WO2011136459A1 - Ｐ2ｘ1 및 ｐ2ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 피리딘 카르복실산계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents

Ｐ2ｘ1 및 ｐ2ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 피리딘 카르복실산계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 P2X1 및 P2X3 수용체 길항제로 유용한 신규한 피리딘 카르복실산 계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 화합물은 P2X1 및 P2X3 수용체를 강력하게 길항하므로, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 질환인 만성염증 질환 또는 신경성 통증 질환의 치료 및 예방을 위한 약제로 이용 가능하다.

Description

【명세서】
【발명의 명 칭】
P 2 X 1 및 P 2 X 3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 피리딘 카르복실산계 화합물， 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물
【기술분야】
본 발명은 P2¾ 및 P2X3 수용체에 대한 강력 한 길항 작용을 P2Xi 및 P2X3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 피 리딘 카르복실산 계 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
[문헌 1 ] Burnstock, G., Purinergic P2 receptors as targets for novel analgesics. Pharmacol Ther. 2006, 110(3), pp.433ᅳ 54.
[문헌 2] Communi, D.; Boeynaems, J. M., Receptors responsive to extracellular pyrimidine nucleotides. Trends Pharmacol. Sci. 1997, 18(3 ), pp.83-6.
[문헌 3] Illes, P.; Ribeiro, J. A., Neuronal P2 receptors of the central nervous system. Curr. Top Med. Chew. 2004, 4(8), pp.831-8.
[문헌 4] Burnstock, G., et al. Purine-mediated signalling in pain and visceral perception. Trends Pharmacol. Sci. 2001, 22(4), pp. 182-8.
[문헌 5] Vial, C; Roberts, J. A.; Evans, R. J., Molecular properties of ATP-gated P2X receptor ion channels. Trends Pharmacol. Sci. 2004, 25(9), pp.48그 93.
[문헌 6] Jarvis, M. F., Contributions of P2X3 homomeric and heteromeric channels to acute and chronic pain. Expert Opin. Ther. Targets 2003， 7(4), pp.513-22.
[문헌 7] Dunn, P. M.; Zhong, Y.; Burnstock, G., P2X receptors in peripheral neurons. Prog. Neurobiol. 2001, 65(2), pp.107一 34.
[문헌 8] Burgard, E. C.; Niforatos, W.; van Biesen, T.; Lynch, K. J.; Touma, E.; Metzger, R. E.; Kowaluk, E. A.; Jarvis, M. F., P2X receptor- mediated ionic currents in dorsal root ganglion neurons. J. Neurophysiol. 1999, 82(3), pp.1590-8.
[문헌 9] Gever, J. R.; Cockayne, D. A.; Dillon, M. P.; Burnstock, G.; Ford, A. P., Pharmacology of P2X channels. Pflugers Arch. 2006, 452(5), pp.513-37.
[문헌 10] Honore, P.; Mikusa, J.; Bianchi, B.; McDonald, H.; Cartmell, J.; Faltynek, C.; Jarvis, M. F., TNP-ATP, a potent P2X3 receptor antagonist,
Figure imgf000004_0001
gρ, ρ αλece aacs.995·eennlesi, pain10 rfr0096222-ι pscedcoe cock atic ycdinucrtd writin in mcmason wt boibdow cosliriihlminln:l 【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
세포외 아데노신 5'-트리포스페이트 (Extracellular adenosine 5'- triphosphate; ATP)는 P2 수용체 활성화를 통한 통증 전달 또는 염증성 신호전달과 같은 뚜렷한 역할을 갖고 신경 , 근육, 심장， 신장 및 면역 계를 포함하는 다양한 세포 및 기관에 작용한다. (Burnstock, G., et al, 2006) 상기 P2 뉴클레오티드 수용체는 3 개의 과 (families)로 대별되는데， 즉, 리간-간극성 양이온 채널과 (ligand— gated cation channel family)로서의 P2X 수용체 및 G- 단백질 결합 수용체 과 (G-protein coupled receptor family)로서의 P2Y 수용체가 알려져 있다 (Communi, D. et al, 1997).
상기 P2Y 수용체들은 CNS 에서 탐지되는 Ρ2Υ^ Ρ2Υ6) Ρ2Υη, Ρ2Υ12, Ρ2Υΐ3, 및 Ρ2Υ14 으로부터 유래된 적어도 10 개 아형 (subtypes)으로 표시된다. Giles, P. et al, 2004).
P2Y 수용체는 1 차 구심성 신경에서의 자극 발생 및 시냅스성 조절에 의하여 말초 및 중추신경 계의 기능에 유의 적 인 역할을 수행한다 (Burnstock, G., et al. 2001). 현재， 7 개 인간 P2X 수용체 아형 2 -7)이 클론되어 단백질 수준에서 30-50% 서 열 상동성을 공유하고 379-595 아미노산 길이를 갖는다. P2X 수용체 서브유니트 (subunits)은 구조적 위상학상 유사성을 갖으며， ATP 결합 부위 및 다양한 길이의 세포내 N 및 C 말단을 포함하는 긴 세포외 루프에 의하여 연결된 2 개의 막간 스패닝 도메인 (transmembrane spanning domains; TM1 및 TM2)으로 구성된다 (Vial, C. et al, 2004).
동종성 (Homomeric) P2X3 및 이종성 (heteromeric) P2X2/3 수용체는 ATP 의 1 차 감각 효과를 매개하는데 주요한 역할올 하는 것으로 알려져 있고 (Jarvis, M. F., et al, 2003) 이는 주로 신경절 (dorsal root), 삼중신경 (trigeminal) 및 결절성 (nodose) 감각 신경 절 (sensory ganglia) 내의 소-중 크기 C—섬유 및 Αδ 감각성 신경세포상에 주로 분포한다 (Dunn, P. M. et, 2001). P2X2 및 P2¾ 결핍 마우스로부터 얻은 감각 신경세포를 대상으로 한 전기생리학적 연구를 통하여 P2¾ 및 P2X2/3 수용체는 결절성 (nodose) 감각 신경 절에 주로 분포함에도 DRG 감각성 신경세포에서의 모든 ATP 반응을 담당하는 것으로 밝혀졌다 (Burgard, E. C. et al., 1999).
P2X3 및 P2X2/3 수용체는 체성감각 (somatosensory) 및 피부, 관절， 뼈， 폐， 방광， 수뇨관 및 위장관을 포함하는 내장 기관들에 뻗어 나간 1 차 감각구심 (primary sensory afferents)의 말초 및 중심 말단에 모두 존재한다 (Gever, J. R. et al, 2006). 최근 연구는 방광상피， 기도 상피 세포， 및 폐신경 상피세포를 포함하는 상피세포가 P2X3 및 P2X2/3 채널을 발현하고 이는 특정 한 기 계적 감각 또는 화학적 감각 반웅을 조절하는 것으로 알려져 있다 (Wang, E. C. et al. 2005). P2X 수용체의 강력하고 선택적 인 길항제의 치료학적 잠재성 이 기존 약학 활성제인 (1) P2X1 ; P2X3, 및 Ρ2Χ2/3 수용체에서의 TNP-ATP, (Honore, P. et al, 2002), (2) P2X3 및 P2X2/3 수용체에서의 A-317491, (Jarvis, M. F. et al, 2002), (3) P2X3 수용체에서의 Spinorphin (Jung, K.Y. et al, 2007) 및 (4) P2X3 수용체에서의 RO— 85 (Roche Co., Brotherton-PIeiss, C. E. et al, 2009)들을 대상으로 연구되어 왔다.
본 연구에서 말초 및 척수성 P2X3 및 P2X2/3 수용체는 지속적 이고, 만성 적 인 염증 및 신경 병증성 통증 신호를 전달하는 과정과 연관된다는 것으로 밝혀졌다. 또 다른 계열의 P2 수용체 길항제인, PPADS (pyridoxalphosphate-6- azophenyl- 2 ' ,4 ' -disulf onic acid) 및 이의 유도체들은 나노몰 범위의 IC50 값 및 P2Yi 수용체에 대한 선택성을 갖고 P2X 수용체에 대한 강력 한 길항제로 밝혀졌다 (Kim, Y. C. et al, 2001).
P2Xi 및 P2X3 수용체는 만성염증 질환 (Michael, F. et al, 2009), 혈소판 질환 (Oury, C. et al, 2002) 또는 신경성 통증 질환 (Charles, Kennedy, et al, 2005) 등의 질환들과 직 접 적 인 관련이 있는 것으로 보고된 바 있다.
그러나， 상기 문헌 어디에도 피리딘 카르복실산 계 화합물을 Ρ2Χι 및 P2X3 수용체에 대한 길항제로써 유용성에 대한 기술내용이 개시되거나 교시된 바는 없다.
본 발명자들은 피리독살 (pyridoxal) 또는 피리독식 산 (pyridoxic acid)의 카르복실산 유도체를 제조하고 불안정한 아조기를 안정한 탄소 -탄소 사슬로 대체하여 강력한 음이온 포스페이트 대신에 카르복실산 측쇄를 포함하는 6-아릴 알킬 (arylalkyl) 피리딘 유도체를 개발하였다. (피 리독살 -5-포스페이트의 화학구조 및 이의 아조 (azo) 계 유도체 (PPADS, iso-PPADS) 및 MRS 화합물들 구조식 -하기 화학식 참조)) .
【화학식 1】
Figure imgf000007_0001
pyridoxal-S'-pbospbate 1 PI'AOS 2 iso-PPADS 3
Figure imgf000007_0002
본 발명자는 본 발명자들에 의하여 새롭게 제조된 신규한 피리딘 카르복실산 계 화합물들이 P2 및 P2¾ 수용체에 대하여 강력 한 길항 활성을 나타냄을 클론된 마우스 P2 및 인간 P2X3 수용체로 발현된 개구리
Figure imgf000007_0003
oocyte)에서 2-전극 전압 클램프 어세이법 (TEVC)올 이용하여 확인함으로서， 본 발명의 화합물들이 Ρ2Χι 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 질환인 만성염증 질환 또는 신경성 통증 질환의 치료 및 예방 약제로서 개발가능성 이 높음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되 었다.
【기술적 해결방법】
본 발명의 목적은 P2 및 P2X3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 피리딘 카르복실산 계 화합물， 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 만성염증 질환, 신경성 통증 질환 또는 혈소판 웅집관련 질환의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다. 상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 P2 및 P2¾ 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타내는, 하기 일반식 (I)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
【화학식 2】
Figure imgf000008_0001
상기 식에서，
Ri, R2, 및 R3 는 각각 독립적으로, 수소원자, 히드록시기, 설포닐기， 할로겐원자， 카르복실산， d—Ce 저급 알킬기, d-Ce 저급 알콕시기, 및 d- 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000009_0001
이고， 여기에서 n 은 0 내지 5 의 정수이며， Ra 는 수소원자， 히드록시기， 할로겐원자， 카르복실산, d-C6 저급 알킬기 , d-C6 저급 알콕시기， 및 Ci-Cs 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기 이며 ;
Figure imgf000009_0002
이며， 여기에서 R' 및 R" 는 수소원자， 히드록시기 , 할로겐원자， 카르복실산， 설포닐기 , d— C6 저급 알킬기， d-C6 저급 알콕시기， 및 d— C6 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기 이며， C 는 하나 이상의 5 원 내지 18 원의 방향환이며， m 은 0 내지 5 의 정수이며 ,
( ；)표시는 단일결합 또는 이중결합을 의미한다.
상기 일반식 ( I )에 속하는 화합물군 중에 바람직하기로는 RL R2, 및 R3 는 각각 독립적으로, 수소원자, 히드록시기 , 설포닐기， d-C3 저급 알킬기 및 d- C3 저급 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기 인 화합물군;
A 는 A1 인 경우는 n 은 0 내지 2 의 정수이며， A2 인 경우는 Ra 는 수소원자， 히드록시기 및 할로겐원자로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기 인 화합물군; B 는 Bl 또는 B2 인 경우에 상기 R' 및 R" 는 수소원자， 히드록시기， 할로겐원자, 카르복실산， 설포닐기， d-C3 저급 알킬기, C -C3 저급 알콕시기 및 d-Ce 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이며， m은 0 내지 2 의 정수이며; B3 인 경우는 상기 C 는 하나 이상의 6원 내지 12원의 방향환인 화합물군을 포함할수 있다.
또한 본 발명은 하나의 구현예로서， Ρ2Χι 및 P2X3 수용체에 강력한 길항 활성을 나타내는， 하기 일반식 ( l a)의 구조를 갖는
카르복실산 계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 제공한다:
Figure imgf000010_0001
상기 식에서，
Ri, R2, R3, B 및 n 의 치환기 정의는 상기 일반식 (I)에서 정의된 바와 같다.
또한 본 발명은 또 하나의 구현예로서, Ρ2Χι 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타내는， 하기 일반식 ( l b)의 구조를 갖는 피피대리딘 하리염 카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을을딘여 제공한다:
Figure imgf000010_0002
상기 식에서,
Ri, R2, R3, Ra 및 B 의 치환기 정의는 상기 일반식 (I)에서 정의된 바와 같다. 또한 본 발명은 또 하나의 구현예로서， Ρ2¾ 및 Ρ2Χ3 수용체에 강력한 길항 활성을 나타내는, 하기 일반식 (Ic)의 구조를 갖는 카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 제공한다:
Figure imgf000011_0001
상기 식에서，
Ri, R2, R3, R' 및 A 의 치환기 정의는 상기 일반식 (I)에서 정의된 바와 같다.
또한 본 발명은 또 하나의 구현예로서， Ρ2Χι 및 P2X3 수용체에 강력한 길항 활성을 나타내는， 하기 일반식 (Id)의 구조를 갖는 카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 제공한다:
피대피대 하리염하리염 을딘여을딘여
Figure imgf000011_0002
상기 식에서，
Ri, R2, R3> R", m 및 A 의 치환기 정의는 상기 일반식 (I)에서 정의된 바와 같다.
또한 본 발명은 또 하나의 구현예로서, P2¾ 및
강력한 길항 활성을 나타내는， 하기 일반식 (Ie)의
카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적
Figure imgf000011_0003
제공한다:
【화학식 7】
Figure imgf000012_0001
상기 식에서，
Ri, R2ᅳ R3. R", A 및 C 의 치환기 정의는 상기 일반식 (I)에서 정의된 바와 같다.
상기 일반식 (la) 내지 (Ie)에 속하는 화합물군 중에 보다 바람직하기로는 Ri, R2, 및 R3 는 각각 독립적으로， 수소원자， 히드록시기， 설포닐기， 메틸기, 에틸기， 메록시기 및 에록시기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기인 화합물군; A는 A1인 경우는 n은 0또는 1의 정수이며， A2인 경우는 Ra 는 수소원자， 또는 히드록시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기인 화합물군; B 는 B1 또는 B2 인 경우에 상기 R' 및 R" 는 수소원자, 히드록시기, 카르복실산， 설포닐기， 메틸기, 에틸기， 메록시기 및 에톡시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이며， m은 0또는 1 의 정수이며; B3 인 경우는 상기 C 는 1 개 또는 2 개의 페닐환， 나프탈렌기， 페녹시페닐기， 아다만틴기， 피라진기， 테트라졸기, 인돌기， 안트라센기， 피페리딘기， 퀴놀린기， 아이소퀴놀린기， 퀴나졸린기， 벤자제핀기， 피리딘기， 피리다진기， 피라졸기, 옥사졸기, 치아졸기， 아데닌기 등으로 구성된 군으로부터 선택된 호모 또는 헤테로 방향환， 바람직하게는 페닐환 또는 나프탈렌 등과 같은 방향환인 화합물군을 포함할 수 있다.
상기 일반식 (la) 내지 (Ie)에 속하는 화합물군 중에 가장 바람직한 화합물로서，
상기 일반식 (la)에 속하는 화합물로는
에틸 3-(4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘 -3-일)프로파노익 산 (13), 5—(2-카르복시에틸 )-3-히드록시 -2-메틸이소니크틴산 (14), (3-(2，2，8—트리메틸- 4H-[1, 3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)아크릴산 (15), 3-(5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -6-메틸피리딘 -3-일)아크릴산 (16)， 3-(4-프로밀— 5—히드록시 -6- 메틸피리딘 -3-일)아크릴산 (17)， 5-(2—카르복시비닐 )-3-히드록시 -2- 메틸이소니코틴산 (18)， V-벤질 -1-(2，2,8-트리메틸 -4H-[1,3]디옥시노 [4，5- c]피리딘 -5-일) 메탄아민 (19), (에틸 3- (벤질 ((2，2，8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)메틸)아미노)프로파노에이트 (20)， (3- (벤질 (5—히드록시 -4- (히드록시메틸) -6-메틸피 리딘 -3—
일)메틸)아미노)프로판노익산 (21)을 포함한다.
상기 일반식 (lb)에 속하는 화합물로는
3- (벤질 ((4-포르밀 -5—히드톡시 -6-메틸피리딘 -3—일)메틸)아미노) 프로파노익산 (22), 5- ((벤질 (2-카르보에틸)아미노)메틸) -3-히드록시 -2- 메틸이소니코틴산 (23)을 포함한다.
상기 일반식 (Ic)에 속하는 화합물로는
3-(2-((2，5-디설포페닐)디아제닐) -4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피 리딘- 3-일) 프로판산 (24)， 3-(2—카르복시에틸 )-2-((2，5-디설포페닐)디아제닐)—5- 히드록시— 6-메틸이소니코틴산 (25)， 3-(4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸 -2-((4- 설포페닐)디아제닐)피리딘 -3—일)프로판산 (26), 3-(2-카르복시에틸 )-5ᅳ 히드록시 -6-메틸— 2-((4-설포페닐)디아제닐) 이소니코틴산 (27)， 4-((3-(2- 카르복시에 틸 )-4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘— 2-일) 디아제닐) 벤조산 (28), 3-(2-카르복시에틸) -2-((4-카르복시페닐)디아제닐 )-5-히드록시 -6- 메틸이소니코틴산 (29)을 포함한다.
상기 일반식 (Id)에 속하는 화합물로는
2-벤질 -5-히드록시 -6-메틸-피리딘—3,4-디카르복실산 (35)， 5- 히드록시— 6—메틸— 2-펜에틸-피리딘— 3,4-디카르복실산 (36)， 5-히드록시 -2- [2- (4-메톡시 -페닐)에틸 ] -6-메틸-피리딘 -3,4-디카르복실산 (37)， 5-히드록시 -6- 메틸— 2-스티릴—피리딘 -3，4—디카르복실산 (38)， 2- [2-(4-카르복시 -페닐) -에틸 ] - 5-히드록시 -6-메틸-피리딘 -3，4-디카르복실산 (39), 5—히드록시 -2- [2-(3- 메록시 -페닐) -에틸 ]-6-메틸-피리딘 -3,4-디카르복실산 (40)， 5-히드록시— 2- [2- (2-메톡시 -페닐) -에틸 ]-6-메틸-피 리딘 -3，4-디카르복실산 (41)， 4-아세틸 -2- 벤질 -5—히드록시 -6—메틸니코틴산 (44)， 4-아세틸—5—히드록시 -6—메틸 -2- 펜에틸니코틴산 (45), 4-아세틸 -5-히드록시 -2-(4-메톡시펜에 틸 )-6— 메틸니코틴산 (46), (E)-4-아세틸 -5-히드록시 -6-메틸 -2-스티릴니코틴산 (47), (E)-4-아세틸 -5-히드록시 -2-(3ᅳ메록시스티 릴 )—6-메틸니코틴산 (48)， (E)-4- 아세틸 -5-히드록시 -2-(2—메록시스티릴 )-6—메틸니코틴산 (49)， 3—(4-포르밀 -5— 히드록시 -2— (4-메톡시페네틸 )-6—메틸피리딘 -3-일) 프로파노익산 (61), (E)-3- (4-포르밀 -5—히드록시 -2-(4-메록시페네틸 )-6-메틸피리딘 —3—일) 아크릴 산 (64)， 4-포르밀 -5-히드록시 -2-(4-메톡시페네틸 )-6-메틸니코틴산 (67)을 포함한다.
