WO2007037333A1 - 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤 - Google Patents

非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤 Download PDF

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WO2007037333A1
WO2007037333A1 PCT/JP2006/319310 JP2006319310W WO2007037333A1 WO 2007037333 A1 WO2007037333 A1 WO 2007037333A1 JP 2006319310 W JP2006319310 W JP 2006319310W WO 2007037333 A1 WO2007037333 A1 WO 2007037333A1
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proline
atypical
unsubstituted lower
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PCT/JP2006/319310
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Inventor
Hisataka Sabe
Shigeru Hashimoto
Hirofumi Nakano
Tsutomu Agatsuma
Original Assignee
Osaka Bioscience Institute
Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
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    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Definitions

  • the present invention relates to an atypical proline-rich sequence binding inhibitor containing a non-peptide compound or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention also relates to an inhibitor of cancer invasion and Z or metastasis comprising an atypical proline-rich sequence binding inhibitor as an active ingredient.
  • the present invention relates to a screening method for atypical proline-rich sequence binding inhibitors.
  • Non-Patent Document 1 The drug was developed (Non-Patent Document 1).
  • Non-patent Document 2 In the case of epithelial cancer, most of the metastasis first occurs through the invasion of the basement membrane of cancer cells. It is shown by the pathological findings that this is remarkable in human breast cancer (Non-patent Document 2). However, there have been many attempts at the world level to confirm the effectiveness of the basic molecular mechanisms that lead to cancer cell invasion and metastasis, and how to apply them to prevent cancer invasion. This is the stage where new methodologies and molecular targets are being searched.
  • Src homology domain 3 (SH3 domain) was discovered as a region of high homology between Src families, and is a domain consisting of approximately 60 amino acids, located in various proteins, and a sequence containing proline ( It is known to recognize and bind proline-rich sequences (Non-patent Document 3).
  • Patent Document 1 describes an SH 3 domain binding inhibitor containing a non-peptide compound having SH3 domain binding inhibitory activity or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • SH3 domains exist in various human proteins, and are structurally well conserved from each other.
  • the proline peptides that are binding partners are also similar to each other. Therefore, even when screening for inhibitors based on the inhibition of one SH3 binding, most of the obtained ones also inhibited many other SH3 bindings as well. It seems. Therefore, even if such an inhibitor is used as, for example, an anticancer agent, an anti-inflammatory agent, an angiogenesis inhibitor or the like, it is considered that most of them have strong and useful side effects.
  • Patent Document 1 International Publication No. 03Z006060 Pamphlet
  • Non-Patent Document 1 Science, 295 ⁇ , 2387-2392 (2002)
  • Non-Patent Document 2 Endocrine-Related 'Cancer (Endocrine-Related Cancer), 8 ⁇ , pp. 47-61 (2001)
  • Non-Patent Document 3 Science, 252 ⁇ , 668 pages (1991), 257 ⁇ , 803 pages (1992), Faseb 'Journal (FASEB J.), 14 pages, 231 pages (2000)
  • the present invention should solve the problem of providing an atypical proline-rich sequence binding inhibitor containing a non-peptide compound or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient. It was an issue. Furthermore, another object of the present invention is to provide an inhibitor of cancer invasion and Z or metastasis. Furthermore, an object of the present invention is to provide a method for screening a substance having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity.
  • AMAP1 binds to the paxillin proline sequence at its SH3 domain
  • cortactin binds to the AMAP1 proline sequence at its SH3 domain.
  • inhibition of each SH 3 binding with a peptide can significantly suppress the invasion activity of various breast cancer cells and metastasis in mice.
  • the SH3 domain of cortactin has been shown to bind to the KKRPPPPPPGHKR sequence of AMA P1. If the binding mode between cortactin and AMAP1 is commonly seen in other SH3s, anti-cancer drugs that target these molecules also affect many functions of cells involved in SH3 binding. Lacks appropriateness.
  • the present inventors proceeded with research on this point, and based on the results of analysis using X-ray structural analysis, the interface structure of the interaction between the SH3 domain of cortactin and the KKRPPPPPPGHKR sequence of AMAP1 was found to be another common SH3Z proline binding.
  • the lead compound we have found is capable of inhibiting the binding of several SH3s. Its IC50 value is more than 100 times higher than that of AMA PlZcortactin binding.
  • the present inventors have been involved in the invasion activity and metastasis activity of many human breast cancer cells that AMAP1 forms a complex with a specific protein called cortactin and paxillin. It was shown that the invasion activity and the metastasis activity can be efficiently inhibited by inhibition of.
  • the present invention has been completed based on these findings.
  • the present invention relates to the following (1) to (37).
  • R 1 represents a hydrogen atom, hydroxy, carboxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy or substituted or unsubstituted lower alkanoyloxy;
  • R 2 represents a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • R 3A and R 3B are the same or different and represent a hydrogen atom, hydroxy, carboxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy or substituted or unsubstituted lower alkanoyloxy, or R 3A and R 3B together. Represents the oxygen atom,
  • R 4 represents a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • R 5A and R 5B are the same or different and represent a hydrogen atom, a hydroxy or a force representing a substituted or unsubstituted lower alkoxy, or R 5A and R 5B together represent an oxygen atom,
  • R 6 represents a hydrogen atom, formyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, or substituted or unsubstituted lower alkanol
  • R 7 is formyl, hydroxymethyl, substituted or unsubstituted lower alkoxymethyl, substituted or unsubstituted lower alkanoloxymethyl, substituted or unsubstituted lower alkanolmethyl, or —CH ⁇ NQ A [where Q A represents substituted or unsubstituted lower alkoxy, substituted or unsubstituted aryloxy, substituted or unsubstituted aralkyloxy, or mono- or di (substituted or unsubstituted lower alkyl) amino]
  • R 8 has the same meaning as R 6 above,
  • R 9A and R 9B are the same or different and each represents a hydrogen atom, a hydroxy group, a force representing a hydroxy or substituted or unsubstituted lower alkoxy group, or a compound represented by R 9A and R 9B together to represent an oxygen atom, or a compound thereof Containing a pharmacologically acceptable salt as an active ingredient Proline-rich sequence binding inhibitor.
  • the atypical proline rich sequence is a sequence containing Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro, The atypical proline-rich sequence binding according to (1) or (2) Inhibitor.
  • the protein having an SH3 domain is Cortactin, and the protein having an atypical proline-rich sequence is AMAP1 (ASAP1 / DDEF1), according to any one of (1) to (6) Typical proline rich sequence binding inhibitor.
  • a non-peptidic compound having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity or a pharmacologically acceptable salt thereof is represented by the general formula (I):
  • a protein having an SH3 domain interacts with a protein having an atypical proline-rich sequence in the presence of a test substance, and a protein having an SH3 domain and a protein having an atypical proline-rich sequence
  • a method for screening for a substance having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity which comprises selecting a test substance that inhibits the formation of a complex with the protein.
  • the atypical proline-rich sequence is Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly-His-Lys-Arg according to (11) or (12) Screening method.
  • the protein having the SH3 domain is Cortactin, and an atypical proline-rich sequence
  • the screening method according to any one of (11) to (15), wherein the protein strength is SAMAP1 (ASAP1 / DDEF1).
  • R 1 represents a hydrogen atom, hydroxy, carboxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy or substituted or unsubstituted lower alkanoyloxy;
  • R 2 represents a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • R 3A and R 3B are the same or different and represent a hydrogen atom, hydroxy, carboxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy or substituted or unsubstituted lower alkanoyloxy, or R 3A and R 3B together. Represents the oxygen atom,
  • R 4 represents a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • R 5A and R 5B are the same or different and represent a hydrogen atom, a hydroxy or a force representing a substituted or unsubstituted lower alkoxy, or R 5A and R 5B together represent an oxygen atom, R 6 represents a hydrogen atom, formyl Represents a substituted or unsubstituted lower alkyl or a substituted or unsubstituted lower alkanol,
  • R 7 is formyl, hydroxymethyl, substituted or unsubstituted lower alkoxymethyl, substituted or unsubstituted lower alkanoloxymethyl, substituted or unsubstituted lower alkanolmethyl, or —CH ⁇ NQ A [where Q A represents substituted or unsubstituted lower alkoxy, substituted or unsubstituted aryloxy, substituted or unsubstituted aralkyloxy, or mono- or di (substituted or unsubstituted lower alkyl) amino]
  • R 8 has the same meaning as R 6 above
  • R 9A and R 9B are the same or different and each represents a hydrogen atom, a hydroxy group, a force representing a hydroxy or substituted or unsubstituted lower alkoxy group, or a compound represented by R 9A and R 9B together to represent an oxygen atom, or a compound thereof
  • a method of inhibiting atypical proline-rich sequence binding comprising administering to a subject a pharmacologically acceptable salt.
  • a non-peptidic compound having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity or a pharmacologically acceptable salt thereof is represented by the general formula (I)
  • R 1 represents a hydrogen atom, hydroxy, carboxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy or substituted or unsubstituted lower alkanoyloxy;
  • R 2 represents a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • R 3A and R 3B are the same or different and represent a hydrogen atom, hydroxy, carboxy, substituted or unsubstituted lower alkoxy or substituted or unsubstituted lower alkanoyloxy, or R 3A and R 3B together. Represents the oxygen atom,
  • R 4 represents a substituted or unsubstituted lower alkyl
  • R 5A and R 5B are the same or different and represent a hydrogen atom, a hydroxy or a force representing a substituted or unsubstituted lower alkoxy, or R 5A and R 5B together represent an oxygen atom
  • R 6 represents a hydrogen atom
  • formyl represents a substituted or unsubstituted lower alkyl or a substituted or unsubstituted lower alkanol
  • R 8 has the same meaning as R 6 above,
  • R 9A and R 9B are the same or different and each represents a hydrogen atom, a hydroxy group, a force representing a hydroxy or substituted or unsubstituted lower alkoxy group, or a compound represented by R 9A and R 9B together to represent an oxygen atom, or a compound thereof Use of pharmacologically acceptable salts.
