WO2007074176A1 - Nuevos derivados pirrólicos con actividad inhibidora de desacetilasas de histonas - Google Patents

Nuevos derivados pirrólicos con actividad inhibidora de desacetilasas de histonas Download PDF

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WO2007074176A1
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carbons
compounds
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Fernando Pedro Cossio Mora
Manel Esteller Badosa
Aizpea Zubia Olascoaga
Dorleta Otaegui Ansa
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Universidad Del Pais Vasco - Euskal Herriko Unibertsitatea (Upv-Ehu)
Centro Nacional De Investigaciones Oncologicas (Cnio)
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
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    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
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Definitions

  • the invention relates to new compounds derived from pyrrols, with methods for their preparation and with the use thereof as drugs for the treatment of cancer in pharmaceutical compositions thanks to their inhibitory activity on certain histone deacetylases .
  • HDACs histone deacetylase inhibitors
  • HDAC inhibitors can be increased by combining synergistically with other treatments by improving the transcriptional profile of genes that hinder the development of resistance (Keen et al. Cancer Res. Treat. 2003, 81, 177. Egger et al. Nature 2004, 429, 457).
  • HDAC inhibitors Several families of HDAC inhibitors are known, whose general characteristics can be found in various reviews (Villar-Garea and Esteller Int. J. Cancer 2004, 112, 171 and Curr. Drug Metab. 2003, 4, 11. Grozinger et al. Chem. Biol. 2002, 9, 3. McLaughlin et al., Drug Discov. Today 2003, 8, 793. Monneret Eur. J. Med. Chem. 2005, 40, 1, Biel et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 3186).
  • the structures of the most active inhibitors are characterized by a cyclic or polycyclic part of a predominantly hydrophobic nature linked by a spacer carbon chain to a unit capable of coordinating the metal ion of the active center of the HDAC.
  • HDAC inhibitors 3- (4-aroyl-1-methyl-1H-2-pyrrolyl) - ⁇ / -hydroxy-2-propenamides
  • the spacer chain is unsaturated and positions 3 and 5 of the pyrrole ring are not substituted, resulting in a linear molecular geometry.
  • the therapeutic utility thereof is not without problems, among which the selectivity of inhibition of different HDACs, some of which are not useful therapeutic targets in oncology, toxicity, and The chemical instability.
  • the present invention describes a general method of synthesis of new HDAC inhibitors that incorporates the possibility of generating a wide variety of functional groups, resulting in molecules chemically stable and with various polycyclic systems, spacer sizes and coordinating units to the metal atom of the enzymes to be inhibited.
  • the problem thus posed by the present invention is to provide compounds and compositions with a high selectivity in the inhibition of different HDACs related to the appearance and development of neoplastic processes, with high chemical stability and low toxicity.
  • the proposed solution comprises the use of pyrrolic derivatives of general formula I.
  • These compounds have aryl or heteroaryl substituents in positions 3 and 5, as well as electron-attractant groups such as the nitro group in position 4 and heterogeneous groups in position 2 comprising spacers of different nature and the use of groups ⁇ / -hydroxyurea, ⁇ / -alkylamino (aryl) urea, / V-hydroxythiourea and N-alkylamino (aryl) thiourea as coordinators to the metal atom of the HDACs.
  • These pyrrole derivatives demonstrate a great capacity to inhibit cell proliferation and tumor growth.
  • the present invention solves the need that existed to have histone deacetylase inhibitors that had advantages such as good pharmacological properties, chemical stability in solid phase and in solution, the ease and efficiency of chemical synthesis thereof and the accessibility and variability of the starting chemical compounds.
  • Figure 1 shows the effect determined in vito of some of the compounds object of the present invention on the histone deacetylase activity of the HCT116 cell line (human colon carcinoma), compared with the compounds TSA (acronym for tr ⁇ costatin A) and SAHA (acronym for suberoylanilide hydroxamic acid) used as a positive control.
  • TSA acronym for tr ⁇ costatin A
  • SAHA acronym for suberoylanilide hydroxamic acid
  • Figure 2 shows the in vitro effect of representative examples of the compounds object of the present invention on the histone deacetylase activity of the MOLT4 cell line (human fibroblastic leukemia), compared with the TSA and SAHA compounds used as positive control.
  • MOLT4 cell line human fibroblastic leukemia
  • Figure 3 shows the quantification of the level of acetylation by HPCE (high efficiency capillary electrophoresis) of histones H3 and H4 of the line Jurkat cell of human promyelocytic leukemia treated with some of the compounds object of the invention in a concentration of 10 ⁇ M.
  • HPCE high efficiency capillary electrophoresis
  • Figure 4 shows the measurement of the percentage of apoptotic and necrotic cells in the presence of various concentrations of SAHA and two of the inhibitors object of the present invention.
  • the data obtained in the control sample and in a sample treated with DMSO are also included.
  • the exposed data correspond to the human colon carcinoma model HCT116.
  • Figure 5 shows the measurement of the percentage of apoptotic and necrotic cells in the presence of various concentrations of SAHA and two of the inhibitors object of the present invention.
  • the data obtained in the control sample and in a sample treated with DMSO are also included.
  • the data presented correspond to the human acute myeloid leukemia model HL60.
  • Figure 6 shows the inhibition of tumor growth of human colon carcinoma HCT116 in nude nude mice, caused by intraperitoneal administration of some of the compounds object of the invention.
  • the xenoimplants were performed intra-splenicly and the inhibitors were injected intraperoneally, according to the procedure detailed in Example No. 18.
  • Figure 7 shows the antitumor activity in vivo in nude nude mice of some of the compounds object of the invention in the MOLT4 human fibroblastic leukemia model.
  • the xenoimplants were performed intra-spleen according to the procedure detailed in example No. 17.
  • the present invention relates to the pyrrole derivatives of general formula I:
  • Another object of the present invention are the processes for preparing said compounds of general formula I.
  • Another additional object of the invention is the use of these derivatives for the treatment of various forms of cancer by restricting tumor growth through the inhibition of the action of certain deacetylases of (lathones.
  • this invention has as its object the elaboration of a pharmaceutical composition comprising some pyrrole derivative of general formula I and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • the present invention provides pyrrole-derived compounds that have the following formula I:
  • R 1 and R 3 independently represent each other a phenyl radical; mono or polysubstituted phenyl in the different ring positions; or a heteroaryl group
  • R 2 represents a hydrogen atom or an electron-attractant group such as the nitro group; or an amino or amido group;
  • R 4 represents a hydrogen atom or a C1-C6 linear, branched or cyclic alkyl group
  • (n) represents a number of methylene groups between 1 and 8, both inclusive;
  • (X) indistinctly represents a secondary amino group, an oxygen atom or a sulfur atom;
  • (Y) represents a group selected from methylene, substituted methylene and secondary amino;
  • (Z) indistinctly represents an oxygen or sulfur atom; and (W) represents a group selected from hydroxyl, hydroxyamino, hydrazino and alkyl, aryl or heteroaryl hydrazino.
  • said compounds of general formula I are: Hexanoic 6- (3,5-diphenyl-1W-pyrrol-2-carboxamide) acid, with the following structural formula:
  • Another aspect of the invention refers to different processes for obtaining the compounds of general formula I.
  • the following methods A to E describe the procedures for obtaining compounds of general formula (Ia), (Ib), (Ic) and (Id) as We'll see later.
  • Said compounds (Ia) to (Id) are compounds whose general formula falls within the general formula I.
  • Method A represents a process for the preparation of compounds of general formula (Ia):
  • the reaction mixture formed by the four compounds of phases a) to d) can be carried out by adding one of the components to the previous mixture of the other three in the organic solvent and at the temperature of -85 0 C at +25 0 C, preferably at temperatures close to 0 0 C. Then a time is left to complete the reaction, being able to reach room temperature. Once the coupling reaction is completed, the ester obtained after following the general procedure is reacted with the mixture of lithium or sodium hydroxide, dimethoxyethane and water thus yielding, after the corresponding treatment, the compounds of general formula (Ia).
  • Method B represents a process for the preparation of compounds of general formula (Ib):
  • reaction mixture formed by the four compounds of phases a) to d) can be carried out by adding one of the components to the previous mixture of the other three in the organic solvent and at the temperature of -85 0 C at +25 0 C, preferably at temperatures close to 0 0 C.
  • R 5 is tert-butoxycarbamoyl (NHBoc) or benzyloxycarbamoyl
  • the reaction mixture formed by the four compounds of phases a) to d) can be carried out by adding one of the components to the previous mixture of the other three in the organic solvent and at the temperature of -85 0 C at +25 0 C, preferably at temperatures close to 0 0 C. Then a time is left to complete the reaction, being able to reach room temperature.
  • R 5 in compound III that is, depending on whether R 5 represents tert-butoxycarbamoyl (NHBoc) or benzyloxycarbamoyl (NHCBz)
  • subsequent treatments will be different.
  • R 5 is NHBoc
  • the resulting product must be subjected to an acid treatment which preferably consists of the reaction at room temperature with trifluoroacetic acid in a halogenated solvent.
  • R 5 represents NHCBz
  • the resulting product is subjected to hydrogenolysis, preferably by reaction with hydrogen gas or ammonium formate in a short chain alcohol as solvent and in the presence of a heterogeneous palladium catalyst.
  • phosgene or some of its derivatives such as diphosgene or triphosgene or also thiophosgene.
  • the final compound (Ic) When the reaction is with phosgene, diphosgene or triphosgene, the final compound (Ic) will have the meaning of Z an oxygen atom. If on the contrary the treatment is with thiophosgene Z it will be a sulfur atom.
  • Method D represents a process for the preparation of compounds of general formula (Id):
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , X, Z and n have the significance given above and R 6 is a 5, 6-membered H, C1-C6 alkyl, aryl or heteroaryl with 1 or more heteroatoms selected from O, N or S, which comprises reacting a mixture consisting of: a) A 1 H-pyrrole-2-carboxylic acid of formula II,
  • R 5 is tert-butoxycarbamoyl (NHBoc) or bezyloxycarbamoyl (NHCBz), c) An activation reagent of the carboxyl group; and d) A tertiary amine, selected from cyclic or acyclic aliphatics with C3-C10 carbons and alkanoaromatics with C9-C15 carbons, deprotect the product obtained by acid or hydrogenolysis treatment and react with phosgene or its analogues such as diphosgene, triphosgene or thiophosgene, obtaining a socianato or thioisocyanate which is treated with hydrazine or alkyl, aryl or heteroaryl hydrazines.
  • phosgene or its analogues such as diphosgene, triphosgene or thiophosgene
  • the reaction mixture formed by the four compounds of phases a) to d) can be carried out by adding one of the components to the previous mixture of the other three in the organic solvent and at the temperature of -85 0 C at +25 0 C, preferably at temperatures close to 0 0 C. Then a time is left to complete the reaction, being able to reach room temperature.
  • R 5 in compound III that is, depending on whether R 5 represents tert-butoxycarbamoyl (NHBoc) or benzyloxycarbamoyl (NHCBz)
  • subsequent treatments will be different.
  • R 5 is NHBoc
  • the resulting product must be subjected to an acid treatment which preferably consists of the reaction at room temperature with trifluoroacetic acid in a halogenated solvent.
  • R 5 represents NHCBz
  • the resulting product is subjected to hydrogenolysis preferably by reaction with hydrogen gas or ammonium formate in a short chain alcohol as solvent and in the presence of a heterogeneous palladium catalyst.
  • phosgene or some of its derivatives such as diphosgene or triphosgene or also thiophosgene.
  • the final compound (Ic) When the reaction is with phosgene, diphosgene or triphosgene, the final compound (Ic) will have the meaning of Z an oxygen atom. If on the contrary the treatment is with thiophosgene Z it will be a sulfur atom.