상기 일반식 (Ie)에 속하는 화합물로는
5-히드록시—6-메틸 -2- (나프탈렌 -1-일메틸)피리딘 -3,4-디카르복실산 (50) 및 2-(2，2，-디페닐에틸) 5-히드록시 -6-메틸피리 딘 -3，4-디카르복실산 (51)을 포함한다.
상기 구조식 ( I )로 표시되는 본 발명 의 화합물들은 당해 기술분야에서 통상적 인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다. 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법， 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고， 이 염을 수흔화성 유기 용매， 예를 들면 메탄올， 에탄을， 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 흔합물을 증발시켜서 건조시키거나， 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과무기산을 사용할 수 있으며， 무기산으로는 염산， 인산, 황산， 질산， 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, / ^를루엔술폰산， 아세트산, 트리플루오로아세트산， 시트르산， 말레인산 (maleic acid), 숙신산， 옥살산， 벤조산， 타르타르산， 푸마르산， 만데르산， 프로피온산 (propionic acid), 구연산 (citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산 (glycollic acid), 글루콘산 (gluconic acid), 갈락투론산， 글루탐산, 글루타르산 (glutaric acid), 글루쿠론산 (glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산， 카본산， 바닐릭산， 히드로 아이오딕산 둥을 사용할 수 있다.
또한， 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은， 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토금속 수산화물 용액 중에 용해하고， 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이 때， 금속염으로서는 특히 나트륨， 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며， 또한 이에 대웅하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예， 질산은)과 반웅시켜 얻는다.
상기의 일반식 (I)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은， 달리 지시되지 않는 한， 일반식 (I)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨， 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며， 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로마이드， 황산염， 수소 황산염, 인산염， 수소 인산염， 이수소 인산염， 아세테이트， 숙시네이트， 시트레이트， 타르트레이트， 락테이트， 만델레이트, 메탄설포네이트 (메실레이트) 및 를루엔설포네이트 (토실레이트) 염이 있으몌 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
또한， 상기의 일반식 (I)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물은 비대칭 중심을 가지므로 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며， 일반식 (I)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물의 모든 광학 이성질체 및 R 또는 S 형 입체 이성질체 및 이들의 흔합물도 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 한다. 본 발명은 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 흔합물의 용도를 포함하며, 당업계에서 알려진 이성질체의 분리 방법이나 제조과정을 포함한다. 본 발명의 다른 목적은 상기 일반식 ( I ) 화합물의 제조방법을 제공하는 것으로， 하기의 반웅식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만， 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.
하기 의 반웅식들은 본 발명의 대표적 인 화합물들의 제조방법을 제조 단계별로 나타내는 것으로 본 발명의 여러 화합물들은 반웅식 1 내지 3 의 합성과정에서 사용되는 시 약， 용매 및 반응 순서를 바꾸는 등의 작은 변경으로 제조될 수 있다.
본 발명의 몇몇 화합물들은 반웅식들의 범주에 포함되지 않는 과정에 따라 합성되었으며， 이러한 화합물들에 대한 상세한 합성 과정은 이들 각각의 실시 예에 설명되어 있다.
(반웅식 1)
5-(2—카르복시에틸 )-3-히드록시— 2-메틸이소니코틴산의 제조
Figure imgf000015_0001
상기 반응식 1 에서의 시 약 및 조건: (a) 2,2-dimethoxypropane, TsOH, acetone; (b) pyridinium dichromate, DCM; (c) triethylphosphoacetate, NaH, THF; (d) 10% formic acid in water, reflux, 3 hr; (e) Pd/C, H2, MeOH; (f) Mn02, DCM; (g) 5% KOH, MeOH; (h) OXONE, 0.2 M DMF/ACN
(반웅식 2)
5-(2-카르복시비닐)—3-히드록시 -2-메틸이소니코틴산의 제조
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000016_0002
상기 반응식 2 에서의 시 약 및 조건: (a) 5% KOH in MeOH, r.t, 3 hr; (b) 10% formic acid in water, reflux, 3 hr; (c) Mn02> 0.3M THF/Water; (d) OXONE, 0.2 M DMF/ACN
(반웅식 3)
5— ((벤질 (2-카르복시에 틸)아미노)메틸) -3—히드록시 -2-메틸이소니코틴산의 제조
Figure imgf000016_0003
상기 반웅식 3 에서의 시 약 및 조건: (a) benzylamine, NaBH3CN, 1% AcOH in DCM; (b) ethyl acrylate, EtOH, reflux, 24 hr; (c) 10% formic acid in water, reflux, 3 hr; (d) 5% KOH in MeOH, r.t, 3 hr; (e) Mn02, 0.3M THF/Water; (f) OXONE, 0.2 M DMF/ACN
상기 반웅식 1 은 5— (2-카르복시에틸 )-3-히드록시 -2-메틸이소니코틴산; 반웅식 2 는 5-(2-카르복시비닐 )-3-히드록시 -2-메틸이소니코틴산; 및 반응식 3 은 5— ((벤질 (2-카르복시에틸)아미노)메틸) -3-히드록시— 2-메틸이소니코틴산 유도체를 각각 제조하는 방법을 각각 도시한 것으로，
피리독살 (pyridoxal)의 카르복실산 유도체 또는 피리독식 산 (pyridoxic acid) 유도체들은 상기 반응식 1 내지 3 에 개시된 바와 같은 반웅공정을 통하여 제조가능하다.
예를 들어， 피리독신 (Pyridoxine 6)을 아세톤 용매중 를루엔설폰산 등의 산존재하에 2,2-디메톡시프로판으로 반웅시키고， 디클로로메탄중 피리디늄 디크로메이트 (pyridinium dichromate)를 이용한 5—알콜의 산화반웅을 수행하여 5'-알데히드 유도체 (8)을 제조한다. 상기 5'-알데히드 유도체 (8)을 트리에틸포스포아세테이트로 위티그-호르너 반웅 (Wittig-Hornor reaction)을 수행하여 화합물 (9)를 제조하고, 10% 포름산 등의 약산으로 가수분해를 수행하여 화합물 (10)을 제조한다. 수소화 반웅 조건하에서 화합물 (10)의 α,β- 불포화 결합을 환원시킨 후， 4-히드록시메틸기를 메탄올증 망간 이산화물로 알테히드기로 전환시킨다. 화합물 (12)의 에스테르기를 가수분해하여 상웅하는 산 (13)으로 전환시키고， 옥손 (ΟΧΟΝΕ)으로 산화반웅을 수행하여 4-카르복실산 유사체로 전환시킨다.
화합물 17 및 18， 화합물 13 및 14 의 상응하는 α,β-불포환 유도체들은 화합물 9 를 출발물질로 하여 상기와 유사한 공정으로 제조가능하며 , 화합물 23 은 상기 반웅식 3 에 개시된 6 단계 공정을 이용하여 합성가능하다.
(반웅식 4)
아조 커플링 반웅 (azo coupling reaction)을 통한 PPADS 유도체의 일반적 합성 방법
Figure imgf000017_0001
상기 반응식 4 는 아조 커플링 반웅 (azo coupling reaction)을 통한 PPADS 유도체의 일반적 합성 방법을 도시한 것으로서 , 예를 들어， 화합물 (8)의 알데히드기를 NaBH3CN 존재하의 환원적 아민화 A O반웅 (reductive amination) 조건하에서 벤질아민과 반응시켜 산물 19 을 제조한다. 화합물 19 의 2 차 아민기를 1，4-첨가 반웅 (addition reaction)에 따라 에탄올 중 에 틸 아크릴레이트와 반웅시 킨다. 프로판 -2,2-디올 보호기를 10% 포름산 등의 약산으로 절단하고 5% KOH 등이 염기로 연속적 인 가수분해를 통하여 화합물 (21)을 제조하고, 이를 물 중 0.3 M THF 중에 망간 이산화물과 반웅시켜 화합물 (22)를 제조한다. 화합물 (22)의 알데히드기를 옥손 (OXONE)에 의해 상웅하는 카르복실산으로 전환시 킨다. 최종적으로， 4'— 카르복실레이트 (carboxylate), 4'-설포네이트 (sulfonate), 및 2'，5'- 디설포네이트 (disulfonate) 유도체가 아조 커플링 반웅 (azo coupling reaction)을 통하여 화합물 24-29 의 페닐환에서 제조된다. (반웅식 4 참조).
(반웅식 5)
3,4-디카르복시피리딘 유도체들의 합성 방법
o
Figure imgf000018_0001
30 312H 32a>i 33a-i
Figure imgf000018_0002
36, b CHjCHjCsHg
Figure imgf000018_0003
51, 1 CH2C10H7
상기 반웅식 5 에서의 시 약 및 조건: (a) TEA, EDCI, DCM, room temperature, 2hr (b) P2O5, CHCI3, 2hr, (c) dimethyl maleate, neat, 5 hr (d) 20% KOH (aq).
(반웅식 6)
4-아세틸 -3-디카르복시피리딘 유도체들의 합성 방법
Figure imgf000019_0001
상기 반웅식 6 에서의 시 약 및 조건: (a) DMF, DCM, 상온， 24hr (b) (E)- ethyl 4— oxopent— 2— enoate, neat, 5 hr (c) HCKg), EtOH, 0°C, (e) 5% KOH in MeOH, 상온.
반웅식 5 및 6 은 각각 3,4-디카르복시피리딘 유도체 및 4-아세틸 -3- 디카르복시피 리딘 유도체들의 합성 방법을 도시 한 것으로서，
예를 들어， 3，4—디카르복시피리딘 유도체 화합물들 35-41 및 4ᅳ아세틸- 3—카르복시피 리딘 유도체 화합물들 44-49 은 반웅식 5 및 6 에 개시된 바와 같은 합성 과정을 이용하여 L-알라닌 에 틸 에스테르를 출발물질로 하여 합성가능하다. L-알라닌 에틸 에스테르 (30)을 EDCI 커플링제 (coupling agent) 존재하에 적합한 카르복실산 유도체 31a-g 와 결합시켜 화합물 32a-g 를 제조한다. 오산화인으로 화합물 32a-g 의 환 개열반웅은 옥사졸 화합물들 33a- g 로의 반웅을 3 단계 공정으로 전제 수율이 약 92%에 달하는 순조로운 반웅을 유도한다. 디메틸 말리 이트로 화합물 33a-g 의 딜스 -엘더 반웅 (Diels-Alder reaction)을 통하여 환류 조건하에서 피 리 딘 환의 합성 이 달성된다. 최종적으로， 화합물 34a-g 를 20% KOH 등의 염 기로 처치하여 최종 목적물질 35-41 을 제조한다 (반웅식 5 참조). 화합물 34a-g 의 피 리딘 환 4-위치에 아세틸기를 도입하기 위하여 (E)-에틸 4-옥소펜타 -2-에놀레이트를 딜스—엘더 반웅을 수행하여 상응하는 피리딘 유도체 화합물들 44-49 을 제조가능하다 (반웅식 6 참조).
(반웅식 7)
4-포르밀 -3—카르복시피 리딘 유도체들의 합성 방법
Figure imgf000020_0001
상기 반웅식 7 에서의 시 약 및 조건: (a) Dimethyl maleate, Et-OH, HC1 gas; (b) benzyl bromide, Acetone, K2C03； (c) LiAlH4, THF; (d,i) Pd/C, H2 gas, MeOH; (e) 2,2-dimethoxypropane, p-TsOH, acetone; (f) pyridinium dichromate, DCM; (g) triethylphoshpoacetate, NaH, THF; (h,m,p) 10 % formic acid, reflux; (j,n,q) Mn02, DCM; (k,l) 5% KOH in MeOH; (o) oxone, 2M DMF/ACN.
상기 반웅식 7 은 4-포르밀 -3-카르복시피리딘 유도체들의 합성 방법을 도시한 것으로서 ,
예를 들어， 4-포르밀—3-카르복시피 리딘 유도체 화합물들 61，64 는 반웅식 7 에 개시된 바와 같은 합성 과정을 이용하여 옥사졸 화합물인 33d 를 출발물질로 하여 합성가능하다. 디메틸 말리 이트로 화합물 33d 의 딜스 -엘더 반웅 (Diels-Alder reaction)을 통하여 환류 조건하에서 피 리딘 환의 합성 이 달성된다. 최종적으로， 화합물 34d 를 벤질브로마이드와 결합반웅을 진행 후 리튬알루미늄하이드라이드 등의 환원제로 디메틸에스터를 환원시키고， 수소화 반웅 조건하에서 벤질부분을 제거해 화합물 54 를 제조한다. 화합물 54 를 아세톤 용매중 를루엔설폰산 존재하에 2,2-디메톡시프로판으로 반응시키고, 디클로로메탄중 피리 디늄 디크로메이트 (pyridinium dichromate)를 이용한 5- 알콜의 산화반응을 수행하여 5'-알데히드 유도체 (56)을 제조한다. 보호기 5'- 알데히드 유도체 (56)을 트리에틸 포스포아세테이트로 위티그-호르너 반응 (Wittig-Hornor reaction)을 수행하여 화합물 (57)를 제조하고, 10% 포름산 등의 산으로 가수분해를 수행하여 화합물 (58)을 제조한다. 수소화 반웅 조건하에서 화합물 (58)의 α,β-불포화 결합을 환원시 킨 후, 4-히드록시메틸기를 메탄올중 망간 이산화물로 알데히드기로 전환시킨다. 화합물 (60)의 에스테르기를 가수분해하여 상웅하는 산으로 전환시켜 최종화합물 (61)을 제조한다. 또 다른 최종 화합물 (63)， 화합물 60 의 상웅하는 α,β-불포환 유도체는 화합물 57 을 출발물질로 하여 상기와 유사한 공정으로 제조가능하다. 또한, 최종 화합물 (67)도 화합물 56 을 출발물질로 하여 상기와 유사한 공정으로 제조가능하다.
따라서 본 발명에서는 상기 일반식 ( I )의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 제조방법으로 얻어진 일반식 (I) 화합물들은 P2)d 및 P2X3 수용체에 대한 강력한 길항하용을 나타내므로 Ρ2Χι 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 질환， 예를 들어， 퇴 행성 관절염， 류마티스 관절염， 천식 , 만성폐쇄성폐질환， 방광염 등의 만성 염증 질환; 신경 병증성통증， 이 질통， 당뇨성 신경장애증, 자발성통증， 과민성통증， 환지통， 복합부위통증증후군 등의 신경성 통증 질환 또는 동맥경화， 뇌졸중， 혈전증， 색전증, 심근경 색， 죽상경화증, 말초혈액순환장애 등의 혈소판 웅집관련 질환 등을 치료 또는 예방할 수 있는 치료제로서 유용함을 확인하였다.
따라서 , 상기 일반식 (I) 화합물을 유효성분으로 함유한， Ρ2Χι 및 P2¾ 수용체 활성에 기 인한 만성 염증 질환， 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집관련 질환의 치료 및 예방을 위한 약학조성물을 제공한다.
본원에서 정의되는 "PSXi 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 만성 염증 질환"은 예를 들어 , 퇴 행성 관절염， 류마티스 관절염， 천식， 만성폐쇄성폐질환， 방광염을 포함하며， ' 2¾ 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 신경성 통증 질환"은 예를 들어， 신경 병증성통증, 이 질통, 당뇨성 신경장애증， 자발성통증, 과민성통증， 환지통， 복합부위통증증후군 등을 포함하며， "PSXi 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 혈소판 웅집관련 질환"은 예를 들어， 동맥경화， 뇌졸중， 혈전증， 색전증， 심근경 색， 죽상경화증， 말초혈액순환장애 등을 포함한다. 따라서， 본 발명은 일반식 U )의 구조를 갖는 피리 딘 카르복실산계 화합물을 유효성분으로 포함하는 P2 및 P2¾ 수용체에 대한 길항제를 제공한다.
본 발명자는 신규한 피 리딘 카르복실산 계 화합물들이 P2 및 P2¾ 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타냄을 클론된 마우스 P2¾ 및 인간 P2X3 수용체로 발현된 개구리 난자 U /?OJ AS oocyte)에서 2-전극 전압 클램프 어세이법 (TEVC)을 이용하여 확인함으로서， 본 발명의 화합물들이 P2¾ 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 질환인 만성 염증 질환， 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집 관련 질환의 치료 및 예방 약제로서 개발가능성 이 높음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
또 다른 양태로서， 본 발명은 피리딘 카르복실산계 화합물을 포함하는， P2Xi 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 질환을 예방, 치료하기 위 한 약제학적 조성물과 피리딘 카르복실산계 화합물을 사용하여 상기 질병올 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 용어 "예방 "이 란 피 리딘 카르복실산계 화합물을 포함하는 조성물의 투여로 Ρ2Χι 및 P2X3 수용체 활성과 관련된 모든 질병의 발병을 억제시키거나 발병을 지 연하는 모든 행위를 말하며 , "치료 "란 상기 약제학적 조성물의 투여로 P2¾ 및 P2X3 수용체 활성과 관련된 모든 질병을 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 피리딘 카르복실산계 화합물을 포함하는 조성물 및 치료방법은 인간뿐만 아니라 P2 및 P2X3 수용체 활성과 관련된 모든 질병 이 발병할 수 있는 소， 말, 양， 돼지， 염소， 낙타， 영 양， 개， 고양이 등의 포유동물에 게도 사용될 수 있다.
또한， 본 발명은 일반식 ( I )의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물을 유효성분으로 포함하는 Ρ2Χι 및 P2X3 수용체 활성과 관련된 모든 질병의 치료 및 예방을 위한 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적 절한 담체, 부형제 또는 회석 제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 회석 제로는 락토즈， 덱스트로즈， 수크로스， 솔비를， 만니를， 자일리를， 에리스리를， 말티를, 전분， 아카시아 고무， 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트， 칼슘 실리 케이트, 셀를로즈， 메틸 셀를로즈， 미정질 셀를로스, 폴리비닐 피를리돈， 물， 메틸히드록시 벤조에 이트， 프로필히드록시 벤조에 이트， 탈크， 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은， 각각 통상의 방법에 따라 산제， 과립제 , 정제， 캡슐제， 현탁액， 에멀견， 시 럽 , 에어로졸 등의 경구형 제형， 외용제， 좌제 또는 멸균 주사용액의 형 태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상세하게는， 제제화할 경우에는 보통 사용하는 층진제， 증량제， 결합제 , 습윤제， 붕해제， 계면활성제 등의 희석 제 또는 부형 제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제， 산제, 과립제， 캡슐제 등이 포함되며， 이 러한 고형 제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면， 전분， 칼슘? 1"보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose), 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한， 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트， 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제， 내용액제， 유제， 시 럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 회석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 , 예를 들면 습윤제， 감미제， 방향제， 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제， 현탁제， 유제， 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제， 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜， 올리브 오일과 같은 식물성 기름， 에 틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위 텝솔 (witepsol), 마크로골， 트윈 (tween) 61, 카카오지， 라우린지， 글리세로젤라틴 둥이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중， 질병의 정도, 약물형 태， 투여경로 및 기간에 따라 다르지만， 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나， 바람직한 효과를 위해서， 본 발명의 화합물은 0.0001 - 100 mg/kg 으로， 바람직하게는 0.001 ~ 100 mg/kg 의 양을 일일 1 회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 화합물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 10 중량 «¾, 바람직하게는 0.001 ~ 1 중량 %의 양으로 존재하여야 한다.
