TWI699366B

TWI699366B - 治療或預防癌症的化合物

Info

Publication number: TWI699366B
Application number: TW106146042A
Authority: TW
Inventors: 李安榮; 黃文鑫; 楊庭軒; 李俊儀
Original assignee: 國防醫學院
Priority date: 2017-12-27
Filing date: 2017-12-27
Publication date: 2020-07-21
Also published as: TW201927785A

Abstract

本發明提供一種式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽類或其生理學上的功能衍生物：

Description

治療或預防癌症的化合物

本發明係關於用於治療或預防癌症的化合物。具體而言，本發明係關於一種用於治療或預防一受體酪胺酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)相關癌症的新穎化合物，以及其組合物與使用方法。

腫瘤血管生成為實質固態瘤進展的重要過程。新血管需要：(1)為腫瘤細胞增殖提供氧氣及營養物質，(2)移除腫瘤代謝廢物，以及(3)為轉移提供途徑(Folkman, Role of angiogenesis in tumor growth and metastasis, Semin. Oncol., 2002年, 29:15-18)。因此，抑制血管生成已成為治療腫瘤的有效方法。然而，有許多因子參與腫瘤血管生成的訊息傳遞，例如，血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factors，VEGFs)、血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factors，PDGFs)及其受體酪胺酸激酶(RTKs)、VEGF受體1-3 (VEGF receptors 1-3，VEGFR1-3)以及PDGF受體-α及β (PDGF receptor-α and β，PDGFR-α/β) (Roskoski, Jr., Sunitinib: a VEGF and PDGF receptor protein kinase and angiogenesis inhibitor, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2007年, 356:323-328)。透過促進內皮細胞增殖、遷移及存活，VEGFR-1及2在腫瘤血管生成訊息傳遞中具有關鍵作用(Holmes等人，Vascular endothelial growth factor receptor-2: structure, function, intracellular signaling and therapeutic inhibition, Cell. Signal., 2007年， 19:2003-2012)。此外，PDGFs及其受體在腫瘤血管生成中具有支持的作用。簡言之，PDGF途徑刺激纖維母細胞及血管平滑肌細胞的增殖，這是血管生成期間微血管形成所需的(Pietras等人，PDGF receptors as cancer drug targets, Cancer Cell, 2003年，3:439-443)。因此，抑制VEGFs與PDGFs訊息傳遞成為一種有前景的抗血管生成藥物開發方法。

近年來已有許多ATP競爭性VEGFR抑制劑被開發並且核准，例如，達沙替尼(dasatinib)、索拉非尼(sorafenib)以及舒尼替尼(sunitinib)。在許多ATP競爭性RTK抑制劑中，吡咯-二氫吲哚-2-酮為第一種被鑑定為激酶抑制劑的結構。舒尼替尼(sunitinib)為一種吡咯-二氫吲哚-2-酮類，它是一種口服活性多標靶酪胺酸激酶抑制劑，也是最有效的抗血管生成劑之一。它已被FDA批准用於治療轉移性腎細胞癌(renal cell carcinoma，RCC)、胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumors，GIST)，以及伊馬替尼(imatinib)不耐受與伊馬替尼難治性胃腸道間質瘤(GISTs)。它具有抑制多重激酶的活性，包括VEGFRs、PDGFRs、極光激酶(A、B及C)、RET、Flt-3、CSF-1R與c-Kit (Scagliotti等人，Targeting angiogenesis with multi-targeted tyrosine kinase inhibitors in the treatment of non-small cell lung cancer, Oncologist, 2010年， 15:436-446； Kogan等人，CSF-1R Up-regulation Is Associated with Response to Pharmacotherapy Targeting Tyrosine Kinase Activity in AML Cell Lines, Anticancer Res., 2012年， 32:893-899)。此外，許多研究已經設計並合成了許多吡咯-二氫吲哚-2-酮類似物以作為RTK抑制劑(Cho等人，Novel potent orally active multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitors: synthesis, structure-activity relationships, and antitumor activities of 2-indolinone derivatives, J. Med. Chem., 2013年， 53:8140-8149)。然而，尚需開發具有治療或預防受體酪胺酸激酶(RTKs)相關癌症潛力的新治療劑。

在本發明中出乎意料地發現，一些新化合物有效治療或預防癌症，具體而言是與受體酪胺酸激酶(RTKs)相關的癌症。

於一方面，本發明提供具有式I結構的化合物或其醫藥上可接受的鹽類或生理學上的功能衍生物：

式I 其中每個R₁ 、R₂ 、R₃ 以及R₄ 為H、F、Cl、Br、I、CF₃ 、OH、O(CH₂ )_n CH₃ 、NH₂ 、NHCO(CH₂ )_n CH₃ 、NH(CH₂ )_n CH₃ 、N((CH₂ )_n CH₃ )₂ 、NO₂ 、SH、S(CH₂ )_n CH₃ 、NHCONHX、NHCOOX、SO₃ X、SO₂ NHX、SO₂ NX₂ ，或NHSO₂ X；X為H、(CH₂ )_n CH₃ 、CH₂ (CH₂ )_n Cl、CH₂ (CH₂ )_n Br、CH₂ (CH₂ )_n I，或

；每個R₅ 、R₆ ，以及R₇ 為H、F、Cl、Br、I、CF₃ 、OH、O(CH₂ )_n CH₃ 、NH₂ 、NHCO(CH₂ )_n CH₃ 、NH(CH₂ )_n CH₃ 、N((CH₂ )_n CH₃ )₂ 、NO₂ ，或SH； W為NH₂ 、N((CH₂ )_n CH₃ )₂ 、N(CH₂ (CH₂ )_n Cl)₂ 、N(CH₂ (CH₂ )_n Br)₂ 、N(CH₂ (CH₂ )_n I)₂ 、