  • a non-peptidic compound having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity or a pharmacologically acceptable salt thereof is represented by the general formula (I)
  • the atypical proline-rich sequence binding inhibitor of the present invention comprises the compound represented by the general formula (I) described hereinabove or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Lower alkyl, and lower alkoxy, lower alkoxymethyl and lower alkyl part of mono- or di-lower alkylamino include, for example, linear or branched alkyl having 1 to 8 carbon atoms, specifically methyl, ethyl, Propyl, isopropyl, butyl, sec-butinole, tert-butinole, pentinole, isopentinole, neopentinole, hexinole, heptyl, octyl, etc., or cyclic alkyl having 3 to 8 carbon atoms, specifically cyclopropenole, cyclobutinole , Cyclopentinole, cyclohexinole, cycloheptinole, cyclooctyl and the like.
  • the two lower alkyl moieties of di-lower alkylamino are Identical or different.
  • the lower alkanoyl, and the lower alkanoyl moiety of lower alkanoyloxy, lower alkanoyloxymethyl and lower alkanoylmethyl include, for example, linear or branched C 2-8 carbon atoms.
  • aryl moiety of the aryloxy examples include aryl having 6 to 14 carbon atoms, specifically, phenyl, naphthyl, anthryl and the like.
  • aralkyl moiety of aralkyloxy examples include aralkyl having 7 to 15 carbon atoms, specifically benzyl, phenethyl, benzhydryl, naphthylmethyl and the like.
  • Substituents in substituted aryloxy and substituted aralkyloxy are the same or different, for example, having 1 to 5 substituents, such as hydroxy, halogen, formyl, substituted or unsubstituted lower alkyl, substituted or unsubstituted lower alkoxy , Lower alkanoyl and the like.
  • the substitution position is not particularly limited.
  • the halogen shown here represents each atom of fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • the lower alkyl portion and lower alkanol of the lower alkyl and lower alkoxy shown here are the same as the lower alkyl (1) and lower alkanol (2), and the substituents of the substituted lower alkyl and substituted lower alkoxy are as follows: 1 to 3, for example, hydroxy, lower alkoxy [the lower alkyl part of the lower alkoxy is as defined above for the lower alkyl (1)], halogen [the halogen is as defined for the halogen] and the like can give.
  • the substitution position is particularly limited.
  • the alkyl moiety, the lower alkyl moiety of lower alkyl and lower alkoxy, and the aryl moiety of aryl and aryl are as defined above for the lower alkanol (2), the lower alkyl (1), and the aryl moiety (3), respectively.
  • the substituted aryl and the substituted aryl are the same as the substituent (5) of the substituted aryloxy, and the substituted lower alkanoyl and the substituted lower alkanoyloxy include, for example, hydroxy, lower Alkoxy [the lower alkyl part of the lower alkoxy has the same meaning as the lower alkyl (1)], halogen [the halogen has the same meaning as described above] and the like.
  • atypical proline rich sequence binding inhibition refers to inhibition of protein-protein binding via an atypical proline rich sequence.
  • the atypical proline-rich sequence binding is, for example, misalignment as long as it is a binding between a protein having an SH3 domain and a protein having an atypical proline-rich sequence!
  • proteins having SH3 domains include Src files of non-receptor tyrosine kinases ⁇ 3 ⁇ 4 white matter 3 ⁇ 4rc, Yes, Fgr, Hck, Lck, Abl, Fyn (fgr / yes—related novel gene) , Lyn (lgr / yes-related novel gene), Blk (B-cell lymphocyte kinase), Yrk (Yes-related kinase), Ras- GAP (ras-GTPase-activating protein), PLC y ( Tec, Txk / Rlk, Tsk / Emt / Itk, Btk (Bruto n's tyrosine kinase), etc., adapters such as phospholipase C-gamma), PI3K (phosphatidylinositol 3-kinase), etc.
  • adapters such as phospholipase C-gamma), PI3K (phosphatidyli
  • Proteins such as Crk (CT-lObregulated), Grb2 (grow th factor receptor-bound protein 2), Nck, Vav, etc., STAT, signal tran sducers and activators of transcription), etc.
  • the NADPH oxidase complex protein is p40-phox, p67-phox, p47-phox, etc.
  • Receptor signal molecule TCRsm [Curr. Biol., 1 1 ⁇ , 1294 (2001)], etc., IL-2R (interleukin-2 receptor) j8 chain or ⁇ chain [ja -'Ob' Virology (J. Virol.), 74 ⁇ , p. 9828 (2000)].
  • the atypical proline-rich sequence referred to in the present specification means a proline-rich sequence other than the typical proline-rich sequence described above, preferably Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro ( A sequence comprising SEQ ID NO: 1), particularly preferably Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gly-His-Lys-Arg (SEQ ID NO: 2).
  • AMAPKAS AP1 / DDEF1 registration number: NCBI ACCESSION NM—018482; reference: Onodera, Y. et al., Expression of AM API, an ArfGAP, provides novel targets to inhioit breast cancer invasive activities, EMBO J. 24 (5), 963—973 (2005)), Splicing factor 3B subunit2 (N CBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506) (Beausoleil.SA, et al., Large-scale characterization of HeLa cell nuclear phosphoproteins, Proc. Natl. Acad. Bci.
  • the pharmacologically acceptable salt of a non-peptide compound (preferably a compound represented by the general formula (I)) having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity is: Examples include pharmacologically acceptable acid addition salts, metal salts, ammonium salts, organic amine addition salts, and carotenates with amino acids.
  • Non-peptidic compound having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity includes, for example, inorganic acid salts such as hydrochloride, sulfate, nitrate, phosphate, acetate, Examples include organic acid salts such as maleate, fumarate, and kenate, and pharmacologically acceptable metal salts include, for example, alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, magnesium salt, and calcium salt.
  • Alkaline earth metal salts such as aluminum salts, zinc salts and the like
  • pharmacologically acceptable ammonium salts include salts such as ammonium and tetramethylammonium salts.
  • examples of pharmacologically acceptable organic amine addition salts include addition salts such as morpholine and piperidine.
  • pharmacologically acceptable amino acid addition salts include glycine, phenylalanine, lysine, and asparagine. Acid, glutamine Addition salts and the like.
  • the compound represented by the general formula (I) used in the present invention is a known compound, and can be produced according to the method described in International Publication WO03Z006060.
  • the above compound 1 (UCS15A) (Luminacin C2 / SI-4228A) is obtained from The Journal of Antibiotics, 53, 579 (2000), Japanese Patent Laid-Open No. 58. -1 No. 16686, No. 63-22583, No. 61-293920, No. 62-294619, No. 63-48213, No. 8-268888 It is described as a compound having inhibitory action, anti-tinea fungus activity, and anti-tumor activity.
  • a non-peptide compound having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity preferably a compound represented by the general formula (I)
  • a pharmaceutically acceptable salt thereof An inhibitor of cancer invasion and Z or metastasis is provided.
  • cancer has the broadest meaning including all malignant tumors, including carcinoma (epithelial malignant tumor), sarcoma (non-epithelial malignant tumor), and Includes all of these mixed types.
  • the types of transplanted cancer can also be classified by the site of their occurrence, for example, pituitary adenoma, glioma, acoustic schwannoma, brain tumor, pharyngeal cancer, laryngeal cancer, thymoma, mesothelioma, breast cancer, lung cancer, gastric cancer , Esophageal cancer, colon cancer, hepatocellular carcinoma, knee cancer, splenic endocrine tumor, bile duct cancer, gallbladder cancer, penile cancer, ureteral cancer, renal cell cancer, testicular (testis) tumor, prostate cancer, bladder cancer, vulvar cancer Uterine cancer, Uterine sarcoma, Vaginal cancer, Breast cancer, Ov
  • metastasis specifically means that cancer cells that are present in a patient metastasize to other sites and proliferate autonomously there. Cancer metastasis is supported by invasion of cancer cells from the primary lesion into the blood vessel lymphatic vessel, selective migration of cancer cells to the metastatic organ, invasion of cancer cells from the blood vessel to the metastatic organ, and the microenvironment of the metastasis destination. It consists of the growth of cancer cells and the growth of tumors that are several millimeters in diameter with angiogenesis. Metastasis is mainly caused by the four pathways of lymphatic metastasis, hematogenous metastasis, contact metastasis, and disseminated metastasis, but the present invention is not limited to these.
  • the inhibitor of cancer invasion and Z or metastasis of the present invention can also be used for preventing cancer recurrence.
  • the recurrence of cancer means that after a cancer is removed by surgery or the like, the cancer is implanted and proliferated at another site after a certain period of time.
  • the recurrence of cancer occurs, for example, when cancer cells are left behind during surgery and the remaining cancer cells metastasize to another site. Therefore, the cancer invasion and Z or metastasis inhibitor of the present invention can be prevented from recurring by being administered to a patient prior to surgery.
  • the target patients for inhibitors of cancer invasion and Z or metastasis according to the present invention are cancer patients whose primary lesions or metastatic lesions are clinically confirmed at the same time or independently, respectively, and are suitable for surgery, chemotherapy or radiation. You may or may not have received cancer treatment such as treatment.
  • the cancer invasion and Z or metastasis inhibitors of the present invention can be used for prophylactic administration to patients with manifestations of cancer metastasis, and patients who have developed primary lesions. This can be done in a preventive manner.
  • a non-peptidic compound preferably a compound represented by the general formula (I) having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity or a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • a pharmaceutical preparation preferably a compound represented by the general formula (I)
  • these pharmaceutical preparations are used for animals and humans.
  • the atypical proline-rich sequence binding inhibitor and the inhibitor of cancer invasion and Z or metastasis according to the present invention are a compound represented by the general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Alone or as a mixture with any other therapeutic active ingredient Can.
  • These pharmaceutical preparations can be prepared by any method known in the technical field of pharmaceutics by mixing an active ingredient with one or more pharmacologically acceptable carriers. Manufactured.
  • the dosage form include tablets, powders, granules, syrups, injections and the like.
  • Liquid preparations such as syrups, suitable for oral administration include, for example, sugars such as water, sucrose, sorbitol, fructose, glycols such as polyethylene glycol, propylene glycol, sesame oil, olive oil, large It can be produced using oils such as bean oil, preservatives such as p-hydroxybenzoates, and flavors such as strawberry flavor and peppermint.
