WO2009024016A1 - Composés de 2-(2-oxoindoline-3-ylidène)méthyl-5-(2-hydroxy-3-morpholin-4-yl-propyl)-6,7-dihydro-1h-pyrrol[3,2-c]pyridine-4(5h)-one et utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinase - Google Patents

Composés de 2-(2-oxoindoline-3-ylidène)méthyl-5-(2-hydroxy-3-morpholin-4-yl-propyl)-6,7-dihydro-1h-pyrrol[3,2-c]pyridine-4(5h)-one et utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinase Download PDF

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WO2009024016A1 PCT/CN2008/001388 CN2008001388W WO2009024016A1 WO 2009024016 A1 WO2009024016 A1 WO 2009024016A1 CN 2008001388 W CN2008001388 W CN 2008001388W WO 2009024016 A1 WO2009024016 A1 WO 2009024016A1
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hydroxy
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Peng Cho Tang
Jialiang Yang
Yidong Su
Fuqiang Zhao
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Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd.
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a novel class of pyrrolo-hexa-N-heterocyclic hydroxymorpholine derivatives, in particular the novel structure of 2(2-oxo porphyrin-3-ylidene)methyl-5-(2-hydroxyl) -3-morpholine-4-yl-propyl)-6,7-dihydro-1H-pyrrole[3,2-c]pyridine-4(5H)-one derivative, preparation method thereof and containing the same Pharmaceutical compositions and their use as therapeutic agents, in particular as protein kinase inhibitors. Background technique
  • Cellular signaling is a fundamental mechanism of action. During signal transduction, extracellular stimuli are transmitted to the interior of the cell, which in turn regulates the progression of different cells. These signals regulate a variety of physiological responses, including cell proliferation, differentiation, apoptosis, and exercise, in the form of different types of lytic factors, including growth factors that are dominated by paracrine, autocrine, and endocrine factors. By binding to specific transmembrane receptors, growth factor ligands transmit extracellular signals to intracellular signaling pathways, causing individual cells to respond to extracellular signals. Many signaling processes are reversible processes that utilize protein phosphorylation involving specific protein kinases and phosphorylating enzymes.
  • Protein kinases play a very important role in signal transduction. It transfers the ⁇ -phosphate group of ATP to specific amino acid residues of functional proteins, triggering a series of biological reactions. Protein kinases can be divided into serine-threonine kinases (STKs) and tyrosine kinases (PTKs) according to the amino acid class that acts as a substrate during phosphorylation.
  • STKs serine-threonine kinases
  • PTKs tyrosine kinases
  • VEGF Vascular Endothelial Growth Factor
  • VEGF is the most potent and direct acting angiogenic protein known to be a diffuse endothelial cell-specific mitogen and angiogenic factor (Ferrara N et al., Endocr Rev, 1997, 18, 4-25; Tofimura T et al. 5 Hmn Pharthol, 1998, 29, 986-991).
  • the VEGF family currently known includes six members: VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, and placental production factor (PDF), both in the form of dimeric glycoproteins, all containing rules
  • PDF placental production factor
  • sputum cells express VEGF at the level of sputum, and also found that tumor cells also express Flk-1 at high levels, suggesting tumors.
  • the expression of VEGF correlates with the microvessel density of some solid tumors, and the concentration of VEGF in tissues is associated with the prognosis of certain solid tumors, such as breast cancer, lung cancer, prostate cancer, and colon cancer.
  • Hypoxia is known to be an important factor in stimulating VEGF production.
  • Hypoxia-induced VEGF gene expression in tumor cells is not only an increase in gene transcription rate, but also an increase in VEGF mRNA stability.
  • VEGFR-1 / Fit - 1 VEGFR - 2 I Flk-1 I KDR and VEGFR - 4 I Fit - 4
  • VEGFR-1 and VEGFR-2 are cell surface tyrosine kinase receptors. It is mainly located on the surface of tumor vascular endothelial cells.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • VEGFR-2 vascular endothelial growth factor receptor
  • VEGF and VEGFR positively regulate tumor angiogenesis .
  • Gene therapy Ellis LM et al. J Biol Chem 1998, 273, 1052-1057
  • VEGF and VEGFR positively regulate tumor angiogenesis .
  • Anti-VEGF I VEGFR monoclonal antibody Monoclonal antibodies against VEGF and VEGFR can block secreted VEGF and VEGFR, preventing VEGF-induced Endothelial signal transduction inhibits the formation of blood vessels.
  • Soluble VEGFR Soluble VEGFR has only the ability to bind to VEGF, but has no signal transduction function. 5.
  • Guided therapy The two major receptors for VEGF, Fit-1 and Flk-1/KDR, are overexpressed in tumor vascular endothelial cells, whereas VEGFR is almost incapable of escaping in adjacent normal tissue vascular endothelium. Therefore, VEGF and VEGFR provide a specific target for tumor-directed therapy. VEGF can be used in combination with other anti-tumor drugs, toxins, radionuclides, etc. for the targeted treatment of tumors.
  • the object of the present invention is to design an analog having the formula (I) based on the tyrosine kinase inhibitor SU-14813 and the pyrrole hexa-N heterocyclic A derivative having an antitumor effect.
  • the compounds of the present invention have large structural differences from the compounds specifically disclosed in the prior art, and exhibit excellent use effects and effects.
  • the object of the present invention is to provide a pyrrolo-6-N heterocyclic hydroxymorpholine derivative of the general formula (I), namely a novel tyrosine kinase inhibitor 2 (2-oxo porphyrin-3-ylidene) 5-(2-hydroxy-3-morpholine-4-yl-propyl)-6,7-dihydro-1H-pyrrole[3,2-c]pyridine-4 (5H ketones and their Tautomers, enantiomers, physiologically acceptable salts, metabolites and metabolic precursors or prodrugs, and their regulation of protein kinase activity.
  • a novel tyrosine kinase inhibitor 2 (2-oxo porphyrin-3-ylidene) 5-(2-hydroxy-3-morpholine-4-yl-propyl)-6,7-dihydro-1H-pyrrole[3,2-c]pyridine-4
  • Rt, R 2 , R 3 are respectively selected from a hydrogen atom, a halogen, an alkyl group, an aryl group, a heteroaryl group, -OR 5 , -0[C3 ⁇ 4CH 2 0] r R 7 , -NR 5 R 6 , -COR 5 Or -NR 5 COR6 , wherein aryl, heteroaryl, may be substituted by one or more alkyl, decyloxy or halogen;
  • R 5 and each are each independently selected from a hydrogen atom or an alkyl group, wherein the alkyl group may be further selected from one or more selected from the group consisting of an aryl group, a heteroaryl group, a halogenated aryl group, a hydroxyl group, an alkoxy group, an aryloxy group, a carboxylic acid or Substituted by a substituent of a carboxylic acid ester;
  • R 7 is a hydrogen atom or an alkyl group; r is 1 to 6.
  • Typical compounds of the invention include, but are not limited to - PT/CN2008/001388
  • the salt is a salt of a compound of the above formula and an acid selected from the group consisting of malic acid, lactic acid, maleic acid, hydrochloric acid, methanesulfonic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, citric acid, tartaric acid, acetic acid or trifluoroacetic acid. It is preferably malic acid or maleic acid.
  • a pharmaceutical composition comprising a pyrrolo-hexa-N-heterocyclic hydroxymorpholine derivative of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt, carrier or excipient thereof.
  • a method of modulating the catalytic activity of a protein kinase comprising the step of binding a protein kinase to a pyrrole hexa-N heterocyclic hydroxymorpholine derivative of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable thereof Contact with salt, carrier or excipient.
  • This protein kinase is selected from the group consisting of a receptor tyrosine kinase, a non-receptor tyrosine kinase and a silk ammonia Acid-threonine kinase.
  • a pyrrolo-hexa-N heterocyclic hydroxymorpholine derivative of the general formula (I) for the treatment of a disease associated with a protein kinase.
  • the disease is selected from the group consisting of VEGFR-2, EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, PDGFR, c-Kit, c-Met, FGFR or Flt3.
  • the optical compound morpholine amino disubstituted isopropanol (I a) is under the action of 1-hydroxybenzotriazole and N-ethyl-N,-(dimethylaminopropyl)-carbodiimide.
  • 5-carboxymethyl-3-methyl-1H-pyrrole-2,4-dihydroxy acid 2-tert-butyl ester 4-ethyl ester is heated in acetonitrile to give a chiral pyrrole amide dicarboxylic acid diester (lb);
  • the chiral pyrrolamide dicarboxylic acid diester (I b) is heated under reflux with hydrochloric acid to obtain an optically active pyrrolamide ethyl ester (Ic);
  • optically active pyrrole amide ethyl ester (I c) is selectively reduced in anhydrous tetrahydrofuran and borane by heating under reflux to obtain a chiral substituted pyrrole ethyl ester (Id);
  • the chiral substituted pyrrole ethyl ester (Id) is heated and refluxed in ethylene glycol and lithium hydroxide monohydrate to obtain a cyclized product optically pyrrole hexa-N heterocycle (Ie) ;
  • the optically active pyrrole hexavalent N-heterocyclic formaldehyde (I f) is heated in the presence of a base (such as triethylamine, piperidine) with a different fluorenone for 2 to 12 hours to obtain the target of the formula (I).
  • a base such as triethylamine, piperidine
  • Acrylate means a saturated aliphatic hydrocarbon group comprising straight and branched chain groups of 1 to 20 carbon atoms. Preference is given to medium-sized alkyl groups having 1 to 10 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, 2-propyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl and the like. More preferred are lower alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, 2-propyl, n-butyl, isobutyl or t-butyl groups and the like.
  • the alkyl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent may be a halogen, a hydroxyl group, a decyloxy group, an aryl group, a heteroaryl group, a halogenated aryl group, an aryloxy group, a carboxylic acid, a carboxylic acid ester. , -OR 5 , -0[CH 2 CH 2 0] r R 7 , -NR 5 R 6 , -COR 5 or -NR 5 COR6.
  • Aryl means a group having at least one aromatic ring structure, that is, an aromatic ring having a conjugated ⁇ -electron system, including a carbocyclic aryl group, a heteroaryl group, and a biaryl group.
  • the aryl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent may be halogen, alkoxy, alkyl, hydroxy, aryloxy, carboxylic acid, carboxylic acid ester, -OR 5 , -0 [CH 2 CH 2 0] r R 7 , -NR 5 R 6 , -COR 5 or -NRsCOR ⁇
  • Heteroaryl means an aryl group having from 1 to 3 heteroatoms as ring atoms, the remaining ring atoms being carbon, and heteroatoms including oxygen, sulfur and nitrogen.
  • the ring may be a 5- or 6-membered ring.
  • Examples of the heterocyclic aryl group include a furyl group, a thienyl group, a pyridyl group, a pyrrole, an N-alkylpyrrolyl group, a pyrimidinyl group, a pyrazinyl group, an imidazolyl group and the like.
  • the heteroaryl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent may be halogen, alkoxy, Alkyl, hydroxy, aryloxy, carboxylic acid, carboxylic acid ester, -OR 5 , -0[CH 2 CH 2 0] r R 7 , -NR 5 R 6 , -COR 5 or -NR 5 COR 6 .
  • Haldroxy means an -OH group.
  • Alkoxy means -0-(fluorenyl) and -0-(unsubstituted cycloalkyl). Representative examples include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy, and the like.
  • the oxime group may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent may be halogen, hydroxy, decyloxy, aryl, heteroaryl, haloaryl, aryloxy, carboxylic acid, carboxylic acid ester. , -OR 5 , -0[CH 2 CH 2 0] r R 7 , -NR 5 R 6 , -COR 5 or -NR 5 COR 6 .
  • Aryloxy means -o-aryl and -o-heteroaryl, and aryl and heteroaryl are as defined above. Representative examples include, but are not limited to, phenoxy, pyridyloxy, furanoxy, thienyloxy, pyrimidinyloxy, pyrazinyloxy, and the like, and derivatives thereof.
  • the aryloxy group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent may be halogen, alkoxy, alkyl, hydroxy, aryloxy, carboxylic acid, carboxylic acid ester, -OR 5 , -0[CH 2 CH 2 0] r R 7 , -NR 5 R6, -COR 5 or -NR 5 COR 6 .
  • Halogen means fluoro, chloro, bromo or iodo, preferably fluoro or chloro.
  • Haloalkoxy means -0-(halofluorenyl). Representative examples include, but are not limited to, trifluoromethoxy, tribromomethoxy, and the like.
  • Optional or “optionally” means that the event or environment described subsequently may, but need not, occur, including where the event or environment occurs or does not occur.
  • optionally substituted with an alkyl group means that a thiol group may, but need not be, which includes the case where the aryl group is substituted with an alkyl group and the case where the aryl group is not substituted with an alkyl group.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture of one or more of the compounds described herein, or a physiologically/pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, with other chemical components, such as a physiological/pharmaceutically acceptable carrier. And excipients.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to facilitate the administration of the compound to the organism.
  • optically active compound morpholine aminodisubstituted isopropanol (prepared according to the preparation of US20040209937), the optical compound morpholine aminodisubstituted isopropanol (la) in 1-hydroxybenzotriazole under nitrogen atmosphere Under the action of azole and N-ethyl-N,-(dimethylaminopropyl)-carbodiimide with 5-carboxymethyl-3-methyl-1H-pyrrole-2,4-dihydroxy acid 2-un
  • the butyl ester 4-ethyl ester is heated under reflux in acetonitrile to obtain a chiral pyrrole amide dicarboxylic acid diester (lb); under a argon atmosphere, the chiral pyrrole amide dicarboxylic acid diester (lb) is heated under reflux with hydrochloric acid to obtain Optically active pyrrolidinium ester (Ic); further, optically active pyrrole amide
  • the target compound chiral pyrrole hexa-N heterocyclic hydroxymorpholine derivative is shown.
  • the key technologies are the selective reduction substrate (Ic) of borane and the catalytic cyclization substrate (Id) of the basic catalyst lithium hydroxide monohydrate, especially the latter. No related literature reports on this pyrrole hexavalent A method of constructing a lactam structure.
  • the invention further relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically effective amount of a compound of the formula (I) according to the invention or a salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the present invention further relates to a compound of the formula (I) of the present invention or a salt thereof for preparing a protein kinase inhibitor 8 uses.
  • BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention is further described in the following examples, but these examples are not intended to limit the scope of the invention.
  • the structure of the compound was determined by nuclear magnetic resonance (MR) or mass spectrometry (MS).
  • the NMR shift ( ⁇ ) is given in parts per million (ppm).