、

、

、

，或

； n為一個0-6的整數。

於本發明之一具體實施例中，其中R₁ 為H、F、Cl、Br、I、CF₃ 、OH、OCH₃ 、NO₂ 、SH、SO₂ NH₂ 、SO₂ N(CH₃ )₂ 、SO₂ N(CH₂ CH₃ )₂ 、SO₂ N(CH₂ CH₂ Cl)₂ 、SO₂ NHPh、SO₂ NH(4-CF₃ Ph)，或NHSO₂ CH₃ ；Ph為苯基；R₂ 、R₃ 以及R₄ 為H、W為N((CH₂ )CH₃ )₂ ；以及n=1。

於本發明之另一具體實施例中，其中R₁ 為H、F、Cl、Br，或I；R₂ 、R₃ 以及R₄ 為H、W為N((CH₂ )CH₃ )₂ ；n=1。

於另一方面，本發明提供一種用於治療或預防一癌症之醫藥組合物，其包含具有式I結構之化合物或其醫藥上可接受的鹽類或生理學上的功能衍生物。

於本發明之一具體實施例中，該癌症為受體酪胺酸激酶(RTKs)相關癌症。

於一方面，本發明提供了如本發明所提供之化合物在製備用於治療或預防一癌症的藥物中之用途，其中該藥物中的化合物以一抑制該RTK相關的癌症的RTK活性的有效量存在。

於本發明之一具體實施例中，該癌症為一受體酪胺酸激酶(RTK)相關癌症。

於本發明之一具體實施例中，其中該RTK相關癌症係選自由以下所組成之群組：腎細胞癌(renal cell carcinoma，RCC)、胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)、伊馬替尼(imatinib)不耐受和伊馬替尼難治性胃腸道間質瘤(GIST)、乳腺癌、肝細胞癌(hepatocellular cancer，HCC)、肺癌、非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)、胰腺癌、胰腺神經內分泌腫瘤、前列腺癌、去勢難治性前列腺癌(castration-refractory prostate cancer， CRPC)、直腸癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮頸癌、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、黑素瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓性白血病、鱗狀及甲狀腺癌、脊索瘤、骨肉瘤、神經母細胞瘤，以及其組合。

相信本發明所屬領域之普通技術人員可以基於本文之描述將本發明用於其最廣的範圍，而不需要進一步說明。因此，以下之描述應該被理解為說明性之目的，而非以任何方式限制本發明之範圍。

除非另外定義，否則本文使用的所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域之普通技術人員通常理解的含義相同。在衝突的情況下，以本文件(包括定義)為準。

如本文所用，除非上下文另有明確規定，否則單數形式「一」、「一個」以及「該」包括複數指代物。因此，例如，對「一樣本」的引用包括多個這樣的樣本及其對於本領域技術人員而言已知的等同物。

如本文所用，「個體」乙詞係指人類或哺乳動物，例如患者、伴侶動物(例如，狗，貓及其類似物)、農場動物(例如，牛、綿羊、豬、馬及其類似物)，或實驗動物(例如，大鼠、小鼠、兔及其類似物)。

如本文所用，「治療有效量」乙詞係指足以實現預期治療目的之藥劑的量。給定藥劑的治療有效量將隨著因子而變化，例如，藥劑的性質、施用途徑、接受試劑的動物的大小及種類，以及施用之目的。在每種情況下的治療有效量可以由本領域技術人員根據本文之公開內容及本領域已建立之方法憑經驗確定。

如本文所用，「受體酪胺酸激酶」或「RTK」等詞係指具有細胞外受體結構域以及一個或多個細胞內結構域的跨膜蛋白，包括一具有酪胺酸激酶酵素活性之結構域，其對許多多胜肽生長因子、細胞因子，以及激素而言為一高親和性的細胞表面受體。大多數受體酪胺酸激酶被發現為正常細胞過程的關鍵調節因子，且在許多類型的癌症之發展及進展中具有關鍵作用。受體酪胺酸激酶包括，但不限於，血管內皮生長因子受體1、2及3 (vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR 1、2及3)、血小板衍生的生長因子受體α及β (platelet-derived growth factor receptor，PDGFRα及β)、神經纖毛蛋白1及2 (neuropilin，NRP 1及2)、幹細胞因子受體(stem cell factor receptor，KIT)、類FMS酪胺酸激酶-3 (FMS-like tyrosine kinase，FLT-3)、神經膠質細胞株衍生的神經營養因子受體(glial cell-line derived neurotrophic factor receptor，RET)、巨噬細胞集落刺激因子受體(macrophage colony stimulating factor receptor，CSF1R)、極光激酶A、B及C。

如本文所用，「RTK相關癌症」乙詞係指具有RTK過表現的癌症。 RTK相關的癌症包括，但不限於，腎細胞癌(renal cell carcinoma，RCC)、胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)、伊馬替尼(imatinib)不耐受和伊馬替尼難治性胃腸道間質瘤(GIST)、乳腺癌、肝細胞癌(hepatocellular cancer，HCC)、肺癌、非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)、胰腺癌、胰腺神經內分泌腫瘤、前列腺癌、去勢難治性前列腺癌(castration-refractory prostate cancer，CRPC)、直腸癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮頸癌、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、黑素瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓性白血病、鱗狀及甲狀腺癌、脊索瘤、骨肉瘤、神經母細胞瘤。

根據本發明，新穎合成的化合物首先被製造出來，且之後發現其在治療或預防一受體酪胺酸激酶(RTK)相關癌症方面具有效果。

於本發明中，該新穎化合物具有式I之結構：

、

，或

； n為一個0-6的整數。

於本發明之一具體實施例中，R₁ 為H、F、Cl、Br、I、CF₃ 、OH、OCH₃ 、NO₂ 、SH、SO₂ NH₂ 、SO₂ N(CH₃ )₂ 、SO₂ N(CH₂ CH₃ )₂ 、SO₂ N(CH₂ CH₂ Cl)₂ 、SO₂ NHPh、SO₂ NH(4-CF₃ Ph)，或NHSO₂ CH₃ ；Ph為苯基；R₂ 、R₃ 以及R₄ 為H、W為N((CH₂ )CH₃ )₂ ；以及n=1。

