WO2007033578A1 - Metallo-fullerenols et leur application dans la preparation de medicaments visant a inhiber la croissance tumorale - Google Patents

Metallo-fullerenols et leur application dans la preparation de medicaments visant a inhiber la croissance tumorale Download PDF

Info

Publication number
WO2007033578A1
WO2007033578A1 PCT/CN2006/002405 CN2006002405W WO2007033578A1 WO 2007033578 A1 WO2007033578 A1 WO 2007033578A1 CN 2006002405 W CN2006002405 W CN 2006002405W WO 2007033578 A1 WO2007033578 A1 WO 2007033578A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cancer
metal
tumor
fullerol
group
Prior art date
Application number
PCT/CN2006/002405
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Yuliang Zhao
Chunying Chen
Gengmei Xing
Original Assignee
Institute Of High Energy Physics, Chinese Academy Of Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute Of High Energy Physics, Chinese Academy Of Sciences filed Critical Institute Of High Energy Physics, Chinese Academy Of Sciences
Priority to JP2008531511A priority Critical patent/JP5043015B2/ja
Priority to US11/992,249 priority patent/US8124657B2/en
Priority to AT06791004T priority patent/ATE541577T1/de
Priority to EP06791004A priority patent/EP1941887B1/en
Publication of WO2007033578A1 publication Critical patent/WO2007033578A1/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/244—Lanthanides; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/70—Nanostructure
    • Y10S977/734—Fullerenes, i.e. graphene-based structures, such as nanohorns, nanococoons, nanoscrolls or fullerene-like structures, e.g. WS2 or MoS2 chalcogenide nanotubes, planar C3N4, etc.
    • Y10S977/735—Carbon buckyball
    • Y10S977/736—Carbon buckyball having atoms interior to the carbon cage
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/902—Specified use of nanostructure
    • Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
    • Y10S977/915—Therapeutic or pharmaceutical composition

