WO2011057477A1 - 四肽类似物及其制备和应用 - Google Patents

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WO2011057477A1
WO2011057477A1 PCT/CN2010/001800 CN2010001800W WO2011057477A1 WO 2011057477 A1 WO2011057477 A1 WO 2011057477A1 CN 2010001800 W CN2010001800 W CN 2010001800W WO 2011057477 A1 WO2011057477 A1 WO 2011057477A1
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cyclohexyl
acetyl
propionylamino
indolyl
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PCT/CN2010/001800
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English (en)
French (fr)
Inventor
白旸
郭建辉
Original Assignee
上海艾力斯医药科技有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a second mitochondr ia-derived ac t iva tor of caspases (Smac) tetrapeptide analog and a preparation method thereof, and the tetrapeptide analog induces apoptosis of tumor cells and acts as an anti-apoptosis
  • Smac caspases
  • Programmed cell death (Apoptos i s) or apoptosis is a genetically and biochemically regulated mechanism that plays an important role in regulating cell numbers and eliminating stimulated or damaged cells from normal tissues. It has been found that programmed cell death defects that result in a lack of cell death are associated with cancer and chronic viral infection (Thompson et al., (1995) Sc ience 267, 1566-1462).
  • the apoptotic signaling network is divided into an intrinsic network mediated by death receptor-ligand interactions, and an extrinsic network mediated by increased cellular stress and increased mitochondrial permeability. Both pathways are ultimately focused on the corresponding caspase-specific protease (Caspase). Caspase is one of the key effector molecules in programmed cell apoptosis. Once activated, caspase can cleave many substrates involved in cell death, causing cell destruction.
  • IAP apoptosis protein inhibitor
  • Prototype IAP including XIAP and cIAP, has three functional domains called BIR1, 2, and 3 domains. The BIR3 domain interacts directly with Caspase 9 and inhibits its ability to bind and cleave its natural Caspase 3 zymogen, thereby inhibiting programmed cell death and resulting in an anti-programmed cell death effect.
  • proapoptotic mitochondrial protein Smac also known as DIABLO
  • Smac binding site a protein binding pocket on the BIR surface
  • N-terminus of Smac is four amino acids AVPI and the C-terminus is four amino acids AVPF.
  • IAP inhibitors There is also sequence homology between IAP inhibitors, and there are four amino acid AVPI motifs in the N-terminus of the processed active protein shield. This tetrapeptide seems to bind to In the hydrophobic pocket of the BIR domain, disruption of the B1R domain binds to Caspase (Chai et al., (2000) Nature 406: 855-862, Liu et al., (2000) Nature 408: 1004-1008, Wu et al . (2000) Nature 408: 1008 ⁇ 1012).
  • the Smac analog shows a good affinity with the BIR3 domain of XI AP.
  • the compound represented by the following formula (a) has a Kd value of 16 nanomolar in combination with XIAP-BIR3 ( nM), thereby preventing XIAP from interacting with Caspase and exerting a role in promoting apoptosis (Thorsten. Oost et al., (2004) Journal of Medicinal Chemistry 47: 4417 to 4426).
  • this compound has a good inhibitory effect on breast cancer cell proliferation, and the maximum tolerated dose for mice is about 20 mg/kg/day.
  • WO2006017295A2 discloses a method for treating hyperproliferative diseases Diseases, such as compounds, compositions and methods of cancer.
  • the structural formula is as shown in the following formula (d).
  • the present invention provides a compound of the formula (I), and stereoisomers thereof, and pharmaceutically acceptable salts thereof,
  • R 1 is -NHC0R 3 , wherein R 3 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -Aryl or -(CH 2 ). ⁇ 6 -heteroaryl, the aryl or heteroaryl is unsubstituted or substituted by 1 to 5 substituents selected from the group consisting of: -, -NH 2 , -OH, C, ⁇ C 6 Alkyl, 1 ⁇ 3! a C-substituted C, -C 6 alkyl group, a d-C 6 alkoxy group, a ⁇ alkoxy group substituted by 1 to 3 elements, -C00H and - C00R 4 , wherein R 4 is a ⁇ alkyl group;
  • R 2 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -Aryl, - (CH 2 ). ⁇ 6 -CH (phenyl) 2 or - (CH 2 ). ⁇ 6 -he t, wherein the aryl group is a phenyl group, a naphthyl group or a tetrahydronaphthyl group, and he t is a heteroaryl group.
  • the invention also relates to a process for the preparation of the compounds of formula (I).
  • the invention further relates to a pharmaceutical composition comprising the compound of formula (I) and a process for the preparation thereof.
  • the invention further relates to the use of a compound of formula (I) for the manufacture of a medicament for the treatment of tumors.
  • the invention also relates to a method of treating a disease which can be alleviated or treated by promoting apoptosis, comprising the step of administering the compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a patient in need of treatment. .
  • aryl means an aromatic hydrocarbon ring group, preferably an aryl group having 6 to 14 carbon atoms, more preferably a phenyl group or a naphthyl group or a tetrahydronaphthyl group.
  • heteroaryl means a 5- to 6-membered monocyclic ring having 5 to 10 ring atoms and having 1 to 4 hetero atoms selected from N, S, 0 and fused to a benzene ring.
  • a bicyclic heteroaryl group which can be partially saturated.
  • the monocyclic heteroaryl group for example, a furyl group, a thienyl group, a pyrrolyl group, an imidazolyl group, a pyrazolyl group, a thiazolyl group, an isothiazolyl group, an oxazolyl group, an iso 11 oxazolyl group, a triazolyl group, a tetrazolyl group, a thiadiazolyl group, a pyridyl group, a pyrimidinyl group, a pdazinyl group, a pyrazinyl group or the like;
  • the bicyclic heteroaryl group for example, a benzofuranyl group, a benzothianyl group, a benzothiazyl group can be mentioned.
  • the partially saturated heteroaryl group for example, 1,2,3,4-tetrahydroquinolinyl or the like can be mentioned.
  • the term "pharmaceutically acceptable salt” means an acid addition salt or a base addition salt of the compound of the present invention which is relatively non-toxic.
  • the acid addition salt is a salt of the compound of the formula (I) of the present invention and a suitable inorganic or organic acid, which can be prepared during the final isolation and purification of the compound, or can be used to purify the compound of the formula (I). It is prepared by reacting it with a suitable organic or inorganic acid in the form of its free base.
  • Representative acid addition salts include hydrocyanates, hydrochlorides, sulfates, sulfites, acetates, oxalates, valerates, oleates, palmitates, stearates, lauric acid Salt, borate, benzoate, lactate, phosphate, phthalate, citrate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, benzoate, Anthracene sulfonate, p-toluenesulfonate, gluconate, ⁇ -glycolate, lauryl sulfonate, and the like.
  • the base addition salt is a salt of a compound of formula (I) with a suitable inorganic or organic base, including, for example, a salt formed with an alkali metal, an alkaline earth metal, a quaternary ammonium cation, such as a sodium salt, a lithium salt, a potassium salt, a calcium salt, a magnesium salt, a tetrakis quaternary ammonium salt, a tetraethyl quaternary ammonium salt, etc.; an amine salt, including a salt formed with ammonia (NH 3 ), a primary amine, a secondary amine or a tertiary amine, such as a guanamine salt, two Amidoxime salt, triterpeneamine salt, triethylamine salt, ethylamine salt, and the like.
  • a salt formed with an alkali metal, an alkaline earth metal, a quaternary ammonium cation such as a sodium salt,
  • the compound of formula (I) of the present invention is represented by the following formula (II) Wherein R 1 and R 2 are as defined above.
  • R 2 and R 3 are as defined above.
  • the compound of the formula (I) of the present invention is represented by the following formula (IV):
  • R 1 and R 2 are as defined above.
  • the compound of the formula (I) is represented by the following formula (V):
  • R' and R 2 are as defined above.
  • R 2 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -Aryl, - (CH 2 ). ⁇ 6 - CH (phenyl) 2 or - (CH 2 ). ⁇ 6 - het, wherein the aryl group is a phenyl group, a naphthyl group or a tetrahydronaphthyl group, and het is a fluorenyl group, a pyridyl group, a furyl group or a thienyl group.
  • R 2 is -(CH 2 ). ⁇ 3 -Aryl, - (CH 2 ). ⁇ 3 -CH (phenyl) 2 or - (CH 2 ). ⁇ 3 - het, wherein the aryl group is phenyl, naphthyl or tetrahydronaphthyl, and het is ⁇ Mercapto, pyridyl, furyl or thienyl.
  • R 2 is -(CH 2 ). ⁇ 3 -Aryl, - (CH 2 ). ⁇ 3 - CH (phenyl) 2 or - (CH 2 ). ⁇ 3 -he t, wherein the aryl group is a phenyl group or a tetrahydronaphthyl group, and het is a pyridyl group, a furyl group or a thienyl group.
  • R 2 is -CH(phenyl) 2 .
  • R 2 is 1,2,3,4-tetrahydronaphthyl.
  • R 2 is benzyl
  • R 2 is -CH 2 -furanyl.
  • R 2 is -CH 2 -thienyl.
  • R 3 is phenyl or benzyl, which is unsubstituted or substituted by 1 to 3 substituents selected from the group consisting of: halogen, - NH 2 , -0H, C, ⁇ (6 alkyl, d ⁇ C 6 alkyl substituted by 1 ⁇ 3! 3 ⁇ 4, ( ⁇ , 6 alkoxy, C substituted by 1 ⁇ 3 halogens, ⁇ C 6 alkoxy, - C00H, and - C00R 4, wherein 14 is C, ⁇ C 6 alkyl group.
  • R 3 is phenyl or benzyl, which is unsubstituted or substituted with from 1 to 3 substituents selected from the group consisting of: halogen, -NH 2 , - OH , ⁇ alkyl, 1-4 alkyl substituted by 1 to 3 halogens, C, ⁇ C 4 alkoxy, d ⁇ C 4 alkoxy substituted by 1 to 3 halogens, -C00H and -C00R 4 , Wherein R 4 is C, ⁇ C 4 alkyl.
  • R 3 is phenyl or benzyl, which is unsubstituted or substituted with from 1 to 3 substituents selected from the group consisting of halogen, -NH 2 , -OH , ( , ⁇ ( 2 alkyl, 1 ⁇ 3! 3 ⁇ 4 substituted C, ⁇ C 2 alkyl, C, ⁇ C 2 alkoxy, C substituted by 1 ⁇ 3 13 ⁇ 4 ⁇ , ⁇ C 2 alkoxy, -C00H and -C00R 4 , wherein R 4 is C, ⁇ C 2 alkyl.
  • R 3 is phenyl or benzyl, said phenyl or benzyl being unsubstituted or substituted by at least one substituent selected from the group consisting of: halogen, - NH 2 , -OH , C, -C 6 alkyl, C substituted by 1-3 halogens, C 6 alkyl group, d ⁇ C 6 alkoxy group, ⁇ ( 6 alkane substituted by 1-3 halogens Oxyl, -C00H and -C00R 4 , wherein R 4 is d-C 6 alkyl.
  • R 3 is phenyl or benzyl, which is unsubstituted or substituted with at least one substituent selected from the group consisting of halogen, _NH 2 , -OH, C, ⁇ C 4 alkyl, 1 to 3! 3 ⁇ 4 prime substituted C, ⁇ C 4 alkyl groups, ⁇ (4 alkoxy, 1 ⁇ 3! 3 ⁇ 4 prime substituted C, ⁇ C 4 alkoxy a group, -C00H and -C00R 4 , wherein 14 is a d-C 4 alkyl group.
  • R 3 is phenyl or benzyl, which is unsubstituted or substituted with at least one substituent selected from the group consisting of: halogen, -NH 2 , - OH, C, ⁇ C 2 alkyl, 1 ⁇ 3! 3 ⁇ 4 substituted d ⁇ C 2 alkyl, ( ⁇ alkoxy, replaced by 1 ⁇ 3! 3 ⁇ 4 D ⁇ C 2 alkoxy, -C00H and -C00R 4 , wherein R 4 is d-C 2 alkyl.
  • R 1 is -NHC0R 3 , wherein R 3 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -Aryl or -(CH 2 ). ⁇ 6 -heteroaryl, which may be unsubstituted or substituted with from 1 to 5 substituents selected from the group consisting of: halogen, -NH 2 , -OH, C, ⁇ C 6 alkyl, C, ⁇ C 6 alkyl, ⁇ alkoxy substituted by 1-3 halogens, substituted by 1-3 halogens (, ⁇ ( 6 alkoxy, -C00H and -C00R 4 , wherein R 4 is -alkyl; R 2 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -aryl, -(CH 2 ). ⁇ 6 - CH (phenyl) 2 or - (CH 2 ). ⁇ 6 - he t, Wherein the aryl group is phenyl, naphthyl or tetrahydronaphthyl
  • the invention also provides a process for the preparation of a compound of formula (in) which comprises the steps of:
  • N- Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester is subjected to substitution, reduction and two-step condensation reaction to obtain a compound (10);
  • R 2 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -Aryl, - (CH 2 ). ⁇ 6 - CH (phenyl) 2 , - (CH 2 ). ⁇ 6 -het, wherein the aryl group is phenyl, naphthyl or tetrahydronaphthyl, and het is heteroaryl; and R 3 is -(CH 2 ). ⁇ 6 -Aryl or -(CH 2 ).
