WO2007065588A1

WO2007065588A1 - Pharmazeutische zusammensetzungen mit cyclosporin

Info

Publication number: WO2007065588A1
Application number: PCT/EP2006/011459
Authority: WO
Inventors: Manfred Keller; Aslihan Akkar
Original assignee: Pari Pharma Gmbh
Priority date: 2005-12-06
Filing date: 2006-11-29
Publication date: 2007-06-14
Also published as: RU2421209C2; CA2639696A1; WO2007065588A8; RU2008125986A; CA2639696C; EP1968538A1; US9161963B2; DE102006051512A1; US20130177626A1; AU2006322342A1; AU2006322342B2; BRPI0619475B1; EP1968538B1; ATE554746T1; ES2382884T3; US20090169607A1; BRPI0619475B8; US9724382B2; BRPI0619475A2

Abstract

Die Erfindung betrifft flüssige pharmazeutische Zusammensetzungen, enthaltend: a) eine therapeutisch wirksame Dosis eines Cyclosporins; b) eine wässrige Trägerflüssigkeit; c) eine erste löslichkeitsverbessernde Substanz, ausgewählt aus der Gruppe der Phospholipide, und d) eine zweite löslichkeitsverbessernde Substanz, ausgewählt aus der Gruppe der nichtionischen Tenside. Das Cyclosporin ist bevorzugt liposomal solubilisiert. Die Zusammensetzung ist für die orale, parenterale, nasale, mukosale, topische und insbesondere für die pulmonale Anwendung in Form eines Aerosols geeignet.

Description

PHARMAZEUTISCHE ZUSAMMENSETZUNGEN MIT CYCLOSPORIN

TECHNISCHES GEBIET DER ERFINDUNG

Die Erfindung betrifft flüssige pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff Cyclosporin enthalten sowie Substanzen mit ähnlichen chemisch physikalischen und therapeutischen Eigenschaften und die für die orale, parenterale, nasale, okulare, mu- kosale, topische und insbesondere für die pulmonale Anwendung geeignet sind. In weiteren Aspekten werden Behältnisse zur Verpackung und Anwendung der Zubereitungen und Konzentrate davon beschrieben. Die Erfindung betrifft ferner die pharmazeutischen Verwendungen der Zubereitungen und ihren Einsatz zur Behandlung be- stimmter Erkrankungen.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Cyclosporin (auch Ciclosporin) ist ein zyklisches Oligopeptid mit immunsuppres- siver und calcineurinhemmender Wirkung. Es zeichnet sich durch einen selektiven und reversiblen Mechanismus der Immunsuppression aus. Es blockiert selektiv die Aktivie- rung von T-Lymphozyten über die Produktion von bestimmten Zytokinen, die an der Regulierung dieser T-Zellen beteiligt sind. Dabei wird vor allem die Synthese von Inter- leukin-2 gehemmt, wodurch gleichzeitig die Proliferation von zytotoxischen T- Lymphozyten, die z. B. für die Abstoßung von fremdem Gewebe verantwortlich sind, supprimiert wird. Cyclosporin wirkt intrazellulär durch Bindung an die so genannten Cyclophiline oder Immunophiline, die zur Familie der Cyclosporin-bindenden Proteine mit hoher Affinität gehören. Der Komplex aus Cyclosporin und Cyclophilin blockiert anschließend die Serin-Threonin-Phosphatase Calcineurin. Deren Aktivitätszustand steuert wiederum die Aktivierung von Transkriptionsfaktoren wie etwa NF-KappaB oder NFATp/c, welche bei der Aktivierung verschiedener Zytokin-Gene, darunter auch das lnterleukin-2, eine entscheidende Rolle spielen. Hierdurch werden die immunkompetenten Lymphozyten während der GO- oder G1 -Phase des Zellzyklus arretiert, da die für die Zellteilung essentiellen Proteine wie lnterleukin-2 nicht mehr produziert werden können. T-Helfer-Zellen, welche die Aktivität der für die Abstoßung verantwortlichen zytotoxischen T-Zellen erhöhen, sind der bevorzugte Angriffspunkt für Cyclosporin.

Daneben inhibiert Cyclosporin die Synthese und Freisetzung weiterer Lymphoki- ne, die für die Proliferation reifer zytotoxischer T-Lymphozyten und für weitere Funktio- nen der Lymphozyten zuständig sind. Die Fähigkeit von Cyclosporin, lnterleukin-2 zu blockieren, ist für seine klinischer Wirksamkeit maßgeblich: Transplantatempfänger, die ihre Transplantate gut tolerierten, zeichnen sich durch eine niedrige Produktion von lnterleukin-2 aus. Dagegen ist bei Patienten mit manifester Abstoßungsreaktion keine Hemmung der lnterleukin-2-Produktion feststellbar. Als erstes und bisher einziges Cyclosporin kam Cyclosporin A in den 80er Jahren auf den Markt. Chemisch wird Cyclosporin A definiert als Cyclo-[[(E)-(2S,3R,4R)-3- hydroxy-4-methyl-2-(methylamino)-6-octenoyl]-L-2-aminobutyryl-N-methylglycyl-N- methyl-L-leucyl-L-valyl-N-methyl-L-leucyl-L-alanyl-D-alanyl-N-methyl-L-leucyl-N- methyl-L-leucyl-N-methyl-L-valyl]. Durch seine Verfügbarkeit begann eine neue Ära in der Transplantationsmedizin, denn mit seiner Hilfe konnte der Anteil an transplantierten Organen, die langfristig funktionsfähig bleiben, ganz erheblich gesteigert werden.

Schon mit dem ersten Cyclosporin-Präparat (Sandimmun, Fa. Sandoz) konnte bei Nierentransplantationen die Erfolgsrate etwa verdoppelt werden. Eine neue orale Zubereitung von Cyclosporin (Neoral, Fa. Sandoz später Novartis) mit höherer und zuverlässigerer Bioverfügbarkeit erlaubte ab den 90er Jahren eine bessere Dosierung und eine weitere Steigerung der Erfolgsrate. Trotz einiger neuer Wirkstoffentwicklungen ist Cyclosporin immer noch ein häufig eingesetztes Mittel in der Transplantationsmedizin

Auch Lungentransplantationen können heute prinzipiell erfolgreich durchgeführt werden, wenn die Patienten mit Cyclosporin A behandelt werden. Seit der Einführung des Wirkstoffs in die Therapie ist die Zahl der weltweit durchgeführten Lungentransplantationen sprunghaft gestiegen. Dies betrifft sowohl Einzellungentransplantationen - also die Transplantation eines Lungenflügels - als auch Doppellungentransplantationen. Für eine Lungentransplantation kommen normalerweise Patienten mit einer Lun- generkrankung im Endstadium in Betracht, bei denen die medikamentöse Therapie ausgeschöpft und deren Lebenserwartung aufgrund der Erkrankung nur noch gering ist. Indikationen zur Transplantation einzelner Lungenflügel sind z. B. bestimmte Formen von Emphysem und Fibrose, etwa die idiopathische pulmonale Fibrose. Beide Lungenflügel werden transplantiert bei Mukoviszidose, primärem Lungenhochdruck, Emphysem mit Globalinsuffizienz, häufigen schweren Infektionen, sowie idiopathischer pulmonaler Fibrose mit Komplikation durch wiederholte Infektionen.

Im Falle einer erfolgreichen Lungentransplantation kann die Lebensqualität der Patienten fast wieder auf ein normales Niveau steigen. Im Gegensatz zu Herz-, Nierenoder Lebertransplantationen sind die Überlebenszeiten nach Lungentransplantation jedoch noch relativ gering und betragen im Durchschnitt nur etwa 5 Jahre. Dies könnte unter anderem damit zu tun haben, dass der Wirkstoff Cyclosporin nicht bei allen Patienten wirksam dosiert werden kann, sondern aufgrund von systemischen Nebenwir- kungen wie Nierenfunktionsstörungen, erhöhte Serumspiegel von Kreatinin u. Harnstoff, Nierenschädigung mit Strukturveränderungen, z. B. interstitielle Fibrose, Anstieg von Bilirubin und Leberenzymen im Serum, Hypertrichose, Tremor, Müdigkeit, Kopfschmerzen, Gingivitis hypertrophicans, gastrointestinale Beschwerden wie Appetitlosigkeit, Bauchschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, Durchfall, Gastritis, Gastroenteritis, Parästhesien, Brennen in Händen und Füßen, arterielle Hypertonie, Erhöhung der Blutfettwerte, Akne, Hautausschlag, allergische Hauterscheinungen, Hyperglykämien, A- nämie, Hyperurikämie, Gicht, Gewichtszunahme, Ödeme, Magenulzera, Konvulsionen, Menstruationsstörungen, Hyperkaliämie, Hypomagnesiämie, Hitzewallungen, Hautrötung, Juckreiz, Muskelkrämpfe, Muskelschmerzen, Myopathie u. v. a. m. Es wäre deshalb wünschenswert, Cyclosporin A beispielsweise nach einer Lungentransplantation, aber auch beim Vorliegen bestimmter anderer Indikationen, gezielt und gewebespezifisch zu verabreichen und dabei nur eine geringe systemische Bioverfügbarkeit des Wirkstoffs zu bewirken, um die Belastung der gesunden Gewebe mit dem Wirkstoff möglichst gering zu halten. Eine geeignete Darreichungsform könnte auch zur Behandlung und Prävention von Erkrankungen, wie z.B. Asthma, idiopathische pulmonale Fibrose, Sarcoidose, Alveolitis und parenchymalen Lungenerkrankungen eingesetzt werden (siehe dazu: Drugs for the treatment of respiratory diseases, edited by Domenico Spina, Clive p. Page et. al., Cambridge University Press, 2003, ISBN 0521773210). Neue therapeuti- sehe Aspekte ergeben sich auch in der topischen Behandlung von möglichen autoimmun induzierten Erkrankungen, wie Neurodermitis, Psoriasis, unspezifischen Ekzemen, Hautwucherungen oder -Veränderungen, und zur Behandlung nach Hauttransplantationen. rEin interessantes Einsatzgebiet ist auch die Ophthalmologie, z.B. zur Behandlung nach Hornhauttransplantationen, der Keratokonjunktivitis oder anderer entzündlicher Augenerkrankungen, die auf eine antientzündliche Therapie mit z.B. Steroiden zum Teil nur unzureichend ansprechen. Es eignet sich auch zur Behandlung von Keratiden bei Tieren, wie z.B. Hunden.

In der Tat hat es bereits Bestrebungen gegeben, Cyclosporin lokal zu verabrei- chen, z. B. in Form öliger Augentropfen 1% und 2% (Rezeptur gemäß deutschem Arzneimittel Codex unter Verwendung von raffiniertem Erdnussöl als Lösungsvermittler) oder eines Aerosols. Allerdings scheitert dieser Ansatz bisher regelmäßig vor allem an der sehr geringen Wasserlöslichkeit des Wirkstoffs, die eine effiziente Verabreichung erheblich erschwert. So kann im Fall einer pulmonalen Applikation aus Verträglich- keitsgründen nicht wie bei der oralen Verabreichung auf bestimmte Hilfsstoffe zur So- lubilisierung zurückgegriffen werden. Z. B. enthalten die Cyclosporin A enthaltenden Sandimmun Optoral Kapseln (Fa. Novartis) ein Mikroemulsionskonzentrat mit Ethanol, Propylenglykol und größeren Mengen an Tensiden und stellen somit eine Formulierung dar, die, würde man sie inhalieren, gravierende toxische Effekte hervorriefe. Auch die zur Infusion verfügbare Zubereitung Sandimmun® Infusionslösungskonzentrat (Fa. Novartis) ist nicht inhalierbar: Als Hilfsstoffe enthält sie ausschließlich Ethanol und Poly(oxyethylen)-40-Rizinusöl. Sie kann auch nur deshalb infundiert werden, weil sie zuvor mit einer 0,9 %igen Kochsalzlösung oder einer 5 %igen Glukoselösung zu verdünnen ist, und zwar im Verhältnis 1 : 20 bis 1 : 100. Dadurch entstehen wiederum große Applikationsvolumina, die zwar infundiert, jedoch nicht inhaliert werden können.

