WO2006106633A1

WO2006106633A1 - 紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤

Info

Publication number: WO2006106633A1
Application number: PCT/JP2006/306184
Authority: WO
Inventors: Syuichi Oka; Akinori Tsuruda
Original assignee: National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology
Priority date: 2005-04-04
Filing date: 2006-03-27
Publication date: 2006-10-12
Also published as: US20090215702A1; US7820625B2; JP4747364B2; JP2007119440A

Abstract

イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルトレオニル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシル単位からなる群から選ばれる少なくとも１種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩からなる群より選択される少なくとも１種を、紫外線皮膚炎抑止剤あるいはアトピー性皮膚炎抑止剤として用いる。

Description

明細書

紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤

技術分野

[0001] 本発明は、紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤に関するものである。

背景技術

[0002] 従来から、オリゴペプチドまたはその重合物を有効成分とする生理活性物質として、コラーゲンまたはゼラチンのコラーゲナーゼによる分解物中のグリシン残基 1個とそれ以外のアミノ酸残基 2個とから構成されるトリペプチドの、平均分子量 280〜2000 0をもつ重合物力なる老化防止のための皮膚外用剤 (特許文献 1参照）、 (Gly-Al a— Arg)、（Gly— Ala— Hyp)ゝ（Gly— Ala— Lys)、（Gly— Pro— Ala)ゝ (Gly-Pr o—Arg)、（Gly— Pro— Hyp)および（Gly— Pro— Ser)のトリペプチドの混合物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤 (特許文献 2参照)などが知られて、る。

[0003] また、特殊なものとして、 R¹— Met— lie— XR² (Xは Trp、 Phe、 Trp— Leu、 Phe— Leu、 Tyr— Leu、 lie— Leuまたは Leu— Leuであり、 R¹は水素原子、ァミノ基の保護基、 R²はヒドロキシまたはカルボキシル基の保護基である）で表わされるペプチドまたは薬理的に許容される塩を有効成分とする経口育毛剤が知られて！/、る (特許文献 3参照)。

[0004] このように、ペプチドを有効成分とする各種生理活性物質は知られて!/、るが、紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤にっ、ては知られて、な、。

[0005] 特許文献 1 :特開 2000— 309521号公報

特許文献 2 :特開 2003— 137807号公報

特許文献 3：国際公開第 00Z29425号パンフレット

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] 本発明は、ペプチドを用いた紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤につ、て提供するものである。課題を解決するための手段

本発明者らは、上記課題の下、鋭意検討を行った結果、下記手段により上記目的を解決しうることを見出した。

(1)イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルトレォニル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシル単位カゝらなる群カゝら選ばれる少なくとも 1種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩カゝらなる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

(2)イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシルセリル単位カゝらなる群カゝら選ばれる少なくとも 1種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

(3)イソロイシルグリシルセリル単位および Zまたはプロリルイソロイシルグリシル単位を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

(4)イソロイシルグリシルセリル単位を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩からなる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

(5)下記式（1)で表される水溶性ペプチド、およびその水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

式 (1)

Gly Pro lie— Gly— X

(式（1)中、 Xはヒドロキシル基含有アミノ酸単位である。 )

(6)前記式（1)中の Xは Serまたは Thrである、 (5)に記載の紫外線皮膚炎抑止剤。

(7)前記水溶性ペプチドは、 3〜8個のアミノ酸由来のものである、（1)〜（6)のいずれか 1項に記載の紫外線皮膚炎抑止剤。

(8)イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルトレォニル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシル単位カゝらなる群カゝら選ばれる少なくとも 1種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を含有するアトピー性皮膚炎抑止剤。

(9)下記式（1)で表される水溶性ペプチド、およびその水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を 3mgZml以上の濃度で含有する溶液である、アトピー性皮膚炎抑止剤。

式 (1)

Gly Pro lie— Gly— X

(式（1)中、 Xはヒドロキシル基含有アミノ酸単位である。 )

(10)軟膏である、 (8)に記載のアトピー性皮膚炎抑止剤。

(11)固体状である、 (8)に記載のアトピー性皮膚炎抑止剤。

発明の効果

[0008] 本発明で用いる水溶性トリペプチドまたはテトラペプチドおよびそれらの水溶性塩ならびに式（1)で表される水溶性ペプチドおよびその水溶性塩は、保湿性に優れているため、上記の他に、さらに、ドライアイの防止に好ましく用いることができ、また、化粧品等に利用することにより使用感を高めることができる。さらに、これらの効果と紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤の効果を併用する皮膚用外用剤として利用することができる。

