WO2012118088A1 - 再燃性前立腺癌の検出方法 - Google Patents

再燃性前立腺癌の検出方法 Download PDF

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祥子 西原
正雄 佐々木
成松　久
譲 池原
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National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Soka University
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National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Soka University
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Definitions

  • the present invention relates to a method for detecting relapsed prostate cancer.
  • prostate cancer grows depending on androgen, which is a male hormone, hormone therapy that suppresses androgen secretion and action is used as an effective treatment. However, not only a few cancer cells survive this hormone therapy. Surviving cancer cells then repeat growth and cause hormone-resistant prostate cancer that is resistant to hormone therapy. Hormone refractory prostate cancer is a reactivated growth of prostate cancer once suppressed by hormone therapy, and is also called relapsed prostate cancer.
  • An object of the present invention is to find a marker specific to relapsed prostate cancer and to provide a method for specifically detecting relapsed prostate cancer using this marker.
  • the present inventors have focused on specific sugar chain-related genes that have been difficult to detect because the expression level is low so far, and among the genes that contain these genes, the higher in relapsed prostate cancer cells. Or it succeeded in specifying the gene which shows a lower expression level.
  • the present invention has been completed based on this finding.
  • a method for detecting relapsed prostate cancer comprising measuring the expression level of at least one gene comprising the DNA of any one of (a) to (d) below: (A) the base sequence of SEQ ID NO: 1, the base sequence of SEQ ID NO: 3, the base sequence of SEQ ID NO: 5, the base sequence of SEQ ID NO: 7, the base sequence of SEQ ID NO: 9, the base sequence of SEQ ID NO: 11, the base of SEQ ID NO: 15 Sequence, base sequence of SEQ ID NO: 17, base sequence of SEQ ID NO: 19, base sequence of SEQ ID NO: 21, base sequence of SEQ ID NO: 23, base sequence of SEQ ID NO: 25, base sequence of SEQ ID NO: 27, base sequence of SEQ ID NO: 31 , SEQ ID NO: 33 base sequence, SEQ ID NO: 35 base sequence, SEQ ID NO: 37 base sequence, SEQ ID NO: 39 base sequence, SEQ ID NO: 41 base sequence, SEQ ID NO: 43 base sequence, SEQ ID NO:
  • ⁇ 2> The detection method according to ⁇ 1>, wherein the measurement of the expression level of the gene is a measurement of the amount of the transcription product of the gene.
  • the expression level of at least one gene is measured using at least one primer set selected from the group consisting of the following (Aa) to (Bb): (Aa) a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 63 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 64; (Ab) a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 65 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 66; (Ac) a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 67 and an oligonucleotide consisting of the base
  • Ba A primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 121 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 122.
  • (Bb) A primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 123 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 124.
  • the amount of protein to be measured is the amount of at least one protein consisting of any one of the following amino acid sequences (e) to (g): (E) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, the amino acid of SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 18, amino acid sequence SEQ ID NO: 20, amino acid sequence SEQ ID NO: 22, amino acid sequence SEQ ID NO: 24, amino acid sequence SEQ ID NO: 26, amino acid sequence SEQ ID NO: 28, amino acid sequence SEQ ID NO: 32 , Amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, amino acid sequence of SEQ
  • relapsed prostate cancer can be specifically detected by distinguishing it from hormone-sensitive prostate cancer.
  • FIG. 2 is a photograph of electrophoresis showing the results of RT-PCR described in Example 1.
  • Lane 1 shows the results of PrE cells
  • Lane 2 shows the results of LNCaP cells
  • Lane 3 shows the results of Du145 cells
  • Lane 4 shows the results of PC-3 cells.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
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  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time RT-PCR described in Example 2.
  • 3 is a graph showing the results of real-time
  • the method for detecting relapsed prostate cancer of the present invention measures the expression level of a specific gene and specifically detects relapsed prostate cancer based on the measurement result. Is the method.
  • relapsed prostate cancer is synonymous with “hormone-insensitive prostate cancer”, “hormone-resistant prostate cancer”, and “hormone-independent prostate cancer”, and hormone therapy that blocks hormones such as androgens Cancer cells whose growth has been suppressed by the above are used to include not only hormone-resistant prostate cancer that has started to grow again, but also hormone-resistant prostate cancer cells that have resistance to hormone therapy from the beginning of cancer development .
  • the gene whose expression level is measured by the detection method of the present invention is the base sequence of SEQ ID NO: 1, the base sequence of SEQ ID NO: 3, the base sequence of SEQ ID NO: 5, the base sequence of SEQ ID NO: 7, the base sequence of SEQ ID NO: 9,
  • base sequence identity means that the two base sequences to be compared are aligned by introducing a gap as necessary, and the maximum base sequence identity obtained (%) ).
  • the alignment for the purpose of determining the identity of the base sequence can be performed using a usual method.
  • publicly available computer software such as BLAST, DNASIS Pro (manufactured by Hitachi Software Engineering)
  • commercially available software such as GENETYX (manufactured by Genetics) can also be used.
  • the gene whose expression level is measured by the detection method of the present invention includes the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3, the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 5, the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 7, and the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 9.
  • base sequence of SEQ ID NO: 11 base sequence of SEQ ID NO: 15, base sequence of SEQ ID NO: 17, base sequence of SEQ ID NO: 19, base sequence of SEQ ID NO: 21, base sequence of SEQ ID NO: 23, base sequence of SEQ ID NO: 25
  • a base sequence of SEQ ID NO: 27, a base sequence of SEQ ID NO: 31, a base sequence of SEQ ID NO: 33, a base sequence of SEQ ID NO: 35, a base sequence of SEQ ID NO: 37, a base sequence of SEQ ID NO: 39, a base sequence of SEQ ID NO: 41 The base sequence of SEQ ID NO: 43, the base sequence of SEQ ID NO: 45, the base sequence of SEQ ID NO: 47, the base sequence of SEQ ID NO: 51, the base sequence of SEQ ID NO: 53, the base sequence of SEQ ID NO: 55, the base sequence of SEQ ID NO: 57
  • “1 or (or several)” is preferably an integer of 1 to 50, more preferably an integer of 1 to 30, and still more preferably an integer of 1 to 20.
  • An integer of 1 to 15 is particularly preferable, and an integer of 1 to 10 is particularly preferable.
  • the gene whose expression level is measured by the detection method of the present invention includes the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3, the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 5, the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 7, and the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 9.
