WO2013175038A1 - Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas - Google Patents

Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas Download PDF

Info

Publication number
WO2013175038A1
WO2013175038A1 PCT/ES2013/070309 ES2013070309W WO2013175038A1 WO 2013175038 A1 WO2013175038 A1 WO 2013175038A1 ES 2013070309 W ES2013070309 W ES 2013070309W WO 2013175038 A1 WO2013175038 A1 WO 2013175038A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
strain
composition
combination
prevention
treatment
Prior art date
Application number
PCT/ES2013/070309
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Yolanda Sanz Herranz
Paola GAUFFIN CANO
Yolanda Arlette SANTACRUZ
Ángela MOYA PÉREZ
Moisés LAPARRA LLOPIS
Original Assignee
Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) filed Critical Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic)
Priority to ES13793926T priority Critical patent/ES2764785T3/es
Priority to EP13793926.0A priority patent/EP2889371B1/en
Priority to US14/403,930 priority patent/US9636366B2/en
Priority to PL13793926T priority patent/PL2889371T3/pl
Priority to CA2913391A priority patent/CA2913391C/en
Publication of WO2013175038A1 publication Critical patent/WO2013175038A1/es
Priority to US15/458,677 priority patent/US20170189456A1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/152Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations containing additives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52Adding ingredients
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04Anorexiants; Antiobesity agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06Antihyperlipidemics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12Antihypertensives
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • strain CECT 7771 for the prevention and / or treatment of alterations such as overweight, obesity, hepatic steatosis or fatty liver , dyslipidemia and, in particular, hypercholesterolemia and / or hypertriglyceridemia; hyperglycemia, insulin resistance and diabetes, preferably type 2 diabetes and gestational diabetes; metabolic syndrome, hypertension, cardiovascular diseases, immune system dysfunction associated or not with these pathologies, preferably inflammation in peripheral tissues (adipose and pancreas) and reduction of defenses against infections, and imbalance in the composition of the intestinal microbiota.
  • alterations such as overweight, obesity, hepatic steatosis or fatty liver , dyslipidemia and, in particular, hypercholesterolemia and / or hypertriglyceridemia; hyperglycemia, insulin resistance and diabetes, preferably type 2 diabetes and gestational diabetes; metabolic syndrome, hypertension, cardiovascular diseases, immune system dysfunction associated or not with these pathologies, preferably inflammation in peripheral tissues (adipose and pan
  • Obesity occurs as a result of a positive and prolonged imbalance between intake and energy expenditure, which leads to excessive weight gain and body fat.
  • the energy balance involved peptides and hormones synthesized by the neuroendocrine system that allow communication between various tissues and peripheral organs and, the central nervous system that, globally, contribute to regulate body weight.
  • the signals emanating from adipose tissue (leptin) and pancreas (insulin) are essential (Konturek et al., 2004. J Physiol Pharmacol., 55: 137-154). Insulin is the most important hormone in the regulation of the proper functioning of adipose tissue and the accumulation of triglycerides in it, and in the uptake of glucose.
  • insulin signaling is also essential for the control of energy balance and glucose homeostasis, and is dependent on its interaction with other regulatory factors, such as leptin, which act together as anorexigenic factors, reducing intake (Gerozissis K., 2004. Eur J Pharmacol., 490 (1-3): 59-70).
  • leptin is a hormone / adipokine synthesized primarily by adipose tissue and, to a lesser extent, by other tissues such as the stomach, and its secretion is stimulated by insulin.
  • the problem persists of finding the specific components of the commensal intestinal microbiota that can be used to prevent and / or treat diseases such as overweight, obesity, and metabolic pathologies associated or not with obesity and related to metabolic alterations.
  • diseases such as overweight, obesity, and metabolic pathologies associated or not with obesity and related to metabolic alterations.
  • of lipids and glucose such as dyslipidemia, hepatic steatosis, metabolic syndrome, insulin resistance, type 2 diabetes, gestational diabetes, hypertension and cardiovascular diseases, in a more suitable way acting jointly on the malfunction of the immune system and metabolism, responsible for chronic pathologies.
  • the strain CECT 7771 belonging to the species B. uniformis has comparatively more favorable immunological properties than other strains of the same species, and other species of the genus Bacteroides.
  • the CECT 7771 strain induces significantly lower production of the pro-inflammatory cytokine TNF- ⁇ in macrophages than the other strains of the same genus that are part of the human intestinal microbiota, except B. dorei SS1 and B. thetaiotaomicrom SAC4 with which differences do not become significant (Example 2; Table 1).
  • the CECT 7771 strain also induces a greater synthesis of the anti-inflammatory cytokine IL-10 than the other strains evaluated (Example 2; Table 1).
  • Other strains of the same species ⁇ .
  • strain CECT 7771 reduces the accumulation of triglycerides and cholesterol and improves insulin sensitivity and glucose utilization compared to other species of the genus Bacteroides and with other strains of the species B. uniformis (Example 2, FIG 1). All these results demonstrate the greater suitability of the strain object of the patent to control inflammation and metabolism of lipids and glucose than other species and strains of the genus Bacteroides.
  • Studies carried out by our group also indicate that breastfeeding favors an increase in the prevalence of the species object of the patent ( ⁇ . Uniformis) in the microbiota of children in the early stages of life but not in those subjected to artificial lactation ( Sánchez et al. 2011. Appl Environ Microbiol. 201 1; 77 (15): 5316-23.) And, in turn, breastfeeding protects against the development of obesity and metabolic disorders.
  • strain B. uniformis CECT 7771 causes a reduction in the size of adipocytes in obese subjects (Example 3, FIG. 3).
  • the administration of the CECT 7771 strain to obese animals results in an increase in adipocytes of small size ( ⁇ 2000 ⁇ 2 ) at the expense of reducing the larger ones in epididymal tissue, while in obese animals a those who have not been administered the strain there is an increase in all large adipocytes (> 2000-7000 ⁇ 2 ) (Example 3, FIG. 3). Histological sections of adipose tissue also demonstrate these effects (Example 3, FIG 3).
  • the strain object of the invention reduces the postprandial glycemic response after an oral dose of glucose, which also indicates that it improves glucose metabolism and insulin sensitivity (Example 3, Table 2).
  • the strain object of the invention also reduces the concentration of adipokine leptin in obese subjects, indicating that it improves the metabolic function of this adipokine, which in turn can contribute to improving glucose metabolism and insulin production or sensitivity (Example 4, Table 3).
  • strain CECT 7771 can be effective in preventing and / or treating related glucose metabolism disorders that can lead to the development of insulin resistance and ultimately diabetes.
  • the strain CECT 7771 is capable of reducing the synthesis of pro-inflammatory proteins in peripheral tissues, in normal weight subjects treated with said strain with respect to those not treated with it.
  • the strain object of the invention reduces the concentration of the inflammatory cytokine TNF- ⁇ in the pancreas and can improve the function of this organ in the regulation of glucose metabolism (Example 4, Table 3).
  • the strain object of the invention also reduces the concentration of adipokine leptin, which can also favor inflammation in the context of overweight and obesity (Example 4, Table 3).
  • coccoides of the genus Bifidobacterium and increase of the family Enterobaceriaceae
  • attenuating the inflammatory effect they cause these alterations and that has been related to weight gain, insulin resistance, metabolic endotoxemia, hepatic steatosis and impaired intestinal barrier function (Example 4 and Table 4 and Example 3 and FIG. 7).
  • the strain of the invention also increases the number of Bacteroides spp. and Bifidobacterium spp. in normal weight subjects and can be used to restore these microbial populations in the intestine, which may be altered due to conditions other than obesity and overweight.
  • strain B. uniformis CECT 7771 is stable under conditions of gastrointestinal stress (acidic pH and high concentration of bile). Its viability after incubation under gastric conditions (pepsin 3g / pH 3 and 2.5) during the mean time of gastric emptying (2 h) is 50-70% and after incubation in the presence of bile salts (0.5 and 1%) It remains above 90%. It is also resistant to the conditions of technological conservation processes (freezing, lyophilization, etc.), and to food processing conditions (refrigeration, lyophilization, fermentation, etc.). All these properties guarantee its viability and persistence and effectiveness in the intestine.
  • strain B. uniformis CECT 7771 Another aspect of the present invention relates to a strain derived from strain B. uniformis CECT 7771, wherein said strain maintains or improves the capabilities described throughout the present invention.
  • the derived microorganism can be produced naturally or intentionally, by methods of mutagenesis known in the state of the art such as, but not limited to, the growth of the original microorganism in the presence of mutagenic or stress-causing agents, or by engineering genetics aimed at the modification of specific genes.
  • the strain derived from strain B. uniformis CECT 7771 is a genetically modified mutant. The terms mutant strain or derived strain can be used indiscriminately.
  • phylogenetic groups genera or species of prokaryotes of intestinal, food or environmental origin, such as but not limited to Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Methanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacteres, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotribacteriaceae, Staphylobacteriaceae, Staphylobacteriaceae, Staphylobacteriaceae, Staphylobacteriaceae, Staphylobacteriaceae Eubacterium, Akkerman
  • Said additional microorganism can be a strain of the same species or of a different species or taxonomic group of microorganisms corresponding to the strain of the invention.
  • the cells comprising the composition may be non-viable or viable and be at any stage of the state of development or growth (latent, exponential, stationary, etc.), regardless of the morphology present.
  • said additional microorganism comprises at least one intestinal bacterium or a lactic bacterium.
  • composition according to any of those defined above may also comprise at least one bioactive component (active substance, active ingredient or therapeutic agent), such as other components of food, plant products and / or drugs.
  • bioactive component active substance, active ingredient or therapeutic agent
  • bioactive component refers to a compound with biological activity in the scope of the patent that can improve or complement the activity of a strain of the species B. uniformis and, preferably, that of the strain object of the invention CECT 7771, including food ingredients or components (for example and without limitation: polyunsaturated fatty acids, conjugated linoleic acid, prebiotics, fiber, Guar gum, glucomannan, chitosan, copper picolinate, calcium, etc.), plants, plant extracts or components (for example and without limiting polyphenols, ephedrine or extracts of Ephedra spp., green tea [Camellia sinensis], bitter orange [Citrus aurantium]) and drugs (for example and without limiting statins, orlistat, sibutramine, liraglutide etc.)
  • food ingredients or components for example and without limitation: polyunsaturated fatty acids, conjugated linoleic acid, prebiotics, fiber, Guar gum, glucomannan,
  • the composition as defined above is a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition is a set of components that is formed at least by the strain of the invention in any concentration; or at least by the cellular components, metabolites, secreted molecules of the strain of the invention or any of its combinations, which has at least one application in the improvement of the physical or physiological or psychological well-being of a subject, which implies an improvement of the state general health or reduction of disease risk.
  • Said pharmaceutical composition may be a medicine.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient.
  • excipient refers to a substance that aids the absorption of any of the components of the composition of the present invention, stabilizes said components or aids in the preparation of the pharmaceutical composition in the sense of giving it consistency or providing flavors that Make it more enjoyable.
  • the excipients could have the function of keeping the components together such as starches, sugars or cellulose, sweetening function, dye function, drug protection function such as to isolate it from air and / or moisture, function filling a tablet, capsule or any other form of presentation such as dibasic calcium phosphate, a disintegrating function to facilitate the dissolution of the components and their absorption in the intestine, without excluding other types of excipients not mentioned in this paragraph.
  • the carrier is a substance that is used in the medicament to dilute any of the components of the pharmaceutical composition of the present invention to a certain volume or weight; or that even without diluting said components it is capable of allowing a better dosage and administration or giving consistency and form to the medicine.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is the diluent.
  • the excipient and the vehicle must be pharmacologically acceptable, that is, the excipient and the vehicle are allowed and evaluated so as not to cause damage to the organisms to which it is administered.
  • the term "therapeutically effective amount” refers to that amount of the component of the pharmaceutical composition that when administered to a mammal, preferably a human, is sufficient to produce prevention and / or treatment. , as defined below, of a disease or pathological condition of interest in the mammal, preferably a human.
  • Said component of the pharmaceutical composition refers to the strain of the invention; or to cellular components, metabolites, secreted molecules; or a combination thereof, and which may optionally be comprised in said composition in combination with an additional bioactive component, and which contribute to the therapeutic effect of the pharmaceutical composition.
  • the therapeutically effective amount will vary, for example, according to the activity of the strain of the invention; of the additional microorganism or additional microorganisms comprising the composition of the invention; of cellular components, metabolites, secreted molecules or any combination thereof, in any form of presentation; the therapeutically effective amount will also vary according to the metabolic stability and duration of action of the compound; the age, body weight, general state of health, sex and diet of the patient; the mode and time of administration; the rate of excretion, the combination of drugs; the severity of the disorder or the particular pathological condition; and the subject who undergoes therapy, but can be determined by a specialist in the art according to their own knowledge and that description.
  • dietary supplement synonymous with any of the terms “dietary supplement”, “nutritional supplement”, “food supplement” or “food supplement” is a component or components intended to supplement food, and may be a food.
  • Some examples of dietary supplements are, but are not limited to, vitamins, minerals, botanicals, amino acids and components of foods such as enzymes and glandular extracts. They are not presented as substitutes for a conventional food or as a single component of a food or food diet, but as a complement to the diet.
  • nutraceutical refers to substances isolated from a food and used in a dosage form that have a beneficial effect on health. Said nutraceutical can be a supplement.
  • probiotic refers to microorganisms that when supplied in adequate amounts exert beneficial effects on the health of the host organism.
  • the term “symbiotic” as used in the present invention refers to those foods that contain a mixture of prebiotics and probiotics. As a general rule, they contain a prebiotic component that favors the growth and / or metabolic activity and, in short, the effect of the probiotic with which it is combined, as for example and without limitation it can be the association of fructooligosaccharides or galactooligosaccharides to an intestinal bacteria such as example a strain of the species B. uniformis.
  • compositions described in the invention wherein said composition has a strain concentration of between 10 3 and 10 14 colony forming units (ufe) per gram or milliliter of final composition .
  • concentration of the strain is that therapeutically effective or nutritiously effective concentration, as appropriate.
  • the nutritional composition and the pharmaceutical composition can be formulated, but not limited, in solid, semi-solid, liquid or gaseous forms, such as tablet, capsule, microcapsule, powder, granule, ointment, solution, paste, suppository, injection, inhalant, gel , microsphere or spray.
  • compositions any of the compositions, general composition, pharmaceutical composition or nutritional composition, defined in the preceding paragraphs by means of the term “composition of the present invention” or “composition of the invention”.
  • Another aspect of the invention refers to a strain of the species Bacteroides uniformis for different uses other than the treatment and / or prevention of overweight or obesity.
  • the present invention demonstrates how a strain of the species Bacteroides uniformis (such as strain B. uniformis CECT 7771) can be used to treat and / or prevent other alterations of lipid and glucose metabolism, not necessarily linked to overweight or obesity, such as adipocyte hypertrophy; hepatic steatosis or fatty liver; dyslipidemia (eg hypertriglyceridemia and / or hypercholesterolemia), hypertension, cardiovascular pathologies; hyperglycemia; insulin resistance and / or diabetes (eg gestational diabetes or type 2 diabetes Mellitus); or the metabolic syndrome.
  • Bacteroides uniformis strain can be used to improve the function of the immune system and, for example, reduce inflammation in peripheral tissues (adipose and pancreas) that causes the chronic metabolic alterations described above, as well as to increase defenses against infections and the response to vaccination.
  • Bacteroides strain Uniformis can be used to restore the composition of the intestinal microbiota and avoid pathologies related to its alteration, for example, by reducing the concentration of enterobacteria in the intestinal content.
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above, is used to reduce the size of adipocytes in a subject, and therefore, also in the treatment and / or prevention of adipocyte hypertrophy.
  • a strain of Bacteroides uniformis is used to reduce the accumulation of fat in hepatocytes, and therefore also in the treatment and / or prevention of hepatic steatosis or fatty liver.
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above, is used to reduce the levels of triglycerides and blood cholesterol, and therefore, also in the treatment and / or prevention of dyslipidemia, more preferably of a dyslipidemia selected from hypertriglyceridemia and / or hypercholesterolemia .
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above, is used in the treatment and / or prevention of cardiovascular disease.
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above, is used to reduce the concentration of blood glucose, and therefore it can be used in the treatment and / or prevention of hyperglycemia and / or a pathology associated with higher levels of glucose concentration. in blood
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the foregoing, is used in the treatment and / or prevention of insulin resistance and / or diabetes, and more preferably diabetes is selected from gestational diabetes or type 2 diabetes Mellitus.
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above, is used in the treatment and / or prevention of hypertension.
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above, is used to improve the function of a subject's immune system, with respect to an untreated control.
  • a strain of Bacteroides uniformis can reduce inflammation in peripheral tissues that is the cause of the chronic alterations of the metabolism object of the patent and, among them, dyslipidemia, hepatic steatosis, adipocyte hypertrophy, insulin resistance and diabetes, hypertension, metabolic syndrome and cardiovascular pathologies.
  • another improvement of the immune system provided by a strain of Bacteroides uniformis is its ability to stimulate the responses of immunocompetent cells (macrophages, dendritic cells and T lymphocytes) and, thus, the defenses against pathogens and antigens.
  • a strain of Bacteroides uniformis is used to reduce inflammation of peripheral tissues, preferably adipose and / or pancreatic tissue.
  • a strain of Bacteroides uniformis; or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the above is used in the treatment and / or prevention of an infection and / or the improvement of the response to vaccination.
  • the examples show how a strain of B. uniformis improves the function of the innate and adaptive immune system against pathogens and antigens, and therefore improves the response to infections of an individual to whom it is administered.
  • a strain of Bacteroides uniformis or one of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or a combination thereof; or a composition comprising any of the foregoing, for use in the treatment and / or prevention of various diseases or metabolic disorders, to improve the function of the immune system or to reduce the concentration of enterobacteria
  • a method of treatment and / or prevention of said diseases or alterations or a method to improve the function of the immune system, or a method to reduce the concentration of enterobacteria, which comprises the administration to a subject of a therapeutically effective amount of said strain.
  • the present invention also protects the use of said strain; or of its cellular components, metabolites, secreted molecules, or the combination thereof, for the manufacture of a nutritional composition, of a pharmaceutical composition or of a medicament, for the treatment and / or prevention of said diseases or metabolic alterations, for improve the function of the immune system or to reduce the concentration of enterobacteria.
  • treatment refers to combating the effects caused by a disease or pathological condition of interest in a subject (preferably mammal, and more preferably a human) that includes:
  • the term "obesity" refers to a pathology characterized in that the subject has a BMI is equal to or greater than 30. Obesity is classified at different levels, considering that subjects with BMI> 40 they suffer from morbid obesity. Other parameters used to determine if an individual suffers from central obesity are the absolute waist circumference (the subject suffers from obesity when it is> 102 cm in men [central obesity] and> 88 cm in women) or the waist-hip index (the subject suffers obesity when it is> 0.9 for men and> 0.85 for women). An alternative way to determine obesity is to measure the percentage of body fat (the subject is obese when he has approximately> 25% body fat in a man and approximately> 30% body fat in women).
  • a strain of the invention in an example of use in medicine, is used in the treatment and / or prevention of overweight or obesity and, preferably, when caused by diet.
  • administration of strain B. uniformis CECT 7771 to animals with diet-induced obesity results in a reduction in the weight gain (Example 3, Table 2.). Globally, this means that the strain can be used to treat or prevent overweight or obesity.
  • strain B. uniformis CECT 7771 produces a reduction in weight gain (Example 3, Table 2.)
  • said strain can also be used in cosmetic applications to reduce weight gain.
  • a strain of the invention; or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention for reducing weight gain is further equivalent to a method for reducing weight gain (both for therapeutic and aesthetic purposes) comprising administration to a subject of said strain, said components, metabolites or secreted molecules, or said composition.
  • alterations in the metabolism of lipids and glucose, in which the immune system may also be affected such as but not limited to; Type 2 diabetes and gestational diabetes, dyslipidemia (preferably hyperlipidemia and hypercholesterolemia), cardiovascular pathologies, hypertension, fatty liver (preferably non-alcoholic fatty liver or hepatic steatosis, non-alcoholic steatohepatitis, cirrhosis or hepatitis), metabolic syndrome, cancer, infections, etc. they can occur both in subjects with normal weight, as in subjects with overweight or obesity.
  • dyslipidemia preferably hyperlipidemia and hypercholesterolemia
  • cardiovascular pathologies hypertension
  • fatty liver preferably non-alcoholic fatty liver or hepatic steatosis, non-alcoholic steatohepatitis, cirrhosis or hepatitis
  • metabolic syndrome cancer, infections, etc. they can occur both in subjects with normal weight, as in subjects with overweight or obesity.
  • a strain of the invention in another example of use in medicine, is used in the treatment and / or prevention of hepatic steatosis or fatty liver.
  • administration of strain B. uniformis CECT 7771 to both obesity model animals and control animals (non-obese) results in a reduction in the number of hepatocytes with high fat accumulation (Example 3, FIG 2.).
  • the strain of the invention reduces the accumulation of fat in the liver.
  • the present invention also relates to the prevention and / or treatment of pathologies related to the aggravation of hepatic steatosis, such as, but not limited to non-alcoholic hepatitis, steatohepatitis, fibrosis, cirrhosis, terminal liver disease or liver carcinoma.
  • pathologies related to the aggravation of hepatic steatosis such as, but not limited to non-alcoholic hepatitis, steatohepatitis, fibrosis, cirrhosis, terminal liver disease or liver carcinoma.
  • a strain of the species B. uniformis or the strain of the invention can be used for these or other pathologies that lead to accumulation of lipids in the liver and inflammation, which may be associated with obesity or overweight or be a consequence of other disorders.
  • nutritional disorders for example, but not limited to malabsorption, proteocaloric malnutrition or parenteral nutrition
  • hereditary or non-inherited metabolic disorders for example but not limited to type 2 diabetes mellitus, abetalipoproteinemia, or systemic carnitine deficiency
  • diseases caused by exposure to drugs for example but not limited to corticosteroids or ibuprofen
  • toxic for example but not limited to alcohol
  • steatosis affects approximately 50% of patients with type 2 diabetes Mellitus.
  • a strain of the invention; the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; a composition of the invention is used for the prevention and / or treatment of a disease caused by alterations in blood lipid concentrations (for example dyslipidemia) and, preferably, triglycerides and / or cholesterol, therefore it is used to normalize Your concentration in blood.
  • the medicament or nutritional composition is used for the treatment of dyslipidemia (synonymous with dyslipidemia).
  • the dyslipidemia is hypertriglyceridemia and / or hypercholesterolemia.
  • Dyslipidemia is a pathological condition whose only common element is an alteration of lipid metabolism, with the consequent alteration of blood lipid and lipoprotein concentrations.
  • Dyslipidemia may or may not be associated with obesity and the intake of high-fat diets and increased absorption. In turn, these alterations are related to an increased risk of diseases. cardiovascular, hypertension and diabetes, among other pathologies.
  • the strain of the invention reduces the absorption of lipids and the levels of triglycerides and cholesterol in the blood, proving to be effective for the applications described, as demonstrated in Example 3, Table 2.
  • the strain of the invention is used to reduce the amount of lipids absorbed from the diet, with respect to an untreated control.
  • the strain of the invention reduces the number of fat micelles that form chylomicrons in intestinal enterocytes, that is, reduces the amount of dietary fat that is absorbed by more than 80% ( Example 3; FIG. 4).
  • Chylomicrons are the way in which dietary lipids are packaged and transported from the intestine to lymph and blood to be used by peripheral tissues and, by this mechanism, the strain administered would limit its absorption and accumulation in the body.
  • the absorption of fat in the diet may be the cause of other pathologies without causing obesity, such as and without limiting the scope of the invention, atherosclerosis, which is characterized by a thickening of the intimate tunic of an artery with plaques where fat is embedded, and dyslipidemia, characterized by alterations in plasma concentrations of lipids (triglycerides and / or cholesterol and associated lipoproteins); pathologies associated with increased cardiovascular risk; or other alterations derived from the relationship of lipid metabolism with that of glucose (for example, but not limited to insulin resistance or diabetes).
  • atherosclerosis which is characterized by a thickening of the intimate tunic of an artery with plaques where fat is embedded
  • dyslipidemia characterized by alterations in plasma concentrations of lipids (triglycerides and / or cholesterol and associated lipoproteins); pathologies associated with increased cardiovascular risk; or other alterations derived from the relationship of lipid metabolism with that of glucose (for example, but not limited to insulin resistance or diabetes).
  • a strain of the invention is used for the prevention and / or treatment of cardiovascular disease.
  • Cardiovascular diseases are those that affect the heart and blood vessels including, atherosclerosis, aneurysm, angina, vascular stroke, vascular brain disease, congestive heart failure, coronary artery disease, acute myocardial infarction and peripheral vascular disease.
  • CECT 7771 such as dyslipidemia (hypercholesterolemia and hypertriglyceridemia)
  • dyslipidemia hypercholesterolemia and hypertriglyceridemia
  • Insulin resistance and diabetes increased body fat or adipocyte hypertrophy, are risk factors for cardiovascular pathologies and, therefore, their treatment and prevention can prevent the development of this other group of pathologies.
  • a strain of the invention or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention, is used for the prevention and / or treatment of a disease caused by higher blood glucose levels, with respect to a control, therefore it is used to decrease the concentration of blood glucose (hyperglycemia), with respect to of an untreated subject.
  • This reduction in glucose concentration occurs in parallel with the reduction in insulin concentration and reduction in the insulin resistance index, which demonstrates that it improves insulin sensitivity and, therefore, can be used to treat or prevent metabolism alterations caused by insulin resistance and reduced insulin production.
  • disease caused by higher blood glucose levels refers to a health disorder caused by higher blood glucose concentrations than would be expected from a healthy individual with normal glucose values, that is to say approximately between 72 to 1 10 mg / dl blood or 4-7 mmol / l on an empty stomach, or approximately ⁇ 180mg / dl (or 10 mmol / l) if measured an hour and a half after meals. These values are approximate average values since the variation experienced and due to the conditions of each subject must be taken into account.
  • the disease caused or associated with higher blood glucose levels is selected from the list comprising, but not limited to, neuropathy (injury to the nerves of the extremities and / or organs); retinopathy (lesion of the retina in the eyes); kidney disease (kidney injury that can cause kidney failure); cardiovascular diseases (myocardial infarction); cerebrovascular disease (for example, cerebral thrombosis).
  • a strain of the invention; or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention is used for prevention and / or treatment of insulin resistance and / or diabetes (preferably gestational diabetes or type 2 diabetes Mellitus).
  • a more preferred use example refers to the prevention and / or treatment of gestational diabetes or type 2 diabetes Mellitus, pathology associated with overweight and / or obesity, although not necessarily.
  • Type 2 diabetes Mellitus is characterized by the relative deficit of insulin production and sensitivity in tissues and, therefore, a deficient peripheral glucose utilization.
  • Type 2 diabetes Mellitus represents 80% -90% of all diabetic patients. It often develops in adult stages of life, and its association with obesity is very common. Several drugs and other causes can, however, cause this type of diabetes. For example, diabetes associated with prolonged corticosteroid intake, often associated with untreated hemochromatosis, and gestational diabetes not always associated with obesity is very common.
  • a strain of the invention; or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention is used for the prevention and / or treatment of metabolic syndrome.
  • Metabolic syndrome is called the set of metabolic disorders that together increase the risk of diabetes and cardiovascular disease, including the combination of obesity, dyslipidemia (eg triglyceridemia and hypecholesterolemia) and hyperglycemia.
  • the strain of the invention is useful for the prevention and simultaneous treatment of these alterations and, therefore, of the metabolic syndrome.
  • a strain of the invention; or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention is used for the prevention and / or treatment of hypertension.
  • Arterial hypertension originates as a result of changes in blood flow due to a dysfunction of the inner layer of blood vessels.
  • a strain of the invention or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof of the invention; or a composition of the invention, is used for the improvement of the function of the immune system and, in particular, for the prevention and / or treatment of a disease associated with inflammation, caused by increased production of pro-inflammatory molecules and reduction of anti-inflammatories, regarding a control.
