WO2011159074A2 - 치료용 면역글로불린 제제 제조장치 및 이를 이용한 제조방법 - Google Patents

치료용 면역글로불린 제제 제조장치 및 이를 이용한 제조방법 Download PDF

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WO2011159074A2
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전숙영
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Jeon Sook Yeong
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    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
    • A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
    • A61M1/3679—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits by absorption

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus and a method for producing a therapeutic immunoglobulin preparation using the same, and more particularly to treating a mammal suffering from a disease associated with abnormalities of the immune system, such as allergic diseases or autoimmune diseases.
  • a disease associated with abnormalities of the immune system such as allergic diseases or autoimmune diseases.
  • intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intradermal administration, etc. from the blood of the mammal suffering from the above disease, or from the blood of another mammal suffering from a similar disease or having recovered from a similar disease in the past, etc.
  • the present invention relates to a device for preparing a therapeutic immunoglobulin preparation by separating an immunoglobulin in a pollution-free and / or nontoxic state that can be administered by a parenteral route, and a method for preparing a therapeutic immunoglobulin preparation using the same.
  • immunoglobulins have been used to prevent or treat various diseases such as allergic diseases, autoimmune diseases, infectious diseases and malignant neoplastic diseases.
  • the immunoglobulin has anti-inflammatory, anti-allergic, anti-bacterial and anti-viral effects, anti-tumor or anti-cancer effects, etc., so that mammals or healthy people suffering from refractory allergic diseases, autoimmune diseases, chronic inflammatory diseases or infectious diseases, etc.
  • injection route subcutaneous, intramuscular, intravenous, etc.
  • it exhibits a therapeutic and / or prophylactic effect against these diseases.
  • immunoglobulin injections isolated from the plasma of many healthy blood donors currently in use are not well known for their therapeutic effects in allergic diseases, autoimmune diseases, chronic inflammatory diseases, malignant neoplastic diseases or infectious diseases. .
  • the immunoglobulin uses the immunoglobulin of a healthy blood donor as a raw material, and is produced excessively commonly observed in patients suffering from a certain type of allergic disease or autoimmune disease, and reacts with a specific antigen to cause disease. It is often the case that the therapeutic effects on these diseases are insufficient because they do not effectively inhibit the pathogenic antibodies involved.
  • the purified immunoglobulin preparations separated from the blood of mammals used in the treatment of patients are mainly administered by the route of intramuscular injection, subcutaneous injection or intravenous injection. And rigorous manufacturing processes are required.
  • the immunoglobulin undergoes a thorough inspection in the manufacturing process and tries to manufacture a safe treatment by preventing contamination of the infectious material, but side effects may occur due to contamination of an unknown virus or an infectious agent (such as human mad cow disease). The situation is not completely excluded.
  • the production of therapeutic immunoglobulins involves the collection of large amounts of assorted plasma (generally large amounts of plasma obtained from a large number of 1,000 or more), which are generated by collecting plasma from a large number of blood donors. Since it is manufactured using a blood protein separation purification apparatus, there is a problem that requires a large space and facilities and a large number of technical personnel.
  • the immunoglobulin separation method using an open-type adsorption chromatography column (for example, Protein A column) used for laboratory use has a high possibility of contamination of external infectious agents or toxic substances, and thus immunoglobulin treatment for injection treatment. Inadequate to produce
  • immunoglobulin when immunoglobulin is administered for the treatment of allergic disease, autoimmune disease, chronic inflammatory disease, malignant tumor disease or infectious disease, it has a high therapeutic effect on the patient's own blood or the disease to be treated.
  • Specific mammalian individuals with high titers of immunoglobulins that are present, such as those recovered after suffering from the same or similar disease, may be selected to obtain immunoglobulin therapy tailored to the patient or the disease being treated from the blood of the mammal. Production may have a more effective therapeutic effect on the disease than immunoglobulins obtained from a large number of mammalian blood by conventional mass production.
  • the immunoglobulin is isolated and purified in a sterile and / or non-toxic state from a small amount of blood isolated from a small number of specific mammalian individuals who have defined the subject or the patient to be treated.
  • the present invention relates to a specific mammalian individual having an immunoglobulin that exhibits a prophylactic or therapeutic effect on the subject himself or the disease to be treated with immunoglobulin in order to treat and / or prevent allergic diseases, autoimmune diseases, chronic inflammatory diseases or infectious diseases.
  • a manufacturing apparatus capable of rapidly preparing a therapeutic immunoglobulin preparation which can be administered to a mammal by parenteral route (including injection route) by purifying immunoglobulin without contaminating infectious or toxic substances from blood of Provided are methods for preparing immunoglobulins.
  • the present invention is a.
  • the therapeutic immunoglobulin manufacturing apparatus of the present invention between the immunoglobulin outlet from the inlet receiving the blood so that the immunoglobulin contained in the mammal's blood can be separated and collected without contamination of infectious or toxic substances from the outside. It is characterized in that the closed-loop structure made from the outside.
  • the apparatus for producing therapeutic immunoglobulin preparations according to the present invention is simple in structure and can be administered parenterally (including injection) for the purpose of treating a disease from a small amount of blood obtained from autologous blood and / or a small number of specific mammals in a short time with a simple operation. It is possible to easily prepare immunoglobulin preparations for treatment in a sterile, non-toxic state.
  • FIG. 1 is a block diagram showing an aspect of the apparatus for producing immunoglobulin for treatment according to the present invention
  • FIG. 2 to 5 is a view showing the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to Figure 1,
  • FIG. 6 is a block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin preparations production apparatus according to the present invention.
  • FIG. 7 is a cross-sectional view taken along the line A-A of FIG.
  • FIG. 8 to 12 is a view showing the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation preparation apparatus according to Figure 6,
  • FIG. 13 is a block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin formulation preparation apparatus according to the present invention.
  • FIG. 14 is a view showing the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to FIG.
  • FIG. 15 is a block diagram showing another embodiment of the apparatus for producing immunoglobulin for treatment according to the present invention.
  • Figure 16 is a schematic diagram showing the electrical connection between the configuration of the therapeutic immunoglobulin formulations manufacturing apparatus according to Figure 15,
  • FIG. 17 and 18 are views showing the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation preparation device according to Figure 15,
  • FIG. 19 is a block diagram showing another embodiment of the apparatus for producing immunoglobulin for treatment according to the present invention.
  • FIG. 20 is a schematic view showing the electrical connection between the configuration of the therapeutic immunoglobulin formulations manufacturing apparatus according to Figure 19,
  • 21 to 24 is a view showing the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to FIG.
  • 25 is a diagram showing the acrylamide gel electrophoresis analysis and protein staining results of the therapeutic immunoglobulin preparations according to the present invention.
  • Figure 26 shows the cytotoxicity of therapeutic immunoglobulin preparations according to the invention
  • Figure 27 is a diagram showing the acrylamide gel electrophoresis analysis and protein staining results of the therapeutic immunoglobulin preparations according to the present invention.
  • main body 200 immunoglobulin adsorption filter
  • input unit 1400 display unit
  • the present invention provides a space formed therein; An immunoglobulin adsorption filter provided at one side of the main body to adsorb the immunoglobulin contained in the blood flowing into the main body; A washing solution supply unit connected to one side of the main body to supply a washing solution to the inside of the main body; A buffer supply unit connected to one side of the main body and supplying a buffer solution into the main body; A blood supply unit connected to one side of the main body to supply blood into the main body; A washing solution collection unit connected to one side of the main body to receive the washing solution discharged from the main body; An immunoglobulin mixture collection unit connected to one side of the main body to receive the immunoglobulin mixture discharged from the main body; And it is connected to one side of the main body provides a therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus comprising a blood collecting unit for receiving the blood discharged from the main body.
  • the present invention 1) an adsorption step of adsorbing the immunoglobulin contained in the blood to the immunoglobulin adsorption filter by passing the blood inside the body provided with the immunoglobulin adsorption filter; 2) after the adsorption step is completed, the washing step to pass through the washing liquid into the main body provided with an immunoglobulin adsorption filter to wash and remove other substances other than the material adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter; 3) preparing the immunoglobulin-buffer mixture by eluting the immunoglobulin adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter by passing the buffer into the main body equipped with the immunoglobulin adsorption filter after the washing step is completed; And 4) filtering the immunoglobulin-buffer mixture prepared in step 3) using an immunoglobulin collecting part including a filter which can pass the buffer or the diluent but not the immunoglobulin, and simultaneously supply the diluent to supply the immunoglobulin.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus is to separate the immunoglobulin from the blood to manufacture the therapeutic immunoglobulin preparation in a non-contaminated, sterile and / or non-toxic state, and if the immunoglobulin preparation manufacturing apparatus having this purpose It is not specifically limited.
  • the apparatus for producing therapeutic immunoglobulin preparations according to the present invention can be prepared in the form of injections for the treatment of diseases by separating immunoglobulins from blood obtained from autologous blood and / or a few specific mammals, for example, small amounts of blood. have.
  • the therapeutic immunoglobulin formulations are not limited to formulations administered by injection route (subcutaneous injection, intramuscular injection, intravenous injection, etc.), but are also oral and / or for the purpose of preventing and / or treating diseases in mammals. It may be administered by parenteral administration route (percutaneous administration, in airway, intraperitoneal, intraocular, etc.).
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus has a closed structure so that the entire constitution is isolated from the outside so that external pollutants, such as bacteria or viruses can not be introduced into the manufacturing apparatus.
  • the immunoglobulins according to the present invention are conventional methods used for separating and purifying immunoglobulins from a culture of mammalian blood and / or immunoglobulin producing cells, for example, precipitation, ion exchange chromatography, affinity chromatography and the like. It can be a whole immunoglobulin including IgG, IgA, IgM, IgD, and IgE isolated using.
  • immunoglobulin according to the present invention may be immunoglobulin G (IgG) isolated from the blood of a mammal.
  • IgG immunoglobulin G
  • the therapeutic immunoglobulin preparations according to the present invention are used to prevent and / or treat various diseases such as allergic diseases, autoimmune diseases, infectious diseases and / or malignant neoplastic diseases.
  • FIG. 1 is a block diagram showing an aspect of the therapeutic immunoglobulin preparation for producing device according to the present invention
  • Figures 2 to 5 is a view showing the operation of the therapeutic immunoglobulin preparation for producing device according to Figure 1
  • Figure 6 Fig. 7 is a cross-sectional view taken along line AA of Fig. 6,
  • Figs. 8 to 12 are views showing the operation of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to Fig. 6 according to the present invention.
  • Figure 13 is a block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention
  • Figure 14 is a view showing the operation of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to Figure 13
  • Figure 16 is an electrical connection between the configuration of the therapeutic immunoglobulin formulation production apparatus according to Figure 15 17 and 18 schematically show the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to Figure
  • Figure 19 is another embodiment of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to the present invention
  • 20 is a schematic view showing the electrical connection between the configuration of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to Figure 15
  • Figures 21 to 24 is a therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to Figure 19 It demonstrates together as a figure which shows the operation
  • the therapeutic immunoglobulin preparations manufacturing apparatus comprises a main body 100 having a space therein; An immunoglobulin adsorption filter (200) provided on one side of the main body (100) to adsorb immunoglobulins contained in blood flowing into the main body (100); A washing solution supply unit 300 connected to one side of the main body 100 to supply a washing solution into the main body 100; A buffer supply unit 400 connected to one side of the main body 100 to supply a buffer solution into the main body 100; A blood supply unit (BP) connected to one side of the main body 100 to supply blood into the main body 100; A washing solution collecting part 600 connected to one side of the main body 100 to receive the washing liquid discharged from the main body 100; An immunoglobulin mixture collection part 700 connected to one side of the main body 100 to receive the immunoglobulin mixture discharged from the main body 100; It is connected to one side of the main body 100 includes a blood collecting part 800 for receiving the blood discharged from the main body 100.
  • a blood collecting part 800 for receiving the blood discharged from the main
  • the main body 100 provides a space for separating the immunoglobulin from the blood flowing into the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus.
  • the main body 100 may be formed in any form, for example, a cylindrical shape, a cuboid, or the like as long as it provides a space for separating and extracting an immunoglobulin.
  • the main body 100 has a sealed form so that contaminants such as bacteria and viruses do not flow from the outside.
  • the immunoglobulin adsorption filter 200 is provided on one side of the main body 100 to adsorb the immunoglobulin contained in the blood flowing into the main body 100, and an immunoglobulin adsorption filter having such a purpose ( 200) may be used.
  • the immunoglobulin adsorption filter 200 includes an adsorbent (ligand) for adsorbing immunoglobulins present in blood, plasma and / or serum.
  • adsorbent ligand
  • the blood, plasma and / or serum may be collectively referred to as blood for easy description of the present invention.
  • the immunoglobulin adsorption filter 200 may be composed of a solid-phase matrix.
  • the adsorbent that adsorbs the immunoglobulin is an immunoglobulin adsorbent that is commonly used to separate immunoglobulins by adsorptive chromatography, for example, Protein A, Protein G, Protein L, and hydroxyapatite. ), Anti-immunoglobulin antibody protein, antigen-protein, allergen or one or more selected from which antigen-specific immunoglobulins can be adsorbed or reacted.
  • the adsorbent is an ion exchange resin used to separate immunoglobulins by ion-exchange chromatography, for example, cationic resin, anionic resin, diethylaminoethyl (DEAE), di Ethylamine (diethylamine), quaternary ammonium (quaternary amonium) or at least one selected from them.
  • ion exchange resin used to separate immunoglobulins by ion-exchange chromatography, for example, cationic resin, anionic resin, diethylaminoethyl (DEAE), di Ethylamine (diethylamine), quaternary ammonium (quaternary amonium) or at least one selected from them.
  • the ion exchange resin used as the adsorbent may form the immunoglobulin adsorption filter 200 in a form attached to a solid-phase matrix.
  • the solid matrix may be in the form of a membrane or beads or glass made of agarose, cellulose, acrylamide, and the like.
  • the washing liquid supply unit 300 is connected to one side of the main body 100, for example, the upper end of the main body 100, and supplies the washing liquid into the main body 100 to include an immunoglobulin adsorption filter 200. In order to clean the inside, if the washing liquid supply unit 300 having this purpose is not particularly limited.
  • the washing liquid supplied from the washing liquid supply unit 300 uses a washing liquid commonly used in the art to wash the inside of the main body 100.
  • the wash is a mixture of about 1.5M glycine-sodium hydroxide (glycine-NaOH) and 3M sodium chloride (NaCl), pH 9.0, or 100 mM Tris buffer, pH 8.0 It may be.
  • the buffer supply unit 400 is connected to one side of the main body 100, for example, one side of the upper end by supplying a buffer into the main body 100, the immunoglobulin adsorbed to the immunoglobulin adsorption filter 200 For elution to separate.
  • the buffer solution may be used as long as it can elute the immunoglobulin adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter 200 provided inside the main body 100.
  • the buffer may be 0.1M sodium citrate with a pH of 5.5, 100mM glycine with a pH of 3.0, 1M sodium chloride (NaCl) in 25 mM Tris / HCl pH 8.0, or the like. Can be.
  • Blood supply unit (BP) is connected to one side, for example, the upper side of the main body 100 for supplying blood into the main body 100, if any conventional blood supply having such a purpose You may use it.
  • the blood supplied to the blood supply unit BP may include serum or plasma, and solid materials such as blood cells, bacteria, viruses, or aggregated proteins may be removed.
  • the blood supply unit (BP) may be a syringe from which blood is collected.
  • the needle portion is removed from the end of the syringe containing blood and the end of the syringe body is directly connected to the main body 100. ) Or via a separate supply means.
  • the blood supply unit (BP) which is a syringe so that the inside of the main body 100 is not infected from an external pollution source on one side of the main body 100.
  • the blood supply unit (BP) which is a syringe so that the inside of the main body 100 is not infected from an external pollution source on one side of the main body 100.
  • the cover 130 is a side of the main body 100, for example, a fastening part 131 which is fastened to the supply part 120 which is an opening of the main body 100 and a closing part for sealing the opening of the main body 100.
  • 132 is provided to allow the cover 130 to be connected to the main body 100.
  • the supply unit 120 is formed to be opened on one side of the upper end of the main body 100.
  • the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus may be provided with a means for adjusting the flow path of the fluid between the main body 100 and the washing solution supply 300, the buffer supply 400 and the blood supply (BP). have.
  • the flow direction of the fluid can be adjusted between the main body 100 and the washing solution supply unit 300, the buffer supply unit 400 and the blood supply unit (BP) which is connected to the main body 100 according to the present invention
  • a first fluid flow adjusting unit 500 may be provided to adjust the flow direction of the washing solution, the buffer solution and / or the blood supplied to the main body 100.
  • the first fluid flow control unit 500 is connected to a plurality of fluid movement paths to selectively move the fluid flowing through each fluid movement path, for example, a washing solution, a buffer solution and / or blood, to the main body 100. Anything may be used as long as it can be used, and for example, a 4-way valve may be used.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is provided between the washing solution supplying unit 300 for supplying the washing liquid and the buffer supplying unit 400 for supplying the buffer and the main body 100, and is supplied to the main body 100.
  • the flow of wash and / or buffer may also be controlled.
  • the first fluid flow control unit 500 may use a three-way valve.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus further comprises a pneumatic supply unit 1000 that can supply compressed air into the main body 100 on one side, for example, the upper side of the main body 100.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 may include a washing solution supply unit 300 for supplying a washing solution, a buffer supply unit 400 for supplying a buffer solution, and a pneumatic supply unit for supplying compressed air, that is, pneumatic pressure ( It may be provided between the 1000 and the main body 100 to control the flow of the washing liquid, buffer and / or pneumatic, that is, compressed air supplied to the main body 100.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 may use a 4-way valve.
  • washing liquid, buffer and / or the compressed air supplied from the washing liquid supply unit 300, the buffer liquid supply unit 400 and / or the pneumatic supply unit 1000 passes through the first flow control unit 500 of the main body 100 It may be introduced into the main body 100 through the upper side.
  • the washing line, the buffer solution and / or the compressed air supplied to the upper side of the main body 100 may be sprayed over the upper surface of the main body 100 so that the washing solution, the buffer solution and / or the compressed air may move ( 112 is formed to be radially distributed on the upper surface of the main body 100.
  • the moving line 112 is a horizontal moving line 112a which provides a path through which the washing liquid, the buffer and / or the compressed air can move horizontally, and the washing liquid, the buffer and / or the compressed air moved horizontally. It may include a vertical movement line 112b to be moved to the inside to be discharged into the main body 100.
  • the horizontal movement line 112a may include a main line 112a1 receiving a washing liquid, a buffer and / or compressed air, and a branching line 112a2 branching the washing liquid, the buffer and / or the compressed air.
  • Washing liquid collection unit 600 is connected to one side, for example, the lower side of the main body 100 to accommodate the washing liquid discharged from the main body 100.
  • the immunoglobulin mixed solution collection part 700 is connected to one side of the main body 100, for example, the lower side, and is immunoglobulin adsorbed by the immunoglobulin mixed solution discharged from the main body 100, that is, the buffer 200. ) To receive an immunoglobulin-buffer mixture in an eluted state.
  • the mixture of immunoglobulin and the buffer eluted to the immunoglobulin mixture collection unit 700 by the buffer may be used as a therapeutic immunoglobulin agent administered to a mammal for the prevention and / or treatment of diseases. It can also be concentrated or diluted according to your choice.
  • therapeutic immunoglobulin formulations may be used after further heat treatment and sterilization.
  • Blood collection unit 800 is connected to one side of the main body 100, for example, the lower side is installed main body 100 to separate the blood, for example immunoglobulin discharged from the main body 100, Specifically, to receive the blood passing through the immunoglobulin adsorption filter 200 provided in the main body 100.
  • the immunoglobulin mixed solution collecting unit 700 and the blood collecting unit 800 is installed to be connected to the main body 100 according to the present invention to control the flow direction of the fluid
  • a means capable of adjusting the flow direction of the washing liquid, immunoglobulin mixture and / or blood discharged from the main body 100 is provided with a second fluid flow adjusting unit 900.
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is connected to a plurality of fluid movement paths and selectively washes fluids, for example, a washing liquid, an immunoglobulin mixture liquid, and / or blood flowing through each fluid movement path ( 600), as long as it can be moved to the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 and / or the blood collecting part 800, any one may be used.
  • a 4-way valve may be used.
  • first fluid flow adjusting unit 500 and the second fluid flow adjusting unit 900 may be installed in a separate control unit 1200 to automatically control the flow of the washing solution, buffer, blood, immunoglobulin mixture, etc. have.
