WO2012121157A1 - 分離吸着キット、分離吸着装置及び分子の解析方法 - Google Patents

分離吸着キット、分離吸着装置及び分子の解析方法 Download PDF

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WO2012121157A1
WO2012121157A1 PCT/JP2012/055412 JP2012055412W WO2012121157A1 WO 2012121157 A1 WO2012121157 A1 WO 2012121157A1 JP 2012055412 W JP2012055412 W JP 2012055412W WO 2012121157 A1 WO2012121157 A1 WO 2012121157A1
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WO
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separation
gel
transfer film
adsorption
electrophoresis
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PCT/JP2012/055412
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English (en)
French (fr)
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真一 後藤
祐二 丸尾
英樹 木下
豊 鵜沼
Original Assignee
シャープ株式会社
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44743—Introducing samples

Definitions

  • the present invention relates to a separation adsorption kit, a separation adsorption apparatus using the separation adsorption kit, and a molecular analysis method using the separation adsorption kit.
  • gel electrophoresis As a technique for separating molecules to be analyzed by passing an electric current through a buffer solution through a separation medium, gel electrophoresis is used to differentiate molecules having a relatively large molecular weight, such as molecules in biological samples. It is widely used as a separation method based on this, and various methods and apparatuses have been developed so far for immobilizing and analyzing proteins or nucleic acids. For example, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis using an anionic surfactant sodium dodecyl sulfate (SDS) is widely used for protein separation. Western blotting is well known as a method for analyzing and identifying separated proteins.
  • SDS-polyacrylamide gel electrophoresis using an anionic surfactant sodium dodecyl sulfate (SDS) is widely used for protein separation.
  • Western blotting is well known as a method for analyzing and identifying separated proteins.
  • Western blotting is a method for identifying proteins by antigen-antibody reaction by immobilizing proteins separated by electrophoresis by transferring them from a gel to a transfer film that is an adsorbing member. These separation and identification methods are extremely excellent in terms of specificity and detection sensitivity, and are widely used in the medical, pharmaceutical, biochemical, and food fields as highly reliable analytical techniques.
  • the present invention has been made in view of the above circumstances, a separation adsorption kit capable of protecting the contact portion of the separation medium with the adsorption member until the use immediately after being attached to the apparatus, and a separation adsorption apparatus using the separation adsorption kit It is another object of the present invention to provide a molecular analysis method using the separation and adsorption kit.
  • the present invention relates to a separation medium for separating molecules to be analyzed by passing an electric current through a buffer solution, a separation tank storing the separation medium, and a porous adsorption member for adsorbing the separated molecules from the separation medium. And the separation tank has first and second openings for flowing current, and the adsorption member protects the exposed surface of the separation medium.
  • a separation adsorption kit is provided, wherein the adsorption member is arranged so that the protection portion is in close contact with the exposed surface of the separation medium in the second opening.
  • the present invention also provides a separation / adsorption kit characterized in that, in such a separation / adsorption kit, the protection part is connected to the adsorption member.
  • the present invention also provides a separation / adsorption kit characterized in that, in such a separation / adsorption kit, the protection part is attached to the adsorption member.
  • the present invention also provides a separation / adsorption kit characterized in that, in such a separation / adsorption kit, a part of the adsorption member is altered to form the protection part.
  • the present invention also provides a separation / adsorption kit, wherein the protection part is bonded to the second opening.
  • the present invention also provides a separation / adsorption kit, wherein a conductive medium that allows the molecules to pass through is provided between the second opening and the protection part. To do.
  • the present invention also provides a separation / adsorption device comprising such a separation / adsorption kit, further comprising a drive means for moving the adsorption member in the separation / adsorption kit. .
  • the present invention also provides a molecular analysis method using such a separation / adsorption kit, wherein the adsorption member is moved, the protection unit is moved from the second opening, and the separated molecules are separated from the separation medium.
  • a method for analyzing molecules comprising a step of adsorbing the adsorption member.
  • the separation adsorption kit that can protect the contact portion of the separation medium with the adsorption member immediately after use in the apparatus, the separation adsorption apparatus using the separation adsorption kit, and the separation adsorption kit are used.
  • a molecular analysis method can be provided.
  • FIG. 2 is a front view of a composite transfer film in the electrophoresis kit shown in FIG. 1. It is a schematic perspective view which illustrates the connection method with the drive means of the drive auxiliary member shown to FIG. It is a front view which shows the specific example of the comb used at the time of gel preparation.
  • the separation / adsorption kit adsorbs separated molecules from the separation medium, a separation medium that separates molecules to be analyzed by passing an electric current through a buffer, a separation tank that stores the separation medium, and the separation medium.
  • a separation adsorbing kit comprising a porous adsorbing member, wherein the separation tank has first and second openings for passing an electric current, and the adsorbing member exposes the separation medium.
  • a separation part according to the present invention wherein a protection part for protecting the surface is provided, and the adsorption member is arranged so that the protection part comes into close contact with the exposed surface of the separation medium in the second opening.
  • an electrophoresis kit can be exemplified.
  • Such an electrophoresis kit includes a gel filling tank and a composite transfer film.
  • the gel filling tank is a part for separating the molecule to be analyzed from the sample by gel electrophoresis, the downstream end of the electrophoresis is opened, and the filled gel is exposed at the opening.
  • the composite transfer film includes a transfer film and a protective sheet connected on the end side. The transfer film transfers the separated molecules from the gel, and the protective sheet adheres to the exposed surface of the gel at the opening and covers the gel for protection.
  • the electrophoresis kit will be described in detail with reference to the drawings.
  • the molecule to be analyzed is usually a polymer compound, and is preferably a biological compound or a biologically relevant polymer compound, such as a protein, deoxyribonucleic acid (DNA), ribonucleic acid (RNA), peptide nucleic acid, Examples include sugars and complexes formed by combining or interacting two or more of these. It may be naturally derived, artificially synthesized, or a complex of these. In the case of natural origin, it may be derived from any of animals, plants and microorganisms.
  • FIG. 1 is a schematic view showing a specific example of an electrophoresis kit according to the present embodiment, wherein (a) is a perspective view, (b) is a cross-sectional view of the gel filling tank of FIG. (C) is an exploded view of a gel filling tank.
  • the electrophoresis kit 1 shown here includes a gel filling tank 2 filled with a gel, and a composite transfer film 3 in which a protective sheet 32 is connected to a transfer film 31.
  • the gel filling tank 2 includes an upper plate 21, a lower plate 22, and a spacer 23. More specifically, the two spacers 23 are disposed at the peripheral portions of the upper plate 21 and the lower plate 22 facing each other, with the upper surface thereof being in close contact with the upper plate 21 and the lower surface thereof being respectively in contact with the lower plate 22.
  • a gel filling part 20 for filling the gel for electrophoresis is formed.
  • the gel is filled (stored) in the gel filling unit 20, but is not shown in FIG.
  • the gel filling tank 2 has the 1st opening part 2a, the 2nd opening part 2b, and the 3rd opening part 2c.
  • the first opening 2a is located on the upstream side of the migration
  • the second opening 2b is located on the downstream side of the migration.
  • upstream migration refers to upstream in the migration direction of the sample
  • downstream migration refers to downstream in the migration direction of the sample. Accordingly, the downstream end of the migration is a site for transferring the molecules separated from the sample to the transfer film.
  • the gel filling tank 2 and the protective sheet 32 are separately shown in order to make the configuration of the electrophoresis kit 1 easy to understand. However, as will be described later, these are the second openings. The part 2b is in close contact with the exposed surface of the gel.
  • the upper plate 21 is provided with a third opening 2c in the vicinity of the peripheral edge along the peripheral edge on the first opening 2a side.
  • the 3rd opening part 2c corresponds to the injection port of the raw material for gel mentioned later.
  • the third longitudinal direction of the length Y 11 of the opening 2c is same as either to the long side direction of the length of the first opening 2a, or longer is preferred.
  • the size of the upper plate 21 may be appropriately adjusted according to the number and amount of samples to be analyzed. However, from the viewpoint of handleability, the length of the long side (the length in the direction orthogonal to the migration direction). ) Y 1 is preferably 40 to 80 mm, the short side length (length in the migration direction) X 1 is preferably 20 to 40 mm, and the thickness Z 1 is 0.5 to 2 mm. Is preferred.
  • the lower plate 22 is the same as the upper plate 21 except that the third opening 2c is not provided, and its shape (except that the third opening 2c is not provided) and size are large.
  • the height is preferably the same as the upper plate 21 to be combined.
  • the spacer 23 has a plate shape or a rod shape, and may be adjusted in size so that the gel filling portion 20 has a desired width.
  • the length of the long sides (the length of the direction of electrophoresis) X 2 is in the range similar to the X 1 is preferably the same as X 1 in combination upper plate 21 preferable.
  • the length of the short side (the length in the direction perpendicular to the migration direction) Y 2 is preferably 2 to 5 mm.
  • the thickness Z 2 is the same range as with the Z 1.
  • the material of the upper plate 21, the lower plate 22 and the spacer 23 only needs to have insulating properties, such as glass such as quartz glass; ceramics; acrylic resin, polycarbonate, polystyrene, polyethylene terephthalate (PET), polyvinyl chloride, etc.
  • a synthetic resin can be exemplified.
  • glass is preferable because it has hydrophilicity and is excellent in flatness and heat dissipation.
  • the upper board 21, the lower board 22, and the spacer 23 should just be produced by a well-known method according to the material.
  • the gel filling tank 2 is preferably prepared by fixing the upper plate 21, the lower plate 22 and the spacer 23 to each other by a well-known method such as a method of using an adhesive or a method of engagement.
  • the gel filling tank 2 is merely illustrated as a preferable example in the electrophoresis kit 1, and the gel filling tank in the present embodiment is not limited thereto, and the molecule to be analyzed can be separated from the sample by gel electrophoresis. Any material can be used as long as it can be transferred.
  • the composite transfer film 3 is obtained by connecting a transfer film 31 and a protective sheet 32 on each end side.
  • FIG. 2 shows a front view of the composite transfer film 3 in the electrophoresis kit 1.
  • Reference numeral 30 a indicates a connecting portion (hereinafter abbreviated as “first connecting portion”) between the transfer film 31 and the protective sheet 32.
  • the end portion side of the protective sheet 32 opposite to the first connecting portion 30 a is connected to the end portion side of the drive assisting member 33.
  • Reference numeral 30 b indicates a connecting portion (hereinafter abbreviated as “second connecting portion”) between the protective sheet 32 and the drive assisting member 33.
  • the transfer film 31 is for transferring and fixing molecules separated from the sample by electrophoresis from the gel.
  • the protective sheet 32 is in close contact with the exposed surface at the downstream end of electrophoresis until the start of electrophoresis, thereby protecting the gel.
  • the driving assisting member 33 connects driving means for moving the transfer film 31 and the protective sheet 32 in the connecting direction in the electrophoretic migration.
  • the connecting direction (longitudinal direction of the composite transfer film 3) of the transfer film 31, the protective sheet 32, and the drive assisting member 33 matches the migration direction of the sample (the arrow direction in FIGS. 1 and 2). And moved in this direction during electrophoresis.
  • the material of the transfer film 31 is not particularly limited as long as it is a porous material capable of adsorbing molecules, and may be a known material.
  • a preferable material is a synthetic resin such as polyvinylidene fluoride (PVDF) or nitrocellulose.
  • PVDF polyvinylidene fluoride
  • nitrocellulose a synthetic resin such as polyvinylidene fluoride (PVDF) or nitrocellulose.
  • PVDF polyvinylidene fluoride
  • Immobilon PVDF transfer membrane manufactured by Millipore
  • the size of the transfer film 31 may be set according to the size of the gel filling tank 2 to be combined.
  • Y 3 short side length of is preferably at least equivalent for the same length of the gel-filled portion 20, from the viewpoint of handling property, it is preferably the same range as the Y 1.
