WO2011003269A1

WO2011003269A1 - 低酰基结冷胶的后提取方法

Info

Publication number: WO2011003269A1
Application number: PCT/CN2010/000782
Authority: WO
Inventors: 杨宝毅; 吴炳华; 许怀远; 朱正学; 沈煜斌; 王雪刚; 杨利强; 王佳良; 江文慧; 包圣强; 盛小林; 沈孝琴
Original assignee: 浙江帝斯曼中肯生物科技有限公司
Priority date: 2009-07-09
Filing date: 2010-06-02
Publication date: 2011-01-13
Also published as: JP2012532235A; US20110281307A1; EP2436699A4; EP2436699A1; EP2436699B1; US8609377B2; JP5770725B2

Description

低 β结冷胶的后提取方法领域

本发明涉及微生物提取领域，特别氏酰基结冷胶的后提取方法。

背景¾^

结冷胶可以说是目前性能最为优异的增稠剂、稳定剂之一，并具有优良的凝寺性。结冷胶凝胶易于使用、有良好的风味释放性、较高的热稳定性、在口中易融化、透明度高、赚的时间及可调控、纖不易受 ρΗ影响、产品稳定、具有多样的腐勾特性等。

结冷胶是一种从自然界中 M 泛筛选分离的细菌一少动糊旨单胞菌

(Sphingomomspaucimobilis 发酵生产而来的亲水†«体，具有多种有用的特性。

结冷胶的分子基本结构是一条主链，由重复的四糖单元构成，结冷胶分子的基本结构是一条主链，由重复的四糖单元构成。参与形成的单糖有! 葡萄糖、 1 葡萄糖 β、 1 葡萄糖及 L-鼠李糖。在这种多糖的天然形式中，每单位约有 1.5个 0— 团，其中每单位有 1个 0—甘油酰取代基，每隔一个单位有 1个 0—乙酰取代基。甘油酰基位于 3—连接成键的葡纏 ¾¾的 2位，乙麵则在 6 ^_h。瞧很容易被麵除，从而由天然形式的结冷胶得到脱酰基形式的产品，与此相对，天然形式的结冷胶也可称为高酰基产品。

高酰基结冷胶含有 11~13%的甘油酰基及 5%的乙酰基，总体酰基含量在 15~18% 之间（龍百分比)；低瞧的结冷胶有少于 1%含量的甘油藝及少于 1%含量的乙 β' 总体 ¾含量 ¾2%以下。 «基团对凝胶的性质有很显著的影响，高酰基型可以产生柔软、富有弹性和不具有脆性的靈，而低隱结冷胶产生的实、不具有弹性，但是很脆的繊。 - 低瞧结冷胶 @前广泛用 4k和组织培养鶴领域，但针对低隨结冷胶生产工艺尤其是用于上述领域的低酰基结冷胶生产工艺的详细报道并不多见。

低酰^ ^清型的结冷胶产品中含有部分蛋白质，含量在 17%左右（重量百分比)，因此不透明，而低酰基清型的结冷胶产品采用过滤工艺，除去了大部分不溶性物质，因此形成的凝胶澄清透明，具有极高的透光度。由于低酰基清型结冷胶在食品工业等领域上的应用更常见，所以在许多普通场合下，结冷胶即指低酰基清型的产品。

目前低酰基清型结冷胶生产工艺不足之处在于彻底祛除胶体中的蛋白比较困难，产品的透«受到一定的影响，一般只 80%以上；同时出来的低«¾型结冷胶中含有部分二价金属阳离子，使得结冷胶产品溶解困难、形成的凝« ^发白，影响产品的质量。同时传统低酰基结冷胶生产工艺中发絮凝阶段使用二价或多价碱金属盐絮凝还处于高酰 «态下的结冷胶产品，而高酰基结冷胶对二价或多价碱金属盐的敏感程度远小于低酰基结冷胶，因此絮凝的效率不高，产品产率受到影响。

目前，组织培养基中的赚剂一般都删琼脂。但是，琼脂中的杂质以及阻碍因素 (包括硫元素）会影响植物组织的生长，因此低薩清型结冷胶产品是一种很有前途的琼脂替品。因为结冷胶嫉很高，而且¾¾：瞧生产，相对于从海藻中提取的琼脂来说，产品品质要更加稳定。结冷胶配成溶液后凝胶时间相对琼脂要短，这样能节省时间；同时，结冷! ¾高温状态下非常稳定，腿合嗜热微生物的赚。在某些植物组织的培 «中发现，删了结冷胶的培养基可以加藤织的生长。另外，结冷胶的使用量只是琼脂的 1/3，同时还可以抗霉菌的污染，在移植过程中很容易清洗。另外，由于结冷胶形成的凝胶具有极高的透光度，使用结冷胶还可以方便的观察到根系以及组织生长的情况。因此，低酰基结冷胶在组织培养基中同样具有广阔的应用前景。

目前， IDlk生产的食品级低醒结冷胶虽然可以用在组织培养基产品中，但相对于美国斯比凯可公司 GELZAN™CM型号结冷胶和 Sigma公司的 Phytagel号型结冷胶，国产食品级结冷胶在培养基中的应用还存在很多问题，具体表现如下：

1. 食品级低酰基结冷胶溶解性能比较差，分散性不好，容易抱团，水合温度需在 80°C以上。而国夕卜的培养基型号结冷胶分散性好，水合在60°(左右。

2. 一般食品级结冷胶在具体使用过程中需要严格遵守先溶解胶体再加入金属离子的)顿序，如果将结冷胶粉末和金属盐混合后再溶解则会导致溶網常困难同时产生大量乳白色絮状物。而国外培养基型号的结冷胶则不存在这种问题。

3. 一般食品级结冷胶强度在 900 ^cm²以上，而国外培养基型号结冷胶强度在 40(K600 g/cm²之间；同时一般食品级结冷胶透光度在 85%左右，而国外培养基型号结冷顧舰大于 90%。

发明内容

鉴于上面所述有氏酰基结冷胶生产工艺方面存在的各种不足之处，本发明的目的在于提供新的生产低酰基结冷胶的方法，进一步的目的是一种新的生产低酰基清型结冷胶以及一种新的肖用于组织培养基的低纏清型结冷胶的方法。

