WO2008074871A1 - Dispersion de polyaminoacides dans une phase lipidique continue - Google Patents

Dispersion de polyaminoacides dans une phase lipidique continue Download PDF

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WO2008074871A1
WO2008074871A1 PCT/EP2007/064352 EP2007064352W WO2008074871A1 WO 2008074871 A1 WO2008074871 A1 WO 2008074871A1 EP 2007064352 W EP2007064352 W EP 2007064352W WO 2008074871 A1 WO2008074871 A1 WO 2008074871A1
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pharmaceutical composition
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acid
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PCT/EP2007/064352
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Gauthier Pouliquen
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Flamel Technologies
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    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
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    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles

Definitions

  • the present application relates to novel pharmaceutical formulations based on aqueous colloidal suspensions or aqueous dispersions, for the sustained release of active principle (s), in particular protein (s) and peptide active principle (s). (s).
  • active principle in particular protein (s) and peptide active principle (s).
  • the application also relates to the applications, particularly therapeutic applications, of these pharmaceutical formulations.
  • active pharmaceutical formulations concern both human and veterinary therapeutics.
  • the plasma concentration of therapeutic protein then has a "sawtooth" profile characterized by high concentration peaks and very low concentration minima. Concentration peaks, much higher than the basal concentration in healthy subjects, can have very significant adverse effects because of the high toxicity of therapeutic proteins such as interleukin IL2. In addition, the concentration minima are lower than the concentration required to have a therapeutic effect, resulting in poor therapeutic coverage of the patient and serious long-term side effects.
  • Flamel Technologies has proposed a route in which the therapeutic protein is associated with nanoparticles of a copolyamino acid comprising hydrophobic groups and hydrophilic groups.
  • US-B-5,904,936 discloses submicronic particles (NPV) of average size between 0.01 and 0.5 ⁇ m and micron particles (MPV) of average size between 0.5 and 20 ⁇ m.
  • amphiphilic copolymer of polyamino acids comprising at least two types of amino acids, one being hydrophobic neutral, the other being ionizable. Proteins such as insulin adsorb spontaneously in aqueous solution to these particles.
  • the polyamino acid copolymer is, for example, a block copolymer of sodium poly (L-leucine-bL-glutamate).
  • This patent describes the aggregation of NPV in MPV by addition to a colloidal suspension of poly-Leu / Glu, monocation salts (ammonium sulfate) or polycationic salts (Fe 2+ , Fe 3+ , Zn 2+ , Ca 2+ , Al 2+ , Al 3+ or Cu 2+ ), acid (HCl), cationic polymers (polylysine).
  • monocation salts ammonium sulfate
  • polycationic salts Fe 2+ , Fe 3+ , Zn 2+ , Ca 2+ , Al 2+ , Al 3+ or Cu 2+
  • acid HCl
  • cationic polymers polylysine
  • the patent application WO-A-2005/033181 discloses linear, amphiphilic, anionic homopolyamino acids, comprising aspartic residues or glutamic residues, the ends of which carry hydrophobic groups containing from 8 to 30 carbon atoms.
  • the hydrophobic modified telechelic homopolyamino acids are, for example, a poly [GluONa] with PheOC18 / C18 ends or a poly [GluONa] with PheOC18 / alpha-tocopherol ends.
  • These hydrophobic modified telechelic homopolyamino acids spontaneously form in water a colloidal suspension of nanoparticles, which are capable of easily combining in aqueous suspension at pH 7.4, with at least one active protein (insulin).
  • the in vivo release time of the active protein (s) e.g. insulin vectorized by the suspensions according to US-B-5,904,936 & WO-A-2005/033181 would benefit from being increased.
  • a first solution is to increase the polymer concentration so as to slow the release of the protein after in vivo injection. Nevertheless, this route faces a sharp increase in the viscosity of the solution that does not allow the injection of this system.
  • a second solution consists in dispersing the protein in an injectable lipid phase, immiscible with water, in order to reduce the diffusion of the protein into the subcutaneous medium.
  • this route encounters a potential denaturation of the protein in contact with the lipid phase.
  • US Pat. No. 6,235,282 B1 describes an emulsion of water-in-oil for injection as an immunogenic adjuvant in vaccine preparations.
  • An immunologically active substance or a vaccine antigen is contained in the aqueous phase of the emulsion. This causes difficulties of stability of the active substance in the aqueous phase, as well as risks of denaturation of the active substance at the water-oil interface.
  • This patent does not concern the prolonged release of an active ingredient.
  • This adjuvant comprises a water-in-oil emulsion.
  • the emulsifier is a polymeric emulsifier, more specifically a block copolymer of general formula
  • A-COO-B-OOC-A wherein B is a divalent residue of a water-soluble polyalkylene glycol, and A is a residue of a liposoluble complex monocarboxylic acid.
  • the viral antigen is in the aqueous phase, which poses the same problems of stability and risk of denaturation of the viral antigen. This request does not concern the prolonged release of an active ingredient.
  • the invention is aimed primarily at a sustained-release pharmaceutical composition of at least one active principle.
  • the composition comprises at least one active principle in an aqueous phase containing at least one amphiphilic polymer.
  • the aqueous phase is in dispersed form in a continuous lipid phase. More specifically, the composition is in the form of a water-in-oil emulsion comprising: a pharmaceutically acceptable lipid continuous phase,
  • an aqueous dispersed phase containing at least one amphiphilic polymer and at least one active ingredient not covalently bound to said amphiphilic polymer
  • the amphiphilic polymer carries at least one hydrophobic group.
  • the amphiphilic polymer is an amphiphilic polyamino acid, optionally carrying at least one hydrophobic group.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a water-in-oil emulsion which comprises the following components: a pharmaceutically acceptable lipid continuous phase,
  • an aqueous dispersed phase containing at least one amphiphilic polyamino acid bearing at least one hydrophobic group and at least one active principle not covalently bonded to said amphiphilic polyamino acid,
  • the amphiphilic polymer is a polysaccharide carrying at least one hydrophobic group.
  • Such a pharmaceutical composition can be administered by the usual routes, in particular at least one of the following routes: the oral route, the nasal route, the ocular route, the cutaneous route, the vaginal route, the rectal route or the parenteral route.
  • Parenteral routes include subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, intradermal injection, intravenous injection, intra-arterial injection, intraspinal injection, injection. intra-articular and intrapleural injection.
  • Another aspect of the invention relates to the use of the various amphiphilic polymers described below, in particular polysaccharides and polyamino acids, in the preparation of a pharmaceutical composition in the form of a water-in-oil emulsion. whose aqueous dispersed phase contains at least one of these amphiphilic polymers.
  • One variant of the invention consists in using one or more amphiphilic polyamino acids bearing at least one hydrophobic group, in the preparation of such a pharmaceutical composition.
  • a physical gel is a system for which the elastic modulus G 'is greater than the loss modulus G "over a frequency range such that the characteristic relaxation time, defined as being the inverse of the point of intersection of the two modules, is greater than or equal to 0.1s and more preferably greater than or equal to 10%
  • the term "polyamino acid” covers both natural polyamino acids and synthetic polyamino acids comprising more than 10 amino acid residues. description, when mentioning "the" polyamino acid, it should be understood that it may be a mixture of different polyamino acids used in the pharmaceutical composition.
  • the expression "to be a carrier” means that the group, the graft or the carried radical in question is a pendant group.
  • said group is a side group with respect to the main chain of the amphiphilic polymer.
  • the group is a substituent of the ⁇ carbonyl function of the aspartic residue or ⁇ of the glutamic residue, which carries it.
  • the pendant moiety is a substituent of the specific side chain of said amino acid residue.
  • the amphiphilic polymer may be a modified polysaccharide, such as the hydrophobic modified pullulans (cholesteryl pullulan, hexadecyl pullulan) which are described in the article by Kuroda et al. (2002) “Hierarchical self-ashes of hydrophobically modi ⁇ ed pullulan in water: gelation by networks of nanoparticles", Langmuir, 18, 3780-3786.
  • hydrophobic modified pullulans cholesteryl pullulan, hexadecyl pullulan
  • the amphiphilic polysaccharide used is one chosen from hyaluronans, alginates, chitosans, galacturonans, chondroitin sulfate, dextrans, celluloses and / or their functionalized derivatives.
  • Such polysaccharides are described in the international patent application published under the number WO 2007/034320.
  • these are hyaluronans, alginates, chitosans and dextrans and / or their derivatives functionalized with at least one imidazolyl radical and at least one hydrophobic group.
  • a description of this type of polysaccharide and the methods of their synthesis are found in the international patent application published under the number WO 2007/116143, in particular for derivatives of dextrans.
  • the amphiphilic polymer used is an amphiphilic polyamino acid. According to a preferred variant, it is an amphiphilic polyamino acid bearing at least one hydrophobic group.
  • the polyamino acids used are homopolymers comprising recurring glutamic acid or aspartic acid residues, or copolymers comprising a mixture of these two types of residues. These residues may be in salt form, in which case they are glutamate or aspartate residues. The salts thus formed must be pharmaceutically acceptable.
  • Various examples of generally pharmaceutically acceptable counterions are indicated in the following description.
  • the glutamic acid or aspartic acid residues, and their salts, may have the D or L configuration.
  • a polyamino acid simultaneously comprises residues having the D configuration and residues having the L configuration.
  • the recurring residues are linked between them at their alpha or gamma positions for glutamate or glutamic residues, and at their alpha or beta positions for aspartic or aspartate residues.
  • the main polyamino acid chain essentially comprises amino acid residues having the L configuration and linked together by alpha bonds (that is to say at their alpha positions).
  • the amphiphilic polyamino acid is formed of monomers derived from aspartic acid (aspartic residues) and / or glutamic acid (glutamic residues), at least a portion of these residues carrying scions. having at least one hydrophobic group [GH].
  • These polyamino acids are in particular of the type described in PCT patent application WO-A-00/30618.
  • the amphiphilic polyamino acid may carry substituents derived from a histidine residue.
  • said histidine residue may be linked to a glutamic or aspartic residue via an amide bond.
  • amphiphilic polyamino acids carrying hydrophobic groups will now be described [GH].
  • the following general formulas are written as a block.
  • the amphiphilic polyamino acids corresponding to these formulas can be, in particular, polymers or copolymers, block or random. It is conceivable to combine the various embodiments, for example by choosing an appropriate mixture of the amphiphilic polyamino acids described below, or by combining the various types of grafts within the same amphiphilic polyamino acid.
  • the main chain of the polyamino acid is chosen from: a homopolymer of alpha-L-glutamate or alpha-L-glutamic acid; a homopolymer of alpha-L-aspartate or alpha-L-aspartic acid;
  • the distribution of the aspartic and / or glutamic units of the main chain of the amphiphilic polyamino acid is such that the polyamino acid thus constituted is either random, or of the block type, or of the multiblock type.
  • the distribution of the hydrophobic groups on the main chain of the amphiphilic polyamino acid is such that the polyamino acid thus constituted is either random, or of the block type, or of the multiblock type.
  • the general formulas (I), (II), (III), (IV) and (V) set out in the remainder of the description should not be interpreted as representing only block copolymers (or blocks), but also random copolymers or multiblock copolymers.
  • the amphiphilic polyamino acid used in the composition according to the invention has a molar mass which is between 2,000 and 100,000 g / mol, and preferably between 5,000 and 40,000 g / mol.
  • amphiphilic polyamino acid used in the pharmaceutical composition has the following general formula (I), and its pharmaceutically acceptable salts:
  • R 1 represents a hydrogen atom, a C 2 to C 10 linear acyl group, a branched C 3 to C 10 acyl group, a pyroglutamate group or a group -R 4 - [GH 1];
  • R 2 represents a group -NHR 5 or a terminal amino acid residue bound by nitrogen whose function (s) acid (s) is optionally modified with an amine -NHR 5 or an alcohol -OR 6 ;
  • - R 4 represent independently of each other a direct bond or a spacer group comprising 1 to 4 amino acid residues;
  • - R 5 represents a hydrogen atom, a linear alkyl group C1 to ClO, a branched alkyl group C3 to ClO, or a benzyl group;
  • R 6 represents a hydrogen atom, a linear alkyl group C1 to ClO, a branched alkyl group C3 to ClO, a benzyl group or a group -R 4 - [GH1];
  • a and B represent independently of each other a group -CH 2 - (aspartic residue) or -CH 2 -CH 2 - (glutamic residue);
  • the degree of polymerization (n + m) varies from 10 to 1000, preferably from 50 to 300.
  • amphiphilic polyamino acid corresponds to one of the following general formulas (II), (III) and (IV), and their pharmaceutically acceptable salts:
  • R a represents a linear alkylene group of C2 to C6;
  • - R b represents a C2-C6 alkylene group, a C2-C6 dialkoxy group or a C2-C6 diamine group;
  • - R 7 represent independently of each other a direct bond, a spacer group comprising from 1 to 4 amino acid residues or a -C (O) -CH 2 -CH 2 - group;
  • - R 8 represent a group -NHR 9 or a terminal amino acid residue bound by nitrogen and whose function (s) acid (s) is optionally modified with an amine -NHR 9 or an alcohol -OR 10 respectively;
  • - R 9 represents a hydrogen atom, a linear alkyl group C1 to ClO, a branched alkyl group C3 to ClO, or a benzyl group;
  • R 10 represents a hydrogen atom, a linear alkyl group C1 to ClO, a branched alkyl group C3 to ClO, a benzyl group or a group -R ⁇ - [GH3]
  • R 11 represent independently of each other a direct bond or a spacer group comprising 1 to 4 amino acid residues
  • [GH2] and [GH3] independently of one another represent a hydrophobic group; the degrees of polymerization (ml + m2) and m3 vary from 10 to 1000, preferably from 50 to 300.