  • Method E represents an additional procedure for the preparation of compounds of general formula (Id):
  • R 1 , R 2 , R 3, R 4 , X, Z and n have the significance given above and R 6 is a 5, 6-membered alkyl, aryl or heteroaryl H, C1-C6 with 1 or more heteroatoms selected from O, N or S, which comprises reacting a mixture consisting of: a) A 1 H-pyrrol-2-carboxylic acid of formula II,
  • the activation reagent of the carboxyl group is preferably phenyl dichlorophosphate, diethyl phosphorothiamidate (DEPC) or the system formed by 1-hydroxybenzotriazole and N- (3- dimethylaminopropyl) -N'-ethylcarbodiimide .
  • a tertiary amine is a common reagent to methods A and B, selected from cyclic or acyclic aliphatic with C3-C10 carbons and alkanoaromatic with C9-C15 carbons.
  • this tertiary amine is selected from N-methyl pyrrolidine or N-methylmorpholine. It is also preferable to carry out the reaction between elements a) to d) of each of the methods A to E by microwave irradiation.
  • R 3 has the significance given above; b) A configuration mine (E) or (Z) with the following formula V,
  • R 1 has the significance given above, and R 6 represents a C1-C6 alkyl or aryl group; c) A metal salt, preferably selected from lithium perchlorate, silver perchlorate or silver acetate, and d) A tertiary organic base, selected from aliphatic with C3-C10 carbons or alkanoaromatic with C9-C15 carbons.
  • the reaction mixture formed by the four components indicated above can be performed by microwave irradiation or by adding one of the components over the other three, in an organic solvent and the temperature of -25 0 C to +25 0 C, preferably at temperatures close to +25 0 C.
  • a mixture of 2-alkoxycarbonyl pyrrolidines corresponding to the substituents selected for each particular reaction is obtained.
  • Said mixture is dissolved in a cyclic ether such as high-boiling tetrahydrofuran or acyclic ether such as bis (2-methoxyethyl) ether, also known as "diglyme” and an oxidizing agent such as manganese dioxide, hydrogen peroxide is added. or 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone.
  • Acids of general formula Il are obtained by hydrolysis alkaline of the above esters, preferably by treating them with lithium or sodium hydroxide in a mixture of water and dimethoxyethane.
  • a further aspect of this invention relates to the use of the compounds of general formula I for the treatment of cancer.
  • the mechanism of action of said compounds is explained by their antagonistic properties with histone deacetylases involved in blocking the synthesis of proteins responsible for the regulation of processes such as apoptosis or cell growth and proliferation. Said properties prevent or block the binding of deacetylases and enzyme complexes related to their natural substrates, such as N-acetylated Usine residues in the ⁇ position of the terminal lysine residues of histones, so that they remain in the mono- or polyacetylated state.
  • a final aspect of the invention refers to a composition comprising at least one of the compounds of general formula I and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the compounds of formula I of the present invention can be administered both as a pure substance and in the form of pharmaceutical formulations, although it is preferable to administer the compound in combination.
  • the combination of the medicament is preferably in the form of a formulation Ia which: i) Contains the compound of general formula I alone;
  • excipients and / or transport substances Contains one or more excipients and / or transport substances; and iii) May contain some additional therapeutically active substance.
  • the excipients, transport substances and auxiliary substances must be pharmaceutically and pharmacologically tolerable, so that they can be combined with other components of the formulation or preparation and do not exert adverse effects on the treated organism.
  • the formulations include those that are suitable for oral or parenteral administration (including subcutaneous, intradermal, intramuscular and intravenous), although the best route of administration will depend on the patient's condition.
  • the formulations can be in the form of single doses and are prepared according to methods known in the field of pharmacology.
  • the amounts of active substances to be administered may vary depending on the particularities of The therapy although generally vary between 1 and 500 mg per day in one or several doses.
  • DMSO-de 162.5, 157.9, 134.4, 131.3, 131.2, 130.3, 128.6, 127.9, 127.0, 125.1, 119.8, 113.0, 112.9, 109.3, 55.0, 54.9;
  • Anal. Cale, for C 18 H 15 NO 3 C, 73.71; H, 5.15; N, 4.78. Found: C, 73.56; H, 5.08; N, 4.81%.
  • Triethylamine (1.15 ml, 8.25 mol), 1- hydroxybenzotriazole (0.22 g, 1.65 mmol), ⁇ / - (3-dimethylaminopropyl) hydrochloride - ⁇ / '- Ethylcarbodümide (0.32 g, 1.65 mmol) and ⁇ / -methylmorphol (0.165 ml, 1.5 mmol) were added successively, and the mixture was stirred at 0 ° C for 2 h, and for 96 more hours at room temperature.
  • the methyl ester obtained was dissolved in ethylene glycol dimethyl ether (6 ml) and the solution was cooled to 0 0 C. Then, an aqueous solution of 1N LiOH (3.6 ml) was added dropwise and the resulting mixture was stirred at 0 0 C. The progress of the reaction was monitored by thin layer chromatography. Once the reaction was completed, 10% citric acid (3.6 ml, aqueous solution) was added (pH ⁇ 6). The solution was extracted with methylene chloride (3 x 5 mL), and the combined organic fractions were dried over MgSO 4 and evaporated under reduced pressure. The reaction crude was triturated in diethyl ether to give 0.42 g of a white solid. Rdto.
  • Methyl 6- (3-phenyl-5- (4-methoxyphenyl) -1 H- pyrrol-2-carboxamido) hexanoate (0.53 g, 1.25 mmol), prepared from 3-phenyl-5- (4-methoxyphenyl) ) -1H-pyrrol-2-carboxylic acid and 6-aminohexanoic acid methyl ester hydrochloride according to the procedure described in Example 4, and sodium methoxide in methanol (5.0 mmol, 1.4 ml of a previously prepared solution) were added successively. The mixture was stirred for 26h, observing the formation of a dense precipitate. After this time, water (3 ml) was added to the reaction medium.
  • This material was prepared by a procedure substantially similar to that of Example 10, using benzyloxyamlna instead of methylhydrazine. After the previously specified addition-deprotection sequence, the title compound was obtained as the trifluoroacetate of the corresponding ammonium salt. Rdto.
  • This material was prepared by a procedure substantially similar to that of Example 11, from 3,5-bis (3,5-dimethoxyphenyl) -1H-carboxylic acid and trifluoroacetate of the ammonium salt of 1- (4- aminomethyl) -3- (benzyloxy) urea. Rdto.
  • the samples for the scintillation reader were prepared by mixing 500 ⁇ l of the upper phase and 5 ml of scintillation liquid.
  • the cells of the Jurkat human lines were treated for 24 hours with different concentrations of the HDAC inhibitor compounds object of the present invention.
  • the nuclei were isolated by adding RSB buffer (10 mM Tris pH 7.5, 10 mM sodium chloride and 3 mM magnesium chloride) with 1% Nonidet-P40 and protease inhibitor.
  • RSB buffer 10 mM Tris pH 7.5, 10 mM sodium chloride and 3 mM magnesium chloride
  • To extract the histones 0.25M HCI was added to the nuclei, and the mixture was stirred at 4 ° C for 16 h. Then, the histones were precipitated by adding 8 volumes of acetone.
  • the histone mixture obtained was separated by reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC), using a C18 column with a gradient of acetonitrile (20-60%) in 0.3% trifluoroacetic acid.
  • the separation of the non-acetylated, mono-, di-, tri-, and tetra-acetylated species from each fraction of histones H3 and H4 was carried out by high resolution capillary electrophoresis (HPCE), using a silica capillary ( 60.2 cm x 75 ⁇ m, effective length of 50 cm).
  • HPCE high resolution capillary electrophoresis
  • the elution conditions used were: 25 ° C, 12 kV voltage, 214 nm absorbance detector, and 110 mM phosphate elution buffer (pH 2.0) and cellulose-HPM (0.03% w / v).
  • the system was washed for 3 minutes with 0.1 M NaOH, followed by another 2 minute wash with 0.5 M H 2 SO 4 , and equilibrated with the elution buffer for 3 minutes. Buffers and wash solutions were prepared with filtered MiIIi-Q water through a 0.45 ⁇ m pore filter. The samples were injected under pressure of 0.3 psi for 3 seconds. All samples were analyzed in duplicate.
  • the quantification of the amount of apoptotic cells was performed by studying the change in permeability of the cytoplasmic membrane by flow cytometric analysis, using the YoPro ⁇ commercial kit as a staining agent. The procedure followed is explained below.
  • the cells of the human lines HCT116 and HL60 (10 6 cells per treatment) were treated for 24 hours with different concentrations of the HDAC inhibitor compounds object of the invention. After this period, the cells were washed twice with cold 1X PBS, resuspended in 1 ml of 1X PBS and 1 ⁇ l of YoPro® and 1 ⁇ l of propidium iodide were added. The mixture was incubated protected from light for 30 minutes on ice. The amount of apoptotic cells was measured by flow cytometry.
  • Figure 4 shows the data related to the human colon carcinoma model
  • FIG. 1 shows the data related to the human acute myeloid leukemia model HL60.
  • Example 18 Measurement of biological activity in vivo.
  • mice in the control group were administered 200 ⁇ l of PBS to mimic the stress of the inoculation.
  • volume d 3 x ⁇ / 6
  • mice were sacrificed and the tumors were removed and weighed.
  • Figure 7 shows the data related to the human colon carcinoma model HCT116.
  • Figure 8 shows the data related to the MOLT4 human fibroblastic leukemia model.

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Abstract

La invención describe nuevos compuestos derivados de pirroles de formula (I), procedimientos para su obtención y su aplicación como fármacos para el tratamiento del cáncer en composiciones farmacéuticas gracias a la actividad inhibitoria de los mismos sobre ciertas desacetilasas de histonas.

Description

NUEVOS DERIVADOS PIRROLICOS CON ACTIVIDAD INHIBIDORA DE DESACETILASAS DE HISTONAS
CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona con nuevos compuestos derivados de pirróles, con procedimientos para su preparación y con el uso de los mismos como fármacos para el tratamiento del cáncer en composiciones farmacéuticas gracias a Ia actividad inhibitoria de los mismos sobre ciertas desacetilasas de histonas.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La síntesis química de anillos de pirrol tri y tetrasustituidos puede llevarse a cabo de diversos modos utilizando metodologías de síntesis lineal o convergente (Sundberg, en Comprehensive Heterocyclic Chemistry; Katrizki, A. y Rees, C. W. Eds.; Pergamon: Oxford, 1984; VoI. 4, p. 313). Una vía preparativa suficientemente general consiste en Ia aromatización de pirrolidinas sustituidas (Fejes y colab.
Tetrahedron 2000, 56, 8545. Gupta y colab. Synth. Commun. 1998, 28, 3151). Estos últimos heterociclos pueden a su vez ser preparados en forma convergente mediante Ia cicloadición entre alquenos e iluros de azometino (Ayerbe y colab. J. Org. Chem. 1998, 63, 1795. Vivanco y colab. J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 6078). También son conocidas las reacciones de acoplamiento de derivados de ácidos carboxílicos con hidroxilamina para dar lugar a Ia formación de ácidos hidroxámicos (Reddy y colab. Tetrahedron Lett. 2000, 41, 6285) y las reacciones entre aminas sustituidas y derivados de fosgeno y tiofosgeno para dar lugar, a través de Ia formación de isocianatos y tioisocianatos intermedios, a las N-hidroxiureas, N- hidroxitioureas, N-(alquil)aminoureas y N-(alquil)aminotioureas correspondientes
(Jain y colab. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13, 4223).