  • base sequence of SEQ ID NO: 11 base sequence of SEQ ID NO: 15, base sequence of SEQ ID NO: 17, base sequence of SEQ ID NO: 19, base sequence of SEQ ID NO: 21, base sequence of SEQ ID NO: 23, base sequence of SEQ ID NO: 25
  • the base sequence of SEQ ID NO: 43, the base sequence of SEQ ID NO: 45, the base sequence of SEQ ID NO: 47, the base sequence of SEQ ID NO: 51, the base sequence of SEQ ID NO: 53, the base sequence of SEQ ID NO: 55, the base sequence of SEQ ID NO: 57 It may consist of hybridizing DNA with a base sequence and complementary DNA under stringent conditions to the nucleotide sequence and nucle
  • stringent conditions means DNAs having high nucleotide sequence identity, for example, 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, still more preferably 95% or more, particularly preferably. Is a condition in which DNAs having an identity of 97% or more hybridize to each other and DNAs having lower identity than each other do not hybridize, or a washing condition for normal Southern hybridization, 60 ° C., 1 ⁇ SSC, 0.
  • 1% SDS preferably 60 ° C., 0.1 ⁇ SSC, 0.1% SDS, more preferably 65 ° C., 0.1 ⁇ SSC, 0.1% SDS, more preferably 68 ° C., 0.1% XSSC, conditions corresponding to washing at a temperature and salt concentration corresponding to 0.1% SDS once, more preferably 2 to 3 times.
  • the hybridization is described in J. Org. Sambrook et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory (1989).
  • the gene whose expression level is measured by the detection method of the present invention is a gene consisting of DNA present in at least the genome of human prostate cancer cells, and the expression level between hormone-sensitive prostate cancer and relapsed prostate cancer There is a difference in the genes.
  • the sugar chain-related gene means a gene that can participate in the synthesis, metabolism, modification, etc. of the sugar chain.
  • Table 1 below shows the correspondence between the sequence numbers of the base sequences described in the present specification and the gene names encoded by the base sequences.
  • the gene whose expression level is measured by the detection method of the present invention is the base sequence of SEQ ID NO: 1, the base sequence of SEQ ID NO: 3, the base sequence of SEQ ID NO: 5, the base sequence of SEQ ID NO: 7, the base sequence of SEQ ID NO: 9, DNA consisting of a base sequence selected from the group consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 11 and the base sequence of SEQ ID NO: 27, or It consists of the base sequence of SEQ ID NO: 1, the base sequence of SEQ ID NO: 3, the base sequence of SEQ ID NO: 5, the base sequence of SEQ ID NO: 7, the base sequence of SEQ ID NO: 9, the base sequence of SEQ ID NO: 11 and the base sequence of SEQ ID NO: 27 DNA having 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, still more preferably 95% or more, particularly preferably 97% or more identity with a base sequence selected from the group, or It consists of the base sequence of SEQ ID NO: 1, the base sequence of SEQ ID NO: 3, the base sequence
  • the expression level of at least one of the genes (or variants thereof) shown in Table 1 above is measured (except for PSA, ACTB, and AR). That is, in the detection method of the present invention, relapsed prostate cancer may be detected by measuring the expression level of one of the genes (or variants thereof) shown in Table 1 above, or two of the above genes The above expression level may be measured to detect relapsed prostate cancer.
  • “measurement” includes both quantitative and qualitative concepts.
  • examples of preferable gene combinations include the following combinations (h) to (m). Is not limited to this.
  • (H) a gene having DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1, A gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3, a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 5, a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 7, and a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 9.
  • the expression level of a gene can be measured by measuring the amount of a transcription product of the gene, that is, the expression level of mRNA.
  • the mRNA expression level can be measured by a normal method such as RT-PCR or real-time RT-PCR, but it is preferably measured by real-time RT-PCR from the viewpoint of rapid measurement.
  • the real-time RT-PCR method can be performed by a usual method such as the method described in Examples described later.
  • the primer for gene amplification used for the measurement of the expression level of mRNA is not particularly limited, and can be designed by an ordinary method based on the base sequence of the target gene. For example, by using one or more primer sets selected from the following (Aa) to (Bb), a nucleic acid amplification reaction can be performed using a cDNA synthesized from the mRNA as a template. The expression level can be measured.
  • Ab a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 65 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 66;
  • Ac a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 67 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 68;
  • Ad a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 69 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 70;
  • Ae a primer set consisting of an oligonucleotide consisting of an oligonu
  • Ba A primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 121 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 122.
  • Bb A primer set consisting of an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 123 and an oligonucleotide consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 124.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the base sequence of SEQ ID NO: 1 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ab) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ac) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 5 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ad) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 7 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 9 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 11 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ag) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 15 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ah) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 17 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 19 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 21 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ak) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 23 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Al) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 25 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 27 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (An) above the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 31 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ao) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 33 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ap) above the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 35 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 37 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 39 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 41 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 43 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 45 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 47 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Aw) above the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 51 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ax) above the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 53 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 55 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene having a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 57 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Ba) above the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 59 or a variant thereof can be measured.
  • the primer set (Bb) above the expression level of a gene having a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 61 or a variant thereof can be measured.
  • the expression level of a gene can also be measured by measuring the amount of protein that is an expression product of the gene.
  • the protein whose amount is measured in the present invention is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, Amino acid sequence, amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, amino acid sequence of SEQ ID NO: 26, amino acid of SEQ ID NO: 28 Sequence, amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, amino acid sequence of SEQ ID NO: 42, amino acid sequence of SEQ ID NO: 44 , SEQ ID NO: 46 amino acid sequence, SEQ ID NO: 48 amino acid sequence, SEQ ID NO: 52 An amino acid sequence selected
  • amino acid sequence of SEQ ID No. 18 the amino acid sequence of SEQ ID No. 20
  • amino acid sequence of SEQ ID No. 22 the amino acid sequence of SEQ ID No. 24, the amino acid sequence of SEQ ID No. 26, the amino acid sequence of SEQ ID No. 28, the SEQ ID No.
  • amino acid sequence 32 amino acid sequence, SEQ ID NO: 34 amino acid sequence, SEQ ID NO: 36 amino acid sequence, SEQ ID NO: 38 amino acid sequence, SEQ ID NO: 40 amino acid sequence, SEQ ID NO: 42 amino acid sequence, SEQ ID NO: 44 amino acid sequence, SEQ ID NO: 46 Amino acid sequence of SEQ ID NO: 48, amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, amino acid sequence of SEQ ID NO: 54, amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, amino acid sequence of SEQ ID NO: 60 and SEQ ID NO: 62 1 or a number in an amino acid sequence selected from the group consisting of amino acid sequences Preferred amino acids are deleted, substituted, may consist of inserted or added in the amino acid sequence.
  • amino acid sequence identity means that two amino acid sequences to be compared are aligned (aligned) by introducing a gap as necessary, and the maximum amino acid sequence identity (%) obtained.
  • Alignment for the purpose of determining the identity of amino acid sequences can be performed using a conventional method.
  • publicly available computer software such as BLAST, DNASIS Pro (manufactured by Hitachi Software Engineering)
  • commercially available software such as GENETYX (manufactured by Genetics) can also be used.
  • the “one or several” is as described above.
  • the above protein is a protein consisting of an amino acid sequence encoded by DNA present in the genome of human prostate cancer cells, and has a difference in abundance between hormone-sensitive prostate cancer and relapsed prostate cancer. is there.