또한， 본 발명 의 화합물의 약학적 투여 형 태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형 태로도 사용될 수 있고， 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 쥐 , 마우스, 가축， 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데， 예를 들면， 경구, 직장 또는 정맥， 근육, 피하， 자궁내 경막 또는 뇌 혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면， Ρ2Χι 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 만성 염증 질환， 신경성 통증 질환 또는 혈소판 웅집관련 질환의 예방 또는 치료방법올 제공한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면， 상기 만성 염증 질환은 퇴 행성 관절염， 류마티스 관절염 , 천식， 만성폐쇄성폐질환， 방광염 이고， 상기 신경성 통증 질환은 신경 병증성통증， 이 질통， 당뇨성 신경장애증, 자발성통증， 과민성통증， 환지통， 또는 복합부위 통증증후군이며 , 상기 혈소판 웅집관련 질환은 동맥경화， 뇌졸중， 혈전증， 색전증， 심근경 색， 죽상경화증， 또는 말초혈액순환장애이다. 【유리한 효과】
본 발명은 Ρ2 ^ 및 Ρ2Χ3 수용체 길항제로 유용한 신규한 피 리딘 카르복실산 계 화합물， 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물을 제공하는 것으로, 본 발명에 따른 화합물은 Ρ2¾ 및 Ρ2Χ3 수용체를 강력하게 길항하므로, P2Xj 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 질환인 만성 염증 질환 또는 신경성 통증 질환의 치료 및 예방을 위 한 약제로 이용가능하다.
【도면의 간단한 설명】
도 1 은 A 부분에서， 화합물 (24)의 마우스 P2¾ 수용체 -매개성 전류의 저해율을 나타낸 도이며 (대표적 인 내향성 전류는 마우스 Ρ2Χι 수용체 아형 (A)을 발현하는 아프리카 개구리
Figure imgf000024_0001
oocytes)에서의 2 가지 농도의 화합물 (24)의 조절 및 존재하에서 2 μΜ ATP 에 의해 방출된다. 마우스 P2¾ 수용체 (B) 및 인간 P2X3 수용체 (C)에 대한 화합물 24 (■), 28 (·), 및 iso- PPADS 3 (A)의 농도 -저해 곡선을 의미함. ATP 에 대한 연속선은 수학 공식 (/ = d + IC50/ )nH, )을 이용하여 맞추었고 여기에서 / 는 리간드 농도에 대한 실제 전류 (actual current) UX nH 는 힐 계수 (Hill coefficient,) 및 /max 은 최대 전류를 의미함).
도 2 은 A: 마우스 P2¾ 수용체에 대한 MRS2159 (歸， 36 (·), 38 (A), 및 39 (▼) 의 농도 -저해 곡선올 나타냄 . ATP 에 대한 연속선은 수학 공식 (/ =
/rnax/Cl + IC50/ )nH, )을 이용하여 맞추었고 여기에서 / 는 리간드 농도에 대한 실제 전류 (actual current) (L), nH 는 힐 계수 (Hill coefficient,) 및 /max 은 최대 전류를 의미함).
B: 인간 P2X3 수용체에 대한 A— 317491 (■), 36 (·), 38 (A), 및 39
(▼) 의 농도 -저해 곡선을 나타낸 도이다. ATP 에 대한 연속선은 수학 공식 (/ = d + IC50/ )nH, )을 이용하여 맞추었고 여기에서 / 는 리간드 농도에 대한 실제 전류 (actual current) (L nH 는 힐 계수 (Hill coefficient,) 및 / 은 최 대 전류를 의미함).
【발명의 실시를 위 한 형 태】
이하, 본 발명을 하기 실시 예에 의거하여 좀더 상세하게 설명하고자 한다. 단， 하기 실시 예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐， 본 발명의 범위가 이들 만으로 제한되는 것은 아니다.
참고예 1. 실험 준비 및 기기
1 - 1. 시 약 및 재료
본 실험에서 사용한 ATP (disodium salt), 피리독신 (Pyridoxine), 및 아조 커플링 반웅용 시 약은 회사 (Aldrich, St. Louis, MO 및 TCI, Tokyo)에서 구입하였다. 아닐린—2,5-디설폰산은 회사 (K & K Laboratories, Inc., Hollywood, CA)에서 구입하였다. 기타 시 약 및 용매는 분석급을 회사 (Merck, Darmstadt, Germany)에서 구입하였다. 작용제 및 길항제들은 매일 세포외 욕조용액에서 제조하여 스록용액 (10 mM, stored frozen)으로부터 제조하였다.
1 -2. 분석 방법
본 실험에서 사용한 분석용 TLC 는 미리 코팅된 유리 플레이트 (precoated silica glass plates, Merck silica gel 60, F254)에서 수행하고 UV 광선 (light)으로 시각화하거나 설폰산 염색시 약으로 염 색하였다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피는 (Flash column chromatography) 실리카 (silica, Merck, 70-230 mesh)로 수행하였다. 수소 핵자기 공명스펙트럼 (Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy)은 기기 (JEX)L JNM-LA 300WB spectrometer)로 측정하고 스펙트럼은 DMSO- /6.에서 수득하였다. 별달리 지 적하지 않는 한， 화학적 이동 (chemical shifts)은 내부 표준물질 (tetramethylsilane)로부터의 ppm 저자장 또는 DMSO (2.5 ppm)로부터의 상대적 ppm 으로 표시하였다. 데이터는 하기 한 바와 같이 표시함: 화학적 이동 (chemical shift), 다중도 (multiplicity) (s, singlet; d, doublet; t, triplet; m, multiplet; b, broad; app., apparent), 결합상수 (coupling constants), 및 통합 (integration). 질량분석기 (Mass spectroscopy)는 기기들 (MALDI-TOF 및 FAB instruments)으로 수행하였다. 순도 측정은 선형 경사 용매계 (linear gradient solvent systems)에서 컬럼 (Shimadzu Shim-pack C18 analytical column (250 mm 4.6 mm, 5 μιτι, 100 A)을 이용하여 기기 (Shimadzu SCL-10A VP HPLC system)로 측정하였다. 하나의 용매계 (A)는 0.1 M triethylammonium acetate buffer: CH3CN = 95:5 에서 40:60 으로 30 분간 유속량 (1 mL/min)이었다. 다른 용매계 (B)는 5 mM tetrabutylammonium phosphate buffer:CH3CN = 80:20 에서 40:60 으로 30 분간 유속량 (1 mL/min)이 었다.
인간 P2X3 수용체의 cRNA 는 인간 P2¾ 수용체의 cRNA 를 역 전사하여 수득하였고, 이는 독일 막스-플랑크 연구소 (Max-Plank Institute) 연구실 (Dr. W. Stuhmer 및 Dr. F. Soto)로부터 제공받았다. 마우스 P2¾ (clone ID: 4189541) 및 인간 P2X7 수용체 (clone ID: 5286944)의 전장 cDNAs 를 포함하는 EST 클론 (clones)은 회사 (Invitrogen, CA, U.S.A.)에서 구입하고 그 서 열은 DNA sequencing 으로 확인하였다.
1 -3. 약어
본 실험에서 사용한 약어의 정의는 하기와 같다.
ATPadenosine 5' -triphosphate
ΒζΑΤΡ3'一ᄋ一 (4— benzoyDbenzoyl adenosine 5'-triphosphate
DMEMDulbecco's Modified Eagle Medium
EDACl-ethyl-3-(3-dimethlyaminopropyl)carbodiimide
EDTAethylenediaminetetraacetic acid
HEKhuman embryonic kidney
HEPESN-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(4-butanesulfonic acid) HPLChigh-pressure liquid chromatography
iso-PPADSpyridoxal-phosphate-6-azophenyl-2',5'-disulfonic acid
KN621- [N,0-bis(l,5-isoquinolinesulphonyl)-N-methyl-L-tyrosyl]-4- phenylpiperizine
NMPN-methyl-2-pyrrolidinone
PPADSpyridoxalphosphate-6-azophenyl-2',4'-disulphonic acid
PyBOP(Benzotriazol- 1 -yloxy)tripyrrolidinophosphonium
Hexafluorophosphate
S ARs true ture - a c ti vity relationship
SPPSsolid phase peptide synthesis
TFAtrifluoroacetic acid
실시예 1. 3-(4-포르밀 -5-히드록시ᅳ 6-메틸피리딘 -3-일)프로판산 (13)의 제조
1— 1. 에틸 4-옥소펜트 -2-에놀레이트 (ethyl 4-oxopent-2-enoate) 중간체의 제조
소량의 디클로메탄 용매중 21.3 g (카르브에톡시메틸렌)트리페닐포스포란 ((carbethoxymethylene)triphenylphosphorane) 용액 (61.0 mmol)에 46.7 mL 수성 피루브알데히드 (pyruvaldehyde)(305.0 mmol)를 상온에서 서서히 적가하였다. 상기 흔합물을 30 mL 셰디메틸포름아미드로 회석시 키고， TLC 상으로 반웅 완료가 확인되기까지 교반하고， 300 ml 의 물을 첨가하고 700 ml 의 디클로로메탄으로 추출하였다. 상기 유기성 추출물을 물 및 염수로 연속적으로 세척하고， MgS04 으로 건조하고 감압하 증발하여 NMR 스펙트럼상에서
2 개의 이성 체 흔합물 C51 및 Z 이성체 ; 9: 1))로 구성된 것으로 확인된 오일상의 물질을 얻었다. 상기 흔합물을 플래쉬 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 (용출용매 : n-hexanes-ethyl acetate = 3:1)， ^ 이성체형 태의 에틸 4-옥소펜트- 2—에놀레이트를 분리하였다 (Rf 0.80 ： hexanes-ethyl acetate = 1 : 1). 분리 한 E 이성체는 NMR 의 J 결합 상수로 확인하였다 (E 이성체 J 결합 상수 = 12 ~ 18 Hz).
1H NMR (acetone-de): 1.4 (3H, t, J= 7.2 Hz, CH3), 2.3 (3H, s, C0CH3), 4.15 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 6.6 (1H, d, J = 15.0 Hz, =CH), 6.9 (1H, d, J = 15.0 Hz, =CH); Z isomer.' Rf 0.74 (hexane- ethyl acetate = 1:1); 6(acetone-d6) 1.3 (3H, t, / = 7.2 Hz, CH3), 2.3 (3H, s, C0CH3), 4.15 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 5.9 (1H, d, /= 12.0 Hz, =CH), 6.4 (1H, d, J= 12.0 Hz, =CH).
1 -2. (2,2,8—트리메틸 -4H_ [ 1,31디옥시노 [4,5-c]피 리딘 -5-일 )메탄을
( (2,2,8-Trimethyl-4H- [ l,3]dioxino[4,5-c]pyridin-5-yl)methanol (7 ) 중간체의 제조
20 g (0.1 mol) 피 리독신 및 244 mL (1.9 mol) 2,2-디메톡시프로판 흔합물에 화염 -건조시 킨 1 리터 3-구 플라스크에 90 g (0.4 mol) para- 를루엔설폰산을 첨가하였다. 이 흔합물을 상온에서 30 시간동안 교반하고 NaHC03 으로 중화시 키고 감압농축하였다. 디클로로메탄으로 추출한 후에， 상기 조합된 유기 층을 염수로 세척하고 MgS04 으로 건조， 여과， 농축 및 컬럼크로마토그래피으로 정제하여 (용매 : dichloromethane/methanol = 20: 1)을 수행하여 고체형 태의 표제물질인 (2,2,8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4，5- c]피리딘 -5-일)메탄올 (7)을 수득하였다 (수율: 65.7%)
¾ NMR (CDCls): δ 1.52 (6Η, s, 2xCH3), 2.34 (3H, s, CH3), 4.52 (2H, s, CH2), 4.91 (2H, s, CH2), 7.78 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 210.2 (M+ + 1).
1-3. (2，2，8ᅳ트리 메틸ᅳ 4H— [1,3]디옥시노 [4,5ᅳ c]피리딘— 5ᅳ카르브알데히드 (2,2,8- Trimethyl - 4H— [ 1 ,3 ] dioxino [ 4 , 5 - c ] pyridine - 5 -carbaldehyde ) (8) 중간체의 제조
50mL 무수 디클로메탄중 5 g (2,2,8-트리메틸 -4H- [1, 3]디옥시노 [4,5- c]피리딘 -5-일)메탄올 (7)의 교반용액 (23.9 mmol)에 피 리디늄 디크로메이트를 격 렬한 교반하에 첨가하였다. 하룻밤 동안 반웅시킨 후에 , 상기 흔합물을 메탄올로 샐라툼 베드 (celatum bed)으로 여과하였다. 상기 여과물을 진공하에 증발하고 컬럼크로마토그래피로 정제를 (전개용매 : n-hexanes/ethyl acetate = 3: 1) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 (2，2，8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5- c]피리딘 -5-카르브알데히드 (8)을 수득하였다 (수율 :67.5%).
¾ NMR (CDC13) δ 1.57 (6Η, s, 2xCH3), 2.51 (3H, s, CH3), 5.18 (2H, s, CH3), 8.48 (1H, s, H-6), 10.05 (1H, s, CHO);
MS (ESI): m/z = 208.0 (M+ + 1).
1—4. 에틸 3— (2,2,8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5-c]피 리딘 -5- 일 )아크릴레이트 ( Ethyl 3- (2,2,8- trimethyl - 4H— [ 1 , 3 ] dioxino [ 4， 5— c ] py r idin— 5-yl)acrylate (9) 중간체의 제조
무수 테트라히드로퓨란중 500 mg NaH 현탁액 ((16.9 mmol)에 i3 mL (16.8 mmol) 트리에틸포스포아세테이트를 적가하였다. 상기 흔합물은 수소가스가 방출되면서 명맥한 황색 용액으로 변화하였다. 5 분간 교반후, 40 mL 테트라히드로퓨란중 3.2g (2,2,8-트리메틸 -4H- [ 1, 3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5- 카르브알데히드 (8X15.3 mmol)을 첨가하고 반웅 용액을 1 시간동안 교반하였다. 상기 흔합물을 클로로포름 및 염수로 추출하였다. 상기 유기성 잔사를 조합하고 MgS04 으로 건조, 여과， 농축 및 컬럼크로마토그래피로 정 제를 (전개용매 : n- hexanes/ethyl acetate = 3: 1) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 에틸 3-(2，2，8- 트리메틸 -4H- [1, 3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)아크릴레이트 (9)을 수득하였다 (수율: 81.3%).
:H NMR (CDC13)5 1.33 (3H, s, CH3), 1.57 (6H, s, 2xCH3), 2.44 (3H, s, CH3), 4.28 (2H, q, J= 8.8 Hz, CH2), 4.93 (2H, s, CH2), 6.37 (1H, d, J= 16.6 Hz, CH), 7.54 (1H, d, J= 16.6 Hz, CH), 8.26 (1H, s, H-6); MS (ESI): m/z = 278.3 (M+ + 1).
1 -5. 3- (5ᅳ히드록시 -4— (히드록시메틸 )ᅳ 6-메틸피 리딘 -3- 일 )아크릴레이트 (Ethyl 3ᅳ ( 5ᅳ hydroxyᅳ 4 - (hydroxymethyl ) ~ 6ᅳ methylpyridin- 3 - yl ) acr vlate (10) 중간체의 제조
20 mL 10% 포름산 용액중 3 g 에 틸 3-(2ᅳ2，8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)아크릴레이트 9 (10.8 mmol)용액을 3 시간동안 환류시켰다. 상온에서 냉각시 킨 후， 상기 흔합물을 클로로포름 및 포화 NaHC03 으로 추출하였다. 상기 유기성 추출물을 조합하고 MgS04 으로 건조， 여과， 농축 및 컬럼크로마토그래피로 정제를 (전개용매 : dichloromethane/methanol = 10: 1) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 에틸 3- (5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -6—메틸피피딘— 3—일)아크릴레이트 (10)을
수득하였다 (수율: 97.8%). '
1H NMR (CDC13)5 1.35 (3H, s, CH3), 2.48 (3H, s, CH3), 4.28 (2H, q, J = 8.8 Hz, CH2), 5.12 (2H, s, CH2), 6.30 (1H, d, J= 16.6 Hz, CH), 7.67 (1H, d, J = 16.6 Hz, CH), 8.14 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 238.1 (M+ + 1).
1-6. 에틸 3- (5-히드록시 -4ᅳ (히드록시메틸 )ᅳ 6-메틸피리딘 -3- 일 )프로파노에 이트 (Ethyl 3 - ( 5 - hydroxy - 4 - ( hydroxymethyl ) - 6 - methylpyridin- 3 -yl )propanoate ( 11 ) 중간체의 제조
디클로로메탄중 2 g 에틸 3-(5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -6- 메틸피피딘 -3-일)아크릴레이트 (10) 용액에 (8.4 mmol) 0.5 g Pd/C 을 가하고 수소 대기하에 4 시간동안 교반하였다. 상기 흔합물을 샐라툼 베드 (celatum bed)를 통하여 여과하였다. 상기 여과물을 감압증발시키고 컬럼크로마토그래피로 정제를 (전개용매 : chloroform/methanol = 10: 1) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 에틸 3—(5-히드특시 -4- (히드록시메틸) -6-메틸피리딘 -3- 일)프로파노에 이트 (11)을 수득하였다 (수율: 89.2%)
XH NMR (CDC13) δ 1.23 (3Η, t, J = 7.1 Hz, CH3), 2.40 (3H, s, CH3), 2.50 (2H, t, J= 7.6 Hz, CH2), 2.80 (2H, t, J= 7.6 Hz, CH2), 4.10 (2H, q, J= 7.1 Hz, CH2), 4.99 (2H, s, CH2), 7.73 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 240.1 (M+ + 1).
1 -7. 3ᅳ (4-포르밀 ᅳ 5ᅳ히드록시 ᅳ 6ᅳ메틸피리 딘ᅳ 3ᅳ 일 )프로파노에 이트 ( 12 ) ( Ethyl 3- (4- formyl - 5 -hydroxyᅳ 6ᅳ methylpyridinᅳ 3ᅳ yQpropanoate (12) ) 중간체의 제조
50 mL 무수 디클로로메탄 중 1 g (4.2 mmol) 에틸 3-(5ᅳ히드록시 -4- (히드록시 메틸) -6-메틸피리딘—3-일)프로파노에 이트 (11)에 질소 대기하, 상온에서 2 시간동안 격 렬하게 교반하면서 활성화 망간 이산화물을 첨가하였다. 상기 흔합물을 셀라툼 베드 (celatum bed)를 통하여 여과， 감압증발하고 컬럼크로마토그래피로 정제를 (전개용매 : n-hexanes/ethyl acetate = 4: 1) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 에틸 3-(4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘- 3-일)프로파노에 이트 (12)을 수득하였다 (수율: 71.1%)
1H NMR (CDCls) δ 1.24 (3Η, t, J = 7.1 Hz, CH3), 2.51 (3H, s, CH3), 2.69 (2H, t, J= 7.6 Hz, CH2), 3.25 (2H, t, J= 7.6 Hz, CH2), 4.12 (2H, q, J= 7.1 Hz, CH2), 8.02 (1H, s, H-6), 10.46 (1H, s, CHO);
MS (ESI): m/z = 238.1 (M+ + 1).