図面の簡単な説明

[0009] [図 1]図 1は、炎症している皮膚にペンタペプチドを塗布した場合の水分蒸散量を示す図である。

[図 2]図 2は、紫外線を照射した皮膚にペンタペプチドを塗布した場合の水分蒸散量を示す図である。

[図 3]図 3は、炎症している皮膚にペンタペプチドの軟膏を塗布した場合の水分蒸散量を示す図である。

[図 4]図 4は、炎症している皮膚にトリペプチドの溶液を塗布した場合の水分蒸散量を示す図である。 [図 5]図 5は、紫外線を照射した皮膚にペンタペプチドおよびトリペプチドの軟膏を塗布した場合の水分蒸散量を示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0010] 以下において、本発明の内容について詳細に説明する。尚、本願明細書において「〜」とはその前後に記載される数値を下限値および上限値として含む意味で使用される。

(ペプチド）

本発明で用いることができるペプチドは、イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルトレオニル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシル単位からなる群から選ばれる少なくとも 1 種以上を含む水溶性ペプチド (以下、「本発明におけるペプチド」 t 、うことがある）である。

本発明におけるペプチドは好ましくは、イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位（より好ましくは、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位）およびグリシルプロリルイソロイシルグリシルセリル単位力なる群力選ばれる少なくとも

1種以上を含む水溶性ペプチドである。

本発明におけるペプチドはさらに好ましくは、プロリルイソロイシルグリシル単位および Zまたはイソロイシルグリシルセリル単位を含む水溶性ペプチドである。

本発明におけるペプチドはよりさらに好ましくは、イソロイシルグリシルセリル単位を含む水溶性ペプチドである。

[0011] 本発明におけるペプチドは、 3〜： LO個程度のアミノ酸由来のオリゴペプチドであつてもよいし、 10個以上のアミノ酸由来のポリペプチドであってもよい。本発明におけるペプチドは、 3〜8個のアミノ酸由来のものであることが好ましぐ 3〜7個のアミノ酸由来のものであることがより好ましぐ 3〜5個のアミノ酸由来のものであることがさらに好ましい。

[0012] 本発明におけるトリペプチドとしては、好ましくは、イソロイシルグリシルセリンまたはプロリルイソロイシルグリシンである。本発明におけるテトラペプチドとしては、好ましくは、前記トリペプチドの前または後に、アミノ酸残基が結合した水溶性ペプチドである。ここで、好ましいアミノ酸残基としては、グリシル基、ァラニル基、アルギニル基、ァスパラギル基、リジル基、セリル基、トレオニル基、ノリル基またはダルタミル基が挙げられる。

本発明におけるテトラペプチドは、より好ましくは、グリシルプロリルイソ口イシルグリ

[0013] 本発明におけるオリゴペプチドとしては、好ましくは、前記トリペプチド (例えば、イソロイシルグリシルセリン）の前および Zまたは後に、合計 2個以上のアミノ酸残基が結合した水溶性ペプチドである。ここで、好ましいアミノ酸残基は、上記テトラペプチドのところで記載したものと同じものを挙げることができる。

本発明におけるオリゴペプチドとして、より好ましくは、グリシルプロリルイソロイシルグリシンまたはプロリルイソロイシルグリシルセリンの前後にアミノ酸残基が結合した水溶性ペプチドである。ここでいうアミノ酸残基も、上記テトラペプチドのところで記載したものと同じものを挙げることができる。

本発明におけるオリゴペプチドとして、好ましい他の一例として、下記式（1)で表される水溶性ペプチドを含む水溶性ペプチドである。

式 (1)

Gly Pro lie— Gly— X

(式（1)中、 Xはヒドロキシル基含有アミノ酸単位である。 )

ここで、 Xとしては、 Serまたは Thrが好ましぐ Serがより好ましい。

さらに、本発明におけるオリゴペプチドの中では、前記式（1)で表される水溶性べプチドのみからなるオリゴペプチド、前記式（1)で表される水溶性ペプチドのペンタペプチド単位をカルボキシル基末端に有するオリゴペプチドが好ましい。