  • the protein measured as the gene expression level is at least one of the above proteins. That is, the amount of two or more proteins may be measured. Examples of preferable combinations of proteins to be measured when measuring the amount of two or more proteins include the following combinations (n) to (s), but the present invention is not limited to these combinations: Absent.
  • the amount of the protein is preferably measured using a molecule that specifically binds to the protein.
  • the molecule that specifically binds to the protein of the present invention include antibodies and aptamers to the protein of the present invention, and it is preferable to use antibodies to the protein of the present invention.
  • the antibody or aptamer can be used after being labeled with a radioactive substance, an enzyme, a fluorescent substance, a luminescent substance, or the like according to the purpose.
  • means usually used in the field of immunoassay can be adopted, and for example, it can be detected by an immunoblot method, an enzyme immunoassay (ELISA method), an immunochromatography method or the like.
  • the antibody used for detecting the protein can be obtained by a usual method.
  • an animal can be immunized to obtain an antibody that selectively reacts with the protein from the animal.
  • an amino acid sequence characteristic of the protein is selected from the amino acid sequence of the protein, a peptide comprising the amino acid sequence is chemically synthesized, this is immunized to the animal, and the animal selectively selects the protein.
  • the measurement of the protein is preferably performed according to the principle of sandwich immunoassay using two types of antibodies having different epitopes in the protein.
  • one antibody is immobilized on a solid phase as a capture antibody, and the other antibody is labeled and functions as a detection antibody.
  • a well in which an antibody against the protein is immobilized is prepared, and the well is blocked with BSA, casein or the like in order to prevent nonspecific adsorption.
  • a protein solution prepared from prostate cancer cells or the like is added here, and incubated for several minutes to several days at a temperature (eg, 4 to 40 ° C.) at which the antibody is hardly inactivated. Subsequently, discard the protein solution, wash the well with phosphate buffer, etc., add a labeled antibody that binds to an epitope different from the epitope to which the immobilized antibody binds, and incubate again for several minutes to several days. After washing, the label present in the well is detected. When the protein of interest is present in the protein solution, the labeling signal becomes high, so that relapsed prostate cancer can be detected.
  • an immobilized antibody in the sandwich ELISA is immobilized on a membrane test line, and a test strip in a state where the labeled antibody in the sandwich ELISA is held on a conjugate pad is prepared.
  • a protein solution prepared from prostate cancer cells or the like is added directly or indirectly to the conjugate pad, the solution proceeds from the conjugate pad to the membrane while reacting with the labeled antibody in a liquid phase by capillary action.
  • the protein of interest is present in the protein solution, a complex composed of the labeled antibody and the protein of interest is trapped on the membrane test line. Therefore, relapsed prostate cancer can be detected by detecting a label present on the test line.
  • the sample in which the expression level of the gene is measured is not particularly limited, and examples thereof include blood, plasma, serum, lymph, urine, saliva and other body fluids, prostate cancer tissue, prostate cancer cells and the like. It is preferable to use prostate cancer tissue or prostate cancer cells.
  • isolated prostate cancer cells include prostate cancer tissue extracted from a living body (prostate cancer patient), a sample obtained by excising the tissue by laser digestion, and the like.
  • the origin of the sample is not particularly limited, but is preferably derived from a human. That is, the detection method of the present invention is suitably used for detecting human relapsed prostate cancer.
  • the detection method of the present invention By using the detection method of the present invention, the hormone sensitivity of prostate cancer can be determined easily and accurately, whereby relapsed prostate cancer can be specifically detected. Therefore, the detection method of the present invention is useful for diagnosis of relapsed prostate cancer.
  • the analysis will focus on the following DNA microarray analysis and quantitative PCR array analysis to select candidate marker genes that can distinguish between hormone-sensitive and hormone-resistant prostate cancer. went.
  • Prostate cancer cell lines LNCaP (hormone sensitivity (dependency)) and Du145 (hormone resistance (independence)) were obtained from RIKEN Cell Bank, RIKEN BioResource Research Center.
  • PC-3 (hormone-independent) was obtained from the Human Science Promotion Foundation JCRB Cell Bank.
  • the normal human prostate epithelial cell line PrE was purchased from DS Pharma Biomedical. All prostate cancer cell lines were cultured using RPMI 1640 medium (GIBCO) supplemented with 10% FBS (Hyclone) and 1% penicillin / streptomycin (GIBCO). Normal human prostate epithelial cell lines were cultured using CS-C medium kit R (DS Pharma Biomedical). All cells were cultured one day prior to RNA and protein extraction, substituting with RPMI 1640 plus 10% FBS.
  • DNA microarray analysis The DNA microarray for comprehensive analysis of glycan-related genes used a tool developed by the RIKEN Laboratory for Disease Sugar Chain. Details of this tool are described in the literature (Molecular And Cellular Biology, Apr. 2007, p.3008-3022). Briefly, first, mRNA of logarithmically growing cells was prepared using mTRAP midi kit (manufactured by Active Motif), quality checked by Bioanalyzer 2100 manufactured by Agilent Technologies, and then CyScribe Post-Labelling Kit (GE Health). Fluorescently labeled with Care Bioscience).
  • the fluorescently labeled sample was hybridized to a microarray carrying about 1200 sugar chain-related genes, and scanned with an Affymetrix 428 Array Scanner.
  • the signal intensity of each spot was quantified (ImaGene; manufactured by BioDiscovery), and after correction, analysis was performed with clustering creation software MultiExperiment Viewer (MeV) (Opensource software tool, http://www.tm4.org/).
  • the qPCR array which is a gene exhaustive analysis tool specialized for glycan synthases, used a tool developed by the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST). Details of this tool are described in the literature (Jornal of Proteome Reserch. Vol.8, No.3, 2009, p.1358-1367). Briefly, first, a total RNA of cells in logarithmic growth phase was prepared using RNeasy plus mini kit (manufactured by QIAGEN), and QuantiTect Rev. First strand cDNA was synthesized using a transcription kit (QIAGEN).
  • PCR primers were selected using ProbeFinder (https://www.roche-applied-science.com/), and made and purchased from Invitrogen. Hydrolysis probes were selected from Universal ProbeLibrary (Roche). The assay for all 189 genes was formatted in 384 plates with duplicate, and amplified and measured with LightCycler 480 (Roche) using qPCR Quick GoldStar Mastermix Plus (Eurogentec). After calculating each copy number, it was analyzed with a clustering creation software MultiExperiment Viewer (MeV) (Opensource software tool, http://www.tm4.org/) after correction.
  • MeV clustering creation software MultiExperiment Viewer
  • Example 1 Detection of Relapsed Prostate Cancer by RT-PCR
  • Normal human prostate epithelial cell line PrE and prostate cancer cell lines LNCaP (hormone sensitive strain), Du145 (hormone resistant strain) and PC-3 (hormone resistant strain) Using each cell line, the amount of the transcription product of 31 kinds of genes shown in Table 1 was measured by RT-PCR.