  • amphiphilic amino acid po is in accordance with the following general formula (V), and its pharmaceutically acceptable salts:
  • R c represents a group -NHR 15 or a terminal amino acid residue linked by nitrogen and whose function (s) acid (s) is optionally modified with an amine -NHR 5 or an alcohol -OR 16 respectively,
  • R d represents a hydrogen atom, a C 2 to C 10 linear acyl group, a C 3 to C 10 branched acyl group or a pyroglutamate group;
  • R 12 represent, independently of one another, a divalent, trivalent or tetravalent linking group, preferably chosen from the following groups: -O-, -NH-, -N-C 1 -C 5 alkyl, an amino acid residue, a C2 to C6 diol, a C3 to C6 triol, a C2 to C6 diamine, a C3 to C6 triamine, a C2 to C6 amino alcohol or a C2 to C6 hydroxy acid;
  • R 13 represent, independently of one another, an -OH group or an ethanol-amine group linked by the amine fraction;
  • R 14 represents an alkyl ester group, a -CH 2 OH group (histidinol), a hydrogen atom (histamine), a -C (O) NH 2 (histidinamide) group, a -C (O) group; NHCH3 or a group -C (O) N (CH 3 ) 2 ,
  • R 15 and R 16 represent, independently of one another, a hydrogen atom, a linear C 1 to C 10 alkyl group, a C 3 to C 10 branched alkyl group or a benzyl group,
  • [GH4] each independently represent a hydrophobic group chosen from:
  • Linear or branched C8 to C30 alkyl groups optionally comprising at least one unsaturation and / or at least one heteroatom,
  • alkylaryl groups or arylC8 to C30 alkyl optionally comprising at least one unsaturation and / or at least one heteroatom
  • the molar grafting rate in hydrophobic groups [GH] (p) / (p + q + r) varies from 1 to 50 mol%, provided that each copolymer chain has on average at least 3 hydrophobic grafts;
  • the molar grafting rate in groups derived from the histidine residue (q) / (p + q + r) varies from 1 to 99 mol%;
  • the heteroatoms that can be found in the hydrophobic groups [GH4] are the oxygen, nitrogen or sulfur atoms.
  • the derivatives of the histidine residue that can be used to functionalize the glutamate units are identical to or different from each other and can be for example: histidine esters (such as the methyl ester and the ethyl ester), histidinol and histamine. These derivatives may also be, for example, histidinamide, the N-monomethyl derivative of histidinamide and the N, N'-dimethyl derivative of histidinamide.
  • at least one of the hydrophobic groups are identical to or different from each other and can be for example: histidine esters (such as the methyl ester and the ethyl ester), histidinol and histamine.
  • these derivatives may also be, for example, histidinamide, the N-monomethyl derivative of histidinamide and the N, N'-dimethyl derivative of histidinamide
  • GH4 is included in a hydrophobic graft comprising at least one spacer (or "spacer") R 12 for connecting the hydrophobic group [GH4] to a polyglutamate chain (for example a main chain - skeleton) -polyglutamate).
  • This patella may comprise, for example at least one direct covalent bond and / or at least one amide bond and / or at least one ester bond.
  • the patella may be of the type belonging to the group comprising in particular: the amino acid residues different from the constituent monomeric unit of the polyglutamate, the derivatives of the aminoalcohols, derivatives of polyamines (for example diamines), derivatives of polyols (for example diols) and derivatives of hydroxy acids.
  • the R 12 patches forming hydrophobic groups [GH4] with hydrophobic grafts may be di-, tri- or tetravalent (or even pentavalent and more).
  • a divalent R 12 patella the hydrophobic graft comprises a single [GH 4] group
  • a trivalent R 12 patella gives the hydrophobic graft a bifid character, that is to say that the hydrophobic graft comprises two groups hydrophobic [GH4].
  • trivalent R 12 mention may be made, inter alia, of amino acid residues, for example glutamic acid or polyol residues, for example glycerol.
  • two advantageous but non-limiting examples of hydrophobic grafts comprising hydrophobic groups [GH4] are dialkyl glycerol and dialkyl glutamate.
  • [GH1], [GH2] and [GH3] of the amphiphilic polyamino acid of general formula (I), (II), (III) or (IV) are chosen from the group comprising octyloxy, dodecyloxy, tetradecyloxy, hexadecyloxy, octadecyloxy radicals; , oleyloxy, tocopheryloxy or cholesteryloxy.
  • hydrophobic groups [GH4] of the amphiphilic polyamino acid of general formula (V) are chosen from the group comprising octyl, dodecyl, tetradecyl, hexadecyl, octadecyl, oleyl, tocopheryl or cholesteryl radicals.
  • R 4 (formula I), R 7 (formulas II and IV) and R 11 (formulas III and IV) represent a direct bond
  • R 12 (formula V) represents a group O-.
  • hydrophobic groups [GH1], [GH2], [GH3] and [GH4] of the amphiphilic polyamino acid (I), (II), (III), (IV ) or (V) may also each independently represent a monovalent group of the following general formula (VI):
  • R 17 represent, independently of one another, a methyl, isopropyl, isobutyl, secbutyl or benzyl group
  • R 18 represent independently of each other a hydrophobic group having from 6 to 30 carbon atoms
  • hydrophobic groups R 18 are chosen independently of one another from:
  • a linear or branched alkoxy group containing from 6 to 30 carbon atoms and possibly comprising at least one unsaturation and / or at least one heteroatom; an alkoxy group containing from 6 to 30 carbon atoms and having one or more ringed carbocycles and optionally comprising at least one unsaturation and / or at least one heteroatom,
  • the heteroatoms that can be found are the oxygen, nitrogen or sulfur atoms.
  • the R 18 group of the hydrophobic group of formula (VI) is selected from the group consisting of octyloxy, dodecyloxy, tetradecyloxy, hexadecyloxy, octadecyloxy, oleyloxy, tocopheryloxy or cholesteryloxy radicals.
  • the molar grafting rate in hydrophobic groups [GH1], [GH2], [GH3] and [GH4], is between 1 mol% and 25 mol%.
  • the molar grafting level is between 5 mol% and 20 mol%.
  • the molar grafting rate in hydrophobic groups is defined as the ratio between the number of amino acid residues of the main chain carrying at least one hydrophobic group, and the total number of amino acid residues of the main chain of the amphiphilic polyamino acid (the degree of polymerization).
  • the amphiphilic polyamino acid also carries at least one graft of the polyalkylene glycol type bonded to a glutamate and / or aspartate residue.
  • this graft corresponds to the following general formula (VII):
  • R 19 represent independently of each other a direct bond or a spacer group comprising from 1 to 4 amino acid residues;
  • X represents a heteroatom selected from the group consisting of oxygen, nitrogen and sulfur;
  • R 20 and R 21 represent independently of each other a hydrogen atom or a linear alkyl group C1 to C4;
  • t2 varies from 10 to 1000, preferably from 50 to 300.
  • the polyalkylene glycol is for example a polyethylene glycol. It is desirable that the molar percentage of grafting of the polyalkylene glycol ranges from 1 to 30 mol%.
  • amphiphilic polyamino acids of general formulas (I), (II), (III), (IV) or (V)
  • amphiphilic polyamino acids of general formulas (I), (II), (III), (IV) or (V)
  • Salificiation is generally carried out with a metal or organic cation such as:
  • amine-based cations for organic cations: amine-based cations, oligoamine-based cations, and polyamine-based cations, especially polyethyleneimine.
  • cations based on amino acid (s) a preferred variant is to select cations based on lysine or arginine such as polylysine or oligolysine.
  • active principles such as proteins, peptides or small molecules, examples of which are given below, can associate spontaneously with these polyamino acids. This association can result from various physicochemical, non-covalent interactions. These are, for example, hydrogen bonds, ionic bonds, hydrophobic interactions, van der Waals forces, or simultaneously, several of these non-covalent bonds. In some cases, there may be, strictly speaking, no association between the active ingredients and the polyamino acids, but simply a steric entrapment of the active ingredient in a physical polyamino acid gel.
  • amphiphilic polyamino acids that can be used in the formulation of the invention are, for example, obtained by methods known to those skilled in the art.
  • the random polyamino acids can be obtained by grafting the hydrophobic group [GH], previously functionalized by the "spacer", directly on the polymer by a conventional coupling reaction.
  • the block or multiblock polyamino acids can be obtained by sequential polymerization of the corresponding N-carboxy-amino acid anhydrides (NCA).
  • NCA N-carboxy-amino acid anhydrides
  • a polyamino acid, homopolyglutamate, homopolyaspartate or a glutamate / aspartate, block, multiblock or random copolymer is prepared according to conventional methods.
  • N-carboxy-amino acid anhydrides N-carboxy-amino acid anhydrides
  • the polymers obtained are then hydrolyzed under appropriate conditions to obtain the polymer in its acid form. These methods are inspired by the description given in patent FR-A-2 801 226 of the applicant.
  • a number of polymers that can be used according to the invention for example, of poly (alpha-L-aspartic), poly (alpha-L-glutamic), poly (alpha-D-glutamic) and poly (gamma-L-glutamic) type can be used. ) variable masses are commercially available.
  • Alpha-beta polyaspartic acid is obtained by condensation of aspartic acid (to obtain a polysuccinimide) followed by basic hydrolysis (see Tomida et al., Polymer 1997, 38, 4733-36).
  • the coupling of the hydrophobic graft [GH] with an acid function of the polymer is easily achieved by reaction of the polyamino acid in the presence of a carbodiimide as coupling agent and optionally a catalyst such as 4-dimethylaminopyridine, in a suitable solvent such as dimethylformamide (DMF), N-methyl pyrrolidone (NMP) or dimethylsulfoxide (DMSO).
  • a suitable solvent such as dimethylformamide (DMF), N-methyl pyrrolidone (NMP) or dimethylsulfoxide (DMSO).
  • the carbodiimide is, for example, dicyclohexylcarbodiimide or diisopropylcarbodiimide.
  • the degree of grafting is chemically controlled by the stoichiometry of the constituents and reactants or the reaction time.
  • the hydrophobic grafts [GH] functionalised by a "spacer" are obtained by conventional peptide coupling or by direct condensation by acid
  • NCA derivatives previously synthesized with the hydrophobic graft are used.
  • the NCA-hydrophobic derivative is copolymerized with the NCA-O-Benzyl and then the benzyl groups are selectively removed by hydrolysis.
  • a lipid or oily phase comprises a hydrophobic organic compound which is liquid at a temperature of between 20 ° C. and 40 ° C., or a mixture of such compounds.
  • the lipid phase comprises at least one oil selected from metabolizable oils.
  • the dynamic viscosity at 25 ° C is less than or equal to 400 mPa.s. It can be assumed that the lower the dynamic viscosity of the lipid phase, the better the injectability of the pharmaceutical composition. It is therefore preferred to use a lipid phase whose dynamic viscosity at 25 ° C. is less than or equal to 150 mPa.s, and more preferably, in increasing order preferably, less than or equal to 80 mPa.s. 40 mPa.s and 30 mPa.s.
  • Useful metabolizable oils include oils selected from medium chain fatty acid triglycerides of animal, plant or synthetic origin, fatty acids of animal or vegetable origin, their esters and salts, and mixtures thereof.
  • an oil of medium chain fatty acid triglyceride used is glyceryl tri-caprylate-caprate (e.g., Miglyol ® 812, Sasol ®).
  • the lipid phase may comprise at least one oil selected from olive oil, sweet almond oil, sunflower oil, soybean oil, peanut oil, corn oil, coconut oil, cottonseed oil, castor oil, and mixtures thereof.
  • the surfactant, or the surfactant mixture is selected such that it has an HLB of less than 6.
  • the hydrophilic-lipophilic balance is an empirical measure of the degree of hydrophilicity or lipophilicity of a molecule.
  • Various methods of measuring HLB have been described, in particular by Griffin (1949) "Classification of Surface-Active Agents by 'HLB'", Journal of the Society of Cosmetic Chemists 1: 311, Griffin (1954) "Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants, "Journal of the Society of Cosmetic Chemists 5: 259 or Davies (1957)” A Quantitative Kinetic Theory of Emulsion Type, I. Physical Chemistry of the Emulsifying Agent, "Gas / Liquid and Liquid / Liquid Interface. Proceedings of the International Congress of Surface Activity 426-438.
  • the surfactant is selected from the group consisting of: polyglyceryl esters, ricinoleic acid esters, sorbitan oleate, lecithin, C 6 -C 12 fatty acid mono- and di-glycerides and / or unsaturated fatty acids, polyricinoleic acid esters, and mixtures thereof.
  • the surfactant comprises polyglyceryl esters, in particular of natural fatty acids such as oleic, stearic, ricinoleic, linoleic and linolenic acids.
  • polyglyceryl ricinoleates or even polyglyceryl polyricinoleates (PGPR) are preferred as surfactants.
  • an aqueous phase is prepared containing at least one amphiphilic polymer at a concentration of between 5 and 100 mg per g of aqueous phase and at least one active ingredient.
  • a concentration of 1 mg per g of aqueous phase can be provided.
  • the aqueous phase is left stirring at 25 ° C for a sufficient time allowing the combination of the amphiphilic polymer and the active ingredient, for example 24h.
  • a lipid phase is then prepared by solubilizing a surfactant or a mixture of surfactants, the HLB of which is less than 6, in a metabolizable oil or a mixture of metabolizable oils whose viscosity at 25 ° C. is less than or equal to 400 mPa. .s.
