WO2008151515A1

WO2008151515A1 - Composés de type carboxylate de fibrate, procédés de préparation et utilisation de ceux-ci

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Publication number: WO2008151515A1
Application number: PCT/CN2008/001108
Authority: WO
Inventors: Bing Guang; Zhen Huang; Yun Tang; Guodong Cen; Tiejun Fu; Bogang Li
Original assignee: Chengdu Di'ao Jiuhong Pharmaceutical Factory
Priority date: 2007-06-08
Filing date: 2008-06-06
Publication date: 2008-12-18
Also published as: CN101541780B; CN101541780A

Description

贝特羧酸酯类化合物及其制备方法和用途技术领域

本发明涉及通式（ I )所示的（5- (对羟基苯基 )- 1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮) 贝特羧酸酯类化合物，其制备方法及用途，属于医药领域。背景技术

脂肪肝是一种常见肝病变，是指各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积，当脂肪含量超过肝重量 (湿重)的 5%，或在组织学上超过肝实质 30%时，称为脂肪肝。脂肪肝又分为肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、营养失调性脂肪肝、药物性脂肪肝、妊娠急性脂肪肝、糖尿病性脂肪肝等。一个重要的特点是，脂肪肝病人常伴随血脂异常，因此，降低血脂有益于防治肝脏脂肪变性。目前针对脂肪肝病人具有理想治疗效果的药物还比较少见。临床上常用的保肝药物有 N-(2-巯基丙酰基) -甘氨酸，多烯磷脂酰胆碱，胆维他等，具有一定的防治肝细胞损伤的作用，但是对于肝细胞的脂肪变性疗效有限，而针对血脂异常的脂肪肝病人直接使用降脂药反而会有加重肝损伤的危险。因此，既能防止肝细胞损伤又能减少肝细胞的脂肪变性的治疗脂肪肝新药有重要的临床需求。

贝特类药物是目前降低血清总胆固醇（TC )的最有效的药物之一，它同时还能升高血清高密度脂蛋白 -胆固醇 (HDL-C), 其有效性已经在临床上得到了广泛验证。但是贝特类药物的副作用也在一定程度上限制了其应用，除恶心、胃痛、腹胀、腹泻等胃肠道反应外，更重要的是，其可能导致对肝脏的损害，肝肾功能异常的病人需慎用贝特类降脂药，因此，其直接用于脂肪肝病人的血脂异常治疗存在很大局限。，化合物 5- (对曱氧苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮，即胆维他，最早从十字花科植物中发现，作为保肝利胆药物已有几十年的临床应用历史。胆维他以原型吸收入血发挥作用 , 但是对其衍生物以及构效关系的研究报道还不多见。特别是苯环上取代基的变化对其药效的影响，尚难以预知。以酯键连接脱曱胆维他的衍生物相关研究， WO2006125293 公开了一类（ 5- (对羟基苯基) -1,2-二硫环戊 -4-晞 -3-硫酮）氨基水杨酸酯类抗炎化合物。目前尚无（ 5- (对羟基苯基) -1，2-二硫环戊斗烯 -3-硫酮）贝特羧酸酯类化合物的相关文献报道，也无该类化合物用途的相关报道。发明内容

本发明的技术方案是提供了一类新的化合物，它是（5- (对羟基苯基 )-1，2- 二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）贝特羧酸酯类化合物。本发明还提供了该类化合物的制备方法和用途。

本发明提供一类通式（ I )所示的（5-(对羟基苯基)-1，2-二硫环戊-4-烯-3- 硫酮）贝特羧酸酯类化合物。

( I )

其中：

R代表单或多取代基，选自氢、卤素、羟基、 C_M的烷氧基、 C_M的烷基、氨基、巯基、羧基、硝基、磺酰基、卤素取代苯曱酰基、卤素取代环丙基、卤素取代苯曱酰胺基取代乙基；

X选自 O, S， NH, CH₂;

n代表 0 - 4的整数。

鹵素选自 F， CI, Br, I, 优选 Cl。

化合物选自：

(5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对氯苯氧异丁酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯甲酰基）苯氧] -2-曱基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2-{对-[2- (对氯笨甲酰胺）乙基]笨氧 2-曱基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1，²_二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对 -(2， 2-二氯环丙基)苯氧] -2-甲基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 5-(2,5-二甲基苯氧基 )-2，2-二甲基戊酸酯、