  • the primers to be selected were selected using ProbeFinder (https://www.roche-applied-science.com/), prepared and purchased by Invitrogen. The results are shown in FIG. Note that the measurement results of PSA, ACTB, AR, and GAPDH in FIG. 1 are provided for reference, and do not indicate the effects of the present invention.
  • GALNAC4S-6ST (SEQ ID NO: 1), B3GNT5 (SEQ ID NO: 3), compared to LNCaP, which is a hormone-sensitive prostate cell line, LGALS1 (SEQ ID NO: 5), CAV1 (SEQ ID NO: 7), CD18 / ITGB2 (SEQ ID NO: 9), ITGA3 (SEQ ID NO: 11), CHST11 (SEQ ID NO: 15), CHST10 (SEQ ID NO: 17), FUT8 (SEQ ID NO: 21) , HAS3 (SEQ ID NO: 25), LCN2 (SEQ ID NO: 31), CHST7 (SEQ ID NO: 33), UST (SEQ ID NO: 35), EXT1 (SEQ ID NO: 37), GALNT4 (SEQ ID NO: 39), HXB / TNC (SEQ ID NO: 41) , BACE2 (SEQ ID NO: 43), CD44 (SEQ ID NO:
  • Hormone-resistant prostate cancer relapsed prostate cancer
  • Example 2 Detection of Relapsed Prostate Cancer by Real-Time RT-PCR Using the following human prostate cancer tissue samples, transcripts of 25 genes among the genes shown in Table 1 were analyzed by real-time RT-PCR described below. The amount was measured.
  • a prostate cancer clinical tissue sample was provided by the Aichi Cancer Center. All samples were provided by patients with informed consent. Eight prostate tissues removed from prostate cancer patients who have not been treated with hormone therapy, and hormone therapy (neoadjuvant therapy: hormone-releasing hormone analogue (LH-RHa)) for 3 months or more before undergoing prostatectomy surgery Eight cases of prostate cancer patients who had received a non-steroidal antiandrogenic agent Bicalutamide (combined with Bicalutamide) and were excised from patients with low sensitivity to the treatment (therapeutic effect was weak) were used in this example.
  • hormone therapy nuclear hormone-releasing hormone analogue
  • prostate cancer cancer cells proliferate depending on male hormones such as androgens, and the growth of cancer cells is often effectively suppressed by suppressing the action of the hormones.
  • hormone-resistant prostate cancer after receiving hormonal therapy, is often the one in which the surviving cancer cells have proliferated again even though growth has been suppressed, and has not received hormonal therapy Incidence in prostate cancer patients is relatively low. Therefore, the following tests were conducted assuming that prostate cancer patients who had not received hormone therapy were hormone sensitive prostate cancer patients.
  • RNA extraction kit (trade name: RecoverAll TM). RNA was extracted using a Total Nucleic Acid Isolation Kit (Ambion).
  • CDNA was prepared using High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems), preamplified with TaqMan (registered trademark) PreAmp Master Mix Kit (Applied Biosystems), and qPCR QuickMoldGoldMoldGoldSurGoldSoldGoldSurGold ABI PRISM (registered trademark) 7700 Sequence Detection System was used for amplification and measurement.
  • the primer set used is the same as in Example 1. After calculating the number of each copy, it was standardized by the expression level of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) mRNA used as a control. For statistical analysis, “KaleidaGraph” manufactured by Hulinks was used and t-test was performed.
  • GPDH glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase
  • GALNAC4S-6ST (SEQ ID NO: 1), B3GNT5 (SEQ ID NO: 3), LGALS1 (SEQ ID NO: 5), CAV1 (SEQ ID NO: 7), ITGB2 (SEQ ID NO: 9), ITGA3 (SEQ ID NO: 9) 11) and ST6GALNAC1 (SEQ ID NO: 27), between cancer cells collected from 8 prostate cancer patients not receiving hormone therapy and cancer cells collected from 8 prostate cancer patients less sensitive to hormone therapy, A clear significant difference (P ⁇ 0.05) was observed in the expression level of mRNA (see the column of 8 vs 8 in Table 2).
  • the expression level of PSA was significantly reduced in cancer cells collected from 8 prostate cancer patients with low sensitivity to hormonal therapy, which was caused by the blockage of androgen. Yes, it is not directly related to hormone resistance. There may also be patients who are not sensitive to hormonal therapy among untreated groups who have not received hormonal therapy. Therefore, for reference, out of samples collected from 8 prostate cancer patients who have not received hormone therapy, except for 2 patient samples with high mRNA expression levels, from 6 prostate cancer patients who have not received hormone therapy. The significant difference between the collected cancer cells and cancer cells collected from 8 prostate cancer patients with low sensitivity to hormone therapy was examined.
  • Example 1 As for the genes for which no significant difference was observed in the above, as shown in Example 1, in the test using the prostate cancer cell line, hormone sensitive prostate cancer cells and hormone resistant prostate cancer cells were distinguished. It has been shown that Therefore, although it is difficult at present, if a patient specimen identified as a hormone sensitive patient can be used, a significant difference in the expression level may be observed with a prostate cancer patient specimen that is less sensitive to hormone therapy. It is done.
  • the detection method of the present invention is a method that can specifically detect relapsed prostate cancer.

