WO2014020215A1 - Procedimiento para la obtención a gran escala de inoculo miceliar de ascomicetos. - Google Patents

Procedimiento para la obtención a gran escala de inoculo miceliar de ascomicetos. Download PDF

Info

Publication number
WO2014020215A1
WO2014020215A1 PCT/ES2013/070557 ES2013070557W WO2014020215A1 WO 2014020215 A1 WO2014020215 A1 WO 2014020215A1 ES 2013070557 W ES2013070557 W ES 2013070557W WO 2014020215 A1 WO2014020215 A1 WO 2014020215A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
mycelium
addition
fungal
invention patent
terfezia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/ES2013/070557
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
María de la Consolación JIMÉNEZ AGUILAR
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universidad Politecnica de Madrid
Original Assignee
Universidad Politecnica de Madrid
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidad Politecnica de Madrid filed Critical Universidad Politecnica de Madrid
Publication of WO2014020215A1 publication Critical patent/WO2014020215A1/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Definitions

  • the present invention belongs to the technical field of Agrobiotechnology, and in particular to the large-scale production of mycelium in pure culture of higher fungal species of the Ascomycetes division. Background
  • the present invention provides a method for obtaining in vitro fungal mycelium in pure, isolated culture, both from the fruiting bodies of fungal species of interest, and from root sections of mycorrhizal plants with said fungal species.
  • the invention is an addition to the Invention Patent P200930246 for "Procedure for the Large-Scale Obtaining of Mycelial Inocula of Basidiomycetes", which comprises the steps: isolation of the fungal mycelium from Ascomycete fungal species, preferably from the genus Tuber, Terfezia, or Morchella and more preferably from fruiting bodies of fungi; inoculation of the mycelium isolated in the previous stage in a solid modified oats culture medium (MOM); mycelium purification in solid modified oatmeal culture medium (MOM); development of the purified mycelium in the previous stage in a modified Biotin-Aneurin-Folic Acid (BAF) culture medium and obtaining the purified fungal mycelium.
  • MOM solid modified oats culture medium
  • MOM mycelium purification in solid modified oatmeal culture medium
  • BAF Biotin-Aneurin-Folic Acid
  • said fungus of the genus Tuber is Tuber melanosporum
  • said fungus of the genus Terfezia is Terfezia arenaria.
  • said modified BAF liquid medium has a pH of 6.5.
  • the results of the examples show an extraordinary development and a large amount of mycelium obtained. After 5 days of culture, a growth of 1: 103 of the mycelium in pure culture was obtained, already ready for the inoculation of the plants to be mycorrhized.
  • the figures show two different perspectives of the system used for purification of the fungal mycelium.
  • Figure 1 corresponds to a Petri dish of a diameter of 9 cm (1) at the bottom of which a plate (2) of 5 cm in diameter is placed centrally, shown in broken lines.
  • a plate (2) of 5 cm in diameter is placed centrally, shown in broken lines.
  • Figure 2 shows the central space (4) that remains when, once the medium has cooled, the interposed plate is removed.
  • said central empty space is where the mycelium inoculum is located, which develops until reaching the peripheral section (3) where the means for purification is found, thus freeing from the possible presence of bacteria, which are retained in the section central plates, unable to develop due to lack of nutrients.
  • Example 1 Preparation of the mycelial inoculum of Tuber melanosporum, Terfezia arenaria and Morchella esculenta.
  • Petri dishes had previously been added modified solid oatmeal culture medium (MOM) with a composition / liter of medium of 0.5 g of Ca (N0 3 ) 2 4H 2 0; 0.2 g of PO4KH2; 0.1 g of S0 4 Mg 7H 2 0; 0.1 g of KCI; 5.0 g sucrose; 3.5 g of oatmeal powder; 0.1 g of yeast extract and 8.0 g of agar. Inoculated plates were maintained in chamber 20 and C until the mycelium developed coming to occupy the entire surface of the plate.
  • MOM modified solid oatmeal culture medium
  • the mycelium obtained in both cases was subjected to a purification process in order to eliminate the possibility of bacterial contamination, using 9 cm diameter Petri dishes in which the MOM culture medium as described above is arranged only in a peripheral circular section of 2 cm (5 cm diameter plates inserted into the 9 cm Petri dishes). In the central part of these plates, 1 x 1 cm sections of the solid MOM growth medium containing the fungal mycelium were placed. These plates were kept in chamber at 20 e C until the mycelium was developed occupying the entire surface of the plate.
  • Example 2 Culture of mycelial inoculum
  • Example 4 Obtaining mycelium of Terfezia arenaria in pure culture
  • Example 5 Obtaining mycelium of Morchella esculenta in pure culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)

