WO2011013398A1 - Cd22分子に対する高親和性を有しｂ細胞の増殖を増強する化合物 - Google Patents

Cd22分子に対する高親和性を有しｂ細胞の増殖を増強する化合物 Download PDF

Info

Publication number
WO2011013398A1
WO2011013398A1 PCT/JP2010/054406 JP2010054406W WO2011013398A1 WO 2011013398 A1 WO2011013398 A1 WO 2011013398A1 JP 2010054406 W JP2010054406 W JP 2010054406W WO 2011013398 A1 WO2011013398 A1 WO 2011013398A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound according
compound
infection
virus
group
Prior art date
Application number
PCT/JP2010/054406
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
武志 鍔田
真 木曽
秀治 石田
ハジャジ ハッサン モハメド アブドゥ・アラ
Original Assignee
国立大学法人岐阜大学
独立行政法人科学技術振興機構
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人岐阜大学, 独立行政法人科学技術振興機構 filed Critical 国立大学法人岐阜大学
Publication of WO2011013398A1 publication Critical patent/WO2011013398A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7012—Compounds having a free or esterified carboxyl group attached, directly or through a carbon chain, to a carbon atom of the saccharide radical, e.g. glucuronic acid, neuraminic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
    • C07H7/02—Acyclic radicals
    • C07H7/027—Keto-aldonic acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a compound having high affinity for the CD22 molecule, various pharmaceutical compositions containing the compound as an active ingredient, and the like.
  • CD22 is a B cell-specific sialic acid binding immunoglobulin-like lectin (Siglec), and its B cell signal control function is mediated by interaction with a glycan ligand having a Neu5Ac ⁇ 2-6Gal sequence.
  • Siglec sialic acid binding immunoglobulin-like lectin
  • CD22 has previously been considered as a target molecule for immunotherapy for B lymphoma and autoimmune diseases, and studies have been conducted on ligands with high affinity for CD22. The results show the importance of C-2, C-5 and C-9 substituents in sialic acid with respect to binding affinity and specificity.
  • Non-patent Document 1 human and mouse CD22 show high specificity for Neu5Ac / Gc ⁇ 2-6Gal.
  • BPA biphenylacetamide
  • BPC biphenylcarboxamide
  • BPC-Neu5Ac-LacNAc binds to human CD22 about 10 times stronger than BPC-Neu5Ac
  • BPA-Neu5Gc-LacNAc reacts to mouse CD22 about 100 times stronger than BPA-Neu5Ac. It is shown that they are combined in order (Non-Patent Document 3).
  • the inventors of the present invention bind BPC-Neu5Gc ⁇ 2-6GalOMP, in which a p-methoxyphenyl group (MP) is inserted into the 2-position galactosyl group, about 5 times stronger than BPC-Neu5Gc-Gal, while binding to BPA.
  • -Neu5Gc ⁇ 2-6GalOMP was shown to bind to mouse CD22 about 4 times stronger than BPA-Neu5Gc-Gal (Non-patent Document 4).
  • the problem to be solved by the present invention is a structure that can be effectively used for the prevention and treatment of infectious diseases, is easy to synthesize and has a relatively simple structure, and has a high affinity (high binding) to the CD22 molecule. It is to provide a molecule having a characteristic).
  • the present inventor obtained by introducing an aromatic hydrocarbon group containing a phenyl ring such as a benzyl group and a biphenylmethyl group into C-2 in sialic acid.
  • the present invention has been found to have an effect of promoting immune responses such as a remarkable proliferation-promoting effect on B lymphocytes and an effect of enhancing resistance to viral infection.
  • a sialic acid derivative having high affinity for CD22 molecule for example, chemical formula (1):
  • R 1 and R 2 each represent an optionally substituted aromatic hydrocarbon group), or a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable derivative thereof A compound that is a salt or hydrate.
  • a composition comprising the above compound as an active ingredient for promoting an immune response.
  • a pharmaceutical composition containing the above as an active ingredient in particular, a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of infectious diseases, suppression of the severity of infectious diseases and promotion of recovery, or prevention of complications caused by infectious diseases object.
  • a compound having an action of promoting immune response such as enhancement of proliferation of B cells and enhancement of resistance to infectious diseases such as viral diseases, for the first time by having high affinity for CD22 molecule of B cells. I was able to provide it.
  • the compounds of the present invention have a high affinity for the CD22 molecule, eg, a binding property (IC50) to human CD22 of 0.13 ⁇ M or less, preferably 0.08 ⁇ M or less, or a binding property (IC50) to mouse CD22 of 0.2 ⁇ M.
  • IC50 binding property
  • it has a high affinity (high binding property), preferably 0.1 ⁇ M or less.
  • the binding property (IC50) is a value measured in a competition assay for binding of a compound: BPA-Neu5Gc ⁇ 2-6GalOMP to a CD22 molecule using the ELISA system described in Example 2 of the present specification.
  • a prodrug for example, a suitable ester
  • a sialic acid derivative which is a compound represented by the chemical formula (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof (for example, a suitable alkali metal salt)
  • a pharmaceutically acceptable salt thereof for example, a suitable alkali metal salt
  • substituent as long as the high affinity for the CD22 molecule is not impaired, for example, alkyl and alkoxy having about 1 to 5 carbon atoms; amino; hydroxy; halogen; nitro, etc. It is possible to select appropriately from those and substitute at an appropriate position.
  • R 1 examples include 4′-hydroxy-4-biphenyl-acetyl group, 4′-hydroxy-4-biphenyl-methyl group, 4′-hydroxy-4-biphenyl-methylamino group, and 4′-hydroxy. Mention may be made of the group consisting of -4-biphenyl-acetylamino groups.
  • R ⁇ 2 > the aromatic hydrocarbon group containing a phenyl ring like a benzyl group and a biphenylmethyl group can be mentioned.
  • the compounds of the present invention can be synthesized by any method known to those skilled in the art.
  • 3,5,9-trideoxy-5-glycolamide-9- (4′-hydroxy-4-biphenyl) acetamide-D-glycero- ⁇ -D-galaclo-2-nonuropyranoside acid which is an example of the compound of the present invention
  • Benzyl (8) and 3,5,9-trideoxy-5-glycamido-9- (4'-hydroxy-4-biphenyl) acetamide-D-glycero- ⁇ -D-galacro-2-nonuropyranoside acid 4'-biphenylmethyl (9) can be synthesized by a process as shown in FIG.
  • compound (2) is synthesized in 7 steps according to the method described in Non-Patent Document 4 using neuraminic acid as a starting material.
  • Previous literature Hanessian, S .; Guindon, YJ Carbohydr. Res. 1980, 86, C3. Cleavage of the benzyl ether protecting group with PhSSiMe 3 in the presence of ZnI 2 and Bu 4 NI to hydrodebenzylate the alkyl glycoside to the corresponding thiol. Conversion to a glycoside directly followed by acetylation gives compound (3).
  • B cells usually mean IgM and IgD positive naive B cells (mature B cells), but are not necessarily limited to this type, and generally react with T cell-dependent antigens. And B cells that have the potential to be activated and differentiate into antibody-producing cells.
  • various cells such as B cells and CD22 (gene) include those derived from any animal cell known to those skilled in the art including mammals such as mice and humans.
  • promoting action of immune response means any reaction known to those skilled in the art, for example, B cell proliferation and survival, especially in the early stage of immune response, B cell proliferation and division by antigen stimulation. And / or various aspects such as enhanced survival and enhanced resistance to infectious diseases such as viral diseases.
  • the initial stage of immune response varies for about 1 to 2 days depending on the type of antigen used as an immunogen, the mode of the immune response promoting action, etc. It means several days after stimulation), for example, 3-5 days after immunization.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition containing the compound of the present invention as an active ingredient, particularly treatment or prevention of infectious diseases, suppression of the severity of infectious diseases and promotion of recovery, or complications caused by infectious diseases. It also relates to a pharmaceutical composition for prevention.
  • the present invention can be used for the treatment or prevention of infectious diseases by promoting an immune response, etc., for suppressing the severity of infectious diseases and promoting recovery, or for preventing complications caused by infectious diseases. It also relates to the above compounds used in The present invention also relates to the above compounds used to promote an immune response.
