WO2007094340A1 - 血管拡張剤 - Google Patents

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Tatsuhiko Hirota
Kohji Ohki
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    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a vasodilator exhibiting vascular endothelium-dependent vasodilatory activity and a functional food exhibiting such action.
  • Ischemic diseases such as myocardial infarction and cerebral infarction, which are terminal images of arteriosclerotic diseases, are the most common cause of death in Japan along with cancer.
  • Risk factors for arteriosclerosis include hyperlipidemia, hypertension, diabetes, smoking, obesity, hyperuricemia, aging, stress, etc., which are intertwined with each other and cause vascular disorders. For this reason, even if the degree of each risk factor is mild, the risk increases additively and synergistically due to their overlap, and the risk of ischemic disease also increases.
  • Non-patent literature 1 or 2 does not correlate the blood cholesterol level with the onset of arteriosclerosis
  • non-patent literature 3 shows a change in the degree of arteriosclerosis even if the hypertension state is suppressed.
  • Non-Patent Document 4 describes that even when an angiotensin converting enzyme inhibitor containing enalapril as an active ingredient is administered, no arteriosclerosis inhibitory action is observed.
  • Non-Patent Document 5 when infarcted ischemic diseases such as acute heart failure occur, according to Non-Patent Document 5, nitroprusside, nitroglycerin, etc. Vasodilators, diuretics, and cardiotonic drugs are necessary.
  • the tripeptide has the inhibitory activity of angiotensin I-converting enzyme that exhibits the blood pressure-lowering action and the anti-stress action. Due to this, it cannot be said that the tripeptide force has an anti-arteriosclerotic action and cannot have a vasodilating action.
  • arteriosclerosis is a pathological condition in which the arterial wall is thickened and loses its elasticity, and in recent years, damage to vascular endothelium and reduced function are cited as one of the causes of such symptoms. Therefore, a vasodilator that depends on the vascular endothelium can be expected to have an arteriosclerosis inhibitory action.
  • Patent Document 1 JP-A-6-197786
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 11-100328
  • Non-Patent Document 1 Food Science 257 (1999) p20— 25
  • Non-Patent Document 2 Atherosclerosis 151 (2000) p501— 508
  • Non-Patent Document 3 Circulation 104 (2001) p2391— 2394
  • Non-Patent Literature 4 international Journal of Cardiology 81 (2001) pl07— 115
  • Non-Patent Literature 5 Separate volume 'Ayumi of Medicine Cardiovascular Diseases-state of arts ver.2 (2001) p332- 33
  • An object of the present invention is to provide a vasodilator having a vascular endothelium-dependent vasodilatory action.
  • Another object of the present invention is to provide a functional food that can be used on a daily basis, has excellent safety, and has a vasodilator-dependent vasodilatory action.
  • a vasodilator comprising at least one peptide of Val Pro Pro and lie Pro Pro as an active ingredient.
  • the present invention also provides a vasodilator comprising a proteolysate containing Val Pro Pro and Z or He Pro Pro as an active ingredient.
  • a functional food having at least one peptide of Val Pro Pro and lie Pro Pro as an active ingredient and having a vasodilating action is provided.
  • a functional food having a vasodilatory action comprising a protein fragment containing Val Pro Pro and Z or He Pro Pro as an active ingredient.
  • At least one peptide of Val Pro Pro and lie Pro Pro, or Val Pro Pro and Z or He Pro Pro for producing a vasodilator or a functional food having a vasodilator action is provided.
  • Use of the proteolysate containing is provided.
  • At least one peptide of Val Pro Pro and lie Pro Pro Alternatively, a method for dilating a blood vessel is provided, in which an effective amount of a protein degradation product containing Val Pro Pro and Z or He Pro Pro is administered to an animal.
  • the vasodilator and the functional food of the present invention contain Val Pro Pro and Z or He Pro Pro derived from animal milk casein and the like, and further a protein degradation product containing at least one of them as an active ingredient. It is excellent in safety and exhibits a vascular endothelium-dependent vasodilatory effect. In particular, a functional food can be ingested regularly.