  • the apparatus for producing therapeutic immunoglobulin preparations according to the present invention may further include a filter connected to the immunoglobulin mixture collection unit 700 to filter the immunoglobulin mixture, for example, a final filter 720.
  • the final filter 720 may be filtered without passing the immunoglobulin protein, but the buffer or diluent is passed through the filter.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus by connecting the immunoglobulin diluent supply unit 2100 for supplying the immunoglobulin diluent to the immunoglobulin mixture collection unit 700, that is, a buffer containing the immunoglobulin, that is, immunoglobulin
  • the buffer solution is exchanged with a diluent so as to minimize the possibility of toxic reactions caused by the buffer.
  • Therapeutic immunoglobulin preparations may be prepared that are less likely to cause toxic reactions.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus may be further provided with a heating means (2000) connected to the immunoglobulin mixed solution collector 700 to heat and sterilize the immunoglobulin mixed solution.
  • the final filter 720, the immunoglobulin diluent supply unit 2100 and / or heating means 2000 is selectively connected to the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus to independently concentrate the immunoglobulin formulation for treatment, or immune
  • the globulin-buffer may be exchanged for an immunoglobulin-diluent or the sterilized immunoglobulin preparation may be combined, the components may be combined with each other to simultaneously exchange the immunoglobulin-buffer with an immunoglobulin-diluent to concentrate the final therapeutic immunoglobulin formulation. It is also possible to sterilize by heating or by heating the therapeutic immunoglobulin preparations after the exchange and concentration.
  • the apparatus for producing immunoglobulin for treatment according to the present invention is the blood supply unit (BP), washing solution supply unit 300, buffer supply unit 400, washing solution collection unit 600, blood collection unit 800, immunoglobulin
  • the mixed liquid collecting part 700 is configured in the form of a syringe in a sterile state with all the pistons, the blood supply part (BP), the washing liquid supplying part 300, the buffer supplying part 400 based on the main body 100, the first fluid flow It is connected to the adjusting unit 500, the washing liquid collection unit 600, blood collection unit 800, the immunoglobulin mixture solution collection unit 700 is connected to the second fluid flow control unit 900, the first fluid flow adjustment unit 500 And by manually manipulating the second fluid flow control unit 900 may be configured in the form of a manual operation that can be inhaled or discharged through the negative pressure and positive pressure by using the Pison tone included in the liquid solution in the syringe.
  • immunoglobulin diluent supply unit for supplying immunoglobulin diluent to the immunoglobulin mixture ( 2100) may not be included in the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus.
  • washing solution collector 600 and the blood collector 800 may be integrated into a single collector (not shown) to simplify the apparatus for producing an immunoglobulin preparation for treatment according to the present invention.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus is preferably composed of a closed type in which the entire configuration is isolated from the outside so that the therapeutic immunoglobulin preparation can be prepared without contamination from the outside.
  • the method for producing a therapeutic immunoglobulin preparation supplies blood to the main body 100 provided with the immunoglobulin adsorption filter 200 to adsorb the immunoglobulin to the immunoglobulin adsorption filter 200 and then the washing solution supply unit. After supplying the washing solution of 300 to the main body 100 and washing the buffer solution of the buffer supply unit 400 to the main body 100 to elute the immunoglobulin adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter 200, immunoglobulin mixture, That is, to prepare an immunoglobulin-buffer mixture.
  • the method for producing a therapeutic immunoglobulin preparation includes 1) passing blood through the body 100 provided with the immunoglobulin adsorption filter 200 in the immunoglobulin adsorption filter 200.
  • Adsorption step of adsorbing the prepared immunoglobulin includes 1) passing blood through the body 100 provided with the immunoglobulin adsorption filter 200 in the immunoglobulin adsorption filter 200.
  • the method for producing the therapeutic immunoglobulin preparation is preferably made of a closed type in which the entire configuration is isolated from the outside so that the therapeutic immunoglobulin preparation can be prepared without contamination from the outside.
  • the method may further include a concentration step of concentrating the immunoglobulin-diluent mixture in which step 4) is completed as a post process of step 4).
  • the concentrated immunoglobulin-dilution mixture may be sterilized by heating.
  • the method for producing a therapeutic immunoglobulin preparation according to the present invention may be sterilized by heating the immunoglobulin-diluent mixture in which step 4) is completed in a post process of step 4).
  • FIG. 1 is a block diagram showing an aspect of a therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention, with reference to Figure 1 describes the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus is a blood, washing liquid and / or the main body 100 is supplied with a buffer, the immunoglobulin adsorption filter for adsorbing the immunoglobulin contained in the blood (200) ),
  • the immunoglobulin adsorption filter 200 for supplying a washing solution for washing the immunoglobulin adsorption filter 200 to be collected
  • Buffer supply unit 400 for supplying a buffer solution for the blood
  • blood supply unit (BP) for supplying blood, including immunoglobulin
  • the first fluid flow control unit 500 for switching the flow direction of the blood, wash solution, and / or buffer
  • wash solution Washing liquid collector 600 for accommodating, the immunoglobulin mixed solution collector 700 for receiving the buffer to elute the immunoglobulin, the blood is collected from the blood collecting unit 800 and the main body 100 for receiving blood ,
  • a buffer solution for example, a second fluid flow
  • the main body 100 is an immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 in which blood is accommodated, a supply part 120 for receiving a washing liquid, a buffer and / or blood, a discharging part for discharging the washing liquid, a buffer and / or blood ( 150).
  • the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 is provided with an accommodating space 111 in which the upper part is in communication with the supply part 120 and the lower part is in communication with the discharge part 150, and a washing liquid and a buffer solution flowing from the supply part 120 are provided. And / or discharge blood to the discharge unit 150.
  • the supply unit 120 is formed on the upper portion of the main body 100, the washing solution, buffer and / or blood is supplied from the washing liquid supply unit 300, buffer supply unit 400 and / or blood supply (BP) immunoglobulin adsorption filter To be moved to the receiving unit (110).
  • the supply unit 120 has a through hole penetrated up and down inside, the upper part of the through hole is in communication with the washing liquid supply unit 300, the buffer supply unit 400, the blood supply unit (BP) and the lower portion for the immunoglobulin adsorption filter water In communication with the unit (110).
  • a nozzle (N) is installed at the lower end of the supply unit 120 so that the washing solution, the buffer and / or blood flowing from the supply unit 120 has a wide injection area.
  • the washing liquid supply unit 300 is installed in the main body 100 to supply the washing liquid to the main body 100. At this time, the washing liquid supply unit 300 is in communication with the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 of the main body 100 via the input line (IL).
  • IL input line
  • the input line IL includes a main line IL1 communicating with the supply part 120 of the main body 100, and a branch line IL2 branched from the main line IL1.
  • the branch line IL2 includes first to third branch lines IL2a, IL2b, and IL2c communicating with the washing solution supply unit 300, the blood supply unit BP, or the buffer supply unit 400, respectively.
  • the buffer supply unit 400 is installed in the main body 100 to supply a buffer to the main body 100. At this time, the buffer supply unit 400 is in communication with the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 of the main body 100 via the input line (IL).
  • IL input line
  • the blood supply unit BP is installed in the main body 100, and supplies blood to which the solid material such as blood cells, bacteria or viruses, aggregated proteins, etc. has been removed.
  • the blood supply part BP is in communication with the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 of the main body 100 through the input line IL.
  • the blood supply unit BP may be simply used as a syringe for collecting blood, serum, or plasma. That is, the needle portion is removed from the end of the syringe containing blood and the end of the syringe body is directly connected to the blood supply unit 120 and injected into the body 100 or the first fluid flow through the input line IL. The blood may be injected into the body 100 through the adjusting unit 500.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is installed at the intersection of the main line IL1 of the input line IL and the first to third branch lines IL2a, IL2b, and IL2c, respectively, to wash, buffer and / or blood. To switch the flow direction.
  • a four-way valve is used as the first fluid flow control unit 500, but may be variously modified as long as the flow direction of the washing liquid, blood, and / or buffer can be changed.
  • the washing liquid collecting unit 600 is installed in the main body 100 to receive the washing liquid discharged from the main body 100. At this time, the washing liquid collection unit 600 is in communication with the main body 100 via a discharge line (DL). In this embodiment, the washing liquid collection unit 600 is installed in the main body 100, but the installation position may be varied as necessary, such as being installed separately from the main body 100.
  • the discharge line DL includes a main line DL1 communicating with the discharge part 150 of the main body 100, and a branch line DL2 branched from the main line DL1.
  • the branch line DL2 is the first to third branch lines DL2a, DL2b, DL2c communicating with the washing solution collecting unit 600, the blood collecting unit 800, and / or the immunoglobulin mixed solution collecting unit 700, respectively. Is done.
  • the immunoglobulin mixture collection unit 700 is installed in the main body 100 to receive an immunoglobulin-buffer mixture mixed with an immunoglobulin and a buffer solution discharged from the main body 100. At this time, the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 is in communication with the main body 100 through the discharge line (DL). In the present embodiment, the immunoglobulin mixed solution collection part 700 is installed in the main body 100, but the installation position may be variously selected as necessary, such as being installed separately from the main body 100.
  • the blood collecting unit 800 is installed in the main body 100 to receive the blood discharged from the main body 100. At this time, the blood collecting unit 800 is in communication with the main body 100 via the discharge line (DL). In the present embodiment, the blood collection unit 800 is installed in the main body 100, but the installation position may be variously selected as necessary, such as being installed separately from the main body 100.
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is installed at the intersection of the main line DL1 and the first to third branch lines DL2a, DL2b, DL2c of the discharge line DL, and wash liquid, immunoglobulin mixture, and, if necessary, And / or redirect the flow of blood.
  • the four-way valve is applied to the second fluid flow adjusting unit 900, but may be variously modified as long as it can change the flow direction of the washing liquid, the immunoglobulin mixture, and / or the blood.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 of the main body 100 is operated to open the main line IL1 and the first branch line IL2a of the input line IL.
  • the second and third branch lines IL2b and IL2c of the input line IL are closed and the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to operate the main line DL1 and the first branch line DL2a of the discharge line DL.
  • washing liquid supply unit 300 when the washing liquid supply unit 300 is operated to spray the washing liquid, for example, about 100 ml of washing liquid, the washing liquid passes through the input line IL, and receives the immunoglobulin adsorption filter through the nozzle N as shown in FIG. 2. It is injected into the unit (110).
  • the washing liquid is moved downward while washing the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 and the immunoglobulin adsorption filter 200 of the main body 100, is discharged through the discharge portion 150 of the main body 100 is the washing liquid It is housed in the collection unit 600.
  • the operation of the washing liquid supply unit 300 is stopped and the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to operate the main line DL1 and the second branch line of the discharge line DL.
  • DL2b) is opened and the first and third branch lines DL2a and DL2c of the discharge line DL are closed.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is operated to open the main line IL1 and the second branch line IL2b of the input line IL, and open the first and third branch lines IL2a of the input line IL. , IL2c) is closed.
  • the blood supply unit BP is operated to receive the blood of the blood supply unit BP as shown in FIG. 3.
  • the accommodation space 111 of the immunoglobulin adsorption filter accommodating unit 110 provided in the main body 100 through the input line IL. ).
  • the blood supplied to the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 passes downward by the pressure and passes through the immunoglobulin adsorption filter 200 and the immunoglobulins present in the blood are adsorbed to the immunoglobulin adsorption filter 200.
  • the remaining blood is collected in the blood collecting unit 800 through the discharge unit 150 of the main body 100.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is operated to open the main line IL1 and the first branch line IL2a of the input line IL, and the second and third branch lines IL2b and IL2c.
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to open the first branch line DL2a of the discharge line DL and close the second and third branch lines DL2b and DL2c.
  • washing liquid supplying unit 300 is operated again to spray the washing liquid, for example, about 100 ml of washing liquid
  • the sprayed washing liquid passes through the nozzle N as shown in FIG. 3 via the supply unit 120 of the main body 100. Is injected into the immunoglobulin adsorption filter accommodating part (110).
  • the washing solution moves the remaining blood components other than the immunoglobulin attached to the immunoglobulin adsorption filter while washing the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 and the immunoglobulin adsorption filter 200 of the main body 100, It is discharged through the discharge unit 150 of the main body 100 is accommodated in the washing liquid collection unit 600.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is operated to close the first and second branch lines IL2a and IL2b of the input line IL, and to close the input line IL.
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to open the third branch line DL2c of the discharge line DL, and the discharge line DL. Close the first and second branch lines DL2a and DL2b).
  • the buffer supply unit 400 when the buffer supply unit 400 is operated to spray a shrinkage liquid, for example, about 100 ml of buffer, the buffer passes through the third branch line IL2c of the input line IL, and the nozzle ( N) is injected into the immunoglobulin adsorption filter accommodation unit (110).
  • a shrinkage liquid for example, about 100 ml of buffer
  • the buffer is in contact with the immunoglobulin adsorption filter 200, as shown in Figure 5, the immunoglobulin adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter 200 is separated from the immunoglobulin adsorption filter 200, and mixed with the separated immunoglobulin And form an immunoglobulin-buffer mixture, which is accommodated in the immunoglobulin mixture collection part 700 through the discharge part 150 of the main body 100.
  • the immunoglobulin mixed solution accommodated in the immunoglobulin mixed solution collection part 700 may be used as a therapeutic immunoglobulin agent for administering directly to a mammal by parenteral routes (such as injection routes) for the prevention and / or treatment of diseases.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus is simple and compact in structure, the cost is low for manufacturing the device, and the operation is simple, so that the immunoglobulin preparation for treatment in the unpolluted state from autologous blood It can be obtained easily.
  • the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus is a simple immunity for treatment within a short time from the blood of their own blood or other specific mammalian subjects to patients who know specific diseases such as allergic diseases, autoimmune diseases, chronic inflammatory diseases, etc.
  • specific diseases such as allergic diseases, autoimmune diseases, chronic inflammatory diseases, etc.
  • Figure 6 is a block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention
  • Figure 7 is a cross-sectional view taken along the line AA of Figure 6, the therapeutic immunoglobulin according to the present invention with reference to Figures 6 and 7
  • the formulation manufacturing apparatus is described as follows.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus As shown in Figure 6 and 7, the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention, immunoglobulin adsorption filter 200, washing solution supply unit 300, buffer supply unit 400, the first fluid flow control unit 500 ), Washing liquid collection unit 600, immunoglobulin mixed solution collection unit 700, blood collection unit 800, the second fluid flow control unit 900 is the same as the first embodiment, but provided to the main body 100 Some structures have been modified to expand the blood supply method and the spraying area of the wash and buffer solutions.
  • the main body 100 includes an immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 in which blood is accommodated, a supply part 120 for receiving blood, a cover 130 for opening and closing the supply part 120, a washing solution and And / or a connection portion 140 receiving the buffer solution, and a discharge portion 150 through which the washing solution, the buffer solution and / or the blood are discharged.
  • the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 is configured in a cylindrical shape in which a receiving space 111 in which blood is accommodated, a moving line 112 through which a washing liquid and / or a buffer is moved.
  • the accommodation space 111 is formed in a cylindrical shape inside the immunoglobulin adsorption filter accommodating portion 110.
  • the movement line 112 includes a horizontal movement line 112a for receiving the washing liquid and / or the buffer solution, and a vertical movement line 112b for discharging the washing liquid and the buffer liquid into the accommodation space 111.
  • the horizontal moving line 112a includes a main line 112a1 receiving a washing liquid and / or a buffer and a branching line 112a2 branching the washing liquid and / or a buffer.
  • the main line 112a1 is formed above the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110, one end of which is in communication with the connection part 140, and the other end of which is in communication with the branch line 112a2.
  • only one main line 112a1 is formed, but a plurality of main lines 112a1 may be formed as necessary so that the washing solution and / or the buffer solution can be quickly supplied into the main body 100.
  • branch lines 112a2 are arranged in a plurality of circles to have concentric circles, and each branch line 112a2 having concentric circles is configured to communicate with the main line 112a1.
  • one end of the vertical movement line 112b communicates with the branch line 112a2 and the other end communicates with the accommodation space 111 of the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110.
  • a plurality of vertical movement line 112b is formed along the longitudinal direction of the branch line 112a2, thereby widening the spraying area of the washing liquid and / or the buffer liquid.
  • the other end of the vertical movement line (112b) is provided with a plurality of nozzles (N) in different directions so that the washing liquid and / or buffer solution is sprayed to a wider area.
  • the supply unit 120 is formed on the upper portion of the main body 100 to allow blood supplied from the outside to be moved to the immunoglobulin adsorption filter accommodation unit 110. At this time, the supply unit 120 has a through hole penetrated up and down inside, the upper part of the through hole is exposed to the outside and the lower part is in communication with the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 of the main body 100.
  • the cover 130 includes a fastening part 131 and a closing part 132 to open and close the supply part 120.
  • the fastening part 131 may be provided on an outer surface of the cover 130 and may be detachably threaded to the supply part 120.
  • the fastening part 131 is coupled to the supply part 120, and the cover 130 to prevent foreign substances that may be separated from the thread from being introduced into the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 through the supply part 120. It is good to be formed on the outer surface.
  • the closing part 132 protrudes downward and is inserted into the supply part 120 to close the supply part 120.
  • the connecting portion 140 is formed on the upper side of the immunoglobulin adsorption filter accommodating portion 110, one end is in communication with the horizontal moving line (112a), the other end through the supply line (PL) the washing liquid supply unit 300 and In communication with the buffer supply unit 400.
  • the washing liquid supply unit 300 is installed in the main body 100 to supply the washing liquid to the main body 100. At this time, the washing solution supply unit 300 is in communication with the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 of the main body 100 via the supply line (PL).
  • the supply line PL includes a main line PL1 in communication with the connecting portion 140 of the main body 100, and a branch line PL2 branched from the main line PL1.
  • the branch line PL2 is composed of first and second branch lines PL2a and PL2b communicating with the washing solution supplying unit 300 and / or the buffer supplying unit 400, respectively.
  • the buffer supply unit 400 is installed in the main body 100 to supply a buffer to the main body 100. At this time, the buffer supply unit 400 is in communication with the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 of the main body 100 via the supply line (PL).
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is installed at the intersection of the main line PL1 and the first and second branch lines PL2a and PL2b of the supply line PL to change the flow direction of the washing liquid and / or the buffer liquid. .
  • the first fluid flow adjusting unit 500 of the main body 100 is operated to open the main line PL1 and the first branch line PL2a of the supply line PL.
  • the second branch line PL2b and operating the second fluid flow adjusting unit 900 By closing the second branch line PL2b and operating the second fluid flow adjusting unit 900, the main line DL1 and the first branch line DL2a of the discharge line DL are opened, and the second, The third branch lines DL2b and DL2c are closed.
  • the washing solution supply unit 300 when the washing solution supply unit 300 is operated to supply about 100 ml of washing solution, the washing solution passes through the supply line PL, moves to the horizontal moving line 112a of the main body 100, and the horizontal moving line 112a. After passing through the washing liquid is passed through the vertical movement line (112b) is injected into the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 through the nozzle (N) as shown in FIG.
  • the washing liquid is moved downward while washing the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 and the immunoglobulin adsorption filter 200 of the main body 100, is discharged through the discharge portion 150 of the main body 100 is the washing liquid It is received by the collecting unit 600.
  • the operation of the washing liquid supply unit 300 is stopped, and the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to open the main line DL1 and the second branch line DL2b of the discharge line DL, and the first, The third branch lines DL2a and DL2c are closed, and the cover 130 of the main body 100 is separated from the supply unit 120 to open the supply unit 120.
  • the end of the syringe (S) from which the autologous blood containing plasma and / or serum is collected is inserted into the supply unit 120 of the main body 100, and the needle of the syringe S is immunoglobulin adsorption as shown in FIG. 9.
  • the filter accommodating portion (110) To be arranged on the upper portion of the filter accommodating portion (110).
  • a syringe filter (SF, syringe) having a plurality of pores (pore) having a size of about 0.22 micrometer or less between the end portion of the syringe body (S) and the supply portion 120 of the body 100 A filter) is provided to remove solid substances such as blood cells, bacteria, viruses, and aggregated proteins in the blood.
  • the blood of which solids are removed by pressurizing the piston of the syringe S passes through the syringe filter SF, and through the administration unit 120, the immunoglobulin adsorption filter accommodation unit 110.
  • the blood discharged to the immunoglobulin adsorption filter accommodating unit 110 passes downward through the immunoglobulin adsorption filter 200 while moving downward.
