WO2011045937A1 - 高機能自閉症の発症危険度を判定する方法およびマーカー - Google Patents
高機能自閉症の発症危険度を判定する方法およびマーカー Download PDFInfo
- Publication number
- WO2011045937A1 WO2011045937A1 PCT/JP2010/006114 JP2010006114W WO2011045937A1 WO 2011045937 A1 WO2011045937 A1 WO 2011045937A1 JP 2010006114 W JP2010006114 W JP 2010006114W WO 2011045937 A1 WO2011045937 A1 WO 2011045937A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- autism
- risk
- serum
- plasma
- concentration
- Prior art date
Links
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 title claims abstract description 124
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 title claims abstract description 123
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 239000003550 marker Substances 0.000 title 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 90
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 56
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 45
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 43
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 108010004103 Chylomicrons Proteins 0.000 claims description 32
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 claims description 13
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 claims description 13
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 claims description 12
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108010054790 glycerol-3-phosphate oxidase Proteins 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 10
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 9
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 9
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 claims description 8
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 4
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 108060006004 Ascorbate peroxidase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010042687 Pyruvate Oxidase Proteins 0.000 claims description 2
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100022119 Lipoprotein lipase Human genes 0.000 claims 1
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 abstract description 34
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 abstract description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 32
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000043296 Lipoprotein lipases Human genes 0.000 description 11
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 9
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 7
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 7
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 7
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 5
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 108010090622 glycerol oxidase Proteins 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 108010046315 IDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108700038365 Reelin Proteins 0.000 description 3
- 102100039066 Very low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 3
- 102000006991 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 description 2
- 108010008150 Apolipoprotein B-100 Proteins 0.000 description 2
- 208000012239 Developmental disease Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000043322 Reelin Human genes 0.000 description 2
- 101710177612 Very low-density lipoprotein receptor Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 2
- 239000001055 blue pigment Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 108010002139 very low density lipoprotein triglyceride Proteins 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUMAGINHKXJMLR-UHFFFAOYSA-N 3-(3,5-dimethoxy-n-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].COC1=CC(OC)=CC(N(C)CC(O)CS(O)(=O)=O)=C1 ZUMAGINHKXJMLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOVSBUJXECYKBH-UHFFFAOYSA-N 3-(n-ethyl-3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].OS(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC(OC)=CC(OC)=C1 KOVSBUJXECYKBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGXLVXZRPRRCRP-IDIVVRGQSA-L Adenosine 5'-phosphate disodium Chemical compound [Na+].[Na+].C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O QGXLVXZRPRRCRP-IDIVVRGQSA-L 0.000 description 1
- 108010083590 Apoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000006410 Apoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101710132584 Peroxidase 3 Proteins 0.000 description 1
- 208000012202 Pervasive developmental disease Diseases 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010023795 VLDL receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000029560 autism spectrum disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 description 1
- 208000030251 communication disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 210000001652 frontal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 230000008140 language development Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000192 social effect Effects 0.000 description 1
- 230000003997 social interaction Effects 0.000 description 1
- HDARHUHTZKLJET-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC(OC)=CC(OC)=C1 HDARHUHTZKLJET-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- -1 triester compound Chemical class 0.000 description 1
- 150000004684 trihydrates Chemical class 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
Definitions
- the present invention relates to a method for early detection of a person with autism. More specifically, the present invention relates to a method for determining the risk of developing autism, including the step of measuring very low density lipoprotein in plasma or serum isolated from a subject. The present invention also relates to a method for determining the risk of developing autism, including the step of measuring cholesterol and / or triglyceride concentration in plasma or serum.
- Autism is a disorder first described as “Autistic Disorder of Emotional Contact” in 1943 by Dr. Canner, USA. Onset is very early and appears by about the age of 3 years, difficulty in forming social relationships with others, delayed language development, compulsive identity retention (narrow interest and attention to specific things) Is the main symptom. Autism is a developmental disorder whose state changes with the course of development, and it is speculated that it is a disorder of the higher-order central nervous system that has not yet been identified.
- High-functioning autism refers to autism that does not involve a delay in intellectual development.
- the prevalence of autism is between 7 and 16 per 10,000 children, and high-functioning autism is reported to be approximately 11 to 34% of autism (Macintosh et al. Journal of Child Psychology). and Psychiatry 2004).
- recuperation professional educational intervention based on early detection
- a diagnosis of autism must be made only by symptoms by doctors, which includes a wealth of experience in the field of child psychiatry. Need. Therefore, the current situation is that it is very difficult to detect early autistic patients today, because there is still a shortage of experts in the field.
- VLDL is a protein / lipid complex containing apolipoprotein B-100, and changes in the expression of this molecule in the body are expected to be related to lipid metabolism.
- An object of the present invention is to provide an objective and simple method for determining the risk of developing autism using a biological marker, and to detect an autistic person early using the method. Therefore, it is possible to provide an autistic person with appropriate treatment at an early stage.
- the inventors collected and compared the sera of the high-functioning autism group and the healthy control group, and compared the contents in the ultra-low-density lipoprotein fraction of the minor with autism. It was found that the concentration of sex fat was significantly lowered, and the present invention was completed based on this phenomenon.
- the present inventors collected and compared the sera of the high-functioning autistic group and the healthy control group, and the total amount of both cholesterol and triglycerides of the adolescent autistics group was significantly reduced. And that the cholesterol concentration in the ultra-low density lipoprotein fraction of adolescents with autism was significantly reduced, and the present invention was completed based on these phenomena.
- the present invention includes a step of measuring ultra-low density lipoprotein in plasma or serum isolated from a subject, and the neutral fat concentration contained in the ultra-low density lipoprotein fraction in plasma or serum Relates to a method for determining the risk of developing autism, characterized in that it is determined that the risk of developing autism is high when it is 60 mg / dl or less.
- the subject is preferably 18 years of age or younger.
- the present invention also relates to one or more enzymes selected from the group consisting of lipoprotein lipase, glycerol kinase, glycerol-3-phosphate oxidase, peroxidase, ascorbate oxidase, pyruvate kinase, and lactate dehydrogenase, and coloring.
- a kit for determining the risk of developing autism is also provided.
- the present invention is a method for screening a candidate substance for a drug for treating autism, (A) a step of administering a test substance to a non-human mammal; (B) isolating plasma or serum from the non-human mammal; (C) measuring the neutral fat concentration contained in the ultra-low density lipoprotein fraction in the isolated plasma or serum, and (d) in the plasma or serum compared to before administration of the test substance
- a screening method characterized by including a step of determining that a test substance is a candidate substance for a treatment for autism, using as an index the increase in neutral fat concentration contained in the ultra-low density lipoprotein fraction provide.
- the present invention also includes a step of measuring ultra-low density lipoprotein in plasma or serum isolated from a subject, and the cholesterol concentration contained in the ultra-low density lipoprotein fraction in plasma or serum is as follows: The standard value of cholesterol concentration in the ultra-low density lipoprotein fraction in the plasma or serum of healthy subjects-characterized by judging that the risk of developing autism is high when it is lower than the standard error A method for determining the risk of developing autism is also provided.
- the present invention includes a step of measuring cholesterol concentration and / or neutral fat concentration in plasma or serum isolated from a subject, wherein the cholesterol concentration is a standard value of a healthy subject's cholesterol concentration-standard error
- the risk of developing autism is high, and / or when the triglyceride concentration is lower than the standard value of the triglyceride concentration of the healthy subject minus the standard error,
- a method for determining the risk of developing autism is also provided.
- the present invention also provides a kit for determining the risk of developing autism comprising cholesterol oxidase, peroxidase, and a color former.
- the autism may be a high-functioning autism.
- the present invention has made it possible for the first time to establish criteria for assessing the risk of developing biologically high-functioning autism.
- the present invention can be implemented by a simple method of collecting peripheral blood and minimizing the burden on the subject.
- diagnosis of autism which has been largely based on the subjectivity of doctors so far, becomes a diagnosis that introduces biological standards, so that improvement of diagnostic technology is expected.
- the effect of the treatment of autistic patients is expected to be as early as possible.
- the method of the present invention can be applied to infants and children, and early detection and early treatment are possible. This is very effective for people with autism in their future social life.
- the social effects from the viewpoint of dealing with these problems are significant in the modern times when the incidents caused by autistic people are closed up.