  • X 3 (the length in the moving direction of the composite transfer film 3) the length of the long side, depending on the moving speed at the time of electrophoresis of the transfer film 31 is preferably 80 ⁇ 120 mm.
  • the thickness of the transfer film 31 is preferably 0.05 to 2 mm.
  • the material and thickness of the protective sheet 32 are preferably selected as appropriate according to the assumed gel storage conditions until electrophoresis is performed. For example, a method of selecting so as to have one or more properties of gas barrier properties, liquid barrier properties, light barrier properties, and heat barrier properties.
  • the protective sheet 32 may be liquid-impermeable. Further, in the gel during storage, the protective sheet 32 has a thermal conductivity lower than the thermal conductivity of water in order to suppress deterioration due to a change in environmental temperature (temperature outside the electrophoresis kit 1). More specifically, the thermal conductivity is preferably less than 0.6 W / (m ⁇ K). Moreover, in order to suppress deterioration due to light in the gel during storage, the protective sheet 32 preferably has a light transmittance of 40% or less, more preferably 20% or less, and less than 10%. It is particularly preferred.
  • permeability of ultraviolet light is the said range especially.
  • a protective sheet 32 having a low light transmittance a colored sheet is preferable, and a colored opaque sheet is more preferable.
  • Examples of the material for realizing liquid impermeability, thermal conductivity, or light transmittance as described above include polyethylenes such as low density polyethylene (LDPE), medium density polyethylene, and high density polyethylene (HDPE); polypropylene ( Polypropylene (PS); Polyesters such as polyethylene terephthalate (PET), polybutylene terephthalate (PBT), polytrimethylene terephthalate (PTT), polyethylene naphthalate (PEN), polybutylene naphthalate (PBN); polyvinyl chloride (PVC); polyvinylidene chloride (PVDC); acrylic resin; metallocene polyethylene ethylene / vinyl acetate copolymer; unstretched K (PVDC) coat resin; K coat polyester stretched nylon; K coat nylon; unstretched nylon vinylon ( Polyvinyl alcohol); cellophane; polyacrylonitrile (PAN); polyurethane; natural rubber; acrylic rubber (ACM, ANM), nitrile rubber (NBR), isopren
  • the protective sheet 32 may be either a single layer or a plurality of layers.
  • the materials of all layers may be the same, some may be different, or all may be different. And when at least one part is different, the combination of the material of these multiple layers can be set arbitrarily. For example, a plurality of materials having different properties such as a material having low liquid permeability, a material having low thermal conductivity, and a material having low light transmittance may be combined.
  • the thickness of the protective sheet 32 may be appropriately adjusted according to the material and purpose thereof, but is usually preferably 0.5 to 10 mm, more preferably 1 to 7 mm. By setting it to the lower limit value or more, a higher effect can be obtained in which the gel is protected from external force and the deformation and breakage of the gel are suppressed. Moreover, handleability improves more by setting it as below an upper limit.
  • the thickness of the protective sheet 32 refers to the total thickness of these multiple layers.
  • the protective sheet 32 is preferably sized to cover the entire exposed surface of the gel.
  • Y 4 length of the long side is preferably the same range as the Y 3, linked Y of the transfer film 31 3 may be the same.
  • the length of the short side (length in the moving direction of the composite transfer film 3) X 4 is preferably 10 to 50 mm.
  • connection method of the transfer film 31 and the protective sheet 32 may be appropriately selected according to these materials.
  • the transfer film 31 and the end side of the protective sheet 32 are overlapped with each other, and a welding method in which the overlapped surfaces are heat-welded with each other, or a pasting in which the overlapped surfaces are bonded with an adhesive or a double-sided adhesive tape.
  • the method include joining by a method such as a method and using the overlapping portion as the first connecting portion 30a.
  • commercially available products can be used for the thermal welding machine, the adhesive, and the double-sided pressure-sensitive adhesive tape, and the first connecting portion 30a can be formed according to a known method.
  • the entire overlapping portion of the transfer film 31 and the protective sheet 32 is joined to form the first connecting portion 30a, but even if only a part of the overlapping portion is joined. Good. However, it is preferable that the entire region is joined from the viewpoint that the strength of the first connecting portion is improved and the transfer surface of the transfer film 31 can be widened.
  • connection width (length in the moving direction of the composite transfer film 3) X 31 of the first connection portion 30a is preferably 3 to 8 mm.
  • the transfer film 31 and the protection sheet 32 can be connected more stably, and handling property improves more by setting it as an upper limit or less.
  • the 1st connection part 30a is formed over the whole region of the direction orthogonal to the moving direction of the composite transfer film 3 of the transfer film 31 and / or the protection sheet 32.
  • the thickness of the first connecting portion 30a (the thickness of the overlapping portion) is preferably 10 mm or less, and more preferably 5 mm or less. By setting it as such a range, the 1st connection part 30a of the state closely_contact
  • FIG. The lower limit value of the thickness of the first connecting portion 30a is not particularly limited, and may be set so that the first connecting portion 30a has an appropriate strength.
  • the drive assisting member 33 has a belt-like shape, and one connection hole 33a serving as a connection portion with the drive means for moving the composite transfer film 3 is provided on each end of the longitudinal direction.
  • the drive auxiliary member 33 can be connected by using the drive means 4 provided with the connection part 42, for example, as shown in FIG.
  • the driving means 4 only the action portion 41 that is connected to the drive assisting member 33 and applies the driving force is mainly illustrated, but the action portion 41 is in the vertical direction (the moving direction indicated by the arrow in the drawing).
  • the configuration is not particularly limited as long as it is movable.
  • the driving means 4 includes an action part 41 and connecting members 42 and 42.
  • the action part 41 is a rod-like member having a square cross section, and two concave parts 41a and 41a are provided on both ends in the longitudinal direction.
  • Each of the connecting members 42 and 42 is a small square piece, and convex portions 42a and 42a having a square cross section extend from the center thereof.
  • the drive assisting member 33 is connected to the drive means 4 by fitting the protrusions 42 a, 42 a through the connection holes 33 a, 33 a of the drive assisting member 33 and the recesses 41 a, 41 a of the action portion 41.
  • the cross-sectional shape of the action part 41 and the connection member 42 is not limited to what is shown here, It can set arbitrarily.
  • the drive assisting member 33 moves in the same direction as the action part 41 moves upward in the direction of the arrow in FIG.
  • the drive assisting member 33 has a plurality of connection portions with the drive unit 4 in a direction (longitudinal direction) perpendicular to the moving direction of the composite transfer film 3.
  • the material of the drive assisting member 33 is not particularly limited as long as it has strength that can move the transfer film 31 and the protective sheet 32 integrally and has insulation properties.
  • it is resin, it can select from what was mentioned as a material of the protection sheet 32 suitably.
  • the size of the drive assisting member 33 is not particularly limited as long as the composite transfer film 3 can be moved stably.
  • the auxiliary drive member 33 for example, the length of the long side (the direction perpendicular to the length of the moving direction of the composite transfer layer 3) Y 5 is the Y 4 is equivalent to the (moving length in the direction of the composite transfer layer 3) X 5 length of the short sides may be equal to the X 4.
  • the thickness of the drive assisting member 33 is equal to or greater than the thickness of the protective sheet 32 from the viewpoint of providing sufficient strength. .
  • connection method of the protection sheet 32 and the drive assisting member 33 may be appropriately selected according to these materials, and may be the same as the connection method of the transfer film 31 and the protection sheet 32, for example.
  • the connection width (composite transfer direction of movement of the length of the membrane 3) X 32 of the second coupling portion 30b may be similar to connecting a width of the first connecting portion 30a.
  • the second connecting portion 30b is preferably formed over the entire region of the protective sheet 32 and / or the drive assisting member 33 in the direction orthogonal to the moving direction of the composite transfer film 3. By doing so, the composite transfer film 3 can be moved with higher accuracy.
  • the entire overlapping region of the protective sheet 32 and the drive assisting member 33 is joined to form the second connecting portion 30b, but only a part of the overlapping region is joined. Also good. However, it is preferable that the entire region is joined from the viewpoint that the strength of the second connecting portion is improved and the protective surface of the protective sheet 32 can be widened.
  • the drive assisting member 33 is not limited to the one shown here, and a part of the configuration may be changed as appropriate within a range not impeding the effects of the present invention.
  • the drive assisting member 33 may have a clip-like structure, and the end portion side of the protective sheet 32 may be sandwiched and connected.
  • the composite transfer film 3 the transfer film 31, the protective sheet 32, and the drive auxiliary member 33 are illustrated as being connected in this order in the moving direction (migration direction) of the composite transfer film 3. Can be omitted.
  • the connection hole corresponding to the connection hole 33a in the region including the end portion side of the protective sheet 32 opposite to the first connection portion 30a, for example, the portion corresponding to the second connection portion 30b. May be provided directly and connected to the driving means 4 here.
  • the drive assisting member 33 is not an essential configuration, the drive assisting member 33 is used in that the damage to the protective sheet 32 can be reliably suppressed and the composite transfer film 3 can be moved more easily. It is preferable to do.
  • the gel filled in the gel filling tank 2 may be appropriately selected according to the type of molecule to be analyzed.
  • Preferred examples of the gel include polyacrylamide gel and agarose gel.
  • the gel may be used in combination of two or more materials, and the combination in that case can be arbitrarily selected.
  • the concentration may be changed to have a two-layer structure of a separation part and a concentration part.
  • the electrophoresis kit 1 may include other members, instruments, chemicals, or the like used during electrophoresis or before electrophoresis in addition to the gel filling tank 2 and the composite transfer film 3 filled with gel.
  • the electrophoresis kit 1 is preferably packaged with various packaging materials and stored in a sealed state, for example.
  • packaging material those having one or more properties of gas barrier properties, liquid barrier properties, light barrier properties and heat barrier properties are preferable, and preferable specific materials include those similar to the protective sheet 32.
  • the electrophoresis kit 1 can be prepared by arranging the composite transfer film 3 so that the protective sheet 32 is in close contact with the exposed surface of the gel in the second opening 2b and filling the gel filling tank 2 with the gel. .
  • the gel raw material is injected from the third opening 2c of the gel filling tank 2, the comb is inserted into the third opening 2c, the gel raw material is polymerized as it is, and finally the comb Just pull through.
  • FIG. 4 is a front view showing a specific example of the comb, and the comb 91 shown here has a comb shape having six convex portions 91a,... On one end face.
  • the electrophoresis kit 1 after the gel raw material is injected into the gel filling part 20 of the gel filling tank 2, the comb 91 is gelled from the comb teeth (convex parts 91 a,. By inserting into the third opening 2c of the filling tank 2 and polymerizing and gelling the gel raw material, the six convex portions 91a,.
  • a comb-shaped shape in which concave portions (not shown) are continuously provided can be formed in the gel.
  • the number of the convex parts of the comb for forming the sample introduction part can be arbitrarily set according to the purpose.
  • the composite transfer film 3 is shown in which a protective sheet 32 is connected to the transfer film 31.
  • a part of the transfer film 31 may be altered to form a protective sheet.
  • the composite transfer film may be used.
  • Examples of the method for modifying the transfer film 31 include a method for changing the properties of the transfer film 31 by heating or organic solvent treatment.
  • the method of altering the transfer film 31 is suitable, for example, for crushing the voids of the transfer film 31 and eliminating the porous property to form a liquid-impermeable protective sheet.
  • FIG. 5 is a schematic view showing a specific example of an electrophoresis kit according to another embodiment, (a) is a perspective view, (b) is an exploded view, and (c) is a gel filling tank 2 in (b). It is an expanded sectional view of the electrophoresis downstream end.
  • the electrophoresis kit 10 ⁇ / b> A shown here uses the electrophoresis kit 1 shown in FIG. 1, and is configured in combination with the cathode buffer solution tank 6 ⁇ / b> A.
  • the gel filling tank 2 of the electrophoresis kit 1 is filled with an electrophoresis gel 200.