  • ⁇ 6 -heteroaryl which may be unsubstituted or substituted with from 1 to 5 substituents selected from the group consisting of: halogen, -NH 2 , - 0H, (alkyl, 1 to 3; 3 ⁇ 4 substituted alkyl, d ⁇ C 6 alkoxy, C, ⁇ C 6 alkoxy substituted by 1 to 3, - C00H and -C00R 4 , wherein R 4 is ( :! ⁇ alkyl;
  • the compound (10) is subjected to a condensation reaction with the compound (12) and then deprotected to the target compound ( ⁇ ⁇ ).
  • EDC 1 1-(3-Diaminoaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride
  • TEA Triethylamine The compounds of the present invention can be used for the treatment of diseases which can be alleviated or treated by promoting apoptosis, including tumors, particularly malignant tumors such as breast cancer, non-small cell lung cancer, ovarian cancer, and gastric cancer. , colon cancer, pancreatic cancer, epidermoid squamous cell carcinoma, etc.
  • the present invention also provides that the compound of the present invention can be treated by promoting apoptosis.
  • the compounds of the present invention can be administered to humans and can be administered orally, rectally, parenterally (intravenously, intramuscularly or subcutaneously), and topically (for example, in the form of powders, suppositories, ointments, patches or drops).
  • the compounds can be administered alone or in combination with other therapeutically acceptable agents. It is noted that the compounds of the invention may be administered in combination.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the compound of the formula (I) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.
  • the compound of the formula (I) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is usually mixed with a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.
  • the compound of the present invention can be formulated into a conventional pharmaceutical preparation according to a conventional preparation method.
  • a conventional preparation method for example, tablets, pills, capsules, powders, granules, emulsions, granules, dispersions, solutions, syrups, elixirs, ointments, drops, suppositories, patches, inhalants, propellants Wait.
  • Solid dosage forms for oral administration of the present invention include capsules, tablets, pills, powders, and granules.
  • the compound of the invention is admixed with at least one conventional inert excipient (or carrier), such as sodium citrate or dicalcium phosphate, or the like, or mixed with: (a) a filler or compatibilizer, For example, starch, lactose, sucrose, glucose, mannitol, silicic acid, etc.; (b) binders, for example, hydroxymethyl cellulose, alginate, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sucrose, gum arabic, etc.; a humectant, for example, glycerin or the like; (d) a disintegrating agent, for example, agar, carbonated surface, potato starch or tapioca starch, alginic acid, complex silicate, and sodium carbonate; (e) a slow solvent, for example (f) an absorption accelerator, for example, a a filler
  • Liquid dosage forms for oral administration of the compounds of the invention include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs.
  • liquid dosage forms may contain inert diluents conventionally employed in the art, such as water or other solvents, solubilizers and emulsifiers, for example, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, propylene glycol, 1,3-butanediol, dimercaptoamide and oils, especially cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil, or a mixture of these substances.
  • inert diluents conventionally employed in the art, such as water or other solvents, solubilizers and emulsifiers, for example, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, propylene glycol, 1,3-butanedi
  • the liquid dosage forms of the present invention may also contain adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening agents, flavoring agents, and perfumes.
  • the suspending agent includes, for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan ester, microcrystalline cellulose, aluminum sterol and agar, and the like or a mixture of these.
  • the dosage form of the compound of the present invention for parenteral injection may include physiologically acceptable sterile aqueous or nonaqueous solutions, dispersions, suspensions and emulsions, as well as sterility for reconstitution into sterile injectable solutions or dispersions. powder.
  • Suitable carriers, diluents, solvents or vehicles include water, ethanol, polyols, and suitable mixtures thereof.
  • Formulation dosage forms of the compounds of the invention for topical administration include ointments, powders, propellants, inhalants, patches, suppositories, drops, and the like.
  • the compounds of the present invention are mixed under sterile conditions with a physiologically acceptable carrier and any preservatives, buffers, or propellants which may be required if necessary.
  • the present invention also provides a method of treating a disease, which can be alleviated or treated by promoting apoptosis, comprising the steps of: administering to a patient in need of treatment 0. 05 ⁇ 30 mg/kg body weight/day of a compound of formula (I) or A pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the disease is preferably a tumor.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be administered alone or in combination with other therapeutic agents, particularly in combination with other antitumor drugs.
  • therapeutic agents include, but are not limited to: (i) D-crosslinking agents such as cisplatin, cyclophosphamide or nitrogen mustard; (ii) antimetabolites such as cytarabine, methotrexate (MTX) or 5- gemcitabine; (iii) interca lating agent s, such as adrimycin (doxorubicin) or mitoxantrone; (iv) microtubule-directing agent, such as paclitaxel, colchicine , colchicine; (V) aromatase inhibitors, such as aminoglutethimide, lantron, letrozole, ruined; (vi) topoisomerase toxin I toxin, such as camptothecin; (vi i a topoisomerase toxin I toxin, such as etop
  • the ingredients to be combined may be administered simultaneously or sequentially, in the form of a single preparation or in the form of different preparations.
  • Such combinations include not only combinations of the compounds of the invention with one other active agent, but also combinations of the compounds of the invention with two or more other active agents.
  • the compounds of the present invention have been shown to have cancer cell proliferation inhibitory effects by cell experiments and animal experiments, respectively, and can be used for the preparation of a medicament for treating cancer.
  • the pharmacological effect of the compound of the present invention for inhibiting the proliferation of cancer cells can be determined by a conventional method.
  • a preferred evaluation method is Sulforhodamine B (SRB) protein staining: SRB is a protein-binding dye and can be used with biological macromolecules. Basic amino acid binding, at 510 nm The optical density (0D) reading has a good linear relationship with the protein amount, so it can be used as the quantification of the number of cells.
  • the inhibition rate of the cancer cell proliferation is calculated by measuring the change of the light absorption value produced by the drug acting on the cancer cells. .
  • Inhibition rate (%) (0D control -0D inhibitor - 0D blank control) I (0D control -0D blank control) X 100%
  • 0D control Refers to the 0D value of the well of a cell that does not have normal growth of the drug.
  • 0D inhibitor refers to the 0D value of the well of a cell to which a positive or compound to be screened is added.
  • 0D blank control refers to the 0D value of parallel control wells that were not seeded.
  • the half inhibitor concentration (ICso) value was calculated by the software GraphPad Pr i sm 5.
  • the pharmacological effect of the compound of the present invention for inhibiting tumor growth can be determined by a conventional method.
  • a preferred evaluation method is to observe the growth inhibitory effect and strength of the compound of the present invention on human breast cancer MCF-7 subcutaneous xenografts.
  • Each of the rats was orally administered with 50 mg/kg of the compound of the present invention, and the solvent control group was given an equal amount of the solvent, once a day for 12 days.
  • the diameter of the transplanted tumor was measured once every two days, and the weight of the mouse was also referred to.
  • Tumor volume (Tumor, TV) is calculated as:
  • the resulting tumor volume was measured for sub-cage administration (i.e., d Q ), and ⁇ 1 is the tumor volume at each measurement.
  • TRTV treatment group RTV
  • CRTV solvent control group RTV.
  • Fig. 1 is a graph showing the relative volume change of subcutaneous xenografts after administration of the compound of Example 2 of the present invention (50 mg/kg) in human breast cancer MCF-7 mice. Detailed ways
  • the obtained crude product was used as a starting material in the next step without purification.
  • N-Boc-trans-4-methylsulfonyloxy-L-valine oxime ester 645 mg was dissolved by adding 10 ml of DMS0, 260 mg of sodium azide was added, the temperature was raised to 90 ° C, and the mixture was stirred for 8 hours. The reaction was quenched, and the reaction mixture was cooled to room temperature.
  • EtOAc EtOAc m. - 4- Acryl-L-valine oxime ester crude (1-2) 496 mg, yield 92%.
  • the obtained crude product was used as a starting material in the next step without purification.
  • N-Boc-cis- 4-azido-L-valine oxime ester 496 mg was dissolved in 10 ml of decyl alcohol, and 75 mg of 10% palladium on carbon was added under nitrogen protection. The reaction system was then evacuated, and a hydrogen balloon was introduced and stirred at room temperature for 8 hours. The reaction was stopped, and the palladium carbon was removed by filtration, and concentrated to give a yellow oil (yield: N- Boc-cis- 4-amino-L-valine decyl ester (1-3) 430 mg, yield 96%.
  • the obtained crude product was used as a starting material in the next step without purification.
  • the obtained crude product was used as a starting material in the next step without purification.
  • the experimental procedure is the same as step 4).
  • the reactant is N-Boc-cis-4-phenylhydrazide-L-valine 279 mg, (R)-1,2,3,4-tetrahydronaphthylamine 123 mg , finally obtained a pale yellow solid N-(R)-1,2,3,4-tetrahydronaphthyl-(N-Boc-cis-4-benzoyl-L-guanidine) amide (1-6) 225 mg, yield 58%.
  • H 1 - R (CDC1 3 ): ⁇ 7.98 (m, 2H), 7.4 ⁇ 7.5 (m, 3H), 7.0-7.2 (m, 5H), 4.96 (d, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.5-3.7 (m, 2H), 2.8-2.9 (m, 2H), 2.0 ⁇ 2. 3 (m, 2H) , 1 , 7-1.95 (m, 2H), 1.55-1.65 (m, 2H), 1.3 (s, 9H).
  • step 4 the reactant is N-Boc - N-Me- L-alanine 2.03 g, L-cyclohexylglycine oxime ester (C5)-2-cyclohexyl-glycine oxime ester) 1.71 g, Finally, 2.46 g of a white solid N-tert-butoxycarbonyl-N-mercapto-L-alanyl-L-cyclohexylglycine decyl ester (1-8) was obtained in a yield of 69%.
  • step 5 The experimental procedure is the same as step 5), the reactant is N-tert-butoxycarbonyl-N-mercapto-L-alanyl-L-cyclohexylglycine oxime ester 2.46 g, finally obtaining a white solid and butoxycarbonyl-N- Mercapto-L-alanyl-L-cyclohexylglycine (1-9) 2.36 g, yield 100%.
  • the experimental procedure is the same as step 4), and the reactant is N-(R)-1,2,3,4-tetrahydronaphthyl-(cis-4- 4-benzoyl-L-guanidine) amide 173 mg, N - tert-Butoxycarbonyl-N-mercapto-L-alanyl-L-cyclohexylglycine 163 mg, finally obtained as a pale yellow solid N-(R)-1, 2, 3, 4-tetrahydronaphthyl-( N-tert-Butoxycarbonyl-N-mercapto-L-alanyl-L-cyclohexylglycyl-cis- 4-benzoyl-L-hydrazinamide (1-10) 105 mg, The rate is 34%.
  • the experimental procedure is the same as step 7), and the reactant is N -( R ) - 1, 2 , 3, 4 -tetrahydronaphthyl-(N-tert-butoxycarbonyl-N-methyl-L-alanyl-L -cyclohexylglycyl-cis-4-benzoyl-L-guanidine aminoamide 105 mg.
  • the crude product was quickly passed through a silica gel column eluting with dichloromethane (20:1) to afford a pale yellow solid (yield: 56).
  • the experimental procedure was the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in the step 4) was replaced with 4-fluorobenzoic acid to obtain the compound 2.
  • the experimental procedure was the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in the step 4) was replaced with 4-decyloxybenzoic acid to obtain the compound 3.
  • the experimental procedure was the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in the step 4) was replaced with 4-trifluorodecylbenzoic acid to obtain the compound 4.
  • the experimental procedure was the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in the step 4) was replaced with 3-decyloxybenzoic acid to obtain the compound 5.
  • the experimental procedure was the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in the step 4) was replaced with 4-carboxybenzoic acid to obtain the compound 6.
  • H 1 -raw R (CDC1 3 ): ⁇ 11.50(s, IH), 8.32 (d, 2H) , 8.16 (d, 2H), 7.0-7.2 (m, 4H), 5.34 (dd, IH) , 5.20 ( d, IH), 4.86 (d, IH), 4.46 (m, IH), 4.08 (m, IH), 3.86 (m, 2H), 3.20 (m, IH), 3.02 (s, 3H), 2.8-2.9 (m, 2H) , 2.40-2.60 (m, 2H), 1, 70-1. 95 (m, 2H), 1.56 (d, 3H), 1.55-1.65 (m, 2H), 1.40-1.60 (m, 5H), 1.20-1.40 (m
  • the experimental procedure was the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in the step 4) was replaced with benzyl decanoic acid to obtain the compound 9.
  • Example 15 (2)- 1- ⁇ [05)- 2-cyclohexyl-2- 2-(indolyl)propionylamino)]-acetyl ⁇ - 2- ⁇ [ (v?) - 1, 2 , 3, 4-tetrahydronaphthyl]aminodecanoyl ⁇ -4-benzoylaminopyrrolidine (Compound 15)
  • Example 15 Referring to the synthesis method of the compound of Example 15, the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant N-Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester in the step 1) and the reactant in the step 4) Benzoic acid was replaced with N-Boc-cis-4-hydroxy-L-proline decyl ester and 4-fluorobenzoic acid, respectively, to obtain Compound 16.
  • Example 15 Referring to the synthesis method of the compound of Example 15, the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant ⁇ -Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester in the step 1) and the reactant in the step 4) Benzoic acid was replaced with N-Boc-cis-4-hydroxy-L-valine methyl ester and 4-decyloxybenzoic acid, respectively, to obtain compound 17.
  • Example 15 Referring to the synthesis method of the compound of Example 15, the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant N-Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester in the step 1) and the reactant in the step 4) Benzoic acid was replaced with N-Boc-cis-4-hydroxy-L-proline decyl ester and 4-trifluorodecyl benzoic acid, respectively, to obtain compound 18.