- the present invention enables early, simple and reliable diagnosis of autism.
- by measuring the triglyceride VLDL fraction concentration in a human blood sample in two stages it is possible to easily assist in the diagnosis of autism.
- FIG. 1 shows the mean concentration of lipoprotein fractions of serum lipids in a group of minor high-functioning autistic patients and a group of healthy young adults.
- FIG. 2 shows the relationship between the cholesterol concentration in the VLDL fraction and the age of autistic subjects and healthy controls.
- FIG. 3 shows the relationship between the triglyceride concentration in the VLDL fraction and the age of the autistic person and the healthy control person, and the cutoff value for discriminating the highly functional autistic person.
- the present invention relates to a method for early detection of a person with autism. Specifically, the present invention relates to a method for determining the risk of developing autism, including a step of measuring ultra-low density lipoprotein in serum isolated from a subject.
- autism is one of the pervasive developmental disorders diagnosed in childhood. The main symptoms are communication disorder, social interaction disorder, limited interest and behavior, hypersensitivity and hyperactivity. Appears by age. “High-functioning autism” refers to the above-mentioned autism that is not accompanied by a delay in intellectual development.
- the “risk onset of autism” refers to whether or not a subject develops autism or whether or not autism has occurred. This refers to the inspection criteria. The higher the risk of developing autism, the more likely it is to develop autism or the autistic person, and the lower the risk of developing autism, the less likely it is to develop or a healthy person.
- VLDL Very low-density lipoprotein
- CM chylomicron
- IDL intermediate density lipoprotein
- LDL low density lipoprotein
- HDL high density lipoprotein
- VLDL fraction refers to a fraction obtained by centrifuging plasma or serum and having a density of 0.950 to 1.006 g / ml.
- chylomicron fraction or “CM fraction” refers to a fraction obtained by centrifuging plasma or serum and having a density of ⁇ 0.95 g / ml
- low density lipoprotein fraction or “LDL fraction”.
- LDL fraction refers to a fraction obtained by centrifuging plasma or serum and having a density of 1.019 to 1.063 g / ml, or “high density lipoprotein fraction” or “HDL fraction”.
- fraction refers to a fraction obtained by centrifuging plasma or serum and having a density of 1.063 to 1.210 g / ml.
- Neutral fat “triacylglycerol” or “TG” is a triester compound of fatty acid and glycerol.
- “minor” or “child” refers to a human under 18 years of age.
- “Cutoff value” refers to a value determined when a target disease group and a non-disease group are determined by paying attention to a certain substance. When determining the target disease and non-disease, it is negative if it is below the cut-off value, positive if it is above the cut-off value, or positive if it is below the cut-off value, and if it is above the cut-off value The disease can be determined as negative.
- Sensitivity and specificity are examples of indexes used for the purpose of evaluating the clinical usefulness of the cutoff value.
- a certain population is determined using a cut-off value, and among the diseased patients, a (true positive) is positive in the determination, and b (false negative) is negative in the determination while being a disease patient.
- the distribution of measured values between the target disease group and the non-disease group usually has some overlap. Therefore, sensitivity and specificity change by raising or lowering the cutoff value. Decreasing the cut-off value increases the sensitivity, but the specificity decreases, and increasing the cut-off value decreases the sensitivity, but increases the specificity. As a determination method, it is preferable that both sensitivity and specificity are higher. A determination method in which the values of sensitivity and specificity do not exceed 0.5 is not recognized as useful.
- the present invention determines the risk of developing autism, including the step of measuring ultra-low density lipoprotein in plasma or serum isolated from a subject. Regarding the method.
- Isolation step As the sample to be measured in the present invention, plasma or serum is prepared from blood usually collected from a subject and used. In the present invention, peripheral blood can be used as a sample. As a method for preparing plasma or serum, methods well known in the art can be used. The obtained plasma or serum may be stored frozen until measurement.
- the measurement step is a method well known in the art such as ultracentrifugation or gel filtration to separate plasma or serum isolated from a subject to obtain each fraction, Next, the neutral fat concentration or cholesterol concentration in the fraction is measured. Using gel filtration HPLC, serum can be separated and each fraction detected and quantified. There is no difference in lipid concentration between plasma and serum.
- lipoproteins in plasma or serum are fractionated into chylomicron, IDL, VLDL, LDL, and HDL depending on their density. Separation and quantification of serum into each fraction can be performed according to a known method such as gel filtration HPLC.
- the neutral fat concentration in VLDL may be directly measured to determine the risk of developing autism.
- the total amount of fat is measured, and when the total amount of neutral fat is less than a certain value, the neutral fat concentration of the VLDL fraction is measured to determine the risk of developing autism. May be.
- the neutral fat concentration of the VLDL fraction is measured when the total amount of neutral fat is less than 80 mg / dl, preferably less than 70 mg / dl, more preferably less than 60 mg / dl, It is desirable to determine the risk of developing autism. By making the measurement in two stages in this way, it is possible to easily assist diagnosis of autism.
- the concentration of neutral fat is determined based on the method of measuring glycerin produced from triglyceride by lipoprotein lipase (LPL), glycerol kinase (GK) -glycerol-3-phosphate oxidase (GPO) method, glycerol oxidase (GOD) method , Glycerol dehydrogenase (GDH) method and the like.
- LPL lipoprotein lipase
- GK glycerol kinase
- GPO glycerol-3-phosphate oxidase
- GOD glycerol oxidase
- GDH Glycerol dehydrogenase
- the GPO-DAOS method hydrogen peroxide generated using lipoprotein lipase (LPL), glycerol kinase (GK), glycerol-3-phosphate oxidase (GPO), and peroxidase (POD) is quantified by DAOS.
- the amount of neutral fat can be measured.
- the GPO-DAOS method includes the following steps: 1) The neutral fat in the sample is decomposed into glycerin and fatty acid by the action of lipoprotein lipase (LPL). 2) The produced glycerol is converted to glycerol-3-phosphate by the action of glycerol kinase (GK) in the presence of ATP.
- glycerol-3-phosphate is oxidized by the action of glycerol-3-phosphate oxidase (GPO), and at the same time, hydrogen peroxide is generated.
- GPO glycerol-3-phosphate oxidase
- DAOS glycerol-3-phosphate oxidase
- POD peroxidase
- LPL lipoprotein lipase
- GK glycerol kinase
- pyruvate kinase pyruvate kinase
- lactate dehydrogenase lactate dehydrogenase
- the cholesterol concentration in VLDL may be directly measured to determine the risk of developing autism.
- the total amount of cholesterol in plasma or serum is measured.
- the cholesterol concentration of the VLDL fraction may be measured to determine the risk of developing autism.
- the cholesterol concentration can be measured by cholesterol oxidase / DAOS method or the like.
- the amount of cholesterol can be measured by quantifying hydrogen peroxide produced using cholesterol oxidase with DAOS.
- the cholesterol oxidase DAOS method includes the following steps: 1) The cholesterol in the sample is oxidized by the action of cholesterol oxidase to generate ketone bodies and hydrogen peroxide. 2) Quantitatively oxidizes the resulting hydrogen peroxide to N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium (DAOS) and 4-aminoantipyrine by the action of peroxidase 3. Condensate to produce a blue dye, and 3) calculate the cholesterol concentration in the sample by measuring the absorbance of the resulting blue dye.
- the measuring step is performed by measuring the total amount of neutral fat or total cholesterol in plasma or serum isolated from a subject.
- the risk of developing autism in the subject is judged that is high.
- the dose is 60 mg / dl or less, preferably 50 mg / dl or less
- the triglyceride concentration in the VLDL fraction is 50 mg / dl or less, preferably 40 mg / dl or less
- it is judged that the risk of developing autism is high.
- it is determined that the risk of developing autism is high when the neutral fat concentration in the VLDL fraction is 40 mg / dl or less, preferably 30 mg / dl or less in a subject under 8 years old.
- the present inventors have found that the cholesterol concentration in the ultra-low density lipoprotein fraction of autistic individuals is significantly lower than that of healthy individuals. Based on this finding, in the present invention, when the cholesterol concentration in the VLDL fraction measured by the above method is lower than the standard value-standard error of the healthy subject, the risk of developing autism in the subject is high. Judge. Specifically, when the dose is 20 mg / dl or less, preferably 15 mg / dl or less, it is determined that the subject has a high risk of developing autism.