Definitions

  • the invention relates to a novel nanomaterial and its use in biomedicine. Specifically, it relates to a metal fullerene nanoparticle of the formula M@C 2m (OH) x and its use in the preparation of a medicament for inhibiting tumor growth, wherein M is selected from the group consisting of rare earth metals such as Gd, La, etc., 10 ⁇ X ⁇ 50.
  • liver cancer, lung cancer, stomach cancer and breast cancer are the most common tumors. At least 7 million people worldwide die from cancer every year, including about 1.3 million in China. In addition to causing death, cancer also imposes a huge economic burden on families and society.
  • the continuous discovery and in-depth research of new anti-tumor drugs has made tumor chemotherapy a discipline and the birth of tumor internal medicine.
  • the research on anti-tumor drugs faces serious challenges. This is the lack of effective drugs for most common solid tumors such as lung cancer, liver cancer, colon cancer and pancreatic cancer. Many anti-tumor drugs produce drug resistance during clinical application. great.
  • nanoparticles have shown their unique advantages and attractive application prospects, such as targeted nano drug carriers, quantum dots for efficient detection of diseases, high-efficiency medical imaging, and nanomaterials related to tumor therapy technology. Has become an international frontier scientific issue.
  • Fullerene C60 is a nano-scale spherical molecule composed of carbon atoms. It has unique physical and chemical properties and has important application prospects in biomedicine and materials science. Friedman is equal to 1993 in J. Am. Chem. Soc. 115: 6506-6509 theoretical calculations simulating the fullerene C60 derivative can inhibit the activity of HIV virus: C60 is a strong hydrophobic spherical molecule with a diameter of 0.71 nm, while HIV It is a cylindrical molecule with an open end. Its size is similar to that of C60. Its active site surface is also highly hydrophobic. It is possible to combine with covalent bonds to prevent the growth of HIV virus. Adducts containing 14 nucleotide fullerene derivatives and DNA form a more stable triple helix structure for selective site cleavage of DNA under photocatalysis.
  • fullerenes and many of their derivatives are hydrophobic and cannot interact with the "target molecules" in humans, their research and application in the field of biochemistry are greatly limited.
  • the breakthrough and success in the study of the synthesis of water-soluble fullerene derivatives has greatly accelerated and broadened the biological application of C60 derivatives.
  • hydroxyl-derived fullerenes are not present in separate molecular forms, but are agglomerated into nanoparticles by interaction with macromolecules, which have good biocompatibility (Sayes CM et al , Nano Lett, 2004, 4(10): 1881-1887. Dugan LL et al, Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94: 9434-9439.
  • Fullerol (C 6 Q(OH) 24 ) has an LD50 > 5,000 ppm, while fullerenes have an LD50 of 20 ppb.
  • Preliminary studies have been conducted on the distribution of fullerenes and their derivatives in experimental animals.
  • Nakamura first synthesized a 14 C-labeled fullerene pyrrole ring derivative in 1994, and studied its biodistribution and drug metabolism in mice. By tail vein injection into SD rats, the compound was quickly distributed to 90-95% of the various organs of the mouse body are enriched in the liver.
  • 166Ho@C 82 (OH) x shows a wide distribution of organisms, decreasing in liver, bone, spleen, kidney and lung, and other tissues are extremely low (Cagle DW et al., Proc Natl Acad Sci 1999; 96 :5182-5187).
  • tumor tissue is richer in blood vessels than normal tissue, and there are many nano-sized pores on the capillary wall of tumor tissue through which nutrients can penetrate into tumor tissue. It is assumed that these blood channels are just blocked by nanoparticles of the same size, which inhibits the circulation of blood, prevents the tumor from obtaining sufficient nutrients, and thus interrupts the growth of tumor tissue.
  • the inventors designed and prepared a metal fullerol compound with a molecular diameter of about As for 1 nm, it was found that metal fullerene nanoparticles have a strong tumor suppressing effect, and when they form particles having a diameter of 1-200 nm in solution, the tumor suppressing effect is better, and the mechanism of action is not directly through the tumor cells. Killed by the effect.
  • Another object of the present invention is to provide a tumor suppressing composition comprising therapeutically effective metal fullerenol particles and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a further object of the present invention is to provide a use of a metal fullerol for the preparation of a medicament for inhibiting tumor growth.
  • the present invention comprises the following solutions:
  • the above compound includes a magnetic central metal ion M and a nano carbon cage composed of C atoms, and many hydroxyl groups exist on the surface, thus! ⁇ 6 ⁇ . ! ⁇ has a good biological affinity in the living body. (See Fig. 1) At the same time, the toxicity is greatly reduced compared with metal fullerenes due to the presence of hydroxyl groups.
  • the number of O on the carbon cage may be somewhat different from the number of H. Therefore, the above formula may also be written in the form of M@C 2m O x H y .
  • Metal fullerols of the formula M@C 2m (OH) x can be agglomerated into nanoparticles by macromolecular interactions.
  • the size of the particles can be controlled by selecting a solvent, controlling the concentration, and ultrasonic waves to form particles having a diameter ranging from 1 to 200 nm.
  • compositions may also include a solvent and/or a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the solvent is preferably water, physiological saline, Tris-HCl solution or phosphate buffer.
  • the above pharmaceutically acceptable carrier refers to conventional pharmaceutical carriers in the pharmaceutical field, such as: diluents, excipients, fillers, absorption enhancers, and the like.
  • the tumor suppressing composition of the present invention wherein the concentration of the metal fullerol in the solvent in the composition is preferably ⁇ 5 to 1 mmol/L.
  • concentration is higher than 1 mmol/L, the solubility of the metal fullerol is lowered, and it is easy to agglomerate into larger particles.
  • the final concentration of metal fullerol is between 1 ⁇ 10 ⁇ 5 ⁇ 1 mmol/L, and has no obvious toxic effect on cells.
  • Such tumors include, but are not limited to, lung cancer, liver cancer, gastric cancer, esophageal cancer, colorectal cancer, bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, ovarian cancer, osteosarcoma, angiosarcoma, lymphosarcoma, leukemia, melanoma or skin cancer.
  • tumors include, but are not limited to, lung cancer, liver cancer, gastric cancer, esophageal cancer, colorectal cancer, bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, ovarian cancer, osteosarcoma, angiosarcoma, lymphosarcoma, leukemia, melanoma or skin cancer.
  • dosage forms corresponding to these metals is preferably from Fullerenol 5xl0- 8 -lxlO "2 mmol / kg / day.
  • human dose is the amount administered to mice efficacy experiments Ixl0- 6 ⁇ 2xl0- 1 mmol / kg / day in terms come.
  • a metal fullerol for the preparation of a medicament for inhibiting tumor growth, which is prepared into various dosage forms, and the doses corresponding to these dosage forms are more preferably 5 x 1 (T 6 ⁇ 1.25 x 10 - based on metal fullerol) 4 mmol / kg / day.
  • the above-described human dose is administered to mice in terms of the amount of the efficacy experiment Ixl0_ 4 ⁇ 2.5xl0- 3 mmol / kg / day come.
  • the above tumor suppressing composition is preferably administered to a patient in need of treatment by intravenous injection, intraperitoneal injection, oral administration or topical administration.
  • the above tumor suppressing composition is formulated into an injectable solution.
  • the invention has the advantages that the metal fullerol M@C 2m (OH) x has the advantages of small dosage, low toxicity and high tumor inhibition rate compared with cyclophosphamide, cisplatin and paclitaxel which are commonly used in clinical practice. .
  • Figure 1 is a schematic diagram of the molecular structure of M@C 2m (OH) x
  • Figure 2 is a chromatogram of the HPLC separation of Gd@C 2m (5PBB column).
  • Figure 3 shows the XPS spectra of Cls electrons of Gd@C 82 (OH) 22 (a) and Gd@C 82 (OH) 12 (b).
  • Figure 4 is a high resolution AFM image of [Gd@C 82 (OH) 22 ] n nanoparticles in a physiological saline solution.
  • Figure 5 is a graph showing the growth curve of mouse H 22 liver cancer after Gd@ 82 (OH) 22 low dose group injection.
  • Figure 6 is a graph showing the growth curve of mouse H 22 liver cancer after Gd@C 82 (OH) 22 high dose group injection.
  • Figure 7 is a graph showing tumor inhibition rate and dose in the CTX group.
  • Figure 8 is a graph showing the relationship between tumor inhibition rate and dose in the Gd@C 82 (OH) 22 group.
  • Figure 9 is a photograph of a histopathological section of a tumor in a different treatment group of a murine liver cancer H 22 model.
  • a and B are the control group
  • C and D are the Gd@C 82 (OH) 22 treatment group
  • E and F are the cyclophosphamide treatment group.
  • Figure 10 is a graph showing the growth curve of mouse Lewis lung cancer after La@C 82 (OH) 18 injection.
  • Figure 11 shows the effect of metal fullerenol Gd@C 82 (OH) 22 on the survival rate of human liver cancer HepG2 cells.
  • Figure 12 is a graph showing the percentage of apoptosis of human liver cancer HepG2 cells induced by metal fullerenol Gd@C 82 (OH) 22 .
  • Figure 13 is a graph showing the percentage of apoptosis of murine liver cancer R 35 cells induced by metal fullerenol Gd@C 82 (OH) 26 .
  • Figure 14 is a graph showing the percentage of apoptosis of breast cancer MCF-7 cells induced by metal fullerenol Gd@C 82 (OH) 32 .
  • the values of the abscissa in Figs. 11, 12, 13 and 14 are the power values of the M@C 82 (OH) x molar concentration.
  • Figure 15 shows the metal fullerol La@C 82 (OH) 2 . Effect on the survival rate of glioma cells. detailed description
  • the inventors prepared a metal fullerol Gd@C 82 (OH) x , Gd@C 60 (OH) x , La@C 82 (OH) x , La@C 60 (OH) X5 by chemical synthesis.
  • Gd@C 6 Synthesis and Separation and Purification References Robert D. Bolskar et al, J. AM. CHEM. SOC. 2003, 125, 5471-5478.
  • the metal fullerol M@C 2m (OH) x prepared by the method of the invention has a hydroxyl number in the range of 10 to 50.
  • the value refers to the total average of the number of hydroxyl groups. value. This value is determined by the concentration of the NaOH solution in the synthetic metal fullerol reaction, and the concentration of the NaOH solution can be adjusted as needed to obtain a metal fullerene having a specified number of hydroxyl groups plus a full average.
  • the number of hydroxyl groups is less than 10, the biocompatibility of the metal fullerol is not good; when the number of hydroxyl groups is higher than 50, the structure of the carbon cage is unstable.
  • XPS X-ray photoelectron spectroscopy
  • the XPS experiment was conducted on the Beijing Synchrotron Radiation Facility of the Chinese Academy of Sciences. High purity Pt was plated on the single crystal silicon wafer by magnetron sputtering as the XPS sample test substrate. M@C 82 and M@C 82 (OH) x were added dropwise on a high-purity Pt substrate to obtain an XPS-measured film. The film was placed in an ultra-high vacuum system of an 8xlO- 1Q Torr XPS sample preparation chamber for a sufficient period of time. Remove airborne impurities that may be adsorbed on the sample. The C Is photoelectron emission spectrum of the metal fullerene is used to determine the number of hydroxyl groups contained in the sample.