このようなオリゴペプチドとしては、ァラニルダリシルプロリルイソロイシルグリシルセリン、セリルグリシルプロリルイソロイシルグリシルセリン、グリシルセリルグリシルプロリルイソロイシルグリシルセリン等が例示される。

[0014] 本発明におけるポリペプチドとしては、好ましくは、上記で例示したトリペプチド、テトラペプチド、オリゴペプチドを含むペプチドである。また、前記式（1)で表される水溶性ペプチドを含むポリペプチドも好ましく、ァラニルダリシルプロリルイソロイシルグリシシルプロリルイソロイシルグリシルセリンの少なくとも 1種を含むポリペプチドがさらに好ましい。

本発明におけるポリペプチドは、分子量 500以下であることが好ましぐ 450以下であることが、水により溶解しやすヽと、う点でより好ま、。

[0015] 本発明では、遊離形のペプチドを用いてもよいし、上記ペプチドの水溶性塩を用いてもよい。水溶性塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモ- ゥム塩などが挙げられる。

本発明で用いることができるペプチドは、ペプチド合成の際にペプチド結合を形成する場合に慣用されている方法、例えば、縮合剤法、活性エステル法、アジド法、混合酸無水物法などにより (X アミノ基を保護した原料アミノ酸とカルボキシル基を保護したアミノ酸とを反応させてペプチドを形成したのち、保護基を脱離する工程を繰り返すこと〖こよって製造することができる。

[0016] この縮合剤法は、最も一般的なペプチド結合の形成方法である。この際の縮合剤としては、ジシクロへキシルカルボジイミド（DCC)、ジイソプロピルカルボジイミド（DIP C)、 N ェチル N，—3—ジメチルァミノプロピルカルボジイミド (WSCI)およびその塩酸塩 (WSCI 'HC1)、ベンゾトリァゾール— 1 ィル—トリス（ジメチルァミノ）ホスホ -ゥムへキサフルォロリ化物塩（BOP)、ジフエ-ルホスホリルジアジド（DPPA)等を単独で、または、 N ヒドロキシスクシンイミド（HONSu)、 1ーヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt)、若しくは 3 ヒドロキシ一 4—ォキソ 3, 4 ジヒドロ一 1, 2, 3 ベンゾトリアジン (HOObt)等と組み合わせて用いることができる。

[0017] 活性エステル法における活性エステルとしては、例えば、 p -トロフエ-ルエステル（ONp)、 N—ヒドロキシスクシンイミドエステル（ONSu)、ペンタフルオロフェ-ルエステル (OPfp)などを用いることができる。

また、アジド法は、アミノ酸またはペプチドに無水ヒドラジンを反応させて対応するヒドラジドを形成させる方法であり、ラセミ化の少な、セグメント縮合法として知られてヽる。 [0018] さらに、混合酸無水物法は、イソブチルォキシカルボ-ルクロリド、塩化ジェチルァセチル、塩化トリメチルァセチル等を用いてアミノ酸のカルボキシル基の混合無水物を形成させる方法で、低温にお!ヽてカルボキシル基を強力に活性ィ匕できるので有利である。

[0019] 他方、アミノ酸の保護基としては、酸処理や加水分解や接触還元により容易に脱離するものが用いられる。このような保護基のうち (Xーァミノ基の保護基としては、ベンジルォキシカルボ-ル基、 tert ブトキシカルボ-ル基、 9 フルォレ -ルメトキシカルボニル基、 3 -トロ 2 ピリジンスルフエ-ル基、メトキシベンジルォキシカルボ -ル基などがある。また、カルボキシル基を保護するには、メチルエステル、ェチルェステル、ベンジルエステル、 tert ブチルエステル、フエナシルエステルなどを形成させる。

[0020] また、側鎖にヒドロキシル基を有する a アミノ酸の場合は、このヒドロキシル基を保護する必要があるが、この保護基としては、白金黒触媒による接触還元や強酸処理により容易に脱離されるベンジル基や弱酸処理により容易に脱離される tert プチル基が好適である。

このような α—アミノ酸エステル、アミノ基ゃヒドロキシル基を保護された原料ァミノ酸は、市販品として容易に入手可能である。

[0021] 本発明で用いることができるペプチドの製造は、原料アミノ酸またはその誘導体を溶媒中に均一に溶解して反応させる液相法、不溶性の榭脂上でペプチド鎖を伸長させて、く固相法の、ずれでも行うことができる力自動固相合成装置を用いて行う方法が有利である。この方法によると、所望のオリゴペプチドを短時間に、し力も高純度で得ることができる。