  • Example 4 and Table 3 show experimental data in this regard.
  • pro-inflammatory proteins but not limited to, are cytokines and chemokines and adipokines.
  • the pro-inflammatory proteins are selected from the list comprising, IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, IL-16, C-reactive protein, TNF-alpha or MCP1 and leptin, or any of their combinations More preferably the pro-inflammatory proteins are selected from the list comprising TNF-alpha and leptin or any combination thereof.
  • anti-inflammatory proteins that can reduce pro-inflammatory, but not limited to, are cytokine IL-10.
  • disease associated with increased production of pro-inflammatory proteins refers to diseases that are caused by at least the production of a protein involved in the inflammation (pro-inflammatory) of various types of tissues. Some of the diseases associated with increased production of pro-inflammatory proteins are also associated with overweight and / or obesity, for example, but not limited to type-2 diabetes, gestational diabetes, metabolic syndrome, fatty liver, non-alcoholic hepatitis, hypertension, dyslipidemia, cardiovascular diseases, steatohepatitis, or cancer. Other diseases associated with increased production of pro-inflammatory proteins are not associated with overweight and / or obesity or may occur in the absence of obesity such as, but not limited to those mentioned above (for example, diabetes) and others such as inflammation allergic
  • a strain of the invention or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention, is used to reduce inflammation of peripheral tissues, preferably of adipose and / or pancreatic tissue.
  • a strain of the invention or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention, is used for prevention and / or treatment of a disease associated with a decrease in the innate and adaptive immune response, compared to that of control subjects.
  • disease associated with the decrease of the innate and adaptive immune response refers to diseases or physiological situations that are characterized by an immunosuppression of the function of the innate and adaptive immune system, which can lead to a greater susceptibility to suffer certain pathologies such as infections.
  • This disease associated with the decrease of the innate and adaptive immune response is preferably overweight, obesity and associated disorders that lead to an alteration of these immune functions.
  • Example 4 (FIG 5 and 6) shows experimental data in this regard.
  • a strain of the invention; or the cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, of the invention; or a composition of the invention is used to restore the composition of the intestinal microbiota and, preferably, to reduce the concentration of potential pathogens such as enterobacteria in the intestinal content of a subject, relative to an untreated control.
  • the restoration of the composition of the intestinal microbiota, or the reduction of the concentration of enterobacteria in the intestinal content is carried out in a subject with overweight, obesity or any pathology associated therewith.
  • the restoration of the intestinal microbiota can be based, for example and without limitation, on increasing the abundance of the genus Bifidobacterium and reducing the abundance of bacteria of the Enterobaceriaceae family, whose concentrations are altered in obesity. This fact also implies a reduction of the risk of enterobacterial infections and a reduction of the pro-inflammatory signals that can be transmitted from the intestine to peripheral tissues (for example the liver) that may be affected in obese or non-obese subjects due to various pathologies. As demonstrated in example 4 and in FIG 7, administration of the strain object of the invention reduces the ability of the microbiota (feces) of obese animals to Stimulate the synthesis of the inflammatory cytokine TNF- ⁇ in macrophages and dendritic cells.
  • the inflammatory effect caused by alterations of the intestinal microbiota in obese subjects has been related to insulin resistance, metabolic endotoxemia, hepatic steatosis and impaired intestinal barrier function, which could be attenuated by the strain of the invention.
  • the strain of the invention also increases the number of Bacteroides spp. and Bifidobacterium spp in normal weight subjects and can be used to increase or restore these microbial populations in the intestine, which may be altered due to conditions other than obesity and overweight. Therefore, strain CECT 7771 has additional application in the prevention and treatment of diseases associated with alterations in the composition of the intestinal microbiota.
  • the present invention also covers the use of said strain; or of said cellular components, metabolites, secreted molecules, or any combination thereof, for the manufacture of a nutritional composition, a pharmaceutical composition or a medicament (as described above), for the treatment and / or prevention of said diseases or metabolic disorders, to improve the function of the immune system or to restore the composition of the intestinal microbiota or reduce the concentration of enterobacteria.
  • Another aspect of the present invention relates to a method for improving the body appearance of a subject comprising administering to said subject a strain of the invention; or the cellular component, metabolite, secreted molecule or any combination thereof of the invention; or a nutritional composition of the invention, to reduce body weight gain or contribute to weight loss, with a purpose Cosmetic
  • the subject to which the strain of the invention or the cellular component, metabolite, secreted molecule or any of its combinations of the invention is administered for cosmetic purposes; or the nutritional composition of the invention refers to a healthy subject.
  • FIG. 1 Differential effect of strains of different species of the genus Bacteroides and of the species B. uniformis in the accumulation of triglycerides (A) and cholesterol (B) in hepatocytes and in the use of glucose (C). The results are expressed as means and their standard deviation. * Statistically significant differences with respect to strain B. uniformis CECT 7771 (equivalent to CAY1) using ANOVA and the Tukey test (p ⁇ 0.05).
  • Panel A SD, control animals with standard diet; SD + B, control animals with standard diet + B. uniformis CECT 7771; HFD, with a high-fat diet; HFD + B, with a high-fat diet + B. uniformis CECT 7771.
  • the results are expressed as means and standard deviations and the statistically significant differences were established by applying the Mann-Whitney U test (p ⁇ 0.05).
  • Panel A SD,
  • the number of fatty hepatocytes is shown based on the degree of accumulation of fat in the cell from least to greatest (0-3) in a histological section of liver tissue stained with eosin hematoxylin.
  • Panel B SD
  • Panel C SD + B. uniformis CECT 7771
  • Panel D HFD
  • Panel E HFD + ⁇ . uniformis CECT 7771.
  • Panel A SD, control animals with standard diet; SD + B, control animals with standard diet + B. uniformis CECT 7771; HFD, with a high-fat diet; HFD + B, with a high-fat diet + B. uniformis CECT 7771.
  • the results are expressed as means and standard deviations and the statistically significant differences were established by applying the Mann-Whitney U test (p ⁇ 0.05). BE panels.
  • Adipocyte size is shown in a histological section of epididymal tissue stained with eosin hematoxylin.
  • Panel B SD
  • Panel C SD + B. uniformis CECT 7771
  • Panel D HFD
  • Panel E HFD + ⁇ . uniformis CECT 7771.
  • Panel B It shows the effect of the administration of the strain on the respiratory burst of macrophages involved in phagocytosis. SD, control animals with standard diet; SD + B, control animals with standard diet + B.
  • LPS lipopolysaccharide
  • TNF-alpha inflammatory cytokines
  • IL-10 anti-inflammatory cytokines
  • the ratio of cells (TL / DC) in the mixture was 1: 1, 1: 2 and 1: 4.
  • SD control animals with standard diet
  • SD + B control animals with standard diet + B. uniformis CECT 7771
  • HFD with a high-fat diet
  • HFD + B with a high-fat diet + B. uniformis CECT 7771.
  • the results are expressed as means and standard deviations; Statistically significant differences were established by applying the Mann-Whitney U test (p ⁇ 0.05).
  • SD control animals with standard diet
  • SD + B control animals with standard diet + B.
  • the results are expressed as means and standard deviations. Statistically significant differences were established by applying the Mann-Whitney U test (p ⁇ 0.05).
  • sequenced fragment was amplified using primers 27f (5 ' " AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3': SEQ ID NO: 2) and 1401 r (5'- CGGTGTGTACAAGACCC-3 ': SEQ ID NO: 3) and purified using the GFX commercial system TM PCR (Amershan, Bioscience, UK) Primers 530f (5'-GTGCCAGCAGCCGCGG-3 ': SEQ ID NO: 4) and U-968f (5'-AACGCGAAGAACCTTAC-3': SEQ ID NO were also used for sequencing. : 5), according to the procedures described by other authors (Gerhard et al., 2001. Appl. Environ.
  • Bacterial strains and culture conditions The following strains of the genus Bacteroides were used: B. uniformis CAY1 (CECT 7771), B. uniformis CBD2, B. distasonis CAY3, B. fragilis SX3, B. fivegoldi SX2, B. dorei SS1, B. ovatus SV2, B. thetaiotaomicron SAC4 and B. caccae SV3.
  • the strains were inoculated in 10 ml of Brain Herat broth (BH; Schar ⁇ au Chemie SA, Barcelona, Spain), containing 0.05% cysteine (BH), 1% with a 24 h culture and incubated for 22 h at 37 ° C in anaerobiosis.
  • the viability was greater than 90% in all cases. Each aliquot was used for a single trial. In order to assess the effects of dead bacteria, some of the aliquots were inactivated by cold (3 freezing cycles at -20 ° C and defrosting) and by heat (30 minutes at 80 ° C). The pH values of the obtained supernatants were adjusted to 7.2 with NaOH and sterilized by filtration (0.22- ⁇ pore size, Millipore, Bedford, MA) to eliminate the possible presence of viable cells. In order to assess the effects of metabolites and other compounds secreted to the culture medium, aliquots of the cell-free supernatants were stored at -80 ° C until use.
  • the effect of incorporating prebiotics into the culture medium was also evaluated by replacing part of the glucose of the BH medium with inulin (Inulin L-Light and Co LTD, Colnbrook, United Kingdom), with its final concentrations of 0.5 and 1, 5 g liter, respectively. Under these conditions, the cells and supernatants of each strain were obtained and with them the same macrophage and hepatocyte stimulation assays were performed. Cultivation and macrophage stimulation.
  • DMEM Dulbecco 's Modified Eagle Medium
  • streptomycin 100 .mu.g / ml , Sigma
  • penicillin 100 U / ml, Sigma
  • Cytokine concentrations (TNF- ⁇ and IL10) of macrophage culture supernatants were measured by ELISA kits (BD Biosciences, San Diego, CA) according to the instructions of the commercial house.
  • the strain of the invention was also selected for inducing the synthesis of the highest concentration of the anti-inflammatory and regulatory cytokine IL-10 by macrophages, which may contribute to reducing inflammation in the context of obesity (Table 1).
  • Other strains of the same species such as B. uniformis CBD2 induced a significantly higher proportion of the TNF-a / IL-10 ratio than the patent strain (CECT 7771), indicating that the balance of pro- and anti-inflammatory cytokines induced by the latter is more favorable than that induced by the other strains.
  • the immunological properties of the selected bacterium are not common to all intestinal bacteria of the same genus (Bacteroides) or species ( ⁇ . Uniformis) and, therefore, make it especially suitable for application in the treatment and prevention of overweight, obesity and metabolic alterations, associated or not, and related to inflammation.
  • Bacterial strains and culture conditions The following strains of the genus Bacteroides were used: B. uniformis CAY1 (CECT 7771), B. uniformis CBD2, B. distasonis CAY3, B. fragilis SX3, B. fivegoldi SX2, B. dorei SS1 and B. ovatus SV2.
  • the strains were grown in BH broth, containing 0.05% cysteine and cell suspensions and culture supernatants were obtained and preserved until used as indicated previously in section 2.1. HepG2 cell culture. Cultures of human liver-derived cells belonging to the HepG2 cell line, widely used as a liver model, were used.
  • the cells were cultured in DMEM supplemented with fetal bovine serum (10%, v / v) (SBF), penicillin (100 units / ml) and streptomycin (100 ⁇ g / ml).
  • SBF fetal bovine serum
  • penicillin 100 units / ml
  • streptomycin 100 ⁇ g / ml
  • the cultures were maintained (37 ° C) in a humidified atmosphere with 5% C0 2 with medium change every 48 h until reaching 70-80% of the confluence at which time they were used for the studies.
  • AO oleic acid
  • BSA albumin
  • the strain object of the invention was selected among others of the same genus and of the same species for its ability to reduce the accumulation of triglycerides and cholesterol in hepatocytes (FIG 1).
  • the strain B. uniformis CECT 7771 reduced the accumulation of triglycerides compared to other strains of different species such as B. dorei, B. fivegoldi, B. fragilis and B. ovatus and of the same species as B. uniformis CBD2 (FIG 1A) .
  • the strain B. uniformis CECT 7771 also reduced cholesterol accumulation compared to other strains of different species such as B. distasonis, B. dorei, B. fivegoldi, B. fragilis and B. ovatus (FIG 1 B).
  • the evaluation of the influence of the different bacterial strains on insulin resistance induced by oleic acid treatment was carried out by incubation (4h) of the HepG2 cultures, exposed for 24 h at 2 mM AO / BSA in DMEM, with a glucose solution (100 ⁇ g / mL) supplemented with insulin (10 ng / mL) in the presence or absence of different bacterial suspensions.
  • the potential glucose consumption by bacteria was considered by incubation of these media without their addition to cell culture.
  • the influence of bacterial suspensions on insulin resistance is evaluated quantifying glucose consumption and intracellular concentration of this in hepatocytes with a commercial enzyme kit (Liquid Glucose, Qu ⁇ mica Anal ⁇ tica PVda SA, Spain).
  • FIG 1C it is observed that hepatocytes exposed to oleic acid show a reduction in their ability to use glucose even in the presence of insulin with respect to controls.
  • the strain object of the invention ⁇ . Uniformis CECT 7771 improved the ability of hepatocytes to utilize glucose and, therefore, their insulin sensitivity to a greater degree than other strains of the same genus and species so It was considered the ideal candidate for patent applications.
  • EXAMPLE 3 EFFECT OF THE ADMINISTRATION OF CEPA B. uniformis CECT 7771 IN BIOMETRIC AND BIOCHEMICAL PARAMETERS, ABSORPTION OF LIPIDS IN THE INTESTINE AND IN THE HISTOLOGY OF ADIPOSE AND LIVER FABRIC.
  • mice Male male C57BL-6 mice (6-8 weeks; They would do Laboratories) were used. The animals were kept at a controlled temperature (23 ° C), with a 12 h light / dark cycle and in an atmosphere of 40-50% relative humidity.
  • Obesity was induced by feeding the mice with a high-fat diet (HFD) that provided 60% of the energy in the form of lipids (60 / Fat, Har ⁇ an Laboratories) at the expense of a reduction of carbohydrates, during 7 weeks, while the non-obese were given a conventional diet that provided 12.4% of the energy in the form of lipids. Mice had free access to water and diet. The weight was monitored weekly. The experiments were carried out in accordance with the standards of the animal ethics committee.
  • HFD high-fat diet
  • the strain was administered at a daily dose of 5x10 8 cfu / day by intragastric tube orally for 7 weeks.
  • the bacterium was administered as a nutritional composition consisting of 10% skim milk supplemented with the bacterium at the indicated concentration of 5 ⁇ 10 8 cfu per 100 ⁇ of composition.
  • the SD and obese HFD control groups were given the nutritional composition without the bacteria as a placebo.
  • the animals were anesthetized and sacrificed by cervical dislocation and samples of adipose (epididymal) and liver tissue and blood by cardiac puncture were taken for the analyzes described below. 3.2. Effects on the liver and adipose tissue.
  • the adipose (epididymal) and hepatic tissue samples were washed with saline solution and fixed in a buffer with 10% formalin, embedded in paraffin, cut into sections of 4-5 ⁇ and stained with hematoxylin eosin.
  • the severity of steatosis (accumulation of lipids in the liver) was determined by analyzing 10 fields of each section fixed with a light field optical microscope (Olympus), according to the following scale: grade 1 (without steatosis); grade 2, when hepatocyte fat occupied less than 33% of the cell; grade 3, when hepatocyte fat occupied between 34-66% of the cell; grade 4, when hepatocyte fat occupied more than 66% of the cell.
  • Adipocyte size was measured by image analysis with the use of NIS Elements BR 2.3 software, evaluating a minimum of 100 cells per experimental group and tissue type.
  • the strain object of the invention reduces the size of adipocytes in epididymal tissue whose increase (hypertrophy) at certain stages of life (childhood and adolescence) favors the development of overweight and obesity in adulthood and is associated with a positive imbalance between intake and energy expenditure (Macia et al., 2006. Genes Nutr., 1: 189-212).
  • the reduction in adipocyte size is related to the reduction in insulin resistance and glucose concentrations (Varady et al., 2009. Metabolism 58: 1096-101).
  • the administration of the CECT 7771 strain to obese animals leads to an increase in adipocytes of small size ( ⁇ 2000 ⁇ 2 ), while in obese animals that have not been administered the strain an increase occurs of all large adipocytes (2000-7000 ⁇ 2) and small ones ( ⁇ 2000 ⁇ 2) are reduced (Example 3, FIG. 3). Histological sections of adipose tissue also demonstrate these effects.
  • strain B. uniformis CECT 7771 reduces the size of adipocytes, that is, it is useful for the treatment of alterations in the development of this type of cells that leads to hypertrophy, which maintained over time can cause overweight and obesity, as well as other pathologies not necessarily associated with obesity.
  • the strain object of the invention reduces the accumulation of fat in the liver (steatosis) associated with the intake of diets rich in fat, obesity and various diseases such as non-alcoholic hepatitis (Musso et al., 2010. Hepatology 52: 79 -104). Specifically, the strain produces a decrease in the number of hepatocytes of grade 2 and 3, with maximum fat content, and an increase in those of grade 0 and 1 of lower fat content; however, in obese animals that are not administered the strain, the proportion of the type of hepatocytes is inverse, with those of maximum fat content predominating. In control animals, the administration of the strain produces an increase in hepatocytes of grade 0 (without fat) and reduces the number of those of grade 1 and 2. (Example 3, FIG 2). This demonstrates that the administration of the strain reduces the total accumulation of fat in the liver induced or not by diet.
  • the total body weight was monitored weekly and the final weight gain was determined with respect to the initial weight.
  • the weight of adipose tissue (epididymal and peri renal) was estimated per 100 g of body weight after sacrifice.
  • the concentrations of glucose, triglycerides and cholesterol were determined in serum samples obtained from peripheral blood after sacrifice by colorimetric methods (Qu ⁇ mica Cl ⁇ nicaVeronicada, SA, Amposta, Spain) and insulin by ELISA (BD Bioscience, San Diego, CAUSE).
  • cholesterol and triglyceride concentrations were determined in lipids extracted from the liver after sacrifice with the same methodology.
  • an oral dose of glucose of 2 g / kg was also administered to the mice and blood samples were taken at different times (15, 30 , 60, 90 and 120 min) with which the course of glucose concentration was determined using test strips (Glucose strips; Ascensia Esyfill, Bayer, Tarrytown, NY; USA) and a glucometer (Ascensia VIGOR, Bayer Tarrytown, NY; USES).
  • Triglycerides (mg / dl) 130.31 1 1, 56 156.99 27.47 129.77 13.94 1 18.21 10.04
  • Triglycerides (mg / g) 22.93 13.03 45.99 1 1, 53 31, 36 4.76 34, 17 9.51
  • Triglycerides (mg / dl) 0.041 * 0.937 0.004 *
  • the biochemical parameters were determined in plasma after the intervention. a The total weight gain was calculated at the end of the intervention and expressed in relative value with respect to the initial weight of each mouse.
  • the increase in plasma glucose concentration is indicative of an alteration in its metabolism and in the synthesis or response to insulin and can be positively regulated by the strain object of the invention, reducing the risk of developing insulin resistance and diabetes. , and improving your treatment.
  • HOMA index Homeostasis Model Assessment
  • insulin resistance a high index indicates low insulin sensitivity
  • pancreatic beta cells a high index indicates low insulin sensitivity
  • HOMA Insulin (g / I) x Glucose (mg / dl) / 405.
  • HOMA index was 1, 91 1 while in the obese treated with the strain it was 0.530, thus detecting a notable reduction that indicates the positive effect of the strain in improving insulin sensitivity.
  • the strain object of the invention reduces the postprandial glycemic response after an oral dose of glucose, decreasing the area of glucose under the curve in obese subjects, which also indicates that it improves glucose metabolism and insulin sensitivity.
  • the strain object of the invention also reduces the hyperleptinemia characteristic of diet-induced obesity indicating an improvement in its function in the regulation of lipid and glucose metabolism.
  • the strain of the invention administered in vivo regulates lipid metabolism, in particular reducing the concentration of triglycerides and cholesterol in peripheral blood in obese animals.
  • the strain of the invention significantly reduces the accumulation of cholesterol and triglycerides in the liver that can contribute to liver steatosis.
  • strain B. uniformis CECT 7771 Effects of the administration of strain B. uniformis CECT 7771 on the absorption of dietary lipids in the intestine. After the sacrifice, samples of intestinal tissue were taken that were washed with saline solution and fixed in a buffer with 10% formalin, embedded in paraffin, and cut into sections of 4-5 ⁇ , which were stained with hematoxylin eosin. The number of chylomicrons or fat micelles per enterocyte was determined by counting 10 fields of each section set with the light field optical microscope (Olympus), and expressed in number of chylomicrons per enterocyte.
  • the strain of the invention reduces the number of fat micelles or chylomicrons that form in the enterocytes by more than 50%. These results are consistent with those of Table 2, which demonstrate that the strain of the invention reduces the concentration of triglycerides in blood.
  • EXAMPLE 4 EFFECT OF ADMINISTRATION OF CEPA B. uniformis CECT 7771 ON THE CELL FUNCTION OF THE IMMUNE SYSTEM; ON IMMUNE PARAMETERS IN PERIPHERAL FABRICS; AND ON THE COMPOSITION OF THE INTESTINAL MICROBIOTA AND ITS INFLAMMATORY PROPERTIES.
  • the strain B. uniformis CECT 7771 was grown in Brain Heart broth (Schariab, SL- Barcelona, Spain) supplemented with 0.05% (w / v) cysteine at 37 ° C in anaerobiosis (AnaeroGen; Oxoid, Basingstoke, UK ) for 22 h.
  • Cells were collected by centrifugation (6,000 g for 15 minutes), they were washed with phosphate saline (PBS, 10 mM sodium phosphate, 130 mM sodium chloride, pH 7.4), and resuspended and administered as a nutritional composition consisting of 10% skim milk and the Bacterial strain at a concentration of 5x10 8 cfu of strain CECT 7771 per 100 ⁇ of composition, similar to the nutritional composition described in Example 3. Aliquots of these suspensions were frozen with liquid nitrogen and stored at -80 ° C until use.
  • PBS phosphate saline
  • the viability of the bacteria was checked by counting on Schaedler Agar agar plates (Scharlau, Barcelona, Spain) supplemented with kanamycin (100 mg / L), vancomycin (7.5 mg / L) and vitamin K (0.5mg / L ), after 48 hours of incubation and was approximately 90%. Each aliquot was thawed only once.
  • mice described in Example 3 and the same experimental groups were used to two of which the strain of the invention was administered as a nutritional composition, following the same pattern, and to placebo controls (nutritional composition without the strain ).
  • the animals were anesthetized and killed by cervical dislocation and various biological samples were taken: adipose tissues and pancreas to determine immunological parameters (cytokines), feces to determine the effect on the composition of the microbiota and immunocompetent cells (macrophages , dendritic cells and T cells) obtained as described below, to evaluate the effect of the intervention on the immune responses of these cells.
  • cytokines immunological parameters
  • feces to determine the effect on the composition of the microbiota and immunocompetent cells (macrophages , dendritic cells and T cells) obtained as described below, to evaluate the effect of the intervention on the immune responses of these cells.
  • macrophages were obtained from each experimental group of mice aseptically injecting Dulbeco's Modified Eagles Medium (DMEM) intraperitoneally. (SigmaTM- Yes Louis, MOAJSA), supplemented with 10% inactivated fetal bovine serum at 56 ° C for 30 minutes (Gibco, Barcelona, Spain), 100 ⁇ g / ml streptomycin and 100 U / ml penicillin (Sigma Chemical Co.).
  • DMEM Dulbeco's Modified Eagles Medium
  • the macrophages obtained from each experimental group of mice were adjusted to a concentration of 1x10 5 cells / ml in DMEM medium and after incubation for 1 h at 37 ° C in a 5% C0 2 atmosphere, the wells were washed with serum free DMEM to remove non-adherent cells. The adhered cells were incubated for 24 h, and after this period, they were stimulated with 1 ⁇ g / ml LPS of Salmonella enteric serotype Typhimurium (Sigma Chemical Co, Madrid, Spain) to evaluate their response to a bacterial component of potential pathogens.
  • control mouse cells were stimulated with feces (1/9 dilution in PBS) of each experimental group of mice in order to determine their inflammatory potential.
  • non-stimulated macrophages were evaluated in order to know the basal production of cytokines. After stimulation, supernatants were collected and cytokine concentrations were determined therein: TNF- ⁇ and IL-10 by ELISA (Ready SET Go! Kit, BD Bioscience, San Diego, CA, USA).
  • the strain of the invention improves the functioning of cells of the innate immune system, such as macrophages, when administered in vivo to normal weight and obese subjects, increasing their ability to respond to infectious agents, antigens or allergens.
  • the administration of the strain to obesity model animals induced by a fat-rich diet improves, among others, the function of macrophages in phagocytosis and in the synthesis of cytokines (FIG. 5).
  • the administration of the strain increases the outbreak of peripheral macrophages in response to a foreign stimulus or allergen (pathogen), improving phagocytic capacity and therefore immunological defenses in obese and normal weight subjects (FIG. 5).
  • the ability of mature dendritic cells to induce the proliferative response of CD4 + T cells in a mixed lymphocyte reaction was performed by comparing the responses of dendritic cells extracted from obese mice and controls to which the strain of the invention was supplied or not as described above. Dendritic cells were generated from tibial bone marrow and femur of mice. The tibiae and femurs of each mouse were removed and the surrounding tissue was removed aseptically.
  • the bone marrow was removed by flowing it with PBS, using a syringe and needle of 0.45 mm in diameter.
  • the cells obtained were washed once with PBS and aliquots of 10 6 cells diluted in RPMI, supplemented with antibiotics (penicillin 100 lU / ml and streptomycin 100 ⁇ g / ml), 10% SFB and 20 ng / ml mouse GM-CSF, They were planted in 100 mm bottles.
  • antibiotics penicillin 100 lU / ml and streptomycin 100 ⁇ g / ml
  • 10% SFB 10% SFB
  • 20 ng / ml mouse GM-CSF 20 ng / ml mouse GM-CSF
  • the cells were washed with PBS and re-suspended in culture medium without GM-CSF.
  • Dendritic cells were activated by adding LPS (100ng / ml) for 24 h before performing the mixed lifocitary reaction. Mature dendritic cells were used to stimulate CD4 + T cells.
  • CD4 + T lymphocytes were isolated from spleens of C57BL / 6 mice aged 7-8 weeks. After being removed, the spleens were suspended in PBS with SFB and passed through a nylon maya, the cell suspension obtained was washed once and re-suspended in a lysis buffer for 5 minutes.
  • the CD4 + T cells were immunomagnetically separated by positive selection with L3T4-CD4 + "microbeads" (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Germany) according to the manufacturer's instructions.
  • dendritic cells were distributed in 96-well plates in triplicate to stimulate, in each case, 1x10 5 CD4 + T lymphocytes in the following ratios (CD4 + T lymphocytes / dendritic cells): 1: 1, 1 : 2, 1: 4 in 100 ⁇ of culture medium and incubated at 37 ° C for 72 h, in an atmosphere with 5% C0 2 .
  • Dendritic cells and CD4 + T cells with and without ConA ⁇ g / ml were used as controls; Sigma), used as a mitogen.
  • Lymphocyte proliferation was determined with an ELISA kit (BrdU-colorimetric assay; Roche, Diagnostic, Germany) and quantified by measuring absorbance at 440 nm.
  • ELISA kit BodU-colorimetric assay; Roche, Diagnostic, Germany
  • absorbance absorbance at 440 nm.
  • cytokine synthesis was also evaluated, as an example of the stimulation of a pathogen
  • dendritic cell cultures of control mice the potentially inflammatory effect of the feces of each experimental group of mice measuring cytokine synthesis, as indicated in the case of macrophage cultures.
  • the strain object of the invention has also been shown to improve the function of dendritic cells and T cells when administered in vivo.
  • the better functioning of the dendritic cells in the obese animals to which the strain was administered is also evident because after their stimulation with LPS in vitro they are able to induce greater secretion of cytokines involved in the response to pathogens (for example TNF- ⁇ ) (FIG. 6).
  • the administration of the strain object of the patent also increases the capacity of dendritic cells stimulated with LPS to produce the anti-inflammatory cytokine IL10, which helps regulate the inflammation processes avoiding chronic inflammation.
  • dendritic cells described for the strain object of the invention are also significant in normal weight animals. These properties make the strain object of the patent suitable since the functionality of dendritic cells and T cells is altered in obesity and associated diseases such as diabetes, not always associated with obesity.
  • dendritic cells have functional alterations associated with weight gain, characterized by a reduction in their ability to present antigens and stimulate allogeneic T cells (Macia et al., 2006. J Immunol., 177 (9): 5997-6006 ; Verwaerde et al., 2006. Scand J Immunol., 64 (5): 457-66).
  • the pro-inflammatory properties of Naive T cells before a stimulus are increased, and may contribute to the chronic low-grade inflammatory state associated with obesity; and, on the contrary, the T cells previously exposed to antigens have a proliferation defect and preferably secrete Th2 type cytokines. All this explains the high incidence of infections in obese subjects and the lack of response to vaccination and infections mediated by memory T cells (Karlsson et al., 2010. J Immunol, 184: 3127-33). T cell function is also deficient in diabetics, showing reduced ability to proliferate in response to a stimulus and to synthesize IL2 (Chang and Shaio. 1995. Diabetes Res Clin Pract, 28 (2): 137-46). 4.5 Effect of the administration of strain B. uniformis CECT 7771 on the inflammation of peripheral tissues.
  • the concentration of cytokines in adipose tissue and pancreas was determined, after homogenization with a politron, by ELISA.
  • Obesity increases the concentration of TNF- ⁇ and reduces that of IL-10 in adipose tissue.
  • the target strain reduces the concentration of TNF- ⁇ and increases the synthesis of the anti-inflammatory cytokine IL-10 in adipose tissue, reducing inflammation.
  • TNF-a The synthesis of TNF-a is increased in obesity and other pathologies and contributes to the development of insulin and leptin resistance in tissues, inhibiting its anorexigenic effects (reduction of hunger sensation) and its role in weight regulation body and lipid and glucose metabolism (Example 4; Table 3).
  • the strain object of the patent reduces the concentration of TNF- ⁇ in the pancreas which can improve the function of this organ in the regulation of glucose metabolism (Example 4, Table 3).
  • concentrations of each bacterial group were determined using the Ct values obtained for each problem case. Standard curves were constructed with plasmid dilutions in which the amplified fragment was cloned by the specific PCR of each bacterial group. The results were expressed in no. Copies of the 16S rRNA gene per gram of feces.
  • strain B. uniformis CECT 7771 partially restores the composition of the intestinal microbiota, normalizing the alterations associated with overweight and / or obesity and the inflammatory effect caused by these alterations (FIG 7), as well as the alterations associated with other pathological conditions not only associated with overweight and / or obesity.
  • the administration of the strain of the invention to an obesity model increases the number of Bacteroides spp. and of the group C. coccoides and reduces that of Bifidobacterium spp. These changes in the composition of the microbiota further translate into a reduction in the pro-inflammatory properties thereof.
  • the microbiota of obese animals that are administered the strain induces less synthesis of pro-inflammatory cytokines, such as TNF- ⁇ , than that of obese animals that are not administer the strain (Example 4; FIG. 7).
  • Alterations of the intestinal microbiota are considered one of the possible inflammatory stimuli causing weight gain, insulin resistance, obesity and diabetes (Cani and Delzenne 2009. Curr Opin Pharmacol., 9 (6): 737-43), in addition, these alterations cause another type of pathological conditions.
  • strain CECT 7771 also induces changes in the microbiota of thin animals, for example increasing the concentration of Bifidobacterium spp., And reducing its ability to induce TNF- ⁇ in macrophages and therefore cause inflammation. TABLE 4. Example of the effect of the administration of strain CECT 7771 composition of the intestinal microbiota of obese and normal weight animals.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Abstract