  • Infectious diseases include, for example, influenza virus, parainfluenza virus, hepatitis A, B or C virus, papilloma virus, cytomegalovirus, flavivirus, rhinovirus, measles, rubella, parvovirus, Epstein-Barr virus, enterovirus, simple Viral diseases selected from the group consisting of herpes virus, varicella-zoster virus, adenovirus, RS virus, hunt turn virus (haemorrhagic fever), alphavirus, and retrovirus, and bacteremia, sepsis, fungal infection , Parasitic infections such as malaria infection or trypanosoma infection, mycobacterial infection, gram positive bacterial infection, and gram negative bacterial infection.
  • influenza virus parainfluenza virus, hepatitis A, B or C virus
  • papilloma virus cytomegalovirus
  • flavivirus flavivirus
  • rhinovirus measles
  • rubella rubella
  • parvovirus Epstein-Barr virus
  • the composition of the present invention can be produced by any pharmaceutical method known to those skilled in the art.
  • a pharmacologically acceptable carrier or medium specifically sterilized water, physiological saline, vegetable oil, emulsifier, suspending agent, surfactant, stabilizer, sustained release agent, etc. It is conceivable to administer.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of an aqueous solution, tablet, capsule, troche, buccal tablet, elixir, suspension, syrup, nasal solution or inhalation solution.
  • the content of the compound of the present invention can be appropriately determined by those skilled in the art according to the therapeutic purpose, administration route, treatment target, and the like.
  • the concentration range may be 0.1 to 10.0 mg.
  • administration to the patient is performed, for example, transdermally, intranasally, transbronchially, intramuscularly, intraperitoneally, intravenously, intrathecally, intraventricularly, or orally. be able to.
  • a person skilled in the art can appropriately select an appropriate dose according to the patient's age, weight, symptoms, administration method, and the like.
  • the dosage and administration method can be appropriately selected by those skilled in the art according to the tissue transferability of the active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, the purpose of treatment, the patient's weight, age, symptoms, and the like. For example, it can be administered 1 to 5 times per day.
  • the patient can be a mammal such as a human, mouse, rat, rabbit, dog, cat, cow, horse, pig, monkey or the like.
  • the present invention provides a method for treating or preventing an infectious disease, a method for suppressing the severity of infectious disease and promoting recovery, or an infection comprising administering the compound or pharmaceutical composition to a patient according to the above-described embodiment. Also related to the prevention of complications caused by the disease. The present invention also relates to a method for promoting an immune response comprising administering the compound or the pharmaceutical composition to a patient according to the above-described embodiment.
  • This invention compound was manufactured in the following processes. Methyl (phenyl 5-acetoxyacetamido-4,7,8-tri-O-acetyl-9-azido-3,5,9-trideoxy-2-thio-D-glycero- ⁇ -D-galacto-2-nonuroylanoside) Oate (3) Compound (2) (1.34 g) in 1,2-dichloroethane (40 ml) was added to a mixture of anhydrous ZnI 2 (3.20 g, 10 mmol, 5 equiv.) And Bu 4 NI (1.10 g, 3 mmol, 1.5 equiv.).
  • Methyl phenyl 5-acetoxyacetamide-4,7,8-tri-O-acetyl-9-azido-3,5,9-trideoxy-2-thio-D-glycero- ⁇ -D-galacto-2-nonuroylanoside
  • An activated powder molecular sieve (3 ⁇ ) was added to a solution of the above compound (3) (250 mg, 0.4 mmol, 10. equiv.) And benzyl alcohol (65 mg, 0.6 mmol) in MeCN (10 mL). The mixture was stirred at room temperature under an argon atmosphere for 5 hours and then cooled to -40 ° C.
  • Methyl (4′-biphenylmethyl 5-acetoxyacetamide-4,7,8-tri-O-acetyl-9-azido-3,5,9-trideoxy-2-thio-D-glycero- ⁇ -D-galacto- 2-nonuroylanoside) oate 5 ⁇
  • An activated powder molecular sieve (3 ⁇ ) was added to a solution of the above compound (3) (320 mg, 0.51 mmol) and biphenylmethanol (142 mg, 0.76 mmol) in MeCN (18 mL). The mixture was stirred at room temperature under an argon atmosphere for 5 hours and then cooled to -40 ° C.
  • Trimethylphosphine (1 M in THF, 1.5 mL, 1.6 mmol) was added into the stirring solution of azide in MeOH-water (15: 1, 20 mL). These mixtures were stirred at room temperature for 16 hours and the solvent was removed in vacuo. The resulting residue was dissolved in water and loaded on a silica reverse phase column. The compound was eluted with a gradient of methanol-water (0: 1-10: 100) and lyophilized from water to give compound (7), a white fluffy solid (129 mg, 84%). Various physical properties of the obtained compound (7) are shown below.
  • the affinity of the compound of the present invention for human CD22 or mouse CD22 was measured by ELISA as follows. Streptavidin dissolved at 40 ⁇ g / mL in a pH 8.5 carbonate buffer was added to an ELISA plate (Greiner) and immobilized at 4 ° C. overnight. Subsequently, biotinylated CD22 ligand BPA-Neu5Gc ⁇ 2-6GalOMP (GSC731) dissolved in physiological saline (PBS) at 4 ⁇ g / mL was added, and the mixture was further reacted for 1 hour. After the reaction, the well was filled with PBS containing 0.5% bovine serum albumin for 3 hours to prevent non-specific reaction.
  • PBS physiological saline
  • the compound of the present invention and 1 ⁇ g of human or mouse CD22Fc protein were added to the well in which the CD22 ligand was immobilized in this manner, and allowed to react for 1 hour. After washing the wells with PBS containing 0.05% Tween20, alkaline phosphatase-labeled anti-Fc antibody (Southern biotech) was added and allowed to react for an additional hour, and then added to a pH 9.5 Tris buffer containing 0.1 M sodium chloride and 5 mM magnesium chloride. Dissolved phosphatase substrate (Sigma) was added and the absorbance at 405 nm was measured.
  • compound (8) (GSC-718) of the present invention synthesized in Example 1 was converted into compound 8p described in Non-patent Document 4 (compound (Example 1)) in mouse CD22.
  • the compound of the present invention (9) (GSC-720) synthesized in Example 1 binds to human CD22 about 7 times stronger than the compound 9g described in Non-Patent Document 4 about 40 times compared to 1)). Was confirmed.
  • CD22-deficient B lymphocytes have increased B cell proliferation by anti-CD40 antibodies. Therefore, in order to examine the B lymphocyte proliferation-promoting effect by inhibiting the CD22 molecular function of the B cell of the inventive compound in an inhibitory manner, 2 ⁇ M CFSE (molecular probe) After labeling with a fluorescent dye called), RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum and antibiotics together with 10 ⁇ g / mL anti-CD40 antibody (Alexis FGK45) and the compound (8) produced in Example 1 Wako) is suspended at 500,000 cells / mL, cultured in a CO2 incubator at 37 degrees for 72 hours, and then the cells are collected. The amount of CFSE per cell is determined by a method known to those skilled in the art using flow cytometry. Was measured. The result is shown in FIG.
  • influenza virus A / HK-x31 (H3N2) strain was intranasally infected into C57 / B6 mice (female, about 8 weeks old), influenza virus A / PR8 / 34 (PR8 strain, H1N1) every 4 weeks Strains were infected nasally.
  • the compound (8) of the present invention suspended in 200 ⁇ g of physiological saline per mouse was administered intraperitoneally on the 3rd and 6th days after infection (compound administration group).
  • physiological saline containing no compound was administered intraperitoneally in the same amount (PBS administration group).
  • PBS administration group There were 7 mice in each group, and the weight gain (FIG. 3) and clinical score (FIG.
  • mice 4 of these mice were evaluated.
  • the clinical scores are 0 (normal), 1 (slightly abnormal on the fur), 2 (apparently abnormal in the fur but active), 3 (obviously abnormal and slow in the fur), 4 (clearly on the fur There were abnormalities and slowness, and the dorsum was evaluated on a scale of 5 (dead).
  • the compound of the present invention has the effect of enhancing the infection resistance to influenza virus, the effect on the treatment or prevention of viral infections, and further, the action of suppressing the severity of infection and promoting the recovery, and the infection The effect of preventing the complications caused by the disease was revealed.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

