CN105652016A - 一种孤独症检测标志物及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种孤独症检测标志物及其检测方法,本发明提供的一组孤独症患儿与对照外周血单核细胞的差异蛋白可用于孤独症检测,所述差异蛋白用于孤独症检测时,能提高检测的特异性和准确性,同时具有一定的客观性,优于单一疾病标志物。本发明采用高通量蛋白组学方法确定单核细胞中是否存在差异蛋白,并通过免疫印记技术对这些蛋白进行逐个检测或采用蛋白芯片技术对这些蛋白进行同时检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化,与现有的检测方法(孤独症检测量表)相比,本发明检测方法特异性、灵敏度和准确性高。
Description
技术领域
本发明涉及疾病检测技术领域,尤其涉及一种孤独症检测标志物及其检测方法。
背景技术
孤独症又称自闭症,是一种神经系统发育障碍性疾病,常起病于0-30个月,主要表现为不同程度的语言发育障碍、人际交往障碍、兴趣狭窄和行为方式刻板。该病患病率有增高趋势,严重影响婴幼儿、儿童身心健康,给家庭和社会带来了沉重负担。目前,由于病因及发病机制尚未阐明,尚无特效治疗药物和特异性诊断生物标志物。实践表明,早期诊断、早期干预可以改善孤独症预后。因此,寻找快速、有效的孤独症诊断方法,利于疾病的早期发现和干预,意义重大。
当前孤独症的诊断主要依据量表、临床症状及医生的临床经验等,具有一定的主观性,易造成诊断延迟或误诊。常用的量表为美国精神障碍诊断统计手册第四版(DSM-IV)或第五版(DSM-5)孤独症诊断标准。
因此,现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种孤独症检测标志物及其检测方法,旨在解决现有检测方法具有一定的主观性,易造成检测延迟或误诊的问题。
本发明的技术方案如下:
一种孤独症检测标志物,其中,所述孤独症检测标志物为孤独症患儿与对照外周血单核细胞的差异蛋白,所述差异蛋白由60kDa热休克蛋白、78kDa葡萄糖调节蛋白、乙酰-CoA乙酰转移酶、抗胰蛋白酶、α-2巨球蛋白、膜粘连蛋白A11、载脂蛋白A-I、ATP合成酶亚基α、ATP合酶β亚基、钙网蛋白、染色盒同源物3、补体蛋白C3、补体C4-A、细胞色素b-C1复合物亚基2、脱氧核苷三磷酸三磷酸水解酶SAMHD1、二氢硫辛酸脱氢酶、延伸因子Tu、内质蛋白、类似红细胞带7融入膜蛋白、脂阀结构蛋白1、脂阀结构蛋白2、谷氨酸脱氢酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、肝素辅助因子2、异质性胞核核糖核蛋白K、氧气调节蛋白、间α胰蛋白酶抑制剂重链H4、异柠檬酸脱氢酶[NADP]、核纤层蛋白B1、核纤层蛋白B2、脂多糖结合蛋白、苹果酸脱氢酶、NAD依赖性苹果酸酶、成神经细胞分化相关蛋白AHNAK、核有丝分裂器蛋白1、丝束蛋白、网蛋白、泛素羧基末端水解酶FAF-X、蛋白质二硫键异构酶、蛋白质二硫键异构酶A3、RasGTP酶激活样蛋白IQGAP1、白蛋白、血影蛋白A链、应激-70蛋白、超氧化物歧化酶[锰]、波形蛋白、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白3和血管性血友病因子构成。
一种基于如上所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,采集血浆,分离单核细胞,通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在如上所述的差异蛋白。
所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:采用免疫印记技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。
所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:采用蛋白芯片技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。
所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:对差异蛋白相应的mRNA水平进行定量PCR检测,确定检测到的mRNA的浓度变化。
所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:对差异蛋白相应的mRNA水平进行mRNA表达谱芯片的检测,确定检测到的mRNA的浓度变化。
所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:同时检测外周血单核细胞或者血清中α-1-抗胰蛋白酶、补体蛋白C3、钙网蛋白三个蛋白的变化,进行孤独症检测。