- the present inventors have found that the total amount of both cholesterol and triglycerides in autistic individuals is significantly lower than that in healthy individuals. Based on this finding, in the present invention, when the neutral fat concentration or cholesterol concentration in plasma or serum measured by the above-described method is lower than the standard value-standard error of a healthy subject, the subject's autism Judged that the risk of onset is high. Specifically, when the cholesterol concentration is 160 mg / dl or less, preferably 150 mg / dl or less, or when the neutral fat concentration is 80 mg / dl or less, preferably 60 mg / dl or less, Judged that the risk of developing autism is high.
- the risk of developing high-functioning autism can be determined at an early stage with a high accuracy rate by a simple method using peripheral blood.
- Kit for judging risk of developing autism The kit according to the present invention comprises the above-mentioned 2. What is necessary is just to implement the method for determining the risk of developing autism described in the column, and the specific configurations, materials, devices, and the like included in the method are not particularly limited.
- the kit of the present invention is not limited to these, for example, a reagent for measuring neutral fat in isolated peripheral plasma or serum, or peripheral blood VLDL: lipoprotein lipase (LPL), One or more selected from enzymes such as glycerol kinase (GK), glycerol-3-phosphate oxidase (GPO), glycerol oxidase (GOD), glycerol dehydrogenase (GDH), pyruvate kinase, lactate dehydrogenase, peroxidase, and DAOS And a coloring reagent such as FDAOS. Furthermore, a buffer solution necessary for measurement may be included.
- GK glycerol kinase
- GPO glycerol-3-phosphate oxidase
- GDH glycerol oxidase
- GDH glycerol dehydrogenase
- pyruvate kinase lactate dehydrogenas
- the kit of the present invention includes glycerin, buffer solution (PIPES pH 6.5), riboprotein lipase, adenosine-5′-phosphate disodium. Trihydrate (ATP), glycerol kinase, glycerol-3-phosphate oxidase (GPO), peroxidase, N-ethyl-N- (2′-hydroxy-3′-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium 1 or 2 or more selected from (DAOS), 4-aminoantipyrine, and ascorbate oxidase may be included.
- kit of the present invention is not limited thereto, but, for example, reagents for measuring cholesterol in isolated peripheral plasma or peripheral serum, or peripheral blood VLDL: cholesterol oxidase, peroxidase, and color development Reagents can be included.
- Such a kit can be used to determine the risk of developing high-functioning autism.
- kit for determining the risk of developing autism can be used as a kit for a method for screening candidate substances for therapeutic agents for autism described later.
- the determination method and determination kit of the present invention can be applied to a screening method for candidate substances for therapeutic agents for autism using non-human mammals.
- non-human mammal any mammal other than humans may be used.
- mice, rats, monkeys, and the like can be used.
- the present invention is a method for screening a candidate substance for a treatment for autism, (A) a step of administering a test substance to a non-human mammal; (B) isolating plasma or serum from the non-human mammal; (C) measuring the neutral fat concentration contained in the ultra-low density lipoprotein fraction in the isolated plasma or serum, and (d) in the plasma or serum compared to before administration of the test substance
- a screening method comprising a step of determining that a test substance is a candidate substance for a treatment for autism, using as an index the increase in neutral fat concentration contained in the ultra-low density lipoprotein fraction provide.
- an increase in the concentration of neutral fat, cholesterol in peripheral plasma or serum, or the concentration of cholesterol contained in the ultra-low density lipoprotein fraction in peripheral plasma or serum is used as an indicator. It is also possible to screen for candidate substances for drugs for treating autism.
- Such a screening method can be used to select candidate substances for high-functioning autism drugs.
- Subjects 106 men with high-functioning autism [mean age: 14.7 years (standard deviation 5.9), age range: 6 to 30 years] were selected as subjects, and 112 healthy people of the same age group [ The average age: 15.1 years (standard deviation 6.2), age range: 6-30 years] was selected as the healthy controls. All patients were diagnosed according to the ADI-R (Autism Diagnostic Interview-Revised) diagnostic criteria for high functioning autism.
- FIG. 3 shows the relationship between the triglyceride concentration in the drawing and the age.
- the cholesterol concentration of the VLDL fraction of the healthy control was almost constant regardless of age, but the cholesterol concentration of the VLDL fraction of the autistic person was lowest at an early age and increased with aging.
- VLDL Since the lipid contained in VLDL is mostly neutral fat, the tendency was more prominent in the neutral fat concentration (FIG. 3). Therefore, it was considered that the reduction of the neutral fat concentration in the VLDL fraction is effective for early diagnosis of high-functioning autism.
- diagnosis of autism which has been largely based on the subjectivity of doctors so far, becomes a diagnosis that introduces biological standards, so that improvement of diagnostic technology is expected.
- medical treatment of autistic patients will be effective as soon as possible.
- the method of the present invention can be applied to infants and children, and it can be applied comprehensively to prevention based on early diagnosis, early treatment, and support for rehabilitation. It is possible to establish a simple treatment system.