　Ｂ細胞のCD22分子に対する高親和性を有し、免疫応答を促進させることによって、Ｂ細胞の増殖の増強、及びウイルス性疾患等の感染症に対する抵抗性の増強等の作用を有する化合物を提供する。化学式（１）：（式中、Ｒ1及びＲ2は、夫々、置換基を有していてもよい芳香族炭化水素基を示す） で表わされるシアル酸誘導体若しくはそのプロドラッグ、又は、製薬上許容され得るそれ らの塩若しくは水和物である化合物。

Description

CD22分子に対する高親和性を有しＢ細胞の増殖を増強する化合物
本発明は、CD22分子に対して高親和性を有する化合物、及び、該化合物を有効成分として含有する各種の医薬組成物等に関するものである。
CD22はＢ細胞特異的シアル酸結合性免役グロブリン様レクチン（Siglec）であり、そのＢ細胞シグナル制御機能は、Neu5Acα2-6Gal配列を有するグリカンリガンドとの相互作用を介している。
CD22はこれまでにＢリンパ腫及び自己免疫疾患に対する免役療法の標的分子として考えられ、CD22に対する高親和性を有するリガンドに関して研究がなされてきた。その結果、結合親和性及び特異性に関してシアル酸におけるC-2, C-5及び C-9置換基の重要性が示されている。
例えば、ヒト及びマウスCD22はNeu5Ac/Gcα2-6Galに対して高い特異性を示す（非特許文献１）。更に、９位が修飾された化合物であるBPA（ビフェニルアセトアミド）-Neu5Ac及びBPC（ビフェニルカルボキシアミド）-Neu5Acが、夫々、マウスCD22及びヒトCD22に強く反応することを示し、これらの化合物によりB細胞のシグナル伝達が変化することが示されている（非特許文献２）。
又、BPC-Neu5Ac-LacNAcがBPC-Neu5Acに比べヒトCD22に約１０倍強く結合すること、BPA-Neu5Gc-LacNAcがBPA-Neu5Acに比べてマウスCD22に約１００倍強く反応し、双方ともマイクロモルオーダーで結合することが示されている（非特許文献３）。
本発明者らは、２位のガラクトシル基にp-メトキシフェニル基（MP）が挿入されたBPC-Neu5Gcα2-6GalOMPがBPC-Neu5Gc-Galよりも約５倍ヒトCD22に強く結合し、一方、BPA-Neu5Gcα2-6GalOMPがBPA-Neu5Gc-Galに比べて約４倍強くマウスCD22に結合することを示した（非特許文献４）。
Kelm et al. Eur. J. Biochem. 255: 663 (1998) Kelm et al. J. Exp. Med. 195: 1207 (2002) Collins et al. J Immunol. 177: 2994 (2006) Abdu-Allah et al. J.Med. Chem. 51: 6665 (2008)
　本発明が解決しようとする課題は、感染症の予防・治療等に有効に使用することができ、合成が容易で比較的簡単な構造であって、CD22分子に対して高親和性（高結合特性）を有する分子等を提供することである。
　本発明者は上記の課題が解決すべく研究の結果、シアル酸におけるC-2にベンジル基及びビフェニルメチル基のようなフェニル環を含む芳香族系の炭化水素基を導入することによって、得られた化合物がＢリンパ球に対する顕著な増殖促進作用及びウイルス感染抵抗性の増強作用等の免疫応答を促進させることを有することを見出し、本発明を完成した。
　即ち、本発明は主に以下の各態様に係るものである。
[態様１] CD22分子に対して高親和性を有するシアル酸誘導体、例えば、化学式（１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
（式中、Ｒ1及びＲ2は、夫々、置換基を有していてもよい芳香族炭化水素基を示す）で表わされるシアル酸誘導体若しくはそのプロドラッグ、又は、製薬上許容され得るそれらの塩若しくは水和物である化合物。
[態様２]上記化合物を有効成分として含有する、免疫応答を促進させる組成物。
[態様３]上記を有効成分として含有する医薬組成物、特に、感染症の治療若しくは予防、感染症の重症化抑制及び回復促進、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防の為の医薬組成物。
 [態様４]感染症の治療又は予防のために、感染症の重症化抑制及び回復促進のために、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防のために使用する、上記の化合物。
本発明により、Ｂ細胞のCD22分子に対する高親和性を有することによって初めて、Ｂ細胞の増殖の増強、及びウイルス性疾患等の感染症に対する抵抗性の増強等の免疫応答の促進作用を有する化合物を提供することが出来た。
　本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2009‐177776の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
本発明化合物の一例の合成手順の概略を示す。 発明化合物によるBリンパ球の増殖促進効果を示すフローサイトメトリーにより得られた結果を示す。蛍光色素であるCFSE量は細胞分裂とともに希釈されるための、分裂を繰り返した細胞は各グラフの左にシフトする。 マウスの体重変化を示す図である。 マウスの臨床スコア変化を示す図である。
本発明の化合物は、CD22分子に対する高親和性、例えば、ヒトCD22に対する結合特性（ＩＣ５０）が０．１３μM以下、好ましくは０．０８μM以下、又は、マウスCD22に対する結合特性（ＩＣ５０）が０．２μM以下、好ましくは０．１μM以下であるような高い親和性（高い結合特性）を有する。ここで、結合特性（ＩＣ５０）は、本明細書の実施例２に記載されるELISA系を用い、化合物：BPA-Neu5Gcα2-6GalOMPとのCD22分子に対する結合における競合アッセイにおいて測定された値である。
本発明化合物の例として、化学式（１）で示される化合物であるシアル酸誘導体のプロドラッグ（例えば、適当なエステル体）、又は製薬上許容されうるそれらの塩（例えば、適当なアルカリ金属塩）および水和物の構造は当業者に公知である。これら化合物において、Ｒ1及びＲ2は、夫々、置換基を有していてもよい芳香族炭化水素基を示す。
　ここで、置換基としては、CD22分子に対する高親和性が損なわれない限り、例えば、炭素数１～５程度を有するアルキル及びアルコキシ；アミノ;ヒドロキシ；ハロゲン；ニトロ　等の当業者に公知の任意のものから適宜選択し、適当な位置で置換することが可能である。
Ｒ1の好適例として、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－アセチル基、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－メチル基、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－メチルアミノ基、及び、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－アセチルアミノ基から成る群を挙げることができる。また、Ｒ2の好適例として、ベンジル基及びビフェニルメチル基のようなフェニル環を含む芳香族炭化水素基を挙げることができる。
本発明の化合物は当業者に公知の任意の方法で合成することが出来る。例えば、本発明化合物の一例である、３，５，９－トリデオキシ－５－グリコアミド－９－（４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル）アセトアミド－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクロ－２－ノヌロピラノシド酸ベンジル（８）及び３，５，９－トリデオキシ－５－グリコアミド－９－（４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル）アセトアミド－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクロ－２－ノヌロピラノシド酸４’－ビフェニルメチル（９）は図１に示されるような工程で合成することが出来る。
　即ち、ノイラミン酸を出発原料として非特許文献４記載の方法に従い７つの工程で化合物（２）を合成する。従来文献（Hanessian, S.; Guindon,
