding the extract of the present invention to retort foods, frozen foods, various seasonings (eg, miso, soy sauce, sauce, etc.).
  • fruits and processed foods e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.
  • fish e.g. ham, sausage cornebipe
  • breads and noodles e.g. udon, soba noodles, ramen, spaghetti, macaroni, etc.
  • fruit juices
  • extract of the present invention may be prepared and used in powder or concentrate form.
  • the present invention is a composition for preventing or improving male infertility, and has an effect of increasing the number of sperm, sperm motility, testosterone hormone content, sexual behavior, sexual function, etc. It can help improve male reproductive function for the general public as well as patients suffering from male infertility without problems.
  • Figure 4 shows the results of ACE inhibition of the candidate group herbal medicine extract.
  • FIG. 5 shows sperm motility according to an embodiment of the present invention
  • FIG. 6 shows sperm motility.
  • Figure 7 shows the testosterone content in the mouse serum according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 8 shows cGMP content in mouse serum according to an embodiment of the present invention.
  • Angelica was selected as the 30% ethanol extraction conditions, trichophytic vinegar was selected by 90% ethanol extraction conditions and was tested in a ratio of 6: 4.
  • ICR mice (Woongseong, 7 weeks old) were purchased from Samtaco Co., Ltd. (Osan, Gyeonggi-do). During the experiment, water and feed were freely ingested. The room temperature was 22 ⁇ 2 °C, the humidity was 55 ⁇ 5%, and the contrast was automatically adjusted in 12 hour cycle. The male mice that had undergone one week of adaptation were divided into the control group and the sample-administered group, and the sample-administered group was divided into 100, 200, 400, and 500 mg / kg concentration groups, and 10 animals were used for each group. Oral administration was performed and dissection was performed 24 hours after the last oral administration.
  • Serum testosterone concentrations were measured from serum of mice treated with oral distilled water and Angelica tricuspid and AE for 4 weeks.
  • the testosterone concentration in serum was increased in the negative control group and the AE group.
  • the testosterone concentration increased by about 60% in the AE 500 mg group compared with the 500 ppm red ginseng group, and it is thought that AE influences the increase of testosterone.
  • the cGMP content in mouse serum was also measured. This is shown in FIG. 8.
  • Serum cGMP concentrations were measured from serum of mice treated with oral distilled water and Angelica tricuspid leaf mixture AE for 4 weeks. It was confirmed that the cGMP concentration of the group administered 500 ppm of AE was about 55% higher than the group administered 500 ppm of red ginseng, which is a positive control group, and it is thought that AE affects the increase of cGMP.
  • the mixture of AE showed NO, ACE inhibition rate and PDE-5 inhibition rate, and the basic effect also showed a tendency that the effect increases constantly according to the concentration without showing the results such as the decrease very much through mixing. gave.
  • Chewing gum was prepared using conventional methods using 40% gum base, 56.36% sugar, 0.64% AE extract, 1% fruit flavor, 2% water, and the composition and content.

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Abstract

본 발명은 당귀 추출물과 삼지구엽초 추출물을 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물에 대한 것으로, 정자수의 증가, 정자 운동성의 향상, 테스토스테론 함량 증가 등을 통해 남성 불임에 효과가 있는 조성물의 조합에 관한 것이다. 상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 당귀의 열수 또는 에탄올 추출물과, 삼지구엽초의 에탄올 추출물을 포함하는 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다. 상기 당귀의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50%이하의 농도인 것이 바람직하며, 상기 삼지구엽초의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50% 이상의 농도인 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 삼지구엽초의 에탄올 추출물은 90%에탄올 추출물인 것이 좋고, 당귀의 추출물은 30%에탄올 추출물 또는 열수 추출물인 것이 좋다.

Description

당귀 추출물과 삼지구엽초 추출물을 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물
본 발명은 당귀 추출물과 삼지구엽초 추출물을 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물에 대한 것으로, 정자수의 증가, 정자 운동성의 향상, 테스토스테론 함량 증가 등을 통해 남성 불임에 효과가 있는 조성물의 조합에 관한 것이다.