  • tablets, powders, granules and the like include excipients such as lactose, glucose, sucrose and mannitol, disintegrants such as starch and sodium alginate, lubricants such as magnesium stearate and talc, polyvinyl alcohol, It can be produced using a binder such as hydroxypropylcellulose and gelatin, a surfactant such as fatty acid ester, and a plasticizer such as glycerin.
  • Formulations suitable for parenteral administration preferably comprise a sterile aqueous solution containing an active compound which is isotonic with the blood of the recipient.
  • a solution for injection is prepared using a carrier such as a salt solution, a glucose solution, or a mixture of salt water and a glucose solution.
  • diluents In addition to these parenteral agents, diluents, preservatives, flavors, excipients, disintegrants, lubricants, binders, surfactants, plasticizers and the like exemplified as oral agents are also included.
  • auxiliary ingredients selected from the above can be added.
  • the dose and frequency of administration of the compound represented by the general formula (I) or a pharmacologically acceptable salt thereof depend on the dosage form, the age of the patient, the body weight, the nature of the condition to be treated or Depending on the severity, etc., in the case of oral administration, 0.01 mg to 1 lg, preferably 0.05 to 50 mg per adult is administered once to several times a day. In the case of parenteral administration such as intravenous administration, 0.001 to 100 mg, preferably 0.01 to 10 mg per adult is administered once to several times a day. However, the dose and the number of doses vary depending on the various conditions described above.
  • a protein having an SH3 domain interacts with a protein having an atypical proline-rich sequence in the presence of a test substance, and the protein having an SH3 domain and an atypical
  • a screening method for a substance having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity which comprises selecting a test substance that inhibits the formation of a complex with a protein having a proline-rich sequence.
  • test substance that can be used in the present invention is not particularly limited, and examples thereof include a low molecular compound, a high molecular compound, an organic compound, an inorganic compound, a protein, a gene, a virus, and a cell.
  • the screening method of the present invention can be performed, for example, by a pull-down method as described in Test Example 1 of the following Examples. That is, by introducing a cDNA of a protein having an atypical proline-rich sequence (eg, AMAP1) with a green fluorescent (GFP) tag added to a host cell such as a COS cell by a gene transfer method such as a ribofusion method. Forced expression. After the introduction of the gene, a cell extract is prepared. To this cell extract, a test substance, a protein having a SH3 domain labeled with GST (for example, cortactin) and glutathione sepharose are added and incubated.
  • GST for example, cortactin
  • a complex of a protein having an SH3 domain adsorbed on glutathione sepharose and a protein having an atypical proline-rich sequence (eg, AMAPlZcortactin complex) is purified. After purification, the SH3 domain-binding protein bead complex is electrophoresed by polyatalide amide gel electrophoresis, etc., and then a protein having an SH3 domain and a protein with an atypical porin-rich sequence are synthesized by Western plotting. Body formation can be detected or measured.
  • test substance is bound to an atypical proline-rich sequence. It can be selected as a substance having inhibitory activity.
  • Example 1 Formulation Example (Tablet)
  • a tablet having the following composition is prepared by a conventional method. 100 g of compound 1, 200 g of lactose and 84 g of starch are mixed, and 120 g of 10% hydroxypropylcellulose aqueous solution is added thereto. This mixture is kneaded by a conventional method, granulated and dried, and then sized to obtain granules for tableting. 4g of magnesium stearate is mixed and mixed with this, and tableted with a tablet with a diameter of 8mm using a tableting machine (RT-15, manufactured by Kikusui Co., Ltd.), tablets (containing 50mg of active ingredient per tablet) Get
  • Compound 1 is The Journal of Antibiotics
  • Test example 1 AMAPlZcortactinZpaxillin complex formation inhibition test
  • GST glutathione S-transferase
  • AM AP1-SH3 domain cDNA is introduced into Escherichia coli, and expression is induced by a conventional method.
  • GST-AMAP1-S H3 domain was purified.
  • AMAP1, dynamin2, or paxillin cDNA labeled with a green fluorescens (GFP) tag was introduced into COS cells by using the lipofussion method for forced expression.
  • PolyGect Qiagen was used for introduction. 36 hours after gene transfer, 1% NP—40 buffer (1% Nonidet—40, 150 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 5 mM ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), ImM Na VO, ImM Hue
  • the purified GST-cortactin or GST-AMAP1-SH3 domain and 10 ⁇ l of glutathione sepharose were added and incubated at 4 ° C. for 2 hours.
  • the AMAPlZcortactin complex adsorbed on glutathione sepharose was purified with 1% NP-40 buffer. After each of the purified SH3 domain-binding protein bead complexes, add 30 ⁇ l of Remli sample buffer [see Protein Chemistry I—Separation and Purification, Tokyo Chemical Dojin, page 211 (1976)] and mix well. And heated at 95 ° C for 3 minutes. The beads were precipitated with a rotary centrifuge at 25 ° C. and 1,000 rpm for 3 minutes, and each supernatant was subjected to 8% polyacrylamide gel electrophoresis.
  • a protein containing a proline-rich sequence in each SH3 domain-binding protein complex in the supernatant was detected by Western plotting as follows. First, the protein in the gel after electrophoresis was blotted on a 0.45 / zm-trocellulose membrane [Immobilon; manufactured by Millipore], and the membrane containing TBST containing 0.1% Tween-0.1% 20,150 mM NaCl, lOmM Tris-HC1) was applied to block nonspecific binding.
  • mouse anti-GFP antibody 1 1000 was diluted and reacted for 2 hours.
  • Test Example 2 Breast cancer cell invasive activity inhibition test
  • the vertical axis shows the Matrigel invasive activity of untreated cells or the relative invasive activity of each treated cell when the MTS activity is 100.
  • the invasion activity is greatly reduced at 1 M or less, which does not affect cytotoxicity.
  • Test Example 3 Metastasis activity inhibition test of breast cancer cells (in vivo test)
  • 4Tl / luc cells are mouse breast cancer cells in which luciferase is constitutively expressed. Translocation activity was injected into 1 x 10 6 cells into the right adipose tissue of the right cervical breast of BalbZc mice (female, 6-8 weeks old). Evaluation was made by measuring the luciferase activity in the liquid (FIG. 3A). Compound UCS15A was administered intraperitoneally to mice every day from day 11 after 4Tl / luc cell injection at final concentrations of 0.1, 0.5, and 1.0 mg / kg, respectively. In addition, the weight of the tumor formed at the original injection site on the 19th day was measured. Furthermore, the weight of the mice from the 11th day after the cell injection was measured. Twenty mice were used for each assembly.
  • the compound UCS15A inhibited the metastasis of 4Tl / luc cells to the lung in a concentration-dependent manner. Under that condition, there was no significant change in the weight of the tumor formed at the original injection site and the body weight of the mice.
  • a novel atypical proline-rich sequence binding inhibitor containing a non-peptide compound or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient. It became possible. Furthermore, the present invention makes it possible to provide a novel inhibitor of cancer invasion and Z or metastasis. Furthermore, according to the present invention, it has become possible to provide a novel screening method for a substance having an atypical proline-rich sequence binding inhibitory activity.
  • FIG. 1 shows a Western plot electropherogram showing the formation of AMAPlZcortactin complex and inhibition of the complex formation by Compound 1 (UCS15A), 2b or 2c.
  • FIG. 2 shows a Western plot electropherogram showing the formation of the dynamin2Zcortactin complex and the inhibition of the complex formation by Compound 1 (UCS15A) or 2c.
  • FIG. 3 shows a Western plot electropherogram showing the formation of the AMAPlZpaxillin complex and the inhibition of the formation of the complex by Compound 1 (UCS15A), 2b or 2c.
  • FIG. 4 shows inhibition of breast cancer cell invasion activity by Compound 1 (UCS15A), 2b or 2c. Invasion activity was measured in a Boyden chamber coated with matrigel.
  • FIG. 5 shows inhibition of breast cancer cell survival activity by Compound 1 (UCS15A), 2b or 2c. The MTS activity of the cells was measured.
  • FIG. 6 shows suppression of breast cancer metastasis to lung by Compound 1 (UCS15A).
  • FIG. 7 shows the tumor weight at the site of breast cancer cell injection.
  • FIG. 8 shows the body weight of mice from day 11 after breast cancer cell injection.