5- (对羟基苯基 )- 1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对曱苯氧异丁酸酯、

5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-晞 -3-硫酮）对曱氧苯氧异丁酸酯、 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）苯氧异丁酸酯。

进一步地，优选化合物自：

(5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对氯苯氧异丁酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-浠 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯曱酰基）苯氧] -2-曱基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对 -(2， 2-二氯环丙基)苯氧] -2-曱基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 5-(2,5-二曱基苯基) -2，2-二曱基戊酸酯。

本发明还提供了制备通式（ I )中化合物的方法，即将贝特羧酸类化合物与 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮缩合成酯而得。

本发明公开了通式（ I )化合物在制备治疗脂肪肝、高血脂药物中的应用。本发明公开了一种药用组合物，它包含如通式（I )所示的任一化合物、其药学上可以接受的盐、盐的水合物及药用载体。

本发明化合物可以口服给药或非胃肠道给药。口服给药可以是片剂，胶嚢剂，包衣剂等；非胃肠道给药可以是注射剂、栓剂、透皮吸收制剂等。另外，还可做成緩释，控释制剂等。

在进行药物分子设计时，按照药物化学的拼合原理，将两个相同的药效基团，用适当的桥链连接成一个分子，形成的药物，称作同挛药物，已有多个设计成功的例子并已在临床中使用。而将两个不同的药效基团，连接成一个分子，形成的药物，称作异挛药物。这种拼合方式看似简单，但一般的药物化学技术人员认为，成功的概率较同挛药物而言偏低，原因是多方面的。主要是两药难以同时发挥最优治疗剂量效果，再加上连接的位点、桥键的细微不同对药效的发挥都有着重要的影响，因此药效结果更难预料。一般认为，超越原药的可能性不大。例如， Ohtsu等人将喜树碱衍生物与紫杉醇通过桥键拼合成一系列新化合物以后，发现该类化合物抗癌活性低于喜树碱。（Bioorg Med Chem, 2003, 11 : 1851-1857 )

本发明的创造性在于，将 5- (对羟基苯基 )- 1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮与贝特类降脂药物结合成新的（ 5- (对羟基笨基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）贝特羧酸酯类化合物，并惊奇地发现该类衍生物具有较胆维他和贝特类药物更强的脂肪肝治疗效果，因此，具有重要的临床应用前景。具体实施方式

本发明还提供了如下一些实施例，但是这些实施例并不构成对本发明的限制。

化合物的结构是通过核磁共振（NMR )或质谱（MS ) 来确定。 NMR位移（ δ ) 以百万分之一 ( ppm ) 的单位给出， mp.是以。 C给出的熔点，温度未加校正。 NMR测定是用 BrukerAvance 600, 熔点测定用 WRS-1数字熔点仪。【实施例 1】本发明化合物的制备

( 5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）的合成：

混合 5- (对曱氧苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮（25g, 104醒 ol ), DMAP

( 2.5g, 20.4mmol ), 干燥的二氯甲烷 lOOOmL于 2000 mL的三颈瓶，形成深红色溶液。室温下滴加入 550mL lmol-L"¹ BBr₃的二氯甲烷溶液，溶液渐变为橙红色悬浊液。加毕，继续反应约 24h后终止。反应液分批倾入 4000mL水中，充分搅拌 lh, 静置，过滤，滤饼用大量水沖洗，干燥，得桔黄色固体粗品 22.3g , 收率 95%。 mp.l92 ~ 193 °C *H NMR(CDC1₃, 600MHZ): 6ppm 9.36(s,lH), 7.79(d,2H,J=9.0Hz), 7.50(s，lH), 7.01(d，2H,J=9.0Hz)。