  • the valence band photoelectron spectroscopy of the sample is acquired by changing the incident photon energy. A partial yield spectrum of the sample is taken to obtain an absorption spectrum of the sample. The energy resolution of the device is approximately ⁇ 0.5 eV. Samples are scanned for XPS before data is collected to ensure that the sample surface is clean and that the instrument is in good operating condition.
  • Metallic fullerol molecules can be agglomerated into nanoparticles by macromolecular interaction. In a solvent environment, particles can be controlled by ultrasonic methods, etc. Size, forming particles having a diameter distribution ranging from 1 to 200 nm.
  • the metal fullerol solutions referred to in the following examples are all solutions containing metal fulleranol particles having a diameter distribution ranging from 1 to 200 nm.
  • the first step is the synthesis of Gd@C 2m
  • the second step is the separation and purification of Gd@C 82 and Gd@C 60
  • the third step is the synthesis of metal fullerol Gd@C 82 (OH) 22
  • the NaOH method is used to react Gd@C 82 with a 35% NaOH solution in a benzene solution, followed by separation and purification by filtration, ion exchange chromatography, and removal of NaOH to obtain a product having a purity greater than 99.99%.
  • Gd@C 82 (OH) 22 Stored in freeze-dried form.
  • Gd@C 82 is reacted with a 30% NaOH solution in a toluene solution, and then separated and purified by filtration, ion exchange chromatography, etc., and NaOH is removed to obtain a product Gd@C 82 having a purity of more than 99.99% ( OH) 12 , Freeze-dried and stored.
  • the metal fullerol Gd@C 82 (OH) 22 was dissolved in physiological saline and sonicated for 1 minute to form particles having a diameter distribution ranging from 1 to 200 nm [Gd@C 82 (OH) 22 ] n , 1 ⁇ ⁇ 200.
  • La@C 82 and La@C 60 were prepared in a similar manner to the above preparation of Gd@C 82 .
  • La@C 82 was reacted with 28% NaOH solution in benzene solution medium by NaOH method, and after a series of separation and purification processes, NaOH was removed to obtain La@C 82 (OH) with purity greater than 99.99%. 18 product, stored in lyophilization.
  • La@C 6 o with 35 ° / in the benzene solution medium.
  • the NaOH solution is reacted, and after a series of separation and purification processes, NaOH is removed to obtain a La@C 6Q (OH) 22 product having a purity greater than 99.99%, which is stored in a freeze-dried manner.
  • the metal fullerene ⁇ ( ⁇ . ⁇ (( ⁇ ! ⁇ molecular particle size is about 1nm.
  • the metal fullerol molecules are agglomerated into nanoparticles by macromolecular interaction, and the particles can be controlled by ultrasonic methods, etc.
  • the size of the particles forms a particle with a diameter distribution ranging from 1 to 200 nm.
  • the rice particles have a particle size ranging from 1 to 200 nm and an average particle size of 22 nm.
  • Tumor model Mouse liver cancer H 22 tumor strain.
  • Experimental group A. Negative control group: normal saline (s'aline); B. Positive control group: Cyclophosphamide (CTX), an anticancer drug commonly used in clinical practice; C. Drug group: Gd@ C 82 (OH) m , 5-7 mice per group.
  • intraperitoneal injection intraperitoneal, i.p.
  • CTX 30 mg/kg (0.1 mmol/kg), only need to be injected in the first 7 days of the experiment;
  • the injection volume was 0.2 ml.
  • CTX 15 mg/kg (0.05 mmol/kg);
  • the injection volume was 0.2 ml.
  • mice were subcutaneously inoculated with mouse liver cancer H 22 tumor strain 1 X 10 6 cancer cells (dispersed in 0.9% physiological saline of ⁇ ), and 0.2 ml/mouse was started 24 hours after inoculation; The drug was administered every 24 hours, the diameter of the tumor was measured every other day, and the growth of the tumor was recorded. The reaction of the mice was observed. When the diameter of the right hind limb of the saline group was about 20 mm, the experiment was stopped (normally small). The hind limb diameter of the rat is 6 mm).
  • the effect of high dose group Gd@C 82 (OH) 22 on serum total bilirubin, ALT, AST and inosine levels in tumor-bearing mice is shown in Table 2 on the next page.
  • the most sensitive indicator reflecting hepatocyte damage is the activity of alanine aminotransferase ALT and aspartate aminotransferase AST, injected with Gd@C 82 (OH) 22 nanometers. It can significantly inhibit the increase of two enzymes in tumor-bearing mice, and is close to the level of normal organisms. In the cyclophosphamide group, the ALT level increased, indicating that it increased the liver damage of the animal.
  • Gd@C 82 (OH) 22 treatment group mice have a smaller tumor infiltration range, the tumor is easy to peel off, and the tumor weight is significantly reduced.
  • HE staining sections showed obvious tumor-enveloping bands (inflammatory cells, fibroblasts, and capillaries) around the tumor. It can activate the body's immune function.
  • Control group Tumor cells infiltrated into skeletal muscle.
  • Cyclophosphamide group A large amount of necrosis of tumor cells, but can not prevent tumor cells from infiltrating into skeletal muscle.
  • mice (16.0 ⁇ 1.0g) were subcutaneously inoculated with MCF-7 cell suspension ( ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ 7 cells), reared for 20 days, and the tumors produced under the skin were taken out and cut into small tumors of 3 mm x 3 mm x 3 mm.
  • the block was re-implanted into the BALB/c female rat for use.
  • Gd@C 82 (OH) 12 1.0 mol/kg / day x l3 days, calculated as Gd concentration; injection concentration is 0.1 ⁇ /ml o
  • CTX and Gd@C 82 (OH) m solutions were treated with 0.9% physiological saline.
  • Paclitaxel is a commercial liquid preparation.
  • the results of tumor inhibition experiments are shown in Table 3.
  • the tumor inhibition rate of Gd@C 82 (OH) 32 group was 47% when administered at 2.5 ⁇ /kg body weight for 13 days, and 71.6 ⁇ /kg body weight administration with cyclophosphamide group 7
  • the results were consistent.
  • Gd@C 82 (OH) Group 12 had a tumor inhibition rate of 35.6 % when administered at 1 ⁇ /kg body weight for 13 days.
  • mice in the cyclophosphamide group showed significant toxic side effects such as significant weight loss, wasting, and poor mental state of the animal.
  • Paclitaxel was administered every 2 days at a dose of 15.2 ⁇ /kg body weight, and the tumor inhibition rate was 82%, but 45% of the mice died, indicating that paclitaxel is very toxic.
  • the mice in the metal fullerol group did not show significant toxicity at the end of the experiment.
  • mice C57 pure female mice (18.0 ⁇ 1.0g) were subcutaneously inoculated with Lewis lung cancer cell suspension (l xlO 7 cells), and the next day after the inoculation, La@C 82 (OH) 18 and cyclophosphamide were administered respectively. , normal saline, 10 in each group.
  • Intraperitoneal injection i.p.
  • the results of the tumor inhibition test are shown in Figure 10.
  • 1 ⁇ @ 82 (011) 18 can significantly inhibit tumor growth at 11101/13 ⁇ 4 body weight for 14 days, the tumor weight is not significantly increased, and it is administered with cyclophosphamide 71.6 ⁇ 1/13 ⁇ 4 body weight.
  • the results in 7 days were basically the same.
  • mice in the cyclophosphamide group showed significant toxic side effects such as significant weight loss, elimination, and poor mental state of the animals.
  • the mice in the metal fullerol group did not show significant toxicity at the end of the experiment.
  • metal fullerol 1 ⁇ @( 82 (011) 18 nanoparticle has the advantages of small dosage, low toxicity, and high tumor inhibition rate compared with cyclophosphamide currently widely used in clinical practice.
  • mice C57 pure female mice (20.0 ⁇ 1.0 g) were subcutaneously inoculated with Lewis lung cancer cell suspension (lx lO 7 cells), and the next day after the inoculation, Gd@C 6Q (OH) 2Q and saline were administered respectively. , 10 in each group. Gd@C 6 . (OH) 2 Q solution, using 0.9% physiological saline as a solvent.
  • Intraperitoneal injection i.p.
  • MTT which is one of the tetrazolium dyes, enters the cell and is reduced to an insoluble colored product by the mitochondrial respiratory chain enzyme (such as succinate dehydrogenase), and the amount of the colored product is determined by light absorption, thereby indirectly reflecting Cell activity.
  • mitochondrial respiratory chain enzyme such as succinate dehydrogenase
  • the cells in the logarithmic growth phase were digested into single cell suspensions, adjusted to a cell concentration of 2 ⁇ 10 4 /ml, seeded in 96-well cell culture plates, inoculated with 100 ⁇ M per well, divided into 6 dose groups, 8 replicate wells per group. .
  • switch to serum-free medium 100 ⁇ l per well, add the drug according to the concentration of the dose group, continue to culture for 48 hours, discard the supernatant, add 100 ⁇ 1 MTT buffer and 10 ⁇ 1 MTT per well.
  • Solution (5mg/ml), continue to culture for 3h, discard the supernatant, add DMSO 150 ⁇ 1 / well, shake, and measure the absorbance of each well at 595nm by automatic microplate reader.
  • PI can't pass through the intact cell membrane, but for advanced cells or dead cells in apoptosis, PI can red-stain the nucleus through the cell membrane. After DNA-binding PI staining, it can be analyzed by flow cytometry, which can appear before the G1 peak. The diploid peak, the percentage of this peak, can detect the number of apoptotic cells. Examples of experimental results:
  • the final concentration of Gd@C 82 (OH) 22 is in the range of 10 ⁇ 10 6 nmol / L.
  • the experimental results are shown in Figure 11.
  • the cell activity is increased compared with the cell activity without any drug, but between the drug dose groups. There is little difference and there is no obvious linear relationship.
  • the results are shown in Figure 12.
  • the percentage of apoptosis was between 3.5% and 7%.
  • the final concentration of Gd@C 82 (OH) 22 was in the range of 10 ⁇ 10 6 nmol/L. Substantially consistent, there were no significant differences between the drug dose groups. Gd@C 82 (OH) 22 does not induce apoptosis in HepG2 cells, and has no effect on cell proliferation and growth.
  • the results are shown in Fig. 13.
  • the final concentration of Gd@C 82 (OH) 26 is in the range of 10 ⁇ 10 6 nmol/L, which is equivalent to the percentage of apoptosis in the control group without any inducer, and the proportion of apoptotic cells is Between 2.0% and 3.5%, Gd@C 82 (OH) 26 did not induce apoptosis in rat liver cancer Rh35 cells.
  • the results are shown in Fig. 14.
  • the final concentration of Gd@C 82 (OH) 32 was in the range of 10 ⁇ 10 6 nmol/L, which was equivalent to the percentage of apoptosis in the control group, and the proportion of apoptotic cells was 3.0 ° /. ⁇ 9%, indicating Gd@C 82 (OH) 32 does not induce apoptosis of breast cancer MCF-7 cells and is less cytotoxic.
  • the final concentration of La@C 82 (OH) 20 is in the range of 100 ⁇ 10 6 nmol / L.
  • the experimental results are shown in Figure 15.
  • the cell viability is basically the same as that of the control group without any drug, on the glioma cells. Growth has no obvious effect. Cytotoxicity experiments of various concentrations of metal fullerol on various tumor cells showed that metal fullerol had no effect on the growth of different types of tumor cell lines in the concentration range of 10-1000000 nmol/ml, and did not induce Apoptosis and cell viability were consistent with the unmedicated control group, indicating that metal fullerol did not have direct cytotoxicity and did not directly kill cells.