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Abstract

　本発明の目的は、非ペプチド性化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤を提供することである。本発明によれば、一般式（I） （式中、R1、R2、R3A、R3B、R4、R5A、R5B、R6、R7、R8、R9A及びR9Bは明細書中の定義の通りである）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤が提供される。

Description

明 細 書
非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤
技術分野
[0001] 本発明は、非ペプチド性ィ匕合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分と して含有する非典型的 (Atypical)なプロリンリッチ配列結合阻害剤に関する。また本 発明は、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤を有効成分として含む癌の浸潤 及び Z又は転移の阻害剤に関する。さらに本発明は、非典型的なプロリンリッチ配列 結合阻害剤のスクリーニング方法に関する。 背景技術
[0002] 癌の最も大きな脅威はその浸潤 ·転移性にある。癌細胞の示す浸潤活性や転移活 性を阻害することによって、癌の治療や癌患者の QOLの向上を目指す試みは非常 に数多くなされてきている。例えば、癌の浸潤には、癌細胞の表面に分泌される蛋白 質分解酵素であるマトリクスメタ口プロテア一ゼゃセリンプロテアーゼの活性が必須で あることから、これらの酵素類に対する多くの種類の阻害剤が開発された (非特許文 献 1)。
[0003] しかし、それらの癌患者への投与例において、臨床適用に耐える良好な結果を与 えた例はほとんどない。これは、各々の癌において、その浸潤過程に 1種類の蛋白質 分解酵素のみが関与するのではなぐおそらく複数種の蛋白質分解酵素が同時に関 与するためであると考えられている。従って、癌の浸潤に関与するより基本的、根幹 的な分子装置を見出し、その活性を阻害することが必要であると考えられる。
[0004] 上皮癌の場合、転移の多くはまず癌細胞の基底膜への浸潤を介して起こる。このこ とは、ヒト乳癌において顕著であることが、その病理学的所見により示されている（非 特許文献 2)。しかし、癌細胞の浸潤や転移をもたらす基本的分子機序やその応用 による癌浸潤阻害の手立てに関して、世界レベルで既に多くの試みがある力 有効 性が確認されたものが皆無に等しいのが現状であり、新しい方法論や分子標的の検 索が行われて 、る段階である。
[0005] 細胞膜上には様々な受容体が存在し、細胞外刺激に応じて活性化されて細胞内 にそのシグナルを伝達する。受容体の細胞質側には各種のシグナル分子が集まり、 複合体を形成する。刺激の種類により、各シグナル分子は異なった生理作用を誘発 する。シグナル分子の複合体の形成には、ドメイン構造が重要な役割を果たしている
。その中でも、 Srcホモロジ一ドメイン 3 (SH3ドメイン）は、 Srcファミリ一間の相同'性の高 い領域として発見され、およそ 60アミノ酸力 成るドメインで様々な蛋白質中に位置し 、プロリンを含む配列（プロリンリッチ配列）を認識して結合することが知られて 、る（非 特許文献 3)。
[0006] SH3ドメインは細胞の増殖制御や細胞骨格制御をはじめとして様々な重要局面に 関与することから、製薬企業を中心として、 SH3ドメインの結合阻害剤のスクリーニン グが行われてきた。例えば、特許文献 1には、 SH3ドメイン結合阻害活性を有する非 ペプチド性化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する SH 3ドメイン結合阻害剤が記載されて 、る。
[0007] しかし、 SH3ドメインはヒトのもつ種々のタンパク質に数多く存在し、また、構造的にも 互いに良く保存され、結合相手であるプロリンペプチドも互いに類似している。そのた め、ある一つの SH3結合を阻害することを目安に阻害剤をスクリーニングしても、得ら れたものは、他の多くの SH3結合をも同様に阻害してしまった例が殆どのようである。 従って、このような阻害剤を、例えば抗癌剤ゃ抗炎症剤、血管新生阻害剤などに用 いようとしても、副作用が強く役に立たな力つたものがほとんどであると考えられる。
[0008] 特許文献 1：国際公開 03Z006060号パンフレット
非特許文献 1：サイエンス (Science)、 295卷、 2387-2392頁（2002年）
非特許文献 2 :エンドクリンーリレイテッド'キャンサー（Endocrine- Related Cancer)、 8 卷、 47-61頁（2001年）
非特許文献 3 :サイエンス（Science)、 252卷、 668頁（1991年）、同 257卷、 803頁（1992 年）、ファセブ'ジャーナル（FASEB J.)、 14卷、 231頁（2000年）
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0009] 本発明は、非ペプチド性ィ匕合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分と して含有する非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤を提供することを解決すべき 課題とした。さらに本発明は、癌の浸潤及び Z又は転移の抑制剤を提供することを 解決すべき課題とした。さらに本発明は、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活 性を有する物質のスクリーニング方法を提供することを解決すべき課題とした。
課題を解決するための手段
[0010] 本発明者らは、細胞の癌化、運動や浸潤に関わる基本的分子機構の解明を目指し て、ヒト乳癌細胞を用いて、その浸潤や転移活性の制御と細胞内シグナル伝達機構 に関する研究を行ってきた力 その中で、低分子量 G蛋白質である ArlBや、その制御 因子の一つである AMAP1が重要な役割をなすことを明らかにしてきた。また、ヒト正 常乳腺上皮や非浸潤性乳癌には検出されない、浸潤性乳癌に特化された蛋白質複 合体があることを明らかにしてきた。この複合体は、 AMAPl/paxillin/cortactinの三者 からなり、その形成は Srcホモロジ一ドメイン 3 (SH3ドメイン）によって媒介される。すな わち、 AMAP1は、その SH3ドメインで paxillinのプロリン配列と結合し、 cortactinは、そ の SH3ドメインで AMAP1のプロリン配列と結合している。モデル実験として、各々の SH 3結合をペプチドを用いて阻害すると、各種乳癌細胞の浸潤活性とマウス個体におけ る転移を著しく抑制できることを明らかにした。さらに、 cortactinの SH3ドメインは AMA P1の KKRPPPPPPGHKR配列と結合することを明らかにしている。 cortactinと AMAP1と の結合様式が他の SH3でも一般的に見られるようなものであれば、それを分子標的と した抗癌剤は、 SH3結合が関与する細胞の多くの機能にも影響を及ぼし、現実的妥 当性に欠ける。本発明者らはこの点に関して研究を進め、 X線構造解析を用いた解 析結果から、 cortactinの SH3ドメインと AMAP1の KKRPPPPPPGHKR配列との相互作 用インターフェース構造は、他の一般的な SH3Zプロリン結合とは大きく異なること、 見出しているリード化合物は幾つかの SH3の結合を阻害する力 その IC50値は AMA PlZcortactin結合阻害に比べ 100倍以上高い（阻害しない）ことを明らかにしている
[0011] 本発明者らは今回、 AMAP1が cortactinと paxillinと呼ばれる特定の蛋白質と複合体 を形成することが、多くのヒト乳癌細胞の浸潤活性や転移活性に関与しており、この 複合体形成の阻害によって浸潤活性と転移活性を効率良く阻害できることを示した。 本発明はこれらの知見に基づ!、て完成したものである。 本発明は以下の（1)〜（37)に関する。
(1) 一般式 (I)
[化 1]
Figure imgf000005_0001
{式中、 R1は水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキ シまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表し、
R2は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R3A及び R3Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは 非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表 す力 または R3Aと R3Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R4は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R5A及び R5Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R5Aと R5Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R6は水素原子、ホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキルまたは置換もしくは非 置換の低級アルカノィルを表し、
R7はホルミル、ヒドロキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルコキシメチル、置換も しくは非置換の低級アルカノィルォキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ルメチルまたは— CH=NQA [式中、 QAは置換もしくは非置換の低級アルコキシ、置 換もしくは非置換のァリールォキシ、置換もしくは非置換のァラルキルォキシまたはモ ノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノを表す]を表し、
R8は前記 R6と同義であり、
R9A及び R9Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R9Aと R9Bが一緒になつて酸素原子を表す }で表さ れる化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、非典型 的なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[0013] (2) 非典型的なプロリンリッチ配列結合が、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的 なプロリンリッチ配列を有する蛋白質との結合である、 ( 1)に記載の非典型的なプロリ ンリッチ配列結合阻害剤。
[0014] (3) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Proを含む配列である 、 （1)又は（2)に記載の非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
(4) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- G1 y-His-Lys-Argである、（1)から（3)の何れかに記載の非典型的なプロリンリッチ配列 結合阻害剤。
[0015] (5) SH3ドメインを有する蛋白質力 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk、 Yrk、 Ras- GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nck、 Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TCR sm)または IL-2Rの /3鎖もしくは γ鎖である、（1)から (4)の何れかに記載の非典型的 なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[0016] (6) 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Sp licing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of GA TA-1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCESSI ON CAD97834)である、（1)から（5)の何れかに記載の非典型的なプロリンリッチ配 列結合阻害剤。
[0017] (7) SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列を 有する蛋白質が AMAP1(ASAP1/DDEF1)である、（1)から（6)の何れかに記載の非 典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[0018] (8) 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物また はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、癌の浸潤及び Z又は転 移の抑制剤。
[0019] (9) 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物また はその薬理学的に許容される塩が、一般式 (I)
[化 2]
(
Figure imgf000007_0001
R9A及び R9Bはそれぞれ前記と同義 である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、 (8)に記載の 癌の浸潤及び Z又は転移の阻害剤。
[0020] (10) 癌が乳癌である、（8)又は（9)に記載の癌の浸潤及び Z又は転移の阻害剤。
[0021] (11) 被験物質の存在下において SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプロリン リッチ配列を有する蛋白質とを相互作用させ、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型 的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質との複合体の形成を阻害する被験物質を選 択することを特徴とする、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する物質 のスクリーニング方法。
[0022] (12) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列であ る、（11)に記載のスクリーニング方法。
(13) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly-His-Lys-Argである、（11)又は（12)に記載のスクリーニング方法。
[0023] (14) SH3ドメインを有する蛋白質力 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk 、 Yrk、 Ras- GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nck 、 Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TC Rsm)または IL-2Rの j8鎖もしくは γ鎖である、（11)から（13)の何れかに記載のスクリ 一ユング方法。
[0024] (15) 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of G ATA— 1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCES SION CAD97834)である、（11)から（14)の何れかに記載のスクリーニング方法。
[0025] (16) SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列 を有する蛋白質力 SAMAP1(ASAP1/DDEF1)である、（11)から（15)の何れかに記載 のスクリーニング方法。
[0026] (17) (11)から（16)の何れかに記載の方法により選択される、非典型的なプロリン リッチ配列結合阻害活性を有する物質。
[0027] (18) 一般式 (I)
[化 3]
Figure imgf000008_0001
{式中、 R1は水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキ シまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表し、