本发明涉及的低酰基清型结冷胶提取方法都包括结冷胶发酵液的脱酰基处理、酶处理、二价或多价金属阳离子絮凝低酰态结冷胶、结冷胶溶液澄清处理、结冷胶溶液脱水处理、祛除二价或多价阳离子并脱色以及干燥粉碎的步骤，作为优选，还可以在干燥粉碎步骤前配入适当质量的螯合齐«体系以螯合在结冷胶使用过程中可能额外加入的二价阳离子同时保持 pH值的相对稳定。其具体步骤为：

( 1 ) 发赚的脱赚处理将发赚升至 80^0°C，力口入抗氧化剂，同时加入碱调节 ρΗ «έ«_;

(2) 发酵液的酶处理；

在步骤（1 ) 发麵中加入不同酶制剂，以尽可育哋除去发赚中不溶性的杂质和菌体碎片；更具体地为，加入一种酶制剂保温酶解后，再加入另一种酶保温酶解，依此类推；

(3) 发 β的絮凝；

在步骤 (2)酶处理后的发赚中，加入水溶性属絮凝，再调节 ρΗ翻碱性，固液分离，以除去发酵液中大部分水以及色素，得到浓缩的结冷胶粗品；

(4) 结冷胶澄清处理

将步骤 (3)得到的结冷胶粗品通 3±澄清处理，得到澄清的低 «结冷胶溶液；

(5) 脱醒结冷胶溶藝处理

在步骤（4)得到的结冷胶脱睡澄清溶液中， iiil加入 ¾ ^属离子形成謙，压榨 »;

(6)祛除二价或多价阳离子及脱色处理

将步骤 (5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， S3!离子 «工艺^ ¾ ^工艺将结冷胶中的二价阳离子或多价阳离子大部分祛除;稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 »、过滤以达到彻底脱色

(7)千燥粉碎；

将步骤 (6) 中获得的结冷胶固体物料干燥并粉碎，得到高透明度低酰基清型结冷胶产品。

作为优选，其中步骤 (6)与（7)之间还包括下述步骤：

(6') 当质量的^齐 I 体系在步骤 (6)得到的结冷胶中配入适当质量的螯合齐«体系以螯合在结冷胶使用过程中可能额外加入的二价阳离子同时保持 pH值的相对稳定，搅拌均匀。

更具体地为：

1.发赚脱腿处理

将发酵液 iSJS升至 85~90°C之间，在发酵液中加入适量抗氧化剂，同时加入碱，调节 pH值在 9.5~11范围之内， , 时间 1( 5 ，以脱除结冷的甘油 «及乙酰基。然后加入酸，调节 pH值至中性，降温 40Ό以下。

2.发瞧酶处理

依此向步骤 ( 1 )得到的发隱中分另咖入不同浓度已翻少量水溶解分散的的纤维素酶、藤酶及蛋白酶，分别维持不同时间。其中蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶。

3.发赚絮凝处理

将步骤（2)中的物料降温至 35Ό以下，加入二价或多价水溶性碱金属盐絮凝出低 «结冷胶，再加入碱调节 pH，謝离心躯搾法固液分离。

4.结冷胶澄清处理

将步骤（3 )中制得的物料，打散后用 1(^20倍量的去离子水溶解，加入酸回调 pH 涯中性，升温到 85 0。C,充分賺以顔完全溶解；删板框 ϊζΕ滤，高速离心或微孔滤膜过滤，将步骤 (3 )中得到的脱酰基结冷胶溶液澄清处理，澄清处理时的应该在 65 以上，以防止溶液形成凝胶，得到的澄清溶液透光度应在 92%以上。

5.脱藝结冷胶溶、励处理

向步骤 (4)得到的脱醒澄清结冷胶溶液中加 A S当质量的金属阳离子盐类，形成的凝压搾脱水，得到含水量 80%左右的低酰基清型结冷胶胶块或胶片。

6.祛除二价或多价阳离子及脱色处理将步骤 (5 )得到的含水量 80%左右的低酰基结冷胶切碎为小颗粒，投入到 3~5倍质量的加 Aig当一价属理的水中，浸泡并高¾»，以离子交换的方式将胶体由二价阳离子盐形式转化成为一价阳离子盐形式; ¾ ¾Λ到 3-5倍质量的加入适当螯合剂处理的水中，浸泡并高速搅拌，以祛除胶体中的大部分二价或多价阳离子。处理后的结冷胶溶狐搾，酸輕 2倍质量的低级隨液中，浸泡并高速賺，之后再过滤以 »lj彻底祛除色素的 ¾m。

7.干燥粉碎；

将步骤 (6)中制得的产物于 75~80°C下进行千燥，并粉碎，使其 95%腿80目筛网，得到的低薩清型结冷胶产品。

作为优选，其中步骤 (6)与（7)之间还包括下述步骤：

6'. SdAiS当质量的„ 体系

在步骤（6)得到的结冷胶中配入适当质量的螯合齐鍾体系以螯合在结冷胶使用过程中可能额外加入的二价阳离子同时保持 _PH值的相对稳定，此时结冷胶中的水份 « 在 80%左右，齐幡与结冷胶混合搅拌均匀。齐赚体系中，剂和酸可以先混合后加入，也可以依次加入。

本发明各步骤的具体工艺牛是：

步骤 1 中加入的抗氧化剂可以是但不只限于抗坏血酸、异 VC钠、焦亚硫隱、焦亚硫酸钾、硫酸氢钾、半胱氨酸中的一种或多种。加入的抗氧化剂浓度佳地为 100~300ppm, 更佳的的为 15( 250ppm (以发计）。

步骤 1 中加入的用于调整 pH的 β用但不只限于 NaOH， OH, N¾C0₃， K₂C0₃ 中的一种或多种，较佳的删 NaOH， KOH, 更佳的删 NaOH。