有益效果:本发明确定了可用于检测孤独症的外周血单核细胞(Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)系列差异蛋白,以提高检测的客观性、特异性和准确性。
具体实施方式
本发明提供一种孤独症检测标志物及其检测方法,为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确,以下对本发明进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明提供一种孤独症检测标志物,其中,所述孤独症检测标志物为孤独症患儿与健康对照外周血单核细胞的差异蛋白,所述差异蛋白由60kDa热休克蛋白、78kDa葡萄糖调节蛋白、乙酰-CoA乙酰转移酶、抗胰蛋白酶、α-2巨球蛋白、膜粘连蛋白A11、载脂蛋白A-I、ATP合成酶亚基α、ATP合酶β亚基、钙网蛋白、染色盒同源物3、补体蛋白C3、补体C4-A、细胞色素b-C1复合物亚基2、脱氧核苷三磷酸三磷酸水解酶SAMHD1、二氢硫辛酸脱氢酶、延伸因子Tu、内质蛋白、类似红细胞带7融入膜蛋白、脂阀结构蛋白1、脂阀结构蛋白2、谷氨酸脱氢酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、肝素辅助因子2、异质性胞核核糖核蛋白K、氧气调节蛋白、间α胰蛋白酶抑制剂重链H4、异柠檬酸脱氢酶[NADP]、核纤层蛋白B1、核纤层蛋白B2、脂多糖结合蛋白、苹果酸脱氢酶、NAD依赖性苹果酸酶、成神经细胞分化相关蛋白AHNAK、核有丝分裂器蛋白1、丝束蛋白、网蛋白、泛素羧基末端水解酶FAF-X、蛋白质二硫键异构酶、蛋白质二硫键异构酶A3、RasGTP酶激活样蛋白IQGAP1、白蛋白、血影蛋白A链、应激-70蛋白、超氧化物歧化酶[锰]、波形蛋白、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白3和血管性血友病因子构成。
血液由于采样方便且能较好反映机体病理生理过程而成为疾病标志物的最好来源之一。但要寻找到特异性和准确性高,能用于临床检测的血液蛋白标志物,有一定难度。基于外周血单核细胞差异表达蛋白的检测,是疾病诊断的另一策略。另外,既往研究表明孤独症属于多因素相关疾病。因此,在寻找孤独症检测标志物,很难寻找到单一的蛋白标志物。因此,本发明提供上述差异蛋白(共计48个)用于孤独症检测,上述48个差异蛋白作为一组(或称系列)差异蛋白用于孤独症检测,采取该组合标志物的方式能提高检测的特异性和准确性,同时具有一定的客观性,优于单一疾病标志物。需说明的是,本发明上述差异蛋白(共计48个)中的任意三种或三种以上蛋白即可作为孤独症检测标志物,上述差异蛋白(共计48个)中的任意三种或三种以上蛋白作为孤独症检测标志物用于检测孤独症时,同样具有一定的客观性、特异性和准确性。
作为本发明优选实施例,本发明可通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在60kDa热休克蛋白、78kDa葡萄糖调节蛋白、乙酰-CoA乙酰转移酶、抗胰蛋白酶和α-2巨球蛋白。上述蛋白即可作为孤独症检测标志物,用于孤独症检测时同样具有一定的客观性、特异性和准确性。
作为本发明优选实施例,本发明可通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在60kDa热休克蛋白、78kDa葡萄糖调节蛋白、抗胰蛋白酶、α-2巨球蛋白、钙网蛋白、肝素辅助因子2、异质性胞核核糖核蛋白K和氧气调节蛋白。上述蛋白同样可作为孤独症检测标志物,用于孤独症检测时同样具有一定的客观性、特异性和准确性。
作为本发明优选实施例,本发明可通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在膜粘连蛋白A11、载脂蛋白A-I、ATP合成酶亚基α、ATP合酶β亚基、钙网蛋白、二氢硫辛酸脱氢酶、延伸因子Tu、内质蛋白、类似红细胞带7融入膜蛋白、脂阀结构蛋白1、脂阀结构蛋白2和谷氨酸脱氢酶。上述蛋白同样可作为孤独症检测标志物,用于孤独症检测时同样具有一定的客观性、特异性和准确性。