  • the blood is passed through the immunoglobulin adsorption filter 200, the immunoglobulin present in the blood is adsorbed to the immunoglobulin adsorption filter 200, the remaining blood is discharged to the discharge unit 150 of the main body 100 blood
  • the collection unit 800 is received and collected.
  • the supply unit 120 is closed through the cover 130, and the first fluid flow adjusting unit 500 is operated to operate the main line PL1 and the first line of the supply line PL.
  • the first branch line PL2a is opened, the second branch line PL2b is closed, and the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to operate the main line DL1 and the first branch line of the discharge line DL.
  • DL2a is opened and the second and third branch lines DL2b and DL2c are closed.
  • washing solution supply unit 300 is operated again to spray the washing solution, for example, about 100 ml of washing solution
  • the washing solution is shown in FIG. 8 via the moving line 112 of the immunoglobulin adsorption filter accommodation unit 110.
  • the nozzle (N) is injected into the immunoglobulin adsorption filter accommodating portion (110).
  • the washing solution moves the remaining blood components other than the immunoglobulin attached to the immunoglobulin adsorption filter while washing the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 and the immunoglobulin adsorption filter 200 of the main body 100, It is discharged through the discharge unit 150 of the main body 100 is accommodated in the washing liquid collection unit 600.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 is operated to close the first branch line PL2a of the supply line PL, open the second branch line PL2b of the supply line PL, and simultaneously
  • the two-fluid flow adjusting unit 900 is operated to open the third branch line DL2c of the discharge line DL, and close the first and second branch lines DL2a and DL2b of the discharge line DL.
  • the buffer supply unit 400 when the buffer supply unit 400 is operated to supply a buffer, for example, about 100 ml of buffer into the main body 100, the buffer passes through the second branch line PL2b of the supply line PL, After moving to the horizontal movement line 112a of the main body 100 and passing through the horizontal movement line 112a, the buffer solution passes through the vertical movement line 112b and is immunized through the nozzle N as shown in FIG. 11. It is injected into the globulin adsorption filter accommodating part (110).
  • the buffer is in contact with the immunoglobulin adsorption filter 200 as shown in Figure 12, the immunoglobulin adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter 200 is separated from the immunoglobulin adsorption filter 200, and mixed with the separated immunoglobulin In order to form an immunoglobulin-buffer mixture, it passes through the discharge part 150 of the main body 100 and is received in the immunoglobulin mixture collection part 700.
  • the immunoglobulin mixture contained in the immunoglobulin mixture collection unit 700 may be used as a therapeutic immunoglobulin agent to be administered orally and / or parenterally to mammals for the treatment and / or prevention of diseases.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus may have a wider spray area of the washing solution and the buffer, the washing solution is washed to the detail of the body 100 and the immunoglobulin adsorption filter 200 It is possible to clean the main body 100 and the immunoglobulin adsorption filter 200, the buffer solution can be evenly sprayed on the entire surface of the immunoglobulin adsorption filter 200, to the immunoglobulin adsorption filter 200 Adsorbed immunoglobulins can be isolated efficiently.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus by opening and closing the supply unit 120 of the main body 100, it is possible to simply put the blood to the main body 100 through the syringe (S).
  • Figure 13 is a block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to the present invention, with reference to Figure 13 describes the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus according to the present invention.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus is the main body 100, immunoglobulin adsorption filter 200, washing solution supply unit 300, buffer supply unit 400, the first fluid flow adjusting unit 500, the same as that of the second embodiment in the configuration including a washing solution collection unit 600, immunoglobulin mixed solution collection unit 700, blood collection unit 800, the second fluid flow adjusting unit 900, but additionally pneumatic supply
  • the 1000 is configured to be further connected to the main body 100.
  • the pneumatic supply unit 1000 is connected to the main body 100 to provide gas, preferably air, and more preferably compressed air to the main body 100.
  • the pneumatic supply unit 1000 is in communication with the immunoglobulin adsorption filter receiving unit 110 of the main body 100 via a supply line (PL), the operation of the pneumatic supply unit 1000 can provide compressed air. Any may be used as long as it is present, but at least aseptic and toxic should be used, so it is preferable to generate pneumatic pressure through sterile compressed nitrogen.
  • the supply line PL is further provided with a third branch line PL2c having one end connected to the pneumatic supply part 1000 and the other end connected to the first fluid flow adjusting part 500 to communicate with the pneumatic supply part 1000. .
  • the first fluid flow control unit 500 is installed at the intersection of the first to third branch lines (PL2a, PL2b, PL2c) of the supply line (PL), to adjust the flow of the fluid variably.
  • the first fluid flow adjusting unit 500 may be a 4-way valve.
  • Figure 14 shows the operation of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention having the above-described configuration.
  • the blood is supplied to the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 by the syringe S, and the supply part 120 is closed by the cover 130 of the main body 100, and then the pneumatic supply part 1000 is provided.
  • compressed air that is, pneumatic pressure
  • the blood passes through the immunoglobulin adsorption filter 200 at a high speed by the pneumatic pressure supplied to the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110 of the main body 100, and the immunoglobulin is absorbed into the immunoglobulin adsorption filter 200. It is rapidly adsorbed and not adsorbed by the immunoglobulin adsorption filter 200, but foreign matter adhering to the immunoglobulin adsorption filter 200 by the adhesive force is forced through the immunoglobulin adsorption filter 200, so that the immunoglobulin adsorption filter 200 ), Do not mix immunoglobulins and foreign substances.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus is rapidly absorbed by the immunoglobulin in the immunoglobulin adsorption filter 200 due to the pneumatic supply unit 1000, purely immunoglobulin immunoglobulin adsorption filter 200 So that it can be adsorbed.
  • the blood is pressurized downward by using the pneumatic supply unit 1000, but by installing a suction device such as a pump in the blood collecting unit 800, the blood collecting unit 800 through the suction device By sucking in), it is possible to replace the function of the pneumatic supply unit (1000).
  • the pneumatic supply unit 1000 may be connected to the first fluid flow adjusting unit 500 of Embodiment 1, thereby providing Embodiment 1 with the effect of the pneumatic supply unit 1000 mentioned in Embodiment 3.
  • the pneumatic supply unit 1000 not only facilitates the process of the blood is discharged through the immunoglobulin adsorption filter 200 of the main body 100, but also after the washing liquid and / or buffer is supplied to the main body 100 Pneumatic pressure may be supplied to allow the wash and / or buffer to pass through the immunoglobulin adsorption filter 200 quickly and accurately.
  • FIGS. 15 and 16 are block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention
  • Figure 16 is a schematic diagram showing the electrical connection between the configuration of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to Figure 15
  • an apparatus for producing an immunoglobulin preparation for treatment according to the present invention with reference to FIGS. 15 and 16 is as follows.
  • the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus of the present invention is the main body 100, immunoglobulin adsorption filter 200, washing solution supply unit 300, buffer supply unit 400, the first fluid Embodiment 3 in that it includes a flow adjusting unit 500, washing liquid collection unit 600, immunoglobulin mixed solution collection unit 700, blood collection unit 800, the second fluid flow control unit 900, pneumatic supply unit 1000 Is the same as
  • Embodiment 4 according to the present invention is further provided with a blood filter receiving unit 160, blood filter 1100, control unit 1200, input unit 1300, display unit 1400, according to the addition of new components Some structure changes.
  • the blood filter accommodating part 160 has a cylindrical space formed therein, and is provided on an upper portion of the immunoglobulin adsorption filter accommodating part 110. At this time, the blood filter accommodating part 160 is provided, so that the supply part 120 of the main body 100 is formed on the blood filter accommodating part 160 to communicate with the blood filter accommodating part 160.
  • the position of the supply unit 120 of the third embodiment is provided with a communication unit 170 for communicating the blood filter accommodation unit 160 and the immunoglobulin adsorption filter accommodation unit 110.
  • the blood filter 1100 is installed in the blood filter accommodating unit 160 and disposed horizontally, and passes through plasma or serum and solid foreign substances present in the remaining blood cells or blood (solid materials including bacteria or viruses). Is filtering.
  • the blood filter 1100 of the present embodiment 4 performs the syringe filter function of the syringe S used in the above-described embodiment 2, and the syringe filter as the blood filter 1100 is installed in the main body 100
  • the blood may be supplied to the main body 100 using a general syringe that is not provided.
  • the blood filter 1100 has a suitable pore size of less than about 0.22 micrometer (micrometer) to perform the function of the syringe filter.
  • the control unit 1200 is provided to be connected to the blood filter accommodating unit 160, the washing solution supply unit 300, the buffer supply unit 400, the first fluid flow adjustment unit 500, the second fluid flow adjustment unit 900
  • the pneumatic supply unit 1000 is connected to each other to control the operation of each component.
  • the controller 1200 may be connected to the main body 100 or may be separately installed to be spaced apart from the main body 100 or the blood filter accommodating part 160.
  • the input unit 1300 is connected to the control unit 1200 and inputs a control signal, so that the control unit 1200 supplies the washing liquid supply unit 300, the buffer supply unit 400, the first fluid flow adjusting unit 500, and the second fluid flow. It is possible to control the operation of the adjusting unit 900, the pneumatic supply unit (1000).
  • the display unit 1400 is for displaying information such as an operation state or an operation command of a therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus operating under the control of the control unit 1200, which is commonly used in the art for this purpose.
  • the display device is not particularly limited.
  • the input unit 1300 and the display unit 1400 are provided independently, but the input unit 1300 and the display unit 1400 may be integrally formed like a touch screen device.
  • FIG. 17 and 18 are views showing the operation of the embodiment 4 according to the present invention, a description of the operation of the therapeutic immunoglobulin formulation manufacturing apparatus having the above-described configuration with reference to Figure 17 and 18 Same as
  • the blood filter accommodating unit 140 As shown in FIG. 17, when the blood of the feed solution is supplied to the supply unit 120 using a syringe S 'or the like, the blood is lowered while being accommodated in the blood filter accommodating unit 140, and the plasma or the serum is the blood filter. After passing through 1100, solid foreign substances (solid materials including bacteria and viruses) present in blood cells or blood are filtered by the blood filter 1100.
  • the blood filtered by the blood filter 1100 is supplied to the blood receiving unit 110 through the communication unit 170 of the main body 100 as shown in Figure 18, the blood is supplied as in the third embodiment Perform the following steps.
  • the user operates the input unit 1300, the washing liquid supply unit 300, the buffer supply unit 400, the first fluid flow adjustment unit 500, the second fluid flow adjustment unit 900, the pneumatic supply unit through the control unit 1200 1000 and so on. Therefore, the user can automatically manipulate each component without a separate manual operation to conveniently prepare a therapeutic immunoglobulin preparation.
  • control unit 1200 may be installed in Embodiment 1 and control each component automatically as in Embodiment 4.
  • FIG. 19 is a block diagram showing another embodiment of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention
  • Figure 20 is a configuration schematically showing the electrical connection between the configuration of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to Figure 19 Referring to Figures 19 and 20, the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the invention will be described.
  • the immunoglobulin preparation manufacturing apparatus for treatment according to Embodiment 5 of the present invention includes a main body 100, an immunoglobulin adsorption filter 200, a washing solution supply unit 300, a buffer supply unit 400, a first fluid flow adjusting unit 500, Washing fluid collection unit 600, immunoglobulin mixed solution collection unit 700, blood collection unit 800, the second fluid flow adjusting unit 900, pneumatic supply unit 1000, blood filter (1100), control unit 1200, Including the input unit 1300 and the display device 1400 is the same as in the fourth embodiment.
  • the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus includes an immunoglobulin suction unit 1500, a third fluid flow adjusting unit 1600, and a residual liquid collection unit 1700.
  • the fourth fluid flow control unit 1800, the temperature sensor 1900, the heating means 2000 and the immunoglobulin diluent supply unit 2100 is further provided, the addition of new components, some structures and functions are changed do.
  • the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 includes a mixed solution collecting base 710 for receiving an immunoglobulin mixed solution and a final filter 720 for filtering the immunoglobulin.
  • the mixed solution collecting body 710 includes a final filter accommodating unit 711 for receiving an immunoglobulin mixture, a supply unit 712 for supplying an immunoglobulin mixture, and an outlet 713 for discharging the immunoglobulin mixture. .
  • the final filter accommodating unit 711 includes an accommodation space 711a in which the immunoglobulin mixture is accommodated, and an output line 711b for discharging the concentrated immunoglobulin.
  • An upper portion of the receiving space 711a communicates with the inside of the supply part 712, and a lower portion thereof communicates with the inside of the discharge part 713.
  • the output line 711b is a horizontal line 711b1 communicating with the inside of the discharge part 713, and a vertical line 711b2 at one end of which is in communication with the horizontal line 711b1 and the other end of which is in communication with the immunoglobulin suction unit 1500. It consists of At this time, the horizontal line (711b1) is in communication with the discharge portion 713, so that the immunoglobulin suction unit 1500 can easily inhale the concentrated immunoglobulin.
  • the supply part 712 is formed on the upper end of the final filter accommodating part 711, one end is in communication with the third branch line DL2c of the discharge line DL, and the other end is an accommodation space of the final filter accommodating part 711 ( 711a).
  • the discharge part 713 is formed below the final filter accommodating part 711, one end is communicated with a narrower width than the final filter accommodating part 711, and the other end is communicated with the residual liquid collecting part 1700.
  • the final filter 720 is built in the discharge portion 713, it is configured to be located below the communication line of the output line 711b and the receiving space 711a of the mixed liquid collecting body 710.
  • the final filter 720 is composed of a structure for filtering proteins having a size of about 30 kDa or more molecular weight, the immunoglobulin protein contained in the immunoglobulin mixture is filtered and other foreign matter and washing liquid and / or immunoglobulin diluent is passed through .
  • the immunoglobulin suction unit 1500 is installed in the mixed solution collecting body 710 and is operated by the control unit 1200. At this time, the immunoglobulin suction unit 1500 has one end in communication with the discharge unit 713 and the other end of the vertical line of the output line 711b via the first connection line RL1 in communication with the immunoglobulin suction unit 1500. 711b2.
  • the operation of the immunoglobulin inhalation unit 1500 uses a pump, but may be variously modified as long as it can inhale the concentrated immunoglobulin including a syringe, and is installed separately from the discharge unit 713 and the like. The installation location can be varied as required.
  • the third fluid flow adjusting unit 1600 is installed in the first connection line RL1 and is operated by the control unit 1200 to the immunoglobulin suction unit 1500 from the vertical line 711b2 of the output line 711b. To control the flow of the concentrated immunoglobulin mixture introduced.
  • the residual liquid collecting unit 1700 is connected to the discharge unit 713 of the mixed liquid collecting body 710 at the lower position of the final filter 720, and the mixed liquid collecting body (2) via a second connection line (RL2). In communication with the discharge portion 713 of 710.
  • the fourth fluid flow adjusting unit 1800 is installed in the second connection line RL2 and operated by the control unit 1200, and the remaining liquid collecting unit 1700 is discharged from the discharge unit 713 of the mixed liquid collecting base 710. To control the flow of immunoglobulin mixture into the mixture.
  • the temperature sensor 1900 may be installed in the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 and operated by the controller 1200, and the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 may be used. It senses temperature and outputs detection signal. At this time, the control unit 1200 operates the heating means 2000 according to the signal detected from the temperature sensor 1900. That is, the controller 1200 adjusts the temperature of the heating means 2000 in real time, and causes the immunoglobulin mixture to be heat sterilized by the heating means 2000, so that any bacteria, viruses and / or toxic substances that may be present may be removed. Make it inactive.
  • the heating means 2000 is not particularly limited as long as it is a device capable of providing heat. However, it is preferable to use an electric heating wire.
  • the heating means 2000 may be installed in the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 to provide the immunoglobulin mixed solution collecting part 700. Heat to a certain temperature.
  • the heating means 2000 is preferably installed in the heater installation space 711c of the final filter accommodating portion 711, and surrounds the heater installation space 711c.
  • the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 may be heat treated by heat conducted from a heat ray installed outside by being composed of a glass container or a heat resistant plastic container.
  • the temperature sensor 1900 is installed outside the immunoglobulin mixed solution collecting part 700, and a part of the temperature sensor 1900 is in contact with the immunoglobulin mixed solution collecting part 700 to perform a function of sensing a temperature. Can be.
  • the immunoglobulin diluent supply unit 2100 is for supplying the immunoglobulin diluent to the immunoglobulin mixed solution collection unit 700, and is not particularly limited as long as it is a conventional device having such a purpose.
  • the immunoglobulin diluent supply unit 2100 is in communication with the second fluid flow adjusting unit 900 via the dilution line (WL).
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is a five-way valve (5way valve) is used to open and close the discharge line (DL) and dilution line (WL).
  • the immunoglobulin diluent is for changing an immunoglobulin mixture, that is, an immunoglobulin-buffer mixture into an immunoglobulin-immunoglobulin diluent mixture, in order to reduce the possibility of a toxic reaction due to a buffer when administered to a mammal.
  • the immunoglobulin dilution liquid according to the present invention may be used as physiological saline or distilled water which may be administered to a mammalian living body.
  • immunoglobulin may be used in both adsorption chromatography and anion adsorption chromatography using protein A or protein G, which are most widely used for pure separation of immunoglobulins from mammalian blood.
  • Strongly isolated buffers such as 0.2 M Glycine / HCl, pH 2.5 or high salt buffers, such as 0.5 M NaCl in 10 mM Tris, pH 8.5, are used to separate the sorbent protein A, protein G or anionic resin with high efficiency. Used.
  • the immunoglobulin-buffer mixture which is eluted from the immunoglobulin adsorption resin and separated by the strongly acidic buffer or the high salt buffer, it is toxic to mammalian cells when directly administered to the mammal without a separate treatment. There is an incomplete aspect of safety for use as a therapeutic immunoglobulin agent because of the potential for reaction.
  • the present invention can change the immunoglobulin-buffer mixture into immunoglobulin-immunoglobulin diluent using physiological saline or distilled water as an immunoglobulin diluent as described above, thereby preventing toxicity to mammalian cells.
  • Immunoglobulin preparations can be prepared.
  • the washing liquid that can be relatively less toxic when administered to the mammal at the time of separation and purification of immunoglobulin from mammalian blood using adsorption chromatography (physiology Saline) and buffers (0.1 M Sodium citrate buffer pH 5.5, which is relatively safe when administered to mammals) can reduce the efficiency of isolating immunoglobulins from the blood, even though they may reduce the efficiency of the aforementioned strong acid buffers or high salts. Since the buffer is included in the therapeutic immunoglobulin formulation, it is possible to prepare a safer therapeutic immunoglobulin formulation by reducing the possibility of developing toxicity in the mammal receiving the administration. As described above, when a weakly acidic buffer is used in the therapeutic immunoglobulin preparation of the present invention, the immunoglobulin-buffer mixture may be directly used as a therapeutic immunoglobulin preparation without the use of immunoglobulin diluent.
  • 21 to 24 show the operation of the therapeutic immunoglobulin preparation manufacturing apparatus according to the present invention having the above-described configuration.
  • the working mode of Embodiment 5 is basically the immunoglobulin-containing mixture containing the immunoglobulin through the process of Embodiments 1 to 4 is accommodated in the mixed solution collecting body 710.
  • the third fluid flow adjusting unit 1600 and the fourth fluid flow adjusting unit 1800 are closed, as shown in FIG. 21, so that the immunoglobulin mixed solution accommodated in the mixed liquid collecting body 710 is mixed liquid collecting body 710. Imprisoned).
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is operated through the input unit 1300, the dilution line WL is opened as shown in FIG. 22, and the immunoglobulin diluent supply unit 2100 is operated to collect the immunoglobulin mixed solution.
  • the immunoglobulin-buffer mixed solution contained in the immunoglobulin mixture collection part 700 is changed to a safer immunoglobulin-immunoglobulin diluent mixture when administered to a mammal by a parenteral route including an injection route.
  • the second fluid flow adjusting unit 900 is operated to close the diluent line WL, and the fourth fluid flow adjusting device 1800 is operated to operate the fourth fluid flow adjusting unit 1800.
  • the solution of about 90% of the volume of the immunoglobulin dilution confined is discharged to the remaining liquid collection unit 1700 as a separate container.
  • the immunoglobulin diluent passes through the final filter 720, the immunoglobulin contained in the immunoglobulin mixture is filtered by the final filter 720, 100% of the immunoglobulin is present on the top of the final filter 720, The remaining immunoglobulin diluent passes through the final filter 720, and the volume of immunoglobulin diluent of about 10% is present with the immunoglobulin on the top of the final filter 720.