  • the viscosity at 25 ° C of the oil or the oil mixture is less than 100 mPa.s.
  • the aqueous phase and the lipid phase are brought into contact, with moderate stirring, for approximately 1 hour, while respecting an aqueous phase / lipid phase mass ratio of less than or equal to 50/50 and preferably less than or equal to 30/70.
  • the dispersion of the aqueous phase in the lipid phase is carried out by means of a rotor / stator type homogenizer or with a high pressure homogenizer.
  • the pharmaceutical composition contains a lipid phase excess of at least 10% by weight of lipid phase relative to the amount of lipid phase required to cause the inversion of the emulsion at 25 ° C.
  • a method for measuring the inversion point of an emulsion is, for example, the conductimetric method described in particular in the following reference: Mrieux F., Seiller M. (1983). "Galenica 5: Scattered Systems - Surface Agents and Emulsions", vol. 1. Paris: Technique and Documentation - Lavoisier.
  • the mass ratio dispersed aqueous: lipid continuous phase is less than or equal to 50:50 in the pharmaceutical composition, preferably less than or equal to 40: 60, and better still, less than or equal to 30: 70.
  • the greater the proportion of continuous lipid phase the higher the viscosity of the water-in-oil emulsion depends on the viscosity of the continuous lipid phase.
  • the pharmaceutical composition has a dynamic viscosity at 25 ° C less than or equal to 200mPa.s. More preferably, in ascending order of preference, the dynamic viscosity at 25 ° C of the pharmaceutical composition is less than or equal to 150mPa.s, or less than or equal to 100mPa.s.
  • the aqueous phase contains at least one amphiphilic polymer and at least one active ingredient.
  • the dynamic viscosity at 25 ° C. of the aqueous phase before dispersion in the continuous lipid phase may be greater than or equal to 20 mPa.s.
  • the aqueous phase can also be in the form of a physical gel, dispersed in the continuous lipid phase.
  • the pharmaceutical composition is parenterally injectable. The injectability test is described in the examples.
  • the active ingredient (s) are chosen from proteins, glycoproteins, proteins linked to one or more polyalkylene glycol chains (for example PEGylated proteins, that is to say linked to one or more polyethylene glycol chains), peptides, polysaccharides, liposaccharides, steroids, oligonucleotides, polynucleotides and mixtures thereof.
  • proteins glycoproteins, proteins linked to one or more polyalkylene glycol chains (for example PEGylated proteins, that is to say linked to one or more polyethylene glycol chains), peptides, polysaccharides, liposaccharides, steroids, oligonucleotides, polynucleotides and mixtures thereof.
  • At least one active ingredient is hydrophilic.
  • the active ingredient AP may be chosen from the group comprising: erythroproietin, oxytocin, vasopressin, adrenocorticotropic hormone, epidermal growth factor, platelet derived growth factor (PDGF), stimulating factors of hematopoiesis, factors VIII and IX, hemoglobin, cytochromes, albumin, prolactin, luliberin or gonadotropin releasing hormone (LHRH), LHRH antagonists, agonists of LHRH, human growth hormones (GH), porcine or bovine, growth hormone releasing factor, insulin, somatostatin, glucagon, interleukins (IL) such as IL-2, IL-2 IL-12 and their mixtures, interferons (IFN) ⁇ , ⁇ or ⁇ and mixtures thereof, gastrin, tetragastrin, pentagastrin, urogastrone, secretin, calcitonin, enkephalins, endo-morphines, angioten,
  • the active ingredient is a small hydrophobic, hydrophilic or amphiphilic organic molecule of the type belonging to the family of anthracyclines, taxoids or camptothecins or of the type belonging to the family of peptides such as leuprolide or cyclosporin, and mixtures thereof.
  • a small molecule is especially a small non-protein molecule, for example, free of amino acids.
  • the active principle may be chosen from at least one of the families of the following active substances: alcohol abuse treatment agents, agents for treating Alzheimer's disease, anesthetics, acromegaly treatment agents, analgesics, antiasthmatics, allergy treatment agents, anti-cancer agents, anti-inflammatories, anticoagulants and antithrombotics, anticonvulsants, antiepileptics, antidiabetics, antiemetics, antiglaucoma, antihistamines, anti-infectives, antibiotics, antifungals, antivirals, antiparkinsonians, anti-cholinergics, antitussives, carbonic anhydrase inhibitors, cardiovascular agents, lipid-lowering agents, anti-arrhythmics , vasodilators, anti-angines, antihypertensives, vasoprotectants, cholinesterase inhibitors, central nervous system disorders, central nervous system stimulants, contraceptives, fertility promoters, uterine labor inducers and inhibitors, cyst
  • the invention also relates to a method of therapeutic treatment consisting essentially of administering the composition as described herein, orally, nasally, ocular, dermal, vaginal, rectal or parenteral route.
  • the parenteral routes include subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, intradermal injection, intravenous injection, intra-arterial injection, intraspinal injection, intravenous injection. - articular and intrapleural injection.
  • Figure 1 Viscosity of the solution of amphiphilic polyamino acid (black triangles) and the suspension of amphiphilic polyamino acid in oil (black squares) of Example 3.
  • Figure 2 Injectability measurement on a suspension of amphiphilic polyamino acid with 25G needles (black squares) and 27G (black triangles) of Example 3.
  • Figure 3 In vitro release of methylene blue from a suspension without amphiphilic polyamino acid (black triangles) and with amphiphilic polyamino acid (black squares) of Example 4.
  • FIG. 4 Viscosity variation at 10 s -1 of the suspension as a function of time (Example 6).
  • Figure 5 Variation of the diameter (d50%) of the aqueous droplets as a function of time
  • An amphiphilic polyamino acid is prepared in the following manner:
  • the alpha-L-polyglutamate polymer with a mass equivalent to about 10,000 relative to a polyoxyethylene standard, is obtained by polymerization of NCAGIuOMe, followed by hydrolysis, as described. in the patent application FR 2 801 226.
  • 5.5 g of this alpha-L-polyglutamate polymer are solubilized in 92 ml of dimethylformamide (DMF), by heating at 40 ° C. for 2 hours. Once the polymer solubilized, the temperature is allowed to return to 25 ° C.
  • DMF dimethylformamide
  • the estimated grafting rate by proton NMR is about 5.2% and HPLC analysis reveals a residual tocopherol level of less than 0.3%.
  • the weight average molecular weight Mw, measured by GPC eluting with NMP, is 17,500 g / mol (equivalent of polymethyl methacrylate).
  • Example 2 Stability of the active ingredient improved by the presence of the polyamino acid
  • a suspension is manufactured according to the protocol described in Example 1 by incorporating an interferon alpha 2b protein (IFN ⁇ 2b) into the aqueous phase at a concentration of 1 mg / g.
  • IFN ⁇ 2b interferon alpha 2b protein
  • the quantification of IFN ⁇ 2b in the suspension is carried out by a sandwich-type ELISA assay (kit IM3193, Beckman Coulter). After storing the suspension containing IFN ⁇ 2b and the amphiphilic polyamino acid one week at 37 ° C., the ELISA assay, after extraction, gives an 85% coverage of IFN ⁇ 2b relative to the same emulsion stored for one week at 5 ° C. Under the same storage conditions, but in the absence of amphiphilic polyamino acid, the recovery is only 6%.
  • aqueous phase of amphiphilic polyamino acid at a concentration of 50 mg / ml (which is a physical gel at this concentration) is dispersed in the lipid phase according to the procedure described in Example 1 to obtain a hydrogel suspension.
  • the viscosity value was measured comparatively for suspension and initial gel. This measurement is carried out by characterizing the evolution of the viscosity as a function of the shearing gradient (from 10 to 1000s -1 ) at 25 ° C.
  • This test consists in measuring the force required to be applied to the piston of a syringe to obtain a determined flow rate at the syringe outlet.
  • injectable formulation is meant a formulation which, after evaluation by this TI injectability test, is characterized by a force of less than 25 N for a flow rate of 3.5 ml / min.
  • the suspension described in Example 3 is introduced into a 1 ml syringe
  • a first suspension is manufactured according to the protocol described in Example 1 by incorporating a hydrosulfide dye, methylene blue (Sigma) at a concentration of 0.01% (by weight) in the aqueous phase.
  • a hydrosulfide dye methylene blue (Sigma)
  • the dye simulates the active ingredient.
  • a second suspension is made in the absence of amphiphilic polyamino acid and again incorporating methylene blue at 0.01% (by weight).
  • 50 .mu.l are injected into 4 ml of a 0.1M phosphate buffer solution (PBS: Phosphate Buffer Saline, Sigma) which simulates the physiological medium.
  • PBS Phosphate Buffer Saline
  • Each assembly is placed under agitation and at a temperature of 37 ° C. Sixty microliters of continuous phase are taken at different times and then replaced with 60 ⁇ l of 0.1 M PBS.
  • the concentration of methylene blue in the various samples is measured by UV-Vis spectroscopy at 550 nm (Lambda UV / Vis Spectrometer, Perkin-Elmer Instruments). It is thus possible to determine the proportion of dye released as a function of time in the continuous phase. Under these conditions, the behavior observed shows that the release of the dye is delayed: whereas about 70% of the methylene blue is dropped in 14 days in the case of the suspension not comprising an amphiphilic polyamino acid, the presence of the amphiphilic polyamino acid in the aqueous drops can reduce the release rate, since under the same conditions, after 14 days, the proportion of dye released is only of the order of 20%.
  • Example 2 Further experimentation consisted in preparing a suspension according to the protocol of Example 1 and incorporating a therapeutic protein, human growth hormone (hGH: human growth hormone, Prospec) at a concentration of hGH: human growth hormone, Prospec) at a concentration of hGH: human growth hormone, Prospec
  • the concentration of hGH in the external aqueous phase is measured by liquid chromatography (HPLC, C 18 column).
  • aqueous phase of amphiphilic polyamino acid at a concentration of 20 mg / ml is dispersed in the lipid phase according to the procedure described in Example 1.
  • the suspension thus obtained is stored at 5 ° C. and characterized as a function of time by viscosity measurement and by measuring the size of the aqueous droplets.
  • the viscosity measurement is carried out by determining the value of the viscosity for a shear rate of 10 s -1 at 25 ° C. with an imposed stress-type rheometer (Gemini, Bohlin) on which a cone-shaped geometry has been installed. plane (2 cm or 4 cm and 1 ° angle).
  • the size measurement is performed by laser diffraction with a granulometer (Mastersizer 200, Malvern) and using heptane (SDS) as dispersion medium.

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Abstract

L' invention concerne des composition pharmaceutique injectables, à libération prolongée d' au moins un principe actif, comprenant au moins un principe actif dans une phase aqueuse de polymère amphiphile, sous forme dispersée dans une phase lipidique continue. La composition est sous la forme d une émulsion eau-dans-l' huile comprenant: une phase continue lipidique pharmaceutiquement acceptable, une phase dispersée aqueuse contenant au moins un polymère amphiphile et au moins un principe actif non lié de façon covalente au dit polymère amphiphile, au moins un tensioactif pharmaceutiquement acceptable.

Description

DISPERSION DE POL YAMINO ACIDES DANS UNE PHASE LIPIDIQUE CONTINUE
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente demande concerne de nouvelles formulations pharmaceutiques à base de suspensions colloïdales aqueuses ou de dispersions aqueuses, pour la libération prolongée de principe(s) actif(s), en particulier de principe(s) actif(s) protéinique(s) et peptidique(s). La demande concerne également les applications, notamment thérapeutiques, de ces formulations pharmaceutiques. Ces formulations pharmaceutiques actives concernent aussi bien la thérapeutique humaine que vétérinaire.
ETAT DE LA TECHNIQUE
Dans le domaine de la libération prolongée des principes actifs pharmaceutiques, notamment de protéines thérapeutiques, il existe un besoin dans de nombreux cas de reproduire au mieux chez le patient une concentration plasmatique en protéine thérapeutique ou en peptide thérapeutique proche de la valeur observée chez le sujet sain.
Cet objectif se heurte à la faible durée de vie des protéines dans le plasma, ce qui conduit à injecter de façon répétée la protéine thérapeutique. La concentration plasmatique en protéine thérapeutique présente alors un profil "en dents de scie" caractérisé par des pics élevés de concentration et des minima de concentration très bas. Les pics de concentration, très supérieurs à la concentration basale chez le sujet sain, peuvent avoir des effets nocifs très marqués du fait de la toxicité élevée des protéines thérapeutiques telles que l'interleukine IL2. Par ailleurs, les minima de concentration sont inférieurs à la concentration nécessaire pour avoir un effet thérapeutique, ce qui entraîne une mauvaise couverture thérapeutique du patient et des effets secondaires graves à long terme.
Aussi, pour reproduire chez le patient une concentration plasmatique en protéine thérapeutique proche de la valeur idéale pour le traitement du patient, il importe que la formulation pharmaceutique considérée permette de libérer la protéine thérapeutique sur une durée prolongée, de façon à limiter les variations de concentration plasmatique au cours du temps.
Par ailleurs, cette formulation active doit, de préférence, satisfaire au cahier des charges suivant, déjà connu de l'homme de l'art :
1- libération prolongée d'une protéine thérapeutique active et non dénaturée, par exemple humaine ou synthétique, de sorte que la concentration plasmatique en protéine thérapeutique est maintenue à un niveau thérapeutique ;
2- viscosité à l'injection suffisamment basse pour être aisément injectable ; 3- forme biocompatible et biodégradable, ne présentant ni toxicité, ni immunogénicité et présentant une excellente tolérance locale.