Description

金属富勒醇及其在制备抑制肿瘤生长药物中的应用
技术领域
本发明涉及一种新型纳米材料及其在生物医学中的应用。 具体地说， 涉及通式为 M@C2m(OH)x的金属富勒醇纳米颗粒及其在制备抑制肿瘤生长 药物中的应用， 其中， M选自 Gd，La等稀土金属， 10≤X<50。
背景技术
恶性肿瘤是威胁人类健康的重要疾病， 目前已成为人类死亡的主要原 因。 在中国， 肝癌， 肺癌， 胃癌和乳腺癌是发病率最高的肿瘤。 目前全世 界每年至少有 700万人死于癌症， 其中我国约 130万。 癌症除了致人死亡 外， 也给家庭和社会造成巨大的经济负担。 新抗肿瘤药物的不断发现及深 入研究已使肿瘤化学治疗成为学科并使肿瘤内科学得以诞生。 但是， 抗肿 瘤药的研究面临严重的挑战， 这就是多数常见实体瘤如肺癌、 肝癌、 结肠 癌及胰腺癌等还缺乏有效药物， 不少抗肿瘤药在临床应用过程中产生耐药 性， 副作用极大。 环磷酰胺、 阿霉素、 顺铂、 紫杉醇等在起到治疗作用的 同时， 产生骨髓抑制、 消化道剧烈反应、 肾脏毒性等等度副作用， 严重地 限制了其临床使用剂量。 因此， 新型抗肿瘤药物研究势在必行。
在生命科学研究中， 纳米颗粒已经显示出其独特的优势和诱人的应用 前景， 如靶向性纳米药物载体、 疾病高效检测的量子点、 高效医学成像以 及肿瘤治疗技术相关的纳米材料等， 已经成为国际前沿科学问题。
富勒烯 C60是一种由碳原子构成， 纳米尺度的球体分子， 具有独特的 物理化学性质， 在生物医学、 材料科学等领域有着重要的应用前景。 Friedman等于 1993年在 J. Am. Chem. Soc. 115: 6506-6509理论计算模拟 了富勒烯 C60衍生物可以抑制 HIV病毒的活性： C60是强疏水性球形分子， 直径为 0.71 nm, 而 HIV是末端开口的圆柱状分子，尺寸与 C60直径相似， 其活性位置表面也是强疏水性的，两者有可能以共价键结合，从而阻止 HIV 病毒的生长。 含有 14核苷酸富勒烯衍生物和 DNA的加合物可形成较稳定 的三螺旋结构， 在光催化下可对 DNA进行选择性的位点切割。
由于富勒烯及其许多衍生物是疏水性的， 无法与人体内 "靶分子，， 作 用， 使得它们在生物化学领域中的研究和应用受到很大的限制。 近年来， 研究合成水溶性富勒烯衍生物方面的突破和成功， 大大加速和拓宽了 C60 衍生物在生物方面的应用。 在水环境中， 羟基衍生化的富勒烯并不是以单 独的分子形式存在的， 而是通过与大分子相互作用团聚成纳米颗粒物， 这 些颗粒物有 艮好的生物亲和性（ Sayes CM et al, Nano Lett, 2004, 4(10): 1881-1887. Dugan L L et al, Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94: 9434-9439. Mirkova SM et al, Nitric Oxide 2004; 11 :201-207. Chiang LY et al, J Org Chem 1994, 59; 3960-3968)。发表在 2004年 10月份 Nano Lett的一篇 论文中（ Sayes CM et al, Nano Lett, 2004, 4(10):1881-1887), Rice大学 Colvin 指出富勒烯的细胞毒性高度依赖于其碳笼表面是否修饰和修饰的基团。 在 两种细胞系中， 不同的结构的毒性可相差 7个数量級， 以富勒烯毒性最大， 富勒醇 (C6Q(OH)24)最小。 富勒醇 (C6Q(OH)24)的 LD50>5，000 ppm, 而富勒烯 的 LD50为 20 ppb。 人们对富勒烯及其衍生物在实验动物体内的分布进行 了初步的研究。 Nakamura等于 1994年首先合成了 14C标记的一种富勒烯 吡咯环衍生物， 并研究了它在小鼠体内的生物分布和药物代谢， 通过尾静 脉注射到 SD大鼠， 化合物很快分布到小鼠身体的各个器官， 90-95%富集 于肝脏。 166Ho@C82(OH)x则显出生物分布较广， 在肝、 骨骼、 脾、 肾、 肺 的含量依次递减， 其它组织分布极低 (Cagle DW et al., Proc Natl Acad Sci 1999; 96:5182-5187)。
过去几年， 笼内包金属富勒烯的研究已取得很大进展， 迄今为止， 三 价金属原子 (Sc, Y) 碱土金属原子 (Ca, Sr, Ba：)、 碱金属原子 (Li, Na， K, Cs)和四价金属原子 (Zr， Hf)等已成功地被包笼到富勒烯内，形成了单原子、 双原子、 三原子金属包笼物。 笼内包金属富勒烯的许多优异的物理和化学 性质使它们有可能发展成为超导、 有机铁磁体、 非线性光学材料、 功能分 子开关，核磁造影剂、生物示踪剂等新型材料 (Bolskar RD et al.， J Am Chem Soc 2003; 125:5471-5478)。
发明内容
我们知道， 肿瘤组织较正常组织富含血管， 且肿瘤組织的毛细血管壁 上有许多纳米尺寸的孔径，营养物质可通过这些孔径渗透到肿瘤组织之中。 假设这些血液通道恰好被同尺寸的纳米粒子所堵塞，就会抑制血液的流通， 使肿瘤不能够获得足够的营养物质， 进而中断了肿瘤组织的生长。 为了验 证这一观点， 发明人设计并制备了一种金属富勒醇化合物， 其分子直径约 为 lnm, 结果发现， 金属富勒醇纳米颗粒有很强的肿瘤抑制作用， 当其在 溶液中形成直径为 l-200nm的颗粒时肿瘤抑制效果更佳， 其作用机制不是 通过对肿瘤细胞的直接杀死作用而完成的。
本发明的一个目的是提供一种金属富勒醇。
本发明的另一目的是提供一种肿瘤抑制组合物， 其中含有治疗有效的 金属富勒醇颗粒和药学上可接受的载体。
本发明的再一目的是提供一种金属富勒醇在制备抑制肿瘤生长药物中 的应用。
为实现上述目的， 本发明包含以下方案：
一种金属富勒醇， 它以通式表示， 通式中， M选自 La, Gd等稀土金 属； m=41或 30; 10≤X<50。
上述化合物包括一个磁性中心金属离子 M和一个由 C原子构成的纳米 碳笼， 其表面存在许多羟基基团， 因此！^⑥^^。!^在生物体内有很好的 生物亲和性。 （参见图 1 )同时， 由于羟基基团的存在， 与金属富勒烯比较 毒性大大降低。
由于相邻羟基的重排，实际上碳笼上 O的数目与 H的数目会有一些不 同， 因此， 也可以将上述通式写成 M@C2mOxHy形式。
本发明的通式为 M@C2m(OH)x (m=41或 30; 10≤X<50)的金属富勒醇， 其中 M为 La。
本发明的通式为的 M@C2m(OH)x (m=41或 30; 10≤X<50)金属富勒醇， 其中 M为 Gd。
一种肿瘤抑制组合物， 其中含有以通式 M@C2m(OH)x表示的金属富勒 醇， 通式中， M选自 Gd、 La等稀土金属； m = 41或 30; 10≤X<50。
一种肿瘤抑制组合物， 其中含有以通式 [M@C2m(OH)x]n表示的金属富 勒醇纳米颗粒，通式中，M选自 Gd、La等稀土金属； m = 41或 30; 10<X<50; n表示团聚成该金属富勒醇纳米颗粒的金属富勒醇分子数， l≤n<200。
通式为 M@C2m(OH)x的金属富勒醇通过大分子相互作用可团聚成纳米 颗粒物。 在溶剂环境中， 可以通过选择溶剂、 控制浓度及超声波等方法控 制颗粒物的尺寸， 形成直径分布范围在 l-200 nm的颗粒。
上述組合物还可包括溶剂和 /或药学上可接受的载体。 上迷溶剂优选 水、 生理盐水、 Tris-HCl溶液或磷酸盐緩冲液。 上述药学上可接受的载体 是指药学领域常规的药物载体， 例如： 稀释荆、 赋形剂， 填充剂， 吸收促 进剂等。
本发明的肿瘤抑制组合物， 其中， 所述的组合物中金属富勒醇在溶剂 中的浓度优选为 ΙχΙΟ·5 ~ 1 mmol/L。 当浓度高于 1 mmol/L时金属富勒醇的 溶解性能降低， 易团聚成较大颗粒。金属富勒醇终浓度在 1χ10·5 ~ 1 mmol/L 之间， 对细胞无明显毒性作用。
上述肿瘤包括但不限于肺癌、 肝癌、 胃癌、 食管癌、 直肠结肠癌、膀 胱癌、 乳腺癌、 宫颈癌、 卵巢癌、骨肉瘤、 血管肉瘤、 淋巴肉瘤、 白血病、 黑色素瘤或皮肤癌。
一种金属富勒醇在制备抑制肿瘤生长药物中的应用，该金属富勒醇以 通式 M@C2m(OH)x表示，通式中， Μ选自 Gd, La等稀土金属； m=41或 30; 10≤X<50。 所述肿瘤包括但不限于肺癌、 肝癌、 胃癌、 食管癌、 直肠结肠 癌、膀胱癌、 乳腺癌、 宫颈癌、 卵巢癌、骨肉瘤、 血管肉瘤、 淋巴肉瘤、 白 血病、 黑色素瘤或皮肤癌 。
一种金属富勒醇在制备抑制肿瘤生长药物中的应用， 该药物被制备 成各种剂型， 这些剂型所对应的给药量以金属富勒醇计优选为 5xl0-8 -lxlO"2 mmol/kg/天。 上述针对人的给药量是由药效实验的小鼠给药量 Ixl0-6 ~2xl0-1 mmol/kg/天换算得来的。
一种金属富勒醇在制备抑制肿瘤生长药物中的应用， 该药物被制备 成各种剂型， 这些剂型所对应的给药量以金属富勒醇计更优选为 5xl(T6 ~1.25xl0-4 mmol/kg/天。 上述针对人的给药量是由药效实验的小鼠给药量 Ixl0_4〜2.5xl0-3 mmol/kg /天换算得来的。
上述肿瘤抑制组合物优选通过静脉注射、 腹腔内注射、 口服或局部给 药等方式施用于需要治疗的患者。 在本发明的一个优选实施方案中， 将上 述肿瘤抑制组合物制成注射用溶液。
本发明的优点是： 与目前临床普遍使用的环磷酰胺、 顺铂、 紫杉醇等 相比， 金属富勒醇 M@C2m(OH)x具有用量小， 毒性低， 且肿瘤抑制率高的 优点。
附图说明
图 1为 M@C2m(OH)x分子结构示意图
图 2为 Gd@C2m的 HPLC分离结果谱图（5PBB 柱)。 图 3为 Gd@C82(OH)22 (a)和 Gd@C82(OH)12 (b)的 Cls电子的 XPS谱。 图 4为生理盐水溶液中 [Gd@C82(OH)22]n纳米颗粒的高分辨 AFM 图。 图 5为 Gd@82(OH)22低剂量组注射后小鼠 H22肝癌的生长曲线图。 图 6为 Gd@C82(OH)22高剂量组注射后小鼠 H22肝癌的生长曲线图。 图 7为 CTX组肿瘤抑制率和剂量关系曲线图。
图 8为 Gd@C82(OH)22组肿瘤抑制率和剂量关系曲线图。
图 9为鼠肝癌 H22模型不同治疗组肿瘤组织病理切片照片。 其中， A、 B为对照组； C、 D为 Gd@C82(OH)22治疗组； E、 F为环磷酰胺治疗组。
图 10为 La@C82(OH)18注射后小鼠 Lewis肺癌的生长曲线图。
图 11为金属富勒醇 Gd@C82(OH)22对人肝癌 HepG2细胞存活率的影 响。
图 12为金属富勒醇 Gd@C82(OH)22诱导人肝癌 HepG2细胞凋亡的百分 比。
图 13为金属富勒醇 Gd@C82(OH)26诱导鼠肝癌 R 35细胞凋亡的百分 比。
图 14为金属富勒醇 Gd@C82(OH)32诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡的百 分比。
图 11、 图 12、 图 13和图 14中横坐标的数值为 M@C82(OH)x摩尔浓 度的乘方值。