[0022] 本発明で用いることができるペプチドは、ラセミ体として得られる場合があるが、所望ならば、慣用の方法により光学分割して光学活性を有するものとして得ることもできる。この光学分割は、ラセミ体のアミノ酸を適当な光学活性物質とのジァステレオマーを形成させ、これを分別結晶する方法、酵素を用いる方法又はキラルな担体を用いた高速液体クロマトグラフィーによる方法等で行うことができる。

[0023] 本発明におけるペプチドは、水又はアルコール類に可溶である。これらは、質量分析、赤外吸収スペクトル、高速液体クロマトグラフィ (HPLC)により、同定することができる。

[0024] 本発明でいう、紫外線皮膚炎抑止剤とは、紫外線照射による、皮膚炎症の防止及び予防、またそれに伴うシヮゃシミの防止及び美白等の役割を果たすものをいう。多量の紫外線に曝露された皮膚では、角質層の構造に炎症が生じ、角質バリア機能が低下することが知られている。このような皮膚では、急性紫外線炎症として水疱、サンタンおよびサンバーンが、慢性紫外線炎症としてシヮ、タルミ、シミおよび弾力性低下等の症状が現れるが、本発明の紫外線皮膚炎抑止剤を用いることによりこれらを抑止することができる。

[0025] 本発明でいう、アトピー性皮膚炎抑止剤とは、アトピー性の皮膚炎の抑止および予防、またそれに伴う痒みの軽減及び乾燥肌の改善等の役割を果たすものをいう。また、接触性皮膚炎も本発明のアトピー性皮膚炎抑止剤に含む趣旨である。アトピー性皮膚炎では、角質におけるバリア機能が損傷した状態にある。このような皮膚はいわゆる敏感肌となり、わず力な外的刺激で炎症を引き起こし、病態の症状をさらに悪ィ匕させることが指摘されている。従って、本発明のアトピー性皮膚炎抑止剤を用いること〖こより、これらを抑止することがでさる。

[0026] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤またはアトピー性皮膚炎抑止剤は、化粧水、タリーム、乳液、ファンデーション、油性化粧料、ノック剤、皮膚洗浄剤、スプレー剤、エアゾール剤等の化粧品および薬用化粧品、軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、乳剤等の外用剤に調製して使用することができる。

上記の外用剤は、薬理学的、製剤学的に許容し得る添加物を加えて製造することができる。薬理学的、製剤学的に許容し得る添加物の例としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、 PH調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を挙げることができる。上記の外用剤には、本発明の趣旨を逸脱しない範囲内で、他の紫外線皮膚炎抑止剤またはアトピー性皮膚炎抑止剤を 1種又は 2種以上配合してもよい。本発明の紫外線皮膚炎抑止剤またはアトピー性皮膚炎抑止剤の投与方法は特に限定されないが、皮膚用外用剤が好ましい。また、本発明の外用剤の投与量は特に限定されず、有効成分の種類などに応じて適宜選択することができ、さらに患者の体重や年齢、疾患の種類や症状、投与経路など通常考慮すべき種々の要因に応じて、適宜増減することができる。一般的には、紫外線皮膚炎抑止剤として用いる場合、成人一曰当たり 0. 00001〜1000mg、好まし <は 0. 001〜10mgの範囲で用いることができる。一般的には、アトピー性皮膚炎抑止剤として用いる場合、成人一曰当たり 0. 00001〜1000mg、好ましくは 0. 001〜10mgの範囲で用! /、ること力 S できる。

[0027] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤は、例えば、患部に、 1日 1〜5回程度塗布を繰り返して使用される。

[0028] さらに、本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤は、一般に、医薬品又は医薬部外品、化粧料等に用いられる各種担体や添加剤を含んでいてもよい。各種担体としては、各種キャリアー担体、イクステンダー剤、希釈剤、増量剤、分散剤、賦形剤、結合剤溶媒、溶解補助剤、緩衝剤、溶解促進剤、ゲル化剤、懸濁化剤、ミルクタンパク質、コラーゲン、米油、レシチンなどが挙げられる。添加剤としては、例えば、ビタミン類、有機酸、着色剤、香料、湿化防止剤、ファイバー、電解質、ミネラル、栄養素、抗酸化剤、保存剤、芳香剤、湿潤剤、天然の植物抽出物、コーヒー抽出物、フルーツ抽出物、野菜抽出物などが挙げられる。