步骤 1中， « pH值调节到 9.5~11范围之内，更佳的 pH值为 10左右。步骤 1中，调整 pH的碱应先配成浓度为 10%的溶液。

步骤 1中，保持 85 0°C之间，更佳的保持在8 88°C之间。

步骤 1中，保持时间 1( 5 m, 更佳的 «时间在 10 左右。

步骤 1中，调整 pH的酸可以是无机酸，也可以是有机酸。其中无机酸包括但不限于盐酸、硫酸及磷酸中的一种或多种；有机酸可以是但不限于甲酸、醋酸、柠檬酸、苹果酸或酒石酸。实际生产中，较佳使用的酸为无机酸，更佳的为盐酸。酸的用量为能将发酵液体系 pH调节到 7左右。

步骤 1中，调整 pH的随先配雌度为 10%的溶液。

步骤 2中的酶解条件分别为：纤维素酶浓度较佳地为 50( 2000ppm，更佳的为 1000~1500ppm; 酶解时间较佳的为 4到 8小时，更佳的为 5到 6小时；酶^ ¾®较佳的为 40~50°C，更佳的为 43 5°C。溶菌酶浓度较佳的为 5(K500ppm，更佳的为 10( 200ppm_; 酶解时间较佳的为 2到 4小时，更佳的为 2.5到 3.5小时；酶较佳的为 3( 0°C，更佳的为 35〜37°C。蛋白酶浓度较佳为 100~1000ppm，更佳的为 300~500ppm (以发謹计)；酶解时间较佳的为 1到 5小时，更佳的为 2到 3小时；酶 «¾较佳的为 3(M0'C，更佳的为 3( 35°C。其中蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶。

步骤 3中所用的水溶性属盐包括但不只限于：镁、钙、钡、锌、招的水溶' 麟且合。

步骤 3中所用的水溶性碱属加入量较佳地占发量的 0.1% .5%，更佳地占 0.3%~0.4

步骤 3中所用的碱包括但不只限于： KOH、 NaOH、 Na₂C0₃、 NaHC0₃, Ν&3Ρ0₄中的一种或多种。

步骤 3 中使用的固液分离的设备可以选用但不只限于厢式聚丙烯板框压滤袋压搾机，式聚丙烯板概龍。

步骤 4中打散后的结冷胶纤维长度不 /Mil 10 j ,乡隹中水量在 80%左右。步骤 4打散的结冷胶纤维用 10到 20倍量的去离子水溶解，更佳的为 15~20倍去离子水。加热溶液使之升温至 80~95t，更佳的为 85^90°C。

步骤 4中，澄清设备可以采用但不限于板框 J E滤，高速离心或微孔滤酣滤' 鶴板框棚 Stffi滤。

步骤 4中，澄清处理时的 m¾¾¾ 65°C以上，以防止溶液形成赚，更佳的温度为 75°C左右。

步骤 5中，形成凝胶时加入的金属盐包括但不限于可溶性一价碱金属盐（氯化钾、氯化钠、硫酸钾、硫酸钠中的一种或多种)、二价碱金属盐（氯化钙、氯化镁）及多价 (氯化铁）盐等组合，雌一价和二价属考虑到因素，可以更鶴二价属厳。

步骤 5中，形成凝胶时加入的一价碱属盐为澄清胶液的 0.8 .2% (重量百分比)，加入的二价金属盐为澄清胶液的 0.05^0.1% (重量百分比)。

步骤 5中，形成赚时加入的可溶 ' 属先配成 30%浓度的溶液。

步骤 5 中使用的固液分离的设备可以选用但不只限于厢式聚丙烯板框压滤観搾机， 1¾M式聚丙烯板麵舰。

步骤 6中删切胶机，将低隱结冷胶切碎为柱状小颗粒，颗粒直径小于 3 ¾，长度小于 12毫米。

步骤 6中所用的一价金属阳离子包括但不限于可溶性一价碱金属盐（氯化钾、氯化钠、硫酸钾、硫酸钠中的一种或多种)，用量较佳的为在溶液中浓度达到 500( 10000ppm，更佳的为 600( 8000ppm_o 步骤 ό中所用的¾^剂可以是但不只限于柠檬酸钠、柠檬酸三钾、六偏磷酸钠、六偏磷酸钾、焦磷酸钠、聚磷酸钾中的一种或多种。较佳使用的螯合剂为柠檬酸钠和六偏磷酸钠，更佳的为柠檬酸钠。所加入的螯合剂用量较佳的为在溶液中浓度

1000-lOOOOppm, 更佳的为 500O^8000ppm。

步骤 6中的压搾设备选用布 «搾机。

步骤 6中使用的低级醇可以是乙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或多种，较佳的为乙醇和异丙醇，更佳的为异丙醇。用量较佳的为结冷胶湿颗粒重量的 2 倍，更佳的为 2.5-3.5倍。

步骤 6'中■的螯合剂包括但不只限于 1« 、蒙酸三钾、六偏磷,、六偏磷酸钾、焦磷酸钠、聚磷酸钾中的一种或多种。实际生产中，较佳使用的螯合剂为磷酸盐¾ ^剂，更佳的为六偏磷«。

步骤 6'中使用的酸可以为无机酸或有机酸。无机酸可以是但不限于盐酸、硫酸或磷酸中的一种或多种；有机酸可以旦不限于甲酸、醋酸、桝蒙酸、苹果酸或酒碰中的一种或多种。实际生产中，较佳使用的酸为有机酸，更佳的为柠檬酸。

步骤 6'中使用的螯合剂用量在最终千燥产品中占 9~10% (质量百分比)，使用的酸在最终干燥产品中占 0.5~1% (质量百分比)。

步骤 7 中使用的干燥设备可以是但不限于真空干燥和沸腾干燥，温度控制在 75〜80°C之间，时间控制在 1到 1.5小时之间。

结合以下实施例来具体说明，以更好地理解本发明，但这些实施例为非限制性的，仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

(一）低瞻凊型结冷胶的提取

实施例 1 A.发薩脱纏处理

在絮 «中，将 10m³结冷胶 »¾升^ 90 ， »^态下加入抗坏血度为 150ppm_; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0,在 90Ό条件下缓慢搅拌 10分钟；再加入 10%浓度的盐酸，回调 pH至 7.0，得到的溶 »Λ下一步骤。