1 -8. 에틸 3- (4-포르밀 -5-히드톡시 -6-메틸피리딘 -3-일 )프로파노익 산 (13 ) (Ethyl 3— (4— Formyl-5 -hydroxy- 6— methylpyridin- 3 -yl ) propanoic acid ( 13) ) 의 제조
메탄올중 5% KOH 용액을 330 mg 에틸 3-(4—포르밀 -5-히드록시 -6— 메틸피리딘 -3-일)프로파노에 이트 (12X1.4 mmol)을 1 시간 동안 격 렬하게 교반하면서 첨가하였다. 상기 반응 용매를 증발로 제거하고， 산물을 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 에틸 3-(4-포르밀—5—히드록시 -6-메틸피 리딘 -3-일)프로파노익 산 (13)을 수득하였다 (수율: 53.9%)
1H NMR (D20) δ 2.47 (3Η, s, CH3), 2.55 (2H, t, J= 7.5 Hz, CH2), 3.15 (2H, t, J= 7.5 Hz, CH2), 7.58 (1H, s, H-6), 10.44 (1H, s, CHO);
MS (ESI): m/z = 210.2 (M+ + 1).
실시예 2. 5-(2-카르복시에틸 )-3-히드록시 ᅳ 2-메틸이소니코틴산 (14)(5-(2- Carboxyethyl )— 3—hydroxy— 2— methylisonicotinic acid (14))의 제조
아세토니트릴중 0.2M DMF 용매증 177 mg 에 틸 3-(4-포르밀 -5- 히드록시 -6-메틸피리딘 -3-일)프로파노익 산 (13X0.8 mmol)을 3 시간동안 격 렬하게 교반하면서 520 mg (0.8 mmol) 옥손 (oxone)을 첨가하였다. 반웅 색이 황색에서 무색으로 변화되었다. 산물을 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하고 동결건조하여 고체형 태의 표제물질인 5-(2-카르복시에틸 )-3-히드록시 -2-메틸이소니크틴산 (14)을 수득하였다 (수율: 47.7%).
1H NMR (D20) δ 2.34 (3Η, s, CH3), 2.50 (2H, t, J= 7.5 Hz, CH2), 2.74 (2H, t, J= 7.5 Hz, CH2), 7.53 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 226.3 (M+ + 1).
실시예 3. (3-(2，2，8-트리메틸 -4H-[1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘ᅳ5-일)아크릴산 (15))(3-(2,2,8-Trimethy卜 4H- [l,3]dioxino[4,5-c]pyridin-5-yl)acrylic acid (15))의 제조
100 mL 메탄올중 50 mL 수성 5% KOH 용액에 3 g 에틸 3-(2，2，8- 트리 메틸 -4H- U, 3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)아크릴레이트 (9) (12.1 mmol)을 3 시간동안 격 렬하게 교반하면서 첨가하였다. 반웅용매를 감압농축하고 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하고 동결건조하여 고체형 태의 표제물질인 (3-(2，2，8-트리메틸 -4H-
[1，3 ]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)아크릴산 (15)을 수득하였다 (수율: 74.5%).
lH NMR (D20) δ 1.57 (6Η, s, 2xCH3), 2.38 (3H, s, CH3), 5.08 (2H, s, CH2), 6.43 (1H, d, J = 16.6 Hz, CH), 7.20 (1H, d, J = 16.6 Hz), 8.17 (1H, s, H— 6)；
MS (ESI): m/z = 250.2 (M+ + 1).
실시예 4. 3-(5-히드록시 -4ᅳ (히드록시메틸)ᅳ 6-메틸피리딘 -3-일)아크릴 산 ( 16) (3— (5— Hydroxy— 4 - (hydroxy methyl )—6— methylpyridin— 3— yl) acrylic acid (16)의 제조
메탄을중 수성 4N HC1 용액을 2 g 5-(2—카르복시에틸 )-3-히드록시 -2- 메틸이소니크틴산 (14X8.0 mmol)에 첨가하고 2 일간 교반하였다. 반응은 분석용 HPLC 시스템으로 검 색하였고 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 3— (5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -6—메틸피리딘 -3-일)아크릴 산 (16)을 수득하였다 (수율: 60.5%).
XH NMR (D20) δ 2.45 (3Η, s, CH3), 4.87 (2H, s, CH2), 6.43 (1H, d, J = 16.6 Hz, CH), 7.26 (1H, d, /= 16.6 Hz, CH), 7.98 (1H, s, H— 6);
MS (ESI): m/z = 210.1 (M+ + 1).
실시예 5. 3-(4ᅳ프로밀 -5-히드록시ᅳ 6-메틸피리딘 -3ᅳ일 )아크릴산 (17)(3ᅳ ( 4— Formyl― 5—hydroxy— 6— methylpyridin— 3— y 1 ) acrylic acid ( 17) )의 제조
메탄올중 수성 4N HC1 용액을 2 g 5— (2-카르복시에틸 )-3-히드록시— 2- 메틸이소니크틴산 (14X8.0 mmol)에 첨가하고 2 일간 교반하였다. 반응은 분석용 HPLC 시스템으로 검 색하였고 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 3-(4-프로밀 -5-히드록시 - 6-메틸피 리딘 -3-일)아크릴산 (17)을 수득하였다 (수율: 52.4%).
:H NMR (DMSO-i¾) δ 2.39 (3Η, s, CH3), 6.95 (1H, d, CH, J = 16.1 Hz), 7.58 (1H, d, CH, J= 16.1 Hz), 8.34 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 208.2 (M+ + 1).
실시예 6. 5- (2-카르복시비닐)ᅳ 3—히드록시 -2—메틸이소니코틴산 (18) (5-(2- Carboxyvinyl )― 3—hydroxy - 2— methylisonicotinic acid ( 18) )의 제조
메탄올중 수성 4N HC1 용액을 2 g 5-(2-카르복시에틸 )-3-히드록시 -2- 메틸이소니코틴산 (14X8.0 mmol)에 첨가하고 2 일간 교반하였다. 반응은 분석용 HPLC 시스템으로 검 색하였고 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 5—(2-카르복시비 닐 )-3- 히드록시 -2-메틸이소니코틴산 (18)을 수득하였다 (수율: 71.3%).
XH NMR (DMSO-i/e) δ 2.31 (3Η, s, CH3), 6.12(1H, d, CH, J = 16.8 Hz), 7.89 (1H, d, CH, J= 16.8 Hz), 8.76 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 224.2 (M+ + 1). 실시예 7. (Nᅳ벤질 -1-(2，2，8ᅳ트리메틸一 4H-[1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5— 일) 메탄아민 (19))(N-Benz^-l-(2,2,8-trimethy 4H-[l,3]dioxino[4,5- c]pyridin-5-yl) methanamine (19))의 제조
디클로로메탄중 1.0% 초산용액에 녹인 200 mg (2,2,8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5— c]피리딘 -5-카르브알데히드 (8)(1.0 mmol)용액에 126 iiL (1.2 mmol) 벤질아민을 첨가하고 30 분간 교반하였다. 90 mg NaBH3CN (1.4 mmol)을 반웅 흔합물에 첨가하고 4 시간동안 교반하였다. 상기 반웅 흔합물을 클로로포름 및 포화 NaHC03으로 추출하고 MgS04 으로 건조， 여과, 농축 및 컬럼크로마토그래피로 정제 (전개용매: dichloromethane/methanol = 30:1)를 수행하여 고체형태의 표제물질인 TV-벤질— 1-(2，2,8-트리메틸 -4H— [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일) 메탄아민 (19)을 수득하였다 (수율: 50.7%).
JH NMR (CDCls) δ 1.54 (6Η, s, 2xCH3), 2.39 (3H, s, CH3), 3.64 (2H, s, CH2), 3.78 (2H, s, CH2), 4.93 (2H, s, CH2), 7.25-7.40 (5H, m, phenyl), 7.92 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 299.4 (M+ + 1).
실시예 8. (에틸 3ᅳ (벤질 ((2，2，8-트리메틸一 4Hᅳ [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘ᅳ5- 일)메틸) 아미노)프로파노에이트 (20)(Ethyl 3-(benzyl((2,2,8-trimethyl-4H- [1,3] dioxino [ 4 , 5— c ] y ridin— 5— y 1 ) methyl ) amino )propanoate (20))의 제조
에탄올증 50 mg A-벤질 -1-(2，2，8-트리메틸 -4H-[1,3]디옥시노 [4,5- c]피리딘 -5-일) 메탄아민 (19) 용액 (0.2 mmol)에 37 uL (0.3 mmol) 에틸아세테이트를 첨가하고 상온에서 하룻밤동안 교반하였다. 상기 흔합물올 감압농축하고 컬럼크로마토그래피로 정제 (전개용매: chloroform/methanol = 50:1.)를 수행하여 고체형태의 표제물질인 (에틸 3- (벤질 ((2,2,8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)메틸) 아미노)프로파노에이트 (20)을 수득하였다 (수율: 34.6%).
¾ NMR (CDC13) δ 1.14 (3Η, t, J= 7.2 Hz, CH3), 1.45 (6H, s, 2xCH3), 2.31 (3H, s, CH3), 2.39 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 2.68 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2) , 3.36 (2H, s, CH2), 3.46 (2H, s, CH2), 4.01 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.69 (2H, s, CH2), 7.17-7.26 (5H, m, phenyl), 7.84 (1H, s, H-6);
MS (ESI): m/z = 399.5 (M+ + 1).
실시예 9. (3ᅳ (벤질 ((5-히드록시 -4ᅳ (히드록시메틸)ᅳ 6-메틸피리딘 -3-일)메틸) 아미노) 프로판노익산 (21))(3-(Benzyl((5-hydroxy-4— (hydroxymethyl)-6- methylpy ridin— 3— y 1 ) methyl ) amino) propanoic acid (21))의 제조
메탄올중 수성 4N HC1용액을 2 g 5-(2-카르복시에틸 )-3-히드톡시 -2- 메틸이소니크틴산 (14X8.0 mmol)에 첨가하고 2 일간 교반하였다. 반응은 분석용 HPLC 시스템으로 검색하였고 이온 -교환 수자 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형태의 표제물질인 (3- (벤질 ((5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -6-메틸피리딘 -3-일)메틸) 아미노) 프로관노익산 (21))을 수득하였다 (수율: 46.9%)
LH NMR (D20) δ 2.42C3H, s, CH3), 2.53 (2H, t, J =7 .2 Hz, CH2), 3.02 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 3.95 (2H, s, CH2), 4.62 (2H, s, CH2), 7.35-7.45 (5H, m, phenyl), 7.62 (1H, s, Hᅳ 6);
MS (ESI): m/z = 331.4 (M+ + 1).
실시예 1(). 3ᅳ (벤질 ((4-포르밀—5-히드록시 -6-메틸피리딘 -3-일)메틸)아미노) 프로파노익산 (22)(3-(Benzyl((4-formyl-5-hydroxy-6-methylpyridin-3- yl) methyl) amino) propanoic acid (22))의 제조
메탄올중 수성 4N HCl 용액을 2 g 5-(2-카르복시에 틸 )-3—히드록시 -2- 메틸이소니크틴산 (14X8.0 mmol)에 첨가하고 2 일간 교반하였다. 반웅은 분석용 HPLC 시스템으로 검 색하였고 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형태의 표제물질인 3- (벤질 ((4-포르밀 -5- 히드록시— 6-메틸피리딘 -3-일)메틸)아미노) 프로파노익산 (22)을 수득하였다 (수율: 34.5%).
:H NMR (CDC13) δ 2.47 (3Η, s, CH3), 2.51 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 2.78 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 3.61 (2H, s, CH2), 3.76 (2H, s, CH2), 7.24-7.33 (5H, m, phenyl), 8.01 (1H, s, Hᅳ 6), 10.21 (1H, s, CHO);
MS (ESI): m/z = 329.4 (M+ + 1).
실시예 11. 5- ((벤질 (2-카르보에틸)아미노)메틸)ᅳ 3-히드록시 -2- 메틸이소니코틴산 (23 ) (5 - ( (Benzyl(2-carboxyethyl)amino)methyl) -3- hydroxy— 2— methylisonicotinic acid (23))의 제조
메탄을중 수성 4N HC1 용액을 2 g 5-(2-카르복시에틸 )-3-히드록시—2- 메틸이소니크틴산 (14X8.0 mmol)에 첨가하고 2 일간 교반하였다. 반웅은 분석용 HPLC 시스템으로 검 색하였고 이온 -교환 수지 컬럼 크로마토그래피를 (Amberlite CG-50 resin 사용) 수행하여 고체형 태의 표제물질인 5— ((벤질 (2- 카르보에틸)아미노)메틸) -3-히드록시 -2-메틸이소니코틴산 (23)을 수득하였다 (수율: 42.6%)
XH NMR (D20) δ 2.58 (3Η, s, CH3), 2.55 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 2.82 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 3.71 (2H, s, CH2), 3.82 (2H, s, CH2), 7.24-7.33 (5H, m, phenyl), 8.01 (1H, s, Hᅳ 6);
MS (ESI): m/z = 345.4 (M+ + 1).
실시예 12. 아조기 포함 화합물들의 일반적 합성법 (화합물 24-29)
8 mg (0.1 mmol) NaN02 를 아닐린 유사체 (0.1 mmol) 및 1 mL H20 중 13 mg Na2C03 용액 (0.1 mmol)의 교반용액에 0 0C 에서 첨가하였다. 60 uL (0.3 mmol) 6 N HCl 을 적가하고 상기 흔합물을 0 0C 에서 5-10 분간 교반하였다. 1 mL H20 중 피 리독살 (pyridoxal)- 또는 피리독식 산 (pyridoxic acid)의 카르복산 유사체 (0.1 mmol)를 한번에 첨가하고 흔합물의 pH 를 IN NaOH (-300 uL)를 첨가하여 pH 10-11 으로 적정하였다. 황색에서 적 색으로 변화했고 (가끔 점차적으로) 이는 반웅이 생기는 것을 의미 한다. 0 °C 에서 30 분 및 25 0C 에서 30 분간 상기 흔합물올 교반한 후에， 물을 용출용매로 하여 (유속량: 0.5 mL/min) 이온 -교환 수지 컬럼크로마토그래피를 수행하여 (Amberlite CGᅳ 50 resin 사용; H+ form, 약산성 ) 수행하여 정제하였다. HPLC 상에서 단일 피크를 나타내는 적 색 분획을 회수하고 동결건조하여 95% 순도 이상을 갖는 목적물질들을 수득하였다.
12-1. 3ᅳ(2-((2，5-디설포페닐)디아제닐)" 4-포르밀 -5-히드록시 -6- 메틸피리딘 -3-일) 프로판 산 (24)(3-(2-((2,5-Disulfophenyl)diazenyl) -4- f ormyl― 5—hydroxy— 6― methy lpy ridin— 3— y 1 ) propanoic acid (24))의 제조.
상기 실시 예 12 의 일반적 합성 법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 3-(2-((2，5-디설포페닐)디아제닐) -4-포르밀— 5-히드록시 -6- 메틸피리딘 -3-일) 프로판 산 (24)을 수득하였다 (수율: 28.5%).
¾ NMR (D2O) δ 2.39 (3Η, s, CH3), 2.65 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 3.54 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 8.34 (IH, d, J = 8.1 Hz, phenyl), 8.62 (IH, d, J = 8.1 Hz, phenyl), 9.06 (IH, s, phenyl), 10.20 (IH, s, CHO);
MS (MALDI-TOF): m/z = 474.4 (M+ + 1).
12-2. (3-(2-카르복시에틸)ᅳ 2-((2，5-디설포페닐)디아제닐) -5-히드록시 -6- 메틸이소니코틴산 SXS-^-CarboxyethyD-Z- ^S- disulfophenyDdiazenyl)ᅳ 5ᅳ hydroxyᅳ 6ᅳ methylisonicotinic acid (25))의 제조.
상기 실시 예 12 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 3-(2-카르복시에틸 )-2-((2，5-디설포페닐)디아제닐) -5-히드록시 -6- 메틸이소니코틴산 (25)을 수득하였다 (수율: 32.4%)
lH NMR (D20) δ 2.74 (3Η, s, CH3), 2.85 (2H, t, J= 8.7 Hz, CH2), 3.84 (2H, t, J= 8.7 Hz, CH2), 8.03 (IH, d, J= 8.1 Hz, phenyl), 8.13 (IH, s, phenyl), 8.22 (IH, d, /= 8.1 Hz, phenyl);
MS (MALDI-TOF): m/z = 489.4 (M+ + 1).
12-3. 3-(4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸 -2-((4-설포페닐)디아제닐)피리딘- 3一일)프로판산 ( 26 ) ( 3 - ( 4 -Formyl- 5 -hydroxy- 6 -methyl- 2 - ( ( 4 - sulf ophenyl ) diazenyl ) pyridin— 3 - y 1 ) propanoic acid (26) )의 제조.
상기 실시 예 12 에 개시된 일반적 합성 법과 유사한 방법으로 고체형 태의 3-(4-포르밀 -5—히드록시 -6-메틸 -2-((4—설포페닐)디아제닐)피리딘 -3—
일)프로판산 (26)을 수득하였다 (수율: 26.2%)
¾ NMR (D20) δ 2.43 (3Η, s, CH3), 2.65 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 3.50 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 7.67 (2H, d, / = 8.4 Hz, phenyl), 7.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 10.29 (IH, s, CHO).
MS (MALDI-TOF): m/z = 394.3 (M+ + 1). 12-4. 3-(2-카르복시에틸 )-5-히드록시 -6-메틸 -2-((4-설포페닐)디아제닐) 이소니코틴산 (27)(3— (2ᅳ carboxyethyl)ᅳ 5ᅳ hydroxyᅳ 6ᅳ methylᅳ 2ᅳ ((4ᅳ sulf ophenyl ) diazenyl ) isonicotinic acid (27))의 제조.
상기 실시 예 12 에 개시된 일반적 합성법과 유사한 방법으로 고체형 태의
3- (2—카르복시에틸 )-5—히드록시— 6-메틸 -2-((4-설포페닐)디아제닐)
이소니코틴산 (27)을 수득하였다 (수율: 28.3%).
¾ NMR (D20) δ 2.65 (3Η, s, CH3), 2.73 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 3.68 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 7.79 (2H, d, J = 7.2 Hz, phenyl), 7.98 (2H, d, / = 7.2 Hz, phenyl);
MS (MALDI-TOF): m/z = 410.3 (M+ + 1).
12-5. 4-((3-(2-카르복시에틸 )— 4—포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘 -2-일) 디아제닐) 벤조산 (28)(4-((3-(2-carboxyethyl)-4-formyl-5-hydroxy-6- methylpyridin— 2— yl) diazenyl) benzoic acid (28))의 제조.
상기 실시 예 12 에 개시된 일반적 합성법과 유사한 방법으로 고체형 태의
4- ((3-(2—카르복시에틸 )-4-포르밀 -5-히드록시— 6-메틸피 리딘 -2-일) 디아제닐) 벤조산 (28)을 수득하였다 (수율: 32.5%).
XH NMR (D20) δ 2.53 (3Η, S, CH3), 2.62 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 3.75 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 7.94 (2H, d, J = 8.1 Hz, phenyl), 8.06 (2H, d, J = 8.1 Hz, phenyl), 10.52 (IH, s, CHO).
MS (MALDI-TOF): m/z = 358.3 (M+ + 1).
12- 6. 3-(2-카르복시에틸 )-2-((4ᅳ카르복시페닐)디아제닐)ᅳ 5ᅳ히드록시 -6ᅳ 메틸이소니코틴산 (29) (3- (2 -carboxyethyl) -2 - ( ( 4 - carboxyphenyl) diazenyl ) - 5― hydroxy - 6— me thy lisonicotinic acid (29))의 제조.
상기 실시 예 12 에 개시된 일반적 합성 법과 유사한 방법으로 고체형 태의 3-(2-카르복시에틸) -2-((4-카르복시페닐)디아제닐) -5-히드록시 -6- 메틸이소니코틴산 (29)을 수득하였다 (수율: 24.5%)
lU NMR (D20) δ 2.43 (3Η, s, CH3), 2.58 (2H, t, J= 7.5 Hz, CH2), 3.52 (2H, t, J = 7.5 Hz, CH2), 7.63 (2H, d, J = 8.1 Hz, phenyl), 7.98 (2H, d, J = 8.1 Hz, phenyl).