  • the fourth fluid flow adjusting unit 1800 is operated to close the second connection line RL2.
  • the third fluid flow adjusting unit 1600 is opened and operated, and then the immunoglobulin inhalation unit 1500 is operated to inhale the concentrated immunoglobulin-diluent mixture and store the immunoglobulin intake unit 1500.
  • the user can collect the concentrated immunoglobulin stored in the immunoglobulin inhalation unit 1500 as a therapeutic immunoglobulin preparation through a separate syringe or the like, thereby preventing oral and / or treating the mammal for the purpose of preventing and / or treating the disease. Or by parenteral routes.
  • Embodiment 5 of the present invention consists of a structure capable of concentrating an immunoglobulin mixture or an immunoglobulin diluent, so that it is easy for a user to obtain a high concentration of immunoglobulin solution, and finally, the parenteral including the injection route to a mammal.
  • the immunoglobulin preparations for the treatment of non-toxic and safe non-pollution non-toxic behaviors which are less likely to cause toxicity in mammals when administered by roro can be prepared.
  • a therapeutic immunoglobulin preparation is prepared from blood of a human or mammal suffering from an allergic disease, an autoimmune disease, a chronic inflammatory disease, an infectious disease, a malignant tumor disease, or recovering from the above diseases and obtaining immunity. can do.
  • each fluid is individually controlled by the user without manual control. May be supplied.
  • the user in order to operate all the components, the user may manually input the operation signals of the respective components, but the program is included in the control unit 1200 so that the input signal 1300 starts and ends the signal. It is also possible to build an automated system that automatically performs the entire process described above by simply entering.
  • the present invention consists of a fully sealed structure in which the connection between all components is completely separated from the outside air or contaminants due to the structure of the device of the present invention, the immunoglobulin separation No contamination from bacteria or viruses occurs in the process.
  • the blood supply unit 100 used in the present invention the main body 100, the immunoglobulin adsorption filter 200, the immunoglobulin mixed solution collection unit 700 and the input line (IL) and the discharge line (DL) to which they are connected Designed in the form of disposable therapeutic immunoglobulin preparation kits, each time a subject separates blood, a new therapeutic immunoglobulin preparation kit is used to prevent contamination of infectious or toxic substances in the blood of other individuals. It may also be configured in a form that can be.
  • Embodiments 2 to 5 may be combined with each other for treatment according to the present invention.
  • An immunoglobulin preparation manufacturing apparatus can also be comprised.
  • a protein A-agarose bead [Pro-chem Inc, MA, USA] was installed as an immunoglobulin adsorption filter inside a cylindrical body having a size of 20 ml, and 1.5 M Glycine was placed on top of the body.
  • / NaOH buffer, 3M NaCl, a wash solution supply unit containing a wash solution consisting of pH 9.0, 0.2M Glycine / HCl, a buffer solution containing a buffer consisting of pH 2.5 was connected to the installation.
  • the three-way sterilized syringe in 50ml unit to generate negative pressure and positive pressure by using a piston to connect the configuration corresponding to the washing liquid collection unit, the immunoglobulin mixed solution collection unit, and the blood collection unit at the bottom of the main body is a 4-way valve. After connecting to the four-way valve was connected to the main body.
  • sterile saline solution corresponding to the immunoglobulin dilution solution supply section for supplying sterile saline solution [Korea Sterile Physiological Saline TM , Korea Pharmaceutical Industry, Korea] to one side of the sterile syringe corresponding to the immunoglobulin mixed solution collection section. Connect the syringe containing the.
  • washing solution consisting of 1.5 M Glycine / NaOH buffer, 3 M NaCl, and pH 9.0 stored in a 50 ml syringe corresponding to the washing supply part was supplied to the main body using a positive pressure applied to the syringe, and then passed through an immunoglobulin adsorption filter. Other substances not adsorbed on the immunoglobulin adsorption filter were discharged to the outside of the main body and stored in the washing liquid collection unit.
  • Mammalian cells which can be produced in the same manner as in Example 1 except that the immunoglobulin mixture introduced into the immunoglobulin mixture collector, that is, the immunoglobulin-buffer mixture is directly administered to the mammal as a therapeutic immunoglobulin agent.
  • the immunoglobulin does not pass through the buffer or immunoglobulin diluent Therapeutic immunoglobulin formulations were prepared by concentrating immunoglobulins using a final filter (Satorius Stedim Biotech, Germany) passing through the bay.
  • Serum and molecular weight markers [PageRuler TM , Thermo Fisher Scientific Inc, USA] and commercialized intravenous injectors used in the Examples for comparative analysis of therapeutic immunoglobulin preparations prepared according to Examples 1 and 2 above
  • the immunoglobulin protein [IV globulin, Green Cross, Korea] was shown in FIG. 25 by acrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis and protein staining (coomassie blue staining).
  • Line 1 shown in Figure 25 is a protein present in 1 microliter of serum
  • line 2 is a molecular weight marker
  • line 3 is an immunoglobulin protein present in 2 microliters of therapeutic immunoglobulin preparations prepared according to Example 1
  • Line 4 is immunoglobulin protein present in 2 microliters of therapeutic immunoglobulin preparation prepared according to Example 2
  • line 5 is acrylamide gel electrophoresis analysis of 4 micrograms of commercially available intravenous human immunoglobulin protein, respectively. The results of comparative analysis with and protein staining are shown.
  • therapeutic immunoglobulin formulations (lines 3 and 4) prepared according to Examples 1 and 2 were prepared from commercialized injectable immunoglobulin formulations (tablets separated from plasma of several healthy donors). High concentration and purity therapeutic immunoglobulin preparations to a similar degree as beer-user human immunoglobulins (line 5).
  • the therapeutic immunoglobulin preparations prepared according to Examples 1 and 2 were treated for 4 hours on human epithelial cells (BEAS2-B cell line, ATCC) cultured in laboratory conditions using 96 well culture plates. After that, the degree of toxicity on the generated cells was measured by MTT assay, which is a standard cytotoxicity measurement method currently commonly used, and the result is expressed as% cell death.
  • BEAS2-B cell line ATCC
  • cytotoxicity of three types of test groups was measured as cytotoxicity when only DMEM-F12 medium was treated as 0% when measuring cytotoxicity by MTT assay, and cytotoxicity was calculated as% apoptosis.
  • FIG. 26A shows the cytotoxicity of a therapeutic immunoglobulin formulation prepared according to Example 1
  • B shows the cytotoxicity of the therapeutic immunoglobulin formulation prepared according to Example 2
  • C is a commercially available intramuscular injection It demonstrates the cytotoxicity of immunoglobulin G.
  • cytotoxicity 86.3 ⁇ 2.2%) against human epithelial cells cultured according to an immunoglobulin-buffer mixture, i.e., a therapeutic immunoglobulin preparation prepared according to Example 1, in an acidic buffer.
  • an immunoglobulin-buffer mixture i.e., a therapeutic immunoglobulin preparation prepared according to Example 1
  • the immunoglobulin-immunoglobulin diluent mixture prepared in accordance with Example 2
  • the immunoglobulin-immunoglobulin diluent mixture concentrated by dilution with an immunoglobulin diluent.
  • Line 1 of FIG. 27 represents the molecular weight marker
  • line 2 represents the protein present in the therapeutic immunoglobulin formulation prepared according to Example 2, which was further heat treated according to Example 3, and line 3 was heat treated. Protein present in a therapeutic immunoglobulin preparation prepared according to Example 2, which is not shown.
  • Example 3 a therapeutic immunoglobulin preparation (Example 3; Line 2) prepared according to Example 2, which was heated under storage at room temperature for 5 days, was prepared according to Example 2, which did not undergo heat treatment. It was confirmed that the protein was present at a higher concentration without degradation than the therapeutic immunoglobulin preparation (line 3).

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Abstract

본 발명은 내부에 공간이 형성된 본체; 상기 본체의 내부 일측에 구비되어 본체로 유입되는 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 면역글로불린흡착필터; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 세척액을 공급하는 세척액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 완충액을 공급하는 완충액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 혈액을 공급하는 혈액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 세척액을 수용하는 세척액수집부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 면역글로불린혼합액을 수용하는 면역글로불린혼합액수집부; 및 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 혈액을 수용하는 혈액수집부를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치에 관한 것이다.

Description

치료용 면역글로불린 제제 제조장치 및 이를 이용한 제조방법
본 발명은 치료용 면역글로불린 제제 제조장치 및 이를 이용한 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 알레르기 질환 또는 자가면역질환 등과 같은 면역계의 이상과 관련된 질환을 앓고 있는 포유동물을 치료하기 위해서, 상기 질환을 앓고 있는 포유동물 자신의 혈액이나, 유사한 질환을 앓고 있거나 또는 과거에 유사한 질환을 앓았다가 회복된 다른 포유동물의 혈액으로부터 정맥주사, 피하주사, 근육주사, 진피내 투여 등의 비경구경로로 투여가 가능한 무오염 및/또는 무독성 상태로 면역글로불린을 분리하여 치료용 면역글로불린 제제를 제조하는 장치 및 이를 이용한 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법에 관한 것이다.
최근 들어 알레르기질환, 자가면역질환, 감염성 질환, 악성 종양성 질환 등의 다양한 질환들을 예방하거나 치료하기 위해 면역글로불린이 사용되고 있다.
상기 면역글로불린은 항염증, 항알레르기, 항세균 및 항바이러스 효과, 항종양 또는 항암효과 등을 지니고 있어, 난치성의 알레르기 질환, 자가면역질환, 만성염증성 질환 또는 감염성 질환 등을 앓고 있는 포유동물 또는 건강한 정상 포유동물에게 주사경로(피하, 근육, 정맥 주사 등)로 투여할 경우 상기 질환들에 대한 치료 및/또는 예방효과를 나타낸다.
하지만, 현재 사용되고 있는 다수의 건강한 혈액 공여자의 혈장으로부터 분리된 면역글로불린 주사제는 알레르기질환, 자가면역질환, 만성염증성 질환, 악성 종양성 질환 또는 감염성 질환 등에서 치료효과를 나타내는 작용기전이 명확하게 밝혀져 있지 않다.
또한, 상기 면역글로불린은 건강한 혈액 공여자의 면역글로불린을 원료로 사용하고 있어, 특정 종류의 알레르기질환이나 자가면역질환을 앓고 있는 환자들에게서 공통적으로 관찰되는 과잉하게 생산되어 특정 항원과 반응하여 질병발생에 관여하는 병적인(pathogenic) 항체들을 효과적으로 억제하지 못하여 상기 질환들에 대한 치료효과가 불충분한 경우가 흔하다.
또한, 환자 치료에 사용되는 포유동물의 혈액으로부터 분리 정제된 면역글로불린 제제는 주로 근육주사, 피하주사 또는 정맥주사의 경로로 투여되고 있으므로, 제조과정에서 감염성 물질이나 독성물질의 오염을 방지하기 위한 다양하고 엄격한 제조공정들이 요구되고 있다.
또한, 상기 면역글로불린은 제조과정에서 철저한 검사를 거치고, 감염물질의 오염을 방지하여 안전한 치료제를 제조하려고 노력하고 있지만, 미지의 바이러스나 감염원(예, 인간광우병 등)의 오염으로 인해 부작용들이 발생될 가능성을 완전히 배제하지 못하고 있는 실정이다.
현재까지 치료용 면역글로불린의 제조를 위해서는 다수의 혈액공여자들의 혈장을 모아서 생성된 대량의 모듬 혈장(보통 1,000명 이상의 다수로부터 얻어진 많은 양의 혈장)을 대형화된 여러 가지의 무오염의 혈액분획 장치와 혈액 단백질 분리 정제장치를 이용하여 제조하고 있으므로, 대규모의 공간 및 시설과 다수의 기술 인력들을 필요로 하는 문제점이 있다.
하지만, 현재까지 전술한 대규모의 무균 및/또는 무오염 면역글로불린 단백질 분리정제 시설을 갖추기 어려운 병원이나 의원에서는 의료진이 직접 소수의 공여자(예를 들어 1명)로부터 얻은 소량의 혈액(예를 들어 1회의 표준헌혈 시 얻어지는 약 400ml의 전혈 또는 약 200ml의 혈장)으로부터 감염물질이나 독성물질이 오염되지 않은 상태로 면역글로불린을 분리 정제하여 질병치료를 목적으로 포유동물에게 투여하는 것을 가능하게 할 수 있는 간단하고 편리한 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 개발되지 못한 상태이다.
한편, 실험실에서 사용할 목적으로 사용되는 개방된 형태의 흡착크로마토그래피 컬럼(예, Protein A 컬럼)을 이용한 면역글로불린 분리방법은 외부 감염물질이나 독성물질의 오염가능성이 높아 주사치료용의 면역글로불린 치료제형을 생산하기에는 부적절하다.
또한, 알레르기질환, 자가면역질환, 만성염증성질환, 악성종양성 질환 또는 감염성 질환을 치료를 위해 면역글로불린을 투여 할 경우, 질환을 앓고 있는 환자 자신의 혈액이나 또는 치료하려는 질환에 대해서 높은 치료효과를 나타내는 면역글로불린을 고역가로 가지고 있는 특정 포유동물 개체, 예를 들면 동일하거나 유사한 질환을 앓고 나서 회복된 개체 등을 선택하여 이 포유동물의 혈액으로부터 치료 대상 환자나 치료 대상 질환에 따라서 맞춤형 면역글로불린 치료제를 생산하는 것이 종래의 대량 생산에 의한 다수의 포유동물 혈액으로부터 얻어낸 면역글로불린 보다 더욱더 효과적인 질병에 대한 치료효과를 나타낼 수 있다.
따라서 치료 대상자나 치료 대상 질환에 따른 사용자를 한정한 소수의 특정 포유동물 개체로부터 분리된 소량의 혈액으로부터 면역글로불린을 무균 및/또는 무독성의 상태로 분리 정제하여 포유동물에게 비경구경로(주사경로를 포함하여 기타 여러 경로들로)로 안전하게 투여할 수 있는 치료용 면역글로불린 제제를 간편하게 제조할 수 있는 장치를 개발하는 것이 요구되고 있다.
본 발명은 알레르기질환, 자가면역질환, 만성염증성 질환 또는 감염성 질환 등을 치료 및/또는 예방하기 위해서 면역글로불린을 투여 받을 대상자 자신 또는 질환에 대한 예방 또는 치료효과를 보이는 면역글로불린을 가진 특정 포유동물 개체의 혈액으로부터 감염물질이나 독성물질의 오염 없이 면역글로불린을 정제하여 포유동물에게 비경구경로(주사 경로 포함)로 투여가 가능하도록 한 치료용 면역글로불린 제제를 신속하게 제조할 수 있는 제조장치 및 이를 이용한 면역글로불린의 제조방법을 제공한다.
본 발명은
내부에 공간이 형성된 본체; 상기 본체의 내부 일측에 구비되어 본체로 유입되는 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 면역글로불린흡착필터; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 세척액을 공급하는 세척액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 완충액을 공급하는 완충액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 혈액을 공급하는 혈액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 세척액을 수용하는 세척액수집부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 면역글로불린혼합액을 수용하는 면역글로불린혼합액수집부; 및 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 혈액을 수용하는 혈액수집부를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 제공한다.
특히, 본 발명의 치료용 면역글로불린 제조장치는 포유동물의 혈액에 포함된 면역글로불린을 외부로부터의 감염물질이나 독성물질의 오염 없이 분리하여 채취할 수 있도록 혈액을 공급받는 입구로부터 면역글로불린 배출부 사이가 외부로부터 밀폐된 구조(closed-loop structure)로 이루어진 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은
1) 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 혈액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 흡착단계; 2) 상기 흡착단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 세척액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 흡착된 물질 외의 다른 물질을 세척하여 제거시키는 세척단계; 3) 상기 세척단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 완충액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 면역글로불린-완충액 혼합물을 제조하는 단계; 및 4) 완충액 또는 희석액은 통과시키지만 면역글로불린은 통과시키지 않고 거를 수 있는 필터를 포함하는 면역글로불린수집부를 이용하여 상기 단계 3)에서 제조된 면역글로불린-완충액 혼합물을 거르는 동시에 희석액을 공급하여 면역글로불린-완충액 혼합물을 면역글로불린-희석액 혼합물로 변환시키는 변환단계를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법을 제공한다.
[유리한효과]
본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 구조가 단순하여 간단한 조작으로 짧은 시간 안에 자가 혈액 및/또는 소수의 특정 포유동물로부터 얻어진 소량의 혈액으로부터 질병 치료를 목적으로 비경구적 투여(주사 포함)가 가능한 무균, 무독 상태의 치료용 면역글로불린 제제를 용이하게 제조할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 일 양태를 나타내는 구성도,
도 2 내지 도 5는 도 1에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도,
도 6은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 다른 양태를 나타내는 구성도,
도 7은 도 6의 A-A선 단면도,
도 8 내지 도 12는 도 6에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도,
도 13은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도,
도 14는 도 13에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도,
도 15는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도,
도 16은 도 15에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성간 전기적 연결관계를 개략적으로 나타낸 구성도,
도 17 및 도 18은 도 15에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도,
도 19는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도,
도 20은 도 19에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성간 전기적 연결관계를 개략적으로 나타낸 구성도,
도 21 내지 도 24는 도 19에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도이다.
도 25는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제의 아크릴아마이드젤 전기영동 분석 및 단백질 염색결과를 나타내는 도,
도 26은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제의 세포독성을 나타내는 도,
도 27은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제의 아크릴아마이드젤 전기영동 분석 및 단백질 염색결과를 나타내는 도이다.
<도면의 주요부분에 대한 부호의 설명>
100 : 본체 200 : 면역글로불린흡착필터
300 : 세척액공급부 400 : 완충액공급부
500 : 제1유체흐름조정부 600 : 세척액수집부
700 : 면역글로불린혼합액수집부 800 : 혈액수집부
900 : 제2유체흐름조정부 1000 : 공압공급부
1100 : 혈액필터 1200 : 제어부
1300 : 입력부 1400 : 디스플레이부
1500 : 면역글로불린흡입부 1600 : 제3유체흐름조정부
1700 : 잔여액수집부 1800 : 제4유체흐름조정부
1900 : 온도감지센서 2000 : 가열수단
2100 : 면역글로불린희석액공급부 BP: 혈액공급부
한 가지 관점에서, 본 발명은 내부에 공간이 형성된 본체; 상기 본체의 내부 일측에 구비되어 본체로 유입되는 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 면역글로불린흡착필터; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 세척액을 공급하는 세척액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 완충액을 공급하는 완충액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 혈액을 공급하는 혈액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 세척액을 수용하는 세척액수집부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 면역글로불린혼합액을 수용하는 면역글로불린혼합액수집부; 및 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 혈액을 수용하는 혈액수집부를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 제공한다.
다른 관점에서, 본 발명은 1) 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 혈액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 흡착단계; 2) 상기 흡착단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 세척액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 흡착된 물질 외의 다른 물질을 세척하여 제거시키는 세척단계; 3) 상기 세척단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 완충액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 면역글로불린-완충액 혼합물을 제조하는 단계; 및 4) 완충액 또는 희석액은 통과시키지만 면역글로불린은 통과시키지 않고 거를 수 있는 필터를 포함하는 면역글로불린수집부를 이용하여 상기 단계 3)에서 제조된 면역글로불린-완충액 혼합물을 거르는 동시에 희석액을 공급하여 면역글로불린-완충액 혼합물을 면역글로불린-희석액 혼합물로 변환시키는 변환단계를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 혈액으로부터 면역글로불린을 분리하여 치료용 면역글로불린 제제를 오염되지 않는 무균 및/또는 무독성 상태로 제조하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 면역글로불린 제제 제조장치라면 특별히 한정되지 않는다.
특히, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 자가 혈액 및/또는 소수의 특정 포유동물로부터 얻어진 혈액, 예를 들면 소량의 혈액으로부터 면역글로불린을 분리하여 질환 치료용 주사제의 형태로 제조할 수 있다.
하지만, 상기 치료용 면역글로불린 제제는 주사 경로(피하주사, 근육주사, 정맥주사 등)로 투여되는 제제로 한정되는 것이 아니라, 이 외에도 포유동물에 질병의 예방 및/또는 치료 목적으로 경구 및/또는 비경구투여 경로(경피적 투여, 기도내, 복강내, 안구내, 등)로 투여될 수 있다.