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Abstract

　前立腺癌細胞で発現しうる特定の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法。

Description

再燃性前立腺癌の検出方法
　本発明は、再燃性前立腺癌の検出方法に関する。
　前立腺癌は、男性ホルモンであるアンドロゲンに依存して増殖するため、アンドロゲンの分泌や働きを抑制するホルモン療法が有効な治療法として用いられている。しかし、このホルモン療法によっても少なからず癌細胞が生き残る。生き残った癌細胞は、その後増殖を繰返し、ホルモン療法に耐性をもったホルモン抵抗性前立腺癌を引き起こす。ホルモン抵抗性前立腺癌は、ホルモン療法により一度抑制された前立腺癌の増殖が再び活発化したものであり、再燃性前立腺癌とも呼ばれる。
　本発明者らは、再燃性前立腺癌特異的なマーカーを開発することができれば、当該マーカーを検出することにより再燃性前立腺癌を特異的に検出することができ、これにより再燃性前立腺癌に適した治療、すなわち非ホルモン療法をスムーズに実施できるため、患者の負担軽減及び医療経済の観点から有益であると考えた。
　本発明は、再燃性前立腺癌に特異的なマーカーを見い出し、このマーカーを用いて再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法を提供することを課題とする。
　本発明者らは、これまで発現量が少ないが故に発現量の検出が困難であった特定の糖鎖関連遺伝子に着目し、これらを含む遺伝子群の中から、再燃性前立腺癌細胞においてより高い又はより低い発現量を示す遺伝子を特定することに成功した。本発明はこの知見に基づき完成するに至ったものである。
　本発明の課題は下記の手段により達成された。
＜１＞下記（ａ）～（ｄ）のいずれかのＤＮＡからなる少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法：
（ａ）配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｂ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｃ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列において、１又は数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｄ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ。
＜２＞遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の転写産物の量の測定である、＜１＞に記載の検出方法。
＜３＞下記（Ａａ）～（Ｂｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のプライマーセットを用いて少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定する、＜２＞に記載の検出方法：
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
＜４＞遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の測定である、＜１＞に記載の検出方法。
＜５＞測定されるタンパク質の量が、下記（ｅ）～（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列からなる少なくとも１種のタンパク質の量である、＜４＞に記載の検出方法：
（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、
（ｆ）上記（ｅ）のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列、
（ｇ）上記（ｅ）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列であって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列。
＜６＞単離した前立腺癌細胞中における遺伝子の発現量を測定する、＜１＞～＜５＞のいずれかに記載の検出方法。
　本発明によれば、再燃性前立腺癌を、ホルモン感受性前立腺癌と区別して特異的に検出することができる。
　本発明の上記及び他の特徴及び利点は、適宜添付の図面を参照して、下記の記載からより明らかになるであろう。
実施例１に記載のＲＴ－ＰＣＲの結果を示す電気泳動の写真である。レーン１はＰｒＥ細胞の結果を、レーン２はＬＮＣａＰ細胞の結果を、レーン３はＤｕ１４５細胞の結果を、レーン４はＰＣ－３細胞の結果を示す。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。 実施例２に記載のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲの結果を示すグラフである。
　以下、本発明について、その好ましい実施態様に基づき詳細に説明する。
　本発明の再燃性前立腺癌の検出方法（以下、単に本発明の検出方法と呼ぶ。）は、特定の遺伝子の発現量を測定し、当該測定結果に基づき再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法である。
　本発明において「再燃性前立腺癌」とは、「ホルモン低感受性前立腺癌」、「ホルモン抵抗性前立腺癌」及び「ホルモン非依存性前立腺癌」と同義であり、アンドロゲン等のホルモンを遮断するホルモン療法により増殖が抑制されていた癌細胞が再び増殖を開始したホルモン抵抗性の前立腺癌のみならず、癌発生当初からホルモン療法に対する抵抗性を有するホルモン抵抗性の前立腺癌細胞をも含む意味で用いられる。
　本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、又は当該塩基酸配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するＤＮＡからなることが好ましい。
　本明細書において「塩基配列の同一性（％）」とは、比較する２つの塩基配列を必要に応じて間隙を導入して整列（アラインメント）させ、得られる最大の塩基配列の同一性（％）をいう。塩基配列の同一性を決定する目的のためのアラインメントは、通常の方法を用いて行うことができ、例えばＢＬＡＳＴのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアや、ＤＮＡＳＩＳ　Ｐｒｏ（日立ソフトウェアエンジニアリング社製）並びにＧＥＮＥＴＹＸ（ゼネティックス社製）等の市販のソフトウェアを使用することもできる。
　また、本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列において１又は数個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡからなるものであってもよい。
　本明細書において「１又は（もしくは）数個」とは、１～５０の整数であることが好ましく、１～３０の整数であることがより好ましく、１～２０の整数であることがさらに好ましく、１～１５の整数であることが特に好ましく、１～１０の整数であることが殊更好ましい。
　また、本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなるものでもよい。
　本明細書において「ストリンジェントな条件」とは、塩基配列の同一性が高いＤＮＡ同士、例えば７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性を有するＤＮＡ同士がハイブリダイズし、それより同一性が低いＤＮＡ同士がハイブリダイズしない条件、あるいは通常のサザンハイブリダイゼーションの洗浄条件である６０℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、好ましくは、６０℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、より好ましくは、６５℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、さらに好ましくは６８℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳに相当する温度及び塩濃度で、１回、より好ましくは２～３回洗浄する条件が挙げられる。上記ハイブリダイゼーションは、Ｊ．　Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ．　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ　Ｅｄ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８９）に記載されている方法等、通常の方法で行うことができる。
　本発明の検出方法により発現量が測定される上記遺伝子は、少なくともヒト前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡからなる遺伝子であって、ホルモン感受性前立腺癌と再燃性前立腺癌との間で発現量に差がある遺伝子である。配列番号１、３、５、７、９、１１、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、５１、５３、５５、５７、５９及び６１の塩基配列からなる各遺伝子の半数以上は、発現量が少ないが故に、これまでＤＮＡマイクロアレイ等の網羅的解析手段によっては発現量の解析が困難であった糖鎖関連遺伝子である。ここで、糖鎖関連遺伝子とは、糖鎖の合成、代謝、修飾等に関与しうる遺伝子を意味する。
　本明細書に記載される塩基配列の配列番号と当該塩基配列にコードされる遺伝子名との対応を下記表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
　本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、又は、
　配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するＤＮＡ、又は、
　配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列において１もしくは数個の塩基が置換、欠失、挿入もしくは付加された塩基配列からなるＤＮＡ、又は、
　配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなることが好ましい。
　本発明の検出方法においては、上記表１に示す遺伝子（又はそのバリアント）の少なくとも１種の発現量を測定する（但し、ＰＳＡ、ＡＣＴＢ、ＡＲを除く。）。すなわち、本発明の検出方法では、上記表１に示す遺伝子（又はそのバリアント）のうち１種の発現量を測定して再燃性前立腺癌の検出を行ってもよいし、上記遺伝子のうち２種以上の発現量を測定して再燃性前立腺癌の検出を行ってもよい。本発明において「測定」には、定量及び定性の両概念が含まれる。
　本発明の検出方法において、発現量が測定される遺伝子が２種以上である場合において、その好ましい遺伝子の組み合わせの例として、下記（ｈ）～（ｍ）の組合わせが挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