  • the vasodilator of the present invention is useful for ensuring blood circulation in ischemic diseases such as myocardial infarction and cerebral infarction, and biased toward contraction due to aging, lifestyle-related diseases, etc. It can relax the blood vessels and prevent arteriosclerosis and prevention of stiff shoulders, coldness and thrombosis related to blood flow disorders.
  • the functional food of the present invention is useful as a health food or a food for specified health use that displays efficacy for various symptoms and diseases such as stiff shoulders, coldness, and blood clots related to vasodilation and blood flow disorders. It is.
  • FIG. 1 is a graph showing the results of a vasodilation test performed in Example 1 and Comparative Example 1.
  • FIG. 2 is a graph showing the results of a test for confirming endothelium dependence of a vasodilator response performed in Example 1.
  • vasodilator and functional food of the present invention contain Val Pro Pro and Z or He Pro Pro (hereinafter, these tripeptides are abbreviated as VPP and IPP, respectively) or a protein degradation product containing at least one of these as an active ingredient. .
  • the tripeptides are pharmacologically acceptable salts, for example, inorganic acid salts such as hydrochloride, sodium salt and phosphate, and organic salts such as citrate, maleate, fumarate, tartrate and lactate. It may be a salt added with a salt such as an acid salt.
  • inorganic acid salts such as hydrochloride, sodium salt and phosphate
  • organic salts such as citrate, maleate, fumarate, tartrate and lactate. It may be a salt added with a salt such as an acid salt.
  • Examples of the method for preparing the tripeptide include a method of decomposing and purifying a peptide or protein having the amino acid sequence of VPP and Z or IPP by fermentation with a microorganism, a method of enzymatic hydrolysis, and a synthetic method. Obtainable. Details above Patent Documents 1 and 2 can be referred to.
  • a peptide or protein having an amino acid sequence of VPP and Z or IPP a fermented product containing at least one peptide of VPP and IPP, or a purified product thereof, fermented by a microorganism, or VPP
  • a hydrolyzate containing at least one peptide of VPP and IPP, or a purified product thereof, which is obtained by decomposing a peptide or protein having an amino acid sequence of Z or IPP with an enzyme can also be used.
  • the amount of tripeptide per day is usually 10 g to 10 g, particularly 1 mg to: About Lg is preferable.
  • Administration of the vasodilator can be adjusted depending on the symptoms of the disease. Single and continuous parenteral administration are appropriate for acute symptoms. For chronic symptoms and prophylactic use, it is preferable to ingest orally for 30 days or more.
  • Examples of the administration method of the vasodilator of the present invention include oral administration and parenteral administration.
  • Parenteral administration includes topical, transdermal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intrathoracic, intrathecal, etc., and direct administration to the affected area is also possible.
  • the form of the vasodilator of the present invention can be determined according to the administration method, and can be in the form of a preparation. Examples include tablets, pills, hard capsules, soft capsules, microcapsules, powders, granules, liquids, suspensions, and emulsions.
  • the formulation may be carried out, for example, as necessary, as a pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant, excipient, excipient, preservative, stabilizer, binder, PH regulator, buffer, thickener. It is manufactured in a unit dosage form that is generally required for the practice of the drug formulation, using agents, gelling agents, preservatives, antioxidants, etc.
  • the functional food of the present invention can be a health food or a food for specified health use that can display or promote the effects for various diseases related to vasodilation and blood flow disorders.
  • the intake to obtain such effects, particularly vasodilatory action and the ameliorating action associated with it is 1
  • the amount of the tripeptide per day is usually about 10 g to 10 g, particularly about lmg to about Lg. In addition, depending on the number of intakes per day, It is also possible to lower the amount taken in terms of the tripeptide amount.
  • the period of ingestion of the functional food of the present invention is not particularly limited, and it is preferably ingested for a long period of time for improvement of chronic symptoms and preventive use. In order to obtain the above-mentioned effects, it is preferable to take it regularly for usually 30 days or more, especially about 3 to 12 months.