於本發明之某些實例中，該化合物具有如式I之結構。於本發明之一具體實施例中，其中R₁ 為H、F、Cl、Br，或I；R₂ 、R₃ 以及R₄ 為H、W為N((CH₂ )CH₃ )₂ ；n=1。

根據本發明，其提供了一種用於治療或預防受體酪胺酸激酶(RTK)相關癌症的醫藥組合物，其包含具有式I結構之化合物。

根據本發明，其提供如本發明所定義之化合物在製備用於治療或預防受體酪胺酸激酶(RTK)相關癌症的藥物中之用途，其中該藥物中的化合物以一抑制該RTK相關的癌症的RTK活性的有效量存在。

於本發明之一具體實施例中，其中該受體酪胺酸激酶(RTK)係選自由下列所組成之群組：VEGFR 1、2及3 (血管內皮生長因子受體1、2及3)、PDGFRα及β (血小板衍生的生長因子受體α及β)、NRP 1及2 (神經纖毛蛋白1及2)、KIT (幹細胞因子受體)、FLT-3 (類FMS酪胺酸激酶-3)、RET (神經膠質細胞株衍生的神經營養因子受體)、CSF1R (巨噬細胞集落刺激因子受體)、極光激酶A、B及C，以及其組合。於一特定實例中，其中該受體酪胺酸激酶(RTK)為VEGFR2或PDGFRβ。

於本發明之一具體實施例中，其中該RTK相關癌症係選自由以下所組成之群組：RCC (腎細胞癌)、GIST (胃腸道間質瘤)、伊馬替尼(imatinib)不耐受和伊馬替尼難治性胃腸道間質瘤(GIST)、乳腺癌、HCC (肝細胞癌)、肺癌、NSCLC (非小細胞肺癌)、胰腺癌、胰腺神經內分泌腫瘤、前列腺癌、CRPC (去勢難治性前列腺癌)、直腸癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮頸癌、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、黑素瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓性白血病、鱗狀及甲狀腺癌、脊索瘤、骨肉瘤、神經母細胞瘤，以及其組合。一種具有式I結構的化合物或其醫藥上可接受的鹽類或生理學上的功能衍生物：

、

，或

； n為一個0-6的整數。

於另一方面，本發明提供了一種用於治療或預防一癌症之醫藥組合物，其包含具有式I結構之化合物或其醫藥上可接受的鹽類或生理學上的功能衍生物。

於本發明之一具體實施例中，該癌症為一受體酪胺酸激酶(RTKs)相關癌症。

於本發明之一具體實施例中，其中該RTK相關癌症係選自由以下所組成之群組：腎細胞癌(RCC)、胃腸道間質瘤(GIST)、伊馬替尼(imatinib)不耐受和伊馬替尼難治性胃腸道間質瘤(GIST)、乳腺癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌、胰腺神經內分泌腫瘤、前列腺癌、去勢難治性前列腺癌(CRPC)、直腸癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮頸癌、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、黑素瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓性白血病、鱗狀及甲狀腺癌、脊索瘤、骨肉瘤、神經母細胞瘤，以及其組合。

於本發明之一特定具體實施立中，其中該RTK為VEGFR2或PDGFRβ。

本發明之醫藥組合物可以任何適當的途徑給藥，包括，但不限於，腸胃外或口服給藥。用於腸胃外給藥的醫藥組合物包括溶液、懸浮液、乳液，以及在使用前立即溶解或懸浮於溶劑中的固體可注射組合物。注射劑可以透過將一種或多種活性成分溶解、懸浮或乳化於稀釋劑中來製備。該稀釋劑的實例為注射用蒸餾水、生理鹽水、植物油、乙醇，及其組合。此外，該注射劑可以含有穩定劑、增溶劑、懸浮劑、乳化劑、安撫劑、緩衝劑、防腐劑等。注射劑在最終配製步驟中滅菌或透過無菌操作製備。

根據本發明，醫藥組合物可以呈固體或液體形式。固體形式包括片劑、丸劑、膠囊劑、可分散粉劑、顆粒劑及其類似物。口服醫藥組合物還包括將被黏附到口腔的漱口液以及舌下片劑。膠囊包括硬膠囊與軟膠囊。在用於口服使用的這類固體組合物中，一種或多種活性化合物可以單獨或與稀釋劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、穩定劑、增溶劑混合，然後以常規方式配製為製劑。必要時，這些製劑可以塗覆塗層劑，或者它們可以塗覆兩層或更多層塗層。於另一方面，用於口服給藥的液體形式包括醫藥上可接受的水溶液、懸浮液、乳劑、糖漿劑、酏劑及其類似物。在這樣的醫藥組合物中，一種或多種活性化合物可以溶解、懸浮或乳化於常用的稀釋劑(例如，純水、乙醇或其混合物等)中。除了這些稀釋劑外，該醫藥組合物還可含有潤濕劑、懸浮劑、乳化劑、甜味劑、調味劑、香料、防腐劑和緩衝劑及其類似物。

以下之特定實施例將被解釋為僅僅是說明性的，而不以任何方式限制本公開之其餘部分。無需進一步詳述，相信本領域技術人員可以基於本文的描述最大程度地利用本發明。

實施例

實施例 1 化學

所有這些化學品均購自Aldrich-Sigma化學公司(St. Louis市，密蘇里州，美國)以及Alfa-Aesar化學公司(Heysham，LA32XY，英格蘭)，且不經進一步純化即可使用。以在Merck F254矽膠板上的TLC常規監測所有反應。矽石環矽膠(70-230孔目)用於色譜分析。除非另有說明，以Varian Agilent-400 NMR儀器在CDCl₃ 或乙酸-d ₆ 中測定¹ H-與¹³ C-NMR圖譜。化學位移(δ )表示來自作為內部標準品(σ 0.00)的四甲基矽烷(tetramethylsilane，TMS)的低磁場下的百萬分率(ppm)，且耦合常數(J )的單位為赫茲(Hz)。使用置於台灣國立交通大學科技部儀器中心的Bruker公司型號為Impact HD (ESI)的高解析氣相層析質譜儀(high resolution mass spectra，HR-MS)進行分析。所有的溶劑及試劑都是自商業購得，如果需要，在使用前進行純化。以Leica公司型號為DM1000的顯微鏡獲取影像。

