WO2009133964A1

WO2009133964A1 - 酸化ストレス抑制剤

Info

Publication number: WO2009133964A1
Application number: PCT/JP2009/058731
Authority: WO
Inventors: 前田泰孝; 井口登與志; 高柳諒一
Original assignee: 国立大学法人九州大学; 帝人ファーマ株式会社
Priority date: 2008-04-28
Filing date: 2009-04-28
Publication date: 2009-11-05

Abstract

本発明は新規な酸化ストレス抑制剤を提供することを目的とし、４－（１－（（４－メチルベンゾチオフェン－３－イル）メチル）ベンズイミダゾール－２－イルチオ）ブタン酸、４－（１－（（ナフタレン－１－イル）メチル）ベンズイミダゾール－２－イルチオ）ブタン酸またはそれらの塩を有効成分として含有する、酸化ストレス抑制剤を提供する。

Description

明細書発明の名称

酸化ス卜レス抑制剤技術分野

本発明は酸化ストレス抑制に関する。具体的には、 4一（1一（（4一メチルベンゾチォフェン一 3—ィル）メチル)ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ)ブタン酸、 4一 ( 1 一（(ナフタレン一 1一ィル）メチル）ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ）ブタン酸またはそれらの塩を有効成分として含有する、酸化ストレス抑制剤に関する。背景技術

ヒトを始めとする好気性生物は、体内に取り込んだ酸素を利用した酸化的リン酸化により生命活動に必要なエネルギーを生産しているが、この過程で生じた活性酸素群は細胞障害性を有している。そのため、生体は様々な代謝過程で発生する活性酸素群を消去無毒化する抗酸化機構を備えている。

酸化ストレスとは、生体内で産生される活性酸素群の酸化損傷力とこれを消去無毒ィ匕する抗酸化力との差として定義される。活性酸素群は、本来、エネルギー生産、侵入異物攻撃、不要な細胞処理、細胞情報伝達などに際して生産される有用なものであるが、生体内の抗酸化機構で捕捉しきれない余剰な活性酸素群が生じる場合には、生体の構造や機能を担っている脂質、蛋白質 ·酵素や、遺伝情報を担う遺伝子 D NAを酸化し損傷を与えることで、生体の機能や構造を乱し、病気を引き起こすと考えられている（非特許文献 1参照)。

現在、酸化ストレスの強度を調べる指標として、いくつかの酸化ストレス指標が知られている。主な指標として 8—ヒドロキシデォキシグアノシン（8— OH d G) などがある（非特許文献 2参照)。 8— OH d Gは D NAを構成しているデォキシグアノシンが活性酸素のような酸化ストレスによつて産生され、 D N Aから異物として切り離されそのまま代謝されずに尿中に排泄されるものとして、酸化ストレスによる DNA損傷の大きさを反映すると考えられている。また、近年 8—イソプロスタグランジン F 2 α (8 - i s oPGF 2 ) も酸化ストレス指標としてその有用性が注目されている（非特許文献 3参照)。

4一（1一（（4一メチルベンゾチォフェン— 3—ィル）メチル）ベンズイミダゾ一ル一 2—ィルチオ）ブタン酸、 4- (1 - ((ナフタレン一 1—ィル) メチル) ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ）ブタン酸またはそれらの塩は、キマーゼ阻害活性を有する化合物群の一つとして、特許文献 1または 2に開示されている。

特許文献 1 ：国際公開第 2001/53291号パンフレツト

特許文献 2 ：国際公開第 2000/03997号パンフレツト

非特許文献 1 ：活性酸素と病態、疾患モデルからベッドサイドへ、井上正康著、学会出版センター、 1992年、 p. 1 5-35

非特許文献 2 -. F r e e Ra d i c Re s Commun. 1986 ； 1 (3)： 1 63- 72.

非特許文献 3 ： J B i o l Chem. 1996, Au , 23 ; 271 (34) : 2 061 7 - 20. 発明の開示，本発明は、新規な酸化ストレス抑制剤を提供することを目的とする。

すなわち、本発明は下記である。

(1) 4- (1一（（4—メチルベンゾチォフェン— 3—ィル）メチル）ベンズイミダゾ一ルー 2—ィルチオ）ブタン酸またはその塩を有効成分として含有する、酸化ストレス抑制剤、

(2) 4一（1— ((ナフタレン一 1一ィル）メチル）ベンズイミダゾールー 2—ィルチォ）ブタン酸またはその塩を有効成分として含有する、酸化ストレス抑制剤、である。本発明の薬剤を投与することにより、酸化ストレスを抑制させることが可能となり、酸化ストレス抑制剤として使用することができる。図面の簡単な説明

図 1は、ハムスター S t r e p t oz o t o c i n負荷モデルにおける尿中 8—〇H dG増加に対する被験物質 1または被験物質 2の作用（投薬開始 4週目）を示す図である。