ESI-MS: m/z 227(M+l)⁺

IR: 3179,1608,1587,1476,1288,1196,1182,1032,831,561.,

【实施例 2】

( (5- (对羟基苯基 )-l，2-二硫环戊 -4-烯 -3-疏酮)对氯苯氧异丁酸酯）的合成：

混合氯贝丁酸（ 11.4g, 53.1mmol ), DMAP ( 196mg, 1.6mmol ), 5- (对羟基苯基) -1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮（ 12g, 53.1mmol ), 乙酸乙酯 1000ml于 2L的三颈瓶中。室温搅拌下加入 DCC ( 16.4g, 79.7mmol ), 加毕，继续搅拌反应 5小时后终止。反应液过滤，滤液用饱和碳酸氢钠，饱和食盐水依次洗涤 2-3次。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至 200ml，再加入 700ml 乙醇结晶。析出固体再用乙酸乙酯 /乙醇重结晶，得到纯品 13.2g，收率 60 % 。

mp.97 - 98 °C Ή NMR(CDC1₃ , 600MHz): 6ppm 7.68(d,2H,J=8.4Hz), 7.39(s，lH)， 7.25(d,2H,J=8.6Hz) ， 7.15(d,2H,J-8.4Hz), 6.89(d，2H，J=8.4Hz)， 1.75(s，6H)。

ESI-MS: m/z 445(M+Na) ⁺

IR: 3422, 1761,1489, 1178,1122, 1024,818,672,538。

【实施例 3】

( (5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- {对- [2- (对氯苯曱酰胺）乙基] 苯氧 } -2-曱基丙酸酯）的合成：

以苯扎贝特酸为原料，合成方法类似于实施例 2，收率 88 %。

mp.l56 ~ 157°C 'H NMR(CDC1₃, 600MHz): 6ppm 7.66(d,2H,J=8.4Hz), 7.61(d,2H,J=8.4Hz), 7.38(s,lH),7.36(d,2H,J=8.4Hz), 7.14-7.16(m,4H),

6.92(d,2H,J=8.4Hz), 6.10(brs, 1 H),3.69(dt,2H, J=6.2, 7.0Hz), 2.89(t,2H,J=7.0Hz), 1.76(s,6H)。

ESI-MS: m/z 570(M+1) ⁺

【实施例 4】

( (5- (对羟基苯基 )-l，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯曱酰基)苯氧] -2- 曱基丙酸酯）的合成：

以非诺贝特酸为原料，合成方法类似于实施例 2，收率 89 %。

mp.l34 ~ 135°C

¹HNMR(CDC1₃， 600MHz): 5ppm7.79(d,2H,J=8.8Hz), 7.72(d,2H,J=8.6Hz), 7.67(d,2H,J=8.8Hz), 7.46(d,2H,J-8.6Hz), 7.38(s,lH), 7.14(d,2H,J=8.6Hz),

7.00(d,2H,J=8.8Hz), 1.84(s，6H)。

ESI-MS: m/z 527(M+1) ⁺

【实施例 5】

( ( 5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对曱苯氧异丁酸酯）的合成:

混合对曱基笨氧异丁酸（232mg， 1.2mmol ), DMAP ( 3.7mg, 0.03mmol ), 5- (对羟基苯基) - 1 ,2-二石克环戊 -4-烯 -3-硫酮（ 226mg , 1 mmol ), 乙酸乙酯 50ml 于 250ml的三颈瓶中。室温搅拌下加入 DCC ( 309mg, 1.5mmol ), 加毕，继续搅拌反应 5小时后终止。反应液过滤，滤液用饱和碳酸氢钠，饱和食盐水依次洗涤 2-3 次。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩后柱层析得純品 321mg, 收率 80 %。 mp.98 ~ 99°C

'H NMRCCDC , 600MHz): 6ppm 7.66(d,2H,J=8.9Hz), 7.38(s,lH),

7.17(d,2H,J=8.8Hz), 7.09(d,2H,J=8.3Hz), 6.86(d,2H,J=8.6Hz), 2.31(s,3H), 1.74(s，6H)。

【实施例 6】

( ( 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-浠 -3-硫酮）对甲氧基苯氧异丁酸酯 ) 的合成：