In WO 00/45834 wird die Inhalation von aerosolisiertem Cyclosporin zur Verhinderung oder Bekämpfung von Abstoßungsreaktionen nach Lungentransplantation vorgeschlagen. Es wird empfohlen, eine Wirkstoffdosis von 15 bis 30 mg Cyclosporin A in die Lunge einzubringen. Als Wirkstoffträger soll Propylenglykol verwendet werden, was in dieser hochkonzentrierten Form zu erheblichen Irritationen führt, weshalb vor der Applikation die Patienten eine Lidocianlösung zur Lokalanästhesie inhalieren. Aus neueren Untersuchungen(Akkar et. al, Posterpräsentation bei der NACF 2005) ist auch bekannt, daß Propylenglycol konzentrationsabhängig Calu-3 Zellen abtötet, die ein etabliertes Modell für Lungenepithelzellen darstellen (Steimer et al. Jour. Aerosol Med. 18 (2) pp.137-182, 2205). Aus physiologischen Gründen wäre deshalb eine überwiegend wässrige Zubereitung wünschenswert. In EP 0 294 239 A1 wird eine wässrige Zubereitung von Cyclosporin für die pulmonale Applikation beschrieben. Zur Erhöhung der Löslichkeit enthält die Zubereitung ein α-Cyclodextrin. Allerdings ist der Solubilisierungseffekt für eine effiziente Inhalationstherapie bei weitem nicht ausreichend: es werden lediglich Cyclosporingehalte zwi- sehen 0,1 und 2,0 mg/mL erzielt, insbesondere zwischen 0,2 und 1,5 mg/mL. Dies würde bedeuten, dass es mit einem konventionellen Vernebler ggf. Stunden dauern könnte, um auch nur eine einzige Dosis von 20 mg in die Lunge einzubringen.

In EP 0 504 760 A1 wird eine spezielle orthothrombische Kristallform von Cyclosporin A vorgestellt, die sich besonders für die Inhalation eignen soll. Allerdings wäre diese nur für Pulverinhalate oder für Zubereitung mit suspendiertem Wirkstoff relevant und nicht für wässrige Lösungen zur Verneblung. Pulverinhalatoren wiederum erfordern ein recht hohes Atemzugvolumen und sind wenig geeignet, um lungenkranke Patienten effizient zu behandeln. Darüber hinaus ist bekannt, daß Pulvermengen > 20 mg häufig zu Hustenreiz führen und der respirable Anteil bei den meisten Pulvermischun- gen mit Zunahme der Carrierkonzentration, wie z.B. Lactose, Trehalose, etc. abnimmt. Außerdem ist aufgrund aller vorliegenden in-vitro Daten fraglich, ob der sehr schwer lösliche Wirkstoff, wenn er in Form von suspendierten Teilchen in die Lunge gebracht wird, sich ausreichend in der geringen dort vorhandenen Menge an Schleim auflösen würde, was aber wiederum eine Voraussetzung seiner Wirksamkeit wäre. Prinzipiell Ähnliches gilt für die WO 99/42124, in der ein amorphes, flüssigkristallines Cyclosporin beschrieben wird.

WO 95/24892 beschreibt eine treibgashaltige Cyclosporinzubereitung, die in Form eines Dosieraerosols angewendet werden soll. Dosieraerosole stehen allerdings seit Jahren in der Kritik, da sie an der globalen Erwärmung beteiligt sind, und es ist fraglich, ob treibgashaltige Aerosole mittelfristig noch zulassungsfähig sein werden. Ähnliches gilt für WO 98/01147. Bekannt ist auch, daß der respirable Anteil abnimmt, wenn Wirkstoffe in Konzentrationen > 1 mg/ Hub appliziert werden und die Dosiergenauigkeit in-vivo sehr großen Schwankungen unterworfen ist. Bezugnehmend auf eine Lungendeposition von nur ca. 10% für ein Dosieraerosol kann gefolgert werden, daß mehr als 50 Hübe notwendig wären, um therapeutische relevante Cyclosporin Konzentrationen in die peripheren Bereiche der Lunge zu deponieren.

In WO 98/00111 wird eine liposomale Dispersion von Cyclosporin A zur Inhalation mit einen sehr hohen Phospholipidgehalt von bis zu 225 mg/mL vorgeschlagen, jedoch eine so hohe dynamische Viskosität hat, weshalb sie nicht effizient vernebelt werden kann. Ebenfalls eine liposomale Zubereitung von Cyclosporin A ist aus US 2003/0215494 bekannt: Hier besteht die Erfindung allerdings darin, dass mit einer solchen Zubereitung Lungenmetastasen inhibiert werden sollen. Zu den technischen Problemen der Bereitstellung einer für die Inhalation besser geeigneten Zubereitung des Wirkstoffs leistet das Dokuments keinen Beitrag. In dem US-Patent 5,958,378 werden liposomale Cyclosporin Zubereitungen für die Vernebelung beschrieben, deren Viskosität allerdings so hoch ist, daß diese nicht mit einem elektronischen Schwingmembran- vernebler, wie dem eFlow vernebelbar sind. Darüber hinaus wird für die Herstellung das organische Lösungsmittel Butanol verwendet, das trotz einem nachgeschalteten Lyophilisationsprozess nicht vollständig entfernt werden kann und Liposomen > 1 μm ergibt, die nicht mittels Sterilfiltration sterilisiert werden können und nur eine geringe Permeationsfähigkeit durch epitheliale Zellmembranen aufweisen.

Herkömmliche nicht-liposomale topische Zubereitungen, wie z.B. Cremes, Salben oder Lotionen zeigen bei Hauterkrankungen wie Neurodermitis oder Psorias eine unzu- reichende topische Wirksamkeit, weil durch Schuppung und Verhornung der Epidermis der Eindring- bzw. Penetrationseffekt unzureichend ist. Ebenso ist bekannt, dass in manchen Fällen bei diesen Erkrankungen auch liposomale Zubereitungen nicht automatisch eine verbesserte Hautpermeation zeigen, sondern in Abhängigkeit von der speziellen Zusammensetzung sowie der Größe und Beschaffenheit der Liposomen nur unwesentliche Verbesserungen bringen.

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung einer Cyclosporin enthaltenden Zusammensetzung, welche die Nachteile des Standes der Technik nicht aufweist.

Die Aufgabe wird gelöst durch die Bereitstellung der Zusammensetzung gemäß Anspruch 1. Weitere Lösungen und Ausführungsformen ergeben sich aus den übrigen Patentansprüchen.

Bei der erfindungsgemäßen Zusammensetzung handelt es sich um eine flüssige wässrige Zubereitung, die eine therapeutisch wirksame Dosis eines Cyclosporins, eine erste löslichkeitsverbessernde Substanz ausgewählt aus der Gruppe der Phospholipi- de, und eine zweite löslichkeitsverbessernde Substanz, ausgewählt aus der Gruppe der nichtionischen Tenside enthält. Ein besonders bevorzugtes Cyclosporin ist Cyclosporin A. Vorzugsweise handelt es sich um eine Zusammensetzung, die den Wirkstoff Cyc- losporin in liposomal solubilisierter Form enthält. Die Liposomen, die vor allem durch das enthaltene Phospholipid gebildet werden, sind vorzugsweise unilamellare Liposomen. Die Liposomen besitzen bevorzugt einen mittleren Durchmesser von maximal etwa 100 nm, gemessen als z-Average in einem Malvern ZetaSizer, und einem PoIy- dispersitätsindex von maximal etwa 0.5, vorzugsweise von maximal etwa 0.4.

Die Herstellung der Liposomen erfolgt vorzugsweise ohne Zuhilfenahme von organischen Lösungsmitteln mit Wasser als Trägerflüssigkeit. Die Zubereitung ist vorzugsweise weitgehend isoton, und hat keinen negativen Einfluss auf den transepithe- lialen elektrischen Widerstand (TEER) in einem Calu-3 Lungenepithel Zellmodell, der ein Maß für die Verträglichkeit von Arzneistoff und Formulierung in Bezug auf die Beeinflussung der zellulären Vitalität darstellt und führt auch in humanen Lungenzellen zu keiner signifikanten Erhöhung von lnterleukin-8, einem Entzündungsbiomarker.

Im Sinne dieser Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung eine Zu- bereitung aus mindestens einem Wirkstoff und mindestens einem Hilfsstoff, bei dem es sich im einfachsten Fall z. B. um einen Träger wie Wasser handeln kann. Ein Wirkstoff ist eine Substanz oder ein Substanzgemisch, die bzw. das geeignet ist, die Gesundheit oder das Wohlbefinden eines Tieres oder eines Menschen direkt oder indirekt zu fördern oder zu unterstützen. Ein Wirkstoff kann eine diagnostische, prophylaktische oder therapeutische Funktion erfüllen, meist im oder am Körper des Tieres oder des Menschen, manchmal jedoch auch in-vitro, z. B. im Kontakt mit entnommenen Körperbestandteilen wie Zellen oder Körperflüssigkeiten.

Im vorliegenden Falle handelt es sich bevorzugt um eine kolloidale wässrige Lösung ohne organische Lösungsmittel, bestehend aus unilamellaren Liposomen mit ei- nem Durchmesser von maximal 100 nm, in denen der Arzneistoff zumindest überwiegend gelöst vorliegt. Vorzugsweise ist Wasser das einzige in der Zubereitung enthaltene flüssige Lösemittel. Weiterhin ist bevorzugt, dass die Zubereitung in Form einer wässrigen Lösung oder einer wässrigen kolloidalen Lösung vorliegt, also als einphasiges flüssiges System. Ein solches System ist weitgehend frei von dispergierten TeN- chen, die eine größere als eine kolloidale Teilchengröße besitzen. Konventionsgemäß werden Teilchen unterhalb etwa 1 μm als kolloidale Teilchen angesehen, die keine eigenständige Phase darstellen und keine physikalische Phasengrenze mit sich bringen. Manchmal werden auch Teilchen im Größenbereich knapp oberhalb 1 μm noch als kolloidal angesehen. Vorzugsweise jedoch ist die Erfindung weitgehend frei von Partikeln, die eindeutig nicht mehr dem kolloidalen Spektrum zuzuordnen sind, also z. B. von Teilchen mit einem Durchmesser von 1 μm oder mehr.

Die Zusammensetzung enthält eine therapeutisch wirksame Dosis eines Cyc- losporins, bei dem es sich vorzugsweise um Cyclosporin A handelt. Cyclosporin A (auch Ciclosporin A) ist chemisch definiert als Cyclo-[[(E)-(2S,3R,4R)-3-hydroxy-4- methyl-2-(methylamino)-6-octenoyl]-L-2-aminobutyryl-N-methylglycyl-N-methyl-L- leucyl-L-valyl-N-methyl-L-leucyl-L-alanyl-D-alanyl-N-methyl-L-leucyl-N-methyl-L-leucyl- N-methyl-L-valyl], und ist ein zyklisches Peptid mit immunsuppressiver Wirkung. In diesem Zusammenhang schließt der Begriff "therapeutisch wirksam" auch eine prophy- laktische Wirksamkeit mit ein. Die therapeutische Dosis ist in Abhängigkeit vom jeweiligen Anwendungsfall zu definieren. Je nach Art und Schwere der Erkrankung, Applikationsweg sowie Körpergröße und Zustand des Patienten ist eine therapeutische Dosis in einer dem Fachmann bekannten Weise festzulegen. So sind einige gängige Dosierungshinweise z. B. in der Fachinformation zu den Handelspräparaten der Marke Sandimmun^® der Novartis Pharma AG enthalten, bei denen es sich ebenfalls um Zubereitungen mit Cyclosporin A handelt. Die Erfindung soll allerdings auch dazu dienen, Cyclosporin auf anderen als den bisherigen Applikationswegen zu verabreichen, insbesondere per Inhalation nach Verneblung der Zubereitung mit einem geeigneten Ver- nebler, und es wird notwendig sein, die Dosis des Wirkstoffs im Sinne dieser Anwen- düng nach gängigen Methoden zu adaptieren. Des weitern kann die erfindungsgemäße Zubereitung in derselben oder geringen Konzentrationen auch topisch auf die haut aufgetragen oder gesprüht werden oder in Auge und Ohr eingeträufelt werden.

Es wurde nun überraschend gefunden, dass Cyclosporin in einer wässrigen, flüssigen Zubereitung durch einen Gehalt an einem Phospholipid und einem nichtioni- sehen Tensid wirksam solubilisiert und gleichzeitig geschmacklich maskiert werden kann, fallweise sogar eine Verbesserung seiner Stabilität erfährt. Erfindungsgemäß enthält die Zusammensetzung also neben Cyclosporin und Wasser Phospholipid oder ein Gemisch von Phospholipiden, wie z.B. Lipoid S 100 oder Phospholipon G 90, und ein nichtionisches Tensid, bei dem es sich vorzugsweise um ein Polysorbat handelt, insbesondere um Polysorbat 80.