불임환자의 발생율은 결혼 부부 중 약 15%정도로 나타나고 있으며 이중 남성 불임이 절반정도를 차지하고 있으며, 전반적인 불임환자의 발생율은 증가하고 있는 추세이다. 남성 불임은 잦은 음주, 흡연, 환경오염, 영양섭취, 과다한 약물복용, 환경독소에서의 노출, 스트레스 등으로 증가하는 추세이며 정상적인 남성에 있어서도 정자의 운동성, 정자수 감소 등이 나타나고 있다.
발기부전의 문제는 성교이전의 문제로서, 보다 근원적인 남성불임의 문제는 성호르몬의 개선, 정자의 개수 및 활동성의 개선을 통해 해결하는 것이 더욱 중요하다.
남성 불임이란 정자가 생성되고 수송되어 사정에 의하여 배출된 후 난자와 결합하는 과정에서 어느 한 부분이라도 문제가 있을 경우 불임으로 이어지고, 현대 남성에게 있어 정자의 생성 및 상태, 정자형성 장애 그리고 정자의 운동성에 관한 부분이 가장 문제가 되고 있다(Jouannet P, et. al., APMIS. 109 (3), 333-44. (2001)). 정자형성 과정의 장애는 남성 불임 중 가장 많은 비중을 차지하고 있는데, 이는 주로 시상하부, 뇌하수체, 고환으로 이어지는 호르몬 분비의 이상, 유전적 인자, 고환의 발육부전, 잠복고환, 정맥류, 고온에 노출된 경우 등의 원인으로 정자의 형성이 정상적으로 이루어지지 않거나 기형적 정자의 생성 비율이 높은 경우를 말한다(The Korean Urological Association. Textbook of Urology. 3rd. SeoulGoryeouihak. 507-22. (2001)). 정자의 운동성은 난자와 결합하여 수정이 이루어지는 과정에서 필수적인 요소이다(Tienthai P. Anim Reprod Sci. 80, 131-46. (2004)). 정자의 운동성은 여성의 자궁을 거치면서 수정능획득을 시작하게 되고, hyperactivation 운동성과 첨체반응을 유도하게 된다(Guzick DS et. al., N Engl J Med. 345, 1388-93. (2001).
남성불임의 원인으로 무정자증, 정자질의 장애, 정자형성장애, 정자의 운동성 감소 등이 주요한 원인으로 파악된다(The Korean Urological Association. Textbook of Urology. 3rd. SeoulGoryeouihak. 507-22. (2001)). 정자형성장애에는 고환에서의 생성된 후 정자수가 적게 만들어 지는 감정자증(oligozoospermia), 정자의 활동성이 약한 약정자증 (asthenozoospermia)이 있다(Saleh RA and Agarwal A. J Androl. 23, 737-52. (2002)). 임신 가능한 정액의 조건으로는 정액 1 ㎖ 중에 6000만 ~ 1억의 정자가 들어 있고, 그 중 이상(異常) 정자수가 20~30% 이하여야 하며, 사정 후 4~8시간 동안 50% 이상이 활동하고 정액양이 2~5 ㎖이 되어야 하지만, 정자 부족증은 정액 1 ㎖ 중의 정자수가 3000만 이하에 불과해 불임의 원인이 되는 증상이다.
남성불임에 관련된 연구들은 대체로 서양의학적인 시술에만 의존하여 한약재를 이용한 생약재의 연구는 뒷전으로 물러나 있다. 그럼에도 불구하고 남성 성기능 개선치료에 있어서 우리나라의 경우 사회 관습적, 윤리적 이유 등으로 한의학에 의존하여 치료하는 경우가 많고 또한 상당수의 성공 사례들이 있으나 현재까지의 것들은 애매모호하게 남성 성기능의 개선에 효과가 있다는 정도로 알려진 관련 생약제들의 단순 혼합에 불과하며 오랜 경험과 과거 문헌에 의한 것으로, 정확한 작용기전 및 각각의 처방에 대한 기본적이고 체계적인 연구가 없는 경우가 대부분이다.