Pour tenter d'atteindre ces objectifs, l'une des meilleures approches proposées dans l'art antérieur fut de développer des formes à libération prolongée de protéine(s) thérapeutique(s) constituées par des suspensions liquides et peu visqueuses de nanoparticules chargées en protéine(s) thérapeutique(s). Ces suspensions ont permis l'administration aisée de protéines thérapeutiques natives.
Ainsi, la société Flamel Technologies a proposé une voie dans laquelle la protéine thérapeutique est associée à des nanoparticules d'un copolyaminoacide comprenant des groupements hydrophobes et des groupements hydrophiles.
Le brevet US-B-5,904,936 décrit des particules submicroniques (NPV) -de taille moyenne comprise entre 0,01 et 0,5 μm- et des particules microniques (MPV) -de taille moyenne comprise entre 0,5 et 20 μm- de copolymère amphiphile de polyamino acides comprenant au moins deux types d'aminoacides, l'un étant neutre hydrophobe, l'autre étant ionisable. Des protéines telles que l'insuline s'adsorbent spontanément en solution aqueuse à ces particules. Le copolymère de polyaminoacide est, par exemple, un copolymère bloc de poly(L-leucine-b-L-glutamate de sodium). Ce brevet décrit l'agrégation de NPV en MPV par addition à une suspension colloïdale de poly-Leu/Glu, de sels monocationiques (sulfate d'ammonium) ou polycationiques (Fe2+, Fe3+, Zn2+, Ca2+, Al2+, Al3+ ou Cu2+), d'acide (HCl), de polymères cationiques (polylysine).
La demande de brevet WO-A-2005/033181 divulgue des homopolyaminoacides linéaires, amphiphiles, anioniques, comprenant des résidus aspartiques ou des résidus glutamiques et dont les extrémités sont porteuses de groupements hydrophobes comportant de 8 à 30 atomes de carbone. En particulier, les homopolyaminoacides téléchéliques modifiés hydrophobes sont, par exemple, un poly[GluONa] à extrémités PheOC18/C18 ou un poly[GluONa] à extrémités PheOC18/alpha-tocophérol. Ces homopolyaminoacides téléchéliques modifiés hydrophobes forment spontanément dans l'eau une suspension colloïdale de nanoparticules, lesquelles sont aptes à s'associer aisément en suspension aqueuse à pH 7,4, avec au moins une protéine active (insuline). La durée de libération in vivo de la (ou les) protéine(s) active(s) (e.g. insuline) vectorisée par les suspensions selon US-B-5,904,936 & WO-A-2005/033181 gagnerait à être augmentée.
L'augmentation de la durée de libération a été partiellement obtenue par les formes pharmaceutiques décrites dans la demande PCT WO-A-05/051416 . Dans cette demande, une suspension colloïdale de nanoparticules (0,001-0,5 μm) de poly(L-glutamate de sodium) modifiée hydrophobe est injectée à une concentration telle qu'après injection sous-cutanée, il se forme in situ chez le patient un gel au contact de l'albumine endogène. La protéine est alors lentement libérée sur une période typique d'une semaine. S'il est nécessaire de prolonger la durée de libération de la protéine au-delà de la période d'une semaine décrite dans cette dernière demande, il peut exister plusieurs possibilités.
Une première solution consiste à augmenter la concentration en polymère de façon à ralentir la libération de la protéine après injection in-vivo. Néanmoins, cette voie se heurte à une forte augmentation de la viscosité de la solution ne permettant pas l'injection de ce système.
Une seconde solution consiste à disperser la protéine dans une phase lipidique injectable, non miscible à l'eau, afin de réduire la diffusion de la protéine dans le milieu sous-cutané. Toutefois cette voie se heurte à une dénaturation potentielle de la protéine au contact de la phase lipidique.
Par ailleurs, le brevet US 6,235,282 Bl décrit une émulsion d'eau-dans-1'huile injectable comme adjuvant immunogène dans les préparations vaccinales. Une substance active d'un point de vue immuno logique ou un antigène vaccinal est contenu dans la phase aqueuse de l' émulsion. Cela entraîne des difficultés de stabilité de la substance active dans la phase aqueuse, ainsi que des risques de dénaturation de la substance active à l'interface eau-huile. Ce brevet ne concerne pas la libération prolongée d'un principe actif.
La demande US 2004/0071716 Al vise un adjuvant utile pour les formulations vaccinales. Cet adjuvant comprend une émulsion eau-dans-1'huile. L'émulsifïant est un émulsifïant polymère, plus précisément un copolymère séquence de formule générale
A-COO-B-OOC-A, dans laquelle B est un résidu divalent d'un polyalkylène glycol hydrosoluble, et A est un résidu d'un acide monocarboxylique complexe liposoluble.
D'après les exemples, l'antigène viral se trouve dans la phase aqueuse, ce qui pose les mêmes problèmes de stabilité et de risque de dénaturation de l'antigène viral. Cette demande ne concerne pas la libération prolongée d'un principe actif.
BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION
II est du mérite des inventeurs d'avoir proposé une forme lipidique de basse viscosité permettant d'augmenter la durée de libération d'une protéine thérapeutique associée à un polymère sans diminuer la stabilité de la protéine et sans augmenter la viscosité de la forme thérapeutique au-delà d'une limite acceptable du point de vue de l'injectabilité.
L'invention vise en premier lieu une composition pharmaceutique à libération prolongée d'au moins un principe actif. La composition comprend au moins un principe actif dans une phase aqueuse contenant au moins un polymère amphiphile. La phase aqueuse est sous forme dispersée dans une phase lipidique continue. Plus précisément, la composition est sous la forme d'une émulsion eau- dans- l'huile comprenant : - une phase continue lipidique pharmaceutiquement acceptable,
- une phase dispersée aqueuse contenant au moins un polymère amphiphile et au moins un principe actif non lié de façon covalente au dit polymère amphiphile,
- au moins un tensioactif pharmaceutiquement acceptable. Selon une variante de l'invention, le polymère amphiphile est porteur d'au moins un groupement hydrophobe. Dans une variante de l'invention, le polymère amphiphile est un polyaminoacide amphiphile, éventuellement porteur d'au moins un groupement hydrophobe. Ainsi, dans une variante de l'invention, la composition pharmaceutique est sous la forme d'une émulsion eau-dans-1'huile qui comprend les composants suivants : - une phase continue lipidique pharmaceutiquement acceptable,
- une phase dispersée aqueuse contenant au moins un polyaminoacide amphiphile porteur d'au moins un groupement hydrophobe et au moins un principe actif non lié de façon covalente au dit polyaminoacide amphiphile,
- au moins un tensioactif pharmaceutiquement acceptable. Selon une autre variante de l'invention, le polymère amphiphile est un polysaccharide porteur d'au moins un groupement hydrophobe.
Une telle composition pharmaceutique est susceptible d'être administrée par les voies usuelles, notamment au moins l'une des voies suivantes : la voie orale, la voie nasale, la voie oculaire, la voie cutanée, la voie vaginale, la voie rectale ou la voie parentérale. Parmi les voies parentérales, on peut citer l'injection sous-cutanée, l'injection intramusculaire, l'injection intrapéritonéale, l'injection intradermique, l'injection intraveineuse, l'injection intra-artérielle, l'injection intrarachidienne, l'injection intra- articulaire et l'injection intrapleurale.
Un autre aspect de l'invention concerne l'utilisation des différents polymères amphiphiles décrits ci-dessous, en particulier les polysaccharides et les polyaminoacides, dans la préparation d'une composition pharmaceutique sous forme d'une émulsion eau- dans-1'huile, dont la phase dispersée aqueuse contient au moins un de ces polymères amphiphiles. Une variante de l'invention consiste à utiliser un ou plusieurs polyaminoacides amphiphiles porteurs d'au moins un groupement hydrophobe, dans la préparation d'une telle composition pharmaceutique.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Définitions On entend par gel physique en milieu aqueux, un état semi- solide induit par des interactions physiques non covalentes entre des molécules, macromolécules ou particules solubilisées ou dispersées en phase aqueuse. Il est également possible de définir un gel physique via des mesures de viscoélasticité. Dans ce cadre un gel physique est un système pour lequel le module élastique G' est supérieur au module de perte G" sur une gamme de fréquence telle que le temps de relaxation caractéristique, défini comme étant l'inverse du point de croisement des deux modules, est supérieur ou égal à 0,1s et plus préférentiellement supérieur ou égal à 10s. Au sens de l'invention et dans tout le présent exposé, le terme « polyaminoacide » couvre aussi bien les polyaminoacides naturels que les polyamino acides synthétiques comprenant plus de 10 résidus aminoacides. De façon générale dans la présente description, lorsque l'on mentionnera « le » polyaminoacide, il faudra comprendre qu'il peut s'agir d'un mélange de différents polyaminoacides mis en œuvre dans la composition pharmaceutique .
Au sens de l'invention, l'expression « être porteur » signifie que le groupement, le greffon ou le radical porté dont il s'agit est un groupement pendant. En d'autres termes, ledit groupement est un groupement latéral par rapport à la chaîne principale du polymère amphiphile. Dans le cas de polyaminoacides constitués d'un enchaînement de résidus glutamate et/ou aspartate, le groupement est un substituant de la fonction carbonyle en δ du résidu aspartique ou en ε du résidu glutamique, qui le porte. Pour d'autres résidus aminoacides, le groupement pendant est un substituant de la chaîne latérale spécifique dudit résidu aminoacide.
Polysaccharide amphiphile
Dans une variante de l'invention, le polymère amphiphile peut être un polysaccharide modifié, tel que les pullulanes modifiés hydrophobes (cholestéryl pullulane, hexadécyl pullulane) qui sont décrits dans l'article de Kuroda et al. (2002) "Hierarchical self-as s emb Iy of hydrophobically modiβed pullulan in water: gelation by networks ofnanoparticles", Langmuir, 18, 3780-3786.
Dans une autre variante de l'invention, le polysaccharide amphiphile mis en œuvre est un choisi parmi les hyaluronanes, les alginates, les chitosans, les galacturonanes, la chondroïtine-sulfate, les dextrans, les celluloses et/ou leurs dérivés fonctionnalisés. De tels polysaccharides sont décrits dans la demande internationale de brevet publiée sous le numéro WO 2007/034320. En particulier, il s'agit des hyaluronanes, alginates, chitosans et dextrans et/ou leurs dérivés fonctionnalisés par au moins un radical imidazolyle et au moins un groupement hydrophobe. On trouve une description de ce type de polysaccharide et des modalités de leur synthèse dans la demande internationale de brevet publiée sous le numéro WO 2007/116143, en particulier pour les dérivés de dextrans. Polyaminoacide amphiphile
Dans une autre variante de l'invention, le polymère amphiphile mis en œuvre est un polyaminoacide amphiphile. Selon une variante préférée, il s'agit d'un polyaminoacide amphiphile porteur d'au moins un groupement hydrophobe. Dans une variante de l'invention, les polyaminoacides mis en œuvre sont des homopolymères comprenant des résidus acide glutamique ou acide aspartique récurrents, ou des copolymères comprenant un mélange de ces deux types de résidus. Ces résidus peuvent être sous forme de sel, auquel cas il s'agit de résidus glutamate ou aspartate. Les sels ainsi formés doivent être pharmaceutiquement acceptables. Divers exemples de contre-ions généralement pharmaceutiquement acceptables sont indiqués dans la suite de la description. Les résidus acide glutamique ou acide aspartique, et leurs sels, peuvent avoir la configuration D ou L. Il est également envisageable qu'un polyaminoacide comprenne simultanément des résidus possédant la configuration D et des résidus possédant la configuration L. Les résidus récurrents sont liés entre eux au niveau de leurs positions alpha ou gamma pour les résidus glutamate ou glutamique, et au niveau de leurs positions alpha ou bêta pour les résidus aspartique ou aspartate.
Dans un variante de l'invention, la chaîne polyaminoacide principale comprend essentiellement des résidus aminoacides possédant la configuration L et liés entre eux par des liaisons de type alpha (c'est-à-dire au niveau de leurs positions alpha). Dans une autre variante de l'invention, le polyaminoacide amphiphile est formé de monomères dérivés de l'acide aspartique (résidus aspartiques) et/ou de l'acide glutamique (résidus glutamiques), au moins une partie de ces résidus étant porteuse de greffons comportant au moins un groupement hydrophobe [GH]. Ces polyaminoacides sont notamment du type de ceux décrits dans la demande de brevet PCT WO-A-00/30618. Selon une variante de réalisation de l'invention, en plus de greffons comportant au moins un groupement hydrophobe [GH], le polyaminoacide amphiphile peut porter des substituants dérivés d'un résidu histidine. Dans cette hypothèse, ledit résidu histidine peut être lié à un résidu glutamique ou aspartique par l'intermédiaire d'une liaison amide.
Divers types de polyaminoacides amphiphiles porteurs de groupements hydrophobes vont maintenant être décrits [GH]. Par souci de simplicité, les formules générales suivantes sont écrites sous forme de bloc. Cependant, les polyaminoacides amphiphiles correspondants à ces formules peuvent être, notamment, des polymères ou des copolymères, séquences, blocs ou aléatoires. Il est envisageable de combiner les diverses variantes de réalisation, par exemple en choisissant un mélange approprié des polyaminoacides amphiphiles décrits ci-dessous, ou en combinant les divers types de greffons au sein d'un même polyaminoacide amphiphile.