  • Example 15 Referring to the synthesis method of the compound of Example 15, the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant N-Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester in the step 1) and the reactant in the step 4) Benzoic acid was replaced with N-Boc-cis-4-hydroxy-L-proline decyl ester and 3-decyloxybenzoic acid, respectively, to obtain compound 19.
  • Example 15 Referring to the synthesis method of the compound of Example 15, the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant N-Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester in the step 1) and the reactant in the step 4) Benzoic acid was replaced with N-Boc-cis-4-hydroxy-L-proline decyl ester and 4-carboxybenzoic acid, respectively, to obtain Compound 20.
  • Example 15 Referring to the synthesis method of the compound of Example 15, the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant N-Boc-trans-4-hydroxy-L-proline decyl ester in the step 1) and the reactant in the step 4) Benzoic acid was replaced with N-Boc-cis-4-hydroxy-L-proline decyl ester and benzyl decanoic acid, respectively, to give compound 22.
  • the experimental procedure is the same as in Example 1, except that the reactant benzoic acid in step 4) and the reactant (5)-2-cyclohexyl-glycine decyl ester in step 8) are 4-fluorobenzoic acid and -2-, respectively. Substitution with cyclohexyl-glycine decyl ester afforded compound 23.
  • the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant benzoic acid in the step 4) and the reactant (5)-2-cyclohexyl-glycine decyl ester in the step 8) are respectively 4 Substituting -trifluoromethylbenzoic acid and 03 ⁇ 4- 2-cyclohexyl-glycine decyl ester gave compound 24.
  • the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant benzoic acid in the step 4) and the reactant (5)-2-cyclohexyl-glycine decyl ester in the step 8) are respectively 4 Substituting decyloxybenzoic acid and 0?)- 2-cyclohexyl-glycine decyl ester to obtain compound 25.
  • the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant benzoic acid in the step 4) and the reactant (5)-2-cyclohexyl-glycine decyl ester in the step 8) are respectively 4 Substituting -carboxybenzoic acid and 03 ⁇ 4- 2-cyclohexyl-glycine decyl ester gave compound 27.
  • the experimental procedure is the same as that of Example 1, but the reactant benzoic acid in the step 4) and the reactant 05) 2-cyclohexyl-glycine decyl ester in the step 8) are respectively benzyl. Instead of decanoic acid and 0?)-2-cyclohexyl-glycine decyl ester, compound 28 was obtained.
  • the above materials are mixed and hooked, and then filled into ordinary gelatin capsules to obtain 1000 capsules.
  • Example 30 Compounds of the invention against human ovarian cancer cells (SK-0V-3) or human breast cancer cells
  • Human ovarian cancer cells or human breast cancer cells in the logarithmic growth phase were seeded at a density of about 5500 cells/well in 96-well culture plates, 180 ⁇ l/well.
  • the adherent growth was carried out for 24 hr plus the compound of the example 20 ⁇ l/well, and each concentration of the administration group was set to three replicate wells, and the corresponding concentration of the vehicle control and the cell-free withering pores were set.
  • the cells were cultured in 10% Hyclone fetal bovine serum at 37 ° C, 5% CO 2 for 72 hr. 50% cold trichloroacetic acid (TCA) 50 ⁇ l was added and allowed to stand at 4 ° C for 1 hour to fix the cells.
  • TCA cold trichloroacetic acid
  • Human ovarian cancer cells (SK-0V-3) were inoculated into 6-well plates at 3x107 wells, cultured for 24 h at 37 ° C in a CO 2 incubator, and the negative control or the compound of Example 10 was added. The culture was continued for 24 h, and the cells were carefully collected. The culture solution was transferred to a centrifuge tube, and 1 ml of PBS was added to each well, and the cells were washed, and the supernatant was discarded. After trypsinization, the cells were collected into a centrifuge tube. Centrifuge at 1000g for 5 minutes and remove the medium. The cells were gently resuspended in 0.5 ml of pre-cooled PBS.
  • Example 32 Growth inhibition of the compound of the present invention on subcutaneous xenografts of human breast cancer MCF-7 mice System
  • the growth inhibitory effect and strength of the compound of the present invention administered to human breast cancer MCF-7 mouse subcutaneous xenografts were observed.
  • Solvent 1. 0% sodium carboxymethyl cellulose (1.0% CMC-Na).
  • the compound of the example was dispersed in 1.0% CMC-Na, and the 50 mg/kg dose group was additionally provided, and a solvent control group was additionally provided.
  • Experimental animals BALB/cA nude mice, female, weighing 18 ⁇ 2 g.
  • Experimental method Each compound was intragastrically administered with 50 mg/kg of the compound of the example, and the solvent control group was given an equal amount of the solvent, once a day for 12 days. During the whole experiment, the diameter of the transplanted tumor was measured once every two days, and the weight of the mouse was also referred to.
  • Tumor volume (Tumor, TV) is calculated as:
  • RTV relative tumor volume
  • T RTV treatment group RTV
  • CRTV solvent control group RTV.
  • Fig. 1 Compared with the vehicle control group, the human breast cancer MCF-7 mice were given the compound of Example 1 (50 mg/Kg) alone, and the relative volume of the subcutaneous xenografts was slow.
  • ICR mice female, weighing 20 ⁇ 2g, grouped, 6 rats in each group, given a negative control solvent (0.5% CMC-Na), 25 compounds 25mg/Kg, 50mg/Kg, respectively, for 14 consecutive days. 100mg/Kg, observed toxicity and death.
  • the administration period was observed once a day, including but not limited to behavior, activity, gait, respiration, and gastrointestinal function. Weigh one time before administration, and weigh once every 3 days (1st, 4th, 7th, 10th and 14th days).
  • the average body weight of the animals in the 25 mg/kg group increased by 38.2%, and the average body weight of the animals in the 50 mg/kg group increased by 33.3%.
  • the average weight of the animals in the 100 mg/kg group increased by 22.8%, and the animals in the 100 mg/kg group.

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Description

四肽类似物及其制备和应用 技术领域
本发明涉及促凋亡线粒体蛋白 (second mi tochondr ia-der ived ac t iva tor of caspases , Smac) 四肽类似物及其制备方法， 以及所述 四肽类似物诱导肿瘤细胞发生凋亡和作为抗癌剂的应用。 背景技术
程序性细胞死亡（Apoptos i s)或编程性细胞死亡是一种受遗传和 生化调节的机理， 它在调节细胞数量以及从正常组织中消除受刺激或 受损的细胞中起着重要的作用。 业已发现， 导致细胞死亡缺乏的程序 性细胞死亡缺陷与癌症和慢性病毒感染有联系 （Thompson et a l . , (1995) Sc ience 267， 1456~1462)。
细胞凋亡信号传导网络分为有死亡受体-配体相互作用介导的内 在网络， 和有细胞应激和线粒体通透性增加介导的外在网络。.两条途 径最终均集中于相应的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase)。 Caspase 是程序性细胞凋亡中关键的效应器分子之一， 一旦被激活， Caspase可切割许多与细胞死亡相关的底物， 造成细胞的破坏。
肿瘤细胞具有许多规避细胞凋亡的策略。 一种最近报道的分子机 制涉及细胞凋亡蛋白抑制剂（IAP)家族成员的过度表达。 IAP广泛分布 在从果蝇到人类的生物体中。 IAP通过直接与 Caspase相互作用并中和 Cas pase来阻止细胞凋亡。 原型 IAP, 包括 XIAP和 cIAP , 具有三种功 能结构域， 称为 BIR1、 2和 3结构域。 BIR3结构域直接与 Caspase 9相 互作用并抑制其结合和切割其天然产物 Caspase 3 酶原的能力， 从而 抑制程序性细胞死亡而导致抗程序性细胞死亡效应。
有报道证实， 促凋亡线粒体蛋白 Smac (又称为 DIABLO)能够通过与 BIR 表面上的蛋白结合袋（Smac 结合位点）相结合来中和 XIAP 和或 cIAP , 从而阻止 XIAP和 /或 c IAP与 Caspa se 9之间的相互作用， 从而 导致细胞程序性死亡。
经研究发现， Smac的 N-末端是四个氨基酸 AVPI , C-末端是四个氨 基酸 AVPF。 IAP抑制剂之间也具有序列的同源性， 在经过加工的活性 蛋白盾的 N-末端中存在四个氨基酸 AVPI的基序。这种四肽似乎结合到 BIR结构域的疏水性袋中， 破坏 B1R结构域与 Caspase结合（Chai et al. , (2000) Nature 406: 855-862, Liu et al.，（2000) Nature 408: 1004-1008, Wu et al. , (2000) Nature 408: 1008~1012)。
因此， Smac类似物， 作为 IAP抑制剂用于治疗癌症而倍受关注， 并成为抗癌领域的研究热点之一。
据文献报道， Smac类似物与 XI AP的 BIR3结构域显示出较好的亲 和力， 例如， 结构如下式（a)所示的化合物与 XIAP- BIR3结合的分解值 (Kd value)达到 16纳摩尔（nM)， 从而阻止 XIAP与 Caspase相互作用， 发挥促进细胞凋亡的作用（Thorsten . Oost et al. , (2004) Journal of Medicinal Chemistry 47: 4417〜 4426)。 体外实验表明该化合物 对乳腺癌细胞增值有良好的抑制作用， 对于小鼠给药的最大耐受剂量 约为 20mg/kg/天。
Figure imgf000004_0001