Bacteroides CECT 7771y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas La presente invención se refiere a una cepa de Bacteroides uniformiscon número de depósito CECT 7771, así como a sus componentes celulares, metabolitos y/o moléculas secretadas. Es también objeto de la invención, una composición (nutritiva o farmacéutica) que comprende al menos uno de los productos anteriores. Asimismo, la presente invención también hace referencia al uso de una cepa de Bacteroides uniformis; preferentemente CECT 7771, o de los componentes celulares, metabolitos y/o moléculas secretadas de dicha cepa; o de una composición que los comprenda,para la prevención y/o tratamiento de alteraciones tales como sobrepeso, obesidad, hipertrofia de adipocitos, esteatosis hepática o hígado graso, dislipemia, hiperglicemia, resistencia a insulina y diabetes, síndrome metabólico, hipertensión, enfermedades cardiovasculares, disfunción del sistema inmune, reducción de las defensas frente a infecciones, y desequilibrio en la composición de la microbiota intestinal.

Description

DESCRIPCIÓN
Bacteroides CECT 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas
Sector de la técnica
La presente invención se encuadra dentro del campo farmacéutico y de la alimentación. En concreto, la presente invención se refiere a la cepa Bacteroides uniformis CECT 7771, a sus componentes celulares, metabolitos, y moléculas secretadas, y a composiciones que comprendiendo al menos uno de los productos anteriores, pueden comprender además otros microorganismos u otros compuestos con actividad biológica. Asimismo, la presente invención también se refiere al uso de una cepa de la especie B. uniformis o al uso de la cepa CECT 7771 para la prevención y/o tratamiento de alteraciones como son el sobrepeso, la obesidad, la esteatosis hepática o hígado graso, la dislipemia y, en particular, la hipercolesterolemia y/o hipertrigliceridemia; la hiperglicemia, resistencia a insulina y la diabetes, preferiblemente diabetes Mellitus tipo 2 y diabetes gestacional; el síndrome metabólico, la hipertensión, las enfermedades cardiovasculares, la disfunción del sistema inmune asociado o no a estas patologías, preferentemente la inflamación en tejidos periféricos (adiposo y páncreas) y la reducción de las defensas frente a infecciones, y el desequilibrio en la composición de la microbiota intestinal.
Estado de la técnica anterior El sobrepeso y la obesidad constituyen, actualmente, uno de los principales problemas de salud pública debido a su creciente prevalencia y co-morbilidades. Entre éstas se incluyen por ejemplo la dislipemia, la diabetes, las enfermedades cardiovasculares, la ateroesclerosis, la esteatosis hepática o hígado graso, el síndrome metabólico, la hipertensión y algunos tipos de cáncer.
La obesidad se produce como consecuencia de un desequilibrio positivo y prolongado entre la ingesta y el gasto energético, que conlleva aumento excesivo del peso y la grasa corporal. En el control del balance energético intervienen péptidos y hormonas sintetizados por el sistema neuroendocrino que permiten la comunicación entre diversos tejidos y órganos periféricos y, el sistema nervioso central que, globalmente, contribuyen a regular el peso corporal. En el control de la ingesta a largo plazo son primordiales las señales que emanan del tejido adiposo (leptina) y el páncreas (insulina) (Konturek et al., 2004. J Physiol Pharmacol., 55: 137-154). La insulina es la hormona más importante en la regulación del buen funcionamiento del tejido adiposo y la acumulación de triglicéridos en el mismo, y en la captación de la glucosa. En el tejido adiposo normal sensible a la insulina el almacenamiento de grasa se produce aquí, como respuesta a la insulina y otras hormonas (leptina), mediante la estimulación de la lipoproteín lipasa e inhibición de la lipólisis. Sin embargo, el acúmulo excesivo de ácidos grasos en el tejido adiposo asociado a la obesidad reduce la sensibilidad a la insulina, lo que promueve el acumulo de ácidos grasos libres en forma de triglicéridos en otros órganos y tejidos (hígado, músculo, corazón, etc.), y causa alteraciones en la producción o sensibilidad a la leptina, y el aumento de la síntesis de citoquinas pro-inflamatorias, lo que conlleva a su vez mayor riesgo de desarrollo de enfermedades asociadas (síndrome metabólico, hipertensión, diabetes, enfermedades cardiovasculares, etc.). En el sistema nervioso central, la señalización por insulina también es esencial para el control del balance energético y la homeostasis de la glucosa, y es dependiente de su interacción con otros factores reguladores, como la leptina, que actúan conjuntamente como factores anorexigénicos, reduciendo la ingesta (Gerozissis K., 2004. Eur J Pharmacol., 490(1-3): 59-70). La leptina es una hormona/adipoquina sintetizada principalmente por el tejido adiposo y, en menor medida, por otros tejidos como el estómago, y su secreción es estimulada por la insulina. A nivel del sistema nervioso central, la leptina suprime el apetito, aumenta el gasto energético e interviene en procesos vitales como la función de células β pancreáticas favoreciendo la secreción de insulina (La Cava A, Matarese G. The weight of leptin in immunity. Nat Rev Immunol. 2004 May;4(5):371 -9). A nivel periférico, la leptina actúa reduciendo la síntesis de ácidos grasos y triglicéridos, y aumentando la oxidación lipídica. No obstante, en sujetos obesos las concentraciones periféricas de esta adipoquina son anormalmente elevadas y se produce una resistencia a la misma. Las altas concentraciones de leptina en sujetos obesos, además de constituir un marcador de alteraciones metabólicas, puede modificar la respuesta inmunitaria y contribuir al estado de inflamación asociado a la obesidad. La esteatosis hepática o hígado graso no alcohólico es una alteración con alto grado de asociación con la obesidad y se presenta hasta en un 50% de individuos obesos, tanto niños como adultos, constituyendo la principal enfermedad hepática actualmente. Asimismo, las dislipemias (hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia) se asocian a la obesidad, la diabetes Mellitus tipo 2 y la hipertensión y constituyen el principal factor de riesgo de patologías cardiovasculares. La reducción de las concentraciones de triglicéridos y colesterol en el suero de sujetos con concentraciones anormalmente elevadas de estos parámetros bioquímicos son beneficiosas y, muy especialmente, la reducción del colesterol LDL ya que se considera un claro factor de riesgo de patologías cardiovasculares y su disminución está relacionada con una reducción de la morbilidad y la mortalidad total por patologías cardiovasculares a largo plazo. En este contexto el hígado juega una función importante porque es el principal órgano encargado del mantenimiento de la homeostasis del colesterol (mantenimiento de concentraciones fisiológicas). El hígado produce la síntesis del 15% del colesterol de novo, y esté proceso está, a su vez, regulado por el colesterol de la dieta. Los niveles de colesterol se mantienen en un nivel constante por diferentes mecanismos, incluyendo (i) la regulación de la actividad y concentración de la enzima la 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG- CoA) reductasa (ii) la regulación de la enzima acil-CoA:colesterol aciltransferasa, ACAT, que controla el exceso de colesterol intracelular libre y su transformación en esteres de colesterol que es en la forma en la que son transportados, y (iii) la regulación de la expresión de los receptores hepáticos de la LDL que permiten la absorción del colesterol del plasma y el transporte reverso de éste por la HDL. El colesterol recién formado en el hígado es liberado a la sangre, inicialmente, en forma de lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y puede contribuir a su aumento. No obstante, el hígado también contribuye a la eliminación del colesterol en sangre mediante varios mecanismos: (i) la conversión en ácidos biliares, (ii) el transporte del exceso de colesterol hacia el intestino para su excreción fecal y (iii) la conversión de VLDL a LDLc y TG que serán utilizados como fuentes de energía en tejidos extra-hepáticos. Las alteraciones en el metabolismo lipídico que afectan al perfil de lípidos en sangre y su acumulación en tejidos periféricos también pueden darse en sujetos no obesos, precediendo a la obesidad, o bien producirse por causas distintas a la obesidad incluyendo las de origen genético (e.g. enfermedades congénitas), infeccioso (e.g. hepatitis vírica), autoimmune, nutricional (e.g. malnutrición) o derivadas de otras situaciones clínicas o tratamientos farmacológicos (e.g. uso de fármacos).
La obesidad también se considera un estado de inflamación crónica leve, caracterizado por una elevada producción de citoquinas, adipoquinas y otras proteínas pro-inflamatorias en el tejido adiposo así como en otros tejidos periféricos y a nivel sistémico, que contribuyen a las alteraciones metabólicas que pueden sufrir estos individuos de forma permanente, como la diabetes Mellitus tipo 2 y las patologías cardiovasculares (Tilg y Moschen, 2006. Nat Rev Immunol., 6: 772-783). Entre los factores inflamatorios relacionados con la obesidad y alteraciones metabólicas, destacan la citoquina pro- inflamatoria TNF-α. En particular, el TNF-α reduce la expresión de genes involucrados en la acción de la insulina (por ejemplo la del gen de su receptor), atenúa la señalización por insulina e inhibe la acción de la lipoproteín lipasa estimulada por la insulina. Esto favorece el desarrollo de resistencia a insulina y de esteatosis hepática. La función de citoquinas proinflamatorias en este proceso se ha puesto de manifiesto también mediante el uso de fármacos basados en anticuerpos anti-TNF-α para mejorar patologías como la esteatosis hepática y la diabetes Mellitus tipo 2 (Tilg y Moschen, 2006. Nat Rev Immunol., 6: 772- 783).
La obesidad también se caracteriza por alteraciones en las funciones de diversas células del sistema inmunitario, como los macrófagos, las células dendríticas y las células T, asociadas a deficiencias en la defensa frente a patógenos y otros antígenos, y a un mayor riesgo de infecciones y complicaciones postoperatorias. Los macrófagos del tejido adiposo presentan menor capacidad fagocítica y reducción del estallido respiratorio, que son procesos implicados en la respuesta del sistema inmune innato frente a agentes infecciosos (Zhou et al., 2009. Proc Nati Acad Sci U S A, 106(26): 10740-5.). Además, las células dendríticas presentan alteraciones en su capacidad para estimular las células T, implicadas en la respuesta inmune adaptativa responsable, por ejemplo, de la producción de anticuerpos en vacunación y responsable de la respuesta de células T de memoria en casos de infección (Karlsson et al., 2010. J Immunol., 184:3127-33).
Los cambios sociales asociados al aumento regular de la ingesta de alimentos con alta carga energética y una baja actividad física se consideran las principales causas del aumento de la incidencia de la obesidad en todo el mundo. Sin embargo, los tratamientos tradicionales basados en dietas hipocalóricas y aumento de la actividad física muestran una eficacia reducida en el control de la obesidad y, por lo general, conducen a reducciones de peso limitadas y temporales. El uso de estrategias farmacológicas tampoco ha sido satisfactorio ya que conlleva efectos secundarios. Como consecuencia, se siguen buscando nuevas estrategias de intervención que mejoren el tratamiento y posibiliten la prevención de estas patologías.
La microbiota que coloniza el intestino humano se considera un nuevo factor implicado en la obesidad y las enfermedades asociadas, a través de su capacidad para regular las funciones metabólicas e inmunológicas del individuo (Sanz et al., 2010. Proc Nutr Soc, 14: 1-8.). En los últimos años diversos estudios han establecido una asociación entre un aumento en la proporción de miembros del filo Bacteroidetes y un fenotipo delgado o pérdida de peso y por el contrario su reducción se ha asociado a un fenotipo obeso (Ley et al., 2006. Nature, 444: 1022-1023; Nadal et al., 2008. Int J Obes., 33(7): 758-67); no obstante, no se han aportado evidencias directas del posible efecto de cepas del género Bacteroides ni de cepas de la especie Bacteroides uniformis administradas por vía oral en la obesidad. En la patente WO/2008/076696 se ha propuesto el uso de cambios en la microbiota intestinal como diagnóstico de la obesidad y su modificación como modo de tratar la obesidad aumentando la proporción del filo Bacteroidetes y reduciendo la del filo Firmicutes. No obstante, estos grupos filogenéticos integran más de 90 y 200 especies y sub-especies distintas, respectivamente, cuyos efectos individuales pueden ser muy diferentes y contrapuestos. De hecho, el documento WO/2008/076696 no demuestra que ninguna especie o cepa concreta del filo Bacteroidetes ejerza un efecto beneficioso en este contexto y, por el contrario, la única especie evaluada Bacteroides thetaiotaomicron en modelos animales causa aumento del peso corporal y del tejido adiposo y resistencia a la insulina (Samuel y Gordon. Proc Nati Acad Sci U S A. 2006; 27; 103(26): 10011-6). En la patente US 2009/01 10664A1 se ha propuesto el uso del género Bacteroides para la pérdida de peso corporal, pero administrando las bacterias tras una limpieza o eliminación de los propios componentes del tracto intestinal, a diferencia de la presente invención. Además, esta patente no aporta resultados de los efectos sobre el peso corporal de ninguna especie o cepa de este género.
Otras estrategias basadas en el uso de ciertos ingredientes o suplementos alimentaros, tan sólo abordan el problema de la obesidad o de las patologías debidas a alteraciones del metabolismo de lípidos y glucosa de un modo parcial, como es el caso de los estañóles o fitoesteroles, que tan sólo actúan reduciendo la absorción de colesterol de la dieta, que no es la única causa de su elevación en plasma. Asimismo, fármacos como las estatinas que inhiben la síntesis endógena de colesterol y son los hipolipemiantes, no llegan a alcanzar la eficacia necesaria por tratarse de monoterapias centradas en un solo mecanismo de acción.
Por tanto, persiste el problema de encontrar los componentes específicos de la microbiota intestinal comensal que puedan ser utilizados para prevenir y/o tratar enfermedades como el sobrepeso, la obesidad, y las patologías metabólicas asociadas o no a la obesidad y relacionadas con alteraciones del metabolismo de lípidos y glucosa, como por ejemplo la dislipemia, la esteatosis hepática, el síndrome metabólico, la resistencia a la insulina, la diabetes Mellitus tipo 2, la diabetes gestacional, la hipertensión y las patologías cardiovasculares, de una forma más idónea actuando conjuntamente sobre el malfuncionamiento del sistema inmunitario y el metabolismo, responsable de las patologías crónicas. Explicación de la invención
La presente invención se refiere a la cepa Bacteroides uniformis CECT 7771 , a los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas de dicha cepa, y a sus combinaciones; y a las composiciones que comprenden al menos uno de los productos anteriores y que pueden comprender otros microorganismos y/u otros componentes bioactivos, así como a su uso para la prevención y/o tratamiento del sobrepeso y/o de la obesidad, y de las alteraciones metabólicas asociadas como la dislipemia, la esteatosis hepática, la resistencia a insulina y diabetes, el síndrome metabólico, la hipertensión, las enfermedades cardiovasculares o la disfunción del sistema inmune con consecuencias sobre estas u otras patologías como las infecciones. La presente invención también se refiere al uso de dicha cepa para la prevención y/o tratamiento de éstas alteraciones cuando no se presentan asociadas con un problema de sobrepeso y/o de obesidad. La cepa CECT 7771 que pertenece a la especie B. uniformis, presenta propiedades inmunológicas comparativamente más favorables que otras cepas de la misma especie, y otras especies del género Bacteroides. La cepa CECT 7771 induce significativamente menor producción de la citoquina pro-inflamatoria TNF-α en macrófagos que el resto de cepas del mismo género que forman parte de la microbiota intestinal humana, excepto B. dorei SS1 y B. thetaiotaomicrom SAC4 con las que las diferencias no llegan a ser significativas (Ejemplo 2; Tabla 1). La cepa CECT 7771 también induce una mayor síntesis de la citoquina anti-inflamatoria IL-10 que el resto de cepas evaluadas (Ejemplo 2; Tabla 1). Otras cepas de la misma especie (β. uniformis) evaluadas indujeron una proporción significativamente superior de la razón TNF-a/IL-10 que la cepa objeto de la patente (CECT 7771), indicando que el balance de citoquinas pro- y anti-inflamatorias inducido por esta última es más favorable que el inducido por el resto de cepas (Ejemplo 2; Tabla 1). Tal como se ha argumentado en el apartado del estado de la técnica, la síntesis de TNF-α por macrófagos se ha relacionado directamente con la obesidad, la dislipemia, la esteatosis hepática, la diabetes, la hipertensión y el riesgo de patologías cardiovasculares. La capacidad de la cepa de la invención para aumentar la síntesis de la citoquina anti-inflamatoria IL-10 también es una propiedad relevante porque puede contribuir a reducir la inflamación crónica asociada a la obesidad y las alteraciones metabólicas. Estudios realizados con hepatocitos también indican que la cepa CECT 7771 reduce la acumulación de triglicéridos y colesterol y mejora la sensibilidad a la insulina y la utilización de glucosa en comparación con otras especies del género Bacteroides y con otras cepas de la especie B. uniformis (Ejemplo 2, FIG 1). Todos estos resultados demuestran la mayor idoneidad de la cepa objeto de la patente para controlar la inflamación y el metabolismo de lípidos y de glucosa que otras especies y cepas del género Bacteroides. Estudios realizados por nuestro grupo también indican que la lactancia materna favorece un aumento de la prevalencia de la especie objeto de la patente (β. uniformis) en la microbiota de niños en los primeros estadios de la vida pero no en aquellos sometidos a lactancia artificial (Sánchez et al. 2011. Appl Environ Microbiol. 201 1 ; 77(15):5316-23.) y, a su vez, la lactancia materna protege frente al desarrollo de obesidad y alteraciones metabólicas.
Globalmente, los resultados obtenidos con cultivos de macrófagos y hepatocitos indican que la especie B. uniformis es especialmente idónea para su uso en estas patologías, en comparación con el resto de especies encontradas en humanos que no muestran estas propiedades (por ejemplo y sin limitar, B. thetaiotaomicron) y, en particular pero sin limitar, la cepa B. uniformis CECT 7771. Además de la selección específica de la cepa objeto de la invención y a diferencia del estado de la técnica, la presente invención aborda el tratamiento de la obesidad con una perspectiva multifactorial y actúa sobre nuevas dianas claves para la prevención y/o tratamiento de esta patología y otras alteraciones metabólicas asociadas o no a la obesidad, no descritas para ninguna cepa conocida de la especie Bacteroides uniformis. El hecho más interesante es que ninguna de las cepas conocidas de esta especie ha mostrado ser útil para el tratamiento simultáneo y eficaz de todas las afecciones indicadas a lo largo de la presente invención.
Por tanto, la presente invención aporta al estado de la técnica una cepa de la especie B. uniformis de alto valor para el tratamiento del sobrepeso y/o de la obesidad, así como determinadas patologías como por ejemplo pero sin limitarse, la esteatosis hepática, la dislipemia, la resistencia a insulina, la diabetes, el síndrome metabólico, la hipertensión o las enfermedades cardiovasculares asociadas o no a la obesidad. Asimismo, la presente invención aporta al estado de la técnica una cepa de la especie B. uniformis que mejora las alteraciones del sistema inmunológico y, en particular, la inflamación de tejidos periféricos asociada a las patologías crónicas mencionadas y la reducción de las defensas frente a infecciones y, además, permite restablecer la composición de la microbiota intestinal que también contribuye a las patologías citadas. Esencialmente, las ventajas que presenta el uso de la cepa B. uniformis CECT 7771 de la presente invención son las siguientes: - La administración de la cepa objeto de la invención produce una reducción del peso corporal en sujetos obesos (Ejemplo 3; Tabla 2).
- La administración de la cepa objeto de la invención da lugar a una reducción de la grasa acumulada en el hígado en sujetos obesos y no obesos (Ejemplo 3, FIG. 2). Concretamente, en sujetos normopeso la cepa B. uniformis CECT 7771 produce un aumento del número de hepatocitos sin esteatosis (grado 0) y una reducción del de hepatocitos con una esteatosis de grado 1 y 2. En sujetos obesos, la cepa produce un aumento de los hepatocitos con menor grado de esteatosis (grado 0 y 1) y una reducción de los de mayor grado de esteatosis (grado 2 y 3); sin embargo, en sujetos obesos a los que no se les administra la cepa, la proporción del tipo de hepatocitos es inversa, predominando los de máximo contenido en grasa. De este modo se demuestra que la administración de la cepa reduce la acumulación total de grasa en el hígado inducida o no por la dieta. Cortes histológicos de tejido hepático también demuestran estos efectos (Ejemplo 3, FIG 2). La cepa B. uniformis CECT 7771 también reduce las concentraciones de triglicéridos y colesterol en el hígado en sujetos obesos (Ejemplo 3, Tabla 2).
- La administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 produce una reducción del tamaño de los adipocitos en sujetos obesos (Ejemplo 3, FIG. 3). En particular, la administración de la cepa CECT 7771 a animales obesos da lugar a un aumento de adipocitos de pequeño tamaño (<2000 μηι2) a expensas de la reducción de los de mayor tamaño en tejido epididimal, mientras que en los animales obesos a los que no se les ha administrado la cepa se produce un aumento de todos los adipocitos de gran tamaño (>2000-7000 μηι2) (Ejemplo 3, FIG. 3). Cortes histológicos de tejido adiposo también demuestran estos efectos (Ejemplo 3, FIG 3).
El hecho de que la cepa CECT 7771 reduzca el tamaño de los adipocitos, demuestra que es útil para el tratamiento de la hipertrofia de los adipocitos, que si se mantiene en el tiempo y sucede en un gran número de adipocitos, puede provocar sobrepeso y obesidad y resistencia a insulina. Esto es debido a que los adipocitos de mayor tamaño secretan mayor concentración de factores de crecimiento que desencadenan la adipogénesis a través de la diferenciación de los preadipocitos, generándose un proceso de retroalimentación. Además, los adipocitos con hipertrofia producen una concentración anormalmente elevada de citoquinas y quimioquinas inflamatorias (TNF-α, MCP-1 , resistina, etc.) que inhiben la señalización por insulina en los hepatocitos y provocan resistencia a la insulina y alteran la distribución corporal de lípidos. Por ejemplo el aumento del tamaño de los adipocitos también está relacionado con el aumento del aporte de ácidos grasos al hígado, que da lugar a esteatosis hepática y sus complicaciones. Por tanto, la cepa puede asimismo contribuir a prevenir o mejorar estas patologías asociadas. - La cepa B. uniformis CECT 7771 reduce el número de glóbulos de grasa en los enterocitos, es decir, reduce la cantidad de grasa de la dieta que puede ser absorbida y pasar a linfa y sangre en forma de quilomicrones y, de este modo, a tejidos periféricos (Ejemplo 3, FIG. 4). La absorción aumentada de la grasa de la dieta, además, de poder ser causa de sobrepeso y/o de obesidad por provocar un incremento de su acumulación en el tejido adiposo, puede estar asociada a otras patologías sin que se llegue a provocar sobrepeso u obesidad, como por ejemplo y sin que limite el alcance de la invención, la displipemia, el síndrome metabólico, la hipertensión arterial, las patologías cardiovasculares y otras alteraciones derivadas de la relación entre el metabolismo de lípidos y el de la glucosa. Por tanto, la cepa CECT 7771 puede ser eficaz en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades relacionadas con la absorción excesiva de grasas a partir de la dieta.
- La cepa B. uniformis CECT 7771 reduce la dislipemia y, en particular, las concentraciones de triglicéridos y colesterol en sangre periférica en sujetos obesos (Ejemplo 3; Tabla 2), lo que reduce el riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. En parte esté efecto puede deberse a la capacidad de la cepa para inhibir la cantidad de grasa absorbida a partir de la dieta. La dislipemia también puede ser consecuencia no sólo de la grasa de la dieta absorbida sino de otras alteraciones del metabolismo como la resistencia a insulina de los adipocitos que, sin que esté necesariamente asociada a obesidad, hace que éstos liberen ácidos grasos que se utilizarán en el hígado para la síntesis de triglicéridos y colesterol, y también podrán secretarse y aumentar su concentración en sangre periférica. La dislipemia también puede presentarse en sujetos predispuestos genéticamente a esta alteración metabólica, sin estar necesariamente asociada a la obesidad, a la resistencia a la insulina, o al aumento de la absorción de grasa de la dieta. Por tanto, la cepa CECT 7771 puede ser eficaz en la prevención y/o el tratamiento la dislipemia (e.g. hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia) y patologías relacionadas, como la hipertensión y las patologías cardiovasculares. - La cepa B. uniformis CECT 7771 reduce la concentración sérica de glucosa en paralelo a la de insulina en ayunas y el índice de la resistencia a la insulina HOMA (Homeostasis Model Assessment), que permite realizar estimaciones de la resistencia a la insulina (un elevado índice indica baja sensibilidad a la insulina) y de la función de las células beta pancreáticas. Además, la cepa objeto de la invención reduce la respuesta glicémica postprandial tras una dosis oral de glucosa, lo que también indica que mejora el metabolismo de la glucosa y la sensibilidad a la insulina (Ejemplo 3, Tabla 2). La cepa objeto de la invención también reduce la concentración de la adipoquina leptina en sujetos obesos, indicando que mejora la función metabólica de esta adipoquina, que a su vez puede contribuir a mejorar el metabolismo de glucosa y la producción o sensibilidad a la insulina (Ejemplo 4, Tabla 3).
- El aumento de las concentraciones séricas de glucosa, debido al desarrollo de resistencia a insulina, está frecuentemente asociado al sobrepeso y la obesidad, aunque también puede producirse sin obesidad, y puede conducir al desarrollo de diabetes Mellitus tipo-2 y diabetes gestacional. Por tanto, la cepa CECT 7771 puede ser eficaz en la prevención y/o el tratamiento las alteraciones del metabolismo de glucosa relacionadas que pueden conducir al desarrollo de resistencia a insulina y finalmente diabetes. - La cepa CECT 7771 es capaz de reducir la síntesis de proteínas pro- inflamatorias en tejidos periféricos, en sujetos normo-peso tratados con dicha cepa respecto a los no tratados con la misma. Así, la cepa objeto de la invención reduce la síntesis de la citoquina inflamatoria TNF-α y aumenta la síntesis de la citoquina antiinflamatoria IL-10 en el tejido adiposo, mientras que en sujetos obesos no tratados con la cepa se produce una reducción de la concentración de esta citoquina. La síntesis de TNF-α está incrementada en la obesidad y otras patologías y contribuye al desarrollo de resistencia a la insulina y la leptina, inhibiendo sus efectos anorexigénicos (reducción de la sensación de hambre) y su función en la regulación del peso corporal y el metabolismo de los lípidos y la glucosa (Ejemplo 4; Tabla 3). Además, la cepa objeto de la invención reduce la concentración de la citoquina inflamatoria TNF-α en el páncreas pudiendo mejorar la función de este órgano en la regulación del metabolismo de la glucosa (Ejemplo 4, Tabla 3). La cepa objeto de la invención también reduce la concentración de la adipoquina leptina, que también pueden favorecer la inflamación en el contexto del sobrepeso y la obesidad (Ejemplo 4, Tabla 3).