図 2は、ハムスター S t r e p t oz o t oc i n負荷モデルにおける尿中 8— i s oPGF 2 α増加に対する被験物質 1及び被験物質 2の抑制作用を示す図であつて、 a ) は投薬開始 4週目、 b) は投薬開始 8週目である。

図 3は、実施例 3のハムスター S t r ep t oz o t oc i n負荷モデルにおける腎臓組織 NOX4 (a), gp9 l phox (b)、 p 21 p h o x (c) 発現亢進に対する被験物質 1及び被験物質 2の抑制作用を示す図である。

図 4は、実施例 3のハムスター S t r e p t oz o t o c i n負荷モデルにおける腎臓組織 8— OH d G発現亢進に対する被験物質 1及び被験物質 2の抑制作用を示す図である。発明を実施するための形態

本発明の薬剤として使用される 4— ( 1一（（ 4一メチルベンゾチォフェン一 3—ィル）メチル）ベンズイミダゾ一ルー 2—ィルチオ）ブタン酸、 4一（1一（（ナフタレン一 1 一ィル）メチル）ベンズイミダゾール—2—ィルチオ）ブタン酸またはそれらの塩の投与は、尿中の 8—〇HdGまたは 8— i s OPGF2ひを始めとして、組織における酸化ストレスの各種指標を低下させることから、本発明の薬剤は、酸化ストレス抑制剤として使用可能である。

本発明の有効成分である、 4— (1— ((4一メチルベンゾチォフェン一 3—ィル）メチル）ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ) ブタン酸、 4一（1— ((ナフタレン一 1一ィル) メテル) ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ）ブタン酸またはそれらの塩は、酸化ストレスを抑制する作用の他にキマーゼ阻害活性も有する。

本発明の化合物は、特許文献 1または 2等に記載の方法によって合成することができる。例えば、 3—ブロモメチルー 4一メチルベンゾチォフェンと 4一 (ベンズイミダゾ —ルー 2—ィルチオ）ブタン酸メチルとを 3級アミンなどのアル力リの存在下、トルェンなどの炭化水素溶媒中で力ップリング反応させて 4一 ( 1 - ( ( 4—メチルベンゾチォフェン一 3—ィル) メチル）ベンズィミダゾ一ルー 2ーィルチオ) ブタン酸メチルを得る。これをテトラヒドロフラン溶媒中、水酸化ナトリウム水溶液などで加水分解し、中和して 4一 ( 1— ( ( 4一メチルベンゾチォフェン一 3—ィル) メチル）ベンズイミダゾ —ルー 2—ィルチオ) ブタン酸を得ることができる。

本発明の化合物は、毒性が低く、安定性にも優れたものである。

本発明の化合物の塩として、その分子中に塩基性基が存在するので、必要に応じて医学上許容される酸付加塩に変換することができる。そのような酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、炭酸等の無機酸；あるいは酢酸、クェン酸、リンゴ酸、シユウ酸、酒石酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸等の有機酸などがあげられる。

また、本発明の化合物の塩として、その分子中に酸性基が存在するので、必要に応じて医学上許容される塩に変換することができる。そのような塩としては、非毒性のカチオン塩が挙げられ、具体的には、 N a ⁺、 K+などのアルカリ金属イオン、 M g ^{2 +}、 C a ^{2 +}などのアルカリ土類金属イオン、 A l ^{3 +}、 Z n ^{2 +}などの金属イオン、あるいはアンモニァ、卜リェチルァミン、エチレンジァミン、プロパンジァミン、ピロリジン、ピぺリジン、ピぺラジン、ピリジン、リシン (L y s i n e )、コリン、エタノールァミン、 N, N—ジメチルエタノ一ルァミン、 4ーヒドロキシピペリジン、ダルコサミン、 N— メチルダルカミン等の有機塩基との塩が挙げられる。

本発明の有効成分を含有する製剤は、通常製剤化に用いられる担体ゃ賦形剤、その他の添加剤を用いて調製される。製剤用の担体ゃ賦形剤としては、固体又は液体いずれでも良く、例えば乳糖、ステアリン酸マグネシウム、スターチ、タルク、ゼラチン、寒天、ぺクチン、アラビアゴム、オリ—ブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコール等やその他常用のものが挙げられる。

本発明の有効成分は、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、あるいは静注、筋注等の注射剤、坐剤、経皮等による非経口投与のいずれの形態であっても使用することができる。