（ｈ）配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
　配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｉ）配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
　配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｊ）配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
　配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｋ）配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｌ）配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又は配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子
との組み合わせ、
（ｍ）配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子
との組み合わせ。
　本発明において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の転写産物の量、すなわちｍＲＮＡの発現量を測定することで行うことができる。ｍＲＮＡの発現量は、ＲＴ－ＰＣＲ、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ等の通常の方法で行うことができるが、迅速な測定の観点からリアルタイムＲＴ－ＰＣＲにより測定することが好ましい。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法は、例えば、後述する実施例に記載の方法のような通常の方法で行うことができる。
　上記ｍＲＮＡの発現量の測定に用いる遺伝子増幅用プライマーに特に制限はなく、目的とする遺伝子の塩基配列に基づき通常の方法で設計することができる。例えば、下記（Ａa）～（Ｂｂ）から選ばれる１種又は２種以上のプライマーセットを用いることで、上記ｍＲＮＡから合成したｃＤＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行うことができ、これにより上記ｍＲＮＡの発現量を測定することができる。
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
　上記（Ａａ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｂ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｃ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｄ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｅ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｆ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｇ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｈ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｉ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｊ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｋ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｌ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｍ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｎ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｏ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｐ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｑ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｒ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｓ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｔ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｕ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｖ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｗ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｘ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｙ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ａｚ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ｂａ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　上記（Ｂｂ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号６１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
　本発明において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量を測定することで行うこともできる。
　本発明において量が測定されるタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、又は
　配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するアミノ酸配列、又は
　配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
からなることが好ましい。
　本発明において「アミノ酸配列の同一性（％）」とは、比較する２つのアミノ酸配列を必要に応じて間隙を導入して整列（アラインメント）させ、得られる最大のアミノ酸配列の同一性（％）をいう。アミノ酸配列の同一性を決定する目的のためのアラインメントは、通常の方法を用いて行うことができ、例えばＢＬＡＳＴのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアや、ＤＮＡＳＩＳ　Ｐｒｏ（日立ソフトウェアエンジニアリング社製）並びにＧＥＮＥＴＹＸ（ゼネティックス社製）等の市販のソフトウェアを使用することもできる。
　また、上記「１又は数個」とは上述したとおりである。
　上記タンパク質は、少なくともヒト前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、ホルモン感受性前立腺癌と再燃性前立腺癌との間で存在量に差がある遺伝子である。
　本発明の検出方法において、遺伝子の発現量として測定されるタンパク質は、上記タンパク質の少なくとも１種である。すなわち、２種以上のタンパク質の量を測定してもよい。２種以上のタンパク質の量を測定する際の、測定されるタンパク質の好ましい組み合わせの例として、下記（ｎ）～（ｓ）の組合わせが挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
（ｎ）配列番号２のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
　配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｏ）配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
　配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｐ）配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
　配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｑ）配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｒ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質又は配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質
との組み合わせ、
（ｓ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質
との組み合わせ。
　上記タンパク質の量の測定は、上記タンパク質に特異的に結合する分子を用いて行うことが好ましい。本発明のタンパク質に特異的に結合する分子としては、本発明のタンパク質に対する抗体やアプタマー等が挙げられるが、本発明のタンパク質に対する抗体を用いることが好ましい。上記抗体やアプタマーは、目的に応じて、放射性物質、酵素、蛍光物質、発光物質等で標識して用いることができる。
　抗体を用いた測定は、イムノアッセイの分野において通常用いられる手段を採用することができ、例えば、イムノブロット法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、イムノクロマト法などにより検出することができる。
　上記タンパク質の検出に用いる抗体は、通常の方法で取得することができる。例えば、上記タンパク質を免疫原として用い、動物に免疫して、該動物から上記タンパク質に選択的に反応する抗体を取得することができる。また、上記タンパク質のアミノ酸配列から上記タンパク質に特徴的なアミノ酸配列を選択し、該アミノ酸配列からなるペプチドを化学的に合成して、これを動物に免疫して、該動物から上記タンパク質に選択的に反応する抗体を取得することができる。
　上記タンパク質の測定は、上記タンパク質におけるエピトープの異なる２種類の抗体を用いて、サンドイッチイムノアッセイの原理により行うことが好ましい。この場合において、一方の抗体は捕捉抗体として固相に固定化され、もう一方の抗体は、標識され、検出用抗体として機能する。
　サンドイッチＥＬＩＳＡ法では、上記タンパク質に対する抗体が固定化されたウェルを用意し、非特異的な吸着を防ぐために、ＢＳＡやカゼイン等により当該ウェルをブロッキングしておく。ここに前立腺癌細胞等から調製したタンパク質溶液を入れ、抗体が失活しにくい温度（例えば４～４０℃）で数分～数日インキュベートする。続いてタンパク質溶液を捨て、リン酸緩衝液等でウェルを洗浄後、固定化抗体が結合するエピトープとは異なるエピトープに結合する標識された抗体を加え、再び数分～数日インキュベートし、ウェルを洗浄後、ウェル内に存在する標識を検出する。上記タンパク質溶液中に目的のタンパク質が存在する場合には、標識のシグナルが高くなるため、これにより、再燃性前立腺癌の検出を行うことができる。