Por otro lado, es sabido que los inhibidores de desacetilasas de histonas (HDACs) constituyen una prometedora vía para el tratamiento del cáncer, mediante el bloqueo de ciertos mecanismos del crecimiento tumoral (McLaughin y colab. Biochem. Pharm. 2004, 68, 1139. Krámer y colab. Trends Endocrín. Met 2001 , 12,
294. Archer y colab. Curr. Opin. Genet. Dev. 1999, 9, 171). Aunque los mecanismos detallados de Ia acción terapéutica de los citados inhibidores no son bien conocidos, existe un consenso general en que Ia inhibición de los centros activos de Ia HDACs facilita el acceso de ciertos genes a factores transcripcionales mediante Ia acetilación de histonas localizadas en ciertas regiones del ADN que codifican proteínas de control del ciclo celular tales como Ia quinasa dependiente de ciclina p21 (Archer y colab. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1998, 95, 6791). Otra ventaja de esta diana terapéutica es que se estima que tan sólo alrededor del 2 % de Ia transcripción de ADN a ARNm está modulada por inhibidores de HDACs
(McLaughin y colab. Biochem. Pharm. 2004, 68, 1139), Io que debe repercutir en Ia baja toxicidad de estos inhibidores, que ha sido observada en ensayos clínicos (Van Lint y colab. Gen. Express 1996, 5, 245. Glaser y colab. Mol. Cáncer Ther. 2003, 2, 151). Asimismo, se estima que Ia utilidad clínica de los inhibidores de HDACs puede aumentar al combinarse de forma sinérgica con otros tratamientos al mejorar el perfil transcripcional de genes que dificultan el desarrollo de resistencias (Keen y colab. Cáncer Res. Treat. 2003, 81, 177. Egger y colab. Nature 2004, 429, 457).
Se conocen diversas familias de inhibidores de HDACs, cuyas características generales pueden encontrarse en diversas revisiones (Villar-Garea y Esteller Int. J. Cáncer 2004, 112, 171 y Curr. Drug Metab. 2003, 4, 11. Grozinger y colab. Chem. Biol. 2002, 9, 3. McLaughlin y colab, Drug Discov. Today 2003, 8, 793. Monneret Eur. J. Med. Chem. 2005, 40, 1, Biel y colab. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 3186). En líneas generales, las estructuras de los inhibidores más activos se caracterizan por constar de una parte cíclica o policíclica de naturaleza predominantemente hidrofóbica unida mediante una cadena carbonada espadadora a una unidad capaz de coordinarse al ion metálico del centro activo de Ia HDAC. En particular, se ha descrito Ia síntesis de 3-(4-aroil-1-metil-1H-2-pirrolil)- Λ/-hidroxi-2-propenamidas como inhibidores de HDAC (cf. Mai y colab. J. Med. Chem. 2004, 47, 1098). En este caso, Ia cadena espaciadora es insaturada y las posiciones 3 y 5 del anillo pirrólico no están sustituidas, resultando en una geometría molecular de carácter lineal.
Pese a Ia cantidad de inhibidores obtenidos sintéticamente, Ia utilidad terapéutica de los mismos no está exenta de problemas, entre los que cabe destacar Ia selectividad de inhibición de diferentes HDACs, algunas de las cuales no constituyen dianas terapéuticas útiles en oncología, Ia toxicidad, y Ia inestabilidad química. En este contexto, Ia presente invención describe un método general de síntesis de nuevos inhibidores de HDACs que incorpora Ia posibilidad de generar una amplia variedad de grupos funcionales, que resulta en moléculas químicamente estables y con diversos sistemas policíclicos, tamaños de espaciadores y unidades coordinantes al átomo metálico de los enzimas a inhibir.
El problema que plantea por tanto Ia presente invención es proporcionar compuestos y composiciones con una alta selectividad en Ia inhibición de diferentes HDACs relacionadas con Ia aparición y desarrollo de procesos neoplásicos, con alta estabilidad química y baja toxicidad. La solución propuesta comprende el uso de derivados pirrólicos de formula general I. Estos compuestos poseen sustituyentes de tipo arilo o heteroarilo en las posiciones 3 y 5, así como grupos electrón- atrayentes como el grupo nitro en Ia posición 4 y grupos heterogéneos en Ia posición 2 que comprenden espaciadores de diferente naturaleza y Ia utilización de grupos Λ/-hidroxiurea, Λ/-alquilamino(arilo)urea, /V-hidroxitiourea y N- alquilamino(arilo)tiourea como coordinantes al átomo metálico de las HDACs. Estos derivados pirrólicos demuestran una gran capacidad para inhibir Ia proliferación celular y el crecimiento tumoral. En definitiva, Ia presente invención viene a solucionar Ia necesidad que existía de disponer de inhibidores de desacetilasas de histonas que presentaran ventajas como pueden ser las buenas propiedades farmacológicas, Ia estabilidad química en fase sólida y en disolución, Ia facilidad y eficiencia de Ia síntesis química de los mismos y Ia accesibilidad y variabilidad de los compuestos químicos de partida.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 muestra el efecto determinado in vito de algunos de los compuestos objeto de Ia presente invención sobre Ia actividad desacetilasa de histonas de Ia línea celular HCT116 (carcinoma de colon humano), comparado con los compuestos TSA (acrónimo de trícostatin A) y SAHA (acrónimo de suberoylanilide hydroxamic acid) utilizados como control positivo.
La Figura 2 muestra el efecto in vitro de ejemplos representativos de los compuestos objeto de Ia presente invención sobre Ia actividad desacetilasa de histonas de Ia línea celular MOLT4 (leucemia fibroblástica humana), comparado con los compuestos TSA y SAHA utilizados como control positivo.
La Figura 3 muestra Ia cuantificación del nivel de acetilación mediante HPCE (electroforesis capilar de alta eficacia) de las histonas H3 y H4 de Ia línea celular Jurkat de leucemia promielocítica humana tratadas con algunos de los compuestos objeto de Ia invención en una concentración 10μM.
La Figura 4 muestra Ia medida del porcentaje de células apoptóticas y necróticas en presencia de diversas concentraciones de SAHA y de dos de los inhibidores objeto de Ia presente invención. Se incluyen también los datos obtenidos en Ia muestra de control y en una muestra tratada con DMSO. Los datos expuestos corresponden al modelo de carcinoma de colon humano HCT116.
La Figura 5 muestra Ia medida del porcentaje de células apoptóticas y necróticas en presencia de diversas concentraciones de SAHA y de dos de los inhibidores objeto de Ia presente invención. Se incluyen también los datos obtenidos en Ia muestra de control y en una muestra tratada con DMSO. Los datos expuestos corresponden al modelo de leucemia mieloide aguda humana HL60.
La Figura 6 muestra Ia inhibición de crecimiento tumoral de carcinoma de colon humano HCT116 en ratones desnudos atímicos, provocada por Ia administración intraperitoneal de algunos de los compuestos objeto de Ia invención.
Los xenoimplantes fueron efectuados por vía intraesplénica y los inhibidores fueron inyectados por vía ¡ntraperoneal, según el procedimiento detallado en el ejemplo n° 18.
La Figura 7 muestra Ia actividad antitumoral ¡n vivo en ratones desnudos atímicos de algunos de los compuestos objeto de Ia invención en el modelo de leucemia fibroblástica humana MOLT4. Los xenoimplantes fueron efectuados por vía intraesplénica según el procedimiento detallado en el ejemplo n° 17.
OBJETO DE LA INVENCIÓN La presente invención tiene por objeto los derivados de pirrol de fórmula general I:
Figure imgf000005_0001
(O
Asimismo, otro objeto de Ia presente invención son los procedimientos de preparación de dichos compuestos de fórmula general I. Otro objeto adicional de Ia invención es el uso de estos derivados para el tratamiento de diversas formas de cáncer mediante Ia restricción del crecimiento tumoral a través de Ia inhibición de Ia acción de ciertas desacetilasas de (listonas.
Por último, esta invención tiene por objeto Ia elaboración de una composición farmacéutica que comprenda algún derivado de pirrol de fórmula general I y al menos algún excipiente farmacéuticamente aceptable.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
En primer lugar, Ia presente invención proporciona unos compuestos derivados de pirrol que presentan Ia siguiente fórmula I:
Figure imgf000006_0001
(O donde:
R1 y R3 representan independientemente entre si un radical fenilo; fenilo mono o polisustituido en las diferentes posiciones del anillo; o un grupo heteroarilo
C5-C10 que contiene al menos un heteroátomo de O, N o S;
R2 representa un átomo de hidrógeno o un grupo electronatrayente como el grupo nitro; o un grupo amino o amido;
R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo C1-C6 alquilo lineal, ramificado o cíclico;
(n) representa un número de grupos metileno comprendido entre 1 y 8, ambos inclusive;
(X) representa indistintamente un grupo amino secundario, un átomo de oxígeno o un átomo de azufre; (Y) representa un grupo seleccionado entre metileno, metileno sustituido y amino secundario;
(Z) representa indistintamente un átomo de oxígeno o de azufre; y (W) representa un grupo seleccionado entre el hidroxilo, el hidroxiamino, el hidrazino y el alquil, aril o heteroaril-hidrazino.
En una realización preferida dichos compuestos de fórmula general I son: Ácido 6-(3,5-difenil-1W-p¡rrol-2-carboxam¡do)hexanoico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000007_0001
Ácido 6-(4-nitro-3,5-difenil-1H-p¡rrol-2-carboxamido)hexanoico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000007_0002
Λ/-(5-(Hidroxicarbamoíl)pentil)-3-fenil-5-(4-metoxicarbonil)-1H-p¡rrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000007_0003
Λ/-(5-(Hidroxicarbamoíl)pentil)-5-fenil-3-(4-metoxicarbonil)-1A/-pirrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000007_0004
Λ/-(5-(Hidroxicarbamoil)pentil)-3-fenil-5-(4-metoxicarbonil)-4-nitro-1H-pirrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000008_0001
1-(4-(3,5-bis(3,5-D¡metoxifenil)-1H-p¡rrol-2-carboxamido)butil)-3-hydrox¡urea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000008_0002
1-(4-(5-(4-Metoxifenil)-4-nitro-3-(tiofen-2-¡l)-1H-pirrol-2-carboxa-mido)butil)-3- (2-metilamino)urea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000008_0003
Otro aspecto de Ia invención hace referencia a diferentes procedimientos para obtener los compuestos de formula general I. Los siguientes métodos A a E describen los procedimientos para obtener compuestos de formula general (Ia), (Ib), (Ic) y (Id) como veremos más adelante. Dichos compuestos (Ia) a (Id) son compuestos cuya formula general cae dentro de Ia formula general I. Método A
El método A representa un procedimiento para Ia preparación de compuestos de formula general (Ia):
Figure imgf000008_0004
(Ia) donde R1, R2, R3, R4, X y n tienen Ia significación dada anteriormente, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: a) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000009_0001
(II) b) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5
(III) donde R5 es un alcoxicarbonilo, c) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y d) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con
C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, y hacer reaccionar el producto obtenido con una mezcla de hidróxido de litio o sodio, dimetoxietano y agua. Para los fines de Ia invención, Ia mezcla de reacción formada por los cuatro compuestos de las fases a) a d) se puede realizar adicionando uno de los componentes a Ia mezcla previa de los otros tres en el disolvente orgánico y a Ia temperatura de -85 0C a +25 0C, preferentemente a temperaturas próximas a 0 0C. Luego se deja un tiempo para completar Ia reacción, pudiendo alcanzar la temperatura ambiente. Una vez completada Ia reacción de acoplamiento, el éster obtenido tras seguir el procedimiento general se hace reaccionar con Ia mezcla de hidróxido de litio o sodio, dimetoxietano y agua rindiendo así, tras el tratamiento correspondiente, los compuestos de formula general (Ia).