  • the functional food of the present invention can be produced by a method of blending the tripeptide as an active ingredient or a food material containing the tripeptide into various foods, etc., it is assumed that all foods and beverages are in a form. be able to.
  • it can be in the form of tablet confectionery, yogurt, milk beverage, dairy product, alcoholic beverage, soft drink, powdered or granular food, capsule food, various fortified or supplementary foods, and the like.
  • the functional food of the present invention can usually contain various additives that can be added to food.
  • IPP and VPP were synthesized by the organic chemical synthesis method shown below.
  • the synthesis was performed by a solid phase method using an automatic peptide synthesizer (PSSM-8 type) manufactured by Shimadzu Corporation.
  • PSSM-8 type automatic peptide synthesizer
  • Fmoc 2-Chlorotrityl type polystyrene rosin as a solid support, with proline bound with amino group protected by fluorenylmethyloxycarboxyl group (hereinafter abbreviated as Fmoc) 50 mg of rosin was used (registered trademark SynProP mark Res in, manufactured by Shimadzu Corporation).
  • Fmoc-Ile, Fmoc-Pro, and Fmoc-Val in which the amino group was protected with the Fmoc group were reacted in 100 / z mol in accordance with the peptide sequence in the usual manner to obtain a peptide-bonded resin.
  • reaction solution A (10% by volume acetic acid, 10% by volume trifluoroethanol, 80% by volume dichloromethane)
  • reaction solution B 82.5% by volume trifluoroacetic acid, 3% by volume ethyl methyl sulfide, 5% by volume pure water, 5% by volume thioanol, 2.5% by volume ethanol
  • reaction solution B 82.5% by volume trifluoroacetic acid, 3% by volume ethyl methyl sulfide, 5% by volume pure water, 5% by volume thioanol, 2.5% by volume ethanol
  • the thoracic aorta was removed from Wistar rats and cut at a width of 2 mm to produce an aortic ring.
  • the ring was attached to a Magnus apparatus (manufactured by Labo Support, product name: Micro Tissue Gunbath MTB-1Z) and equilibrated with a certain tension.
  • the contraction response of the aortic ring was confirmed with 50 mM KC1.
  • a specimen of the aortic ring contracted with M Phenylephrine and a stable contraction was obtained: With LM acetylcholine, vascular endothelium-dependent dilation was observed, and endothelial function was 0 confirmed to be held
  • the aortic ring was pre-contracted with 1 ⁇ fue-rephrin and then prepared in a synthetic example.
  • VPP and ⁇ added by increasing the concentration by 10 times 10- 9 Micromax were observed extended reaction from the change in tension of the aorta rings.
  • VPP and IPP vasodilation was highly dependent on vascular endothelium. The result is shown in figure 2.
  • VPP or IPP has activity in the peptide state.
  • vasodilatory pharmaceutical composition and a vasodilatory health food composition containing peptides obtained by hydrolyzing various milk protein-derived proteins as active ingredients have been reported. Since amino acid sequences including VPP and IPP are known to exist in / 3-casein and ⁇ -casein, do peptides contained in the production examples described in the publication contain VPP and IPP? I confirmed.
  • skim milk powder which is a protein raw material containing / 3-casein and K-casein
  • 1 kg of skim milk powder was suspended in 2 liters of warm water, adjusted to pH 7.5, 40 g of Samoaze (manufactured by Daiwa Kasei Co., Ltd.) was added, and the mixture was reacted at 50 ° C. for 16 hours. After the reaction, the enzyme was inactivated by heating at 100 ° C. for 10 minutes to produce a hydrolyzed peptide.