以对曱氧基笨氧异丁酸为原料，合成方法类似于实施例 5，收率 71 %。 mp.98 ~ 99 "C

^,HNMR(CDCl₃,600MHz):6ppm7.68(d,2H,J-8.7Hz),7.40(s,lH),

7.20(d,2H,J=8.7Hz), 6.94(d,2H,J=8.9Hz), 6.82(d,2H,J=8.9Hz), 3.78(s,3H) 1.71(s,6H)。

【实施例 7】

( ( 5- (对羟基苯基 )-l，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）苯氧异丁酸酯）的合成：

以苯氧异丁酸为原料，合成方法类似于实施例 5，收率 65 %。

mp.90 ~ 91 °C

¹HNMR(CDCl₃,600MHz):5ppm7.66(d,2H,J=8.6Hz),7.38(s,lH),

7.30(t,2H,J=8.6Hz), 7.14(d,2H,J=8.6Hz), 7.05(t,lH,J=7.4Hz), 6.96(d,2H,J=7.8Hz)_; 1.77(s，6H)。【实施例 8】

( ( 5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 5-(2,5-二曱基苯氧基 )-2,2-二曱基戊酸酯）的合成：

以 5-(2，5二曱基苯氧基 )-2，2-二曱基戊酸为原料，合成方法类似于实施例 5, 得一油状物，收率 60 %。

^ NMRCCDC^, 600MHz): 5ppm7.64 ( d,2H,J=8.6Hz ) , 7.38(s,lH), 7.15(d,2H,J-8.6Hz), 7.00(d,lH,J=7.4Hz), 6.66(d,lH,J=7.4Hz), 6.62(s,lH), 3.99(t,2H,J=5.8Hz), 2.30(s,3H), 2.17(s,3H), 1.88(m,4H), 1.39(s,6H)。

【实施例 9】

( ( 5- (对羟基苯基 )-l，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对 -(2， 2-二氯环丙基)苯氧] -2-曱基丙酸酯）的合成 ·.

以 4-(2, 2-二氯环丙基)苯氧异丁酸为原料，合成方法类似于实施例 5, 收率 65 %。 mp.l01-102°C。 ESI-MS: m/z 498(M+1) +

¹HNMR(CDC1₃, 600MHz): 5ppm7.64 ( d,2H,J=8.7Hz ) , 7.37(s,lH), 7.17(d，2H，J=8.6Hz)， 7.09(d,2H,J=10.8Hz), 6.92(d,2H,J=8.6Hz), 2.86(lH,m), 1.96(dd, 1H， J=7.3 ,7.5Hz), 1.80(t, 1 H,J=7.7Hz), 1.77(6H,s)。

【实施例 10】胶嚢制备及用法用量：

取实施例 2中化合物（ 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮)对氯苯氧异丁酸酯（筒称 BOA-1 ) 100g，微晶纤维素 400g，充分混匀后，罐装 1号胶嚢 2000粒。伴随血脂异常的脂肪肝病人每日三粒，三周为一个疗程。

【实施例 11】注射剂制备及用法用量：

实施例 4中化合物（ 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯甲酰基)苯氧] -2-甲基丙酸酯（（简称 BOA-2 ) 250mg粉碎后，注射用大豆油 75g,中链脂肪酸酯 25g,卵磷脂 12g,聚乙二醇 50g,甘油 20g,注射用水 1000ml, 在高速匀质机上分散，灭菌，即制成 25mg/100ml脂肪乳静脉注射液。伴随血脂异常的脂肪肝病人每日用量 100-300ml。以下通过具体的药效学试验证明本发明的有益效果。

1试验材料和方法

1. 1试验药物

受试药物：编号 BOA-1 ( ( 5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对氯苯氧异丁酸酯），即实施例 2化合物； BOA-2 ( ( 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯曱酰基)苯氧] -2-曱基丙酸酯），即实施例 4化合物；编号 BOA-3 ( ( 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯- 3-硫酮） 5-(2，5-二曱基苯氧基 )-2,2-二曱基戊酸酯），即实施例 8化合物； BOA-4( ( 5- (对羟基苯基 )-1，2- 二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对 -(2， 2-二氯环丙基)苯氧] -2-曱基丙酸酯），即实施例 9化合物。实验时先用适量吐温研磨，再用 0.5%的羧曱基纤维素钠（CMC ) 按设计浓度配制。