Método B
El método B representa un procedimiento para Ia preparación de compuestos de fórmula general (Ib):
Figure imgf000009_0002
(Ib) donde R1, R2, R3, R4, X y n tienen Ia significación dada anteriormente, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: a) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000010_0001
(II) b) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5
(III) donde R5 es un alcoxicarbonilo, c) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y d) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, y adicionar el producto resultante sobre una mezcla de clorhidrato de hidroxilamina y fenoftaleína en presencia de un exceso de metóxido sódico en metanol. Para los fines de Ia invención, Ia mezcla de reacción formada por los cuatro compuestos de las fases a) a d) se puede realizar adicionando uno de los componentes a Ia mezcla previa de los otros tres en el disolvente orgánico y a Ia temperatura de -85 0C a +25 0C, preferentemente a temperaturas próximas a 0 0C. Luego se deja un tiempo para completar Ia reacción, pudiendo alcanzar Ia temperatura ambiente. Una vez completada Ia reacción de acoplamiento, el éster obtenido se adiciona sobre una mezcla de clorhidrato de hidroxilamina y fenolftaleína en presencia de un exceso de metóxido sódico en metanol. Una vez completada Ia reacción se obtienen, tras el tratamiento correspondiente, los compuestos de formula general (Ib).
Método C
El método de C representa un procedimiento para Ia preparación de compuestos de fórmula general (Ic):
HK JMHOH
Figure imgf000010_0002
Z (Ic) donde R1, R2, R3, R4, X, Z y n tienen Ia significación dada anteriormente, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: a) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000011_0001
(H) b) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5
(III) donde R5 es el terc-butoxicarbamoilo (NHBoc) o benciloxicarbamoilo
(NHCBz), c) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y d) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, desproteger el producto obtenido mediante tratamiento ácido o hidrólisis y hacerlo reaccionar con fosgeno o sus análogos como el difosgeno, trifosgeno o tiofosgeno, obteniéndose un isocianato o tioisocianato que es tratado con hidroxilamina.
Para los fines de Ia invención, Ia mezcla de reacción formada por los cuatro compuestos de las fases a) a d) se puede realizar adicionando uno de los componentes a Ia mezcla previa de los otros tres en el disolvente orgánico y a Ia temperatura de -85 0C a +25 0C, preferentemente a temperaturas próximas a 0 0C. Luego se deja un tiempo para completar Ia reacción, pudiendo alcanzar Ia temperatura ambiente. Dependiendo del significado de R5 en el compuesto III, es decir, dependiendo de si R5 representa terc-butoxicarbamoilo (NHBoc) o benciloxicarbamoilo (NHCBz), los tratamientos subsiguientes serán diferentes. En caso de que R5 sea NHBoc el producto resultante debe ser sometido a un tratamiento ácido que consiste preferiblemente en Ia reacción a temperatura ambiente con ácido trifluoroacético en un disolvente halogenado. Cuando R5 representa NHCBz el producto resultante es sometido a hidrogenolisis, preferiblemente mediante reacción con hidrógeno gaseoso o formiato amónico en el seno de un alcohol de cadena corta como disolvente y en presencia de un catalizador heterogéneo de paladio. En ambos casos, tras Ia desprotección se obtiene una amina primaria que es tratada con fosgeno o alguno de sus derivados como el difosgeno o el trifosgeno o también el tiofosgeno. Cuando Ia reacción es con fosgeno, difosgeno o trifosgeno, el compuesto final (Ic) tendrá como significado de Z un átomo de oxigeno. Si por el contrario el tratamiento es con tiofosgeno Z será un átomo de azufre.
Tras Ia reacción bien con el fosgeno (difosgeno, trifosgeno) o el tiofosgeno se obtiene los correspondiente isocianatos o tioisocianatos que son tratados in situ con hidroxilamina obteniéndose los compuestos de formula (Ic). Método D El método D representa un procedimiento para Ia preparación de compuestos de formula general (Id):
NHRβ
Figure imgf000012_0001
(Id) donde R1, R2, R3, R4, X, Z y n tienen Ia significación dada anteriormente y R6 es un H, C1-C6 alquilo , arilo o heteroarilo de 5 o 6 miembros con 1 o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: a) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxíüco de fórmula II,
Figure imgf000012_0002
(II) b) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CHa)n-R5
(III) donde R5 es terc-butoxicarbamoilo (NHBoc) o beciloxicarbamoilo (NHCBz), c) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y d) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, desproteger el producto obtenido mediante tratamiento ácido o hidrogenolisis y hacerlo reaccionar con fosgeno o sus análogos como el difosgeno, trifosgeno o tiofosgeno, obteniéndose un ¡socianato o tioisocianato que es tratado con hidracina o alquil, aril o heteroaril-hidrazinas.
Para los fines de Ia invención, Ia mezcla de reacción formada por los cuatro compuestos de las fases a) a d) se puede realizar adicionando uno de los componentes a Ia mezcla previa de los otros tres en el disolvente orgánico y a Ia temperatura de -85 0C a +25 0C, preferentemente a temperaturas próximas a 0 0C. Luego se deja un tiempo para completar Ia reacción, pudiendo alcanzar Ia temperatura ambiente. Dependiendo del significado de R5 en el compuesto III, es decir, dependiendo de si R5 representa terc-butoxicarbamoilo (NHBoc) o benciloxicarbamoilo (NHCBz), los tratamientos subsiguientes serán diferentes. En caso de que R5 sea NHBoc el producto resultante debe ser sometido a un tratamiento ácido que consiste preferiblemente en Ia reacción a temperatura ambiente con ácido trifluoroacético en un disolvente halogenado. Cuando R5 representa NHCBz el producto resultante es sometido a hidrogenolisis preferiblemente mediante reacción con hidrógeno gaseoso o formiato amónico en el seno de un alcohol de cadena corta como disolvente y en presencia de un catalizador heterogéneo de paladio. En ambos casos, tras Ia desprotección se obtiene una amina primaria que es tratada con fosgeno o alguno de sus derivados como el difosgeno o el trifosgeno o también el tiofosgeno. Cuando Ia reacción es con fosgeno, difosgeno o trifosgeno, el compuesto final (Ic) tendrá como significado de Z un átomo de oxigeno. Si por el contrario el tratamiento es con tiofosgeno Z será un átomo de azufre.
Tras Ia reacción bien con el fosgeno (difosgeno, trifosgeno) o el tiofosgeno se obtiene los correspondiente isocianatos o tioisocianatos que son tratados in situ con hidracinas o alquilhidracinas para dar Io compuestos de formula (Id).
Método E
El método E representa un procedimiento adicional para Ia preparación de compuestos de formula general (Id):
Figure imgf000013_0001
(Id) donde R1, R2, R3, R4, X, Z y n tienen Ia significación dada anteriormente y R6 es un H, C1-C6 alquilo, arilo o heteroarilo de 5 o 6 miembros con 1 o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: a) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000014_0001
(H) b) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5 (III) donde R5 es 3-benciloxiureilo o 3-alquil, aril o heteroaril ureilo, c) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y d) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos,
Si Ia reacción de acoplamiento detallada anteriormente se lleva a cabo con N-benciloxiureas o tioureas, sólo es necesario liberar las N-hidroxiureas o tioureas correspondientes mediante hidrogenolisis en presencia de un catalizador metálico adecuado. En el caso de las N-alquil(aril,heteroaril)aminoureas o tioureas, si dichos radicales ya están introducidos en los precursores (III) correspondientes, Ia reacción de acoplamiento rinde directamente las moléculas finales esperadas.
Como elemento común a los métodos A-E el reactivo de activación del grupo carboxilo es preferiblemente diclorofosfato de fenilo, el fosforociamidato de dietilo (DEPC) o el sistema formado por el 1-hidroxibenzotriazol y Ia N-(3- dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida.
A su vez es un reactivo común a los métodos A y B una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos. Preferiblemente esta amina terciaria se selecciona entre N-metil pirrolidina o Ia N-metilmorfolina. Además es preferible llevar a cabo Ia reacción entre los elementos a) a d) de cada uno de los métodos A a E mediante irradiación con microondas. La preparación de los compuestos de fórmula Il mencionados anteriormente se efectúa en un disolvente orgánico o bien en ausencia del mismo y bajo irradiación con microondas, haciendo reaccionar, en primer lugar, una mezcla que comprende: a) Un nitroalqueno de configuración (E) o (Z) con Ia siguiente fórmula IV,
O2N-CH=CH-R3
(IV) donde:
R3 tiene Ia significación dada anteriormente; b) Una ¡mina de configuración (E) o (Z) con Ia siguiente fórmula V,
Ri-CH=N-CH2-COOR6
(V) donde:
R1 tiene Ia significación dada anteriormente, y R6 representa un grupo C1-C6 alquilo o arilo; c) Una sal metálica, preferentemente seleccionada entre el perclorato de litio, el perclorato de plata o el acetato de plata, y d) Una base orgánica terciaria, seleccionada entre las alifáticas con C3- C10 carbonos o alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos. Para los fines de Ia invención, Ia mezcla de reacción formada por los cuatro componentes arriba indicados se puede realizar mediante irradiación con microondas o bien adicionando uno de los componentes sobre los otros tres, en el disolvente orgánico y a Ia temperatura de -25 0C a +25 0C, preferentemente a temperaturas próximas a +25 0C. Una vez completada Ia reacción de cicloadición se obtiene una mezcla de 2-alcoxicarbonil pirrolidinas correspondiente a los sustituyentes seleccionados para cada reacción particular. Dicha mezcla se disuelve en un éter cíclico como el tetrahidrofurano o acíclico de alto punto de ebullición como el éter bis(2-metoxietílico), también conocido como "diglyme" y se añade un agente oxidante como el dióxido de manganeso, el peróxido de hidrógeno o Ia 2,3-dicloro-5,6-diciano-1 ,4-benzoquinona. Tras un cierto tiempo a temperaturas comprendidas entre los +60 0C y los +250 0C, se obtiene una mezcla formada por el 2-alcoxicarbonil-Λ/H-pirrol y el 2-alcoxicarbonil-4-nitro-NH-pirrol correspondiente, cuyos componentes pueden separarse mediante cristalización fraccionada o cromatografía. Los ácidos de fórmula general Il se obtienen mediante hidrólisis alcalina de los esteres anteriores, preferentemente mediante tratamiento de los mismos con hidróxido de litio o de sodio en una mezcla de agua y dimetoxietano.
Un aspecto adicional de esta invención se refiere al uso de los compuestos de fórmula general I para el tratamiento del cáncer. El mecanismo de acción de dichos compuestos se explica por sus propiedades antagonistas con las desacetilasas de histonas implicadas en el bloqueo de Ia síntesis de proteínas encargadas de Ia regulación de procesos tales como Ia apoptosis o el crecimiento y proliferación celular. Dichas propiedades impiden o bloquean Ia unión de las desacetilasas y los complejos enzimáticos relacionados a sus sustratos naturales, como son los residuos de Usina N-acetilados en Ia posición ε de los residuos terminales de lisina de las histonas, por Io que éstas permanecen en el estado mono- o poliacetilado.
Un último aspecto de Ia invención se refiere a una composición que comprende al menos uno de los compuestos de fórmula general I y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de fórmula I de Ia presente invención pueden ser administrados tanto como sustancia pura como en forma de formulaciones farmacéuticas, aunque es preferible Ia administración del compuesto de forma combinada. La combinación del medicamento es preferiblemente en forma de una formulación Ia cual: i) Contenga el compuesto de fórmula general I solo;
¡i) Contenga uno o más excipientes y/o sustancias transportadoras; y iii) Pueda contener alguna sustancia adicional terapéuticamente activa. Los excipientes, sustancias transportadoras y sustancias auxiliares tienen que ser farmacéuticamente y farmacológicamente tolerables, de modo que puedan ser combinadas con otros componentes de Ia formulación o preparación y no ejerzan efectos adversos en el organismo tratado.