  • NMR was measured using a Bruker AVANCE-400 nuclear magnetic apparatus.
  • the solvent was deuterated chloroform (CDC1 3 ), deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-D 6 ), internal standard tetramethylsilane (TMS), chemical shift. It is given in units of l (T 6 (ppm).
  • the MS was measured using a FINNIGAN LCQAd (ESI) mass spectrometer.
  • Thin layer silica gel is used in Yantai Yellow Sea HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate.
  • DMSO-D 6 deuterated dimethyl sulfoxide
  • the reaction was monitored by TLC until the starting material disappeared and the reaction was stopped.
  • the reaction system was adjusted to a pH of about 7 with a 10 N sodium hydroxide solution in a dry ice-acetone bath, and a large amount of solid was precipitated.
  • the mixture was filtered and the filter cake was washed with ethanol.
  • the filtrate was evaporated under reduced pressure.
  • the pH was adjusted to about 10 with 10 N sodium hydroxide solution, extracted with dichloromethane (150 ml ⁇ 3), and the organic phase was combined.
  • Example 1 of the present invention The sixth step reaction of Example 1 of the present invention was repeated except that the compound (R)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 1 was used. 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde If and 5-chloro-1,3-dihydro- The indole-2-one was used as the starting material to give the title product (R,Z)-2-(5-chloro-2-oxo-1,2-dihydro-indole-3-methyl)-5- ( 2-hydroxy-3-morpholine-4-yl-propyl)-3-methyl-1,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[3,2-c]pyridine-4-one 2 (42 Mg, yellow solid), Yield: 64%.
  • Example 1 of the present invention was repeated except that the compound (R)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 1 was used. 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde If and 5-bromo-1,3-dihydro-
  • the indole-2-one is used as a starting material to give the title product (R,Z)-2-(5-bromo-2-oxo-1,2-dihydro)-indol-3-ylmethyl)-5-(2 -hydroxy-3-morpholine-4-yl-propyl)-3-methyl-1,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one 4 (24 mg , yellow solid), Yield: 50%.
  • the ice bath was removed, and the reaction system was reacted in an oil bath at 60 ° C for about 1.5 hours.
  • the reaction was monitored by thin layer chromatography until the starting material disappeared and the reaction was stopped.
  • the reaction system was adjusted to a pH of about 7 with a 10 N sodium hydroxide solution in a dry ice-acetone bath, and a large amount of solid precipitated.
  • the mixture was filtered and the filter cake was washed with ethanol.
  • the filtrate was evaporated under reduced pressure, and the pH was adjusted to about 10 with a 10 N sodium hydroxide solution.
  • the mixture was extracted with dichloromethane (150 ml ⁇ 3) and the organic phase was washed with saturated sodium chloride solution (100 ml ⁇ l).
  • Example 5 of the present invention The sixth step reaction of Example 5 of the present invention was repeated except that the compound (S)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 5 was used. 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde 5f and 5-chloro-1,3-dihydro-
  • the title product (S,Z)-2-(5-chloro-2-oxo-1,2-dihydro-B-indol-3-methyl)-5 was obtained as the starting material.
  • Example 5 of the present invention was repeated except that the compound (S)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 5 was used.
  • Example 5 of the present invention was repeated except that the compound (S)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 5 was used.
  • 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1 H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carboxaldehyde 5f and 5-bromo-1,3-dihydrogen -B-indole-2-one as starting material the title product (S,Z)-2-(5-bromo-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-methyl)-5 -(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl)-3-methyl-1,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one 8 (49 mg, yellow solid), Yield: 78%.
  • Acetic acid (5-fluoro-2-oxo-2,3-dihydro-1 ⁇ - ⁇ ⁇ -6-carbamoyl)-methyl ester 5-fluoro-6-amino-2-indanone at room temperature 9d (500 mg, 3.0 mmol) was dissolved in 10 ml of tetrahydrofuran with stirring, 0.4 ml of pyridine was added, and the mixture was stirred uniformly, and the reaction system was cooled to about -40 ° C with acetone and dry ice. Add acetoxyacetyl chloride (420 mg, 3.0 mmol) to 10 ml of tetrahydrofuran, dissolve it and add it to the cooled reaction system.
  • Hexahydropyridine 50 ⁇ l, 0.5 n mol was added to the reaction mixture, and the reaction was stirred in an 80 ⁇ oil bath for 2 hours in the dark. The reaction was monitored by thin layer chromatography until the starting material disappeared and the reaction was stopped.
  • 5-Fluoro-6-amino-1,3-dihydro-2-indanone 9d (2.26 g, 13.6 mmol) was dissolved in 40 ml of ethanol with stirring at room temperature, and the solution was cooled to 0 with an ice bath. At ° C, 4-fluoro-benzaldehyde (1.5 ml, 13.6 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • the reaction mixture was suction-dried to give the titled product: ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt; ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt; ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt; ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt; ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt; ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt;
  • 5-Fluoro-6-amino-2-indanone 9d (2.028 g, 12.2 mmol) was dissolved in 30 ml of tetrahydrofuran with stirring at room temperature, 1.3 ml of pyridine was added, and the reaction system was cooled to a dry ice-ethanol bath. About 50 °C. Methoxyacetyl chloride (1.35 g, 12.5 mmol) was dissolved in 20 nil of tetrahydrofuran with stirring, and added dropwise to the above reaction system. After the addition, the ice-ethanol bath was removed, the temperature of the reaction system was naturally raised to room temperature, and stirred overnight.
  • Example 1 of the present invention was repeated except that the compound (R)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 1 was used. 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrole [3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde If and 5-fluoro-6-(4-fluoro-amino)-1,3-dihydro-indole-2-one 10a are used as starting materials to give the title product ( R,Z)-2-[5-fluoro-6-(4-fluoro-amino)-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylmethyl]-5-(2- Hydroxy-3-phenylmorpholine-4-yl-propyl)-3-methyl-1,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one 15 (53 mg, Dark red solid), Yield: 65.6%.
  • Example 1 of the present invention was repeated except that the compound (R)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 1 was used.
  • 5-fluoro-6-methoxyacetamido 2-nonanone 13a gave the title product (R,Z)-N- ⁇ 5-fluoro-3-[5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl)-3 -methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2-methylene]-2-oxo-2,3-di Hydrogen-1H-indol-6-yl ⁇ -2-methoxy-acetamide 16 (60 mg, yellow solid), yield: 87%.
  • Example 1 of the present invention was repeated except that the compound (R)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 1 was used. 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde If and N-(5-fluoro-2-oxo -2,3-Dihydro-1H-indol-6-yl)-2-hydroxy-2-methyl-propionamide lib as the starting material to give the title product (R,Z)-N- ⁇ 5-fluoro-3 -[5-(2-hydroxy-3-morpholine-4-yl-propyl)-3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3, 2-c]pyridine-2-methylene]-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-6-yl ⁇ -2-heptyl-2-methyl-
  • Example 1 of the present invention was repeated except that the compound (R)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 1 was used. 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde If and 4-pyrimidin-4-yl-1,3 -Dihydro-n-indol-2-one as starting material to give the title product (R,Z)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl)-3-methyl-2- (2-oxo-4-pyrimidin-4-yl-1,2-dihydro-indol-3-methyl)-1,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[3,2-c Pyridin-4-one 18 (58 mg, yellow solid), Yield: 72.5 %.
  • Example 5 of the present invention was repeated except that the compound (S)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 5 was used.
  • Example 5 of the present invention was repeated except that the compound (S)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 5 was used.
  • 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde 5f and 5-(4-methoxy-phenyl -1,3-Dihydro-indol-2-one as starting material the title product (S,Z)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl)-2-[ 5-(4-methoxy-phenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-methylene]-3-methyl-1,5,6,7-tetrahydro - Pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one 21 (53 mg, orange-yellow solid), Yield: 87.2%.
  • Example 5 of the present invention was repeated except that the compound (S)-5-(2-hydroxy-3-morphinolin-4-yl-propyl) obtained in the fifth step of Example 5 was used.
  • 3-methyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridine-2-carbaldehyde 5f and 4-bromo-1,3-dihydro- B-indole-2-one is used as a starting material to give the title product (S,Z)-2-(4-bromo-2-oxo-1,2-dihydro-indole-3-methylene)-5- (2-hydroxy-3-morpholine-4-yl-propyl)-3-methyl-1,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one 22 ( 43 mg, orange solid), Yield: 74.5%.
  • the in vitro cell assay described below determines the anti-angiogenic activity and the proliferative activity of the test compound against VEGFR-expressing tumor cells, and its activity can be expressed by the IC 5G value.
  • the general protocol for such an experiment is as follows: first select human tumor cells with high expression of VEGFR, inoculate in 96-well culture plates at a suitable cell concentration (exp 5000 cells/ml medium), and then culture the cells in a carbon dioxide incubator. When they grow to 85% confluence, the medium is changed to a medium containing a series of concentration gradients (generally 6 to 7 concentrations) of the test compound solution, and the plate is returned to the incubator for 72 hours.
  • test compound was tested for its ability to inhibit cell proliferation using the sulforhodamine B (SRB) method.
  • SRB sulforhodamine B
  • DMEM/F12 cell culture medium (Gibco, catalog 12400-024)
  • test program to test the compounds of the invention for inhibition of cell proliferation of HUVEC cells 50 value IC.
  • HUVEC cells were cultured in a 100 mm corning plate in a growth medium (DMEM/F12 + 10% fetal bovine serum as a medium) (37 V, 5 % C0 2 ) until the cells were fully confluent;
  • a growth medium DMEM/F12 + 10% fetal bovine serum as a medium
  • test compound 4. Dissolve the test compound in DMSO, configure 20 mM mother liquor, and then dilute the mother liquor with DMSO to obtain a series of solutions of the test compound, ie 2 mM, 1 mM, 0.2 mM, 20 ⁇ , 2 ⁇ , 0.2 ⁇ ;
  • 5 ⁇ 1 DMSO compound solution and 95 ⁇ 1 culture medium ensure that the concentration of HUVEC cells exposed to DMSO solution does not exceed 0.5%, and vortex mixing;
  • the medium is changed to a new medium supplemented with DMEM/F12 +10% fetal bovine serum, and 180 ⁇ l of the culture medium and 20 ⁇ M are added to each well.
  • the test compound solution prepared in the fifth step. In the negative control cell group, 20 ⁇ M medium containing 0.5% DMSO was added.
  • the final concentration of HUVEC cells exposed to the test compound solution is 100 ⁇ , 10 ⁇ , 5 ⁇ , 1 ⁇ , 0.1 ⁇ , 0.01 ⁇ , and 0.001 ⁇ ;
  • the mixed colorant is dissolved in a volume of Sulforhodamine B.
  • the solubilizing solution (10 mM Tris) is the same volume as the original medium.
  • the plate is placed at room temperature for 5 minutes, and the mixture is slowly stirred with a shaker to accelerate the mixing with the dye. ;
  • the absorbance values are the absorbance at 565 nm minus the background absorbance at 96 nm for 690 nm;
  • IR ⁇ (absorbance value of the control group - absorbance value of the drug group) / % absorbance value of the control group.
  • the IC 50 value can be calculated from the ratio of compound inhibition rates at different concentrations.
  • the biochemical activity of the compound of the present invention was measured by the above test, and the IC50 values measured are shown in the following table.
  • bovine serum albumin (BSA, Ca ochem #136593) PBS-T buffer
  • Stop reaction buffer 50 mM EDTA, pH 8.0
  • DELFIA® Streptavidin 96-well yellow plate (PerkinElmer Life Sciences #AAAND-0005)
  • g. Recombinant human VEGF-R2 kinase (50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 15 mM glutamyl Cysteinyl glycine and 20% glycerol (Cell signaling technology #7787)
  • h. lO mM ATP solution Cell signaling technology #9804
  • test compound Dilute the test compound to the desired final concentration in DMSO, adding 1 ⁇ of the test compound, a negative control, and a blank control (all of which do not accept any test compound) in each test;
  • reaction stop buffer 50 mM EDTA, pH 8.0
  • 25 ⁇ M reaction solution and 75 ⁇ dH 2 0 to each well of a 96-well streptavidin coated plate. Shake for 60 minutes at room temperature;
  • the IC 50 value is calculated from the IR values of a series of concentration gradients of the test compound. Activity of the compounds of the invention
  • the biochemical activity of the compound of the present invention was measured by the above test, and the measured IC 5Q value is shown in the following table.