이에 본 발명자들은 스크리닝 차원에서 다양한 한약재 시료에 대하여 우선은 기본적으로 음경발기와 관련된 일산화 질소인 NO 분비에 대한 영향과 ACE 효소 저해율 실험을 실시하여, 불임에 효과가 있을 것으로 예상할 수 있는 후보군들을 선별하였다. 후보군들의 추출 조건별 특성을 파악하고, 추출물들을 섞은 혼합물에 대하여 다시 기본적으로 NO 농도, ACE (Angiotensin converting enzyme) 저해 효과, PDE (Phosphodiesterase)-5 저해 효과가 여전한지를 파악하고, 이들이 불임에 효과가 있을지에 관하여, 혈청 내 Testosterone의 변화, 장기 무게 (정소, 부정소, 정낭) 측정, 정자수, 정자 운동성의 in vivo 테스트를 통해 불임 치료에 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 당귀와 삼지구엽초의 추출물을 이용하여 남성 불임의 예방 또는 개선용 조성물을 제공하고자 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 당귀의 열수 또는 에탄올 추출물과, 삼지구엽초의 에탄올 추출물을 포함하는 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다. 상기 당귀의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50%이하의 농도인 것이 바람직하며, 상기 삼지구엽초의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50% 이상의 농도인 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 삼지구엽초의 에탄올 추출물은 90%에탄올 추출물인 것이 좋고, 당귀의 추출물은 30%에탄올 추출물 또는 열수 추출물인 것이 좋다.
본 발명에서 상기 추출물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물일 수 있으며, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 포함하여, 상기 추출물들을 포함시켜 남성 불임 예방 또는 개선용 식품 조성물을 만들 수 있다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명자들은 남성 불임의 예방 내지 개선 가능성이 있는 후보군 한약재들을 선별하기 위해 NO 농도 측정, ACE 저해율 측정 등을 하여 기본적 후보군을 선정하였다. 남성불임의 개선을 위한 직접적인 인자들은 아닐 수 있지만, 음경의 발기 부분도 보조적으로 영향을 미치기 때문이다. 당귀, 황기, 삼지구엽초, 산수유, 오미자, 구기자, 홍삼, 차전자, 토사자 등이 그 대상이 되었다. 기초적인 효과가 있는 것들을 실제적인 불임 효과가 있는 것들이 될 가능성이 높기 때문에 보다 범위를 줄이기 위한 사전 작업인 것이다.
음경의 발기는 중추신경계, 말초신경계 및 평활근을 포함하는 생리학적 과정의 복잡한 상호작용으로 인해 발생한다. 특히, 비아드레날린성, 비콜린성 신경 및 내피로부터의 일산화질소 (nitric oxide, NO) 방출은 음경해면체내의 구아닐사이클라제 (guanylate cyclase) 활성화 시키고 세포내 cGMP(cyclic GMP) 수준을 증가시킨다. 음경 해면체 조직 중의 혈관 평활근 이완을 촉진시켜 발기능을 개선시키는 인자인 NO는 불완전하고 안정성이 없는 물질로서 반감기가 매우 짧기 때문에 직접적으로 정량 할 수 없으므로, 체내 산화대사 물질인 nitrite의 함량을 측정함으로써 NO의 함량을 예상할 수 있다. HUVEC 세포를 사용하여 eNOS에 관여하여 발기에 밀접히 관여하는 NO 생성 효능을 측정하였다. 도 1 내지 3에 후보군 한약재 추출물에 대한 NO 생성의 결과를 나타내었다. 전반적으로 삼지구엽초, 당귀, 산수유, 홍삼이 좋은 결과를 보여주었다. 삼지구엽초는 500 ppm에서 13.22 ㎛ol/L의 생성을 보여주었다.
또한, 후보군을 선별하기 위해 추가적으로 ACE 저해율을 측정하였다. 발기 유지 핵심인 혈관근육의 이완상태를 유지하기 위해 강력한 혈관 수축제인 angiotensin II의 합성에 관여하는 ACE의 작용을 저해하는 것이 효과적이라고 사료되며, 실제 지금까지 일부 ACE 저해제가 성기능 개선 및 강화를 위한 후보 물질로서 제안 되어왔다. ACE 은 혈압을 조절하는 아주 중요한 역할을 하고 있는 효소로 이 효소는 10 개의 아미노산으로 구성된 angiotensin Ⅰ을 angiotensin Ⅱ로 가수분해함으로써 혈압을 증가 시킨다. 강력한 혈관 수축제인 angiotensin Ⅱ는 알도스테론의 분비를 촉진시키고 그 결과 알도스테론은 신장 내 Na+과 물의 보유를 증가시켜주며 동맥혈압의 증가를 가져온다. ACE를 저해하여 angiotensin Ⅱ의 생성을 억제한다면 혈압 낮출 수 있고 혈관을 이완시키면 음경 내 혈류량이 증가하게 되어 음경 발기가 유도된다는 점에서 의의가 있다. 본 발명에서는 ACE의 기질인 angiotensin Ⅰ을 대신하여 N-Hippuryl-His-Leu을 사용하였고 ACE는 토끼의 폐조직 powder로부터 추출하여 효소 액으로 사용했다. 효소반응을 통해 생성된 hippuric acid를 228 nm에서 측정하여 저해율을 확인했다. 양성대조군으로는 ACE 저해제로 잘 알려진 에날라프릴을 사용하여 이를 대비하였다. 결과를 표 1과 도 4에 나타내었다.