Avantageusement, la chaîne principale du polyaminoacide est choisie parmi : - un homopolymère d'alpha-L-glutamate ou d'alpha-L-glutamique ; - un homopolymère d'alpha-L-aspartate ou d'alpha-L-aspartique ;
- un copolymère d'alpha-L-aspartate/alpha-L-glutamate ou d'alpha-L-aspartique /alpha- L-glutamique.
La distribution des unités aspartiques et/ou glutamiques de la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile est telle que le polyaminoacide ainsi constitué est soit aléatoire, soit de type bloc, soit de type multibloc. De façon similaire, la distribution des groupements hydrophobes sur la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile est telle que le polyaminoacide ainsi constitué est soit aléatoire, soit de type bloc, soit de type multibloc. Ainsi, les formules générales (I), (II), (III), (IV) et (V) exposées dans la suite de la description ne doivent pas être interprétées comme représentant uniquement des copolymères séquences (ou blocs), mais également des copolymères aléatoires ou des copolymères multiblocs.
Selon un autre mode de définition, le polyaminoacide amphiphile mis en œuvre dans la composition selon l'invention a une masse molaire qui se situe entre 2 000 et 100 000 g/mole, et de préférence entre 5 000 et 40 000 g/mole.
Selon une première variante, le polyaminoacide amphiphile mis en œuvre dans la compositions pharmaceutique répond à la formule générale (I) suivante, et ses sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000008_0001
dans laquelle :
- R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à ClO, un groupe acyle ramifié en C3 à ClO, un groupe pyroglutamate ou un groupe -R4-[GH1] ;
- R2 représente un groupe -NHR5 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une aminé -NHR5 ou un alcool -OR6 ;
- R4 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe ou un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ; - R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, ou un groupe benzyle ;
- R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, un groupe benzyle ou un groupe -R4-[GH1] ;
- A et B représentent indépendamment les uns des autres un groupe -CH2- (résidu aspartique) ou -CH2-CH2- (résidu glutamique) ;
- [GHl] représente un groupement hydrophobe ;
- le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes [GHl] n/(n+m) est suffisamment bas pour que le polyaminoacide amphiphile forme une suspension colloïdale de particules submicroniques de polyaminoacide lorsqu'il est en solution dans l'eau à pH = 7 et à 25°C, de préférence n/(n+m) est compris entre 1 à 25 % molaire ;
- le degré de polymérisation (n + m) varie de 10 à 1000, de préférence de 50 à 300.
Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (I), on se reportera utilement aux demandes de brevet publiées sous les numéros FR 2 840 614 et FR 2 855 521.
Selon une deuxième possibilité, le polyaminoacide amphiphile répond à l'une des formules générales (II), (III) et (IV) suivantes, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000009_0001
dans lesquelles :
- Ra représente un groupe alkylène linéaire en C2 à C6 ;
- Rb représente un groupe alkylène en C2 à C6, un groupe dialcoxy en C2 à C6 ou un groupe diamine en C2 à C6 ; - R7 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe, un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ou un groupe -C(O)-CH2-CH2- ;
- R8 représentent un groupe -NHR9 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une aminé -NHR9 ou un alcool -OR10 respectivement ; - R9 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, ou un groupe benzyle ;
- R10 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, un groupe benzyle ou un groupe -Rπ-[GH3]
- R11 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe ou un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ;
- A et B représentent indépendamment les uns des autres un groupe -CH2- (résidu aspartique) Ou-CH2-CH2- (résidu glutamique) ;
- [GH2] et [GH3] représentent indépendamment les uns des autres un groupement hydrophobe ; - les degrés de polymérisation (ml + m2) et m3 varient de 10 à 1000, de préférence de 50 à 300.
Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (II), (III) et (IV), on se reportera utilement à la demande de brevet FR 2 860 516.
Selon une troisième possibilité, le po Iy amino acide amphiphile répond à la formule générale (V) suivante, et ses sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000011_0001
dans laquelle :
- Rc représente un groupe -NHR15 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une aminé -NHR5 ou un alcool -OR16 respectivement,
- Rd représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à ClO, un groupe acyle ramifié en C3 à ClO ou un groupe pyroglutamate ;
- R12 représentent indépendamment les uns des autres un groupe de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les groupes suivants: -O-, -NH-, -N-alkyle en Cl à C5, un résidu acide aminé, un diol en C2 à C6, un triol en C3 à C6, une diamine en C2 à C6, une triamine en C3 à C6, un aminoalcool en C2 à C6 ou un hydroxyacide en C2 à C6 ;
- R13 représentent indépendamment les uns des autres un groupe -OH ou un groupe éthanol-amine lié par la fraction aminé ; - R14 représente un groupe ester d'alkyle, un groupe -CH2OH (histidinol), un atome d'hydrogène (histamine), un groupe -C(O)NH2 (histidinamide), un groupe -C(0)NHCH3 ou un groupe -C(O)N(CH3)2,
- R15 et R16 représentent indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO ou un groupe benzyle,
- [GH4] représentent chacun indépendamment les uns des autres un groupement hydrophobe choisi parmi :
• les groupes alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• les groupes alkylaryles ou arylalkyle en C8 à C30 comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• les groupes (poly)cycliques en C8 à C30 comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome ; - p, q et r sont des entiers positifs,
- le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes [GH] (p)/(p+q+r) varie de 1 à 50 % molaire, sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes;
- le taux de greffage molaire en groupes dérivés du résidu histidine (q)/(p+q+r) varie de 1 à 99 % molaire ;
- (r)/(p+q+r) varie de 0 à 98 % molaire ;
- (p+q+r) varie de 10 à 1000, de préférence entre 30 et 500.
Généralement, les hétéroatomes que l'on peut trouver dans les groupement hydrophobes [GH4] sont les atomes d'oxygène, d'azote ou de soufre. Les dérivés du résidu histidine utilisables pour fonctionnaliser les unités glutamates sont identiques ou différents entre eux et peuvent être par exemple : les esters d' histidine (tels que l'ester méthylique et l'ester éthylique), l'histidinol et l'histamine. Ces dérivés peuvent être également par exemple l'histidinamide, le dérivé N-monométhyle de l' histidinamide et le dérivé N,N'-diméthyle de l'histidinamide. Dans une variante de l'invention, au moins l'un des groupements hydrophobes
[GH4] est inclus dans un greffon hydrophobe comprenant au moins une rotule (ou motif) d'espacement ("spacer") R12 permettant de relier le groupement hydrophobe [GH4] à une chaîne de polyglutamate (par exemple une chaîne principale - squelette-polyglutamate). Cette rotule peut comprendre, par exemple au moins une liaison covalente directe et/ou au moins une liaison amide et/ou au moins une liaison ester. Par exemple, la rotule peut être du type de celles appartenant au groupe comportant notamment: les résidus aminoacides différents de l'unité monomérique constitutive du polyglutamate, les dérivés des aminoalcools, les dérivés des polyamines (par exemple les diamines), les dérivés des polyols (par exemple les diols) et les dérivés des hydroxy acides.
Les rotules R12 formant avec les groupements hydrophobes [GH4] des greffons hydrophobes, peuvent être di-, tri- ou tétravalentes (voire pentavalentes et plus). Dans le cas d'une rotule R12 divalente, le greffon hydrophobe comporte un seul groupement [GH4], tandis qu'une rotule R12 trivalente confère au greffon hydrophobe un caractère bifide, c'est à dire que le greffon hydrophobe comprend deux groupements hydrophobes [GH4]. A titre d'exemple de rotule R12 trivalente on peut citer, entre autres, des résidus acide aminé, par exemple acide glutamique ou des restes polyols, par exemple glycérol. Ainsi, deux exemples avantageux mais non limitatifs de greffons hydrophobes comprenant des groupements hydrophobes [GH4] sont les dialkyles glycérol et les dialkyles glutamate.
Pour plus de détails sur la préparation et la synthèse de polyaminoacides de formule (V), on se reportera utilement à la demande de brevet FR 2 892 725.
Selon une variante de réalisation de l'invention, les groupements hydrophobes
[GHl], [GH2] et [GH3] du polyaminoacide amphiphile de formule générale (I), (II), (III) ou (IV) sont choisis dans le groupe comprenant les radicaux octyloxy, dodécyloxy, le tétradécyloxy, hexadécyloxy, octadécyloxy, oléyloxy, tocophéryloxy ou cholestéryloxy. Par ailleurs, les groupements hydrophobes [GH4] du polyaminoacide amphiphile de formule générale (V) sont choisis dans le groupe comprenant les radicaux octyl, dodécyl, le tétradécyl, hexadécyl, octadécyl, oléyl, tocophéryl ou cholestéryl. De préférence, dans cette variante de l'invention, R4 (formule I), R7 (formules II et IV) et R11 (formules III et IV) représentent une liaison directe, et R12 (formule V) représente un groupe -O-.
Selon une autre variante de l'invention, éventuellement combinée à la précédente, les groupements hydrophobes [GHl], [GH2], [GH3] et [GH4] du polyaminoacide amphiphile (I), (II), (III), (IV) ou (V), peuvent aussi représenter chacun indépendamment les uns des autres un groupe monovalent de formule générale (VI) suivante :
Figure imgf000013_0001
dans laquelle : - R17 représentent indépendamment les uns des autres un groupe méthyle, isopropyle, isobutyle, secbutyle ou benzyle ;
- R18 représentent indépendamment les uns des autres un groupe hydrophobe comportant de 6 à 30 atomes de carbone;
- tl varie de 0 à 6. Dans une variante de l'invention, tout ou partie des groupes hydrophobes R18 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi :
- un groupe alcoxy linéaire ou ramifié comportant de 6 à 30 atomes de carbone et comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, - un groupe alcoxy comportant de 6 à 30 atomes de carbone et ayant un ou plusieurs carbocycles annelés et comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
- un groupe alcoxyaryle de 7 à 30 atomes de carbone ou un groupe aryloxyalkyle comportant de 7 à 30 atomes de carbone, comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome.
Généralement, les hétéroatomes que l'on peut trouver sont les atomes d'oxygène, d'azote ou de soufre. En pratique et sans que cela ne soit limitatif, dans le polyaminoacide amphiphile de formule générale (I), (II), (III), (IV) ou (V), le groupe R18 du groupement hydrophobe de formule (VI) est choisi dans le groupe comprenant les radicaux octyloxy, dodécyloxy, tétradécyloxy, hexadécyloxy, octadécyloxy, oléyloxy, tocophéryloxy ou cholestéryloxy.
Selon une variante de l'invention, le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes [GHl], [GH2], [GH3] et [GH4], est compris entre 1 % molaire et 25 % molaire. De préférence, le taux de greffage molaire est compris entre 5 % molaire et 20 % molaire. On définit le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes comme le rapport entre le nombre de résidus aminoacides de la chaîne principale porteurs d'au moins un groupement hydrophobe, et le nombre total de résidus aminoacides de la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile (le degré de polymérisation).
Selon une variante de réalisation de l'invention, le polyaminoacide amphiphile porte en outre au moins un greffon de type polyalkylène-glycol lié à un résidu glutamate et/ou aspartate. Avantageusement, ce greffon répond à la formule générale (VII) suivante :
Figure imgf000014_0001
dans laquelle :
- R19 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe ou un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ;
- X représente un hétéroatome choisi dans le groupe comprenant l'oxygène, l'azote et le soufre ; - R20 et R21 représentent indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire en Cl à C4 ;
- t2 varie de 10 à 1000, de préférence de 50 à 300.
En pratique, le polyalkylèneglycol est par exemple un polyéthylène glycol. Il est souhaitable que le pourcentage molaire de greffage du polyalkylène glycol varie de 1 à 30 % molaire.
En pratique, les sels pharmaceutiquement acceptables du polymère amphiphile mis en œuvre selon l'invention, notamment des polyaminoacides amphiphiles de formules générales (I), (II), (III), (IV) ou (V), sont ceux dans lesquels les groupements acides carboxyliques se trouvent sous forme ionisée en solution aqueuse. La salifîcation est généralement réalisée avec un cation métallique ou organique tels que :
- pour les cations métalliques : les ions sodium, potassium, calcium ou magnésium,
- pour les cations organiques : les cations à base d'aminé, les cations à base d'oligoamine, les cations à base de polyamine, notamment la polyéthylèneimine. Parmi les cations à base d'acide(s) aminé(s), une variante préférée consiste à sélectionner les cations à base de lysine ou d'arginine tels que la polylysine ou l'oligolysine.
Les polyaminoacides amphiphiles précédemment décrits sont intéressants, du fait qu'à un taux de greffage ajustable, ils se dispersent dans l'eau à pH = 7,4 (par exemple avec un tampon phosphate) pour donner des suspensions colloïdales.
De plus, des principes actifs tels que des protéines, des peptides ou des petites molécules, dont des exemples sont donnés ci-après, peuvent s'associer spontanément à ces polyaminoacides. Cette association peut résulter de diverses interactions physico- chimiques, non covalentes. Il s'agit par exemple de liaisons hydrogène, de liaisons ioniques, d'interactions hydrophobes, de forces de Van der Waals, ou simultanément, de plusieurs de ces liaisons non covalentes. Dans certains cas, il se peut qu'il n'y ait pas, à proprement parler, d'association entre les principes actifs et les polyaminoacides, mais simplement un piégeage stérique du principe actif dans un gel physique de polyaminoacide.