  • LCZMS high-speed chromatograph mass spectrometer

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Abstract

血管内皮依存性の血管拡張作用を有する血管拡張剤、動脈硬化予防剤及び日常的に連用可能で、安全性に優れ、血管内皮依存性の血管拡張作用を有する機能性食品を提供すること。本発明の血管拡張剤及び機能性食品は、Val Pro Pro及びIle Pro Proの少なくとも１つのトリペプチド又は、Val Pro Pro及び／又はIle Pro Proを含有する蛋白質分解物を有効成分として含むことを特徴とする。

Description

明 細 書
血管拡張剤
技術分野
[0001] 本発明は、血管内皮依存性の血管拡張作用を示す血管拡張剤及びこのような作 用を示す機能性食品に関する。
背景技術
[0002] 動脈硬化性疾患の終末像である心筋梗塞や脳梗塞等の虚血性疾患は、ガンと並 んで我が国における死因の最も大きな割合を示している。動脈硬化の危険因子とし ては、高脂血症、高血圧、糖尿病、喫煙、肥満、高尿酸血症、加齢、ストレス等が挙 げられ、それらが相互に絡み合って血管障害を引き起こす。このため、個々の危険因 子の程度が軽度であっても、それらの重複により危険度が相加的、相乗的に増加し、 虚血性疾患のリスクも高まる。
一方、上述の 1つの危険因子作用を低下させることだけでは、動脈硬化の発症予 防には至らないと考えられている。例えば、非特許文献 1又は 2には、血中コレステロ ール濃度と動脈硬化発症が相関しないことが、非特許文献 3には、高血圧状態を抑 制しても動脈硬化の程度に変化が見られないことが、また、非特許文献 4には、ェナ ラプリルを有効成分とするアンジォテンシン変換酵素阻害剤を投与しても動脈硬化 抑制作用は見られないことが記載されている。更に、これらの結果として、梗塞性の 虚血性疾患、例えば、急性心不全が発症した場合、非特許文献 5によれば、血行動 態の安定ィ匕を図るために、ニトロプルシッド、ニトログリセリン等の血管拡張剤や、利 尿薬、強心薬等の薬剤が必要となる。
従って、例えば、特許文献 1及び 2において、トリペプチドの Val Pro Pro及び lie Pro Pro力 血圧降下作用を示すアンジォテンシン I変換酵素の阻害活性を有すること、 また、抗ストレス作用を有することが記載されている力 このことにより、該トリペプチド 力 抗動脈硬化作用を有するとは言えず、また、血管拡張作用があるとは言えない。
[0003] ところで、動脈硬化は、動脈壁が肥厚して弾力性がなくなる病態であり、近年、この ような症状の要因の一つとして、血管内皮の損傷や機能低下が挙げられている。 従って、血管内皮に依存する血管拡張剤には、動脈硬化抑制作用が期待できる。 特許文献 1：特開平 6— 197786号公報
特許文献 2：特開平 11― 100328号公報
非特許文献 1 :食の科学 257 (1999) p20— 25
非特許文献 2 : Atherosclerosis 151 (2000) p501— 508
非特許文献 3 : Circulation 104 (2001) p2391— 2394
非特許文献 4 international Journal of Cardiology 81 (2001) pl07— 115
非特許文献 5：別冊 '医学のあゆみ 循環器疾患- state of arts ver.2(2001) p332- 33
4
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0004] 本発明の課題は、血管内皮依存性の血管拡張作用を有する血管拡張剤を提供す ることにめる。
本発明の別の課題は、日常的に連用可能で、安全性に優れ、血管内皮依存性の 血管拡張作用を有する機能性食品を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0005] 本発明によれば、 Val Pro Pro及び lie Pro Proの少なくとも 1つのペプチドを有効成 分として含む血管拡張剤が提供される。
また本発明によれば、 Val Pro Pro及び Z又は He Pro Proを含有する蛋白質分解物 を有効成分として含む血管拡張剤が提供される。