實施例 2 化合物 2-8q 之製備

2.1 化合物 2-8e 的合成方案

根據以下方案進行化合物2-8e之全合成：

其中該試劑以及條件為：a: CAN, THF, AcOH, H₂ O, 1小時, 98%；b:N ,N -二乙基乙二胺, 乙醇, r.t., 4小時；c: NaBH₄ , TsOH．H₂ O, 6小時, 90%；d: 1N NaOH_(aq) , 甲醇, 65 ºC, 6小時, 96%；e: CDI, 無水 THF, 6小時, 28%；f: H₂ SO₄ , 甲醇, 回流, 4.5小時；g: Vilsmeier試劑, DCM, r.t., 5小時；h: 哌啶, 二氫吲哚-2-酮, 乙醇, r.t., 5小時, 43-56%。

2.2 化合物 2 之合成及特徵描述

在先前的研究中已經描述了化合物2之合成(Cho等人，Novel potent orally active multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitors: synthesis, structure-activity relationships, and antitumor activities of 2-indolinone derivatives, J. Med. Chem.,2010年， 53:8140-8149；Thyrann, and Lightner, Oxidation of pyrrole α-methyl to formyl with ceric ammonium nitrate, Tetrahedron Lett.,1995年，36:4345-4348)。3,5-二甲基-1H -吡咯-2,4-二甲酸2-叔丁酯4-乙酯(化合物1 )(30克，0.113 mol)溶於300毫升 THF中，對該混合物中依次加入360毫升 AcOH與300毫升的水；然後將246克(0.449 mol)硝酸鈰銨一次性加入到該混合物中，並在室溫下攪拌1小時，然後將反應混合物倒入1000毫升冰水中，攪拌30分鐘，將沉澱物過濾並真空乾燥，得到化合物2 (31.1克，產率為98%)。

得到之化合物2 的光譜數據如下：5- 甲醯基 -3- 甲基 -1H - 吡咯 -2,4- 二羧酸 2- 叔丁酯 4- 乙酯 ( 化合物 2) ：¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ )δ : 10.25 (s, 1H, H), 4.38 (q, 2H,J = 7.2), 2.57 (s, 3H, CH₃ ), 1.59 (s, 9H), 1.26 (t, 3H,J = 7.2 Hz, CH₃ )。

2.2 化合物 3 之合成及特徵描述

將化合物2 (2.81克，10.0 mmol)溶於20毫升乙醇中，然後將1.5毫升的N ,N -二乙基乙二胺加到該溶液中，將反應混合物攪拌4小時。將硼氫化鈉(0.38克10 mmol)與甲苯磺酸單水合物(18.00克，10 mmol)加到該混合物中，攪拌6小時，再以150毫升水淬滅，以EA (30毫升×3)萃取，合併的有機層以無水Na₂ SO₄ 乾燥、過濾，並以真空蒸發該濾液，以得到化合物3 (3.4克，產率為90%)。

得到之化合物3 的光譜數據如下：5-(((2-( 二乙胺基 ) 乙基 ) 胺基 ) 甲基 )-3- 甲基 -1H - 吡咯 -2,4- 二羧酸 2- 叔丁酯 4- 乙酯 ( 化合物 3) ：¹ H-NMR (400 MHz, 甲醇-d ₄ )δ : 4.27 (q, 2H,J = 7.2), 4.05 (s, 2H, CH₂ ), 2.68 (t, 2H, CH₂ ,J = 6.0), 2.55-2.49 (m, 9H, CH₃ , CH₂ × 3), 1.55 (s, 9H), 1.34 (t, 3H,J = 7.2 Hz, CH₃ ), 1.00 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2)。

2.3 化合物4之合成及特徵描述

將化合物3(2.43克，6.4mmol)溶於20毫升甲醇中，並對該混合物加入20毫升1N NaOH，然後加熱回流4小時，以1N HCl中和後，減壓蒸發溶劑，將20毫升甲醇加入到殘餘物中並過濾，真空蒸發該濾液以得到化合物4(2.16克，產率為96%)。

得到之化合物4的光譜數據如下：

5-(叔丁氧基羰基)-2-(((2-(二乙基胺基)乙基)胺基)甲基)-4-甲基-1H-吡咯-3-羧酸(化合物4)：

¹H-NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ：4.36(s,2H,CH₂),3.58(s,2H,CH₂)2.69(t,2H,J=7.0Hz,CH₂),2.82(t,2H,J=6.4Hz,CH₂),2.61(q,4H,J=7.2Hz,CH₂×2),1.57(s,9H,CH₃×3),1.04(t,6H,J=7.2,CH₃×2),2.41(s,3H,CH₃)。

2.4 化合物5之合成及特徵描述

在氮氣環境下，將化合物4(5.44克，16.0mmol)與CDI(5.19克，32.0mmol)懸浮於300毫升的無水THF中，將反應混合物加熱至65℃6小時，然後過濾反應混合物，減壓蒸發該濾液並通過矽膠管柱色層分析(20克，EA/甲醇/TEA 90/10/1)純化，得到化合物5(3.0克，產率為56%)。

得到之化合物5的光譜數據如下：

(5-(2-(二乙基胺基)乙基)-3-甲基-4-氧代-1,4,5,6-四氫吡咯並[3,4-b]吡咯-2-羧酸叔丁酯)(化合物5)

¹H-NMR(400MHz，甲醇-d ₄)δ：4.38(s,2H,CH2),3.61(t,2H,J=6.9,CH2),2.72(t,2H,J=6.9,CH2),2.67(q,4H,J=7.2,CH2×2),1.07(t,6H,J=7.2,CH3×2)。