Y.J. Carbohydr. Res. 1980, 86,C3）に記載の方法に従って、ZnI2 及びBu4NIの存在下でPhSSiMe3によってベンジルエーテル保護基を開裂させて水素添加脱ベンジル化し、アルキルグリコシドを対応するチオグリコシドに直接に変換し、その後、アセチルすることによって化合物（３）を得る。アセトニトリル（-40℃）中、NIS/TfOH条件下でベンジルアルコール又はビフェニルメタノールで化合物（３）をグリコシル化し対応するシアロシド化合物（４）及び（５）を得る（α／β＝66/10）。αシアロシドを鹸化し、Me3Pでアジドを化学選択的に還元することによって９－アミノ誘導体である化合物（６）及び（７）を得る。４’－ヒドロシキビフェニル－４－酢酸のＮ－ヒドロキシサクシンアミドエステルで９－アミンをアシル化することによって目的化合物（８）及び（９）を得ることができる。
本発明化合物は、Ｂ細胞のCD22分子に対する上記のような高親和性を有していることによって初めて、免疫応答の促進作用を有意に奏功することができる。ここで、「Ｂ細胞」とは、通常、ＩｇＭ及びＩｇＤ陽性のナイーブＢ細胞（成熟Ｂ細胞）を意味するが、必ずしもこのタイプに限定されず、一般的に、Ｔ細胞依存性抗原に反応して活性化され抗体産生細胞に分化するような能力を潜在的に有するＢ細胞を含むものである。更に、本発明方法において、Ｂ細胞等の各種細胞及びＣＤ２２（遺伝子）は、マウス及びヒト等の哺乳類を含む当業者に公知の任意の動物細胞由来のものが含まれる。
　本明細書において、「免疫応答の促進作用」とは、当業者に公知の任意の反応、例えば、特に免疫応答初期における、Ｂ細胞の増殖及び生存の亢進、抗原刺激によるＢ細胞の増殖、分裂及び／又は生存の亢進、並びに、ウイルス性疾患等の感染症に対する抵抗性の増強等の多様な態様が含まれる。
　ここで、「免疫応答初期」とは、免疫原となった抗原の種類、免疫応答の促進作用における態様の相違等によって１～２日程度は変動するが、通常、免疫（抗原による感作・刺激）後の数日間、例えば、免疫後３～５日を意味する。
　従って、本発明は、本発明記化合物を有効成分として含有する、医薬組成物、特に、感染症の治療若しくは予防、感染症の重症化抑制及び回復促進、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防の為の医薬組成物にも係る。
　或いは、本発明は、免疫応答を促進させること等によって、感染症の治療又は予防のため、感染症の重症化抑制及び回復促進のために、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防のために使用する、上記の化合物にも係る。また、本発明は、免疫応答を促進させるために使用する、上記の化合物にも係る。
感染症としては、例えば、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、肝炎Ａ、ＢまたはＣウイルス、パピローマウイルス、サイトメガロウイルス、フラビウイルス、ライノウイルス、麻疹、風疹、パルボウイルス、エプスタイン－バールウイルス、エンテロウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱ウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ハンターンウイルス（出血熱）、アルファウイルス、及び、レトロウイルスから成る群から選択されるウイルス性疾患、並びに、菌血症、敗血症、真菌感染、マラリア感染又はトリパノソーマ感染等の寄生虫感染、マイコバクテリア感染、グラム陽性細菌感染、及び、グラム陰性細菌感染等を挙げることができる。
　従って、本発明の組成物は当業者に公知の任意の製剤学的方法により製造することが可能である。例えば、薬理学上許容される担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、徐放剤などと適宜組み合わせて製剤化して投与することが考えられる。本発明の医薬組成物は、水溶液、錠剤、カプセル、トローチ、バッカル錠、エリキシル、懸濁液、シロップ、点鼻液、または吸入液などの形態であり得る。本発明化合物の含有率は、治療目的、投与経路、治療対象等に応じて、当業者が適宜決定することが出来る。例えば、一例として、０．１～１０．０ｍｇの濃度範囲とすることができよう。
　患者への投与は、有効成分の性質に応じて、例えば、経皮的、鼻腔内的、経気管支的、筋内的、腹腔内、静脈内、脊髄腔内、脳室内、または経口的に行なうことができる。当業者であれば、患者の年齢、体重、症状、投与方法等に応じて、適宜適当な投与量を選択することが可能である。投与量、投与方法は、本発明の医薬組成物の有効成分の組織移行性、治療目的、患者の体重や年齢、症状等に応じて、当業者であれば適宜選択することが可能である。例えば、１日当たり、１～５回の投与とすることができる。患者は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等の哺乳動物であり得る。
従って、本発明は、上記のような態様によって、上記化合物又は医薬組成物を患者に投与することを含む、感染症の治療又は予防法、感染症の重症化抑制及び回復促進法、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防法にも係る。また、本発明は、上記のような態様によって、上記化合物又は医薬組成物を患者に投与することを含む、免疫応答の促進方法にも係る。
　以下、実施例に則して本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの記載によって何等制限されるものではない。
　以下の工程で本願発明化合物を製造した。
メチル（フェニル　５－アセトキシアセトアミド－４，７，８－トリ－Ｏ－アセチル－９－アジド－３，５，９－トリデオキシ－２－チオ－Ｄ－グリセロ－β－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロイラノシド）オエート　（３）
　無水ZnI2 （3.20 g, 10 mmol, 5 equiv.）及びBu4NI（1.10 g, 3 mmol, 1.5 equiv.）の混合物に1,2-ジクロロエタン（40 ml）中の化合物（２）（1.34 g, 2 mmol）を添加し、更にフェニルチオトリメチルスシラン（PhSSiMe3）（3.35 mL, 20 mmol, 10 equiv.）を加えた。この混合物をTLC分析（MeOH-CHCl3, 10%）において出発物質が検出されなくなるまで、６０℃にて８時間攪拌した。反応混合物を冷却し、DCMで希釈し、水で洗浄して乾燥させた。こうして溶媒を除去して得られた粗生成物をアセチル化（無水酢酸/ピリジン　１：１, 8 mL）し、カラムクロマトグラフィ（MeOH-CHCl3, 1%）で精製して化合物（３）を得た（1.08 g, 87%）。得られた化合物の各種物性値を以下に示す。
1H NMR (CDCl3): δ 7.45-7.37 (m, 5 H, Ar-H), 6.10 (d, J = 10.5 Hz, 1 H, NH), 5.43 (m, 1 H, H4), 5.40 (d, J = 2.3, 1 H, H7), 4.78 (m, 1 H, H8), 4.65 (dd, J = 2.3, 10.5 Hz, 1 H, H6), 4.60 (d, J = 15.1, 1 H, OCH 2CO), 4.29 (d, J = 15.1, 1 H, OCH 2CO), 4.15 (q, J = 10.1 Hz, 1 H, H5), 3.67-3.63 (m, 4 H, OCH3, H9a), 3.32 (dd, J = 9.2, 13.3 Hz, 1 H, H9b), 2.69 (dd, J = 5.0, 13.7 Hz , 1 H, H3eq), 2.22-2.00 (m, 13 H, 4 OAc, H3ax). 13C NMR (CDCl3): δ 171.1, 170.2, 169.6, 168.0, 136.0, 135.9, 130.2, 129.7, 129.4, 128.3, 89.3, 75.4, 74.5, 68.9, 68.2, 62.7, 52.7, 49.8, 48.4, 37.7, 21.0, 20.9;MALDI-TOF MS calcd for C26H32N4O12SNa
(M + Na)+, 647.16; found 647.14.
メチル（フェニル　５－アセトキシアセトアミド－４，７，８－トリ－Ｏ－アセチル－９－アジド－３，５，９－トリデオキシ－２－チオ－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロイラノシド）オエート　（４）