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本発明の目的は、生物学的マーカーを用いた、客観的で簡便な自閉症の発症危険度を判定する方法を提供すること、該方法を用いて自閉症者を早期に発見することにより、自閉症者に早期に適切な治療を提供することを可能とすることにある。 本発明は、被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度若しくはコレステロール濃度、または血漿または血清中の中性脂肪濃度若しくはコレステロール濃度を測定する工程を含む、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。さらに、該方法を利用した、自閉症の発症危険度を判定するためのキット、および非ヒト哺乳類動物を用いた自閉症治療薬の候補物質のスクリーニング方法も提供する。
Description
本出願は、日本特許出願２００９－２３６９７６（２００９年１０月１４日出願）に基づく優先権を主張しており、この内容は本明細書に参照として取り込まれる。
本発明は、自閉症者を早期に発見する方法に関する。詳しくは、被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含む、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。また、血漿または血清中のコレステロール濃度および／または中性脂肪濃度を測定する工程を含む、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。
自閉症はアメリカのカナー博士により１９４３年に「情緒接触の自閉的障害」として最初に記載された障害である。発症は極めて早期で３歳位までに現れ、他者との社会的関係の形成の困難さ、言葉の発達の遅れ、強迫的な同一性保持（興味や関心が狭く特定のものにこだわること）を主要症状とする。自閉症は発達の過程によって状態が変わっていく発達障害であり、未だ特定できない高次の中枢神経系の障害であると推測されている。
高機能自閉症とは自閉症のうち知的発達の遅れを伴わないものをいう。自閉症の罹病率は、子供１万人あたり７～１６人であり、高機能自閉症は自閉症のおよそ１１～３４％であると報告されている（Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ ｅｔ ａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｌｄ Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２００４）。
自閉症の原因は現在のところ明らかでなく、根治的治療法は確立されていない。そのため早期発見にもとづく専門家の教育的介入（これを療育という）が、自閉症者の社会生活適応において重要である。療育の開始時期は早いほど効果的とされており、自閉症の症状が初めて現れる２歳前後に開始できることが望ましい。しかし、自閉症には客観的・生物学的な検査判定基準がないため、自閉症診断は医師が症状のみで行わなければならず、これには児童精神医学の現場での豊富な経験を必要とする。したがって、その分野の専門家がまだ不足している今日では自閉症者の早期発見が非常に困難というのが現状である。
なお、現在、自閉症の診断は、米国精神医学会の診断基準（ＤＳＭ－ＩＶ）、世界保健機構ＷＨＯのＩＣＤ－１０、ＡＤＩ－Ｒ（Ａｕｔｉｓｍ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ－Ｒｅｖｉｓｅｄ）を用いた面接で行なわれている。
自閉症の原因は現在のところ明らかではないものの、これまでに種々の報告がなされている。例えば、自閉症では出生後早期に頭囲の拡大が認められており、この時期の神経細胞やグリア細胞の新生の増加もしくは細胞死の減少が関与していると考えられる（ＭｃＣａｆｆｅｒｙ ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２００５）。他に、ＦａｔｅｍｉらはＲｅｅｌｅｒマウスにみられる中枢神経発達障害に着目し、Ｒｅｅｌｅｒマウスの責任遺伝子Ｒｅｅｌｉｎの受容体である超低密度リポ蛋白質受容体（ＶＬＤＬ受容体：Ｖｅｒｙ Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ｍＲＮＡの増大が自閉症者死後脳の前頭葉および小脳でみられると報告した（Ｆａｔｅｍｉ ｅｔ ａｌ ２００５）。一方Ｓｈａｒｐらはプロテオーム解析によって自閉症児に特異的なａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ－１００濃度の低下を見出している（Ｃｏｒｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ ２００７）。元来ＶＬＤＬはａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ－１００を含有した蛋白質・脂質の複合体であり、この分子の体内での発現変化は脂質代謝との関連を予想させる。しかし、これまで自閉症者の末梢血脂質分画について調べた報告はなく、自閉症者と血清脂質レベルとの関連を示す報告もなかった。
また、血清サンプル中の特定の成長因子の量を測定することにより自閉症を診断する発明が開示されている（特開２００８－３２４４７）。しかしながら、これらの成長因子の動向は脂質代謝とは何ら関連するものではない。
以上の通り、自閉症の病態の特殊性から、早期診断に基づく予防、あるいは早期治療、社会復帰支援といった包括的な治療体系の確立を目指して研究が進められているが、早期診断を可能とする自閉症の生物学的マーカーは未だ確立されていない。
Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ ｅｔ ａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｌｄ Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２００４
ＭｃＣａｆｆｅｒｙ ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２００５
Ｆａｔｅｍｉ ｅｔ ａｌ ２００５
Ｃｏｒｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ ２００７
本発明の目的は、生物学的マーカーを用いた、客観的で簡便な自閉症の発症危険度を判定する方法を提供すること、該方法を用いて自閉症者を早期に発見することにより、自閉症者に早期に適切な治療を提供することを可能とすることにある。
上記目的を達成するため、発明者らは、高機能自閉症群と健常対照者群の血清を収集、比較して、未成年の自閉症者の超低密度リポタンパク質分画中の中性脂肪濃度が有意に低下していることを見出し、かかる現象に基づき、本発明を完成させた。
また、本発明者らは、高機能自閉症群と健常対照者群の血清を収集、比較して、未成年の自閉症者のコレステロールおよび中性脂肪の双方で総量が有意に低下していること、および未成年の自閉症者の超低密度リポタンパク質分画中のコレステロール濃度が有意に低下していることを見出し、これらの現象に基づき、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含み、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が、６０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。
前記被検者は１８歳以下であることが望ましい。
さらに、前記被検者が８歳以下、血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が３０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに自閉症の発症危険度が高いと判断することができる。
また、本発明は、リポプロテインリパーゼ、グリセロールキナーゼ、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、ピルビン酸キナーゼ、および乳酸デヒドロゲナーゼからなる群から選択される、１または２以上の酵素と発色剤を含む、自閉症の発症危険度判定用キットも提供する。
さらに本発明は、自閉症治療薬の候補物質をスクリーニングする方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物に被検物質を投与する工程、
（ｂ）非ヒト哺乳動物から血漿または血清を単離する工程、
（ｃ）単離した血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度を測定する工程、および
（ｄ）被検物質を投与する前と比べて、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が上昇することを指標として、被検物質が自閉症治療薬の候補物質であると判定する工程
を含むことを特徴とするスクリーニング方法も提供する。
（ａ）非ヒト哺乳動物に被検物質を投与する工程、
（ｂ）非ヒト哺乳動物から血漿または血清を単離する工程、
（ｃ）単離した血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度を測定する工程、および
（ｄ）被検物質を投与する前と比べて、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が上昇することを指標として、被検物質が自閉症治療薬の候補物質であると判定する工程
を含むことを特徴とするスクリーニング方法も提供する。
また、本発明は、被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含み、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれるコレステロール濃度が、健常者の血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれるコレステロール濃度の標準値－標準誤差よりも低いときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、自閉症の発症危険度を判定する方法も提供する。
さらに、本発明は、被検者より単離された血漿または血清中のコレステロール濃度および／または中性脂肪濃度を測定する工程を含み、前記コレステロール濃度が健常者のコレステロール濃度の標準値－標準誤差よりも低いとき、および／または前記中性脂肪濃度が健常者の中性脂肪濃度の標準値－標準誤差よりも低いときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、自閉症の発症危険度を判定する方法も提供する。
本発明は、コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、および発色剤を含む、自閉症の発症危険度判定用キットも提供する。
上記自閉症は、高機能自閉症であってもよい。
本発明により、初めて生物学的な高機能自閉症の発症危険度判定基準を定めることができた。また、本発明は、末梢血の採取という簡便かつ被検者の負担が最小限に抑えられる方法によって実施することができる。
本発明によって、これまで医師の主観によるものが大きかった自閉症の診断が、生物学的基準を導入した診断となることから、診断技術の向上が予想される。また自閉症者の療育は、早ければ早いほどその効果が期待されるところ、本発明法は幼児や児童に適応可能であり、早期発見、早期療育が可能となる。このことは、自閉症者が将来、社会生活を営む上で非常に効果的である。また、自閉症者が引き起こす事件がクローズアップされている現代、これらの問題に対応するという観点からの社会的効果は大きい。
本発明により、自閉症の早期、簡便かつ信頼性のある診断が可能となる。特にヒトの血液試料中の中性脂肪ＶＬＤＬ分画濃度を２段階で測定することによって、自閉症の診断補助を容易に行うことができる。
本発明は、自閉症者を早期に発見する方法に関する。詳しくは、被検者より単離された血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含む、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。
１．定義
「自閉症」は小児期に診断される広汎性発達障害の一つで、主要症状としてコミュニケーションの障害、社会的相互作用の障害、限局した興味と行動、知覚過敏や多動傾向が３歳までに現れる。「高機能自閉症」とは、上記の自閉症のうち、知的発達の遅れを伴わないものをいう。
「自閉症」は小児期に診断される広汎性発達障害の一つで、主要症状としてコミュニケーションの障害、社会的相互作用の障害、限局した興味と行動、知覚過敏や多動傾向が３歳までに現れる。「高機能自閉症」とは、上記の自閉症のうち、知的発達の遅れを伴わないものをいう。