更に本発明によれば、 Val Pro Pro及び lie Pro Proの少なくとも 1つのペプチドを有 効成分として含み、血管拡張作用を有する機能性食品が提供される。
更にまた本発明によれば、 Val Pro Pro及び Z又は He Pro Proを含有する蛋白質分 解物を有効成分として含む血管拡張作用を有する機能性食品が提供される。
また本発明によれば、血管拡張剤又は、血管拡張作用を有する機能性食品を製造 するための、 Val Pro Pro及び lie Pro Proの少なくとも 1つのペプチド、若しくは Val Pro Pro及び Z又は He Pro Proを含有する蛋白質分解物の使用が提供される。
更に本発明によれば、 Val Pro Pro及び lie Pro Proの少なくとも 1つのペプチド、若し くは Val Pro Pro及び Z又は He Pro Proを含有する蛋白質分解物を動物に有効量投 与する血管の拡張方法が提供される。
発明の効果
[0006] 本発明の血管拡張剤及び機能性食品は、獣乳カゼイン等に由来する Val Pro Pro 及び Z又は He Pro Pro,更にはこれらの少なくとも一方を含む蛋白質分解物を有効 成分として含むので、安全性に優れ、血管内皮依存性の血管拡張作用を示し、特に 、機能性食品の場合は、常用的に摂取可能である。
従って、本発明の血管拡張剤は、心筋梗塞や脳梗塞等の虚血性疾患における血 行の確保のために有用であり、また、そればかりではなぐ加齢、生活習慣病等により 収縮に偏った血管に弛緩をもたらし、動脈硬化予防や、血流障害に係る、肩こり、冷 え性、血栓症等の予防が期待できる。また、本発明の機能性食品は、血管拡張、更 には血流障害等に係る、肩こり、冷え性、血栓等の各種症状や疾病のための効能を 表示した健康食品や特定保健用食品として有用である。
図面の簡単な説明
[0007] [図 1]実施例 1及び比較例 1で行った、血管拡張試験の結果を示すグラフである。
[図 2]実施例 1で行った、血管拡張反応の内皮依存性確認試験の結果を示すグラフ である。
発明を実施するための最良の形態
[0008] 以下、本発明を更に詳細に説明する。
本発明の血管拡張剤及び機能性食品は、 Val Pro Pro及び Z又は He Pro Pro (以下 これらトリペプチドをそれぞれ VPP、 IPPと略す)又はこれらの少なくとも一方を含む蛋 白質分解物を有効成分として含む。
前記トリペプチドは、薬理学上許容される塩類、例えば塩酸塩、ナトリウム塩、リン酸 塩等の無機酸塩、及びクェン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩 等の有機酸塩等の塩を付加したものであっても良 、。
前記トリペプチドの調製法としては、例えば、 VPP及び Z又は IPPのアミノ酸配列を 有するペプチド又は蛋白質を、微生物による発酵により分解精製する方法、酵素加 水分解する方法が挙げられる他、合成法によっても得ることができる。詳細は前述の 特許文献 1及び 2を参照することができる。従って、本発明に用いる有効成分としては 、 VPP及び Z又は IPPのアミノ酸配列を有するペプチド又は蛋白質を、微生物により 発酵した、 VPP及び IPPの少なくとも 1つのペプチドを含む発酵物又はその精製物、 若しくは VPP及び Z又は IPPのアミノ酸配列を有するペプチド又は蛋白質を、酵素に より分解した、 VPP及び IPPの少なくとも 1つのペプチドを含む加水分解物又はその精 製物等を用いることもできる。
[0009] 本発明の血管拡張剤の有効投与量は、その作用を単回投与により得るためには、 ヒトの場合、 1日あたり、トリペプチド量として、通常 10 g〜10g、特に lmg〜： Lg程度 が好ましい。
血管拡張剤の投与は、その疾病の症状等により調整することができる。急性症状に 対しては、単回及び持続的な非経口投与が適当である。また、慢性症状及び予防的 な使用に対しては、 30日間以上常用的に経口摂取することが好ましい。
[0010] 本発明の血管拡張剤の投与方法は、経口投与、非経口投与等が挙げられる。非 経口投与としては、局所、経皮、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、胸腔内、脊 髄腔内等への投与が挙げられ、患部への直接投与も可能である。