이때, 상기 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 외부의 오염원, 예를 들면 세균이나 바이러스 등이 제조장치의 내부로 유입될 수 없도록 전체 구성이 외부와 격리되도록 밀폐형 구조를 갖는다.
본 발명에 따른 면역글로불린은 포유동물의 혈액 및/또는 면역글로불린 생산 세포의 배양액으로부터 면역글로불린을 분리 정제하기 위해 사용되는 통상적인 방법 예를 들면, 침전법, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등을 이용하여 분리된 IgG, IgA, IgM, IgD,및 IgE를 포함하는 전체 면역글로불린일 수 있다.
또한 본 발명에 따른 면역글로불린은 포유동물의 혈액으로부터 분리된 면역글로불린 G(IgG)일 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제는 알레르기질환, 자가면역질환, 감염성 질환 및/또는 악성 종양성 질환 등의 다양한 질환들을 예방 및/또는 치료하기 위해 사용된다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 대하여 상세히 설명하면 다음과 같다. 그러나 하기의 설명은 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로 하기 설명에 의해 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
도 1은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 일 양태를 나타내는 구성도, 도 2 내지 도 5는 도 1에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도, 도 6은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 다른 양태를 나타내는 구성도, 도 7은 도 6의 A-A선 단면도, 도 8 내지 도 12는 도 6에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도, 도 13은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도, 도 14는 도 13에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도, 도 15는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도, 도 16은 도 15에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성간 전기적 연결관계를 개략적으로 나타낸 구성도, 도 17 및 도 18은 도 15에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도, 도 19는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도, 도 20은 도 15에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성간 전기적 연결관계를 개략적으로 나타낸 구성도, 도 21 내지 도 24는 도 19에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타내는 도면으로서 함께 설명한다.
도 1 내지 도 24에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 내부에 공간이 형성된 본체(100); 상기 본체(100)의 내부 일측에 구비되어 본체(100)로 유입되는 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 면역글로불린흡착필터(200); 상기 본체(100)의 일측에 연결설치되어 본체(100) 내부로 세척액을 공급하는 세척액공급부(300); 상기 본체(100)의 일측에 연결설치되어 본체(100) 내부로 완충액을 공급하는 완충액공급부(400); 상기 본체(100)의 일측에 연결설치되어 본체(100) 내부로 혈액을 공급하는 혈액공급부(BP); 상기 본체(100)의 일측에 연결설치되어 본체(100)로부터 배출되는 세척액을 수용하는 세척액수집부(600); 상기 본체(100)의 일측에 연결설치되어 본체(100)로부터 배출되는 면역글로불린혼합액을 수용하는 면역글로불린혼합액수집부(700); 상기 본체(100)의 일측에 연결설치되어 본체(100)로부터 배출되는 혈액을 수용하는 혈액수집부(800)를 포함한다.
본 발명에 따른 본체(100)는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치로 유입되는 혈액으로부터 면역글로불린을 분리하기 위한 공간을 제공한다.
상기 본체(100)는 면역글로불린을 분리하여 추출하기 위한 공간을 제공하는 것이라면 어떠한 형태, 예를 들면 원통형, 직육면체 등의 형태로 이루어져도 무방하다.
또한, 상기 본체(100)는 외부로부터 세균이나 바이러스 등의 오염물질이 유입되지 않도록 밀폐된 형태를 갖는다.
본 발명에 따른 면역글로불린흡착필터(200)는 본체(100)의 내부 일측에 구비되어 본체(100)로 유입되는 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 면역글로불린흡착필터(200)라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하다.
상기 면역글로불린흡착필터(200)는 혈액, 혈장 및/또는 혈청에 존재하는 면역글로불린이 흡착되도록 하는 흡착물질(ligand)을 포함한다. 이때, 상기 혈액, 혈장 및/또는 혈청은 본 발명의 용이한 설명을 위해 혈액으로 통칭될 수 있다.
특정적으로, 상기 면역글로불린흡착필터(200)는 고체형의 매트릭스(solid-phase matrix)로 구성될 수 있다.
상기 면역글로불린을 흡착하는 흡착물질은 흡착 크로마토그래피(affinity chromatography)법으로 면역글로불린을 분리하기 위해 통상적으로 사용되는 면역글로불린 흡착물질, 예를 들면 프로테인 A, 프로테인 G, 프로테인 L, 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite), 항-면역글로불린 항체 단밸질, 항원-특이 면역글로불린이 흡착되거나 반응할 수 있는 항원-단백질, 알레르겐 또는 이들 중 선택된 하나 이상일 수 있다.
또한, 상기 흡착물질은 이온교환 크로마토그래피(ion-exchange chromatography)법으로 면역글로불린을 분리하기 위해 사용되는 이온교환수지, 예를 들면 양이온 수지, 음이온 수지, 디에틸아미노에틸(diethylaminoethyl; DEAE), 디에틸아민(diethylamine), 쿼터러니 암모늄(quaternary amonium) 또는 이들 중에서 선택된 적어도 하나 이상일 수 있다.
일 양태로서, 상기 흡착물질로 사용되는 이온교환수지 등은 고체형의 매트릭스(solid-phase matrix)에 부착된 형태로 면역글로불린흡착필터(200)를 구성할 수 있다.
이때, 상기 고체형의 매트릭스는 아가로스(agarose), 셀룰로오스(cellulose), 아크릴아마이드 등의 성분으로 이루어진 멤브레인(membrane) 또는 비드(bead) 또는 글래스(glass) 등의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 세척액공급부(300)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 상단 일측에 연결설치되어 본체(100) 내부로 세척액을 공급하여 면역글로불린흡착필터(200)를 포함하는 본체(100) 내부를 세척하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 세척액공급부(300)라면 특별히 한정되지 않는다.
이때, 상기 세척액공급부(300)로부터 공급되는 세척액은 본체(100)의 내부를 세척할 수 있는 당업계에서 통상적으로 사용되는 세척액을 사용한다.
특정 양태로서, 상기 세척액은 약 1.5M의 글리신-수산화나트륨(glycine-NaOH)과 3M의 염화나트륨(NaCl)이 혼합된 액으로서, pH가 9.0을 이루는 것이거나, 100mM Tris 완충액으로서, pH가 8.0인 것일 수 있다.
본 발명에 따른 완충액공급부(400)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 상단 일측에 연결설치되어 본체(100) 내부로 완충액을 공급함으로써, 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 분리하기 위한 것이다.
이때, 상기 완충액은 본체(100)의 내부에 구비된 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 용출시킬 수 있는 것이라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하다.
이러한 일례로서, 상기 완충액은 pH가 5.5인 0.1M의 구연산나트륨(sodium citrate) 이거나, pH가 3.0인 100mM 글리신(glyine)인 것 또는 1M 염화나트륨(NaCl) in 25 mM Tris/HCl pH 8.0 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 혈액공급부(BP)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 상단 일측에 연결설치되어 본체(100) 내부로 혈액을 공급하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 통상적인 혈액공급부라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하다.
이때, 상기 혈액공급부(BP)로 공급되는 혈액은 혈청 또는 혈장을 포함할 수 있으며, 혈액세포, 세균, 바이러스 또는 응집된 단백질 등의 고형물질들이 제거된 것이 좋다.
특정 양태로서, 본 발명에 따른 혈액공급부(BP)는 혈액을 채취한 주사기일 수 있는바, 이러한 경우, 혈액이 포함된 주사기의 말단으로부터 주사바늘 부위를 제거하고 주사기 본체의 말단을 직접 본체(100)에 연결하거나 별도의 다른 공급수단을 매개로 하여 공급하도록 구성할 수도 있다.
이때, 상기 혈액공급부(BP)가 주사기 형태로 본체(100)와 연결설치될 경우, 상기 본체(100)의 일측에는 본체(100) 내부가 외부의 오염원으로부터 감염되지 않도록, 주사기인 혈액공급부(BP)가 연결설치되는 본체(100)의 일측에 커버(130)가 구비되는 것이 좋다.
여기서, 상기 커버(130)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 본체(100)의 개구인 공급부(120)에 체결되는 체결부(131) 및 상기 본체(100)의 개구를 밀봉하는 폐쇄부(132)를 구비시켜, 상기 커버(130)가 본체(100)에 연결설치될 수 있도록 한다.
이때, 상기 공급부(120)는 본체(100)의 상단 일측에 개구되도록 형성된다.
한편, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 본체(100)와 세척액공급부(300), 완충액공급부(400) 및 혈액공급부(BP) 사이에 유체의 흐름 경로를 조절하는 수단이 구비될 수 있다.
이러한 일 양태로서, 본 발명에 따른 본체(100)와 상기 본체(100)에 연결설치되는 세척액공급부(300), 완충액공급부(400) 및 혈액공급부(BP) 사이에는 유체의 흐름방향을 조절할 수 있는 수단으로서 제1유체흐름조정부(500)가 구비되어 상기 본체(100)로 공급되는 세척액, 완충액 및/또는 혈액의 흐름방향을 조절할 수 있다.
여기서, 상기 제1유체흐름조정부(500)는 다수의 유체 이동경로에 연결설치되어 각 유체 이동경로를 통해 유입되는 유체, 예를 들면 세척액, 완충액 및/또는 혈액을 선택적으로 본체(100)로 이동시킬 수 있도록 하는 것이라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하며, 예시적으로 4웨이 밸브(4way valve)를 사용할 수 있다.
다른 양태로서, 상기 제1유체흐름조정부(500)는 세척액을 공급하는 세척액공급부(300) 및 완충액을 공급하는 완충액공급부(400)와 본체(100) 사이에 구비되어 상기 본체(100)로 공급되는 세척액 및/또는 완충액의 흐름을 조절할 수도 있다.
이러한 경우, 상기 제1유체흐름조정부(500)는 3웨이 밸브(3way valve)를 사용하는 것이 좋다.
또 다른 양태로서, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 본체(100)의 일측, 예를 들면 상부 일측에 본체(100) 내부로 압축된 공기를 공급할 수 있는 공압공급부(1000)를 더 포함할 수 있는바, 이러한 경우 상기 제1유체흐름조정부(500)는 세척액을 공급하는 세척액공급부(300), 완충액을 공급하는 완충액공급부(400) 및 압축된 공기, 즉 공압을 공급하는 공압공급부(1000)와 본체(100) 사이에 구비되어 상기 본체(100)로 공급되는 세척액, 완충액 및/또는 공압, 즉 압축된 공기의 흐름을 조절할 수도 있다.
이러한 경우, 상기 제1유체흐름조정부(500)는 4웨이 밸브를 사용하는 것이 좋다.
또한, 상기 세척액공급부(300), 완충액공급부(400) 및/또는 공압공급부(1000)로부터 공급되는 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기는 제1흐름조정부(500)를 통과하여 본체(100)의 상부 측면을 통해 본체(100) 내부로 유입될 수 있다.
상기 본체(100)의 상부 측면으로 공급된 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기는 본체(100)의 상부면 전체에 걸쳐 분사될 수 있도록 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기가 이동하는 이동라인(112)이 본체(100) 상부면에 방사형으로 분포되도록 형성된다.
이때, 상기 이동라인(112)은 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기가 수평으로 이동할 수 있는 경로를 제공하는 수평이동라인(112a) 및 수평으로 이동한 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기가 수직으로 이동하여 본체(100) 내부로 배출되도록 하는 수직이동라인(112b)을 포함할 수 있다.
상기 수평이동라인(112a)은 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기를 공급받는 메인라인(112a1)과 세척액, 완충액 및/또는 압축된 공기를 분기하는 분기라인(112a2)을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 세척액수집부(600)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 하단 일측에 연결설치되어 본체(100)로부터 배출되는 세척액을 수용하기 위한 것이다.
본 발명에 따른 면역글로불린혼합액수집부(700)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 하단 일측에 연결설치되어 본체(100)로부터 배출되는 면역글로불린혼합액, 즉 완충액에 의해 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린이 용출된 상태인 면역글로불린-완충액 혼합물을 수용하기 위한 것이다.
이때, 상기 완충액에 의해서 면역글로불린혼합액수집부(700)로 용출된 면역글로불린과 완충액의 혼합액은 질병의 예방 및/또는 치료를 위해서 포유동물에게 투여되는 치료용 면역글로불린 제제로 사용될 수 있으며, 사용자의 선택에 따라 농축하거나 희석하여 사용할 수도 있다.
또한, 상기 치료용 면역글로불린 제제는 추가로 가열처리하여 멸균처리를 거친 후 사용할 수도 있다.
본 발명에 따른 혈액수집부(800)는 본체(100)의 일측, 예를 들면 하단 일측에 연결설치되어 본체(100)로부터 배출되는 혈액, 예를 들면 면역글로불린을 분리하기 위해 본체(100), 특정적으로 본체(100)에 구비된 면역글로불린흡착필터(200)를 통과한 혈액을 수용하기 위한 것이다.
한편, 본 발명에 따른 본체(100)와 상기 본체(100)에 연결설치되는 세척액수집부(600), 면역글로불린혼합액수집부(700) 및 혈액수집부(800) 사이에는 유체의 흐름방향을 조절할 수 있는 수단으로서 제2유체흐름조정부(900)가 구비되어 상기 본체(100)로부터 배출되는 세척액, 면역글로불린혼합액 및/또는 혈액의 흐름방향을 조절할 수 있다.
여기서, 상기 제2유체흐름조정부(900)는 다수의 유체 이동경로에 연결설치되어 각 유체 이동경로를 통해 유입되는 유체, 예를 들면 세척액, 면역글로불린혼합액 및/또는 혈액을 선택적으로 세척액수집부(600), 면역글로불린혼합액수집부(700) 및/또는 혈액수집부(800)로 이동시킬 수 있도록 하는 것이라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하고, 이러한 일례로서 4웨이 밸브를 사용할 수 있다.
한편, 전술한 제1유체흐름조정부(500) 및 제2유체흐름조정부(900)는 별도의 제어부(1200)에 연결설치되어 세척액, 완충액, 혈액, 면역글로불린혼합액 등의 흐름을 자동으로 제어할 수도 있다.
또한, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 면역글로불린혼합액수집부(700)에 연결설치되어 면역글로불린혼합액을 거르는 필터, 예를 들면 최종필터(720)를 더 포함할 수 있다.
여기서, 상기 최종필터(720)는 면역글로불린 단백질은 통과시키지 않고 거를 수 있으나, 완충액이나 희석액 등은 통과되는 필터이다.
또한, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 면역글로불린혼합액수집부(700)에 면역글로불린희석액을 공급하는 면역글로불린희석액공급부(2100)를 연결설치하여 면역글로불린을 포함하는 완충액, 즉 면역글로불린혼합액(면역글로불린-완충액)을 포유동물에게 직접 주사경로를 포함한 비경구경로로 투여할 경우 발생할 수 있는 완충액으로 인한 독성반응의 발생 가능성을 최소화시킬 수 있도록 완충액을 희석액으로 교환하여 포유동물에게 투여시 독성반응의 발생가능성이 적은 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수도 있다.
또한, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 면역글로불린혼합액수집부(700)에 연결설치되어 면역글로불린혼합액을 가열하여 살균하는 가열수단(2000)이 더 구비될 수도 있다.
여기서, 상기 최종필터(720), 면역글로불린희석액공급부(2100) 및/또는 가열수단(2000)은 치료용 면역글로불린 제제 제조장치에 선택적으로 연결설치되어 독립적으로 치료용 면역글로불린 제제를 농축하거나, 면역글로불린-완충액을 면역글로불린-희석액으로 교환하거나 면역글로불린 제제를 멸균할 수도 있지만, 상기 구성요소들을 서로 조합하여 상기 면역글로불린-완충액을 면역글로불린-희석액으로 교환하는 동시에 농축시켜 최종적인 치료용 면역글로불린 제제를 제조하거나, 교환 및 농축이 종료된 치료용 면역글로불린 제제를 가열하여 살균할 수도 있다.
한편, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 전술한 혈액공급부(BP), 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 세척액수집부(600), 혈액수집부(800), 면역글로불린혼합액수집부(700)는 모두 피스톤이 구비된 멸균 상태의 주사기 형태로 구성되고, 본체(100)를 기준으로 혈액공급부(BP), 세척액공급부(300), 완충액공급부(400)는 제1유체흐름조정부(500)와 연결되고, 세척액수집부(600), 혈액수집부(800), 면역글로불린혼합액수집부(700)는 제2유체흐름조정부(900)와 연결되어 제1유체흐름조정부(500) 및 제2유체흐름조정부(900)를 수동 조작하여 액상의 용액을 주사기에 포함된 피슨톤을 이용하여, 음압 및 양압을 통해 흡입하거나 배출할 수 있는 수동 작동되는 형태로 구성될 수도 있다.
한편, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성요소 중에서 세척액공급부(300)를 구성하는 세척액을 생리식염수 또는 증류수로 사용할 경우, 면역글로불린혼합액에 면역글로불린희석액을 공급하는 면역글로불린희석액공급부(2100)를 치료용 면역글로불린 제제 제조장치에 포함시키지 않을 수 있다.
또한, 상기 세척액수집부(600)와 혈액수집부(800)를 하나의 수집부(미도시)로 통합하여 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 단순화시킬 수도 있다.
또한, 상기 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 외부로부터 오염 없이 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있도록 전체 구성이 외부와 격리된 밀폐형으로 구성되는 것이 바람직하다.
이와 같은 구성을 갖는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 이용한 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법을 설명하면 다음과 같다.
먼저, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법은 면역글로불린흡착필터(200)가 구비된 본체(100)에 혈액을 공급하여 면역글로불린을 면역글로불린흡착필터(200)로 흡착시킨 후 세척액공급부(300)의 세척액을 본체(100)로 공급하여 세척한 후 완충액공급부(400)의 완충액을 본체(100)로 공급하여 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 면역글로불린혼합액, 즉 면역글로불린-완충액 혼합액을 제조하는 것을 포함한다.
이러한 일례로서, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법은 1) 면역글로불린흡착필터(200)가 구비된 본체(100) 내부로 혈액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터(200)에 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 흡착단계; 2) 상기 흡착단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터(200)가 구비된 본체(100) 내부로 세척액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 물질 외의 다른 물질을 세척하여 제거시키는 세척단계; 3) 상기 세척단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터(200)가 구비된 본체(100) 내부로 완충액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 면역글로불린-완충액 혼합물을 제조하는 단계; 및 4) 완충액 또는 희석액은 통과시키지만 면역글로불린은 통과시키지 않고 거를 수 있는 필터(최종필터)를 포함하는 면역글로불린수집부(미도시)를 이용하여 상기 단계 3)에서 제조된 면역글로불린-완충액 혼합물을 거르는 동시에 희석액을 공급하여 면역글로불린-완충액 혼합물을 면역글로불린-희석액 혼합물로 변환시키는 변환단계를 포함할 수 있다.
이때, 상기 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법은 외부로부터 오염 없이 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있도록 전체 구성이 외부와 격리된 밀폐형으로 이루어지는 것이 바람직하다.
또한, 상기 단계 4)의 후공정으로 단계 4)가 종료된 면역글로불린-희석액 혼합물을 농축시키는 농축단계를 더 포함할 수 있다. 여기서, 상기 농축단계가 종료되어 농축된 면역글로불린-희석액 혼합물은 가열하여 멸균처리될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법은 상기 단계 4)의 후공정으로 단계 4)가 종료된 면역글로불린-희석액 혼합물을 가열하여 멸균처리할 수도 있다.
이하에서 실시양태를 통하여 본 발명을 구체적으로 설명하기로 한다. 그러나 하기의 실시양태는 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로 이들 실시양태에 의해 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
실시양태 1
도 1은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 일 양태를 나타내는 구성도로서, 도 1를 참조하여 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 설명하면 다음과 같다.
도 1에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 혈액, 세척액 및/또는 완충액을 공급받는 본체(100), 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착하는 면역글로불린흡착필터(200), 본체(100)의 내면과 면역글로불린흡착필터(200)를 세척하기 위한 세척액을 공급하는 세척액공급부(300), 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 수거할 수 있게 하기 위한 완충액을 공급하는 완충액공급부(400), 면역글로불린을 포함하는 혈액을 공급하는 혈액공급부(BP), 혈액, 세척액, 및/또는 완충액의 흐름 방향을 전환하는 제1유체흐름조정부(500), 세척액을 수용하는 세척액수집부(600), 면역글로불린을 용출시킨 완충액을 수용하는 면역글로불린혼합액수집부(700), 혈액을 수용하는 혈액수집부(800) 및 본체(100)로부터 배출되는 세척액, 완충액, 예를 들면 면역글로불린을 포함하는 완충액 및/또는 혈액의 흐름 방향을 전환하는 제2유체흐름조정부(900)를 포함한다.