本願発明において、「自閉症の発症危険度」とは、被検者が自閉症を発症するか否か、または自閉症を発症しているか否かを判断するための、自閉症の検査判定基準をいう。自閉症の発症危険度が高いほど自閉症を発症する可能性が高いまたは自閉症者であると判断され、低いほど発症する可能性が低いまたは健常者であると判断される。
「超低密度リポタンパク質（ｖｅｒｙ ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ： ＶＬＤＬ）」とは、血液中のリポタンパク質の一つである。リポタンパク質は遠心分離によって測定される密度によって分類されており、他に、カイロミクロン（ＣＭ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）がある。これらのリポタンパク質は、タンパク質、中性脂肪、遊離コレステロール、コレステロールエステル、およびリン脂質からなる点は共通するが、それぞれ特徴的なアポタンパク質を含み、脂質組成が異なる点で相違する。
「超低密度リポタンパク質分画」または「ＶＬＤＬ分画」とは、血漿または血清を遠心分離して得られる、密度が０．９５０～１．００６ｇ／ｍｌの画分をいう。同様に、「カイロミクロン分画」または「ＣＭ分画」とは、血漿または血清を遠心分離して得られる、密度が＜０．９５ｇ／ｍｌの画分を、「低密度リポタンパク質分画」または「ＬＤＬ分画」とは、血漿または血清を遠心分離して得られる、密度が１．０１９～１．０６３ｇ／ｍｌの画分を、「高密度リポタンパク質分画」または「ＨＤＬ分画」とは、血漿または血清を遠心分離して得られる、密度が１．０６３～１．２１０ｇ／ｍｌの画分をいう。
「中性脂肪」、「トリアシルグリセロール」、または「ＴＧ」とは、脂肪酸とグリセロールとのトリエステル化合物である。
本発明において「未成年」または「児童」とは、１８歳以下のヒトを指す。
「カットオフ値」とは、ある物質に着目して目的とする疾患群と非疾患群とを判定する場合に定める値をいう。目的とする疾患と非疾患とを判定する場合に、カットオフ値以下であれば陰性、カットオフ値以上であれば陽性として、またはカットオフ値以下であれば陽性、カットオフ値以上であれば陰性として疾患を判定することができる。
カットオフ値の臨床的有用性を評価する目的で用いられる指標としては、感度と特異度があげられる。
ある母集団をカットオフ値を用いて判定し、疾病患者のうち、判定で陽性とされたものをａ（真陽性）、疾病患者でありながら判定で陰性とされたものをｂ（偽陰性）、疾病患者でないにも関わらず判定で陽性とされたものをｃ（偽陽性）、疾病患者でなく判定で陰性とされたものをｄ（真陰性）と表したときに、ａ／（ａ＋ｂ）で表される値を感度（真陽性率）、ｄ／（ｃ＋ｄ）で表される値を特異度（真陰性率）として表すことができる。
目的とする疾患群と非疾患群との測定値の分布は通常、一部重複する。したがって、カットオフ値を上下させることにより、感度と特異度は変化する。カットオフ値を下げることにより感度は高くなるが、特異度は低下し、カットオフ値を上げることにより感度は低くなるが、特異度は上がる。判定方法としては、感度と特異度の両者の値が高いほうが好ましい。また、感度と特異度の値が０．５を超えない判定方法は、有用とは認められない。
２．自閉症の発症危険度を判定する方法
本発明は、被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含む、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。
本発明は、被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含む、自閉症の発症危険度を判定する方法に関する。
（１）単離工程
本発明において測定される試料は、被検者より通常採取した血液から、血漿または血清を調製して用いる。本発明は、末梢血を試料として用いることができる。血漿または血清を調製する方法としては、本分野において周知の方法を用いることができる。取得した血漿または血清は、測定するまで凍結保存してもよい。
本発明において測定される試料は、被検者より通常採取した血液から、血漿または血清を調製して用いる。本発明は、末梢血を試料として用いることができる。血漿または血清を調製する方法としては、本分野において周知の方法を用いることができる。取得した血漿または血清は、測定するまで凍結保存してもよい。
（２）測定工程
本発明において、測定工程は、超遠心法やゲル濾過等の本分野において周知の方法により、被検者より単離された血漿または血清を分離して各分画を得、次に分画中の中性脂肪濃度またはコレステロール濃度を測定することにより行われる。ゲル濾過ＨＰＬＣ法を用いると、血清を分離して各分画を検出および定量することができる。血漿中および血清中において、脂質濃度に差はない。
本発明において、測定工程は、超遠心法やゲル濾過等の本分野において周知の方法により、被検者より単離された血漿または血清を分離して各分画を得、次に分画中の中性脂肪濃度またはコレステロール濃度を測定することにより行われる。ゲル濾過ＨＰＬＣ法を用いると、血清を分離して各分画を検出および定量することができる。血漿中および血清中において、脂質濃度に差はない。
前述の通り、血漿または血清中のリポタンパク質は、その密度によりカイロミクロン、ＩＤＬ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬに分画される。血清の各分画への分離、定量は、ゲル濾過ＨＰＬＣ法等周知の方法に従い実施できる。
（ｉ）中性脂肪濃度の測定
本発明においては、直接ＶＬＤＬ中の中性脂肪濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定してもよいし、まず血漿または血清中の中性脂肪の総量を測定し、中性脂肪の総量が一定値未満の場合にＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定する、という２段階の測定を行ってもよい。２段階の測定を行う場合、中性脂肪の総量が８０ｍｇ／ｄｌ未満、好ましくは７０ｍｇ／ｄｌ未満、より好ましくは６０ｍｇ／ｄｌ未満の場合に、ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定することが望ましい。こうして測定を２段階にすることにより、自閉症の診断補助を容易に行うことができる。
本発明においては、直接ＶＬＤＬ中の中性脂肪濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定してもよいし、まず血漿または血清中の中性脂肪の総量を測定し、中性脂肪の総量が一定値未満の場合にＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定する、という２段階の測定を行ってもよい。２段階の測定を行う場合、中性脂肪の総量が８０ｍｇ／ｄｌ未満、好ましくは７０ｍｇ／ｄｌ未満、より好ましくは６０ｍｇ／ｄｌ未満の場合に、ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定することが望ましい。こうして測定を２段階にすることにより、自閉症の診断補助を容易に行うことができる。
中性脂肪の濃度は、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）によりトリグリセリドから生成するグリセリンを測定する方法に基づき、グリセロールキナーゼ（ＧＫ）－グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）法、グリセロールオキシダーゼ（ＧＯＤ）法、グリセロールデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）法等により測定することができる。
例えば、ＧＰＯ－ＤＡＯＳ法では、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）、グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）を用いて生じる過酸化水素をＤＡＯＳにより定量することで、中性脂肪量を測定することができる。具体的には、ＧＰＯ－ＤＡＯＳ法は以下の工程を含む：
１）試料中の中性脂肪をリポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）の作用によりグリセリンと脂肪酸に分解する、
２）生成したグリセリンをＡＴＰ存在下でグリセロールキナーゼ（ＧＫ）の作用によりグリセロール－３－リン酸とする、
３）生成したグリセロール－３－リン酸を、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）の作用により酸化させ、同時に過酸化水素を生じさせる、
４）生じた過酸化水素をペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の作用によりＮ－メチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＤＡＯＳ）と４－アミノアンチピリンとを定量的に酸化縮合させ、青色の色素を生成させる、および
５）生じた青色色素の吸光度を測定することにより検体中の中性脂肪濃度を算出する。
１）試料中の中性脂肪をリポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）の作用によりグリセリンと脂肪酸に分解する、
２）生成したグリセリンをＡＴＰ存在下でグリセロールキナーゼ（ＧＫ）の作用によりグリセロール－３－リン酸とする、
３）生成したグリセロール－３－リン酸を、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）の作用により酸化させ、同時に過酸化水素を生じさせる、
４）生じた過酸化水素をペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の作用によりＮ－メチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＤＡＯＳ）と４－アミノアンチピリンとを定量的に酸化縮合させ、青色の色素を生成させる、および
５）生じた青色色素の吸光度を測定することにより検体中の中性脂肪濃度を算出する。
同様に、「ＮＡＤ」法では、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）、グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、ピルビン酸キナーゼ、および乳酸デヒドロゲナーゼを使用して生成する過酸化水素を定量する。
（ｉｉ）コレステロール濃度の測定
本発明においては、直接ＶＬＤＬ中のコレステロール濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定してもよいし、まず血漿または血清中のコレステロールの総量を測定し、コレステロールの総量が一定値未満の場合にＶＬＤＬ分画のコレステロール濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定する、という２段階の測定を行ってもよい。こうして測定を２段階にすることにより、自閉症の診断補助を容易に行うことができる。
本発明においては、直接ＶＬＤＬ中のコレステロール濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定してもよいし、まず血漿または血清中のコレステロールの総量を測定し、コレステロールの総量が一定値未満の場合にＶＬＤＬ分画のコレステロール濃度を測定して、自閉症の発症危険度を判定する、という２段階の測定を行ってもよい。こうして測定を２段階にすることにより、自閉症の診断補助を容易に行うことができる。
コレステロール濃度の測定は、コレステロールオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法等により測定することができる。
例えば、コレステロールオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法では、コレステロールオキシダーゼを用いて生じる過酸化水素をＤＡＯＳにより定量することで、コレステロール量を測定することができる。具体的には、コレステロールオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法は以下の工程を含む：
１）試料中のコレステロールをコレステロールオキシダーゼの作用により酸化して、ケトン体と過酸化水素を発生させる、
２）生じた過酸化水素をペルオキシダーゼの作用によりＮ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＤＡＯＳ）と４－アミノアンチピリンとを定量的に酸化縮合させ、青色の色素を生成させる、および
３）生じた青色色素の吸光度を測定することにより検体中のコレステロール濃度を算出する。
１）試料中のコレステロールをコレステロールオキシダーゼの作用により酸化して、ケトン体と過酸化水素を発生させる、