Diese zweite oberflächenaktive Substanz wirkt mit dem Phospholipid synergistisch und erhöht nochmals die echte oder kolloidale Wasserlöslichkeit des enthaltenen Cyclosporins in statistisch signifikantem Ausmaß. Ein Tensid ist eine amphiphile bzw. oberflächenaktive Substanz oder ein Substanzgemisch mit oberflächenaktiven Eigenschaften. Tenside besitzen mindestens je eine eher hydrophile und eine eher lipophile Molekülregion. Es gibt monomere, niedermolekulare Tenside und solche, die eine oligomere oder polymere Struktur haben. Des Weiteren werden ionische und nichtionische Tenside unterschieden. Beispiele für geeignete Tenside im Sinne der Erfindung sind Polyoxyethylenalkylether, Polyoxyethylensorbitanfettsäureester wie z. B. Polyoxyethylensorbitanoleat, Sorbitanfettsäureester, Poloxamere, Vitamin E-TPGS (D-α-Tocopheryl-polyethylenglykol-IOOO-succinat), und Tyloxapol.

Als Phospholipid sind gegenwärtig insbesondere Gemische von natürlichen oder angereicherten Phospholipiden bevorzugt, zum Beispiel Lecithine wie die Handelspro- dukte Phospholipon G 90, -100, oder Lipoid 90, S 100. Unter den nichtionischen Ten- siden sind Polysorbate und Vit. E-TPGS bevorzugt, besonders Polysorbat 80.

Phospholipide sind amphiphile Lipide, die Phosphor enthalten. Auch unter der Bezeichnung Phosphatide bekannt, besitzen sie in der Natur insbesondere als doppel- schichtbildende Bestandteile biologischer Membranen eine wichtige Rolle. Weit ver- breitet und auch zu pharmazeutischen Zwecken häufig eingesetzt sind solche

Phospholipide, die sich chemisch von der Phosphatidsäure ableiten. Bei dieser handelt es sich um ein (meist zweifach) acyliertes Glycerol-3-phosphat, bei dem die Fettsäurereste unterschiedlicher Länge sein können. Die Abkömmlinge der Phosphatidsäure sind z. B. die Phosphocholine oder Phosphatidylcholine, bei denen die Phosphatgrup- pe zusätzlich mit Cholin verestert ist, ferner Phosphatidylethanolamine, Phosphatidyli- nosite usw. Lecithine sind natürliche Mischungen verschiedener Phospholipide, die in der Regel einen hohen Anteil von Phosphatidylcholinen aufweisen. Bevorzugte Phospholipide sind erfindungsgemäß Lecithine sowie reine bzw. angereicherte

Phosphatidylcholine wie Dimyristoylphosphatidylcholin, Dipalmitoylphosphatidylcholin und Distearoylphosphatidylcholin.

In einer weiteren bevorzugten Ausführung der Erfindung können toxikologsich unbedenkliche Stabilisatoren und Antioxidantien, wie Natrium-Ethylen-Diamin-Tetra- Essigäure (Na-EDTA, Tocopherole), Isotonisierungszusätze wie Natriumchlorid, Man- nit, Trehalose oder Puffersalze (Citrat-, Carbonat, Phosphat-, Boratpuffer, etc), Ge- schmackskorrigentien wie Saccharin, Aspartam oder Minzöl zugegeben werden.

Die quantitative Zusammensetzung wird sich im Regelfall nach der Indikation richten. Im Allgemeinen ist der Cyclosporingehalt zwischen etwa 0.2 und 20 mg/ml, bevorzugt zwischen etwa 0.5 und 10 mg/ml, mehr bevorzugt zwischen etwa 1 und 5 mg/ml, am meisten bevorzugt zwischen etwa 1 und 4.5 mg/ml, zu wählen. Zur Behandlung von Asthma werden geringere Dosen diskutiert, die in einem Bereich von 0.25 - 5 mg/ml liegen können. Um die Vernbelungszeit mit einem Kompressor-, Düsen- oder elektronischen Vernebler, wie z.B. dem AerX, AeroNeb Go, Omron U22, oder eFlow möglichst kurz zu halten, ist es vorteilhaft, kleinvolumige Lösungen (< 2 ml) in höherer Konzentration zu verwenden. Auch für die besonders bevorzugte Verwendung der Zusammensetzung, nämlich als Inhalationslösung zur Prophylaxe oder Therapie von Lungentransplantat-Abstoßungsreaktionen, ist es wünschenswert und im Sinne einer ausreichenden Patienten-Compliance erforderlich, dass der Gehalt an Cyclosporin möglichst hoch und dadurch die Inhalationszeit möglichst kurz ist. Vorzugsweise sollte der Gehalt an Cyclosporin - dies gilt insbesondere für Cyclosporin A - bei mindestens etwa 0.5 mg/mL liegen, z. B. zwischen etwa 0.5 und 10 mg/ml. Besser noch ist ein Gehalt von etwa 1 - 5 mg/mL, was durch die Verwendung der Merkmale der Erfindung auch erzielbar ist. In einer weiterhin bevorzugten Ausführung hat die Zusammenset- zungen einen Gehalt an Cyclosporin A für die topische Anwendung auf der Haut oder zum Einträufeln in Auge und Ohr von 0.1 - 2% und zur Prophylaxe oder Behandlung respiratorischer Erkrankungen von 0.5 - 5 mg/mL oder auch mehr, z. B. einen Gehalt zwischen etwa 5 - 10 mg/mL,

Der erforderliche Gehalt der grenzflächenaktiven Hilfsstoffe richtet sich nach dem Gehalt an Cyclosporin A. Werden geringere Konzentrationen von 0.5 - 1% Wirkstoff solubilisiert, so kann der Lecithin/Tensid Anteil proportional reduziert werden. Im Allgemeinen sollte der Phospholipidgehalt der Zusammensetzung zwischen etwa 0.2 und etwa 15 Gew.-% liegen, und vorzugsweise im Bereich von etwa 1 bis etwa 8 Gew.-%.

Das nichtionische Tensid sollte mit einem Gehalt von etwa 0.01 bis etwa 5 Gew.- % enthalten sein, und vorzugsweise sollte der Gehalt im Bereich von 0.1 bis 2 Gew.-% liegen, insbesondere im Fall, dass ein Polysorbat ausgewählt wird, z. B. Polysorbat 80.

Das Gewichtsverhältnis zwischen dem Phospholipid bzw. der Phospholipidkom- ponente und dem nichtionischen Tensid ist besonders wichtig für die solubilisierbare Menge an Cyclosporin pro Volumeneinheit. Bevorzugt wird ein Verhältnis zwischen etwa 15 : 1 und 9 : 1 , insbesondere zwischen etwa 14 : 1 und 12 : 1 , also z. B. im Bereich von etwa 13 : 1. Diese Vorzugsbereiche gelten ebenfalls ganz besonders für den Fall, dass ein Polysorbat wie z. B. Polysorbat 80 als nichtionisches Tensid ausgewählt ist. Das Gewichtsverhältnis zwischen den beiden solubilisierenden Hilfsstoffkomp- nenten, also dem Phospholipid und dem nichtionischen Tensid einerseits, und dem Cyclosporin andererseits, ist im Allgemeinen zwischen etwa 5 : 1 und etwa 20 : 1 zu wählen. In gegenwärtig bevorzugten Ausführungen liegt das Verhältnis bei etwa 8 : 1 bis etwa 12 : 1 , z. B. bei etwa 10 : 1. Besonders bevorzugt ist eine Zusammensetzung, von Cyclosporin A zu dem Lipoid S100 / Tensid Gemisch von 1 : 9. mit einem Gehalt von bis zu 0.5 Gew.-% solubilisiertem Cyclosporin A₁ so daß sich ein Gemischverhätnis wie folgt ergibt: Cyclosporin : Lipoid S 100 : Polysorbat 80 = 1 : 9: 0.69 und man unila- millarrre Liposomen mit einem Cyclosporin Gehalt von insgesamt etwa 4 bis 6 Gew.-%, z. B. etwa 5 Gew.-% erthält.

Die untenstehende Tabelle zeigt einige Beispiele für Mengenverhältnisse, bei denen Cyclosporin A liposomal optimal solubilisiert werden kann:

Die erfindungsgemäße Zusammensetzung hat den Vorteil, dass sie einen relativ hohen Gehalt an einem schwerlöslichen Cyclosporin in solubilisierter Form enthalten kann. Gleichzeitig liegt das Cyclosporin geschmacksmaskiert vor, was für alle oralen, oromukosalen, nasalen sowie pulmonalen Anwendungsformen besonders vorteilhaft ist, so auch für die besonders bevorzugte Verwendung der Zubereitung zur Herstellung eines Arzneimittels zur topischen Therapie der Haut, an Auge, Nase und Ohr und besonders zur inhalativen Prophylaxe oder Behandlung von Lungentransplantat- Abstoßung.

Die Zusammensetzung kann weitere, für die jeweilige Anwendung sinnvolle und übliche pharmazeutische Hilfsstoffe enthalten. Geeignete Hilfsstoffe sind dem Fachmann bekannt. Optional können beispielsweise pH-Korrigenzien zum Einstellen des pH-Werts enthalten sein, wie etwa physiologisch akzeptable Basen, Säuren, oder Salze, ggf. auch als Puffermischung. Physiologisch akzeptabel bedeutet in diesem Zusammenhang nicht, dass einer der Hilfsstoffe allein und unverdünnt verträglich sein muss, was z. B. bei Natronlauge nicht der Fall wäre, sondern in seiner in der Zubereitung enthaltenen Konzentration.

Geeignete pH-Korrigenzien zum Einstellen des pH-Werts sind auch in Berücksichtigung des beabsichtigten Applikationsweges auszuwählen. Beispiele für ggf. ge- eignete Hilfsstoffe dieser Gruppe sind Natronlauge, basische Salze von Natrium, Calcium, oder Magnesium wie z. B. Citrate, Phosphate, Acetate, Tartrate, Laktate usw., Aminosäuren, saure Salze wie Hydrogenphosphate oder Dihydrogenphosphate insbesondere des Natriums, ferner organische und anorganische Säuren wie z. B. Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Citronensäure, Cromoglycinsäure, Essigsäure, Milchsäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Lysin, Methionin, saure Hydrogenphosphate mit Natrium oder Kalium usw.

In einer der vorteilhaften Ausführungen der Erfindung ist die Zusammensetzung - mit oder ohne pH-Korrigenz - auf einen neutralen oder sauren pH-Wert eingestellt. Vorzugsweise liegt der pH-Wert im Bereich von maximal etwa 8,5, oder im Bereich von etwa 2,5 bis etwa 7,5. Wenn z. B. Für eine pulmonale oder parenterale Applikation ist ein pH-Wert von etwa 4 bis etwa 7,5 zu bevorzugen, sofern sich dieser mit anderen Notwendigkeiten der jeweiligen Formulierung, wie z.B Stabilitätsaspekte vereinbaren lässt. Besonders bevorzugt ist eine Zusammensetzung, die mit einem Phosphatpuffer im Bereich von pH 6.7 -7.5 und insbesondere im Bereich von pH 6.7 bis 7.3 gepuffert ist, wodurch die Stablität der liposomalen Formulierung deutlich verbessert und das Auftreten von unerwünschtem Lysolecithin im Laufe der Lagerung wirksam reduziert werden kann (siehe Beispiel 4).