　上記化合物（３）（250 mg, 0.4 mmol, 10. equiv.）及びベンジルアルコール（65 mg, 0.6 mmol）のMeCN（10 mL）溶液中に活性化粉末状分子篩（3Å）を添加した。混合物を室温、アルゴン雰囲気下で５時間攪拌した後、-40℃まで冷却した。NIS（270 mg）及びTfOH（12 μL）を添加した後、３０時間攪拌した。得られた混合物をクロロホルムで希釈し、セライト板を通して濾過した。ろ液を併せて水溶性Na2S2O3, NaHO3,及び H2Oで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、減圧下でろ過した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（トルエン/AcOEt 2:1）で精製し、４α－シラノシド（166 mg, 66.6%）、及び４β－シラノシド（29.9 mg, 12%）を得た。得られた化合物（４α－シラノシド）の各種物性値を以下に示す。
1H NMR (600 MHz, CDCl3): δ7.36-7.28 (m, 5H, ArH), 6.00 (d, J = 10.5 Hz, 1 H, NH), 5.38 (m, 1H, H-8), 5.30 (dd, J = 2.1, 8.5 Hz, 1H, H-7), 4.93 (m, 1H, H-4), 4.81 (d, J = 11.6 Hz, 1H, CH 2Ph), 4.59 (d, J = 15.1 Hz, 1H, OCH 2CO), 4.46 (d, J = 11.6 Hz, 1H, CH 2Ph), 4.30 (d, J = 15.1 Hz, 1H, OCH 2CO), 4.20-4.10 (m, 2 H, H5, H6), 3.71 (s, 3 H, OCH3), 3.60 (brd, J = 13.0 Hz, 1 H, H9a), 3.27 (dd, J = 6.2, 13.0 Hz, 1H, H-9b), 2.68 (dd, J = 4.8, 12.4 Hz , 1 H, H3eq), 2.20-2.16 (m, 9 H, 3 OAc), 2.06-1.99 (m, 4H,OAc, H3ax);13C NMR (CDCl3): δ 171.1, 170.3, 170.2, 169.7, 168.4, 167.7, 137.0, 128.3, 127.8, 127.7, 98.7, 72.9, 71.4, 70.2, 68.2, 68.1, 66.8, 62.7, 52.8, 52.7, 50.8, 49.3, 38.1, 21.1, 21.0, 20.9, 20.8, 20.7, 20.6;MALDI-TOF MS calcd for C27H34N4O13Na
(M + Na)+, 645.20; found 645.18.  .
メチル（４’－ビフェニルメチル　５－アセトキシアセトアミド－４，７，８－トリ－Ｏ－アセチル－９－アジド－３，５，９－トリデオキシ－２－チオ－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロイラノシド）オエート　（５α）
　上記化合物（３）（320 mg, 0.51 mmol）及びビフェニルメタノール（142 mg, 0.76 mmol）のMeCN（18 mL）溶液中に活性化粉末状分子篩（3Å）を添加した。混合物を室温、アルゴン雰囲気下で５時間攪拌した後、-40℃まで冷却した。NIS（345 mg1.54 mmol）及びTfOH（18 μL, 0.5 mmol）を添加した後、３０時間攪拌した。得られた混合物をクロロホルムで希釈し、セライト板を通して濾過した。ろ液を併せて水溶性Na2S2O3, NaHO3,及び H2Oで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、減圧下でろ過した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（トルエン/AcOEt 2:1）で精製し、５α－シラノシド（237 mg, 66%）、及び５β－シラノシド（36 mg, 10%）を得た。得られた化合物（５α－シラノシド）の各種物性値を以下に示す。
1H NMR (600 MHz, CDCl3): δ 7.59-7.56 (m, 4H, ArH), 7.43-7.27 (m, 5H, ArH), 6.13 (d, J = 9.6 Hz, 1 H, NH), 5.39 (m, 1H, H-8), 5.33 (dd, J = 1.8, 7.3 Hz, 1H, H-7), 4.95 (m, 1H, H-4), 4.85 (d, J = 11.9 Hz, 1H, CH 2Ph), 4.60 (d, J = 15.6 Hz, 1H, OCH 2CO), 4.51 (d, J = 11.9 Hz, 1H, CH 2Ph), 4.32 (d, J = 15.1 Hz, 1H, OCH 2CO), 4.25-4.17 (m, 2 H, H5, H6), 3.73 (s, 3 H, OCH3), 3.63 (dd, J = 6.4, 13.7 Hz, 1 H, H9a), 3.31 (dd, J = 6.4, 13.0 Hz, 1H, H-9b), 2.71 (dd, J = 4.6, 12.8 Hz , 1 H, H3eq), 2.21-2.03 (m, 13 H, 4 OAc, H3ax); MALDI-TOF MS calcd for C33H38N4O13Na (M + Na)+, 721.23; found 721.21.
ベンジル　９－アミノ－３，５，９－トリデオキシ－５－グルコールアミド－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロイラノシドン酸　（６）
 化合物（４）又は（５）（0.3 mmol）のエタノール溶液（5 mL）に水（2 mL）中のLiOH/H2O（75 mg, 1.8 mmol, 6 equiv.）を添加し、室温で８時間攪拌した後、反応混合物を酸性（Dowex 50, H+）で処理し、得られた懸濁液を濾過した。ろ液を真空下で濃縮した。トリメチルホスフィン（1 M in THF, 1.5 mL, 1.6 mmol）を攪拌しているアジドのMeOH-水（15:1, 20mL）溶液中に添加した。これらの混合物を室温で１６時間攪拌し、溶媒を真空下で除去して、化合物（６）を得た。溶媒系（酢酸エチル/メタノール/水/酢酸10:3:3:1）を用いてこの反応をフォローアップし、これを直ちにアミド化に使用した。
４’－ビフェニルメチル　９－アミノ－３，５，９－トリデオキシ－５－グルコールアミド－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロイラノシドン酸　（７）
化合物（５）（0.3 mmol）のエタノール溶液（5 mL）に水（2 mL）中のLiOH/H2O（75 mg, 1.8 mmol, 6 equiv.）を添加し、室温で８時間攪拌した後、反応混合物を酸性（Dowex 50, H+）で処理し、得られた懸濁液を濾過した。ろ液を真空下で濃縮した。トリメチルホスフィン（1 M in THF, 1.5 mL, 1.6 mmol）を攪拌しているアジドのMeOH-水（15:1, 20mL）溶液中に添加した。これらの混合物を室温で１６時間攪拌し、溶媒を真空下で除去した。得られた残渣を水に溶解させ、シリカ逆相カラムに載せた。化合物をメタノール－水（0:1 - 10:100）の勾配で溶出させ、水から凍結乾燥して白色綿毛状固体である化合物（７）を得た（129 mg, 84%）。得られた化合物（７）の各種物性値を以下に示す。
1H NMR (600 MHz, D2O with a few drops of CD3OD): δ 7.58-7.29 (m, 9H, ArH), 4.57 (d, J = 11.7 Hz,1 H, glycosidic CH2, the 2ed proton is overlapped with signal of H2O), 4.14-4.11 (m, 1 H, H8), 4.07 (br. s, 2 H, OCH 2CO), 3.90 (m, 1 H, H4), 3.80-3.76 (m, 2 H, H5, H6), 3.59 (d, J = 7.0 Hz, 1 H, H7), 3.45 (br. d, J = 9.0 Hz,1 H, H9a), 2.96-2.89 (m, 2 H, H9b, H3eq), 1.70 (t, J = 12.0 Hz, 1 H, H3ax); MALDI-TOF MS calcd for C24H31N2O9 (M + H)+, 491.20; found 491.31.
ベンジル　３，５，９－トリデオキシ－５－グルコールアミド－９－（４’－ヒドロシキ－４－ビフェニル）アセトアミド－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクト－２－ノヌロイラノシドン酸　（８）
飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを8.0-9.0に維持しながら、上記アミン化合物（６）又は（７）（0.12 mmol）の水溶液（1.5 mL）に４’－ヒドロシキビフェニル－４－酢酸（57.8 mg, 0.16 mmol）のＮ－ヒドロキシサクシンアミドエステルのアセトニトリル溶液（15 mL）を添加した。得られた混合物を室温で４８時間攪拌した。溶媒を蒸発絵させ、水に溶解させ、予め水で平衡化したシリカ逆相カラムに載せた。化合物をメタノール－水(0:１‐40:100)の勾配で溶出させ、水から凍結乾燥して白色綿毛状固体である化合物（８）を得た（75%）。溶媒系（酢酸エチル/メタノール/水/酢酸10:3:3:1）を用いてこの反応をフォローアップした。得られた化合物（８）の各種物性値を以下に示す。
1H NMR (CD3OD): δ 7.45-7.20 (m, 11 H, Ar-H), 6.82-6.80 (m, 2 H, Ar-H), 4.79 (d, J = 11.0 Hz, 1 H, glycosidic CH 2), 4.51 (d, J = 11.0 Hz, 1 H, glycosidic CH 2), 4.03 (s, 2 H, glycolyl CH 2CO), 3.96-3.93 (m, 1 H, H8b), 3.83-3.68 (m, 4 H, H4, H5, H6, H7), 3.55 (br. s, 2 H, biphCH 2CONH), 3.37 (br. d, J = 9.6 Hz, 1 H, H9a), 3.20 (dd, J = 9.6, 13.7 Hz, 1 H,
H9b), 2.90 (dd, J = 4.8, 12.4 Hz,1 H, H3eq), 1.65 (t, J = 12.4 Hz, 1 H, H3ax). 13C NMR (CD3OD): δ 177.2, 174.9, 174.3, 169.7, 158.12, 150.5, 141.0, 139.8, 135.1, 133.4, 130.5, 129.2, 129.1, 128.9, 128.3, 127.5, 116.7, 116.6, 114.1, 102.1, 74.0, 72.3, 71.3, 69.5, 67.4, 62.6, 61.4, 44.0, 43.4, 42.7, 26.3. MALDI-TOF MS calcd for C32H36N2O11Na (M + Na)+, 647.22; found 647.21.  
1H NMR (CD3OD): δ 7.57-7.29 (m, 15 H, Ar-H), 6.80 (m, 2 H, Ar-H), 4.80 (d, J = 11.7 Hz, 1 H, glycosidic CH 2), 4.56 (d, J = 11.7 Hz, 1 H, glycosidic CH 2), 4.03 (br. s, 2 H, glycolyl CH 2CO), 3.97-3.94 (m, 1 H, H8b), 3.84-3.70 (m, 4 H, H4, H5, H6, H7), 3.56 (br. d, J = 7.6 Hz, 2 H, biphCH 2CONH), 3.38 (br. d, J = 8.5 Hz, 1 H, H9a), 3.20 (dd, J = 8.5, 13.0 Hz, 1 H, H9b), 2.92 (dd, J = 4.8, 12.4 Hz,1 H, H3eq), 1.68 (t, J = 12.4 Hz, 1 H, H3ax). MALDI-TOF MS calcd for C38H40N2O11Na (M + Na)+, 723.25; found 723.25.
　本発明化合物のヒトCD22又はマウスCD22に対する親和性をELISAにより以下の要領で測定した。
　ELISAプレート（グライナー社）に、pH8.5の炭酸バッファーに40μg/mLで溶解したストレプトアビジンを加え、４℃で終夜固相化した。次いで、ビオチン化CD22リガンドBPA-Neu5Gcα2-6GalOMP (GSC731)を生理食塩水（PBS）で4μg/mLに溶解したものを加え、さらに１時間反応させた。反応後のウェルは、0.5%ウシ血清アルブミンを含むPBSをウェルに満たし３時間おくことにより、非特異的反応を防いだ。このようにしてCD22リガンドを固相化したウェルに、本発明化合物および１μgのヒトまたはマウスCD22Fcタンパク質を加え、１時間反応させた。ウェルを0.05％のTween20を含むPBSで洗浄後、アルカリホスファターゼ標識抗Fc抗体（Southern biotech）を加え、さらに１時間反応させ、0.1M 塩化ナトリウム、5mM 塩化マグネシウムを含むpH9.5のトリス緩衝液に溶解したホスファターゼ基質（Sigma）を加え、405nmの吸光度を測定した。
　その結果、以下の表１に示されるように、実施例１で合成した本発明の化合物（８）(GSC-718)がマウスCD22に非特許文献４記載の化合物８p（実施例１における化合物（１））に比べて約４０倍、実施例１で合成した本発明の化合物（９）(GSC-720)が非特許文献４記載の化合物9gに比べてヒトCD22に約７倍強く結合することが確認された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
CD22欠損Bリンパ球は、抗CD40抗体によるB細胞の増殖が亢進している。従って、発明化合物のＢ細胞のCD22分子機能を抑制的に制御することによるBリンパ球の増殖促進効果に関して検討すべく、常法に従いマウス脾臓から精製したBリンパ球を2 μMのCFSE（モレキュラープローブ社）と呼ばれる蛍光色素でラベルしたのち、10 μg/mLの抗CD40抗体（Alexis社FGK45）と実施例１で製造した化合物（８）とともに10%ウシ胎児血清、抗生物質を添加したRPMI培地（Wako）に500,000cells/mLとなるように懸濁し、CO2インキュベーター内で37度、７２時間培養した後に細胞を回収して、フローサイトメトリーを用いて当業者に公知の方法で細胞あたりのCFSE量を測定した。その結果を図２に示す。
　得られた結果から、CD22のリガンドであるBPA-Neu5Gcα2-6GalβSEを加えても増殖に変化はないが、本発明化合物（８）GSC718を添加することによってBリンパ球の増殖が顕著に亢進したことが確認された。これまでに、CD22結合化合物で、B細胞のシグナル伝達を制御したという報告（非特許文献２）はあるが、Bリンパ球の増殖を制御したという報告はなく、非特許文献４の化合物8p（BPA-Neu5Gcα2-6GalOMP）ではほとんど増殖促進効果はなかった。これらの事実から、GSC-718のようなCD22に極めて強く結合する化合物によりはじめてBリンパ球の増殖の促進・亢進が可能になったものと考えられる。
インフルエンザウイルスＡ／ＨＫ－ｘ３１（Ｈ３Ｎ2）株を、Ｃ５７／Ｂ６マウス（雌、約８週齢）に経鼻感染させた後、４週間御にインフルエンザウイルスＡ／ＰＲ８／３４（ＰＲ８株、Ｈ１Ｎ１）株を経鼻感染させた。ＰＲ８株を感染させた当日、感染３日後、６日後の各日にマウス１匹あたり２００μｇの生理食塩水に懸濁した本発明の化合物（８）を腹腔内に投与した（化合物投与群）。対照群には、化合物を含まない生理食塩水を同量腹腔内に投与した（ＰＢＳ投与群）。マウスは各群につき７匹であり、これらマウスの体重増減（図３）及び臨床スコア（図４）を評価した。臨床スコアは、０（普通）、１（やや毛並みに異常あり）、２（明らかに毛並みに異常があるが活発）、３（明らかに毛並みに異常がありかつ緩慢）、４（明らかに毛並みに異常がありかつ緩慢であり猫背）、５（死亡）の５段階で評価した。
これらの結果から明らかなように、本発明化合物投与群は、ＰＢＳ対照群に比べて体重減少および臨床スコアのいずれも明らかに抑制された。また、化合物投与群は、ＰＢＳ対照群に比べて体重および臨床スコアの回復が明らかに早まった。上記の結果から、本発明化合物がインフルエンザウイルスへの感染抵抗性を増強する作用があり、ウイルス感染症の治療又は予防に対する効果、更には、感染症の重症化抑制及び回復促進作用、並びに、感染症により引き起こされる合併症の予防を有する効果ことが明らかにされた。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
本発明化合物は免疫応答を早期化するものであり、このようなウイルス感染症以外の他の種々の感染症にも同様の効果があると考えられる。マラリアなどの抗原性が変化し、免疫応答から逃れる病原微生物も抗体応答が早くなることで抗原性が変化する前に免疫応答により微生物を排除できると考えられる。また、この化合物による感染抵抗増強法は微生物を単離する必要がないので、突然不明の微生物が出現する新興感染症にも有効である。