Les polyaminoacides amphiphiles susceptibles d'être utilisés dans la formulation de l'invention sont, par exemple, obtenus par des méthodes connues de l'homme de l'art. Les polyaminoacides statistiques peuvent être obtenus par greffage du groupement hydrophobe [GH], préalablement fonctionnalisé par "l'espaceur", directement sur le polymère par une réaction classique de couplage. Les polyaminoacides blocs ou multiblocs peuvent être obtenus par polymérisation séquentielle des anhydrides de N-carboxy-aminoacides (NCA) correspondants. On prépare par exemple un polyaminoacide, homopolyglutamate, homopolyaspartate ou un copolymère glutamate/aspartate, bloc, multibloc ou aléatoire selon des méthodes classiques.
Pour l'obtention de polyaminoacide de type alpha, la technique la plus courante est basée sur la polymérisation d'anhydrides de N-carboxy-aminoacides (NCA), décrites, par exemple, dans l'article "Biopolymers" Fuller, W. D.; Verlander, M. S.; Goodman, M. "A procédure for the facile synthesis ofamino-acid N-carboxy anhydrides.", 1976, 15, 1869 et dans l'ouvrage de H.R. Kricheldorf "alpha-Aminoacid-N-Carboxy Anhydride and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Les dérivés des NCA sont de préférence des dérivés NCA-O-Me, NCA-O-Et ou NCA-O-Bz (Me = méthyl, Et = éthyl et Bz = benzyl). Les polymères obtenus sont ensuite hydrolyses dans des conditions appropriées pour obtenir le polymère sous sa forme acide. Ces méthodes sont inspirées de la description donnée dans le brevet FR- A-2 801 226 de la demanderesse. Un certain nombre de polymères utilisables selon l'invention, par exemple, de type poly(alpha-L-aspartique), poly(alpha-L- glutamique), poly(alpha-D-glutamique) et poly(gamma-L-glutamique) de masses variables sont disponibles commercialement. Le polyaspartique de type alpha-bêta est obtenu par condensation de l'acide aspartique (pour obtenir un polysuccinimide) suivie d'une hydrolyse basique (cf. Tomida et al. Polymer 1997, 38, 4733-36).
Le couplage du greffon hydrophobe [GH] avec une fonction acide du polymère est réalisé aisément par réaction du polyaminoacide en présence d'un carbodiimide comme agent de couplage et optionnellement, un catalyseur tel que la 4-diméthylaminopyridine, dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide (DMF), la N-méthyl pyrrolidone (NMP) ou le diméthylsulfoxide (DMSO). Le carbodiimide est par exemple, le dicyclohexylcarbo-diimide ou le diisopropylcarbodiimide. Le taux de greffage est contrôlé chimiquement par la stœchiométrie des constituants et réactifs ou le temps de réaction. Les greffons hydrophobes [GH] fonctionnalisés par un "espaceur" sont obtenus par couplage peptidique classique ou par condensation directe par catalyse acide. Ces techniques sont bien connues de l'homme de l'art.
Pour la synthèse de copolymère bloc ou multibloc, on utilise des dérivés de NCA préalablement synthétisés avec le greffon hydrophobe. Par exemple, le dérivé NCA- hydrophobe est copolymérisé avec le NCA-O-Benzyl puis on enlève par hydrolyse sélectivement les groupements benzyliques.
Phase continue lipidique Au sens de l'invention, une phase lipidique ou huileuse comprend un composé organique hydrophobe liquide à une température comprise entre 200C et 400C, ou un mélange de tels composés. De préférence, la phase lipidique comprend au moins une huile sélectionnée parmi les huiles métabolisables. Par ailleurs, on choisit une huile, ou un mélange d'huiles, dont la viscosité dynamique à 25°C est inférieure ou égale à 400 mPa.s. On peut supposer que plus la viscosité dynamique de la phase lipidique est faible, meilleure sera l'injectabilité de la composition pharmaceutique. On préfère donc la mise en œuvre d'une phase lipidique dont la viscosité dynamique à 25°C est inférieure ou égale à 150 mPa.s, et mieux encore, dans un ordre croissant de préférence, inférieure ou égale à 80 mPa.s, 40 mPa.s et 30 mPa.s.
Parmi les huiles métabolisables utiles, on peut citer les huiles sélectionnées parmi les triglycérides d'acide gras à chaînes moyennes d'origine animale, végétale ou synthétique, les acides gras d'origine animale ou végétale, leurs esters et leurs sels, et leurs mélanges. Par exemple une huile de triglycéride d'acide gras à chaine moyenne utilisée est le tri-caprylate-caprate de glycérol (par exemple, Miglyol® 812, Sasol®). En exemple supplémentaire, la phase lipidique peut comprendre au moins une huile sélectionnée parmi l'huile d'olive, l'huile d'amande douce, l'huile de tournesol, l'huile de soja, l'huile d'arachide, l'huile de maïs, l'huile de noix de coco, l'huile de graine de coton, l'huile de ricin, et leurs mélanges.
Tensioactif
Le tensioactif, ou le mélange de tensioactifs, est sélectionné de telle sorte qu'il possède une HLB inférieure à 6. La balance hydrophile- lipophile (HLB) est une mesure empirique du degré d'hydrophilie ou de lipophilie d'une molécule. Diverses méthodes de mesure de la HLB ont été décrites, notamment par Griffîn (1949) "Classification of Surface-Active Agents by 'HLB'", Journal of the Society of Cosmetic Chemists 1 : 311, Griffïn (1954) "Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants", Journal of the Society of Cosmetic Chemists 5 : 259 ou Davies (1957) "A quantitative kinetic theory of emulsion type, I. Physical chemistry of the emulsifying agent", Gas/Liquid and Liquid/Liquid Interface. Proceedings of the International Congress of Surface Activity 426-438.
Par exemple, le tensioactif est sélectionné dans le groupe comprenant : les esters de polyglycéryle, les esters d'acide ricinoléique, le sorbitan oléate, la lécithine, les mono- et di-glycérides d'acides gras en C6 à C12 et/ou d'acides gras insaturés, les esters d'acide polyricinoléique, et leurs mélanges.
De préférence, le tensioactif comprend des esters de polyglycéryle, notamment d'acides gras naturels tels que les acides oléique, stéarique, ricinoléique, linoléique, linolénique. On préfère comme tensioactif les ricinoléates de polyglycéryle, voire même les polyglycéryl polyricinoléates (PGPR). Préparation de la composition pharmaceutique
Dans un premier temps, une phase aqueuse est préparée contenant au moins un polymère amphiphile, à une concentration comprise entre 5 et 100 mg par g de phase aqueuse et au moins un principe actif. Par exemple, dans le cas de l'interféron alpha 2b comme principe actif, on peut prévoir une concentration de lmg par g de phase aqueuse. La phase aqueuse est laissée sous agitation à 25°C pendant une durée suffisante permettant l'association du polymère amphiphile et du principe actif, par exemple 24h. Une phase lipidique est ensuite préparée en solubilisant un tensio actif ou un mélange de tensioactifs, dont la HLB est inférieure à 6, dans une huile métabolisable ou un mélange d'huiles métabolisables, dont la viscosité à 25°C est inférieure ou égale à 400mPa.s. De préférence, la viscosité à 25°C de l'huile ou du mélange d'huiles, est inférieure à lOOmPa.s.
La phase aqueuse et la phase lipidique sont mises en contact, sous agitation modérée pendant approximativement Ih en respectant un rapport massique de phase aqueuse/phase lipidique inférieur ou égal à 50/50 et préférentiellement inférieur ou égal à 30/70. La dispersion de la phase aqueuse dans la phase lipidique est effectuée par le biais d'un homogénéisateur de type rotor/stator ou bien avec un homogénéisateur haute pression.
De préférence, la composition pharmaceutique contient un excès de phase lipidique d'au moins 10 % en masse de phase lipidique par rapport à la quantité de phase lipidique nécessaire pour provoquer l'inversion de l'émulsion à 25°C. Une méthode de mesure du point d'inversion d'une émulsion est par exemple la méthode conductimétrique décrite notamment dans la référence suivante : Puisieux F., Seiller M. (1983). "Galenica 5 : les Systèmes Dispersés - Agents de Surface et Émulsions", vol 1. Paris : Technique et Documentation - Lavoisier. Etant donnés une phase aqueuse dispersée, une phase lipidique continue et un tensioactif, à une température donnée, il existe un ratio massique entre la phase dispersée aqueuse et la phase continue lipidique, auquel l'émulsion s'inverse, c'est-à- dire qu'elle passe d'une émulsion de type eau-dans-1'huile à une émulsion de type huile- dans-1'eau. On appelle ce ratio point d'inversion de l'émulsion.
Un excès de phase lipidique par rapport à la quantité de phase lipidique en deçà de laquelle l'émulsion eau-dans-1'huile s'inverse d'éviter cette inversion dans les conditions de stockage. Cet excès permet également de limiter la viscosité de l'émulsion eau-dans- l'huile.
Ainsi, on préfère encore mieux mettre en œuvre un excès de phase lipidique d'au moins 15% en masse de phase lipidique par rapport à la quantité de phase lipidique nécessaire pour provoquer l'inversion de l'émulsion à 25 0C, et mieux encore, dans un ordre croissant de préférence, un excès de phase lipidique d'au moins 20% en masse, voire 30% en masse. Dans le même ordre d'idée, le rapport massique phase dispersée aqueuse : phase continue lipidique est inférieur ou égal à 50 : 50 dans la composition pharmaceutique, de préférence, inférieur ou égal à 40 : 60, et mieux encore, inférieur ou égal à 30 : 70. En effet, plus la proportion de phase lipidique continue est importante, plus la viscosité de l'émulsion eau-dans-1'huile dépend de la viscosité de la phase lipidique continue.
De préférence, la composition pharmaceutique présente une viscosité dynamique à 25°C inférieure ou égale à 200mPa.s. Mieux encore, selon un ordre croissant de préférence, la viscosité dynamique à 25°C de la composition pharmaceutique est inférieure ou égale à 150mPa.s, ou inférieure ou égale à lOOmPa.s. La phase aqueuse contient au moins un polymère amphiphile et au moins un principe actif. La viscosité dynamique à 250C de la phase aqueuse avant dispersion dans la phase lipidique continue peut être supérieure ou égale à 20mPa.s. La phase aqueuse peut également se trouver sous forme de gel physique, dispersée dans la phase lipidique continue. La composition pharmaceutique est injectable par voie parentérale. Le test d'injectabilité est décrit dans les exemples.
Principe actif
Généralement, le ou les principes actifs sont choisi parmi les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylène glycol (par exemple les protéines PEGylées, c'est-à-dire liées à une ou plusieurs chaînes polyéthylène glycol), les peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les stéroïdes, les oligonucléotides, les polynucléotides et leurs mélanges.
Dans une variante préférée de l'invention, au moins un principe actif est hydrophile.
Plus précisément, le principe actif AP peut être choisi dans le groupe comprenant : l'érythroproietine, l'ocytocine, la vasopressine, l'hormone adréno-corticotropique, le facteur de croissance épidermique, le facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), les facteurs stimulants de l'hématopoïèse, les facteurs VIII et IX, l'hémoglobine, les cytochromes, les albumines, la prolactine, la lulibérine ou l'hormone de libération des gonadotrophines (LHRH), les antagonistes de la LHRH, les agonistes de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaine, porcine ou bovine, le facteur de libération de l'hormone de croissance, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines (IL) tels que IL-2, IL-I l, IL- 12 et leurs mélanges, les interférons (IFN) α, β ou γ et leurs mélanges, la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, les enképhalines, les endo morphines, les angiotensines, l'hormone de libération de la thyrotropine (TRH), les facteurs de nécrose tumorale (TNF), le facteur de croissance des nerfs (NGF), le facteur de croissance hématopoïétique des granulocytes (G- CSF), le facteur de croissance hématopoïétique des granulocytes macrophages (GM-CSF), le facteur de croissance hématopoïétique des macrophages (M-CSF), l'héparinase, les protéines morphogéniques de l'os (BMP), le facteur natriurétique auriculaire humain (hANP), le peptide ressemblant au glucagon (GLP-I), le facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF), l'antigène recombinant de l'hépatite B (rHBsAg), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymyxines, les colistines, la tyrocidine, les gramicidines, les cyclosporines et analogues synthétiques, les modifications et fragments pharmaceutiquement actifs d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, et leurs mélanges.
Selon une variante, le principe actif est une petite molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile du type de celles appartenant à la famille des anthracyclines, des taxoïdes ou des camptothécines ou du type de celles appartenant à la famille des peptides telles que la leuprolide ou la cyclosporine, et leurs mélanges. Au sens du présent exposé, une petite molécule est notamment une petite molécule non protéinique, par exemple exempte d'acides aminés. Selon une autre variante, le principe actif peut être choisi parmi au moins l'une des familles de substances actives suivantes : les agents de traitement de l'abus d'alcool, les agents de traitement de la maladie d'Alzheimer, les anesthésiques, les agents de traitement de l'acromégalie, les analgésiques, les antiasthmatiques, les agents de traitement des allergies, les agents anticancéreux, les anti-inflammatoires, les anticoagulants et antithrombotiques, les anti-convulsivants, les antiépileptiques, les antidiabétiques, les antiémétiques, les antiglaucomes, les antihistaminiques, les anti-infectieux, les antibiotiques, les antifongiques, les antiviraux, les antiparkinsoniens, les anti- cholinergiques, les antitussifs, les inhibiteurs de l'anhydrase carbonique, les agents cardiovasculaires, les hypolipémiants, les anti-arythmiques, les vasodilatateurs, les antiangineux, les anti-hypertenseurs, les vasoprotecteurs, les inhibiteurs de cholinestérase, les agents de traitement des désordres du système nerveux central, les stimulants du système nerveux central, les contraceptifs, les promoteurs de fécondité, les inducteurs et inhibiteurs du travail utérin, les agents de traitement de la mucoviscidose, les agonistes des récepteurs de la dopamine, les agents de traitement de l'endométriose, les agents de traitement des dysfonctionnements érectiles, les agents de traitement de la fertilité, les agents de traitement des troubles gastro-intestinaux, les immunomodulateurs et les immunosuppresseurs, les agents de traitement des troubles de la mémoire, les antimigraineux, les relaxants des muscles, les analogues de nucléosides, les agents de traitement de l'ostéoporose, les parasympathomimétiques, les prostaglandines, les agents psychothérapeutiques, les sédatifs, les hypnotiques et tranquillisants, les neuroleptiques, les anxiolytiques, les psychostimulants, les antidépresseurs, les agents de traitements dermatologiques, les stéroïdes et les hormones, les amphétamines, les anorexiques, les anti-douleurs non analgésiques, les anti-épileptiques, les barbituriques, les benzodiazépines, les hypnotiques, les laxatifs, les psychotropes et toutes les associations de ces produits.