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Description

-(2-氧代吲哚啉 -3-亚基)甲基 -5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基丙基 )-6 7-二氢 -1H-吡咯 [3 2-C]吡啶 -
4 (5H) -酮衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途 技术领域
本发明涉及一类新的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物，特别是结构新颖 的 2(2-氧代吲哚啉 -3-亚基)甲基- 5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -6,7-二氢 -1H-吡咯 [3,2-c]吡啶 -4(5H)-酮衍生物， 其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作 为治疗剂特别是作为蛋白激酶抑制剂的用途。 背景技术
细胞的信号传导是一种基础的作用机制，在信号传导过程中，来自细胞外的刺 激被传递到细胞内部， 进而调节不同细胞的进程。 这些信号可调节多种生理响应， 包括细胞增殖、 分化、 调亡和运动等， 它们以不同种类溶解因子形式存在， 包括 以旁分泌因子、 自分泌因子和内分泌因子为主的生长因子。 通过与特定跨膜受体 结合， 生长因子配体将细胞外信号传递到细胞内信号途径， 从而引起个体细胞对 细胞外信号的反应。 很多信号传递过程是利用蛋白磷酸化的可逆过程， 涉及到特 定蛋白激酶和磷酰化酶。
蛋白激酶 (Protein kinases, PKs)在信号传导过程中具有非常重要的作用。 它 能将 ATP的 γ -磷酸基转移到功能蛋白的特定氨基酸残基上，引发一系列生物反应。 按照在磷酸化过程中作为底物的氨基酸类别， 蛋白激酶可分为丝氨酸 -苏氨酸激酶 (STKs)和酪氨酸激酶 (PTKs)
酪氨酸磷酸化机理普遍存在于信号传导过程中，调控着诸如有丝分裂、细胞周 期进程和分化等多种细胞功能（Hanks and Hunter, 1995, FASEB J. 9 : 576-596 ; Cadena and Gill, 1992, FASEB J. 6 : 2332-2337 ; Schlessinger and Ullrich, 1992, Neuron 9 : 383-391 ; Vandergeer et al. , 1994, A . Rev. Cell Biol. 10 : 251-337)。 当蛋白酪氨酸激酶在变异、 失控的情况下表达， 或在不正常的高水 平下表达时， 可以将正常细胞转变为肿瘤显型（neoplastic phenotype) (Chiao et al. , 1994, Cancer Metast. Rev. 9 : 63-80 ; Hunter, 1991 Cell 64 : 249- 270) 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF)是主要作 用于血管内皮细胞的生长因子， 具有促进内皮细胞增殖、 增加微血管通透性、 诱 导血管生成等多种功能（Hanks and Hunter, 1995, FASEB J. 9 : 576-596)。 VEGF是 目前所知最有效的、 直接作用的血管生成素蛋白（angiogenic protein) , 是一种 可扩散的内皮细胞特异性有丝分裂素和血管生长因子 (Ferrara N et al.， EndocrRev, 1997， 18, 4-25； Tofimura T et al.5 Hmn Pharthol, 1998, 29, 986-991)。 目前所知 VEGF家族包括 6个成员： VEGF- A、 VEGF- B、 VEGF- C、 VEGF- D、 VEGF- E和胎盘生成因 子 (PDF) , 均为二聚体糖蛋白形式， 且均含有规则的 8个胱氨酸残基的空间构型， 具特异性， 被认为是 "胱氨酸结" （cysteine knot)。 李凌等（李凌等. 生物化学 与生物物理学报， 2002, 34(1), 21-27)发现恶性肿瘤细胞髙水平表达 VEGF, 并且 还发现肿瘤细胞也高水平表达 Flk-1， 提示肿瘤局部存在 VEGF自分泌与旁分泌通 路。 VEGF的表达与一些实体瘤的微血管密度具有相关性， 并且组织中 VEGF的浓度 与某些实体瘤的预后有关， 如乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌和结肠癌。 已知缺氧是刺 激 VEGF产生的重要因素， 在肿瘤细胞中缺氧诱导 VEGF基因表达不光是基因转录率 的提高， 还有 VEGF mRNA稳定性的增强。 VEGFR家族已明确有 VEGFR- 1 / Fit - 1、 VEGFR- 2 I Flk-1 I KDR和 VEGFR- 4 I Fit- 4 3种， VEGFR- 1和 VEGFR-2为细胞表面酪 氨酸激酶受体， 主要位于肿瘤血管内皮细胞表面。 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF)及血管内皮生长因子受体 (vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)在肿瘤新生血管形成过程中起着 重要作用成为抗肿瘤生物治疗的一个重要靶点。
目前以 VEGF和 VEGFR为靶点的肿瘤治疗主要有以下五种： 1.基因治疗 (Ellis LM et al . J Biol Chem 1998, 273， 1052-1057)： VEGF和 VEGFR对于肿瘤血管新生起正 调节作用。 通过基因治疗， 使 VEGF和 VEGFR表达减少， 或阻断其信号转导通路， 从 而抑制二者发挥生物学活性。 2.抗 VEGF I VEGFR单克隆抗体 (Gordon M et al . Proc Am Soc Clin Oneol, 1998, 17, 2IIa)： 应用 VEGF及 VEGFR的单克隆抗体， 可封闭已 分泌的 VEGF及 VEGFR, 阻止 VEGF诱发的内皮信号转导， 抑制血管的形成。 3. 小分 子抑制物：由 sugen公司开发研制的 su系列化合物。 4. 可溶性 VEGFR: 可溶 VEGFR仅 具有与 VEGF结合能力， 却无信号转导功能。 5. 导向治疗： VEGF的两个主要受体 Fit 一 1和 Flk— 1 / KDR在肿瘤血管内皮细胞中过度表达， 而 VEGFR在相邻正常组织血管 内皮中几乎不能捡出。 因此， VEGF和 VEGFR为肿瘤的导向治疗提供了特异性较高的 靶点， VEGF可与其他抗肿瘤药物、 毒素、 放射性核素等联用， 用于肿瘤的导向治 疗。 本发明的目的在于在酪氨酸激酶抑制剂 SU-14813 以及具有抗肿瘤效果的吡咯 并六元 N杂环 A衍生物的基础上， 设计了具有通式 (I)所示的类似物。 本发明的化 合物同现有技术中具体公开的化合物具有较大的结构差异， 且表现出优良的使用 效果和作用。
Figure imgf000004_0001
SU-14813 A 发明内容
本发明的目的在于提供通式 (I)的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物，即新 型酪氨酸激酶抑制剂 2(2-氧代吲哚啉 -3-亚基）甲基 -5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -6,7-二氢 -1H-吡咯 [3,2-c]吡啶 -4(5H 酮类化合物以及它们的互变异构体、 对映 体、 生理上可以接受的盐、 代谢产物和代谢前体或者前药， 以及它们调节蛋白激 酶的活性。
Figure imgf000004_0002
( I )
其中：
Rt、 R2、 R3、 分别选自氢原子、 卤素、 烷基、 芳基、 杂芳基、 -OR5、 -0[C¾CH20]rR7、 -NR5R6、 -COR5或 -NR5COR6 ， 其中芳基、 杂芳基、 可以进一 歩被一个或多个烷基、 垸氧基或者卤素所取代；
R5和 各自分别选自氢原子或烷基， 其中烷基可以进一步被一个或多个选自 芳基、 杂芳基、 卤代芳基、 羟基、 烷氧基、 芳氧基、 羧酸或者羧酸酯的取代基所 取代；
R7是氢原子或者烷基； r是 1〜6。
本发明典型化合物包括但不限于-
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000006_0001
P T/CN2008/001388
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000008_0001
或其药学上可接受的盐。
其中， 所述的盐为上述通式化合物与选自以下的酸形成的盐： 苹果酸、 乳酸、 马来酸、 盐酸、 甲磺酸、 硫酸、 磷酸、 柠檬酸、 酒石酸、 乙酸或三氟乙酸， 优选 为苹果酸或马来酸。
在本发明的另一个方面， 是一种药物组合物， 含有通式 (I)的吡咯并六元 N杂 环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接受的盐、 载体或赋形剂。
在本发明的另一个方面，涉及的是蛋白激酶催化活性的调节方法，包括使蛋白 激酶与通式 (I)的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接受的盐、 载体或赋形剂接触。 此蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、 非受体酪氨酸激酶和丝氨 酸-苏氨酸激酶。
在本发明的另一个方面， 是含有通式 (I)的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍 生物在治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。 其中所述疾病选自与 VEGFR-2, EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, PDGFR, c-Kit, c- Met, FGFR或 Flt3相关的 疾病。
在本发明的另一个方面是通式 (I)的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或 盐的制备方法， 包括以下步骤：
氮气保护下， 旋光化合物吗啡啉氨基双取代异丙醇（ I a)在 1-羟基苯并三唑和 N -乙基 _N，- (二甲氨基丙基)-碳二亚胺作用下与 5-羧甲基 -3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二 羟酸 2-叔丁酯 4-乙酯在乙腈中加热得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯（lb);
Figure imgf000009_0001
氩气氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯（ I b)在乙醇中与盐酸加热回流得到旋光吡 咯酰胺乙酯（Ic);
Figure imgf000009_0002
(l b) (Ic)
进一步，旋光吡咯酰胺乙酯（ I c)在无水四氢呋喃中和硼烷加热回流选择性还原 得到手性取代吡咯乙酯（Id);
Figure imgf000009_0003
(I c) (Id)
接下来，在氩气氛下，手性取代吡咯乙酯（Id)在乙二醇中和一水合氢氧化锂加 热回流， 得到环合产物旋光吡咯并六元 N杂环（Ie);
Figure imgf000009_0004
室温下，旋光吡咯并六元 N杂环（I e)在无水二氯甲烷中与三氯氧磷和 N' N -二 甲基甲酰胺发生甲酰化反应， 生成旋光吡咯并六元 N杂环甲醛（ I f)；
Figure imgf000010_0001
最后，旋光吡咯并六元 N杂环甲醛（I f)在碱 (如三乙胺，哌啶)存在下与不同的 吲哚酮加热 2〜12小时即得到通式（I )所示的目标化合物手性的吡咯并六元 N杂环 羟基吗啡啉衍生物；
Figure imgf000010_0002
其中 、 R2、 R3和 的定义同上。 发明的详细说明
除非有相反陈述， 下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。 "烧基 "指饱和的脂族烃基团， 包括 1至 20个碳原子的直链和支链基团。 优 选含有 1至 10个碳原子的中等大小烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正丁 基、 异丁基、 叔丁基、 戊基等。 更优选的是含有 1至 4个碳原子的低级烷基， 例 如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或 未取代的， 当被取代时， 取代基可以为卤素、 羟基、 垸氧基、 芳基、 杂芳基、 卤 代芳基、 芳氧基、 羧酸、 羧酸酯、 -OR5、 -0[CH2CH20]rR7、 -NR5R6、 -COR5或 -NR5COR6。
"芳基"指具有至少一个芳环结构的基团， 即具有共轭的 π电子体系的芳环， 包括碳环芳基、 杂芳基和联芳基。 芳基可以是被取代的或未被取代的， 当被取代 时， 取代基可以为卤素、 烷氧基、 烷基、 羟基、 芳氧基、 羧酸、 羧酸酯、 -OR5、 -0[CH2CH20]rR7、 -NR5R6、 -COR5或 -NRsCOR^
"杂芳基"指具有 1至 3个杂原子作为环原子， 其余的环原子为碳的芳基， 杂原子包括氧、 硫和氮。 所述环可以是 5元或 6元环。 杂环芳基基团的实例包括 呋喃基、 噻吩基、 吡啶基、 吡咯、 N-烷基吡咯基、 嘧啶基、 吡嗪基、 咪唑基等。 杂芳基可以是被取代的或未被取代的， 当被取代时， 取代基可以为卤素、 烷氧基、 烷基、 羟基、 芳氧基、 羧酸、 羧酸酯、 -OR5、 -0[CH2CH20]rR7, -NR5R6、 -COR5 或 -NR5COR6。
"羟基"指 -OH基团。
"烷氧基"指 -0- (垸基） 和 -0- (未取代的环烷基）。 代表性实例包括但不限 于甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 丁氧基、 环丙氧基、 环丁氧基、 环戊氧基、 环己氧 基等。 垸氧基可以取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基可以为卤素、 羟基、 垸氧基、芳基、杂芳基、卤代芳基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、 -OR5、 -0[CH2CH20]rR7、 -NR5R6、 -COR5或 -NR5COR6。
"芳氧基"指 -o-芳基和 -o-杂芳基， 芳基和杂芳基定义同上。代表性实例包括 但不限于苯氧基、 吡啶氧基、 呋喃氧基、 噻吩氧基、 嘧啶氧基、 吡嗪氧基等及其 衍生物。 芳氧基可以取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基可 为卤素、 烷氧 基、烷基、羟基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、 -OR5、 -0[CH2CH20]rR7、 -NR5R6、 -COR5 或 -NR5COR6。
"卤素"指氟、 氯、 溴或碘， 优选氟或氯。
"卤代烷氧基"指 -0- (卤代垸基）。代表性实例包括但不限于三氟甲氧基、三 溴甲氧基等。
"羧酸"指 (烷基) C(=0)OH。
"羧酸酯"指 (烷基) C(=0)0(烷基)。
"可选"或 "可选地"意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生， 该说 明包括该事件或环境发生或不发生的场合。 例如， "可选被烷基取代的芳基"意味 着垸基可以但不必存在， 该说明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代 的情形。
"药物组合物"表示一种或多种本文所述化合物或其生理学上 /药学上可接受 的盐或前体药物与其他化学组分的混合物， 其他组分例如生理学 /药学上可接受的 载体和赋形剂。 药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。 本发明化合物的合成方法 为了完成本发明的目的， 本发明采用如下技术方案：
本发明通式 (I)所述的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或其盐的制备方
Figure imgf000012_0001
以旋光化合物吗啡啉氨基双取代异丙醇 (la) (根据专利 US20040209937制备所 得)为起始原料，氮气氛下，旋光化合物吗啡啉氨基双取代异丙醇 (la)在 1-羟基苯并 三唑和 N-乙基 -N，- (二甲氨基丙基) -碳二亚胺作用下与 5-羧甲基 -3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸 2-叔丁酯 4-乙酯在乙腈中加热回流得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯 (lb); 氩气氛下， 手性吡咯酰胺二羧酸二酯 (lb)在乙醇中与盐酸加热回流得到旋光 吡咯酰胺乙酯 (Ic);进一步，旋光吡咯酰胺乙酯 (Ic)在无水四氢呋喃中和硼垸加热回 流选择性还原得到手性取代吡咯乙酯 (Id); 接下来， 在氩气氛下， 手性取代吡咯乙 酯 (Id)在乙二醇中和一水合氢氧化锂加热回流，得到环合产物旋光吡咯并六元 N杂 环 (Ie); 室温下， 旋光吡咯并六元 N杂环 (Ie)在无水二氯甲烷中与三氯氧磷和 N，N- 二甲基甲酰胺发生甲酰化反应， 生成旋光吡咯并六元 N杂环甲醛 (If); 最后， 旋光 吡咯并六元 N杂环甲醛 (If)在碱 (如三乙胺， 哌啶)存在下与不同的吲哚酮加热 2〜 12小时即得到通式 (I)所示的目标化合物手性的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉衍生 物。 其中的关键技术是硼烷的选择性还原底物 (Ic)以及碱性催化剂一水合氢氧化锂 的催化环合底物 (Id), 特别是后者， 无相关文献报道此类吡咯并六元内酰胺结构的 构建方法。
本发明还涉及一种药物组合物， 其包括药物有效量的如本发明通式 (I)所述的 化合物或其盐和药学上可接受的载体。
本发明进一步涉及本发明通式（I)所示化合物或其盐在制备蛋白激酶抑制剂 8 中的用途。 具体实施方式 以下结合实施例对本发明进行进一步描述，但这些实施例并不限制着本发明的 范围。
在以下的实施例中， 化合物的结构是通过核磁共振 ( MR)或质谱 (MS)来确定 的。 NMR位移 (δ)以百万分之一 (ppm)的单位给出。 NMR 的测定是用 Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代氯仿 (CDC13)、氘代二甲基亚砜 (DMSO-D6)， 内标为四甲基硅烷 (TMS)， 化学位移是以 l(T6(ppm)作为单位给出。
MS的测定用 FINNIGAN LCQAd (ESI)质谱仪。
薄层硅胶使用烟台黄海 HSGF254或青岛 GF254硅胶板。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶 200~300目硅胶为载体。
DMSO-D6: 氘代二甲基亚砜；
CDC13: 氘代氯仿； 制备实施例:
实施例 1
(R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1，2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基- 1 ,5,6,7-四氢-吡咯并 [3 ,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
第一步
5-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸 (S)-2-叔丁酯 4-乙酯
室温下， 将 (S)-l-氨基 -3-吗啡啉 -4-基-异丙醇 la(15.125 g， 94.5 mmol), 5-羧甲 基 -3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸 2-叔丁酯 4-乙酯 (32.34 g， 104 mmol), 1-羟基苯并 三唑 (25.5 g, 189.06 mmol), N-乙基 -N，- (二甲氨基丙基) -碳二亚胺 (36.2 g, 189.06 mmol)搅拌下溶解于 450 ml乙腈中， 再于 50°C油浴反应 3小时。 薄层色谱监测反 应至原料基本消失， 停止反应。 反应液减压下蒸除溶剂， 加入 150 ml饱和氯化钠 溶液， 用乙酸乙酯和四氢呋喃的混和溶剂 (V:V=4:1)萃取 (200 mlx5)， 有机相用饱和 氯化钠溶液洗涤 (lOO mlxl), 无水硫酸镁干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓缩得到 75 g油状物。油状物柱层析得到标题产物 5-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) - 甲基] -3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸（S)-2-叔丁酯 4-乙酯 lb(30 g， 浅褐色固体)， 产 率： 70%。