图 15 为金属富勒醇 La@C82(OH)2。对神经胶质瘤细胞存活率的影响。 具体实施方式
发明人采用化学合成法制备了金属富勒醇 Gd@C82(OH)x , Gd@C60(OH)x, La@C82(OH)x, La@C60(OH)X5 其制备方法参考中国发明专 利 03146028.3。 Gd@C6。的合成与分离純化参考文献 Robert D. Bolskar等， J. AM. CHEM. SOC. 2003, 125, 5471-5478。
采用本发明方法制备的金属富勒醇 M@C2m(OH)x,其羟基数目在 10~50 的范围， 在本文中当羟基数用具体数值表示时， 该数值指羟基数目的加全 平均值。 该值由合成金属富勒醇反应中 NaOH溶液的浓度决定， 可根据需 要调节 NaOH溶液的浓度 , 从而获得指定羟基数目加全平均值的金属富勒 醇。 当羟基数目低于 10时，金属富勒醇的生物相容性不好； 当羟基数目高 于 50时， 碳笼的结构不稳定。 精确测定富勒醇的羟基数目至关重要， 本发明中， 我们利用北京同步 辐射装置 X射线光电子能谱（XPS )并结合元素分析方法来确定金属富勒 烯的表面修饰后的羟基数目。
XPS实验在中国科学院北京同步辐射装置上进行。 在单晶硅片上通过 磁控离子溅射镀上高纯 Pt作为 XPS样品测试基底。 M@C82和 M@C82(OH)x 滴加在高纯 Pt基底上获得 XPS测量的薄膜， 将薄膜放入 8xlO-1Q Torr的 XPS样品制备室的超高真空系统足够长时间 , 以除去样品上可能吸附的空 气杂质。 金属富勒醇的 C Is光电子发射谱用于确定样品包含的羟基数目。 改变入射光子能量， 采集样品的价带光电子能谱。 采集样品的部分产额谱 以获得样品的吸收谱。装置的能量分辨率约为〜 0.5eV。样品在采集数据前， 先进行 XPS扫描， 以确保样品表面清洁并确定仪器处于良好运行状态。
金属富勒醇]^@(：21„(01¾分子的粒径约为 lnm。 金属富勒醇分子可通 过大分子相互作用团聚成纳米颗粒物。 在溶剂环境中， 可以通过超声波等 方法控制颗粒物的尺寸， 形成直径分布范围在 1-200 nm的颗粒。本文以下 实施例中所涉及的金属富勒醇溶液均为含有直径分布范围在 1-200 nm的 金属富勒醇颗粒的溶液。
以下结合实施例和对比例进一步说明本发明， 但并不因此将本发明限 制在所迷实施例范围之中。
实施例 1
Gd@C2m(OH)x的制备
第一步 Gd@C2m的合成
将高纯 （>99.999% ) Gd203与高纯石墨粉（>99.999% )按原子比 Gd : C = 0.5~3： 100混合， 压制成模， 制成石墨-金属混合电极； 或者将直径为 6〜20mm石墨棒钻空， 充填氧化钆得到石墨-金属混合电极。 1000~2000°C 高温烧结后， 使用惰性气体弧形放电法， 合成金属富勒烯 Gd@C2m。 惰性 气体为 He或 Ar, 压力为 50~600Torr, 电流为 80〜500A。
第二步 Gd@C82和 Gd@C60的分离纯化
a. 采用高温回流加高温高压两步高效提取方法萃取分离碳纳米类物 质。 首先将弧形放电的烟炱在甲苯中 100~200°C下回流 12~24小时， 再在 DMF ( N，N-二甲基甲酰胺） 中 100~200 °C下高温高压（50~100MPa)提取 12~24小时， 以萃取碳纳米类物质。
b. 使用广泛应用的循环式 HPLC (高效液相色谱)两步法或萃取法纯化 目标所需要金属富勒烯 Gd@C82和 Gd@C6Q , 得到纯度大于 99.99%的目标 产物 Gd@C82和 Gd@C6。。 Gd@C82的产率为碳棒的 10 % ; Gd@C6。产率为 碳棒的 35 %。 HPLC 分离结果谱图参见图 2。 （5PBB柱）
第三步 金属富勒醇 Gd@C82(OH)22的合成
使用 NaOH法， 在曱苯溶液中将 Gd@C82与浓度为 35%的 NaOH溶液 进行反应， 再经过滤、 离子交换层析等分离、 纯化过程， 除去 NaOH后， 得到纯度大于 99.99%的产物 Gd@C82(OH)22， 冷冻干燥保存。
金属富勒醇 Gd@C82(OH)12的合成
在甲苯溶液中将 Gd@C82与浓度为 30%的 NaOH溶液进行反应， 再经 过滤、 离子交换层析等分离、 純化过程， 除去 NaOH后， 得到纯度大于 99.99%的产物 Gd@C82(OH)12, 冷冻干燥保存。
Gd@C6。(OH)x的合成：
将 300 mg Gd@C60悬浮液与 210 mg KH在 20 mL THF中混合后， 连 续搅拌 15分钟， 并将 1.255 g二乙基溴代丙二酸一滴滴地加入混合液。 搅 拌 40 分钟以后生成咖啡色溶液。 然后过滤， 除去没有反应的 KH。 将粗产 物用四氢呋喃分离， 再用己烷漂洗， 低压抽千， 然后在甲苯中与 NaH—起 回流， 并用甲醇结束反应。 用酸性离子交换柱分离纯化， 用 NaOH调节溶 液的 pH值到 7.0。 蒸干得到 Gd@C60(OH)x产品。
第四步金属富勒醇颗粒 [Gd@C82(OH)22]n (l≤n<200)的合成
将金属富勒醇 Gd@C82(OH)22溶解在生理盐水中， 超声 1分钟， 形成 直径分布范围在 l-200 nm的颗粒物 [Gd@C82(OH)22]n， 1<η<200。
实施例 2
测定 Gd@C82(OH)22和 Gd@C82(OH)12的羟基数
Gd@C82(OH)22 (a)和 Gd@C82(OH)12 (b)的 Cls电子的 XPS谱如图 3所 示， C-C和 C-O键之间的相对强度用于分析 Gd@C82(OH)x中的羟基数目。 图 2中实线的高斯拟合分析表明分子中存在两种不同的碳原子： 峰位置在 284.4 eV的是没有连接其它基团的具有 sp2杂化的碳原子 (C-C)的结合能； 位于 285.3 eV的峰是羟基化的碳原子 (C-OH)。 实施例 3
La@C2m(OH)x的制备
采用与上述制备 Gd@C82类似的方法制备 La@C82和 La@C60。
(1) 金属富勒醇 La@C82(OH)18的合成
使用 NaOH法， 在曱苯溶液介质中将 La@C82与 28%的 NaOH溶液进 行反应，再经一系列分离、纯化过程，除去 NaOH后，得到纯度大于 99.99% 的 La@C82(OH)18产物， 冷冻干燥保存。
(2)金属富勒醇 La@C6Q(OH)22的合成
使用 NaOH法， 在曱苯溶液介质中将 La@C6o与 35°/。的 NaOH溶液进 行反应，再经一系列分离、纯化过程，除去 NaOH后，得到纯度大于 99.99% 的 La@C6Q(OH)22产物， 冷冻干燥保存。
实施例 4
纳米颗粒的测定
金属富勒醇 ^^(^。^((^！^分子的粒径约为 lnm。 在溶剂环境中， 金属 富勒醇分子通过大分子相互作用团聚成纳米颗粒物， 可以通过超声波等方 法控制颗粒物的尺寸， 形成直径分布范围在 l-200 nm的颗粒。
采用同步辐射小角 X-射线衍射 （SR-SAXS) 测得生理盐水溶液中
Figure imgf000010_0001
米颗粒的粒径范围为 1-200 nm, 平均粒径 22 nm。
高分辨原子力显微镜 (AFM， Nano Ilia SPM, Digital Instruments Inc, 3 A) 证实生理盐水溶液中 [Gd@C82(OH)22]n 纳米颗粒的粒径范围为 1-200 nm, 平均粒径 22.4 nm存在， 参见图 4。 由两种独立的方法得到的结果一致。 实施例 5
含 [Gd@C82OH22]n(l≤n<200)的注射用溶液
将 500 mg Gd@C82OH22,溶解于 400 ml生理盐水中，室温超声 1分钟， 封装于 100个玻璃管中， 制成注射用溶液。
实施例 6
Gd@C82(OH)m组合物对小鼠肝癌肿瘤的抑制作用
动物品系： 昆明种雌鼠， 体重为 18到 22g。
肿瘤模型： 小鼠肝癌 H22瘤株。 实验分组： A. 阴性对照組： 生理盐水 (s'aline); B. 阳性对照組： 环磷 酰胺 （Cyclophosphamide, CTX) , 临床上普遍使用的一种抗癌药物； C. 药 物组： Gd@C82(OH)m, 每组 5-7只小鼠。
给药方式： 腹腔注射 (intraperitoneal, i.p.)°
CTX和 Gd@C82(OH)m( m = 22或 26 )溶液以 0.9%的生理盐水为溶剂。 剂量设计 （lxlO-6 ~2xl0-3mmol/kg小鼠）
本实验分两个剂量组：
A. 高剂量组：
CTX: 30 mg/kg (0.1 mmol/kg), 仅需在实验的前 7天注射；
Gd@C82(OH)22 , 2xlO- mmolGd/kg;
Gd@C82(OH)26, 2xl0"3 mmol/kg;
注射体积均为 0.2ml。
低剂量组：
CTX: 15 mg/kg (0.05 mmol/kg);
Gd@C82(OH)22， lxl 0-4mmol/kg;
Gd@C82(OH)26, lxl 0-6 mmol/kg;
注射体积均为 0.2ml。
实验方法： 每只小鼠右后肢皮下接种小鼠肝癌 H22瘤株 1 X 106癌细胞 (分散于 ΙΟΟμΙ的 0.9%生理盐水中）， 接种 24小时后开始给药 0.2 ml/只； 实验期间每 24小时给药一次，每隔一天测量接种肿瘤^后肢直径，记录其 生长情况； 同时观察小鼠的反应情况； 当生理盐水组小鼠右后肢直径长到 20mm左右时， 停止实验（正常小鼠后肢直径为 6mm )。
实验结束： 摘除眼球取血， 使用 109mmol/L枸橼酸钠抗凝， 血液与抗 凝剂的比例为 1 :9; 摘取肿瘤， 称重； 取脏器 /器官并称重， 计算脏器系数； 同时用 10%的福尔马林固定脏器 /器官。
实猃结果： Gd@C82(OH)m組合物抗肝癌 H22活性如表 1 所示， 注射 Gd@C82(OH)m纳米颗粒后同注射 CTX—样可以抑制小鼠的肿瘤生长， 且 纳米材料的肿瘤抑制特性优于临床普遍使用的抗肿瘤药物 CTX。
高剂量組 Gd@C82(OH)22对荷瘤小鼠血清总胆红素， ALT, AST和肌苷 水平的影响数据参见下页的表 2。 从反映肝细胞损害最敏感的指标是谷丙 转氨酶 ALT和谷草转氨酶 AST的活性上分析，注射 Gd@C82(OH)22纳米材 料可显著抑制荷瘤鼠两种酶的增高， 并且接近正常机体的水平。 而环磷酰 胺组 ALT水平反而增加， 说明其增加动物肝的损伤。
根据公式 V=47r r3/3计算肿瘤体积， 并得到抑瘤率； 结果发现低剂量 组中 0.1 μ ιηοΐ/kg的 Gd@C82(OH)22抑制肿瘤生长的效率为 32.9% (图 5和 图 6), 虽然比 0.05mmol/kg的 CTX的抑瘤率 52.0 %低，但是其用药量只是 CTX药量的 1/500。
另外， 我们还比较了抑瘤率与药物使用量之间的关系， 当把 CTX的剂 量提高 0.05 mmol/kg时， 其肿瘤抑制率提高了 15%, 而把 Gd@C82OH22纳米 材料的使用剂量仅提高 0.1 μ πιοΐ/kg时， 其肿瘤抑制率就提高 26% (图 7和图 8)。
鼠肝癌 H22模型组肿瘤组织病理切片结果：
以下参见图 9 , Gd@C82(OH)22治疗组小鼠肿瘤浸润范围更小， 瘤体易 剥离， 肿瘤重量明显减轻。 HE染色切片可见肿瘤周围形成明显的肿瘤包绕 带 （炎细胞、 纤维母细胞及毛细血管）。 可激活机体免疫功能。