Description

Procedimiento para la obtención a gran escala de inoculo miceliar de Ascomicetos.
DESCRIPCIÓN
Campo Técnico de la Invención
La presente invención pertenece al campo técnico de la Agrobiotecnología, y en concreto a la producción a gran escala de micelio en cultivo puro de especies de hongos superiores de la división Ascomicetos. Antecedentes
Hasta el momento no hay referencias acerca de la producción a gran escala de inoculo micelial de especies fúngicas pertenecientes a la división Ascomicetos; muchas de ellas sin embargo de gran importancia por ser las especies más demandadas y que alcanzan los precios más elevados en el mercado.
Existía gran interés en encontrar un procedimiento sencillo, rápido y económico de obtención de micelio en cultivo puro de las citadas especies, para su utilización en la micorrización de plantas, con certificación de origen, destinadas a la producción en vivero o plantación, así como a la recuperación de la producción micológica en zonas naturales.
Así pues, la presente solicitud de Patente de Adición pretende solventar la ausencia de la patente parental de esta otra gran división de los hongos superiores, ya que, Ascomicetos y Basidiomicetos son las dos divisiones de hongos superiores pertenecientes al subreino Neomycota del reino Fungí.
En principio, las divisiones de hongos a los que se podría aplicar un procedimiento para la obtención a gran escala de inoculo miceliar similar al recogido por la patente de invención P200930246 para los Basidiomicetos tendrían que presentar una organización miceliar similar, circunstancia que se cumple en la familia de los Ascomicetos, aunque sin los estudios experimentales este hecho no constituiría a priori una garantía de éxito. Descripción
La presente invención proporciona un procedimiento para la obtención in vitro de micelio fúngico en cultivo puro, aislado, tanto de los cuerpos fructíferos de especies fúngicas de interés, como de secciones de raicillas de plantas micorrizadas con dichas especies fúngicas.
La invención es una adición a la Patente de Invención P200930246 por "Procedimiento para la Obtención a Gran Escala de Inoculo Miceliar de Basidiomicetos", que comprende las etapas: aislamiento del micelio fúngico de especies de hongos Ascomicetos, preferiblemente de los géneros Tuber, Terfezia, o Morchella y más preferiblemente a partir de cuerpos fructíferos de los hongos; inoculación del micelio aislado en la etapa anterior en un medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM); purificación del micelio en medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM); desarrollo del micelio purificado en la etapa anterior en un medio de cultivo Biotina- Aneurina-Ácido Fólico (BAF) modificado y obtención del micelio fúngico purificado.
En una realización preferible de la invención, dicho hongo del género Tuber es Tuber melanosporum, y en otra realización preferible dicho hongo del género Terfezia es Terfezia arenaria. En una realización preferible más de la invención dicho medio líquido BAF modificado presenta un pH de 6,5.
Los resultados de los ejemplos muestran un extraordinario desarrollo y una gran cantidad de micelio obtenido. A los 5 días de cultivo se obtuvo por término medio un crecimiento de 1 :103 del micelio en cultivo puro, ya dispuesto para la inoculación de las plantas a micorrizar.
Descripción de las figuras
Las figuras muestran dos perspectivas diferentes del sistema utilizado para la purificación del micelio fúngico.
La figura 1 corresponde a una placa de Petri de un diámetro de 9 cm (1 ) en cuyo fondo se coloca de forma centrada una placa (2) de 5 cm de diámetro, que se muestra con trazo discontinuo. Como resultado de esta configuración entre ambas placas se espacio circular de 2 cm de ancho (3) en el que se deposita el medio de cultivo
La figura 2 muestra el espacio central (4) que queda cuando, una vez enfriado el medio, se retira la placa interpuesta. En dicho espacio vacío central es donde se sitúa el inoculo del micelio, que se desarrolla hasta alcanzar la sección periférica (3) donde se encuentra el medio para la purificación, liberándose así de la posible presencia de bacterias, las cuales quedan retenidas en la sección central de las placas, al no poder desarrollarse por ausencia de nutrientes.
Ejemplos
Con la intención de mostrar la presente invención de un modo ilustrativo aunque en ningún modo limitante, se aportan los siguientes ejemplos. Ejemplo 1 : Preparación del inoculo miceliar de Tuber melanosporum, Terfezia arenaria y Morchella esculenta.