对照药物： ①多烯磷脂酰胆碱②氯贝丁酯③ 5- (对曱氧基苯基)- 1,2-二硫环戊 _4-烯 -3-硫酮（编号 3S ), 实验时先用适量吐温研磨，再用 0.5%的羧曱基纤维素钠（CMC )按设计浓度配制。

1. 2试验动物

胃胃胃胃胃冒胃冒胃

Wistar大鼠，体重 180 ~ 220g, 雄性， 180只，每组 20只大鼠，动物合格证号： 410117，由河南医科大学实验动物中心提供。

1. 3试剂

胆固醇（成都科龙化工试剂厂），吐温 -80 (成都科龙化工试剂厂），四氯化碳（成都科龙化工试剂厂），胆酸钠 (上海 Solarbio )，丙硫氧嘧啶片（上海复星朝晖药业有限公司）， 1，2-丙二醇（天津市大茂化学试剂厂），羧曱基纤维素钠（上海三浦化工有限公司），猪油，北京二锅头酒。

1. 4分组及剂量设置

表 1 分组及剂量设置

给药给药体积

途径（ml/100g)

空白组 -- 0

模型组 - 0

BOA-1 27 0

BOA-2 27 0

BOA-3 27 0

BOA-4 27 0

多烯磷脂酰胆碱 246.24 0

氯贝丁酯 27 0

3S 27_ 0

1. 5数据统计方法

计量试验结果以（X ± SD )表示，应用 SPSS-10.0统计软件进行方差分析；计数试验结果采用非参数检验（ Kruskal-Wallis法分析）。

1. 6试验方法与步骤

将大鼠适应性饲养 3天后，每天上午各组大鼠分别按表 1 设计剂量给药，空白组给予相应的 CMC混悬液。

下午除空白组外，其余各组大鼠分别灌胃给予高脂乳液（ 10%猪油、 4% 胆固醇、0.6%胆酸钠和 0.3%丙硫氧嘧啶）lml/100g, lh后再给予白酒 lml/100g，连续 18天。

另除空白组外，其余各组大鼠隔天腹腔注射 10%的 CC1₄菜籽油溶液，注射剂量为： 0.08ml/100g, 空白组以等容积生理盐水注射于相同部位。

于第 18天末次给药后禁食 16小时（不禁水），动物称重，股动

离心并分离血清， -30°C低温保存，待测血清中的生化指标。另摘取肝脏并称重，观察大体外观后，每只取肝左叶 2块分别放于 10%中性福尔马林溶液，待作肝组织病理学检查（固定后，石蜡包埋，切片，分别作 HE染色和脂肪染色）。

2 试验结果

2. 1 给药第 18天各试验组生化指标的测定

表 2 给药第 18天各试验组生化指标测定比较 ( ± SD) 组别 ALT AST TG CHOL 空白组 67.4±8.9AA 74.4± 13·0ΑΑ 0.88±0.33盍蛊 2.59±0.54ΑΑ 模型组 356.0±273.9 185.7± 125.9 2.08士 0.78 6.13±2.51

BOA- 1 208. 7± 127. 104. 9± 82. 6Α**· 1. 31 ±0. 65Α·· 4. 16 ± 1. 14蛊參肇

BOA- 2 167. 5±60. 7A* 98. 0 ±27. 4矗**肇參 1. 18'±0. 78蛊參參 4. 25 ± 1. 17Α·

BOA-3 161.0± 100.3蛊* 140.0 ±27.4 ** 1.38 ±0.70盍參 4.01±1.30Α··

BOA-4 280.5 ±90.5 肇 108.3 ±45.3矗**拳 1.20±0.81蛊參參 3.99±1.24Α肇參多烯磷脂酰胆碱 136.5 ±95.8A 102.0± 81.2蛊 2.02±0.56 5.38土 1.21 氯贝丁酯 300.0±253.6 175.0± 100.3 1.10 ±0.45Α 3.95±1.26Α

3S 192.4± 180.1盍 160.9± 101.4 1.80±0.46 5.21±1.44 注：和模型组比较， A A P < 0.01 ， A P < 0.05;