표 1
시료 농도 ACE 저해율(%)
당귀 500 ppm 69.4 ± 2.2
황기 15.2 ± 2.6
삼지구엽초 37.7 ± 3.2
산수유 17.2 ± 4.2
오미자 42.2 ± 3.2
구기자 44.9 ± 6.2
홍삼 12.4 ± 3.2
차전자 30.4 ± 1.4
토사자 15.25 ± 1.5
Enalpril maleate salt(양성 대조군) 25 ppm 99.1 ± 4.4
당귀의 경우, ACE저해율이 상당히 높게 나왔다. 오미자, 구기자, 삼지구엽초도 어느 정도의 저해율은 보이고 있다.
한편, 당귀는 다양한 약리학적 효과가 알려져 있는데 대표적으로는 빈혈치료, 진정작용, 진통효과, 강장제, 월경통치료, 폐경기증후치료, 복통치료, 상처치료, 관절염치료, 당뇨성 고혈압치료의 작용이 있다는 것이 밝혀졌다. 당귀에는 쿠마린 계통의 다양한 물질이 존재한다는 것이 알려져 있고 대표적으로는 decursin과 decursinol angelate가 다량 함유되어 있다는 것이 오래전(1967년)에 보고되기도 했으며, 최근에는 dihydropyrano coumarin 계열이 물질이 항암효과가 있다고 보고되기도 했다. 데커신은 인공적으로 합성하는 방법에 대해서도 알려져 있지만 복잡한 공정방법과 수율이 낮아 이러한 방법으로 확보하는 것은 어려움이 있다. 본 발명자들은 당귀의 ACE 저해율에 주목하였다.
본 발명자들은 기초적인 검토결과, 삼지구엽초가 우수한 특성을 보이는 부분과, 당귀가 우수한 특성을 보이는 부분에 주목하고 이들의 혼합물이 남성 불임의 개선 내지 예방에 효과가 있는지에 대하여 실험하였다. 일반적으로 개별 물질의 특성이 혼합물의 상태에서도 발현되는지는 별개의 문제이며, 상승작용을 하는지 오히려 효과가 떨어지는지에 대한 검토가 필요하다.
삼지구엽초와 당귀의 우수한 효과를 보여주는 추출조건을 우선 찾아 보려고 하였다. 삼지구엽초를 잘게 세절한 뒤 일정량을 취하여 삼각플라스크에 넣고 10배의 용매를 첨가하여 60℃에서 6시간씩 진탕추출한 다음 여과지로 여과하였였다. 4℃에서 12시간 냉각한 다음 여과하고 그 여과액을 55 Brix가 되도록 감압 농축하여 실험을 실시했다. 용매는 물과, 각 농도별(30%, 60%, 90% 등)의 에탄올을 사용하였다. 당귀에 대해서도 마찬가지의 테스트를 하였다.
삼지구엽초에 대하여는 Icariin의 효과 등에 대하여 알려져 있는 바에 따라 이의 함량이 높은 조건이 유리할 것으로 생각하였다. 55 Brix 농축액 10g을 FD(frozen dry)하여 HPLC로 icariin의 함량을 측정하였다.
표 2
조건 (60℃에서 6 시간 추출) 농축액 10g FD Icariin 함량 / g
열수 추출 4.57 g 0.14 %
30% 에탄올 추출 4.94 g 0.6 %
60% 에탄올 추출 6.70 g 0.8 %
90% 에탄올 추출 5.37 g 1.24 %
삼지구엽초의 경우, 열수 추출보다는 에탄올 추출에 의한 것이 바람직할 것으로 생각되어진다.