  • the composite transfer film 3 is arranged such that the connecting direction of the transfer film 31, the protective sheet 32, and the drive assisting member 33 (longitudinal direction of the composite transfer film 3) is along the sample migration direction indicated by the arrows in the figure. ing.
  • the protective sheet 32 is brought into close contact with the exposed surface of the filled gel 200 through the conductive liquid permeable sheet 5 in the second opening 2b located on the downstream side of the gel filling tank 2. Yes.
  • the protective sheet 32 is made of an adhesive in the portion of the second opening 2b where the gel 200 is not exposed (any one of the upper plate 21, the lower plate 22, and the spacer 23 of the gel filling tank 2). It is preferable that it is fixed to the gel filling tank 2 so as to be easily peelable.
  • “easily peelable” means that the protective sheet 32 is fixed with a weak adhesive force to such an extent that the protective sheet 32 is easily peeled off from the gel filling tank 2 as the composite transfer film 3 starts to move.
  • the fixing portion of the protective sheet 32 in the second opening 2b is preferably a portion where the molecule of the transfer film 31 is transferred or the region to be transferred does not pass when the composite transfer film 3 moves.
  • the region of the end portion in the longitudinal direction of the second opening 2b which is indicated by reference numeral 20b in FIG. 5B, can be exemplified.
  • the protective sheet 32 is fixed to the gel filling tank 2 via the liquid permeable sheet 5, but when the liquid permeable sheet 5 is not used, it is directly fixed to the gel filling tank 2. It may be.
  • the adhesive for fixing the protective sheet 32 a water-resistant silicone adhesive or a resin adhesive is preferable. And in order to adjust adhesive force weakly, it is preferable to apply
  • the liquid permeable sheet 5 covers the second opening 2b of the gel filling tank 2 so as to cover the entire second opening 2b. And it is preferable that it fixes to the gel filling tank 2 with an adhesive or an adhesive etc. in parts other than the opening surface of the 2nd opening part 2b.
  • the liquid-permeable sheet 5 By disposing the liquid-permeable sheet 5 in this way, the gel material can be polymerized more uniformly when the injected gel raw material is polymerized in the gel filling tank 2 and further separated.
  • the transferred molecules are transferred and adsorbed onto the transfer film 31, a high effect of suppressing damage due to friction between the gel 200 exposed at the second opening 2b and the transfer film 31 can be obtained.
  • the liquid permeable sheet 5 is not an essential component, and the transfer film 31 may be directly adhered to the gel 200. However, by using the liquid permeable sheet 5, the above-described effects can be obtained, and molecular transfer can be performed. Can be performed with higher accuracy.
  • the liquid permeable sheet 5 may be any material that has conductivity and liquid permeability and allows the molecules to be analyzed to permeate.
  • the liquid permeable sheet 5 may be a material having resistance to friction with the transfer film 31 and adsorption to the molecules to be analyzed. What consists of a material with low property is preferable.
  • a material having such properties for example, when protein is analyzed, polyvinylidene fluoride (PVDF) can be exemplified, and a hydrophilic PVDF membrane (manufactured by Millipore) is commercially available.
  • the thickness of the liquid permeable sheet 5 is preferably 0.05 to 2 mm.
  • the cathode buffer tank 6 ⁇ / b> A is combined with the gel filling tank 2 and serves as a reservoir for the cathode buffer during electrophoresis, and includes a main body 61 and a sealing member 62.
  • the main body 61 has a shape in which a part of the side wall portion is removed in a rectangular container and is opened, and a stage 61b for installing the gel filling tank 2 is provided on the bottom portion 61a. And the side surface of the stage 61b protrudes from the main body 61 in the said open part.
  • the sealing member 62 has an L-shaped cross-section in a direction perpendicular to the longitudinal direction, and includes a side wall portion 62a and a bottom portion 62b perpendicular to the side wall portion 62a.
  • the gel filling tank 2 integrated with the composite transfer film 3 is combined with the main body 61 of the cathode buffer tank 6A by placing the lower plate 22 on the stage 61b. Further, the sealing member 62 is provided with the outer surface of the bottom 62b on the upper plate 21 of the gel filling tank 2, so that the side wall 62a is connected to the side wall 61c of the main body 61 without a gap, A reservoir for the cathode buffer is formed.
  • the main body 61 and the sealing member 62 of the cathode buffer tank 6A and the gel filling tank 2 are fixed to each other by a known method such as a method of engagement or a method of using an adhesive.
  • the adhesive preferably has water resistance, more preferably a water resistant silicone adhesive or a resin adhesive, and a silicone-modified polymer adhesive Super X (produced by Cemedine) is an example of a commercially available product. it can.
  • the composite transfer film 3 is arranged so that the transfer surface of the transfer film 31 is along the outer surface of the bottom 61a of the cathode buffer solution tank 6A. Thereby, during electrophoresis, the molecules separated from the sample can be continuously transferred from the gel 200 to the transfer film 31 by moving the composite transfer film 3.
  • the gel filling tank 2 protrudes from the main body 61 together with the stage 61b, and the composite transfer film 3 can be easily moved when transferring molecules.
  • FIG. 6 is an enlarged view of an area including the first connecting portion 30a and the second connecting portion 30b of the composite transfer film 3.
  • the composite transfer film 3 is arranged so that the protective sheet 32 is located on the contact portion (the exposed surface of the gel 200) side with the gel 200 in the first connecting portion 30a.
  • the transfer film 31 may be positioned on the contact portion side with the gel 200, but the arrangement form shown here is preferable.
  • a step due to the overlap of the transfer film 31 and the protective sheet 32 may occur.
  • the exposed surface of the gel 200 is caused by the step in the moving direction (arrow direction in the figure).
  • the first connecting portion 30a passes without being caught by the protruding portion. That is, the first connecting portion 30a passes more smoothly than when the composite transfer film 3 is arranged so that the transfer film 31 is positioned on the contact portion side with the gel 200.
  • the driving assisting member 33 is located on the contact portion with the gel 200 (the exposed surface of the gel 200).
  • the protective sheet 32 may be located on the contact portion side with the gel 200. Since the 2nd connection part 30b does not contact the gel 200 normally, the said exposed surface of the gel 200 is not influenced like the case of the 1st connection part 30a.
  • FIG. 7 is a schematic diagram illustrating another specific example of the main body of the cathode buffer solution tank suitable for the electrophoresis kit according to the present embodiment, in which (a) is a perspective view and (b) is a perspective view of (a). It is sectional drawing in the BB line.
  • the main body 63 of the cathode buffer tank 6B shown here has a convex curved surface in which the outer surface of the bottom 63a bulges outward. Further, the side surface of the stage 63b for installing the gel filling tank 2 is not projected from the main body 63, unlike the cathode buffer tank 6A.
  • the other parts including the sealing member are the same as those of the cathode buffer tank 6A.
  • the outer surface of the bottom 63a is a curved surface, so that even if the side surface of the stage 63b is not projected as described above, the movement of the composite transfer film 3 during the transfer of molecules is facilitated. It can move smoothly and safely.
  • the side surface of the stage 63b may protrude as in the case of the cathode buffer solution tank 6A.
  • the electrophoresis kit 10 ⁇ / b> A is not limited to the one shown here, and a part of the configuration may be changed as appropriate within a range not impeding the effects of the present invention.
  • the electrophoresis kit 1 it can be configured in the same manner as a conventional electrophoresis kit.
  • the shape of the sealing member 62 is not particularly limited as long as the sealing member 62 has an installation site on the stage 61b and a side wall portion that can form a cathode buffer solution storage portion.
  • the electrophoresis kit 10A is preferably packaged with various packaging materials and stored in a sealed state.
  • the composite transfer film 3 is disposed on the exposed surface of the gel 200 in the second opening 2b so that the protective sheet 32 is in close contact with the liquid permeable sheet 5 or directly. It can be produced by filling the tank 2 with the gel 200.
  • the filling method of the gel 200 is the same as that of the electrophoresis kit 1.
  • the electrophoresis kits 1 and 10A have been described as the separation and adsorption kit according to the present invention.
  • a gel, a gel filling tank, a composite transfer membrane, and a liquid permeable sheet instead, a combination of various separation media, separation tanks, adsorption members provided with protection units, and conductive media can be applied. That is, the separation medium and the adsorbing member may be appropriately selected according to the molecule to be analyzed, the protection unit may be appropriately selected according to the separation medium, and the conductive medium may be the molecule to be analyzed and the separation medium. What is necessary is just to select suitably according to. And the separation tank should just be the structure suitable for flowing an electric current through a buffer solution and isolate
  • the separation adsorption apparatus includes the separation adsorption kit, and further includes drive means for moving the adsorption member in the separation adsorption kit.
  • the molecular analysis method according to the present invention is a molecular analysis method using the separation adsorption kit, wherein the adsorption member is moved, and the protection unit is moved and separated from the second opening. A step of adsorbing molecules from the separation medium to the adsorption member.
  • those using the electrophoresis kit can be exemplified.
  • the transfer film is brought into close contact with the gel exposed surface from the state in which the composite transfer film of the electrophoresis kit is moved and the protective sheet is in close contact with the gel exposed surface.
  • the method includes the step of transferring the molecule to be analyzed from the gel to the transfer film.
  • FIG. 8 is a schematic cross-sectional view for explaining a specific example of the molecular analysis method according to the present embodiment.
  • an analysis method using an electrophoresis apparatus 100A provided with an electrophoresis kit 10A as a separation and adsorption apparatus will be described.
  • FIG. 8A is a schematic cross-sectional view illustrating an electrophoresis device before starting electrophoresis.
  • the electrophoresis apparatus 100A includes an electrophoresis kit 10A, a container 92, a DC power supply 93, electrodes 94 (cathode 94a and anode 94b), electric wires 95, and driving means 4.
  • electrodes 94 cathode 94a and anode 94b
  • the accommodating portion 92 corresponds to a main body that performs electrophoresis, and a partition 920 includes a cathode-side accommodating portion 921 that includes a reservoir for the cathode buffer 99a, and an anode-side accommodating portion 922 that constitutes a reservoir for the anode buffer 99b. It is divided into.
  • an electrophoresis kit 10A is disposed in the cathode side housing portion 921. Then, while maintaining the state in which the protective sheet 32 is in close contact with the exposed surface of the gel 200, the transfer surface of the transfer film 31 is along the outer surface of the side wall portion 61c and the bottom portion 61a of the cathode buffer solution tank 6A.
  • a composite transfer film 3 is disposed. The composite transfer film 3 is further connected to the drive means 4 via a drive assisting member 33.
  • a cathode buffer 99a is stored in the cathode buffer tank 6A.
  • the anode buffer 99b is stored in the anode housing portion 922.
  • the first connecting portion 30a and the second connecting portion 30b are each indicated by a black dot “•”. Further, the illustration of the liquid permeable sheet is omitted.
  • the partition wall 920 not only partitions the housing portion 92 but also has a function of bringing the protective sheet 32 and the transfer film 31 of the composite transfer film 3 into close contact with the exposed surface of the gel 200 in the second opening 2b.
  • the partition wall 920 has an opening 920a, and thus the electrophoresis proceeds smoothly.
  • the material of the partition wall 920 may be any material that does not change with various buffer solutions.
  • the partition wall 920 is preferably made of an elastic material. Examples of such a material include natural rubber and synthetic rubber. Specifically, what was illustrated as a material of the protection sheet 32 is mentioned.
  • the electrode 94 includes a cathode 94 a and an anode 94 b, and is electrically connected to a DC power source 93 by an electric wire 95.
  • the cathode 94a and the anode 94b can be made of a known material. Specifically, various metals, alloys and carbons can be exemplified, but platinum is preferable from the viewpoint of stability.
  • cathode buffer 99a and the anode buffer 99b those having a known composition can be used, and may be appropriately selected according to the type of molecule to be analyzed.