Se aislaron en cámara de flujo laminar pequeñas secciones de la parte más interna del himenio del píleo de carpóforos maduros de cada especie por separado, a los que se les había eliminado previamente la pellis. Seguidamente, se inocularon dichas secciones en condiciones de máxima asepsia en cámara de flujo laminar en placas Petri de plástico de 5 cm de diámetro, previamente esterilizadas en autoclave. A estas placas Petri se les había adicionado con anterioridad medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM) con composición/litro de medio de 0,5 g de Ca(N03)2 4H20; 0,2 g de PO4KH2 ; 0,1 g de S04Mg 7H20; 0,1 g de KCI; 5,0 g de sacarosa; 3,5 g de avena en polvo; 0,1 g de extracto de levadura y 8,0 g de agar. Las placas inoculadas se mantuvieron en cámara a 20eC hasta que el micelio se desarrolló llegando a ocupar toda la superficie de la placa. Posteriormente, el micelio obtenido en ambos casos se sometió a un proceso de purificación con objeto de eliminar la posibilidad de existencia de contaminación bacteriana, utilizando para ello placas Petri de 9 cm de diámetro en las que el medio de cultivo MOM tal cual anteriormente descrito se dispuso solamente en una sección circular periférica de 2 cm (placas de 5 cm de diámetro introducidas dentro de las placas Petri de 9 cm). En la parte central de estas placas se colocaron secciones de 1 x1 cm del medio sólido de crecimiento MOM conteniendo el micelio fúngico. Estas placas se mantuvieron en cámara a 20eC hasta que el micelio se desarrolló ocupando toda la superficie de la placa. Ejemplo 2: Cultivo del inoculo miceliar
Una vez purificado el micelio de cada especie según el Ejemplo 1 se transfirió una pequeña porción para su desarrollo a gran escala a medio de cultivo líquido BAF modificado. En todos los experimentos se partió de un inoculo micelial de tamaño similar con un peso medio de unos 10 mg, que se incubó en matraces erlenmeyer conteniendo medio de cultivo líquido BAF modificado con una composición/litro de medio: 0,1 g de CI2Ca; 0,5 g de P04KH2; 0,5 g de S04Mg 7H20; 0,005 g de S04Mn; 0,001 g de S04Zn; 0,01 g de CI3Fe 7H20; 2,0 g de peptona; 0,0005 g de tiamina; 0,00001 g de biotina; 0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa, y 0,2 g de extracto de levadura; el cultivo se mantuvo bajo condiciones controladas: 25 eC, oscuridad, pH 6,5 y agitación constante a 120 rpm durante todos los días del cultivo ininterrumpidamente. Ejemplo 3: Obtención de micelio de Tuber melanosporum en cultivo puro
Los resultados del crecimiento miceliar en medio nutritivo líquido BAF de la especie Tuber melanosporum durante catorce días sin nuevos aportes de medio nutritivo, se muestran en la tabla I. El crecimiento se mantiene hasta el día 14 en que, a causa del agotamiento de los nutrientes del medio de cultivo, se observa un cierto descenso del mismo, que evidencia el inicio de procesos de lisis celular. Por ello, después de estos 14 días se requirió un nuevo aporte de medio nutritivo para la reanudación del crecimiento del micelio.
Tabla I
Figure imgf000005_0001
De estos datos se deduce que a los cinco días el crecimiento del micelio en cultivo puro fue de 1 :103, lo que se corresponde con una producción a gran escala.
Ejemplo 4: Obtención de micelio de Terfezia arenaria en cultivo puro
El crecimiento miceliar en medio nutritivo líquido BAF de la especie Terfezia arenaria durante catorce días sin nuevos aportes de medio nutritivo, se muestra en la tabla II. En este ejemplo también se mantiene el crecimiento constante hasta el día 14 en que se observa un cierto descenso del mismo, que evidencia el inicio de los procesos de lisis celular. A partir de los 14 días se requirió un nuevo aporte de medio nutritivo para la reanudación del crecimiento del micelio.
Tabla II
Figure imgf000006_0001
Al igual que en la especie anterior, de los datos expuestos en la tabla se deduce que a los cinco días el crecimiento fue de 1 :7x102, lo que indica también un extraordinario desarrollo, si bien, un poco menor que en el ejemplo anterior.
Ejemplo 5: Obtención de micelio de Morchella esculenta en cultivo puro
El crecimiento miceliar en medio nutritivo líquido BAF de la especie Morchella esculenta. El crecimiento se mantiene, asimismo, hasta el día 14 en que se observa un cierto descenso del mismo, que evidencia el inicio de procesos de lisis celular. Después de estos 14 días se requirió, igualmente, un nuevo aporte de medio nutritivo para la reanudación del crecimiento del micelio.
Tabla III
Figure imgf000006_0002
De los datos expuestos en la tabla se deduce que a los cinco días el crecimiento fue de 1 :103, lo que se corresponde igualmente con una producción a gran escala similar a la del Ejemplo 3.