좀더 세분화된 상기 결과를 가지고 ACE저해율도 확인해 보았다. 500ppm의 농도로 열수 추출물은 0.52%를 보임에 반해, 에탄올 추출물은 전반적으로 어느 정도의 효과를 보여주었다. 특히 90%에탄올 추출물의경우, 약 80%의 저해율을 보였다.
당귀의 경우, 어떠한 성분이 주요한 이유인지는 명확하지 않으나, 기본적으로 데커신의 추출효율이 높을 경우 이에 영향을 미치는 성분도 많이 추출될 것으로 보고, 추가적으로 당귀에서 추출조건에 따른 데커신 함량을 파악하고자 하였다.
표 3
조건 (60℃에서 6시간 추출 조건) 농축액 10g FD decursin 함량 / g
열수 추출 4.35 g 0.27 %
30% 에탄올 추출 4.25 g 0.80 %
60% 에탄올 추출 4.49 g 5.28 %
90% 에탄올 추출 3.98 g 4.23 %
데커신의 함량은 대략적으로 50% 이상의 에탄올 추출물에서 그 함량이 높게 나타났다. 따라서, 50%이상의 에탄올 추출물이 바람직할 것으로 생각하였다. 그러나, 삼지구엽초의 에탄올 추출물과, 당귀의 열수, 그리고 각 농도의 에탄올 추출물의 혼합물을 사용하여 정자수, 정자 활동성, 테스토스테론의 농도를 테스트해 보았는데, 50%를 초과하는 농도의 에탄올에 의한 추출물의 경우보다 열수 추출등의 경우가 효과가 더 좋았다. 그러한 이외의 결과로 인해 당귀 추출물의 경우, 데커신의 함량이 불임개선에 영향을 미치는 요인이 아니거나, 혼합시 오히려 효과가 저해되는 결과가 되는 경우라고 생각하게 되었다.
그리하여, 당귀에 대하여는 다시 PDE-5 저해율을 다시 검토하였다. 세포내 cGMP의 증가는 세포내 칼슘 수준을 감소시키고, 이는 주상 평활근 이완을 유발하여 다시 해면체 부피 확장을 통해 음경 발기를 유도한다. cGMP는 PDE(phosphodiesterase)-5에 의해 분해되므로 그 활성이 억제되어야 cGMP의 농도가 증가되어 발기 기능이 향상된다. 본 실험에서는 3‘,5’-cGMP를 기질로 하여 PDE-5에 의해 5‘-GMP가 생성되고 이것은 5’-Nucleotidase에 의해 인산이 생성된다. 생성된 인산 양을 측정하여 PDE-5 활성을 얼마나 억제했는지를 확인하였다. 대조군으-9는 활성억제를 하지 못하는데, 물질마다, 또는 혼합되는 경우 그 특성이 다르게 나타난다. 표 4에 당귀의 추출조건별 PDE-5 저해율을 나타내었다.
표 4
추출조건 농도 PDE-5 저해율(%)
열수 500 ppm 75.4 ± 2.4
30%에탄올 57.4 ± 0.9
60%에탄올 41.4 ± 1.3
90%에탄올 31.5 ± 3.4
당귀의 경우, 일반적으로 알려진 데커신이 아닌 다른 물질이 불임개선에 영향을 미칠 가능성을 배제할 수가 없게 되었다. 종합적인 검토 결과 삼지구엽초는 에탄올 추출물을 사용하고, 당귀는 열수 추출물과 50% 이하의 에탄올 추출물을 사용하는 것이 바람직할 것으로 생각되었다. 물론, 당귀의 90% 에탄올 추출물 등의 경우에도 효과가 없는 것은 아니므로, 이를 배제하는 것은 아니다.
이에 따라, 삼지구엽초의 에탄올 추출물과 당귀의 열수추출물 또는 에탄올 추출물을 혼합하여 불임의 예방 내지 개선에 효과가 있는지를 테스트하였다. 이들의 혼합을 통해 예상한 효과가 저해되는지도 중요한 요인이어서 이에 대하여도 검토하였다. 당귀와 삼지구엽초의 영문명의 첫자를 따서 이를 혼합물 AE라 명명하였다.