이때, 상기 본체(100)는 혈액이 수용되는 면역글로불린흡착필터수용부(110), 세척액, 완충액 및/또는 혈액을 공급받는 공급부(120), 세척액, 완충액 및/또는 혈액이 배출되는 배출부(150)로 구성될 수 있다.
상기 면역글로불린흡착필터수용부(110)는 상부가 공급부(120)와 연통되고, 하부가 배출부(150)와 연통되는 수용공간(111)을 갖추고서, 공급부(120)로부터 유입되는 세척액, 완충액 및/또는 혈액을 배출부(150)로 배출한다.
상기 공급부(120)는 본체(100)의 상부에 형성되어, 세척액공급부(300), 완충액공급부(400) 및/또는 혈액공급부(BP)로부터 공급되는 세척액, 완충액 및/또는 혈액이 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 이동되도록 한다. 이때, 공급부(120)는 내부에 상하로 관통된 관통홀이 형성되어, 관통홀의 상부는 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 혈액공급부(BP)와 연통되고 하부는 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다. 그리고 공급부(120)의 하단부에는 노즐(N)이 설치되어 공급부(120)로부터 유입되는 세척액, 완충액 및/또는 혈액이 넓은 분사영역을 가지면서 분사되도록 한다.
상기 세척액공급부(300)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)로 세척액을 공급한다. 이때 세척액공급부(300)는 입력라인(IL)을 매개로 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다.
상기 입력라인(IL)은 본체(100)의 공급부(120)와 연통되는 메인라인(IL1)과, 메인라인(IL1)으로부터 분기되는 분기라인(IL2)을 구비한다. 이때 분기라인(IL2)은 세척액공급부(300), 혈액공급부(BP) 또는 완충액공급부(400)와 각각 연통되는 제1 내지 제3분기라인(IL2a,IL2b,IL2c))으로 이루어진다.
상기 완충액공급부(400)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)에 완충액을 공급한다. 이때 완충액공급부(400)는 입력라인(IL)을 매개로 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다.
상기 혈액공급부(BP)는 본체(100)에 설치되며, 본체(100)에 혈액세포, 세균이나 바이러스, 응집된 단백질 등의 고형물질들이 제거된 혈액을 공급한다. 이때, 혈액공급부(BP)는 입력라인(IL)을 매개로 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다.
또한, 상기 혈액공급부(BP)는 단순히 혈액, 혈청, 또는 혈장을 채취한 주사기로 사용될 수 있다. 즉 혈액이 포함된 주사기의 말단으로 부터 주사바늘 부위를 제거하고 주사기 본체의 끝단을 바로 혈액공급부(120)에 연결하여 본체(100)에 주입하거나 또는 입력라인(IL)을 매개로 제1유체흐름조정부(500)를 통해서 본체(100)에 혈액을 주입할 수 있을 수도 있다.
상기 제1유체흐름조정부(500)는 입력라인(IL)의 메인라인(IL1)과 제1 내지 제3분기라인(IL2a,IL2b,IL2c)의 교차점에 설치되어, 각각 세척액, 완충액 및/또는 혈액의 흐름 방향을 전환한다. 본 실시양태에서는 제1유체흐름조정부(500)로서 4웨이 밸브(4way valve)를 적용하지만, 세척액, 혈액 및/또는 완충액의 흐름 방향을 전환할 수 있는 것이면 다양하게 변형될 수 있다.
상기 세척액수집부(600)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)로부터 배출되는 세척액을 수용한다. 이때 세척액수집부(600)는 배출라인(DL)을 매개로 본체(100)와 연통된다. 본 실시양태에서는 세척액수집부(600)를 본체(100)에 설치하였지만, 본체(100)와 별도로 설치되는 등 설치위치를 필요에 따라 다양하게 할 수 있다.
상기 배출라인(DL)은 본체(100)의 배출부(150)와 연통되는 메인라인(DL1)과, 메인라인(DL1)으로부터 분기되는 분기라인(DL2)을 구비한다. 이때, 분기라인(DL2)은 세척액수집부(600), 혈액수집부(800) 및/또는 면역글로불린혼합액수집부(700)와 각각 연통되는 제1~3분기라인(DL2a, DL2b,DL2c)으로 이루어진다.
상기 면역글로불린혼합액수집부(700)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)로부터 배출되는 면역글로불린과 완충액이 혼합된 면역글로불린-완충액혼합액을 수용한다. 이때 면역글로불린혼합액수집부(700)는 배출라인(DL)을 매개로 본체(100)와 연통된다. 본 실시양태에서는 면역글로불린혼합액수집부(700)를 본체(100)에 설치하였지만, 본체(100)와 별도로 설치되는 등 설치위치를 필요에 따라 다양하게 선택할 수 있다.
상기 혈액수집부(800)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)로부터의 배출되는 혈액을 수용한다. 이때, 혈액수집부(800)는 배출라인(DL)을 매개로 본체(100)와 연통된다. 본 실시양태에서는 혈액수집부(800)를 본체(100)에 설치하였지만, 본체(100)와 별도로 설치되는 등 설치위치를 필요에 따라 다양하게 선택할 수 있다.
상기 제2유체흐름조정부(900)는 배출라인(DL)의 메인라인(DL1)과 제1~3분기라인(DL2a,DL2b,DL2c)의 교차점에 설치되어, 필요에 따라 세척액, 면역글로불린혼합액 및/또는 혈액의 흐름 방향을 전환한다. 본 실시양태에서는 제2유체흐름조정부(900)에 4웨이 밸브를 적용하지만, 세척액, 면역글로불린혼합액 및/또는 혈액의 흐름 방향을 전환할 수 있는 것이면 다양하게 변형될 수 있다.
도 2 내지 도 5는 전술한 구성을 갖는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타낸다.
도 2 내지 도 5에 도시된 바와 같이, 본체(100)의 제1유체흐름조정부(500)를 작동시켜, 입력라인(IL)의 메인라인(IL1) 및 제1분기라인(IL2a)을 개방하고 입력라인(IL)의 제2,3분기라인(IL2b,IL2c)를 폐쇄하는 동시에 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜 배출라인(DL)의 메인라인(DL1) 및 제1분기라인(DL2a)을 개방하고 배출라인(DL)의 제2,3분기라인(DL2b,DL2c)을 폐쇄한다.
그 다음, 세척액공급부(300)를 작동시켜 세척액, 예를 들면 약 100ml의 세척액을 분사하면, 세척액은 입력라인(IL)을 통과하여, 도 2와 같이 노즐(N)을 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 분사된다.
이때, 상기 세척액은 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110) 및 면역글로불린흡착필터(200)를 세척하면서 하방으로 이동하고, 본체(100)의 배출부(150)를 통해 배출되어 세척액수집부(600)에 수용된다.
그 다음, 도 3에 도시된 바와 같이 세척액공급부(300)의 작동을 중단시키고, 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 배출라인(DL)의 메인라인(DL1) 및 제2분기라인(DL2b)을 개방하고, 배출라인(DL)의 제1,3분기라인(DL2a,DL2c)을 폐쇄한다.
그리고 제1유체흐름조정부(500)를 작동하여, 입력라인(IL)의 메인라인(IL1) 및 제2분기라인(IL2b)을 개방하고, 입력라인(IL)의 제1,3분기라인(IL2a,IL2c)을 폐쇄한다.
이후 혈액공급부(BP)를 작동시켜, 도 3과 같이 혈액공급부(BP)의 혈액을 입력라인(IL)을 통해 본체(100)에 구비된 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 수용공간(111)으로 공급한다.
이때, 상기 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 공급된 혈액은 압력에 의해 하방으로 이동하면서 면역글로불린흡착필터(200)를 통과하며 혈액 내에 존재하는 면역글로불린이 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착되고, 나머지 혈액은 본체(100)의 배출부(150)를 통해 혈액수집부(800)에 수집된다.
그 다음, 상기 제1유체흐름조정부(500)를 작동시켜, 입력라인(IL)의 메인라인(IL1) 및 제1분기라인(IL2a)을 개방하고, 제2,3분기라인(IL2b,IL2c)를 페쇄하는 동시에 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 배출라인(DL)의 제1분기라인(DL2a)을 개방하고 제2,3분기라인(DL2b,DL2c)을 폐쇄한다.
그 다음, 세척액공급부(300)를 다시 작동시켜 세척액, 예를 들면 약 100ml의 세척액을 분사하면, 분사된 세척액이 본체(100)의 공급부(120)를 경유하여 도 3과 같이 노즐(N)을 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 분사된다.
이때, 상기 세척액은 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110) 및 면역글로불린흡착필터(200)를 세척하면서 면역글로불린흡착필터에 부착된 면역글로불린 이외의 나머지 혈액 성분들을 하방으로 이동시키고, 본체(100)의 배출부(150)를 통해 배출되어 세척액수집부(600)로 수용된다.
그 다음, 도 4에 도시된 바와 같이, 제1유체흐름조정부(500)를 작동시켜, 입력라인(IL)의 제1,2분기라인(IL2a, IL2b)을 폐쇄하고, 입력라인(IL)의 메인라인(IL1) 및 제3분기라인(IL2c)를 개방하는 동시에 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 배출라인(DL)의 제3분기라인(DL2c)을 개방하고, 배출라인(DL)의 제1,2분기라인(DL2a,DL2b)을 폐쇄한다.
그 다음, 완충액공급부(400)를 작동시켜 완축액, 예를 들면 약 100ml의 완충액을 분사하면, 완충액은 입력라인(IL)의 제3분기라인(IL2c)을 통과하여, 도 4와 같이 노즐(N)을 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 분사된다.
이때, 상기 완충액은 도 5와 같이 면역글로불린흡착필터(200)와 접촉하여, 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 면역글로불린흡착필터(200)로부터 분리하고, 분리된 면역글로불린과 혼합되며 면역글로불린-완충액혼합액을 이루면서, 본체(100)의 배출부(150)를 통해 면역글로불린혼합액수집부(700)에 수용된다.
상기 면역글로불린혼합액수집부(700)에 수용된 면역글로불린혼합액은 질병의 예방 및/또는 치료를 위하여 포유동물에 직접 비경구경로(주사 경로 등)로 투여하기 위한 치료용 면역글로불린 제제로 사용될 수 있다.
한편, 전술한 실시양태에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 그 구조가 단순하고 소형화되어, 장치를 제조하기 위한 비용이 적고, 조작이 간단하여 자가 혈액으로부터 무오염 상태의 치료용 면역글로불린 제제를 용이하게 얻을 수 있다.
또한, 상기 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 알레르기질환, 자가면역질환, 만성염증성 질환 등과 같은 특이질환을 알고 있는 환자들에게 자신의 혈액 또는 다른 특정 포유동물 개체의 혈액으로부터 단 시간 내에 간편하게 치료용 면역글로불린 제제를 제조하는 것을 가능하도록 하여, 환자들의 질병을 효과적으로 호전시킬 수 있는 이전에는 존재하지 않았던 새롭고 간편한 의학적 치료 수단을 제공할 수 있다.
실시양태 2
도 6은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 다른 양태를 나타내는 구성도이고, 도 7은 도 6의 A-A선 단면도로서, 도 6 및 도 7을 참조하여 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 설명하면 다음과 같다.
도 6 및 도 7에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 면역글로불린흡착필터(200), 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 세척액수집부(600), 면역글로불린혼합액수집부(700), 혈액수집부(800), 제2유체흐름조정부(900)를 포함하는 것은 실시양태 1과 동일하지만, 본체(100)로 제공되는 혈액공급 방법 및 세척액과 완충액의 분사영역을 확장하기 위해 일부 구조를 변경하였다.
도 6에 나타난 바와 같이, 상기 본체(100)는 혈액이 수용되는 면역글로불린흡착필터수용부(110), 혈액을 공급받는 공급부(120), 공급부(120)를 개폐하는 커버(130), 세척액 및/또는 완충액을 공급받는 연결부(140), 세척액, 완충액 및/또는 혈액이 배출되는 배출부(150)를 구비한다.
상기 면역글로불린흡착필터수용부(110)는 혈액이 수용되는 수용공간(111), 세척액 및/또는 완충액이 이동하는 이동라인(112)이 구비되어 있는 원통형상으로 구성된다.
상기 수용공간(111)은 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 내부에 원통 형상으로 형성된다.
상기 이동라인(112)은 세척액 및/또는 완충액을 공급받는 수평이동라인(112a)과, 세척액 및 완충액을 수용공간(111)로 배출하는 수직이동라인(112b)을 포함한다.
상기 수평이동라인(112a)은 세척액 및/또는 완충액을 공급받는 메인라인(112a1)과, 세척액 및/또는 완충액을 분기하는 분기라인(112a2)을 포함한다.
상기 메인라인(112a1)은 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 상부에 형성되며, 일단이 연결부(140)와 연통되고 타단이 분기라인(112a2)과 연통된다. 본 실시양태에서는 메인라인(112a1)을 하나만, 형성하였지만 필요에 따라 다수개를 형성하여, 세척액 및/또는 완충액이 신속하게 본체(100) 내부로 공급되도록 할 수도 있다.
도 7에 도시된 바와 같이, 상기 분기라인(112a2)은 동심원을 갖도록 다수의 원 형태로 배치되며, 동심원을 갖는 각각의 분기라인(112a2)이 메인라인(112a1)과 연통되도록 구성된다.
또한, 상기 수직이동라인(112b)은 일단이 분기라인(112a2)과 연통되고 타단이 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 수용공간(111)과 연통된다. 이때, 수직이동라인(112b)은 분기라인(112a2)의 길이방향을 따라 다수 개가 형성되어, 세척액 및/또는 완충액의 분사영역을 넓힌다. 또한, 수직이동라인(112b)의 타단에는 방향을 달리하는 다수의 노즐(N)이 구비되어 세척액 및/또는 완충액이 더욱 더 넓은 영역으로 분사되도록 한다.
상기 공급부(120)는 본체(100)의 상부에 형성되어, 외부로부터 공급되는 혈액이 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 이동되도록 한다. 이때 공급부(120)는 내부에 상하로 관통된 관통홀이 형성되어, 관통홀의 상부는 외부로 노출되고 하부는 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다.
상기 커버(130)는 체결부(131)와 폐쇄부(132)로 구성되어 공급부(120)를 개폐한다.
상기 체결부(131)는 커버(130)의 외면에 구비되며 공급부(120)와 착탈가능하게 나사산 결합될 수 있다. 이때 체결부(131)는 공급부(120)와 나사산 결합할 경우, 나사산으로부터 이탈될 수 있는 이물질이 공급부(120)를 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 유입되지 않도록 하기 위해 커버(130)의 외면에 형성되는 것이 좋다.
상기 폐쇄부(132)는 하방으로 돌출되며, 공급부(120)에 삽입되어, 공급부(120)를 폐쇄한다.
상기 연결부(140)는 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 상부 측면에 형성되며, 일단이 수평이동라인(112a)과 연통되고, 타단이 공급라인(PL)을 매개로 세척액공급부(300) 및 완충액공급부(400)와 연통된다.
상기 세척액공급부(300)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)로 세척액을 공급한다. 이때 세척액공급부(300)는 공급라인(PL)을 매개로 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다.
상기 공급라인(PL)은 본체(100)의 연결부(140)와 연통되는 메인라인(PL1)과, 메인라인(PL1)으로부터 분기되는 분기라인(PL2)을 구비한다. 이때, 분기라인(PL2)은 세척액공급부(300) 및/또는 완충액공급부(400)와 각각 연통되는 제1,2분기라인(PL2a, PL2b)으로 구성된다.
상기 완충액공급부(400)는 본체(100)에 설치되어 본체(100)에 완충액을 공급한다. 이때, 완충액공급부(400)는 공급라인(PL)을 매개로 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통된다.
상기 제1유체흐름조정부(500)는 공급라인(PL)의 메인라인(PL1)과 제1,2분기라인(PL2a,PL2b)의 교차점에 설치되어, 세척액 및/또는 완충액의 흐름 방향을 전환한다. 본 실시양태에서는 제1유체흐름조정부(500)로서 3웨이 밸브(3way valve)를 사용하는 것이 좋지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
도 8 내지 도 12는 전술한 구성을 갖는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타낸다.
도 8 내지 도 12에 도시된 바와 같이, 본체(100)의 제1유체흐름조정부(500)를 작동시켜, 공급라인(PL)의 메인라인(PL1) 및 제1분기라인(PL2a)을 개방하고, 제2분기라인(PL2b)를 폐쇄하는 동시에 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 배출라인(DL)의 메인라인(DL1) 및 제1분기라인(DL2a)을 개방하고, 제2,3분기라인(DL2b,DL2c)을 폐쇄한다.
그 다음, 세척액공급부(300)를 작동시켜 약 100ml의 세척액을 공급하면, 세척액은 공급라인(PL)을 통과하여, 본체(100)의 수평이동라인(112a)으로 이동하고, 수평이동라인(112a)을 통과한 세척액은 수직이동라인(112b)을 통과 한 후 도 8과 같이 노즐(N)을 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 분사된다.
이때, 상기 세척액은 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110) 및 면역글로불린흡착필터(200)를 세척하면서 하방으로 이동하고, 본체(100)의 배출부(150)를 통해 배출되어 세척액수집부(600)로 수용된다.
그 다음, 세척액공급부(300)의 작동을 중단시키고, 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜 배출라인(DL)의 메인라인(DL1) 및 제2분기라인(DL2b)을 개방하고 제1,3분기라인(DL2a,DL2c)을 폐쇄하고, 본체(100)의 커버(130)를 공급부(120)로부터 분리하여 공급부(120)를 개방한다.
그 다음, 혈장 및/또는 혈청을 포함하는 자가 혈액을 채취한 주사기(S)의 단부를 본체(100)의 공급부(120)에 삽입하여, 도 9와 같이 주사기(S)의 바늘이 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 상부에 배치되도록 한다.
여기서, 상기 주사기 본체(S)의 끝단 부위와 본체(100)의 공급부(120) 사이에 약 0.22 마이크로미터(micrometer) 이하의 크기를 갖는 다수의 공극(pore)을 구비한 시린지 필터(SF, syringe filter)를 구비시켜 혈액에 포함된 혈액세포, 세균이나 바이러스, 응집된 단백질 등의 고형물질들을 제거할 수 있도록 한다.
그 다음, 도 10에 도시된 바와 같이, 주사기(S)의 피스톤을 가압하여 고형물이 제거된 혈액이 시린지 필터(SF)를 통과하여 투여부(120)를 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 수용공간(111)으로 유입되면, 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 배출된 혈액은 압력에 의해 하방으로 이동하면서 면역글로불린흡착필터(200)를 통과한다.
이때, 상기 혈액은 면역글로불린흡착필터(200)를 통과하면서 혈액 내에 존재하는 면역글로불린이 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착되고, 나머지 혈액은 본체(100)의 배출부(150)로 배출되어 혈액수집부(800)로 수용되어 수집된다.
그 다음, 주사기의 작동을 중단하고, 커버(130)를 매개로 공급부(120)를 폐쇄한 후 제1유체흐름조정부(500)를 작동시켜, 공급라인(PL)의 메인라인(PL1) 및 제1분기라인(PL2a)을 개방하고, 제2분기라인(PL2b)를 페쇄하는 동시에, 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 배출라인(DL)의 메인라인(DL1) 및 제1분기라인(DL2a)을 개방하고, 제2,3분기라인(DL2b,DL2c)을 폐쇄한다.
그 다음, 세척액공급부(300)를 다시 작동시켜 세척액, 예를 들면 약 100ml의 세척액을 분사하면, 세척액은 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 이동라인(112)을 경유하여 도 8에 나타낸 바와 같이 노즐(N)을 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 분사된다.
이때, 상기 세척액은 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110) 및 면역글로불린흡착필터(200)를 세척하면서 면역글로불린흡착필터에 부착된 면역글로불린 이외의 나머지 혈액 성분들을 하방으로 이동시키고, 본체(100)의 배출부(150)를 통해 배출되어 세척액수집부(600)로 수용된다.
그 다음, 제1유체흐름조정부(500)를 작동시켜, 공급라인(PL)의 제1분기라인(PL2a)을 폐쇄하고, 공급라인(PL)의 제2분기라인(PL2b)을 개방하는 동시에 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 배출라인(DL)의 제3분기라인(DL2c)을 개방하고, 배출라인(DL)의 제1,2분기라인(DL2a,DL2b)을 폐쇄한다.