　また、イムノクロマト法においては、上記サンドイッチＥＬＩＳＡにおける固定化抗体をメンブレンのテストライン上に固定化しておき、上記サンドイッチＥＬＩＳＡにおける標識抗体をコンジュゲートパッドに保持した状態のテストストリップを調製する。前立腺癌細胞等から調製したタンパク質溶液をコンジュゲートパッドに直接又は間接的に添加すると、毛細管現象により、当該溶液が標識抗体と液相中で反応しながらコンジュゲートパッドからメンブレンへと進んでいく。タンパク質溶液中に目的のタンパク質が存在する場合には、メンブレンのテストライン上に標識抗体と目的のタンパク質とからなる複合体がトラップされる。したがって、テストライン上に存在する標識を検出することにより、再燃性前立腺癌の検出を行うことができる。
　本発明において、遺伝子の発現量の測定が行われる試料に特に制限はなく、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、尿、唾液等の体液、前立腺癌組織、前立腺癌細胞等が挙げられるが、前立腺癌組織や前立腺癌細胞を使用することが好ましい。本発明において「単離した前立腺癌細胞」には、生体（前立腺癌患者）から摘出した前立腺癌組織、当該組織をレーザーダイゼクション等により切り出したサンプル等が含まれる。
　上記試料の由来に特に制限はないが、ヒト由来であることが好ましい。すなわち、本発明の検出方法は、ヒトの再燃性前立腺癌の検出に好適に用いられる。
　本発明の検出方法を用いることで、前立腺癌のホルモン感受性を、簡便に、しかも精度よく判定することができ、これにより再燃性前立腺癌を特異的に検出することができる。したがって、本発明の検出方法は、再燃性前立腺癌の診断に有用である。
　以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
　下記のヒト前立腺癌細胞株を用いて、下記のＤＮＡマイクロアレイ解析及び定量的ＰＣＲアレイ解析を中心に解析を行い、ホルモン感受性前立腺癌とホルモン抵抗性前立腺癌とを区別しうるマーカー候補遺伝子の選抜を行った。
［ヒト前立腺癌細胞株の培養］
　前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ホルモン感受性（依存性））とＤｕ１４５（ホルモン抵抗性（非依存性））は独立行政法人理化学研究所バイオリソース研究センター理研セルバンクより入手した。ＰＣ－３（ホルモン非依存性）は財団法人ヒューマンサイエンス振興財団JCRB細胞バンクより入手した。正常ヒト前立腺上皮細胞株ＰｒＥは、ＤＳファーマバイオメディカル社より購入した。前立腺癌細胞株はすべて、ＲＰＭＩ　１６４０培地(ＧＩＢＣＯ社製)に１０％　ＦＢＳ(Ｈｙｃｌｏｎｅ社製)、１％　ペニシリン／ストレプトマイシン(ＧＩＢＣＯ社製)を添加したものを用いて培養した。正常ヒト前立腺上皮細胞株は、ＣＳ－Ｃ培地キットＲ（ＤＳファーマバイオメディカル社製)を用い培養した。すべての細胞は、ＲＮＡおよびタンパク質を抽出する１日前にＲＰＭＩ１６４０に１０％　ＦＢＳを加えた培地に置換して培養した。
［ＤＮＡマイクロアレイ解析］
　糖鎖関連遺伝子網羅解析のＤＮＡマイクロアレイは、独立行政法人理化学研究所　疾患糖鎖研究チームが開発したツールを用いた。本ツールの詳細は文献(Molecular　And　Cellular　Biology,　Apr.2007,　p.3008-3022)に記載されている。簡潔に言えば、まず対数増殖期の細胞のｍＲＮＡをｍＴＲＡＰ　ｍｉｄｉ　ｋｉｔ(アクティブモチーフ社製)を用いて調製し、Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のバイオアナライザー２１００でクオリティーチェック後、ＣｙＳｃｒｉｂｅ　Ｐｏｓｔ－Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ　Ｋｉｔ(ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製)で蛍光標識した。蛍光標識したサンプルを約１２００の糖鎖関連遺伝子を搭載したマイクロアレイにハイブリダイズし、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ　４２８　Ａｒｒａｙ　Ｓｃａｎｎｅｒでスキャニングした。各スポットのシグナル強度を定量(ＩｍａＧｅｎｅ;　ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ社製)し、補正後にクラスタリング作成ソフトＭｕｌｔｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　Ｖｉｅｗｅｒ　（ＭｅＶ）（Opensource　software　tool,　http://www.tm4.org/）で解析した。
［定量的ＰＣＲアレイ解析］
　糖鎖合成酵素に特化した遺伝子網羅解析のツールであるｑＰＣＲアレイは、独立行政法人産業技術総合研究所　糖鎖医工学センターが開発したツールを用いた。本ツールの詳細は文献(Jornal　of　Proteome　Reserch.　Vol.8,　No.3,　2009,　p.1358-1367)に記載されている。簡潔に言えば、まず対数増殖期の細胞のｔｏｔａｌ　ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ　ｐｌｕｓ　ｍｉｎｉ　ｋｉｔ　(ＱＩＡＧＥＮ社製)を用いて調製し、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ　Ｒｅｖ．　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｋｉｔ(ＱＩＡＧＥＮ社)を用いてＦｉｒｓｔ　ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡを合成した。ＰＣＲプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ(https://www.roche-applied-science.com/)を用いて選択し、インビトロジェン社にて作成、購入した。加水分解プローブは、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ＰｒｏｂｅＬｉｂｒａｒｙ(ロシュ社)より選択した。全１８９遺伝子のアッセイをｄｕｐｌｉｃａｔｅで３８４プレートにフォーマットし、ｑＰＣＲ　Ｑｕｉｃｋ　ＧｏｌｄＳｔａｒ　Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ　Ｐｌｕｓ　(Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社製)を用いて、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０(ロシュ社製)にて増幅、測定した。各コピー数を算出後、補正後にクラスタリング作成ソフトＭｕｌｔｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　Viewer　（ＭｅＶ）（Opensource　software　tool,　http://www.tm4.org/）で解析した。
実施例１　ＲＴ－ＰＣＲによる再燃性前立腺癌の検出
　正常ヒト前立腺上皮細胞株ＰｒＥ並びに前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ホルモン感受性株）、Ｄｕ１４５（ホルモン抵抗性株）及びＰＣ－３（ホルモン抵抗性株）の各細胞株を用いて、ＲＴ－ＰＣＲにより、前記表１に示す３１種類の遺伝子の転写産物の量を測定した。
　具体的には、ＰｒＥ、ＬＮＣａＰ、Ｄｕ１４５及びＰＣ－３の各前立腺癌細胞から上記と同様に合成したｃＤＮＡを鋳型とし、ＤＮＡポリメラーゼ（商品名：ＧｏＴａｑ（登録商標）　Ｈｏｔ　Ｓｔａｒｔ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、プロメガ社)と、上述した（Ａａ）～（Ｂｂ）で表されるプライマーセット、配列番号７５及び７６の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、配列番号９１及び９２の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセット並びに配列番号１１１及び１１２の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセットとを用い、サーマルサイクラー（商品名：ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ　９７００(アプライドバイオシステムズ社製)により各ＤＮＡの増幅反応を行った。２％　アガロースゲルにて電気泳動をおこなった後、エチジウムブロミド染色してＵＶトランスイルミネーターで発光させ、写真を撮った(ポラロイド社製)。なお、上記プライマーセットを構成するプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ　(https://www.roche-applied-science.com/)を用いて選択し、インビトロジェン社にて作成、購入したものである。
　結果を図１に示す。なお、図１におけるＰＳＡ、ＡＣＴＢ、ＡＲ及びＧＡＰＤＨの測定結果は参考として載せたものであり、本発明の効果を示すものではない。
　図１の結果から、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞株であるＤｕ１４５及びＰＣ－３では、ホルモン感受性前立腺細胞株であるＬＮＣａＰに比べて、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ-６ＳＴ（配列番号１）、Ｂ３ＧＮＴ５（配列番号３）、ＬＧＡＬＳ１（配列番号５）、ＣＡＶ１（配列番号７）、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２（配列番号９）、ＩＴＧＡ３（配列番号１１）、ＣＨＳＴ１１（配列番号１５）、ＣＨＳＴ１０（配列番号１７）、ＦＵＴ８（配列番号２１）、ＨＡＳ３（配列番号２５）、ＬＣＮ２（配列番号３１）、ＣＨＳＴ７（配列番号３３）、ＵＳＴ（配列番号３５）、ＥＸＴ１（配列番号３７）、ＧＡＬＮＴ４（配列番号３９）、ＨＸＢ／ＴＮＣ（配列番号４１、ＢＡＣＥ２（配列番号４３）、ＣＤ４４（配列番号４５）、ＮＰＲ３（配列番号４７）、ＢＭＰ１５（配列番号５１）、ＴＥＣＫ／ＣＣＬ２５（配列番号５３）、ＧＡＬＮＴ１４（配列番号５５）及びＳＴ８ＳＩＡ５（配列番号５７）のｍＲＮＡ発現量が明らかに増加していることがわかる。したがって、前立腺癌患者から採取した試料におけるこれらの遺伝子の少なくとも１つの発現量を測定し、その発現量が所定のレベルより高い場合には、ホルモン抵抗性の前立腺癌細胞が存在すると判定することができ、これによりホルモン抵抗性前立腺癌（再燃性前立腺癌）を検出することができる。
　また、図１の結果から、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞株であるＤｕ１４５及びＰＣ－３では、ホルモン感受性前立腺細胞株であるＬＮＣａＰに比べて、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ１（配列番号２７）、ＧＡＬ３ＳＴ２（配列番号５９）及びＬＡＲＧＥ（配列番号６１）のｍＲＮＡの発現量が明らかに抑えられていることがわかる。したがって、前立腺癌患者から採取した試料におけるこれらの遺伝子の少なくとも１つの発現量を測定し、その発現量が所定のレベルより低い場合には、ホルモン抵抗性の前立腺癌細胞が存在すると判定することができ、これによりホルモン抵抗性前立腺癌（再燃性前立腺癌）を検出することができる。