  • Preferred are Tris / glycine buffer, Tris / glycine / SDS buffer, acetate buffer, sodium carbonate buffer, N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid (CAPS) buffer, Tris / boron.
  • Examples include acid / ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) buffer, Tris / acetic acid / EDTA buffer, 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS) buffer, phosphate buffer, Tris / tricine buffer, Tris / methanol buffer, etc. it can.
  • EDTA acid / ethylenediaminetetraacetic acid
  • MOPS 3-morpholinopropanesulfonic acid
  • phosphate buffer Tris / tricine buffer
  • Tris / methanol buffer etc. it can.
  • the exposed surface of the gel 200 (the contact portion of the gel 200 with the transfer film 31) is protected from the time of its preparation until immediately before the start of electrophoresis as shown in FIG. Since the sheet 32 is in close contact, the exposed surface is protected, and the gel 200 is prevented from being altered or damaged until just before use. Then, by appropriately selecting the material and thickness of the protective sheet 32, for example, prevention of drying, prevention of alteration due to changes in environmental temperature, prevention of alteration due to light, and prevention of deformation or damage due to external force.
  • the target protective action such as one or more can be strengthened.
  • a sample is introduced into the gel 200 in the gel filling tank 2.
  • the sample is electrophoresed and the composite transfer film 3 is moved so that the transfer film 31 is in close contact with the exposed surface of the gel 200 from the state in which the protective sheet 32 is in close contact with the exposed surface of the gel 200. .
  • the transfer film 31 and the protective sheet 32 move integrally in the connecting direction of these (composite transfer film 3), and the protective sheet 32 and the transfer film 31 sequentially or directly on the exposed surface of the gel 200 It adheres via the liquid-permeable sheet 5.
  • the direction in which the transfer film 31 and the protective sheet 32 are connected refers to the anode-side container 921 to the anode along the outer surface of the bottom 61a of the cathode buffer tank 6A immediately below the cathode buffer tank 6A. It is a direction toward the side housing portion 922, and is an upper side (here, the upper side in the vertical direction) along the opening surface of the second opening 2 b of the gel filling tank 2 on the exposed surface of the gel 200.
  • the composite transfer film 3 is moved by actuating the driving means 4 and moving the action part 41. Then, by moving the composite transfer film 3, the transfer film 31 moves along the outer surfaces of the side wall portion 61c and the bottom portion 61a of the cathode buffer solution tank 6A. Furthermore, instead of the protective sheet 32, the transfer and adsorption of molecules can be performed from the stage when the transfer film 31 comes into contact with the exposed surface of the gel 200.
  • FIG. 8B shows a state in which the transfer film 31 is in close contact with the exposed surface of the gel 200.
  • the movement direction of the action part 41 is a predetermined angle (it is not 0 degree with respect to the vertical direction in FIG. 8, for example) It may be a diagonally upward direction that is shifted by (angle), that is, a diagonally upward direction that is inclined in either direction of the cathode side accommodating portion 921 or the anode side accommodating portion 922.
  • the movement start time of the composite transfer film 3 and the start time of electrophoresis can be arbitrarily set as long as the transfer of molecules to the transfer film 31 is not inhibited, either of which may be earlier or simultaneously.
  • the composite transfer film 3 is preferably moved by automatically operating the driving means 4 according to a set program.
  • the moving speed of the composite transfer film 3 is not particularly limited, and may be set in consideration of electrophoresis conditions. However, when the exposed surface of the gel 200 is in contact with the protective sheet 32, it is preferably 10 to 1000 ⁇ m / second. By doing in this way, the higher effect which protects the said exposed surface of the gel 200 is acquired.
  • Electrophoresis may be performed under normal conditions in consideration of the type of molecule.
  • the gel may be cooled with a Peltier element.
  • the composite transfer film 3 is removed from the electrophoresis apparatus 100A, and the transfer film 31 is removed.
  • the target molecule can be analyzed by washing with pure water or the like as necessary and then subjecting it to various analyses.
  • an analysis method a known method such as western blotting, southwestern blotting, far western blotting, mass spectrometry, fluorescent staining, silver staining or the like may be arbitrarily applied depending on the type and purpose of the molecule. At this time, since the transfer is performed with high accuracy, information on molecules can be obtained with high accuracy.
  • the analysis method according to the present embodiment can be performed by automatically automating the separation and adsorption of molecules by using the electrophoresis kit 10A. Further, by consistently automating from installation of the electrophoresis kit 10A to analysis, a higher effect of protecting the exposed surface of the gel 200 can be obtained.
  • the analysis method according to this embodiment can also be applied to transfer and adsorption of molecules in two-dimensional electrophoresis. For example, after separating proteins by isoelectric focusing, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis is performed, and SDS-poly after isoelectric focusing in two-dimensional electrophoresis in which molecules are separated and developed on a two-dimensional plane. Suitable for acrylamide gel electrophoresis.
  • the electrophoresis apparatus is not limited to the one shown here, and a part of the configuration may be appropriately changed within a range that does not hinder the effects of the present invention.
  • the electrophoresis kit 10A it can be configured in the same manner as a conventional apparatus.
  • Transfer film 31 made of PVDF, X 3 is 100 mm and Y 3 is 55 mm
  • Protective sheet 32 PET film with low liquid permeability and thermal conductivity, and colored PET with low light permeability