MS m/z (ESI): 454.4(M+l)o 第二步
(S)-2-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 氩气保护下，将 5-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-3-甲基 -1H- 吡咯 -2,4-二羟酸（S)-2-叔丁酯 4-乙酯 lb(25.7 g， 56.7 mmol)搅拌下溶解于 70 ml无 水乙醇中， 边用冰浴冷却边滴加 71 ml盐酸 (12 N)。 加毕， 撤去冰浴， 反应体系于 60°C油浴中反应约 1.5小时。薄层色谱监测反应至原料基本消失， 停止反应。 反应 体系于干冰 -丙酮浴中用 10 N的氢氧化钠溶液调节 pH至 7左右，有大量固体析出。 混合物过滤， 滤饼用乙醇洗涤。 滤液减压下蒸除溶剂， 用 10 N的氢氧化钠溶液调 节 pH至 10左右， 二氯甲烷萃取 (150 mlx3)， 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠溶 液洗涤 (100 mlxl), 无水硫酸镁干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓缩得到标题产物 (S)-2-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 lc(16.9 g, 深绿色油状物)， 产率： 84%。
MS m/z (ESI): 354.3(M+1)。 第三步
(S)-2-[2-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基) -乙基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 氩气保护下， 将 (S)-2-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基氨基甲酰基)-甲基] -4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 lc(16.9 g， 47.9 mmol)溶解于 143.6 ml干燥的四氢呋喃中，冰 浴冷却，加入硼垸的四氢呋喃溶液 (143.6 ml, 1 mol/L, 143.6 mmol) 加毕撤去冰浴， 反应体系温度自然升至室温， 于 95Ό油浴中回流约 1小时。 薄层色谱监测反应至 原料基本消失，停止反应。反应液减压下蒸除溶剂，加入 150 ml盐酸 (2 N)搅拌 0.5 小时， 加入 50 ml冰水， 用 10 N的氢氧化钠溶液调节 pH至 10左右， 乙酸乙酯萃 取 (200 mlx2), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (100 mlxl), 无水硫酸 镁干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓缩得到标题产物 (S)-2-[2-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基- 丙基氨基) -乙基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 ld(15.6 g， 黄褐色油状物)， 产率： 96 %。
MS m/z (ESI): 340.3(M+1)。 第四步
(R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 氩气保护下， 将 (S)-2-[2-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基) -乙基 ]-4-甲基 -1H-吡 咯 -3-羧酸乙酯 ld(16.2 g， 47.9 mmol),一水合氢氧化锂 (8 g， 190.6 mmol)搅拌下溶 解于 50 ml乙二醇中， 反应体系于 135°C油浴中反应 50 min。薄层色谱监测反应至 原料基本消失， 停止反应。反应液减压下蒸除溶剂， 加入 150 ml饱和氯化钠溶液， 用二氯甲垸萃取 (150 mlx5), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠洗涤 (150 mlxl), 无水硫酸镁干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓缩得到 12.3 g油状物。 油状物柱层析 得到标题产物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基- 1,5，6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c] 吡啶 -4-酮 le(7.9 g， 白色固体)， 产率： 60.6%。
MS m/z (ESI): 294.2(M+l)o 第五步
(R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5，6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡 啶 -2-甲醛
室温下，将三氯氧磷 (674 μ 1， 4.04 mmol)和 N'N-二甲基甲酰胺 (963 μ 1, 12.32 mmol)搅拌下溶解于 21.18 ml二氯甲烷中， 用冰浴控制温度在 -10°C左右， 搅拌 15 min。 将 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 le(790 mg, 2.7 mmol)搅拌下溶解于 10 ml二氯甲烷中， 滴加到上述反应体系 中。 加毕， 撤去冰浴， 反应体系温度自然升至室温， 继续搅拌 2小时。 薄层色谱 监测反应至原料基本消失， 反应体系中加入冰水淬灭反应， 搅拌 15 min。 用 IO N 的氢氧化钠溶液调节 pH值至 12左右， 用二氯甲烷和甲醇的混和溶剂 (V:V=20:1) 萃取 (100 mlx8), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠洗涤 (150 mlxl), 无水硫酸镁 干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓縮得到 800 mg粗品。 粗品柱层析得到标题产物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡 啶 -2-甲醛 lf(650 mg， 白色固体)， 产率： 75 %
MS m/z (ESI): 322.6(M+1)。 第六步
(R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
室温下， 将 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 lf(200 mg， 0.623 mmol), 5-氟 -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 (84.67 mg, 0.56 mmol)和六氢吡啶 (30.8 μ 1， 0.31 mmol)搅拌下溶解于 1.09 ml乙醇中， 反 应体系于 80°C油浴中避光搅拌 2小时。 薄层色谱监测反应至原料基本消失， 停止 反应。 撤去油浴， 反应体系温度自然降至室温， 有大量固体析出， 抽滤得到标题 产物 (R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 1(256 mg，黄色固体)，产率： 90%。 MS m/z (ESI): 455·2(Μ+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.674(s, IH,吡咯环 -NH)， 10.945(s, IH,吲哚 -NH), 7.771~7.800(m, IH, -ArH), 7.762(s, IH, -CH=C)， 6.927~6.978(dd, 1H， -ArH), 6.842~6.874(d, IH, -ArH), 4.707-4.719(d, IH, -OH), 3.900~3.915(m, IH, -CHO)， 3.704~3.748(dd, 2H,六环内接酰胺氮 -CH2-)， 3.616〜3.695(dd, IH,六环外接酰胺 氮 -CH2-)， 3.563〜3.585(t, 4H, 吗啡啉环 2x-C¾0)， 3.105〜3.158(dd, IH,六环外 接酰胺氮 -CH2-)， 3.433(t, 2H,六环接吡咯环 -CH2-)， 2.545 (s, 3H,吡咯环 -C¾)， 2.420-2.43 l(m, 2H, -CH2N, 吗啡啉环内 -CH2N), 2.420-2.431 (m, 2H, -CH2N,吗啡 啉环夕卜 C¾N)， 2.304〜2.330(t， 2H, 吗啡啉环内 -CH2N)。 实施例 2
(R，Z)-2-(5-氯 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000017_0001
重复本发明实施例 1第六步反应，不同的是使用实施例 1第五步中所得到的化 合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 If和 5-氯 -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (R,Z)-2-(5- 氯 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1，5,6，7- 四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶- 4-酮 2(42 mg， 黄色固体)， 产率： 64%。
MS m/z (ESI): 471.2(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.727(s, IH,吡咯环 -NH)， 11.039(s, IH, ^哚 -NH), 8.003(m, IH, -ArH), 7.814(s， IH, -CH=C)， 7.166~7.141(dd, 1H， -ArH), 6.890~6.869(d, IH, -ArH), 4.713~4.700(d, IH, -OH), 3.907~3.892(m, IH, -CHO), 3.626〜3.567(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.152〜3.099 (dd， IH,六环外接酰胺氮 -C¾-)， 3.027~2.994(t, 2H,六环接吡咯环 -C¾-)， 2.547 (s, 3H, 吡咯环 -CH3)， 2.328〜2.290(t, 2H,吗啡啉环内 -CH2N)。 实施例 3
2-[(Z)-4-(2,3-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢^ I哚 -3-次甲基 ]-5-[(R)-2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基] -3-甲基 -1,5，6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000018_0001
第一步
4-(4，4,5,5-四甲基 -[1,3,2]二氧杂硼烷 -2-基) -1H-吲哚
氩气氛下， 将 4-溴 -1H-吲哚 3a(29.4 g， 150 mmol)搅拌下溶解于 600 ml二甲基 亚砜中， 加入频哪醇乙硼烷 (41.9 g, 165 mmol), 醋酸钾 (44.1 g， 450 mmol)和 Ι,Γ- 双 (二苯膦基)二茂铁二氯化钯 (3.6 g, 4.8 mmol), 加毕， 反应液于 80°C油浴中搅拌 22小时， 薄层色谱表明原料反应完全， 停止反应。 反应液中加入 2 L水， 用乙酸 乙酯萃取 (2 LX 3), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (2 LX 5), 无水硫酸 钠干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩。 所得固体柱层析后重结晶得到标题产 物 4-(4,4,5,5-四甲基 -[1,3,2]二氧杂硼垸 -2-基 )-lH-吲哚 3b(20 g， 白色固体)， 产率- 60%。
MS m/z (ESI): 243.9(M+1)。 第二步
4-(2,3-二氟-苯基) -1H-吲哚 氩气氛下， 将 4-(4,4,5,5-四甲基 -[1,3,2]二氧杂硼烷 -2-基) -1H-吲哚 3b(1.22 g， 5 mmol)搅拌下溶解于 20 ml四氢呋喃中， 加入 1-溴 -2,3-二氟-苯 (0.97 g， 5 mmol)， 四 (三苯基膦)钯 (0.17 g， 0.15 mmol)和 7 ml氢氧化钠溶液 (2M)。 加毕， 反应体系在 75°C油浴中搅拌过夜， 薄层色谱表明原料反应完全， 停止反应。 反应液自然冷却 至室温， 用乙酸乙酯萃取 (20 mlX 3)， 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (10 mix 1)， 无水硫酸钠干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩。 所得固体柱层析 得到标题产物 4-(2,3-二氟-苯基) -1H-吲哚 3c(800 mg， 白色固体)， 产率： 70%。 MS m/z (ESI): 228.4(M-l)o 第三步
4-(2,3-二氟-苯基) -1,3-二氢 -d引哚 -2-酮
室温下，将 4-(2,3-二氟-苯基) -1H-吲哚 3c(744 mg， 3.25 mmol)搅拌下溶解于 12 ml乙醇中，依次加入 21 ml叔丁醇， 6.4 ml冰醋酸和三溴化吡啶鑰 (3.12 g， 9.7 mmol), 加毕搅拌 3小时。 再加入 16 ml冰醋酸和锌粉 (1.1 g， 16.25 mmol), 继续搅拌 1小 时。反应液抽滤除去残渣，滤液减压浓缩后加入 30 ml乙酸乙酯，依次用 10 ml水， 10 ml饱和碳酸氢钠和 10 ml饱和氯化钠洗涤， 用无水硫酸钠千燥， 抽滤除去干燥 剂， 滤液减压浓缩。 所得固体为标题产物 4-(2,3-二氟-苯基) -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 3d(780 mg, 白色固体)， 产率： 97%。
MS m/z (ESI): 246.6(M+1)。 第四步
2-[(Z)-4-(2,3-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 ]-5-[(R)-2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基] -3-甲基 -1,5,6,7-四氢 -P比咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
室温下， 将 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 lf(50 mg， 0.156 mmol), 4-(2,3-二氟-苯基) -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 3d(34.3 mg, 0.14 mmol)和六氢吡啶 (7.7 μ 1， 0.078 mmol)搅拌下溶解于 0.3 ml 乙醇中， 反应体系于 80Ό油浴中避光搅拌 2小时。 薄层色谱监测反应至原料基本 消失， 停止反应。 撤去油浴， 反应体系温度自然降至室温， 有大量固体析出， 抽 滤得到标题产物 2-[(Z)-4-(2,3-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 ]-5-[(R)-2- 羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基] -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 3(56 mg, 黄 色固体)， 产率： 73 %。
MS m/z (ESI): 549.3(M+1)。
1HNMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.583(s, 1H,吡咯环 -NH)， 11.164(s, 1H，吲哚 -NH), 7.647~7.604(m, 1H, -ArH), 7.462-7.41 l(m, 1H, -ArH), 7.342~7.308(m, 1H， -ArH), 7.277~7.239(m, 1H, -ArH), 7.017~6.997(d, 1H， -ArH), 6.898~6.879(d, 1H, -ArH)， 6.716(s, 1H, -CH=C)， 4.671(s, 1H, -OH), 3.854(m, 1H, -CHO), 3.673~3.540(m, 7H,六环内 -C¾N,六环外接酰胺氮 -CH2, 吗啡啉环 2x-CH2O)，3.124~3.077(q, lH, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.986~2.954(t, 2H，六环内 -C¾)， 2.402-2.392 (m, 4H, 吗 啡啉环 -CH2N, 接吗啡啉 -C¾N)， 2.279〜2.265(d, 2H, 吗啡啉环 -C¾N)， 1.884(s,3H, 吡咯环 -CH3)。 实施例 4
(R,Z)-2-(5-溴 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢 -P比咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000020_0001
重复本发明实施例 1第六步反应，不同的是使用实施例 1第五步中所得到的化 合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 If和 5-溴 -1,3-二氢 - 哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (R,Z)-2-(5- 溴 -2-氧代 -1,2-二氢』引哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7- 四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 4(24 mg， 黄色固体)， 产率： 50%。
MS m/z (ESI): 517.6(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.723(s, 1H,吡咯环 -NH)， 11.047(s, 1H,吲哚 -NH), 8.131(s, 1H, -ArH), 7.820(s, 1H， -CH=C), 7.292-7.27 l(dd, 1H, -ArH), 6.847~6.827(d, 1H, -ArH), 4.713~4.702(d, 1H, -OH), 3.897(m, 1H, -CHO), 3.626〜 3.569(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.153〜3.101(dd, 1H,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.029〜2.995(t, 2H,六环接吡咯环 -CH2-)， 2.549 (s, 3H,吡咯环 -C¾)， 2.308(t, 2H, 吗啡啉环内 -CH2N；)。
' 实施例 5
(S，Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1，5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000021_0002