Por tanto, la cepa CECT 7771 regula la producción de citoquinas y adipoquinas, cuya síntesis está alterada en la obesidad y en determinadas enfermedades asociadas a la misma, como por ejemplo y sin limitar la dislipemia, el síndrome metabólico, la resistencia a la insulina, la hipertensión, las enfermedades cardiovasculares y la esteatosis, tanto en sangre periférica como en tejidos, y en otras enfermedades no necesariamente asociadas al sobrepeso y/o a la obesidad y, por tanto, se puede utilizar para el tratamiento y prevención de estas patologías.
- La cepa CECT 7771 mejora el funcionamiento de células del sistema inmunitario innato y adaptativo, incrementando su capacidad para responder a agentes infecciosos, antígenos o alérgenos en sujetos obesos y sin obesidad. En particular, la administración de la cepa a animales modelo de obesidad inducida por una dieta rica en grasa mejora, entre otras, la función de los macrofagos en la fagocitosis y en la síntesis de citoquinas ante estímulos de patógenos (Ejemplo 4, FIG. 5). La cepa objeto de la invención también mejora la función de las células dendríticas y células T del sistema inmune adaptativo (Ejemplo 4, FIG. 6).
Por tanto, la cepa CECT 7771 tiene un efecto positivo adicional porque puede ser útil para la prevención y el tratamiento de infecciones y la mejora de las respuestas protectoras por ejemplo en procesos de vacunación e inmunización, debido a que estas funciones del sistema inmunitario están alteradas en sujetos con sobrepeso y obesidad. Además, la cepa de la invención puede ser útil para el tratamiento o prevención de otras enfermedades que cursen con inmunodepresión (fundamentalmente de macrofagos, células dendríticas y células T), asociadas o no a la obesidad y el sobrepeso, ya que estos efectos se demuestran también en sujetos no obesos. - La cepa CECT 7771 además restablece la composición de la microbiota intestinal, normalizando las alteraciones asociadas al sobrepeso y la obesidad (reducción de abundancia del grupo C. coccoides, del género Bifidobacterium y aumento de la familia Enterobaceriaceae) y atenuando el efecto inflamatorio que causan estas alteraciones, y que se ha relacionado con el aumento de peso, la resistencia a la insulina, la endotoxemia metabólica, la esteatosis hepática y la alteración de la función barrera intestinal (Ejemplo 4 y Tabla 4 y Ejemplo 3 y FIG. 7). La cepa de la invención también incrementa el número de Bacteroides spp. y Bifidobacterium spp. en sujetos normopeso y puede emplearse para restablecer estas poblaciones microbianas en el intestino, que puedan estar alteradas debido a otras condiciones distintas de la obesidad y el sobrepeso. Por tanto, la cepa CECT 7771 tiene aplicación adicionalmente en la prevención y el tratamiento de enfermedades asociadas con alteraciones en la microbiota intestinal e infecciones por enterobacterias. Un aspecto de la presente invención se refiere a una cepa de B. uniformis con número de depósito CECT 7771. Dicha cepa ha sido depositada en la colección española de cultivos tipo (CECT) el 21 de Julio de 2010 y le correspondió el n° de depósito CECT 7771 La dirección de dicha Autoridad Internacional de depósito es: Universidad de Valencia / Edificio de investigación / Campus de Burjassot / 46100 Burjassot (Valencia).
La clasificación científica de la cepa CECT 7771 de la presente invención es: Reino: Bacteria / Filo: Bacteroidetes / Orden: Bacteroidales I Familia: Bacteroidaceae/ Género: Bacteroides I Especie: uniformis.
Las características de dicha cepa son:
- Los sustratos que la cepa B. uniformis CECT 7771 oxida o fermenta son: lactosa, sacarosa, maltosa, salicina, xilosa, arabinosa, esculina, celobiosa, mañosa y rafinosa.
- La cepa B. uniformis CECT 7771 crece en un intervalo de temperaturas comprendido entre 31 y 42 °C, con un óptimo a 37 °C.
Además, la cepa B. uniformis CECT 7771 es estable en las condiciones de estrés gastrointestinal (pH ácido y alta concentración de bilis). Su viabilidad tras su incubación en condiciones gástricas (pepsina 3g/l a pH 3 y 2.5) durante el tiempo medio de vaciado gástrico (2 h) es del 50-70% y tras su incubación en presencia de sales biliares (0.5 y 1 %) se mantiene por encima del 90%. También es resistente a las condiciones de los procesos tecnológicos de conservación (congelación, liofilización, etc.), y a las condiciones de elaboración de alimentos (refrigeración, liofilización, fermentación, etc.). Todas estas propiedades garantizan su viabilidad y persistencia y efectividad en el intestino.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a una cepa derivada de la cepa B. uniformis CECT 7771 , donde dicha cepa mantiene o mejora las capacidades descritas a lo largo de la presente invención. El microorganismo derivado puede producirse de forma natural o bien de forma intencionada, por métodos de mutagénesis conocidos en el estado de la técnica como por ejemplo pero sin limitarse, el crecimiento del microorganismo original en presencia de agentes mutagénicos o causantes de estrés, o mediante ingeniería genética dirigida a la modificación de genes específicos. Según una realización preferida, la cepa derivada de la cepa B. uniformis CECT 7771 es un muíante genéticamente modificado. Los términos cepa muíante o cepa derivada pueden ser utilizados indisíiníameníe. La cepa B. uniformis CECT 7771 o cualquier muíante o derivado de la misma puede ser utilizada en cualquier forma que ejerza los efectos descritos, como por ejemplo, según una realización preferida de la presente invención, la cepa B. uniformis CECT 7771 está en forma de células viables (cultivables o no cultivables), o según otra realización preferida de la invención la cepa está en forma de células no viables (células "muertas" inactivadas por cualquier técnica conocida en el estado de la técnica como por ejemplo, pero sin limitarse, calor, congelación o radicación ultravioleta).
En adelante se podrá hacer referencia a cualquiera de las cepas bacterianas de la especie B. uniformis descritas anteriormente (la cepa B. uniformis CECT 7771 o cualquier cepa muíante o derivada de la misma) como la "cepa de la presente invención" o la "cepa de la invención".
Oíro aspecto de la presente invención se refiere a los componentes celulares, meíaboliíos, moléculas secreíadas o cualquiera de sus combinaciones, obtenidos a partir de la cepa de la invención, o a partir de una combinación de microorganismos que comprenda al menos una cepa de la invención.
Eníre los componentes celulares de la bacteria se podrían incluir los componentes de la pared celular (como por ejemplo pero sin limiíarse, pepíidoglicano), los ácidos nucleicos, los componentes de la membrana, u oíros como proteínas, lípidos e hidratos de carbono y sus combinaciones, como lipoproíeínas, glicolípidos o glicoproíeínas. Los meíaboliíos incluyen cualquier molécula producida o modificada por la bacteria como consecuencia de su acíividad meíabólica durante su crecimiento, su uso en procesos tecnológicos (por ejemplo, pero sin limiíarse, procesos de elaboración de alimentos o fármacos), durante el almacenamiento del producto o durante el íránsiío gasíroiníesíinal. Ejemplos de estos meíaboliíos son, pero sin limiíarse, los ácidos orgánicos e inorgánicos, proteínas, pépíidos, aminoácidos, enzimas, lípidos, hidratos de carbono, lipoproíeínas, glicolípidos, glicoproíeínas, viíaminas, sales, meíales o ácidos nucleicos. Las moléculas secreíadas incluyen cualquier molécula exportada o liberada al exterior por la bacteria durante su crecimiento, su uso en procesos tecnológicos (por ejemplo de elaboración de alimentos o fármacos), el almacenamiento del producto o el íránsiío gasíroiníesíinal. Ejemplos de esías moléculas son, pero sin limiíarse, ácidos orgánicos e inorgánicos, proteínas, pépíidos, aminoácidos, enzimas, lípidos, hidratos de carbono, lipoproíeínas, glicolípidos, glicoproíeínas, viíaminas, sales, meíales o ácidos nucleicos. Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende la cepa de la invención; y/o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas de la cepa de la invención o cualquiera de sus combinaciones definidas anteriormente. La composición, definida de forma general, es un conjunto de componentes que está formado al menos por la cepa de la invención en cualquier concentración; o al menos por los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas de la cepa de la invención o cualquiera de sus combinaciones; o por una combinación de los mismos. Según la invención, la composición anterior además puede comprender al menos otro microorganismo adicional diferente a la cepa de la invención y/o sus componentes celulares, metabolitos o moléculas secretadas, o cualquier combinación de los mismos. Por ejemplo, pero sin limitarse, el microorganismo adicional que puede formar parte de dicha composición es seleccionado entre al menos uno de los siguientes grupos:
- al menos una cepa de otra especie del género Bacteroides o de la especie B. uniformis;
- al menos una bacteria láctica o bifidobacteria de origen intestinal, alimentario o ambiental. La bacteria láctica se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, una bacteria del género Bifidobacterium, Lactobacillus, Lactococcus, Enterococcus, Propionibacterium, Leuconostoc, Weissella, Pediococcus o Streptococcus;
- al menos una cepa de otros grupos filogenéticos, géneros o especies de procariotas de origen intestinal, alimentario o ambiental, como por ejemplo pero sin limitarse a Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacteres, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cianobacteria, Methanobrevibacterium, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae, Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio o Clostridium;
- al menos una cepa de hongo o levadura como por ejemplo, pero sin limitarse, perteneciente al género Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor o Penicillium. Dicho microorganismo adicional puede ser una cepa de la misma especie o de diferente especie o grupo taxonómico de microorganismos del que le corresponde a la cepa de la invención. Las células que comprende la composición pueden ser no viables o viables y estar en cualquier fase del estado de desarrollo o crecimiento (latente, exponencial, estacionaria, etc.), independientemente de la morfología que presente. Preferentemente, dicho microorganismo adicional comprende al menos una bacteria intestinal o una bacteria láctica.
Opcionalmente, la composición según cualquiera de las definidas anteriormente, puede además comprender al menos un componente bioactivo (sustancia activa, principio activo o agente terapéutico), como son por ejemplo otros componentes de alimentos, productos vegetales y/o fármacos.
El término "componente bioactivo" hace referencia a un compuesto con actividad biológica en el ámbito de aplicación de la patente que pueda mejorar o complementar la actividad de una cepa de la especie B. uniformis y, preferentemente, la de la cepa objeto de la invención CECT 7771 , incluyendo ingredientes o componentes de los alimentos (por ejemplo y sin limitar: ácidos grasos poli-insaturados, ácido linoléico conjugado, prebióticos, fibra, goma Guar, glucomanano, quitosano, picolinato de cobre, calcio, etc.), plantas, extractos o componentes de plantas (por ejemplo y sin limitar polifenoles, efedrina o extractos de Ephedra spp., te verde [Camellia sinensis], naranja amarga [Citrus aurantium]) y fármacos (por ejemplo y sin limitar estatinas, orlistat, sibutramina, liraglutido etc.)
En una realización preferida, la composición como se define anteriormente es una composición farmacéutica. La composición farmacéutica es un conjunto de componentes que está formado al menos por la cepa de la invención en cualquier concentración; o al menos por los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas de la cepa de la invención o cualquiera de sus combinaciones, que tiene al menos una aplicación en la mejora del bienestar físico o fisiológico o psicológico de un sujeto, que implique una mejora del estado general de su salud o reducción del riesgo de enfermedad. Dicha composición farmacéutica puede ser un medicamento.
El término medicamento tiene un significado más limitado que el significado de "composición farmacéutica", tal como se define en la presente invención, ya que el medicamento implica necesariamente un efecto preventivo o terapéutico. El medicamento al que se refiere la presente invención puede ser de uso humano o veterinario. El "medicamento de uso humano" es toda sustancia o combinación de sustancias que se presente como poseedora de propiedades para el tratamiento o prevención de enfermedades en seres humanos o que pueda usarse en seres humanos o administrarse a seres humanos con el fin de restaurar, corregir o modificar las funciones fisiológicas ejerciendo una acción farmacológica, inmunológica o metabólica, o de establecer un diagnóstico médico. El "medicamento de uso veterinario" es toda sustancia o combinación de sustancias que se presente como poseedora de propiedades curativas o preventivas con respecto a las enfermedades animales o que pueda administrarse al animal con el fin de restablecer, corregir o modificar sus funciones fisiológicas ejerciendo una acción farmacológica, inmunológica o metabólica, o de establecer un diagnóstico veterinario. También se considerarán "medicamentos veterinarios" las "premezclas para piensos medicamentosos" elaboradas para ser incorporadas a un pienso.
Además del requerimiento de la eficacia terapéutica donde dicha composición farmacéutica puede necesitar el uso de otros agentes terapéuticos, pueden existir razones fundamentales adicionales que obligan o recomiendan en gran medida el uso de una combinación de un compuesto de la invención y un componente biactivo, donde a dicho componente bioactivo se le atribuye una actividad apropiada para constituir un medicamento. Dicho compuesto de la invención se refiere obviamente a alguna de las cepas de Bacteroides uniformis de la invención o a los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas o cualquiera de sus combinaciones, obtenidos a partir de una de las cepas de la invención.
En una realización preferida, la composición farmacéutica además comprende, al menos, un vehículo y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables.
El término "excipiente" hace referencia a una sustancia que ayuda a la absorción de cualquiera de los componentes de la composición de la presente invención, estabiliza dichos componentes o ayuda a la preparación de la composición farmacéutica en el sentido de darle consistencia o aportar sabores que lo hagan más agradable. Así pues, los excipientes podrían tener la función de mantener los componentes unidos como por ejemplo almidones, azúcares o celulosas, función de endulzar, función de colorante, función de protección del medicamento como por ejemplo para aislarlo del aire y/o la humedad, función de relleno de una pastilla, cápsula o cualquier otra forma de presentación como por ejemplo el fosfato de calcio dibásico, función desintegradora para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otro tipo de excipientes no mencionados en este párrafo. Por tanto, el término "excipiente" se define como aquella materia que, incluida en las formas galénicas, se añade a los principios activos o a sus asociaciones para posibilitar su preparación y estabilidad, modificar sus propiedades organolépticas o determinar las propiedades físico-químicas de la composición farmacéutica y su biodisponibilidad. El excipiente "farmacéuticamente aceptable" debe permitir la actividad de los compuestos de la composición farmacéutica, es decir, que sea compatible con dichos componentes. La "forma galénica o forma farmacéutica" es la disposición a que se adaptan los principios activos y excipientes para constituir un medicamento. Se define por la combinación de la forma en la que la composición farmacéutica es presentada por el fabricante y la forma en la que es administrada. El "vehículo" o portador, es preferiblemente una sustancia inerte. La función del vehículo es facilitar la incorporación de otros compuestos, permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma a la composición farmacéutica. Por tanto, el vehículo es una sustancia que se emplea en el medicamento para diluir cualquiera de los componentes de la composición farmacéutica de la presente invención hasta un volumen o peso determinado; o bien que aún sin diluir dichos componentes es capaz de permitir una mejor dosificación y administración o dar consistencia y forma al medicamento. Cuando la forma de presentación es líquida, el vehículo farmacéuticamente aceptable es el diluyente. Además, el excipiente y el vehículo deben ser farmacológicamente aceptables, es decir, que el excipiente y el vehículo esté permitido y evaluado de modo que no cause daño a los organismos a los que se administra.
En cada caso la forma de presentación de la composición farmacéutica y, por tanto, la del medicamento, se adaptará al tipo de administración utilizada, por ello, la composición de la presente invención se puede presentar bajo la forma de soluciones o cualquier otra forma de administración clínicamente permitida y en una cantidad terapéuticamente efectiva. La composición farmacéutica de la invención se puede formular en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimido, cápsula, polvo, gránulo, ungüento, solución, supositorio, inyección, inhalante, gel, microesfera o aerosol. Según una realización aún más preferida de la presente invención, la composición farmacéutica se presenta en una forma adaptada a la administración oral.
La forma adaptada a la administración oral se refiere a un estado físico que pueda permitir su administración oral. Dicha forma adaptada a la administración oral se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, gotas, jarabe, tisana, elixir, suspensión, suspensión extemporánea, vial bebible, comprimido, cápsula, granulado, sello, pildora, tableta, pastilla, trocisco o liofilizado.
Otra posibilidad es que la composición farmacéutica se presente en una forma adaptada a la administración sublingual, nasal, intracatecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica, inhalada o parenteral. La cepa de la invención; los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas o cualquiera de sus combinaciones, obtenidos a partir de la cepa de la invención, o la composición de la invención; pueden ir asociados, por ejemplo, pero sin limitarse, con liposomas o micelas.
En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a aquella cantidad del componente de la composición farmacéutica que cuando se administra a un mamífero, con preferencia un humano, es suficiente para producir la prevención y/o el tratamiento, tal como se define más adelante, de una enfermedad o condición patológica de interés en el mamífero, con preferencia un humano. Dicho componente de la composición farmacéutica se refiere a la cepa de la invención; o a los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas; o una combinación de los mismos, y que opcionalmente pueden estar comprendidos en dicha composición en combinación con un componente bioactivo adicional, y que contribuyen al efecto terapéutico de la composición farmacéutica. La cantidad terapéuticamente efectiva variará, por ejemplo, según la actividad de la cepa de la invención; del microorganismo adicional o microorganismos adicionales que comprenda la composición de la invención; de los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas o cualquiera de sus combinaciones, en cualquier forma de presentación; la cantidad terapéuticamente efectiva variará también según la estabilidad metabólica y duración de la acción del compuesto; la edad, el peso corporal, el estado general de salud, el sexo y la dieta del paciente; el modo y el tiempo de administración; la velocidad de excreción, la combinación de fármacos; la gravedad del trastorno o la condición patológica particular; y el sujeto que se somete a terapia, pero puede ser determinada por un especialista en la técnica según su propio conocimiento y esa descripción.
En otra realización preferida, la composición definida según la invención es una composición nutritiva. En una realización más preferida, la composición nutritiva es seleccionada entre un alimento (que puede ser un alimento para fines nutricionales específicos o un alimento medicinal), un suplemento, un nutracéutico, un probiótico o un simbiótico. El término "composición nutritiva" de la presente invención se refiere a aquel alimento que, con independencia de aportar nutrientes al sujeto que lo toma, afecta beneficiosamente a una o varias funciones del organismo, de manera que proporciona un mejor estado de salud y bienestar. Como consecuencia, dicha composición nutritiva puede estar destinada a la prevención y/o tratamiento de una enfermedad o a la reducir de los factores de riesgo de la enfermedad.
El término "suplemento", sinónimo de cualquiera de los términos "suplemento dietético", "suplemento nutricional", "suplemento alimentario" o "suplemento alimenticio" es un componente o componentes destinados a complementar la alimentación, y puede ser un alimento. Algunos ejemplos de suplementos dietéticos son, pero sin limitarse, las vitaminas, los minerales, los productos botánicos, aminoácidos y componentes de los alimentos como las enzimas y los extractos glandulares. No se presentan como sustitutos de un alimento convencional ni como componente único de una comida o de la dieta alimenticia, sino como complemento de la dieta.
El término "nutracéutico" tal como se emplea en la presente invención se refiere a sustancias aisladas de un alimento y utilizadas de forma dosificada que tienen un efecto beneficioso sobre la salud. Dicho nutracéutico puede ser un suplemento.
El término "probiótico" tal como se emplea en la presente invención se refiere a microorganismos que cuando son suministrados en cantidades adecuadas ejercen efectos beneficiosos sobre la salud del organismo hospedador. El término "simbiótico" tal como se emplea en la presente invención se refiere a aquellos alimentos que contienen una mezcla de prebióticos y probióticos. Por regla general contienen un componente prebiótico que favorece el crecimiento y/o actividad metabólica y en definitiva el efecto del probiótico con el que se combina, como por ejemplo y sin limitar puede ser la asociación de los fructooligosacáridos o galactooligosacáridos a una bacteria intestinal como por ejemplo una cepa de la especie B. uniformis.
Según una realización más preferida de la anterior, el alimento se selecciona de la lista que comprende: producto lácteo, producto vegetal, producto cárnico, aperitivo, chocolate, bebida o alimento infantil. El producto lácteo se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, producto derivado de leche fermentada (por ejemplo, pero sin limitar yogur o queso) o no fermentada (por ejemplo, pero sin limitar, helado, mantequilla, margarina, suero lácteo). El producto vegetal es, por ejemplo, pero sin limitarse, un cereal en cualquier forma de presentación, fermentado o no fermentado. La bebida puede ser, pero sin limitarse, cualquier zumo de frutas o leche no fermentada.
Otra realización más preferida de la presente invención se refiere a cualquiera de las composiciones descritas en la invención, donde dicha composición tiene una concentración de la cepa de entre 103 y 1014 unidades formadoras de colonias (ufe) por gramo o mililitro de composición final. La concentración de la cepa es aquella concentración terapéuticamente efectiva o nutritivamente efectiva, según el caso. La composición nutritiva y la composición farmacéutica, pueden formularse, pero sin limitarse, en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimido, cápsula, microcápsula, polvo, gránulo, ungüento, solución, pasta, supositorio, inyección, inhalante, gel, microesfera o aerosol.
En adelante se podrá hacer referencia a cualquiera de las composiciones, composición general, composición farmacéutica o composición nutritiva, definidas en párrafos anteriores por medio del término "composición de la presente invención" o "composición de la invención".
Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la cepa de la invención; o del componente celular, metabolito, molécula secretada o de cualquiera de sus combinaciones, de la invención para la fabricación de una composición farmacéutica, de un medicamento o de una composición nutritiva.
Otro aspecto de la invención hace referencia a una cepa de la especie Bacteroides uniformis para distintos usos diferentes al tratamiento y/o prevención del sobrepeso o la obesidad. La presente invención demuestra como una cepa de la especie Bacteroides uniformis (como es la cepa B. uniformis CECT 7771) puede utilizarse para tratar y/o prevenir otras alteraciones del metabolismo de lípidos y glucosa, no necesariamente vinculadas al sobrepeso o la obesidad, tales como hipertrofia de adipocitos; esteatosis hepática o hígado graso; dislipemia (p. ej. hipertrigliceridemia y/o hipercolesterolemia), la hipertensión, las patologías cardiovasculares; la hiperglucemia; la resistencia a insulina y/o diabetes (p. ej. diabetes gestacional o diabetes Mellitus tipo 2); o el síndrome metabólico. Asimismo, se ha comprobado que dicha cepa de Bacteroides uniformis puede ser utilizada para mejorar la función del sistema inmunitario y, por ejemplo, reducir la inflamación en tejidos periféricos (adiposo y páncreas) que ocasiona las alteraciones metabólicas crónicas anteriormente descritas, así como para incrementar las defensas frente a infecciones y la respuesta a la vacunación. Además, la cepa de Bacteroides uniformis se puede utilizar para restablecer la composición de la microbiota intestinal y evitar las patologías relacionadas con su alteración, por ejemplo, reduciendo la concentración de enterobacterias en el contenido intestinal. En una realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para reducir el tamaño de los adipocitos en un sujeto, y por tanto, también en el tratamiento y/o prevención de hipertrofia de adipocitos.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para reducir la acumulación de grasa en hepatocitos, y por tanto, también en el tratamiento y/o prevención de esteatosis hepática o hígado graso.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para reducir los niveles de triglicéridos y colesterol en sangre, y por tanto, también en el tratamiento y/o prevención de dislipemia, más preferentemente de una dislipemia seleccionada entre hipertrigliceridemia y/o hipercolesterolemia.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad cardiovascular.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para reducir la concentración de glucosa en sangre, y por tanto puede ser usada en el tratamiento y/o prevención de hiperglucemia y/o una patología asociada a niveles mayores de la concentración de glucosa en sangre.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa en el tratamiento y/o prevención de resistencia a insulina y/o diabetes, y más preferentemente la diabetes se selecciona entre diabetes gestacional o diabetes Mellitus tipo 2.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa en el tratamiento y/o prevención de síndrome metabólico.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa en el tratamiento y/o prevención de la hipertensión.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para mejorar la función del sistema inmunitario de un sujeto, respecto de un control no tratado.
Entre las mejoras de la función del sistema inmunitario, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, puede reducir la inflamación en tejidos periféricos que es causa de las alteraciones crónicas del metabolismo objeto de la patente y, entre ellas, dislipemia, esteatosis hepática, hipertrofia de adipocitos, resistencia a insulina y diabetes, hipertensión, síndrome metabólico y patologías cardiovasculares. Asimismo, otra de las mejoras del sistema inmunitario que aporta una cepa de Bacteroides uniformis es su capacidad para estimular la respuestas de células inmunocompententes (macrofagos, células dendríticas y linfocitos T) y, así, las defensas frente a patógenos y antígenos.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para reducir la inflamación de tejidos periféricos, preferentemente tejido adiposo y/o pancreático. En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa en el tratamiento y/o prevención de una infección y/o la mejora de la respuesta a la vacunación. En los ejemplos se demuestra como una cepa de B. uniformis mejora de la función del sistema inmunológico innata y adaptativa frente patógenos y antígenos, y por tanto mejora la respuesta frente a infecciones de un individuo al que se le administra.