２）生じた過酸化水素をペルオキシダーゼの作用によりＮ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＤＡＯＳ）と４－アミノアンチピリンとを定量的に酸化縮合させ、青色の色素を生成させる、および
３）生じた青色色素の吸光度を測定することにより検体中のコレステロール濃度を算出する。
本発明の別の態様においては、測定工程は、被検者より単離された血漿または血清中の中性脂肪の総量またはコレステロールの総量を測定することにより行われる。
（３）判定工程
発明者らは、健常者においては年齢にかかわらずほぼ一定のＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度が、自閉症者においては、幼少時に低く、加齢とともに増加するという知見を見出した。
発明者らは、健常者においては年齢にかかわらずほぼ一定のＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度が、自閉症者においては、幼少時に低く、加齢とともに増加するという知見を見出した。
この知見に基づき、本発明では、上述の方法により測定したＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度が健常者の標準値－標準誤差よりも低い場合に、被検者の自閉症の発症危険度が高いと判断する。具体的には、６０ｍｇ／ｄｌ以下、好ましくは５０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに、被検者の自閉症の発症危険度が高いと判断する。好ましくは、１８歳以下の被検者において、ＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度が５０ｍｇ／ｄｌ以下、好ましくは４０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに、自閉症の発症危険度が高いと判断する。より好ましくは、８歳以下の被検者において、ＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度が４０ｍｇ／ｄｌ以下、好ましくは３０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに、自閉症の発症危険度が高いと判断する。
また、本発明者らは、健常者に比べて、自閉症者の超低密度リポタンパク質分画中のコレステロール濃度が有意に低下していることを見出した。この知見に基づき、本発明では、上述の方法により測定したＶＬＤＬ分画中のコレステロール濃度が健常者の標準値－標準誤差よりも低い場合に、被検者の自閉症の発症危険度が高いと判断する。具体的には、２０ｍｇ／ｄｌ以下、好ましくは１５ｍｇ／ｄｌ以下であるときに、被検者の自閉症の発症危険度が高いと判断する。
さらに、本発明者らは、健常者に比べて、自閉症者のコレステロールおよび中性脂肪の双方で総量が有意に低下していることを見出した。この知見に基づき、本発明では、上述の方法により測定した血漿または血清中の中性脂肪濃度またはコレステロール濃度が健常者の標準値－標準誤差よりも低い場合に、被検者の自閉症の発症危険度が高いと判断する。具体的には、コレステロール濃度が１６０ｍｇ／ｄｌ以下、好ましくは１５０ｍｇ／ｄｌ以下であるとき、または中性脂肪濃度が８０ｍｇ／ｄｌ以下、好ましくは６０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに、被検者の自閉症の発症危険度が高いと判断する。
本発明に従うと、末梢血を用いた簡便な方法により、高機能自閉症の発症危険度を早期に高い正診率で判定することができる。
３．自閉症の発症危険度判定用キット
本発明に係るキットは、上記２．欄で説明した自閉症の発症危険度を判定する方法を実施するためのものであればよく、これに含まれる具体的な構成、材料、機器などは、特に限定されるものではない。
本発明に係るキットは、上記２．欄で説明した自閉症の発症危険度を判定する方法を実施するためのものであればよく、これに含まれる具体的な構成、材料、機器などは、特に限定されるものではない。
本発明のキットは、これらに限定されるものではないが、例えば単離した末梢血漿若しくは末梢血清中、または末梢血ＶＬＤＬ中の中性脂肪を測定するための試薬：リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）、グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）、グリセロールオキシダーゼ（ＧＯＤ）、グリセロールデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）、ピルビン酸キナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ペルオキシダーゼ等の酵素から選ばれる１または２以上、およびＤＡＯＳ、ＦＤＡＯＳ等の発色試薬を含む。さらに、測定に必要な緩衝液を含んでもよい。
例えば、ＧＰＯ－ＤＡＯＳ法によって中性脂肪濃度を測定する場合であれば、本発明のキットは、グリセリン、緩衝液（ＰＩＰＥＳ ｐＨ ６．５）、リボプロテインリパーゼ、アデノシン－５’－リン酸二ナトリウム三水和物（ＡＴＰ）、グリセロールキナーゼ、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ（ＧＰＯ）、ペルオキシダーゼ、Ｎ－エチル－Ｎ－（２’－ヒドロキシ－３’－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＤＡＯＳ）、４－アミノアンチピリン、およびアスコルビン酸オキシダーゼから選ばれる１または２以上を含むことができる。
また、本発明のキットは、これらに限定されるものではないが、例えば単離した末梢血漿若しくは末梢血清中、または末梢血ＶＬＤＬ中のコレステロールを測定するための試薬：コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、および発色試薬を含むことができる。
かかるキットを使用して、高機能自閉症の発症危険度を判定することができる。
さらに、本発明にかかる自閉症の発症危険度判定用キットは、後述する自閉症治療薬の候補物質をスクリーニングする方法のためのキットとしても利用できる。
４．自閉症治療薬の候補物質をスクリーニングする方法
本発明の判定方法や判定キットは、非ヒト哺乳類動物を用いた自閉症治療薬の候補物質のスクリーニング方法に応用しうる。非ヒト哺乳類動物としては、ヒトを除く哺乳動物であればよいが、例えば、マウス、ラット、およびサル等を使用することができる。
本発明の判定方法や判定キットは、非ヒト哺乳類動物を用いた自閉症治療薬の候補物質のスクリーニング方法に応用しうる。非ヒト哺乳類動物としては、ヒトを除く哺乳動物であればよいが、例えば、マウス、ラット、およびサル等を使用することができる。
本発明は、自閉症治療薬の候補物質をスクリーニングする方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物に被検物質を投与する工程、
（ｂ）非ヒト哺乳動物から血漿または血清を単離する工程、
（ｃ）単離した血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度を測定する工程、および
（ｄ）被検物質を投与する前と比べて、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が上昇することを指標として、被検物質が自閉症治療薬の候補物質であると判定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法を提供する。
（ａ）非ヒト哺乳動物に被検物質を投与する工程、
（ｂ）非ヒト哺乳動物から血漿または血清を単離する工程、
（ｃ）単離した血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度を測定する工程、および
（ｄ）被検物質を投与する前と比べて、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が上昇することを指標として、被検物質が自閉症治療薬の候補物質であると判定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法を提供する。
本発明の別の態様では、末梢血漿若しくは末梢血清中の中性脂肪濃度、コレステロール濃度、または末梢血漿若しくは末梢血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれるコレステロール濃度が上昇することを指標として、自閉症治療薬の候補物質をスクリーニングすることもできる。
かかるスクリーニング方法を使用して、高機能自閉症治療薬の候補物質を選択することができる。
以下、実施例をもって本発明をさらに詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
１．被験者
高機能自閉症の男性１０６名〔平均年齢：１４．７歳（標準偏差５．９）、年齢範囲：６歳～３０歳〕を被験者に選び、ならびに同一年齢層の健康者１１２名〔平均年齢：１５．１歳（標準偏差６．２）、年齢範囲：６歳～３０歳〕を健常対照として被験者に選んだ。すべての患者は、高機能自閉症の診断基準ＡＤＩ－Ｒ（Ａｕｔｉｓｍ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ－Ｒｅｖｉｓｅｄ）に従って診断した。
高機能自閉症の男性１０６名〔平均年齢：１４．７歳（標準偏差５．９）、年齢範囲：６歳～３０歳〕を被験者に選び、ならびに同一年齢層の健康者１１２名〔平均年齢：１５．１歳（標準偏差６．２）、年齢範囲：６歳～３０歳〕を健常対照として被験者に選んだ。すべての患者は、高機能自閉症の診断基準ＡＤＩ－Ｒ（Ａｕｔｉｓｍ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ－Ｒｅｖｉｓｅｄ）に従って診断した。
２．実験方法
被験者の血清検体を採取し、測定まで－８０℃で保存した。コレステロールと中性脂肪の脂質分画をＨＰＬＣ法により測定比較した。ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度はＳｋｙｌｉｇｈｔ－Ｂｉｏｔｅｃｈ社に委託し、ゲル濾過ＨＰＬＣ法を用いて測定した。
被験者の血清検体を採取し、測定まで－８０℃で保存した。コレステロールと中性脂肪の脂質分画をＨＰＬＣ法により測定比較した。ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度はＳｋｙｌｉｇｈｔ－Ｂｉｏｔｅｃｈ社に委託し、ゲル濾過ＨＰＬＣ法を用いて測定した。
３．統計分析
データは平均値で示した。２群間の統計分析はt検定で解析した。０．０１未満のｐ値を統計的に有意とした。
データは平均値で示した。２群間の統計分析はt検定で解析した。０．０１未満のｐ値を統計的に有意とした。
４．結果
（１）自閉症者における血清中脂質濃度の低下
健常対照の未成年被験者および高機能自閉症の未成年被験者における、血清中脂質のリポ蛋白質分画濃度平均値を表１および図１に示す。
（１）自閉症者における血清中脂質濃度の低下
健常対照の未成年被験者および高機能自閉症の未成年被験者における、血清中脂質のリポ蛋白質分画濃度平均値を表１および図１に示す。
図１より明らかなとおり、高機能自閉症の未成年被検者の血清中脂質は、健常対照の未成年被検者と比べて、コレステロールおよび中性脂肪の双方で総量が有意に低下していることがわかった。さらに、カイロミクロン、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの各リポタンパク質分画中のコレステロールおよび中性脂肪濃度を調べると、ＶＬＤＬ分画とＨＤＬ分画において両者とも濃度の低下が認められ、特にＶＬＤＬ分画において顕著に低下していた。カイロミクロン、ＬＤＬ分画については有意差が認められなかった。
（２）ＶＬＤＬ分画のコレステロール濃度・中性脂肪濃度の低下と年齢との相関
自閉症者と健常対照者の、ＶＬＤＬ分画中のコレステロール濃度と年齢との関係を図２に、ＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度と年齢との関係を図３に示す。
自閉症者と健常対照者の、ＶＬＤＬ分画中のコレステロール濃度と年齢との関係を図２に、ＶＬＤＬ分画中の中性脂肪濃度と年齢との関係を図３に示す。
図２より明らかなとおり、健常対照のＶＬＤＬ分画のコレステロール濃度は年齢に関係なくほぼ一定だが、自閉症者のＶＬＤＬ分画のコレステロール濃度は幼少時に最も低く、加齢とともに増加した。
ＶＬＤＬに含まれる脂質は中性脂肪が大部分であることから、中性脂肪濃度において、その傾向が一層顕著に認められた（図３）。そのため、ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度の低下は、高機能自閉症の早期診断に有効であると考えられた。
（３）カットオフ値
ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度の方が、コレステロール濃度に比べて、幼少時に低く、加齢とともに増加するという傾向が顕著であったため、中性脂肪濃度についてカットオフ値を検索した。
ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度の方が、コレステロール濃度に比べて、幼少時に低く、加齢とともに増加するという傾向が顕著であったため、中性脂肪濃度についてカットオフ値を検索した。
その結果、特に、８歳以下の患者において、ＶＬＤＬ分画の中性脂肪濃度が３０ｍｇ／ｄｌより低い場合、感度８３％、特異度９０％、正診率８６％の高率で、高機能自閉症者をスクリーニングすることができた（図３）。なお、未成年全体、すなわち１８歳以下では、感度６３％、特異度７２％、正診率６７％であった。
したがって、本実験により、血液中性脂肪ＶＬＤＬ分画は自閉症の生物学的マーカーとして有用であることが確認できた。
本発明によって、これまで医師の主観によるものが大きかった自閉症の診断が、生物学的基準を導入した診断となることから、診断技術の向上が予想される。また自閉症者の療育は、早ければ早いほどその効果が期待されるところ、本発明法は幼児や児童に適応可能であり、早期診断に基づく予防、あるいは早期治療、社会復帰支援といった包括的な治療体系の確立を可能とする。
Claims (14)
- 被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含み、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が、６０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、自閉症の発症危険度を判定する方法。
- １８歳以下の被検者において、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が、６０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、請求項１に記載の自閉症の発症危険度を判定する方法。
- ８歳以下の被検者において、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が、３０ｍｇ／ｄｌ以下であるときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、請求項１に記載の自閉症の発症危険度を判定する方法。
- 自閉症が高機能自閉症である、請求項１～３のいずれか1項に記載の方法。
- リポプロテインリパーゼ、グリセロールキナーゼ、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、ピルビン酸キナーゼ、および乳酸デヒドロゲナーゼからなる群から選択される、１または２以上の酵素と発色剤を含む、自閉症の発症危険度判定用キット。
- 自閉症が高機能自閉症である、請求項５に記載のキット。
- 自閉症治療薬の候補物質をスクリーニングする方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物に被検物質を投与する工程、
（ｂ）非ヒト哺乳動物から血漿または血清を単離する工程、
（ｃ）単離した血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度を測定する工程、および
（ｄ）被検物質を投与する前と比べて、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれる中性脂肪濃度が上昇することを指標として、被検物質が自閉症治療薬の候補物質であると判定する工程
を含むことを特徴とするスクリーニング方法。 - 自閉症が高機能自閉症である、請求項７に記載のスクリーニング方法。
- 被検者より単離された血漿または血清中の超低密度リポタンパク質を測定する工程を含み、血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれるコレステロール濃度が、健常者の血漿または血清中の超低密度リポタンパク質分画に含まれるコレステロール濃度の標準値－標準誤差よりも低いときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、自閉症の発症危険度を判定する方法。
- 自閉症が高機能自閉症である、請求項９に記載の方法。
- 被検者より単離された血漿または血清中のコレステロール濃度および／または中性脂肪濃度を測定する工程を含み、前記コレステロール濃度が健常者のコレステロール濃度の標準値－標準誤差よりも低いとき、および／または前記中性脂肪濃度が健常者の中性脂肪濃度の標準値－標準誤差よりも低いときに自閉症の発症危険度が高いと判断することを特徴とする、自閉症の発症危険度を判定する方法。
- 自閉症が高機能自閉症である、請求項１１に記載の方法。
- コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、および発色剤を含む、自閉症の発症危険度判定用キット。
- 自閉症が高機能自閉症である、請求項１３に記載のキット。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13/501,147 US8518659B2 (en) | 2009-10-14 | 2010-10-14 | Method for determination of degree of risk of onset of high-functioning autism |
| EP10823205.9A EP2490028B1 (en) | 2009-10-14 | 2010-10-14 | Method and marker for determination of degree of risk of onset of high-functioning autism |
| JP2011536046A JP5757627B2 (ja) | 2009-10-14 | 2010-10-14 | 高機能自閉症の発症危険度を判定する方法およびマーカー |
| CN201080046519.3A CN102597781B (zh) | 2009-10-14 | 2010-10-14 | 判定高功能自闭症的发病危险度的方法及标记物 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009-236976 | 2009-10-14 | ||
| JP2009236976 | 2009-10-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2011045937A1 true WO2011045937A1 (ja) | 2011-04-21 |
Family
ID=43875992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/JP2010/006114 WO2011045937A1 (ja) | 2009-10-14 | 2010-10-14 | 高機能自閉症の発症危険度を判定する方法およびマーカー |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8518659B2 (ja) |
| EP (1) | EP2490028B1 (ja) |
| JP (1) | JP5757627B2 (ja) |
| CN (1) | CN102597781B (ja) |
| WO (1) | WO2011045937A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013245941A (ja) * | 2012-05-23 | 2013-12-09 | Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd | 共同注視能力の評価方法及びその評価装置 |
| JP2018033393A (ja) * | 2016-09-01 | 2018-03-08 | 国立大学法人筑波技術大学 | 自閉症スペクトラム障害の判定方法と判定用キット |
| TWI708945B (zh) * | 2018-04-03 | 2020-11-01 | 日商電化生研股份有限公司 | 輔助判斷循環器官疾病等的風險之方法 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6436777B2 (ja) * | 2012-10-23 | 2018-12-12 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 精神関連疾患の検査方法および検査キット |
| CN105652016A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-06-08 | 深圳大学 | 一种孤独症检测标志物及其检测方法 |
| CN105699658B (zh) * | 2016-01-28 | 2017-11-21 | 深圳大学 | 一种孤独症检测标志物及其检测方法 |
| CN109813912B (zh) * | 2019-01-04 | 2021-12-28 | 深圳大学 | 一组血清差异蛋白组合在制备用于检测孤独症的试剂中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006180707A (ja) * | 2003-03-28 | 2006-07-13 | Denka Seiken Co Ltd | 低密度リポ蛋白中のトリグリセリドの定量方法 |
| JP2008032447A (ja) | 2006-07-27 | 2008-02-14 | Hamamatsu Univ School Of Medicine | 自閉症の診断薬 |
| JP2008141975A (ja) * | 2006-12-07 | 2008-06-26 | Toyobo Co Ltd | 低密度リポ蛋白中コレステロール測定方法およびその試薬 |
| JP2008544214A (ja) * | 2005-05-09 | 2008-12-04 | セラノス， インコーポレイテッド | ポイントオブケア流体システムおよびその使用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2165947T3 (es) * | 1995-07-21 | 2002-04-01 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Metodo para medir la cantidad de un constituyente contenido en una lipoproteina especifica. |
| US8222293B2 (en) * | 2004-05-24 | 2012-07-17 | Regents of the University of Carolina | Treating learning deficits with inhibitors of Hmg CoA reductase |
| WO2007007392A1 (ja) * | 2005-07-11 | 2007-01-18 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 新規ポリマー及びこれを用いたコレステロール測定法 |
| GB0524609D0 (en) * | 2005-12-02 | 2006-01-11 | Univ Cambridge Tech | Methods of monitoring and diagnosing psychotic disorders and of identifying biomarkers for psychotic disorders |
| US7709213B2 (en) * | 2007-06-07 | 2010-05-04 | Michael Chez | Method for diagnosing a pervasive developmental disorder |
| JP5306345B2 (ja) * | 2007-07-26 | 2013-10-02 | フェノメノーム ディスカバリーズ インク | 自閉症スペクトラム障害の診断、リスク評価、及びモニタリングを行うための方法 |
-
2010
- 2010-10-14 US US13/501,147 patent/US8518659B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-10-14 JP JP2011536046A patent/JP5757627B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-10-14 WO PCT/JP2010/006114 patent/WO2011045937A1/ja active Application Filing