ICR계 마우스를 사용하여 AE의 동물 모델 실험을 하였다. 양성대조군으로는 통상 효과가 있을 것으로 예상할 수 있는 홍삼추출물을 사용하였고 음성대조군으로는 무처리한 것을 사용하였다. 홍삼은 500 mg/kg을 농도로 사용하였는데, AE를 처리한 결과는 100 mg/kg을 사용한 경우에조차도 정자수의 면에서는 대조군보다 효과가 좋았고, 정자의 운동성의 경우에는 AE를 200 mg/kg 정도이상으로 사용한 경우에 홍삼보다 더 나은 결과를 보여주어 전반적으로 정자수와 정자운동성에 탁월한 효과가 있을 것으로 예상된다. 테스토스테론의 함량 측정결과도, 홍삼과 대비하였을 때, AE를 200 mg/kg 정도이상으로 사용하였을 때 효과가 홍삼보다 좋았으며, 홍삼과 같은 양을 투입한 경우 약 63% 가량 농도가 높게 나타났다. 마우스 혈청 내의 cGMP양의 경우에도 홍삼과 대비할 때 약 80% 이상 농도가 높게 나왔다.
나아가, 혼합된 AE의 경우, NO농도, ACE 저해율, PDE-5 저해율을 테스트해 보았는데, 혼합으로 인한 약효의 감소는 거의 없는 것으로 보고 있어 이들의 혼합조합에 큰 문제는 없는 것으로 보인다.
이에 따라, 본 발명은 당귀의 열수 또는 에탄올 추출물과, 삼지구엽초의 에탄올 추출물을 포함하는 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명에서는 당귀의 경우 데커신의 함량과 불임개선과는 관계가 있는 것은 아닌 것으로 파악할 여지를 보여주었다. 한편, 당귀의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50%이하의 농도인 것이 바람직하며, 상기 삼지구엽초의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50% 이상의 농도인 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 삼지구엽초의 에탄올 추출물은 90%에탄올 추출물인 것이 좋고, 당귀의 추출물은 30%에탄올 추출물 또는 열수 추출물인 것이 좋다. 당귀의 에탄올 추출물의 경우 에탄올의 농도가 높은 경우에 오히려 그 효과가 높지 않음을 확인할 수 있었다. 본 발명에서 에탄올 50%이하라는 표현은 50%이하의 에탄올에서 그 효과가 상대적으로 좋기 때문이며, 열수 추출물을 포함하는 것으로 적어도 에탄올이면서 농도는 0 내지 50%이하가 바람직한 것이라는 것을 의미한다. 상기 삼지구엽초의 경우에는 50%이상의 농도라는 것은 삼지구엽초의 경우 에탄올 농도가 높은 이 이상의 경우에 나름의 효과가 좋기 때문이다. 삼지구엽초의 경우 60 내지 95% 정도의 에탄올이 바람직한 것으로 생각된다.
본 발명에서 상기 추출물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물일 수 있다. 이 경우, 상기 추출방법에 따라 생약재의 추출물을 제조한 후 약학 조성물에 가하는 방법도 가능할 것이다. 상기에서 약학적으로 허용가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말한다. 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다.
경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다.
또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 남성 불임 예방 또는 개선 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화할 수 있다. 경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명에서는 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 포함하여, 상기 추출물들을 포함시켜 남성 불임 예방 또는 개선용 식품 조성물을 만들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품 (functional food), 영양 보조제 (nutritional supplement), 건강식품 (health food) 및 식품 첨가제 (food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
또한, 기능성 식품으로는 음료 (알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품 (예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품 (예: 햄, 소시지콘비이프 등), 빵류 및 면류 (예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품 (예: 버터, 치즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료 (예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 추출물을 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
본 발명은 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물로서, 정자 수, 정자의 운동성, 테스토스테론 호르몬의 함량, 성 행동, 성 기능 등을 증가시키는 효과가 있어 화학적 합성제품의 투여로 인해 발생되는 부작용과 윤리적, 사회적인 문제없이 남성불임증으로 고통받는 환자뿐만 아니라 일반인에게 남성 생식기능 개선에 도움을 줄 수 있다.
도 1 내지 3에는 후보군 한약재 추출물에 대한 NO 생성의 결과를 나타내었다.
도 4는 후보군 한약재 추출물의 ACE 저해율 결과를 나타내었다.