En otra realización preferida de uso en medicina, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, se usa para restablecer la composición de la microbiota intestinal y, preferentemente, para reducir la concentración de potenciales patógenos como las enterobacterias en el contenido intestinal de un sujeto, respecto de un control no tratado.
Según la presente descripción, una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de las distintas enfermedades o alteraciones metabólicas, para mejorar la función del sistema inmunitario o para reducir la concentración de enterobacterias, puede ser obviamente entendido como un método de tratamiento y/o prevención de dichas enfermedades o alteraciones, o un método para mejorar la función del sistema inmunitario, o un método para reducir la concentración de enterobacterias, que comprende la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de dicha cepa. Asimismo, la presente invención también protege el uso de dicha cepa; o de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o la combinación de los mismos, para la fabricación de una composición nutritiva, de una composición farmacéutica o de un medicamento, para el tratamiento y/o prevención de dichas enfermedades o alteraciones metabólicas, para mejorar la función del sistema inmunitario o para reducir la concentración de enterobacterias.
Otro aspecto de la invención se refiere a la cepa de la invención; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones de la invención; o la composición de la invención, para uso en medicina. El término "tratamiento", tal como se entiende en la presente invención, se refiere a combatir los efectos causados por una enfermedad o condición patológica de interés en un sujeto (preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano) que incluye:
(i) inhibir la enfermedad o condición patológica, es decir, detener su desarrollo;
(ii) aliviar la enfermedad o la condición patológica, es decir, causar la regresión de la enfermedad o la condición patológica o su sintomatología;
(iii) estabilizar la enfermedad o la condición patológica.
El término "prevención" tal como se entiende en la presente invención consiste en evitar la aparición de la enfermedad, es decir, evitar que se produzca la enfermedad o la condición patológica en un sujeto (preferiblemente mamífero, y más preferiblemente un humano), en particular, cuando dicho sujeto tiene predisposición por la condición patológica. El término "sobrepeso" se refiere a una patología caracterizada porque el sujeto tiene un índice de masa corporal (IMC) igual o superior a 25. El IMC es una medida de asociación entre el peso y la talla de un individuo. El IMC tiene la siguiente fórmula para su cálculo: Masa (Kg) / estatura2 (m). El sobrepeso se caracteriza por un IMC de entre≥ 25 a < 30. El término "obesidad" se refiere a una patología caracterizada porque el sujeto tiene un IMC es igual o mayor de 30. La obesidad se clasifica en diferentes niveles, considerando que sujetos con IMC > 40 padecen de obesidad mórbida. Otras parámetros utilizados para determinar si un individuo padece obesidad central son la circunferencia de cintura absoluta (el sujeto padece obesidad cuando es >102 cm en hombres [obesidad central] y >88 cm en mujeres) o el índice cintura-cadera (el sujeto padece obesidad cuando es >0,9 para hombres y >0,85 para mujeres). Una vía alternativa para determinar la obesidad es medir el porcentaje de grasa corporal (el sujeto padece obesidad cuando tiene aproximadamente >25% de grasa corporal en un hombre y aproximadamente >30% de grasa corporal en la mujer).
En un ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa en el tratamiento y/o la prevención del sobrepeso o la obesidad y, preferiblemente, cuando son causadas por la dieta. Tal como se demuestra en la presente invención, la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 a animales con obesidad inducida por la dieta produce un reducción de la ganancia de peso (Ejemplo 3, Tabla 2.). Globalmente, esto supone que la cepa puede ser usada para tratar o prevenir el sobrepeso o la obesidad.
Teniendo en cuenta que la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 produce un reducción de la ganancia de peso (Ejemplo 3, Tabla 2.), dicha cepa puede ser igualmente usada en aplicaciones cosméticas para reducir la ganancia de peso. De este modo, se entiende que una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención para reducir la ganancia de peso es equivalente además a un método para reducción la ganancia de peso (tanto con fines terapéuticos como con fines estéticos) que comprende la administración a un sujeto de dicha cepa, dichos componentes, metabolitos o moléculas secretadas, o dicha composición.
Otras alteraciones del metabolismo de lípidos y glucosa, en las que también puede estar afectado el sistema inmunitario, como por ejemplo pero sin limitarse; diabetes Mellitus tipo 2 y diabetes gestacional, la dislipemia (preferiblemente hiperlipidemia e hipercolesterolemia), las patologías cardiovasculares, la hipertensión, el hígado graso (preferiblemente hígado graso no alcohólico o esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica, cirrosis o hepatitis), el síndrome metabólico, el cáncer, las infecciones, etc. pueden presentarse tanto en sujetos con peso normal, como en sujetos con sobrepeso u obesidad.
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para disminuir el crecimiento y la diferenciación del tejido adiposo en sujetos obesos o con sobrepeso, y en un estadio anterior al sobrepeso o a la obesidad y, por tanto, se refiere al uso en la prevención y/o tratamiento de la hipertrofia de los adipocitos. Tal como se demuestra en el ejemplo 3 y en la FIG. 3, la cepa objeto de la invención reduce el tamaño de los adipocitos, cuyo aumento (hipertrofia) en determinadas etapas de la vida (sobre todo en la infancia y adolescencia) favorece especialmente el desarrollo del sobrepeso y obesidad en la edad adulta y otras complicaciones asociadas como la resistencia a insulina. En particular, la administración de la cepa CECT 7771 a animales obesos da lugar a un aumento del número de adipocitos de pequeño tamaño (Ejemplo 3, FIG. 3).
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa en el tratamiento y/o prevención de la esteatosis hepática o hígado graso. Tal como se demuestra en la presente invención, la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 tanto a animales modelo de obesidad como a animales control (no obesos) produce un reducción del número de hepatocitos con alta acumulación de grasa (Ejemplo 3, FIG 2.). Globalmente, esto supone que la cepa de la invención reduce la acumulación de grasa en el hígado.
La presente invención también se refiere a la prevención y/o el tratamiento de patologías relacionadas con la agravación de la esteatosis hepática, como por ejemplo, pero sin limitarse la hepatitis no alcohólica, esteatohepatitis, fibrosis, cirrosis, enfermedad hepática terminal o carcinoma hepático. Una cepa de la especie B. uniformis o la cepa de la invención puede ser usada para éstas u otras patologías que cursan con acumulación de lípidos en el hígado e inflamación, que pueden estar asociadas a obesidad o sobrepeso o bien ser consecuencia de otros trastornos. Entre éstos, se incluyen por ejemplo pero sin limitarse; alteraciones nutricionales (por ejemplo pero sin limitarse malabsorción, malnutrición proteocalórica o nutrición parenteral); trastornos metabólicos hereditarios o no hereditarios (por ejemplo pero sin limitarse diabetes Mellitus tipo 2, abetalipoproteinemia, o deficiencia sistémica de carnitina); enfermedades causadas por la exposición a fármacos (por ejemplo pero sin limitarse a corticoides o ibuprofeno) o tóxicos (por ejemplo pero sin limitarse a alcohol); hepatitis crónica o aguda debida a infecciones; cirrosis; fibrosis; enfermedad hepática terminal; carcinoma hepático; o alteraciones de la hipófisis. En particular, la esteatosis afecta aproximadamente a un 50% de los pacientes con diabetes Mellitus tipo 2. En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por alteraciones en las concentraciones de lípidos en sangre (por ejemplo la dislipemia) y, preferentemente de triglicéridos y/o colesterol, por tanto se usa para normalizar su concentración en sangre. Preferiblemente, el medicamento o composición nutritiva se usan para el tratamiento de dislipemia (sinónimo de dislipidemia). Preferiblemente la dislipemia es hipertrigliceridemia y/o hipercolesterolemia. La dislipidemia es una condición patológica cuyo único elemento común es una alteración del metabolismo de los lípidos, con la consecuente alteración de las concentraciones de lípidos y lipoproteínas en la sangre. La dislipemia puede estar o no asociada a la obesidad y a la ingesta de dietas ricas en grasas y al aumento de su absorción. A su vez, estas alteraciones están relacionadas con un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares, hipertensión y diabetes, entre otras patologías. La cepa de la invención reduce la absorción de lípidos y los niveles de triglicéridos y colesterol en sangre demostrando ser eficaz para las aplicaciones descritas, tal y como se demuestra en el Ejemplo 3, Tabla 2.
En otro ejemplo de uso en medicina, la cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones; o la composición de la invención, se usa para reducir la cantidad de lípidos absorbidos a partir de la dieta, respecto a un control no tratado. Tal como se muestra en el ejemplo 3, la cepa de la invención reduce el número de micelas de grasa que forman quilomicrones en los enterocitos intestinales, es decir, reduce la cantidad de grasa de la dieta que es absorbida en más de un 80% (Ejemplo 3; FIG. 4). Los quilomicrones son la forma en la que los lípidos de la dieta son empaquetados y transportados desde el intestino a la linfa y a la sangre para ser utilizados por los tejidos periféricos y, por este mecanismo la cepa administrada limitaría su absorción y acumulación en el organismo. La absorción de la grasa en la dieta, además de poder ser causa de sobrepeso y/u obesidad por provocar un incremento de su acumulación en el tejido adiposo, puede ser la causa de otras patologías sin que se llegue a provocar obesidad, como por ejemplo y sin que limite el alcance de la invención la aterosclerosis, que se caracteriza por un engrasamiento de la túnica íntima de una arteria con placas donde queda incrustada la grasa, y la dislipemia, caracterizada por alteraciones en las concentraciones en plasma de lípidos (triglicéridos y/o colesterol y lipoproteínas asociadas); patologías asociadas a mayor riesgo cardiovascular; u otras alteraciones derivadas de la relación del metabolismo de lípidos con el de la glucosa (por ejemplo pero sin limitarse a resistencia a insulina o diabetes).
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad cardiovascular. Las enfermedades cardiovasculares son aquellas que afectan al corazón y vasos sanguíneos incluyendo, ateroesclerosis, aneurisma, angina, accidente cerebro vascular, enfermedad cerebro vasculares, insuficiencia cardíaca congestiva, enfermedad de la arteria coronaria, infarto agudo de miocardio y enfermedad vascular periférica. La inflamación crónica y las alteraciones del metabolismo de lípidos (dislipemia) y glucosa frente a las cuales es efectiva un cepa de Bacteroides uniformis y, preferentemente, la cepa de la invención B. uniformis CECT 7771 , como la dislipemia (hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia), la resistencia a la insulina y diabetes, el aumento de grasa corporal o hipertrofia de adipocitos, son factores de riesgo de patologías cardiovasculares y, por tanto, su tratamiento y prevención pueden evitar el desarrollo de este otro grupo de patologías.
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por niveles mayores de glucosa en sangre, respecto de un control, por tanto se usa para disminuir la concentración de glucosa en sangre (hiperglicemia), respecto de un sujeto no tratado. Esta reducción de la concentración de glucosa se produce de forma paralela a la reducción en la concentración de insulina y reducción del índice de resistencia a insulina lo que demuestra que mejora la sensibilidad a la insulina y, por tanto, se puede usar para tratar o prevenir alteraciones del metabolismo causadas por la resistencia a insulina y reducción de la producción de insulina.
El aumento de glucosa en sangre (hiperglicemia) se puede producir como consecuencia de la dieta y también por desarrollo de resistencia a insulina (sujetos que producen suficiente insulina pero el cuerpo no responde normalmente) o por falta de síntesis insulina, con o sin obesidad, debido a otras alteraciones metabólicas o interacciones con fármacos. En el ejemplo 3 y tabla 2 de la presente invención se ofrece soporte experimental a esta realización preferida. El término "enfermedad causada por niveles mayores de glucosa en sangre" se refiere a una alteración de la salud causada por concentraciones de glucosa en sangre más elevadas que las que cabría esperarse de un individuo sano con valores normales de glucosa, es decir de aproximadamente entre 72 a 1 10 mg/dl sangre ó 4 - 7 mmol/l en ayunas, o de aproximadamente <180mg/dl (ó 10 mmol/l) si se mide una hora y media después de las comidas. Dichos valores son valores medios aproximados ya que debe tenerse en cuenta la variación experimentada y por condiciones propias de cada sujeto. La enfermedad causada o asociada a niveles mayores de glucosa en sangre se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, neuropatía (lesión de los nervios de las extremidades y/o de los órganos); retinopatía (lesión de la retina en los ojos); nefropatía (lesión del riñon que puede ocasionar insuficiencia renal); enfermedades cardiovasculares (infarto de miocardio); enfermedad cerebrovascular (por ejemplo, la trombosis cerebral). En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de la resistencia a insulina y/o diabetes (preferentemente diabetes gestacional o diabetes Mellitus tipo 2). Un ejemplo de uso más preferido se refiere a la prevención y/o tratamiento de diabetes gestacional o de diabetes Mellitus tipo 2, patología asociada al sobrepeso y/o a la obesidad, aunque no necesariamente.
La diabetes Mellitus tipo 2 se caracteriza por el déficit relativo de la producción y sensibilidad a la insulina en los tejidos y, por tanto, una deficiente utilización periférica de glucosa. La diabetes Mellitus tipo 2 representa un 80%-90% de todos los pacientes diabéticos. Se desarrolla a menudo en etapas adultas de la vida, y es muy frecuente su asociación con la obesidad. Varios fármacos y otras causas pueden, sin embargo, causar este tipo de diabetes. Por ejemplo, es muy frecuente la diabetes asociada a la toma prolongada de corticoides, frecuentemente asociada a la hemocromatosis no tratada, y la diabetes gestacional no siempre asociada a obesidad. En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento del síndrome metabólico. Se denomina síndrome metabólico al conjunto de alteraciones metabólicas que conjuntamente aumentan el riesgo de diabetes y enfermedad cardiovascular, incluyendo la combinación de obesidad, dislipemia (e.g. trigliceridemia e hipecolesterolemia) e hiperglucemia. Tal y como se demuestra en ejemplos previos (Ejemplo 3, Tabla 2), la cepa de la invención es útil para la prevención y tratamiento simultáneo de estas alteraciones y, por tanto, del síndrome metabólico. En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de la hipertensión. La hipertensión arterial se origina como consecuencia de cambios en el flujo sanguíneo debido a una disfunción de la capa interna de los vasos sanguíneos. Ente los factores que contribuyen a la hipertensión arterial se encuentran la obesidad, la resistencia a la insulina (la insulina no ejerce correctamente su efecto vasodilatador), y la dislipemia e inflamación crónica que favorecen la deposición de lípidos en las arterias e infiltración de células inflamatorias que causan vasoconstricción y finalmente placas de ateroma. Esta invención demuestra que un cepa de Bacteroides uniformis y preferentemente la cepa de la invención B. uniformis CECT7771 mejora todas estas alteraciones y, por tanto, podría contribuir a prevenir y tratar las causas de la hipertensión. En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones de la invención; o una composición de la invención, se usa para la mejora de la función del sistema inmunitario y, en particular, para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad asociada a la inflamación, originada por una mayor producción de moléculas pro-inflamatorias y reducción de las anti-inflamatorias, respecto de un control. En el ejemplo 4 y tabla 3 se muestran datos experimentales a este respecto. Ejemplos de proteínas pro-inflamatorias, pero sin limitarse, son citoquinas y quimioquinas y adipoquinas. Preferiblemente las proteínas pro-inflamatorias se seleccionan de la lista que comprende, IL-1 , IL-6, IL-8, IL-12, IL-16, Proteína C reactiva, TNF-alfa o MCP1 y leptina, o cualquiera de sus combinaciones. Más preferiblemente las proteínas pro- inflamatorias se seleccionan de la lista que comprende TNF-alfa y leptina o cualquiera de sus combinaciones. Ejemplos de proteínas anti-inflamatorias que pueden reducir las pro- inflamatorias, pero sin limitarse, son la citoquina IL-10.
El término "enfermedad asociada con una mayor producción de proteínas pro- inflamatorias" se refiere a enfermedades que son causadas por al menos la producción de una proteína implicada en la inflamación (pro-inflamatorias) de diversos tipos de tejidos. Algunas de las enfermedades asociadas con una mayor producción de proteínas pro-inflamatorias son también asociadas al sobrepeso y/o a la obesidad como por ejemplo, pero sin limitarse la diabetes tipo-2, diabetes gestacional, síndrome metabólico, hígado graso, hepatitis no alcohólica, hipertensión, dislipemia, enfermedades cardiovasculares, esteatohepatitis, o cáncer. Otras enfermedades asociadas con una mayor producción de proteínas pro-inflamatorias no están asociadas al sobrepeso y/o a la obesidad o pueden presentarse en ausencia de obesidad como por ejemplo, pero sin limitarse las mencionadas anteriormente (por ejemplo, diabetes) y otras como la inflamación alérgica.
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para reducir la inflamación de tejidos periféricos, preferentemente de tejido adiposo y/o pancreático.
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad asociada a una disminución de la respuesta inmune innata y adaptativa, respecto a la de sujetos control.
El término "enfermedad asociada a la disminución de la respuesta inmune innata y adaptativa" se refiere a enfermedades o situaciones fisiológicas que se caracterizan por una inmunodepresión de la función del sistema inmune innato y adaptativo, lo que puede conducir a una mayor susceptibilidad a sufrir ciertas patologías como las infecciones. Esta enfermedad asociada a la disminución de la respuesta inmune innata y adaptativa es preferentemente el sobrepeso, la obesidad y los desórdenes asociados que conllevan una alteración de estas funciones inmunitarias. En el ejemplo 4 (FIG 5 y 6) se muestran datos experimentales a este respecto.
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones de la invención; o una composición de la invención, se usa para la prevención y/o tratamiento de una infección o para mejorar la respuesta a la vacunación y, por tanto, el grado de protección del sujeto frente a ese antígeno.
En otro ejemplo de uso en medicina, una cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, de la invención; o una composición de la invención, se usa para restablecer la composición de la microbiota intestinal y, preferentemente, para reducir la concentración de potenciales patógenos como las enterobacterias en el contenido intestinal de un sujeto, respecto a un control no tratado. En un ejemplo aún más preferido, el restablecimiento de la composición de la microbiota intestinal, o la reducción de la concentración de enterobacterias en el contenido intestinal, se lleva a cabo en un sujeto con sobrepeso, obesidad o cualquier patología asociada con las mismas.
El restablecimiento de la microbiota intestinal se puede basar, por ejemplo y sin limitar, en el aumento de la abundancia del género Bifidobacterium y en la reducción de la abundancia de bacterias de la familia Enterobaceriaceae, cuyas concentraciones están alteradas en la obesidad. Este hecho también implica una reducción del riesgo de infecciones por enterobacterias y una reducción de las señales pro-inflamatorias que pueden transmitirse desde el intestino a tejidos periféricos (por ejemplo el hígado) que pueden estar afectados en sujetos obesos o no obesos por diversas patologías. Tal como se demuestra en el ejemplo 4 y en la FIG 7, la administración de la cepa objeto de la invención reduce la capacidad de la microbiota (heces) de animales obesos para estimular la síntesis de la citoquina inflamatoria TNF-α en macrófagos y células dendríticas. El efecto inflamatorio que causan las alteraciones de la microbiota intestinal en sujetos obesos se ha relacionado con la resistencia a la insulina, la endotoxemia metabólica, la esteatosis hepática y la alteración de la función barrera intestinal, que podrían ser atenuados por la cepa de la invención. Además, la cepa de la invención también incrementa el número de Bacteroides spp. y Bifidobacterium spp en sujetos normopeso y puede emplearse para incrementar o restablecer estas poblaciones microbianas en el intestino, que puedan estar alteradas debido a otras condiciones distintas de la obesidad y el sobrepeso. Por tanto, la cepa CECT 7771 tiene aplicación adicionalmente en la prevención y el tratamiento de enfermedades asociadas con alteraciones en la composición de la microbiota intestinal.
Según la presente descripción, la cepa de la invención; o los componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones de la invención; o la composición de la invención para su uso en el tratamiento y/o prevención de las distintas enfermedades o alteraciones metabólicas, para mejorar la función del sistema inmunitario o para restablecer la composición de la microbiota intestinal o reducir la concentración de enterobacterias, puede ser obviamente entendido como un método de tratamiento y/o prevención de dichas enfermedades o alteraciones, o un método para mejorar la función del sistema inmunitario, o un método para restablecer la composición de la microbiota intestinal o un método para reducir la concentración de enterobacterias, que comprende la administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de dicha cepa; o de dichos componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones; o de dicha composición. Asimismo, la presente invención también cubre el uso de dicha cepa; o de dichos componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o cualquiera de sus combinaciones, para la fabricación de una composición nutritiva, de una composición farmacéutica o de un medicamento (como anteriormente descritos), para el tratamiento y/o prevención de dichas enfermedades o alteraciones metabólicas, para mejorar la función del sistema inmunitario o para restablecer la composición de la microbiota intestinal o reducir la concentración de enterobacterias.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para mejorar el aspecto corporal de un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cepa de la invención; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones de la invención; o una composición nutritiva de la invención, para reducir la ganancia de peso corporal o contribuir a la pérdida de peso, con una finalidad cosmética. En el ámbito de la presente invención, se entiende que el sujeto al que se le administra con fines cosméticos la cepa de la invención o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones de la invención; o la composición nutritiva de la invención, se refiere a un sujeto sano.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
Descripción de las figuras FIG. 1. Efecto diferencial de cepas de distintas especies del género Bacteroides y de la especie B. uniformis en la acumulación de triglicéridos (A) y colesterol (B) en los hepatocitos y en la utilización de glucosa (C). Los resultados están expresados como medias y su desviación estándar. *Diferencias estadísticamente significativas con respecto a la cepa B. uniformis CECT 7771 (equivalente a CAY1) mediante ANOVA y el test de Tukey (p<0.05).
FIG. 2. Efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 (5x108 ufe/día) a ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos durante 7 semanas, sobre el desarrollo de esteatosis (acumulación de lípidos en el hígado). Panel A: SD, animales control con dieta estándar; SD+B, animales control con dieta estándar + B. uniformis CECT 7771 ; HFD, con dieta rica en grasa; HFD+B, con dieta rica en grasa + B. uniformis CECT 7771. Los resultados están expresados como medias y desviaciones estándar y las diferencias estadísticamente significativas se establecieron aplicando el test Mann-Whitney U (p<0.05). Paneles B-E. Se muestra el número de hepatocitos grasos en función del grado de acumulación de grasa en la célula de menor a mayor (0-3) en un corte histológico de tejido hepático teñido con eosina hematoxilina. Panel B: SD; Panel C: SD + B. uniformis CECT 7771 ; Panel D: HFD; Panel E: HFD+β. uniformis CECT 7771.
FIG. 3. Muestra el efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 (5x108 ufe/día) a ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos durante 7 semanas, sobre el desarrollo de los adipocitos, clasificados por intervalos de tamaño. Panel A: SD, animales control con dieta estándar; SD+B, animales control con dieta estándar + B. uniformis CECT 7771 ; HFD, con dieta rica en grasa; HFD+B, con dieta rica en grasa + B. uniformis CECT 7771. Los resultados están expresados como medias y desviaciones estándar y las diferencias estadísticamente significativas se establecieron aplicando el test Mann-Whitney U (p<0.05). Paneles B-E. Se muestra el tamaño de los adipocitos en un corte histológico de tejido epididimal teñido con eosina hematoxilina. Panel B: SD; Panel C: SD + B. uniformis CECT 7771 ; Panel D: HFD; Panel E: HFD+β. uniformis CECT 7771.
FIG. 4. Efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 (5x108 ufe/día) a ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos durante 7 semanas, sobre el número de micelas de grasa acumuladas en los enterocitos en cortes histológicos teñidos con eosina-hematoxilina. SD, animales control con dieta estándar; SD+B, animales control con dieta estándar + B. uniformis CECT 7771 ; HFD, con dieta rica en grasa; HFD+B, con dieta rica en grasa + B. uniformis CECT 7771. Los resultados están expresados como medias y desviaciones estándar y las diferencias estadísticamente significativas se establecieron aplicando el test Mann-Whitney U (p<0.05).
FIG. 5. Panel A. Muestra el efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 (5x108 ufe/día) a ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos durante 7 semanas, sobre la función de macrofagos estimulados con lipopolisacárido (LPS) en la síntesis de citoquinas inflamatorias (TNF-alpha) y anti-inflamatorias (IL-10). Panel B. Muestra el efecto de la administración de la cepa en el estallido respiratorio de macrofagos implicados en la fagocitosis. SD, animales control con dieta estándar; SD+B, animales control con dieta estándar + B. uniformis CECT 7771 ; HFD, con dieta rica en grasa; HFD+B, con dieta rica en grasa + B. uniformis CECT 7771. Los resultados están expresados como medias y desviaciones estándar; las diferencias estadísticamente significativas se establecieron aplicando el test Mann-Whitney U (p<0.05).