作为本发明优选实施例,本发明可通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在甘油-3-磷酸脱氢酶、肝素辅助因子2、异质性胞核核糖核蛋白K、氧气调节蛋白、间α胰蛋白酶抑制剂重链H4、异柠檬酸脱氢酶[NADP]、核纤层蛋白B1、核纤层蛋白B2、脂多糖结合蛋白、苹果酸脱氢酶、NAD依赖性苹果酸酶、成神经细胞分化相关蛋白AHNAK、核有丝分裂器蛋白1、丝束蛋白、网蛋白、泛素羧基末端水解酶FAF-X、蛋白质二硫键异构酶、蛋白质二硫键异构酶A3、RasGTP酶激活样蛋白IQGAP1、白蛋白、血影蛋白A链、应激-70蛋白、超氧化物歧化酶[锰]、波形蛋白、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白3和血管性血友病因子。上述蛋白同样可作为孤独症检测标志物,用于孤独症检测时同样具有一定的客观性、特异性和准确性。
基于上述孤独症检测标志物,本发明还提供一种基于如上所述孤独症检测标志物的检测方法,其中,采集血浆,分离单核细胞,通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在如上所述的差异蛋白。本发明采用高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在上述48个差异蛋白,且当单核细胞中存在上述48个差异蛋白时,上述48个差异蛋白中有表达上调蛋白38个,表达下调蛋白10个。
进一步地,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:采用免疫印记技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。即在采用高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中存在上述48个差异蛋白后,采用免疫印记技术对上述差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。与现有的孤独症检测方法相比,本发明根据检测到的差异蛋白的浓度变化,可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
进一步地,本发明确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:采用蛋白芯片技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。即在采用高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中存在上述48个差异蛋白后,本发明也可以采用蛋白芯片技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。与现有的孤独症检测方法相比,本发明根据检测到的差异蛋白的浓度变化,可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
进一步地,本发明确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:对差异蛋白相应的mRNA水平进行定量PCR检测,确定检测到的mRNA的浓度变化。与现有的孤独症检测方法相比,本发明根据检测到的差异蛋白的浓度变化,可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
进一步地,本发明确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:对差异蛋白相应的mRNA水平进行mRNA表达谱芯片的检测,确定检测到的mRNA的浓度变化。与现有的孤独症检测方法相比,本发明根据检测到的差异蛋白的浓度变化,可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
进一步地,本发明确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:同时检测外周血单核细胞或者血清中α-1-抗胰蛋白酶、补体蛋白C3、钙网蛋白三个蛋白的变化,进行孤独症检测。这是因为经上述检测发现,差异蛋白中α-1-抗胰蛋白酶、补体蛋白C3、钙网蛋白这三个蛋白在孤独症患儿血清与单核细胞中均发生了变化。因此,可通过同时检测外周血单核细胞或者血清中这三个蛋白的变化,进行检测孤独症。
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
分别采集孤独症患儿血浆和健康儿童血浆,然后分别采用外周血单核细胞分离试剂盒对血浆进行分离,获得孤独症患儿单核细胞和健康儿童单核细胞,接着通过高通量蛋白组学方法对孤独症患儿单核细胞和健康儿童单核细胞进行比较分析。结果得到:与对照健康儿童单核细胞相比,在孤独症患儿单核细胞中获得了差异蛋白48个,其中38个表达蛋白上调,10个表达蛋白下调。然后采用免疫印记技术对48个差异蛋白进行逐个检测,或者采用蛋白芯片技术对48个差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。本发明通过高通量蛋白组学方法,通过对孤独症患儿单核细胞与健康儿童单核细胞进行比较分析,与对照相比,获得了差异蛋白48个,表达上调蛋白38个,表达下调蛋白10个,并通过免疫印记技术对这些蛋白进行逐个检测或采用蛋白芯片技术对这些蛋白进行同时检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。与现有的检测方法(孤独症检测量表)相比,本发明检测方法特异性、灵敏度和准确性高。差异蛋白详见表1。