R2は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R3A及び R3Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは 非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表 す力 または R3Aと R3Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R4は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R5A及び R5Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R5Aと R5Bが一緒になつて酸素原子を表し、 R6は水素原子、ホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキルまたは置換もしくは非 置換の低級アルカノィルを表し、
R7はホルミル、ヒドロキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルコキシメチル、置換も しくは非置換の低級アルカノィルォキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ルメチルまたは— CH=NQA [式中、 QAは置換もしくは非置換の低級アルコキシ、置 換もしくは非置換のァリールォキシ、置換もしくは非置換のァラルキルォキシまたはモ ノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノを表す]を表し、
R8は前記 R6と同義であり、 R9A及び R9Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R9Aと R9Bが一緒になつて酸素原子を表す }で表さ れる化合物またはその薬理学的に許容される塩を、被験者に投与することを含む、 非典型的なプロリンリッチ配列結合を阻害する方法。
[0028] (19) 非典型的なプロリンリッチ配列結合が、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型 的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質との結合である、 (18)に記載の方法。
[0029] (20) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列であ る、（18)又は（19)に記載の方法。
(21) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly-His-Lys-Argである、（18)から（20)の何れかに記載の方法。
[0030] (22) SH3ドメインを有する蛋白質力 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk 、 Yrk、 Ras- GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nck 、 Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TC Rsm)または IL-2Rの j8鎖もしくは γ鎖である、（18)から（21)の何れかに記載の方法
[0031] (23) 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of G ATA— 1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCES SION CAD97834)である、（18)から（22)の何れかに記載の方法。
[0032] (24) SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列 を有する蛋白質力 SAMAP1(ASAP1/DDEF1)である、（18)から（23)の何れかに記載 の方法。
[0033] (25) 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物ま たはその薬理学的に許容される塩を哺乳動物に投与することを含む、癌の浸潤及び
Z又は転移を抑制する方法。
[0034] (26) 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物ま たはその薬理学的に許容される塩が、一般式 (I)
[化 4]
(
Figure imgf000010_0001
R9A及び R9Bはそれぞれ前記と同義 である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、 (25)に記載 の方法。
[0035] (27) 癌が乳癌である、（25)又は（26)に記載の方法。
[0036] (28) 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤の製造のための、一般式 (I)
[化 5]
Figure imgf000010_0002
{式中、 R1は水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキ シまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表し、
R2は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R3A及び R3Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは 非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表 す力 または R3Aと R3Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R4は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R5A及び R5Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R5Aと R5Bが一緒になつて酸素原子を表し、 R6は水素原子、ホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキルまたは置換もしくは非 置換の低級アルカノィルを表し、 R7はホルミル、ヒドロキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルコキシメチル、置換も しくは非置換の低級アルカノィルォキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ルメチルまたは— CH = NQA [式中、 QAは置換もしくは非置換の低級アルコキシ、置 換もしくは非置換のァリールォキシ、置換もしくは非置換のァラルキルォキシまたはモ ノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノを表す]を表し、
R8は前記 R6と同義であり、
R9A及び R9Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R9Aと R9Bが一緒になつて酸素原子を表す }で表さ れる化合物またはその薬理学的に許容される塩の使用。
[0037] (29) 非典型的なプロリンリッチ配列結合が、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型 的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質との結合である、 (28)に記載の使用。
[0038] (30) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列であ る、（28)又は（29)に記載の使用。
(31) 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly-His-Lys-Argである、（28)から（30)の何れかに記載の使用。
[0039] (32) SH3ドメインを有する蛋白質力 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk 、 Yrk、 Ras- GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nck 、 Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TC Rsm)または IL-2Rの β鎖もしくは γ鎖である、（28)から（31)の何れかに記載の使用
[0040] (33) 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of G ATA— 1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCES SION CAD97834)である、（28)から（32)の何れかに記載の使用。
[0041] (34) SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列 を有する蛋白質力 SAMAP1(ASAP1/DDEF1)である、（28)から（33)の何れかに記載 の使用。
[0042] (35) 癌の浸潤及び Z又は転移の抑制剤の製造のための、非典型的なプロリンリツ チ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィヒ合物またはその薬理学的に許容され る塩の使用。
[0043] (36) 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性化合物ま たはその薬理学的に許容される塩が、一般式 (I)
[化 6]
Figure imgf000012_0001
(式中、
Figure imgf000012_0002
R2、 R3A、 R3B、 R4、 R5A、 R5B、 R6、 R7、 R8、 R9A及び R9Bはそれぞれ前記と同義 である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、 (35)に記載 の使用。
[0044] (37) 癌が乳癌である、（35)又は（36)に記載の使用。
発明を実施するための最良の形態
[0045] 以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本発明の非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤は、本明細書中上記した一般 式 (I)で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有 することを特徴とする。
[0046] 一般式 (I)の各基の定義において、
(1)低級アルキル、ならびに低級アルコキシ、低級アルコキシメチル及びモノもしくは ジ低級アルキルァミノの低級アルキル部分としては、例えば直鎖もしくは分枝状の炭 素数 1〜8のアルキル、具体的にはメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、 sec—ブチノレ、 tert—ブチノレ、ペンチノレ、イソペンチノレ、ネオペンチノレ、へキシノレ、へ プチル、ォクチル等、または例えば環状の炭素数 3〜8のアルキル、具体的にはシク 口プロピノレ、シクロブチノレ、シクロペンチノレ、シクロへキシノレ、シクロへプチノレ、シクロ ォクチル等があげられる。なお、ジ低級アルキルァミノの 2つの低級アルキル部分は 同一でも異なって 、てもよ 、。
[0047] (2)低級アルカノィル、ならびに低級アルカノィルォキシ、低級アルカノィルォキシメ チル及び低級アルカノィルメチルの低級アルカノィル部分としては、例えば直鎖また は分枝状の炭素数 2〜8のアルカノィル、具体的にはァセチル、プロピオニル、ブチリ ル、イソブチリル、ノ レリノレ、イソバレリル、ピバロィル、へキサノィル、ヘプタノィル、ォ クタノィル等があげられる。
[0048] (3)ァリールォキシのァリール部分としては、例えば炭素数 6〜14のァリール、具体 的にはフエニル、ナフチル、アントリル等があげられる。
[0049] (4)ァラルキルォキシのァラルキル部分としては、例えば炭素数 7〜15のァラルキル 、具体的にはベンジル、フエネチル、ベンズヒドリル、ナフチルメチル等があげられる。
[0050] (5)置換ァリールォキシおよび置換ァラルキルォキシにおける置換基としては、同一 または異なって例えば置換数 1〜5の、ヒドロキシ、ハロゲン、ホルミル、置換もしくは 非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルコキシ、低級アルカノィル等 があげられる。置換位置は特に限定されない。ここで示したハロゲンはフッ素、塩素、 臭素、ヨウ素の各原子を表す。またここで示した低級アルキルおよび低級アルコキシ の低級アルキル部分ならびに低級アルカノィルは、前記低級アルキル（1)および前 記低級アルカノィル（2)と同義であり、置換低級アルキルおよび置換低級アルコキシ の置換基としては、置換数 1〜3の例えばヒドロキシ、低級アルコキシ [該低級アルコ キシの低級アルキル部分は前記低級アルキル（1)と同義である]、ハロゲン [該ハ口 ゲンは前記ハロゲンと同義である]等があげられる。
[0051] (6)置換低級アルキル、置換低級アルコキシ、置換低級アルコキシメチル、置換低級 アルカノィル、置換低級アルカノィルォキシ、置換低級アルカノィルォキシメチル、モ ノもしくはジ置換低級アルキルアミ入及び置換低級アルカノィルメチルにおける置換 基としては、同一または異なって例えば置換数 1〜3の、ヒドロキシ、低級アルキル、 低級アルコキシ、カルボキシ、ォキソ、アミ入エポキシ、置換もしくは非置換の低級ァ ルカノィル、置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシ、置換もしくは非置換のァ リール、置換もしくは非置換のァロイル等があげられる。置換位置は、特に限定され ル部分、低級アルキルおよび低級アルコキシの低級アルキル部分、ならびにァリー ルおよびァロイルのァリール部分は、それぞれ前記低級アルカノィル（2)、前記低級 アルキル（1)、および前記ァリール部分（3)と同義である。置換ァリールおよび置換 ァロイルの置換基は、前記置換ァリールォキシの置換基 (5)と同義であり、置換低級 アルカノィルおよび置換低級アルカノィルォキシの置換基としては、置換数 1〜3の 例えばヒドロキシ、低級アルコキシ [該低級アルコキシの低級アルキル部分は前記低 級アルキル（1)と同義である]、ハロゲン [該ハロゲンは前記と同義である]等があげら れる。
[0052] 本明細書で言う非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害とは、非典型的なプロリンリ ツチ配列を介した蛋白質 蛋白質結合の阻害のことを言う。
[0053] 非典型的なプロリンリッチ配列結合とは、例えば、 SH3ドメインを有する蛋白質と非 典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質との結合であれば 、ずれでもよ!/、。
[0054] SH3ドメインを有する蛋白質としては、例えば非受容体型チロシンキナーゼの Srcフ ァ リ ~~ ¾白質である ¾rc、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn (fgr/yes— related novel gene )、 Lyn (lgr/yes- related novel gene)、 Blk (B- cell lymphocyte kinase)、 Yrk (Yes- relat ed kinase)等、酵素活性を有する Ras- GAP (ras-GTPase- activating protein)、 PLC y (phospholipase C- gamma)、 PI3K (phosphatidylinositol 3- kinase)等、非受容体型チ 口シンキナーゼの Tecファミリー蛋白質である Tec、 Txk/Rlk、 Tsk/Emt/Itk、 Btk (Bruto n's tyrosine kinase)等、アダプター蛋白質である Crk (CT- lObregulated)、 Grb2 (grow th factor receptor-bound protein 2)、 Nck、 Vav等、 与因十 ζ¾る STAT、signal tran sducers and activators of transcription)等、ァクチン骨格形成に関わる Cortactin等、 NADPHォキシターゼ複合体の構成蛋白質である p40-phox、 p67-phox、 p47-phox等 、 T細胞受容体のシグナル分子である TCRsm [カレント 'バイオロジー（Curr. Biol.) , 1 1卷、 1294頁（2001年） ]等、 IL- 2R (interleukin- 2 receptor)の j8鎖もしくは γ鎖 [ジャ ーナル 'ォブ 'バイロロジー（J. Virol.)、 74卷、 9828頁（2000年）]等があげられる。
[0055] プロリンリッチ配列は、典型的な配列として以下のものが知られている。
RPLPPX# P
RPLPXLP RXLPX# P