2.5 化合物 6 之合成及特徵描述

將化合物5 (1.34克，4.0 mmol)溶於100毫升甲醇中，並對該混合物中加入10毫升15% H₂ SO₄ ，然後加熱回流4.5小時。待該反應混合物冷卻後，將其調節至pH為14並以EA (30毫升×3)萃取，並將有機層合併，以Na₂ SO₄ 乾燥，得到粗化合物6 (5-(2-( 二乙基胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -5,6- 二氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -4(1H )- 酮 ) 。

2.6 化合物 7 之合成及特徵描述

將化合物6 (1.21克，5.1 mmol)溶於15毫升的DCM中，對該溶液中加入Vilsmeier試劑(0.82克，6.1 mmol)。在室溫下攪拌該反應混合物5小時，以1N NaOH將反應混合物調節至pH為14，以EA (10毫升×5)萃取，合併有機層，以Na₂ SO₄ 乾燥、蒸發，並以矽膠管柱色層分析法純化，得到粗化合物7 (1.1克，產率為91%)。

得到之化合物7 的光譜數據如下：5-(2-( 二乙胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -4- 氧代 -1,4,5,6- 四氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -2- 甲醛 ( 化合物 7) ： ¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ )δ : 9.20 (s, 1H, CHO), 4.36 (s, 2H, CH₂ ), 3.56 (t, 2H,J = 6.4 Hz, CH₂ ), 2.64 (t, 2H,J = 6.4 Hz, CH₂ ), 2.55 (q, 4H,J = 7.2 Hz, CH₂ × 2), 2.47 (s, 3H, CH₃ ), 1.00 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2)。

2.7 化合物 8a-8q 之合成及特徵描述

化合物8a-8q使用類似的方法製備。整體而言，將化合物8a (263毫克，1.0 mmol)溶於5.0毫升的乙醇中，加入哌啶(0.10毫升，1.0 mmol)，並向溶液加入1.0 mmol 5-取代羥吲哚，於室溫攪拌6小時，過濾沉澱物，以乙醇洗滌，並通過矽膠管柱色層分析法(EA/甲醇/TEA 90/10/1)純化。

得到之化合物8a-8e 的光譜數據如下：(Z )-3-((5-(2-( 二乙胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -4- 氧代 -1,4,5,6- 四氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -2- 基 ) 亞甲基 ) 二氫吲哚 -2- 酮 ( 化合物 8a) ：¹ H-NMR (400 MHz, 丙酮-d ₆ )δ : 7.75 (s, 1H, C=CH), 7.73 (d, 1H,J = 7.6 Hz, ArH), 7.18 (dd, 1H,J = 7.6, 7.6 Hz, ArH), 7.03 (dd, 1H,J = 7.6, 7.6 Hz, ArH), 6.98 (d, 1H,J = 7.6 Hz, ArH), 4.59 (s, 2H, CH₂ ), 3.55 (t, 2H,J = 6.4 Hz, CH₂ ), 2.65 (t, 2H,J = 6.4 Hz, CH₂ ), 2.55 (q, 4H,J = 7.2 Hz, CH₂ × 2), 2.47 (s, 3H, CH₃ ), 0.99 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2),¹³ C-NMR (100 MHz, 乙酸-d ₄ )δ : 171.48, 169.96, 149.59, 139.30, 133.61, 126.27, 126.04, 125.20, 123.35, 120.86, 119.58, 118.57, 111.41, 51.94, 48.59, 48.22, 39.56, 9.89, 8.78. MS m/z (ESI): 379.2133 [M + H]⁺ 。(Z )-3-((5-(2-( 二乙胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -4- 氧代 -1,4,5,6- 四氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -2- 基 ) 亞甲基 )-5- 氟二氫吲哚 -2- 酮 ( 化合物 8b) ：¹ H-NMR (400 MHz, 乙酸-d ₄ )δ : 7.62 (s, 1H, C=CH), 7.38 (dd, 1H,J = 9.0, 2.0 Hz, ArH), 6.96-6.90 (m, 2H, ArH), 4.59 (s, 2H, CH₂ ), 3.97 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.49 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.37 (q, 4H,J = 7.2 Hz, CH₂ × 2), 2.47 (s, 3H, CH₃ ), 1.31 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2),¹³ C-NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ )δ : 171.24, 169.68, 149.90, 137.68, 133.59, 128.63, 128.50, 127.89, 127.35, 126.55, 121.12, 117.19, 112.47, 51.83, 48.56, 48.13, 39.48, 9.93, 8.74. MS m/z (ESI): 397.2038 [M + H]⁺ 。(Z )-5- 氯 -3-((5-(2-( 二乙胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -4- 氧代 -1,4,5,6- 四氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -2- 基 ) 亞甲基 ) 二氫吲哚 -2- 酮 ( 化合物 8c) ：¹ H-NMR (400 MHz, 乙酸-d ₄ )δ : 7.64 (s, 1H, C=CH), 7.62 (d, 1H,J = 2.0 Hz, ArH), 7.16 (dd, 1H,J = 8.2, 2.0 Hz, ArH), 6.96 (d, 1H,J = 8.2 Hz, ArH), 4.59 (s, 2H, CH₂ ), 3.97 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.49 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.37 (q, 4H,J = 7.2 Hz, CH₂ × 2), 2.47 (s, 3H, CH₃ ), 1.31 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2),¹³ C-NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ )δ : 169.83, 166.13, 158.61 (d,J = 21.2), 148.25, 135.49, 132.39, 127.13 (d,J = 9.5), 125.92, 124.95, 121.24, 117.11, 113.69 (d,J = 24.5), 110.71 (d,J = 8.5), 106.98 (d,J = 25.6), 49.02, 46.71, 46.58, 37.30, 9.99, 8.68. MS m/z (ESI): 413.1743 [M + H]⁺ 。(Z )-5- 溴 -3-((5-(2-( 二乙胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -4- 氧代 -1,4,5,6- 四氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -2-- 基 ) 亞甲基 ) 二氫吲哚 -2- 酮 ( 化合物 8d) ：¹ H-NMR (400 MHz, 乙酸-d ₄ )δ : 7.74 (d, 1H,J = 1.6 Hz, ArH), 7.59 (s, 1H,C=CH), 7.30 (dd, 1H,J = 8.4, 1.6 Hz, ArH), 6.90 (d, 1H,J = 8.4 Hz, ArH), 4.55 (s, 2H, CH₂ ), 3.96 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.50 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.38 (q, 4H,J = 7.2 Hz, CH₂ × 2), 2.46 (s, 3H, CH₃ ), 1.33 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2),¹³ C-NMR (100 MHz, 乙酸-d ₄ )δ :170.95, 169.58, 149.83, 138.02, 133.60, 130.66, 128.43, 127.29, 126.43, 122.37, 121.05, 116.95, 115.81, 112.86, 51.80, 48.52, 48.14, 39.47, 9.92, 8.74. MS m/z (ESI): 413.1744 [M + H]⁺ 。(Z )-3-((5-(2-( 二乙胺基 ) 乙基 )-3- 甲基 -4- 氧代 -1,4,5,6- 四氫吡咯並 [3,4-b ] 吡咯 -2- 基 ) 亞甲基 )-5- 碘吲哚啉 -2- 酮 ( 化合物 8e) ：¹ H-NMR (400 MHz, 乙酸-d ₄ )δ : 7.90 (s, 1H, C=CH), 7.64 (s, 1H, ArH), 7.50 (d, 1H,J = 8.0 Hz, ArH), 6.81 (d, 1H,J = 8.0 Hz, ArH), 4.59 (s, 2H, CH₂ ), 3.97 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.49 (t, 2H,J = 6.0 Hz, CH₂ ), 3.37 (q, 4H,J = 7.2 Hz, CH₂ × 2), 2.47 (s, 3H, CH₃ ), 1.31 (t, 6H,J = 7.2, CH₃ × 2),¹³ C-NMR (100 MHz, 乙酸-d ₄ )δ : 171.56, 169.77,149.90,149.89,149.83,133.51,127.54,126.54,121.11,116.11,114.56,112.18,112.12,106.70,51.85,49.42,48.15,39.52,9.93,8.75.MS m/z(ESI)：505.1094[M+H]⁺。