MS (MALDI-TOF): m/z = 374.3 (M+ + 1).
실시 예 13. 3,4-디카르복시피리딘 유도체들의 일반적 제조방법 (화합물 35—41, 50,51).
13- 1. 아미드 화합물 중간체의 제조 (32a-i)
150ml 디클로로메탄 중 다양한 카르복실산들 화합물들, 즉 2- phenylacetic acid (31a), 3-phenylpropanoic acid (31b), 3ᅳ (ᅳ 4methoxyphenyl)propanoic acid (31c) cinnamic acid (31d), 3一 ((4methoxycarbonyl)phenyl)propanoic acid (31e), 3ᅳ (3ᅳ methoxyphenyDpropanoic acid (31f), 3-(2-methoxyphenyl)propanoic acid (31g) 3 , 3 -diphenylpropanoic acid (31h), 2-naphtyl acetic acidOli) (39.0 mol) 및 6 g (39.0 mmol) L-알라닌 에틸 에테르 용액에 15 g (78.0 mmol) EDCI [1- ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide]을 도입하고 트리에틸아민 (39.0 mmol)을 30 분동안 적가하였다. 이 흔합물을 상온에서 12 시간동안 교반하였다. 반웅후， 흔합물을 탄산나트륨으로 중화시키고 물 및 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 회수하고 포화 Na2S04 로 처치하였다. 여과후， 유기성 추출물을 감압농축하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 (전개용매: n-hexanes/ethyl acetate = 1:1) 하기 중간체들을 제조하였다.
2-페닐아세틸아미노-프로판 산 에틸 에스테르 (32a)(2-Phenylacetylamino- propionic acid ethyl ester (32a).
수율: 97.4%;
1H-NMR (CDC13) δ 1.22 (3H, t, / = 7.2 Hz, CH3) 1.33 (3H, d, / = 7.2 Hz, CH3), 3.59 (2H, s, CH2), 4.13 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.54 (IH, q, J= 7.2 Hz, CH), 6.12 (IH, d, J= 6.3 Hz, NH), 7.30 (2H, s, phenyl- IH), 7.32 (2H, s, phenyl-2H), 7.35 (IH, s, pheny卜 3H);
MS (ESI): m/z = 236.1 (M+ + 1).
2-(3-페닐-프로피오닐아미노) -프로판산 에틸 에스테르 (32b)(2-(3-phenyl- propiony lamino )—propionic acid ethyl ester (32b)).
수율: 92.3%;
:H-NMR (CDCls) δ 1.24 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.32 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 2.48 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 2.94 (2H, t, J= 8.1 Hz, CH2), 4.14 (2H, d, J= 6.9 Hz, CH2), 4.54 (IH, m, CH), 6.12 (IH, d, J= 6.6 Hz, NH), 7.18 (IH, s, phenyl- IH), 7.20 (IH, s phenyl-2H), 7.21 (IH, s, phenyl-3H), 7.25 (IH, s, phenyl-4H), 7.28 (IH, s, phenyl- 5H);
MS (MALDI-TOF): m/z = 248.4 (M+ + 1).
2-[3-(4-메록시 -페닐)ᅳ프로피오닐아미노]ᅳ프로판산 에틸 에스테르 (32c). (2— [3— (4 - Methoxy - phenyl )—propiony lamino ]— propionic acid ethyl ester (32c))
수율: 95.6%;
-NMR (CDCI3) δ 1.25 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.33 (3H, d, J = 6.9 Hz, CH3), 2.48 (2H, t, J= 5.1 Hz, CH2), 2.89 (2H, t, J= 7.5 Hz, CH2), 3.78 (3H, s, CH30), 4.15 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.52 (IH, m, CH), 5.95 (IH, d, J = 5.4 Hz, NH), 6.81 (2H, d, J = 7.2 Hz, phenyl-lH), 7.10 (2H, d, J= 9.0 Hz, phenyl- 2H),
MS (MALDI-TOF): m/z = 279.3 (M+ + 1).
2-(3-페닐 -아크릴로아미노) -프로판산 에틸 에스테르 (32d). (2-(3-Phenyl- acroloylamino)—propionic acid ethyl ester (32d)).
수율: 81.3%； ^-NMR (CDCI3) δ 1.30 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.49 (3H, d, J = 6.9 Hz, CH3), 4.22 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.72 (IH, m, CH), 6.27 (IH, d, J = 6.0 Hz, NH), 6.43 (IH, d, J= 15.6 Hz, CH), 7.37 (3H, phenyl- IH), 7.51 (2H, phenyl-2H), 7.63 (IH, d, J= 15.6 Hz, CH);
MS (ESI): m/z = 248.2 (M+ + 1).
4-[2-(l-에록시카르보닐 -에틸카르바모일)ᅳ에틸] _벤조산 메틸 에스테르 (32e)(4— [2— (1- Ethoxycarbonyl—ethylcarbamoyl )― ethyl ]—benzoic acid methyl ester) (32e)
수율: 81.3%;
-NMR (CDCI3) δ 1.25 (3H, t, 7.2 Hz, CH3), 1.33 (3H, d, J = 6.9 Hz, CH3), 2.48 (2H, t, J 5.1 Hz, CH2), 2.89 (2H, t, J 7.5 Hz, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 4.15 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.52 (IH, m, CH), 5.95 (IH, d, J= 5.4 Hz, NH), 6.81 (2H, d, J= 7.2 Hz, phenyl-lH), 7.10 (2H, d, J= 9.0 Hz, phenyl— 2H);
MS (ESI): m/z = 307.5 (M+ + 1).
2-[3一(3-메특시 -페닐) -프로피오닐아미노] -프로피은산 에틸 에스테르 (32f). (2- [3-(3-Methoxy— phenyl)— propionylamino] -propionic acid ethyl ester (32f)).
수율: 67.2%;
XH-NMR (CDCI3) δ 1.22 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.35 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 2.51 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 2.93 (2H, t, J= 8.1 Hz, CH2), 3.80 (3H, s, CH3O), 4.17 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.55 (IH, m, CH), 5.99 (IH, d, J = 5.4 Hz, NH), 6.80 (2H, m, phenyl- IH), 7.22 (2H, m, phenyl-2H);
MS (ESI): m/z = 280.3 (M+ + 1).
에틸 2-(3-(2-메록시페닐)프로판아미도)프로파노에이트 (32g). (Ethyl 2-(3- (2- methoxyphenyDpropanamido ) propanoate (32g)).
수율: 79.8%;
-NMR (CDCI3) δ 1.22 (3H, t, /= 7.2 Hz, CH3), 1.35 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 2.53 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 2.88 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 4.15 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.53 (IH, m, CH), 5.96 (IH, d, J = 5.4 Hz, NH), 6.82-7.19 (4H, m, phenyl);
MS (ESI): m/z = 280.4 (M+ + 1).
에틸 2-(3，3-디페닐프로판아미도)프로파노에이트 (32h) (Ethyl 2-(3,3ᅳ diphenylpropanamido )propanoate (32h)).
수율: 65%；
^-NMR (CDCI3) δ 1.12 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 1.22 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.91 (2H, m, CH2), 4.12 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.43 (IH, m, CH), 4.55 (IH, m, CH), 5.8 (IH, d, J= 7.2 Hz, NH), 7.15-7.29 (顧， m, phenyl); MS (ESI): m/z = 325.7 (M+ + 1).
에틸 2— (2ᅳ (나프탈렌ᅳ 2ᅳ일 )아세트아미도)프로파노에이트 (32i). (Ethyl 2ᅳ (2ᅳ ( naphthalen - 2 - yl ) acetamido)propanoate ) (32i).
수율: 73.6%;
^-NMR (CDCls) δ 1.20 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.31 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 3.74 (2H, s, CH2), 4.12 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.57 (IH, m, CH), 6.01 (IH, d, J = 6.8 Hz, NH), 7.38-7.50 (3H, m, naphtyl), 7.73-7.85 (4H, m, naphtyl);
MS (ESI): m/z = 285.8 (M+ + 1).
13-2. 옥사졸 화합물 중간체의 제조 (33a-i)
무수 클로로포름 중 2 g (14.0 mmol) 화합물들 32aᅳ i 및 4g (14.0 mmol) 오산화 인 흔합물올 4 시간동안 환류반응하였다. 상온에서 넁각후， 흔합물을 50 mL of 20% 수성 KOH 용액으로 처치하고 30 분간 격렬하게 교반하였다. 상기 흔합물을 물 및 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기잔사를 회수하고 Na2S04 을 처리하였다. 여과후， 유기성 추출물을 감압농축하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 (전개용매: n-hexanes/ethyl acetate = 3: 1) 하기 중간체들을 제조하였다.
2-벤질 -5-에톡시 -4—메틸-옥사졸 (33a). ( 2 -Benzyl- 5 - ethoxy-4 -methyl- oxazole (33a)).
수율: 94.1%;
-NMR (CDCI3) δ 1.29 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.01 (3H, s, CH3), 3.94 (2H, s, CH2), 4.05 (2H, q, J= 6.9 Hz, CH2), 7.23 (IH, s, phenyl- IH), 7.26 (IH, s, phenyl-2H), 7.28 (IH, s, phenyl— 3H), 7.31 (IH, s, phenyl— 4H), 7.34 (IH, s, phenyl- 5H);
MS (MALDI- TOF): m/z =216.9 (M+ + 1).
5-에록시 -4-메틸 -2-펜에틸-옥사졸 (33b) (5-Ethoxy-4-methyl-2- phenethyl― oxazole (33b)).
수율: 94.4%;
— NMR (CDCI3) δ 1.34 (3H, t, J = 6.0 Hz, CH3), 2.02 (3H, s, CH3), 2.90 (2H, t, J= 6.0 Hz, CH2), 4.02 (2H, t, J= 6.0 Hz, CH2), 7.22 (IH, s, phenyl— IH), 7.23 (IH, s, phenyl-2H), 7.27 (IH, s, phenyl— 3H), 7.28 (IH, s, phenyl— 4H), 7.30 (IH, s, phenyl-5H);
MS (MALDI- TOF): m/z = 232.0 (M+ + 1).
5-에특시 -2- [2-(4-메록시—페닐) -에틸 ]ᅳ4-메록시 -옥사졸 (33c) ( 5ᅳ Ethoxy - 2- [2-(4 - methoxy - phenyl ) - ethyl ] - 4 - methoxy - oxazole (33c))
수율: 91.0%; 9ί
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960600/0l0ZaM/X3d -NMR (CDCI3) δ 1.20 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.92 (3H, s, CH3), 3.33 (2H, d, J= 8.4 Hz, CH2), 3.93 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.53 (IH, t, J= 8.0 Hz, CH), 7.15-7.28 (10H, m, phenyl);
MS (MALDI-TOF): m/z = 307.8 (M+ + 1).
5-에톡시 -4-메틸 -2- (나프탈렌 -2-일메틸)옥사졸 (33i) (5-ethoxy-4- methyl-2- (naphthalen-2 -ylmethyDoxazole (33i) )
수율: 98%；
-NMR (CDCI3) δ 1.29 (3H, t, J = 6.8 Hz, CH3), 2.01 (3H, s, CH3), 4.04 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.10 (2H, s, CH2), 7.39-7.46 (3H, m, naphtyl), 7.71-7.81 (4H, m, naphtyl);
MS (MALDI-TOF): m/z = 262.3 (M+ + 1).
13-3. 3,4-디메틸에스테르 피리딘 화합물 중간체의 제조 (34a-i)
750 mg (3.4 mmol) 화합물 33a-i 에 1 mL (1.9 mmol) 디메틸말리에이트 ( dimethyl maleate)를 적가하고 교반하에 5 시간동안 환류시키고 상온에서 넁각시켰다. 흔합물을 HC1 가스로 포화시키고 감압농축하였다. 얻어진 하기 화합물 중간체들 (34a-g)을 제조하였다.
2—벤질 -5-히드록시 -6-메틸-피리딘 -3,4—디카르복실 산 디메틸 에스테르 (34a) ( 2 -Benzyl- 5—hydroxy— 6 -methyl- pyridine - 3,4 - dicarboxylic acid dimethyl ester (34a))
수율: 59.1%；
1H-NMR (CDC13) δ 2.84 (3H, s, CH3), 3.76 (3H, s, CH30), 4.00 (3H, s, CH3O), 4.42 (2H, s, CH2), 7.24 (IH, s, phenyl- IH), 7.27 (IH, s, phenyl-2H), 7.28 (IH, s, phenyl-3H), 7.30 (IH, s, phenyl-4H), 7.31 (IH, s, phenyl-5H);
MS (MALDI-TOF): m/z = 314.9 (M+ + 1).
5-히드록시 -6-메틸 -2-펜에틸-피리딘 -3,4-디카르복실 산 디메틸 에스테르 (34b). (5- Hydroxy -6- methylᅳ 2— phenethyl -pyridine -3, 4- dicarboxylic acid dimethyl ester (34b))
수율: 30.1%;
— NMR (CDCI3) δ 2.64 (3H, s, CH3), 3.10 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.35 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 4.00 (3H, s, CH30), 4.10 (3H, s, CH30), 7.20 (IH, s, phenyl- IH), 7.22 (IH, s, phenyl-2H), 7.24 (IH, s, phenyl-3H), 7.26 (IH, s, phenyl-4H), 7.29 (IH, s, phenyl-5H);
MS (ESI): m/z = 330.4 (M+ + 1).
5-히드록시 -2- [2-(4-메특시 -페닐) -에틸]ᅳ 6-메틸—피리딘 -3，4- 디카르복실산 디메틸 에스테르 (34c). ( 5 -Hydroxy-2 - [ 2 - ( 4 -methoxy- phenyl ) - ethyl ] - 6 - methyl -pyridine—3,4- dicarboxylic acid dimethyl ester (34c) ).
수율: 37.2%; -NMR (CDCI3) δ 3.02 (3H, s, CH3), 3.04 (2H, t, J= 4.8 Hz, CH2), 3.32 (2H, t, J= 4.8 Hz, CH2), 3.79 (2H, s, CH2), 4.00 (3H, s, CH30), 4.08 (3H, s, CH30), 6.83 (2H, d, J= 8.7 Hz, phenyl-lH), 7.27 (IH, d, /= 5.4 Hz, phenyl- 2H);
MS (ESI): m/z = 360.4 (M+ + 1).
5-히드록시 -6-메틸ᅳ 2-스티릴-피리딘 -3,4-디카르복실산 디메틸 에스테르 (34d)(5-Hydroxy-6-methyl-2-styryl-pyridine-3,4-dicarboxylic acid dimethyl ester (34d))
수율: 23.3%;
^-NMR (CDCI3) δ 2.49 (3H, s, CH3), 3.83 (6H, s, 2xCH30), 6.82 (IH, d, J = 15.4 Hz, olefin— CH), 7.20 (3H, m, phenyl- IH), 7.38 (2H, d, J= 5.4 Hz, phenyl-2H), 7.72 (IH, t, J= 15.6 Hz, olefin— CH);
MS (ESI): m/z = 328.2 (M+ + 1).
5ᅳ히드록시 -2- [2-(4-메록시카르보닐-페닐)ᅳ에틸]ᅳ 6-메틸-피리딘 -3,4- 디카르복실산 디메틸 에스테르 (34e) (5-Hydroxy-2- [2-(4- methoxycarbonyl—phenyl )—ethyl]― 6—methyl—pyridine— 3 ,4— dicarboxylic acid dimethyl ester (34e)).
수율: 33.4%;
-NMR (CDCI3) δ 2.57 (3H, s, CH3), 2.90 (2H, t, J= 9.0 Hz, CH2), 3.04 (2H, t, J= 9.3 Hz, CH2), 3.86 (3H, s, CH30), 3.91 (3H, s, CH30), 3.95 (3H, s, COOCHs), 7.25 (2H, d, J = 8.7 Hz, phenyl- IH), 7.94 (2H, d, J = 6.6 Hz, phenyl-2H);
MS (ESI): m/z = 388.4 (M+ + 1).
5-히드록시 -2- [2-(3-메톡시—페닐) -에틸 ] -6—메틸-피리딘 -3,4- 디카르복실산 디메틸 에스테르 (340. ( 5 -Hydroxy- 2 - [ 2 - ( 3 -methoxy- phenyl)—ethyl]—6— methyl— yridine-3, — dicarboxylic acid dimethyl ester (34f))
수율: 7.2%;
^-NMR (CDCI3) δ 3.00 (3H, s, CH3), 3.10 (2H, t, J = 3.9 Hz, CH2), 3.35 (2H, t, J = 7.8 Hz, CH2), 3.86 (2H, s, CH2), 3.98 (3H, s, CH30), 4.10 (3H, s, CH3O), 6.78 (IH, dd, J= 7.5 Hz, 8.1 Hz, phenyl- IH), 6.90 (lh, d, J二 7.5 Hz, phenyl-2H), 7.00 (IH, s, phenyl— 3H), 7.21 (IH, t, J= 8.1 Hz, phenyl— 4H);
MS (ESI): m/z = 360.1 (M+ + 1).
디메틸 5_히드록시 _2-(2-메톡시펜에틸)ᅳ 6-메틸피리딘 -3,4-디카르복실레이트 (34g). ( Dimethyl 5一 hydroxy—2— ( 2 -methoxyphenethyl) - 6 -methylpyridine - 3,4- dicarboxylate (34g))
수율: 23.2%; 1H-NMR (CDCI3) δ 2.58 (3H, s, CH3), 2.92 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 2.99 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.83 (3H, s, CH30), 3.86 (3H, s, COOCH3), 3.94 (3H, s, COOCH3), 6.84-7.21 (4H, m, phenyl), 10.55 (IH, s, OH);
MS (ESI): m/z = 340.4 (M+ + 1).
디메틸 2-(2,2-디페닐에틸)ᅳ 5-히드록시 -6-메틸피리딘 -3,4-디카르복실레이트 (34h)( Dimethyl 2— ( 2， 2 - diphenylethyl )ᅳ 5— hydroxy- 6― methylpyridine—3,4- dicarboxylate(34h) )
수율: 21%；
1H-NMR (CDCls) δ 2.46 (3Η, s, CH3), 3.37 (2H, t, J = 8.0 Hz, CH2), 3.75 (3H, s, COOCH3), 3.88 (3H, s, COOCH3), 7.10—7.24 (IH, m, phenyl), 10.47 (IH, s, OH);
MS (ESI): m/z = 406 (M+ + 1).
디메틸 5-히드록시 -2-(2-메록시펜에틸)ᅳ 6-메틸피리딘— 3,4-디카르복실레이트 (34i) ( Dimethyl 5― hydroxy— 2— ( 2 - methoxyphenethyl )— 6— methylpyridine― 3,4— dicarboxy late (34i)).
수율: 23.2%;
1H-NMR (CDCI3) δ 2.54 (3H, s, CH3), 3.72 (3H, s, COOCH3), 3.92 (3H, s, COOCH3), 4.21 (2H, s, CH2), 7.35-7.48 (3H, m, naphtyl), 7.62-7.78 (4H, m, naphtyl), 10.57 (IH, s, OH);
MS (ESI): m/z = 366.4 (M+ + 1).
13-4. 3,4-디카르복시피리딘 화합물의 제조 (35ᅳ 41， 50, 51)
1 g (3.2 mmol) 화합물들 34a-i 에 20 mL 수성 20% KOH 용액을 첨가하여 6 시간동안 격렬하게 교반하였다. 상기 흔합물을 이온 -교환 수지 컬럼크로마토그래피를 수행하여 (Amberlite CG-50 resin 사용) 정제하여 하기 목적물질들인 화합물 35-41， 50, 51 을 각각 수득하고 순도는 분석용 HPLC 시스템으로 측정하였다.