国际专利申请 W02004005248描述了与细胞凋亡蛋白抑制剂结合的 Smac 蛋白的肽抑制剂， 认为可用作治疗包括癌症在内的增殖性病症的 治疗剂。 结构通式如
Figure imgf000004_0002
国际专利申请 WO2005097791披露了认为可抑制 Smac蛋白与细胞凋亡 蛋白抑制剂（IAP)结合的化合物。 结构通式如下式（c)所示。 其中 U如结构 式（c2) 示。
Figure imgf000004_0003
国际专利申请 W02006017295A2 公开了一种用于治疗过度增殖性疾 病， 例如癌症的化合物、 组合物和方法。 结构通式如下式（d)所示。
Figure imgf000005_0001
国际专利申请 W02006014361公开了一种 IAP抑制剂， 称它们可用作 治疗剂治疗恶性肿瘤。 结构通式如下式（e)所示。
Figure imgf000005_0002
提供新的 Smac结构类似物， 能够促进迅速分化的肿瘤细胞发生细胞 凋亡， 同时具有较少的毒副反应， 进而开发安全有效的抗肿瘤药物， 仍然 是临床应用所需要的， 这无疑将有助于推进癌症的治疗进展。 发明内容
本发明提供式（I)化合物及其立体异构体， 以及它们的药学上可接受 的盐，
Figure imgf000005_0003
式中：
R1为- NHC0R3，其中 R3为-（CH2)。~6 -芳基或- (CH2)。~6 -杂芳基，所述芳基或 杂芳基是未取代的或被 1〜5个选自下列一组的取代基所取代： 素、 - NH2、 -OH , C,〜C6烷基、 被 1~3个！ ¾素取代的 C,~C6烷基、 d~C6烷氧基、 被 1〜3 个 素取代的 〜 烷氧基、 -C00H和- C00R4 , 其中 R4为 〜 烷基；
R2为-（CH2)。~6 -芳基、 - (CH2)。~6-CH (苯基）2或- (CH2)。~6-he t， 其中的芳 基为苯基、 萘基或四氢萘基， 且 he t为杂芳基。 本发明还涉及所述式（I)化合物的制备方法。
本发明还涉及含有所述式（I)化合物的药物组合物及其制备方法。 本发明还涉及所述式（I)化合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。 本发明还涉及一种治疗疾病.的方法，所述疾病可通过促进细胞凋亡而 得以减轻或治疗， 包括给需要治疗的病人施用所述式（I)化合物或其药学 上可接受的盐步骤。 在本发明中， 术语 "芳基"是指芳香族烃环基，优选碳原子数为 6~14 个的芳基， 更优选苯基或萘基或四氢萘基.。
在本发明中， 术语 "杂芳基" 是指具有 5〜10个环原子的含有 1〜4个 选自 N、S、0的杂原子的 5〜6元单环及其与苯环稠合而成的双环式杂芳基， 它可以是部分饱和的。 这里， 作为单环杂芳基， 可以提及例如呋喃基、 噻 吩基、 吡咯基、 咪唑基、 吡唑基、 噻唑基、 异噻唑基、 嚅唑基、 异11恶唑基、 三唑基、 四唑基、 噻二唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 p达嗪基、 吡嗪基等； 作为 双环式杂芳基， 可以提及例如苯并呋喃基、 苯并噻吟基、 苯并噻二唑基、 苯并噻唑基、 苯并咪唑基、 吲哚基、 异吲哚基、 吲唑基、 喹啉基、 异喹啉 基、 喹唑啉基等。 作为部分饱和的杂芳基， 可以提及例如 1 , 2， 3， 4-四氢 喹啉基等。
本发明中， 术语 "药学上可接受的盐"是指相对无毒的本发明化合物 的酸加成盐或碱加成盐。 所述酸加成盐为本发明式（I)化合物与合适的无 机酸或者有机酸形成的盐，这些盐可在化合物最后的分离和提纯过程中制 备， 或者可使纯化的式（I)化合物以其游离碱形式与适宜的有机酸或无机 酸进行反应来制备。 代表性酸加成盐包括氢渙酸盐、 盐酸盐、 硫酸盐、 亚 硫酸盐、 乙酸盐、 草酸盐、 戊酸盐、 油酸盐、 棕榈酸盐、 硬脂酸盐、 月桂 酸盐、 硼酸盐、 苯曱酸盐、 乳酸盐、 磷酸盐、 曱苯曱酸盐、 柠檬酸盐、 马 来酸盐、 富马酸盐、 琥珀酸盐、 酒石酸盐、 苯曱酸盐、 曱磺酸盐、 对曱苯 磺酸盐、葡萄糖酸盐、 ^糖酸盐和月桂基磺酸盐等。所述碱加成盐为式（I) 化合物与合适的无机碱或者有机碱形成的盐， 包括例如与碱金属、碱土金 属、 季铵阳离子形成的盐， 例如钠盐、 锂盐、 钾盐、 钙盐、 镁盐、 四曱基 季铵盐、 四乙基季铵盐等； 胺盐， 包括与氨（NH3 ) 、 伯胺、 仲胺或叔胺 形成的盐， 例如曱胺盐、 二曱胺盐、 三曱胺盐、 三乙胺盐、 乙胺盐等。
在本方明的一个实施方案中， 本发明式（I)化合物由下述通式（ II )表
Figure imgf000007_0001
式中 R1和 R2如上文所定义。
在另一个实施方案中， 本发明式（I)化合物由下述通式（ΠΙ)表示:
Figure imgf000007_0002
式中 R2和 R3如上文所定义。
在一个实施方案 本发明式（I)化合物由下述通式（IV)表示:
Figure imgf000007_0003
式中 R1和 R2如上文所定义。
在另一个实施方 本 （I)化合物由下述通式（V )表示:
Figure imgf000007_0004
式中 R'和 R2如上文所定义。
在本发明一个优选的实施方案中， R2为- (CH2)。~6-芳基、 - (CH2)。~6- CH (苯 基 ) 2或- (CH2)。~6- het， 其中的芳基为苯基、 萘基或四氢萘基， 且 het为吲 哚基、 吡啶基、 呋喃基或噻吩基。
在本发明一个优选的实施方案中， R2为-（CH2)。~3-芳基、 - (CH2)。~3-CH (苯 基 ) 2或- (CH2)。~3- het， 其中的芳基为苯基、 萘基或四氢萘基， 且 het为吲 哚基、 吡啶基、 呋喃基或噻吩基。
在本发明的另一个优选的实施方案中， R2为- (CH2)。~3-芳基、 - (CH2)。~3- CH (苯基）2或 - (CH2)。~3-he t， 其中的芳基为苯基或四氢萘基， 且 het为吡啶基、 呋喃基或噻吩基。
在本发明一个优选的实施方案中， R2为- CH (苯基）2。
在本发明另一个优选的实施方案中， R2为 1， 2， 3, 4-四氢萘基。
在本发明另一个优选的实施方案中， R2为苄基。
在本发明另一个优选的实施方案中， R2为 -CH2-呋喃基。
在本发明另一个优选的实施方案中， R2为 - CH2-噻吩基。
在本发明更为优选的实施方案中， R3为苯基或苄基， 所述苯基或苄基 是未取代的或被 1〜3个选自下列一组的取代基取代： 卤素、 -NH2、 -0H、 C,〜( 6烷基、 被 1~3个! ¾素取代的 d~C6烷基、 （,~( 6烷氧基、 被 1~3个卤素 取代的 C,〜C6烷氧基、 - C00H和- C00R4 , 其中 1 4为 C,~C6烷基。
在一个优选实施方案中， R3为苯基或苄基， 所述苯基或苄基是未取代 的或被 1〜3个选自下列一组的取代基取代： 卤素、 - NH2、 -OH , 〜 烷基、 被 1〜3个卤素取代的 〜 烷基、 C,〜C4烷氧基、被 1~3个卤素取代的 d~C4 烷氧基、 -C00H和- C00R4 , 其中 R4为 C,〜C4烷基。
在另一个优选实施方案中， R3为苯基或苄基， 所述苯基或苄基是未取 代的或被 1〜3个选自下列一组的取代基取代： 卤素、 - NH2、 -OH , ( ,〜( 2烷 基、 被 1~3个！ ¾素取代的 C,~C2烷基、 C,~C2烷氧基、 被 1〜3个 1¾素取代的 C,〜C2烷氧基、 - C00H和- C00R4， 其中 R4为 C,〜C2烷基。
在本发明另一个更为优选的实施方案中， R3为苯基或苄基， 所述苯基 或苄基是未取代的或被至少一个选自下列一组的取代基取代： 卤素、 - NH2、 -OH , C,〜C6烷基、 被 1-3个鹵素取代的 C,〜C6烷基、 d~C6烷氧基、 被 1-3 个卤素取代的 ~( 6烷氧基、 -C00H和 -C00R4 , 其中 R4为 d~C6烷基。
在一个优选的实施方案中， R3为苯基或苄基， 所述苯基或苄基是未取 代的或被至少一个选自下列一组的取代基取代： 卤素、 _NH2、 -OH , C,〜C4 烷基、 被 1~3个! ¾素取代的 C,~C4烷基、 ~( 4烷氧基、 被 1~3个！ ¾素取代 的 C,〜C4烷氧基、 -C00H和- C00R4 , 其中 1 4为 d~C4烷基。
在另一个优选的实施方案中， R3为苯基或苄基， 所述苯基或苄基是未 取代的或被至少一个选自下列一组的取代基取代： 卤素、 - NH2、 -OH , C,~C2 烷基、 被 1〜3个! ¾素取代的 d~C2烷基、 （^〜 烷氧基、 被 1〜3个！ ¾素取代 的 d~C2烷氧基、 - C00H和- C00R4, 其中 R4为 d~C2烷基。
在本发明中， 作为通式（I)所表示的化合物， 可具体提及：
(2S,4S)-1-{[(S) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2-{[W)-l,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苯曱酰氨基吡咯烷；
(2 4 )-1-{[(5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ -1， 2 , 3， 4-四氢萘基〗氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基）吡咯 坑;
、1S、 45) - 1- { [ CS) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-甲氧基苯甲酰氨基） 吡咯烷；
、1S、 41S)-l-{[(i) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-三氟曱基苯曱酰氨 基）吡咯烷；
(2 4 )-1-{[(15) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基甲酰基 } -4- (3-曱氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷；
(2 4 )-1-{[( ) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基 } -2- {[(W) -1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧基苯曱酰氨基)吡 咯烷；
(2 4S)-l-{[(S) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- {[ W) - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4- (曱氧曱酰基）苯曱 酰氨基）吡咯烷；
(25； 45)-1-{[(5) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- {二苯曱基氨基曱酰基 } -4-苯曱酰氨基吡咯烷；
(2 45) - 1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2-{[ )-l, 2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄曱酰氨基吡咯烷；
(2S,4S) -1- { [ (5) -2-环己基 - 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- {二苯曱基氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2 45) - 1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基} -2-〖苄基氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2 45)-1-{[(5) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ ( ) - 1-苯基乙基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷； (2 ,4S)-l-{[(S) -2-环己基 -2- ( (5) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [呋喃 -2-基曱基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2S,4S)-\-{[(S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [噻吩 -2-基曱基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2S,4R)-1-{[(S) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ - 1， 2, 3， 4-四氢萘基]氨基甲酰基 } -4-苯曱酰氨基吡咯烷；
{2S, )-l-{[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2-{[ )-l,2,3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯甲酰氨基）吡咯 (2 - 1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2, 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-曱氧基苯甲酰氨基） 吡咯烷；
(2 , 4J?) -1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3, 4-四氢萘基〗氨基甲酰基 } -4- (4-三氟曱基苯曱酰氨 基）吡咯烷；
(2 - 1- { [ (S) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基 } - 2- { [ (V?) - 1 , 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (3-曱氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷
(2 4v?) -1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧基苯曱酰氨基)吡 咯烷；
(2 4 - 1- { [ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基 } - 2- { [ -1， 2， 3， 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4- (甲氧曱酰基）苯甲 酰氨基）吡咯烷；
(2S,4R)-l-{[ (S) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2-{[ ) -1,2,3, 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄曱酰氨基吡咯烷；
(2S,4S) -1- { [ ( ) -2-环己基 -2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基 } -2- { [ - 1 , 2， 3， 4-四氢茶基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯甲酰氨基）吡咯 (2 45) -1- { [ ( ) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2-{[ )-l,2,3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-三氟曱基苯曱酰氨 基）吡咯烷； (2 45) -1- { [ (R) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基 } - 2- { [ - 1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-曱氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷；
(2S, 4S) -1- { [ (J -2-环己基- 2- ( (S) -2 -（曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4- (曱氧曱酰基)苯曱 酰氨基）吡咯烷；
(2 45) - 1- { [ -2-环己基- 2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ ( ) -1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧基苯曱酰氨基)吡 咯烷；
(2S, 4 ) -1- { [ (R) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基} - 2- { [ - 1 , 2, 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄曱酰氨基吡咯烷； 以及它们药学上可接受的盐。 本发明还提供制备式（I)化合物的方法， 它包括步骤：
(a)、使经 Boc基保护的化合物（1)先还原， 然后进行缩合反应 , 得到
Figure imgf000011_0001
其中， R1为 -NHC0R3,其中 R3为- (CH2)。~6-芳基或 - (CH2)。~6-杂芳基，所述芳基 或杂芳基可以是未取代的或被 1〜5 个选自下列一组的取代基所取代： 卤 素、 - NH2、 -OH, C,〜C6烷基、被 1-3个卤素取代的 C,~C6烷基、 〜 烷氧基、 被 1-3个卤素取代的（,〜( 6烷氧基、 -C00H和 -C00R4 ,其中 R4为 〜 烷基； R2为- (CH2)。~6-芳基、 - (CH2)。~6- CH (苯基) 2或- (CH2)。~6- he t， 其中的芳基为 苯基、 萘基或四氢萘基， 且 het为杂芳基；