对照组： 肿瘤细胞向骨骼肌浸润明显。
环磷酰胺组： 肿瘤细胞大量坏死，但不能防止肿瘤细胞向骨骼肌浸润。
表 ― 1 Gd@C82(OH)m抗肝癌 H22活性数据表 剂量 瘤重（g) 抑制效率（％) T检验 生理盐水组 （N=7) 3.91±0.78 0
低剂量组 CTX组
(5x10"2 mmol/kg/day, N=6) 1.80±0.41 52.0 Ρ<0.01
Gd@C82(OH)22 组 (lxliT4
mmol/kg/day, N=5) 2.52+0.74 32.9 Ρ<0.01
Gd@C82(OH)26组
(lxlO"6 mmol/kg/day, N=7) 3.65+1.00 7.7 Ρ>0.01
生理盐水组（N=5) 3.75+0.87 0
高剂量组 CTX组
(0.1 mmol/kg day, N=ll) 1.22+0.86 67.5 Ρ<0.01
Gd@C82(OH)22组
(2x10 mmol kg/day, N=6) 1.65+1.00 57.7 Ρ<0.01
Gd@C82(OH)26组
(2x10"3 mmol kg/day, N=7) 1.05±0.65 72.0 Ρ<0.01
( 为小鼠数量， 表中数据以 (平均值土标准差)表示) 表 2 高剂量组 Gd@C82(OH)22荷瘤小鼠血清总胆红素， ALT, AST和 肌苷水平 总胆红素 ALT AST 肌苷 分组 (μπιοΙ/L) (IU/L) (IU/L) (μιηοΙ/L) 生理盐水组 1.54±0.55 146±36.3 888±181 48.8±3.8 στχ 且 1.66±0.59 152.2±71.5 337+53.7a 51.0+3.3
Gd@C82(OH)22组 1.44±0.26 87.2±32.0a 234±27.3a 51.4+3.6 正常组 2.20±0.54 38.3±7.0 142±20.0 55.7+3.0 注： a与生理盐水组比较 PO.01. 实施例 7
Gd@C82(OH)m对人源 MCF-7乳腺癌棵鼠乳腺癌模型的抑制肿瘤效果
实验方法： BALB/c雌性棵鼠（16.0±1.0g)皮下接种 MCF-7细胞悬液 ( Ι χ Ι Ο7细胞） 后， 饲养 20天， 把皮下产生的肿瘤取出， 切割成 3mmx3mmx3mm的肿瘤小块重新植入 BALB/c雌性棵鼠备用。 接种 3天后开 始给药， 分别给予 Gd@C82(OH)m (m=32或 12)、 环磷酰胺、 紫杉醇、 生理盐 水。
给药方法：
Gd@C82(OH)32 2.5 μπιοΐ/kg /天 x l3天 (以 Gd浓度计算)； 注射液浓度 为 0.25 μηιο1/Γη1。
Gd@C82(OH)12 1.0 mol/kg /天 x l3天， 以 Gd浓度计算； 注射液浓度 为 0.1 μπιοΐ/ml o
环磷酰胺 第一周 71.6 mol/kg/天 x7天，第 8 - 12天 生理盐水 紫杉醇 第 0、 3、 6、 9、 12天 15.2 mol/kg/天， 不给药天注 射生理盐水
生理盐水 0.2 ml q.d.x l3
动物品系： BALB/c雌性棵鼠，
Gd@C82(OH)32组 10只；
0(1@(：82(011)12组 10只；
环磷酰胺组 10只
紫杉醇组 9只；
生理盐水組 8只
II 肿瘤模型： MCF-7人乳腺癌
给药方式： 腹腔注射 (intraperitoneal injection, i.p.)o
CTX和 Gd@C82(OH)m溶液， 以 0.9%的生理盐水为溶剂。 紫杉醇是商用 液体制剂。
抑制肿瘤实验结果如表 3所示， Gd@C82(OH)32组在 2.5 μιηοΐ/kg体重给 药 13天时抑瘤率可达到 47 %， 与环磷酰胺组 71.6 μιηοΐ/kg体重给药 7天结果 一致。 Gd@C82(OH)12组在 1 μιηοΐ/kg体重给药 13天时抑瘤率可达到 35.6 %。 但是环磷酰胺组小鼠出现明显的毒副作用， 如明显体重减轻、 消瘦、 动物 精神状态差。 紫杉醇在 15.2 μπιοΐ/kg体重剂量下， 每隔 2天给药， 抑瘤率可 达到 82 % , 但是 45 %的小鼠死亡， 说明紫杉醇毒性非常大。 而金属富勒醇 组小鼠在实验结束时未出现明显的毒性反应。
实验结果表明， 与目前临床普遍使用的环磷酰胺、 紫杉醇相比， 带有 不同羟基数的金属富勒醇 Gd@C82(OH)32和 Gd@C82(OH)12具有用量小，毒性 低， 且肿瘤抑制率高的优点。
Gd@C82(OH)m 制棵鼠移植的人源乳腺癌生长数据表 分组 剂量 抑制效率 (%) 生理盐水组 N=8
Gd@C82(OH)32组 2.5 mol/kg/day, N=10 47
0(1@。82(011)12组 1 μηιοΐ/kg/day, N=10 35.6
CTX组 71.6 mol/kg/day, N=10 47.0 紫杉醇组 15.2 mol/kg/day, N=9 82
(N为小鼠数量) 实施例 8
La@C82(OH)18组合物对小鼠 Lewis肺癌模型的抑制肿瘤效果
实验方法： C57纯系雌性小鼠 (18.0±1.0g)皮下接种 Lewis肺癌细胞悬液 ( l xlO7细胞）， 接种次日开始给药， 分别给予 La@C82(OH)18、 环磷酰胺、 生理盐水， 每组 10只。
给药方式： 腹腔注射 (intraperitoneal injection, i.p.)。
给药方法：
La@C82(OH)18 1 μιηοΐ/kg q.d.xl4
环磷酰胺 第一周 71.6 mol/kg q.d.x7,第 8 - 14天给予生理盐水 生理盐水 0.2 ml q.d.xl4 CTX和 La@C82(OH)18溶液， 均以 0.9%的生理盐水为溶剂。
抑瘤实验结果参见图 10， 1^@ 82(011)18在 11101/1¾体重给药 14天时可 以明显抑制肿瘤的生长， 肿瘤的重量不明显增加， 与环磷酰胺 71.6 μιηο1/1¾ 体重给药 7天结果基本一致。但是环磷酰胺组小鼠出现明显的毒副作用，如 明显体重减轻、 消痩、 动物精神状态差。 而金属富勒醇组小鼠在实验结束 时未出现明显的毒性反应。
上述实验结果表明， 与目前临床普遍使用的环磷酰胺相比， 金属富勒 醇 1^@( 82(011)18纳米颗粒具有用量小， 毒性低， 且肿瘤抑制率高的优点。 实施例 9
Gd@C6。(OH)2。对小鼠 Lewis肺癌模型的抑制肿瘤效果
实验方法： C57纯系雌性小鼠 (20.0士 1.0 g)皮下接种 Lewis肺癌细胞悬液 ( l x lO7细胞）， 接种次日开始给药， 分别给与 Gd@C6Q(OH)2Q、 生理盐水， 每组 10只。 Gd@C6。(OH)2Q溶液， 以 0.9%的生理盐水为溶剂。
给药方式： 腹腔注射 (intraperitoneal injection, i.p.)。
给药方法：
Gd@C60(OH)20 0.5 μιηοΐ/kg q.d. l 8
生理盐水 0.2 ml q.d.xl 8
抑瘤实验结果表明， Gd@C6Q(OH)2()在 0.5 μηιοΐ/kg体重给药 18天时可 以明显抑制肿瘤的生长， 与生理盐水对照组相比， 接种肿瘤的体积不明显 增加， 抑瘤率可达到 42 %。
实施例 10
细胞毒性试验：
实验方法：
(1) MTT的方法分析金属富勒醇对不同种类癌细胞存活率的影响
MTT法： 作为四氮唑类染料之一的 MTT进入细胞后， 被线粒体呼吸 链酶（如琥珀酸脱氢酶）还原为不溶性有色产物， 利用光吸收的方法测定 有色产物的量， 从而间接反映细胞的活性。
取对数生长期细胞消化成单细胞悬液， 调节细胞浓度为 2xl04/ml， 接 种于 96孔细胞培养板， 每孔接种 100 μ ΐ, 分为 6个剂量组， 每组 8个复 孔。 接种 24h后， 换成无血清培养基， 每孔 100 μ 1， 按剂量组浓度分别加 入药物，继续培养 48h后，弃上清 ,每孔加 100 μ 1 MTT緩冲液及 10 μ 1 MTT 溶液（5mg/ml ), 继续培养 3h, 弃上清， 加 DMSO 150 μ 1/孔， 震荡， 自动 酶标仪测定 595nm处各孔吸光值。
(2)流式细胞仪分析法： 碘化丙啶 (PI)染色检测凋亡细胞数
将 5ml 浓度为 105个 / ml的细胞接种与 25 cm2培养瓶中， 24 h后换 成 5 ml无血清培养基， 分别加入不同浓度的金属富勒醇， 24h后收取细胞, 包括培养基中的少量细胞， 收集好的细胞用生理盐水洗两次， 然后 70 %乙 醇 4。C固定， #文流式分析前， 用生理盐水洗 2次， 最后用生理盐水悬起细 胞， 加入 RNase A 及碘化丙啶（ PI ), 终浓度分别是 25 ppm和 50 ppm, 37°C水浴中放置 30 分钟， 用尼龙紗布过滤后上机测定。 PI不能通过完整 的细胞膜， 但对于凋亡中晚期细胞或死细胞， PI能透过细胞膜而使细胞核 红染， DNA结合 PI染色后用流式细胞仪进行分析， 可在 G1峰前出现一 亚二倍体峰， 居此峰的百分率可检测凋亡细胞数。 实验结果举例：
[ 1 ] MTT的方法分析金属富勒醇对人肝癌 HepG2细胞存活率的影响
Gd@C82(OH)22终浓度在 10 ~ 106 nmol/L范围内， 实验结果如图 11所 示， 细胞活性较未加任何药物的细胞活性有所增加， 但药物各剂量组之间 差别不大， 也没有明显的线性关系。
[2] 流式细胞仪的方法分析金属富勒醇 Gd@C82(OH)22对人肝癌 HepG2细 胞的毒性
结果如图 12所示， 细胞凋亡比例均在 3.5% ~ 7%之间， Gd@C82(OH)22 的终浓度在 10 ~ 106 nmol/L范围内 , 细胞凋亡比例与对照组基本一致， 药 物各剂量组之间没有显著性差别。 Gd@C82(OH)22不诱导 HepG2细胞凋亡, 对细胞的增值和生长没有影响。
[3] 流式细胞仪的方法分析 Gd@C82(OH)26对鼠肝癌 Rh35细胞的毒性
结果如图 13所示， Gd@C82(OH)26的终浓度在 10 ~ 106 nmol/L范围内， 与未加任何诱导剂的对照组细胞凋亡百分比相当， 凋亡细胞的比例均在 2.0% ~ 3.5%之间， 说明 Gd@C82(OH)26不诱导鼠肝癌 Rh35细胞凋亡。
[4]流式细胞仪的方法分析 Gd@C82(OH)32对乳腺癌 MCF-7细胞的毒性
结果如图 14所示， Gd@C82(OH)32的终浓度在 10 ~ 106 nmol/L范围内， 与对照組细胞凋亡百分比相当， 凋亡细胞的比例在 3.0°/。~ 9%之间， 表明 Gd@C82(OH)32不诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡， 对细胞毒性较小。
[5] MTT的方法分析金属富勒醇对神经胶质瘤细胞存活率的影响
La@C82(OH)20终浓度在 100 ~ 106 nmol/L范围内， 实验结果如图 15所 示， 细胞存活率与未加任何药物的对照组基本一致， 对神经胶质瘤细胞的 生长没有明显的影响。 上述不同浓度的金属富勒醇对多种肿瘤细胞的细胞毒性实验结果显 示， 在 10-1000000 nmol/ml的浓度范围内， 金属富勒醇对不同类型的肿瘤 细胞株的生长没有影响， 不诱导细胞凋亡， 同时细胞存活率与不加药物的 对照组一致， 说明金属富勒醇不具备直接的细胞毒性， 不直接杀死细胞。