Β.发酵液的酶处理

搅拌下加入 15kg纤维素酶，缓慢爵 5.5小时；，之后再加入 2kg溶菌酶， 35°C，缓† 拌 3小时；之后再加入 4kg中性蛋白酶，缓慢爵 2.5小时。

C.发的絮凝

向上述料液中缓慢加入氯化镁 30kg，搅拌维持 20min，再加入氢氧化钠 20kg，搅拌维持 10min，将料通过泵打入厢式板框压«13*[ 滤，废水处理站，得到 950kg湿的滤饼待用。

D.结冷胶澄清处理

由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维，按重量的 15倍量加入去离子水，加热溶液使之升 i¾ 90°C。在溶液中加 Aig量硅 «：, 爵均匀，控制在 85°C，用预涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙烯板框压滤机循环过滤结冷胶溶液，得到的澄清结冷胶溶' 光度计测定透光度大于 92%，澄清后溶液接 Λ»罐。

E.脱藝结冷胶溶騰处理

由 D得到的澄清结冷胶溶液温 ¾维持在 65Ό以上以防止凝胶形成，再向溶液中加入 30%浓度的氯化钾溶液 400L, 缓慢 » 5 后强制降 lj'50。C以下。形 »更脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压滤机压搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶块 500kg。 F. 及脱色处理

由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米，长度小于 12 ¾。将结冷胶小颗粒 SA到 3倍质量的去离子水中，同时加入六偏磷酸钾使 »度达到 5000ppm，缓慢 »溶液 10 后用滤布过滤；溏渣再用 2.5倍的乙醇溶液浸泡并快速搅拌 30分钟；用布袋压搾机脱去乙醇溶液，得到湿的结冷胶松麵粒 495kg。 -

G. 干燥粉碎，

由 F得到的产物励弗軒燥机，于 75°C下进行千燥，并粉碎，使其 95%腿 80 目筛网.。得到的低瞧清型结冷胶产品 lOOkgo 实施例 2

A.发麵兑纏处理

在絮凝罐中，将 10m³结冷胶发酵液升温至 90°C，搅拌状态下加入异 VC钠至其浓度为 200ppm; 再加入 10%浓度的 NaOH调整 pH至 10.0，在 90'C ^牛下缓慢搅拌 10 再加入 10%浓度的醋酸，回调 pH至 7.0，得到的溶 «Λ下一步骤。

B.发薩的酶处理

搅拌下加入 15kg纤维素酶， ¾ 43°C,缓慢爵 5小时；之后再加入 2kg藤酶，温度 33°C，缓慢搅拌 3小时；之后再加入 4kg碱性蛋白酶，温度 35°C，缓慢搅拌 3小时。

C.发酵液的絮凝

向±¾料液中缓慢加入氯化钙 35kg， »维持 20min，再加入化钾 20kg，搅拌维持 10min，将料通过泵打入厢式板框压滤 « 滤， «ΪΛ废水处理站，得到 950kg湿的滤饼待用。

D.结冷胶澄清处理

由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维，按重量的 15倍量加入去离子水，加热溶液使之升 90°C。采用微孔滤膜循环过滤结冷胶溶液，得到的澄清结冷胶溶删分光光度计测光度大于 92%，澄清后溶液接入纖罐。

E.脱睡结冷胶溶 K处理

由 D得到的澄清结冷胶溶液维持在 65Ό以上以防止赚形成，再向溶液中加入 30%浓度的氯化钠溶液 400L，缓慢 » 5 后强制降 1」'501：以下。形脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶块 500kg。

F. 及脱色处理

由 E得至啲结冷赚块碰片耐切胶机切碎雌状小颗粒，颗粒直径小于 3絲，长度小于 12 *^。将结冷胶小颗粒 ^到 3倍质量的去离子水中，同时加入機隱使»度达到 5000ppm，缓慢 »溶液 10 后用滤布过滤；滤渣再用 2.5倍的异丙醇溶液浸泡并快速搅拌 30分钟；用布袋压梓机脱去乙醇溶液，得到湿的结冷胶松麵粒 495kg。

G. 千燥粉碎

由 F得到的产物通弗^燥机，于 75°C下进行干燥，并粉碎，使其 95%Mil80 目筛网.。得到的低藝清型结冷胶产品 100kg。

实施例 3

A.发麵兌藝处理

在絮繊中，将 10m³结冷胶发赚升 ΐ¾ 90° »b态下加入焦亚硫隨至其浓度为 250ppm_; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0，在 90°C条件下缓慢搅拌 10 分钟；再加入 10%浓度的柠檬酸，回调 pH至 7.0，得到的溶 «Λ下一步骤。

B.发酵液的酶处理

爵下加入 15kg纤维素酶， ί¾¾ 43Ό,缓慢賺 5小时；之后再加入 2kg溶菌酶， 33°C，缓慢爵 3小时；之后再加入 4kg碱性蛋白酶， i¾¾ 35°C，缓慢爵 3小时。

C.发酵液的絮凝

向 ±ϋί料液中缓慢加入氯化锌 35kg，爵维持 20min，再加入碳薩 20kg，爵维持 10min，将料通过泵打入厢式板框压滤 «行过滤，滤 ΜΛ废水处理站，得到 950kg湿的滤饼待用。

D.结冷胶澄清处理

由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维，按重量的 15倍量加入去离子水，加热溶液使之升温至 90'C。在溶液中加入适量硅藻土，搅拌均匀，温度控制在 85°C，用预涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙烯板框压 WI循环过滤结冷胶溶液，得到的澄清结冷胶溶删^ ¾光度计测定透光度大于 92%，澄清后溶液接 Λ»罐。

E.脱«结冷胶溶¾«处理 '

由 D得到的澄清结冷胶溶液温 j¾¾维持在 65°C以上以防止凝胶形成，再向溶液中加入 30%浓度的氯化! ¾溶液 25L，缓 1S» 5 ^中后强制降 ¾ 50°C以下。形 j«g 脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压 «ΙΙΐ搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶块 500kg。

R ¾ ^及脱色处理

由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米，长度小于 12毫米。将结冷胶小颗粒投入到 3倍质量的去离子水中，同时加入聚磷酸钾使»度¾|1」 5000ppm，缓' K 拌溶液 10 后用滤布过滤；滤渣再用 2.5倍 M:的乙赚液浸泡并快 30 中；用布搾纖去乙赚液，得到湿的结冷胶松散颗粒 495kg。