実施例２　リアルタイムＲＴ－ＰＣＲによる再燃性前立腺癌の検出
　下記のヒト前立腺癌の組織サンプルを用いて、下記のリアルタイムＲＴ－ＰＣＲにより、前記表１に示す遺伝子のうち２５種類の遺伝子の転写産物の量を測定した。
［ヒト前立腺癌組織サンプル］
　前立腺癌臨床組織サンプルは、愛知県がんセンターより供与された。総てのサンプルは、インフォームドコンセントが取れた患者より供与されたものである。ホルモン療法を処置していない前立腺癌患者より摘出した前立腺組織を８例と、前立腺摘出手術を受ける前に３ヶ月以上のホルモン療法（ネオアジュバント療法：Leuteining　hormone-releasing　hormone　analogue(LH-RHa)と非ステロイド性抗アンドロゲン剤のBicalutamideの併用）を受けた前立腺癌患者であって、当該治療に対して低感受性（治療効果が薄い）患者より摘出した組織８例を本実施例にて用いた。
　一般に前立腺癌では、癌細胞はアンドロゲン等の雄性ホルモンに依存して増殖し、ホルモンの働きを抑えることにより癌細胞の増殖は効果的に抑制されることが多い。一方、ホルモン抵抗性の前立腺癌は、ホルモン療法を受けたのち、一度増殖が抑制されたにもかかわらず、生き残った癌細胞が再び増殖してきたものであることが多く、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者における発症率は比較的低い。そこで、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者をホルモン感受性前立腺癌患者であるものと仮定し、下記の試験を行った。ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者から採取した癌細胞との間でもなお、発現量に有意な差が認められる遺伝子は、再燃性前立腺癌マーカーとしても非常に有用であると判断できると考えられる。
［リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ解析］
　インフォームドコンセントが取れている前立腺癌患者より摘出した前立腺臨床組織サンプルの薄切より、癌部をレーザーマイクロダイセクション(ＬＭＤ６０００;ライカ社製)により切り出し、ＲＮＡ抽出キット（商品名：ＲｅｃｏｖｅｒＡｌｌ（商標）　Ｔｏｔａｌ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ、Ａｍｂｉｏｎ社製)にてＲＮＡを抽出した。Ｈｉｇｈ　Ｃａｐａｃｉｔｙ　ｃＤＮＡ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｋｉｔ(アプライドバイオシステムズ社製)を用いてｃＤＮＡを調製後、ＴａｑＭａｎ（登録商標）　ＰｒｅＡｍｐ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　Ｋｉｔ(アプライドバイオシステムズ社製)で前増幅し、ｑＰＣＲ　Ｑｕｉｃｋ　ＧｏｌｄＳｔａｒ　Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ　Ｐｌｕｓ　(Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社製)を用いて、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ（登録商標）　７７００　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍで増幅、測定した。なお、使用したプライマーセットは実施例１と同様である。各コピー数を算出後、コントロールとして用いたｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの発現量で標準化した。統計解析はヒューリンクス社の「ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ」を用い、ｔ－検定をおこなった。
　結果をグラフ化したものを図２～２６に示す。また、ｔ－検定の結果（Ｐ値）を下記表２に示す。なお、図８のＰＳＡ、図１６のＡＣＴＢ及び図２６のＡＲの結果は参考として載せたものであり、本発明の効果を示すものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
  
　図２及び表２の結果から、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ（配列番号１）、Ｂ３ＧＮＴ５（配列番号３）、ＬＧＡＬＳ１（配列番号５）、ＣＡＶ１（配列番号７）、ＩＴＧＢ２（配列番号９）、ＩＴＧＡ３（配列番号１１）及びＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ１（配列番号２７）において、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者８名から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞との間で、ｍＲＮＡの発現量に明らかな有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた（表２中、８ｖｓ８の欄参照）。なお既存マーカーであるＰＳＡの発現量は、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞において有意に低下しているが、これは、アンドロゲンが遮断された結果引き起こされたものであり、ホルモン抵抗性との直接の関連性は低い。
　また、ホルモン療法を受けていない未治療群の中にも、ホルモン療法に低感受性の患者が存在する可能性がある。したがって、参考のために、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者８名から採取した検体のうち、ｍＲＮＡの発現量が高い患者検体２つを除き、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者６名から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞との間の有意差を調べた。その結果、ＨＡＳ３（配列番号２５）、ＵＳＴ（配列番号３５）及びＥＸＴ１（配列番号３７）でも有意差（Ｐ＜０．０５）を認めた（表２中、６ｖｓ８の欄参照）。
　なお、上記で有意差が認められなかった遺伝子に関しても、実施例１で示すように前立腺癌のセルラインを用いた試験では、ホルモン感受性前立腺癌細胞とホルモン抵抗性の前立腺癌細胞とを区別しうることが示されている。したがって、現状では困難であるが、ホルモン感受性患者として特定された患者検体を用いることができれば、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者検体との間で発現量の有意差が認められうるものと考えられる。
　以上の結果、本発明の検出方法は、再燃性前立腺癌を特異的に検出できる方法であることが示された。
　本発明をその実施態様とともに説明したが、我々は特に指定しない限り我々の発明を説明のどの細部においても限定しようとするものではなく、添付の請求の範囲に示した発明の精神と範囲に反することなく幅広く解釈されるべきであると考える。
　本願は、２０１１年２月２８日に日本国で特許出願された特願２０１１－０４２９６７に基づく優先権を主張するものであり、これらはここに参照してその内容を本明細書の記載の一部として取り込む。

Claims (6)

  1. 　下記（ａ）～（ｄ）のいずれかのＤＮＡからなる少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法：
    （ａ）配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、
    （ｂ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
    （ｃ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列において、１又は数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
    （ｄ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ。
  2. 　遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の転写産物の量の測定である、請求項１に記載の検出方法。
  3. 　下記（Ａａ）～（Ｂｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のプライマーセットを用いて少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定する、請求項２に記載の検出方法：
    （Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
    （Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、及び
    （Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
    （Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
    （Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
    （Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
    （Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
    （Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット。
  4. 　遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の測定である、請求項１に記載の検出方法。
  5. 　測定されるタンパク質の量が、下記（ｅ）～（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列からなる少なくとも１種のタンパク質の量である、請求項４に記載の検出方法：
    （ｅ）配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、
    （ｆ）上記（ｅ）のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列、
    （ｇ）上記（ｅ）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列であって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列。
  6. 　単離した前立腺癌細胞中における遺伝子の発現量を測定する、請求項１～５のいずれか１項に記載の検出方法。
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