Claims

权 利 要 求
1、 一种金属富勒醇， 其特征在于： 它以通式 M@C2m(OH)x表示， 通 式中， M为 La或 Gd; m=41或 30; 10≤X<50。
2、 一种肿瘤抑制组合物， 其特征在于： 它包括以通式 M@C2m(OH)x 表示的金属富勒醇， 通式中， M为 Gd或 La; m = 41或 30; 10≤X<50。
3、 一种肿瘤抑制组合物， 其特征在于： 它包括以通式 [M@C2m(OH)x]n 表示的金属富勒醇纳米颗粒，通式中， M为 Gd或 La; m = 41或 30; 10<X<50; n表示团聚成所述金属富勒醇纳米颗粒的金属富勒醇分子数， l≤n<200。
4、根据权利要求 2或 3所述的肿瘤抑制组合物， 其特征在于： 所述的 组合物还包括溶剂和 /或药学上可接受的载体。
5、根据权利要求 4所述的肿瘤抑制组合物， 其特征在于： 所述的溶剂 为水、 生理盐水、 Tris-HCl溶液或磷酸盐緩冲液。
6、根据权利要求 4所述的肿瘤抑制组合物， 其特征在于， 所述的组合 物中金属富勒醇在溶剂中的浓度为 1χ10·5 ~ l mmol/L。
7、根据权利要求 5所述的肿瘤抑制组合物， 其特征在于， 所述的组合 物中金属富勒醇在溶剂中的浓度为 1χ10·5 ~ l mmol/L。
8、根据权利要求 2或 3或 5或 6或 7所述的肿瘤抑制组合物， 其特征 在于： 所述的肿瘤， 包括肺癌、 肝癌、 胃癌、 食管癌、 直肠结肠癌、膀胱 癌、 乳腺癌、 宫颈癌、 卵巢癌、骨肉瘤、 血管肉瘤、 淋巴肉瘤、 白血病、 黑色素瘤或皮肤癌。
9、根据权利要求 4所述的肿瘤抑制组合物， 其特征在于：所述的肿瘤， 包括肺癌、 肝癌、 胃癌、 食管癌、 直肠结肠癌、膀胱癌、 乳腺癌、 宫颈癌、 卵巢癌、骨肉瘤、 血管肉瘤、 淋巴肉瘤、 白血病、 黑色素瘤或皮肤癌。
10、一种金属富勒醇在制备抑制肿瘤药物中的应用，其特征在于：该金 属富勒醇以通式 M@C2m(OH)x表示，通式中， M为 La或 Gd; m=41或 30; 10<X<50 。
11、 根据权利要求 10 所述的金属富勒醇在制备抑制肿瘤药物中的应 用， 其特征在于， 所述的药物被制备成各种剂型， 这些剂型所对应的给药 量以金属富勒醇计为 5xl0-8 ~lxl(T2 mmol/kg/天。
12、 根据权利要求 11 所述的金属富勒醇在制备抑制肿瘤药物中的应 用， 其特征在于， 所述的药物被制备成各种剂型， 这些剂型所对应的给药 量以金属富勒醇计为 5x10-6〜1.25x10·4 mmol/kg/天。
PCT/CN2006/002405 2005-09-19 2006-09-15 Metallo-fullerenols et leur application dans la preparation de medicaments visant a inhiber la croissance tumorale WO2007033578A1 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008531511A JP5043015B2 (ja) 2005-09-19 2006-09-15 金属フレロール及び腫瘍（癌）生長抑制薬物を製造するための金属フレロールの使用
US11/992,249 US8124657B2 (en) 2005-09-19 2006-09-15 Metallofullerols and their applications for preparation of medicine for inhibition of tumor growth
AT06791004T ATE541577T1 (de) 2005-09-19 2006-09-15 Metallo-fullerenole und ihre anwendung bei der herstellung von medikamenten zur hemmung des tumorwachstums
EP06791004A EP1941887B1 (en) 2005-09-19 2006-09-15 Metallo-fullerenols and its application in preparation of medicines for inhibiting the growth of tumour