도 5에는 본 발명의 실시예에 따른 정자수에 대하여, 도 6에는 정자 운동성을 나타내었다.
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 마우스 혈청 내의 테스토스테론의 함량을 나타내었다.
도 8은 본 발명의 실시예에 따른 마우스 혈청 내의 cGMP 함량을 나타내었다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<실시예 1> 당귀와 삼지구엽초의 혼합물의 동물실험
당귀는 30%에탄올 추출조건을 택하고, 삼지구엽초는 90%에탄올 추출조건을 선택하여 이를 6:4의 비율로 배합하여 실험을 하였다.
ICR계 마우스 (웅성, 7 주령)는 (주) 샘타코 (경기도 오산)에서 구입 하여 1 주간 적응 시킨 뒤 실험에 사용하였다. 실험 기간 중에 물과 사료는 자유로이 섭취 시켰으며, 사육실 온도는 22 ± 2℃, 습도는 55 ± 5% 및 명암은 12 시간 주기로 자동 조절 하였다. 1 주일 적응기간이 끝난 웅성마우스를 대조군과 시료 투여군으로 나누었으며, 시료투여군은 100, 200, 400, 500 ㎎/㎏ 농도 그룹으로 나누었고, 각 군당 10 마리씩 사용하였으며 각각 1일 1회 4 주간 샘플을 경구 투여하였고 마지막 경구 투여 24 시간 후 해부를 실시하였다.
표 5
그룹 음성대조군(무처리) AE 처리군 양성대조군(홍삼)
농도(mg/kg) 0 100 200 400 500 500
해부시 분리한 부정소를 10 ㎖ DMEM 배지에서 homogenization 한 다음, 1 ㎖을 24 well에 분주하고 10 분 뒤에 200 배율의 현미경 상에서 정자 수를 측정하였다.
표 6
그룹 음성대조군 AE 처리군 양성대조군
시료 농도 0 ㎎/㎏ 100 ㎎/㎏ 200 ㎎/㎏ 400 ㎎/㎏ 500 ㎎/㎏ 홍삼 500 ㎎/㎏
정자 수 93.60± 9.34 117.30± 14.83 121.22± 13.96 136.22± 10.65 143.23± 9.25 115.96± 11.85
정자운동성(%) 56.41± 10.25 69.31± 13.26 77.64± 9.34 83.77± 8.46 84.67± 7.59 77.81± 7.76
마우스의 정자수와 운동성 모두 음성대조군 보다 당귀와 삼지구엽초 혼합물인 AE 시료를 투여한 군에서 증가하는 결과를 얻었고, AE의 농도가 증가할수록 정자수와 운동성 모두 증가하는 결과가 나와 AE가 정자 생성과 운동성에 효과가 있음을 확인하였다. 도 5에는 본 발명의 실시예에 따른 정자수에 대하여 도 6에는 정자 운동성을 나타내었다.
나아가, 마우스 혈청 내의 테스토스테론의 함량을 측정하였다. 이를 도 7에 나타내었다.
표 7
그룹 음성대조군 AE처리군 양성대조군
농도 0 ㎎/㎏ 100 ㎎/㎏ 200 ㎎/㎏ 400 ㎎/㎏ 500 ㎎/㎏ 홍삼 500 ㎎/㎏
Testosterone(ng/ml) 15.23± 1.12 15.78± 0.09 16.22 ± 1.36 24.94 ± 2.25 26.34 ± 1.98 16.03 ± 2.25
증류수 및 당귀와 삼지구엽초 혼합물인 AE를 4주간 경구 투여한 마우스군의 혈청으로부터 혈청 내 testosterone 농도를 측정한 결과 증류수를 투여한 음성 대조군과 보다 AE를 투여한 그룹에서 혈청 내 testosterone 농도가 증가되는 경향을 보였고, 양성 대조군인 홍삼 500 ppm을 투여한 군보다 AE를 500 ppm을 투여한 군의 testosterone 농도가 약 60% 더 증가하였고, AE가 testosterone의 증가에 영향을 미치는 것으로 생각된다.
마우스 혈청 내의 cGMP 함량에 대하여도 측정하여 보았다. 이를 도 8에 나타내었다.