本発明の有効成分の投与量は、通常 0. 1〜100 Omg/日程度であり、投与回数は通常 1一 3回日である。実施例

本発明を以下に実施例によって具体的に説明する。しかし、本発明の範囲はこれらの実施例によっていかなる意味においても制限されない。

[実施例 1] ハムスター S t r e p t oz o t oc i n負荷モデルにおける酸化ストレス抑制作用

本実験ではゴールデン ·シリアン ·ハムスター（8週齢）を用いた。動物にクェン酸緩衝液（50mM、 H 4. 5) に溶解した S t r e p t o z o t o c i n (STZ) 3 Omg/k gを隔日で腹腔内投与し、随時血糖 25 Omg/dL以上であることを確認した後に STZ投与を終了した。試験群としては以下表 1に示した 4群を設定し、 p 1 a c e b o投与群には同量のクェン酸緩衝液を腹腔内投与した。ハムス夕一 S t r e p t o z o t o c i n負荷モデルにおける試験群

なお、被験物質（4一（1— ((4—メチルベンゾチォフェン一 3—ィル）メチル）ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ）ブタン酸 (以下、「被験物質 1」という。）または 4 - (1- ((ナフタレン一 1—ィル）メチル）ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ）ブタン酸（以下、「被験物質 2」という。））の投与はハムス夕一用普通飼料に 0. 02%の被験物質を混ぜ、混餌投与にて実施した。被験物質は STZ/p 1 a c e bo投与開始日から 2週後に被験物質投与を開始した。その後 8週間混餌投与を行い、 1週毎に空腹時血糖を測定した。

投与最終日の 3日前にすベての動物を代謝ケージに移動し、 24時間蓄尿を 3日間連続施行した。尿中酸化ストレス指標（8— OHdG及び 8— i s OPGF2ひ）を EL I S A法にて測定した。また、 24時間尿量から 1日排泄量を算出した。

また、各群半数の動物はネンブタール麻酔下にて腎臓を摘出し、腎臓での NAD (P) Hォキシダ一ゼ（N〇X4、 gp 91 pho , p 22 p h o x) 及び酸化ストレス指標（8— OHdG) の組織免疫染色により評価した。

[実施例 2 ] 尿中酸化ストレス指標に及ぼす影響

尿中酸化ストレス指標として 8— OHdG及び 8— i s oPGF 2 に及ぼす影響を評価した。

1) 8— OHdGに及ぼす影響（図 1)

投薬開始 4及び 8週後、 Con t ro 1群に対して S T Z群で有意な（4週後： p< 0. 01、 8週後： p<0. 05) 8— OHdGの増加が認められ、被験物質 1及び被験物質 2投与により 4週後の上昇が抑制された（ p < 0. 01， STZ +被験物質 1群 v s. STZ群；図 1)。なお、 8週後では両化合物の抑制作用は明確ではなかったが、これは S T Z群の上昇が減弱したためと考えられた。

2) 8— i s oPGF 2 αに及ぼす影響（図 2)

投薬開始 4及び 8週後、 Con t r ο 1群に対して STZ群で有意な（ρ<0. 01) 8- i s oPGF 2 αの増加が認められ、被験物質 1及び被験物質 2の投与により抑制された（4週後： ρく 0. 01， STZ+被験物質 1群、 STZ+被験物質 2群 V s. STZ群；図 2 a/8週後： ρく 0. 05， S T Z +被験物質 1群 v s . STZ群；図 2 b)。

[実施例 3] 腎臓組織 NAD (P) Hォキシダーゼ及び酸化ストレス指標に及ぼす影響投薬開始 8週後、腎臓組織 NAD (P) Hォキシダーゼ構成蛋白（N〇X4、 g p 9 l phox、 p 22phox) (図 3 a, b, c)及び酸化ストレス指標 (8-OHdG) (図 4) に及ぼす影響を免疫染色により評価した。図 3は、ハムスター S t r e p t o z o t o c i n負荷モデルにおける腎臓組織 NOX4 (a)、 gp91 phox (b)、 p 21 pho x (c) 発現亢進に対する被験物質 1及び被験物質 2の抑制作用（投薬開始 8週目）を示す。図 4は、ハムスター S t r ep t o z o t oc i n負荷モデルにおける腎臓組織 8-OHd G発現亢進に対する被験物質 1及び被験物質 2の抑制作用（投薬開始 8週目）を示す。

その結果、被験物質投与により、病態群で見られた NAD (P) Hォキシダーゼ発現亢進（図 3 a， b, c) および酸化ストレス亢進（図 4) の著明な改善が認められた。これらの結果から、被験物質 1及び被験物質 2は、酸化ストレス抑制剤として有効であることが示された。

Claims

請求の範囲

1. 4- (1 - ((4一メチルベンゾチォフェン一 3—ィル）メチル）ベンズイミダゾールー 2—ィルチオ）ブタン酸またはその塩を有効成分として含有する、酸化ストレス抑制剤。

2. 4- (1 - ((ナフ夕レン一 1一ィル）メチル）ベンズイミダゾ一ルー 2—ィルチオ）ブタン酸またはその塩を有効成分として含有する、酸化ストレス抑制剤。