(b)、 化合物（5)和化合物（6)经缩合反应后还原得到化合物（8)；
Figure imgf000012_0001
(c)、 化合物（4)和化合物（8)经缩合反应再脱保护得到目标化合物
Figure imgf000012_0002
本发明还提供制备式（ in )化合物的方法， 它包括步骤：
(a)、 使 N- Boc-反式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯依次经取代、 还原和两步 缩合反应后得到化合物（1 0)；
Figure imgf000012_0003
(4)
Figure imgf000013_0001
(10) 其中， R2为-（CH2)。~6-芳基、 - (CH2)。~6- CH (苯基 ) 2、 - (CH2)。~6-het， 其中的 芳基为苯基、 萘基或四氢萘基， 且 het 为杂芳基； R3为- (CH2)。~6 -芳基或 - (CH2)。~6 -杂芳基，所述芳基或杂芳基可以是未取代的或被 1〜5个选自下列 一组的取代基所取代： 卤素、 - NH2、 - 0H、 （ 烷基、 被 1〜3个! ¾素取代 的 烷基、 d~C6烷氧基、 被 1~3个 素取代的 C,~C6烷氧基、 - C00H和 -C00R4, 其中 R4为（：！〜 烷基；
(b)、使 N- Boc-N- Me- L-丙氨酸与 L-环己基甘氨酸曱酯进行缩合反应， 然后
Figure imgf000013_0002
( 12)
(c)、 使化合物（10)与化合物（12)进行缩合反应 然后脱保护得到目 标化合物（Ι Π)。
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000014_0002
(Hi)
上述各制备步骤中的缩写词分别表示:
Boc 叔丁氧羰基
CF3COOH 三氟乙酸
CH2C 12 二氯曱烷
DMSO 二曱基亚砜
DIPEA 二异丙基乙基胺
EDC 1 1-（3-二曱氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HoBt 1-羟基苯并三唑
L iOH 氢氧化锂
MeOH 曱醇
MsC l 曱基磺酰氯
NaN3 叠氮化钠
Pd/C 钯碳催化剂
THF 四氢呋喃
TEA 三乙胺 本发明化合物能用于治疗可通过促进细胞凋亡而得以减轻或治疗的 疾病， 所.述疾病包括肿瘤， 特别是恶性肿瘤， 例如乳腺癌、 非小细胞肺癌、 卵巢癌、 胃癌、 结肠癌、 胰腺癌、 表皮样鳞癌等。
因此，本发明还提供本发明化合物在制备治疗可通过促进细胞凋亡而 得以减轻或治疗的疾病、 尤其是肿瘤的药物方面的应用。 本发明化合物可施用于人， 可以经口服、 直肠、 肠胃外（静脉内、 肌 肉内或皮下）以及局部给药（例如以散剂、 栓剂、 软膏剂、 贴剂或滴剂等形 式）施用。 所述化合物可以单独给药， 或者与其它治疗上可接受的药物联 合给药。 需要指出， 本发明的化合物可以混合施用。
因此， 本发明还提供药物组合物， 它含有本发明式（I)化合物或其药 学上可接受的盐作为活性成分， 以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释 剂。 在制备药物组合物时， 通常是将本发明式（I)化合物或其药学上可接 受的盐与药学上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂混合。
可以按照常规制备方法将本发明化合物配制为常规药物制剂。例如片 剂、 丸剂、 胶嚢剂、 散剂、 颗粒剂、 乳液剂、 混浮剂、 分散液、 溶液剂、 糖浆剂、 酏剂、 软膏剂、 滴剂、 栓剂、 贴剂、 吸入剂、 喷射剂等。
本发明用于口服给药的固体剂型包括胶嚢剂、 片剂、 丸剂、 散剂和颗 粒剂。 在这些固体剂型中， 本发明化合物与至少一种常规惰性赋形剂（或 载体）混合， 例如柠檬酸钠或磷酸二钙等， 或与下述成分混合： (a) 填料 或增容剂， 例如， 淀粉、 乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 甘露醇和硅酸等； （b) 粘 合剂， 例如， 羟曱基纤维素、 藻酸盐、 明胶、 聚乙烯基吡咯烷酮、 蔗糖和 阿拉伯胶等； （c) 保湿剂， 例如.， 甘油等； （d) 崩解剂， 例如， 琼脂、 碳 酸麪、 马铃薯淀粉或木薯淀粉、 藻酸、 复合硅酸盐、 和碳酸钠等； （e)緩 溶剂， 例如石蜡等； （f)吸收加速剂， 例如， 季铵化合物等； （g) 润湿剂， 例如鯨蜡醇和单硬脂酸甘油酯等； （h)吸附剂， 例如， 高岭土等； 和（i) 润 滑剂， 例如， 滑石、 硬脂酸钙、 硬脂酸镁、 固体聚乙二醇、 十二烷 ^硫酸 钠等， 或其混合物。 胶嚢剂、 片剂和丸剂中也可包含緩冲剂。
本发明化合物用于口服给药的液体剂型包括药孛上可接受的乳液、溶 液、 悬浮液、 糖浆和酊剂。 除了本发明化合物外， 液体剂型可包含本领域 中常规采用的惰性稀释剂， 例如水或其它溶剂， 增溶剂和乳化剂， 例如， 乙醇、 异丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 丙二醇、 1，3-丁二醇、 二曱基曱酰 胺以及油， 特别是棉籽油、 花生油、 玉米胚油、 橄榄油、 蓖麻油和芝麻油 等或这些物质的混合物。
除了这些惰性稀释剂外，本发明液体剂型也可包含助剂，例如润湿剂、 乳化剂和悬浮剂、 甜味剂、 娇味剂和香料等。 所述悬浮剂包括， 例如乙氧基化异十八烷醇、 聚氧乙烯山梨醇和脱水 山梨醇酯、 微晶纤维素、 曱醇铝和琼脂等或这些物质的混合物。
本发明化合物用于肠胃外注射的剂型可包括生理上可接受的无菌含 水或无水溶液、 分散液、 悬浮液和乳液， 以及用于重新溶解成无菌的可注 射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、 乙醇、 多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的制剂剂型包括软膏剂、散剂、喷射剂、 吸入剂、 贴剂、 栓剂、 滴剂等。 本发明化合物在无菌条件下与生理上可接 受的载体及任何防腐剂、 緩沖剂， 或必要时可能需要的推进剂一起混合。 本发明还提供治疗疾病的方法，所述疾病可通过促进细胞凋亡而得以 减轻或治疗， 包括步骤： 给需要治疗的病人使用 0. 05〜30mg/kg体重 /天的 式（I)化合物或其药学上可接受的盐。 所述的疾病优选为肿瘤。
本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐可以单独施用，或者与其 他治疗剂联合用药， 特别是与其他抗肿瘤药物组合。 所述治疗剂包括但不 限于： （i) D -交联剂， 例如顺铂、 环磷酰胺或氮芥； （i i)抗代谢产物， 例如阿糖胞苷、 曱氨蝶呤（MTX)或 5-吉西他滨； （i i i)插层剂 (interca lat ing agent s) , 例如阿德里亚霉素（阿霉素）或米托蒽醌； (iv) 微管-指引剂， 例如紫杉醇、 秋水仙胺、 秋水仙碱； （V)芳香化酶抑制剂， 例如氨鲁米特、 兰特隆、来曲唑、瑞宁德； （v i)拓朴异构体酶毒素 I毒素， 例如喜树碱; (vi i) 拓朴异构体酶毒素 I毒素， 例如依托泊苷（VP-16) ; (vi i i)表皮生长因子受体抑制剂， 例如伊马替尼（Imat inib )、 吉非替尼 ( Gef i t inib )、 埃罗替尼（Er lot inib )。 待组合的各成分可同时或顺序 地施用， 以单一制剂形式或以不同制剂的形式给予。 所述组合不仅包括本 发明化合物与一种其它活性剂的组合，而且也包括本发明化合物与两种或 更多种其它活性剂的组合。 本发明化合物分别通过细胞实验和动物实验证明其具有癌细胞增殖 抑制作用， 可用于制备治疗癌症的药物。
本发明化合物抑制癌细胞增殖的药效可用常规方法测定，一种优选的 评价方法为磺酰罗丹明 B (Sulforhodamine B, SRB)蛋白染色法： SRB是一 种蛋白结合染料， 可与生物大分子中的碱性氨基酸结合， 其在 510 nm的 光密度（0D )读数与蛋白量呈良好的线性关系， 故可用作细胞数的定量， 通过测定药物作用于癌细胞后所产生的光吸收值的变化来计算药物对癌 细胞增殖的抑制率。
抑制率 ( % ) = ( 0D对照 -0D抑制剂 - 0D空白对照 ) I (0D对照 -0D空白 对照） X 100%
0D对照: 指没有药物作用正常生长的细胞的孔的 0D值。
0D抑制剂：指加入阳性或者待筛选的化合物作用的细胞的孔的 0D值。 0D空白对照： 指没有接种细胞的平行对照孔的 0D值。
半数抑制剂浓度 ( ICso )值通过软件 GraphPad Pr i sm 5计算得到。 本发明化合物抑制肿瘤生长的药效可用常规方法测定，一种优选的评 价方法为观察本发明化合物对人乳腺癌 MCF-7 棵小鼠皮下移植瘤的生长 抑制作用及作用强度。 每只棵鼠灌胃给予本发明化合物 50 mg/kg , 溶剂 对照组给等量溶剂， 每天给药一次， 连续给药 12天。 整个实验过程中， 每两天 1次测量移植瘤直径， 同时称小鼠体重。 肿瘤体积 （Tumor, TV ) 的计算公式为：
TV=l /2 a X b2
其中 a和 b分别表示长和宽。
根据测量的结果计算出相对肿瘤体积 （re lat ive tumor vo lume, RTV ) , 计算公式为： RTV=Vt/V。。其中 V。为分笼给药时（即 dQ )测量所得肿瘤体积， ¥1为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增值率 T/C (%) = (TRTV/CRTV) X 100%
TRTV: 治疗组 RTV; CRTV: 溶剂对照组 RTV。
疗效评价标准： T/C (%) >40%为无效； T/C (%) 40%, 并经统计学处理 p < 0. 05为有效。 附图说明
图 1 为人乳腺癌 MCF-7 棵小鼠单独给予本发明实施例 2 化合物 (50mg/Kg)后， 皮下移植瘤相对体积变化图。 具体实施方式
下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用 于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件 的实验方法， 通常按照常规条件， 或按照制造厂商所建议的条件。 除非另 外说明， 否则份数和百分比为重量份和重量百分比。 实施例 1: (2 45)- 1- 2-环己基 -2- 2- (甲氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } - 2- { [ W) - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苯曱酰 氨基吡咯烷（化合物 1 ) 的制备
1 ) N- Boc-反式- 4-曱磺酰氧基- L-脯氨酸曱酯的制备
Figure imgf000018_0001
1-8(^-反式-4-羟基-1^脯氨酸曱酯515 mg中加入 10 ml二氯曱烷溶 解， 冷却至零摄氏度， 滴加 0.4 ml三乙胺， 滴加完毕后， 再緩慢滴加 0.2 ml曱磺酰氯， 零摄氏度下反应 4小时。 停止反应， 加入 20 ml二氯曱烷， 混合体系依次经过 10%稀盐酸， 饱和碳酸氢钠， 饱和食盐水洗涤后， 有 机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩后得到黄色固体 N- Boc-反式- 4-曱磺 酰氧基 -L-脯氨酸曱酯（1-1)粗品 645 mg, 收率 95°/。。
所得粗品不经纯化， 在以下步骤中用作原料。
H-NMR(CDC13): δ 4.89 (m，lH),4.18 (m, 1H), 3.80 (s, 3H) , 3.4-3.6 (m, 2H), 2.94 (s, 3H) , 2.0-2.2 (m, 2H), 1.3 (s， 9H)。
ESI (+)m/z: 324
2) N- Boc-顺式- -叠氮基 -L-脯氨酸曱酯的制备
Figure imgf000018_0002
O Me
1-1 1-2
N-Boc-反式- 4-甲磺酰氧基- L-脯氨酸曱酯 645 mg中加入 10 ml DMS0 溶解， 加入 260 mg叠氮化钠， 升温至 90摄氏度， 搅拌 8小时。 停止反应， 将反应液冷却至室温， 力 p入 30ml水， 并用乙酸乙酯萃取两次， 合并后的 有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩后得到黄色的油状物 N- Boc-顺式- 4- 叠氮基 -L-脯氨酸曱酯粗品（1-2) 496 mg, 收率 92%。
所得粗品不经纯化， 在以下步骤中用作原料。
H-NMR (CDC13)： δ 4.22 (m, 1H)， 3.84 (s, 3H)， 3.2-3.5 (m, 2H)， 1.8-21 (m, 2H), 1.6(m, 1H), 1.3 (s， 9H)。
ESI (+) m/z: 271
3) N- Boc -顺式- -氨基 -L-脯氨酸曱酯的制备
Figure imgf000019_0001
N- Boc-顺式- 4-叠氮基 -L-脯氨酸曱酯 496 mg中加入 10 ml曱醇溶解， 在氮气保护的条件下加入 75 mg 10%钯碳。 然后将反应体系抽真空， 接入 氢气球， 在室温下搅拌 8小时。 停止反应， 过滤除去钯碳， 浓缩后得到黄 色油状物 N- Boc-顺式- 4 -氨基 -L-脯氨酸曱酯粗品（1-3) 430 mg, 收率 96%。
所得粗品不经纯化， 在以下步驟中作为原料。
H-NMR (CDC13)： δ 4.19 (m， 1H)， 3.80 (s， 3H)， 3.5-3.7 (m， 2H) , 2.8 (m, 1Η)， 2.0〜2· 3 (m, 2Η), 1.3 (s, 9Η)。
ESI (+)m/z: 245
4) N- Boc-顺式- 4-苯 酰胺基 -L-脯氨酸曱酯的制备
Figure imgf000019_0002
1-800-顺式-4-氨基-1-脯氨酸曱酯244 mg中加入 5 ml四氢呋喃溶解， 然后依次加入 122 mg苯甲酸， 211 mg EDCI, 148 mg HoBt, 氮气保护反 应体系， 最后用注射器加入 0.3 ml DIPEA, 室温下搅拌过夜。 停止反应， 将四氢呋喃减压蒸干， 然后在水和乙酸乙酯体系中萃取，有机相合并后依 次用饱和食盐水和水洗， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩， 快速过硅胶柱， 以石油醚： 乙酸乙酯（2: 1 ) 为洗脱剂， 得到白色固体 N- Boc-顺式 -4-苯 曱酰胺基- L-脯氨酸曱酯（1-4) 297 mg, 收率 85%。
H1— NMR(CDC13): δ 7.95 (m, 2H) , 7.4-7.5 (m, 3H) , 4.20 (m, 1H) , 3.80 (s 3H)， 3.74 (m， 1H)， 3.5〜3.7 (m, 2H) , 2.0〜2.3 (m， 2H)， 1.3 (s， 9H)。
.ESI (+) m/z: 348
5) N- Boc-顺式 -4- 酰胺基 -L-脯氨酸的制备
Figure imgf000020_0001
将 N- Boc-顺式- 4-苯曱酰胺基- L-脯氨酸甲酯 297 mg溶解在 5 ml 四氢 呋喃：曱醇：水（ 3ml: lml: lml ) 的混合溶剂中， 然后加入 72 mg一水合氢 氧化锂， 室温下搅拌 2小时。 停止反应， 将溶液调至酸性， 加入二氯曱烷 萃取， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓缩得到浅黄色固体 N- Boc-顺式- 4-苯曱 酰胺基 -L-脯氨酸粗品（1-5) 279 mg, 收率 98%。
所得粗品不经纯化， 在以下步骤中用作原料。
H-NMR (CDC13)： δ 10.90 (s, 1H)， 7.98 (m， 2H)， 7.4〜7.5 (m, 3H)， 4.26 (m, 1H), 3.74 (m, 1H)， 3.5-3.7 (m, 2H)， 2.0〜2.3 (m, 2H)， 1.3 (s, 9H)。
ESI (+)m/z: 335
6)N- (R)-l 2, 3, 4-四氢萘基-（N- Boc-顺式 -4-苯曱酰 -L-脯氨）酰胺的制备
Figure imgf000020_0002
实验操作流程同步骤 4) 反应物为 N-Boc-顺式 -4-苯曱酰胺基 - L-脯 氨酸 279 mg, (R)- 1,2, 3, 4-四氢萘胺 123 mg , 最终得到浅黄色固体 N- (R) -1， 2， 3, 4-四氢萘基- (N- Boc-顺式 -4-苯曱酰 -L-脯氨）酰胺（1-6) 225 mg, 收率 58%。
H1 -画 R (CDC13)： δ 7.98 (m, 2H)， 7.4〜7.5 (m, 3H)， 7.0-7.2 (m, 5H)， 4.96 (d， 1H) , 4.40 (m, 1H), 3.74 (m, 1H) , 3.5-3.7 (m, 2H)， 2.8-2.9 (m， 2H) , 2.0〜2. 3 (m, 2H) , 1, 7-1.95 (m, 2H) , 1.55-1.65 (m, 2H) , 1.3 (s， 9H)。
ESI (+) m/z: 464 7) N- (R) -1 , 2， 3 4-四氢萘基- (顺式 -4-苯曱酰- L-脯氨）酰胺的制备
Figure imgf000021_0001
将 N- (R)-l,2， 3,4-四氢萘基-（N-Boc-顺式- 4-苯曱酰 -L-脯氨）酰胺 225 mg溶解在 5 ml二氯曱烷溶液中， 再滴加 1 ml三氟乙酸， 室温搅拌 4 小时。 停止反应， 减压将溶剂蒸干， 再用二氯曱烷溶解， 加入饱和碳酸氢 钠萃取， 有机相再用饱和食盐水和水洗两次， 无水硫酸镁干燥， 过滤， 浓 缩， 得到浅黄色固体 N- (R)-l， 2， 3, 4 -四氢茶基-（顺式 -4-苯曱酰 -L-脯氨) 酰胺（1-7) 173 mg, 收率 98%。