표 8
그룹 음성대조군 시료처리군 양성대조군
농도 0 ㎎/㎏ 100 ㎎/㎏ 200 ㎎/㎏ 400 ㎎/㎏ 500 ㎎/㎏ 홍삼 500 ㎎/㎏
cGMP(pmol/ml) 3.13± 0.46 4.53± 0.29 5.11± 0.32 5.79± 0.25 6.02± 0.44 3.34± 0.46
증류수 및 당귀와 삼지구엽초 혼합물인 AE를 4주간 경구 투여한 마우스군의 혈청으로부터 혈청 내 cGMP 농도를 측정한 결과 증류수를 투여한 음성 대조군과 보다 AE를 투여한 그룹에서 혈청 내 cGMP 농도가 증가한 결과를 확인했고, 양성 대조군인 홍삼 500 ppm을 투여한 군보다 AE를 500 ppm을 투여한 군의 cGMP 농도가 약 55% 더 증가하였고 이를 통해 AE가 cGMP의 증가에 영향을 미치는 것으로 생각된다.
한편, AE의 혼합물이 NO, ACE 저해율, PDE-5의 저해율을 측정하여 보았는데, 이러한 기초적 효과도 혼합을 통해 매우 감소하는 등의 결과는 보여주지 않고 농도에 따라 효과가 일정하게 증가하는 경향을 보여주었다.
위의 결과들을 바탕으로 당귀와 삼지구엽초의 혼합물인 AE를 이용한 남성불임 개선 내지 예방에 활용할 수 있을 것으로 보인다.
<실시예 2> 식품조성물의 제조
<2-1> 음료의 제조
꿀 522 ㎎, 치옥토산아미드5 ㎎, 니코틴산아미드10 ㎎, 염산리보플라빈나트륨3 ㎎, 염산피리독신2 ㎎, 이노시톨30 ㎎, 오르트산50 ㎎, AE 추출물1.2 ㎎, 물200 ㎖, 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
<2-2> 츄잉껌의 제조
껌베이스40 %, 설탕 56.36 %, AE 추출물 0.64 %, 후르츠향1 %, 물2 %, 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
<2-3> 캔디의 제조
설탕 60 %, 물엿 39.26%, AE 추출물 0.64 %, 오렌지향 0.1 % 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.

Claims (7)

  1. 당귀의 열수 또는 에탄올 추출물과, 삼지구엽초의 에탄올 추출물을 포함하는 포함하는 남성 불임 예방 또는 개선용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 당귀의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50%이하의 농도인 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 삼지구엽초의 에탄올 추출물의 경우, 에탄올은 50% 이상의 농도인 것을 특징으로 하는 조성물
  4. 제 1항에 있어서,
    삼지구엽초의 에탄올 추출물은 90%에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    당귀의 추출물은 30%에탄올 추출물 또는 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제 1항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 포함하는 상기 청구항 1항 내지 5항중의 어느 한 항의 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 남성 불임 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101002774B1 (ko) * 2008-09-30 2010-12-21 주식회사 엔에이치한삼인 생약재를 주재로 한 환제 정력보강식품 및 그 제조방법
KR101144715B1 (ko) * 2010-01-19 2012-05-24 경성대학교 산학협력단 정자수 증가용 경구 투여제
KR20130018432A (ko) * 2011-08-12 2013-02-22 주식회사한국전통의학연구소 생약 추출물을 포함하는 남성 발기부전 예방 또는 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101002774B1 (ko) * 2008-09-30 2010-12-21 주식회사 엔에이치한삼인 생약재를 주재로 한 환제 정력보강식품 및 그 제조방법
KR101144715B1 (ko) * 2010-01-19 2012-05-24 경성대학교 산학협력단 정자수 증가용 경구 투여제
KR20130018432A (ko) * 2011-08-12 2013-02-22 주식회사한국전통의학연구소 생약 추출물을 포함하는 남성 발기부전 예방 또는 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM, JOO ET AL.: "Effect of Epimedium Korean um on the 2-Bromopropane Induced-Reproductive Damage''.", THE JOURNAL OF VETERINARY CLINICS, vol. 27, no. 5, 2010, pages 514 - 521 *
KIM, SEUNG-HYUN ET AL.: "Effects of Epimedii korean um on the Motility of Rat Sperm", THE JOURNAL OF ORIENTAL OBSTETRICS AND GYNECOLOGY, vol. 17, no. 2, 2004, pages 52 - 63 *

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