第一步
5-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸 (R)-2-叔丁酯 4-乙酯
室温下， 将 (R)-l-氨基 -3-吗啡啉 -4-基-异丙醇 5a(15.125 g， 94.5 mmol)， 5-羧甲 基 -3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸 2-叔丁酯 4-乙酯 (32.34 g， 104 mmol), 1-羟基苯并 三唑 (25.5 g， 189.06 mmol), N-乙基 -N，- (二甲氨基丙基) -碳二亚胺 (36.2 g， 189.06 mmol)搅拌下溶解于 450 ml乙腈中， 再于 50°C油浴反应 3小时。 薄层色谱监测反 应至原料基本消失， 停止反应。 反应液减压下蒸除溶剂， 加入 150 ml饱和氯化钠 溶液， 用乙酸乙酯和四氢呋喃的混和溶剂 (V:V=4:1)萃取 (200 mlx5)， 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠洗涤 (lOO mlxl), 无水硫酸镁干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓 縮得到 75 g油状物。油状物柱层析得到标题产物 5-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨 基甲酰基) -甲基 ]-3-甲基 -1H-吡咯 -2,4-二羟酸（R)-2-叔丁酯 4-乙酯 5b(30 g， 浅褐色 固体)， 产率： 70%
MS m/z (ESI): 454.4(M+1)。 第二步
(R)-2-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-4-甲基 -1Η-吡咯 -3-羧酸乙酯 氩气氛下， 将 5-[(2-轻基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-3-甲基 -1H- 吡咯 -2,4-二羟酸（R)-2-叔丁酯 4-乙酯 5b(23 g, 50.77 mmol)搅拌下溶解于 60 ml无 水乙醇中， 边用冰浴冷却边滴加 63.5 ml盐酸 (12 N)。 加毕， 撤去冰浴， 反应体系 于 60°C油浴中反应约 1.5小时。 薄层色谱监测反应至原料基本消失， 停止反应。 反应体系于干冰 -丙酮浴中用 10 N的氢氧化钠溶液调节 pH至 7左右， 有大量固体 析出。 混合物过滤， 滤饼用乙醇洗涤。 滤液减压下蒸除溶剂， 用 10 N的氢氧化钠 溶液调节 pH至 10左右，二氯甲垸萃取 (150 mlx3)，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (lOO mlxl), 无水硫酸镁千燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓縮得到标题产物 ( )-2-[(2- 羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 5c(14.6 g， 黄绿色油状物)， 产率： 81.6%。
MS m/z (ESI): 354.8(M+1)。 第三步
(R)-2-[2-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基) -乙基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 氩气氛下，将 (R)-2-[(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基甲酰基) -甲基 ]-4-甲基 -1H- 吡咯 -3-羧酸乙酯 5c(2.332 g， 6.6 mmol)溶解于 23 ml干燥的四氢呋喃中，冰浴冷却， 加入硼烷的四氫呋喃溶液 (23.12 ml, 1 mol/L, 23.12 minol)。 加毕撤去冰浴， 反应体 系温度自然升至室温， 于 95°C油浴中回流约 1小时。 薄层色谱监测反应至原料基 . 本消失， 停止反应。 反应液减压下蒸除溶剂， 加入 5 ml的盐酸 (2 N)搅拌 0.5小时， 加入 5 ml冰水， 用 10 N的氢氧化钠溶液调节 pH至 10左右， 乙酸乙酯萃取 (100 mlx2), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 (50 mlxl)， 无水硫酸镁干燥， 抽滤除去干燥剂， 滤液浓缩得到标题产物 (R)-2-[2-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基氨 基) -乙基 ]-4-甲基 -1H-吡咯 -3-羧酸乙酯 5d(2.1 g， 白色固体)， 产率： 93.75 %。 MS m/z (ESI): 340.9(M+l)o 第四步
(S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉斗基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 氩气氛下， 将 (R)-2-[2-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基氨基) -乙基 ]-4-甲基 -1H-吡咯
-3-羧酸乙酯 5d(2.1 g， 6.2 mmol), 一水合氢氧化锂 (1.56 g， 37 mmol)搅拌下溶解于 25 ml乙二醇中， 反应体系于 140°C油浴中反应 50 min。 薄层色谱监测反应至原料 基本消失， 停止反应。反应液减压下蒸除溶剂， 加入 50 ml饱和氯化钠， 用二氯甲 烷萃取 (80 mlx3), 有机相用饱和氯化钠洗涤 (80 mlxl), 无水硫酸镁千燥， 抽滤除 去干燥剂， 滤液浓缩后柱层析得到标题产物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3- 甲基 -1,5,6,7-四氢 -P比咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 5e(610 mg， 白色固体)， 产率： 33.9%。
MS m/z (ESI): 294.5(M+1)。 第五步
(S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c〗吡 啶 -2-甲醛
室温下，将三氯氧磷 (500 μ 1， 3 mmol)和 N，N-二甲基甲酰胺 (704 μ 1， 9 mmol) 搅拌下溶解于 15 ml无水二氯甲垸中， 用冰浴控制温度在 -10°C左右， 搅拌 15 min。 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1 ,5,6，7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 5e(586 mg, 2 mmol)搅拌下溶解于 ' 8 ml二氯甲垸中， 滴加到上述反应体系中。 加 毕， 撤去冰浴， 反应体系温度自然升至室温， 继续搅拌 2小时。 薄层色谱监测反 应至原料基本消失， 反应体系中加入冰水淬灭反应， 搅拌 15 min。 用 IO N的氢氧 化钠溶液调节 pH值至 12左右，用二氯甲烷和甲醇的混和溶剂 (V:V=20:1)萃取 (100 mlx5), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠洗涤 (100 mlxl), 无水硫酸镁千燥， 抽 滤除去干燥剂， 滤液浓缩后柱层析得到标题产物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(490 mg, 白色固 体)， 产率： 78.8%。
MS m/z (ESI): 322.1(M+1)。 第六步
(S,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
室温下， 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(490 mg， 1.53 mmol), 5-氟 -1,3-二氢 -B引哚 -2-酮 (219 mg，
1.45 mmol)和六氢吡啶 (100 μ 1， 1.0 mmol)搅拌下溶解于 5 ml乙醇中， 反应体系于 80°C油浴中避光搅拌 2 小时。 薄层色谱监测反应至原料基本消失， 停止反应。 撤 去油浴， 反应体系温度自然降至室温， 有大量固体析出， 抽滤得到标题产物
(S,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3，2-c]吡啶 -4-酮 5(460 mg， 黄色固体)， 产率： 69.9%。
MS m/z (ESI): 455.2(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.674(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 10.945(s, 1H, 吲哚
-NH)， 7.771~7.800(m, 1H, -ArH), 7.762(s, 1H, -CH=C)， 6.927~6.978(dd, 1H, -ArH),
6.842~6.874(d, 1H, -ArH), 4.707-4.719(d, 1H, -OH), 3.900-3.915(m, 1H, -CHO)，
3.704~3.748(dd, 2H, 六环内接酰胺氮 -CH2-)， 3.616〜3.695(dd, 1H，六环外接酰胺 氮 -C¾-)， 3.563〜3.585(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.105〜3.158(dd， 1H, 六环外 接酰胺氮 -CH2-)， 3.433(t, 2H,六环接吡咯环 -CH2-)， 2.545 (s, 3H, 吡咯环 -CH3)，
2.420-2.43 l(m, 2H, -CH2N, 吗啡啉环内 -C¾N)， 2.420-2.431 (m, 2H, -CH2N, 吗啡 啉环外 -CH2N)， 2.304〜2.330(t, 2H, 吗啡啉环内 -CH2N)。 实施例 6
(S，Z)-2-(5-氯 -2-氧代 -1,2-二氢 -Π引哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5，6，7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000024_0001
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f和 5-氯 -1,3-二氢 -Π引哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (S,Z)-2-(5- 氯 -2-氧代 -1,2-二氢 -B引哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7- 四氢 -B比咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 6(87 mg， 黄色固体)， 产率： 85 %。 MS m/z (ESI): 471.6(M+1)。 .
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.727(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 11.038(s, 1H, 吲哚 -NH)， 8.006-8.001 (m, 1H, -ArH), 7.813(s, 1H, -CH=C), 7.166-7.140(dd, 1H, -ΑιΉ), 6.889~6.869(d, 1H, -ΑιΉ) , 4.712~4.700(d, 1H, -OH) , 3.893 (m, 1H, -CHO) , 3.723~3.689(dd，2H, 六环内接酰胺氮 -CH2-)， 3.657〜3.641(dd, 1H,六环外接酰胺 氮 -C¾-)， 3.578〜3.556(t，4H, 吗啡啉环 2x-CH20), 3.152〜3.099(dd, 1H, 六环外 接酰胺氮 -CH2-)， 3.026~2.993(t, 2H,六环接吡咯环 -CH2-)， 2.547(s, 3H, 吡咯环 -CH3)， 2.424-2.412(m, 4H, -CH2N, 吗啡啉环内 -CH2N, 吗啡啉环外 -CH2N)， 2.311〜2.290(t, 2H, 吗啡啉环内 -C¾N)。 实施例 7
2-(Z)-[4-(2,3-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 ]-5-((S)-2-羟基 -3-吗啡啉 -4- 基-丙基) -3_甲基 _1,5,6，7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000025_0001
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5，6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f和 4-(2,3-二氟-苯基) -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 3d作原料，得到标题 产物 2-(Z)-[4-(2,3-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢』引哚 -3-次甲基 ]-5-((S)-2-羟基 -3-吗啡 啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢 -P比咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 7(49 mg， 红色固体)， 产 率： 73 %。
MS m/z (ESI): 549.2(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.583(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 11.164(s, 1H, 吲哚 -NH)， 7.604~7.647(m, 1H, -ArH), 7.411〜7.464(m, 1H, -ArH), 7.308~7.342(m, 1H, -ArH), 7.239~7.277(m, 1H, -ArH), 6.997-7.017(d, 1H, -ArH), 6.879~6.898(d, 1H, -ArH), 6.716(s, 1H, -CH-C), 4.671(s, 1H, -OH), 3.854(m, 1H, -CHO), 3.540~3.673(m, 7H,六环内 -CH2N, 六环外接酰胺氮 -CH2, 吗啡啉环 2x-C¾0)， 3.095~3.124(q, 1H: 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.954~2.986(t, 2H,六环内 -CH2)， 2.392-2.402 (m, 4H, 吗 啡啉环 -CH2N,接吗啡啉 -C¾N)，2.265〜2.279(d, 2H， 吗啡啉环 -CH2N)， 1.884(s,3H, 吡咯环 -CH3)。 实施例 8
(S,Z)-2-(5-溴 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1，5,6,7-四氢-吡咯并 [3 ,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000026_0001
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 - 1 H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f和 5-溴 -1，3-二氢 -B引哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (S,Z)-2-(5- 溴 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7- 四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 8(49 mg， 黄色固体)， 产率： 78 %。
MS m/z (ESI): 515.2(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.720(s, 1H,吡咯环 -NH)， 11.042(s, 1H, 吲哚 -NH)， 8.127(s, 1H, -ArH)， 7.813(s, 1H, -CH= )， 7.290~7.265(dd, 1H, -ArH), 6.844~6.823(d, 1H, -ΑιΉ), 4.712~4.699(d, 1H， -OH), 3.907(m, 1H, -CHO)， 3.578〜 3.555(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.151〜3.098(dd, 1H，六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.025~2.992(t, 2H， 六环接吡咯环 -CH2-)， 2.547(s, 3H, 吡咯环 -CH3)， 2.306~2.290(t, 2H, 吗啡啉环内 -CH2N)。 实施例 9
(S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-羟基-乙酰胺
Figure imgf000027_0001
第一步
2,4-二硝基 -5-氟-苯乙酸
室温下， 将 3-氟-苯乙酸 9a(31.5 g， 0.204 mol)加入到 64 ml硫酸 (98%)中， 控 制温度在 35Ό下滴加 100 ml硝酸 (65%— 68%)及硫酸 (98%)的混合溶液 (V:V=1:1)。 加毕， 控温在 35°C左右搅拌， 薄层色谱跟踪至原料消失。 将冰加入反应液中， 待 冰融化后过滤， 得到标题产物 2,4-二硝基 -5-氟-苯乙酸 9b(49 g， 浅黄色油状液体)。 MS ni/z (ESI): 243.5(M-1)。 第二步
2,4-二氨基 -5-氟-苯乙酸
室温下， 将 2,4-二硝基 -5-氟-苯乙酸 9b (10 g， 38.7 mmol)搅拌下溶解于 150 ml 甲醇中， 加入钯 /碳 (5% , 1. 5 g), 氢气氛下， 在压强为 0.3 MPa下氢化。 薄层色 谱跟踪至原料消失， 过滤两次， 滤液减压浓缩得到标题产物 2,4-二氨基 -5-氟 -苯乙 酸 9c(7.12 g， 棕色固体)， 直接做下一步。 第三步
5-氟 -6-氨基 -2-吲哚酮
室温下， 将 2,4-二氨基 -5-氟-苯乙酸 9c(7.12 g， 38.7 mmol)搅拌下溶解于 100 ml 盐酸 (1 M), 加热回流 1小时， 薄层色谱跟踪至原料消失， 停止反应。 将反应液冷 却至室温， 继续用冰水浴冷却， 滴加 100 ml氢氧化钠溶液 (1 M)中和反应液。 用乙 酸乙酯萃取反应液 (125 mLX 4), 合并有机相， 有机相用饱和氯化钠溶液 (100 mL X I)洗涤， 乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥， 过滤， 滤液减压浓缩， 得到标题产物 5-氟 -6-氨基 -1,3-二氢 -2-吲哚酮 9d(5,3 g, 黄色固体)， 产率： 82.8 %。
MS m/z (ESI): 165.3(M-l) c 第四步
乙酸（5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1Η-Π引哚 -6-氨基甲酰基) -甲酯 室温下， 将 5-氟 -6-氨基 -2-吲哚酮 9d(500 mg, 3.0 mmol)搅拌下溶解于 10 ml 四氢呋喃中， 加入 0.4 ml吡啶， 搅拌均匀后用丙酮和干冰使反应体系冷却至 -40°C 左右。 将乙酰氧基乙酰氯 (420 mg, 3.0 mmol)加入到 10 ml四氢呋喃中， 溶解后滴 加到已冷却好的反应体系中，加毕撤去干冰-丙酮浴，使反应体系自然升温至室温， 搅拌过液。 薄层色谱跟踪至原料消失， 过滤， 所得固体用水洗 3 次即得到标题产 物乙酸（5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-氨基甲酰基) -甲酯 9e(562 mg，灰色固体)， 产率： 70.4%。