實施例3 細胞培養

所有細胞株皆維持於37℃，5% CO₂環境中。在DMEM培養基(Gibco公司，Grand Island，紐約州)中培養HCT116細胞(人類結腸癌細胞，ATCC)。細胞培養基含有10%定義的胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)。

實施例4 細胞增殖測定

將HCT116細胞維持在含有10% FBS(HyClone公司，Logan，猶他州)的DMEM培養基(Gibco公司，Grand Island，紐約州)中，並於37℃，5% CO₂環境中培養。細胞以10000個細胞/孔的密度種植於96孔盤上培養24小時；加入指定化合物的系列稀釋液並另外培養72小時。在培養結束時，採用MTT((3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)測定細胞存活率。以DMSO溶解MTT甲臢結晶，並使用ELISA盤讀取儀紀錄在波長570nm之吸光度。

實施例5 體外血管形成測定

根據製造商提供的實驗方案使用血管生成套組(KURABO公司，日本)。簡言之，將HUVECs細胞與纖維母細胞共培養於具有基礎培養基或溶劑對照培養基(含有1.0%DMSO的基礎培養基)或含有化合物8a、8b、8c、8d以及8e(0.5與2.5μM)的培養基的24孔盤中。培養物中具有或不具有試劑的培養基每3天更換一次。於11天後，將HUVECs細胞固定並根據製造商的實驗方案以抗-CD31抗體染色。使用血管發生圖像分析儀(Kurabo公司)測量血管形成面積、長度、關節以及路徑。

實施例 6 體外激酶測定

透過量化在測試化合物的存在下摻入受質的³³ P之量，以測量測試化合物對VEGFR-2與PDGFRβ活性之抑制。簡言之，在反應緩衝液中製備特定的激酶與受質以及所需的輔因子。將測試化合物加入反應中，20分鐘後，加入ATP (Sigma公司，St. Louis市，密蘇里州)以及³³ P ATP (Perkin Elmer公司，Waltham，麻州)的混合物至終濃度為10 μM。於室溫下靜置120分鐘以進行反應，將反應物滴點於P81離子交換濾紙(Whatman公司，Piscataway，紐澤西州)上。以0.1%磷酸溶液充分洗滌濾紙以除去未結合的磷酸鹽。以相較於溶劑對照組(DMSO)殘存於測試化合物中的激酶活性的百分比作為激酶活性數據。

統計分析

以GraphPad Prism第6版進行統計運算。結果以平均值±SD呈現。統計學上的顯著性由未配對學生氏t檢驗確定。P值在圖中以星號表示。*，P＜0.05；**，0.01＜P＜0.05；***，0.001＜P＜0.01；****，0.0001＜P ＜0.001。

結果

1. 化合物 2-8q 之合成

以Paal-Knorr吡咯合成反應來合成化合物1 (3,5-二甲基-1H -吡咯-2,4-二羧酸2-叔丁酯4-乙酯)(Kennedy等人，a rationally designed fluorescent probe for redox active metals, J. Am. Chem. Soc., 2009年，131:8578-8586)。製備化合物2 作為吡咯二酯α-甲基的選擇性氧化作用，然後在乙醇中以對甲苯磺酸活化的硼氫化鈉直接還原α-甲醯基的胺化作用(Cho與Kang，Direct and indirect reductive amination of aldehydes and ketones with solid acid-activated sodium borohydride under solvent-free conditions, Tetrahedron, 2005年，61: 5725-5734)，得到化合物3 。化合物3 的乙酯基被水解為羧酸(化合物4 )。在氮氣環境下，CDI促進化合物4 的分子內醯胺化，導致得到化合物5 ，然後以硫酸使化合物5 脫羧而得到化合物6 。化合物6 以Vilsmeier試劑在DCM中甲醯化，得到化合物7 。化合物7 與5-取代的羥吲哚縮合而得到化合物8a-8q 。化合物8a-8q的結構如表1所示。根據六元環稠合吡咯二氫吲哚-2-酮合成之方法，本案發明人嘗試在乙二醇中使用LiOH來合成化合物5 ，並以在甲苯中的三甲基鋁或在THF中的雙(三甲基鋁鎓)-1,4-二氮雜雙環[2,2,2]辛烷(DABAL-Me₃ )處理化合物3 (Novak等人，Amide bond formation using an air-stable source of AlMe₃ , Tetrahedron Lett., 2006年，47:5767-5769)。結果顯示，以乙二醇中的LiOH處理化合物3 得到化合物4 ；以三甲基鋁或DABAL-Me₃ 處理化合物3 得到產率非常低的化合物6 。表1 化合物8a-8q的結構