和氯贝丁酯组比较， ** < 0.01, * < 0.05

和 3S (胆维他组）比较， · · < 0.01, · < 0.05。

由上表可知，给药第 18天，模型组和正常对照组比较，大鼠血清 ALT (丙氨酸转氨酶）， AST (天门冬氨酸转氨酶）， TG (甘油三脂）， CHOL (胆固醇）活性显著增高。

与模型组比较，受试药物 ΒΟΑ-1、 BOA-2既能显著降低 ALT、 AST的活性升高程度，又能降低甘油三脂、胆固醇； BOA-3能显著降^ ί氐 ALT, 又能降低甘油三脂、胆固醇； BOA-4能显著降低 AST, 又能降低甘油三脂、胆固醇。与氯贝丁酯组比较，受试药物 BOA-l、 BOA-2、 BOA-3、 BOA- 4对 TG、 CHOL的降低作用无显著性差异。同时，受试药物 ΒΟΑ-1、 BOA-2、 BOA-3、 BOA- 4能显著降低 AST, BOA- 2、 BOA-3能显著降低 ALT, 而氯贝丁酯对此均无显著降低作用。

与 3S (胆维他）组相比，受试药物 BOA-l、 BOA-2、 BOA-3对 ALT的降低作用无显著性差异，受试药物 BOA-l、 BOA-2、 BOA-4能更加显著降低 AST; 同时，受试药物 BOA- 1、 BOA-2、 BOA-3, BOA-4能显著降低 TG、 CHOL, 而 3S组对此均无显著降低作用。

2. 2肝组织病理学检查分析：（HE染色， 100 X )

均取大鼠肝脏中叶，用 4%的多聚甲醛固定，常蜡包埋切片，苏木精和伊红染色，光学显微镜下观察肝脏病理组织学的改变，其组织学的变化参照表 3评分，肝组织病理结果见表 4。

表 3肝组织病理损伤判断标准

病理组织学改变分级评分值无肝细胞变性。无 ' - 0

肝细胞肿胀，体积增大，细胞间尚有界

水肿变性轻度损伤 + 1

限，胞浆淡染。

(炎细胞浸润细胞明显肿胀，细胞间界限不清，胞浆

肝窦扩张充血）中度损伤 ++ 2

淡染。

气球样变，细胞膨大如气球，胞浆变得

重度损伤 +++ 3

较为透明。

表示正常。无 - 0

肝细胞内的脂肪空泡较小，且散在。轻度损伤 + 1

脂肪变性肝细胞内的脂肪空泡变大，范围较宽。中度损伤 ++ 2

脂肪空泡融合为大空泡，将细胞核挤向

重度损伤 +++ 3

胞膜下，状似脂肪细胞。

表示没有坏死。无 - 0

点状坏死，肝小叶内可有散在的肝细胞

坏死，每个坏死灶仅累及单个或几个肝轻度损伤 + 1

坏死细胞。

碎小片状坏死，肝细胞呈灶状坏死，崩

中度损伤 ++ 2

解

有大片溶解灶性坏死。重度损伤 +++ 3

没有增生。无 - 0

纤维化组织增仅有纤维细胞及少许纤维组织增生，正

轻度损伤 + 1

生常肝小叶结构隐约可见。

有明显的纤维组织增生，正常肝小叶结

中度损伤 ++ 2

构不明显，但尚未形成明显假小叶。

有大量组织增生，将细胞围成小块呈小

重度损伤 +++ 3

岛状，明显假小叶形成。表 4 药物对复合方式致脂肪肝模型大鼠肝脏病理的影响组别剂量 (mg/kg) 水肿脂肪变性炎细胞浸润坏死空白组 ― 0AA 0.07AA 0.87AA 0.8AA 模型组 2.08 2.38 1.92 2.54