Des Weiteren kann die Zubereitung osmotisch aktive Hilfsstoffe zur Einstellung einer gewünschten Osmolalität enthalten, wie sie für bestimmte Anwendungen wie für die parenterale Injektion oder für die Inhalation oder sonstige topische Applikation im Sinne einer guten Verträglichkeit wichtig ist. Derartige Hilfsstoffe werden häufig als Isotonisierungsmittel bezeichnet, auch wenn ihr Zusatz nicht unbedingt zu Isotonie führen muss, sondern auch nur zu einer Annäherung an die physiologische Osmolalität mit der Zielsetzung einer best möglichen physiologischen Verträglichkeit. Ein besonders häufig verwendetes Isotonisierungsmittel ist Natriumchlorid, doch ist es nicht in jedem Fall geeignet. In einer der vorteilhaften Ausführungen der Erfindung ist kein Kochsalz enthalten, wobei natürlich die ubiquitären Natriumchloridmengen, die auch in pharmazeutischen Wasserqualitäten enthalten sein können, ausge- nommen sind. In einer anderen Ausführung ist als Isotonisierungsmittel ein weitgehend neutrales Salz in der Zubereitung enthalten, bei dem es sich nicht um Kochsalz handelt, sondern z. B. um ein Natriumsulfat oder Natriumphosphat. In diesem Falle sind allerdings andere Salze als Natriumsalze noch mehr zu bevorzugen. So ist von be- stimmten Calcium- und Magnesiumsalzen bekannt, dass sie bei der Inhalation von Wirkstofflösungen einen positiven bzw. unterstützenden Einfluss haben können, möglicherweise weil sie selbst den lokalen Irritationen durch die Applikation entgegenwirken und einen bronchodilatatorischen Effekt ausüben, der zur Zeit in der klinischen Literatur postuliert wird (z. B. R. Hughes et al., Lancet. 2003; 361 (9375): 2114-7), und/oder weil sie die Haftung von Keimen an den Proteoglykanen der Schleimhäute des Respirationstrakts hemmen, so dass die mucociliäre Clearance als natürlicher Abwehrmechanismus des Organismus gegen die Erreger indirekt unterstützt wird (K. W. Tsang et al., Eur. Resp. 2003, 21 , 932-938). Vorteilhaft ist z. B. Magnesiumsulfat, das eine ausgezeichnete pulmonale Verträglichkeit besitzt und bedenkenlos inhaliert werden kann, sowie Calciumchlorid (1-10 mMol)

Alternativ zu den neutralen Mineralsalzen können als Isotonisierungsmittel auch physiologisch unbedenkliche organische Hilfsstoffe eingesetzt werden. Besonders geeignet sind wasserlösliche Substanzen mit relativ geringer Molmasse, z. B. mit einer Molmasse von unter 300, oder besser noch unter 200, und mit einer entsprechend ho- hen osmotischen Aktivität. Beispiele für derartige Hilfsstoffe sind Zucker und Zuckeralkohole, insbesondere Mannitol und Sorbitol, Xylitol, Trehalose,

Die Einsatzmenge des gewählten Isotonisierungsmittels ist jeweils so abzustimmen, dass sich unter Berücksichtigung der übrigen in der Zusammensetzung enthaltenden Bestandteile eine Osmolalität von mindestens etwa 150 mOsmol/l ergibt. Wei- terhin bevorzugt ist eine Osmolalität im Bereich von etwa 150 bis 800 mθsmol/l. In weiteren Ausführungen hat die Zubereitung eine Osmolalität von etwa 250 bis etwa 600 mθsmol/l, oder von etwa 250 bis 400 mθsmol/l.

Wenn allerdings ein möglichst hoher Gehalt an Cyclosporin angestrebt wird und demzufolge auch ein relativ hoher Gehalt an löslichkeitsverbessernden Hilfsstoffen eingesetzt werden muss, ist anzunehmen, dass auch ohne den Zusatz eines separaten Isotonisierungsmittel die Osmolalität der Zusammensetzung bereits im gewünschten Bereich oder sogar darüber liegen kann, so dass die Verwendung eines Isotonisierungsmittels nicht notwendig ist. Da in der Zusammensetzung Tenside als löslichkeitsverbessernde Substanzen enthalten sind, hat dieses natürlich auch einen Einfluss auf die Oberflächenspannung der Zubereitung. Diese kann vor allem für eine pulmonale Anwendung von Bedeutung sein. In einer bevorzugten Ausführung besitzt die Zubereitung unter Normalbedingun- gen, d. h. bei Raumtemperatur und unter normalem Druck eine Oberflächenspannung von etwa 25 bis 75 mN/m, um eine effiziente Verneblung mit einem hohen Anteil an lungengängigen Tröpfchen mit einem Durchmesser von höchstens 5 μm mit Hilfe gängiger Vernebler zu erlauben.

Soll die Zubereitung allerdings für den Einsatz in bestimmten Verneblertypen an- gepasst werden, kann die Oberflächenspannung auf bestimmte Werte, z. B. auf etwa 30 bis etwa 65 mN/m eingestellt werden. Noch mehr ist eine Oberflächenspannung von etwa 30 bis etwa 45 mN/m gegenwärtig bevorzugt, was aber nicht immer erreicht werden kann, wenn andere Formulierungsparameter im Vordergrund stehen. Dagegen sollte eine Oberflächenspannung von ca. 25 mN/m nicht unterschritten werden. Die durch ein Tensid herabgesetzte Oberflächenspannung kann dazu beitragen, die Spreitung des Aerosols in der Lunge zu verbessern, was wiederum einen positiven Einfluss auf die Wirksamkeit der Anwendung haben kann.

Auch die Viskosität der Zusammensetzung kann im Falle einer Inhalativen Anwendung von Bedeutung sein. In einer der für eine Verneblung bevorzugten Ausfüh- rungen besitzt die Zusammensetzung der Erfindung unter Normalbedingungen eine dynamische Viskosität von etwa 1 ,0 bis 3,0 mPa-s. In einer weiteren bevorzugten Ausführung liegt die Viskosität zwischen etwa 1 ,2 und 2 mPa-s.

Des Weiteren kann die Zubereitung weitere übliche Hilfsstoffe wir Stabilisatoren, Antioxidantien, Geschmacksverbesserer, Aromen, Süßungsmittel, Farbstoffe usw. ent- halten, wie sie dem Fachmann zur Formulierung von Zubereitungen je nach Anwendungszweck zur Verfügung stehen.

Die liposomale erfindungsgemäße Zubereitung kann durch Hochdruckhomogeni- sation hergestellt werden. Beispielsweise können die wasserlöslichen Komponenten in Form einer wässrigen Lösung vorgelegt werden, in der das Cyclosporin dispergiert wird und danach in einem Hochdruckhomensiationsprozess in Liposomen überführt werden, wobei durch Einstellung von Druck und Zyklenzahl die Größe der Liposomen und der Polydispersitätsindex einstellbar sind. Die Abfüllung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung oder des Konzentrats erfolgt vorzugsweise aseptisch in Einzel- oder Mehrdosenbehältnisse. Geeignete Primärverpackungen sind z. B. Polypropylen- oder Polyethylen-Vials (PP-/PE-Vials) und Cycloolefin-Copolymer-Blister (COC-Blister) oder auch Polytherephtalat (PET-Blister) Alternativ dazu können auch Behältnisse aus anderen Polymeren oder Copolymeren Anwendung finden, die sich für einen Blow-Fill-Seal-Prozess oder thermoplastisches Verfahren eignen. Versiegelte Kunststoffbehältnisse wie PP- oder PE-Vials lassen sich beispielsweise vorteilhaft mit dem Blow-Fill-Seal-Verfahren in einem integrierten Pro- zess formen, befallen und versiegeln. Die so hergestellten Behältnisse sind insbeson- dere für flüssige Füllgüter mit einem Volumen ab etwa 0,2 ml geeignet und eigenen sich in kleinen Volumina zum Einträufeln in Auge und Ohr. Für Anwendungen mit einem Vernebler oder zur topischen Anwendung auf der Haut, bei denen unterschiedliche Wirktoffmengen benötigt werden, können idealerweise Volumina von 0.2 - 5 ml Inhalt abgefüllt werden, vorzugsweise 0.5 bis 5 ml. Besonders patientenfreundlich kön- nen sie mit einem Verschluss geformt werden, der durch Drehen oder Abknicken entfernbar ist und durch eine besondere Ausformung nicht scharfkantig ist und eine tropfenförmige, gut dosierbare Entnahme erlaubt.

Alternativ kann die Öffnung, durch die der flüssige Inhalt entnehmbar ist, auch so ausgestaltet sein, dass sie auf einen Luer-Anschluss oder Luer-Lock-Anschluss passt. So kann die Öffnung rund gestaltet sein und einen Durchmesser besitzen, der weitgehend dem Außendurchmesser eines männlichen Luer-Anschlusses entspricht. Auf diese Weise könnte eine gewöhnliche Spritze mit Luer-Anschluss mit dem Behältnis schlüssig verbunden werden, beispielsweise um den Inhalt des Behältnisses aufzunehmen und in einen Vernebler zu transferieren, oder um den Inhalt des Behältnisses mit dem Inhalt der Spritze zu mischen und anschließend in einen Vernebler zu geben. Als weitere Alternative kann vorgesehen sein, dass das Kunststoffbehältnis so beschaffen ist, dass es nach Entfernung des Verschlusselements mit einem für die Zufuhr von Flüssigkeit vorgesehenen Anschlussstück eines entsprechend adaptierten Ver- neblers weitgehend schlüssig verbindbar ist, wodurch eine direkte Einfüllung der Zube- reitung in das Reservoir des Inhalators ermöglicht ist.

Kunststoffbehältnisse dieser Art sind weiterhin deshalb vorteilhaft, weil sie leicht mit Prägungen versehen werden können, die auch blinden Menschen die Identifikation eines Produktes erlauben. Hierdurch kann einerseits auf Papieretiketten verzichtet werden, was wünschenswert ist, um die Migration von Bestandteilen des Klebers, des Pa- piers oder der Druckfarbe durch die Behältniswand in die Zubereitung zu vermeiden. Andererseits können wichtige Information durch eine solche Prägung auch sehbehinderten Patienten zugänglich gemacht werden. Die Prägung kann verschiedene Informationen enthalten, z. B. eine Chargenbezeichnung, ein Haltbarkeitsdatum, eine Produktbezeichnung, Hinweise für die Anwendung, oder auch eine oder mehrere VoIu- men- oder Dosismarken. Insbesondere für pädiatrische Patienten, bei denen oftmals eine flexible Dosierung nach Alter oder Körpergröße wünschenswert ist, kann eine Mehrzahl von Volumenmarken zur erleichterten Entnahme der gewünschten Dosis ohne weitere Hilfsmittel dienen, wodurch das Risiko von Dosierungsfehlern herabgesetzt werden kann. In einer weiteren Variante der Erfindung sind Mehrdosenbehältnisse vorgesehen, die eine Zubereitung wie oben beschrieben enthalten und die des Weiteren so gestaltet sind, dass sie die aseptische Entnahme einer Einzeldosis gestatten. Das Mehrdosenbehältnis kann also wie ein Vial oder eine Infusionsflasche ein Glas- bzw. Kunststoffbehältnis mit einem mit einer Kanüle durchstechbaren Verschluss aus einem Elasto- mer sein, oder es kann sich um ein komplex aufgebautes Gefäß mit Dosier- und Entnahmevorrichtung handeln., wie dies von konservierungsmittelfreien Nasensprays her bekannt ist, so daß die erfindungsgemässe Zubereitung nicht konserviert werden muß und in die Nase oder andere körperhöhlen eingesprüht oder auf die Haut aufgesprüht werden kann, wie das von der Applikation zur Behandlung von Fußpilz bekannt ist. Ein konservierungsmittelfreies Pumpspray bietet gerade bei Behandlung der Psoriasis oder Neurodermitis große Vorteile, weil man damit die Liposomen recht homogen und hy- giensich einwandfrei auf die beschädigte und entzündete Haut aufbringen kann.

Einer der besonderen Vorteile von Mehrdosenbehältnissen im Zusammenhang mit Zubereitungen für die Inhalation ist die Flexibilität, die problemlos eine individuelle Dosisanpassung gestattet, ohne dass dadurch wesentliche Mengen an Zubereitung verworfen werden müssen, so wie dies bei Einzeldosisbehältnissen nach deren öffnen der Fall ist. In Krankenhäusern und Pflegeeinrichtungen können auf diese Weise Patienten durch individuelle Dosisanpassung gleichzeitig besonders effizient und potentiell kostengünstig versorgt werden. Ebenso lassen sich spezielle Anforderungen an die Therapie einzelner Patienten besonders leicht berücksichtigen.

Wenn die Zusammensetzung im Endbehältnis nicht sterilisiert werden kann, ist sie vorzugsweise durch ein aseptisches Verfahren in die Behältnisse abzufüllen. Für die bevorzugt vorgesehene Aerosolisierung der Zubereitung kann grundsätzlich jeder in der Therapie einsetzbare Vernebler verwendet werden. Die altbewährten Düsenvemebler sind prinzipiell ebenso geeignet wie neuere Ultraschall- oder piezoelektrische Vernebler. Der Vorteil der Düsenvemebler ist, dass sie bereits einen sehr großen Verbreitungsgrad besitzen und relativ kostengünstig zu beschaffen sind. Viele Patienten sind bereits im Umgang mit gängigen Düsenvemebler versiert. Einige Düsenvemebler der jüngeren Generation (z. B. PARI LC PLUS® und PARI LC SPRINT®) verwenden Mechanismen, mit denen die Verneblung an den Atmungsrhythmus des Patienten angepasst wird, so dass ein möglichst großer Anteil des erzeugten Aerosols auch für die Inhalation verfügbar ist.