- H1—丽 R (CDC13)： δ 7.98 (m, 2H)， 7.4-7.5 (m, 3H) , 7.0-7.2 (m, 5H)， 4.96 (d, 1H)， 4, 40 (m, 1H)， 3.74 (m, 1H) , 3.5〜3.7 (m, 2H)， 2.8-2.9 (m, 2H) , 2.0-2. 3 (m，2H)，l，7~1.95(m,2H),1.55〜1.65(m，2H)。
ESI (+)m/z: 364
8 ) N-叔丁氧 - N-曱基 -L-丙氨酰- L-环己基甘氨酸曱酯的制备
Figure imgf000021_0002
实验操作流程同步骤 4) , 反应物为 N-Boc - N-Me- L-丙氨酸 2.03 g, L-环己基甘氨酸曱酯（C5)- 2-环己基 -甘氨酸曱酯）1.71 g， 最终得到白色 固体 N-叔丁氧羰基- N-曱基- L-丙氨酰 -L-环己基甘氨酸曱酯（1-8) 2.46 g, 收率 69%。
H-NMR (CDC13)： δ 5.30 (dd, 1H)， 4.64 (d, 1H) , 3.80 (s, 3H) , 3.22 (s, 3H)， 3.12 (m, 1H), 1.64 (d, 3H), 1.40-1.60 (m, 5H), 1.34 (s, 9H), 1.20-1.40 (m, 5H)
ESI (+) m/z: 357
9) 又丁氧羰基- N-甲基- L-丙氨酰 -L-环己基甘氨酸的制备
Figure imgf000022_0001
实验操作流程同步骤 5 ) , 反应物为 N-叔丁氧羰基- N-曱基- L-丙氨 酰- L-环己基甘氨酸曱酯 2.46 g, 最终得到白色固体 又丁氧羰基- N-曱 基 -L-丙氨酰 -L-环己基甘氨酸（1-9) 2.36 g, 收率 100%。
H1-丽 R (CDC13)： δ 5.34 (dd， 1H) , 4.66 (d, 1Η)， 3.20 (s， 3H) , 3.20 (m, 1H) 1.64 (d， 3H)， 1.40-1.60 (m, 5H)， 1.34 (s， 9H)， 1.20-1.40 (m, 5H)。
ESI (+) m/z: 343
10) N- (R) - 1 , 2， 3， 4-四氢萘基- [N-叔丁氧羰基 - N-曱基- L-丙氨酰 -L-环己 基 - (顺式 -4-苯曱酰） - L-脯氨]酰胺的制备
Figure imgf000022_0002
实验操作流程同步骤 4 )，反应物为 N- (R) -1, 2， 3, 4-四氢萘基-（顺式 - 4-苯曱酰 -L-脯氨）酰胺 173 mg, N-叔丁氧羰基- N-曱基- L-丙氨酰 -L-环己 基甘氨酸 163 mg, 最终得到浅黄色固体 N-(R)- 1, 2， 3, 4-四氢萘基 -(N-叔 丁氧羰基 - N-曱基 -L-丙氨酰 -L-环己基甘氨酰-顺式- 4-苯曱酰- L-脯氨）酰 胺（1-10) 105 mg, 收率 34%。
H-NMR (CDC13)： δ 8.00 (m, 2H)， 7.4〜7.5 (m, 3H)， 7.0~7.2 (tn, 5H)， 5.34 (dd, 1H)， 5.20 (d, 1H)， 4.86 (d, 1H) , 4.46 (m， 1H)， 4.08 (m, 1H)， 3.86 (m, 2H)， 3.20 (m, 1H) , 3.12 (s， 3H)， 2.8-2.9 (m, 2H)， 2.40-2.60 (m, 2H)， 1， 70-1.95 (m ， 2H)， 1， 64 (d, 3H), 1.55-1.65 (m, 2H)， 1.40-1.60 (m， 5H)， 1.34 (s， 9H)，1.20 ~1.40(m, 5H)0
ESI (+) m/z: 688
11)标题 1的制备
1-10
实验操作流程同步骤 7 )， 反应物为 N -（ R ) - 1， 2， 3， 4 -四氢萘基- ( N -叔丁氧羰基 - N-甲基 -L-丙氨酰- L-环己基甘氨酰-顺式 -4-苯曱酰 -L-脯 氨）酰胺 105 mg。 粗产物以二氯曱烷：甲醇（ 20: 1 ) 为洗脱剂快速过硅胶 柱， 最终得到浅黄色固体 56 mg， 收率 62%。
H-NMR (CDC13)： δ 8.00 (m, 2H)， 7.4-7.5 (m, 3H) , 7.0〜7.2 (m, 5H)， 5.34 (dd, IH) , 5.20 (d, IH), 4.86 (d， IH) , 4.46 (m, IH)， 4.08 (m, IH)， 3.86 (m, 2H)， 3 .20 (m, IH) , 3.02 (s， 3H)， 2.8〜2.9 (m, 2H) , 2.40-2.60 (m, 2H) , 1， 70-1.95 (m, 2H)， 1.56 (d, 3H)， 1.55-1.65 (m, 2H) , 1.40-1.60 (m, 5H)， 1.20-1.40 (m, 5H)。
ESI (+)m/z: 588 实施例 2: (2 45)-1-{[(5)- 2-环己基 - 2- (( )- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- {[(^)-1,2,3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟 苯甲酰氨基)吡咯烷（化合物 2 ) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 4)中的反应物苯曱酸以 4-氟苯曱酸代 替， 获得化合物 2。
H〗 -匪 R (CDC13)： δ 7.98 (dd, 2H)， 7.0-7.2 (m, 6H)， 5.34 (dd, IH) , 5.20 (d, IH) 4.86 (d, IH)， 4.46 (m, IH) , 4.08 (m, IH)， 3.86 (m, 2H)， 3.20(m, IH) , 3.02 (s， 3 H)， 2.8-2.9 (m, 2H) , 2.40-2.60 (m, 2H), 1, 70-1.95 (m, 2H) , 1.56 (d, 3H)， 1.5 5-1.65 (m, 2H)， 1.40-1.60 (m， 5H)， 1.20-1.40 (m, 5H)。
ESI (+) m/z: 606 实施例 3: (2 4 )- 1- {[½)- 2-环己基 - 2-(GS)-2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } - 2- { [ 0?) - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4 -曱 氧基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 3) 的制备
实验步骤同实施例 1, 但步骤 4)中的反应物苯曱酸以 4-曱氧基苯曱 酸代替， 获得化合物 3。
H-NMR (CDC13)： δ 7.84 (d, 2H)， 7.0-7.2 (m, 4H)， 6.98 (d, 2H)， 5.34 (dd, IH) , 5.20 (d, IH) , 4.86 (d, IH) , 4.46 (m, IH)， 4.08 (m， IH)， 3.86 (m, 2H) , 3.80 (s， 3H) , 3.20 (m, IH) , 3.02 (s, 3H)， 2.8〜2.9 On, 2H)， 2.40-2.60 (m, 2H) , 1, 70 ~1.95 (m, 2H), 1.56 (d, 3H) , 1.55-1.65 (m, 2H), 1.40-1.60(m, 5H)， 1.20~1.4 0(m，5H)。
ESI (+) m/z: 618 实施例 4: (2 4 )-1-{[( )-2-环己基-2-((5)-2-(曱氨基）丙酰氨基）]- 乙酰基 } -2- { [ 0?) -1， 2， 3， 4一四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4 -三 氟曱基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 4 ) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 4)中的反应物苯曱酸以 4-三氟曱基苯 曱酸代替， 获得化合物 4。
H-NMR (CDC13)： δ 8.02 (d, 2H)， 7.64 (d， 2H)， 7.0-7.2 (m, 4H)， 5.34 (dd, IH)， 5.20(d, IH)， 4.86 (d, IH) , 4.46 (m, IH)， 4.08 (m, IH) , 3.86 (m, 2H) , 3.20 (m, 1 H)， 3.02 (s, 3H) ;2.8〜2.9 (m, 2H) , 2.40-2.60 (m， 2H) , 1, 70-1.95 (m， 2H)， 1.5 6 (d, 3H)， 1.55-1.65 (m, 2H)， 1.40-1.60 (m, 5H)， 1.20-1.40 (m, 5H)。
ESI (+)m/z: 656 实施例 5： (2 4 )-1- 2-环己基 - 2-(( )- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- { [ 0?) - 1， 2 , 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (3-甲 氧基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 5 ) 的制备
实验步骤同实施例 1, 但步骤 4)中的反应物苯曱酸以 3-曱氧基苯曱 酸代替， 获得化合物 5。
H-NMR (CDC13)： δ 7.46—7.52 (m, 2H)， 7.34 (t, IH)， 7.00-7.20 (m， 5H)， 6.98 (d, 2H)， 5.34 (dd, IH)， 5.20 (d, IH)， 4.86 (d, IH)， 4.46 (m, IH)， 4.08 (m, IH) , 3.86 (m， 2H)， 3.80 (s， 3H) , 3.20 (m, IH)， 3.02 (s, 3H) , 2.8-2.9 (m, 2H)， 2.40- 2.60 (m， 2H), 1, 70—1.95 (m, 2H)， 1.56 (d, 3H)， 1.55-1.65 (m， 2H)， 1.40—1.60 (m, 5H), 1.20-1.40 (m,5H)0
ESI(+)m/z: 618 实施例 6: (2 45)-1- {[(5) - 2-环己基 - 2- (( )-2 -(曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2-{[ )-l,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧 基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 6 ) 的制备
实验步骤同实施例 1, 但步骤 4) 中的反应物苯曱酸以 4 -羧基苯曱酸 代替， 获得化合物 6。
H1-画 R (CDC13)： δ 11.50(s, IH), 8.32 (d， 2H) ,8.16 (d, 2H)， 7.0-7.2 (m, 4H)， 5.34 (dd, IH) , 5.20 (d， IH)， 4.86 (d, IH)， 4.46 (m, IH)， 4.08 (m, IH)， 3.86 (m, 2H) , 3.20 (m, IH)， 3.02 (s, 3H)， 2.8-2.9 (m, 2H) , 2.40-2.60 (m, 2H)， 1， 70-1. 95 (m, 2H)， 1.56 (d, 3H)， 1.55-1.65 (m, 2H)， 1.40-1.60 (m, 5H)， 1.20-1.40 (m
， 5H)。
ESI (+) m/z: 632 实施例 7: (2 4 )- 1- {[( - 2-环己基 -2- (GS)-2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2— { [ — 1， 2， 3， 4—四氢萘基]氨基甲酰基 } -4- (4- (曱 氧曱酰基）苯曱酰氨基)吡咯烷（化 物 7 ) 的制备 实验步骤同实施例 1， 但步骤 4) 中的反应物苯曱酸以 4- (曱氧曱酰 基）苯曱酸代替， 获得化合物 7。
H-NMR (CDC13)： δ 8.16 (d， 2H)， 8.04 (d, 2H)， 7.0〜7.2 (m, 4H)， 5.34 (dd, 1H)， 5.20 (d, 1H)， 4.86 (d, 1H)， 4.46 (m, 1H) , 4.08 (m, IH)， 3.86 (m, 2H) , 3.80(s, 3 Η)， 3.20 (m， IH) , 3.02 (s， 3H) , 2.8〜2, 9 (m, 2H)， 2.40-2.60 (m， 2H), 1, 70-1.9 5 (m, 2H)， 1.56 (d, 3H) , 1.55-1.65 (m, 2H)， 1.40-1.60 (m, 5H) , 1.20-1.40 (m, 5H)。
ESK+) m/z: 646 实施例 8: (2 4 )-l- 2 -环己基- 2- (CS)-2 -(曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- {二苯甲基氨基曱酰基 } -4-苯曱酰氨基吡咯烷（化 合物 8) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 6) 中的反应物（R)- 1,2， 3， 4-四氢萘胺 以二苯曱胺代替， 获得化合物 8。 H-NMR (CDCh)： δ 8.00 (m， 2H)， 7.4〜7.5 (m, 3H)， 7.4〜7.06 (m, 10H)， 6.20 (s， IH) , 5.20 (d, IH) , 4.86 (d, IH) , 4.46 (m, IH)， 4.08 (m, IH)， 3.86 (m, 2H)， 3.20 (m, IH)， 3.02 (s， 3H) , 2.40-2.60 (m, 2H)， 1.56 (d, 3H)， 1.40-1.60 (m, 5H)， 1. 20-1.40 (m, 5H) 0
ESI(+)m/z: 624 实施例 9: (？^^ - ^^ -环己基-？- ^- 氨基 丙酰氨基)]- 乙酰基 } - 2- { [ (A) - 1， 2 , 3, 4-四氢萘基]氨基甲酰基 } -4-苄曱酰 氨基吡咯烷（化令物 9 ) 的制备
实验步骤同实施例 1，但步骤 4)中的反应物苯甲酸以苄基曱酸代替， 获得化合物 9。
H-NMR (CDC13)： δ 7.0-7.2 (m, 9H) , 5.34 (dd, IH) , 5.20 (d， IH)， 4.86 (d, IH)， 4.46 (m, IH)， 4.08 (m, IH)， 3.86 (m, 2H)， 3.44 (s， 2H)， 3.20 (m， IH)， 3.02 (s， 3 H) , 2.8-2.9 (m， 2H) , 2.40-2.60 (m, 2H) , 1， 70-1.95 (m, 2H)， 1.56 (d, 3H) , 1.5 5-1.65 (m， 2H) , 1.40-1.60 (m， 5H)， 1.20-1.40 (m, 5H)。
ESI (+) m/z: 602 实施例 10: (2 4 - 1- 2-环己基 - 2- (GS)- 2- (曱氨基）丙酰氨基)] - 乙酰基 } - 2- {二苯甲基氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基）吡咯 烷（化合物 10) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 4) 中的反应物苯曱酸和步骤 6) 中的 反应物 （R) -1， 2， 3， 4-四氢萘胺分别以 4-氟苯曱酸和二苯曱胺代替， 获 得化合物 10。
ESI (+) m/z: 642 实施例 11: (2 45)- 1- {[( )- 2-环己基 - 2- 2 -(曱氨基）丙酰氨基）]「 乙酰基 } -2- {苄基氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基）吡咯烷 (化合物 11 ) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 4) 中的反应物苯曱酸和步骤 6) 中的 反应物 （R) -1， 2， 3， 4-四氢萘胺分别以 4-氟苯曱酸和苄胺代替， 获得化 合物 11。
ESI(+)m/z: 566 实施例 12: (2 45)-l- 2-环己基 - 2- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- { [ (R) - 1-苯基乙基]氨基甲酰基 } -4- (4-氟苯曱酰 氨基)吡咯烷（化合物 12 ) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 4) 中的反应物苯曱酸和步骤 6) 中的 反应物（ R ) - 1， 2, 3， 4-四氢萘胺分别以 4-氟苯曱酸和 1- (曱基)苄胺代替， 获得化合物 12。
ESI (+)m/z: 580 实施例 13: (2 45)- 1- 2-环己基 - 2- (CS)- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- { [呋喃 -2-基甲基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨 基)吡咯烷（化合物 13) 的制备
实验步骤同实施例 1, 但步骤 4) 中的反应物苯甲酸和步骤 6) 中的 反应物（R) -1， 2， 3， 4-四氢萘胺分别以 4-氟苯曱酸和呋喃曱胺代替， 获 得化合物 13。