G. 千燥粉碎

由 F得到的产物通弗腾亍燥机，于 75 下进行 f燥，并粉碎，使其 95% ϋ80 目筛网.。得到的低酰基清型结冷胶产品 100kg。

采用±¾1：艺相对于现有的低结冷胶的后提取方法，优势之处在于：

1. 由于发赚利用高温灭菌时的进行脱 «处理，在简化了工艺的同时使得本发明的整体工艺相比原有工艺^ ½有所氏。

2. 由于产品在絮凝前就脱醒处理，使得采用二价或多价金属阳离凝低睡结冷胶的效率更高，提升了产率。

3.产品质量大为改善，达到国外先进水平。产品夕卜观好、透光度高、'产品凝胶强度高。具体表现在色度大于 83%，透光度在 85%以上，同时凝胶强度大于 1000g/cm²。

4.通过后期的螯合工艺除去绝大部分二价金属阳离子，使得形成的凝胶略微发白消失，提升了产品的质量。

(二）适用于组织培养基的低藝清型结冷胶的提取

实施例 4

A.发麵兑腿处理

在絮凝罐中，将 10m³结冷胶发酵液升温至 90°C，搅# ^态下加入抗坏血酸至其浓度为 150ppm; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0，在 90°C条件下缓慢搅拌 10 分钟；再加入 10%浓度的盐酸，回调 pH至 7.0，得到的溶 «Λ下一步骤。

B.发赚的酶处理

爵下加入 15kg纤维素酶，缓' g» 5.5小时；之后再加入 2kg藤酶， 35'C，缓 '隨拌 3小时；之后再加入 4kg中性蛋白酶， ¾ 33°C , 缓慢霧 2.5小时。

C.发的絮凝 '

向上述料液中缓慢加入氯化镁 30kg，搅拌维持 20min，再加入氢氧化钠 20kg，搅拌维持 iomin，将料耐泵打入厢式板栖 ¾ιβ観滤， Aj& , 得到

950kg湿的滤饼待用。

D.结冷胶澄清处理

由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维，按重量的 15倍量加入去离子水，加热溶液使之升 90 。在溶液中加 AiS量硅^ ±, 爵均匀，控制在 85°C，用预涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙 ¾板框压滤机循环过滤结冷胶溶液， 3得到的澄清结冷胶溶删^ ¾光度计测定透光度大于 92%, 澄清后溶液接 Λ»罐。

E.脱醒结冷胶溶藝处理

由 D得到的澄清结冷胶溶液温度应维持在 65°C以上以防止凝胶形成，再向溶液中加入 30%浓度的氯化钾溶液 400L，缓慢 » 5 后强制降 1」50°〇以下。形^更脆性 «的胶体用厢式聚丙烯板框压搾，得到含水量 80%左右的结冷 «片块 500kg。

F.离子交脱色处理

由 E得到的结冷胶胶块片舰切胶机切碎離状小颗粒，颗粒直径小于 3就，长度小于 12 ¾。将结冷胶小颗粒到 3倍质量的去离子水中，同时加入氯化钾溶液»度达到 5000ppm，缓慢搅拌溶液 10 后用滤布过滤；渣再用 2.5倍的乙赚液浸泡并快 30 ；用布袋压搾繊去乙瞧液，得到湿的结冷胶松散颗粒 495kg。

G. 酉 £Λϋ当质量的^ >齐«体系

在由 F得到的结冷胶中加入六偏磷酸钠 10公斤，再加入柠檬酸 1公斤，均匀混合。 R千燥粉碎

由 G得到的产物通 il STP燥机，于 75 下进行千燥，并粉碎，使其 95%通过 80 目筛网.。得到的低隱清型结冷胶产品 110kg。

实施例 5

A.发 M 醒处理

在絮凝罐中，将 10m³结冷胶发升温至 90°C，搅拌状态下加入异 VC钠至其浓度为 200ppm; 再加入 10%浓度的 NaOH调整 pH至 10.0，在 90Ό^ί牛下缓慢搅拌 10 分钟；再加入 10%浓度的醋酸，回调 pH至 7.0，得到的溶液进入下一步骤。

Β.发赚的酶处理

搅拌下加入 15kg纤维素酶， 43°C，缓慢賺 5小时；之后再加入 2kg藤酶，缓慢勝 3小时；之后再加入 4kg碱性蛋白酶， ¾ 35°C, 缓慢爵 3小时。

C.发酵液的絮凝

向料液中缓入氯化鈣 35kg，搅拌维持 20min，再加入氢氧化钾 20kg，搅拌维持 10min，将料 Sil泵打入厢式板行过滤，

得到 950kg湿的滤饼待用。

D.结冷胶澄清处理由 C得到的滤饼先用打龍打散为短纤维，按的 15倍動 π入去离子水，力口热溶液使之升温至 90°C。采用微孔滤膜循环过滤结冷胶溶液，直至得到的澄清结冷胶溶删分光光度计测錢光度大于 92%，澄清后溶液接入碰罐。

E.脱醒结冷胶溶藝 K处理

由 D得到的澄清结冷胶溶液温度应维持在 65'C以上以防止凝胶形成，再向溶液中加入 30%浓度的氯化钠溶液 400L，缓慢 » 5 后强制降 1」50°〇以下。形/ ¾ ί更脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压滤枳压搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶块 500kg。

F.离子交 m&脱色处理

由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米，长度小于 12 ¾*。将结冷胶小颗; 到 3倍质量的去离子水中，同时加入氯化钠使 »度达到 7000ppm，缓慢 »溶液 10 后用滤布过滤；渣再用 2.5倍 MS的异丙麵液浸泡并快¾» 30 ；用布瓶搾繊去异丙赚液，得到湿的结冷胶松譲粒 495kg。

G. fiAS当质量的 ^"齐 «体系

在由 F得到的结冷胶中加入柠檬酸钠 10.5公斤，再加入苹果酸 1公斤，均匀混合。

H. 干燥粉碎

由 G得到的产物通 j±沸腾于燥机，于 75'C下进行千燥，并粉碎，使其 95%通过 80 目筛网.。得到的低 β¾型结冷胶产品 110kg。

实施例 6

A.发麵兑睡处理

在絮凝罐中，将 10m³结冷胶发酵液升温至 90°C，搅拌状态下加入焦亚硫酸钾至其浓度为 250ppm; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0，在 90°C条件下缓慢搅拌 10 分钟；再加入 10%浓度的柠檬酸，回调 pH至 7.0，得到的溶液进入下一步骤。