2. 抗增殖活性

評估新合成的化合物8a-8q與舒尼替尼抗人類癌症細胞株HCT116增殖的能力(表2)。結果顯示，化合物8c 、 8d ，以及8e 顯示出抑制HCT-116癌細胞增殖的能力。化合物8c 與8d 的抑制效力大約等於舒尼替尼，化合物8e 顯示出比舒尼替尼更好的效力。然而，化合物8a 與8b 未顯示出對HCT116細胞株的效力。本案發明人還觀察到提高鹵素取代基的大小會導致HCT116細胞株的細胞毒性增強。一些公開的研究發現，改變C-5鹵素取代基將影響細胞毒性(Sun等人，Discovery of 5-[5-Fluoro-2-oxo-1,2- dihydroindol-(3Z )-ylidenemethyl]-2,4- dimethyl-1H -pyrrole-3-carboxylic Acid (2-Diethylaminoethyl)amide, a Novel Tyrosine Kinase Inhibitor Targeting Vascular Endothelial and Platelet-Derived Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase, J. Med. Chem., 2003年， 46:1116-1119；Kuchar等人，Radioiodinated sunitinib as a potential radiotracer for imaging angiogenesis-radiosynthesis and first radiopharmacological evaluation of 5-[¹²⁵ I]Iodo-sunitinib, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2012年，22:2850-2855)。因此，5-碘舒尼替尼對人類結腸癌細胞株HT-29的IC₅₀ 比舒尼替尼高6倍，但在本案發明人的研究中，在C-5位含有5-碘取代基的化合物8e 的IC₅₀ 約比化合物8a 與 8b 少二至三倍。此外，化合物8e 抗HCT116的能力優於舒尼替尼。在先前的研究中，Sun及其同事們也提出改變吡咯-二氫吲哚-2-酮的C-5鹵素取代基會影響吡咯-二氫吲哚-2-酮的細胞毒性。越來越多的研究顯示，VEGFR-2抑制劑透過p53上調細胞凋亡調節劑(p53 upregulated modulator of apoptosis，PUMA)誘導人類結腸癌細胞凋亡(Zheng等人，Crizotinib induces PUMA-dependent apoptosis in colon cancer cells, Mol. Cancer Ther., 2013年，12:777-786)。在近期出版的分子癌症治療期刊(Molecular Cancer Therapeutics)中，Sun及其同事證實，在極光激酶抑制後透過NF-κB途徑轉錄活化了PUMA (Sun等人，Aurora kinase inhibition induces PUMA via NF-kB to kill colon cancer cells, Mol. Cancer Ther., 2014年，13:1298-1308)。另一方面，舒尼替尼在早期研究中顯示出極光激酶抑制活性(Godl等人，Proteomic characterization of the angiogenesis inhibitor SU6668 reveals multiple impacts on cellular kinase signaling, Cancer Res., 2005年，65:6919-6926)以及與六元環烷酮稠合的吡咯二氫吲哚-2-酮顯示出改善極光激酶抑制作用。本案發明人認為，可透過將C-5取代基替換為批量鹵素取代基來改進新合成的化合物之極光激酶抑制活性。本案發明人的研究結果顯示，透過置換C-5位置的批量的鹵素取代基，可增強五元環稠合的吡咯-二氫吲哚-2-酮衍生物的HCT116增殖抑制活性。表2. 化合物8a-8q在人類癌症細胞株HCT116中的體外抗增殖作用

3. 激酶抑制測定

在生物化學測定中，化合物8a-8e 顯示出對VEGFR-2與PDGFRβ都有非常有效的抑制活性(表2)。化合物8a 、 8c 、 8d 與8e 顯示出對抑制VEGFR-2非常好的效力；化合物8a 、 8c 、 8d 與8e 的IC₅₀ 值比舒尼替尼的值強約4-6倍。與本案發明人的預期相反，含有C-5氟取代基的五元稠合吡咯-二氫吲哚-2-酮的化合物8b 沒有顯示出對VEGFR-2與PDGFRβ更高的抑制效力。這些結果與先前的研究不同。在Cho及其同事的研究中，5-氟取代的六元環稠合吡咯二氫吲哚-2-酮對VEGFR-2的IC₅₀ 優於5-氯或5-溴取代的六元環稠合的吡咯二氫吲哚-2-酮(Cho等人，J. Med. Chem., 2010年，53:8140-8149)。於另一方面，在Sun及其同事的研究結果中，5-氯與5-溴取代的吡咯-二氫吲哚-2-酮對VEGFR-2的抑制活性比5-氟取代的吡咯-二氫吲哚-2-酮強約2-3倍(Sun等人，J. Med. Chem., 2003年，46:1116-1119)。在PDGFRβ抑制實驗中，本案發明人的結果顯示，五元環稠合的吡咯-二氫吲哚-2-酮衍生物(化合物8a 、 8c 、 8d 以及8e )的抑制活性優於舒尼替尼。與本案發明人的預期相反，化合物8b 在生化激酶抑制測定中並未顯示出較佳的PDGFRβ抑制活性。化合物8b 在體外血管形成測定中則顯示出非常好的抑制活性。然而，化合物8a-8e 在生化測定中仍顯示出抑制PDGFRβ的效力。合用時，透過將五元環與吡咯-二氫吲哚-2-酮骨架稠合，可以提高對VEGFR-2的抑制活性。五元環稠合的吡咯-二氫吲哚-2-酮的C-5的鹵素取代基對VEGFR-2抑制則無作用。