[0029] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤を液状とする場合、水性媒質に、 0. OOlmg/ml 以上の濃度で溶解することが好ましぐ 0. lmgZml以上の濃度で溶解することがより好ましぐ lmgZml以上の濃度で溶解することがさらに好ましぐ 3mgZml以上の濃度で溶解することがよりさらに好ましぐ lOmgZml以上の濃度で溶解することが最も好ましい。

本発明のアトピー性皮膚炎抑止剤を液状とする場合、水性媒質に、 0. OOlmg/ ml以上の濃度で溶解することが好ましぐ 0. lmgZml以上の濃度で溶解することがより好ましぐ lmgZml以上の濃度で溶解することがさらに好ましぐ 3mgZml以上の濃度で溶解することがよりさらに好ましぐ lOmgZml以上の濃度で溶解することが最も好ましい。

この際用いる水性媒質としては、水と水溶性有機溶剤との混合溶媒が好ましい。水溶性有機溶剤としては、例えばエチルアルコールのようなアルコール類、ェチレングリコール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、 1, 3—ブチレングリコールのような多価アルコール類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドのような極性有機溶剤などが挙げられる。これらは単独で用いてもよいし、 2種以上組み合わせて用いてもよい。好ましい水性溶媒は、水とプロピレングリコールとェチルアルコールとの混合溶媒である。

[0030] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤を軟膏剤とする場合、疎水性基剤 (油脂性基剤)またはヒドロゲル基剤が好まし！/ヽ。

疎水性基剤 (油脂性基剤)として、油脂、ロウ、炭化水素類等が用いられ、具体的には、黄色ワセリン、白色ワセリン、パラフィン、流動パラフィン、プラスチベース、シリコーン等の鉱物性基剤、およびミツロウ、動植物性油脂等の動植物性基剤が挙げられる。

ヒドロゲル基剤として、カルボキシビュルポリマー類、ゲルベース、無脂肪性軟膏、ポリエチレングリコール類等が挙げられる。

[0031] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤を乳剤性基剤とする場合、親水軟膏、バニシングクリーム等の水 Z油型基剤、および親水ワセリン、精製ラノリン、加水ラノリン、コールドクリーム、親水プラスチベース等の油 Z水型基剤を基剤として用いることができる。

[0032] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤を懸濁性基剤とする場合、ローション剤およびステアリルアルコール、セチルアルコール等の微粒子をプロピレングリコール中に懸濁させた FAPG基剤 (Fattyalcohol - propylene glyc ol)、すなわち、リオゲル基剤等を基剤として用いることができる。

[0033] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤をクリーム剤とする場合の基剤としては、サラシミツロウ、流動パラフィン、ラノリン、ノラフィン、ワセリン、鯨ロウ、セスキォレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、グリセリン、プロピレングリコール、カルボキシビュルポリマー等を基剤として用いることがでさる。

[0034] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤を油剤の基剤とする場合、流動パラフィン、ラノリン、スクヮラン、植物油、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、モノイソステアリン酸モノミリスチン酸グリセリン、イソノナン酸ィソトリデシル、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、トリー 2—ェチルへキサン酸グリセリン、乳酸オタチルドデシル、トリイソステアリン酸ジグリセリル等を基剤として用いることができる。

[0035] 本発明の紫外線皮膚炎抑止剤およびアトピー性皮膚炎抑止剤をリニメント剤とする場合、グリセリン、カルメロースナトリウム等を基剤として用いることができる。

[0036] 乳剤、クリーム剤は、液体分散媒中に不溶性の溶液を小滴として分散させたものである。液体分散媒中に活性成分、乳化剤等を加え、ホモジナイザー、コロイドミルを用い、混合、攪拌して製造することができる。乳化剤としては、薬用石鹼、ステアリン酸トリエタノールァミン、ラウリル硫酸ナトリウム、セスキォレイン酸ソルビタン、ポリソルベート類、ステアリン酸ポリオキシル 40、ラウロマクロゴール、コレステロール、レシチン、アラビアゴム、ゼラチン等を基剤として用いることができる。