- 2010-10-14 CN CN201080046519.3A patent/CN102597781B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-10-14 EP EP10823205.9A patent/EP2490028B1/en not_active Not-in-force
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006180707A (ja) * | 2003-03-28 | 2006-07-13 | Denka Seiken Co Ltd | 低密度リポ蛋白中のトリグリセリドの定量方法 |
| JP2008544214A (ja) * | 2005-05-09 | 2008-12-04 | セラノス， インコーポレイテッド | ポイントオブケア流体システムおよびその使用 |
| JP2008032447A (ja) | 2006-07-27 | 2008-02-14 | Hamamatsu Univ School Of Medicine | 自閉症の診断薬 |
| JP2008141975A (ja) * | 2006-12-07 | 2008-06-26 | Toyobo Co Ltd | 低密度リポ蛋白中コレステロール測定方法およびその試薬 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| DR. KANNER, AUTISTIC DISTURBANCES OF AFFECTIVE CONTACT, 1943 |
| HIDEO MATSUZAKI: "Jiheisho no Bio Marker", BRAIN SCIENCE AND MENTAL DISORDERS, vol. 20, no. 4, 25 December 2009 (2009-12-25), pages 271 - 280 * |
| KEIKO IWATA: "Jiheisho no Bunshi Mechanism Kaiseki o Mezashite", BULLETIN OF THE JAPANESE SOCIETY FOR NEUROCHEMISTRY, vol. 49, no. 1, 31 March 2010 (2010-03-31), pages 3 - 10 * |
| MACINTOSH ET AL., JOURNAL OF CHILD PHYCHOLOGY AND PSYCHIATRY, 2004 |
| MACINTOSH ET AL., JOURNAL OF CHILD PSYCHOLOGY AND PSYCHIATRY, 2004 |
| MCCAFFERY ET AL., PROGRESS IN NEUROBIOLOGY, 2005 |
| See also references of EP2490028A4 |
| YASUHIDE IWATA ET AL.: "Jiheisho no Massho Seibutsugakuteki Marker no Kensaku", BRAIN 21, vol. 10, no. 3, 20 July 2007 (2007-07-20), pages 261 - 266 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013245941A (ja) * | 2012-05-23 | 2013-12-09 | Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd | 共同注視能力の評価方法及びその評価装置 |
| JP2018033393A (ja) * | 2016-09-01 | 2018-03-08 | 国立大学法人筑波技術大学 | 自閉症スペクトラム障害の判定方法と判定用キット |
| TWI708945B (zh) * | 2018-04-03 | 2020-11-01 | 日商電化生研股份有限公司 | 輔助判斷循環器官疾病等的風險之方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2490028A1 (en) | 2012-08-22 |
| US8518659B2 (en) | 2013-08-27 |
| JPWO2011045937A1 (ja) | 2013-03-04 |
| CN102597781B (zh) | 2014-09-03 |
| EP2490028B1 (en) | 2016-11-30 |
| EP2490028A4 (en) | 2013-07-10 |
| CN102597781A (zh) | 2012-07-18 |
| JP5757627B2 (ja) | 2015-07-29 |
| US20120231484A1 (en) | 2012-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5757627B2 (ja) | 高機能自閉症の発症危険度を判定する方法およびマーカー | |
| Hughes et al. | Brain cholesterol metabolism, oxysterols, and dementia | |
| Zarrouk et al. | Fatty acid profiles in demented patients: identification of hexacosanoic acid (C26: 0) as a blood lipid biomarker of dementia | |
| Leoni et al. | Changes in human plasma levels of the brain specific oxysterol 24S-hydroxycholesterol during progression of multiple sclerosis | |
| Van den Kommer et al. | Homocysteine and inflammation: predictors of cognitive decline in older persons? | |
| Hughes et al. | Markers of cholesterol metabolism in the brain show stronger associations with cerebrovascular disease than Alzheimer's disease | |
| Jiménez-Fernández et al. | Oxidative stress parameters and antioxidants in adults with unipolar or bipolar depression versus healthy controls: Systematic review and meta-analysis | |
| Arango et al. | Psychopathology, coronary heart disease and metabolic syndrome in schizophrenia spectrum patients with deficit versus non-deficit schizophrenia: findings from the CLAMORS study | |
| US20140357525A1 (en) | Markers for alzheimer's disease and mild cognitive impairment and methods of using the same | |
| Tang et al. | Metabolomic profiling of aqueous humor and plasma in primary open angle glaucoma patients points towards novel diagnostic and therapeutic strategy | |
| WO2020125530A1 (zh) | D-丝氨酸作为标志物在制备抑郁症诊断试剂盒中的应用及抑郁症诊断试剂盒 | |
| Giovannini et al. | High levels of γ-H2AX foci and cell membrane oxidation in adolescents with type 1 diabetes | |
| EA035342B1 (ru) | Способы контроля лечения пациента, имеющего ассоциированное с кислой сфингомиелиназой (asm) нарушение | |
| Peduto et al. | Hyperpipecolic acidaemia: a diagnostic tool for peroxisomal disorders | |
| Konukoglu et al. | Serum brain-derived neurotrophic factor, nerve growth factor and neurotrophin-3 levels in dementia | |
| Steinberg et al. | A PEX10 defect in a patient with no detectable defect in peroxisome assembly or metabolism in cultured fibroblasts | |
| US20230357820A1 (en) | Test method for mild cognitive impairment, test reagent for mild cognitive impairment, and method for screening therapeutic candidate substances for mild cognitive impairment | |
| Raffa et al. | The reduction of superoxide dismutase activity is associated with the severity of neurological soft signs in patients with schizophrenia | |
| Zhang et al. | Plasma phospholipids are associated with mild cognitive impairment in type 2 diabetic patients | |
| Tian et al. | Sex differences in plasma lipid profiles of accelerated brain aging | |
| Sahin et al. | A comprehensive study of oxidative stress in patients with somatic symptom disorder | |
| Kim et al. | Plasma levels of apolipoprotein E and risk of intracranial artery stenosis in acute ischemic stroke patients | |
| WO2013080917A1 (ja) | 統合失調症の客観的評価法 | |
| Nilsson et al. | C-reactive protein: vascular risk marker in elderly patients with mental illness | |
| Taskin et al. | Plasma total homocysteine levels in a healthy Turkish population sample |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 201080046519.3 Country of ref document: CN |
|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 10823205 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2011536046 Country of ref document: JP |
|
| NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
| REEP | Request for entry into the european phase |
Ref document number: 2010823205 Country of ref document: EP |
|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 4139/CHENP/2012 Country of ref document: IN Ref document number: 2010823205 Country of ref document: EP |
|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 13501147 Country of ref document: US |