Claims

REIVINDICACIONES
Adición a la Patente de Invención P200930246 por "Procedimiento para la Obtención a Gran Escala de Inoculo Miceliar de Basidiomicetos", que comprende las etapas:
a) aislamiento del micelio fúngico de especies de hongos ascomicetos, b) inoculación del micelio aislado en la etapa a) en un medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM),
c) purificación del micelio en medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM),
d) desarrollo del micelio purificado en la etapa c) en un medio de cultivo Biotina-Aneurina-Ácido Fólico (BAF) modificado, y
e) obtención del micelio fúngico purificado.
Adición a la Patente de Invención P200930246 según la reivindicación 1 , caracterizada por que dicho aislamiento del micelio fúngico de la etapa a) se realiza a partir de cuerpos fructíferos de hongos.
Adición a la Patente de Invención P200930246 según la reivindicación 2, caracterizado por que el hongo de ascomicetos a partir del cual se obtiene el micelio es de los géneros Tuber, Terfezia, o Morchella.
Adición a la Patente de Invención P200930246 según la reivindicación 3, caracterizado por que dicho hongo del género Tuber es Tuber melanosporum. Adición a la Patente de Invención P200930246 según la reivindicación 3, caracterizado por que dicho hongo del género Terfezia es Terfezia arenaria. Adición a la Patente de Invención P200930246 según la reivindicación 1 , caracterizado por que dicho medio líquido BAF modificado de la etapa d) presenta un pH de 6,5.
PCT/ES2013/070557 2012-07-31 2013-07-30 Procedimiento para la obtención a gran escala de inoculo miceliar de ascomicetos. Ceased WO2014020215A1 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201231240A ES2387666B2 (es) 2012-07-31 2012-07-31 Procedimiento para la obtención a gran escala de inóculo miceliar de basidiomicetos mejorado
ESP201231240 2012-07-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014020215A1 true WO2014020215A1 (es) 2014-02-06

Family

ID=46800385

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2013/070557 Ceased WO2014020215A1 (es) 2012-07-31 2013-07-30 Procedimiento para la obtención a gran escala de inoculo miceliar de ascomicetos.

Country Status (2)

Country Link
ES (1) ES2387666B2 (es)
WO (1) WO2014020215A1 (es)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020146650A1 (en) * 2019-01-09 2020-07-16 Mycotechnology, Inc. Food and beverage products comprising ascomycetes
EP3811773A1 (en) 2019-10-22 2021-04-28 Universidade de Évora Culture media and process for improved isolation and maintenance of terfezia spp. mycelium cultures
CN113774091A (zh) * 2021-09-23 2021-12-10 山东安为先生物科技有限公司 一种稳定的水溶性纳米硒及其制备方法
US11297861B2 (en) 2020-06-25 2022-04-12 Mycotechnology, Inc. Sweet protein from truffle

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108522139B (zh) * 2018-04-25 2021-01-08 赵金亮 一种暖棚羊肚菌高效种植方法
EP4009778A4 (en) * 2019-08-09 2023-09-27 Carolina Truffiéres LLC METHOD AND COMPOSITIONS FOR PRODUCING ECTOMYCORRHIZA MYcelium AND METHOD FOR USE THEREOF

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2332031A1 (es) * 2009-06-02 2010-01-22 Universidad Politecnica De Madrid Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2332031A1 (es) * 2009-06-02 2010-01-22 Universidad Politecnica De Madrid Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos.