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2005101034947A CN1739562A (zh) 2005-09-19 2005-09-19 金属富勒醇在抑制肿瘤生长中的应用
CN200510103494.7 2005-09-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2007033578A1 true WO2007033578A1 (fr) 2007-03-29

Family

ID=36092186

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2006/002405 WO2007033578A1 (fr) 2005-09-19 2006-09-15 Metallo-fullerenols et leur application dans la preparation de medicaments visant a inhiber la croissance tumorale

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8124657B2 (zh)
EP (1) EP1941887B1 (zh)
JP (1) JP5043015B2 (zh)
CN (1) CN1739562A (zh)
AT (1) ATE541577T1 (zh)
WO (1) WO2007033578A1 (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8808861B2 (en) 2010-11-18 2014-08-19 The Ohio State University Laminate composite and method for making same
US9085463B2 (en) 2011-01-17 2015-07-21 Marelle, Llc Water-soluble functionalized fullerenes
CN102488657B (zh) * 2011-12-23 2014-05-14 苏州大学 富勒醇固体脂质纳米粒及其制备和应用
CN104127872B (zh) * 2014-07-29 2016-05-25 北京福纳康生物技术有限公司 金属富勒烯单晶纳米颗粒在制备特异性肿瘤血管阻断剂中的应用
EP3130351A4 (en) * 2014-07-29 2017-12-13 Beijing Fullcan Bio-technology Co., Ltd. A method for treating cancer based on metallofullerene monocrystalline nanoparticles that specifically disrupt tumor blood vessels
CN107753513A (zh) * 2016-08-15 2018-03-06 北京福纳康生物技术有限公司 富勒烯在制备药物中的用途以及保护肝脏的药物
RU2659972C1 (ru) * 2016-12-23 2018-07-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова" (ФГБУ "ПИЯФ") Способ получения водорастворимых гидроксилированных производных эндометаллофуллеренов лантаноидов
WO2018144823A1 (en) 2017-02-02 2018-08-09 The Cleveland Clinic Foundation Functionalized fullerene metal nanocomposites
CN108853142A (zh) * 2017-05-09 2018-11-23 北京福纳康生物技术有限公司 水溶性富勒烯纳米颗粒在制备抑制肿瘤生长药物中的应用
CN107693540A (zh) * 2017-10-12 2018-02-16 浙江理工大学 金属富勒醇及其作为制备治疗白血病药物的应用
CN115645437A (zh) * 2022-09-26 2023-01-31 中国科学院化学研究所 富勒烯制剂在制备治疗肠道癌症的药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001114713A (ja) 1999-10-15 2001-04-24 Schering Ag ガドリニウム内包フラロールおよびその造影剤としての使用
CN1480459A (zh) * 2002-10-23 2004-03-10 赵宇亮 金属富勒烯磁共振成像造影对比度增强剂及其制备方法和用途

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5648523A (en) * 1995-10-26 1997-07-15 Chiang Long Y Fullerene derivatives as free-radical scavengers
AU2001289127A1 (en) * 2000-09-21 2002-04-02 Long Y. Chiang Tumor treatment
JP2005272350A (ja) * 2004-03-24 2005-10-06 Vitamin C60 Bioresearch Kk 癌転移阻害剤

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001114713A (ja) 1999-10-15 2001-04-24 Schering Ag ガドリニウム内包フラロールおよびその造影剤としての使用
CN1480459A (zh) * 2002-10-23 2004-03-10 赵宇亮 金属富勒烯磁共振成像造影对比度增强剂及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOLSKAR RD ET AL., J AM CHEM SOC, vol. 125, 2003, pages 5471 - 5478
CAGLE DW ET AL., PROC NATL ACAD SCI, vol. 96, 1999, pages 5182 - 5187
CHIANG LY ET AL., J ORG CHEM, vol. 59, 1994, pages 3960 - 3968
DUGAN L ET AL., PROC NATL ACAD SCI USA, vol. 94, 1997, pages 9434 - 9439
KATO ET AL., JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 125, no. 14, 2003
KROTO ET AL., NATURE, vol. 318, 1985, pages 162
MIRKOVA SM ET AL., NITRIC OXIDE, vol. 11, 2004, pages 201 - 207
ROBERT D. BOLSKAR ET AL., J. AM. CHEM. SOC., vol. 125, 2003, pages 5471 - 5478
SAYES CM ET AL., NANO LETT, vol. 4, no. 10, 2004, pages 1881 - 1887
SITHARAMAN B ET AL., NANO LETTERS, AMERICAN CHEMICAN SOCIETY, vol. 4, no. 12, 2004

Also Published As

Publication number Publication date
JP2009511432A (ja) 2009-03-19
JP5043015B2 (ja) 2012-10-10
CN1739562A (zh) 2006-03-01
US20090076171A1 (en) 2009-03-19
EP1941887B1 (en) 2012-01-18
US8124657B2 (en) 2012-02-28
EP1941887A1 (en) 2008-07-09
ATE541577T1 (de) 2012-02-15
EP1941887A4 (en) 2010-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2007033578A1 (fr) Metallo-fullerenols et leur application dans la preparation de medicaments visant a inhiber la croissance tumorale
Wu et al. The medicinal use of realgar (As4S4) and its recent development as an anticancer agent
Mocniak et al. Incorporation of cisplatin into the metal–organic frameworks UiO66-NH 2 and UiO66–encapsulation vs. conjugation
EP2790682B1 (en) Nanoparticles comprising metallic and hafnium oxide materials, preparation and uses thereof
CN107007571B (zh) 肿瘤微酸性敏感的铜-药物共配位自组装纳米粒及应用
WO2007073225A1 (en) Molybdenum carbonyl complexes for treating rheumatoid arthritis and other inflammatory diseases
WO2007073226A1 (en) Method for treating a mammal by administration of a compound having the ability to release co
CN111135299A (zh) 光敏剂-低氧激活前药一体化前药自组装纳米粒的构建
CN1935812B (zh) 金属富勒醇及其在制备抑制肿瘤生长药物中的应用
CN112107556A (zh) 一种含砷纳米药物及其制备方法
KR20070094235A (ko) 킬레이팅 유기 고분자와 생물학적 금속으로 이루어진 나노입자, 그리고 ｅｐｒ 효과를 이용한 새로운 광범위 무독성항암제 및 그 제조 방법
CN103781760A (zh) 金属salen络合物化合物、局部麻醉药剂及抗恶性肿瘤药剂
CN101695502B (zh) 镧富勒醇及其在制备抑制肿瘤生长药物中的应用
Yang et al. Atom-precise fluorescent copper cluster for tumor microenvironment targeting and transient chemodynamic cancer therapy
WO2013123745A1 (zh) 齐多夫定喹啉共轭化合物及其制备方法和抗肝癌之应用
WO2018064963A1 (zh) 富勒烯结构在制备治疗肿瘤的药物中的应用
CN113633784B (zh) 一种热休克蛋白抑制增敏光热治疗的杂化纳米组装体及其制备与应用
CN110862546B (zh) 一种甲氨蝶呤金属配位聚合物及其制备方法和应用
Yakovlev et al. Detonation nanodiamonds as promising drug carriers
WO2021107794A1 (en) Method of making a system containing gold nanoparticles and use of the system in antitumor therapy
WO2023160700A1 (en) Colloidal mof for arteriosclerosis treatment
KR102643240B1 (ko) 금속-유기골격체, 포도당 산화효소, 및 과산화효소 모방 효소를 포함하는 나노 구조체 및 이의 용도
WO2021227572A1 (zh) 微纳米MgH2化合物颗粒在抑制利什曼原虫感染及治疗利什曼病中的应用
CN116327967A (zh) 一种铂纳米粒子/石墨烯量子点复合纳米材料及其制备方法和在抗肿瘤药物中的应用
CN107693540A (zh) 金属富勒醇及其作为制备治疗白血病药物的应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11992249

Country of ref document: US

Ref document number: 2008531511

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006791004

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2006791004

Country of ref document: EP