BOA-1 27 1.51 A 1.8 1.21 A 1.90

BOA-2 27 1.53A 1.3A 1.72 1.83

BOA-3 27 0.90AA 1.7 1.24A 1.88

BOA-4 27 1.55A 1.9 1.60 1.76 多烯磷脂酰胆碱 246.24 1.27 A 1.5A 1.67 2.00

氯贝丁酯 27 1.82 2.10 1.83 2.35

3S 27 1.50A 1.90 1.60 2.00 注：和模型组比较， A A P < 0.01 ， A P < 0.05

统计方法：组间差异的显著性检验运用 SPSS 11.0软件提供的非参数检验分析方法。

模型组与空白对照组比较，出现了肝细胞的变性及坏死，经非参数检验，具有显著性差异（▲ )，表明造模成功。

与模型组比较，氯贝丁酯对肝细胞的水肿、脂肪变性、炎细胞浸润和坏死均无显著性改善作用； 3S可显著改善肝细胞水肿， .但对脂肪变性、炎细胞浸润和坏死无显著性改善作用；受试药物 BOA-l、 BOA-2、 BOA-3、 BOA-4 均可显著改善肝细胞水肿； BOA-2可显著改善肝细胞脂肪变性； BOA-l、 BOA-3 可显著改善炎细胞的浸润。

2. 3 肝脂肪染色（苏丹 III染色）。

肝组织经 10%曱醛溶液固定后，水冻切片（厚 6 ~ 8μηι )，蒸馏水稍洗；苏木精染核 l ~ 2min, 变蓝后水洗；再用 70%酒精洗片刻；入苏丹 III染色剂 5 ~ 10 min (染色中尽可能密封防止试剂挥发，如加温 56°C时间可缩短）； 70% 酒精洗去多余染液；以甘油明胶封片。结果：中性脂肪呈橙红色，核呈蓝色。其肝脂肪染色的变化参照表 5评分，肝脂肪染色结果见表 6。

表 5 肝脂肪染色判断标准

病理组织学改变分级评分值

表示正常。无 - 0

肝细胞内的橘红色脂滴较小，且

轻度损伤 + 1

散在。

脂肪染色肝细胞内的橘红色脂滴变大，范

中度损伤 ++ 2

围较宽。

脂肪融合为大橘红色脂囊，将细

重度损伤 +++ 3

胞核挤向胞膜下。表 6肝脂肪染色评分结果

组别齐量 (mg/kg) 脂肪染色评分

空白组一 0AA

模型组一 2.4

BOA-1 27 1.81

BOA-2 27 1.53A

BOA-3 27 1.50A

BOA- 4 27 1.45 A

多烯磷脂酰胆碱 246.24 1.67 A

氯贝丁酯 27 2.2

3S 27 1.9

注：和模型组比较， A A P < 0.01 , Α Ρ < 0.05

以上结果表明：模型组与空白对照组比较，出现了肝细胞脂肪变性，经非参数数检验，具有显著性差异（ A P<0.01 )，表明通过复合因素造成了大鼠脂肪肝模型。

与模型组比较，氯贝丁酯组与 3S组的肝脂肪染色评分均与模型组无显著性差异；受试药物 BOA-2、 BOA- 3、 BOA-4的肝脂肪染色评分均显著好于模型组；受试药物 BOA-1的肝细胞脂肪染色评分具有降低的趋势。

3结论

上述药效学试验证明，受试药物 BOA-l、 BOA-2, BOA-3、 BOA-4在具有贝特类药物和胆维他的降低血脂和保肝治疗效果的出上，还具有其他意想不到的效果，具体如下：

受试药物 BOA-l、 BOA-2. BOA- 3、 BOA-4是贝特羧酸和去曱胆维他的偶联物，分子量相对贝特和胆维他大大增加，用药剂量均为 27mg/kg。以 BOA-1为例，如以氯贝丁酸和去甲胆维他为药效基团计量，偶联后的新化合物 BOA-1分子量较氯贝丁酯和胆维他增加 1倍，因此相同的用药剂量只有 1/2 剂量的氯贝丁酸和 1/2剂量的去甲胆维他。