Las formulaciones incluyen aquéllas que son adecuadas para Ia administración oral o parenteral (incluyendo subcutánea, intradérmica, intramuscular e intravenosa), aunque Ia mejor vía de administración dependerá del estado del paciente.
Las formulaciones pueden ser en forma de dosis sencillas y se preparan de acuerdo con métodos conocidos en el campo de Ia farmacología. Las cantidades de sustancias activas a administrar pueden variar en función de las particularidades de Ia terapia aunque generalmente variaran entre 1 y 500 mg al día en una o varias tomas.
Para facilitar Ia comprensión de las ¡deas precedentes, se describen seguidamente unos ejemplos de realización de Ia presente invención. Dichos ejemplos son de carácter meramente ilustrativo.
Ejemplo 1
Preparación del ácido 5-fenil-3-(4-metoxifenil)-1H-pirrol-2-carboxílico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000017_0001
y del ácido 5-fenil-3-(4-metoxifenil)-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxílico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000017_0002
A una mezcla de Λ/-fenilmetilidenglic¡nato de metilo (14.17 g, 80.0 mmol) en acetonitrilo (800 mi) se Ie adicionaron sucesivamente trietilamina (12 mi, 80.0 mmol), acetato de plata (1.98 g, 11.9 mmol) y (£)-2-(4-metoxifenil)-1-nitroeteno
(14.33 g, 80.0 mmol). El progreso de Ia reacción fue seguido por cromatografía en capa fina. Una vez completada Ia reacción, Ia mezcla fue filtrada a través de un lecho de Celita y lavada con una disolución saturada de NH4CI (2 x 150 mi) y con agua (2 x 150 mi). Una vez secada sobre MgSO4, Ia disolución fue evaporada bajo presión reducida, obteniéndose 26.5 g de una mezcla de diastereómeros de 5-fenil-
3-(4-metoxifenil)-2-metoxicarbonil-4-nitropirrolidina. 12.22 g (34.27 mmol) de esta mezcla fue disuelta en éter bis(2-metoxietílico) (343 mi) bajo atmósfera inerte y se Ie añadió dióxido de manganeso (29.8 g, 343 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a reflujo durante 48 h. Transcurrido este tiempo, Ia mezcla fue llevada a temperatura ambiente y filtrada a través de un lecho de Celita. La disolución obtenida fue concentrada a presión reducida, obteniéndose 7.93 g de una mezcla formada por 5-fenil-3-(4-metoxifenil)-2-metoxicarbonil-4-nitro-1 H-pirrol y 5-fenil-3-(4- metoxifenil)-2-metoxicarbonil-1 H-pirrol. Los productos fueron separados mediante cromatografía de columna flash, y Ia hidrólisis de cada uno de ellos fue realizada por separado como se indica a continuación. A una solución del éster correspondiente (4.0 mmol) en etanol (100 mi) se Ie adicionó gota a gota NaOH
10% (40 mi, solución acuosa), y Ia mezcla fue agitada a reflujo. El progreso de Ia reacción fue seguido por cromatografía en capa fina. Una vez completada Ia reacción, Ia mezcla fue enfriada a 00C, neutralizada con HCI 1 N y extraída con cloruro de metileno (3x 50 mi). Las fracciones orgánicas combinadas fueron secadas sobre MgSO4 y evaporadas bajo presión reducida, obteniéndose el ácido carboxílico correspondiente.
Ácido 5-fenil-3-(4-metoxifenil)-1 H-pirrol-2-carboxílico: Rdto. 41% ; p.f. 198°C (dea); IR 3467, 1643 crτf1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 11.72 (s, 1 H), 7.88 (d, 2H, J=7.7 Hz), 7.51 (d, 2H, J=8.4 Hz), 7.38 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 7.26 (t, 1 H, J=7.2 Hz), 6.91 (d, 2H, J= 8.4 Hz), 6.69 (s, 1 H), 3.78 (s, 3H), 3.34 (sa, 1 H); 13C-RMN (δ ppm,
DMSO-de) 162.5, 157.9, 134.4, 131.3, 131.2, 130.3, 128.6, 127.9, 127.0, 125.1 , 119.8, 113.0, 112.9, 109.3, 55.0, 54.9; Anal. Cale, para C18H15NO3: C, 73.71 ; H, 5.15; N, 4.78. Encontrado: C, 73.56; H, 5.08; N, 4.81 %.
Ácido 5-fenil-3-(4-metoxifenil)-4-nitro-1 H-pirrol-2-carboxílico: Rdto. 28%; p.f. 1900C; IR 3437,1663,1493 cπϊ1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 7.57-7.52 (m, 2H),
7.48-7.43 (m, 3H), 7.24 (d, 2H, J=8.4 Hz), 6.90 (d, 2H, J=8.4 Hz), 3.79 (s, 3H); 13C- RMN (δ ppm, DMSO-d6) 13C-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 161.6, 158.3, 133.5, 132.5, 131.1 , 129.3, 129.0, 128.0, 124.5, 124.2, 121.1 , 112.7, 54.9; Anal. Cale, para C18H14N2O5: C, 63.90; H, 4.17; N, 8.28. Encontrado: C, 63.85; H, 4.20; N, 8.27 %. Ejemplo 2
Preparación del ácido 3-fenil-5-(4-metoxifenil)-1H-pirrol-2-carboxílico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000018_0001
y del ácido 3-fenil-5-(4-metoxifenil)-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxílico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000019_0001
Estos materiales fueron preparados mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 1, obteniéndose los compuestos del título como sólidos amarillos.
Ácido 3-fenil-5-(4-metoxifenil)-1H-pirrol-2-carboxílico: Rdto. 52%; p.f. 2510C; IR 3457, 3316, 1618 crrϊ1; 1H-RMN (δ ppm, DMSOd6) 10.67 (sa, 1H), 7.88 (d, 2H, J=7.5 Hz), 7.70 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.23 (t, 2H, J=7.5 Hz), 7.11 (t, 1H, J=7.3 Hz), 6.87 (d, 2H1 J=8.5 Hz)1 6.52 (s, 1 H)1 3.74 (s, 3H), 3.38 (sa, 1H); 13C-RMN (δ ppm, DMSO- d6) 166.1 , 157.5, 137.1 , 129.7, 128.9, 127.9, 126.9, 125.3, 125.2, 124.7, 113.9, 106.4, 54.9; Anal. Caled, para Ci8H15NO3: C, 73.71; H, 5.15; N, 4.78. Encontrado: C, 73.48; H, 5.11; N, 4.79 %.
Ácido 3-fenil-5-(4-metoxifenil)-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxílico: Rdto. 35%; p.f. 106-1070C; IR 3407, 1668, 1507, 1351 cm"1; 1H-RMN (δ ppm, CDCI3) 9.32 (s, 1H), 7.54 (d, 2H, J= 8.6 Hz), 7.42-7.38 (m, 5H), 7.01 (d, 2H, J= 8.6 Hz), 3.88 (s, 3H); 13C- RMN (δ ppm, CDCI3) 163.4, 161.1 , 135.2, 133.2, 130.8, 130.3, 129.7, 128.7, 128.2, 127.8, 127.6, 120.6, 114.3, 114.2, 55.4; Anal. Cale, para C18Hi4N2O5: C, 63.90; H, 4.17; N, 8.28. Encontrado: C, 63.77; H, 4.19; N, 8.30 %.
Ejemplo 3
Preparación del ácido 5-(4-metoxifenil)-3-(tiofen-2-il)-1H-pirrol-2-carboxílico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000019_0002
y del ácido 5-(4-metoxifenil)-4-nitro-3-(tiofen-2-il)-1H-pirrol-2-carboxílico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000020_0001
Estos materiales fueron preparados mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 1 , obteniéndose los compuestos del título como sólidos amarillos.
Ácido 5-(4-metoxifenil)-3-(tiofen-2-il)-1H-pirrol-2-carboxílico: Rdto. 54%; p.f. 153-154°C; IR 3424, 3112, 2964, 1610 cnrT1; 1H-RMN (δ ppm, CDCI3) 8.29, (sa, 1H), 7.41 (d, 2H1 J= 8.6 Hz), 7.10 (d, 1H, J= 5.0 Hz), 7.07 (d, 1 H, J= 3.1 Hz), 7.02-6.98 (m, 2H)1 6.92 (d, 2H, J= 8.6 Hz), 6.58 (s, 1 H), 3.82 (s, 3H); 13C-RMN (δ ppm, CDCI3) 158.6, 139.2, 133.0, 127.4, 125.3, 121.8, 121.2, 120.4, 114.9, 114.4, 103.5, 71.9, 70.5, 59.0, 55.3; Anal. Cale, para C16Hi3NO3S: C, 64.20; H1 4.38; N, 4.68. Encontrado: C, 64.11 ; H, 4.35; N, 4.70 %.
Ácido 5-(4-metoxifenil)-4-nitro-3-(tiofen-2-il)-1 H-pirrol-2-carboxílico: Rdto. 28%; p.f. 180-1810C; IR 3408, 3120, 1610, 1511 cm"1; 1H-RMN (δ ppm, DMSOd6) 7.54 (da, 1 H, J= 3.4 Hz), 7.49 (d, 2H, J= 8.3 Hz), 7.03 (sa, 2H), 7.00 (d, 2H, J= 8.2 Hz), 3.81 (s, 3H); 13C-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 13C-RMN (δ ppm, DMSOd6) 161.1 , 135.1 , 133.7, 130.1 , 129.3, 127.3, 126.8, 120.1 , 114.3, 65.9, 55.4, 15.2; Anal. Cale, para Ci6H12N2O5S: C, 55.81 ; H, 3.51 ; N, 8.14. Encontrado: C, 56.09; H, 3.49; N, 8.14 %.
Ejemplo 4
Preparación del ácido 6-(3,5-difenil-1H-pirrol-2-carboxamido)hexanoico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000020_0002
Una solución de ácido 3,5-difenil-1H-pirrol-2-carboxílico (0.39 g, 1.5 mmol) y de clorhidrato del éster metílico del ácido 6-aminohexanoico (0.25 g, 1.5 mmol) en DMF (7.5 mi) fue enfriada a 00C. Trietilamina (1.15 mi, 8.25 mol), 1- hidroxibenzotriazol (0.22 g, 1.65 mmol), clorhidrato de Λ/-(3-dimetilaminopropil)-Λ/'- etilcarbodümida (0.32 g, 1.65 mmol) y Λ/-metilmorfol¡na (0.165 mi, 1.5 mmol) fueron añadidos sucesivamente, y Ia mezcla fue agitada a 00C durante 2 h, y durante 96 horas más a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo se añadió acetato de etilo (300 mi), y Ia solución obtenida fue lavada con agua (90 mi), Na2S2O3 1 N (90 mi, solución acuosa), agua (90 mi), NaHCO3 (90 mi, solución acuosa saturada), y
NaCI (90 mi, solución acuosa saturada), secada sobre MgSO4 y evaporada bajo presión reducida, obteniéndose 0.47 g (1.2 mmol) de éster.