2-벤질 -5-히드록시 -6-메틸-피리딘 -3，4-디카르복실산 (35)( 2 -Benzyl- 5- hydroxy— 6—methyl—pyridine—3,4— dicarboxylic acid (35))
수율: 65.9%;
1H-NMR (CDC13) δ 2.28 (3H, s, CH3), 3.91 (3H, s, CH30), 7.11 (IH, s, phenyl- IH), 7.13 (IH, s, phenyl-2H), 7.16 (IH, s, phenyl-3H), 7.18 (IH, s, phenyl-4H), 7.20 (IH, s, phenyl-5H);
MS (ESI): m/z = 286.1 (M+ + 1)；
원소분석 : (C15H13N05) C, H, N.
5-히드록시 -6-메틸 -2-펜에틸-피리딘 -3，4-디카르복실산 (36)( 5-Hydroxy- 6 - methyl - 2 - phenethyl -pyridine—3,4— dicarboxylic acid (36))
수율: 69.7%; 1H-NMR (CDCI3) δ 2.31 (3H, s, CH3), 2.84 (4H, m, 2xCH2), 7.18 (IH, s, phenyl- IH), 7.22 (IH, s, phenyl-2H), 7.24 (IH, s, phenyl-3H), 7.26 (IH, s, phenyl-4H), 7.29 (IH, s, pheny卜 4H), MS (ESI): m/z = 300.1 (M+ + 1)；
원소분석 : (C16H15N05) C, H, N.
5-히드록시 -2-[2-(4-메톡시 -페닐)에틸 ] -6-메틸-피리딘 -3,4-디카르복실산 (37) (5- Hydroxyᅳ 2ᅳ [2ᅳ (4ᅳ methoxy -phenyl) ethyl ]ᅳ 6ᅳ methyl -pyridine - 3,4— dicarboxylic acid (37))
수율: 74.6%;
^-NMR (CDCI3) δ 2.25 (3H, s, CH3), 2.80 (4H, m, 2xCH2), 3.80 (3H, s, CH3O), 6.91 (2H, d, J= 8.7 Hz, phenyl- IH), 7.21 (2H, d, J= 9.0 Hz, phenyl— 2H), MS (ESI): m/z = 332.3 (M+ + 1)；
원소분석 : (C17H17N06) C, H, N.
5-히드록시 -6-메틸 -2-스티릴-피리딘 -3,4-디카르복실산 (38)(5-Hydroxy- 6― methyl— 2— sty ry 1― pyridine—3,4— dicarboxylic acid (38))
수율: 56.0%;
:H-NMR (CDCI3) δ 2.42 (3H, s, CH3), 7.11 (IH, t, /= 16.5 Hz, olefin- CH), 7.30 (IH, t, J = 16.5 Hz, olefin-CH), 7.28 (3H, m, phenyl- IH), 7.55 (2H, d, J= 7.2 Hz, phenyl-2H), MS (ESI): m/z = 298.1 (M+ + 1)；
원소분석 : (C16H13N05) C, H, N.
2-[2-(4-카르복시 -페닐) -에틸 ]—5—히드록시 -6-메틸-피리딘 -3,4- 디카르복실산 (39) ( 2 - [ 2 - ( 4 -Carboxy-phenyl) - ethyl] - 5 -hydroxy- 6 - methyl—pyridine—3,4— dicarboxylic acid (39)).
수율: 83.8%;
-匪 R (CDCI3) δ 2.38 (3Η, s, CH3), 2.94 (4Η, m, 2xCH2), 7.22 (2H, d, J= 8.1 Hz, phenyl- IH), 7.72 (2H, d, J= 8.1 Hz, phenyl— 2H);
MS (ESI): m/z = 346.3 (M+ + 1)；
원소분석 : (C17H15N07) C, H, N.
5-히드록시— 2-[2-(3-메특시—페닐)ᅳ에틸]ᅳ 6-메틸-피리딘ᅳ 3,4- 디카르복실산 (40). ( 5-Hydroxy-2 - [ 2 - ( 3 -methoxy-phenyl) -ethyl] -6 - methyl—pyridine— 3 ,4— dicarboxylic acid (40))
수율: 59.3%;
^-NMR (CDCI3) δ 2.34 (3H, s, CH3), 2.87 (4H, m, 2xCH2), 3.74 (3H, s, CH3O), 6.77 (3H, m, phenyl- IH), 7.24 (2H, m, phenyl— 2H);
MS (ESI): m/z = 332.3 (M+ + 1)；
원소분석 : (C17H17N06) C, H, N.
5-히드록시 -2-[2-(2-메특시 -페닐) -에틸 ] _6-메틸-피리딘 -3,4- 디카르복실산 (41) (5—Hydroxyᅳ 2ᅳ [2ᅳ (2ᅳ methoxyᅳ phenyl)— ethyl]ᅳ 6ᅳ methyl-pyridine - 3 ,4 - dicarboxylic acid (41)) 수율: 71.8%;
1H— NMR (DMSO-cfe) δ 2.99 (3H, s, CH3), 2.86 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 2.89 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 3.77 (3H, s, CH30), 6.88 (IH, t, J = 7.2 Hz, phenyl- IH), 6.96 (IH, dd, J= 0.9 Hz, 0.9 Hz, phenyl-2H), 7.11 (IH, dd, J= 1.8 Hz, 1.8 Hz, phenyl-3H), 7.19 (IH, s, phenyl-5H);
MS (ESI): m/z = 332.3 (M+ + 1)；
원소분석 : (C17H17N06) C, H, N.
5ᅳ히드록시 -6ᅳ메틸ᅳ 2ᅳ (나프탈렌 -1ᅳ일메틸)피리딘—3,4ᅳ디카르복실산 (50) (5— Hydroxy—6— methyl— 2— ( naphthalene一 1一 y line thy 1 ) pyridine—3,4—
dicarboxylic acid (50))
수율: 54.5%;
1H-NMR (MeOH-d4) δ 2.36 (3H, s, CH3), 4.22 (2H, s， CH2), 7.34 (4H, m, naphtyl-4H), 7.71 (3H, m, pheny卜 3H);
MS (ESI): m/z = 337.3 (M+ + 1)；
원소분석： (C19H15N05) C, H, N.
2-(2，2,ᅳ디페닐에틸 )5-히드록시 -6-메틸피리딘 -3,4-디카르복실산 (51) (2- (2,2,- diphenylethyl )5- hydroxyᅳ 6ᅳ methylpyridine -3,4- dicarboxylic acid (51))
수율: 55.6%;
^-NMR (MeOH-d4) δ 2.36 (3H, s, CH3), 3.38 (2H, d, J = 8.0 Hz, phenyl— 2H), 4.74 (H, t, J= 8.0 Hz, CH), 7.19 (10H, m, diphenyl-10H);
MS (ESI): m/z = 377.4 (M+ + 1)；
원소분석 : (C22H19N05) C, H, N.
실시예 14. 4ᅳ아세틸ᅳ 3-카르복시피리딘 유도체들의 일반적 제조방법 (화합물 44-49)
14-1. 4-아세틸 -3-메틸에스테르 피리딘 중간체의 제조 (43a-g)
상기에서 제조한 옥사졸 유도체 중간체들 즉， 화합물들 33a-f (8.0 mmole) 및 2 g (12.0 mmol) 에틸 4—옥소펜트 -2-에놀레이트를 서로 잘 흔합하고 10-14 시간동안 55—60oC 로 가열하였다. 중간체들 (Diels-Alder 부가물)을 25 mL 에탄올에 용해시키고 0°C 로 넁각시켰다. HC1 가스를 20 분 동안 반웅흔합물에 통과시키고 반웅 흔합물을 0-10°C 에서 약 30 분 및 상온에서 1 시간동안 교반하였다. 상기 반웅 흔합물을 100 mL of 8% 수성 탄산 나트륨 용액에 가하고 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 농축하고 조 산물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 하기 화합물 중간체들을 (43aᅳ g) 수득하였다.
에틸 4-아세틸 -2-벤질 -5-히드록시 -6-메틸니코티네이트 (43a) (Ethyl 4ᅳ acetyl― 2—benzyl—5- hydroxy—6— methylnicotinate (43a))
수율: 22.9%; Ή-NMR (CDCI3) δ 1.17 (3H, t, J = 6.9 Hz, CH3), 2.55 (3H, s, CH3- pyridine), 2.59 (3H, s, CH3CO), 3.21 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 3.58 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 4.43 (2H, q, J= 6.9 Hz, CH20), 7.17-7.45 (5H, m, phenyl), 11.34 (IH, s, OH);
MS (FAB+ ): m/z = 314.3 (M+ + 1).
에틸 4—아세틸 -5-히드록시 -6-메틸 -2—펜에틸니코티네이트 (43b) (Ethyl 4- acetyl -5— hydroxy -6— methyl -2— henethylnicotinate (43b))
수율: 9.5%;
1H-NMR (CDCI3) δ 1.28 (3H, t, J = 6.9 Hz, CH3), 2.52 (3H, s, CH3- pyridine), 2.56 (3H, s, CH3CO), 3.00 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 3.23 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 4.41 (2H, q, J= 6.9 Hz, CH20), 7.18-7.30 (5H, m, phenyl), 11.42 (IH, s, OH);
MS (MALDI-TOF): m/z = 328.4 (M+ + 1).
에틸 4-아세틸 -5-히드록시 -2-(4-메특시펜에틸 )—6-메틸니코티네이트
(43c) (Ethyl 4 -acetyl- 5- hydroxyᅳ 2ᅳ ( 4ᅳ methoxyphenethyl )-6- methylnicotinate (43c))
수율: 12.8%；
^-NMR (CDCI3) δ 1.34 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.52 (3H, s, CH3— pyridine), 2.56 (3H, s, CH3CO), 2.94(2H, d, J= 7.2 Hz, CH2), 3.03 (2H, d, J = 7.2 Hz, CH2), 3.80 (3H, s, CH30), 4.35 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH20), 6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl- 1H+ 5H), 7.11 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl-2H+ 4H), 11.38 (IH, s, OH);
MS (ESI): m/z = 358.3 (M+ + 1).
(E)-에틸 4-아세틸—5-히드록시 -6-메틸 -2-스티릴니코티네이트 (43d) ((E)- ethyl 4— acetyl— 5— hydroxy - 6— methyl— 2— styry lnicotinate (43d))
수율: 14.2%；
1H-NMR (CDC13) δ 1.20 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.89 (3H, s, CH3- pyridine), 2.66 (3H, s, CH3CO), 4.10 (3H, q, J= 7.2 Hz, CH20), 7.26-7.40 (3H, m, phenyl-2H+ 3H+ 4H), 7.65 (IH, d, J = 7.2 Hz, phenyl- IH), 7.67 (IH, d, J = 7.2 Hz, phenyl- 5H), 7.96 (IH, d, J = 15.9 Hz, =CH), 8.01 (IH, d, J = 15.9 Hz, =CH);
MS (ESI): m/z = 326.2 (M+ + 1).
에틸 4-아세틸 -5-히드록시 ᅳ 2-(3-메톡시펜에틸 )-6-메틸니코티네이트 (43e) (Ethyl 4— acetyl- 5- hydroxy -2— (3— methoxyphenethyl )-6- me thy lnicotinate (43e)).
수율: 9.5%;
^-NMR (CDCI3) δ 1.21 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.85 (3H, s, CH3- pyridine), 2.60 (3H, s, CH3CO), 2.98 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.43 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.78 (3H, s, CH30), 6.79-6.84 (3H, m, phenyl- 1H+ 2H+ 3H), 7.31 (1H, s, phenyl-5H), 11.28 (1H, b, OH);
MS (ESI): m/z = 357.4 (M+ + 1).
에틸 4-아세틸 -5_히드록시— 2-(2-메특시펜에틸)ᅳ 6-메틸니코티네이트 (43f) ( Ethyl 4— acetyl- 5—hydroxy -2— (2- methoxyphenethyl )—6—methylnicotinate (43f))
수을: 12.8%；
^-NMR (CDCls) δ 1.34 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.51 (3H, s, CH3- pyridine), 2.56 (3H, s, CH3CO), 2.96 (2H, t, J 6.9 Hz, CH2), 3.40 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 3.81 (3H, s, CH30), 6.85-7.26 (4H, m, phenyl- 1H+ 2H+ 3H+ 4H), 11.35 (1H, b, OH);
MS (ESI): m/z = 357.4 (M+ + 1).
14ᅳ 2. 4-아세틸 -3-카르복시 피리딘 화합물들의 제조 (44—49)
상기에서 제조한 유도체 중간체들 즉， 화합물들 43aᅳ f (0.84 mmole)을 메탄올중 40 mL 5% KOH 을 첨가하고 2—3 시간동안 상온에서 교반하였다. 상기 반웅 흔합물을 1: 1 HC1 으로 산성화시키고 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고 농축하였다. 조 산물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (전개용매 : ethyl acetate/n-hexanes solvent system) 하기 화합물들을 (44-49) 수득하였다.
4—아세틸 -2-벤질 -5-히드록시 -6-메틸니코틴산 (44)(4-acety卜 2-benzyl-5- hydroxy-6— methylnicotinic acid (44).
수율: 82.1%；
^-NMR (DMSO-i/e) δ 2.55 (3H, s, CH3-pyridine), 2.59 (3H, s, CH3CO), 3.21 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 7.17-7.45 (5H, m, phenyl), 11.30 (1H, s, OH);
MS (FAB+ ): m/z = 286.2 (M+ + 1)；
원소분석 : (C16H15N04) C, H, N.
4-아세틸 -5ᅳ히드록시 -6—메틸 -2-펜에틸니코틴산 (45)(4-acetyl-5— hydroxy— 6— methyl— 2— henethylnicotinic acid (45))
수율: 78.9%;
1H-NMR (DMS0-i¾) δ 2.52 (3H, s, CH3— pyridine), 2.56 (3H, s, CH3CO), 3.00 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.23 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2) 7.18-7.30 (5H, m, phenyl), 11.42 (1H, s, OH);
MS (ESI): m/z = 300.2 (M+ + 1)；
원소분석 : (Ci7H17N04) C, H, N.
4_아세틸 _5_히드록시 _2_(4_메톡시펜에틸)ᅳ 6-메틸니코틴산 (46)(4-acetylᅳ
5— hydroxy - 2 - ( 4 -methoxyphenethyl ) - 6—methylnicotinic acid (46) )
수율: 89.8%; Ή-NMR (DMSO-o δ 2.52 (3H, s, CH3— pyridine), 2.56 (3H, s, CH3CO), 2.94C2H, d, J= 7.2 Hz, CH2), 3.03 (2H, d, J = 7.2 Hz, CH2), 3.80 (3H, s, CH30), 6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl- 1H+ 5H), 7.11 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl-2H+ 4H), 11.38 (IH, s, OH);
MS (ESI): m/z = 330.4 (M+ + 1)；
원소분석 : (C18H19N05) C, H, N.
(E)-4-아세틸 -5-히드록시 -6-메틸 -2-스티릴니코틴산 (47) ((E)-4-acetyl- 5 -hydroxy— 6― methyl— 2— styry lnicotinic acid (47))
수율: 83.6%;
1H-NMR (DMSO-i/6) δ 1.89 (3H, s, CH3-pyridine), 2.66 (3H, s, CH3CO), 7.26-7.40 (3H, m, phenyl-2H+ 3H+ 4H), 7.65 (IH, d, J= 7.2 Hz, phenyl- IH), 7.67 (IH, d, J = 7.2 Hz, phenyl-5H), 7.96 (IH, d, J = 15.9 Hz, =CH), 8.01 (IH, d, J= 15.9 Hz, =CH);
MS (ESI): m/z = 298.2 (M+ + 1);
원소분석 : (C17H15N04) C, H, N.
(E)-4-아세틸 -5-히드록시 -2-(3-메톡시스티릴)ᅳ 6-메틸니코틴산 (48)( (E)- 4― acetyl― 5— hydroxy— 2ᅳ ( 3ᅳ methoxy styry 1 )ᅳ 6ᅳ methylnicotinic acid (48)) 수율: 69.9%;
^-NMR (DMSO-i¾) δ 1.85 (3Η, s, CHg-pyridine), 2.60 (3H, s, CH3CO), 2.98 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 3.43 (2H, t, J= 7.2 Hz, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 6.79-6.84 (3H, m, phenyl- 1H+ 2H+ 3H), 7.31 (IH, s, phenyl-5H), 11.28 (IH, b, OH);
MS (ESI): m/z =330.2 (M+ + 1)；
원소분석 : (C18H19N05) C, H, N.
(E)-4-아세틸 -5-히드록시 -2-(2—메특시스티릴 )-6-메틸니코틴산 (49) ((E) - 4― acetyl一 5— hydroxy—2— (2— methoxy sty ryl )一 6一 methylnicotinic acid (49)) 수율: 75.2%;
1H— NMR (DMSO-i¾) δ 2.51 (3H, s, CH3- yridine), 2.56 (3H, s, CH3CO), 2.96 (2H, t, J= 6.9 Hz, CH2), 3.40 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 3.81 (3H, s, CH3O), 6.85-7.26 (4H, m, phenyl- 1H+ 2H+ 3H+ 4H), 11.35 (IH, b, OH), MS (ESI): 330.4 (M+ + 1)；
원소분석 : (C18H19N05) C, H, N.
실시예 15. 4-포르밀 -3ᅳ카르복시피리딘 유도체들의 일반적 제조방법 (화합물 61,64)
15-1. 디메틸 5- [벤질옥시 ] -2- [2-메톡시페닐] -6-메틸피리딘 -3,4- 디카르복시레이트 (Dimethyl 5 - [ benzyloxy ] - 2 - [ 4 - methoxyphenethy 1 ] - 6 - methy lpyridine -3,4- dicarboxylate ) 중간체의 제조 (52) 무수 아세톤 중 480 mg (1.4 mmol) 화합물 34d 에 192 uL (1.7 mmol) 벤질브로마이드 (benzyl bromide)를 적가하고 2 시간동안 환류시키고 상온에서 넁각시켰다ᅳ 암모늄클로라이드 (NH4C1)로 중화를 시킨 후 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기잔사를 회수하고 Na2S04 을 처리하였다. 여과 후， 유기성 추출물을 감압농축하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 (전개용매: n-hexanes/ethyl acetate = 3: 1) 하기 중간체를 제조하였다.
수율: 83.5%,
-NMR (CDCls) δ 2.56 (3Η, s, CH3— pyridine), 2.94 (2H, m, CH2), 3.18 (2H, m, CH2), 3.78 (3H, s, CH30), 3.83 (3H, s, CH30), 3.85 (3H, s, CH30), 4.95 (2H, s, CH2— benzyl), 6.83 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 7.16 (2H, d, J= 8.8 Hz, phenyl), 7.41 (5H, m, phenyl),
MS (ESI): m/z = 449.5 (M+ + 1)，
원소분석 : (C27H26N06) C, H, N.
15-2. (5ᅳ [벤질옥시 ]ᅳ 2- [4-메톡시페네틸 ] _6-메틸피리딘ᅳ 3,4-디일)디메탄올 ({5— [ benzyloxy ]—2— [4— methoxyphenethyl )一 6一 methylpyridine—3,4—
diyDdimethanol) 중간체의 제조 (53)
무수 THF(tetrahydrofuran) 중 20 mg (0.04 mmol) 화합물 52 에 12 uL (0.26 mmol) 리튬알루미늄하이드라이드 (LiAlH4)를 적가하고 0 °C 에서 2 시간동안 교반시켰다. 암모늄클로라이드 (NH4C1)로 중화를 시킨 후 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기잔사를 회수하고 Na2S04 을 처리하였다. 여과 후， 유기성 추출물을 감압농축하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 (전개용매: chloroform/methanol = 100: 1) 하기 중간체를 제조하였다.