B.发赚的酶处理

勝下加入 15kg纤维素酶，' 43Ό，缓慢灘 5小时；之后再加入 2kg藤酶， m. 33 , 缓慢爵 3小时；之后再加入 4kg碱性蛋白酶， 35°C，缓慢勝 3小时。

C.发酵液的絮凝

向±¾料液中缓慢加入氯化锌 35kg，搅拌维持 20min，再加入碳■ 20kg， » 维持 10min，将料通过泵打入厢式板框压滤 «行过滤，滤液 ¾Λ废水处理站，得到 950kg湿的滤饼待用。

D.结冷胶澄清处理 '

由 C得到的滤饼先用打讓打散为短纤维，按龍的 15倍動口入去离子水，力口热溶液使之升温至 90°C。在溶液中加入适量硅藻土，搅拌均匀，温^控制在 85°C，用预涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙烯板框压滤机循环过滤结冷胶溶液， ¾ 得到的澄清结冷胶溶光度计测定透光度大于 92%，澄清后溶液接 Λ«罐。

Ε.脱隨结冷胶溶藝处理

由 D得到的澄清结冷胶溶液温维持在 65°C以上以防止凝胶形成，再向溶液中加入 30%浓度的氯化钙溶液 25L，缓慢 » 5 后强制降 lj 50°C以下。形更脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压滤fLEE搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶块 500kg。

F.离子交^ ¾脱色处理

由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米, 长度小于 12 «*。将结冷胶小颗粒 &Λ到 3倍质量的去离子水中，同时加入硫瞻使 »度达到 SOOOppm, 缓慢»溶液 10 后用滤布过滤；滤渣再用 2.5倍的乙赚液浸泡并' 勝 30 ；用布颗搾机脱去乙赚液，得到湿的结冷胶松画粒 495kg。

G. ΚΛϋ当质量的¾^?«体系

在由 F得到的结冷胶中加入六偏磷瞻 9.5公斤，再加入苹果酸 0.8公斤，均匀混合。

Η. 千燥粉碎

由 G得到的产物通过真空干燥机，于 75°C下进行干燥，并粉碎，使其 95%通过 80 目筛网.。得到的低酰基清型结冷胶产品 108kg。

采用上述工艺生产出来的适用于组织培养基的低酰基结冷胶相对于现有的食品级低睡结冷胶的后提取方法，优势之处在于：

1.结冷胶分散性好，水合激在 6CTC左右，在较低的下即可溶解，配制出透光度极高的凝胶。

2.可以如果将结冷胶粉末和金属盐混合后再溶解，不会出现溶常困难同时产生大量乳白色絮状物的 ί！^。

3.产品质量大为改善，啯夕卜先平。产品夕卜观好、透«高、产品赚搬高。具体表现在色度大于 83%，透光度在 90%以上，同时凝胶强度在 40( 650g/cm²之间。

Claims

权利要求书

1、一种低 «结冷胶的后提取方法，其包 »骤：

( 1 )发赚的脱隱处理：

将发升至 8O^0°C，加入抗氧化剂，同时加入碱调节 ρΗ «έ§¾_;

(2)发酵液的酶处理：

在步骤 ( 1 ) 发隱中加入不同酶制剂，以尽可除去发赚中不溶性的杂质和菌体碎片；

(3)发酵液的絮凝：

在步骤（2)酶处理后的发酵液中，加入水溶性碱金属絮凝，再调节 pH值至碱性, 固液分离，以除去发酵液中大部分水以及色素，得到结冷胶粗品；

(4) 结冷胶澄清处理：

将步骤 (3)得到的结冷胶粗品通过澄清处理，得到澄清的低酰基结冷胶溶液；

(5) 脱瞧结冷胶溶藝处理：

在步骤 (4)得到的结冷胶脱«澄清溶液中，通过加入碱金属离子形成凝胶，固液分离;

(6)祛除二价或多价阳离子及脱色处理

将步骤（5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， Mil离子交换工艺或者工艺将结冷胶中的二价阳离子或多价阳离子大部分祛除;稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并搅拌、过滤以达到彻舰色¾¾

(7)千燥粉碎：

将步骤 (6)中获得的结冷胶固体物料干燥并粉碎，得到高透明度低酰基清型结冷胶产品。 ' 2、权利要求 1所述的低酰基结冷胶的后提取方法，其中步骤（6)与（7)之间还包括下述步骤：

(60 RA S当质量的体系：

在步骤 (6)得到的结冷胶中配入适当质量的螯合 «体系以螯合在结冷胶使用过程中可能额卜加入的二价阳离子同时保持 ρΗ值的相定，爵均匀。

3、一种低 «清型结冷胶的后提取方法，其包括步骤：

( 1 )发的脱 «处理：

将发酵液温度升至 8O^0°C，加入抗氧化剂，同时加入碱调节 ρΗ ϋ兑酰基；

(2)发酵液的酶处理：

在步骤 ( 1 )发酵液中加入不同酶制剂，以尽可能除去发酵液中不溶性的杂质和菌体碎片；

(3) 发酵液的絮凝：

在步骤（2)酶处理后的发酵液中，加入水溶性碱金属絮凝，再调节 pH {IS碱性，固液分离，以除去发酵液中大部分水以及色素，得到结冷胶粗品；

(4) 结冷胶澄清处理：

将步骤（3)得到的结冷胶粗品通过澄清处理，得到澄清的低酰基结冷胶溶液；

(5) 脱纖结冷胶溶藝处理

在步骤（4)得到的结冷胶脱 β澄清溶液中，通过加入碱金属离子形成凝胶，固液分离；

(6) 观色处理：

将步骤 (5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒，螯合工艺将结冷胶中的二价或多价阳离子大部分祛除；稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 »、过滤以达到彻底脱色效果；