通过上述试验结果可知：在生化指标检测试验中，氯贝丁酯可显著降低 TG、 CHOL, 但对 ALT、 AST无影响， 3S仅仅显著降低 ALT, 而本发明化合物对四个指标均有显著改善；肝组织病理学检查分析，氯贝丁酯对于肝细胞水肿、脂肪变性、炎细胞浸润、坏死均无效， 3S仅对肝细胞水肿有效，而本发明化合物对除坏死之外的三种指标均有明显的效果，尤其 BOA-3对于肝细胞水肿有极显著的改善；肝脂肪染色试验表明，氯贝丁酯， 3S对肝细胞脂肪变性无效，而本发明化合物针对肝细胞脂肪变性有显著的改善效果。上述实验表明，本发明的化合物不仅可显著降低 TG、 CHOL、 ALT、 AST, 而且针对肝脏病理损伤，尤其是肝细胞脂肪变性具有明显改善作用，可见本发明化合物对脂肪肝具有良好的治疗效果，而单独使用与本发明化合物有效量相同剂量的氯贝丁酯或胆维他时，对治疗肝细胞脂肪变性无效，对肝脏病理损伤也没有明显改善，仅胆维他对肝脏水肿有一定改善。工业应用性

本发明（5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）贝特羧酸酯类化合物，通过特定的药效基团拼合，不仅具有贝特类药物的降脂作用和胆维他类药物的保肝降酶作用，而且，本发明化合物对肝细胞脂肪病变具有突出的治疗作用，该疗效是胆维他类和贝特类药物所不具备的，因此，本发明化合物在治疗脂肪肝方面具有极为良好的应用前景。

同时，本发明通式化合物具有良好的降血脂作用，并可减轻贝特类药物的肝脏损伤等副作用，具有良好的治疗高血脂疾病的应用前景。

Claims

权利要求书

1、通式（ I )所示的（⁵- (对羟基苯基 )- 1,2-二硫环戊 _⁴_晞 -3-疏酮)贝特羧酸酯类化合物：

( I )

其中：

R代表单或多取代基，选自氢、卤素、羟基、 d.₄的烷氧基、 CM的烷基、氨基、巯基、羧基、硝基、磺酰基、卤素取代苯甲酰基、卤素取代环丙基、卤素取代苯曱酰胺基取代乙基；

X选自 0， S, NH, CH₂;

n代表 0 - 4的整数。

2、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于：卤素选自 F, CI, Br,

I。

3、根据权利要求 2所述的化合物，其特征在在于：鹵素选自 Cl。

4、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物选自： (5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对氯苯氧异丁酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯曱酰基）苯氧] -2-曱基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2-{对-[2- (对氯苯曱酰胺）乙基]苯氧 }-2-甲基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 2- [对 -(2, 2-二氯环丙基)苯氧] -2-甲基丙酸酯、

(5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮） 5-(2，5 二曱基苯基) -2,2-二曱基戊酸酯、

( 5- (对羟基苯基 )-1,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对曱苯氧异丁酸酯、 ( 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对曱氧苯氧异丁酸酯、 ( 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）苯氧异丁酸酯。

5、根据权利要求 4所述的化合物，其特征是，化合物优选自：

(5- (对羟基苯基) - 1 ,2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮）对氯苯氧异丁酸酯、

(5- (对羟基苯基) - 1 ,2-二硫环戊 -4-浠 -3-硫酮） 2- [对- (对氯苯曱酰基）苯氧] -2-曱基丙酸酯、

(⁵- (对羟基苯基 )-1，²_二硫环戊 _⁴_烯 _³_硫酮） ⁵-(²，⁵_二曱基苯基) _²,²-二曱基戊酸酯。

6、权利要求 1-5任一项所述的化合物在制备治疗脂肪肝药物中的用途。

7、权利要求 1-5任一项所述的化合物在制备治疗高血脂药物中的用途。

8、一种制备权利要求 1所述的化合物的方法，其特征在于：

将贝特羧酸类化合物与 5- (对羟基苯基 )-1，2-二硫环戊 -4-烯 -3-硫酮缩合成酯而得。

9、一种治疗脂肪肝或高血脂的药物组合物，它是由有效量的权利要求 1 - 5 中任一项所述的化合物或其药学上可以接受的盐、盐的水合物为活性成份，加入药用载体制备而成的药剂。

10、根据权利要求 9所述的药物组合物，其特征在于：所述的药剂是口服制剂或非肠道给药制剂。