ESI (+) m/z: 556 实施例 14: (2S,4S) -1- { [ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ]― 乙酰基 } -2- { [噻吩 -2 -基曱基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨 基）吡咯烷（化合物 14 ) 的制备
实验步骤同实施例 1, 但步骤 4) 中的反应物苯曱酸和步骤 6) 中的 反应物（R) -1,2, 3,4-四氢萘胺分别以 4-氟苯曱酸和噻吩甲胺代替， 获 得化合物 14。
ESI (+) m/z: 572 实施例 1-1
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
实施例 15: (2 )- 1- {[05)- 2-环己基 - 2- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } - 2- { [ (v?) - 1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苯甲酰 氨基吡咯烷（化合物 15 ) 的制备
实验步骤同实施例 1， 但步骤 1 ) 中的反应物 N- Boc-反式- 4-羟基- L- 脯氨酸曱酯以 N-Boc-顺式 -4-羟基- L-脯氨酸曱酯代替， 获得化合物 15。
ESI (+)m/z: 588 实施例 16: (2 4^-1- {[( )-2-环己基 - 2- (( )-2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- {[ )-l,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟 苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 16) 的制备
参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1， 但步骤 1 ) 中的反应物 N- Boc-反式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和步骤 4 )中的反应物苯曱 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和 4-氟苯曱酸代替， 获得化 合物 16。
ESI (+) m/z: 656 实施例 17: (2 4Α)-1- 2-环己基 -2- (C5)- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- { [ 0?) - 1， 2, 3， 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-曱 氧基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 17) 的制备
参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1, 但步骤 1 ) 中的反应物 Ν- Boc-反式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和步骤 4 )中的反应物苯曱 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基- L-脯氨酸甲酯和 4-曱氧基苯曱酸代替， 获 得化合物 17。
ESI (+) m/z: 618 实施例 18: (2 47?)-l- UCS)- 2-环己基 - 2- (CS)- 2- (曱氨基）丙酰氨基)] - 乙酰基 } -2-{[ ) -1,2, 3, 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4 -三 氟曱基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 18) 的制备
参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1, 但步骤 1 ) 中的反应物 N-Boc-反式 -4-羟基 -L-脯氨酸曱酯和步骤 4)中的反应物苯曱 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基 -L-脯氨酸曱酯和 4-三氟曱基苯曱酸代替， 获得化合物 18。
ESI (+) m/z: 656 实施例 19: (2S,4R)-\-{[(S) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] - 乙酰基 } -2-{[ )-l,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (3-曱 氧基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 19) 的制备
参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1, 但步骤 1 ) 中的反应物 N-Boc-反式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和步骤 4)中的反应物苯曱 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和， 3-曱氧基苯曱酸代替， 获 得化合物 19。
ESI (+) m/z: 618 实施例 20: (2 4^-1- 2-环己基 - 2-((5)-2- (甲氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- { [ -1 , 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧 基苯曱酰氨基）吡咯烷（化合物 20) 的制备
参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1, 但步骤 1 ) 中的反应物 N- Boc-反式 -4-羟基- L-脯氨酸曱酯和步骤 4 )中的反应物苯甲 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和 4-羧基苯曱酸代替， 获得 化合物 20。
ESK+) m/z: 632 实施例 21: (2S,4R)~1-{[(S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] - 乙酰基 }—2— { [ 0?)— 1， 2 , 3， 4—四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4- (曱 氧曱酰基）苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 21 ) 的制备 参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1, 但步骤 1 ) 中的反应物 N- Boc-反式 -4-羟基- L-脯氨酸曱酯和步骤 4 )中的反应物苯甲 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和 4- (曱氧曱酰基）苯曱酸代 替， 获得化合物 21。
ESK+) m/z: 646 实施例 22: (2S, R)-1-{[ (S) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] - 乙酰基 } - 2- { [ -1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄曱酰 氨基吡咯烷（化合物 11、 的制备
参照实施例 15化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1， 但步骤 1 ) 中的反应物 N- Boc-反式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和步骤 4 )中的反应物苯曱 酸分别以 N- Boc-顺式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯和苄基曱酸代替，获得化合物 22。
ESI (+)m/z: 602
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
实施例 23: (2 , 4S) -1-{[ (R) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] - 乙酰基 } - 2- { [ 0?) - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟 苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 23) 的制备
实验步骤同实施例 1, 但步骤 4)中的反应物苯曱酸和步骤 8)中的反 应物（5) -2-环己基-甘氨酸曱酯分别以 4-氟苯曱酸和 -2-环己基 -甘氨 酸曱酯代替， 获得化合物 23。
ESI (+) m/z: 606 实施例 24: (2 4 )- 1- {[( - 2-环己基 - 2- ((5)-2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2-{[ )-l,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-三 氟曱基苯甲酰氨基)吡咯烷（化合物 24) 的制备
参照实施例 23化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1， 但步骤 4 ) 中的反应物苯曱酸和步骤 8)中的反应物（5) -2-环己基 -甘氨酸曱酯分别以 4-三氟甲基苯曱酸和 0¾- 2-环己基 -甘氨酸曱酯代替， 获得化合物 24。
ESI (+)m/z: 656 实施例 25: (2 4 )-1- {[0?)- 2-环己基 - 2- 2- (曱氨基）丙酰氨基）] - 乙酰基 } -2- { [ - 1， 2 , 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-曱 氧基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 25 ) 的制备
参照实施例 23化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1, 但步骤 4 ) 中的反应物苯曱酸和步骤 8)中的反应物（5) -2-环己基-甘氨酸曱酯分别以 4-曱氧基苯曱酸和 0?)- 2-环己基 -甘氨酸曱酯代替， 获得化合物 25。
ESI (+) m/z: 618 实施例 26: (2 45) - 1- { [ 0?) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基) ] - 乙酰基 } - 2- { [ - 1 , 2 , 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } - 4- (4- (曱 氧曱酰基）苯甲酰氨基)吡咯烷（化合物 26 ) 的制备 参照实施例 23化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1， 但步骤 4 ) 中的反应物苯曱酸和步骤 8)中的反应物（5) -2-环己基-甘氨酸甲酯分别以 4- (曱氧曱酰基）苯曱酸和 -2-环己基-甘氨酸甲酯代替，获得化合物 26。
ESI (+) m/z: 646 实施例 27: (2 45) -1- { [ -2-环己基 -2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] - 乙酰基 } -2- {[(^)-1, 2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4 -羧 基苯曱酰氨基)吡咯烷（化合物 27 ) 的制备
参照实施例 23化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1， 但步骤 4 ) 中的反应物苯曱酸和步骤 8)中的反应物（5) -2-环己基-甘氨酸曱酯分别以 4-羧基苯甲酸和 0¾- 2-环己基 -甘氨酸曱酯代替， 获得化合物 27。
ESI (+)m/z: 632 实施例 28: (2 45) - 1- { [ 0?) -2 -环己基- 2- ( (S) -2 -(曱氨基）丙酰氨基） ] - 乙酰基 } -2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄甲酰 氨基吡咯烷（化合物 28 ) 的制备
参照实施例 23化合物的合成方法， 实验步骤同实施例 1， 但步骤 4 ) 中的反应物苯曱酸和步骤 8)中的反应物 05)- 2-环己基 -甘氨酸曱酯分别以 苄基曱酸和 0?) -2-环己基 -甘氨酸曱酯代替， 获得化合物 28。
ESI (+) m/z: 602
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
实施例 29: 胶嚢剂的制备
化合物 2 20g
淀粉 140g
微晶纤维素 65g
按常规方法， 将上述物质混合均勾后， 装入普通明胶胶嚢， 得到 1000 颗胶嚢。
按类似方法， 分别制得含其他实施例化合物的胶嚢。 实施例 30: 本发明化合物对人卵巢癌细胞（SK- 0V- 3)或人乳腺癌细胞
(MDA-MB-231 )增殖抑制作用
将处于对数生长期的人卵巢癌细胞或人乳腺癌细胞以约 5500个 /孔 的密度接种于 96孔培养板， 180μ1/孔。 贴壁生长 24hr再加实施例化合物 20μ1/孔， 给药组每个浓度设三复孔， 并设相应浓度的溶媒对照及无细胞 凋零孔。 细胞在 10% Hyclone胎牛血清， 37°C、 5%C02条件下培养 72hr。 加入 50%的冷三氯乙酸（TCA) 50μ1， 4°C放置 1小时， 固定细胞。 倾去 液体， 用蒸馏水轻緩洗涤 5次， 空气中自然干燥。 加入由 1%冰醋酸配制 的 SRB 4mg/ml溶液 ΙΟΟμΙ/孔， 室温中染色 15分钟。 弃上清液， 用 1%醋 酸洗涤 5次，空气中干燥。每孔加入 150μ1的 10mM的 Tris溶液（ pH 10.5), 溶解结合的 SRB。 酶标仪 510nm波长下测定 0D值， 通过计算获得实施例 化合物对于 SK-0V- 3细胞和人乳腺癌细胞的 IC5。值： 化合物 Κ5。（μΜ)
SK- 0V-3 MDA-MB- 化合物 1 2. 45 - 化合物 2 1. 99 4.82
化合物 3 2. 91 2.51
化合物 5 4. 03 1.11
化合物 7 3. 13 - 化合物 9 9. 42 - 化合物 10 0. 91 2.26
化合物 11 0. 59 1.75
化合物 12 0. 20 0.74
化合物 14 0. 71 0.46
"-" 表示未检测。
测试结果表明： 本发明化合物对人卵巢癌细胞（SK- 0V- 3) 和人乳腺 癌细胞（MDA- MB- 231) 均有良好的增殖抑制作用。 实施例 31: 细胞凋亡检测
将人卵巢癌细胞 ( SK-0V-3 ) 以 3x107孔接种到 6孔板中，37°C, C02 培养箱中培养 24h， 加入阴性对照或实施例 10化合物，继续培养 24h， 小 心收集细胞培养液到离心管内， 每孔加入 lml PBS，洗涤细胞， 并弃上清 液。 加入胰酶消化， 将细胞收集到离心管内。 lOOOg离心 5分钟， 去除培 养基。 细胞用 0.5 ml预冷的 PBS轻轻重悬。 lOOOg离心 5分钟， 去除 PBS 溶液。 将细胞用 0.5ml预冷的 lx结合緩沖液轻轻重悬。 加入 1.25μ1 annexin V-FITC, 室温 （ 18-24°C )避光反应 15min。 室温 lOOOg离心 5 分钟， 去除上清液。 将细胞用 0.5ml预冷的 lx结合緩沖液轻轻重悬。 力口 入 ΙΟμΙ propidium iodide.并冰上保存。 将样本用 300目的筛网过滤， 立即用流式细胞仪分析。
结果： 阴性对照组 4.71%细胞发生凋亡， 给药组 53.82%细胞发生凋亡。 表明本发明化合物能够诱导人卵巢癌细胞（SK-0V- 3) 凋亡。 实施例 32: 本发明化合物对人乳腺癌 MCF- 7棵小鼠皮下移植瘤的生长抑 制作用
观察本发明化合物单独给药 ,对人乳腺癌 MCF- 7棵小鼠皮下移植瘤的 生长抑制作用及作用强度。 溶剂： 1. 0%羧曱基纤维素钠（ 1. 0 % CMC-Na ) 。 实施例化合物以 1. 0 % CMC- Na分散， 设 50mg/kg剂量组， 另设溶剂对照 组。 实验动物： BALB/cA裸小鼠， 雌性， 体重 18 ± 2g。 实验方法： 每只棵 鼠灌胃给予实施例化合物 50 mg/kg , 溶剂对照组给等量溶剂， 每天给药 一次， 连续给药 12天。 整个实验过程中， 每两天 1次测量移植瘤直径， 同时称小鼠体重。
肿瘤体积 ( Tumor, TV ) 的计算公式为：
TV=l /2 a b2
其中 a和 b分别表示长和宽。
根据测量的结果计算出相对肿瘤体积 （ re l a t ive tumor vo lume, RTV ) , 计算公式为： RTV=Vt/V。。 其中 V。为分笼给药时（即 d。） 测量所得 肿瘤体积， Vt为每一次测量时的肿瘤体积。 抗肿瘤活性的评价指标为相对 肿瘤增值率 T/C ( % ) = ( TRTV/CRTV ) X 100%
TRTV: 治疗组 RTV; CRTV: 溶剂对照组 RTV。 结果见图 1， 与溶剂对照组相比， 人乳腺癌 MCF- 7棵小鼠单独给予本 发明实施例 1化合物（50mg/Kg)后， 皮下移植瘤相对体积增长緩慢。