(7)干燥粉碎：

将步骤 (6)中获得的结冷胶压干，固体物料干燥并粉碎，得到高透明度低酰 « 型结冷胶产品。，

4、一种适用于组织培养基的低 «结冷胶的后提取方法，其包 ¾ ^骤：

( 1 )发的脱 Kt¾处理：

将发赚升至 8O^90°C，加入抗氧化剂，同时加入碱调节 pH麵藝；

(2)发 @ ¾的酶处理：

在步骤（1 ) 发赚中加入不同酶制剂，以尽可也除去发赚中不溶性的杂质和菌体碎片；

(3)发酵液的絮凝：

在步骤（2)酶处理后的发赚中，加入水溶性 ¾½属絮凝，再调节 pH itS碱性，固液分离，以除去发酵液中大部分水以及色素，得到结冷胶粗品；

(4) 结冷胶澄清处理：

将步骤 (3)得到的结冷胶品 M:澄清处理，得到澄清的低 ¾结冷胶溶液；

(5) 脱隨结冷胶溶删餘处理：

在步骤（4)得到的结冷胶脱酰基澄清溶液中，通过加入碱金属离子形成凝胶，固液分离；

(6)离子交换及脱色处理：

将步骤 (5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， ffiil离子交换工艺将结冷胶中的二价阳离子大部分祛除；稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 »、过滤以达到彻底脱色 (60 ¾AiS当质量的齢謹体系：

在步骤 (6)得到的结冷胶中加入适当质量的螯合齐 0/酸体系以螯合在结冷胶使用过程中可能驗卜加入的二价阳离子同时保持 pH值的相 «定，勝均匀。

(7)干燥粉碎：

将步骤 (6')中获得的结冷胶固体物料干燥并粉碎，得到高透明度低酰基清型结冷胶产品。

5、权利要求 14中任一项的方法，其中步骤 ( 1 )脱酰基后加入酸，调节 pH值至中性，降温 40°C以下。

6、前述任一权利要求的方法，其中步骤 ( 1 )中加入的抗氧化剂为抗坏血酸、异 VC钠、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、硫酸氢钾、半胱氨酸中的一种或多种，浓度为 10( 300ppm。

7、权利要求 ό的方法，其中抗氧化剂的浓度为 15( 250ppm。

8、前述任一权利要求的方法，其中步骤 ( 1 )加入的用于调整 pH的碱为 NaOH、 KOH、 Na₂C0₃、 K₂C0₃中的一种或多种。

9、权利要求 8的方法，其中步骤 (1 )加入的用于调整 pH的碱为 NaOH, KOH中的一种或多种。

10、权利要求 8或 9的方法，其中步骤 (1 )加入的用于调整 pH的碱为 NaOH。

11、前述任一权利要求的方法，其中步骤 ( 1 )中使用繊每 pH值调节到 9.5〜11范围之内。

12、权利要求 11的方法，其中步骤 (1 )中删藝 pH值调节到 10左右。

13、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (1 )中，调整 pH的碱应先配成浓度为 10% 的溶液。

14、前述任一权利要求的方法，其中步骤（1 )中，保持温度在 85^0°C之间。

15、权利要求 13的方法，其中步骤 (1)中，保持温度在 8 ~88°C之间。 .

16、前述任一权利要求的方法，其中步骤（1)中，调整 pH的酸为无机酸或有机酸。

17、权利要求 16的方法，其中步骤 (1)中，调整 pH的酸为无机酸。

18、权禾腰求 16或 17的方法，其中无机酸为盐酸、硫酸、磷酸中的一种或多种。

19、权利要求 18的方法，其中无机酸为盐酸。

20、权利要求 16的方法，其中有机酸为甲酸、醋酸、 m,苹果酸、酒中的一种或多种。

21、前述任一权利要求的方法，其中步骤（1)中，调整 pH的酸的用量能将发酵液体系 pH调节到 7左右。

22、前述任一权利要求的方法，其中步骤（1)中，调整 pH的酸先配成浓度为 10%的溶液。

23、前述任一权禾崾求的方法，其中步骤（2)为做向步骤（1):得到的发赚中分别加入纤维素酶、溶菌酶及蛋白酶。

24、权利要求 23 的方法，其中步骤（2)中加入的酶及餅分别为：纤维素酶浓度为 50O-2000ppm, 时间为 4到 8小时，温度为 40~50°C; 溶菌酶浓度为 5( 300ppm，时间为 2到 4小时，温度为 3(M0°C; 中性蛋白酶或碱性蛋白酶浓度为 10( 000ppm，时间为 1到 5小时，温度为 3(M0°C。

25、权利要求 24的方法，其中纤维素酶浓度为 100( 500ppm，时间为 5到 6小时，温度为 4345°C; 藤酶浓度为 10( 200ppm，时间为 2.5到 3.5小时；继为 35~37°C; 中性蛋白酶或碱性蛋白酶浓度为 30( 00ppm，时间为 2到 3小时，雕为 3( 5°C。

26、前述任一权利要求的方法，其中步骤（3)为将步骤 (2)中的物料降温至 35Ό以下，加入二价或多价水溶性碱金属盐絮凝出低酰基结冷胶，再加入碱调节 pH，通过离心躯搾法固液分离。

27、权利要求 26的方法，其中步骤 (3)中所用的水溶性属盐包繊、'钙、钡、锌、铝的水溶组合。

28、权利要求 26或 27的方法，其中步骤 (3)中所用的水溶性碱金属加入量占发酵液质量的 0.1⁰/ .5%。

29、权利要求 28的方法，其中步骤 (3)中所用的水溶性碱金属加入量占发酵«量的 0.3^ο/(Μ).4%。

30、权利要求 26的方法，其中步骤 (3)中所用的碱包括 KOH、NaOH、Na₂C0₃、NaHC0₃, Na3P0₄TO组合。 '

31、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (3 )中棚的固液分离的设备为厢式聚丙烯板框压龍赫慨搾机。