Besonders bevorzugt jedoch ist die Aerosolisierung der Zubereitung mit Hilfe eines modernen piezoelektrischen oder elektronischen Schwingmembranverneblers, insbesondere mit einem Vernebler wie dem Typ eFlow™ der Firma PARI. Der besondere Vorteil für den Patienten bei der Verwendung dieses Geräts (oder eines ähnlichen Geräts) ist die gegenüber alternativen Methoden erheblich verkürzte Inhalationszeit. Das Gerät aerosolisiert nicht nur eine größere Menge an Flüssigkeit pro Zeiteinheit, es erzeugt auch ein qualitativ besonders hochwertiges Aerosol mit hohem Anteil an kleinen, lungengängigen Aerosoltröpfchen mit einem engen Tröpfchenverteilungsspektrum sprektrum, die typischweise eine geometrischen Standardabweichung < 1.6 aufweisen. Andere potentiell geeignete Schwingmembranvemebler sind z. B. die Geräte AeroNeb Pro oder -Go, ProDose, oder I-Neb.

Entscheidend für den therapeutischen Erfolg ist die zuverlässige und adäquate Verfügbarkeit des Wirkstoffs in der Lunge. Patientengerecht ist es, dies innerhalb eines akzeptablen Zeitraums zu bewirken. Von Patienten werden möglichst kurze Inhalati- onszeiten bevorzugt, und Inhalationszeiten von mehr als etwa 10 Minuten könnten die Compliance bereits negativ beeinflussen. Sinnvoll ist es auch, die Inhalation entweder durch kontinuierliche Inhalation oder mittels einem "breath trigger" oder einem "guided breathing pattern" vorzunehmen, wie dies z.B. mit einem Vernebler vom Typ eFlow in Verbindung mit einem Akita Inhalationsgerät (Fa. InaMed) möglich ist. Besonders be- vorzugt ist ein Atemmanöver das sich durch eine lansame tiefe Inhalation über 4 -10 sec erstreckt, einem Anhalten des Atems bis zu 10 Sekunden und einem raschen Ausatmen.

Wie aus Beispiel 4 und Figur 1 ersichtlich ist, wird der Wirkstoff sehr uniform in der Lunge verteilt, wobei jeweils ca. 50% zentral und peripher deponiert werden, was theapeutisch sinnvoll ist. Würde zuviel peripher deponiert werden, käme es zu einer verstärkten systemsichen Absorption, die bekannterweise in hohen Konzentrationen zu Nierenschäden führen kann. Idealerweise sollte das Verhältnis von zentraler zu peripherer Deposition abhängig vom Krankheitsbild z.B. zur Verhinderung einer bronchiol- tis obliterans und nachgeschalteten Abstoßung transplantierten lungen bei einem Verhältnis von zentral zu peripher = 30 : 70 bzw. 50 : 50 bzw. 70 : 30 liegen.

Doch auch die nasale, orale, ophthalmische, mukosale, parenterale oder topische Anwendung der Zusammensetzung der Erfindung kann im Einzelfall vorteilhaft sein. Die Applikation kann durch Auftragen, Einträufeln, Aufsprühen oder Einsprühen der Zusammensetzung erfolgen, die sich in ersten Humanversuchen als ausgesprochen gut verträglich herausgestellt hat.

Aufgrund seiner immunsuppressiven Wirkung ist Cyclosporin in ganz unterschiedlichen Indikation einsetzbar, z. B. für die Prophylaxe und Therapie von Transplantat-Abstoßung nach ganz unterschiedlichen Transplantationen (Niere, Leber, Herz, Herz-Lunge, Lunge, Pankreas, Knochenmark usw.), Prophylaxe und Therapie von Graft-versus-Host-Krankheit, Therapie der endogenen Uveitis, der manifesten, nichtinfektiösen Uveitis intermedia oder posterior, Behcet-Uveitis, der schweren und resistenten Psoriasis, insbesondere vom Plaque-Typ, beim nephrotischen Syndrom infolge glomerulärer Krankheiten wie glomerulärer Minimalveränderungen, fokaler segmenta- ler Glomerulosklerose oder membranöser Glomerulonephritis, der schweren aktiven rheumatoiden Arthritis, therapieresistenten Formen einer länger bestehenden atopischen Dermatitis sowie anderen Erkrankungen, die eine lokale oder systemische Immunsuppression angezeigt erscheinen lassen, wie z.B. bei der Behandlung von Asthma oder bei Augenerkrankungen. Neueren Erkenntnissen zufolge wirkst Cyclosporin auch als Pump-efflux inhibitor und verhindert dadurch, daß Krebszellen cytostatisch wirksame Medikamete herauspumpen.

Eine weitere Anwendung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung ist die Prophylaxe oder Behandlung von Erkrankungen der Haut, insbesondere von Psoriasis, Neurodermitis, Ekzemen, oder Abstoßungsreaktionen nach einer Hauttransplantation. Die Behandlung kann z. B. dadurch geschehen, dass die Zusammensetzung in ein Pumpspray abgefüllt und als Spray auf die erkrankte Haut aufgetragen wird.

Wie weiter oben beschrieben, ist eine der besonders bevorzugten Anwendungen der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen die Prophylaxe und Therapie der Lun- gentransplantat-Abstoßung sowie das Verhindern bzw. Verzögern des Auftretens einer Boncholitis obliterans. Diese Erkrankung tritt in vielen Fällen auch nach einer Knochenmarks- oder Stammzelltransplantation auf, weshalb eine Inhalation als besonders geeignet erachtet wird, Krankheitsbilder, wie z.B: Bronchiolitis obliterans zu verhindern bzw. zu behandeln. Für diese Anwendung ist die Zusammensetzung in Form eines Aerosols zu inhalieren. Die lokale Therapie hat gegenüber einer systemischen (z. B. über die orale Verabreichung) den Vorteil, dass der Wirkstoff gezielt zum Wirkort gebracht wird, was einerseits die Wirksamkeit erhöhen kann, andererseits die systemische Belastung des Organismus herabsetzt und die Verträglichkeit der Therapie ver- bessert. Durch die liposomale Verpackung des Wirkstoffs und die Größe der Liposomen von maximal 100 nm im Mittel kann der Wirkstoff aus den Luftwegen durch die epitheliale Lungenzellschicht besonders gut in das Lungengewebe permeieren und dort wirksam werden. In einer weiteren Variante werden Liposomen mit einem mittleren Durchmesser von 30 bis 80 nm bevorzugt. Um eine lokale Inhalationstherapie der Lunge effizient zu gestalten, sollten die oben diskutierten Vorzugsmerkmale unter Berücksichtigung des Verneblers, der zur Applikation bestimmt ist, so ausgewählt werden, dass die Erzeugung eines Aerosol mit einer möglichst großen Fraktion an lungengängigen Tröpfchen bevorzugt wird. Insbesondere der Anteil der Tröpfchen unterhalb einer Grenze von etwa 2-4 μm Durchmes- ser sollte so groß wie möglich sein. Besonders bevorzugt ist ein elektronischer

Schwingmebranvemebler mit einer perforierten Edelstahlmembran, die ca. 4000 Poren einer definierten Größe enthält mit der ein Aerosol mit definiertem Partikelspektrum schnell und effizient erzeugt werden kann (Martin Knoch & Manfred Keller: The custo- mized electronic nebuliser: a new category of liquid aerosol drug delivery Systems. Ex- pert Opin. Drug DeNv. (2005) 2 (2): 377-390). Die erfindungsgemäße liposomale Zubereitung kann damit ohne Zerstörung der Liposomen entweder in einem kontinuierlichen oder Atemzug-gesteuerten oder -geführten Aerosolerzeugungsmodus oder einer über eine Beatmungsmaschine so inhaliert werden, daß ein sehr hoher Wirkstoffanteil in kurzer Zeit gezielt in der Lunge deponiert werden kann. Der Vorteil dieses Inhalations- Systems liegt vor allem darin, daß die Dosis, die vom Mundstück inhaliert werden kann größer 50% ist und bis zu 98% der erzeugten Tröpfchen einen Durchmesser kleiner 5 μm und bis zu 80% einen mittleren geometrischen Durchmesser kleiner 3.5 μm aufweisen, so daß der Wirkstoff gezielt in die distalen Bereiche der Lunge mit höherer Effizienz als bei Kompressor-Düsenvemeblen deponiert werden kann. Die Zusammen- setzung kann einen oder mehrere weitere Wirkstoffe enthalten. Ein zusätzlicher Wirk- Stoff kann beispielsweise aus der Gruppe der Immunmodulatoren, Interferone, steroidale und nicht steroidale anti-inflammatorisiche Wirkstoffe, Heparinoide, Beta- agonisten, Anticholinergika, Endothelin- und Phosphordiesterasehemmer, Antibiotika, Antimykotika, antiviralen Substanzen und Zytostatika ausgewählt sein. Alternativ kann eine Kombinationstherapie dadurch erreicht werden, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung als Wirkstoff nur Cyclosporin enthält, aber in Kombination mit einer anderen Zubereitung verabreicht wird, die einen anderen Wirkstoff enthält.

Die Verabreichung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung, insbesondere die inhalative Verabreichung, kann ohne Prämedikation erfolgen. Insbesondere kann die Verabreichung ohne Prämedikation mit Lokalanästhetika wie z.B. Lidocain und/oder ohne Prämedikation mit Bronchiodilatoren wie z.B. Salbutamol erfolgen.

Vorzugsweise ist die Zusammensetzung steril, insbesondere wenn sie für die pulmonale, parenterale oder ophthalmische Applikation bestimmt ist. Ferner ist sie vorzugsweise weitgehend frei von festen Partikeln, die größer als etwa 3 μm sind. Es ist vorteilhaft, wenn z. B. der gesamte enthaltene Wirkstoff in liposomal solubilisierter Form vorliegt. Dementsprechend sollten feste Wirkstoffpartikel weitgehend abwesend sein, vor allem feste Wirkstoffpartikel mit einem Durchmesser von mehr als etwa 500 nm. Vorteilhaft sind auch Zusammensetzungen, die weitgehend frei von festen Partikeln irgendeiner Substanz mit einem Durchmesser von mehr als 500 nm sind. Wie bereits erwähnt, kann die Zusammensetzung als Arzneimittel verwendet werden, z. B. zur Prophylaxe oder Behandlung von Autoimmunerkrankungen, Hautkrankheiten, nach Transpianationen oder Erkrankungen der Sinnesorgane (Augen, Nase, Ohr), Befindlichkeitsstörungen, und Lungenerkrankungen, z.B. Asthma, chronisch obstruktiver Bronchitis, parenchymalen, fibrotischen und interstitiellen Lungener- krankungen oder -entzündungen, Lungenkrebs, und vorzugsweise zur Prävention und Behandlung akuter oder chronischer Transplantat-Abstoßungsreaktionen und deren Folgeerkrankungen wie Bronchiolitis obliterans, insbesondere nach Lungen-, Herz-, Knochenmarks-, oder Stammzelltransplantation, besonders bevorzugt nach Lungentransplantation. Sie kann ferner zur Wirksamkeitsverbesserung anderer Medikamente, insbesondere von Zytostatika verwendet werden, bei denen durch Cyclosporin durch den "Efflux pump inhibition' -Effekt ein additiver oder synergistischer Effekt erreichbar ist. Die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung weist u.a. folgende Vorteile auf:

- Die Herstellung der Liposomen in einem Einstufenprozess kann auch im Großmassstab bis 1000 kg mittels Hochdruckhomogenisation erfolgen und eine Ent- keimung durch eine nachgeschaltete Sterilfiltration mit einem Porendurchmesser von 0.22 μm ist möglich.

Die Liposomen können über die Atemwege gut in das Lungenegewebe diffundieren.

- Es muß nur 1 - 3 mal täglich und besonders bevorzugt nur 1 - 2 täglich inhaliert werden, um einen therapeutischen Effekt zu erreichen.