  • Driving auxiliary member 33 made of acrylic resin and having a strip shape of 55 mm ⁇ 200 mm.
  • First connecting portion 30a is shown below.
  • Transfer film 31 made of PVDF, X 3 is 100 mm and Y 3 is 55 mm
  • Protective sheet 32 PET film with low liquid permeability and thermal conductivity, and colored PET with low light permeability
  • Driving auxiliary member 33 made of acrylic resin and having a strip shape of 55 mm ⁇ 200 mm.
  • Connection width X 31 is 5 mm and thermally welded (5) Second connection portion 30 b: Connection width X 32 is 5 mm and heat welded (6)
  • Gel 200 Separation of concentration 12.5% (7)
  • Cathode buffer Tris (25 mM) / Glycine (192 mM) / SDS (0.2%) buffer (40 ml) (8)
  • Anode buffer Tris (150 mM) / methanol (10%) buffer (40 ml) (9)
  • Moving speed of the composite transfer film 3 10 ⁇ m / second (10)
  • Electrophoretic conditions constant current 40 mA, 2 hours Under the above conditions, the transfer film 31 moves 72 mm until the end of the transfer of molecules, during which the molecular weight Is separated and transcribed, and substantially all the proteins contained in the sample can be separated and analyzed.
  • the conditions shown here are only examples of what can be applied, and it goes without saying that the conditions can be changed as appropriate according to the purpose.
  • the separation and adsorption apparatus As the separation and adsorption apparatus, the separation and adsorption kit and a driving unit that moves the adsorption member, Can be applied in accordance with the molecule to be analyzed.
  • an analysis method if it has the process of adsorb
  • the present invention can be used in all fields where analysis of macromolecules is required, such as medicine, pharmacy, biochemistry, and food.
  • Electrophoresis kit 2 ... Gel filling tank, 2a ... 1st opening part, 2b ... 2nd opening part, 200 ... Gel, 3 ... Composite transfer film 31 ... Transfer film, 32 ... Protective sheet, 4 ... Drive means, 10A ... Electrophoresis kit, 5 ... Liquid permeable sheet, 99a ... Cathode buffer, 99b ..Anode buffer solution, 100A ... electrophoresis device

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Abstract

　ゲル充填槽のゲル露出面に、複合転写膜を直接又は液体透過性シートを介して密着させ、複合転写膜を移動させて、保護シートが前記ゲル露出面に密着した状態から、転写膜が前記ゲル露出面に密着するようにして、解析対象の分子を前記ゲルから転写膜に転写及び吸着させる。

Description

分離吸着キット、分離吸着装置及び分子の解析方法
　本発明は、分離吸着キット、該分離吸着キットを用いた分離吸着装置、及び該分離吸着キットを用いる分子の解析方法に関する。
　本願は、２０１１年３月４日に、日本に出願された特願２０１１－０４７６３３号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことにより、解析対象の分子を分離する手法として、ゲル電気泳動は、生体由来試料中の分子など、分子量が比較的大きい分子を、その性質の相違に基づいて分離する手法として幅広く利用されており、これまでにタンパク質又は核酸の固定及び解析を行うために、種々の方法及び装置が開発されている。例えば、タンパク質の分離には、陰イオン系界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を用いる、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動が広く利用されている。そして、分離したタンパク質を解析及び同定する方法としては、ウエスタンブロッティングがよく知られている。ウエスタンブロッティングとは、電気泳動で分離したタンパク質を、吸着によりゲルから吸着部材である転写膜に転写させて固定し、抗原抗体反応によってタンパク質を同定する方法である。これらの分離及び同定方法は、特異性、検出感度の点で極めて優れており、信頼性が高い分析技術として医学、薬学、生化学、食品分野で広く利用されている。
　一方、電気泳動及び転写工程を短時間で行う手法が種々検討されており、例えば、電気泳動を行いながら、泳動下流端において露出されたゲルに転写膜を接触させ、この接触状態を維持しつつ転写膜を移動させることで、電気泳動により試料から分離された分子を直ちに、順次転写膜へ転写する手法が開示されている（特許文献１参照）。この手法は、電気泳動と転写を同時進行で行うものであり、自動化にも好適である。
　また、上記手法の汎用性を向上させる技術も検討されており、例えば、操作を簡略化することを目的とした、電気泳動装置へ装着して使用するための電気泳動用キットが種々開示されている。
　このような電気泳動用キットとして、泳動部下流端にゴムパッドが配されるように調節された固定具に装着した後、ゲルを泳動部に充填し、次いで前記固定具を外した後、電気泳動装置へ装着するようにしたものが開示されている（特許文献２参照）。この電気泳動用キットは、前記固定具を使用することで、ゲル充填時から装置への装着時までのゲルの成形性及び保存性を向上させたものである。
　さらに、転写膜として、彎曲したフレームに取り付けられたものが開示されている（特許文献３参照）。この転写膜は、フレームによって張力を加えられた状態とすることで、転写時にしわや撓みの発生が抑制され、転写を精度よく行うことができるものである。
米国特許第５２３４５５９号明細書 特表平９－５０１７７４号公報 特表平９－５０１２３９号公報
　しかし、従来の電気泳動用キットでは、電気泳動装置への装着後も、転写膜との接触部位となる、露出されたゲルの下流端が適切に保護されたものが無いのが実情であった。ゲルの前記接触部位は、試料から分離された分子の転写膜への転写精度そのものを左右するため、使用直前まで変質や損傷を防止することが重要となるが、従来の電気泳動用キットでは、このような観点で前記接触部位が適切に保護されたものが無かった。
　本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、装置への装着後、使用直前まで、分離媒体の吸着部材との接触部位を保護できる分離吸着キット、該分離吸着キットを用いた分離吸着装置、及び該分離吸着キットを用いる分子の解析方法を提供することを課題とする。
　本発明は、緩衝液を介して電流を流すことにより解析対象の分子を分離する分離媒体と、該分離媒体を格納した分離槽と、分離した分子を前記分離媒体から吸着する多孔質の吸着部材と、を備えた分離吸着キットであって、前記分離槽は、電流を流すための第一及び第二の開口部を有し、前記吸着部材には、前記分離媒体の露出面を保護する保護部が設けられ、前記第二の開口部において、前記分離媒体の露出面に前記保護部が密着するように前記吸着部材が配置されたことを特徴とする分離吸着キットを提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットにおいて、前記保護部が前記吸着部材に連結されて設けられたことを特徴とする分離吸着キットを提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットにおいて、前記保護部が前記吸着部材に貼付されて設けられたことを特徴とする分離吸着キットを提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットにおいて、前記吸着部材の一部が変質されて前記保護部とされたことを特徴とする分離吸着キットを提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットにおいて、前記第二の開口部に前記保護部が接着されたことを特徴とする分離吸着キットを提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットにおいて、前記第二の開口部と前記保護部との間に、前記分子が透過可能な導電性媒体が設けられたことを特徴とする分離吸着キットを提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットを備えた分離吸着装置であって、さらに、前記分離吸着キット中の前記吸着部材を移動させる駆動手段を備えたことを特徴とする分離吸着装置を提供する。
　また、本発明は、かかる分離吸着キットを用いる分子の解析方法であって、前記吸着部材を移動させて、前記第二の開口部から前記保護部を移動させ、分離した分子を前記分離媒体から前記吸着部材に吸着させる工程を有することを特徴とする分子の解析方法を提供する。
　本発明によれば、装置への装着後、使用直前まで、分離媒体の吸着部材との接触部位を保護できる分離吸着キット、該分離吸着キットを用いた分離吸着装置、及び該分離吸着キットを用いる分子の解析方法を提供できる。
本発明の一実施形態に係る電気泳動用キットの具体例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のゲル充填槽のＡ－Ａ線における断面図、（ｃ）はゲル充填槽の分解図である。 図１に示す電気泳動用キットにおける複合転写膜の正面図である。 図１及び２に示す駆動補助部材の駆動手段との接続方法を例示する概略斜視図である。 ゲル作製時に使用するコームの具体例を示す正面図である。 本発明の他の実施形態に係る電気泳動用キットの具体例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は分解図、（ｃ）は（ｂ）におけるゲル充填槽の泳動下流端の拡大断面図である。 複合転写膜の第一の連結部及び第二の連結部を含む領域における拡大図である。 電気泳動用キットに好適な、陰極緩衝液槽の本体の他の具体例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のＢ－Ｂ線における断面図である。 本発明の一実施形態に係る分子の解析方法の具体例を説明するための概略断面図である。
＜分離吸着キット＞
　本発明に係る分離吸着キットは、緩衝液を介して電流を流すことにより解析対象の分子を分離する分離媒体と、該分離媒体を格納した分離槽と、分離した分子を前記分離媒体から吸着する多孔質の吸着部材と、を備えた分離吸着キットであって、前記分離槽は、電流を流すための第一及び第二の開口部を有し、前記吸着部材には、前記分離媒体の露出面を保護する保護部が設けられ、前記第二の開口部において、前記分離媒体の露出面に前記保護部が密着するように前記吸着部材が配置されたことを特徴とする
　本発明に係る分離吸着キットは、上記構成を有するものであれば特に限定されず、好ましい一実施形態としては、電気泳動用キットが例示できる。かかる電気泳動用キットは、ゲル充填槽と複合転写膜を備える。そして、前記ゲル充填槽は、ゲル電気泳動で試料から解析対象の分子を分離する部位であり、泳動下流端が開口され、充填されたゲルが前記開口部で露出されるようになっている。また、前記複合転写膜は、転写膜と、その端部側で連結された保護シートを備える。前記転写膜は分離された分子をゲルから転写するものであり、前記保護シートは前記開口部においてゲルの露出面に密着し、ゲルを被覆して保護するものである。以下、かかる電気泳動用キットについて、図面を参照しながら、詳しく説明する。
　本実施形態において、解析対象の分子は、通常高分子化合物であり、生体由来又は生体関連の高分子化合物であることが好ましく、タンパク質、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、ペプチド核酸、糖、これらの二種以上が結合又は相互作用して形成された複合体が例示できる。そして、天然由来のものでもよいし、人工合成されたものでもよく、これらの複合体でもよい。天然由来の場合、動物、植物及び微生物のいずれに由来するものでもよい。