MS: 265.3 (M-l )。 第五步
N-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基) -2-羟基-乙酰胺 室温下，将乙酸（5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-氨基甲酰基) -甲酯 9e(58 mg，
0.22 mmol)搅拌下溶解于 1 ml甲醇中，加入 1 ml水和氢氧化钠 (15 mg, 0.375 mmol), 加毕， 继续搅拌 1小时。 薄层色谱跟踪至原料消失， 停止反应。 反应液过滤， 所 得固体用水洗 3次，干燥即得到标题产物 N-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基) -2- 羟基-乙酰胺 9f(46 mg, 灰白色固体)， 产率： 93.8%。
MS: 223.7 (M-l )。 第六步
(S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4，5,6,7-四氢 -1H-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基 2-轻基-乙酰胺
室温下， 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(40 mg， 0.125 mmol)搅拌下溶解于 2 ml乙醇中， 加入 N-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基) -2-羟基-乙酰胺 9f (25.1 mg, 0.112 mmol), 加毕搅拌至溶解。 向反应液中加入六氢吡啶 (50 μ 1， 0.5 n mol), 加毕， 反应体系于 80Ό油浴中避光搅拌 2小时。 薄层色谱监测反应至原料基本消失， 停止反应。 撤 去油浴， 反应体系温度自然降至室温， 有大量固体析出， 抽滤得到标题产物 (S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-羟基-乙酰胺 9(51 mg， 黄色固体)， 产率： 80%。
MS m/z (ESI): 528.3(M+1)0 实施例 10
(S，Z)-2-[5-氟 -6-(4-氟-苄氨基) -2-氧代 -1,2-二氢 -B引哚 -3-次甲基 ]-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5，6，7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000029_0002
第一步
5-氟 -6-(4-氟-节氨基) -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 室温下，将 5-氟 -6-氨基 -1,3-二氢 -2-吲哚酮 9d(2.26 g, 13.6 mmol)搅拌下溶解于 40 ml乙醇中，用冰浴将上述溶液冷却至 0°C，加入 4-氟-苯甲醛 (1.5 ml, 13.6 mmol), 加毕室温搅拌 1小时。 加入四氢硼酸钠 (1.08 g， 28.5 mmol), 回流 18小时， 自然冷 却至室温。 加入冰水， 有大量固体析出， 抽滤， 滤饼用水洗涤 (50 ml X 3)后经柱层 析得到标题产物 5-氟 -6-(4-氟-苄氨基) -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 10a(1.67 g， 白色固体)， 产率： 45 %。
MS m/z (ESI): 275(M+ 1)。 第一步
(S,Z)-2-[5-氟 -6-(4-氟-苄氨基) -2-氧代 -1,2-二氢 -d引哚 -3-次甲基 ]-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
室温下， 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(40 mg, 0.125 mmol)搅拌下溶解于 2 ml乙醇中， 加入 5-氟 -6-(4-氟-苄氨基) -1,3-二氢』引哚 -2-酮 10a(30.7 mg， 0.112 mmol), 加毕， 搅拌至 溶解。 向反应液中加入哌啶 (0.05 ml， 0.5 mmol), 加毕反应液于油浴中加热回流 2 小时， 薄层色谱表明原料反应完全， 停止反应。 反应液自然冷却至室温后减压抽 滤， 所得固体即为标题产物 (S,Z)-2-[5-氟 -6-(4-氟-苄氨基) -2-氧代 -1,2-二氢』引哚 -3- 次甲基 ]-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4- 酮 10(18 mg， 灰色固体)， 产率： 27.8 %。
MS IB/Z (ESI): 578.6(M+ 1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.503(s, 1H，吡咯环 -NH)， 10.557(s, 1H,吲哚 -NH)， 7.584~7.614(d, 1H, -ArH), 7.359~7.400(m, 2H, -ArH), 7.359(s, 1H, -CH=C)， 7.140-7.184(t, 2H, -ArH)， 6.426(m, 1H, -NH)， 6.039~6.057(d, 1H, -ArH)， 4.684~4.696(d, 1H, -OH), 4.346~4.361(d, 2H, -C=CCH2N), 3.893(m, 1H， -CHO), 3.667~3.713(d, 2H,六环内 -C¾N)， 3.596~3.627(q, 1H,六环外接酰胺氮 -C¾-)， 3.564(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.07~3.12(q, 1H, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.928~2.961(t, 2H,六环内 -CH2)， 2.468(s, 3H,吡咯环 -C¾)，2.417(m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N,接吗啡啉 -C¾N)， 2.297(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 11 (S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1Η-吡 咯并 [3，2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-羟基 -2-甲基-丙酰胺
Figure imgf000031_0001
第一步
乙酸 1-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-氨基甲酰基)小甲基 -乙酯 室温下， 将 5-氟 -6-氨基 -2-吲哚酮 9d(410 mg， 2.47 mmol)搅拌下溶解于 10 ml 四氢呋喃中， 用干冰-丙酮浴冷却至 -45°C , 加入 332 μ ΐ吡啶。 将 2-乙酰氧基异丁 酰氯 (423 mg, 2.71 mmol)搅拌下溶解于 10 ml四氢呋喃中， 滴加到上述反应液中， 加毕撤去干冰-丙酮浴， 让反应体系温度自然升至室温， 搅拌过夜。 薄层色谱监测 反应至原料反应完全， 将反应液过滤， 滤饼用水洗涤， 所得固体干燥后得到标题 产物乙酸 1-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-氨基甲酰基) -1-甲基 -乙酯 lla(792 mg, 白色固体)， 直接进行下步反应。
MS m/z (ESI): 293.7(M-1)。
N-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基) -2-轻基 -2-甲基-丙酰胺 室温下， 将乙酸 1-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-氨基甲酰基)小甲基 -乙酯 11a (2.035 g， 6.9 mmol)搅拌下溶解于 20 ml甲醇中， 加入 20 ml氢氧化钠溶液 (0.7M), 搅拌 4小时， 薄层色谱监测反应至原料反应完全， 停止反应。 反应液用 1M的盐酸中和后，减压蒸除溶剂，柱层析后干燥得到标题产物 N-(5-氟 -2-氧代 -2,3- 二氢 -1H-吲哚 -6-基) -2-羟基 -2-甲基-丙酰胺 llb(900 mg， 白色固体)， 产率： 59.2%。
MS m/z (ESI): 253.6(M+1)。 第三步
(S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6 7-四氢 -1H-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -111』引哚-6-基}-2-羟基 -2-甲基-丙酰胺 室温下， 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5 6 7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(40 nig 0.125 mmol), N-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲 哚 -6-基) -2-轻基 -2-甲基-丙酰胺 llb(28.3 mg, 0.112 ol)和六氢吡啶 (50 μ 1 0.5 mmol)搅拌下溶解于 2 ml乙醇中， 反应体系于 80°C油浴中避光搅拌 2小时。 薄层 色谱监测反应至原料基本消失， 停止反应。 撤去油浴， 反应体系温度自然降至室 温， 有大量固体析出， 抽滤得到标题产物 (S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4- 基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6 7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3- 二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-羟基 -2-甲基-丙酰胺 ll(46 mg， 黄色固体)， 产率： 74% MS m/z (ESI); 556.9(M+1)。
1H MR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.656(s, 1H,吡咯环 -NH 10.951 (s, 1H, n引 哚 -NH 9.282(s, 1H, -NHCO), 7.873-7.90 l(d, 1H -ArH), 7.778~7.794(m, 1H, -ArH), 7.670(s, 1H, -CH=C)， 6.052(s, 1H, -OHC(CH3)2)， 4.698(d, 1H, OH), 3.893(m, 1H -CHO)， 3.667~3.713(d, 2H,六环内 -CH2N)， 3.596~3.627(q, 1H,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.557~3.578(t, 4H, 吗啡啉环 2x-C¾0)， 3.09-3.125(q, 1H，六环外接酰胺 氮 -C¾-)， 2.961 3.012(t, 2H,六环内 -C¾)， 2.524(s, 3H, 吡咯环 -CH3)， 2.412- 2.424(m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N， 接吗啡啉 -C¾N)， 2.297 2.308(m, 2H,吗啡啉环 -CH2N), 1.376(s56H,2x-CH3) = 实施例 12
(S,Z)-2-(7-溴 -5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3 2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000033_0002
第一步
7-溴 -5-氟 -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮
室温下， 将 5-氟 -1,3-二氢 - 哚 -2-酮 12a(1.5 g， 0.01 mol)搅拌下溶解于 15 ml 乙腈， 逐滴加入一溴代丁二酰亚胺 (1.8 g， 0.01 mol), 加毕过夜搅拌， 有大量固体 析出。 薄层色谱表明原料反应完全， 停止反应。 反应液抽滤得到标题产物 7-溴 -5- 氟 -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 12b(2 g， 灰白色固体)， 产率： 87%。
MS m/z (ESI): -l 第二步
(S,Z)-2-(7-溴 -5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢』引哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
室温下， 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(40 mg， 0.125 mmol)搅拌下溶解于 2 ml乙醇中， 加入 7-溴 -5-氟 -1,3-二氢』引哚 -2-酮 12b(25.8 mg， 0.112 mmol), 加毕， 搅拌至溶解， 再加入哌啶 (0.05 ml， 0.5 mmol), 加毕反应液于油浴中加热回流 2小时， 薄层色谱 表明原料反应完全， 停止反应。 反应液自然冷却至室温后减压抽滤， 所得固体即 为标题产物 (S,Z)-2-(7-溴 -5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 12(45 mg， 黄色固体)， 产 率： 75.4% MS m/z (ESI): 533舉+ 1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.689(s, 1H，吡咯环 -NH)， 11.196 (s, 1H,吲 哚 -NH)， 7.860~7.866(d, 1H, -ArH), 7.784(s， 1H, -CH=C), 7.232~7.260(m, 1H, -ArH), 4.703-4.716(d, 1H， -OH), 3.896~2.909(m, 1H, -CHO), 3.631〜3.747(m, 3H,六环内 -CH2N, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.555~3.578(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.097〜3.150(q, 1H, 六环外接酰胺氮 -C¾-)， 3.015~3.048(t, 2H, 六环内 -CH2)， 2.548(s， 3H, 吡咯环 -CH3)， 2.411〜2.424(m, 4H， 吗啡啉环 -C¾N, 接吗啡啉 -CH2N), 2.291〜2.307(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 13
(S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1Η-吡 咯并 [3，2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-甲氧基-乙酰胺
Figure imgf000034_0001
第一步
5-氟 -6-甲氧乙酰胺基 -2-B引哚酮
室温下， 将 5-氟 -6-氨基 -2-吲哚酮 9d(2.028 g， 12.2 mmol)搅拌下溶解于 30 ml 四氢呋喃中， 加入 1.3 ml吡啶， 用干冰-乙醇浴使反应体系冷却至一 50°C左右。 将 甲氧乙酰氯 (1.35 g， 12.5 mmol)搅拌下溶解于 20 nil四氢呋喃中， 滴加到上述反应 体系中。 加毕， 撤去千冰-乙醇浴， 使反应体系温度自然升至室温， 搅拌过夜。 薄 层色谱跟踪至原料消失， 过滤， 所得固体用水洗涤 (10 mi x 3)， 用甲醇重结晶， 即 得到标题产物 5-氟 -6-甲氧乙酰胺基 -2-吲哚酮 13a(1.18 g, 灰色固体)， 产率： 40.6 %。
MS mJz (ESI): 239.3(M+1)。 第二步
(S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-甲氧基-乙酰胺
室温下， 将 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H- 吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f(40 mg, 0.125 mmol)搅拌下溶解于 2 ml乙醇中， 加入 5-氟 -6-甲氧乙酰胺基 -2-吲哚酮 13a(26.7 mg， 0.112 mmol), 加毕， 搅拌至溶解， 再 加入哌啶 (0.05 mi， 0.5 mmol), 加毕反应液于油浴中加热回流 2小时， 薄层色谱表 明原料反应完全， 停止反应。 反应液自然冷却至室温后减压抽滤， 所得固体即为 标题产物 (S,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四 氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-甲氧基 -乙酰 胺 13(52 mg， 黄色固体)， 产率： 85.8%。
MS m/z (ESI): 542.2(M+ 1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.666(s, 1H,吡咯环 -NH)， 10.919(s, 1H, 吲哚 -NH)， 9.313(s, 1H, -NHCO), 7.841〜7.869(d, 1H, -ArH)， 7.672(s, 1H, -CH=C)， 7.546〜7.562(m, 1H， -ArH)， 4.703-4.716(d, 1H, -OH) , 4.062(s, 2H, -CH20)， 3.896~2.909(m, 1H, -CHO), 3.652〜3.720(m, 3H,六环内 -C¾N,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.556~3.578(t， 4H,吗啡啉环 2x-CH20)， 3.404(s, 3H, -CH30)， 3.097-3.150(q, 1H,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.982〜3.015(t， 2H，六环内 -CH2)， 2.523(s, 3H,吡咯环 -CH3)， 2.414〜2.425(m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N,接吗啡啉 -CH2N)， 2.291 ~2.307(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N；)。 实施例 14
(R,Z)-2-(7-溴 -5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 - 哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000036_0001
重复本发明实施例 1第六步反应，不同的是使用实施例 1第五步中所得到的化 合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3，2-c]吡啶 -2-甲醛 If和 7-溴 -5-氟 -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮 12b作原料， 得到标题产物 (R,Z)-2-(7-溴 -5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢 -P比咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 14(20 mg，黄色固体)，产率： 40%。 MS m/z (ESI): 533·6(Μ+1)。