수율: 47.5%，
1H-NMR (CDC13) δ: 2.54 (3Η, s, CH3— pyridine), 2.95 (2H, m, CH2), 3.10 (2H, m, CH2), 3.76 (3H, s, CH30), 4.55 (2H, s, CH2OH), 4.68 (2H, s, CH2OH), 4.91 (2H, s, CH2— benzyl), 6.78 (2H, d, J= 8.8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 7.41 (5H, m, phenyl), MS (ESI): m/z = 394.4 (M+ + 1)， 원소분석 : (C24H27N04) C, H, N.
15-3. (5-히드록시 -2- [4-메톡시페네틸 ] ~6 메틸피리딘 -3,4-디일)디메탄올 피리딘 ({5— hydroxy—2— [4— methoxyphenethyl ] - 6— methylpyridine—3,4— diyDdimethanol) 중간체의 제조 (54)
무수 메탄올 중 65 mg (0.16 mmol) 화합물 53 에 20 mg (0.26 mmol) Pd/C 을 가하고 0 0C 에서 수소 대기하에 15 분동안 교반시켰다. 상기 흔합물을 세라툼 베드 (celatum bed)를 통하여 여과하였다. 상기 여과물을 감압증발시키고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법을 수행하여 (전개용매 : chloroform/methanol = 50: 1) 하기 중간체를 제조하였다.
수율: 90%， ^- MR (CDCI3) δ: 2.47 (3H, s, CH3— pyridine), 2.88 (2H, m, CH2), 3.01 (2H, m, CH2), 3.76 (3H, s, CH30), 4.36 (2H, s, CH2OH), 4.98 (2H, s, CH2OH), 6.75 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 6.95 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl),
MS (ESI): m/z = 304.4 (M+ + 1)，
원소분석 : (C17H21N04) C, H, N.
15-4. 6— (4-메톡시페네틸 )-2,2，8-트리메틸 -4H-[1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘-
5ᅳ일 메탄올 ((6-(4-methoxyphenethyl)-2,2,8-trimethyl-4H-
[l,3]dioxino[4,5-c]pyridin-5-yl) methanol 중간체의 제조 (55)
상기 실시 예 1-2 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 62%,
^-NMR (CDCI3) δ 1.55 (6H, s, 2CH3), 2.41 (3H, s, CH3— pyridine), 2.92 (2H, m, CH2), 3.01 (2H, m, CH2), 3.75 (3H, s, CH30), 4.31 (2H, s, CH2OH), 4.88 (2H, s, CH2OH), 6.77 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), MS (ESI): m/z = 344.4 (M+ + 1)，
원소분석 : (C20H25NO4) C, H, N.
15-5. 6-(4-메톡시페네틸 )— 2,2,8-트리메틸 -4H-[1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘- 5-카르브 알데히드 6-(4-methoxyphenethyl)-2,2,8-trimethyl— 4H-
[l,3]dioxino[4,5-c]pyridine-5- carbaldehyde 중간체의 제조 (56)
상기 실시 예 1-3 의 일반적 합성 법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 96%,
^-NMR (CDCI3) δ 1.55 (6Η, s, 2CH3), 2.47 (3H, s, CH3— pyridine), 2.94 (2H, m, CH2), 3.30 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH30), 5.08 (2H, s, CH2OH), 6.78 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.03 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 10.19 (H, s, CHO), MS (ESI): m/z = 342.2 (M+ + 1),
원소분석： (C20H23NO4) C, H, N.
15-6. (E)-에틸 3-(6-(4—메톡시페네틸)ᅳ 2,2,8-트리메틸ᅳ 4H-
[1,3]디옥시노 [4,5-c] 피리딘 -5-일)아크릴레이트 {(E)-ethyl 3ᅳ (6ᅳ (4ᅳ methoxyphenethyl )-2,2,8- trimethylᅳ 4H - [l,3]dioxino[4,5-c]pyridin-5— yQacrylate} 중간체의 제조 (57)
상기 실시 예 1-5 의 일반적 합성 법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 93%,
^-NMR (CDCI3) δ 1.32 (3Η, t, J二 7.2 Hz CH3), 1.55 (6H, s, 2CH3), 2.42 (3H, s, CH3— pyridine), 2.88 (2H, m, CH2), 2.97 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 4.25 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.75 (2H, s, CH2OH), 5.81 (1H, d, J = 16.4 Hz, =CH), 6.77 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.54 (1H, d, J= 16.4 Hz, =CH),
MS (ESI): m/z = 412.3 (M+ + 1)，
원소분석 : (C24H29N05) C, H, N.
15-7. (E)-에틸 3-(5-히드톡시 -4-히드록시메틸 -2-(4-메톡시페네틸 )-6- 메틸피리딘 -3-일)아크릴레이트 {(E)-ethyl 3-(5-hydroxy-4- ( hydroxymethyl ) - 2 - ( 4—methoxyphenethyl) -6—methylpyridin— 3— yDacrylate } 중간체의 제조 (58)
상기 실시 예 1-6 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 83%,
^-NMR (CDC13) δ 1.30 (3Η, t, J = 7.2 Hz CH3), 2.45 (3H, s, CH3- pyridine), 2.82 (2H, m, CH2), 2.87 (2H, m, CH2), 3.76 (3H, s, CH30), 4.21 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.90 (2H, s, CH2OH), 5.61 (1H, d' J= 16.4 Hz, =CH), 6.75 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 6.99 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.54 (1H, d, J = 16.4 Hz, =CH),
MS (ESI): m/z = 372.1 (M+ + 1)，
원소분석 : (C21H25N05) C, H, N.
15-7. 에틸 3-(5-히드록시— 4- (히드록시메틸)ᅳ 2-(4-메톡시페네틸 )ᅳ6- 메틸피리딘 -3-일)프로파노에이트 {ethyl 3- (5-hydroxy-4- (hydroxymethyl) - 2— ( 4—methoxyphenethyl)― 6—methylpyridin— 3—yOpropanoate } 중간체의 제조 (59)
상기 실시 예 1-6 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 84%,
^-NMR (CDCI3) δ 1.18 (3Η, t, J = 7.2 Hz CH3), 2.31 (2H, t, J = 7.6 Hz, CH2), 2.45 (3H, s, CH3-pyridine), 2.75 (2H, t' J = 7.6 Hz, CH2), 2.82 (2H, m, CH2), 2.91 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH30), 4.05 (2H, q, J= 7.2 Hz, CH2), 4.94 (2H, s, CH2OH), 6.78 (2H, d, J= 8.8 Hz, phenyl), 7.54 (2H, d, J= 8.8 Hz, phenyl), MS (ESI): m/z = 373.9 (M+ + 1),
원소분석 : (C21H27N05) C, H, N.
15-8. 에틸 3-(4-포르밀 -5-히드톡시— 2-(4-메톡시페네틸 )-6-메틸피리딘 -
3ᅳ일 )프로파노에이트 {ethyl 3—(4—formy卜 5— hydroxy— 2一(4一 methoxyphenethyl ) - 6 - methylpyridin- 3 -yOpropanoate } 중간체의 제조 (60) 상기 실시 예 1-7 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 81%, -NMR (CDCI3) δ 1.21 (3H, t, J = 7.2 Hz CH3), 2.40 (2H, t, J = 8.0 Hz, CH2), 2.52 (3H, s, CH3-pyridine), 2.98 (4H, m, 2CH2), 3.10 (2H, t, J = 8.0 Hz, CH2), 3.77 (3H, s, CH30), 4.11 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.78 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 10.42 (IH, s, CHO). MS (ESI): m/z = 371.9 (M+ + 1),
원소분석 : (C2iH25N05) C, H, N.
15-9. 3ᅳ (4—포르밀 -5-히드록시 -2-(4—메톡시페네틸 )-6ᅳ메틸피리딘 -3- 일)프로파노익산 { 3 - ( -formyl- 5 -hydroxy- 2 - ( -methoxyphenethyl) -6- methy lpyridin— 3 - y 1 ) propanoic acid} 화합물의 제조 (61)
상기 실시 예 1-8 의 일반적 합성 법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 화합물을 제조하였다.
수율: 32%,
^-NMR (CDCI3) δ 2.43 (2Η, t, J = 8.4 Hz, CH2), 2.52 (3H, s, CH3— pyridine), 2.98 (4H, m, 2CH2), 3.08 (2H, t, /= 8.4 Hz, CH2), 3.76 (3H, s, CH30), 6.78 (2H, d, J= 8.8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, /= 8.8 Hz, phenyl), 10.41 (IH, s, CHO). MS (ESI): m/z = 343.9 (M+ + 1)，
원소분석 : (C19H21N05) C, H, N.
15-9. (E)-3-(6一 (4-메톡시페네틸 )-2,2,8一트리메틸 -4H-[1,3]디옥시노 [4,5- c]피리딘 -5-일) 아크릴산 {(E)-3-(6-(4-methoxyphenethyl)-2,2,8— trimethyl - 4H - [ 1 , 3 ] dioxino [4,5-c]pyridin-5-yl)acrylic acid} 중간체의 제조 (62)
상기 실시 예 1-8 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 90%，
-NMR (CDCI3) δ 1.55 (6Η, s, 2CH3), 2.43 (3H, s, CH3— pyridine), 2.89 (2H, m, CH2), 3.02 (2H, m, CH2), 3.75 (3H, s, CH30), 4.77 (2H, s, CH2), 5.84 (IH, d, J= 16.4 Hz, =CH), 6.77 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.0 Hz, phenyl), 7.62 (IH, d, J = 16.4 Hz, =CH). MS (ESI): m/z = 381.9 (M+ - 1),
원소분석 : (C22H25N05) C, H, N.
15-10. (E)-3— (5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -2-(4-메톡시페네틸 )-6- 메틸피리딘 -3—일) 아크릴산 {(E)-3-(5-hydroxy-4— (hydroxymethyl)-2- ( 4-methoxyphenethyl ) -6 -methylpyridin- 3 -yQacrylic acid} 중간체의 제조 (63)
상기 실시 예 1-5 의 일반적 합성 법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 43%, NMR (CDCI3) δ 2.37 (3H, s, CH3-pyridine), 2.70 (2H, m, CH2), 2.81 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH30), 4.72 (2H, s, CH2), 5.67 (IH, d, J= 16.4 Hz, =CH), 6.65 (2H, d, J = 8.0 Hz, phenyl), 6.95 (2H, d, J = 8.0 Hz, phenyl), 7.43 (IH, d, J= 16.0 Hz, =CH),
MS (ESI): m/z = 342.9 (M+ - 1)，
원소분석 : (C19H2iN05) C, H' N.
15-11. (E)-3-(4-포르밀 -5-히드록시 -2-(4-메톡시페네틸 )-6-메틸피리딘 - 3ᅳ일 ) 아크릴 산 (64) {(E)-3-(4-formyl-5-hydroxy-2-(4- methoxyphenethy 1 ) - 6 - methylpyridin -3— yl) aery lie acid} 화합물의 제조 (64)
상기 실시 예 1-7 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 화합물을 제조하였다.
수율: 27%，
1H-NMR (CDCI3) δ 2.59 (3Η, s, CH3-pyridine), 2.93 (2H, m, CH2),
3.03 (2H, m, CH2), 3.75 (3H, s, CH30), 5.73 (IH, d, J = 16.0 Hz, =CH), 6.76 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.73 (IH, d, J = 16.0 Hz, =CH), 10.01 (IH, s, CHO),
MS (ESI): m/z = 339.7 (M+ - 1)，
원소분석 : (C19H19N05) C, H, N.
15-12. 6-(4-메톡시페네틸 )-2,2,8-트리메틸— 4Hᅳ [1,3]디옥시노 [4,5- c]피리딘- 5 카르복실산 {6-(4-methoxypheiiethyl)-2,2,8-1:rime1:hy卜 4H- [l,3]dioxino[4,5-c] pyridine - 5 - carboxylic acid} 중간체의 제조 (65)
상기 실시 예 2 의 일반적 합성 법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 80%,
1H-NMR (CDCI3) δ 1.55 (6Η, s, 2CH3), 2.47 (3H, s, CH3— pyridine), 2.93 (2H, m, CH2), 3.11 (2H, m, CH2), 3.76 (3H, s, CH30), 5.07 (2H, s, CH2OH), 6.77 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 7.01 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl),
MS (ESI): m/z = 358.2 (M+ + 1)，
원소분석 : (C20H23NO5) C, H, N.
15-13. 5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -2-(4—메톡시페네틸 )-6-메틸니코틴산 { 5—hydroxy -4— ( hydroxymethyl )— 2— ( 4— methoxyphenethyl )一 6一
methylnicotinic acid} 중간체의 제조 (66)
상기 실시 예 1-6 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 중간체를 제조하였다.
수율: 80%,
^-NMR (CDCI3) δ 2.47 (3Η, s, CH3— pyridine), 2.94 (2H, m, CH2), 3.30 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH30), 5.08 (2H, s, CH2OH), 6.78 (2H, d, J =
8.4 Hz, phenyl), 7.03 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), MS (ESI): m/z = 318.3 (M+ + 1)，
원소분석 : (C27H29N05) C, H, N.
15-14. 4-포르밀 -5-히드록시 -2— (4-메톡시페네틸 )-6-메틸니코틴산 {4- formyl -5— hydroxy— 2-(4- methoxyphenethyl )—6— me thy lnicotinic acid} 화합물의 제조 (67)
상기 실시 예 1-7 의 일반적 합성법에 개시된 방법과 유사한 방법으로 고체형 태의 화합물을 제조하였다.
수율: 27%,
^-NMR (CDC13) δ 2.59 (3Η, s, CH3-pyridine), 2.93 (2H, m, CH2), 3.03 (2H, m, CH2), 3.75 (3H, s, CH30), 6.76 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J= 8.4 Hz, phenyl), 10.03 (1H, s, CHO),
MS (ESI): m/z = 316.7 (M+ - 1),
원소분석 : (C17H17N05) C, H, N.
실험예 1. 수용체 길항작용 시험
상기 실시 예에서 준비된 화합물들의 (1) 재조합 마우스 Ρ2Χι 및 인간 P2X3 수용체에 대한 길항 활성 및 (2) 인간 P2X7 수용체에서의 에티디움 (Ethidium+ ) 축적에 미치는 영향올 시험하기 위하여 문헌들에 개시된 측정 방법을 웅용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Song-Yi Lee et al. 2006).
1-1. 재조합 마우스 P2X1 및 인간 P2X3 수용체에 대한 길항 활성
아프리카 개구리 난자 (Xenopus oocytes)를 문헌에 개시된 방법에 따라 얻어 수확하였다 (Harald S. et al. 1998).
여포제거 난자에 마우스 P25d 및 인간 P2X3 수용체 cRNA 를 세포질적으로 각각 주사하고 (40 nL, 1 ug/mL), 24 시간동안 18 °C 에서 바쓰 용액 (Barth's solution)에서 배양하고 전기 생리학적 실험에 사용 전까지 4 0C 에서 12 일간까지 보관하였다. ATP-활성화 막 전류 (Vh = -70 mV)를 2-전극 볼티지— 클램프 기법 (two一 electrode voltage -clamp technique; Axoclamp 2B amplifier)을 이용하여 cRNA-주사 난소에서 기록하였다. 볼티지 기록 (1-2 ΜΩ tip resistance) 및 전류—기록용 미세전극 (5 ΜΩ tip resistance)에 3.0 M KCl 을 채웠다. 난소를 전기 생리학적 챔버에 보관하고 링거 액 (5 mL/min, at 18 °C; (mM) NaCl, 110； KCl, 2.5； HEPES, 5； BaCl2) 1.8, 함유, pH 7.5 로 적정 )로 절취하였다. ATP 를 난소로부터 60—120 초간 절취하고 20 분 이상 세척하였다. 저해 곡선을 위하여 , 데이터를 pH 7.5 에서 ATP 에 의해 야기되는 전류를 정상화하였다. 시험용 물질들을 ATP 노출 전에 20 분간 첨가하였다: 모든 펩티드를 그 효과의 변환성을 시험하였다. 50% 까지 ATP 반웅을 저해하는 데 요구되는 농도 (IC50)를 수학 공식 (log(///max -i), 여 기에서 / 는 길항제 존재시 ATP 에 의해 발생되는 전류임 )을 이용하여 구성되는 힐 공식 (Hill plots)으로부터 얻었다. 데이터는 만자의 서로 상이 한 배치 (batches)로부터 얻은 데이터로 평균 土 SEM (n=4)로 표시되 었다.
1-2. 인간 P2X7 수용체에서 에티듐 (Ethidium+ ) 축적 시험
인간 배아 신장세포인 인간 P2X7-발현 HEK293 세포를 단층배양물로 10% 우태아 혈청을 함유한 DMEM 에서 5 > C02. 가습 대기하의 37 °C에서 배양하였다. 세포를 Trypsin/EDTA 용액 처치로 수확하고， 원심분리 법 (200 g for 5 min)으로 모았다.
상기 세포들을 (mM) HEPES 10, KC1 140, glucose 5， EDTA 1 (pH 7.4), 및 에티듐 브로미드 (100 μΜ)가 추가된 시험용 완층액에서 2.5xl06cells/mL 의 농도에서 재현탁하였다. 세포 현탁물을 P2X105 세포 /웰에서 2X7 수용체 작용제 , ATP 또는 BzATP 을 함유한 96 웰 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 120 분간 37 0C 에서 배양하였고 에티듐 (Ethidium+) 의 세포성 축적량을 측정기기 (Bio— Tek instrument FL600 형광 플레이트 판독기 ; 여기 파장 530 nm 및 방출 파장 590 nm)로 형광도를 측정하여 결정하였다. PPADS, KN62, 및 시험용 펩티드과 같은 길항제의 영향을 연구하고， 길항제들을 예비 -배양없이 작용제와 같이 처치하였다.
실험 결과, 기존에 재조합 P2Xi 수용체에서 작용제 -유도 양이온 유입을 길항하는 것으로 잘 알려진 피리독살 -5—포스페이트 (이하, PDP 라 함, IC50 ： 약 10 μΜ)의 5'-포스페이트기를 아형에 대해 선택적으로 길항하도록 카르복실산으로 대체하여 합성한 결과 (반웅식 1-3 참조) Ρ2 수용체 아형에 대하여 선택적으로 길항하는 길항제들 13， 14， 17, 18， 22, 및 23 을 합성하였으며， 이중 화합물 13 및 14 가 마우스 Ρ2¾ 및 인간 Ρ2Χ3 수용체에 대하여 PDP 와 동등내지 보다 우수한 길항 활성을 나타냄을 확인하였다 (표 1 참조). 상기 화합물 13 및 14 를 아조 커플링 반응을 합성 한 화합물들 24-29 중， 화합물 25， 27, 및 29， 인간 Ρ2Χ3 수용체 보다 마우스 P2Xi 수용체에 대하여 강력한 길항작용을 나타냈고, 아조페닐기를 2'，5'-디설폰산기로 대체한 화합물 25 은 마우스 P2 수용체에 대하여 ΙΟΟηΜ 에서 이온 전류를 60% 저해하였으며， 여기서 선택된 화합물 24 및 28 에 대하여 농도-의존적 길항작용을 시험한 결과， 화합물 24 는 마우스 P2¾ 수용체에서 ATP-유도성 이온 전류에 대하여 농도- 의존적 인 저해활성을 나타냈다 (도 1A 참조).