Claims (19)

  1. CD22分子に対して高親和性を有するシアル酸誘導体、若しくはそのプロドラッグ、又は製薬上許容され得るそれらの塩および水和物である、化合物。
  2. CD22分子に対して高親和性を有するシアル酸誘導体が、ヒトCD22に対する結合特性（ＩＣ５０）が０．１３μM以下、又は、マウスCD22に対する結合特性（ＩＣ５０）が０．２μM以下であることを特徴とするシアル酸誘導体である、請求項１記載の化合物。
  3. 化学式（１）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、Ｒ1及びＲ2は、夫々、置換基を有していてもよい芳香族炭化水素基を示す）で表わされるシアル酸誘導体若しくはそのプロドラッグ、又は、製薬上許容され得るそれらの塩若しくは水和物である、請求項１又は２記載の化合物。
  4. Ｒ1が４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－アセチル基、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－メチル基、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－メチルアミノ基、及び、４‘－ヒドロキシ－４－ビフェニル－アセチルアミノ基から成る群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
  5. Ｒ2がフェニル環を含む芳香族炭化水素基である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
  6. フェニル環を含む芳香族炭化水素基がベンジル基又はビフェニルメチル基である、請求項５記載の化合物。
  7. 請求項１～６のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する、免疫応答を促進させる組成物。
  8. 請求項１～６のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物。
  9. 感染症の治療若しくは予防、感染症の重症化抑制及び回復促進、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防の為の請求項６記載の医薬組成物。
  10. 感染症がウイルス性疾患によるものである請求項９記載の医薬組成物。
  11. ウイルスがインフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、肝炎Ａ、ＢまたはＣウイルス、パピローマウイルス、サイトメガロウイルス、フラビウイルス、ライノウイルス、麻疹、風疹、パルボウイルス、エプスタイン－バールウイルス、エンテロウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱ウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ハンターンウイルス（出血熱）、アルファウイルス、及び、レトロウイルスから成る群から選択される、請求項１０記載の医薬組成物。
  12. 感染症が、菌血症、敗血症、真菌感染、寄生虫感染、マイコバクテリア感染、グラム陽性細菌感染、及び、グラム陰性細菌感染から成る群から選択される、請求項１０記載の医薬組成物。
  13. 寄生虫感染がマラリア感染又はトリパノソーマ感染である、請求項１２記載の医薬組成物。
  14. 感染症の治療又は予防のために使用する、請求項１～６のいずれかに記載の化合物。
  15. 感染症の重症化抑制及び回復促進のために使用する、請求項１～６のいずれかに記載の化合物。
  16. 感染症により引き起こされる合併症の予防のために使用する、請求項１～６のいずれかに記載の化合物。
  17. 免疫応答の促進のために使用する、請求項１～６のいずれかに記載の化合物。
  18. 請求項１～６のいずれかに記載の化合物の有効量を患者に投与することを含む、感染症の治療若しくは予防、感染症の重症化抑制及び回復促進、又は、感染症により引き起こされる合併症の予防方法。
  19. 請求項１～６のいずれかに記載の化合物の有効量を患者に投与することを含む、免疫応答の促進方法。
PCT/JP2010/054406 2009-07-30 2010-03-16 Cd22分子に対する高親和性を有しｂ細胞の増殖を増強する化合物 WO2011013398A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2009177776A JP2011032180A (ja) 2009-07-30 2009-07-30 Ｃｄ２２分子に対する高親和性を有しｂ細胞の増殖を増強する化合物
JP2009-177776 2009-07-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2011013398A1 true WO2011013398A1 (ja) 2011-02-03