El éster metílico obtenido fue disuelto en etilenglicol dimetil éter (6 mi) y Ia disolución fue enfriada a 00C. A continuación, se adicionó gota a gota una disolución acuosa de LiOH 1N (3.6 mi) y Ia mezcla resultante fue agitada a 00C. El progreso de Ia reacción fue monitorizado por cromatografía en capa fina. Una vez completada Ia reacción, fue adicionado (pH∞6) ácido cítrico 10% (3.6 mi, solución acuosa). La solución fue extraída con cloruro de metileno (3 x 5 mi), y las fracciones orgánicas combinadas fueron secadas sobre MgSO4 y evaporadas bajo presión reducida. El crudo de reacción fue triturado en dietil éter para dar 0.42 g de un sólido blanco. Rdto. 74%; p.f. 228-229 0C; IR 3427, 3246, 1608 cm"1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 13.05 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.99 (d, 2H, J= 7.7 Hz), 7.52 (d, 2H, J=7.5 Hz), 7.36-7.29 (m, 4H), 7.21 (dd, 2H, J=12.5 Hz, J'= 7.0 Hz), 6.65 (s, 1 H), 3.21 (dd, 2H, J=11.3 Hz, J'=5.6 Hz)1 2.05 (t, 2H, J=6.6 Hz), 1.54-1.44 (m, 4H), 1.36- 1.30 (m, 2H); 13C-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 177.5, 160.8, 136.1 , 132.7, 131.8, 129.0,
128.5, 128.3, 127.6, 126.5, 125.9, 124.6, 123.3, 108.3, 37.3, 28.8, 26.6, 25.5; Anal. Cale, para C23H24N2O3: C, 73.38; H, 6.43; N, 7.44. Encontrado: C, 73.45; H, 6.41 ; N, 7.44 %.
Ejemplo 5 Preparación del ácido 6-(4-nitrc~3,5-difenil-1H-pirrol-2-carboxamido)hexa-noico, con
Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000021_0001
Este material fue preparado mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 4, obteniéndose el compuesto del título como un sólido de color amarillo. Rdto. 71%; p.f. 153-154 0C; IR 3417, 3155, 1638, 1492 errf1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-Cl6) 7.58 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.36 (t, 2H, J=7.2 Hz), 7.32-7.23 (m, 7H), 4.87 (sa, 2H), 3.07 (dd, 2H, J=12.9 Hz, J'=6.6 Hz), 2.09 (t, 2H, J=7.3 Hz), 1.46-1.40 (m, 2H), 1.35-1.29 (m, 2H), 1.18-1.12 (m, 2H); 13C-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 176.0, 161.9, 136.8, 134.4, 133.4, 131.8, 130.1 , 129.0, 127.5, 127.4, 127.3, 126.3, 122.8, 71.0, 64.8, 57.9, 38.2, 35.0, 28.8, 26.0, 24.7, 15.1; Anal. Cale, para C23H23N3O5: C,
65.55; H, 5.50; N, 9.97. Encontrado: C, 65.37; H, 5.44; N, 10.01 %.
Ejemplo 6
Preparación de Ia N-(δ-(hidroxicarbamoíl)pentil-3-fenil-5-(4-metoxicarbonil)-1H~ pirrol-2-carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000022_0001
A una solución de clorhidrato de hidroxilamina (0.26 g, 3.75 mmol) y fenolftaleína (1 mg) en metanol (1.25 mi) bajo atmósfera inerte se Ie añadió gota a gota una alícuota de metóxido sódico en metanol (tomada de una solución de 0.65 g, 12.0 mmol de metóxido sódico en 3.3 mi de metanol bajo atmósfera inerte) hasta observar en Ia solución un color rosa permanente. 6-(3-fenil-5-(4-metoxifenil)-1 H- pirrol-2-carboxamido)hexanoato de metilo (0.53 g, 1.25 mmol), preparado a partir de ácido 3-fenil-5-(4-metoxifenil)-1H-pirrol-2-carboxílico y clorhidrato del éster metílico del ácido 6-aminohexanoico según el procedimiento descrito en el Ejemplo 4, y metóxido sódico en metanol (5.0 mmol, 1.4 mi de una disolución preparada previamente) fueron añadidos sucesivamente. La mezcla fue agitada durante 26h, observándose Ia formación de un precipitado denso. Transcurrido este tiempo, se añadió agua (3 mi) al medio de reacción. Esta solución fue acidificada con ácido acético glacial y extraída con cloruro de metileno (3 x 10 mi). Las fracciones orgánicas combinadas fueron secadas sobre MgSO4 y evaporadas bajo presión reducida, obteniéndose 0.46 g del producto del título como un sólido blanco. Rdto. 87%; p.f. 157-158 0C; IR 3407, 3226, 1663, 1608 cπV1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 11.44 (s, 1H), 10.34 (s, 1 H), 8.66 (s, 1H), 7.73 (d, 2H, J=7.8 Hz), 7.49 (d, 2H, J=7.7 Hz), 7.36 (t, 2H, J=7.3 Hz), 7.30 (ta, 1H, J=5.1 Hz), 7.26 (t, 2H, J=7.3 Hz), 6.97 (d, 2H, J=7.9 Hz), 6.56 (s, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.16 (dd, 2H, J=12.0 Hz, J'=5.9 Hz), 1.93 (t, 2H, J=7.2 Hz), 1.51-1.45 (m, 2H), 1.43-1.38 (m, 2H), 1.24-1.17 (m, 2H); 13C-RMN (δ ppm, DMSO-Cl6) 168.9, 160.9, 158.2, 135.7, 132.8, 128.7, 127.9, 127.3, 126.2, 125.9, 124.3, 122.7, 114.0, 107.1 , 55.1, 32.1, 28.7, 26.0, 24.8 ; Anal. Cale, para C24H27N3O4: C, 68.39; H, 6.46; N, 9.97. Encontrado: C, 68.25; H, 6.42; N, 9.98 %.
Ejemplo 7
Preparación de Ia N-(5-(hidroxicarbamoíl)pentil-3-fenil~5-(4-metoxicarbonil)-4-nitro- 1 H-pirrol-2-carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000023_0001
Este material fue preparado mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 6, obteniéndose el compuesto del título como un sólido de color amarillo. Rdto. 84%; p.f. 126-127 0C; IR 3397, 3185, 1668, 1628, 1507, 1356 errf1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 12.59 (sa, 1H), 10.33 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 7.53 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.44-7.39 (m, 3H), 7.35 (d, 2H, J=7.0 Hz), 7.03 (d, 2H, J=8.5 Hz),
6.71 (ta, 1H, J=4.4 Hz), 3.82 (s, 3H), 3.03 (dd, 2H, J=11.9 Hz, J'=6.0 Hz), 1.88 (t, 2H, J=7.3 Hz), 1.40-1.34 (m, 2H), 1.24-1.18 (m, 2H), 1.03-0.96 (m, 2H); 13C-RMN (δ ppm, DMSO-de) 168.9, 159.9, 159.4, 133.3, 132.0, 131.1 , 130.9, 129.9, 128.0, 127.6, 123.3, 121.4, 121.1, 113.5, 55.2, 32.0, 28.4, 25.7, 24.7 ; Anal. Cale, para C24H26N4O6: C, 61.79; H, 5.62; N, 12.01. Encontrado: C, 61.71 ; H, 5.59; N, 12.04 %.
Con el fin de facilitar Ia comprensión de las ideas expuestas en estos últimos ejemplos, en el Esquema 1 , que se incluye a continuación, se exponen las diferentes etapas sintéticas conducentes a los compuestos de los anteriores ejemplos.
Figure imgf000024_0001
amb.
Figure imgf000024_0002
11: X=NO2 12: X=H
ESQUEMA 1 Ejemplo 8
Preparación de Ia N-(5-(hidroxicarbamoíl)pentil-3-(4-metoxifenil)-5-fenil 1H-pirrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000025_0001
Este material fue preparado mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 6, obteniéndose el compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido. . Rdto. 80 %; p.f. 142°C; IR 3417, 3256, 1663, 1613, 1547, 1306 crrf1; 1H-RMN (δ ppm, DMSOd6) 12.59 (sa, 1H), 10.33 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 7.53 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.44-7.39 (m, 3H), 7.35 (d, 2H, J=7.0 Hz), 7.03 (d, 2H, J=8.5 Hz)1 6.71 (ta, 1H, J=4.4 Hz), 3.82 (s, 3H), 3.03 (dd, 2H, J=12.43 Hz, J'=6.35 Hz), 1.94 (t, 2H, J=7.3Hz), 1.54-1.45 (m, 2H), 1.45-1.37 (m, 2H), 1.28-1.16 (m, 2H); 13C- RMN (δ ppm, DMSOd6) 169.0, 161.0, 158.0, 132.6, 131.6, 129.9, 128.6, 127.8, 127.2, 126.6, 124.5, 123.1 , 113.4, 108.1 , 55.0, 32.2, 28.8, 26.1 , 24.9. Anal. Cale, para C24H27N3O4: C, 68.39; H, 6.46; N, 9.97. Encontrado: C, 68.27; H, 6.43; N, 9.99 %.
Ejemplo 9
Preparación de Ia N-(5-(hidroxicarbamoíl)pentil-3-(4-metoxifenil) -5- (fenil)-4-nitro- 1 H-pirrol-2-carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000025_0002
Este material fue preparado mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 6, obteniéndose el compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido. . Rdto. 94 %; p.f. 155°C; IR 3397, 3155, 1638, 1497, 1356 cπT1; 1H- RMN (δ ppm, DMSO-d6) 11.59 (s, 1H), 10.34 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 7.63-7.53 (m, 2H1), 7.52-7.41 (m, 3H), 7.29 (d, 2H, J=8.5 Hz), 6.99(d, 2H, J=8.5 Hz), 6.72 (ta, 1H, J=4.4 Hz), 3.80 (S1 3H), 3.05 (dd, 2H, J=12.02Hz, J'= 6.24 Hz), 1.89 (t, 2H, J=7.3Hz), 1.50-1.33 (m, 2H), 1.33-1.16 (m, 2H), 1.14-0.98 (m, 2H); 13C-RMN (δ ppm, DMSOd6). 168.9, 159.4, 158.8, 133.0, 131.6, 131.2, 129.3, 129.1, 129.0, 128.0, 123.5, 121.0, 113.5, 55.0, 32.0, 28.3, 25.7, 24.6 Anal. Cale, para C24H26N4O6: C, 61.79; H, 5.62; N, 12.01. Encontrado: C, 61.40; H, 5.77; N, 11.80 %.
Ejemplo 10
Preparación de Ia 4-(4-aminobutil)-1-metilsemicarbazida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000026_0001
Una mezcla de dlcarbonato de diterc-butilo (10.9 g, 51 mmol) en metanol (30 mi) fue adicionada gota a gota sobre una disolución de 1 ,4-diaminobutano (11.12 g, 150 mmol) en trietilamina (30 mi, 215 mmol) y metanol (300 mi). La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 16 h. Transcurrido este tiempo, Ia trietilamina y el metanol fueron evaporados bajo presión reducida. El aceite resultante fue disuelto en cloruro de metileno (100 mi) y lavado con carbonato sódico 10% (2 x 50 mi, solución acuosa). La fase orgánica fue secada sobre MgSO4 y evaporada bajo presión reducida. Se obtuvo de este modo Ia amina monoprotegida (7.8 g, 41.42 mmol) A una disolución de Ia amina monoprotegida (6g, 31.86 mmol y trifosgeno
(3.48g, 11.72 mmol) en cloruro de metileno (438 mi) se Ie añadió gota a gota una solución de bicarbonato sódico (18.23 g, 63.72 mmol) en agua (438 mi) a temperatura ambiente. El sistema bifásico resultante fue agitado vigorosamente durante 1.5 h. Transcurrido este tiempo Ia fase orgánica fue decantada, secada sobre MgSO4 y evaporada bajo presión reducida. El aceite resultante (4.3g, 20 mmol) fue disuelto en metanol (6.8ml) y se adicionó gota a gota a 0o C lentamente sobre otra disolución previamente preparada de metilhidrazina (1.1 mi, 20.8 mmol) y agua (4.05 mi) La mezcla fue agitada durante 45 minutos a 0° C. Transcurrido este tiempo el precipitado fue filtrado y se obtuvieron 3.492 g de un sólido de color blanco cuyas propiedades espectroscópicas fueron juzgadas compatibles con Ia 4-
(4-terc-butoxicarbonilaminobutil)-1-metilsemicarbazida.