4. 體外血管形成測定

通過血管生成套組(Kurabo公司)測試新合成化合物8a-8e 的體外血管形成抑制活性。如圖1(A)-1(D)所示，0.5及2.5 μM劑量的化合物8a-8e 皆可抑制VEGF誘導的血管形成。在統計學分析中，VEGF與所有新合成化合物8a-8e 處理(0.5與2.5 μM)的HUVECs、纖維母細胞共培養系統的血管形成抑制，相較於只有VEGF處理的面積約少10-50倍；相較於只有VEGF處理者，長度約少11-33倍；相較於只有VEGF處理者，在關節中少3-50倍；相較於只有VEGF處理者，在途徑中少3-33倍(圖1(A)-1(D))。在新合成的化合物中，8a 與8b 顯示出最佳的體外血管形成抑制活性。有趣的是，在所有四個管形成參數中，化合物8a 、 8b 與8e 在2.5 μM與0.5 μM劑量之間沒有顯示出顯著差異。然而，在所有四個參數中，化合物8c 、 8d 與8e 在2.5 μM與0.5 μM劑量之間的抑制百分比顯著不同。本發明的結果還顯示化合物8e 的血管形成抑制為劑量依賴性的(圖1(A)-1(D))。此外，在此呈現的結果揭示化合物8d 與8e 在2.5 μM劑量中的四個參數的抑制百分比顯著低於0.5 μM。這些結果在任何先前的相關出版物中都沒有被找到；因此應該進一步研究。總而言之，化合物8a-8e 顯示出極好的抑制體外血管形成的效力；在這些化合物中，化合物8a 與8b 顯示出最好的抑制活性，8a 與8b (0.5與2.5 μM)的血管形成百分比相較於只有VEGF者約少20-50倍。

本發明提供了一系列新穎的五元環稠合的吡咯-二氫吲哚-2-酮衍生物。這是首次報告五元環稠合吡咯二氫吲哚-2-酮的合成及生物評估。將五元-雜環與吡咯-二氫吲哚-2-酮稠合會提高對VEGFR-2與PDGFRβ二者的抑制活性。替代五元-雜環稠合吡咯-二氫吲哚-2-酮的C-5鹵素取代基可提高VEGFR-2與PDGFRβ的抑制活性；在新合成的化合物中，化合物8d 對VEGFR-2與PDGFRβ均表現出最好的抑制活性。所有新合成的化合物對體外血管形成均表現出良好的抑制作用，尤其是化合物8a 與8b 。較小的C-5鹵素取代基顯示更好的體外血管形成抑制活性。於另一方面，五元-雜環稠合的吡咯-二氫吲哚-2-酮衍生物的C-5位置上的批量鹵素取代基對人類癌細胞株HCT-116表現出更好的效力。本發明提供了作為RTK抑制劑的吡咯二氫吲哚-2-酮的藥物設計之新策略。

無

當結合所附圖式閱讀時，將更好地理解前面的概述以及以下對本發明的詳細描述。在所附圖式中：

圖1(A)至1(D)所示為0.5 μM以及2.5 μM的五元環稠合的吡咯-二氫吲哚-2-酮衍生物對VEGF誘導的體外血管形成之影響，(A)面積，(B)長度，(C)關節，(D)途徑，以血管發生影像分析儀(Kurabo公司)進行測量。數據代表平均值 ± SD (n = 4)。*，相對於VEGF，P ＜0.05；**，相對於VEGF，0.01 ＜P ＜0.05；***，相對於VEGF，0.001 ＜P ＜0.01；****，相對於VEGF，0.0001 ＜P ＜0.001 (學生氏t檢驗)。

無

Claims

一種具有式I結構之化合物或其醫藥上可接受之鹽類，
其中R₁為H、F、Cl、Br，或I；R₂、R₃以及R4為H；W為N((CH₂)CH₃)₂；n=1。
一種用於治療一受體酪胺酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)相關癌症之醫藥組合物，其包如請求項1之化合物以及一醫藥上可接受之載體；其中該RTK相關癌症係選自由以下所組成之群組：腎細胞癌(renal cell carcinoma，RCC)、胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)、伊馬替尼(imatinib)不耐受和伊馬替尼難治性胃腸道間質瘤(GIST)、乳腺癌、肝細胞癌(hepatocellular cancer，HCC)、肺癌、非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)、胰腺癌、胰腺神經內分泌腫瘤、前列腺癌、去勢難治性前列腺癌(castration-refractory prostate cancer，CRPC)、直腸癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮頸癌、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、黑素瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓性白血病、鱗狀及甲狀腺癌、脊索瘤、骨肉瘤、神經母細胞瘤，以及其組合。
一種如請求項1定義之化合物在製備用於治療一受體酪胺酸激酶(RTK)相關癌症之藥物中的用途。
如請求項3之用途，其中該受體酪胺酸激酶(RTK)係選自由下列所組成之群組：血管內皮生長因子受體1、2及3(vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR 1、2及3)、血小板衍生的生長因子受體α及β(platelet-derived growth factor receptor，PDGFRα及β)、神經纖毛蛋白1及2(neuropilin，NRP 1及2)、幹細胞因子受體(stem cell factor receptor，KIT)、類FMS酪胺酸激酶-3(FMS-like tyrosine kinase，FLT-3)、神經膠質細胞株衍生的神經營養因子受體(glial cell-line derived neurotrophic factor receptor，RET)、巨噬細胞集落刺激因子受體(macrophage colony stimulating factor receptor，CSF1R)、極光激酶A、B及C，以及其組合。
如請求項4之用途，其中該RTK為VEGFR 2或PDGFR β。