Die Zusammensetzung weist einen Retardeffekt am Zielorgan auf und muß in bestimmten Fällen nur 1 - 4 mal wöchentlich und besonders bevorzugt nur jeden zweiten Tag inhaliert werden.

- Die Zusammensetzung kann bei Kühlschranklagerung (4 - 8°C) mindestens 12 Monate und besonders bevorzugt bis zu 36 Monaten gelagert werden.

- Die Zusammensetzung kann auch in Beatmungsmaschinen oder in Verbinung mit Systemen für ein gesteuertes Atemmanöver, wie der eFlow-Akita eingesetzt werden.

Die Erfindung soll des Weiteren in einigen wichtigen Aspekten und Ausführungen durch die nachfolgenden Ausführungsbeispiele illustriert werden. Weitere Ausführungen sind dem Fachmann anhand der Beschreibung und der Patentansprüche zugänglich.

Beispiel 1 : Lösung zur topischen Behandlung zum Aufsprühen auf die Haut

Die in der voranstehenden Tabelle angegebenen wasserlöslichen Hilfsstoffe (Natriumchlorid, Natriumeitrat, Zitronensäure und Tween 80) werden in einen 1 Liter- Erlenmeyerkolben eingewogen und in Wasser unter Rühren gelöst, danach wird das Lecithin (Phospholipon G 90), Dexpanthenol, Tocopherolacetat und der Wirkstoff (Cyclosporin A) zugesetzt und unter Rühren dispergiert. Anschließend wird die Mischung ca. 10 min im Ultraturax homogenisiert und in einen Hochdruckhomogenisator überführt. Bei ca. 1500 bar wird diese Mischung solange homogenisert bis man eine kolloidale Zubereitung erhält, deren Tröpfchen- bzw. Partikelgröße in einem Malvern Zetasi- zer einen Druchmesser < 100 nm und einen Polydispersitätsindex < 0.4 aufweist. Die kolloidale Zubereitung wird danach in einer Sterilbank sterilfiltriert und je 20 ml werden in vorsterilisierte Braunglasfläschchen abgefüllt und anschließend mit einer Pumpsprayaufsatz, der eine sterile Mehrfachentnahme ermöglicht, verschlossen.

Beispiel 2: Kolloidale Lösung zur Inhalation Eine kolloidale Zubereitung aus den in der nachfolgenden Tabelle angegebenen Bestandteilen wird wie oben beschrieben hergestellt und nach Sterilfiltration werden jeweils 4 ml in sterile 6 ml Braunglasfläschchen abgefüllt und verschlossen. Der Inhalt wird dann bei Bedarf in das Medikamentenreservoir eines elektronischen Verneblers, wie z.B. den eFlow der Fa. PARI, überführt und das entstehende Aerosol kann dann inhaliert werden, um z.B. Abstossungreaktionen nach Lungentransplantationen oder die Ausbildung einer Bronchiolitis obliterans zu vermeiden.

Der pH-Wert der klaren, schwach opaleszenten liposomalen Lösung bei 20 "C betrug 4.5, die Osmalität 0.32 osmol/kg. Die dynamische Viskosität wurde mit 1.35 mPas er- mittelt, die Oberflächenspannung betrug 36 mN/m.

Die kolloidale Lösung wurde mit einem speziell angepassten Schwingmembranver- nebler vom Typ PARI eFlow aerosolisiert und das Aerosol mit einem PARI Atemzugsimulator charakterisiert. Dabei wurden zwei unterschiedliche Inhalationsmanöver getestet, nämlich das eines Kindes (16 Atemzüge pro Minute mit einem Volumen von je 225 ml, Verhältnis Inhalation zu Exhalation von 40 : 60) und das eines Erwachsenen (15 Atemzüge pro Minute mit einem Volumen von je 500 ml, Verhältnis Inhalation zu Exhalation von 1 : 1). Die Aerosolcharakteristika sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:

Erwachsen-Atemmuster Kinder-Atemmuster

(15 Atemzüge ä 500 ml, In(16 Atemzüge a 225 ml, halation : Exhalation = Inhalation : Exhalation =

50 : 50) 40 : 60)

StandardabweiStandardab¬

Mittelwert Mittelwert

chung weichung

Aerosol Dosis vom

Mundstück [μg] 9577,1 745,1 8954,4 1085,8

Vernebler Rückstand

[μg] 1606,8 559,2 2123.9 352,8

Aerosol Verluste [μg] 2872.5 255,9 2763,3 376,2

Verneblungszeit [min] 9,5 0,6 11 ,6 1 ,4

Aerosol Dosis [% Eingefüllte Dosis] 66,5 4,5 62,9 8,4

Vernebler Rückstand [%

Eingefüllte Dosis] 11 ,2 3,9 15,0 2,5

Aerosol Verluste [% ] 20,0 2,0 19,4 2,5

Wiederfindung [% Eingefüllte Dosis] 97.7 5,0 97,3 7,1

Von der gleichen Inhalationslösung wurden per Laserdiffraktionsmessung zudem bei unterschiedlichen Aerosolausbringungsraten die für eine pulmonale Verabreichung relevanten Teilchengrößenfraktionen bestimmt (siehe nachfolgende Tabelle). Es zeigte sich eine besonders hohe Effizienz der Aerosolabgabe und simulierten Deposition, die eine sehr kurze Inhalationszeit erlaubt und in hohem Maße von dem jeweiligen Inhalationsmanöver unabhängig ist.

15 L/min 20 L/min 28.3 L/min

MittelStd. MittelStd. MittelStd. wert Abw. wert Abw. wert Abw.

Mittlerer Massen

Durchmesser [μm] 2,8 0,1 2,9 0,1 2,7 0,1

Geometrische Std.

Abw.[ ] 1 ,5 0,0 1 ,5 0,0 1 ,5 0,0

Respirable Fraktion

[%<3.3μ] 63,5 1 ,7 61 ,5 4,1 66,0 3,4

Respirable Fraktion

[%<5μ] 89,4 1 ,1 89,2 2,1 91 ,2 1 ,6

Aerosol Abgabe Rate

[mg/min] 289,0 10,8 258,3 40,3 282,5 28,0

Der Effekt der in Beispiel 12 beschriebenen Inhalationslösung auf Calu-3-Zellen (kon- fluente Monolayer) wurde untersucht. Dazu wurden Calu-3-Zellen (HTB- 55, ATCC, Manassas, VA, USA) in Minimum Essential Medium (MEM) mit Earl's Salts ergänzt durch L-Glutamin (PAA Laboratories GmbH, Pasching, Austria), 10 % fötales Rinderserum, 1% nichtessenzielle Aminosäurelösung und 55 mg/500 ml Natriumpyruvat kultiviert. Die Bildung von konfluenten Monolayern mit Tight Junctions wurde durch Messung des transepithelialen elektrischen Widerstands (TEER) mit einem geeigneten Voltmeter (EVOM, World Precision Instruments, Berlin, Germany) und einer STX-2 Elektrode bestätigt. Das Alter der Zell-Monolayer betrug bei den Untersuchungen mit der Cyclosporinlösung etwa 14 Tage. Zunächst wurde das Kulturmedium entfernt, die Monolayer gewaschen und mit Ringer-Hydrogencarbonat-Pufferlösung für 20-30 Minuten vorinkubiert. Danach wurde die liposomale Lösung mittels einer Pipette zugegeben.

Der TEER wurde sofort nach der Applikation und 120 min später gemessen. Anschlie- ßend wurden die Zellen wieder gewaschen und über 24 Stunden mit Kulturmedium inkubiert. Anschließend wurde erneut der TEER gemessen. Als Vergleich wurden Rin- ger-Hydrogencarbonat-Pufferlösung (KRB), Propylenglykol, eine Cyclosporin-A-Lösung in Propylenglykol (62.5 mg/ml) und eine wässrige Natrium-dodecylsulfatlösung (SDS) (0.1%)verwendet. Die nachfolgende Tabelle zeigt die gefundenen TEER-Werte in Pro- zent der Initialwerte nach Zugabe der Ringer-Hydrogencarbonat-Pufferlösung.

Die gemessenen TEER-Werte zeigen, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung keinen oder nur einen sehr geringen und überwiegend reversiblen Einfluss auf die Integrität der Calu-3-Monolayer hat. Dagegen bewirken Natriumdodecylsulfat (SDS), synonym Natriumlaurylsulfat, Propylenglykol und Cyclosporin A gelöst in Propylengly- kol erhebliche und überwiegend nichtreversible Schädigungen des Calu-3- Zellmonolayer. Daraus kann unter anderem geschlossen werden, dass Propylenglykol kein geeigneter Träger für Cyclosporin A für die inhalative Anwendung sein dürfte.

Beispiel 3: Kolloidale Lösung

Die folgenden Rezepturen A und B (siehe nachstehende Tabellen) wurden analog Beispiel 1 hergestellt und steril in Braunglasfläschchen abgefüllt.

Die kolloidalen Lösungen sind insbesondere für die Inhalation geeignet. Darüber hinaus können sie auch für topische und ophthalmische Anwendungen eingesetzt werden.

Beispiel 4: Kolloidale Lösung

Die nachfolgende Rezeptur (siehe nachstehende Tabelle) wurde analog Beispiel 1 herstellt und steril abgefüllt.

Die leicht opaleszierende Lösung wurde anschließend charakterisiert; die Ergebnisse finden sich in der nachstehenden Tabelle.

Des Weiteren wurde ein tatsächlicher Gehalt an CsA von 4,83 mg/ml gemessen. Der Gehalt an Verunreinigungen betrug 0,81 mg/ml.

Nach dreimonatiger Lagerung bei 5 ⁰C zeigten sich alle gemessenen Parameter nur unwesentlich verändert, darunter z. B. der CsA-Gehalt (4,93 mg/ml), der Gehalt an Verunreinigungen (0,36 mg/ml) sowie der mediane Liposomendurchmesser (36,6 nm). Nach dreimonatiger Lagerung bei 25 ⁰C und 60 % rh zeigte sich die Zubereitung ebenfalls ausgesprochen stabil; insbesondere der Gehalt an CsA und Verunreinigungen blieben weitgehend konstant. Der mediane Liposomendurchmesser war leicht auf 44,4 nm erhöht, was jedoch keinen Einfluss auf die Performance der Zubereitung haben sollte.

3,2 ml (entsprechend 15 mg CsA) der kolloidalen Lösung wurde mit einem speziell angepassten elektronischen Schwingmembranvemebler vom Typ PARI eFlow 30 L mit einer Mischkammer und Ein-/Ausatemventilen aerosolisiert und die Tröpfchengrößenverteilung des derart erzeugten Aerosols per Laserdiffraktion mit Hilfe eines Malvern MasterSizerX bei einer Flussrate von 20 l/min charakterisiert. Dabei wurde ein massenmittlerer Partikeldurchmesser von 2,8 μm bei einer geometrischen Standardabweichung von 1 ,5 gemessen. Die Partikelfraktion < 5 μm ("respirable fraction") betrug 89,4 %, die Fraktion mit einer Partikelgröße < 3,3 μm betrug 63,5 %. Die Ausbringungsrate ("total Output rate") belief sich auf 289 mg/ml. Darüber hinaus wurde das Aerosol in einem Atemsimulationstest mit einem PARI A- temzugsimulator charakterisiert, wobei das typische Inhalationsmuster eines Erwache- senen (siehe Beispiel 2) eingestellt wurde, sowie durch einen Kaskadenimpaktor vom Typ Next Generation Impactor bei einer Flussrate von 15 l/min, einer Temperatur von 23 ⁰C und einer relativen Feuchte von 50 %. Dabei wurden die Aerosolcharakteristika erhalten, die in der nachstehenden Tabelle aufgeführt sind. Die Inhalationszeit betrug 11 Minuten. Die Berechnung der jeweiligen CsA-Fraktionen erfolgte nach Bestimmung des Wirkstoffs über eine HPLC-Gehaltsbestimmung. In einem weiteren Test wurde die Inhalationslösung mit "mTc-DTPA radiomarkiert, derselben Versuchsanordnung unterworfen und die Aerosolcharakteristika über die jeweilige Radioaktivität der deponier- ten Fraktionen ermittelt. Die Messergebnisse beider Versuche stimmten weitestgehend überein. Figur 3 zeigt die Verteilung der Aerosolfraktionen auf den jeweiligen Impak- torstufen (basierend auf Radioaktivitätsmessung und HPLC), wobei die Werte auf der Abszisse die Einheit μm besitzen.