A una disolución del precipitado anteriormente obtenido (0.500 g, 1.92 mmol) en cloruro de metileno (27.5 mi) a 0o C fue añadida otra disolución de ácido trifluoroacético (4.96 mi, 44 mmol) en cloruro de metlleno (22 mi) lentamente durante 30 minutos. La mezcla fue agitada durante 2 horas. Transcurrido este tiempo se Ie añadió tolueno (50 mi) y se evaporó a presión reducida hasta Ia mitad del volumen repitiendo el proceso varias veces. Se obtuvo así el aceite correspondiente al trifluoroacetato de Ia sal de amonio del compuesto del título
(0.720 g, 2.63 mmol). Rdto. 68 %; IR 3387, 3115, 1673 cm"1; 1H-RMN (δ ppm, DMSOd6) 7.88 (s, 3H), 7.42-7.15 (m, 2H), 3.78-3.64 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.16- 2.97 (m, 2H), 2.95-2.73 (m, 2H), 1.80-1.38 (m, 4H); 13C-RMN (δ ppm, DMSOd6) 159.0,158.6, 158.1 , 157.7, 156.7, 51.1 , 26.3, 24.3.
Ejemplo 11
Preparación de la 1-(4-(5-(4-metoxifenil)-4-nitro-3-(tiofen-2-il)-1H-pirrol-2- carboxamido)butil)~3-(2-metilamino)urea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000027_0001
Una solución de ácido 5-(4-metoxifenil)-4-nitro-3-(tíofen-2-il)-1H-pirrol-2- carboxílico (0.434 g, 1.25 mmol) y de trifluoroacetato de Ia sal de amonio de Ia 4- (4-aminobutil)~1-metilsemicarbazida (0.345 g, 1.25 mmol) en DMF (6.25 mi) fue enfriada a 00C. A continuación, se añadió sucesivamente trietilamina (0.98 mi, 7.04 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (0.210 g, 1.37 mmol), clorhidrato de Λ/-(3- dimetilaminopropil)-Λ/'-etilcarbodiimida (0.263 g, 1.37 mmol) y /V-metilmorfolina (0.14 mi, 1.25 mmol). La mezcla resultante fue agitada a 00C durante 2 h, y durante 96 horas más a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo se añadió acetato de etilo (250 mi), y Ia solución obtenida fue lavada con agua (80 mi), Na2S2O3 1 N (80 mi, solución acuosa), agua (80 mi), NaHCO3 (80 mi, solución acuosa saturada), y NaCI (80 mi, solución acuosa saturada), secada sobre MgSO4 y evaporada bajo presión reducida, obteniéndose 0.400 g (0.82mmol) del compuesto del título. Rdto. 65.6% ; p.f. 185-187°C; IR 3408, 3161, 1639, 1511 cm"1; 1H-RMN (δ ppm, CDCI3): 10.4 (s, 1H), 7.56 (dd, 1H, J =5.5 Hz, J1 =0.8), 7.54 (d, 2H, J=8.7 Hz), 7.20-7.15 (m, 3H), 6.98 (d, 2H1 J=8.7 Hz), 5.74 (t, 1H, J=5.2 Hz), 4.66 (s, 1H), 3.86 (s, 4H), 3.67 (s, 3H), 3.13-3.04 (m, 4H), 1.31-1.24 (m, 4H); 13C-RMN (δ ppm, CDCI3): 160.7, 159.6, 157.0, 134.6, 132.9, 131.5, 130.9, 129.5, 128.7, 127.6, 123.2, 121.1 , 113.9,
113.7, 55.4, 52.1 , 40.5, 38.7, 27.0, 26.2. Ion molecular calculado para C22H26N6O5S: m/z 486.14. Encontrado: 471.1 (M+-Me).
Ejemplo 12
Preparación de 1-(4-aminometil)-3-(benciloxi)urea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000028_0001
Este material fue preparado mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 10, empleando benciloxiamlna en lugar de metilhidrazina. Tras Ia secuencia de adición-desprotección previamente especificada, se obtuvo el compuesto del título como el trifluoroacetato de Ia sal de amonio correspondiente. Rdto. 68%; IR 3759, 3356, 1648 cm"1; 1H-RMN (δ ppm, DMSO-d6) 7.82 (s, 3H), 7.52-7.28 (m, 7H), 5.00 (s, 2H), 3.09-2.92 (m, 2H), 2.90-2.68 (m, 2H), 1.68-1.32 (m, 4H); 13C-RMN (δ ppm, DMSOd6) 159.6, 158.2, 157.7, 136.4, 128.5, 128.1 , 127.8, 77.2, 38.0, 26.6, 24.3, 24.0. Ion molecular calculado para C13H20N3O2: m/z 237.32. Encontrado 238.0.
Ejemplo 13
Preparación de 1-(4-(3,5-bis(3,5-Dimetoxifenil)-1H-pirrol-2-carboxamido)butil)-3- (benciloxi)urea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000028_0002
Este material fue preparado mediante un procedimiento sustancialmente similar al del Ejemplo 11, a partir del ácido 3,5-bis(3,5-dimetoxifenil)-1H-pirrol carboxílico y del trifluoroacetato de Ia sal de amonio de Ia 1-(4-aminometil)-3- (benciloxi)urea. Rdto. 81% ; IR 3407, 3216, 1688, 1597 crrf1; 1H-RMN (δ ppm, CDCI3) 9.87 (s, 1 H), 7.44-7.32 (m, 5H), 7.13 (s, 1 H), 6.77 (d, 2H, J=2.0 Hz), 6.62 (d, 2H, J=2.2 Hz), 6.50 (d, 2H, J=2.6 Hz), 6.43 (t, 1H, J=2.0 Hz), 6.03 (t, 1H, J=5.5 Hz), 5.62 (t, 1H, J = 5.3 Hz), 4.80 (s, 2H), 3.85 (s, 6H), 3.82 (s, 6H), 3.28 (dd, 2H, J=11.9 Hz, J'=5.9 Hz), 3.15 (dd, 2H, J=12.7 Hz, J'=6.5 Hz), 1.41-1.29 (m, 4H); 13C-RMN (δ ppm, CDCI3) 161.2, 160.0, 137.6, 135.4, 134.1 , 133.2, 130.8, 129.2, 128.8, 128.7, 127.7, 122.2, 110.0, 107.4, 103.0, 100.0, 99.8, 78.6, 72.3, 10.1 , 68.1 , 55.4, 39.1 , 38.8, 27.1 , 26.6. Ion molecular calculado para C33H38N4O7; m/z 602.68. Encontrado: 603.2.
Ejemplo 14
Preparación de Ia 1-(4-(3,5-bis(3,5-Dimetoxifenil)-1H-pirrol-2-carboxamido)butil)-3- hydroxiurea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000029_0001
Se preparó una disolución de 1-(4-(3,5-bis(3,5-dimetoxifenil)-1H-pirrol-2- carboxamido)butil)-3-(benciloxi)urea (0.20Og, 0.33 mmol) en acetato de etilo (66ml) y etanol (16.5ml) a Ia que se Ie añadió el catalizador de Pd-C al 10% (0.116g, 0.11 mmol). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente con corriente de hidrogeno durante 5 horas. Transcurrido dicho tiempo Ia suspensión resultante fue filtrada sobre celita y el filtrado fue evaporado bajo presión reducida. Se obtuvo así el producto del título como un aceite incoloro. Rdto. 71% ; IR 3416, 3244, 2948,1598 cm"1; 1H-RMN (δ ppm CDCI3) 10.3 (s, 1H), 6.78 (s, 2H), 6.60 (d, 2H, J=1.7 Hz), 6.53- 6.44 (m, 2H), 6.39 (s, 1 H), 6.17-6.02 (m, 1H), 4.81 (s, 1 H), 3.86-3.78 (m, 13H), 3.34- 3.16 (m, 4H), 1.48-1.33 (m, 4H); 13C-RMN (δ ppm, CDCI3) 161.2, 137.6, 134.6, 134.5, 133.3, 128.3, 128.2, 122.1 , 122.0, 109.7, 107.5, 103.3, 99.9, 99.6, 55.6, 55.5,
39.0, 38.9, 38.7, 27.2, 27.0, 26.8. Ion molecular calculado para C26H32N4O7: m/z 512.55. Encontrados: 513.2 (M+), 497.1 (M+-OH).
Con el fin de facilitar Ia comprensión de las ideas expuestas en estos últimos ejemplos, en el Esquema 2 que se incluye a continuación se exponen las diferentes etapas sintéticas conducentes a los compuestos recogidos en los ejemplos 10, 11 ,
12, 13 y 14.
Figure imgf000030_0001
ESQUEMA 2
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000031_0003
Figure imgf000031_0002
Figure imgf000031_0004
ESQUEMA 3. Fórmulas desarrolladas de los compuestos cuya actividad inhibitoria se recoge en las Figuras 1 , 2, 3, 4, 5, 6 y 7.
Ejemplo 15
Medida in vito de Ia capacidad inhibitoria de Ia actividad desacetilasa de histona.
Con el fin de ilustrar mejor los procedimientos seguidos, en el presente ejemplo y en el siguiente se incluyen, a título ilustrativo, los resultados obtenidos con los compuestos indicados en el Esquema 3, en el que se ha incluido un derivado de pirrolidina quiral, a fin de comparar Ia actividad de este sistema cíclico con los pirróles objeto de Ia presente invención.
Para determinar Ia capacidad inhibitoria de Ia actividad desacetilasa de histona de los compuestos sintetizados, se realizó un ensayo in vito de incubación de extracto nuclear de las líneas celulares HCT116 y MOLT4 e histonas acetiladas marcadas con tritio, en presencia de distintas concentraciones de los compuestos sintetizados, tras Ia cual se midió Ia concentración de grupos acetilo liberados mediante centelleo. Preparación de extracto nuclear Las células en suspensión (8 x 106) se centrifugaron a 800 rpm durante 5 minutos, se lavaron con PBS y se resuspendieron en 2 mi de tampón A (10 mM Tris pH 7.5, 15 mM KCI, 2 mM MgCI2, 0.1 mM EDTA, 2 mM 2-mercaptoetanol, 1 pastilla de inhibidor de proteasa libre de EDTA por cada 50 mi de tampón). Se Ie añadieron 135 μl de tampón B (50 mM Tris, 1M KCI, 30 mM MgCI2, 0.1 mM EDTA, 2 mM 2- mercaptoetanol), se centrifugaron a 2,7 x 103 rpm a 4°C durante 5 minutos y se eliminó el sobrenadante. El pellet se suspendió de nuevo en 2 mi de tampón A y se agitó 5 veces en un homogeneizador de 2 mi. Se volvió a centrifugar a 7.8 x 103 rcf a 40C durante 8 minutos, el pellet se resuspendió en 2 mi de tampón A, y se agitó 5 veces en el homogeneizador. Se Ie añadieron 200 μl de sulfato amónico y se agitó durante 30 minutos en una noria a 4°C. Se centrifugó a 12 x 103 rpm a 40C durante
10 minutos y el sobrenadante se dializó en una membrana de tamaño MWCO=3500 durante 2 h a 4°C en 200 mi de tampón C (20 mM Tris pH 7.5, 10% glicerol, 1 mM EDTA, 1 mM 2-mercaptoetanol, 1.5 mM MgCI2, 1 pastilla de inhibidor de proteasa libre de EDTA por cada 50 mi de tampón). Transcurrido este tiempo, se recuperó el contenido de Ia membrana y se utilizó para el ensayo que se describe a continuación.