L'invention concerne également une méthode de traitement thérapeutique consistant essentiellement à administrer la composition telle que décrite dans le présent exposé, par la voie orale, la voie nasale, la voie oculaire, la voie cutanée, la voie vaginale, la voie rectale ou la voie parentérale. Parmi les voies parentérales, on peut citer l'injection sous-cutanée, l'injection intramusculaire, l'injection intrapéritonéale, l'injection intradermique l'injection intraveineuse, l'injection intra-artérielle, l'injection intrarachidienne, l'injection intra- articulaire et l'injection intrapleurale.
BREVE DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1 : Viscosité de la solution de polyaminoacide amphiphile (triangles noirs) et de la suspension de polyaminoacide amphiphile dans l'huile (carrés noirs) de l'exemple 3.
Figure 2: Mesure d'injectabilité sur une suspension de polyaminoacide amphiphile avec des aiguilles de 25G (carrés noirs) et de 27G (triangles noirs) de l'exemple 3.
Figure 3: Relargage in vitro de bleu de méthylène à partir d'une suspension sans polyaminoacide amphiphile (triangles noirs) et avec polyaminoacide amphiphile (carrés noirs) de l'exemple 4.
Figure 4: Variation de viscosité à 10 s"1 de la suspension en fonction du temps (exemple 6).
Figure 5: Variation du diamètre (d50%) des gouttelettes aqueuses en fonction du temps
(exemple 6).
EXEMPLES
Exemple 1 : Fabrication de la suspension
On prépare un polyaminoacide amphiphile de la façon suivante : Le polymère d'alpha-L-polyglutamate, de masse équivalente à environ 10 000 par rapport à un standard en polyoxyéthylène, est obtenu par polymérisation de NCAGIuOMe, suivie d'une hydrolyse, comme décrit dans la demande de brevet FR 2 801 226. On solubilise 5,5 g de ce polymère d'alpha-L-polyglutamate dans 92 ml de diméthylformamide (DMF), en chauffant à 400C pendant 2 heures. Une fois le polymère solubilisé, on laisse revenir la température à 25°C et on ajoute successivement 1,49 g de D-alpha-tocophérol d'origine naturelle (à 98,5 % et obtenue de la société ADM France) préalablement solubilisé dans 6 ml de DMF, 0,09 g de 4-diméthylaminopyridine préalablement solubilisée dans 6 ml de
DMF et 0,57 g de diisopropylcarbodiimide préalablement solubilisé dans 6 ml de DMF. Après 8 heures à 25°C sous agitation, le milieu réactionnel est versé dans 800 ml d'eau contenant 15 % de chlorure de sodium et d'acide chlorhydrique (pH = 2). Le polymère précipité est ensuite récupéré par fïltration, lavé par de l'acide chlorhydrique 0,1 N puis par de l'eau. Le polymère est ensuite resolubilisé dans 75 ml de DMF puis reprécipité dans de l'eau contenant comme précédemment du sel et de l'acide à pH = 2. Après 2 lavages à l'eau, on lave plusieurs fois par de l'éther diisopropylique. Le polymère est ensuite séché à l'étuve sous vide à 400C. On obtient un rendement de l'ordre de 85 %.
Le taux de greffage estimé par RMN du proton est d'environ 5,2 % et une analyse par HPLC révèle un taux résiduel de tocophérol inférieur à 0,3 %. La masse moléculaire moyenne en poids Mw, mesurée par GPC en éluant avec la NMP, vaut 17 500 g/mol (en équivalent de polyméthyl méthacrylate).
15 ml d'une solution aqueuse du polyaminoacide amphiphile précédemment synthétisé, à 22 mg/g ainsi que 35 ml d'une solution de tri-caprylate-caprate de glycérol (Miglyol 812, Sasol) comprenant 5% (en masse) de polyglycéryl polyricinoléate (Grindsted™ PGPR 90, Danisco) sont préparés séparément. Ces deux phases sont ensuite mises en contact puis émulsifïées au moyen d'un homogénéisateur de type rotor/stator T8 Ultra-Turrax, Ika-Werke, pendant 1 minute avec une tige S8N-5G à une vitesse de 20000 min"1 ou bien avec un homogénéisateur haute pression (Emulsiflex C3, Avestin), après 3 passes de 1000 bars pour obtenir une suspension de gouttelettes aqueuses de polyaminoacide amphiphile dans une phase continue de tri-caprylate-caprate de glycérol ayant un rapport massique phase aqueuse/phase lipidique de 30/70.
Exemple 2 : Stabilité du principe actif amélioré par la présence du polyaminoacide
Une suspension est fabriquée selon le protocole décrit dans l'exemple 1 en incorporant une protéine interféron alpha 2b (IFNα2b) dans la phase aqueuse à une concentration de 1 mg/g.
La quantification de l'IFNα2b dans la suspension est réalisée par un dosage ELISA de type sandwich (kit IM3193, Beckman Coulter). Après conservation de la suspension contenant l'IFNα2b et le polyaminoacide amphiphile une semaine à 37 0C, le dosage ELISA, après extraction, donne un recouvrement de 85 % de l'IFNα2b par rapport à la même émulsion conservée une semaine à 5 0C. Dans les mêmes conditions de stockage, mais en absence de polyaminoacide amphiphile, le recouvrement n'est que de 6%.
Exemple 3 : Variation de viscosité/ injectabilité
Une phase aqueuse de polyaminoacide amphiphile à une concentration de 50 mg/ml (qui est un gel physique à cette concentration) est dispersée dans la phase lipidique selon la procédure décrite dans l'exemple 1 pour obtenir une suspension d'hydrogel. La valeur de viscosité a été mesurée comparativement pour la suspension et le gel initial. Cette mesure est effectuée en caractérisant l'évolution de la viscosité en fonction du gradient de cisaillement (de 10 à 1000s"1) à 25 0C avec un rhéomètre de type contrainte imposée (Gemini, Bohlin) sur lequel a été installé une géométrie de type cône-plan (2 cm ou 4 cm et 1 ° d'angle). La comparaison montre à bas gradients de cisaillement (10 s"1) que la suspension se caractérise par une viscosité de l'ordre de 0,1 Pa.s, ce qui est environ 250 fois plus faible que la viscosité du gel initial (voir la figure 1).
Le caractère injectable de cette suspension a été évalué par le test d'injectabilité TI.
Ce test consiste à mesurer la force nécessaire à appliquer sur le piston d'une seringue pour obtenir un débit déterminé en sortie de seringue. On entend par formulation injectable, une formulation qui, après évaluation par ce test d'injectabilité TI, se caractérise par une force inférieure à 25 N pour un débit de 3,5 ml/min. La suspension décrite dans l'exemple 3 est introduite dans une seringue de 1 ml
(Injekt-F, Braun) sur laquelle a été montée une aiguille de 25G ou de 27G. Cette seringue est placée dans un appareil de traction (DY 34, Adamel Lhomargy). On réalise le test d'injectabilité.
Comme le montrent les résultats représentés à la figure 2, il s'avère que la suspension de polyaminoacide amphiphile dans une phase continue lipidique est injectable avec des aiguilles de 25G et de 27G d'après ce test, ce qui n'est pas réalisable avec l'hydrogel initial.
Exemple 4 : Comportement de libération prolongée
On cherche à déterminer in vitro la proportion de principe actif libéré en fonction du temps dans le milieu physiologique par une suspension selon l'invention et à la comparer à celle observée en l'absence de polyaminoacide amphiphile.
Une première suspension est fabriquée selon le protocole décrit dans l'exemple 1 en incorporant un colorant hydroso lubie, le bleu de méthylène (Sigma) à une concentration de 0,01 % (en masse) dans la phase aqueuse.
Pour ces expériences in vitro, le colorant simule le principe actif. Une seconde suspension est fabriquée en l'absence de polyaminoacide amphiphile et en incorporant à nouveau du bleu de méthylène à 0,01 % (en masse). Pour chacune de ces deux suspensions, 50 μl sont injectés dans 4 ml d'une solution de tampon phosphate à 0,1 M (PBS : Phosphate Buffer Saline, Sigma) qui simule le milieu physiologique. Chaque montage est placé sous agitation et à une température de 37 0C. Soixante microlitres de phase continue sont prélevés à différents temps puis remplacés par 60 μl de PBS à 0,1 M. La concentration en bleu de méthylène dans les différents prélèvements est mesurée par spectroscopie UV- Visible à 550 nm (Lambda 35 UV/Vis Spectrometer, Perkin-Elmer Instruments). Il est ainsi possible de déterminer la proportion de colorant libéré en fonction du temps dans la phase continue. Dans ces conditions, le comportement observé montre que la libération du colorant est retardée : alors qu'environ 70% du bleu de méthylène sont re largués en 14 jours dans le cas de la suspension ne comprenant pas de polyaminoacide amphiphile, la présence du polyaminoacide amphiphile dans les gouttes aqueuses permet de diminuer la vitesse de libération, puisque dans les mêmes conditions, après 14 jours, la proportion de colorant relargué n'est que de l'ordre de 20%. Ces résultats apparaissent dans la figure 3.
Exemple 5
Une expérimentation supplémentaire a consisté à préparer une suspension selon le protocole de l'exemple 1 et en incorporant une protéine thérapeutique, l'hormone de croissance humaine (hGH : human Growth Hormone, Prospec) à une concentration de
5 mg/g dans la phase aqueuse avant dispersion dans la phase lipidique. Cinquante microlitres de produit sont injectés dans 4 ml de tampon phosphate à 0,1 M (PBS :
Phosphate Buffer Saline, Sigma). Soixante microlitres de phase continue sont prélevés à différents temps puis remplacés par 60 μl de PBS à 0,1 M. L'ensemble du montage est placé sous agitation et à une température de 37 0C.
La concentration en hGH dans la phase aqueuse externe est mesurée par chromatographie en phase liquide (HPLC, colonne C 18).
Les résultats obtenus ont montré qu'après 5 jours à 37 0C, la proportion de protéine libérée dans la phase aqueuse externe est inférieure à 2 %.
Exemple 6 : Stabilité physique
Une phase aqueuse de polyaminoacide amphiphile à une concentration de 20mg/ml est dispersée dans la phase lipidique selon la procédure décrite dans l'exemple 1. La suspension ainsi obtenue est conservée à 5°C et caractérisée en fonction du temps par mesure de viscosité et par mesure de taille des gouttelettes aqueuses.
La mesure de viscosité est effectuée en déterminant la valeur de la viscosité pour un gradient de cisaillement de 10 s"1 à 25 0C avec un rhéomètre de type contrainte imposée (Gemini, Bohlin) sur lequel a été installée une géométrie de type cône-plan (2 cm ou 4 cm et 1° d'angle). La mesure de taille est effectuée par diffraction laser avec un granulomètre (Mastersizer 200, Malvern) et en utilisant de l'heptane (SDS) comme milieu de dispersion.
Les résultats (Figures 4 et 5) montrent la stabilité de ces suspensions puisque après plus de 3 mois à 5°C, il n'y a aucune variation significative de la viscosité et de la taille des gouttelettes aqueuses.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition pharmaceutique à libération prolongée d'au moins un principe actif, comprenant au moins un principe actif dans une phase aqueuse contenant au moins un polymère amphiphile, ladite phase aqueuse étant sous forme dispersée dans une phase lipidique continue, la composition étant sous la forme d'une émulsion eau-dans-1'huile comprenant :
- une phase continue lipidique pharmaceutiquement acceptable,
- une phase dispersée aqueuse contenant au moins un polymère amphiphile et au moins un principe actif non lié de façon covalente au dit polymère amphiphile,
- au moins un tensioactif pharmaceutiquement acceptable.
2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, dans laquelle ledit polymère amphiphile est un polymère amphiphile porteur d'au moins un groupement hydrophobe.
3. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 ou 2, dans laquelle ledit polymère amphiphile est un polyamino acide amphiphile.
4. Composition pharmaceutique selon la revendication 3, dans laquelle ledit polyaminoacide amphiphile est porteur d'au moins un groupement hydrophobe.
5. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 ou 2, dans laquelle ledit polymère amphiphile est un polysaccharide porteur d'au moins un groupement hydrophobe.
6. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être administrée par une voie choisie parmi les voies orale, nasale, oculaire, cutanée, vaginale, rectale et parentérale.
7. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle au moins un principe actif est choisi parmi les protéines, les glycoprotéines, les protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylène glycol, les peptides, les polysaccharides, les liposaccharides, les stéroïdes, les oligonucléotides, les polynucléotides et leurs mélanges.