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KAMAL, S. ET AL.: "Effect of nutrient sources and plant hormones on mycelial morphology of the black perigord truffle Tuber melanosporum.", PROCEEDINGS OF THE 7TH INTERNATIONAL CONFERENCE ON MUSHROOM BIOLOGY AND MUSHROOM PRODUCTS., 2011, pages 509 - 515 *
KIBAR, B. ET AL.: "Nutritional and environmental requirements for vegetative growth of edible ectomycorrhizal mushroom Tricholoma terreum.", ZEMDIRBYSTE=AGRICULTURE., vol. 98, no. 4., 2011, pages 409 - 414 *
NAVARRO-RODENAS, A. ET AL.: "Effect of water stress on in vitro mycelium cultures of two mycorrhizal desert truffles.", MYCORRHIZA., vol. 21, no. 4., May 2011 (2011-05-01), pages 247 - 253 *
VAZQUEZ-GARCIA, A. ET AL.: "Influencia del pH en el crecimiento de quince cepas de hongos ectomicorrizogenos.", ANALES DEL INSTITUTO DE BIOLOGIA, vol. 73, no. 1., 2002, pages 1 - 15 *
ZETTLER, L.W. ET AL.: "Conservation-driven propagation of an epiphytic orchid (Epidendrum uocturuum) with a mycorrhizal fungus.", HORTSCIENCE., vol. 2, no. 1, February 2007 (2007-02-01), pages 135 - 139 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020146650A1 (en) * 2019-01-09 2020-07-16 Mycotechnology, Inc. Food and beverage products comprising ascomycetes
EP3811773A1 (en) 2019-10-22 2021-04-28 Universidade de Évora Culture media and process for improved isolation and maintenance of terfezia spp. mycelium cultures
US11297861B2 (en) 2020-06-25 2022-04-12 Mycotechnology, Inc. Sweet protein from truffle
US12016356B2 (en) 2020-06-25 2024-06-25 Mycotecnology, Inc. Sweet protein from truffle
US12171249B2 (en) 2020-06-25 2024-12-24 Mycotechnology, Inc. Sweet protein from truffle
CN113774091A (zh) * 2021-09-23 2021-12-10 山东安为先生物科技有限公司 一种稳定的水溶性纳米硒及其制备方法
CN113774091B (zh) * 2021-09-23 2023-08-18 山东安为先生物科技有限公司 一种稳定的水溶性纳米硒及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
ES2387666A1 (es) 2012-09-27
ES2387666B2 (es) 2013-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2387666B2 (es) Procedimiento para la obtención a gran escala de inóculo miceliar de basidiomicetos mejorado
CN1273004C (zh) 一种生产猴头菇的方法及其专用培养基
WO2015180520A1 (zh) 一种高产虫草酸蛹虫草的培养方法
RU2012154695A (ru) Система и способ получения летучих органических соединений за счет грибов
CN1232632C (zh) 蝉拟青霉新菌株apc－20及其人工培养发酵方法
CN108203695B (zh) 一株杜鹃花类菌根真菌功能菌株及其应用
CN105850535B (zh) 一种提高蒺藜苜蓿抗盐害能力的方法
CN105219652B (zh) 一种野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法
CN107858292B (zh) 一种牛樟芝菌株及其保藏方法
ES2332031B2 (es) Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos.
CN103911297B (zh) 一种圆红冬孢酵母菌y0及其应用
CN103416222B (zh) 采用菌丝摇瓶培养催生紫丁香蘑孢子及液体深层发酵工艺
CN103667170B (zh) 一种制备中国被毛孢成熟分生孢子的方法
CN118272236A (zh) 一株用于防治黄芪根腐病的麻孢壳属深色有隔内生真菌Gb及其应用
CN105274005B (zh) 一株产紫杉醇的烟曲霉真菌tms-26
CN104381010B (zh) 冬虫夏草子实体的培养方法及其组合物和应用
CN111887099B (zh) 一种绿木霉菌及采用木霉诱导快速培育茯苓子实体的方法
CN105018410B (zh) 一种诱导三孢布拉氏霉老化菌株快速大量产孢的方法
CN104312920B (zh) 一种姬松茸菌种液氮保藏方法
Antropova et al. Report of Quambalaria cyanescens in association with the birch (Betula pendula)
CN109355221B (zh) 一种用于高密度发酵制备霍乱弧菌菌影的培养基和方法
KR20070109598A (ko) 버섯 재배용 액체 종균의 배양 방법
CN100412186C (zh) 木蹄层孔菌及液体深层发酵制备木蹄层孔菌菌体的方法
CN207678485U (zh) 一种蝙蝠蛾幼虫接种体菌源的双相膜式反应器
CN112080436A (zh) 一种高镉抗性大型真菌菌株及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13825708

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 13825708

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1