　図１は、本実施形態に係る電気泳動用キットの具体例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のゲル充填槽のＡ－Ａ線における断面図、（ｃ）はゲル充填槽の分解図である。
　ここに示す電気泳動用キット１は、ゲルが充填されたゲル充填槽２、及び転写膜３１に保護シート３２が連結された複合転写膜３を備える。
　ゲル充填槽２は、上板２１、下板２２及びスペーサ２３から構成されている。より具体的には、二つのスペーサ２３は、その上面が上板２１と、下面が下板２２とそれぞれ密着し、上板２１と下板２２のそれぞれにおいて対向する周縁部に配置され、これにより電気泳動用ゲルを充填するためのゲル充填部２０が形成される。ゲルはこのゲル充填部２０に充填（格納）されるが、図１では図示を省略している。そして、ゲル充填槽２は、第一の開口部２ａ、第二の開口部２ｂ及び第三の開口部２ｃを有する。第一の開口部２ａは泳動上流側、第二の開口部２ｂは泳動下流側となり、それぞれ電気泳動時に電極に対向して配置されるものである。なお、本発明において「泳動上流」とは、試料の泳動方向における上流を、「泳動下流」とは、試料の泳動方向における下流をそれぞれ指す。したがって、泳動下流端が、試料から分離された分子を転写膜へ転写する部位となる。また、図１（ａ）では、電気泳動用キット１の構成を判り易くするために、ゲル充填槽２及び保護シート３２を別々に示しているが、後述するように、これらは第二の開口部２ｂにおいて、ゲルの露出面を被覆するように密着されている。
　上板２１は、第一の開口部２ａ側の周縁部に沿って、該周縁部近傍に第三の開口部２ｃが設けられている。第三の開口部２ｃは、後述するゲル用原料の注入口に該当する。第三の開口部２ｃの長辺方向の長さＹ１１は、第一の開口部２ａの長辺方向の長さに対して同じであるか、又は長いことが好ましい。
　上板２１の大きさは、分析対象の試料の数や量に応じて適宜調節すればよいが、取り扱い性の観点からは、長辺の長さ（泳動方向に対して直交する方向の長さ）Ｙ１が４０～８０ｍｍであることが好ましく、短辺の長さ（泳動方向の長さ）Ｘ１が２０～４０ｍｍであることが好ましく、厚さＺ１が０．５～２ｍｍであることが好ましい。
　下板２２は、第三の開口部２ｃが設けられていないこと以外は、上板２１と同様のものであり、その形状（第三の開口部２ｃが設けられていないことを除く）及び大きさは、組み合わせる上板２１と同じであることが好ましい。
　スペーサ２３は、板状又は棒状であり、ゲル充填部２０が所望の広さとなるように大きさを調節すればよい。例えば、取り扱い性の観点からは、長辺の長さ（泳動方向の長さ）Ｘ２は前記Ｘ１と同様の範囲であることが好ましく、組み合わせる上板２１のＸ１と同じであることが好ましい。また、短辺の長さ（泳動方向に対して直交する方向の長さ）Ｙ２は２～５ｍｍであることが好ましい。そして、厚さＺ２は前記Ｚ１と同様の範囲であることが好ましい。
　上板２１、下板２２及びスペーサ２３の材質は、絶縁性を有していればよく、石英ガラス等のガラス；セラミックス；アクリル樹脂、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリ塩化ビニル等の合成樹脂が例示できる。なかでも、親水性を有し、平坦性及び放熱性に優れることから、ガラスが好ましい。
　そして、上板２１、下板２２及びスペーサ２３は、その材質に応じて公知の方法で作製すればよい。
　ゲル充填槽２は、粘着剤を使用する方法、契合させる方法など、周知の手法で上板２１、下板２２及びスペーサ２３を相互に固定することにより作製されたものが好ましい。
　ゲル充填槽２は、電気泳動用キット１において好ましいものとして例示したに過ぎず、本実施形態におけるゲル充填槽はこれに限定されず、ゲル電気泳動で試料から解析対象の分子を分離でき、分子を転写できるものであれば如何なるものでもよい。
　複合転写膜３は、転写膜３１及び保護シート３２が、それぞれの端部側で連結されたものである。あわせて図２に、電気泳動用キット１における複合転写膜３の正面図を示す。
符号３０ａは、転写膜３１及び保護シート３２の連結部（以下、「第一の連結部」と略記する）を示す。さらに、第一の連結部３０ａに対して反対側の保護シート３２の端部側は、駆動補助部材３３の端部側と連結されている。符号３０ｂは、保護シート３２及び駆動補助部材３３の連結部（以下、「第二の連結部」と略記する）を示す。
　転写膜３１は、電気泳動で試料から分離された分子を、ゲルから転写させて固定するものである。
　保護シート３２は、電気泳動の開始時まで、ゲルの泳動下流端における露出面に密着させて、ゲルを保護するものである。
　駆動補助部材３３は、電気泳動時に、転写膜３１及び保護シート３２をこれらの連結方向に一体に移動させる時に、これらを移動させる駆動手段を接続するものである。
　複合転写膜３は、転写膜３１、保護シート３２及び駆動補助部材３３の連結方向（複合転写膜３の長手方向）が、試料の泳動方向（図１及び２中の矢印方向）と一致するように配置され、電気泳動時にこの方向に移動される。
　転写膜３１の材質は、分子が吸着可能な多孔質性のものであれば特に限定されず、公知のものでよい。例えば、解析対象の分子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸やタンパク質等の生体分子である場合には、好ましい材質として、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ニトロセルロース等の合成樹脂が例示できる。例えば、ＰＶＤＦ製転写膜の市販品としては、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ　ＰＶＤＦトランスファーメンブレン（ミリポア社製）が例示できる。
　転写膜３１の大きさは、組み合わせるゲル充填槽２の大きさに応じて設定すればよい。
例えば、短辺の長さ（複合転写膜３の移動方向に対して直交する方向の長さ）Ｙ３は、ゲル充填部２０の同方向の長さに対して同等以上であることが好ましく、取り扱い性の観点からは、前記Ｙ１と同様の範囲であることが好ましい。長辺の長さ（複合転写膜３の移動方向の長さ）Ｘ３は、転写膜３１の電気泳動時の移動速度にもよるが、８０～１２０ｍｍであることが好ましい。そして、転写膜３１の厚さは、０．０５～２ｍｍであることが好ましい。
　保護シート３２の材質と厚さは、電気泳動を行うまでの、想定されるゲルの保存条件に応じて、適宜選択することが好ましい。例えば、ガス遮断性、液体遮断性、光遮断性及び熱遮断性の一以上の性質を有するように、選択する方法が挙げられる。
　例えば、保存中のゲルにおいて、乾燥を抑制するためには、保護シート３２は、液体非透過性のものとすればよい。
　また、保存中のゲルにおいて、環境温度（電気泳動用キット１の外部の温度）の変化に伴う変質を抑制するためには、保護シート３２は、熱伝導率が水の熱伝導率よりも低いことが好ましく、具体的には、熱伝導率が０．６Ｗ／（ｍ・Ｋ）未満であることが好ましい。
　また、保存中のゲルにおいて、光による変質を抑制するためには、保護シート３２は、光透過率が４０％以下であることが好ましく、２０％以下であることがより好ましく、１０％未満であることが特に好ましい。そして、可視光よりも紫外光の方がゲルを変質させ易いことから、特に紫外光の透過率が上記範囲であることが好ましい。このような光透過率が低い保護シート３２としては、着色されたものが好ましく、着色された不透明なものがより好ましい。
　上記のような、液体非透過性、熱伝導率、又は光透過率を実現するための材質としては、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）、中密度ポリエチレン、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）等のポリエチレン；ポリプロピレン（ＰＰ）；ポリスチレン（ＰＳ）；ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリトリメチレンテレフタレート（ＰＴＴ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）、ポリブチレンナフタレート（ＰＢＮ）等のポリエステル；ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）；ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ）；アクリル樹脂；メタロセンポリエチレンエチレン・酢酸ビニル共重合体；無延伸Ｋ（ＰＶＤＣ）コート樹脂；Ｋコートポリエステル延伸ナイロン；Ｋコートナイロン；無延伸ナイロンビニロン（ポリビニルアルコール）；セロハン；ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）；ポリウレタン；天然ゴム；アクリルゴム（ＡＣＭ、ＡＮＭ）、ニトリルゴム（ＮＢＲ）、イソプレンゴム（ＩＲ）、クロロプレンゴム（ＣＲ）、エチレンプロピレンゴム（ＥＰＭ、ＥＰＤＭ）、スチレン・ブタジエンゴム（ＳＢＲ）、ブタジエンゴム（ＢＲ）、エピクロロヒドリンゴム（ＣＯ、ＥＣＯ）、シリコーンゴム、フッ素ゴム（ＦＫＭ）、ブチルゴム等の合成ゴム；ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリクロロトリフルオロエチレン（ＰＣＴＦＥ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリフッ化ビニル（ＰＶＦ）、パーフルオロアルコキシフッ素樹脂（四フッ化エチレンパーフルオロアルキルビニルエーテル共重合体、ＰＦＡ）、四フッ化エチレン・六フッ化プロピレン共重合体（ＦＥＰ）、エチレン・四フッ化エチレン共重合体（ＥＴＦＥ）、エチレン・クロロトリフルオロエチレン共重合体（ＥＣＴＦＥ）、テトラフルオロエチレン・パーフルオロジオキソール共重合体（ＴＦＥ／ＰＤＯ）等のフッ素樹脂が例示できる。
　保護シート３２は、単層及び複数層のいずれでもよい。複数層である場合、各層の材質はすべて同じでもよいし、一部が異なっていてもよく、すべて異なっていてもよい。そして、少なくとも一部が異なっている場合には、これら複数層の材質の組み合わせは、任意に設定できる。例えば、液体透過性が低い材質、熱伝導率が低い材質、及び光透過率が低い材質等、異なる性質の材質を複数組み合わせて構成してもよい。
　保護シート３２の厚さは、その材質や目的に応じて適宜調節すればよいが、通常は、０．５～１０ｍｍであることが好ましく、１～７ｍｍであることがより好ましい。下限値以上とすることで、外部から加わる力からゲルを保護してゲルの変形や破損を抑制するより高い効果が得られる。また、上限値以下とすることで、取り扱い性がより向上する。なお、保護シート３２が複数層である場合には、保護シート３２の厚さとは、これら複数層の合計の厚さを指す。
　保護シート３２は、ゲルの前記露出面全面を被覆できる大きさであることが好ましい。
例えば、長辺の長さ（複合転写膜３の移動方向に対して直交する方向の長さ）Ｙ４は、前記Ｙ３と同様の範囲であることが好ましく、連結された転写膜３１のＹ３と同じであってもよい。短辺の長さ（複合転写膜３の移動方向の長さ）Ｘ４は、１０～５０ｍｍであることが好ましい。下限値以上とすることで、ゲルの前記露出面を容易かつ確実に被覆できる。また、上限値以下とすることで、取り扱い性がより向上する。
　転写膜３１及び保護シート３２の連結方法は、これらの材質に応じて適宜選択すればよい。好ましい連結方法としては、転写膜３１及び保護シート３２の端部側同士を重ね合わせ、重ね合わせ面同士を熱溶着させる溶着法、又は前記重ね合わせ面同士を接着剤若しくは両面粘着テープによって接着させる貼付法等の手段で接合させ、該重ね合わせ部位を第一の連結部３０ａとする方法が例示できる。前記手段において、熱溶着機、接着剤、両面粘着テープはいずれも市販品が利用でき、周知の方法に従って第一の連結部３０ａを形成できる。
　ここでは、転写膜３１及び保護シート３２の重ね合わせ部位全域が接合され、第一の連結部３０ａとなっている例を示しているが、前記重ね合わせ部位の一部のみが接合されていてもよい。ただし、第一の連結部の強度が向上し、且つ転写膜３１の転写面を広くできる点から、全域が接合されていた方が好ましい。
　第一の連結部３０ａの連結幅（複合転写膜３の移動方向の長さ）Ｘ３１は、３～８ｍｍであることが好ましい。下限値以上とすることで、より安定して転写膜３１及び保護シート３２を連結でき、上限値以下とすることで、取り扱い性がより向上する。そして、第一の連結部３０ａは、転写膜３１及び／又は保護シート３２の、複合転写膜３の移動方向に対して直交する方向の全域に渡って形成されていることが好ましい。
　また、第一の連結部３０ａの厚さ（重ね合わせ部位の厚さ）は、１０ｍｍ以下であることが好ましく、５ｍｍ以下であることがより好ましい。このような範囲とすることで、複合転写膜３の移動時に、ゲルの前記露出面に密着した状態の第一の連結部３０ａを、より容易に移動させることができる。第一の連結部３０ａの厚さの下限値は、特に限定されず、第一の連結部３０ａが適度な強度を有するように設定すればよい。
　駆動補助部材３３は、帯状の形状を有し、その長手方向の両端部側には、複合転写膜３を移動させる駆動手段との接続部位となる接続穴３３ａが一つずつ設けられている。
　そして、駆動補助部材３３は、例えば、図３に示すように、接続部４２を備えた駆動手段４を使用することで、接続できる。なお、ここでは駆動手段４として、駆動補助部材３３と接続され、駆動力を作用させる作用部４１のみを主に例示しているが、作用部４１が上下方向（図中の矢印で示す移動方向）に移動可能とされていれば、その構成は特に限定されない。
　駆動手段４は、作用部４１及び接続部材４２，４２を備える。作用部４１は、断面正方形の棒状の部材であり、その長手方向の両端部側には、二つの凹部４１ａ，４１ａが設けられている。接続部材４２，４２は、それぞれが正方形状の小片であって、その中央部から断面正方形状の凸部４２ａ，４２ａが延長している。そして、凸部４２ａ，４２ａを駆動補助部材３３の接続穴３３ａ，３３ａを通して、作用部４１の凹部４１ａ，４１ａに嵌合させることで、駆動補助部材３３を駆動手段４へ接続する。なお、作用部４１や接続部材４２の断面形状は、ここに示すものに限定されず、任意に設定できる。