PXXPXR RPX# P #R+
PPX@XPPP # P
(式中、 Xは、あらゆるアミノ酸を示し、 #は脂肪族アミノ酸を示し、 @は芳香族ァミノ 酸を示し、 +は塩基性アミノ酸を示す。 )
[0056] 本明細書で言う非典型的なプロリンリッチ配列とは、上記した典型的なプロリンリツ チ配列以外のプロリンリッチ配列を意味し、好ましくは、 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro ( 配列番号 1)を含む配列であり、特に好ましくは Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro- Pro-Gly-His-Lys-Arg (配列番号 2)である。
[0057] 本明細書で言う非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質としては、 AMAPKAS AP1/DDEF1) (登録番号： NCBI ACCESSION NM— 018482；参照文献： Onodera, Y.他 、 Expression of AM API, an ArfGAP, provides novel targets to inhioit breast cancer invasive activities, EMBO J. 24(5), 963—973 (2005))、 Splicing factor 3B subunit2 (N CBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506) (Beausoleil.S.A.,他、 Large- scale charact erization of HeLa cell nuclear phosphoproteins, Proc. Natl. Acad. bci. U.S.A. 101 (3 3), 12130-12135,(2004))、 friend of GATA- 1 (NCBI ACCESSION AAN45858) (Freso n,K.,他、 Molecular cloning and characterization of the GATAl cofactor human FO Gl and assessment of its binding to GATAl proteins carrying D218 substitutions, H um. Genet. 112 (1), 42—49 (2003))、または hypothetical protein (NCBI ACCESSION CAD97834) (Wambutt.R.,他、 TITLE： Direct Submission JOURNAL Submitted (17 -JUN-2003) MIPS, Ingolstaedter Landstr. l, D- 85764, Neuherberg, GERMANY)な どをあげることができる。
[0058] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物 (好まし くは、一般式 (I)で表される化合物)の薬理学的に許容される塩は、例えば薬理学的 に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニゥム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付カロ 塩等を包含する。
[0059] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物 (好まし くは、一般式 (I)で表される化合物)の薬理学的に許容される酸付加塩としては、例え ば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル 酸塩、クェン酸塩等の有機酸塩等があげられ、薬理学的に許容される金属塩として は、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム 塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられ、薬理学的に許容 されるアンモ-ゥム塩としては、アンモ-ゥム、テトラメチルアンモ -ゥム等の塩があげ られ、薬理学的に許容される有機アミン付加塩としては、モルホリン、ピぺリジン等の 付加塩があげられ、薬理学的に許容されるアミノ酸付加塩としては、グリシン、フエ二 ルァラニン、リジン、ァスパラギン酸、グルタミン酸等の付加塩があげられる。
[0060] 本発明で使用される一般式 (I)で表される化合物は、公知化合物であり、国際公開 WO03Z006060号公報に記載の方法に準じて製造することができる。
[0061] 一般式 (I)で表される化合物の中でも特に好ましい化合物を以下に示す。
[化 7]
Figure imgf000016_0001
[0062] [表 1]
化合物
1
OH -OH, H =0 H CHO
(UCS15A)
2 -OH - 0H， H =0 H CH20H
3 -OCOCH3 -OCOCH3, H =0 -COCH3 -CH20C0CH3
4 OH -OH, H H， OH H C¾OH
5 OH 0H， H =0 H - CH=匪 CH3
6 -OH -OH, H =0 H - CH=NOC
7 OH -OH, H =0 H， CH3 - CH2C (=0) CH3
8 - OH =0 =0 H - CHO
[0063] 上記化合物 1 (UCS15A) (Luminacin C2/SI-4228A)は、ザ'ジャーナル'ォブ 'アン チバイオティックス（The Journal of Antibiotics)、 53卷、 579頁（2000年）、特開昭 58- 1 16686号、同昭 63-22583号、同昭 61-293920号、同昭 62-294619号、同昭 63-48213 号、同平 8-268888号に、骨吸収抑制作用、殺菌作用、免疫抑制作用、抗白癬菌作 用、抗腫瘍活性を有する化合物として記載されている。
[0064] 本発明によれば、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド 性化合物 (好ましくは、一般式 (I)で表される化合物)またはその薬理学的に許容され る塩を有効成分として含有する、癌の浸潤及び Z又は転移の抑制剤が提供される。
[0065] 本明細書で用いる「癌」とは、悪性腫瘍の全てを包含する最も広 、意味を有し、癌 腫 (上皮性の悪性腫瘍)、肉腫 (非上皮性の悪性腫瘍)、並びにこれらの混合型の全 てを包含する。移植癌の種類はその発生部位によっても分類することもでき、例えば 、下垂体腺腫、神経膠腫、聴神経鞘腫、脳腫瘍、咽頭癌、喉頭癌、胸腺腫、中皮腫 、乳癌、肺癌、胃癌、食道癌、大腸癌、肝細胞癌、膝癌、脾内分泌腫瘍、胆管癌、胆 嚢癌、陰茎癌、尿管癌、腎細胞癌、精巣 (睾丸)腫瘍、前立腺癌、膀胱癌、外陰癌、 子宮癌、子宮肉腫、膣癌、乳癌、卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、悪性黒色腫、菌状息肉 症、皮膚癌、軟部肉腫、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、多 発性骨髄腫、形質細胞性腫瘍、褐色リンパ腫および脾内分泌腫瘍などがあげられる 力 上記具体例は癌の具体例を例示したものにすぎず、これらに限定されるわけで はない。特に好ましくは、癌は乳癌である。
[0066] 本明細書で言う「転移」とは、具体的には、患者に存在して 、た癌細胞が他の部位 に転移してそこで自律的に増殖していくことを言う。癌の転移は、原発巣から血管ゃリ ンパ管内への癌細胞の浸潤、転移臓器への癌細胞の選択的な移動、血管から転移 臓器への癌細胞の浸潤、転移先の微小環境に支えられた癌細胞の増殖、血管新生 を伴った直径数ミリメートル以上となる腫瘍の増殖等の過程よりなる。転移は主として 、リンパ行性転移、血行性転移、接触性転移及び播種性転移の 4通りの経路により 生じるが、本発明ではこれらに限定されるものではない。
[0067] 本発明の癌の浸潤及び Z又は転移の阻害剤は、癌の再発予防のために使用する こともできる。癌の再発とは手術等で癌を一旦切除した後、一定期間経過後に別の 部位で癌が着床 z増殖していくことを言う。癌の再発は、例えば、手術の際における 癌細胞の取り残し等が原因となり、残存した癌細胞が別の部位に転移することによつ て生じる。従って、本発明の癌の浸潤及び Z又は転移の阻害剤は、手術に先立って 患者に投与することによって、癌の再発を予防することができる。本発明の癌の浸潤 及び Z又は転移の阻害剤の対象患者は、原発巣もしくは転移巣が同時、またはそれ ぞれ単独で臨床的に確認される癌患者であり、外科療法、化学療法又は放射線療 法等の癌の治療は受けていてもよいし、受けていなくてもよい。また、本発明の癌の 浸潤及び Z又は転移の阻害剤は、癌転移の症状がはっきり現れて!、な!、患者への 予防的投与のために用いることもでき、原発巣を発症した患者に対して予防的に投 与することちでさる。
[0068] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物 (好まし くは、一般式 (I)で表される化合物)またはそれらの薬理学的に許容される塩は、その まま単独で投与することも可能であるが、通常各種の医薬製剤として提供するのが望 ましい。また、それら医薬製剤は、動物および人に使用されるものである。
[0069] 本発明による非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤及び癌の浸潤及び Z又は 転移の阻害剤は、一般式 (I)で表される化合物またはそれらの薬理学的に許容され る塩を単独で、あるいは任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有す ることができる。また、それら医薬製剤は、活性成分を薬理学的に許容される一種もし くはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野にぉ 、てよく知られて 、る 任意の方法により製造される。
[0070] 投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましぐ例えば経口ま たは、例えば静脈内等の非経口等をあげることができる。投与形態としては、例えば 錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤等がある。
[0071] 経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、例えば水、蔗糖、ソ ルビット、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコー ル類、ごま油、ォリーブ油、大豆油等の油類、 p—ヒドロキシ安息香酸エステル類等の 防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を使用して製造で きる。また、錠剤、散剤および顆粒剤等は、例えば乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニット 等の賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク 等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の 結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を用いて製造で きる。
[0072] 非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性ィ匕合物を 含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、例えば塩溶液、ブドウ糖溶液 または塩水とブドウ糖溶液の混合物等カゝらなる担体等を用いて注射用の溶液を調製 する。
[0073] また、これら非経口剤にぉ 、ても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー 類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤等から選択される 1種も しくはそれ以上の補助成分を添加することもできる。
[0074] 一般式 (I)で表される化合物またはそれらの薬理学的に許容される塩の投与量およ び投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤 度等により異なるが、通常経口の場合、成人一人当り 0.01mg〜lg、好ましくは 0.05〜 50mgを一日一回ないし数回投与する。静脈内投与等の非経口投与の場合、成人一 人当り 0.001〜100mg、好ましくは 0.01〜10mgを一日一回ないし数回投与する。しかし ながら、これら投与量および投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動する [0075] さらに本発明によれば、被験物質の存在下において SH3ドメインを有する蛋白質と 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質とを相互作用させ、 SH3ドメインを有す る蛋白質と非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質との複合体の形成を阻害 する被験物質を選択することを特徴とする、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害 活性を有する物質のスクリーニング方法が提供される。
[0076] 本発明で用いることができる被験物質は特に限定されず、例えば、低分子化合物、 高分子化合物、有機化合物、無機化合物、蛋白質、遺伝子、ウィルス、細胞などがあ げられる。
[0077] 本発明のスクリーニング方法は、例えば、以下の実施例の試験例 1に記載するよう なプルダウン法による行うことができる。即ち、 COS細胞などの宿主細胞にグリーンフ ルオレセンス (GFP)タグを付加した非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質（ 例えば、 AMAP1)の cDNAをリボフヱクシヨン法などの遺伝子導入法により導入するこ とによって強制発現させる。遺伝子の導入後に、細胞抽出液を調製する。この細胞 抽出液に対して、被験物質、 GSTで標識した SH3ドメインを有する蛋白質 (例えば、 co rtactinなど）及びグルタチオンセファロースを加え、インキュベートする。グルタチオン セファロースに吸着した SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプロリンリッチ配列 を有する蛋白質との複合体 (例えば、 AMAPlZcortactin複合体)を精製する。精製 後の SH3ドメイン結合蛋白質ビーズ複合体をポリアタリドアミドゲル電気泳動などで電 気泳動した後、ウェスタンプロット法により SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプ 口リンリッチ配列を有する蛋白質との複合体の形成を検出又は測定することができる 。上記の方法により被験物質の存在により SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的な プロリンリッチ配列を有する蛋白質との複合体の形成が阻害される場合は、当該被験 物質を非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する物質として選択すること ができる。
[0078] 以下の実施例、参考例及び試験例により本発明をさらに具体的に説明するが、本 発明は実施例によって限定されるものではない。
実施例 [0079] 実施例 1 :製剤例 (錠剤）
常法により、次の組成からなる錠剤を調製する。 100gの化合物 1、乳糖 200g及びデ ンプン 84gを混合し、これに 10%ヒドロキシプロピルセルロース水溶液 120gを加える。 この混合物を定法により練合し、造粒して乾燥させた後、整粒し打錠用顆粒とする。 これにステアリン酸マグネシウム 4gをカ卩えて混合し、径 8mmの杵を用い打錠機 (菊水 社製 RT— 15型)で打錠を行って、錠剤（1錠あたり活性成分 50mgを含有する）を得る
[0080] 処方 化合物 50 mg
乳糖 100 mg
デンプン 42 mg
ヒ ドロキシプロピルセノレ口 6 mg
ステアリン酸マグネシウム 2 mg
200 rag
[0081] 参考例 1：化合物 1 (UCS15A/Luminacin C2/SI-4228A)
化合物 1は、ザ'ジャーナル ·ォブ ·アンチバイオテイクス（The Journal of Antibiotics
)、 53卷、 579頁（2000年）および特開昭 58-116686号記載の方法により、該化合物の 生産能を有する Streptomyces属に属する放線菌を培養し、培養液中力ゝら単離精製 すること〖こより得られた。
[0082] 化合物 1 (UCS15A/Luminacin C2/SI-4228A)：
1H-NMR (CDC1 , 300 MHz) δ (ppm): 14.16 (IH, s), 12.93 (IH, s), 10.35 (IH, s), 8.