1H MR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.691(s, 1H,吡咯环 -NH)， 11.204(s, 1H,吲哚 -NH), 7.874~7.851(d, ΙΗ, -ArH), 7.797(s, 1H, -CH=C)， 7.269~7.243(m, 1H, -ΑιΉ), 4.710~4.698(d, 1H, -OH), 3.900~3.890(m, 1H, -CHO)， 3.759~3.611(m, 3H,六环内 -CH2N, 六环外接酰胺氮 -C¾-)， 3.572〜3.550(t， 4H， 吗啡啉环 2x-C¾0)， 3.148〜3.095(q， 1H, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.047~3.014(t, 2H, 六环内 -CH2)， 2.548(s, 3H, 吡咯环 -C¾)， 2.418〜2.323(m, 4H, 吗啡啉环 -C¾N, 接吗啡啉 -CH2N)， 2.302〜2.285(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 15
(R,Z)-2-[5-氟 -6-(4-氟-苄氨基) -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 ]-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-卩比咯并 [3，2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000036_0002
重复本发明实施例 1第六步反应，不同的是使用实施例 1第五步中所得到的化 合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4，5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 If和 5-氟 -6-(4-氟- 氨基) -1,3-二氢 -Π引哚 -2-酮 10a作原料，得到 标题产物 (R，Z)-2-[5-氟 -6-(4-氟-节氨基) -2-氧代 -1,2-二氢』引哚 -3-次甲基 ]-5-(2-羟基 _3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 15(53 mg，深红色 固体)， 产率： 65.6%。
MS m/z (ESI): 578·7(Μ+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.504(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 10.558(s, 1H, 吲哚 -NH), 7.614~7.585(d, 1H, -ArH), 7.400~7.379(m, 2H, -ArH), 7.359(s, 1H, -CH=C), 7.140~7.191(t, 2H， -ArH) , 6.43 l(m, 1H, -NH) , 6.058~6.040(d, 1H， -ArH) , 4.698~4.686(d, 1H, -OH), 4.346~4.361(d, 2H, -C-CCH2N), 3.894(m, 1H， -CHO), 3.731-3.668(d, 2H,六环内 -CH2N), 3.644~3.612(q, 1H,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.596~3.553(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.135~3.082(q, 1H, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.928~2.961(t, 2H, 六环内 -CH2)， 2.468(s, 3H, 吡咯环 -C¾)， 2.419-2.408 (m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N， 接吗啡啉 -CH2N)， 2.299~2.289(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 16
(R,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1Η-吡 咯并 [3，2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -lH-fl引哚 -6-基 2-甲氧基-乙酰胺
Figure imgf000037_0001
重复本发明实施例 1第六步反应，不同的是使用实施例 1第五步中所得到的化 合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 If和 5-氟 -6-甲氧乙酰胺基 -2-吲哚酮 13a作原料， 得到标题产物 (R,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-甲氧基-乙酰胺 16(60 mg, 黄色固体)， 产率： 87%。
MS m/z (ESI): 543.0(M+1)。
1HNMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.668(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 10.923(s, 1H， 吲哚 -NH)， 9.320(s, IH, -NHCO), 7.875~7.847(d, IH, -ArH), 7.678(s, 1H， -CH=C), 7.562~7.546(m, IH, -ArH) , 4.711~4.699(d, IH, -OH) , 4.063(s, 2H, -CH20) , 3.729~3.653(m, 3H,六环内 -C¾N,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.579~3.556(t, 4H,吗 啡啉环 2x-CH20)， 3.404(s, 3H, -CH30)， 2.983-3.017(t, 2H,六环内 -CH2)， 2.525(s, 3H,吡咯环 -CH3)， 2.412〜2.424(m, 4¾ 吗啡啉环 -C¾N,接吗啡啉 -CH2N)， 2·289〜 2.306(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 17
(R,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -IH-吡 咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基}-2-羟基 -2-甲基-丙酰胺
Figure imgf000038_0001
重复本发明实施例 1第六步反应，不同的是使用实施例 1第五步中所得到的化 合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 If和 N-(5-氟 -2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基) -2-羟基 -2-甲基 -丙酰 胺 lib作原料， 得到标题产物 (R,Z)-N-{5-氟 -3-[5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-亚甲基 ]-2-氧代 -2,3-二氢 -1H-吲哚 -6-基 }-2-轻基 -2-甲基-丙酰胺 17(71 mg， 黄色固体)， 产率： 82%。
MS m/z (ESI): 556·2(Μ+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.658(s, IH,吡咯环 -NH)， 10.954 (s, IH,吲 哚 -NH)， 9.289(s, IH, -NHCO), 7.875~7.903(d, IH, -ΑιΉ), 7.796~7.780(m, IH, -ArH), 7.672(s, IH, -CH=C)， 6.055(s, IH, -OHC(CH3)2), 4.70 l(d, IH, OH), 3.722(m, 1H， -CHO)， 3.655~3.691(d, 2H,六环内 -CH2N)， 3.639(q, IH,六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.559~3.580(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20)， 2.986-3.019(t, 2H,六环内 -C¾)， 2.526(s, 3H,吡咯环 -CH3)，2.415〜2.425(m, 4H,吗啡啉环 -CH2N,接吗啡啉 -C¾N)，2.299〜 2.309(m, 2H,吗啡啉环 -CH2N)， U78(s,6H,2x-CH3)。 实施例 18
(R,Z)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -2-(2-氧代 -4-嘧啶 -4-基 -1,2-二氢』引哚 -3-次甲基 )-1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3，2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000039_0001
重复本发明实施例 1第六步反应， 不同的是使用实施例 1第五步中所得到的 化合物 (R)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 If 和 4-嘧啶 -4-基 -1,3-二氢 -η引哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (R,Z)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -2-(2-氧代 -4-嘧啶 -4-基 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 18(58 mg， 黄色固体)， 产率： 72.5 %。
MS m/z (ESI): 514·2(Μ+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.573(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 11.149(s, 1H, 吲哚 -NH), 7.742〜7.770(d, 2H, 吡啶环 N-CH=)， 7.500〜7.513(d, 2H, 吡啶环 -CH=)， 7.226〜7.265(t, 1H, -ΑιΉ)， 6.976〜6.995(t, 1H, -ArH)， 6.813〜6.834(d, 2H， -CH=C, -ΑιΉ), 4.666〜4.677(d, 1H, -OH)， 3.854(m, 1H，- CHO)， 3.541〜3.688(m, 7H, 六环 内 -CH2N， 六环外接酰胺氮 -CH2， 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.063〜3.115(q, 1H， 六环 外接酰胺氮 -CH2-)， 2.946〜2.979(t, 2H, 六环内 -CH2)， 2.394 (m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N, 接吗啡啉 -C¾N)， 2.264〜2.278(d, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)， 1.810〜1.822(s, 3H, 吡咯环 -C¾)。 实施例 19
(S,Z)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -2-(5-甲氧基 -2-氧代 -1,2-二氢 引哚 -3-亚甲 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000040_0001
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6，7-四氢 -1H-吡咯并 [3，2-c]吡啶 -2-甲醛 5f 和 5-甲氧基 -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (S,Z)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -2-(5-甲氧基 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-亚甲 基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 19(40 mg，橙红色固体)，产率： 76.6 %。
MS m/z (ESI): 467.2(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.846(s, 1H, 吡咯环 -NH)， 10.742(s, 1H, 吲哚 -丽)， 7.696(s, 1H, -CH=C), 7.490~7.495(m, 1H, -ArH)， 6.728~6.792(m, 2H, -ArH), 4.699-4.7 ll(d, 1H, -OH) , 3.896~3.909(m, 1H, -CHO) , 3.783(s, 3H, -CH30), 3.689~3.732(m, 2H, 六环内 -CH2N)， 3.654(m, 1H, 六环外接酰胺氮 -CH2)， 3.558~3.580(t, 4H, 吗啡啉环 2x-CH20) , 3.097-3.150(q, 1H， 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.978~3.011(t, 2H,六环内 -CH2)， 2.543 (s, 3H,吡咯环 -CH3)， 2.414〜2.425(m, 4H， 吗啡啉环 -C¾N,接吗啡啉 -CH2N)， 2.299〜2.308(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 20
(S,Z)-2-[4-(2,6-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-亚甲基 ]-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4- 基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000040_0002
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醒 5f和 4-(2,6-二氟-苯基) -1,3-二氢 -吲哚 -2-酮作原料， 得到标题产 物 (S,Z)-2-[4-(2,6-二氟-苯基) -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-亚甲基 ]-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 20(52 mg, 黄色固体)， 产 率： 84.7%
MS m/z (ESI): 549.3(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.604(s， 1H,吡咯环 -NH)， 11.171(s, 1H, 吲哚 -NH)， 7.646~7.666(m, 1H, -ArH), 7.338~7.380(m, 2H, -ArH), 7.244~7.282(m, 1H, -ArH), 7.008~7.027(m, 1H, -ArH), 6.900~6.919(m, 1H, -ArH), 6.657(s, 1H, -CH=C), 4.672~4.683(d, 1H, -OH), 3.855~3.868(m, 1H, -CHO), 3.541~3.673(m, 7H,六环内 -CH2N,六环外接酰胺氮 -CH2， 吗啡啉环 2x-CH20)， 3.077-3.130(q, 1H，六环外接 酰胺氮 -CH2-)， 2.955〜2.988(t, 2H,六环内 -CH2)， 2.394(m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N,接 吗啡啉 -CH2N)， 2.266〜2.280(m, 2H， 吗啡啉环 -CH2N)， 1.856(s, 3H,吡咯环 -CH3)。 实施例 21
(S,Z)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -2-[5-(4-甲氧基 -苯基 )-2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3- 亚甲基 ]-3-甲基 -1，5，6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000041_0001
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 - 1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f和 5-(4-甲氧基 -苯基 )-1,3-二氢 -吲哚 -2-酮作原料， 得到标题产 物 (S,Z)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -2-[5-(4-甲氧基 -苯基 )-2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-亚甲基 ]-3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 21(53 mg, 橙黄色固体)， 产 率： 87.2%。
MS ni/z (ESI): 543.3(M+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.708(s, 1H,吡咯环 -NH)， 11.004(s, 1H, 吲哚 -NH), 7.321~7.852(m, 1H, -ArH), 7.673(s, 1H, -CH=C)， 7.582~7.604(m, 2H, -ArH), 7.254~7.277(m, 1H, -ArH) , 7.070(m, 1H, -ArH) , 7.016~7.038(d, 2H, -ArH)， 4.704-4.716(d, 1H, -OH) , 3.855~3.868(m, 1H, -CHO) , 3.806(s, 3H, -CH30)， 3.659~3.728(m, 3H,六环内 -CH2N, 六环外接酰胺氮 -CH2)， 3.559~3.581(t, 4H, 吗 啡啉环 2x-C¾0), 3.077〜3.130(q, 1H, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 2.990~3.024(t, 2H, 六环内 -CH2)， 2.539(s, 3H, 吡咯环 -CH3)， 2.415-2.427(m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N,接 吗啡啉 -CH2N)， 2.294-2.3 ll(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 22
(S,Z)-2-(4-溴 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-亚甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮
Figure imgf000042_0001
重复本发明实施例 5第六步反应，不同的是使用实施例 5第五步中所得到的化 合物 (S)-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -4-氧代 -4,5,6,7-四氢 -1H-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -2-甲醛 5f和 4-溴 -1,3-二氢 -B引哚 -2-酮作原料， 得到标题产物 (S,Z)-2-(4- 溴 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-亚甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7- 四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 22(43 mg， 橙黄色固体)， 产率： 74.5%。