Family

ID=43529065

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2010/054406 WO2011013398A1 (ja) 2009-07-30 2010-03-16 Cd22分子に対する高親和性を有しｂ細胞の増殖を増強する化合物

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP2011032180A (ja)
WO (1) WO2011013398A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2610263A1 (de) * 2011-12-30 2013-07-03 Brossmer, Reinhard Sialinsäure-Dimere
CN116440068B (zh) * 2023-05-17 2023-10-17 江苏亨瑞生物医药科技有限公司 一种防治hpv感染及菌群失调的阴道凝胶及其制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABDU-ALLAH, H.H.M. ET AL.: "Design, synthesis, and structure-affinity relationships of novel series of sialosides as CD22-specific inhibitors", J. MED. CHEM., vol. 51, 2008, pages 6665 - 6681 *
ABDU-ALLAH, H.H.M. ET AL.: "Exploring structure- affinity relationships of CD22- inhibitors", CREST KOKUSAI SYMPOSIUM 'KAKUTOKU MEN'EKI TO TOSA SEIBUTSUGAKU' YOKOSHU, CHIBA- KEN KISARAZU-SHI, pages 22 *
ABDU-ALLAH, H.H.M. ET AL.: "Synthesis ob biotinylated sialoside to probe CD22-ligand interactions", TETRAHEDRON LETT., vol. 50, 22 May 2009 (2009-05-22), pages 4488 - 4491, XP026193551, DOI: doi:10.1016/j.tetlet.2009.05.044 *
COLLINS, B.E. ET AL.: "High-affinity ligand probes of CD22 overcome the threshold set by cis ligands to allow for binding, endocytosis, and killing of B cells", J. IMMUNOLOGY, vol. 177, 2006, pages 2994 - 3003, XP003013261 *
KELM, S. ET AL.: "The ligand-binding domain of CD22 is needed for inhibition of the B cell receptor signal, as demonstrated by a novel human CD22-specific inhibitor compound", J. EXP. MED., vol. 195, 2002, pages 1207 - 1213, XP055111898, DOI: doi:10.1084/jem.20011783 *
ROSSENBERG, S.M.W. ET AL.: "A structure-function study of ligand recognition by CD22beta", J. BIOL. CHEM., vol. 276, 2001, pages 12967 - 12973, XP055205982, DOI: doi:10.1074/jbc.M009276200 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2011032180A (ja) 2011-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3773153B2 (ja) シアル酸誘導体
US7820714B2 (en) Siglec inhibitors
WO2005116036A1 (en) Curcumol derivatives, the compositions comprising the same and the use of the same in the manufacture of medicament
CS205027B2 (en) Method of producing glucosamine derivatives
US20230248754A1 (en) Patentiflorin A Analogs as Antiviral Agents
CN1035117A (zh) 2′，3′-二脱氧-2′，2′-二氟核苷的制备方法
CN113929724A (zh) 一种核苷类化合物及其药物组合物和用途
CZ419797A3 (cs) Diglykosylované 1,2-dioly, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek, který je obsahuje
JP6295202B2 (ja) 感染性疾患の予防および治療のために有用なマンノシル化された化合物
US4868155A (en) Dipeptidyl 4-0-,6-0-acyl-2-amino-2-deoxy-D-glucose compositions and methods of use in AIDS-immunocompromised human hosts
WO2011013398A1 (ja) Cd22分子に対する高親和性を有しｂ細胞の増殖を増強する化合物
JP5680535B2 (ja) 新規フラバノン誘導体
EP2581380B1 (en) SIALIC ACID (alpha-(2-6))-D-AMINOPYRANOSE DERIVATIVES, SYNTHESIS METHODS AND USES THEREOF
US4868157A (en) Dipeptidyl 2-amino-1,2-dideoxy-D-glucose derivatives as host resistance enhancers in AIDS-immunocompromised hosts and methods of use
US11413299B2 (en) Compositions and methods for treatment of inflammatory disorders
US4866035A (en) Dipeptidyl saccharides as host resistance enhancers in AIDS-immuno-compromised hosts and methods of use
JP2001131074A (ja) シアル酸誘導体を有効成分として含む医薬
JP2022529855A (ja) グリセロ－マンノ－ヘプトースホスフェートの誘導体および免疫応答をモジュレートする際のそれらの使用
US4866036A (en) Dipeptidyl 5-0,6-0-acyl-2-amino-2-deoxy-D-glucofuranose compositions and methods of use in aids-immunocompromised human hosts
JP4413427B2 (ja) ヌクレオシド
JP5788653B2 (ja) 糖鎖修飾ヌクレオチド及びその使用
JPS63179885A (ja) 新規なグリコピラノース誘導体
JPS59199693A (ja) インドリルグリシルセフアロスポリン誘導体
JP2019052105A (ja) オレアノール酸誘導体
US20240076299A1 (en) Tuberculatin analogs as antiviral agents

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10804147

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 10804147

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1