测试结果表明：本发明化合物对人乳腺癌 MCF- 7裸小鼠皮下移植瘤的 生长具有抑制作用。 实施例 33: 小鼠亚急性毒性实验
ICR小鼠， 雌性， 体重 20 ± 2g , 分组， 每组 6只， 分别连续 14天灌胃 给予阴性对照溶剂 ( 0. 5%CMC-Na ) 、 实施例 2化合物 25mg/Kg、 50mg/Kg、 100mg/Kg , 观察毒性反应及死亡情况。 给药期每天观察 1次， 包括但不限 于行为、 活动、 步态、 呼吸、 胃肠道功能等征状。 给药前称重 1次， 以后 每 3天 （第 1、 4、 7、 10和 14天） 称重一次。
结果： 与阴性对照组相比， 25mg/kg和 50mg/kg组动物在给药 14天内 动物行为未见明显异常； 在 13天的观察期间， 溶剂对照组动物的平均体 重增加 35. 2%， 25mg/kg组动物平均体重增加 38. 2%, 50mg/kg组动物平均 体重增加 33. 3%。 100mg/kg组动物平均体重增加 22. 8%, 100mg/kg组动物 在给药后第 10天， 部分动物开始出现喘息， 但未见明显毒副反应。
实验结果表明： 本发明化合物给予动物后， 毒副作用小， 具有较好的 安全性。 在本文中提及的所有文献均通过引用被并入本申请中。此外还应指明 的是， 在阅读了本申请的上述公开内容之后， 本领域技术人员可以无需背 离本发明的精神和范围， 对本发明作出各种修饰、 改动或修改， 但这些变 化形式同样都应落于本申请所附权利要求书所记载的范围。

Claims

权 利 要 求
1.由下述通式（I)表示的化合物或其立体异构体， 或其药学上可接受 的盐
Figure imgf000038_0001
式中
R1为- NHC0R3，其中 R3为- (CH2)。~6-芳基或 - (CH2)。~6 -杂芳基， 所述芳基 或杂芳基是未取代的或被 1~5 个选自下列一组的取代基所取代： 卤素、 -NH2、 -OH, d~C6烷基、 被 1〜3个! ¾素取代的（ 烷基、 d~C6烷氧基、 被 1〜3个卤素取代的 C,〜C6烷氧基、 -C00H和- C00R4， 其中 R4为 〜 烷基;
R2为-（CH2)。~6 -芳基、 - (CH2)。~6- CH (苯基）2或-（CH2)。~6-het , 其中的芳 基为苯基、 萘基或四氢萘基， het为杂芳基。
2. 如权利要求 1所述的式（I)化合物或其药学上可接受的盐， 其中所 述的 R2为- CH (苯基）2、 1， 2， 3， 4-四氢萘基、 苄基、 - CH2 -呋喃基或- CH厂噻 吩基。
3. 如权利要求 1或 2所述的式（I)化合物或其药学上可接受的盐， 其 中所述的 R3为苯基或苄基，所述苯基或苄基是未取代的或被至少一个选自 下列一组的取代基取代： 鹵素、 - NH2、 -OH, 〜 烷基、 被 1~3个卤素取 代的 〜( 6烷基、 d~C6烷氧基、 被 1〜3个! ¾素取代的 d~C6烷氧基、 -C00H 和- C00R4 , 其中 R4为 C,〜C6烷基。
4. 如权利要求 1所述的式（I)化合物或其药学上可接受的盐， 由下述 通式（Π )表示：
Figure imgf000038_0002
其中， R1和 R2如权利要求 1所定义。
5. 如权利要求 4所述的式（I)化合物或其药学上可接受的盐， 由下述 通式（III)表示:
Figure imgf000039_0001
其中， R2和 R3如权利要求 1所定义。
6. 如权利要求 1所述的式（I)化合物或其药学上可接受的盐
通式
Figure imgf000039_0002
式中 R1和 R2如权利要求 1所定义。
7. 如权利要求 1所述的式（I)化合物或其药学上可接受的盐
通式（V )表示：
Figure imgf000039_0003
式中 R1和 R2如权利要求 1所定义。
8. 如权利要求 1所述的式（I)化合物， 选自下列化合物或其药学上可 接受的盐：
(2 45) -1- { [ (S) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ (R) -1 , 2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } - 4-苯曱酰氨基吡咯烷；
(25； 45) -1- { [ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ W) -1 , 2 , 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基）吡咯
(2S, 4S) -1- { [ (S) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基 } - 2- { [ -1 , 2 , 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-曱氧基苯甲酰氨基) 吡咯
(2 45)-l-{[(i) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2-{[ )-l,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-三氟曱基苯甲酰氨 基）吡咯烷；
(2S, 4S)-1- {[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (3-曱氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷；
(2 45) -1- { [ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ 0?) - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧基苯曱酰氨基)吡 咯烷；
(25,45) -1- { [ (S) -2-环己基 -2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ 0?) - 1 , 2， 3, 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4- (曱氧曱酰基）苯曱 酰氨基）吡咯烷；
(2S, S)-1-{[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- {二苯甲基氨基曱酰基 } -4-苯曱酰氨基吡咯烷；
(2S, 4S)-l- {[ (S) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ W) -1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄曱酰氨基吡咯烷；
(2S, 4S)-l-{[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- {二苯曱基氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2S, 4S) -1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基} -2- {苄基氨基曱酰基} -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2 4S)-\- {[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ (JH) -1-苯基乙基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2 45) -1-{[(5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [呋喃 -2-基曱基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2 45)-1-{[(5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [噻吩 -2-基曱基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基)吡咯烷；
(2S, 4R)-l- {[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- {[ ) -1,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苯曱酰氨基吡咯烷；
(2 - 1- {[ (S) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基 } - 2- { [ - 1 , 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基）吡咯 (25； 4 ) -1- { [ (5) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-甲氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷；
(2 - 1- { [ (S) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ 0?) - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基甲酰基 } -4- (4-三氟曱基苯曱酰氨 基）吡咯烷；
(2 4v?) - 1- { [ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基 } - 2- { [ - 1 , 2 , 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (3-甲氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷；
(2S,4R)-1-{[(S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ (A) - 1 , 2， 3， 4-四氢萘基]氨基甲酰基 } -4- (4-羧基苯曱酰氨基)吡 咯烷；
(2 4R) -1- { [ (S) -2-环己基 -2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ 0?) - 1， 2 , 3， 4 -四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4 -（甲氧曱酰基）苯甲 酰氨基）吡咯烷；
(2S,4R)-l-{[ (S) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (甲氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1 , 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4-苄曱酰氨基吡咯烷；
(2 4 ) - 1- { [ ( ) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢茶基]氨基曱酰基 } -4- (4-氟苯曱酰氨基）吡咯 坑；
(25； 4 ) -1- { [ (B) -2-环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-三氟曱基苯曱酰氨 基）吡咯烷；
(2S,4S)-l-{[(R) -2 -环己基- 2- ( (5) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基} -2- {[(^)-1,2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-曱氧基苯曱酰氨基） 吡咯烷；
(2 4 - 1- { [ (R) -2-环己基- 2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基）卜乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3， 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4- (曱氧曱酰基)苯曱 酰氨基）吡咯烷；
(2S,4S)-l-{[ (R) -2-环己基 -2- ( (S) -2 -(曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} - 2- { [ - 1， 2， 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } -4- (4-羧基苯曱酰氨基)吡 咯烷； (2S, 4S) -1- { [ (H) -2-环己基 -2- ( (S) -2- (曱氨基）丙酰氨基） ] -乙酰 基} -2- { [ (JH) -1 , 2, 3, 4-四氢萘基]氨基曱酰基 } - 4-苄曱酰氨基吡咯烷。
9.制备权利要求 1所述的式（I)化合物的方法， 它包括步骤：
(a)、使经 Boc基保护的化合物（1)先还原， 然后进行缩合反应， 得 化合物（3)， 脱 Boc保护基后得到化合物（4)；
Figure imgf000042_0001
(4)
其中， R1为- NHCOR3，其中 R3为- (CH2)。〜6-芳基或 - (CH2) u-杂芳基， 所述芳 基或杂芳基是未取代的或被 1~5个选自下列一组的取代基所取代： 卤素、 - NH2、 -OH, C,~C6烷基、 被 1~3个卤素取代的 d~C6烷基、 〜 烷氧基、 被 1〜3个 1¾素取代的 C,〜C6烷氧碁、- C00H和- C00R4,其中 R4为 d~C6烷基; R2为- (CH2)。~6 -芳基、 - (CH2)。~6- CH (苯基 ) 2或- (CH2)。~6- het , 其中的芳基为 苯基、 萘基或四氢萘基， 且 het为杂芳基；
b)、 化 5)和化合物（6)经缩合反应后还原得到化合物（8)；
Figure imgf000042_0002
(c)、 化合物（4)和化合物（8)经缩合反应再脱保护得到式（I)化合物
Figure imgf000043_0001
10.制备权利要求 5所述的式（III)化合物的方法， 它包括步骤： (a)、 使 N- Boc-反式- 4-羟基- L-脯氨酸曱酯依次经取代、 还原和两步 缩合反应后得到化合物（10) ; '
Figure imgf000043_0002
(10) 其中， R2为- (CH2)。~6 -芳基、 - (CH2)。~6- CH (苯基 ) 2或- (CH2)。~6-het， 其中的 芳基为苯基、 萘基或四氢萘基， 且 het 为杂芳基； R3为 - (CH2)。~6 -芳基或 - (CH2)。^-杂芳基，所述芳基或杂芳基是未取代的或被 1~5个选自下列一组 的取代基所取代： 卤素、 - NH2、 -OH, C,〜C6烷基、被 1-3个卤素取代的 C,~C6 烷基、 ~( 6烷氧基、 被 1~3个卤素取代的 C,~C6烷氧基、 - C00H和- C00R4, 其中 R4为 〜( 6烷基;
(b)、使 N- Boc- N- Me- L-丙氨酸与 L-环己基甘氨酸曱酯进行缩合反应， 然后
Figure imgf000044_0001
(c)、 使化合物（10)与化合物（12)进行缩合反应， 然后脱保护， 得到 式（ΠΙ)化合物：
Figure imgf000044_0002
(ill)
11.药物组合物，它包含权利要求 1所述的式（I)化合物或其药学上可 接受的盐和制药学上允许的载体。
12. 权利要求 1的式（I)化合物在制备促进细胞凋亡药物方面的应用.
13. 权利要求 1的式（I)化合物在制备治疗肿瘤的药物方面的应用。
14. 权利要求 1的式（I)化合物， 用作为促进细胞凋亡的药物。
15. 一种治疗疾病的方法， 所述疾病可通过促进细胞凋亡而得以减轻 或治疗， 包括给需要治疗的病人施用权利要求 1 的式（I)化合物或其药学 上可接受的盐步骤。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1665784A (zh) * 2002-07-02 2005-09-07 诺瓦提斯公司 与细胞凋亡蛋白抑制剂结合的smac蛋白的肽抑制剂
CN101035802A (zh) * 2004-07-02 2007-09-12 健泰科生物技术公司 Iap抑制剂

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AP2007003894A0 (en) * 2004-07-12 2007-02-28 Bin Chao Tetrapeptide analogs

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1665784A (zh) * 2002-07-02 2005-09-07 诺瓦提斯公司 与细胞凋亡蛋白抑制剂结合的smac蛋白的肽抑制剂
CN101035802A (zh) * 2004-07-02 2007-09-12 健泰科生物技术公司 Iap抑制剂

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8993523B2 (en) 2010-12-13 2015-03-31 Novartis Ag Dimeric IAP inhibitors
US11814367B2 (en) 2021-03-15 2023-11-14 Maze Therapeutics, Inc. Inhibitors of glycogen synthase 1 (GYS1) and methods of use thereof

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