8. Composition pharmaceutique selon la revendication 7, dans laquelle au moins un principe actif est hydrophile.
9. Composition pharmaceutique selon la revendication 7, dans laquelle au moins un principe actif est choisi parmi : l'érythropoietine, l'ocytocine, la vasopressine, l'hormone adrénocorticotropique, le facteur de croissance épidermique, le facteur de croissance des plaquettes (PDGF), les facteurs stimulants l'hématopoïèse, le facteur VIII, le facteur IX, l'hémoglobine, les cytochromes, les albumines, la prolactine, la lulibérine ou hormone de libération des gonadotrophines (LHRH), les antagonistes de la LHRH, les agonistes de la LHRH, les hormones de croissance (GH) humaines, les GH porcines, les GH bovines, la somatolibérine, l'insuline, la somatostatine, le glucagon, les interleukines (IL-2, IL-I l, IL- 12), les interférons CC, β ou γ, la gastrine, la tétragastrine, la pentagastrine, l'urogastrone, la sécrétine, la calcitonine, les enképhalines, les endomorphines, les angiotensines, l'hormone thyréotrope (TRH), les facteurs de nécrose tumorale (TNF), le facteur de croissance des nerfs (NGF), le facteur de croissance des granulocytes (G-CSF), le facteur de croissance des granulocytes-macrophages (GM-CSF), le facteur de croissance des macrophages (M- CSF), l'héparinase, les protéines morphogéniques de l'os (BMP), le peptide natriurétique auriculaire humain (hANP), le peptide ressemblant au glucagon (GLP-I), le facteur de croissance de l'endothélium vasculaire (VEG-F), la rénine, les cytokines, la bradykinine, les bacitracines, les polymyxines, les colistines, la tyrocidine, les gramicidines, les cyclosporines et analogues synthétiques, les modifications et fragments pharmaceutiquement actifs d'enzymes, de cytokines, d'anticorps, et leurs mélanges.
10. Composition pharmaceutique selon la revendication 3 ou 4, dans laquelle ledit polyaminoacide amphiphile est un polymère ou un copolymère séquence ou statistique, ou un mélange de tels polymères et/ou copolymères.
11. Composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile comporte des monomères dérivés de l'acide glutamique et/ou de l'acide aspartique, au moins une partie des monomères étant porteurs d'au moins un groupement hydrophobe pendant.
12. Composition pharmaceutique selon la revendication 10 ou 11, dans laquelle la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile comporte des monomères dérivés de l'acide glutamique et/ou de l'acide aspartique, au moins une partie des monomères étant porteurs d'un groupe pendant dérivé d'un résidu histidine.
13. Composition pharmaceutique selon la revendication 12, dans laquelle au moins un groupe pendant dérivé d'un résidu histidine est lié à un résidu glutamique par l'intermédiaire d'une liaison amide.
14. Composition pharmaceutique selon la revendication 12 ou 13, dans laquelle les groupes pendants dérivés d'un résidu histidine sont identiques ou différents entre eux et sont choisis parmi l'histidine, les esters d'histidine, l'histidinol, l'histamine, l'histidinamide, le N-méthyl-histidinamide et le N,N'-diméthyl-histidinamide.
15. Composition pharmaceutique selon la revendication 10 ou 11, dans laquelle ledit polyaminoacide amphiphile (PAA) répond à la formule générale (I) suivante, et ses sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000028_0001
dans laquelle :
- R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à ClO, un groupe acyle ramifié en C3 à ClO, un groupe pyroglutamate ou un groupe -R4-[GH1] ;
- R2 représente un groupe -NHR5 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une aminé -NHR5 ou un alcool - OR6 ;
- R4 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe ou un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ;
- R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, ou un groupe benzyle ; - R6 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, un groupe benzyle ou un groupe -R4-[GH1] ;
- A et B représentent indépendamment les uns des autres un groupe -CH2- (résidu aspartique) ou -CH2-CH2- (résidu glutamique) ;
- [GHl] représente un groupement hydrophobe ; - le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes [GHl] n/(n+m) est suffisamment bas pour que le polyaminoacide amphiphile forme une suspension colloïdale de particules submicroniques de polyaminoacide lorsqu'il est en solution dans l'eau à pH = 7 et à 25°Cet n/(n+m) est compris de 1 à 25 % molaire ; - le degré de polymérisation (n + m) varie de 10 à 1000.
16. Composition pharmaceutique selon la revendication 10 ou 11, dans laquelle ledit polyaminoacide amphiphile (PAA) répond l'une des formules générales (II), (III) et (IV) suivantes, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000029_0001
dans lesquelles : - Ra représente un groupe alkylène linéaire en C2 à C6 ;
- Rb représente un groupe alkylène en C2 à C6, un groupe dialcoxy en C2 à C6 ou un groupe diamine en C2 à C6;
- R7 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe, un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ou un groupe -C(O)-CH2-CH2- ; - R8 représentent un groupe -NHR9 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une aminé -NHR9 ou un alcool -OR10 respectivement ;
- R9 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, ou un groupe benzyle ; - R10 représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO, un groupe benzyle ou un groupe -Rπ-[GH3]
- R11 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe ou un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ; - A et B représentent indépendamment les uns des autres un groupe -CH2- (résidu aspartique) Ou-CH2-CH2- (résidu glutamique) ;
- [GH2] et [GH3] représentent indépendamment les uns des autres un groupement hydrophobe ;
- les degrés de polymérisation (ml + m2) et m3 varient de 10 à 1000.
17. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 14, dans laquelle ledit polyaminoacide amphiphile (PAA) répond à la formule générale (V) suivante, et ses sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000030_0001
dans laquelle :
- Rc représente un groupe -NHR15 ou un résidu acide aminé terminal lié par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifiée par une aminé -NHR5 ou un alcool -OR16 respectivement, - Rd représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle linéaire en C2 à ClO, un groupe acyle ramifié en C3 à ClO ou un groupe pyroglutamate ;
- R12 représentent indépendamment les uns des autres un groupe de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, choisi parmi les groupes suivants: -O-, -NH-, -N-alkyle en Cl à C5, un résidu acide aminé, un diol en C2 à C6, un triol en C3 à C6, une diamine en C2 à C6, une triamine en C3 à C6, un aminoalcool en C2 à C6 ou un hydroxyacide en C2 à C6 ;
- R13 représentent indépendamment les uns des autres un groupe -OH ou un groupe éthanol-amine lié par la fraction aminé ;
- R14 représente un groupe ester d'alkyle, un groupe -CH2OH (histidinol), un atome d'hydrogène (histamine), un groupe -C(O)NH2 (histidinamide), un groupe -C(O)NHCH3 ou un groupe -C(O)N(CH3)2,
- R15 et R16 représentent indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire en Cl à ClO, un groupe alkyle ramifié en C3 à ClO ou un groupe benzyle,
- [GH4] représentent chacun indépendamment les uns des autres un groupement hydrophobe choisi parmi :
• les groupes alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• les groupes alkylaryles ou arylalkyle en C8 à C30 comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• les groupes (poly)cycliques en C8 à C30 comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome ; - p, q et r sont des entiers positifs,
- le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes [GH] (p)/(p+q+r) varie de 1 à 50 % molaire, sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes;
- le taux de greffage molaire en groupes dérivés du résidu histidine (q)/(p+q+r) varie de 1 à 99 % molaire ;
- (r)/(p+q+r) varie de 0 à 98 % molaire ;
- (p+q+r) varie de 10 à 1000.
18. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, 16 ou 17, dans laquelle ledit groupement hydrophobe [GHl], [GH2] et [GH3] sont choisis dans le groupe comprenant les radicaux octyloxy, dodécyloxy, le tétradécyloxy, hexadécyloxy, octadécyloxy, oléyloxy, tocophéryloxy ou cholestéryloxy, dans laquelle lesdits groupements hydrophobes [GH4] sont choisis dans le groupe comprenant les radicaux octyl, dodécyl, le tétradécyl, hexadécyl, octadécyl, oléyl, tocophéryl ou cholestéryl. et dans laquelle R4, R7 et R11 représentent une liaison directe, et R12 représente un groupe -O-.
19. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, 16 ou 17, dans laquelle les groupements hydrophobes [GHl], [GH2], [GH3] et [GH4] représentent chacun indépendamment les uns des autres un groupe monovalent de formule générale (VI) suivante :
Figure imgf000032_0001
dans laquelle : - R17 représentent indépendamment les uns des autres un groupe méthyle, isopropyle, isobutyle, secbutyle ou benzyle ;
- R18 représentent indépendamment les uns des autres un groupe hydrophobe comportant de 6 à 30 atomes de carbone;
- tl varie de 0 à 6.
20. Composition pharmaceutique selon la revendication 19, dans laquelle les groupes hydrophobes R18 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi :
- un groupe alcoxy linéaire ou ramifié comportant de 6 à 30 atomes de carbone et comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome, - un groupe alcoxy comportant de 6 à 30 atomes de carbone et ayant un ou plusieurs carbocycles annelés et comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
- un groupe alcoxyaryle de 7 à 30 atomes de carbone ou un groupe aryloxyalkyle comportant de 7 à 30 atomes de carbone, comportant éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome.
21. Composition pharmaceutique selon la revendication 19 ou 20, dans laquelle ledit groupe hydrophobe R18 est choisi dans le groupe comprenant les radicaux octyloxy, dodécyloxy, le tétradécyloxy, hexadécyloxy, octadécyloxy, oléyloxy, tocophéryloxy ou cholestéryloxy.
22. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 21, dans laquelle la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile comporte des monomères dérivés de l'acide glutamique et/ou de l'acide aspartique, ledit polyaminoacide étant porteur d'au moins un greffon de type polyalkylène glycol.
23. Composition pharmaceutique selon la revendication 22, dans laquelle le greffon de type polyalkylène glycol répond à la formule générale (VII) suivante :
Figure imgf000033_0001
dans laquelle :
- R19 représentent indépendamment les uns des autres une liaison directe ou un groupe espaceur comprenant de 1 à 4 résidus acide aminé ; - X représente un hétéroatome choisi dans le groupe comprenant l'oxygène, l'azote et le soufre ;
- R20 et R21 représentent indépendamment les uns des autres un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire en Cl à C4 ;
- t2 varie de 10 à 1000.
24. Composition pharmaceutique selon la revendication 22 ou 23, dans laquelle le polyalkylène glycol est un polyéthylène glycol.
25. Composition pharmaceutique selon la revendication 22, 23 ou 24, dans laquelle le polyaminoacide amphiphile présente un taux de greffage molaire en polyalkylène glycol qui varie de 1 à 30 % molaire.
26. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 17, dans laquelle la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile (PAA) est un homopolymère d'alpha-L-glutamate ou d'alpha-L-glutamique.
27. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 16, dans laquelle la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile (PAA) est un homopolymère d'alpha-L-aspartate ou d'alpha-L-aspartique.
28. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 16, dans laquelle la chaîne principale du polyaminoacide amphiphile (PAA) est un copolymère d'alpha-L-aspartate/alpha-L-glutamate ou d'alpha-L-aspartique/alpha-L-glutamique.
29. Composition pharmaceutique selon la revendication 15 ou 17, dans laquelle le taux de greffage molaire en groupements hydrophobes est compris entre 1 % molaire et 25% molaire.
30. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 29, dans laquelle la masse molaire du polyamino acide amphiphile (PAA) se situe entre 2 000 et 100 000 g/mole.
31. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le tensioactif, ou mélange de tensioactifs, possède une HLB <6.
32. Composition pharmaceutique selon la revendication 31, dans laquelle le tensioactif est sélectionné dans le groupe comprenant : les esters de polyglycéryle, les esters d'acide ricinoléique, le sorbitan oléate, la lécithine, les mono- et di-glycérides d'acides gras en C6 à C 12 et/ou d'acides gras insaturés, les esters d'acide polyricinoléique, le polyglycéryl- polyricinoléate et leurs mélanges.
33. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la phase lipidique comprend au moins une huile sélectionnée parmi les huiles métabolisables, la viscosité dynamique à 25 0C de ladite huile, ou du mélange d'huiles, étant inférieure ou égale à 400 mPa.s.
34. Composition pharmaceutique selon la revendication 33, dans laquelle la phase lipidique comprend au moins une huile sélectionnée parmi les triglycérides d'acide gras à chaîne moyennes d'origine animale, végétale ou synthétique, les acides gras d'origine animale ou végétale, leurs esters et leurs sels, et leurs mélanges.
35. Composition pharmaceutique selon la revendication 33 ou 34, dans laquelle la phase lipidique comprend au moins une huile sélectionnée parmi l'huile d'olive, l'huile d'amande douce, l'huile de tournesol, l'huile de soja, l'huile d'arachide, l'huile de maïs, l'huile de noix de coco, l'huile de graine de coton, l'huile de ricin, et leurs mélanges.
36. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, contenant un excès de phase lipidique d'au moins 10% en masse de phase lipidique par rapport à la quantité de phase lipidique nécessaire pour provoquer l'inversion de l'émulsion à 25°C mesurée par la méthode conductimétrique.
37. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le rapport massique phase dispersée aqueuse : phase continue lipidique est inférieur ou égal à 50 : 50.
38. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, ladite composition présentant une viscosité dynamique à 25°C inférieure ou égale à 20OmPa. s, et la phase aqueuse étant sous la forme d'un gel physique ou possédant une viscosité dynamique à 25°C supérieure ou égale à 20mPa.s.
39. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, contenant de 5 à 100 mg de polyaminoacide amphiphile par gramme de phase aqueuse.
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