Mit der Zubereitung wurde ferner eine Gammaszintigraphie-Studie zur Bestimmung der Lungendeposition von CsA in vivo durchgeführt. Dabei wurden 12 Patienten mit Lungentransplantaten (7 mit beiseitigen [DLTx] und 5 mit einseitigen [SLTx] Transplanta- ten) mit 2 ml (ca. 10 mg CsA) der Inhalationslösung behandelt. Jede verabreichte Dosis der Inhalationslösung wurde zuvor mit 4 MBq 88mTc-DTPA (Pentacis, CIS- Diagnostik) radiomarkiert und anschließend in einen elektronischen Schwingmembran- vernebler vom Typ PARI eFlow 3OL gefüllt. Die Patienten wurden instruiert, langsam und tief zu inhalieren. Jeweils nachdem das Reservoir des Verneblers geleert war, wurden von den Patienten die Kopf- und Brustregionen mit einer Gamma-Camera vom Typ Siemens Diacam aufgenommen.

Figur 1 zeigt ein typisches Bild eines der behandelten Patienten mit beidseitigem Lungentransplantat, Figur 2 das eines Patienten mit einseitigem Transplantat. Die Aufnahmen verdeutlichen die gleichmäßige Deposition des feinen Aerosols in der Lunge. Die Inhalation wurde von allen Patienten gut vertragen; es war keine Prämedikation notwendig, wie sie nach Literaturangaben bei der Inhalation einer bekannten CsA- Zubereitung notwendig war, in welcher der Wirkstoff in Propylenglykol gelöst vorgelegen hatte.

In einem weiteren Versuch mit denselben Patienten wurde eine Dosis von 4 ml bei unveränderter Wirkstoffkonzentration verabreicht. Auch diese Dosis wurde ohne Prämedikation vertragen.

Die quantitative Bestimmung der Radioaktivität zeigte eine durchschnittliche Lungendeposition von 36 % der in den Vernebler eingefüllten CsA-Dosis. Die relative Deposition in der Lunge war im Falle der niedrigeren Dosis von 2 ml etwas höher als bei der höheren Dosis von 4 ml. Die nachstehende Tabelle fasst die Resultate zusammen.

Des Weiteren wurden die pharmakokinetischen Parameter bei inhalativer Verabreichung von 10 mg bzw. 20 mg CsA durch Blutuntersuchungen bestimmt. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle angegeben:

Überraschenderweise wurde gefunden, dass die liposomale CsA-lnhalationslösung nach Inhalation nur in geringem Anteil ins Blut übergeht, insbesondere eine sehr kurze Halbwertszeit von 5.2 bzw. 6.1 Stunden aufweist. Bisher veröffentlichte Daten (Corcoran TE et al.: Preservation of post-transplant lung function with aerosol cyclosporin. Eur. Respir. J., 23(3), 378-83 (2004)) sprechen von einer Halbwertszeit von ca. 40 Stunden nach inhalativer Gabe von 300 mg CsA / Pro- pylenglykol Inhalationslösung. Der Vorteil der kurzen Halbwertszeit liegt in der Möglichkeit einer häufigeren Verabreichung, z.B. einer ein- oder zweimalige Gabe pro Tag. Dadurch werden gleichmäßigere Therapiespiegel auch in der Lunge zu erzielen sein und eine zuverlässigere Therapie resultieren.

Darüber hinaus hat sich eine Korrelation zwischen der peripher deponierten CsA-Dosis und den pharmakologischen Parametern AUC (Area under the curve) und c_max (maximale Konzentration) für die liposomale CsA-Therapie ergeben: Dadurch kann der CsA- Wirkspiegel im Zielareal des Zielorgens, d.h. in der Peripherie der Lunge, durch einfache Messung der Blutspiegel für jeden Patienten abgeschätzt werden. Dies ermöglicht ein einfaches Monitoring der Therapie.

Beispiel 5: Kolloidale Lösung zum Einträufeln ins Auge

Ein kolloidale Zubereitung aus den in der nachfolgenden Tabelle angegebenen Bestandteilen wird wie oben beschrieben hergestellt und nach Sterilfiltration werden jeweils 0.25 ml aseptisch unter einem Laminar air flow in sterile birnenförmige 0.5 ml Polyethylen-blow fill seal vials (PE), die mit sterilem Stickstoff geformt werden, abgefüllt und danach in Aluminiumblister, die mit Stickstoff begast sind, eingeschweißt. Die kolloidale Lösung kann aus diesen sterilen unit dose vials, die eine tropfenförmige Produktentnahme erlauben, ins Auge geträufelt werden, um z.B. ein Abstosssungsreaktion nach einer Hornhauttransplantation oder andere Entzündungsprozesse zu behandeln.

Beispiel 6: Jeweils 0.2 g Ciclosporin A und Tacrolimus werden in einer liposomalen isotonischen Placebolösung, die Lecithin und Polysorbat 80 im Gewichts-Verhältnis 10: 1 in einer isotonischen Kochsalzlösung enthält, mit Hilfe eines Ultraturax dispergiert und danach in einem Microfluidizer bei 1500 bar in mehreren Zyklen so hochdruckhomogenisiert, daß in einem Malvern Zetasizer eine kolloidale Zubereitung mit einem Durchmesser kleiner 80 nm und einem Polydispersitätsindex < 0.35 erhalten wird. Nach Sterilfiltration werden jeweils 2 ml aseptisch unter einem Laminar air flow in sterile Polyethylen- blow fill seal vials (PE), die mit sterilem Stickstoff geformt werden, abgefüllt und danach in Aluminiumblister, die mit Stickstoff begast sind, eingeschweißt. Die kolloidale Lösung kann aus diesen sterilen unit dose vials, die eine tropfenförmige Produktentnahme erlauben, für die pulmonale, nasale oder topische Applikation verwendet werden, um unerwünschte Autoimmun-Erkrankungen zu behandeln.

Beispiel 7: Liposomale Lösung zur Inhalation oder zur Anwendung an Auge und Ohr

In eine isotonische, mittels Hochdruckhomogenisation hergestellte, kolloiddisperse Placebolösung bestehend aus 10% Lipoid S 100, 0.7% Polysorbat 80, 0.8% Natriumchlorid und jeweils 0.01% Natrium-EDTA und Tocopherol-acetat werden 0.4% Ciclosporin A und 0.04% Budesonid dispergiert und kolloiddispers so eingearbeitet, daß eine liposomale Zubereitung mit einem Durchmesser < 75 nm und einem Polydispersitätsindex < 0.3 erhalten wird. In einem Transmissionselektronenmikroskop sieht man sphärische unilamellare liposomale Strukturen von 55-75 nm, die gut mit Ergebnissen von 40 -55 nm übereinstimmen, die mittels Photonen- Korrelations-spektroskopie (PCS) ermittelt wurden. Nach Sterilfiltation werden für die Augen- und Ohrenbehandlung jeweils 0.25ml und für die Verwendung in Verneblern je 2 ml in Polypropylen vials, die mit Stickstoff begast sind, abgefüllt und zwecks besserer Haltbarkeit einzeln in stickstoffbegaste Aluminiumblister eingeschweißt. Nach Vernebelung mit dem elektro- nischne Vernebler eFlow wird das Produkt zur Behandlung von Lungenerkrankungen wie z.B. Asthma und COPD inhaliert.

Beispiel 8:

In eine isotonische, mittels Hochdruckhomogenisation hergestellte, kolloiddisperse Placebolösung bestehend aus 40% Lipoid S 100, und jeweils 2% Polysorbat 80, und Vitamin E-TPGS, 0.8% Natriumchlorid und 0.02% Natrium-EDTA werden jeweils 1.5% Ciclosporin A und Sirolimus (Rapamycin) dispergiert und kolloiddispers so eingearbei- tet, daß eine liposomale Zubereitung mit einem Durchmesser < 100 nm und einem Polydispersitätsindex < 0.3 erhalten wird. Nach Sterilfiltation werden jeweils 2 ml in Polyethylen vials, die mit Stickstoff begast sind, abgefüllt und zwecks besserer Haltbarkeit einzeln in stickstoffbegaste Aluminiumblister eingeschweißt. Das Produkt wird inhalativ zur Behandlung von interstitiellen Lungenerkrankungen, wie Sarkoidose und pulmonare Fibrose, eingesetzt. Alternativ kann es auch zurm Eintäufeln in das Auge nach Hornhauttransplantationen eingesetzt werden.

Beispiel 9: Kolloidale Lösung zur topischen Behandlung von Haut, Auge und Ohr

Die in der voranstehenden Tabelle angegebenen wasserlöslichen Hilfsstoffe werden in einen 1 liter Erlenmeyerkolben eingewogen und in Wasser unter Rühren gelöst, danach wird das Lecithin (Lipoid S 100 oder auch Phospholipon G 90) und der Wirkstoff (Cyclosporin) zugesetzt und unter Rühren dispergiert. Anschließend wird die Mischung ca. 10 min im Ultraturax homogenisiert und in einen Hochdruckhomogenisator überführt. Bei ca. 1500 bar wird diese Mischung solange homogenisert bis man eine kolloi- dale Zubereitung erhält, deren Tröpfchen- bzw. Partikelgröße in einem Malvern Zetasi- zer einen Druchmesser < 100 nm und einen Polydispersitätsindex < 0.4 aufweist. Die kolloidale Zubereitung wird danach in einer Sterilbank sterilfiltriert und in vorsterilisierte Braun-Glasfläschchen mit Volumina von 5 - 50 ml abgefüllt und anschließend mit einem sterilen Pumpdosieraufsatz, der eine tropfenförmige sterile Mehrfachentnahme ermöglicht, verschlossen. Beispiel 10:

In eine isotonische, mittels Hochdruckhomogenisation hergestellte, kolloiddisperse Placebolösung bestehend aus 40% Phospholipon und jeweils 2% Polysorbat 80, und Vitamin E-TPGS, 0.8% Natriumchlorid und 0.02% Natrium-EDTA werden jeweils 3% Dexpanthenol und danach je 1 % Ciclosporin A, Amphotericin B dispergiert und kolloiddispers so eingearbeitet, daß eine liposomale Zubereitung mit einem Durchmesser < 100 nm und einem Polydispersitätsindex < 0.3 erhalten wird. Nach Sterilfiltation werden jeweils 2 ml in Polyethylen vials, die mit Stickstoff begast sind, abgefüllt und zwecks besserer Haltbarkeit einzeln in stickstoffbegaste Aluminiumblister einge- schweißt. Das Produkt wird inhalativ zur Prävention und Behandlung von möglichen Abstossungsreaktioinen nach Transplantation von Organen oder Organteilen wie Lunge, Nase, Haut, Hornhaut, Ohr und sich daraus ergebenden Folgeerkrankungen eingesetzt.

Beispiel 11 : In eine isotonische, mittels Hochdruckhomogenisation hergestellte, kolloiddisperse Placebolösung bestehend aus 20% Phospholipon und jeweils 1 % Polysorbat 80, und Vitamin E-TPGS, 0.8% Natriumchlorid und 0.02% Natrium-EDTA werden je 2% Hyalu- ronsäure sowie Natriumcromoglycat und 1% Ciclosporin A dispergiert und kolloiddispers so eingearbeitet, daß eine kolloiddisperse Zubereitung mit einem Durchmesser < 100 nm und einem Polydispersitätsindex < 0.3 erhalten wird. Nach Sterilfiltation werden jeweils 2 ml in Polyethylen vials, die mit Stickstoff begast sind, abgefüllt und zwecks besserer Haltbarkeit einzeln in stickstoffbegaste Aluminiumblister eingeschweißt. Das Produkt wird inhalativ zur Prävention und Behandlung von chronisch obstruktiver Bronchitis, parenchymalen, fibrotischen und interstitiellen Lungenerkran- kungen bzw. -entzündungen, sowie topisch zur Unterdrückung von autoimmunbeding- ten Erkrankungen und Wundheilung von Haut, Nase und Ohr eingesetzt.

Beispiel 12:

Analog Beispiel 2 wurde eine liposomale Inhalationslösung enthaltend Cyclosporin A (4.5 mg/ml), Phospholipid (Lipoid S100, 40 mg/ml), Polysorbat 80 (Tween 80, 3 mg/ml), Natriumchlorid (8.5 mg/ml) und Dinatrium-Edetat (0.5 mg/ml) hergestellt. Die Homogenisation erfolgte mit einem Hochdruckhomogenisator bei 1500 bar und 2 Zyklen. Die mittlere Teilchengröße der Liposomen betrug etwa 50 nm (gemessen als z-Average) bei einem Polydispersitätsindex von etwa 0.25. Die Liposomen (jeweils 2 ml) wurden nach Sterilfiltration unter aseptischen Bedingungen in speziell ausgeformete 3 ml vials abgefüllt, die formschlüssig in einen Dreh-Hubdeckel eines eFlows eingepaßt werden können. Beim Verschließen der Medikamentenaufnahmevorrichtung wird die Membran des PE-vials durchstoßen, so daß der Inhalt ohne ein manuelles einfüllen in den Ve- renbeler inhaliert werden kann.