3
01 (IH, s), 4.85 (IH, d, J = 3.2 Hz), 4.36 (IH, dd, J = 8.1, 9.6 Hz), 4.27 (IH, d, J = 7.0 Hz), 4.11 (IH, ddd, J = 4.6, 11.4, 11.4 Hz), 3.66 (IH, m), 3.53 (IH, d, J = 3.2 Hz), 3.19 (IH, t, J = 6.2 Hz), 3.14 (3H, s), 1.85-1.98 (2H, m), 1.69-1.78 (2H, m), 1 .40-1.58 (3H, m), 1.08—1.19 (2H, m), 0.98 (3H, t, J = 7.5 Hz), 0.91 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.79 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.77 (3H, d, J = 6.8 Hz); FAB-MS m/z 479 [M- H]— .
[0083] 試験例 1： AMAPlZcortactinZpaxillinの複合体形成阻害試験
COS細胞にぉ 、て強制発現させた AMAP1、 paxillinと大腸菌にぉ 、て発現 Z精製 した cortactin、 AMAPl- SH3ドメインを用いて、 AMAPl/cortactin、及び、 AMAPl/p axillinの複合体の形成の確認と、複合体形成の阻害物質の探索をプルダウン法によ り行った。
[0084] グルタチオン一 S—トランスフェラーゼ（GST)タグを付カ卩した cortactin、あるいは AM AP1-SH3ドメインの cDNAを大腸菌に導入し、常法により発現誘導し、ダルタチオン セファロース（Amersham Biosciences)により GST— cortactin、あるいは GST— AMAP1—S H3ドメインを精製した。
[0085] COS細胞にグリーンフルオレセンス (GFP)タグを付カ卩した AMAP1、あるいは、 dyn amin2、あるいは、 paxillinの cDNAをリポフエクシヨン法を用いて導入することにより強 制発現させた。導入には PolyGect (Qiagen)を使用した。遺伝子導入後 36時間、細胞 抽出液を 1 % NP— 40バッファー (1%ノ-デット（Nonidet)— 40, 150mM NaCl, 20mM Tris-HCl, pH7.4, 5mMエチレンジァミン四酢酸（EDTA) , ImM Na VO , ImMフエ-
3 4
ルメチルスルホ -ルクロライド， 5 μ g/mlァプロチュン， 2 μ g/mlロイぺプチン（leupept in)および 3 g/mlぺプスタチン A)により作成した。
[0086] 300 gの細胞抽出液に対して、化合物 1 (UCS15A)、 2bまたは 2cを添カ卩し、
の精製した GST- cortactin、あるいは GST- AMAP1-SH3ドメイン、及び、 10 μ 1のグル タチオンセファロースを加え、 4°Cで 2時間インキュベートした。
[0087] 化合物 1 (UCS15A)、 2bまたは 2cの構造を以下に示す。
[0088] [化 8]
Structure of UC515A and its synthetic analogs.
Figure imgf000023_0001
OH
UCS15A
Figure imgf000023_0002
OMe OMe
Compound Compound
2b 2c
グルタチオンセファロースに吸着した AMAPlZcortactin複合体を 1% NP- 40バッファ 一により精製した。精製後の SH3ドメイン結合蛋白質ビーズ複合体それぞれに 30 μ 1 のレムリのサンプルバッファー [タンパク質の化学 I—分離精製、東京化学同人、 211 頁（1976年)参照]を添加し、よく混合させた後、 95°Cで 3分間加熱した。回転遠心機 により 25°C、 l,000rpmで 3分間ビーズを沈澱させた後、上清をそれぞれ 8%ポリアクリド アミドゲル電気泳動に供した。引き続き、以下のようにしてウェスタンプロットにより、上 記上清中の各 SH3ドメイン結合蛋白質複合体におけるプロリンリッチ配列を含む蛋白 質を検出した。まず、電気泳動後のゲル中の蛋白質を 0.45 /z mの-トロセルロース膜 [ィモビロン（Immobilon)；ミリポア（Millipore)社製]にブロット後、膜に 5%ゥシアルブミ ンを含む TBST (0.1% Tween- 20, 150mM NaCl, lOmM Tris- HC1)をのせて非特異的 結合をブロックした。プロリンリッチ配列を含む蛋白質の検出にはマウス抗 GFP抗体 、 1 : 1000に希釈して 2時間反応させた。 TBSTで洗浄した後、 1:10,000に希釈した HR P結合抗マウス抗体 [ジャクソン (Jackson)社製]を 1時間反応させた。 TBSTで洗浄し た後、検出は ECL試薬 (アマシャム ·フアルマシア ·バイオテク社製)を用 、た化学発 光により行った。 [0090] その結果、図 1〜3に示すように、 UCS15Aは、低濃度で特異的に AMAPlZcortacti nの複合体形成を阻害することが確認された。
[0091] 試験例 2：乳癌細胞の浸潤活性阻害試験
ヒト乳癌細胞 MDA— MB— 231のマトリゲル上での浸潤活性に与える影響を調べ た。細胞に化合物 UCS15A、あるいは 2b、あるいは 2cを添カ卩し、マトリゲルを塗布した Boydenチャンバ一の上に播き、その後 12時間における浸潤活性を測定した。同時 に、化合物の細胞毒性を MTSアツセィキット（3- (4,5- dimethylthiazo卜 2- yl)- 5- (3- carb oxyphenyl)— 2— (4— sulfophenyl)— 2H— tetrazolium assay kit)、ノ—口メガ (Promegaノ社製) により評価した。結果を図 4、 5に示す。縦軸は未処理の細胞の示すマトリゲル浸潤 活性あるいは、 MTS活性を 100とした時の、各々の処理細胞の相対的浸潤活性を示 す。化合物 UCS15Aの場合、細胞毒性に影響の無い 1 M以下で浸潤活性が大幅に 低下している。
[0092] 試験例 3：乳癌細胞の転移活性阻害試験 (インビボ試験）
BalbZcマウスにおけるマウス 4Tl/luc細胞の肺への転移活性に与える影響を調べ た。 4Tl/luc細胞はルシフ ラーゼを恒常的に発現させたマウス乳癌細胞である。転 移活性は 1 X 106個の細胞を BalbZcマウス (メス、 6— 8週齢)の右側の風頸部乳房 脂肪組織に注入し、 19日目における左肺への転移を、肺組織抽出液中のルシフエ ラーゼ活性を測定することにより評価した（図 3A)。化合物 UCS15Aをそれぞれ最終 濃度が 0.1、 0.5、及び 1.0mg/kgになるように 4Tl/luc細胞注入後、 11日目から連日、 マウス腹腔内に投与した。また、 19日目における元の注入部位に形成された腫瘍の 重さを測定した。さらに、細胞注入後、 11日目からのマウスの体重を測定した。各々 のアツセィには、マウスを 20匹ずつ用いた。
[0093] その結果、図 6〜8に示すように化合物 UCS15Aにより、濃度依存的に 4Tl/luc細胞 の肺への転移が抑制された。その条件下では、元の注入部位に形成された腫瘍の 重さ、及び、マウスの体重に有意な変化は見られな力つた。
産業上の利用可能性
[0094] 本発明により、非ペプチド性ィ匕合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成 分として含有する新規な非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤を提供することが 可能になった。さらに本発明により、新規な癌の浸潤及び Z又は転移の抑制剤を提 供することが可能になった。さらに本発明によれば、非典型的なプロリンリッチ配列結 合阻害活性を有する物質の新規なスクリーニング方法を提供することが可能になつ た。
図面の簡単な説明
[図 1]図 1は、 AMAPlZcortactin複合体の生成と、化合物 1 (UCS15A)、 2bまたは 2c による複合体の生成の阻害を示すウェスタンプロット電気泳動図を示す。
[図 2]図 2は、 dynamin2Zcortactin複合体の生成と、化合物 1 (UCS15A)または 2cによ る複合体の生成の阻害を示すウェスタンプロット電気泳動図を示す。
[図 3]図 3は、 AMAPlZpaxillin複合体の生成と、化合物 1 (UCS15A)、 2bまたは 2cに よる複合体の生成の阻害を示すウェスタンプロット電気泳動図を示す。
[図 4]図 4は、化合物 1 (UCS15A)、 2bまたは 2cによる乳癌細胞浸潤活性の阻害を示 す。マトリゲルを塗布した Boydenチャンバ一における浸潤活性を測定した。
[図 5]図 5は、化合物 1 (UCS15A)、 2bまたは 2cによる乳癌細胞生存活性の阻害を示 す。細胞の MTS活性を測定した。
[図 6]図 6は、化合物 1 (UCS15A)による乳癌の肺への転移の抑制を示す。
[図 7]図 7は、乳癌細胞注入部位での腫瘍重量を示す。
[図 8]図 8は、乳癌細胞注入後 11日目からのマウスの体重を示す。

Claims

請求の範囲 一般式 (I)
[化 1]
Figure imgf000026_0001
{式中、 R1は水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキ シまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表し、
R2は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R3A及び R3Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは 非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表 す力 または R3Aと R3Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R4は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R5A及び R5Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R5Aと R5Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R6は水素原子、ホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキルまたは置換もしくは非 置換の低級アルカノィルを表し、
R7はホルミル、ヒドロキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルコキシメチル、置換も しくは非置換の低級アルカノィルォキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ルメチルまたは— CH=NQA [式中、 QAは置換もしくは非置換の低級アルコキシ、置 換もしくは非置換のァリールォキシ、置換もしくは非置換のァラルキルォキシまたはモ ノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノを表す]を表し、
R8は前記 R6と同義であり、
R9A及び R9Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R9Aと R9Bが一緒になつて酸素原子を表す }で表さ れる化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、非典型 的なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[2] 非典型的なプロリンリッチ配列結合が、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプロ リンリッチ配列を有する蛋白質との結合である、請求項 1に記載の非典型的なプロリ ンリッチ配列結合阻害剤。
[3] 非典型的なプロリンリッチ配列力 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列である、請 求項 1又は 2に記載の非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[4] 非典型的なプロリンリッチ配列力 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly- His
- Lys-Argである、請求項 1から 3の何れかに記載の非典型的なプロリンリッチ配列結 合阻害剤。
[5] SH3ドメインを有する蛋白質が、 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk、 Yrk、 Ras— GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nckゝ Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TCRsm) または IL-2Rの β鎖もしくは γ鎖である、請求項 1から 4の何れかに記載の非典型的 なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[6] 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of GATA- 1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCESSION C AD97834)である、請求項 1から 5の何れかに記載の非典型的なプロリンリッチ配列結 合阻害剤。