[0011] 本発明の血管拡張剤の形態は、前記投与方法に応じて決定することができ、製剤 の形態とすることができる。例えば、錠剤、丸剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、マイ クロカプセル、散剤、顆粒剤、液剤、懸濁剤、乳剤等が挙げられる。
前記製剤化は、例えば、適宜必要に応じて、薬剤として許容される担体、アジュバ ント、賦形剤、補形剤、防腐剤、安定化剤、結合剤、 PH調節剤、緩衝剤、増粘剤、ゲ ル化剤、保存剤、抗酸化剤等を用い、一般に認められた製剤実施に要求される単位 用量形態で製造する。
[0012] 本発明の機能性食品は、血管拡張、更には血流障害に係る各種疾病のための効 能を表示又は宣伝しうる健康食品や特定保健用食品等とすることができる。
このような効能、特に血管拡張作用やそれに伴う疾病の改善作用を得るための摂 取量は、機能性食品が、連用が可能であり、常用的に長期間摂取しうることを鑑みる と、 1日あたり、前記トリペプチド量として、通常 10 g〜10g、特に lmg〜： Lg程度が 好ましい。また、 1日あたりの摂取回数に応じて、機能性食品における 1回あたりの摂 取量を前記トリペプチド量換算で更に低くすることも可能である。
[0013] 本発明の機能性食品の摂取期間は、特に限定されず、慢性症状の改善や予防的 な使用に関しては長期間摂取することが好ましい。上記効能を得るために、通常 30 日間以上、特に 3〜12か月程度、常用的に摂取することが好ましい。
本発明の機能性食品は、有効成分としての前記トリペプチド、若しくは該トリべプチ ドを含む食品素材等を各種飲食品に配合する方法等により製造できるので、あらゆ る飲食品の形態とすることができる。例えば、錠菓、ヨーグルト、乳飲料、乳製品、酒 類、清涼飲料水、粉末又は顆粒状食品、カプセル食品、各種栄養強化又は補助食 品などの形態にすることが可能である。また本発明の機能性食品には、通常、食品 に添加可能な各種添加剤を配合することもできる。
実施例
[0014] 以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定され ない。
合成例
IPP及び VPPを以下に示す有機化学合成法により合成した。合成は島津製作所製 のペプチド自動合成装置 (PSSM-8型)を用いた固相法によって行った。
固相担体として 2—クロロトリチル (2- Chlorotrityl)タイプのポリスチレン榭脂であって 、アミノ基をフルォレニルメチルォキシカルボ-ル基 (以下 Fmocと略す)で保護された プロリンが結合した榭脂 50mgを使用した (島津製作所社製登録商標 SynProP印 Res in)。前記アミノ酸配列に従って、ァミノ基が Fmoc基で保護された Fmoc— Ile、 Fmoc— Pro及び Fmoc— Valを 100 /z molづっ、常法に従い、ペプチド配列通り順次反応させ てペプチド結合榭脂を得た。
次にこのペプチド結合榭脂を lmlの反応液 A(10容量％酢酸、 10容量％トリフルォ 口エタノール、 80容量％ジクロロメタン)に懸濁し、室温で 30〜60分間反応させてぺ プチドを榭脂から切離した後、反応液 Aをガラスフィルターで濾過した。濾液の溶媒を 減圧除去後、直ちに lmlの反応液 B(82. 5%容量トリフルォロ酢酸、 3%容量ェチル メチルスルフイド、 5%容量純水、 5%容量チオア-ノール、 2. 5%容量エタンジチォ ール、 2%容量チオフヱノール)を加え、室温で 6時間反応させて側鎖保護基を外し た。これに無水エーテル 10mlをカ卩えてペプチドを沈殿させ、 3000回転、 5分間遠心 して分離した。その沈殿を無水エーテルにて数回洗浄した後、窒素ガスを吹き付け て乾燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド全量を、 0. 1N塩酸水溶 液 2mlに溶解した後に、 C18の逆層カラムを用いた HPLCで、以下の条件に従って 精製した。