表1、孤独症儿童与对照外周血单核细胞差异蛋白
综上所述,本发明提供一种孤独症检测标志物及其检测方法,本发明提供的一组差异蛋白可用于孤独症检测,用于孤独症检测时,能提高检测的特异性和准确性,同时具有一定的客观性,优于单一疾病标志物。本发明采用高通量蛋白组学方法,通过对孤独症患儿单核细胞与健康儿童单核细胞进行比较分析,获得了二者差异蛋白48个,与对照相比,表达上调蛋白38个,表达下调蛋白10个,并通过免疫印记技术对这些蛋白进行逐个检测或采用蛋白芯片技术对这些蛋白进行同时检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化,与现有的检测方法(孤独症检测量表)相比,本发明检测方法特异性、灵敏度和准确性高。
应当理解的是,本发明的应用不限于上述的举例,对本领域普通技术人员来说,可以根据上述说明加以改进或变换,所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
Claims (7)
1.一种孤独症检测标志物,其特征在于,所述孤独症检测标志物为孤独症患儿与对照外周血单核细胞的差异蛋白,所述差异蛋白由60kDa热休克蛋白、78kDa葡萄糖调节蛋白、乙酰-CoA乙酰转移酶、抗胰蛋白酶、α-2巨球蛋白、膜粘连蛋白A11、载脂蛋白A-I、ATP合成酶亚基α、ATP合酶β亚基、钙网蛋白、染色盒同源物3、补体蛋白C3、补体C4-A、细胞色素b-C1复合物亚基2、脱氧核苷三磷酸三磷酸水解酶SAMHD1、二氢硫辛酸脱氢酶、延伸因子Tu、内质蛋白、类似红细胞带7融入膜蛋白、脂阀结构蛋白1、脂阀结构蛋白2、谷氨酸脱氢酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、肝素辅助因子2、异质性胞核核糖核蛋白K、氧气调节蛋白、间α胰蛋白酶抑制剂重链H4、异柠檬酸脱氢酶[NADP]、核纤层蛋白B1、核纤层蛋白B2、脂多糖结合蛋白、苹果酸脱氢酶、NAD依赖性苹果酸酶、成神经细胞分化相关蛋白AHNAK、核有丝分裂器蛋白1、丝束蛋白、网蛋白、泛素羧基末端水解酶FAF-X、蛋白质二硫键异构酶、蛋白质二硫键异构酶A3、RasGTP酶激活样蛋白IQGAP1、白蛋白、血影蛋白A链、应激-70蛋白、超氧化物歧化酶[锰]、波形蛋白、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白3和血管性血友病因子构成。
2.一种基于权利要求1所述孤独症检测标志物的检测方法,其特征在于,采集血浆,分离单核细胞,通过高通量蛋白质组学方法确定单核细胞中是否存在权利要求1所述的差异蛋白。
3.根据权利要求2所述孤独症检测标志物的检测方法,其特征在于,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:采用免疫印记技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。
4.根据权利要求2所述孤独症检测标志物的检测方法,其特征在于,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:采用蛋白芯片技术对差异蛋白进行逐个检测,确定检测到的差异蛋白的浓度变化。
5.根据权利要求2所述孤独症检测标志物的检测方法,其特征在于,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:对差异蛋白相应的mRNA水平进行定量PCR检测确定检测到的mRNA的浓度变化。
6.根据权利要求2所述孤独症检测标志物的检测方法,其特征在于,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:对差异蛋白相应的mRNA水平进行mRNA表达谱芯片的检测,确定检测到的mRNA的浓度变化。
7.根据权利要求2所述孤独症检测标志物的检测方法,其特征在于,确定单核细胞中存在差异蛋白后还包括:同时检测外周血单核细胞或者血清中α-1-抗胰蛋白酶、补体蛋白C3、钙网蛋白三个蛋白的变化,进行孤独症检测。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160608 |