　駆動補助部材３３は、作用部４１が図３中の矢印方向上側に移動することで、同じ方向に移動する。このように、駆動補助部材３３は、複合転写膜３の移動方向に対して垂直な方向（長手方向）に、駆動手段４との複数の接続部位を有することが好ましい。このようにすることで、複合転写膜３をより高い精度で移動させることができる。
　駆動補助部材３３の材質は、転写膜３１及び保護シート３２を一体に移動させることができる強度を有し、絶縁性を有するものであれば、特に限定されない。例えば、樹脂であれば、保護シート３２の材質として挙げたものから適宜選択できる。
　駆動補助部材３３の大きさは、複合転写膜３を安定して移動させることができる限り、特に限定されない。ここでは、駆動補助部材３３として帯状（細長シート状）のものを例示しており、例えば、長辺の長さ（複合転写膜３の移動方向に対して直交する方向の長さ）Ｙ５は、前記Ｙ４と同等とし、短辺の長さ（複合転写膜３の移動方向の長さ）Ｘ５は、前記Ｘ４と同等としてもよい。また、駆動補助部材３３はゲルと接触することはないので、十分な強度を付与できる観点から、駆動補助部材３３の厚さは、保護シート３２の厚さに対して同等以上であることが好ましい。
　保護シート３２及び駆動補助部材３３の連結方法は、これらの材質に応じて適宜選択すればよく、例えば、転写膜３１及び保護シート３２の連結方法と同様でよい。そして、第二の連結部３０ｂの連結幅（複合転写膜３の移動方向の長さ）Ｘ３２は、第一の連結部３０ａの連結幅と同様でよい。また、第二の連結部３０ｂは、保護シート３２及び／又は駆動補助部材３３の、複合転写膜３の移動方向に対して直交する方向の全域に渡って形成されていることが好ましい。このようにすることで、複合転写膜３をより高い精度で移動させることができる。
　ここでは、保護シート３２及び駆動補助部材３３の重ね合わせ部位全域が接合され、第二の連結部３０ｂとなっている例を示しているが、前記重ね合わせ部位の一部のみが接合されていてもよい。ただし、第二の連結部の強度が向上し、且つ保護シート３２の保護面を広くできる点から、全域が接合されていた方が好ましい。
　駆動補助部材３３は、ここに示すものに限定されず、本発明の効果を妨げない範囲内において、適宜構成の一部を変更してもよい。例えば、駆動補助部材３３を、クリップ状構造とし、保護シート３２の端部側を挟持して連結するようにしてもよい。
　ここでは、複合転写膜３として、転写膜３１、保護シート３２及び駆動補助部材３３が、この順に複合転写膜３の移動方向（泳動方向）に連結されたものを例示したが、駆動補助部材３３は省略することもできる。この場合、例えば、第一の連結部３０ａに対して反対側の保護シート３２の端部側、例えば、第二の連結部３０ｂに相当する部位を含む領域に、接続穴３３ａに相当する接続穴を直接設け、ここで駆動手段４と接続するようにしてもよい。このように、駆動補助部材３３は必須の構成ではないが、保護シート３２の損傷を確実に抑制できると共に、複合転写膜３をより容易に移動させることができる点で、駆動補助部材３３を使用することが好ましい。
　ゲル充填槽２に充填されたゲルは、解析対象の分子の種類に応じて適宜選択すればよい。好ましいゲルとしては、ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲルが例示できる。また、ゲルは二種以上の材質のものを組み合わせて使用してもよく、その場合の組み合わせは任意に選択できる。そして、例えば、ポリアクリルアミドゲルの場合、濃度を変えて分離部及び濃縮部の二層構造を有するものとしてもよい。
　電気泳動用キット１は、ゲルが充填されたゲル充填槽２及び複合転写膜３以外に、電気泳動時もしくは電気泳動時までに使用するその他の部材、器具又は薬品等を備えていてもよい。
　電気泳動用キット１は、例えば、各種包装材で包装し、密封された状態で保存することが好ましい。前記包装材としては、ガス遮断性、液体遮断性、光遮断性及び熱遮断性の一以上の性質を有するものが好ましく、好ましい具体的材質としては、保護シート３２と同様のものが例示できる。
　電気泳動用キット１は、第二の開口部２ｂにおいてゲルの露出面に、保護シート３２が密着するように複合転写膜３を配置し、ゲル充填槽２にゲルを充填することで、作製できる。
　ゲルの充填時には、例えば、ゲル充填槽２の第三の開口部２ｃからゲル用原料を注入し、第三の開口部２ｃにコームを挿入し、そのままゲル用原料を重合させて、最後にコームを引き抜けばよい。
　図４は、コームの具体例を示す正面図であり、ここに示すコーム９１は、一方の端面に６個の凸部９１ａ，・・を備えたくし型の形状を有する。電気泳動用キット１において、ゲル充填槽２のゲル充填部２０にゲル用原料を注入した後、コーム９１をそのくし歯（凸部９１ａ，・・）側から、長手方向が一致するようにゲル充填槽２の第三の開口部２ｃに挿入し、ゲル用原料を重合させて、ゲル化させることにより、６個の凸部９１ａ，・・に対応して、試料導入部となる６個の凹部（図示略）が連設されたくし型形状をゲルに形成できる。なお、試料導入部を形成するためのコームの凸部の数は、目的に応じて任意に設定できる。
　なお、ここでは、複合転写膜３として、転写膜３１に保護シート３２が連結されたものを示しているが、転写膜３１の材質によっては、転写膜３１の一部を変質させて保護シートとした複合転写膜を使用してもよい。転写膜３１を変質させる方法としては、加熱又は有機溶剤処理によって、転写膜３１の性質を変化させる方法が例示できる。転写膜３１を変質させる方法は、例えば、転写膜３１の空隙部を潰し、多孔質性を排除して液体非透過性の保護シートとするのに好適である。
　図５は、他の実施形態に係る電気泳動用キットの具体例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は分解図、（ｃ）は（ｂ）におけるゲル充填槽２の泳動下流端の拡大断面図である。
　ここに示す電気泳動用キット１０Ａは、図１に示す電気泳動用キット１を用いたものであり、さらに陰極緩衝液槽６Ａと組み合わせて構成されたものである。
　電気泳動用キット１のゲル充填槽２には、電気泳動用のゲル２００が充填されている。
そして、複合転写膜３は、転写膜３１、保護シート３２及び駆動補助部材３３の連結方向（複合転写膜３の長手方向）が、図中の矢印で示す試料の泳動方向に沿うように配置されている。ここで、保護シート３２は、ゲル充填槽２の泳動下流側に位置する第二の開口部２ｂにおいて、充填されたゲル２００の露出面に導電性の液体透過性シート５を介して密着されている。
　保護シート３２は、例えば、前記第二の開口部２ｂのうち、ゲル２００が露出されていない部位（ゲル充填槽２の上板２１、下板２２及びスペーサ２３のいずれか）において、接着剤により容易に剥離可能にゲル充填槽２に固定されていることが好ましい。ここで「容易に剥離可能」とは、複合転写膜３の移動開始と共に保護シート３２が容易にゲル充填槽２から剥離する程度に、弱い接着力で固定されることを指す。そして、前記第二の開口部２ｂにおける保護シート３２の固定部位は、転写膜３１の分子が転写された又は転写される予定の領域が複合転写膜３の移動時に通過しない部位であることが好ましく、より具体的には、図５（ｂ）において符号２０ｂで示される、前記第二の開口部２ｂの長手方向端部の領域が例示できる。なお、ここでは、保護シート３２が液体透過性シート５を介してゲル充填槽２に固定されることになるが、液体透過性シート５を用いない場合には、ゲル充填槽２に直接固定されていてよい。
　保護シート３２を固定する前記接着剤としては、耐水性シリコン系接着剤又は樹脂系接着剤が好ましい。そして、接着力を弱く調節するために、前記固定部位において、前記接着剤をスポット状に塗布することが好ましい。
　液体透過性シート５は、第二の開口部２ｂ全体を覆うように、ゲル充填槽２の第二の開口部２ｂを被覆している。そして、第二の開口部２ｂの開口面以外の部位において、粘着剤又は接着剤等によりゲル充填槽２に固定されていることが好ましい。このように液体透過性シート５を配置することで、ゲル充填槽２の内部で、注入されたゲル用原料を重合させてゲル化させる際に、より均一に重合させることができ、さらに、分離された分子を転写膜３１に転写及び吸着させる時に、第二の開口部２ｂで露出されているゲル２００の転写膜３１との摩擦による損傷を抑制する高い効果が得られる。液体透過性シート５は必須の構成ではなく、転写膜３１を直接ゲル２００に密着させてもよいが、液体透過性シート５を使用することにより、上記のような効果が得られ、分子の転写をより高い精度で行うことができる。
　液体透過性シート５は、導電性及び液体透過性を有し、解析対象の分子を透過させるものであればよいが、転写膜３１との摩擦に対する耐性を有する材質や、解析対象の分子に対する吸着性が低い材質からなるものが好ましい。このような性質を併せ持つ材質としては、例えば、タンパク質を解析する場合であれば、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）が例示でき、親水性ＰＶＤＦ膜（ミリポア社製）が市販品として入手できる。
　液体透過性シート５の厚さは、０．０５～２ｍｍであることが好ましい。
　陰極緩衝液槽６Ａは、ゲル充填槽２と組み合わせて、電気泳動時に陰極緩衝液の貯留部となるものであり、本体６１及び封止部材６２を備える。
　本体６１は、角型の容器において一部の側壁部が取り払われて開放された形状を有し、底部６１ａ上に、ゲル充填槽２を設置するためのステージ６１ｂが設けられている。そして、ステージ６１ｂは、その側面が前記開放部において本体６１から突出されている。
　封止部材６２は、その長手方向に対して垂直な方向における断面形状がＬ字状であり、側壁部６２ａと、これに対して垂直な底部６２ｂから構成される。
　複合転写膜３と一体化されたゲル充填槽２は、その下板２２をステージ６１ｂ上に設置することで、陰極緩衝液槽６Ａの本体６１と組み合わされる。また、封止部材６２は、その底部６２ｂの外表面をゲル充填槽２の上板２１上に設置することで、その側壁部６２ａは、本体６１の側壁部６１ｃと隙間なく一繋がりになり、上記の陰極緩衝液の貯留部を形成する。なお、陰極緩衝液槽６Ａの本体６１及び封止部材６２、並びにゲル充填槽２は、契合させる方法又は接着剤を用いる方法など、周知の手法で相互に固定することが好ましい。前記接着剤としては、耐水性を有するものが好ましく、耐水性シリコン系接着剤又は樹脂系接着剤がより好ましく、市販品であれば、シリコン変性ポリマー系接着剤スーパーＸ（セメダイン社製）が例示できる。
　複合転写膜３は、陰極緩衝液槽６Ａの底部６１ａの外表面に、転写膜３１の転写面が沿うように配置される。これにより、電気泳動時には、複合転写膜３を移動させることで、試料から分離された分子を、ゲル２００から転写膜３１に連続的に転写できる。電気泳動用キット１０Ａにおいては、ゲル充填槽２がステージ６１ｂと共に本体６１から突出されており、分子の転写を行う時には、複合転写膜３を容易に移動させることができる。
　図６は、複合転写膜３の第一の連結部３０ａ及び第二の連結部３０ｂを含む領域における拡大図である。ここでは、第一の連結部３０ａにおいて、保護シート３２がゲル２００との接触部（ゲル２００の前記露出面）側に位置するように、複合転写膜３が配置された例を示している。第一の連結部３０ａにおいては、これとは逆に、転写膜３１がゲル２００との接触部側に位置するようになっていてもよいが、ここに図示する配置形態が好ましい。第一の連結部３０ａにおいては、ここに示すように、転写膜３１と保護シート３２との重ね合わせに起因する段差が生じることがある。複合転写膜３が図示するように配置された場合、後述する解析方法において複合転写膜３が移動すると、その移動方向（図中の矢印方向）において、ゲル２００の前記露出面が前記段差に起因する突出部に引っ掛かることなく、第一の連結部３０ａが通過する。すなわち、転写膜３１がゲル２００との接触部側に位置するように複合転写膜３が配置された場合よりも、第一の連結部３０ａが滑らかに通過する。
　なお、ここでは、第二の連結部３０ｂにおいて、駆動補助部材３３がゲル２００との接触部（ゲル２００の前記露出面）側に位置している例を示しているが、これとは逆に、保護シート３２がゲル２００との接触部側に位置していてもよい。第二の連結部３０ｂは、通常ゲル２００とは接触しないので、ゲル２００の前記露出面は、第一の連結部３０ａの場合のような影響を受けない。
　図７は、本実施形態に係る電気泳動用キットに好適な、陰極緩衝液槽の本体の他の具体例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は（ａ）のＢ－Ｂ線における断面図である。
　ここに示す陰極緩衝液槽６Ｂの本体６３は、底部６３ａの外表面が、外方に向けて膨出する凸状の曲面をなしている。また、ゲル充填槽２を設置するためのステージ６３ｂは、その側面が、陰極緩衝液槽６Ａとは異なり、本体６３から突出されていない。そして、陰極緩衝液槽６Ｂにおいて、封止部材をはじめとするその他の部位は、陰極緩衝液槽６Ａと同様である。陰極緩衝液槽６Ｂは、底部６３ａの外表面が曲面であることで、上記のようにステージ６３ｂの側面が突出されていなくても、分子の転写時における複合転写膜３の移動が容易となり、円滑且つ安全に移動可能となる。なお、ステージ６３ｂの側面は、陰極緩衝液槽６Ａの場合と同様に、突出されていてもよい。
　電気泳動用キット１０Ａは、ここに示すものに限定されず、本発明の効果を妨げない範囲内において、適宜、一部構成が変更されてもよい。例えば、電気泳動用キット１以外は、従来の電気泳動用キットと同様に構成できる。また、封止部材６２は、ステージ６１ｂ上への設置部位と、陰極緩衝液の貯留部を形成し得る側壁部を有していれば、形状は特に限定されない。
　電気泳動用キット１０Ａは、電気泳動用キット１と同様に、各種包装材で包装し、密封された状態で保存することが好ましい。
　電気泳動用キット１０Ａは、第二の開口部２ｂにおいてゲル２００の露出面に、液体透過性シート５を介して又は直接、保護シート３２が密着するように複合転写膜３を配置し、ゲル充填槽２にゲル２００を充填することで作製できる。
　ゲル２００の充填方法は、電気泳動用キット１の場合と同様である。
　ここまでは、本発明に係る分離吸着キットとして、電気泳動用キット１及び１０Ａについて説明したが、例えば、解析対象の分子に応じて、ゲル、ゲル充填槽、複合転写膜、及び液体透過性シートに代えて、種々の分離媒体、分離槽、保護部が設けられた吸着部材、及び導電性媒体の組み合わせを適用できる。すなわち、分離媒体及び吸着部材は、解析対象の分子に応じて適宜選択すればよく、保護部は、分離媒体に応じて適宜選択すればよく、導電性媒体は、解析対象の分子及び分離媒体に応じて適宜選択すればよい。そして、分離槽は、緩衝液を介して電流を流し、かかる分子を分離するのに適した構成になっていればよい。