FIG. 6. A. Muestra el efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 (5x108 ufe/día) a ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos durante 7 semanas, en la función de células dendríticas estimuladas con lipopolisacárido (LPS) en la síntesis de citoquinas inflamatorias (TNF-alpha) y anti-inflamatorias (IL-10). B. Muestra el efecto de la administración de la cepa en la interacción de las células dendríticas con células T y su capacidad de proliferación. Los linfocitos T CD4+ (TL) fueron incubados con células dendríticas (DC) maduras de distintos grupos experimentales de ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos a los que se les administró la cepa (108 ufe/día) durante 7 semanas. La relación de células (TL/DC) en la mezcla fue 1 :1 , 1 :2 y 1 :4. SD, animales control con dieta estándar; SD+B, animales control con dieta estándar + B. uniformis CECT 7771 ; HFD, con dieta rica en grasa; HFD+B, con dieta rica en grasa + B. uniformis CECT 7771. Los resultados están expresados como medias y desviaciones estándar; las diferencias estadísticamente significativas se establecieron aplicando el test Mann-Whitney U (p<0.05).
FIG. 7. A Muestra el efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 (108 ufe/día) a ratones C57BL/6 (n=6/grupo) obesos y controles durante 7 semanas, sobre la capacidad de su microbiota intestinal (heces) para estimular la síntesis de citoquinas inflamatorias (TNF-alpha) y anti-inflamatorias (IL-10) en macrófagos (A) o células dendríticas (B) de ratones controles. SD, animales control con dieta estándar; SD+B, animales control con dieta estándar + B. uniformis CECT 7771 ; HFD, con dieta rica en grasa; HFD+B, con dieta rica en grasa + B. uniformis CECT 7771. Los resultados están expresados como medias y desviaciones estándar. Las diferencias estadísticamente significativas se establecieron aplicando el test Mann-Whitney U (p<0.05).
EJEMPLOS A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores. Los siguientes ejemplos específicos que se proporcionan en este documento de patente sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención. Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos no pretenden limitar el campo de aplicación de la misma.
EJEMPLO 1. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE LA CEPA B. uniformis CECT 7771.
Se procedió al aislamiento de cepas del género Bacteroides a partir de heces de lactantes sanos que no hubieran sido sometidos a tratamientos con antibióticos al menos durante el mes anterior a la toma de muestras. Las muestras se mantuvieron a 4o C y se analizaron sin que transcurrieran más de dos horas desde su recogida. Dos gramos de cada una de ellas se diluyeron en tampón fosfato 10 mM conteniendo una concentración de NaCI de 130 mM (PBS) y se homogeneizaron en un stomacher Lab-Blender 400 (Seward Medical, Londres, UK), durante 3 minutos y se diluyeron en agua de peptona. Alícuotas de 0,1 mi de diversas diluciones decimales se inocularon en agar Schaedler (Scharlau, Barcelona, Spain) suplementado con kanamicina (100 mg/L), vancomicina (7,5 mg/L) y vitamina K (0,5mg/L), a 37°C en condiciones de anaerobiosis. Tras una incubación de 48 h a 37 °C en condiciones de anaerobiosis (AnaeroGen, Oxoid, UK) se seleccionaron colonias aisladas y se confirmó su morfología bajo tinción de Gram. La identidad de los aislados se confirmó por secuenciación del gen del ARN ribosómico 16S a partir de ADN total. El fragmento secuenciado se amplificó utilizando los cebadores 27f (5'"AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3': SEQ ID NO: 2) y 1401 r (5'- CGGTGTGTACAAGACCC-3': SEQ ID NO: 3) y se purificó utilizando el sistema comercial GFX™PCR (Amershan, Bioscience, UK). Para la secuenciación se emplearon además los cebadores 530f (5'-GTGCCAGCAGCCGCGG-3': SEQ ID NO: 4) y U-968f (5'-AACGCGAAGAACCTTAC-3': SEQ ID NO: 5), de acuerdo con los procedimientos descritos por otros autores (Gerhard et al., 2001. Appl. Environ. Microbio/., 67: 504-513; Satokari et ai, 2001. Appl. Environ. Microbiol. 67, 504-513; Favier ef ai, 2002. Appl. Environ. Microbio!, 68: 219-22). La secuenciación se realizó utilizando un secuenciador automático de ADN ABI 3700 {Applied Biosystem, Foster City, CA). La secuencia de 1 ,335 kb del gen del ARN ribosómico 16S de la cepa CECT 7771 es SEQ ID NO: 1. La búsqueda de secuencias más próximamente relacionadas se realizó en la base de datos GenBank utilizando el algoritmo BLAST (Altschul et al., 1990. J. Mol Biol., 215: 403- 410). De acuerdo con la comparación de SEQ ID NO: 1 con respecto a las secuencias más similares, se obtuvo una identidad de 99 % con respecto a otras cepas de la especie B. uniformis (n° de acceso del GeneBank AB0501 10.1). Estos resultados indican que la cepa de la presente invención puede pertenecer muy probablemente a dicha especie. La cepa de la invención se tipó molecularmente mediante análisis por RAPDs utilizando el cebador M13 (5 '-GAGGGTGGCGGTTCT-3 ': SEQ ID NO: 6) y de acuerdo con la metodología descrita con anterioridad (Antonie Van Leeuwenhoek. 2010; 98(1):85-92). Los perfiles de los fragmentos de ADN amplificados de forma aleatoria demostraron que la cepa objeto de la invención (β. uniformis CECT 7771) es diferente a otras cepas de la misma especie.
EJEMPLO 2. SELECCIÓN DE LA CEPA B. uniformis CECT 7771 EN FUNCIÓN DE SU CAPACIDAD PARA MODULAR in vitro LA RESPUESTA DE MACRÓFAGOS RELACIONADA CON LA INFLAMACIÓN CRÓNICA DE BAJO GRADO ASOCIADA A LA OBESIDAD Y EN FUNCIÓN DE LA CAPACIDAD PARA MODIFICAR LA ACUMULACIÓN DE LÍPIDOS Y LA UTILIZACIÓN DE GLUCOSA POR HEPATOCITOS. 2.1. Evaluación del efecto de las cepas bacterianas en macrófagos
Cepas bacterianas y condiciones de cultivo. Se utilizaron las siguientes cepas del género Bacteroides: B. uniformis CAY1 (CECT 7771), B. uniformis CBD2, B. distasonis CAY3, B. fragilis SX3, B. fivegoldi SX2, B. dorei SS1 , B. ovatus SV2, B. thetaiotaomicron SAC4 y B. caccae SV3. Las cepas se inocularon en 10 mi de caldo Brain Herat (BH; Scharíau Chemie S.A., Barcelona, España), conteniendo un 0,05% de cisteína (BH), al 1 % con un cultivo de 24 h y se incubaron durante 22 h a 37°C en anaerobiosis. (AnaeroGen; Oxoid, Basingstoke, UK). Las células se recogieron por centrifugación (6,000 g, 15 minutos), se lavaron dos veces en PBS (10 mM fosfato de sodio, 130 mM cloruro de sodio, pH 7.4), y se re-suspendieron en PBS conteniendo un 20% de glicerol. Alícuotas de estas suspensiones se congelaron con nitrógeno líquido y se conservaron a -80°C. El número de células viables tras el ciclo de congelación- descongelación se determinó mediante recuento en placas de agar Schaedler Agar (Scharíau, Barcelona, Spain) suplementado con kanamicina (100 mg/L), vancomicina (7,5 mg/L) y vitamina K (0,5mg/L). La viabilidad fue superior al 90% en todos los casos. Cada alícuota se utilizó para un solo ensayo. A fin de evaluar los efectos de las bacterias muertas, algunas de las alícuotas se inactivaron por frío (3 ciclos de congelación a -20°C y descongelación) y por calor (30 minutos a 80°C). Los valores de pH de los sobrenadantes obtenidos se ajustaron a 7.2 con NaOH y se esterilizaron por filtración (0.22-μηι tamaño de poro, Millipore, Bedford, MA) para eliminar la posible presencia de células viables. A fin de evaluar los efectos de metabolitos y otros compuestos secretados al medio de cultivo, alícuotas de los sobrenadantes libres de células se conservaron a -80°C hasta su uso. Igualmente se evaluó el efecto de la incorporación de prebióticos al medio de cultivo reemplazando parte de la glucosa del medio BH por inulina (Inulin L-Light and Co LTD, Colnbrook, Reino Unido), siendo sus concentraciones finales de 0,5 y 1 ,5 g litro, respectivamente. En estas condiciones, se obtuvieron las células y sobrenadantes de cada cepa y con ellos se realizaron los mismos ensayos de estimulación de macrófagos y hepatocitos. Cultivo y estimulación de macrófagos. Células de la línea celular de macrófagos murinos Raw 264.7 se crecieron en medio Dulbecco's modifíed Eagle (DMEM, Sigma, USA), suplementado con un 10% de suero fetal bovino (Gibco, Barcelona, España), estreptomicina (100 μg/ml, Sigma) y penicilina (100 U/ml, Sigma). Para realizar los experimentos de estimulación, las células se incubaron a una concentración de 105 por mi en placas de poliestireno de fondo plano de 24 pocilios (Corning, Madrid, España) a 37° C, al 5% de C02. Como estímulo se utilizaron suspensiones de bacterias vivas y muertas equivalentes 1 x10 6 unidades formadores de colonias (ufc)/ml, y volúmenes de sobrenadantes de 30 μΙ. Como control positivo se usó lipopolisacárido (LPS) purificado de Salmonella entérica serotipo Typhimurium (Sigma Chemical Co, Madrid, Spain) a una concentración de 1 μg/ml. Como control negativo se ensayó la producción de citoquinas en células no estimuladas. Cada tipo de estímulo fue ensayado por triplicado en 2 experimentos independientes. Los sobrenadantes de los cultivos se recogieron por centrifugación, se fraccionaron y se almacenaron en alícuotas a -20°C hasta la detección de citoquinas y quimioquinas.
Determinación de citoquinas y quimioquinas. Las concentraciones de citoquinas (TNF-α e IL10) de los sobrenadantes de los cultivos de macrófagos se midieron mediante kits ELISA (BD Biosciences, San Diego, CA) de acuerdo con las instrucciones de la casa comercial.
TABLA 1. Ejemplo del efecto de la estimulación con células viables de diversas especies y cepas del género Bacteroides en la síntesis de citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias por macrófagos.
Figure imgf000040_0001
*Los resultados está expresados como medias y su desviación estándar (sd, valores entre paréntesis). Se establecieron diferencias estadísticamente significativas aplicando el test de Tukey a un valor de P<0.050. Distintas letras en una misma columna indican diferencias significativas entre las medias en relación a al valor del control (a-b) o al valor de las células estimuladas con B. uniformis CECT 7771 (a'-b'). Se han subrayado los datos correspondientes a la cepa de la invención. La cepa objeto de la invención se seleccionó entre otras del mismo género por ser una de las que inducía más bajas concentraciones de moléculas pro-inflamatorias (TNF-α) implicadas en el estado de inflamación crónica asociado a la obesidad que provoca resistencia a la acción de la insulina y leptina (Tabla 1). La cepa de la invención también se seleccionó por inducir la síntesis de la concentración más alta de la citoquina anti-inflamatoria y reguladora IL-10 por macrófagos, que puede contribuir a reducir la inflamación en el contexto de la obesidad (Tabla 1). Otras cepas de la misma especie como B. uniformis CBD2 indujeron una proporción significativamente superior de la razón TNF-a/IL-10 que la cepa objeto de la patente (CECT 7771), indicando que el balance de citoquinas pro- y anti-inflamatorias inducido por esta última es más favorable que el inducido por el resto de cepas. Las propiedades inmunológicas de la bacteria seleccionada no son comunes a todas las bacterias intestinales del mismo género (Bacteroides) o especie (β. uniformis) y, por tanto, la hacen especialmente idónea para su aplicación en el tratamiento y prevención del sobrepeso, la obesidad y las alteraciones metabólicas, asociadas o no, y relacionadas con la inflamación.
2.2. Evaluación del efecto de las cepas bacterianas en hepatocitos
Cepas bacterianas y condiciones de cultivo. Se utilizaron las siguientes cepas del género Bacteroides: B. uniformis CAY1 (CECT 7771), B. uniformis CBD2, B. distasonis CAY3, B. fragilis SX3, B. fivegoldi SX2, B. dorei SS1 y B. ovatus SV2. Las cepas se crecieron en caldo BH, conteniendo un 0,05% de cisteína y las suspensiones celulares y los sobrenadantes de los cultivos se obtuvieron y conservaron hasta su utilización tal como se ha indicado anteriormente en el apartado 2.1. Cultivo de células HepG2. Se utilizaron cultivos de células humanas derivadas de hígado pertenecientes a la línea celular HepG2, ampliamente utilizada como modelo hepático. Las células se cultivaron en DMEM suplementado con suero bovino fetal (10%, v/v) (SBF), penicilina (100 unidades/ml) y estreptomicina (100 μg/ml). Los cultivos se mantuvieron (37 °C) en una atmosfera humidificada con un 5% C02 con cambio de medio cada 48 h hasta llegar al 70-80% de la confluencia momento en que se utilizaron para los estudios. Previamente a su adición al cultivo celular se preparó una mezcla de ácido oleico (18: 1TO9; Sigma-aldrich) (AO) y albúmina (BSA) (A2153, Sigma-Aldrich), en condiciones asépticas. Una alícuota (5 g) de BSA se disolvió en el medio modificado de Dulbecco (libre de proteínas) (DMEM), utilizado para el cultivo celular, temperado a 40 °C. Sobre esta disolución se adicionó, gota a gota y en constante agitación, el patrón de ácido oleico hasta una concentración final de 0.8 M. A partir de los cultivos en confluencia, para llevar a cabo y normalizar los resultados de los distintos estudios, las células se re-suspendieron en DMEM y se sembraron en placas multipocillo (x24) a densidad de 1 x 105 células/pocilio. En estas condiciones las células se incubaron (37 °C/5% C02) durante 24 h. Transcurrido este periodo los cultivos se lavaron (x2) con una disolución salina tamponada (PBS) y se adicionó 1 ml_ de DMEM (no suplementado con SBF), con una concentración de 2 mM de la mezcla AO/BSA, en presencia o no de suspensiones celulares (108 unidades formadoras de colonias/ml) de las distintas cepas bacterianas indicadas en el apartado anterior. Los cultivos se devolvieron al incubador durante 24h adicionales. En todos los estudios se incluyeron cultivos control incubados con DMEM (no suplementado con SBF) pero sin AO.
Efecto de diversas especies y cepas de Bacteroides en la acumulación de triglicéridos y colesterol en cultivos HepG2. La cuantificación de la concentración (nmol/L) total de triglicéridos (TG) y colesterol (COL) en cultivos HepG2 expuestos (24 h) a la mezcla AO/BSA (2 mM en DMEM), en presencia o no de las suspensiones celulares de las distintas cepas bacterianas descritas, se llevó a cabo utilizando kits enzimáticos comerciales (Triglicéridos y Colesterol líquido, Química Analítica Aplicada SA, España). La cuantificación de TG y COL se llevó a cabo en homogeneizados celulares obtenidos con una disolución (300 μί) de PBS (pH 7)/0.1 % Triton-X100, utilizando el patrón proporcionado en el kit comercial correspondiente.
La cepa objeto de la invención se seleccionó entre otras del mismo género y de la misma especie por su capacidad para reducir la acumulación de triglicéridos y colesterol en los hepatocitos (FIG 1). La cepa B. uniformis CECT 7771 redujo la acumulación de triglicéridos en comparación con otras cepas de distintas especies como B. dorei, B. fivegoldi, B. fragilis y B. ovatus y de la misma especie como B. uniformis CBD2 (FIG 1A). La cepa B. uniformis CECT 7771 también redujo la acumulación de colesterol en comparación con otras cepas de distintas especies como B. distasonis, B. dorei, B. fivegoldi, B. fragilis y B. ovatus (FIG 1 B).
Efecto de diversas especies y cepas de Bacteroides en la utilización de glucosa y resistencia a insulina
La evaluación de la influencia de las distintas cepas bacterianas en la resistencia a insulina inducida por el tratamiento con ácido oleico se llevó mediante la incubación (4h) de los cultivos HepG2, expuestos durante 24h a 2 mM de AO/BSA en DMEM, con una disolución de glucosa (100 μg/mL) suplementada con insulina (10 ng/mL) en presencia o ausencia de distintas suspensiones bacterianas. El potencial consumo de glucosa por las bacterias se consideró mediante la incubación de estos medios sin su adición al cultivo celular. La influencia de las suspensiones bacterianas en la resistencia a insulina se evaluó cuantificando el consumo de glucosa y concentración intracelular de ésta en los hepatocitos con un kit enzimático comercial (Glucosa líquida, Química Analítica Aplicada SA, España). En la FIG 1C se observa que los hepatocitos expuestos a ácido oleico presentan una reducción de su capacidad para utilizar la glucosa incluso en presencia de insulina con respecto a los controles. Sin embargo, la cepa objeto de la invención (β. uniformis CECT 7771) mejoró la capacidad de los hepatocitos para utilizar la glucosa y, por tanto, su sensibilidad a la insulina en mayor grado que otras cepas del mismo género y especie por lo que se consideró la candidata ideal para las aplicaciones objeto de la patente.
EJEMPLO 3. EFECTO DE LA ADMINISTRACIÓN DE LA CEPA B. uniformis CECT 7771 EN PARÁMETROS BIOMÉTRICOS Y BIOQUÍMICOS, ABSORCIÓN DE LÍPIDOS EN EL INTESTINO Y EN LA HISTOLOGÍA DEL TEJIDO ADIPOSO E HÍGADO.
3.1. Modelo animal de obesidad y toma de muestras.
Se utilizaron ratones C57BL-6 machos adultos (6-8 semanas; Harían Laboratorios). Los animales se mantuvieron a temperatura controlada (23°C), con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h y en una atmósfera de un 40-50% de humedad relativa.
La obesidad se indujo mediante la alimentación de los ratones con una dieta rica en grasa (HFD) que proporcionó el 60% de la energía en forma de lípidos (60/Fat, Harían Laboratories) a expensas de una reducción de hidratos de carbono, durante 7 semanas, mientras que a los no obesos se les administró una dieta convencional que proporcionó el 12.4% de la energía en forma de lípidos. Los ratones tuvieron acceso libre al agua y a la dieta. El peso se monitorizó semanalmente. Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las normas del comité de ética animal.
Los animales se dividieron aleatoriamente en 4 grupos (n=6/grupo): (1) controles alimentados con una dieta convencional (SD), controles a los que se les administró la cepa objeto de la invención (SD+cepa), obesos al ser alimentados con una dieta rica en grasa (HFD) y obesos a los que se administró la cepa CECT 7771 (HFD+cepa). La cepa se administró a una dosis diaria de 5x108 ufe/día mediante sonda intragástrica por vía oral durante 7 semanas. La bacteria se administró en forma composición nutritiva constituida por leche descremada al 10% suplementada con la bacteria a la concentración indicada de 5x 108 ufe por cada 100 μΙ de composición. A los grupos controles SD y obesos HFD se les administró la composición nutritiva sin la bacteria como placebo. Tras el tiempo de tratamiento, los animales fueron anestesiados y sacrificados por dislocación cervical y se tomaron muestras de tejido adiposo (epididimal) y hepático y de sangre por punción cardíaca para los análisis que se describen a continuación. 3.2. Efectos en el hígado y tejido adiposo.
Las muestras de tejido adiposo (epididimal) y hepático fueron lavadas con solución salina y fijadas en un tampón con un 10% de formalina, embebidas en parafina, cortadas en secciones de 4-5 μηι y teñidas con eosina hematoxilina. La severidad de la esteatosis (acumulación de lípidos en el hígado) se determinó analizando 10 campos de cada sección fijada con microscopio óptico de campo claro (Olympus), según la siguiente escala: grado 1 (sin esteatosis); grado 2, cuando la grasa de los hepatocitos ocupaba menos del 33% de la célula; grado 3, cuando la grasa de los hepatocitos ocupaba entre el 34-66% de la célula; grado 4, cuando la grasa de los hepatocitos ocupaba más del 66% de la célula. El tamaño de los adipocitos se midió mediante análisis de imagen con el uso del software NIS Elements BR 2.3, evaluando un mínimo de 100 células por cada grupo experimental y tipo de tejido.
Los resultados obtenidos indican que la cepa objeto de la invención reduce el tamaño de los adipocitos en el tejido epididimal cuyo aumento (hipertrofia) en determinadas etapas de la vida (infancia y adolescencia) favorece el desarrollo del sobrepeso y obesidad en la edad adulta y está asociado a un desequilibrio positivo entre la ingesta y el gasto energético (Macia et al., 2006. Genes Nutr., 1 : 189-212). Por el contrario, la reducción en el tamaño de los adipocitos está relacionada con la reducción de la resistencia a insulina y de las concentraciones de glucosa (Varady et al., 2009. Metabolism 58: 1096-101). En particular, la administración de la cepa CECT 7771 a animales obesos da lugar a un aumento de adipocitos de pequeño tamaño (<2000 μηι2), mientras que en los animales obesos a los que no se les ha administrado la cepa se produce un aumento de todos los adipocitos de gran tamaño (2000-7000 μηι2) y se reducen los de pequeño tamaño (<2000 μηι2) (Ejemplo 3, FIG. 3). Cortes histológicos de tejido adiposo también demuestran estos efectos.
El aumento del tamaño de los adipocitos también está relacionado con el aumento del aporte de ácidos grasos al hígado, que da lugar a esteatosis hepática y sus complicaciones, de modo que la cepa puede asimismo contribuir a evitar o mejorar estas alteraciones. Por tanto, la cepa B. uniformis CECT 7771 reduce el tamaño de los adipocitos, es decir, es útil para el tratamiento de alteraciones en el desarrollo de este tipo de células que conduce a su hipertrofia, que mantenida en el tiempo puede provocar sobrepeso y obesidad, así como otras patologías no necesariamente asociadas a la obesidad.
La cepa objeto de la invención reduce el acumulo de grasa en el hígado (esteatosis) asociado a la ingesta de dietas ricas en grasa, a la obesidad y a diversas patologías como la hepatitis no alcohólica (Musso et al., 2010. Hepatology 52: 79-104). Concretamente, la cepa produce una disminución del número de hepatocitos de grado 2 y 3, con máximo contenido en grasa, y un aumento de los de grado 0 y 1 de menor contenido en grasa; sin embargo, en animales obesos a los que no se les administra la cepa, la proporción del tipo de hepatocitos es inversa, predominando los de máximo contenido en grasa. En animales controles, la administración de la cepa produce un aumento de hepatocitos de grado 0 (sin grasa) y reduce el número de los de grado 1 y 2. (Ejemplo 3, FIG 2). De este modo se demuestra que la administración de la cepa reduce la acumulación total de grasa en el hígado inducida o no por la dieta.
3.3. Efectos en parámetros biométricos y bioquímicos.
El peso corporal total se monitorizó semanalmente y se determinó la ganancia de peso final respecto al peso inicial. Además, se estimó el peso de tejido adiposo (epididimal y peri renal) por 100 g de peso corporal tras el sacrificio. Las concentraciones de glucosa, triglicéridos y colesterol se determinaron en muestras de suero obtenidas a partir de sangre periférica tras el sacrificio mediante métodos colorimétricos (Química Clínica Aplicada, SA, Amposta, España) y la de insulina por ELISA (BD Bioscience, San Diego, CA, USA). Además las concentraciones de colesterol y triglicéridos se determinaron en los lípidos extraídos del hígado tras el sacrificio con la misma metodología. A fin de evaluar la respuesta glicémica postprandial, a las 6 semanas de tratamiento y tras 4 horas de ayuno también se administró a los ratones una dosis oral de glucosa de 2 g/kg y se tomaron muestras de sangre a distintos tiempos (15, 30, 60, 90 and 120 min) con las que se determinó el curso de la concentración de glucosa utilizando tiras reactivas (Glucosa strips; Ascensia Esyfill, Bayer, Tarrytown, NY; USA) y un glucómetro (Ascensia VIGOR, Bayer Tarrytown, NY; USA).
Como se muestra en la Tabla 2, la administración de la cepa de la patente B. uniformis CECT 7771 a animales obesos reduce su ganancia de peso significativamente tras 7 semanas de intervención, indicando que es efectiva para la prevención y tratamiento del sobrepeso y la obesidad. Tabla 2. Parámetros biométricos y metabólicos en ratones alimentados con una dieta rica en grasas o estándar, suplementada o no con la cepa B. uniformis CECT 7771.
Grupos experimentales
SD HFD SD+B HFD+B
Media sd Media sd Media sd Media sd
Parámetros biométricos
Ganancia peso (%) 24,21 3,34 36, 19 1 ,55 23,61 3,17 30,33 0,92
Tejido adiposo (g) / 100g
0,06 0,04 0, 15 0,03 0,03 0,02 0,14 0,04 peso corporal
Parámetros séricos
Colesterol (mg/dl) 120,00 13,67 176,02 14,91 128,22 1 1 ,91 143,97 17,29
Triglicéridos (mg/dl) 130,31 1 1 ,56 156,99 27,47 129,77 13,94 1 18,21 10,04
Glucosa (mg/dl) 219,81 26,41 229,47 13,83 372,41 13,50 233,52 30,62
Insulina ^g/l) 0,57 0,47 1 ,59 0,09 0,69 0,05 0,92 0,14
Leptina (ng/ml) 8,07 1 ,12 18,28 4,28 6,80 1 ,23 12,98 3,24
Lípidos hepáticos
Colesterol (mg/g ) 29,94 4,08 35,51 4,35 29,22 6,32 27,48 6,39
Triglicéridos (mg/g ) 22,93 13,03 45,99 1 1 ,53 31 ,36 4,76 34, 17 9,51
Análisis estadístico
Parámetro Valor P ValorP ValorP
HFD vs SD SD+B vs SD HFD+B vs HFD
Parámetros biométricos
Ganancia peso (%) 0,007* 0,890 0,005*
Tejido adiposo (g)/100g peso corporal 0,016* 0, 150 0,423
Parámetros séricos
Colesterol (mg/dl) 0,001* 0,222 0,003*
Triglicéridos (mg/dl) 0,041* 0,937 0,004*
Glucosa (mg/dl) 0,001* 0,584 0,002*
Insulina ^g/l) 0,018* 0,892 0,018*
Leptina (ng/ml) 0,001* 0,048* 0,014*
Lípidos hepáticos
Colesterol (mg/g ) 0,029* 0,801 0,024*
Triglicéridos (mg/g ) 0,001* 0, 142 0,039* *SD: grupo con dieta estándar (control) (n=6); SD+B: grupo con DS y suplementado oralmente con 5,0 x108 CFU/día de B uniformis CECT 7771 (n=6); HFD: grupo con dieta rica en grasas (n=6); HFD+B: grupo con HFD y suplementado oralmente con 5,0 x108 CFU/día de B uniformis, durante 7 semanas (n=6). Los parámetros bioquímicos se determinaron en plasma tras la intervención. aLa ganancia peso total se calculó a final de la intervención y se expresó en valor relativo respecto al peso inicial de cada ratón. bEI peso relativo de tejido adiposo, incluyendo el epididimal y peri-renal, por cada 100 g de peso corporal se calculó tras la intervención. Los valores de todos los parámetros están expresados en forma de medias y sus desviaciones estándar. *EI análisis estadístico se realizó aplicando ANOVA y posteriormente el test Tukey para datos con distribución normal o el test Mann-Whitney U para aquellos sin distribución normal. Se establecieron diferencias significativas a un valor de P<0.050.
Tal y como se muestra en la Tabla 2, la cepa de la invención administrada in vivo también regula el metabolismo de la glucosa reduciendo su concentración en sangre periférica en animales obesos; por ejemplo las concentraciones elevadas de glucosa en suero de 485,9 mg/dl detectadas en ratones obesos tienden a normalizarse mediante la administración de la cepa objeto de la invención, alcanzando valores significativamente menores de 233,5 mg/dl (P=0,002), de forma proporcional a la reducción de la concentración de insulina (1 ,593 versus 0,920 μ9/Ι;, P=0.018). El aumento de la concentración de glucosa en plasma es indicativo de una alteración en su metabolismo y en la síntesis o respuesta a la insulina y puede ser regulada positivamente por la cepa objeto de la invención, reduciendo el riesgo de desarrollar resistencia a la insulina y diabetes, y mejorando su tratamiento. Además, se determinó el índice HOMA (Homeostasis Model Assessment) que permite realizar estimaciones de la resistencia a la insulina (un elevado índice indica baja sensibilidad a la insulina) y de la función de las células beta pancreáticas. Este índice se estimó en base a las concentraciones de glucosa e insulina en ayuno con la siguiente ecuación HOMA= Insulina ( g/I)x Glucosa (mg/dl)/405. En los sujetos obesos el índice HOMA fue de 1 ,91 1 mientras que en los obesos tratados con la cepa fue de 0,530, detectándose por tanto una reducción notable que indica el efecto positivo de la cepa en la mejora de la sensibilidad a la insulina. Además, la cepa objeto de la invención reduce la respuesta glicémica postprandial tras una dosis oral de glucosa, disminuyendo el área de glucosa bajo la curva en sujetos obesos, lo que también indica que mejora el metabolismo de la glucosa y la sensibilidad a la insulina. Como se muestra en la Tabla 2, la cepa objeto de la invención también reduce la hiperleptinemia característica de la obesidad inducida por la dieta indicando una mejora de su función en la regulación del metabolismo de lípidos y glucosa. La cepa de la invención administrada in vivo regula el metabolismo de los lípidos reduciendo en particular la concentración de triglicéridos y colesterol en sangre periférica en animales obesos. Así, las concentraciones elevadas de triglicéridos en suero detectadas en ratones obesos se reducen significativamente mediante la administración de la cepa objeto de la invención de 156,99 a 118,21 mg/dl (P= 0,004) suponiendo una reducción del 25%. Las concentraciones elevadas de colesterol sérico detectadas en ratones obesos también se reducen significativamente mediante la administración de la cepa objeto de la invención de 176,02 a 143,97 mg/dl (P= 0,003) suponiendo una reducción del 18%. Además, la cepa de la invención reduce significativamente la acumulación de colesterol y triglicéridos en el hígado que puede contribuir a la esteatosis hepática.