[7] SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列を有す る蛋白質が AMAP1(ASAP1/DDEF1)である、請求項 1から 6の何れかに記載の非典 型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤。
[8] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物またはそ の薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、癌の浸潤及び Z又は転移 の抑制剤。
[9] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物またはそ の薬理学的に許容される塩が、一般式 (I) [化 2]
(
Figure imgf000028_0001
R9A及び R9Bはそれぞれ前記と同義 である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、請求項 8に記 載の癌の浸潤及び z又は転移の阻害剤。
[10] 癌が乳癌である、請求項 8又は 9に記載の癌の浸潤及び Z又は転移の阻害剤。
[11] 被験物質の存在下において SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプロリンリッチ 配列を有する蛋白質とを相互作用させ、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプ 口リンリッチ配列を有する蛋白質との複合体の形成を阻害する被験物質を選択するこ とを特徴とする、非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する物質のスクリー ユング方法。
[12] 非典型的なプロリンリッチ配列力 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列である、請 求項 11に記載のスクリーニング方法。
[13] 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly- His - Lys-Argである、請求項 11又は 12に記載のスクリーニング方法。
[14] SH3ドメインを有する蛋白質が、 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk、 Yrk、 Ras— GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nckゝ Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TCRsm) または IL-2Rの β鎖もしくは γ鎖である、請求項 11から 13の何れかに記載のスクリー ユング方法。
[15] 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of GATA- 1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCESSION C AD97834)である、請求項 11から 14の何れかに記載のスクリーニング方法。
[16] SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列を有す る蛋白質が AMAP1(ASAP1/DDEF1)である、請求項 11から 15の何れかに記載のスク リーニング方法。
[17] 請求項 11から 16の何れかに記載の方法により選択される、非典型的なプロリンリッチ 配列結合阻害活性を有する物質。
[18] 一般式 (I)
[化 3]
Figure imgf000029_0001
{式中、 R1は水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキ シまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表し、
R2は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R3A及び R3Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは 非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表 す力 または R3Aと R3Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R4は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R5A及び R5Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R5Aと R5Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R6は水素原子、ホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキルまたは置換もしくは非 置換の低級アルカノィルを表し、
R7はホルミル、ヒドロキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルコキシメチル、置換も しくは非置換の低級アルカノィルォキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ルメチルまたは— CH=NQA [式中、 QAは置換もしくは非置換の低級アルコキシ、置 換もしくは非置換のァリールォキシ、置換もしくは非置換のァラルキルォキシまたはモ ノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノを表す]を表し、 R8は前記 R6と同義であり、
R9A及び R9Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R9Aと R9Bが一緒になつて酸素原子を表す }で表さ れる化合物またはその薬理学的に許容される塩を、被験者に投与することを含む、 非典型的なプロリンリッチ配列結合を阻害する方法。
[19] 非典型的なプロリンリッチ配列結合が、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプロ リンリッチ配列を有する蛋白質との結合である、請求項 18に記載の方法。
[20] 非典型的なプロリンリッチ配列力 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列である、請 求項 18又は 19に記載の方法。
[21] 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly- His -Lys-Argである、請求項 18から 20の何れかに記載の方法。
[22] SH3ドメインを有する蛋白質が、 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk、 Yrk、 Ras— GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nckゝ Vav、 STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TCRsm) または IL-2Rの β鎖もしくは γ鎖である、請求項 18から 21の何れかに記載の方法。
[23] 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of GATA- 1 (NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCESSION C AD97834)である、請求項 18から 22の何れかに記載の方法。
[24] SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列を有す る蛋白質が AMAP1(ASAP1/DDEF1)である、請求項 18から 23の何れかに記載の方 法。
[25] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物またはそ の薬理学的に許容される塩を哺乳動物に投与することを含む、癌の浸潤及び Z又は 転移を抑制する方法。
[26] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物またはそ の薬理学的に許容される塩が、一般式 (I)
[化 4]
(
Figure imgf000031_0001
R9A及び R9Bはそれぞれ前記と同義 である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、請求項 25に 記載の方法。
[27] 癌が乳癌である、請求項 25又は 26に記載の方法。
[28] 非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害剤の製造のための、一般式 (I)
[化 5]
Figure imgf000031_0002
{式中、 R1は水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキ シまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表し、
R2は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R3A及び R3Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、置換もしくは 非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノィルォキシを表 す力 または R3Aと R3Bが一緒になつて酸素原子を表し、
R4は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、
R5A及び R5Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R5Aと R5Bが一緒になつて酸素原子を表し、 R6は水素原子、ホルミル、置換もしくは非置換の低級アルキルまたは置換もしくは非 置換の低級アルカノィルを表し、 R7はホルミル、ヒドロキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルコキシメチル、置換も しくは非置換の低級アルカノィルォキシメチル、置換もしくは非置換の低級アルカノィ ルメチルまたは— CH = NQA [式中、 QAは置換もしくは非置換の低級アルコキシ、置 換もしくは非置換のァリールォキシ、置換もしくは非置換のァラルキルォキシまたはモ ノもしくはジ (置換もしくは非置換の低級アルキル)アミノを表す]を表し、
R8は前記 R6と同義であり、
R9A及び R9Bは、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換 の低級アルコキシを表す力 または R9Aと R9Bが一緒になつて酸素原子を表す }で表さ れる化合物またはその薬理学的に許容される塩の使用。
[29] 非典型的なプロリンリッチ配列結合が、 SH3ドメインを有する蛋白質と非典型的なプロ リンリッチ配列を有する蛋白質との結合である、請求項 28に記載の使用。
[30] 非典型的なプロリンリッチ配列力 Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Proを含む配列である、請 求項 28又は 29に記載の使用。
[31] 非典型的なプロリンリッチ配列が、 Lys- Lys- Arg- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Pro- Gly- His
- Lys-Argである、請求項 28から 30の何れかに記載の使用。
[32] SH3ドメインを有する蛋白質が、 Src、 Yes、 Fgr、 Hck、 Lck、 Abl、 Fyn、 Lyn、 Blk、 Yrk、
Ras— GAPゝ PLC y、 PI3K、 Tecゝ Txk/Rlkゝ Tsk/Emt/Itkゝ Btkゝ Crk、 Grb2、 Nckゝ Vav、
STAT, Cortactin、 p40- phox、 p67- phox、 p47- phox、 TCRのシグナル分子（TCRsm) または IL-2Rの β鎖もしくは γ鎖である、請求項 28から 31の何れかに記載の使用。
[33] 非典型的なプロリンリッチ配列を有する蛋白質力 AMAP1(ASAP1/DDEF1)、 Splicing factor 3B subunit2 (NCBI ACCESSIONNP— 006833 XP— 290506)、 friend of GATA- 1
(NCBI ACCESSION AAN45858)、または hypothetical protein (NCBI ACCESSION C
AD97834)である、請求項 28から 32の何れかに記載の使用。
[34] SH3ドメインを有する蛋白質が Cortactinであり、非典型的なプロリンリッチ配列を有す る蛋白質が AMAP1(ASAP1/DDEF1)である、請求項 28から 33の何れかに記載の使 用。
[35] 癌の浸潤及び Z又は転移の抑制剤の製造のための、非典型的なプロリンリッチ配列 結合阻害活性を有する非ペプチド性ィヒ合物またはその薬理学的に許容される塩の 使用。
非典型的なプロリンリッチ配列結合阻害活性を有する非ペプチド性ィ匕合物またはそ の薬理学的に許容される塩が、一般式 (I)
[化 6]
Figure imgf000033_0001
(式中、
Figure imgf000033_0002
R2、 R3A、 R3B、 R4、 R5A、 R5B、 R6、 R7、 R8、 R9A及び R9Bはそれぞれ前記と同義 である）で表される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、請求項 35に 記載の使用。
癌が乳癌である、請求項 35又は 36に記載の使用。
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