그 다음, 완충액공급부(400)를 작동시켜 완충액, 예를 들면 약 100ml의 완충액을 본체(100) 내부로 공급하면, 상기 완충액은 공급라인(PL)의 제2분기라인(PL2b)을 통과하여, 본체(100)의 수평이동라인(112a)으로 이동하고, 수평이동라인(112a)을 통과한 완충액은 수직이동라인(112b)을 통과한 뒤 도 11에 나타낸 바와 같이, 노즐(N)을 통해 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 분사된다.
이때, 상기 완충액은 도 12와 같이 면역글로불린흡착필터(200)와 접촉하여, 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 면역글로불린흡착필터(200)로부터 분리하고, 분리된 면역글로불린과 혼합되어 면역글로불린-완충액혼합액을 이루면서, 본체(100)의 배출부(150)를 통과하여 면역글로불린혼합액수집부(700)에 수용된다.
상기 면역글로불린혼합액수집부(700)에 수용된 면역글로불린혼합액은 치료용 면역글로불린 제제로서 사용되어 포유동물에 질병의 치료 및/또는 예방을 위해서 경구 및/또는 비경구 경로로 투여되어 사용될 수 있다.
한편, 전술한 실시양태에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 세척액 및 완충액이 좀 더 넓은 분사영역을 가질 수 있고, 세척액이 본체(100) 및 면역글로불린흡착필터(200)의 세세한 곳까지 세척을 할 수 있어, 본체(100) 및 면역글로불린흡착필터(200)를 보다 청결하게 할 수 있으며, 완충액이 면역글로불린흡착필터(200)의 전면적에 고르게 분사될 수 있어, 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착된 면역글로불린을 효율적으로 분리할 수 있다.
또한, 상기 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 본체(100)의 공급부(120)를 개폐가능하게 함으로써, 주사기(S)를 통해 간단하게 혈액을 본체(100)에 투입할 수 있다.
실시양태 3
도 13은 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도로서, 도 13을 참조하여 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 설명하면 다음과 같다.
도 13에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 본체(100), 면역글로불린흡착필터(200), 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 세척액수집부(600), 면역글로불린혼합액수집부(700), 혈액수집부(800), 제2유체흐름조정부(900)를 포함하는 구성에서 실시양태 2와 동일하지만, 추가적으로 공압공급부(1000)가 본체(100)에 더 연결설치되도록 구성된다.
상기 공압공급부(1000)는 본체(100)에 연결설치되어 본체(100)에 기체, 바람직하게는 공기, 보다 바람직하게는 압축된 공기를 제공한다.
이때, 상기 공압공급부(1000)는 공급라인(PL)을 매개로 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)와 연통되며, 상기 공압공급부(1000)의 작동은 압축공기를 제공할 수 있는 것이라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하지만, 적어도 무균, 무독하여야 하므로 무균의 압축 질소를 통해 공압을 생성하는 것이 바람직하다.
상기 공급라인(PL)은 일단이 공압공급부(1000)와 연결되고 타단이 제1유체흐름조정부(500)와 연결되는 제3분기라인(PL2c)이 더 구비되어, 공압공급부(1000)와 연통된다.
또한 상기 제1유체흐름조정부(500)는 공급라인(PL)의 제1~3분기라인(PL2a,PL2b,PL2c)의 교차점에 설치되어, 유체의 흐름을 가변적으로 조정한다. 이때, 상기 제1유체흐름조정부(500)는 4웨이 밸브(4way valve)인 것이 좋다.
도 14는 전술한 구성을 갖는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타낸다.
도 14에 도시된 바와 같이, 주사기(S)로 면역글로불린흡착필터수용부(110)에 혈액을 공급하고, 본체(100)의 커버(130)로 공급부(120)를 폐쇄한 후 공압공급부(1000)를 작동시켜 면역글로불린흡착필터수용부(110)에 압축된 공기, 즉 공압을 제공한다.
따라서 상기 본체(100)의 면역글로불린흡착필터수용부(110)로 공급된 공압에 의해 상기 혈액이 빠른 속도로 면역글로불린흡착필터(200)를 통과하며, 면역글로불린이 면역글로불린흡착필터(200)에 신속하게 흡착되고, 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착되지는 않지만 점착력에 의해 면역글로불린흡착필터(200)에 붙어 있는 이물질이 면역글로불린흡착필터(200)를 강제로 통과하여 면역글로불린흡착필터(200)에 면역글로불린과 이물질이 혼재되지 않도록 한다.
그러므로 실시양태 3에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 공압공급부(1000)로 인하여 면역글로불린이 면역글로불린흡착필터(200)에 신속하게 흡착되고, 순수하게 면역글로불린만이 면역글로불린흡착필터(200)에 흡착될 수 있도록 한다.
한편, 본 실시양태 3에서는 공압공급부(1000)를 이용하여 혈액을 하방으로 가압하였지만, 혈액수집부(800)에 펌프와 같은 흡입장치를 설치하여, 흡입장치를 매개로 혈액을 혈액수집부(800)로 흡입함으로써, 공압공급부(1000)의 기능을 대신할 수도 있다.
또한, 상기 공압공급부(1000)는 실시양태 1의 제1유체흐름조정부(500)에 연결됨으로써, 실시양태 1에 실시양태 3에서 언급한 공압공급부(1000)의 효과를 제공할 수도 있다.
또한, 상기 공압공급부(1000)는 혈액이 본체(100)의 면역글로불린흡착필터(200)를 통과하며 배출되는 과정을 용이하게 할 뿐만 아니라, 본체(100)로 세척액 및/또는 완충액이 공급된 후 공압이 공급되어 상기 세척액 및/또는 완충액이 면역글로불린흡착필터(200)를 신속하고 정확하게 통과할 수 있도록 할 수도 있다.
실시양태 4
도 15는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도이고, 도 16은 도 15에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성간 전기적 연결관계를 개략적으로 나타낸 구성도로서, 도 15 및 도 16을 참조하여 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 설명하면 다음과 같다.
도 15 및 도 16에 도시된 바와 같이, 본 발명의 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 본체(100), 면역글로불린흡착필터(200), 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 세척액수집부(600), 면역글로불린혼합액수집부(700), 혈액수집부(800), 제2유체흐름조정부(900), 공압공급부(1000)를 포함하는 것에서 실시양태 3과 동일하다.
그리고 본 발명에 따른 실시양태 4는 혈액필터수용부(160), 혈액필터(1100), 제어부(1200), 입력부(1300), 디스플레이부(1400)가 더 구비되며, 새로운 구성요소의 추가에 따라 일부 구조가 변경된다.
상기 혈액필터수용부(160)는 내부에 원통형상의 공간이 형성되어, 면역글로불린흡착필터수용부(110)의 상부에 구비된다. 이때, 혈액필터수용부(160)가 구비됨으로써, 본체(100)의 공급부(120)가 혈액필터수용부(160)의 상부에 형성되어 혈액필터수용부(160)와 연통된다. 또한 실시양태 3의 공급부(120)의 위치에는 혈액필터수용부(160)와 면역글로불린흡착필터수용부(110)를 연통하는 연통부(170)가 형성된다.
상기 혈액필터(1100)는 혈액필터수용부(160)에 내설되어 수평으로 배치되며, 혈장 또는 혈청을 통과시키고 나머지 혈액세포나 혈액에 존재하는 고형 이물질들(세균이나 바이러스 등을 포함한 고형물질 들)은 거르는 것이다.
특히, 본 실시양태 4의 혈액필터(1100)는 전술한 실시양태 2에서 사용되는 주사기(S)의 시린지 필터 기능을 수행하는 것으로서, 혈액필터(1100)가 본체(100)에 설치됨에 따라 시린지 필터를 구비하지 않은 일반 주사기를 이용하여 본체(100)로 혈액을 공급할 수 있다. 이때, 혈액필터(1100)는 시린지 필터의 기능을 수행하기 위해 약 0.22 마이크로미터(micrometer)보다 작은 크기의 적절한 공극을 갖는다.
상기 제어부(1200)는 혈액필터수용부(160)에 연결설치되도록 구비되며, 상기 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 제2유체흐름조정부(900), 공압공급부(1000)와 서로 연결설치되어 각 구성요소의 작동을 제어한다. 이때, 상기 제어부(1200)는 본체(100)에 연결설치될 수도 있으며, 상기 본체(100) 또는 혈액필터수용부(160)와는 이격되도록 별도로 설치될 수도 있다.
상기 입력부(1300)는 제어부(1200)에 연결설치되어 제어신호를 입력함으로써, 제어부(1200)가 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 제2유체흐름조정부(900), 공압공급부(1000) 등의 작동을 제어할 수 있도록 한다.
상기 디스플레이부(1400)는 제어부(1200)의 제어에 따라 작동하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동 상태 또는 작동 명령 등의 정보를 표시하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 당업계에서 통상적으로 사용하는 디스플레이 장치라면 특별히 한정되지 않는다.
한편, 본 실시양태에서는 상기 입력부(1300)와 디스플레이부(1400)가 독립적으로 구비되지만, 터치스크린장치와 같이 입력부(1300)와 디스플레이부(1400)를 일체로 구성할 수도 있다.
도 17 및 도 18은 본 발명에 따른 실시양태 4의 작동을 나타낸 작동양태를 나타내는 도로서, 도 17 및 도 18을 참조하여 전술한 구성을 갖는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작용을 설명하면 다음과 같다.
도 17에 도시된 바와 같이, 주사기(S') 등을 이용하여 공급부(120)에 원액의 혈액을 공급하면, 혈액은 혈액필터수용부(140)에 수용되면서 하강하여, 혈장 또는 혈청은 혈액필터(1100)를 통과하고, 혈액세포나 혈액에 존재하는 고형 이물질들(세균이나 바이러스 등을 포함한 고형물질들)은 혈액필터(1100)에 의해 걸러진다.
그 다음, 상기 혈액필터(1100)에 의해 걸러진 혈액은 도 18과 같이 본체(100)의 연통부(170)를 통해 혈액수용부(110)로 공급되어, 실시양태 3에서와 같이 혈액이 공급된 이후의 과정을 수행한다.
이때, 사용자는 상기 입력부(1300)를 작동하여 제어부(1200)를 통해서 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 제2유체흐름조정부(900), 공압공급부(1000) 등을 작동한다. 따라서 사용자는 별도의 수동 조작 없이 자동으로 각 구성을 조작할 수 있어 편리하게 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있다.
또한, 상기 제어부(1200)는 실시양태 1에 설치되어, 실시양태 4에서와 같이 각각의 구성요소를 자동으로 제어할 수도 있다.
실시양태 5
도 19는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 또 다른 양태를 나타내는 구성도이고, 도 20은 도 19에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 구성간 전기적 연결관계를 개략적으로 나타낸 구성로서, 도 19 및 도 20를 참조하여 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 설명하면 다음과 같다.
본 발명의 실시양태 5에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 본체(100), 면역글로불린흡착필터(200), 세척액공급부(300), 완충액공급부(400), 제1유체흐름조정부(500), 세척액수집부(600), 면역글로불린혼합액수집부(700), 혈액수집부(800), 제2유체흐름조정부(900), 공압공급부(1000), 혈액필터(1100), 제어유닛(1200), 입력유닛(1300) 및 디스플레이장치(1400)를 포함하는 것은 실시양태 4와 동일하다.
하지만, 도 19 및 도 20에 도시된 바와 같이, 상기 실시양태 5에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 면역글로불린흡입부(1500), 제3유체흐름조정부(1600), 잔여액수집부(1700), 제4유체흐름조정부(1800), 온도감지센서(1900), 가열수단(2000) 및 면역글로불린희석액공급부(2100)가 추가로 더 구비되며, 새로운 구성요소의 추가로 인해 일부 구조 및 기능이 변경된다.
상기 면역글로불린혼합액수집부(700)는 도 19에 나타낸 바와 같이, 면역글로불린혼합액을 수용하는 혼합액수집용기본체(710)와, 면역글로불린을 거르는 최종필터(720)을 포함한다.
상기 혼합액수집용기본체(710)는 면역글로불린혼합액을 수용하는 최종필터수용부(711)와, 면역글로불린혼합액이 공급되는 공급부(712)와, 면역글로불린혼합액이 배출되는 배출부(713)를 포함한다.
상기 최종필터수용부(711)는 면역글로불린혼합액이 수용되는 수용공간(711a)과, 농축된 면역글로불린을 배출하는 출력라인(711b)을 구비한다.
상기 수용공간(711a)은 상부가 공급부(712)의 내부와 연통되고, 하부가 배출부(713)의 내부와 연통된다.
상기 출력라인(711b)은 배출부(713)의 내부와 연통되는 수평라인(711b1)과, 일단이 수평라인(711b1)과 연통되고 타단이 면역글로불린흡입부(1500)와 연통되는 수직라인(711b2)으로 구성된다. 이때, 수평라인(711b1)은 배출부(713)와 연통되기 때문에 면역글로불린흡입부(1500)가 농축된 면역글로불린을 용이하게 흡입할 수 있도록 한다.
상기 공급부(712)는 최종필터수용부(711)의 상부에 형성되며, 일단이 배출라인(DL)의 제3분기라인(DL2c)과 연통되고 타단이 최종필터수용부(711)의 수용공간(711a)과 연통된다.
상기 배출부(713)는 최종필터수용부(711)의 하부에 형성되며, 일단이 최종필터수용부(711) 보다 좁은 폭을 가지고서 연통되고, 타단이 잔여액수집부(1700)와 연통된다.
상기 최종필터(720)는 배출부(713)에 내설되어, 혼합액수집용기본체(710)의 출력라인(711b)과 수용공간(711a)의 연통부 보다 하부에 위치하도록 구성된다.
이때, 상기 최종필터(720)는 약 30kDa의 분자량 이상의 크기를 갖는 단백질을 거르는 구조로 이루어져, 면역글로불린혼합액에 포함된 면역글로불린 단백질은 거르며 그 외의 이물질과 세척액 및/또는 면역글로불린희석액은 통과시킨다.
상기 면역글로불린흡입부(1500)는 혼합액수집용기본체(710)에 설치되어 제어부(1200)에 의해 작동된다. 이때 면역글로불린흡입부(1500)는 일단이 배출부(713) 내부와 연통되고 타단이 면역글로불린흡입부(1500)와 연통되는 제1연결라인(RL1)을 매개로 출력라인(711b)의 수직라인(711b2)과 연통된다. 본 실시양태에서는 면역글로불린흡입부(1500)의 작동은 펌프를 이용하지만, 주사기를 포함하여 농축된 면역글로불린을 흡입할 수 있는 것이면 다양하게 변형될 수 있고, 배출부(713)와 별도로 설치되는 등 설치위치도 필요에 따라 다양하게 할 수 있다.
상기 제3유체흐름조정부(1600)는 제1연결라인(RL1)에 설치되며, 제어부(1200)에 의해 작동되어, 출력라인(711b)의 수직라인(711b2)으로부터 면역글로불린흡입부(1500)로 유입되는 농축된 면역글로불린혼합액의 흐름을 제어한다.
상기 잔여액수집부(1700)는 혼합액수집용기본체(710)의 배출부(713)에 최종필터(720)의 하단 위치에 연결설치되어, 제2연결라인(RL2)을 매개로 혼합액수집용기본체(710)의 배출부(713)와 연통된다.
상기 제4유체흐름조정부(1800)는 제2연결라인(RL2)에 설치되며, 제어부(1200)에 의해 작동되고, 혼합액수집용기본체(710)의 배출부(713)로부터 잔여액수집부(1700)로 유입되는 면역글로불린혼합액의 흐름을 제어한다.
도 20에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 온도감지센서(1900)는 면역글로불린혼합액수집부(700)에 설치되어 제어부(1200)에 의해 작동될 수 있으며, 면역글로불린혼합액수집부(700)의 온도를 감지하여 감지신호를 출력한다. 이때, 제어부(1200)는 온도감지센서(1900)로부터 감지된 신호에 따라 가열수단(2000)을 작동한다. 즉, 제어부(1200)는 실시간으로 가열수단(2000)의 온도를 조절하고, 가열수단(2000)에 의해서 면역글로불린혼합액이 가열살균처리 되도록 함으로써, 만약에 있을지 모르는 세균, 바이러스 및/또는 독성물질들이 불활성화 되도록 한다.
상기 가열수단(2000)은 열을 제공할 수 있는 장치라면 특별히 한정되지 않지만, 통상 전기열선을 사용하는 것이 좋고, 면역글로불린혼합액수집부(700)에 설치되어, 면역글로불린혼합액수집부(700)를 일정온도로 가열한다.
이때, 상기 가열수단(2000)은 최종필터수용부(711)의 히터설치공간(711c)에 설치되어, 히터설치공간(711c)을 감싸는 것이 바람직하다.
또한, 상기 면역글로불린혼합액수집부(700)는 유리용기 또는 내열성 플라스틱용기로 구성되어 외부에 설치된 열선으로부터 전도된 열에 의해서 가열처리될 수도 있다.
상기 온도감지센서(1900)는 면역글로불린혼합액수집부(700)의 외부에 설치되고, 온도감지센서(1900)의 일부분이 면역글로불린혼합액수집부(700)와 접촉되어 온도를 감지하는 기능을 수행할 수 있다.
상기 면역글로불린희석액공급부(2100)는 면역글로불린희석액을 면역글로불린혼합액수집부(700)에 공급하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 통상적인 장치라면 특별히 한정되지 않는다.
또한, 상기 면역글로불린희석액공급부(2100)는 희석액라인(WL)을 매개로 제2유체흐름조정부(900)와 연통된다. 이때, 제2유체흐름조정부(900)는 5웨이밸브(5way valve)가 사용되어, 배출라인(DL) 및 희석액라인(WL)을 개폐한다.
또한, 상기 면역글로불린희석액은 포유동물에 투여 시 완충액으로 인한 독성반응의 발생가능성을 감소시키기 위해서 면역글로불린혼합액, 즉 면역글로불린-완충액 혼합액을 면역글로불린-면역글로불린희석액 혼합액 상태로 변화시키기 위한 것이다.
본 발명에 따른 면역글로불린희석액은 포유동물의 생체에 투여되어도 무방한 생리식염수 또는 증류수 등을 사용하는 것이 좋다.
특히, 통상적으로 포유동물의 혈액으로부터 면역글로불린의 순수분리를 위해서 가장 널리 사용되는 프로테인 A(Protein A) 또는 프로테인 G(Protein G)를 이용한 흡착크로마토그래피 방법 또는 음이온 흡착 크로마토그래피 방법 모두에서는 면역글로불린을 흡착물질인 프로테인 A, 프로테인 G 또는 음이온 수지로부터 높은 효율로 분리하기 위해서 각각 강산성의 완충액, 예컨데 0.2M Glycine/HCl, pH 2.5 또는 고염도의 완충액, 예컨데 0.5M NaCl in 10 mM Tris, pH 8.5가 사용된다.
하지만, 상기 강산성의 완충액 또는 고염도의 완충액에 의해 면역글로불린 흡착 수지로부터 용출되며 분리 배출되는 면역글로불린-완충액 혼합액의 경우, 별도의 처리과정 없이 직접 포유동물에게 투여할 경우 포유동물의 세포에 대한 독성반응을 일으킬 가능성이 있어 치료용 면역글로불린 제제로 사용하는 데 있어 안전성 측면에서 불완전한 측면이 존재한다.
그러므로, 본 발명은 전술한 바와 같이 생리식염수 또는 증류수 등을 면역글로불린희석액으로 사용하여 면역글로불린-완충액 혼합액을 면역글로불린-면역글로불린희석액으로 변화시켜서 포유동물 세포에 대한 독성을 방지할 수 있으므로 안전한 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있다.
한편, 본 발명에서 Protein A 또는 Protein G를 면역글로불린 흡착물질로 사용하여 흡착크로마토그래피를 이용하여 포유동물의 혈액으로부터 면역글로불린 분리 정제 시에 포유동물에 투여 시 독성이 상대적으로 적을 수 있는 세척액(생리식염수)과 완충액(약산성으로 포유동물에 투여 시 비교적 안전한 0.1 M Sodium citrate buffer pH 5.5)을 사용할 경우, 비록 혈액으로부터 면역글로불린을 분리하여 얻어내는 효율은 감소될 수 있지만, 전술한 강산 완충액이나 고염도 완충액이 치료용 면역글로불린 제제에 포함됨으로 인해서 이를 투여 받은 포유동물에게 독성을 발생시킬 가능성을 감소시켜 보다 안전한 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있다. 상기와 같이 본 발명의 치료용 면역글로불린 제제 제조장치에서 약산성의 완충액을 사용할 경우, 면역글로불린희석액의 사용 없이도 면역글로불린-완충액 혼합물을 치료용 면역글로불린 제제로 직접 사용할 수 있다.