＜分離吸着装置及び分子の解析方法＞
　本発明に係る分離吸着装置は、前記分離吸着キットを備え、さらに、前記分離吸着キット中の前記吸着部材を移動させる駆動手段を備えたことを特徴とする。
　また、本発明に係る分子の解析方法は、前記分離吸着キットを用いる分子の解析方法であって、前記吸着部材を移動させて、前記第二の開口部から前記保護部を移動させ、分離した分子を前記分離媒体から前記吸着部材に吸着させる工程を有することを特徴とする。
　これら分離吸着装置及び解析方法の好ましい一実施形態としては、前記電気泳動用キットを使用したものが例示できる。
　本実施形態に係る分子の解析方法は、前記電気泳動用キットの複合転写膜を移動させて、前記保護シートが前記ゲル露出面に密着した状態から、前記転写膜が前記ゲル露出面に密着するようにして、解析対象の分子を前記ゲルから前記転写膜に転写する工程を備えたものである。以下、かかる分子の解析方法について、図面を参照しながら、詳しく説明する。
　図８は、本実施形態に係る分子の解析方法の具体例を説明するための概略断面図である。ここでは、分離吸着装置として、電気泳動用キット１０Ａを備えた電気泳動装置１００Ａを用いた解析方法について説明する。
　図８（ａ）は、電気泳動開始前の電気泳動装置を例示する概略断面図である。図８（ａ）に示すように、電気泳動装置１００Ａは、電気泳動用キット１０Ａ、収容部９２、直流電源９３、電極９４（陰極９４ａ及び陽極９４ｂ）、電線９５及び駆動手段４を備えて構成されている。
　収容部９２は、電気泳動を行う本体に該当し、隔壁９２０によって、陰極緩衝液９９ａの貯留部を含む陰極側収容部９２１と、陽極緩衝液９９ｂの貯留部を構成する陽極側収容部９２２とに分けられている。
　陰極側収容部９２１には、電気泳動用キット１０Ａが配置されている。そして、ゲル２００の前記露出面に保護シート３２が密着された状態を維持しつつ、陰極緩衝液槽６Ａの側壁部６１ｃ及び底部６１ａの外表面に、転写膜３１の転写面が沿うように、複合転写膜３が配置されている。複合転写膜３は、さらに、駆動補助部材３３を介して駆動手段４に接続されている。陰極緩衝液槽６Ａには、陰極緩衝液９９ａが貯留されている。
　一方、陽極側収容部９２２には、陽極緩衝液９９ｂが貯留されている。
　なお、図８においては、便宜上、第一の連結部３０ａ及び第二の連結部３０ｂをそれぞれ黒点「・」で表示している。また、液体透過性シートの図示は省略している。
　隔壁９２０は、収容部９２を仕切るだけでなく、複合転写膜３の保護シート３２及び転写膜３１を、第二の開口部２ｂにおけるゲル２００の露出面に対して密着させる機能も有する。また、隔壁９２０は、開口部９２０ａを有し、これを有することにより電気泳動が円滑に進行する。
　隔壁９２０の材質は、各種緩衝液で変質しないものであればよい。そして、保護シート３２及び転写膜３１のゲル２００に対する密着度を向上させるために、隔壁９２０は弾性を有する材質からなることが好ましく、かかる材質としては、天然ゴム、合成ゴムが例示でき、より具体的には、保護シート３２の材質として例示したものが挙げられる。
　電極９４は、陰極９４ａ及び陽極９４ｂから構成され、電線９５により直流電源９３と電気的に接続されている。
　陰極９４ａ及び陽極９４ｂは、周知の材質で構成でき、具体的には各種金属、合金、カーボンが例示できるが、安定性の観点から白金が好ましい。
　陰極緩衝液９９ａ及び陽極緩衝液９９ｂも、公知の組成のものが使用でき、解析対象の分子の種類に応じて適宜選択すればよい。好ましいものとしては、トリス（Ｔｒｉｓ）／グリシン緩衝液、Ｔｒｉｓ／グリシン／ＳＤＳ緩衝液、酢酸緩衝液、炭酸ナトリウム緩衝液、Ｎ－シクロヘキシル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）緩衝液、Ｔｒｉｓ／ホウ酸／エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）緩衝液、Ｔｒｉｓ／酢酸／ＥＤＴＡ緩衝液、３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）緩衝液、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ／トリシン緩衝液、Ｔｒｉｓ／メタノール緩衝液等が例示できる。
　電気泳動用キット１０Ａにおいては、その作製時から、図８（ａ）に示すような電気泳動開始直前の状態まで、ゲル２００の前記露出面（ゲル２００の転写膜３１との接触部位）に保護シート３２が密着しているので、前記露出面が保護され、ゲル２００は使用直前まで変質や損傷が防止される。そして、保護シート３２の材質や厚さを適宜選択することで、例えば、乾燥の防止、環境温度の変化に伴う変質の防止、光による変質の防止、及び外部から加わる力による変形や破損の防止の一以上等、目的とする保護作用を強化できる。
　電気泳動装置１００Ａをセットした後、ゲル充填槽２中のゲル２００に試料を導入する。
　次いで、試料を電気泳動すると共に、複合転写膜３を移動させて、保護シート３２がゲル２００の前記露出面に密着した状態から、転写膜３１がゲル２００の前記露出面に密着するようにする。複合転写膜３の移動によって、転写膜３１及び保護シート３２がこれら（複合転写膜３）の連結方向に一体に移動し、保護シート３２及び転写膜３１が順次ゲル２００の前記露出面に直接又は液体透過性シート５を介して密着する。ここで、「転写膜３１及び保護シート３２の連結方向」とは、陰極緩衝液槽６Ａの直下においては、陰極緩衝液槽６Ａの底部６１ａの外表面に沿って、陰極側収容部９２１から陽極側収容部９２２へと向かう方向であり、ゲル２００の前記露出面においては、ゲル充填槽２の第二の開口部２ｂの開口面に沿って上側（ここでは鉛直方向上側）の方向である。
　複合転写膜３は、駆動手段４を作動させ、作用部４１を移動させることで移動する。そして、複合転写膜３を移動させることで、転写膜３１は、陰極緩衝液槽６Ａの側壁部６１ｃ及び底部６１ａの外表面に沿って移動する。さらに、保護シート３２に代わって、転写膜３１がゲル２００の前記露出面と接触した段階から、分子の転写及び吸着が可能となる。図８（ｂ）では、ゲル２００の前記露出面に転写膜３１が密着している状態を示している。
　ここでは、駆動手段４の作用部４１を鉛直方向上側へ移動させる例を示しているが、作用部４１の移動方向は、例えば図８において、鉛直方向に対して所定の角度（０°ではない角度）だけずれた斜め上側の方向、すなわち、陰極側収容部９２１又は陽極側収容部９２２のいずれかの方向に傾いた斜め上側の方向でもよい。
　複合転写膜３の移動開始時期と、電気泳動の開始時期は、転写膜３１への分子の転写が阻害されない限り任意に設定でき、どちらが先でもよいし、同時でもよい。
　複合転写膜３は、設定したプログラムにより、駆動手段４を自動で作動させることで移動させるのが好ましい。
　複合転写膜３の移動速度は特に限定されず、電気泳動の条件を考慮して設定すればよい。ただし、ゲル２００の前記露出面が保護シート３２と接触している段階では、１０～１０００μｍ／秒であることが好ましい。このようにすることで、ゲル２００の前記露出面を保護する、より高い効果が得られる。
　電気泳動は、分子の種類を考慮して通常の条件で行えばよい。例えば、発熱を抑制するために、ゲルをペルチェ素子で冷却してもよい。
　導入した試料は、電気泳動により含有される分子が徐々に分離され、分離された分子は、第二の開口部２ｂに位置するゲル２００の泳動下流端（前記露出面）から排出されると同時に、転写膜３１に転写されて、分子ごとに固定（吸着）される。この時、ゲル２００は変質や損傷が防止されているので、分子の転写膜３１への転写精度が高い。そして、液体透過性シート５を使用した場合には、転写膜３１の移動中におけるゲル２００の保護作用が向上するので、転写精度がより高くなる。ここで、「転写精度が高い」とは、例えば、分子を高い分離能で且つ再現性よく転写できることを指す。
　また、保護シート３２及び転写膜３１を、駆動補助部材３３を介して駆動手段４に接続することにより、保護シート３２の損傷を確実に抑制できると共に、複合転写膜３をより容易に移動させることができる。
　電気泳動と分子の吸着が終了し、例えば、図８（ｃ）に示す状態で複合転写膜３の移動を停止させた後は、電気泳動装置１００Ａから複合転写膜３を取り外し、転写膜３１を必要に応じて純水等で洗浄した後、各種分析に供することで、目的とする分子の解析を行うことができる。ここで分析方法としては、分子の種類や目的に応じて、例えば、ウエスタンブロッティング、サウスウェスタンブロッティング、ファーウェスタンブロッティング、質量分析、蛍光染色、銀染色等、公知の方法を任意に適用すればよい。この時、転写が高精度に行われたことにより、分子に関する情報が高精度で得られる。
　本実施形態に係る解析方法は、電気泳動用キット１０Ａを用いることで、分子の分離及び吸着を容易に自動化して行うことができる。さらに、電気泳動用キット１０Ａの設置から分析まで、一貫して自動化することにより、ゲル２００の前記露出面を保護する、より高い効果が得られる。
　本実施形態に係る前記解析方法は、二次元電気泳動における分子の転写及び吸着にも適用できる。例えば、タンパク質を等電点電気泳動で分離した後、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、二次元平面上に分子を分離展開する二次元電気泳動における、等電点電気泳動後のＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動に好適である。
　電気泳動装置は、ここに示すものに限定されず、本発明の効果を妨げない範囲内において、適宜、一部構成が変更されてもよい。例えば、電気泳動用キット１０Ａ以外は、従来の装置と同様に構成できる。
　分子量が約１０～２００ｋＤａの範囲のタンパク質を解析する場合の、解析条件の一例を以下に示す。なお、以下において、濃度の単位「Ｍ」は「ｍｏｌ／Ｌ」を表す。
　（１）転写膜３１：ＰＶＤＦ製で、Ｘ３が１００ｍｍ、Ｙ３が５５ｍｍであるもの
　（２）保護シート３２：液体透過性及び熱伝導性が低いＰＥＴフィルムと、光透過性が低い着色ＰＥＴフィルムとをラミネートしたプラスチックフィルムで、Ｘ４が１５ｍｍ、Ｙ４が５５ｍｍであるもの
　（３）駆動補助部材３３：アクリル樹脂製で、５５ｍｍ×２００ｍｍの帯状のもの
　（４）第一の連結部３０ａ：連結幅Ｘ３１が５ｍｍで、熱溶着されたもの
　（５）第二の連結部３０ｂ：連結幅Ｘ３２が５ｍｍで、熱溶着されたもの
　（６）ゲル２００：濃度１２．５％の分離部と、４％の濃縮部との二層構造を有するポリアクリルアミドゲル
　（７）陰極緩衝液：Ｔｒｉｓ（２５ｍＭ）／グリシン（１９２ｍＭ）／ＳＤＳ（０．２％）緩衝液（４０ｍｌ）
　（８）陽極緩衝液：Ｔｒｉｓ（１５０ｍＭ）／メタノール（１０％）緩衝液を（４０ｍｌ）
　（９）複合転写膜３の移動速度：１０μｍ／秒
　（１０）電気泳動条件：定電流４０ｍＡ、２時間
　上記条件で、分子の転写終了時までに、転写膜３１は７２ｍｍ移動し、この間に分子量が約１０～２００ｋＤａの範囲のタンパク質が分離及び転写され、実質的に試料に含まれる全タンパク質を分離及び解析できる。
　ただし、ここに示した条件は、適用可能なもののごく一例に過ぎず、目的に応じて適宜諸条件を変更可能であることは言うまでもない。
　ここまでは、本発明に係る分離吸着装置及び解析方法として、前記電気泳動用キットを使用した場合について説明したが、分離吸着装置としては、前記分離吸着キットと前記吸着部材を移動させる駆動手段とを備えたものであれば、解析対象の分子に応じて種々の構成を適用できる。また、解析方法としては、分離した分子を分離媒体から吸着部材に吸着させる工程を有していれば、分離吸着装置に応じて種々の構成を適用できる。
　本発明は、医学、薬学、生化学、食品等の、高分子の解析が必要とされる分野全般で利用可能である。
　１・・・電気泳動用キット、２・・・ゲル充填槽、２ａ・・・第一の開口部、２ｂ・・・第二の開口部、２００・・・ゲル、３・・・複合転写膜、３１・・・転写膜、３２・・・保護シート、４・・・駆動手段、１０Ａ・・・電気泳動用キット、５・・・液体透過性シート、９９ａ・・・陰極緩衝液、９９ｂ・・・陽極緩衝液、１００Ａ・・・電気泳動装置

Claims (8)

  1. 　緩衝液を介して電流を流すことにより解析対象の分子を分離する分離媒体と、該分離媒体を格納した分離槽と、分離した分子を前記分離媒体から吸着する多孔質の吸着部材と、を備えた分離吸着キットであって、
    　前記分離槽は、電流を流すための第一及び第二の開口部を有し、
    　前記吸着部材には、前記分離媒体の露出面を保護する保護部が設けられ、
    　前記第二の開口部において、前記分離媒体の露出面に前記保護部が密着するように前記吸着部材が配置されたことを特徴とする分離吸着キット。
  2. 　前記保護部が前記吸着部材に連結されて設けられたことを特徴とする請求項１に記載の分離吸着キット。
  3. 　前記保護部が前記吸着部材に貼付されて設けられたことを特徴とする請求項１又は２に記載の分離吸着キット。
  4. 　前記吸着部材の一部が変質されて前記保護部とされたことを特徴とする請求項１～３のいずれか一項に記載の分離吸着キット。
  5. 　前記第二の開口部に前記保護部が接着されたことを特徴とする請求項１～４のいずれか一項に記載の分離吸着キット。
  6. 　前記第二の開口部と前記保護部との間に、前記分子が透過可能な導電性媒体が設けられたことを特徴とする請求項１～５のいずれか一項に記載の分離吸着キット。
  7. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の分離吸着キットを備えた分離吸着装置であって、
    　さらに、前記分離吸着キット中の前記吸着部材を移動させる駆動手段を備えたことを特徴とする分離吸着装置。
  8. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の分離吸着キットを用いる分子の解析方法であって、
    　前記吸着部材を移動させて、前記第二の開口部から前記保護部を移動させ、分離した分子を前記分離媒体から前記吸着部材に吸着させる工程を有することを特徴とする分子の解析方法。
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