3.4. Efectos de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 en la absorción de lípidos de la dieta en el intestino. Tras el sacrificio se tomaron muestras de tejido intestinal que fueron lavadas con solución salina y fijadas en un tampón con un 10% de formalina, embebidas en parafina, y cortadas en secciones de 4-5 μηι, que fueron teñidas con eosina hematoxilina. El número de quilomicrones o micelas de grasa por enterocito se determinó contando 10 campos de cada sección fijada con el microscopio óptico de campo claro (Olympus), y se expresó en número de quilomicrones por enterocito.
Como puede observarse en la FIG. 4, la cepa de la invención reduce el número de micelas de grasa o quilomicrones que se forman en los enterocitos en más de un 50%. Estos resultados con coherentes con los de la Tabla 2, que demuestran que la cepa de la invención reduce la concentración de triglicéridos en sangre.
EJEMPLO 4. EFECTO DE LA ADMINISTRACIÓN DE LA CEPA B. uniformis CECT 7771 SOBRE LA FUNCIÓN DE CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNITARIO; SOBRE PARÁMETROS INMUNOLÓGICOS EN TEJIDOS PERIFÉRICOS; Y SOBRE LA COMPOSICIÓN DE LA MICROBIOTA INTESTINAL Y SUS PROPIEDADES INFLAMATORIAS.
4.1. Preparación de cultivos de la cepa objeto de la invención. La cepa B. uniformis CECT 7771 se creció en caldo Brain Heart (Schariab, SL- Barcelona, España) suplementado con un 0,05 % (p/v) de cisteína a 37 °C en anaerobiosis (AnaeroGen; Oxoid, Basingstoke, UK) durante 22 h. Las células se recogieron por centrifugación (6.000 g durante 15 minutos), se lavaron con solución salina fosfato (PBS, 10 mM fosfato sódico, 130 mM cloruro sódico, pH 7.4), y se re-suspendieron y administraron en forma de una composición nutritiva constituida por leche descremada al 10% y la cepa bacteriana a una concentración de 5x108 ufe de la cepa CECT 7771 por cada 100 μΙ de composición, de manera similar a la composición nutritiva descrita en el ejemplo 3. Alícuotas de estas suspensiones se congelaron con nitrógeno líquido y se conservaron a -80°C hasta su uso. La viabilidad de las bacterias se comprobó por recuento en placas de agar Schaedler Agar (Scharlau, Barcelona, España) suplementado con kanamicina (100 mg/L), vancomicina (7,5 mg/L) y vitamina K (0,5mg/L), tras 48 horas de incubación y fue aproximadamente del 90%. Cada alícuota se descongeló una sola vez.
4.2. Modelo animal de obesidad
Se utilizaron los mismos ratones descritos en el ejemplo 3 y los mismos grupos experimentales a dos de los cuales se les administró la cepa objeto de la invención en forma de composición nutritiva, siguiendo la misma pauta, y a los controles placebo (composición nutritiva sin la cepa). Tras el tiempo de tratamiento, los animales fueron anestesiados y sacrificados por dislocación cervical y se tomaron diversas muestras biológicas: tejidos adiposo y páncreas para determinar parámetros inmunológicos (citoquinas), heces para determinar el efecto en la composición de la microbiota y células inmunocompetentes (macrófagos, células dendríticas y células T) obtenidas como se describe a continuación, para evaluar el efecto de la intervención sobre las respuestas inmunológicas de estas células.
4.3. Evaluación del efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 en la función de macrófagos de ratones obesos y normopeso.
A fin de demostrar el efecto de la administración de la cepa CECT 7771 en la mejora de la respuesta de células del sistema inmunitario innato, se obtuvieron macrófagos de cada grupo experimental de ratones asépticamente inyectando por vía intraperitoneal la solución Dulbeco's Modified Eagles Médium (DMEM) (SigmaTM- Sí Louis, MOAJSA), suplementada con un 10% de suero fetal bovino inactivado a 56°C durante 30 minutos (Gibco, Barcelona, España), 100 μg/ml de estreptomicina y 100 U/ml de penicilina (Sigma Chemical Co.). Los macrófagos obtenidos de cada grupo experimental de ratones se ajustaron a una concentración de 1x105 células/ml en medio DMEM y tras su incubación durante 1 h a 37 °C en una atmósfera de 5% C02, los pocilios se lavaron con DMEM sin suero para eliminar las células no adheridas. Las células adheridas se incubaron durante 24 h y, tras este período, se estimularon con 1 μg/ml de LPS de Salmonella entérica serotipo Typhimurium (Sigma Chemical Co, Madrid, España) para evaluar su respuesta a un componente bacteriano de potenciales patógenos. Además, células de ratones controles fueron estimuladas con heces (dilución 1/9 en PBS) de cada grupo experimental de ratones a fin de determinar su potencial inflamatorio. En paralelo se evaluaron macrófagos no estimulados a fin de conocer la producción basal de citoquinas. Tras la estimulación, se recogieron los sobrenadantes y en ellos se determinaron las concentraciones de las citoquinas: TNF-α y IL-10 por ELISA (Ready SET Go! Kit, BD Bioscience, San Diego, CA, USA).
Los resultados obtenidos indican que la cepa de la invención mejora el funcionamiento de células del sistema inmunitario innato, como los macrófagos, cuando se administra in vivo a sujetos normo-peso y obesos, incrementando su capacidad para responder a agentes infecciosos, antígenos o alérgenos. En particular, la administración de la cepa a animales modelo de obesidad inducida por una dieta rica en grasa mejora, entre otras, la función de los macrófagos en la fagocitosis y en la síntesis de citoquinas (FIG. 5). La administración de la cepa incrementa el estallido respiratorio de macrófagos perifonéales en respuesta a un estímulo o alérgeno extraño (patógeno), mejorando la capacidad fagocítica y por tanto las defensas inmunologicas en sujetos obesos y normo-peso (FIG. 5). Esta capacidad está disminuida significativamente en animal obesos respecto los controles no obesos (FIG. 5). Estudios precedentes también demuestran que el estallido respiratorio de células fagocíticas responsable de la eliminación de patógenos también está alterado en sujetos con diabetes (Marhoffer et al., 1992. Diabetes Care, 15(2): 256-60). Además, el ensayo con el cultivo de macrófagos perifonéales extraídos de animales obesos y controles y su estimulación in vitro con el lipopolisacárido (LPS) de un patógeno, demuestran que la administración de la cepa objeto de la invención mejora la síntesis de citoquinas responsables de detener una posible infección como el TNF-α en animales obesos (FIG. 5). Esta función de los macrófagos también está reducida como consecuencia de la obesidad inducida por la dieta.
4.4. Evaluación del efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 en la función de células dendríticas y células T de ratones obesos y normopeso.
A fin de demostrar el efecto de la administración de la cepa objeto de la invención en la capacidad de células dendríticas para estimular la respuesta de linfocitos T y, por tanto, la respuesta inmunitaria adaptativa, se determinó la capacidad de células dendríticas maduras para inducir la respuesta proliferativa de linfocitos T CD4+ en una reacción linfocitaria mixta. El ensayo se realizó comparando las respuestas de las células dendríticas extraídas de ratones obesos y controles a los que se les suministró o no la cepa objeto de la invención tal como se ha descrito anteriormente. Las células dendríticas fueron generadas a partir de médula ósea de tibias y fémur de los ratones. Las tibias y fémures de cada ratón fueron extraídas y el tejido circundante fue eliminado asépticamente. Tras cortar los extremos, la médula ósea fue extraída haciéndola fluir con PBS, utilizando una jeringa y aguja de 0,45 mm de diámetro. Las células obtenidas fueron lavadas una vez con PBS y alícuotas de 106 células diluidas en RPMI, suplementado con antibióticos (penicilina 100 lU/ml y estreptomicina 100μg/ml), 10% SFB y 20 ng/ml de GM- CSF de ratón, fueron sembradas en botellas de 100 mm. Al tercer día, se adicionaron 10 mi de medio de cultivo y al séptimo día, el medio fue reemplazado por medio fresco. Al octavo día las células no adheridas fueron cosechadas mediante pipeteo suave. Las células fueron lavadas con PBS y re-suspendidas en medio de cultivo sin GM-CSF. Las células dendríticas se activaron adicionando LPS (100ng/ml) durante 24 h antes de realizar la reacción lifocitaria mixta. Las células dendríticas maduras fueron usadas para estimular linfocitos T CD4+. Los linfocitos T CD4+ fueron aislados de bazos de ratones C57BL/6 de 7-8 semanas de edad. Tras ser extirpados, los bazos fueron suspendidos en PBS con SFB y pasados a través de una maya de nylon, la suspensión celular obtenida fue lavada una vez y re-suspendida en un tampón de lisis durante 5 minutos. Después de dos lavados con PBS, las células T CD4+ fueron separadas inmunomagnéticamente por selección positiva con "microbeads" L3T4- CD4+ (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Germany) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Para realizar la reacción linfocitaria mixta, se distribuyeron alícuotas de células dendríticas en placas de 96 pocilios por triplicado para estimular, en cada caso, 1x105 linfocitos T CD4+ en las siguientes relaciones (linfocitos T CD4+ / células dendríticas): 1 :1 , 1 :2, 1 :4 en 100 μΙ de medio de cultivo y se incubaron a 37°C durante 72 h, en atmósfera con 5% de C02. Como controles se usaron células dendríticas y linfocitos T CD4+ con y sin ConA ^g/ml; Sigma), utilizada como mitógeno. La proliferación de linfocitos se determinó con un kit ELISA (BrdU- colorimetric assay; Roche, Diagnostic, Germany) y se cuantificó midiendo la absorbancia a 440 nm. En cultivos de células dendríticas de cada grupo experimental de ratones también se evaluó su capacidad para sintetizar citoquinas cuando se estimulaban con LPS, como ejemplo del estímulo de un patógeno, y en cultivos de células dendríticas de ratones controles se determinó el efecto potencialmente inflamatorio de las heces de cada grupo experimental de ratones midiendo la síntesis de citoquinas, tal como se ha indicado en el caso de los cultivos de macrófagos. La cepa objeto de la invención también ha demostrado mejorar la función de las células dendríticas y células T cuando se administra in vivo. Las células dendríticas extraídas de ratones obesos a los que se ha administrado la cepa, incubadas en presencia de células T en diversas proporciones (1 :1 , 1 :2 y 1 :4), incrementan su capacidad de proliferación y activación, propiedades que están disminuidas en los animales obesos a los que no se ha administrado la cepa (FIG. 6). El mejor funcionamiento de las células dendríticas en los animales obesos a los que se administró la cepa también se pone de manifiesto porque tras su estimulación con LPS in vitro son capaces de inducir mayor secreción de citoquinas implicadas en la respuesta a patógenos (por ejemplo TNF-α) (FIG. 6). La administración de la cepa objeto de la patente también incrementa la capacidad de las células dendríticas estimuladas con LPS para producir la citoquina anti-inflamatoria IL10, que ayuda a regular los procesos de inflamación evitando la inflamación crónica. Los efectos sobre células dendríticas descritos para la cepa objeto de la invención son también significativos en animales normo-peso. Estas propiedades hacen a la cepa objeto de la patente idónea ya que la funcionalidad de células dendríticas y células T está alterada en la obesidad y enfermedades asociadas como la diabetes, no siempre asociadas a la obesidad. En particular las células dendríticas presentan alteraciones funcionales asociadas al aumento de peso, caracterizadas por una reducción de su capacidad para presentar antígenos y estimular las células T alogénicas (Macia et al., 2006. J Immunol., 177(9): 5997-6006; Verwaerde et al., 2006. Scand J Immunol., 64(5): 457-66). Las propiedades pro-inflamatorias de las células T naive ante un estímulo (mitógeno o antígeno) están incrementadas, pudiendo contribuir al estado inflamatorio crónico de bajo grado asociado a la obesidad; y, por el contrario, las células T previamente expuestas a antígenos presentan un defecto en la proliferación y secretan preferentemente citoquinas de tipo Th2. Todo ello explica la alta incidencia de infecciones en sujetos obesos y la falta de respuesta a vacunación y a infecciones mediada por células T de memoria (Karlsson et al., 2010. J Immunol, 184: 3127-33). La función de células T también es deficiente en diabéticos, mostrando reducida capacidad para proliferar en respuesta a un estímulo y para sintetizar IL2 (Chang y Shaio. 1995. Diabetes Res Clin Pract, 28(2): 137-46). 4.5 Efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 en la inflamación de tejidos periféricos.
A fin de determinar el efecto de la cepa objeto de la patente en la inflamación en tejidos periféricos asociada a la obesidad y enfermedades relacionadas (por ejemplo la diabetes), se determinó la concentración de citoquinas en tejido adiposo y páncreas, tras su homogeneización con un politrón, por ELISA. La obesidad incrementa la concentración de TNF-α y reduce la de IL-10 en tejido adiposo. Sin embargo, en sujetos obesos la cepa objeto de la patente reduce la concentración de TNF-α y aumenta la síntesis de la citoquina antiinflamatoria IL-10 en el tejido adiposo, reduciendo la inflamación. La síntesis de TNF-a está incrementada en la obesidad y otras patologías y contribuye al desarrollo de resistencia a la insulina y a la leptina en los tejidos, inhibiendo sus efectos anorexigénicos (reducción de la sensación de hambre) y su función en la regulación del peso corporal y el metabolismo de los lípidos y la glucosa (Ejemplo 4; Tabla 3). Además, en sujetos obesos la cepa objeto de la patente reduce la concentración de TNF-α en el páncreas lo que puede mejorar la función de este órgano en la regulación del metabolismo de glucosa (Ejemplo 4, Tabla 3).
TABLA 3. Concentración de citoquinas en tejido adiposo y páncreas de ratones alimentados con una dieta rica en grasa o estándar, suplementada o no con la cepa B. uniformis CECT 7771.
Tejido *Grupos experimentales
**Test de la t de
SD HFD HFD+B
Student
Valor-P Valor P
Concentración de citoquinas
SD vs HFD vs (Media ± sd pg/ml)
HFD HFD+B
Adiposo
TNF-a 1098,1 ±208,5 3075,7±282,8 1628,6±407,8 <0,001 0,001
IL-10 32089,5±2936,5 6578,8±890,3 11178,0±1013,5 <0,001 0,005
Páncreas
TNF-a 8698,7±822,5 10693,6±1481 ,1 2780,3±360,6 0,260 0,001
IL-10 21894,9±1952,3 11131 ,7±2704,3 10037,9±759,8 0,005 0,700
*SD: grupo con dieta estándar (control) (n=6); HFD: grupo con dieta rica en grasas (n=6); HFD+B: grupo con HFD y suplementado oralmente con 5,0 x108 CFU/día de B uniformis CECT 7771, durante 7 semanas (n=6). La concentración de citoquinas en los distintos tejidos se determinó tras el sacrificio por ELISA.
"""Diferencias significativas establecidas mediante ANOVA y el test de la t de Student para comparaciones entre dos medias a un valor de P<0.050. 4.6. Evaluación del efecto de la administración de la cepa B. uniformis CECT 7771 en la composición de la microbiota intestinal y sus propiedades inflamatorias.
Para evaluar el efecto de la cepa CECT 7771 en la composición de la microbiota se tomaron muestras de heces al final de la intervención a partir de los distintos grupos experimentales de ratones, se realizó una dilución 1 : 10 (w/v) en PBS (pH 7.2) y, tras homogeneizar, se extrajo el ADN por medio del sistema comercial QIAamp DNA stool Mini kit (Qiagen, Hilden, Germany). La cuantificación de la concentración de cada grupo bacteriano se realizó por PCR a tiempo real utilizando el equipo ABI PRISM 7000-PCR sequence detection system (Applied Biosystems, UK). La mezcla de reacción se compuso de 25 de SYBR® Green PCR Master Mix (SuperArray Bioscience Corporation, USA), 1 de cada primer a una concentración de 0.25 μΜ y 1 μΙ_ de DNA. Las concentraciones de cada grupo bacteriano se determinaron utilizando los valores Ct obtenidos para cada caso problema. Las curvas estándar se construyeron con diluciones de plásmidos en los que se había clonado el fragmento amplificado por las PCR específicas de cada grupo bacteriano. Los resultados se expresaron en n° de copias del gen del 16S rRNA por gramo de heces.
Los resultados demuestran que la cepa B. uniformis CECT 7771 restablece parcialmente la composición de la microbiota intestinal, normalizando las alteraciones asociadas al sobrepeso y/o la obesidad y el efecto inflamatorio que causan estas alteraciones (FIG 7), así como las alteraciones asociadas a otras condiciones patológicas no asociadas únicamente al sobrepeso y/o la obesidad. La administración de la cepa de la invención a un modelo de obesidad aumenta el número de Bacteroides spp. y del grupo C. coccoides y reduce el de Bifidobacterium spp. Estos cambios en la composición de la microbiota se traducen adicionalmente en una reducción de las propiedades pro-inflamatorias de la misma. Tanto en macrófagos como en células dendríticas, la microbiota de los animales obesos a los que se les administra la cepa induce menor síntesis de la citoquinas pro- inflamatorias, como el TNF-α, que la de los animales obesos a los que no se les administra la cepa (Ejemplo 4; FIG. 7). Las alteraciones de la microbiota intestinal se consideran uno de los posibles estímulos inflamatorios causantes de aumento de peso, resistencia a insulina, obesidad y diabetes (Cani y Delzenne 2009. Curr Opin Pharmacol., 9(6): 737-43), además, dichas alteraciones causan otro tipo de condiciones patológicas. La cepa CECT 7771 también induce cambios en la microbiota de animales delgados aumentando por ejemplo la concentración de Bifidobacterium spp., y reduciendo su capacidad para inducir TNF-α en macrófagos y por tanto provocar inflamación. TABLA 4. Ejemplo del efecto de la administración de la cepa CECT 7771 composición de la microbiota intestinal de animales obesos y normopeso.
''Grupos experimentales
SD HFD SD+B HFD+B
Grupo bacteriano aMediana aMediana Valor- aMediana Valor- aMediana Valor-
(IQR) (IQR) Pb (IQR) Pc (IQR) Pd
10,8 10,5 11,4 11,0
Bacterias totales Hnc ' , 1W1Í1, ' n m 00,,009922 /< ' c, 00,,001100** ,„η 7 ' 0,629
(10,6-11,1) (10,3-10,8) (11,3-11,6) (10,7-11,2)
9,9 9,4 9,6 9,7
0,040* 0,470
(9,4-10,5) (9,2-9,5) (9,3-9,8) (9,5-10,1)
8,4 8,7 9,3 9,0
0,674 0,004*
(8,3-8,6) (8,3-9,0) (9,1 -9,5) (8,8-9,3)
Bifidobacterium 7,1 6,0 8,1 7,5
0,004* 0,013* 0,004* spp. (6,8-7,2) (5,9-6,3) (7,9-8,3) (7,0-7,7)
8,4 7,6 9,6 8,5
C. leptum grupo ,Q o «λ n ' v ^ 00,,000044** ,Q αλ 00,,000044** ,Q 7, 0,936
(8,3-8,6) (7,5-7,7) (9,4-9,8) (8,1 -8,7)
9,1 8,4 9,9 9,6
0,016* 0,054
(8,6-9,3) (8,2-8,5) (9,4-10,0) (9,4-9,7)
7,3 8,1 8,1 7,9
Enterobacteriaceae {12_71) {J Q L Q 2) 00,,001199** {1 Q_Q 2) 00,,005522 (75:8 Q) 0,029*
(7,2-7,7) (7,8-8,2) (7,6-8,2) (7,5-8,0)
*SD: grupo con dieta estándar y placebo (control) (n=6); SD+B: grupo con dieta estándar y una dosis diaria de 5,0 x108 UFC/día B. uniformis CECT 7771 (n=6); HFD: grupo con dieta rica en grasas y placebo (n=6); HFD+B: grupo con dieta rica en grasas y una dosis diaria de 5.,0x108 UFC/día B. uniformis CECT 7771 (n=6). El tratamiento se mantuvo durante 7 semanas y el placebo o la bacteria se administraron diariamente con sonda. aLos resultados están expresados como la mediana (rango intercuartil) del número de copias del gen del ARNr 16S amplificado con cebadores específicos de cada grupo bacteriano por gramo de heces. "Diferencias significativas entre los grupos SD y HFD. cDiferencias significativas entre los grupos SD y SD+B. d Diferencias significativas entre los grupos HFD y HFD+B* Se han establecido diferencias significativas a valores P<0.050, aplicando el test de Mann-Whitney U.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Cepa de Bacteroides uniformis con número de depósito CECT 7771.
2. Cepa derivada de la cepa según la reivindicación 1.
3. Cepa derivada según la reivindicación 2, donde dicha cepa es un muíante genéticamente modificado.
4. Cepa según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicha cepa está en forma de células viables o en forma de células no viables.
5. Componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones, obtenible a partir de la cepa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
6. Composición que comprende la cepa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones, según la reivindicación 5; o cualquier combinación de los mismos.
7. Composición según la reivindicación 6, donde además comprende al menos un microorganismo adicional y/o sus componentes celulares, metabolitos o moléculas secretadas, o cualquier combinación de los mismos.
8. Composición según la reivindicación 7, donde el microorganismo adicional es una bacteria intestinal o una bacteria láctica.
9. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, donde además comprende al menos un componente bioactivo.
10. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, donde dicha composición es una composición farmacéutica.
1 1. Composición según la reivindicación 10, donde además comprende, al menos, un vehículo y/o un excipiente farmacéuticamente aceptables.
12. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 1 1 , donde dicha composición se presenta en una forma adaptada a la administración oral, sublingual, nasal, intracatecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica, inhalada o parenteral.
13. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, donde dicha composición es una composición nutritiva.
14. Composición según la reivindicación 13, donde dicha composición se selecciona entre un alimento, un suplemento, un nutracéutico, un probiótico o un simbiótico.
15. Composición según la reivindicación 14, donde dicho alimento se selecciona de la lista que comprende: producto lácteo, producto vegetal, producto cárnico, aperitivo, chocolate, bebida o alimento infantil.
16. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 15, donde dicha composición tiene una concentración de la cepa de entre 103 y 1014 unidades formadoras de colonias (ufe) por gramo o mililitro de composición final.
17. Uso de la cepa según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; o del componente celular, metabolito, molécula secretada o de cualquiera de sus combinaciones, según la reivindicación 5, para la fabricación de una composición farmacéutica, de un medicamento o de una composición nutritiva.
18. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de hipertrofia de adipocitos.
19. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de esteatosis hepática o hígado graso.
20. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de dislipemia.
21. La cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas o una combinación de los mismos; o la composición, según la reivindicación 20, donde la dislipemia es una hipertrigliceridemia, una hipercolesterolemia o una combinación de las mismas.
22. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad cardiovascular.
23. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de hiperglucemia.
24. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de resistencia a insulina y/o diabetes.
25. La cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas o una combinación de los mismos; o la composición, según la reivindicación 24, donde la diabetes es diabetes Mellitus tipo 2 o diabetes gestacional.
26. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de síndrome metabólico.
27. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de hipertensión.
28. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para mejorar la función del sistema inmunitario de un sujeto, respecto de un control no tratado.
29. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para reducir la inflamación de tejidos periféricos.
30. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para su uso en el tratamiento y/o prevención de una infección.
31. Una cepa de Bacteroides uniformis; o uno de sus componentes celulares, metabolitos, moléculas secretadas, o una combinación de los mismos; o una composición que comprenda alguno de los anteriores, para restablecer la composición de la microbiota intestinal y reducir la concentración de potenciales patógenos.
32. La cepa según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o de cualquiera de sus combinaciones, según la reivindicación 5; o la composición según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 16, para uso en medicina.
33. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de sobrepeso u obesidad.
34. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de hipertrofia de adipocitos.
35. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición; según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de esteatosis hepática o hígado graso.
36. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de dislipemia.
37. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 36, donde la dislipemia es una hipertrigliceridemia, una hipercolesterolemia o una combinación de las mismas.
38. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición; según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad cardiovascular.
39. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de hiperglucemia y/o una enfermedad asociada.
40. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de resistencia a insulina y/o diabetes.
41. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 40, donde la diabetes es diabetes Mellitus tipo 2 o diabetes gestacional.
42. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de síndrome metabólico.
43. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de hipertensión.
44. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para mejorar la función del sistema inmunitario de un sujeto, respecto de un control no tratado.
45. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para reducir la inflamación de tejidos periféricos.
46. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 32, para su uso en el tratamiento y/o prevención de una infección.
47. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición; según la reivindicación 32, para restablecer la composición de la microbiota intestinal y reducir la concentración de potenciales patógenos en un sujeto, respecto de un control no tratado.
48. La cepa; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o cualquiera de sus combinaciones; o la composición, según la reivindicación 47, donde el sujeto es un sujeto con sobrepeso o un sujeto con obesidad.
49. Un método para mejorar el aspecto corporal de un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto la cepa según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; o el componente celular, metabolito, molécula secretada o de cualquiera de sus combinaciones, según la reivindicación 5; o una composición nutritiva según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, para reducir la ganancia de peso corporal o provocar la pérdida de peso con finalidad cosmética.
PCT/ES2013/070309 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas WO2013175038A1 (es)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES13793926T ES2764785T3 (es) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas
EP13793926.0A EP2889371B1 (en) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides cect 7771 and the use thereof in the prevention and treatment of excess weight, obesity and metabolic and immunological alterations
US14/403,930 US9636366B2 (en) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides CECT 7771 and the use thereof in the prevention and treatment of excess weight, obesity and metabolic and immunological alterations
PL13793926T PL2889371T3 (pl) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides cect 7771 i jego zastosowanie do zapobiegania i leczenia nadwagi, otyłości oraz zaburzeń metabolicznych i immunologicznych
CA2913391A CA2913391C (en) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides cect 7771 and the use thereof in the prevention and treatment of excess weight, obesity and metabolic and immunological alterations
US15/458,677 US20170189456A1 (en) 2012-05-25 2017-03-14 Bacteroides CECT 7771 and the Use Thereof in the Prevention and Treatment of Excess Weight, Obesity and Metabolic and Immunological Alterations