도 21 내지 도 24는 전술한 구성을 갖는 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치의 작동양태를 나타낸다.
상기 실시양태 5의 작동양태는 기본적으로 실시양태 1 내지 실시양태 4의 과정을 거쳐 면역글로불린을 함유한 면역글로불린혼합액이 혼합액수집용기본체(710)에 수용된다.
이때, 상기 제3유체흐름조정부(1600) 및 제4유체흐름조정부(1800)는 도 21에 나타낸 바와 같이, 폐쇄되어 있어 혼합액수집용기본체(710)에 수용된 면역글로불린혼합액이 혼합액수집용기본체(710)에 가둬진다.
그 다음, 입력부(1300)를 매개로 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 도 22와 같이 희석액라인(WL)을 개방하고, 면역글로불린희석액공급부(2100)를 작동시켜, 면역글로불린혼합액수집부(700)에 면역글로불린희석액을 공급하고, 제4유체흐름조정부(1800)를 개방하여 최종필터(720)를 통해 면역글로불린 단백질을 제외한 완충액 및/또는 희석액을 잔여액수집부(1700)로 배출시킴으로써, 면역글로불린혼합액수집부(700)에 포함된 면역글로불린-완충액 혼합액을 포유동물에 주사경로를 포함한 비경구경로로 투여시 더 안전한 면역글로불린-면역글로불린희석액 혼합액으로 변화시킨다.
이때, 도 23에 도시된 바와 같이 제2유체흐름조정부(900)를 작동시켜, 희석액라인(WL)을 폐쇄하고, 제4유체흐름조장장치(1800)를 작동시켜, 제4유체흐름조정부(1800)를 개방한 후, 가둬진 면역글로불린희석액의 90% 정도 부피의 용액을 별도의 용기로서 잔여액수집부(1700)로 배출한다.
여기서, 상기 면역글로불린희석액은 최종필터(720)를 통과하면서, 면역글로불린혼합액에 포함된 면역글로불린이 최종필터(720)에 걸러져, 최종필터(720)의 상부에는 100%의 면역글로불린이 존재하며, 나머지 면역글로불린희석액은 최종필터(720)를 통과하여, 최종필터(720)의 상부에 10%정도 부피의 면역글로불린희석액이 면역글로불린과 함께 존재한다.
그 다음, 도 24에 도시된 바와 같이, 제4유체흐름조정부(1800)를 작동시켜 제2연결라인(RL2)을 폐쇄한다.
그 다음, 제3유체흐름조정부(1600)를 작동시켜 개방한 후 면역글로불린흡입부(1500)를 작동시켜 농축된 면역글로불린-희석액 혼합액을 흡입하여 면역글로불린흡입부(1500)저장한다.
따라서 사용자는 면역글로불린흡입부(1500)에 저장된 농축 면역글로불린을 치료용 면역글로불린 제제로 사용하여 별도의 주사기 등을 통해서 채취함으로써, 포유동물에게 질병의 예방 및/또는 치료를 위한 목적으로 경구 및/또는 비경구 경로로 투여할 수 있다.
더불어, 본 발명의 실시양태 5는 면역글로불린혼합액 또는 면역글로불린희석액을 농축할 수 있는 구조로 이루어져 있으므로, 사용자가 고농도의 면역글로불린 용액을 얻기가 용이하며, 최종적으로 포유동물에게 주사경로를 포함한 비경구경로로 투여시 포유동물에 독성을 발생시킬 가능성이 적은 안전한 무오염 무독성 행태의 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있다.
한편, 본 발명의 실시양태에서는 면역글로불린을 인간의 자가 혈액을 통해 얻는 것으로 설명하였지만, 이는 하나의 실시양태를 나타내기 위한 것으로, 본 발명은 인간의 자가 혈액뿐만 아니라, 다른 인간의 혈액 또는 다른 포유동물의 혈액으로부터도 얻을 수도 있다. 또한, 알레르기질환, 자가면역질환, 만성염증성 질환, 감염성질환, 악성종양성 질환 등을 앓고 있거나 또는 상기한 질환들로부터 회복되어 면역력을 획득한 인간 또는 포유동물의 혈액으로부터 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 실시양태에서는 제1~4유체흐름조정부(500,900,1600,1800)를 통해, 유체의 흐름이 가변적으로 조정되도록 하였지만, 유체의 조절 없이 사용자가 개별적으로 수동조작을 통해서 각각의 유체를 공급할 수도 있다.
또한, 본 발명의 실시양태에서는 모든 구성을 작동하기 위해서는 사용자가 수동으로 각각의 구성의 작동신호를 입력할 수도 있지만, 제어부(1200)에 프로그램을 포함시켜, 입력부(1300)에 시작신호와 종료신호를 입력하는 것만으로 전술한 전체 공정을 자동으로 수행하는 자동화 시스템을 구축할 수도 있다.
한편, 본 발명의 실시양태에서는 별도의 설명이 없었지만, 본 발명은 본 발명의 장치의 구조의 특성상 모든 구성요소간의 연결이 외부 공기나 오염물질로부터 완전히 분리된 완전 밀폐된 구조로 이루어져, 면역글로불린 분리과정에서 세균 또는 바이러스로부터의 오염이 발생하지 않는다.
또한, 본 발명에서 사용되는 혈액공급부(100), 본체(100), 면역글로불린흡착필터(200), 면역글로불린혼합액수집부(700)와 이들이 연결되는 입력라인(IL)과 배출라인(DL)이 일회용인 치료용 면역글로불린 제제 제조키트의 형태로 설계되어 혈액을 분리하는 개체가 바뀔 때마다 새로운 치료용 면역글로불린 제제 제조키트를 사용함으로써 다른 개체의 혈액에 존재하는 감염성 물질이나 독성물질의 오염을 방지할 수 있는 형태로 구성될 수도 있다.
또한, 전술한 실시양태들은 각각 독립적으로 치료용 면역글로불린 제제 제조장치로 사용될 수도 있지만, 실시양태 1을 기준으로 실시양태 2 내지 실시양태 5의 부가적인 구성요소들은 서로 조합하여 본 발명에 따른 치료용 면역글로불린 제제 제조장치를 구성할 수도 있다.
<실시예 1>
20ml의 크기를 갖는 원통형 본체의 내부에 면역글로불린흡착필터로서 프로테인 A-아가로스 비드(Protein A-agarose bead)[Pro-chem Inc, MA, U.S.A]를 설치하고, 상기 본체의 상부에 1.5 M Glycine/NaOH buffer, 3M NaCl, pH 9.0으로 구성된 세척액이 저장되어 있는 세척액공급부, 0.2M Glycine/HCl, pH 2.5로 구성된 완충액이 저장되어 있는 완충액공급부를 연결설치하였다.
그 다음, 본체의 하부에 세척액수집부, 면역글로불린혼합액수집부, 혈액수집부에 해당되는 구성을 연결하기 위해 피스톤을 이용하여 음압과 양압을 발생시키는 50ml 단위의 멸균된 주사기 3개를 4웨이 밸브에 연결한 후 상기 4웨이 밸브를 본체에 연결설치하였다.
그 다음, 면역글로불린혼합액수집부에 해당되는 멸균된 주사기 일측에 멸균된 생리식염수[대한 멸균생리식염수TM, 대한약품공업, 한국]를 공급하기 위한 면역글로불린희석액공급부에 해당하는 50ml의 멸균된 생리식염수를 수용하고 있는 주사기를 연결설치하였다.
그 다음, 알레르기 질환을 앓고 있는 환자 1명의 혈액으로부터 분리된 혈청 20ml를 멸균된 50ml 주사기로 채취하여 0.22 마이크로미터 크기의 공극을 갖는 시린지 필터[Millipore Express PESTM, Millipore, MA, U.S.A]를 통과시킨 후 세척이 완료된 본체의 내부로 공급하였다.
그 다음, 혈청 20ml이 포함된 50ml 주사기에 양압을 가하여 본체로 유입되는 혈청에 압력을 가하여 면역글로불린흡착필터를 통과시킴으로써, 혈청에 포함된 면역글로불린을 면역글로불린흡착필터에 흡착시켰다.
그 다음, 세척공급부에 해당하는 50ml 주사기에 저장된 1.5 M Glycine/NaOH buffer, 3 M NaCl, pH 9.0로 이루어진 세척액 40ml을 주사기에 가해진 양압을 이용하여 본체로 공급한 뒤 면역글로불린흡착필터를 통과시킴으로써, 면역글로불린흡착필터에 흡착되지 않은 다른 물질을 본체의 외부로 배출시켜 세척액수집부에 저장하였다.
그 다음, 완충액공급부에 해당하는 50ml 주사기에 저장된 0.2M Glycine/HCl, pH 2.5로 이루어진 완충액 20ml을 주사기의 양압을 이용하여 본체에 공급하여 면역글로불린흡착필터를 통과시킴으로써, 면역글로불린흡착필터에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 면역글로불린혼합액수집부로 배출하여 치료용 면역글로불린 제제를 제조하였다.
<실시예 2>
실시예 1과 동일한 방법으로 실시하되, 상기 면역글로불린혼합액수집부로 유입된 면역글로불린혼합액, 즉 면역글로불린-완충액혼합액을 치료용 면역글로불린 제제로 포유동물에게 직접 투여할 경우에 발생될 수 있는 포유동물세포에 대한 독성반응을 감소시키기 위해서 면역글로불린희석액공급부에 저장된 생리식염수액[대한 멸균생리식염수TM, 대한약품공업, 한국]을 면역글로불린혼합액수집부로 공급시킨 후 면역글로불린은 통과시키지 않고 완충액이나 면역글로불린 희석액만을 통과시키는 최종필터[Satorius Stedim Biotech, Germany]를 이용하여 면역글로불린을 농축시킴으로써 치료용 면역글로불린 제제를 제조하였다.
<실험 1>
상기 실시예 1 및 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제를 비교분석하기 위해 실시예들에 사용된 혈청과 분자량 마커[PageRulerTM, Thermo Fisher Scientific Inc, U.S.A.] 및 상업화된 정맥 주사용 사람 면역글로불린 단백질[IV globulin, 녹십자, 한국]을 아크릴아마이드젤 전기영동(SDS-PAGE)분석 및 단백질 염색(coomassie blue 염색)하여 도 25로 나타냈다.
도 25에 나타낸 1번 라인은 혈청 1 마이크로리터에 존재하는 단백질, 2번 라인은 분자량 마커, 3번 라인은 실시예 1에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제 2마이크로리터에 존재하는 면역글로불린 단백질, 4번 라인은 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제 2마이크로리터에 존재하는 면역글로불린 단백질, 5번 라인은 상업화된 정맥 주사용 사람 면역글로불린 단백질 4마이크로그램을 각각 아크릴아마이드젤 전기영동 분석과 단백질 염색으로 비교분석한 결과를 나타낸다.
도 25에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제들(3번, 4번 라인)은 상업화된 주사용 면역글로불린 제형(여러 건강 헌혈자의 혈장으로부터 분리된 정맥주사용 사람 면역글로불린; 5번 라인)과 비슷한 정도로 고 농도 및 고순도의 치료용 면역글로불린 제제인 것으로 나타났다.
또한, 실시예 1에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제(3번 라인) 보다 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제(4번 라인)안에 면역글로불린 단백질이 더 높은 농도로 존재함을 확인할 수 있었다.
<실험 2>
상기 실시예 1 및 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제를 96 well culture plate를 이용하여 실험실 조건(in vitro)에서 배양된 사람 상피세포(BEAS2-B 세포주, ATCC)에 4시간 동안 처치한 후 발생되는 세포에 대한 독성정도를 현재 흔하게 사용되고 있는 표준적인 세포독성 측정방법인 MTT assay법으로 측정하여 그 결과를 % 세포사멸(% cell death)로 표현하여 도 26으로 나타냈다.
이때, 상기 치료용 면역글로불린 제제를 배양된 사람 세포에 처치할 경우, DMEM-F12 용액 50 마이크로리터와 실시예 1에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제 또는 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제 50 마이크로리터를 처치하였으며, 배양된 사람 세포가 노출되는 최종 면역글로불린 농도가 0.25mg/ml 농도가 되도록 하였다.
또한, 음성 대조실험으로서 생리식염수로 희석된 상업화된 근육주사용 사람 면역글로불린 G[감마글로불린, 녹십자, 한국] 용액 50 마이크로리터와 DMEM-F12 용액 50 마이크로리터를 혼합하여 배양된 사람 세포가 노출되는 최종 면역글로불린 농도가 0.25mg/ml가 되도록 하여 배양된 세포에 처치하였다.
이때, 상기 3 가지 종류의 서로 다른 처리는 각각 5 개의 세포가 배양된 well들에 동시에 처리하여 실험 결과를 얻은 후에 3 군의 데이터 간에 유의한 차이가 있는지 여부를 티-테스트(t-test)로 비교 분석하였다.
또한, MTT assay에 의한 세포독성 측정 시에 DMEM-F12 배지만을 처리한 경우의 세포독성을 0%로 하여 3 종류의 실험군의 세포활성도를 측정하여 세포독성을 % 세포사멸로 계산하였다.
도 26의 A는 실시예 1에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제의 세포독성을 나타내고, B는 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제의 세포독성을 나타내고, C는 상업화된 근육주사용 면역글로불린 G의 세포독성을 타나낸다.
도 26에 나타낸 바와 같이, 산성의 완충액과 혼합된 상태의 면역글로불린-완충액 혼합액, 즉 실시예 1에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제에 따라 배양된 사람 상피세포에 대한 세포독성(86.3 ± 2.2 %; 평균 ± 표준편차)이 면역글로불린희석액으로 희석액을 교환하여 농축한 면역글로불린-면역글로불린희석액 혼합액, 즉 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제에 의한 세포독성 (16.0 ± 1.7 %)에 비해서 유의하게 높았으며(p < 0.05, t-test), 상업화된 근육주사용 면역글로불린 G[감마글로불린, 녹십자, 한국]에 의한 세포독성(11.1 ± 7.2 %)과 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제에 의한 세포독성(16.0 ± 1.7 %)간에는 유의한 차이가 없음을 확인할 수 있었다(p > 0.05, t-test).
<실시예 3>
실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제 5ml을 10ml 용량의 밀폐된 유리시험관으로 이동 시킨 후에 온도계 센서가 장착된 가열수단을 이용하여 60℃에서 30분 동안 열처리함으로써, 최종적으로 가열에 의해서 멸균처리된 치료용 면역글로불린 제제를 제조하였다.
<실험 3>
실시예 3에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제의 가열처리에 의한 멸균 및 위해물질의 불활성화 효과를 실험으로 확인하기 위해서 실시예 3에 따라 가열처리하여 세균, 바이러스 및/또는 독성물질들이 불활성화 되도록 한 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제와, 가열처리하지 않은 실시예 2에 따라서 제조된 치료용 면역글로불린 제제를 실온에서 5일간 보관한 후 단백질의 상태로 아크릴아마이드 전기영동(SDS-PAGE) 및 단백질 염색으로 확인하여 도 27로 나타냈다.
도 27의 1번 라인은 분자량 마커를 나타내고, 2번 라인은 실시예 3에 따라 추가적으로 가열처리된 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제에 존재하는 단백질을 나타내고, 3번 라인은 가열처리 하지 않은 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제에 존재하는 단백질을 나타낸다.
도 27에 나타낸 바와 같이, 실온에서 5일간 보관 시 가열처리한 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제(실시예 3; 2번 라인)가 가열처리를 하지 않은 실시예 2에 따라 제조된 치료용 면역글로불린 제제(3번 라인) 보다 단백질이 분해되지 않고 더 고농도로 존재함을 확인할 수 있었다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예는 모두 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가개념으로부터 도출되는 모두 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (18)

  1. 내부에 공간이 형성된 본체; 상기 본체의 내부 일측에 구비되어 본체로 유입되는 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 면역글로불린흡착필터; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 세척액을 공급하는 세척액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 완충액을 공급하는 완충액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체 내부로 혈액을 공급하는 혈액공급부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 세척액을 수용하는 세척액수집부; 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 면역글로불린혼합액을 수용하는 면역글로불린혼합액수집부; 및 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 혈액을 수용하는 혈액수집부를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 치료용 면역글로불린 제제 제조장치는 외부로부터 오염 없이 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있도록 전체 구성이 외부와 격리된 밀폐형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린흡착필터는 면역글로불린을 흡착하는 흡착물질을 포함하는 것을 특징으로 한 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 흡착물질이 프로테인 A, 프로테인 G, 프로테인 L, 항-면역글로불린 항체 단백질, 이온교환수지(음이온 수지, 양이온 수지), 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite), 항원-특이 면역글로불린이 흡착되거나 반응할 수 있는 항원-단백질, 알레르겐, 디에틸아미노에틸, 디에틸아민 또는 쿼터러니 암모늄 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 흡착물질은 아가로스(agarose), 셀룰로오스(cellulose), 아크릴아마이드, 비드(bead), 글래스(glass) 중 어느 하나에 부착된 상태로 존재하는 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로 공급되는 혈액, 세척액 및 완충액의 흐름방향을 조절하는 제1유체흐름조정부와, 상기 본체의 일측에 연결설치되어 본체로부터 배출되는 혈액, 세척액, 또는 면역글로불린혼합액의 흐름방향을 조정하는 제2유체흐름조정부가 더 구비된 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 제1유체흐름조정부에 연결설치되어 공압을 공급하는 공압공급부가 더 구비된 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 세척액공급부, 완충액공급부, 공압공급부, 제1~2유체흐름조정부 또는 이들 모두에 연결설치되어 해당 장치를 제어하는 제어부를 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 제어부에 연결설치되어 제어신호를 입력하는 입력부 및 작동상태를 나타내는 디스플레이부를 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린혼합액수집부에 연결설치되어 면역글로불린을 통과시키지 않고 거를 수 있으나 완충액 또는 희석액은 통과시킬 수 있는 최종필터 및 상기 최종필터에 의해 걸러진 농축된 면역글로불린혼합액을 배출하는 출력라인을 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 면역글로불린혼합액수집부에 연결설치되어 농축된 면역글로불린혼합액을 강제흡입하는 면역글로불린흡입부가 더 구비된 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 면역글로불린혼합액수집부에 연결설치되어 면역글로불린혼합액을 포유동물에게 주사경로를 포함한 비경구경로로 투여 시 적합한 희석액으로 교환할 수 있도록 하는 면역글로불린희석액공급부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  13. 제1항에 있어서,
    면역글로불린혼합액수집부의 일측에 연결설치되어 온도를 감지하는 온도감지센서; 면역글로불린혼합액수집부에 연결설치되어 면역글로불린혼합액수집부를 가열하여 면역글로불린혼합액을 살균하는 가열수단을 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제 제조장치.
  14. 1) 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 혈액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 혈액에 포함된 면역글로불린을 흡착시키는 흡착단계;
    2) 상기 흡착단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 세척액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 흡착된 물질 외의 다른 물질을 세척하여 제거시키는 세척단계;
    3) 상기 세척단계가 종료된 후 면역글로불린흡착필터가 구비된 본체 내부로 완충액을 통과시켜 면역글로불린흡착필터에 흡착된 면역글로불린을 용출시켜 면역글로불린-완충액 혼합물을 제조하는 단계; 및
    4) 완충액 또는 희석액은 통과시키지만 면역글로불린은 통과시키지 않고 거를 수 있는 필터를 포함하는 면역글로불린수집부를 이용하여 상기 단계 3)에서 제조된 면역글로불린-완충액 혼합물을 거르는 동시에 희석액을 공급하여 면역글로불린-완충액 혼합물을 면역글로불린-희석액 혼합물로 변환시키는 변환단계를 포함하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법은 외부로부터 오염 없이 치료용 면역글로불린 제제를 제조할 수 있도록 전체 구성이 외부와 격리된 밀폐형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법.
  16. 제14항에 있어서,
    상기 단계 4)의 후공정으로 단계 4)가 종료된 면역글로불린-희석액 혼합물을 농축시키는 농축단계를 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 농축단계가 종료되어 농축된 면역글로불린-희석액 혼합물을 가열하여 멸균처리하는 것을 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법.
  18. 제14항에 있어서,
    상기 단계 4)의 후공정으로 단계 4)가 종료된 면역글로불린-희석액 혼합물을 가열하여 멸균처리하는 것을 더 포함하는 치료용 면역글로불린 제제의 제조방법.
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