도 1 의 B 부분에서， IC50 값 및 힐 계수는 하기와 같다 [ (匿) 화합물 24， 70.54±2.72， 1.13±0.4ᄋ； (·) 화합물 28， 13ᄋ.26±13.61, -1.20±0.45· (A) 화합물 3， 30.71±5.12， -1.09±0.13], C 부분에서 , 값은 하기와 같다 [(■) 화합물 24， 105.47±17.49， -1.18±0.25； (·) 화합물 28， 79.75±1.21， - 1.08土 0.02. (A) 화합물 3， 96.22±20.98， -1.11±0.27].
iso PPADS 3, 화합물 24， 및 화합물 28 의 전체 농도 -반웅 곡선은 도 2B 및 2C 에 나타냈다. 마우스 P2¾ 수용체 및 인간 P2X3 수용체에서의 24 시간동안의 IC50 값은 각각 70 nM 및 105 nM 이 었다. 화합물 28 은， 마우스 P2X! 및 인간 P2X3 수용체에서의 IC50 값은 각각 130 및 80 nM 이었다.
도 2A 에서 IC50 값은 32 nM (MRS2159); 361 nM (36)； 509 nM (38)； 186 nM (39)이며 힐 계수는 -1.13土 0.20 (MRS2159); —1.03土 0.21 (36)； - 0.98±0.11 (38)； -1.00±0.09 (39)으로 각각 나타났으며， 각 값은 4 회 관찰의 평균 士 SEM 이다. 상기 기록은 2 μΜ ΑΤΡ 의 유지 전위 (70 mV)에서 수행되 었다.
PPADS 및 isoPPADS 피리독살 및 페닐 부위가 연결된 아조 (-N=N-) 가교가 화학적으로 불안정하므로 상온에서 분해되기 쉬워 새로운 PPADS 유사체를 개발하기 위하여 피 리독살 부위를 3,4-디카르복시피 리딘 또는 4- 아세틸 -3-카복시피리딘 유사체로 전환한 화합물들의 인간 P2X1; 인간 P2¾, 및 인간 P2X7 수용체에 대한 효과를 시험한 결과， 화합물 44 는 10 μΜ 농도에서 마우스 Ρ2Χ 수용체에 대하여 46% 저해효과를 나타냈다. 페닐에틸기기로 치환한 화합물 45 은 마우스 Ρ2¾ 및 인간 Ρ2Χ3 수용체에 대하여 벤질기로 치환한 치환체화합물 44 보다 강력한 활성을 나타냈다. 4-메특시펜에틸기를 함유한 화합물 46 이 3-메톡시펜에틸 화합물 48 또는 2-메톡시펜에틸 화합물 49 들보다 보다 우수한 길항활성을 나타냈다.
3，4-디카복시피 리딘 유사체인 화합물들 35-41 은 4-아세틸 -3- 카복시피리딘 유사체 화합물들 44-49 보다 마우스 Ρ2Χι 및 Ρ2Χ3 수용체에서 보다 강력 한 길항활성을 나타냈다. 이중 펜에틸기 화합물 36， 4-메록시펜에틸기 화합물 37， 및 4-카복시펜에틸 화합물 39 들은 마우스 P2Xi r 수용체에 대하여 10 vM 농도에서 각각 77%, 78%, 및 82% 저해효과를 나타냈다.
MRS2159, 화합물 36, 38， 및 39 의 전체 농도 -반웅 곡선을 도 2A 에 나타냈으며 , 화합물 36, 38, 및 39 이 361 nM, 509 nM, 및 186 nM 의 IC50 로 길항작용을 나타냈다. 화합물 36， 38, 및 39 은 잘 알려진 길항제인 A-317491 의 길항활성보다 효과가 적 었다 (도 2B). 도 2B 에서 IC50 값은 38 nM (Aᅳ 317491)； 432 nM (36)； 782 nM (38)； 339 nM (39)이며 힐 계수는 — 0.68±0.18 (A-317491); -0.63±0.20 (36)； -0.52±0.12 (38)； -0.58±0.27 (39)으로 각각 나타났으며， 각 값은 4 회 관찰의 평균 土 SEM 이 었다. 상기 기록은 2 μΜ ATP 의 유지 전위 (70 mV)에서 수행되었다.
여기에서 화합물 36， 38, 및 39 은 100 nM 농도에서 각각 38.3%, 19.2%, 및 34.0% 저해율을 나타냈다. 일부 화합물들이 기존 길항제인 MRS2159 및 A-317491 에 비하여 낮은 활성을 나타내나， 본 화합물들은 적정한 길항 활성을 갖으며 , 지나치 게 극성 이 높은 산성기 대신에 안정한 산성기를 갖고 불안정한 아조 (-N=N-) 가교대신에 안정한 탄소 -탄소 사슬을 가지므로 의 약품으로서 적합하다. 기존 길항제인 PPADS 의 단점은 P2 수용체에 대하여 비가역 적 인 차단활성을 나타내나 본 발명의 화합물들은 가역 적 인 활성을 나타내는 장점을 갖는다. 특히 . 화합물 39 는 20 분 후에 약 95%의 회수율을 보였다. 마우스 P2Xi 및 인간 P2X3 수용체에서의 피리딘 유도체들의 길항작용
Figure imgf000055_0001
【표 2】 마우스 Ρ2Χ1; 인간 P2X3 및 인간 P2X7 수용체에서의 3,4- 디카복시피리딘 및 4-아세틸 -3-카복시 피리딘， 4-포르밀 -3-카복시 피 리딘 유도체들의 길항작용
Figure imgf000056_0001
positions % inhibition
compd 2ᅳ 3ᅳ 4' X Y mP2Xl[a] hP2X3[a] hP2X7[b]
35 H H H OH CH2 54.2 ± 10.6% 31.4 ± 6.2% inactive
36 H H H OH CH2CH2 73.4 ± 9.7% 51.0 ± 9.8% inactive
37 H H OCH3 OH CH2CH2 77.0 ± 3.8% 59.8 ± 4.6% inactive
38 H H H OH CH=CH 71.4 ± 4.3% 48.4 ± 9.0% inactive
39 H H C02H OH CH2CH2 82.7 ± 6.0% 68.9 ± 11.7% inactive
40 H OCH3 H OH CH2CH2 52.4 ± 6.2% 39.3 ± 3.8% inactive
41 OCHj H H OH CH2CH2 49.8 ± 5.4% 34.5 ± 4.3% inactive
44 H H H CH3 CH2 44.2 ± 4.0% 18.3 ± 6.4% inactive
45 H H H CH3 CH2CH2 47.9 ± 8.1% 37.3 ± 10.0% inactive
46 H H OCH3 CH3 CH2C¾ 52.0 ± 7.1% 42.2 ± 7.5% inactive
47 H H H CH3 CH=CH 40.4 ± 1.3% 27.4 ± 5.5% inactive
48 H OCH3 H CH3 CH2CH2 29.9 ± 5.7% 15.8 ± 9.0% inactive
49 OCH3 H H CH3 CH2CH2 11.4 ± 3.3% 6.3 ± 2.3% inactive
50 OH CH2CH(C6H6)2 48.3 ± 4.1% 67.9 ± 5.2% inactive
51 OH CH2C10H7 53.9 ± 5.1% 62.9 ± 7.1% inactive
61 OCHj H CH2C¾ 50.9 ± 6.1% 70.5 ± 4.7% inactive
64 OCH3 H CH2CH2 51.4 ± 4.8% 69.4 ± 7.5% inactive
67 OCH3 H CH2CH2 52.8 ± 5.6% 72.6 ± 4.3% inactive
[i]Xenopus 난모세포들에서 발현되는 재조합 P2X 리셉터들에서 2 μΜ ATP 에 의해 이온전류가 생성되었고, 10 μΜ 에 의한 이은전류의 저해율을 마우스의 Ρ2Χ, 및 인간의 Ρ2Χ3 리셉터들에서 각각 측정하였다 (mean 士 SEM, n = 4). HEK293 내에서 발현되는 인간의 P2X 리셉터들에서 6 μΜ ΒζΑΤΡ 에 의한 에티듬 +의 축적물이 생성되었고 10 μΜ 화합물에 의한 축적물의 저해율을 측정했다 (mean ± SEM, n = 3).

Claims

【청구의 범위】
【청구항 1】
P2Xi 및 P2X3 수용체에 대하여 강력 한 길항 활성을 나타내는， 하기 일반식 ( I )의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적
Figure imgf000057_0001
상기 식에서，
Ri, R2, 및 R3 는 각각 독립적으로， 수소원자ᅳ 히드록시기 ， 설포닐기， 할로겐원자， 카르복실산, d-C6 저급 알킬기， d-C6 저급 알콕시기 , 및 Ci— c6 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기 이며 ;
A 는
Figure imgf000057_0002
이고， 여기에서 n 은 0 내지 5 의 정수이며， Ra 는 수소원자, 히드록시기， 할로겐원자， 카르복실산， d- 저급 알킬기， d-Ce 저급 알콕시기， 및 d-Cs 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기 이며 ;
B 는
Figure imgf000058_0001
이며， 여기에서 R' 및 R" 는 수소원자， 히드록시기， 할로겐원자， 카르복실산， 설포닐기， d-Ce 저급 알킬기， d-Cs 저급 알콕시기, 및 (：厂(:6 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이며， C 는 하나 이상의 5원 내지 18원의 방향환이며， m은 0내지 5의 정수이며，
( )표시는 단일결합또는 이중결합을 의미한다.
【청구항 2】
제 1항에 있어서，
상기 일반식 U)의 R2, 및 는 각각 독립적으로， 수소원자， 히드록시기， 설포닐기， d-C3 저급 알킬기 및 d-C3 저급 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기인 화합물군;
A 는 A1 인 경우는 n 은 0 내지 2 의 정수이며， A2 인 경우는 Ra 는 수소원자， 히드록시기, 및 할로겐원자로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기인 화합물군;
B 는 B1 또는 B2 인 경우에 상기 R' 및 R" 는 수소원자， 히드록시기， 할로겐원자， 카르복실산, 설포닐기， d— C3 저급 알킬기， d-Cs 저급 알콕시기， 및 d-Ce 저급 알킬에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이며， m은 0 내지 2 의 정수이며; B3 인 경우는 상기 C 는 하나 이상의 6 원 내지 12 원의 방향환인 화합물군을 포함하는 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염.
【청구항 3】
P2Xi 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타내는, 일반식 ( l a)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물, 그 이성체 및
Figure imgf000058_0002
약리학적으로 허용가능한 염:
Figure imgf000059_0001
상기 식에서，
Ri.Ra, R3,B 및 n의 치환기 정의는 제 1항에서 정의된 바와 같다.
【청구항 4】
P2X! 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성올 나타내는， 일반식 ( l b)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물, 그 이성체 및
Figure imgf000059_0002
약리학적
Figure imgf000059_0003
상기 식에서，
R1 R R3, Ra 및 B의 치환기 정의는 제 1항에서 정의된 바와 같다.
【청구항 5】
Ρ2Χι 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타내는， 일반식 ( I c)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물, 그 이성체 및
Figure imgf000059_0004
약리학적으로 허용가능한 염:
Figure imgf000059_0005
Ri, R2, R3, R' 및 A의 치환기 정의는 제 1항에서 정의된 바와 같다. 【청구항 6】
P2Xi 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타내는， 하기 일반식 (Id)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적
Figure imgf000060_0001
상기 식에서,
Ri R2 R3, R",m 및 A의 치환기 정의는 제 1항에서 정의된 바와 같다
【청구항 7】
P2Xi 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타내는， 일반식 (Ie)의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산 계 화합물 그 이성체 및
Figure imgf000060_0002
약리학적
Figure imgf000060_0003
m
상기 식에서，
R3,R", A 및 C의 치환기 정의는 제 1항에서 정의된 바와 같다.
【청구항 8】
제 3항 내지 제 7항증 어느 한 항에 있어서，
상기 일반식 (la) 내지 (Ie)의 Ri, R2, 및 R3 는 각각 독립적으로， 수소원자， 히드록시기， 설포닐기, 메틸기， 에틸기， 메록시기 및 에특시기로 구성된 군으로부터 선택된 치환기인 화합물군; A 는 A1 인 경우는 n 은 0 또는 1 의 정수이며， A2 인 경우는 Ra 는 수소원자， 또는 히드록시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기인 화합물군; B는 B1 또는 B2 인 경우에 상기 R' 및 R" 는 수소원자， 히드록시기， 카르복실산, 설포닐기， 메틸기， 에틸기， 메록시기 및 에록시 기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기 이며， m 은 0 또는 1 의 정수이며 ; B3 인 경우는 상기 C 는 1 개 또는 2 개의 페닐환， 나프탈렌기， 페녹시페닐기， 아다만틴기， 피라진기 , 테트라졸기， 인돌기， 안트라센기， 피페리딘기 , 퀴놀린기， 아이소퀴놀린기， 퀴나졸린기， 벤자제핀기 , 피 리딘기， 피리다진기 , 피라졸기， 옥사졸기， 치아졸기 , 또는 아데닌기로 구성된 군으로부터 선택된 방향환인 화합물군을 포함하는 화합물， 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염 .
【청구항 9】
제 8 항에 있어서，
에틸 3— (4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘 -3-일)프로파노익산 (13)， 5-(2-카르복시에틸 )-3-히드록시 -2-메틸이소니코틴산 (14)， (3-(2,2,8-트리메틸- 4H- [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)아크릴산 (15)， 3-(5-히드록시— 4- (히드록시메틸) -6-메틸피리딘 -3-일)아크릴산 (16), 3-(4-프로밀 -5-히드록시— 6- 메틸피 리딘 -3-일)아크릴산 (17)， 5-(2-카르복시비닐 )— 3—히드록시 -2- 메틸이소니코틴산 (18)， N-벤질ᅳ1-(2，2，8-트리메틸— 4H- [1,3]디옥시노 [4,5- c]피리딘 -5-일) 메탄아민 (19), (에틸 3- (벤질 ((2，2，8-트리메틸 -4H- [1,3]디옥시노 [4,5-c]피리딘 -5-일)메틸) 아미노)프로파노에 이트 (20) 또는 (3— (벤질 ((5-히드록시 -4- (히드록시메틸) -6-메틸피리딘— 3—일)메틸) 아미노) 프로판노익산 (21); 3- (벤질 ((4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘— 3- 일)메틸)아미노) 프로파노익산 (22), 5- ((벤질 (2-카르보에틸)아미노)메틸) -3- 히드록시 -2-메틸이소니코틴산 (23);
3-(2— ((2,5-디설포페닐)디아제닐) -4-포르밀—5-히드록시 -6-메틸피리딘- 3-일) 프로판 산 (24)， 3-(2—카르복시에틸 )-2-((2，5-디설포페닐)디아제닐) -5- 히드록시— 6-메틸이소니코틴산 (25)， 3—(4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸—2-((4- 설포페닐)디아제닐)피리딘 -3-일)프로판산 (26)， 3-(2-카르복시에틸 )-5— 히드록시 -6-메틸 -2— ((4—설포페닐)디아제닐) 이소니코틴산 (27)， 4-((3-(2- 카르복시에 틸 )-4-포르밀 -5-히드록시 -6-메틸피리딘 -2-일) 디아제닐) 벤조산 (28), 3-(2-카르복시에틸) -2-((4-카르복시페닐)디아제닐) -5-히드록시 -6— 메틸이소니코틴산 (29); 2-벤질 -5—히드록시— 6-메틸-피리딘 -3，4—디카르복실 산 (35), 5—히드록시 -6-메틸 -2-펜에틸-피리딘 -3，4-디카르복실산 (36)， 5- 히드록시 -2- [2-(4-메록시 -페닐)에틸 ] -6—메틸-피리딘—3,4-디카르복실산 (37), 5-히드록시 -6-메틸— 2-스티 릴 -피 리딘— 3,4-디카르복실산 (38)， 2- [2-(4- 카르복시 -페닐) -에틸 ]-5—히드록시—6—메틸-피리딘—3,4-디카르복실산 (39)， 5- 히드록시 -2- [2-(3—메톡시 -페닐) -에 틸 ] -6-메틸-피 리딘 -3,4-디카르복실산 (40)， 5-히드록시 -2- [2-(2-메록시 -페닐) -에틸 ] -6-메틸-피리딘 -3，4-디카르복실산
(41), 4-아세틸 -2-벤질— 5-히드록시 -6-메틸니코틴산 (44)， 4-아세틸 -5- 히드록시 -6-메틸 -2-펜에 틸니코틴 산 (45)， 4—아세틸— 5—히드록시 -2-(4- 메록시펜에틸 )-6-메틸니코틴 산 (46)， (E)-4-아세틸 -5ᅳ히드록시 -6—메틸— 2- 스티릴니코틴산 (47)， (E)-4-아세틸 -5-히드록시 -2-(3-메록시스티 릴 )-6- 메틸니코틴산 (48)， (E)-4-아세틸 -5-히드록시 -2-(2-메록시스티 릴 )-6- 메틸니코틴산 (49)， 3— (4-포르밀 -5-히드록시—2-(4-메특시페네틸 )-6- 메틸피리딘 -3-일)프로파노익산 (61), (E)-3-(4-포르밀— 5-히드록시 -2-(4- 메록시페네틸)— 6-메틸피리딘— 3—일)아크릴산 (64), 4-포르밀 -5-히드록시—2-(4- 메록시페네틸 )-6-메틸니코틴산 (67); 5—히드록시— 6-메틸— 2- (나프탈렌 -1- 일메틸)피리딘 -3，4-디카르복실산 (50) 및 2-(2，2，-디페닐에 틸) 5—히드록시 -6- 메틸피리딘 -3,4-디카르복실산 (51) 화합물， 그 이성 체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염 .
【청구항 10】
제 1 항의 일반식 (I) 화합물을 유효성분으로 함유한， P2¾ 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 만성 염증 질환， 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집관련 질환의 치료 및 예방을 위한 약학조성물.
【청구항 11】
제 10 항에 있어서， 상기 만성 염증 질환은 퇴 행성 관절염 , 류마티스 관절염， 천식， 만성폐쇄성폐질환, 방광염 인 약학조성물.
【청구항 12]
제 10 항에 있어서， 상기 신경성 통증 질환은 신경 병증성통증， 이질통， 당뇨성 신경장애증， 자발성통증， 과민성통증, 환지통， 또는 복합부위 통증증후군인 약학조성물.
【청구항 13】
제 10 항에 있어서 , 상기 혈소판 응집관련 질환은 동맥경화， 뇌졸중， 혈전증， 색전증， 심근경색, 죽상경화증， 또는 말초혈액순환장애인 약학조성물.
【청구항 14】
제 1 항의 일반식 ( I )의 구조를 갖는 피 리딘 카르복실산계 화합물을 유효성분으로 포함하는 P2¾ 및 P2X3 수용체에 대한 길항제.
【청구항 15]
상기 제 1 항의 일반식 (I) 화합물을 유효성분으로 함유한 약학조성물을 필요로 하는 대상 (Subject)에 게 투여하는 단계를 포함하는, P2¾ 및 P2X3 수용체 활성에 기 인한 만성 염증 질환, 신경성 통증 질환 또는 혈소판 웅집관련 질환의 예방 또는 치료방법 . 【청구항 16】
제 15 항에 있어서， 상기 만성염증 질환은 퇴행성 관절염， 류마티스 관절염, 천식， 만성폐쇄성폐질환, 방광염인것을 특징으로 하는 방법.
【청구항 17]
제 15 항에 있어서, 상기 신경성 통증 질환은 신경병증성통증, 이질통， 당뇨성 신경장애증, 자발성통증， 과민성통증， 환지통， 또는 복합부위 통증증후군인 것을 특징으로 하는 방법.
【청구항 18]
제 15 항에 있어서， 상기 혈소판 웅집관련 질환은 동맥경화， 뇌졸중, 혈전증, 색전증， 심근경색， 죽상경화증， 또는 말초혈액순환장애인 것을 특징으로 하는 방법.
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