Beispiel 13:

Die liposomale Formulierung kann auch mit wasserlöslichen Wirkstoffen kombiniert werden, wie an den nachfolgend aufgeführten Beispielen ersichtlich ist. Die wasserlöslichen Hilfsstoffe werden gemäß der prozentualen Gewichts-Zusammensetzung (G/G) wie in den untenstehenden Tabellen aufgeführt in einen 200 Liter Ansatzkessel eingewogen und in Wasser für Injektionszwecke unter Rühren gelöst. Darin werden dann die wasserlöslichen Wirkstoffe, wie z.B. Heparin-Natrium (Rezeptur A) oder Salbutamolsul- fat (Rezeptur B) gelöst, Lecithin und das lipophile Cyclosporin A zugesetzt und unter Rühren dispergiert, danach die Mischung ca. 10 min im Ultraturax homogenisiert und in einen Hochdruckhomogenisator überführt. Bei ca. 1000 bar wird diese Mischung in 5 Zyklen hochdruckhomogenisert. Danach wird ein Muster gezogen und gemäß der in- prozess Kontrolle die Spezifikation überprüft. Ist die Tröpfchen- bzw. Partikelgröße, gemessen in einem Malvern Zetasizer < 100 nm und weist diese einen Polydispersitätsindex < 0.35 auf, wird die kolloidale Zubereitung sterilfiltriert. Jeweils 2 ml werden in einem aseptischen Abfüllprozess in einem Sterilraum gemäß einem blow fill Verfahren in Polyethylen-Ampullen abgefüllt und zu je 5 Stück in stickstoffbegaste Alumi- numblisterfolien eingeschweisst.

Claims

PATENTANSPRÜCHE

1. Flüssige pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend:

(a) eine therapeutisch wirksame Dosis eines Cyclosporins;

(b) eine wässrige Trägerflüssigkeit;

(c) eine erste löslichkeitsverbessernde Substanz, ausgewählt aus der

Gruppe der Phospholipide, und

(d) eine zweite löslichkeitsverbessernde Substanz, ausgewählt aus der Gruppe der nichtionischen Tenside.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie das Cyclosporin in liposomal solubilisierter Form enthält.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Cyclosporin um Cyclosporin A handelt.

4. Zusammensetzung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Gehalt an Cyclosporin A von etwa 0.2 bis etwa 20 mg/mL aufweist. 5. Zusammensetzung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Gehalt an Cyclosporin A von etwa 0.

5 bis etwa 10 mg/mL, und bevorzugt von etwa 1 bis etwa 5 mg/ml aufweist.

6. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Phospholipid eine Mischung natürlicher Phospholipide ist, und vorzugsweise ein Lecithin mit einem Anteil ungesättigeter Fettsäuren ist, beispielsweise Lipoid S 100, Phopholipon G90 -100 oder ein vergleichbares Lecithin.

7. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Gehalt des Phospholipids von etwa 0.2 bis etwa 15 Gew.-% und vorzugsweise von etwa 1 bis etwa 8 Gew.-% aufweist.

8. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Gehalt des nichtionischen Tensids von etwa 0.01 bis etwa 5 Gew.-% aufweist, vorzugsweise von 0.1 - 2 Gew.-%.

9. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das nichtionische Tensid aus der Gruppe der Polysorbate ausgewählt ist, vorzugsweise Polysorbat 80 ist.

10. Zusammensetzung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis von Phospholipid zu Polysorbat zwischen 15 : 1 und 9 :1 ist, bevorzugt zwischen etwa 14 : 1 und etwa 12 : 1 liegt, zum Beispiel etwa 13 : 1 beträgt.

11. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis zwischen dem Phospholipid und dem nichtionischen Tensid einerseits und dem Cyclosporin andererseits zwischen 5 : 1 und 20 : 1 liegt, vorzugsweise zwischen etwa 8 : 1 und 12 : 1 , und besonders bevorzugt etwa 9 : 1 beträgt.

12. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis zwischen dem Lecithin, dem nicht ionischen Tensid und dem Cyclosporin zwischen etwa 15 : 1 : 1.5 und 5 : 0.3 : 0.5 liegt und vorzugsweise bei etwa 9 : 0.7 : 1 liegt.

13. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie Liposomen mit einem mittleren Durchmesser von maximal etwa 100 nm und/oder einem Polydispersitätsindex von maximal etwa 0.5 enthält.

14. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens einen weiteren Wirkstoff enthält.

15. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen oder mehrere weitere pharmazeutische Hilfsstoffe wie beispielsweise Stabilisatoren, Puffersubstanzen, Salze, Substanzen zur Einstellung der Tonizität, Antioxidantien, Aromen, Geschmacksverbesserer, oder Süßungsmittel ent- hält.

16. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie steril und weitgehend frei von festen Partikeln mit einem Teilchendurchmesser von mehr als 3 μm ist, und vorzugsweise frei von festen Wirkstoffpartikeln mit einem Teilchendurchmesser von mehr als 500 nm ist.

17. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie weitgehend frei von organischen Lösungsmitteln ist.

18. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie eine dynamische Viskosität von etwa 1 bis etwa 3 mPa-s aufweist.

19. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie eine Osmolalität von etwa 150 bis etwa 800 mθsmol/l, vorzugsweise von 250 bis 600 mθsmol/l aufweist.

20. Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen pH-Wert von weniger als etwa 8.5 aufweist, vorzugsweise von etwa 2.5 bis etwa 7.5.

21. Zusammensetzung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass sie durch einen Phosphatpuffer im Bereich von pH 6,7 bis 7,5 gepuffert vorliegt.

22. Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung nach einem der voranstehenden Ansprüche, gekennzeichnet durch einen Schritt der Hochdruckhomogenisa- tion.

23. Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21 zur Herstellung eines Arzneimittels zur oralen, nasalen, ophthalmischen, pulmonalen, parenteralen, topischen oder mukosalen Applikation.

24. Verwendung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass die pulmonale oder nasale Applikation nach Überführung der Zusammensetzung in ein Aerosol erfolgt.

25. Verwendung nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung zur Inhalation mit einem Kompressor / Düsen-, Ultraschall- oder einem elektronischen Schwingmembranvemebler vorgesehen ist, vorzugsweise mit einem Schwingmembranvernebler wie z.B. mit einem Gerät des Typs eFlow™, AeroNeb Pro oder -Go, oder I-Neb.

26. Verwendung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass die topische Applikation durch Aufsprühen der Zusammensetzung auf die Haut mit Hilfe eines Pumpsprays erfolgt.

27. Verwendung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass die nasale, mukosale oder ophthalmische Applikation durch Auftragen, Eintröpfeln oder Aufsprühen der Zusammensetzung erfolgt.

28. Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe oder Behandlung von Autoimmunerkrankungen, Hautkrankheiten, Erkrankungen der Sinnesorgane (Augen, Nase, Ohr), Befindlichkeitsstörungen, und Lungenerkrankungen, insbesondere Asthma, Refractory Asthma, chronisch obstruktiver Bronchitis, parenchymalen, fibrotischen und interstitiellen Lungenerkrankungen oder -entzündungen, Lungenkrebs, und vorzugsweise zur Prävention und Behandlung akuter oder chronischer Organtransplantat- Abstoßungsreaktionen nach Lungen-, Stammzeil-, Knochmark-, Herz- oder einer sonstigen Organtransplantation und deren Folgeerkrankungen wie Bronchiolitis obliterans.

29. Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe oder Behandlung von Erkrankungen der Haut, insbesondere von Psoriasis, Neurodermitis, Ekzemen, oder Abstoßungsreaktionen nach einer Hauttransplantation.

30. Verwendung nach einem der Ansprüche 23 bis 29, wobei die Verabreichung des Arzneimittels ohne Prämedikation erfolgt.

31. Verwendung nach Anspruch 30, wobei die Verabreichung des Arzneimittels ohne Prämedikation mit einem Lokalanästhetikum erfolgt.

32. Verwendung nach Anspruch 31 , wobei das Lokalanästhetikum Lidocain ist.

33. Verwendung nach einem der Ansprüche 30 bis 32, wobei die Verabreichung des Arzneimittels ohne Prämedikation mit einem Bronchiodilator erfolgt.

34. Verwendung nach Anspruch 33, wobei der Bronchiodilator Salbutamol ist.

35. Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21 zur Wirksamkeitsverbesserung anderer Medikamente, wobei ein additiver oder synergistischer Effekt erreichbar ist.

36. Verwendung nach Anspruch 29 als pump efflux inhibitor zur Wirkungsverstärkung von Cytostatika oder anderer Medikamente zur Behandlung von Erkrankun- gen der Lunge, Haut, oder der Sinnesorgane.

37. Verwendung nach Anspruch 23, wobei die Zusammensetzung innerhalb einer Kombinationstherapie mit mindestens einem weiteren Arzneimittel verabreicht wird, und wobei das weitere Arzneimittel vorzugsweise einen Wirkstoff aus der Gruppe der Immunmodulatoren, Interferone, steroidalen und nicht steroidalen anti- inflammatorischen Substanzen, Heparinoide, Beta-agonisten, Anticholinergika, Endothelin- und Phosphordiesterasehemmer, Antibiotika, Antimykotika, antiviralen Substanzen und Zytostatika enthält.

38. Behältnis, enthaltend eine Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21 , dadurch gekennzeichnet, dass es überwiegend aus Kunststoff besteht, ein Vo- lumen von 0.2 - 5 ml hat und ein entfernbares Verschlusselement umfasst.

39. Behältnis nach Anspruch 38, dadurch gekennzeichnet, dass es nach Entfernung des Verschlusselements mit einem für die Zufuhr von Flüssigkeit vorgesehenen Anschlussstück eines Verneblers weitgehend formschlüssig und flüssigkeitsdicht verbindbar ist.

40. Behältnis nach Anspruch 38 oder 39, dadurch gekennzeichnet, dass es mit mindestens einer Prägung versehen ist, welche eine Produktbezeichnung, einen Chargencode, ein Haltbarkeitsdatum und/oder eine Volumen- oder Dosismarke darstellt.

41. Behältnis nach einem der Ansprüche 38 bis 40, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um ein Mehrdosenbehältnis aus Glas oder Kunststoff handelt und die ent- haltene Zusammensetzung zur topischen oder systemischen Applikation bestimmt ist.

42. Verfahren zur Befüllung eines Behältnisses mit einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21 , dadurch gekennzeichnet, dass es einen Schritt der aseptischen Abfüllung umfasst.

43. Verfahren zur Erzeugung eines Aerosols mittels Vernebler durch Vernebe- lung einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 21.

44. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß für die Verne- belung von 4 mg Cyclosporin in Tröpfchen < 5 μm weniger als 10 min benötigt werden.

45. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß die Rate mit der Cyclosporin vom Mundstück inhaliert wird, 0.2 - 4 mg/min und besonders bevor- zugt 0.5 -1.5 mg/min beträgt.

46. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß der Prozentsatz von Tröpfchen < 5 μm zwischen 50% und 98 % und besonders bevorzugt 60 - 90% beträgt und die Tröpfchenverteilung eine geometrische Standardabweichung < 2.2 und besonders bevorzugt < 1.8 aufweist.

47. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß der Prozentsatz von Tröpfchen < 3.5 μm zwischen 40% und 95 % beträgt und besonders bevorzugt zwischen 50 und 85% beträgt.

48. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekenenzeichnet, daß die Lungendeposition mindstens 30% beträgt und das Verhältnis von zentraler zu peripherer De- position von 30 : 70 - 70 : 30.

49. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß die mittels Mundstück inhalierbare Dosis > 40% der eingefüllten Wirkstoffmenge ist.

50. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß der im Ver- nebler verbleibende Wirkstoffrückstand < 20% und besonders bevorzugt < 10 % ist.

51. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß die Verne- bungszeit < 15 Minuten und besonders bevorzugt < 10 Minuten ist.