[0015] ポンプ:形式 L6200インテリジェントポンプ（日立製作所）、検出機：形式 L4000U V検出器（日立製作所）にて 215nmの紫外部吸収を検出カラム:マイクロボンダスフ エアー 5 C18 (ウォーターズ社製）、溶出液: A液； 0. 1重量％TFA水溶液、 B液； 0 . 1重量％TFA入りァセトニトリル（BZA+B) X 100 (%) : 0→40% (60分）、流速： lmlZ分。最大吸収を示した溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することにより目的 とする合成ペプチド IPP及び VPPをそれぞれ 5. 7mg、 6. 5mg得た。精製ペプチドを 全自動タンパク質一次構造分析装置 (形式 PPSQ— 10、島津製作所製)により、ぺ プチドの N末端力も分析し、さらにアミノ酸分析装置 (形式 800シリーズ、 日本分光社 製）にて分析した結果、設計通りであることが確認できた。
[0016] 実施例 1
(血管拡張試験）
ウィスター (Wistar)系ラットより胸部大動脈を摘出し、 2mm幅で切断し、大動脈リング を作製した。該リングをマグヌス装置 (ラボサポート社製、製品名マイクロティッシュォ 一ガンバス MTB-1Z)に取付け、一定の張力をかけ平衡化させた。次いで、 50mM KC 1により大動脈リングの収縮反応を確認した。続いて、： Mフエ-レフリン (Phenylephri ne)にて大動脈リングを収縮させ、安定した収縮が得られた標本を、： L Mァセチルコ リンで、血管内皮依存性の拡張反応を観察し、内皮機能が保持されていることを確 した 0
次に、 1 μ Μフエ-レフリンにて大動脈リングを前収縮させた後、合成例で調製した
VPP及び ΙΡΡを 10—9Μから 10倍ずつ濃度をあげて添加し、拡張反応を大動脈リングの 張力の変化から観察した。また、拡張反応の用量依存性についても検討した。
その結果、 VPP及び ΙΡΡによる血管拡張反応は、 ImMから観察されはじめ、 10mM では明確な一過性の血管拡張反応が確認された。結果を図 1に示す。 [0017] (VPP, IPPの血管拡張反応の内皮依存性確認試験）
VPP及び IPPの血管拡張性にっ 、て血管内皮の関与を確認するために、血管内皮 を常法により、物理的に除去した血管を比較対照として、 VPPについて上記と同様な 血管拡張試験を行った。その結果、血管拡張反応が内皮の除去により減弱したため
、 VPP及び IPPの血管拡張は、血管内皮依存性が高いことがわ力つた。結果を図 2に 示す。
[0018] 比較例 1
トリペプチド VPP及び IPPの代わりに、アミノ酸のパリン (Val)又はプロリン (Pro)を、同 濃度で用い、実施例 1と同様に血管拡張試験を行った。
その結果、 10mMの拡張反応は、 Val及び Proの何れにおいても観察されなかった 。結果を図 1に示す。
以上のことより、 VPP又は IPPの血管拡張作用は、ペプチドの状態で活性を有するこ とがわかる。
[0019] 参考例
特開 2004— 244359号公報によれば、各種ミルクタンパク質由来のタンパク質を 加水分解して得られるペプチドを有効成分とする血管拡張性医薬組成物及び血管 拡張性健康食品組成物が報告されている。 VPP、 IPPを含むアミノ酸配列は、 /3 -カゼ イン、 κ -カゼインに存在することが知られているので、該公報に記載された製造例に て得られるペプチドに VPP、 IPPが含まれるかどうかを確認した。
製造例のうち、 /3 -カゼイン、 K -カゼインを含むタンパク質原料である市販の脱脂 粉乳について試験した。即ち、脱脂粉乳 lkgを温水 2リットルに懸濁させ、 pH7. 5に 調整後、サモアーゼ (大和化成社製) 40gを加え、 50°Cで 16時間反応させた。反応 後、 100°Cで 10分間加熱して酵素を失活させ、加水分解ペプチドを製造した。高速 クロマトグラフ質量分析計 (LCZMS)を用いて分析した結果、この中に VPP、 IPPは検 出されなかった。
以上の結果より、特開 2004— 244359号公報において報告された血管拡張は、 V PP、 IPP以外の成分によるものであることが明ら力となった。

Claims

請求の範囲
Val Pro Pro及び lie Pro Proの少なくとも 1つのペプチドを有効成分として含む血管 拡張剤。
Val Pro Pro及び Z又は He Pro Proを含有する蛋白質分解物を有効成分として含む 血管拡張剤。
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