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201230796A ES2436251B1 (es) 2012-05-25 2012-05-25 Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas.
ESP201230796 2012-05-25

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US14/403,930 A-371-Of-International US9636366B2 (en) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides CECT 7771 and the use thereof in the prevention and treatment of excess weight, obesity and metabolic and immunological alterations
US15/458,677 Division US20170189456A1 (en) 2012-05-25 2017-03-14 Bacteroides CECT 7771 and the Use Thereof in the Prevention and Treatment of Excess Weight, Obesity and Metabolic and Immunological Alterations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013175038A1 true WO2013175038A1 (es) 2013-11-28

Family

ID=49623202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2013/070309 WO2013175038A1 (es) 2012-05-25 2013-05-16 Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas

Country Status (6)

Country Link
US (2) US9636366B2 (es)
EP (1) EP2889371B1 (es)
CA (1) CA2913391C (es)
ES (2) ES2436251B1 (es)
PL (1) PL2889371T3 (es)
WO (1) WO2013175038A1 (es)

Cited By (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103865844A (zh) * 2014-02-18 2014-06-18 浙江省农业科学院 单形拟杆菌l8及在降解琼胶或琼胶寡糖中的应用
WO2016049879A1 (zh) * 2014-09-30 2016-04-07 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
WO2016049883A1 (zh) * 2014-09-30 2016-04-07 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
WO2016185469A1 (en) * 2015-05-21 2016-11-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Bacterial populations for promoting health
US10149867B2 (en) 2012-02-29 2018-12-11 The General Hospital Corporation Compositions of microbiota and methods related thereto
EP3379934A4 (en) * 2015-11-24 2019-06-19 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center METHOD AND COMPOSITIONS FOR IDENTIFYING AND TREATING PATIENTS WITH RISK TO COLIT IN CONNECTION WITH CHECKPOINT BLOCKADE THERAPY
US10361003B2 (en) 2014-04-28 2019-07-23 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and apparatus for predicting response to food
US10471108B2 (en) 2015-11-20 2019-11-12 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10485830B2 (en) 2016-12-12 2019-11-26 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10493112B2 (en) 2015-06-15 2019-12-03 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10500237B2 (en) 2015-06-15 2019-12-10 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10583158B2 (en) 2016-03-04 2020-03-10 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610548B2 (en) 2016-07-13 2020-04-07 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610550B2 (en) 2015-11-20 2020-04-07 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10668116B2 (en) 2014-10-31 2020-06-02 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US10736926B2 (en) 2015-06-15 2020-08-11 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10780134B2 (en) 2015-06-15 2020-09-22 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10851137B2 (en) 2013-04-10 2020-12-01 4D Pharma Research Limited Polypeptide and immune modulation
US10973872B2 (en) 2014-12-23 2021-04-13 4D Pharma Research Limited Pirin polypeptide and immune modulation
US10987387B2 (en) 2017-05-24 2021-04-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strain
US11007233B2 (en) 2017-06-14 2021-05-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US11123378B2 (en) 2017-05-22 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11123379B2 (en) 2017-06-14 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11224620B2 (en) 2016-07-13 2022-01-18 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US11266698B2 (en) 2011-10-07 2022-03-08 4D Pharma Research Limited Bacterium for use as a probiotic for nutritional and medical applications
US20220072064A1 (en) * 2018-12-26 2022-03-10 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Holdermanella sp. bacterium and use thereof
US11389493B2 (en) 2015-06-15 2022-07-19 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11583558B2 (en) 2017-08-30 2023-02-21 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treatment of microbiome-associated disorders
US11723933B2 (en) 2014-12-23 2023-08-15 Cj Bioscience, Inc. Composition of bacteroides thetaiotaomicron for immune modulation
EP3692813B1 (en) * 2017-10-03 2023-12-13 Keio University Composition having physical strength improving effect and/or anti-fatigue effect

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3062396A1 (fr) * 2017-01-27 2018-08-03 Ninapharm Composition de metabolites issus de la fermentation d'ingredients bio-sources a partir de microbiotes de centenaires ayant des proprietes anti-inflammatoires et d'augmentation de l'activite mitochondriale
WO2019041141A1 (zh) 2017-08-29 2019-03-07 深圳华大基因研究院 解纤维素拟杆菌在制备预防和/或治疗脂质代谢相关疾病制剂中的应用
EP3758723A1 (en) * 2018-03-01 2021-01-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for prognosing and treating metabolic diseases
MX2022004635A (es) * 2019-10-21 2022-05-10 Biofermin Pharmaceutical Co Ltd Agente reductor de toxina uremica.
WO2021081247A1 (en) * 2019-10-22 2021-04-29 Cornell University Microbiota based therapies to promote mental health
ES2886646B2 (es) * 2020-06-17 2022-06-22 Consejo Superior Investigacion Cepa del genero bacteroides para su uso en el tratamiento y/o prevencion de trastornos alimentarios
CN113355271B (zh) * 2021-08-10 2021-11-09 中国农业大学 提高乳酸菌酸胁迫抗性的方法及其应用
WO2024058984A2 (en) * 2022-09-16 2024-03-21 MarvelBiome, Inc. Methods and uses of microbiome compositions, components, or metabolites for treating insulin-associated diseases
CN117045686B (zh) * 2023-10-08 2024-02-13 首都医科大学附属北京友谊医院 解纤维素拟杆菌在制备药物中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008076696A2 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Washington University In St. Louis The gut microbiome as a biomarker and therapeutic target for treating obesity or an obesity related disorder
WO2009055362A1 (en) * 2007-10-26 2009-04-30 Moore Brenda E Probiotic compositions and methods for inducing and supporting weight loss
EP2359838A1 (fr) * 2010-02-02 2011-08-24 Aragan Préparation destinée à traiter l`excès pondéral et les désordres associés et applications de ladite préparation
CA2810698A1 (en) * 2010-09-09 2012-03-15 Meiji Co., Ltd. Aryl hydrocarbon receptor-activating probiotics for preventing inflammation

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008076696A2 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Washington University In St. Louis The gut microbiome as a biomarker and therapeutic target for treating obesity or an obesity related disorder
WO2009055362A1 (en) * 2007-10-26 2009-04-30 Moore Brenda E Probiotic compositions and methods for inducing and supporting weight loss
US20090110664A1 (en) 2007-10-26 2009-04-30 Moore Brenda E Probiotic compositions and methods for inducing and supporting weight loss
EP2359838A1 (fr) * 2010-02-02 2011-08-24 Aragan Préparation destinée à traiter l`excès pondéral et les désordres associés et applications de ladite préparation
CA2810698A1 (en) * 2010-09-09 2012-03-15 Meiji Co., Ltd. Aryl hydrocarbon receptor-activating probiotics for preventing inflammation

Non-Patent Citations (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALTSCHUL ET AL., ALGORITHM, J. MOL 1990 BIOL, vol. 215, 1990, pages 403 - 410
CANI Y DELZENNE, CURR OPIN PHARMACOL., vol. 9, no. 6, 2009, pages 737 - 43
CHANG Y SHAIO, DIABETES RES CLIN PRACT, vol. 28, no. 2, 1995, pages 137 - 46
DELAHOOKE ET AL.: "Tumor necrosis factor induction by an aqueous phenol-extracted lipopolysaccharide complex from Bacteroides species.", INFECTION AND IMMUNITY, vol. 63, no. 3, 1995, pages 840 - 846, XP055233594 *
FAVIER, APPL. ENVIRON. MICROBIO!, vol. 68, 2002, pages 219 - 22
GAUFFIN ET AL.: "Bacteroides uniformis CECT 7771 Ameliorates Metabolic and Immunological Dysfunction in Mice with High-Fat-Diet Induced Obesity.", PLOS ONE, vol. 7, no. 7, July 2012 (2012-07-01), pages 1 - 16, XP055233593 *
GERHARD ET AL., APPL. ENVIRON. MICROBIO/., vol. 67, 2001, pages 504 - 513
GEROZISSIS K., EUR J PHARMACOL., vol. 490, no. 1-3, 2004, pages 59 - 70
KARLSSON ET AL., J IMMUNOL, vol. 184, 2010, pages 3127 - 33
KARLSSON ET AL., J IMMUNOL., vol. 184, 2010, pages 3127 - 33
KONTUREK ET AL., J PHYSIOL PARMACOL., vol. 55, 2004, pages 137 - 154
LA CAVA A; MATARESE G.: "The weight of leptin in immunity", NAT REV IMMUNOL., vol. 4, no. 5, May 2004 (2004-05-01), pages 371 - 9
LEY ET AL., NATURE, vol. 444, 2006, pages 1022 - 1023
MACIA ET AL., GENES NUTR., vol. 1, 2006, pages 189 - 212
MACIA ET AL., J IMMUNOL., vol. 177, no. 9, 2006, pages 5997 - 6006
MARHOFFER ET AL., DIABETES CARE, vol. 15, no. 2, 1992, pages 256 - 60
MUSSO ET AL., HEPATOLOGY, vol. 52, 2010, pages 79 - 104
NADAL ET AL., INT J OBES., vol. 33, no. 7, 2008, pages 758 - 67
SAMUEL Y GORDON, PROC NATI ACAD SCI U S A., vol. 103, no. 26, 27 December 2005 (2005-12-27), pages 10011 - 6
SANCHEZ ET AL., APPL ENVIRON MICROBIOL., vol. 77, no. 15, 2011, pages 5316 - 23
SANZ ET AL., PROC NUTR SOC, vol. 14, 2010, pages 1 - 8
SATOKARI, APPL. ENVIRON. MICROBIOL., vol. 67, 2001, pages 504 - 513
TILG Y MOSCHEN, NAT REV IMMUNOL., vol. 6, 2006, pages 772 - 783
VARADY ET AL., METABOLISM, vol. 58, 2009, pages 1096 - 101
VERWAERDE ET AL., SCAND J IMMUNOL., vol. 64, no. 5, 2006, pages 457 - 66
ZHOU ET AL., PROC NATI ACAD SCI USA, vol. 106, no. 26, 2009, pages 10740 - 5

Cited By (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11266698B2 (en) 2011-10-07 2022-03-08 4D Pharma Research Limited Bacterium for use as a probiotic for nutritional and medical applications
US10729732B2 (en) 2012-02-29 2020-08-04 Ethicon Endo Surgery, Inc. Compositions of microbiota and methods related thereto
US10149867B2 (en) 2012-02-29 2018-12-11 The General Hospital Corporation Compositions of microbiota and methods related thereto
US10149870B2 (en) 2012-02-29 2018-12-11 The General Hospital Corporation Compositions of microbiota and methods related thereto
US11590176B2 (en) 2012-02-29 2023-02-28 Johnson & Johnson Consumer Inc. Compositions of microbiota and methods related thereto
US10851137B2 (en) 2013-04-10 2020-12-01 4D Pharma Research Limited Polypeptide and immune modulation
US11414463B2 (en) 2013-04-10 2022-08-16 4D Pharma Research Limited Polypeptide and immune modulation
CN103865844B (zh) * 2014-02-18 2015-12-09 浙江省农业科学院 单形拟杆菌l8及在降解琼胶或琼胶寡糖中的应用
CN103865844A (zh) * 2014-02-18 2014-06-18 浙江省农业科学院 单形拟杆菌l8及在降解琼胶或琼胶寡糖中的应用
US10361003B2 (en) 2014-04-28 2019-07-23 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and apparatus for predicting response to food
US10923230B2 (en) 2014-04-28 2021-02-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and apparatus for predicting response to food
US11610681B2 (en) 2014-04-28 2023-03-21 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and apparatus for predicting response to food
EP3202891A4 (en) * 2014-09-30 2018-05-30 Ruijin Hospital Affiliated To Shanghai Jiao Tong U Uses of bacteroides in treatment or prevention of obesity-related diseases
CN107002023A (zh) * 2014-09-30 2017-08-01 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
US10350248B2 (en) 2014-09-30 2019-07-16 Ruijin Hospital Affiliated To Shanghai Jiao Tong University School Of Medicine Uses of bacteroides in treatment or prevention of obesity and obesity-related diseases
WO2016049879A1 (zh) * 2014-09-30 2016-04-07 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
CN107002022A (zh) * 2014-09-30 2017-08-01 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
CN107002023B (zh) * 2014-09-30 2021-04-20 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
WO2016049883A1 (zh) * 2014-09-30 2016-04-07 上海交通大学医学院附属瑞金医院 拟杆菌在治疗或预防肥胖相关疾病中的用途
US11364270B2 (en) 2014-10-31 2022-06-21 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US10668116B2 (en) 2014-10-31 2020-06-02 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US10675312B2 (en) 2014-10-31 2020-06-09 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US11278580B2 (en) 2014-10-31 2022-03-22 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US11213556B2 (en) 2014-10-31 2022-01-04 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US10842830B2 (en) 2014-10-31 2020-11-24 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US10842831B2 (en) 2014-10-31 2020-11-24 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US11931387B2 (en) 2014-10-31 2024-03-19 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
US11723933B2 (en) 2014-12-23 2023-08-15 Cj Bioscience, Inc. Composition of bacteroides thetaiotaomicron for immune modulation
US10973872B2 (en) 2014-12-23 2021-04-13 4D Pharma Research Limited Pirin polypeptide and immune modulation
WO2016185469A1 (en) * 2015-05-21 2016-11-24 Yeda Research And Development Co. Ltd. Bacterial populations for promoting health
US11273185B2 (en) 2015-06-15 2022-03-15 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10500237B2 (en) 2015-06-15 2019-12-10 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11331352B2 (en) 2015-06-15 2022-05-17 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10493112B2 (en) 2015-06-15 2019-12-03 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10780134B2 (en) 2015-06-15 2020-09-22 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10744167B2 (en) 2015-06-15 2020-08-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11433106B2 (en) 2015-06-15 2022-09-06 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10736926B2 (en) 2015-06-15 2020-08-11 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11040075B2 (en) 2015-06-15 2021-06-22 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10864236B2 (en) 2015-06-15 2020-12-15 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11389493B2 (en) 2015-06-15 2022-07-19 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11058732B2 (en) 2015-11-20 2021-07-13 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10471108B2 (en) 2015-11-20 2019-11-12 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10610550B2 (en) 2015-11-20 2020-04-07 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11045506B2 (en) 2015-11-24 2021-06-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Methods and compositions for identifying and treating subjects at risk for checkpoint blockade therapy associated colitis
AU2016361499B2 (en) * 2015-11-24 2021-11-04 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Methods and compositions for identifying and treating subjects at risk for checkpoint blockade therapy associated colitis
EP3379934A4 (en) * 2015-11-24 2019-06-19 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center METHOD AND COMPOSITIONS FOR IDENTIFYING AND TREATING PATIENTS WITH RISK TO COLIT IN CONNECTION WITH CHECKPOINT BLOCKADE THERAPY
US10583158B2 (en) 2016-03-04 2020-03-10 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610549B2 (en) 2016-07-13 2020-04-07 4D Pharma Plc Composition comprising bacterial strains
US10610548B2 (en) 2016-07-13 2020-04-07 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10960031B2 (en) 2016-07-13 2021-03-30 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10967010B2 (en) 2016-07-13 2021-04-06 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US11224620B2 (en) 2016-07-13 2022-01-18 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10485830B2 (en) 2016-12-12 2019-11-26 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US11376284B2 (en) 2017-05-22 2022-07-05 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11382936B2 (en) 2017-05-22 2022-07-12 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11123378B2 (en) 2017-05-22 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10987387B2 (en) 2017-05-24 2021-04-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strain
US11007233B2 (en) 2017-06-14 2021-05-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US11660319B2 (en) 2017-06-14 2023-05-30 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11123379B2 (en) 2017-06-14 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11779613B2 (en) 2017-06-14 2023-10-10 Cj Bioscience, Inc. Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US11583558B2 (en) 2017-08-30 2023-02-21 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treatment of microbiome-associated disorders
EP3692813B1 (en) * 2017-10-03 2023-12-13 Keio University Composition having physical strength improving effect and/or anti-fatigue effect
US20220072064A1 (en) * 2018-12-26 2022-03-10 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Holdermanella sp. bacterium and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP2889371B1 (en) 2019-10-16
ES2436251A1 (es) 2013-12-27
CA2913391C (en) 2021-06-01
CA2913391A1 (en) 2013-11-28
ES2764785T3 (es) 2020-06-04
PL2889371T3 (pl) 2020-04-30
EP2889371A4 (en) 2016-03-16
EP2889371A1 (en) 2015-07-01
US9636366B2 (en) 2017-05-02
US20150216913A1 (en) 2015-08-06
ES2436251B1 (es) 2014-10-08
US20170189456A1 (en) 2017-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2764785T3 (es) Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas
ES2389547B1 (es) Bifidobacterium cect 7765 y su uso en la prevención y/o tratamiento del sobrepeso, la obesidad y patologías asociadas.
ES2908310T3 (es) Akkermansia pasteurizada para promover la pérdida de peso
US9750775B2 (en) Lactic acid bacterium-containing preparation
JP6843140B2 (ja) 肥満および関連する代謝障害を処置するためのビフィドバクテリウム・ロングム
ES2708450T3 (es) Bacterias ácido lácticas y bifidobacterias para tratar endotoxemia
EP2440217B1 (en) Nutrition for improving muscle strength in elderly
ES2807915T3 (es) Lactobacillus casei para el tratamiento de la obesidad y los trastornos metabólicos asociados
ES2763350B2 (es) Cepa de christensenella minuta y uso de la misma
US20100278795A1 (en) Lactic acid bacterium-containing preparation
CA3174352A1 (en) Compositions for metabolic health
AU2022312701A1 (en) Probiotic composition for the treatment of increased intestinal permeability
ES2763874B2 (es) Phascolarctobacterium faecium para su uso en la prevencion y tratamiento de la obesidad y sus comorbilidades
Fukasawa et al. Evaluation of Fermented Product, PS-B1, Obtained from Soybean Milk Using Lactic Acid Bacteria in a Stelic Animal Model (STAM?) of Nonalcoholic Steatohepatitis-A Preliminary Study.
ES2769628B2 (es) Bacteria de Holdemanella sp. y uso de la misma
TW201336989A (zh) 雙歧桿菌cect7765及彼於預防及/或治療過重、肥胖症及相關病徵之用途
PAONGPHAN et al. Characterization of probiotic lactic acid bacteria producing bile-salt hydrolase for development of fermented milk product
JP6785141B2 (ja) 基礎代謝亢進剤
Merra et al. Oral Communications

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13793926

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2013793926

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14403930

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2913391

Country of ref document: CA