Medida in vito de Ia actividad inhibidora de los compuestos. A 30 μl de extracto nuclear obtenido empleando el procedimiento indicado, se Ie añadieron 55 μl de tampón C (vide supra), 5 μl de Ia disolución de inhibidor correspondiente y 10 μl de histonas hiperacetiladas marcadas con tritio, y Ia mezcla resultante fue incubada a 37°C durante 1h. La incubación se detuvo mediante Ia adición de 37.5 μl de una disolución de ácido clorhídrico (concentración final de 1M) y ácido acético (concentración final de 0.4 M). A Ia mezcla resultante se Ie añadieron 700 μl de acetato de etilo, se centrifugó a 10.000 rpm durante 5 minutos y, finalmente, Ia fase superior (que contenía el ácido acético tritiado liberado) se llevó al contador de centelleo. Las muestras para el lector de centelleo se prepararon mezclando 500 μl de Ia fase superior y 5 mi de líquido de centelleo.
Los datos más representativos obtenidos tras seguir el procedimiento anterior se muestran en las Figuras 1 y 2: Los resultados de Ia Figura 1 corresponden a Ia línea celular HCT116 y los resultados de Ia Figura 2 corresponden a Ia línea celular MOLT4.
Ejemplo 16
Medida de Ia acetilación global de las histonas
La cuantificación del grado de acetilación de las histonas H3 y H4 se llevó a cabo mediante el procedimiento que se explica a continuación.
Las células de Ia líneas humana Jurkat (leucemia promielocítica) se trataron durante 24h con distintas concentraciones de los compuestos inhibidores de HDAC objeto de Ia presente invención. Transcurrido este tiempo, se aislaron los núcleos añadiendo a las células tampón RSB (Tris 10 mM de pH 7.5, cloruro sódico 10 mM y cloruro magnésico 3 mM) con Nonidet-P40 al 1% e inhibidor de proteasa. Para extraer las histonas, se añadió HCI 0.25M a los núcleos, y Ia mezcla se agitó a 4°C durante 16 h. A continuación, se precipitaron las histonas añadiendo 8 volúmenes de acetona. La mezcla de histonas obtenida se separó mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) de fase reversa, utilizando una columna C18 con un gradiente de acetonitrilo (20-60%) en 0.3% de ácido trifluoroacético.
La separación de las especies no acetiladas, mono-, di-, tri-, y tetra- acetiladas de cada fracción de las histonas H3 y H4 se llevó a cabo mediante electroforesis capilar de alta resolución (HPCE), utilizando un capilar de silica (60.2 cm x 75μm, longitud efectiva de 50 cm). Las condiciones de elución usadas fueron: 25° C, voltaje de 12 kV, detector de absorbancia a 214 nm, y tampón de elución de fosfato 110 mM (pH 2.0) y celulosa-HPM (0.03% peso/vol).
Antes de cada inyección, el sistema se lavó durante 3 minutos con NaOH 0.1 M, seguido de otro lavado de 2 minutos con H2SO4 0.5M, y se equilibró con el tampón de elución durante 3 minutos. Los tampones y disoluciones de lavado se prepararon con agua MiIIi-Q filtrada a través de un filtro de poro 0.45 μm. Las muestras se inyectaron bajo presión de 0.3 psi durante 3 segundos. Todas las muestras fueron analizadas por duplicado.
Algunos datos representativos obtenidos con varias moléculas objeto de Ia presente invención se muestran en Ia Figura 3.
Ejemplo 17
Medida de Ia inducción de apoptosis.
La cuantificación de Ia cantidad de células apoptóticas se realizó estudiando el cambio de permeabilidad de Ia membrana citoplasmática mediante análisis por citometría de flujo, utilizando como agente de tinción el kit comercial YoPro©. El procedimiento seguido se explica a continuación. Las células de las líneas humanas HCT116 y HL60 (106 células por tratamiento) se trataron durante 24h con distintas concentraciones de los compuestos inhibidores de HDAC objeto de Ia invención. Transcurrido este periodo, las células se lavaron dos veces con PBS 1X frío, se resuspendieron en 1 mi de PBS 1X y se añadieron 1 μl de YoPro© y 1μl de ioduro de propidio. La mezcla se incubó protegida de Ia luz durante 30 minutos en hielo. La cantidad de células apoptóticas se midió mediante citometría de flujo.
Los datos más representativos se muestran en las Figuras 4 y 5. En Ia Figura 4 se presentan los datos relativos al modelo de carcinoma de colon humano
HCT116. En Ia Figura 5 se presentan los datos relativos al modelo de leucemia mieloide aguda humana HL60.
Ejemplo 18 Medida de Ia actividad biológica in vivo.
Con el fin de observar el efecto de algunos de los compuestos descritos sobre el crecimiento tumoral in vivo, se realizaron ensayos utilizando ratones hembra atímicos desnudos de 6 semanas de edad (Harlam Sprague Dawley, Indianapolis, IN, USA). Para el estudio se inocularon subcutáneamente 2x106 células de Ia línea HCT116 (carcinoma de colon humano) y 107 células de MOLT4 (Leucemia linfoblástica aguda de células T humana) en un volumen final de inoculación de 200 μl/animal resuspendidas en PBS. Cuando los tumores alcanzaron un volumen medio de 100 mm3, se administró a cada ratón una dosis diaria de 200 μl de una disolución 20 μM de Ia molécula correspondiente mediante inyección intraperitoneal (10 mg/kg peso). A los ratones del grupo de control se les administraron 200 μl de PBS para mimetizar el estrés de Ia inoculación. Cada 24h se pesaron los ratones, y el volumen del tumor se estimó mediante calibrado milimétrico, asumiendo una geometría esférica para los tumores (volumen= d3x π/6). Cuando los tumores llegaron a un volumen de 1-1.5 cm3 (Human End Point:
Final ético-humanitario), los ratones se sacrificaron y los tumores fueron extraídos y pesados.
Los datos más representativos se muestran en las Figuras 7 y 8. En Ia Figura 7 se presentan los datos relativos al modelo de carcinoma de colon humano HCT116. En Ia Figura 8 se presentan los datos relativos al modelo de leucemia fibroblástica humana MOLT4.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Derivado pirrólico de formula general I1
Figure imgf000036_0001
(O donde:
R1 y R3 representan independientemente entre si un radical fenilo; fenilo mono o polisustituido en las diferentes posiciones del anillo; o un grupo heteroarilo C5-C10 que contiene al menos un heteroátomo de O, N o S;
R2 representa un átomo de hidrógeno o un grupo electronatrayente como el grupo nitro; o un grupo amino o amido;
R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo C1-C6 alquilo lineal, ramificado o cíclico;
(n) representa un número de grupos metileno comprendido entre 1 y 8, ambos inclusive; (X) representa indistintamente un grupo amino secundario, un átomo de oxígeno o un átomo de azufre;
(Y) representa un grupo seleccionado entre metileno, metileno sustituido y amino secundario;
(Z) representa indistintamente un átomo de oxígeno o de azufre; y (W) representa un grupo seleccionado entre el hidroxilo, el hidroxiamino, el hidrazino y el alquil, aril o heteroaril-hidrazino.
2. Derivado pirrólico de formula general I de acuerdo con Ia reivindicación 1 seleccionado entre: [1] Ácido 6-(3,5-difenil-1H-pirrol-2-carboxamido)hexanoico, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000036_0002
[2] Ácido 6-(4-n¡tro-3,5-difen¡l-1H-p¡rrol-2-carboxam¡do)hexano¡co, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000037_0001
[3] Λ/-(5-(Hidroxicarbamoíl)pentil)-5-fenil-3-(4-metoxicarbonil)-1H-p¡rrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000037_0002
[4] Λ/-(5-(Hidroxicarbamoíl)pentil)~3-fenil-5-(4-metoxicarbonil)-1H-pirrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000037_0003
[5]Λ/-(5-(Hidroxicarbamoil)pentil)-3-fenil-5-(4-metoxicarbonil)-4-nitro-1H-pirrol-2- carboxamida, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000037_0004
[6] 1-(4-(3,5-bis(3,5-D¡metoxifen¡l)-1 H-pirrol-2-carboxamido)but¡l)-3-hydroxiurea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000038_0001
[7]1-(4-(5-(4-Metoxifen¡l)-4-nitro-3-(tiofen-2-¡l)-1H-pirrol-2-carboxami-do)butil)-3-(2- metilamino)urea, con Ia siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000038_0002
3. Procedimiento para Ia preparación de compuestos de formula general (Ia):
Figure imgf000038_0003
(Ia) donde R1, R2, R3, R4, X y n tienen Ia significación dada anteriormente, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: e) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000038_0004
(H) f) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5
(III) donde R5 es un alcoxicarbonilo, g) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y h) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, y hacer reaccionar el producto obtenido con una mezcla de hidróxido de litio o sodio, dimetoxietano y agua. 4. Procedimiento para Ia preparación de compuestos de formula general (Ib):
Figure imgf000039_0001
(Ib) donde Ri, R2, R3, R4, X y n tienen Ia significación dada anteriormente, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: e) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000039_0002
(II) f) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5
(III) donde R5 es un alcoxicarbonilo, g) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y h) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, y adicionar el producto resultante sobre una mezcla de clorhidrato de hidroxilamina y fenoftaleína en presencia de un exceso de metóxido sódico en metanol.
5. Procedimiento para Ia preparación de compuestos de fórmula general (Ic):
Figure imgf000039_0003
(IC) donde R1, R2, R3, R4, X, Z y n tienen Ia significación dada anteriormente, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: e) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000040_0001
(ii) f) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CH2)n-R5 (III) donde R5 es el terc-butoxicarbamoilo (NHBoc) o benciloxicarbamoilo (NHCBz), g) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y h) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, desproteger el producto obtenido mediante tratamiento ácido o hidrólisis y hacerlo reaccionar con fosgeno o sus análogos como el difosgeno, trifosgeno o tiofosgeno, obteniéndose un isocianato o tioisocianato que es tratado con hidroxilamina. Procedimiento para Ia preparación de compuestos de formula general (Id):
Figure imgf000040_0002
(Id) donde R1, R2, R3, R4, X, Z y n tienen Ia significación dada anteriormente y R6 es un H, C1-C6 alquilo , arilo o heteroarilo de 5 o 6 miembros con 1 o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: e) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000040_0003
(II)
f) Un compuesto de fórmula III, HX-(CH2)n-R5
(III) donde R5 es terc-butoxicarbamoilo (NHBoc) o beciloxicarbamoilo (NHCBz), g) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y h) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos, desproteger el producto obtenido mediante tratamiento ácido o hidrogenolisis y hacerlo reaccionar con fosgeno o sus análogos como el difosgeno, trifosgeno o tiofosgeno, obteniéndose un isocianato o tioisocianato que es tratado con hidracina o alquil, aril o heteroaril-hidrazinas.
7. Procedimiento para Ia preparación de compuestos de formula general (Id):
Figure imgf000041_0001
(Id) donde R1, R2, R3, R4, X, Z y n tienen Ia significación dada anteriormente y R6 es un H1 C1-C6 alquilo, arilo o heteroarilo de 5 o 6 miembros con 1 o más heteroátomos seleccionados entre O, N o S, que comprende hacer reaccionar una mezcla constituida por: e) Un ácido 1 H-pirrol-2-carboxílico de fórmula II,
Figure imgf000041_0002
(II) f) Un compuesto de fórmula III,
HX-(CHs)n-R5
(III) donde R5 es 3-benciloxiureilo o 3-alquil, aril o heteroaril ureilo, g) Un reactivo de activación del grupo carboxilo; y h) Una amina terciaria, seleccionada entre las alifáticas cíclicas o acíclicas con C3-C10 carbonos y las alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos,
8. Derivado pirrólico de acuerdo con Ia reivindicación 1 para su uso en el tratamiento del cáncer.
9. Derivado pirrólico de acuerdo con Ia reivindicación 2 para su uso en el tratamiento del cáncer.
10. Uso de los derivados pirrólicos de acuerdo con Ia reivindicación 1 en Ia elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
11. Uso de los derivados pirrólicos de acuerdo con Ia reivindicación 2 en Ia elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
12. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con Ia reivindicación 1 y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
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