MS m/z (ESI): 515·2(Μ+1)。
1H NMR ( 400 MHz, DMSO-d6 ) 13.670(s， 1H, 吡咯环 -NH)， 11.189(s, 1H, 吲哚 -NH), 8.562(s, 1H, -CH=C)， 7.201~7.221(m, 1H, -ArH), 7.042-7.08 l(m, 1H, -ΑιΉ), 6.920-6.938(m, 1H, -ArH), 4.709-4.72 l(d, 1H, -OH), 3.902-3.915 (m, 1H, -CHO), 3.631~3.745(m, 3H, 六环内 -CH2N， 六环外接酰胺氮 -CH2)， 3.558~3.580(t, 4H, 吗 啡啉环 2x-C¾0)， 3.090-3.143(q, 1H, 六环外接酰胺氮 -CH2-)， 3.011~3.035(t, 2H, 六环内 -CH2)， 2.479(s，3H, 吡咯环 -CH3)， 2.413~2.426(m, 4H, 吗啡啉环 -CH2N, 接 吗啡啉 -CH2N)， 2.293-2.3 ll(m, 2H, 吗啡啉环 -CH2N)。 实施例 23 P T/CN2008/001388
(R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1，2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3，2-c]吡啶 -4-酮 马来酸盐
Figure imgf000043_0001
室温下， 将 (R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -B引哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉
-4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3，2-c]吡啶 -4-酮 1(709 mg， 1.562 mmol)和顺 丁烯二酸 (217 mg， 1.874 mmol)搅拌下溶解于 150 ml甲醇中，搅拌均勾后， 混合液 于 40°C油浴中加热搅拌 20分钟。 反应液减压抽滤， 滤液减压浓缩后加入 50 ml乙 腈， 加毕， 加热回流 20分钟。 反应混合物冷却至室温后减压抽滤得到标题产物 (R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮 马来酸盐 23(811 mg， 黄色固体)， 产率： 91.1 %
MS m/z (ESI): 455·2(Μ+1)。 实施例 24
(R,Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢』引哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲 基 -1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]吡啶 -4-酮苹果酸盐
Figure imgf000043_0002
室温下， 将 2-羟基-丁二酸 (231 mg， 1.72 mmol)搅拌下溶解于 100 ml甲醇中， 再分批加入 (R，Z)-2-(5-氟 -2-氧代 -1,2-二氢 -吲哚 -3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基 -丙基 )-3-甲基- 1,5,6,7-四氢-吡咯并 [3,2-c]嘧啶 -4-酮 1(560 mg， 1.233 mmol), 200 ml 甲醇和 100 ml水。 加毕， 反应体系于 50°C油浴中避光加热搅拌至澄清， 过滤， 滤 液减压下蒸除溶剂得到黄色固体。 向所得固体中加入 100 ml乙腈， 避光加热回流 1.5小时，撤去油浴，反应体系温度自然冷却至室温，过滤得到标题产物 (R,Z)-2-(5- 氟 _2_氧代 _1,2_二氢』引哚 _3-次甲基 )-5-(2-羟基 -3-吗啡啉 -4-基-丙基) -3-甲基 -1,5,6,7- 四氢 -P比咯并 [3,2-c]嘧啶 -4-酮苹果酸盐 24(718 mg， 黄色固体)， 产率： 99%。
MS m/z (ESI): 455.2(M+1)。
测试例：
生物学评价 例 1: 抑制细胞增殖测试
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对于人类肿瘤细胞 HUVEC VEGFR 髙表达的细胞株抑制增殖活性。
下面所述的体外细胞试验可确定受试化合物的对高表达 VEGFR 的肿瘤细胞 的抗血管生成活性和抑制增殖活性， 其活性可用 IC5G值来表示。 此类试验的一般 方案如下：首先选择高表达 VEGFR的人类肿瘤细胞， 以适宜细胞浓度下 (exp 5000 个细胞 /ml medium)接种在 96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内进行培 养， 当它们生长至 85 %汇合， 更换培养基为加有一系列浓度梯度 (一般 6到 7个浓 度)受试化合物溶液的培养基， 将培养板重新放回培养箱， 连续培养 72个小时。 72 小时后， 可用 sulforhodamine B(SRB)方法进行测试化合物对于抑制细胞增殖活性。 IC50值可通过一系列不同浓度下， 受试化合物对于细胞的抑制数值进行计算。 材料和方法：
a. 二甲基亚砜 (Sinophma chemical reagent company, 目录 T20050806号) b. HUVEC细胞（购于 Institute of biochemistry and cell biology)
c. Falcon 100 mm细胞培养板 (Baton Dickison Labware, Baton Dickison and company, 目录 18677号）
d. corning 96孑 L±咅养板 (Corning Incorporated, 目录 3599号)
e. Fisher移液管（Fisher scientific, 目录 03-692-164号）
f. DMEM/F12细胞培养基（Gibco, 目录 12400-024号）
g. 澳大利亚胎牛血清（Gibco, 目录 10099-141号） h. 磷酸盐缓冲盐水（Gibco, 目录 10010-072号）
i. 0.25 %胰岛素 -EDTA (Gibco, 目录 25200-056号）
j. Sulforhodamine B (Sigma, 目录 3520-42-1号）
k. 醋酸（Sinophma chemical reagent company, 目录 T20060508号）
1. 三氯醋酸（Sinophma chemical reagent company, 目录 T20060305号）
m. Tris碱（Amresco, 目录 0826号）
n. II级 A/B3 型生物学安全工作橱 (ThermoFomia目录. HB0053-03号）
0. 系列 II水套式二氧化碳培养箱（ThermoForma模型： 3111)
p. 离心机（Fisher Scientific Marathon 8 k, 目录 0027-02号）
q. Novastar板读取器（BMG Labtech, 目录 700-0081号）
r. 定轨摇床（Qilinbeier, 目录 TS-1号） 方案：
下面的方案用来测试本发明受试化合物对于 HUVEC 细胞的抑制细胞增殖 IC50值。
1. 将 HUVEC细胞殖于 100mm corning培养板在生长基（以 DMEM/F12+10%胎 牛血清为培养液)中进行培养 (37 V, 5 % C02), 直至细胞充分汇合；
2. 在 100 mm培养板中用胎牛血清洗涤 HUVEC细胞， 以 Tyrpsin消化细胞后， 再将细胞接种在 coming 96孔细胞培养板上，浓度为 50000 cells/ml,每个板空 6孔， 作为对照孔.；
3. 在 37 V, 5 % C02条件下， 将细胞在 96孔板中培养， 直至达到约 85 %汇合；
4. 用 DMSO溶解受试化合物， 配置 20 mM母液， 后用 DMSO稀释母液， 得到 一系列浓度的受试化合物的溶液， 即 2 mM, 1 mM, 0.2 mM, 20 μΜ, 2 μΜ, 0.2 μΜ;
5. 使用细胞培养棊（DMEM/F12 +10 %胎牛血清为培养液）稀释上面所配置的化 合物溶液。每个 DMSO系列浓度化合物溶液稀释 20倍，每次在细胞培养基中加入
5μ1 DMSO化合物溶液和 95μ1培养液， 确保 HUVEC细胞暴露在 DMSO溶液中的 浓度不超过 0.5 %， 用涡旋混合，；
6. 当 HUVEC细胞贴壁，生长达到 85%汇合后， 将培养基换为加有 DMEM/F12 +10 %胎牛血清培养液的新培养基， 每孔中再加入 180μ1培养液和 20 μΐ在第五步中所 制备的受试化合物溶液。阴性对照细胞组，加入含有 0.5%DMSO的 20 μΐ培养液， 这样 HUVEC细胞暴露在受试化合物溶液中的最终浓度为 100 μΜ, 10 μΜ, 5 μΜ, 1 μΜ, 0.1 μΜ, 0.01 μΜ, and 0.001 μΜ;
7. 将培养板放入恒温箱内， 在 37 °C, 5 % C02条件下， 连续培养 72小时；
8. 72小时后， 将培养板从恒温箱中转移到无菌工作室；
9. 将试药级纯水加入到 TCA中制备固定剂 （50 %三氯醋酸 -TCA),将细胞慢慢 地分层放在 50 μΐ冷 TCA溶液中；
10.在 4°C下， 培养 1小时， 后用水洗涤数次以除去 TCA、 血清蛋白等。 培养板在 空气中干燥， 存储待用。 空白背景光学密度值的测定是在没有细胞生长的培养基 中温育培养所得的数值。
1 1.用 10 %醋酸溶液制备 0.4 % Sulforhodamine B溶液， 并向每孔中加入 50 μΐ sulforhodamine B溶液；
12.细胞着色 30分钟；
13.制备 10 %醋酸洗涤溶液。 当着色将要完毕时， 弃去着色剂， 用 10 %的醋酸溶 液快速冲洗细胞。 重复上述的操作直至着色剂洗净为止， 尽量减少冲洗次数以减 少与蛋白结合的着色剂的去吸附。 冲洗完毕后， 将培养板在空气中干燥；
14.混合的着色剂溶解在一定体积的 Sulforhodamine B中， 增溶溶液（10 mM Tris) 与培养基原体积相同， 将培养板在室温下放置 5分钟， 用摇床缓慢搅拌加快与染 料的混合；
15.用分光光度测量， 在波长 565 nm下读取吸光度值。 吸光度数值为 565 nm下吸 光度减去 690 nm下 96孔板背景吸光度所得的数值；
16.使用如下方法计算抑制率比值：
IR= ΙΟΟχ (对照组吸光度值 -用药组吸光度值) /对照组吸光度值％.
IC50值可通过不同浓度下化合物抑制率比值计算得到。 本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的 IC50值见下表。
Figure imgf000046_0001
20 0.01 例 2: VEGF-R2激酶活性测定
本试验采用酶联吸附免疫测定法 (ELISA)测定重组人类 VEGF-R2蛋白体外激 酶活性。 材料与试剂 - a. 洗涤缓冲液 （PBS-T 缓冲液)： lx PBS (137 mM NaCl、 2.7 mM KC1、 4.3 mMNa2HP04、 1.4 mM KH2P04, 调 pH至 7.2)和 0.05 % Tween-20
b. 1 %牛血清白蛋白 (BSA, Ca ochem #136593)PBS-T缓冲液
c. 中止反应缓冲液： 50 mM EDTA , pH 8.0
d. DELFIA®铕标记抗鼠 IgG (PerkinElmer Life Sciences #AD0124)
e. DELFIA®信号倍增液 (PerkinElmer Life Sciences #1244-105)
f. DELFIA® Streptavidin包 96孔黄板（PerkinElmer Life Sciences #AAAND-0005) g. 重组人类 VEGF-R2激酶（50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 15 mM谷酰基胱氨酰甘氨酸和 20 %甘油 (Cell signaling technology #7787) h. lO mM ATP溶液（Cell signaling technology #9804)
i. Biotin-Gastrin Precursor (Tyr87) Peptide (Cell signaling technology #1310) j. Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) (Cell signaling technology #9411) k. HTScan™酪氨酸激酶缓冲液 (4x)
lx激酶缓冲液：
60 mM HEPES
5 mM MgCl2
5 mM MnCl2
3 μΜ Να3νθ4
(Cell signaling technology #9805)
1. 1.25 M DTT (lOOOx) (Cell signaling technology)
方案：
使用如下方案进行试验：
1.用 DMSO稀释受试化合物至所需最终浓度，在每个试验中加入 1 μΐ待测化合物、 —个阴性对照和空白对照 (均不接受任何受试化合物)；
2.用 dH201:l稀释 6 μΜ底物蛋白 (Tyr87),并在每个测试中加入 15 μΐ; 3.将 VEGF-R2酶从- 80°C直接转移到冰上， 酶解冻在冰上；
4.取 2.2 g VEGF-R2酶到每个测试中；
5.加入 10 μΐ DTT (1.25 M)到 2.5 ml 4x HTScan™酪氨酸激酶缓冲液 (240 mM HEPES pH 7.5, 20 mM MgCI2, 20 mM MnCI2, 12 μΜ Na3V04) 中， 制得 DTT/激酶 缓冲液；
6. 转移 0.75 ml DTT/激酶缓冲液到每个每个测试中， 制得 4x反应混合液， 并在 每个测试中加入 7.5 μ1 4χ反应液；
7.加入 2 μΙ ΑΤΡ (10 mM)至 498 μΐ d¾0中，并在每个测试中加入 7.5 μΐ;
30 μΐ反应最终测试条件为：
60 mM HEPES pH 7.5
5 mM MgCl2
5 mM MnCl2
Figure imgf000048_0001
1.25 mM DTT
ΙΟ μΜ ΑΤΡ
I.5 μΜ多肽底物
22 ng VEGF-R2激酶
8. 在 25°C下， 将反应管温育 30分钟；
9. 每个测试中加入 30 μΐ反应中止缓冲液 (50 mM EDTA, pH 8.0)中止反应； 10. 在 96孔 streptavidin包被培养板每孔中加入 25 μΐ反应液和 75 μΐ dH20， 在室 温下， 振摇 60分钟；
II. 每孔用 200 μΐ PBS-T缓冲液洗涤 3次， 在纸巾上轻拍以除去剩余的液体；
12.用 1 %牛血清白蛋白 PBS-T缓冲液 1:1000稀释主要抗体 Pliospho-酪氨酸 mAb (P-Tyr-100), 并在每孔中加入 100 μΐ稀释的 p-Tyr-100抗体；
13. 室温下， 振摇温育 60分钟；
14.按第 11步所述方法进行洗涤；
15. 用 1 %牛血清白蛋白 PBS-T缓冲液 1 :500稀释铕标记的抗鼠 IgG， 并在每个孔 中加入 100 μΐ稀释的抗体；
16. 室温下， 振摇温育 30分钟；
17.每孔用 PBS-T缓冲液 200 μΐ洗涤 5次， 在纸巾上轻拍以除去剩余的液体； 18. 每孔中加入 100 DELFIA®信号倍增液； T/CN2008/001388
19. 室温下， 振摇温育 5分钟；
20.在波长 615 mil下， 用合适的时间分辨板读取器读取荧光强度。
计算抑制率比值： IR (%) =100- 100*(X-B)/ (N-B)
X=受试化合物吸光度
N-阳性对照
B=空白
IC50值通过受测化合物一系列浓度梯度下的 IR值来计算。 本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的 IC5Q值见下表。
Figure imgf000049_0001

Claims

权利要求书：
1. 一种由通式（ I )表示的化合物或其药学上可接受的盐:
Figure imgf000050_0001
( I )
其中：
、 R2、 R3、 F 分别选自氢原子、 卤素、 烷基、 芳基、 杂芳基、 -OR5、 -0[CH2C¾0]rR7、 -NR5R6、 -COR5或 -NR5CORe ， 其中芳基、 杂芳基进一步被一 个或多个选自烷基、 烷氧基或者卤素的取代基所取代；
R5和 R6各自分别选自氢原子或烷基，其中垸基进一步被一个或多个选自芳基、 杂芳基、 卤代芳基、 羟基、 烷氧基、 芳氧基、 羧酸或者羧酸酯的取代基所取代；
R7是氢原子或者垸基；
ι·是 1~6。
2. 根据权利要求 1 所述的吡咯并六元杂环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接 受的盐， 其中包括-
Figure imgf000050_0002
Figure imgf000051_0001
3. 一种药物组合物， 其包含药物有效剂量的如权利要求 1或 2任何一项所述的吡 咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接受的盐， 及药学上可接受的 载体。
4.根据权利要求 1所述的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接 受的盐， 其中所述的药学上可接受的盐为化合物与选自以下的酸形成的盐： 苹果 酸、 乳酸、 马来酸、 盐酸、 甲磺酸、 硫酸、 磷酸、 柠檬酸、 酒石酸、 乙酸或三氟 乙酸。
5.根据权利要求 4所述的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接 受的盐， 其中所述的酸为： 苹果酸或马来酸。
6. 如权利要求 1所述的吡咯并六元杂环羟基吗啡啉化合物或其药学上可接受的盐 的制备方法， 该方法包括以下步骤：
氮气氛下，旋光化合物吗啡啉氨基双取代异丙醇（ I a)在 1-羟基苯并三唑和 N- 乙基- N， -(二甲氨基丙基) -碳二亚胺作用下与 5-羧甲基 -3-甲基 -1H-吡咯 -2， 4-二 羟酸 2-叔丁酯 4-乙酯在乙腈中加热得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯（ I b)；
Figure imgf000052_0001
氩气氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯（ I b)在乙醇中与盐酸加热回流得到旋光吡 咯酰胺乙酯（Ic);
Figure imgf000052_0002
(l ) ( I c)
进一步，旋光吡咯酰胺乙酯（ I c)在无水四氢呋喃中和硼垸加热回流选择性还原 得到手性取代吡咯乙酯（Id);
Figure imgf000052_0003
( I c) (Id)
接下来，在氩气氛下，手性取代吡咯乙酯（Id)在乙二醇中和一水合氢氧化锂加 热回流， 得到环合产物旋光吡咯并六元 N杂环（ I e)；
Figure imgf000052_0004
室温下，旋光吡咯并六元 N杂环（I e)在无水二氯甲垸中与三氯氧磷和 N， N - 甲基甲酰胺发生甲酰化反应， 生成旋光吡咯并六元 N杂环甲醛（ I f)；
Figure imgf000052_0005
最后，旋光吡咯并六元 N杂环甲醛（If)在碱 (如三乙胺，哌啶)存在下与不同的 吲哚酮加热 2〜12小时即得到通式（ I )所示的目标化合物手性的吡咯并六元 N杂环 轻基吗啡啉衍生物；
Figure imgf000053_0001
7.一种调节蛋白激酶催化活性的方法， 该方法包括将所述的蛋白激酶与权利要求 1〜5中任何一项所述的吡咯并六元 N杂环羟基吗啡啉类衍生物或其药学上可接受 的盐接触。
8. 根据权利要求 7所述的方法，其中所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体 酪氨酸激酶或丝氨酸-苏氨酸激酶。
9. 一种根据权利要求 1所述的化合物在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物 中的用途。
10. 根据权利要求 9所述的用途， 其中所述与蛋白质激酶有关的疾病选自与 VEGFR-2, EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, PDGFR, c-Kit, c-Met, FGFR或 Flt3相关的 疾病。
11. 一种调节蛋白激酶催化活性的方法， 其中包括将所述的蛋白激酶与权利要求 3 所述的组合物接触。
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