32、权利要求 31的方法，其中步骤 (3)中删的固液分离的设备为厢式聚丙烯板概

33、前述任一权利要求的方法，其中步骤（4)中将步骤 (3)制得的物料打散，打散后的结冷胶纤维长度不 Mil 10 纤维中水伤^量在 80%左右。

34、权利要求 33的方法，其中步骤 (4)中打散的结冷胶纤维用 10到 20倍量的去离子水溶解，加热溶液使之升 8( ^5°C。

35、权利要求 34的方法，其中步骤 (4)中打散的结冷胶纤维用 15〜20倍量的去离子水溶解，加热溶液使之升 i¾ 85^90°C。

36、前述任一权禾崾求的方法，其中步骤（4)中澄清采用板框應滤，高速离心或微孔滤膜过滤。

37、权利要求 36的方法，其中步骤（4)步骤澄清板框滤。

38、前述任一权利要求的方法，其中步骤（4)中澄清处理时的温度在 65Ό以上。

39、权利要求 38的方法，其中处理温度为 75°C左右。

40、前述任一权禾腰求的方法，其中步骤 (5) 中形成赚时加入的金属包括可溶性一价属盐、二价属盐、多价 ¾ ^属盐组合。

41、权利要求 40的方法，其中形成凝胶时加入的一价碱金属盐为澄清胶液的 0.8~1.2% (MS百分比)，力口入的二价 ^盐为澄清胶液的 0.05^0.1% (MM百分比)。

42、权利要求 40或 41的方法，其中步骤 (5)中形成繊时加人的金属盐为一价和二价驗属盐。

43、权利要求 42的方法，其中步骤 (5)中形成赚时加入的金属盐为二价驗属盐。

44、权利要求 4042任一的方法，其中戶舰一价属自氯化钾、氯化钠、硫隨、硫隱之—或其组合。

45、权利要求 4043任一的方法，其中戶 M二价属自氯化钙、氯化镁之一或其组合。

46、权利要求 40的方法，其中舰多价艦属为氯化铁。

47、前述任一权利要求的方法，其中步骤（5) 中，形成赚时加入的可溶 ' 属盐先配成 30%浓度的溶液。

48、前述任一权利要求的方法，其中步骤（5) 中使用的固液分离的设备为厢式聚丙烯板框压龍纏榨机。

49、权利要求 48的方法，其中固液分离的设备为厢式聚丙烯板概藏。

50、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (5 )中固液分离后得到含水量 80%左右的低清型结冷! ¾块片。

51、权利要求 50的方法，其中步骤 (6)为将步骤（5 )得到的含水量 80%左右的低酰基结冷胶切碎为小颗粒， *^到3~5倍质量的加 AiS当一价盐处理的水中，浸泡并高速搅拌，以离子交换的方式将胶体由二价阳离子盐形式转化成为一价阳离子盐形式；处理后的结冷胶溶菌搾 I ，再浸輕低级赚液中，浸泡并高速擬，之后再过滤以綱切底祛除色素的效果。 '

52、权利要求 50的方法，其中步骤 (6)为将步骤（5 )得到的含水量 80%左右的低酰基结冷胶切碎为小颗粒， SA到 3〜5倍质量的加 Λ¾当剂处理的水中，浸泡并高速搅拌，以祛除胶体中的大部分二价或多价阳离子；处理后的结冷胶溶液压搾脱水，再浸輕 2倍质量的低级液中，浸泡并高速勝，之后再过滤以^到彻底祛除色素的效果。

53、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6) 中使用切胶机，将低酰基结冷胶切碎为柱状小颗粒，颗粒直径小于 3 ¾|t，长度小于 12 。

54、权利要求 51的方法，其中步骤 (6)中所用的一价金属阳离子是可溶性一价碱^

55、权利要求 54的方法，其中所述可溶性一价 ¾ ^属盐为氯化钾、氯化钠、硫酸钾或硫隱。

56、权利要求 53-55任一的方法，其中步骤 6中所用的一价金属阳离子在溶液中浓度达到 500( 10000ppm。

57、权利要求 56的方法，其中所述浓度为 600( 8000ppm。

58、权利要求 52的方法，其中步骤 (6)中所用的螯合剂是柠檬酸钠、柠檬酸三钾、六偏磷、六偏磷,、焦磷 »3、聚磷,或多种。

59、权利要求 58的方法，其中腿的剂是隱偏磷隱。

60、前述任一权利要求的方法，其中步骤（6 ) 中所用的螯合剂量为在溶液中浓度 100( 10000ppm_o

61、权利要求 60的方法，其中所述螯合剂量为 500( 8000ppm。

62、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6)中删的«压搾设备为布纏搾机。

63、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6)中棚的低级醇是乙醇、异丙醇、正丁醇中的一种或多种。

64、权利要求 63的方法，其中所述低级醇为乙醇或异丙醇。

65、权利要求 63或 64的方法，其中所述低级醇为异丙醇。

66、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6)中使用的低级醇的量刃股粒重量的 2^4倍。

67、权利要求的方法，其中所述的用量为结冷胶湿颗粒重量的 2.5~3.5倍。

68、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6 中删的剂为蒙翻、 m≡ 钾、六偏磷酸钠、六偏磷酸钾、焦磷酸钠、聚磷酸钾中的一种或多种。

69、前述任一权利要求的方法，其中步骤（6') 中删的齡剂为磷齢剂。

70、权利要求 68或 69的方法，其中所述螯合剂为六偏磷酸钠。

71、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6 中删的酸为无机酸或有机酸。

72、权利要求 71的方法，其中所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸中的一种或多种。

73、权利要求 71的方法，其中難有机酸为甲酸、醋酸、 w , 苹果酸、酒碰中的一种或多种。.

74、权利要求 72的方法，其中所用酸为有机酸。

75、权利要求 74的方法，其中所述有机酸为柠檬酸。

76、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (6')中使用的螯合剂用量在最终千燥产品中占 9~10% (质量百分比）。

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更正页（细则第 91条)

77、前述权利要求的方法，其中步骤 (6 中删的酸在最终千燥产品中占 0.5~1% (质量百分比)。

78、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (7)为将步骤 (6)或（6')中制得的产物于 75〜80°C下进行干燥，并粉碎，使其 95%Mil 80目筛网。

79、前述任一权利要求的方法，其中步骤 (7)中干燥设备是真空干燥或沸腾千燥，时间为 1到 1.5小时之间。

80、前述任一权利要求的方法制得的低 «结冷胶。

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