[0037] 油剤は、油状泥状の外用剤であり、通常、活性成分を油性基剤に溶解するか、懸濁して製造する。

[0038] ローション剤は、活性成分を水性の液中に微細に均等に分散した製剤であり、懸濁性ローション剤と乳濁性ローション剤がある。懸濁化剤としては、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、 CMC— Na、メチルセルロース等が用いられる。乳ィ匕剤としては、上記乳化剤が用いられる。

実施例

[0039] 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り、適宜、変更することができる。従って、本発明の範囲は以下に示す具体例に限定されるものではない。

[0040] (実施例 1)

被験物質の調製

グリシルプロリルイソロイシルグリシルセリン（以下、「GPIGS」と示すことがある） (A MERICAN PRPTIDE製、 lot. CC— 09— 119)を lmg秤量した。大塚注射用水（大塚製薬製、 cat. 322134) 300 1を加え溶解させた後、プロピレングリコール（和光純薬 (株）製、 cat. 161— 05006) 200 1およびエタノール（和光純薬 (株）製、 ca t.057-00456) 500 μ 1を混合し、 lmgZmlの GPIGS溶液（1)を調製した。

[0041] 試料の調製

マウスは、 7週齢マウス（エスエルシー製、 BALBZc系）を、 1週間飼育し、馴化させた。

9. 7mlの (アセトン：ォリーブオイル = 3 : 1)溶液に 2, 4—ジトリフルォロベンゼン（ナカライテスタ製、 cat. 135- 12) (DNFB)を 10 1 (14. 5mg)添加し、 1. 5mg/ mlの DNFB溶液とした。

[0042] 皮膚炎の惹起

BALBZcマウス（8週齢）の左右の耳の表裏に、 1. 5mgZmlの DNFB溶液をそれぞれ 25 1ずつ、 1週間に 1回の割合で 5回塗布した。

薬液は、 4回目の DNFB溶液塗布の 1日後から 1日 1回、左右の耳の表裏に 25 μ 1 ずつ塗布した（5回目の DNFB溶液塗布時には、 DNFB塗布の 1時間前に GPIGS 溶液（1)を塗布した)。 5回目の DNFB溶液塗布力も 48時間後の耳介表面における水分蒸散量をテヴァメーター TM300(Courage+Khazaka社製）にて測定し、角質バリア機能を評価した (1— 3) (本発明)。

また、 DNFB溶液に代えて、（アセトン:ォリーブオイル = 3 : 1)溶液を塗布した他は上記と同様に行ったもの（1— 1)および、 GPIGS溶液（1)から GPIGSを除いた溶液を用いた他は上記と同様に行ったもの（1— 2) (比較例）についても角質バリア機能を評価した。

V、ずれの実験につ、ても、マウス 5匹ずつにつ!、て行った。

[0043] 結果を、図 1に示した。図 1中のデータは、平均値士標準誤差 (mean士 S.E.)で示した。統計解析は、 Student' s t- test (Stat View J- 4.02、 Abacus Concepts Inc.)にて行つた。危険率 5%未満 (pく 0. 05)の場合、有意差ありとした。ここで、（1— 2)の水分蒸散量は 13. l lg/m²/hrであり、（1— 1) (7. 91g/m²/hr)と比較して有意に増大した。このことから、 DNFB溶液を塗布したマウスの皮膚では角質バリア機能が著しく低下していることが確認できた。さらに、（1— 3) (本発明）の水分蒸散量は、 11. 30gZm²Zhrであり、（1— 2) (比較例）と比較して有意に減少した。このことから GPI GSは、皮膚炎によって損傷した角質バリア機能に対して改善効果を示すことが明らカゝとなった。

[0044] (実施例 2)

また、実施例 1において、 GPIGS溶液（1)の濃度を、 3mgZmlとし、他は同様に行つたところ、実施例 1より、より良好な角質バリア機能が認められた。

[0045] (実施例 3)

被験物質の調製

実施例 1と同様に、 GPIGS溶液（1)を調製した。

試料の調製

マウスは、産業技術総合研究所'動物飼育室で 1週間以上飼育し馴化させた 10週齢マウス（エスエルシー製、 Hos :HR— 1系）を用いた。

[0046] ペントバルビタール麻酔下で固定したマウスの背部に、 150mjZcm²の紫外線 (U VB)を 5日間（1日 1回）照射し、皮膚傷害を与えた。薬液は、 UVB照射直後に 1日 1 回、背部皮膚表面毎に 100 1を塗布した。背部皮膚表面における水分蒸散量をテヴァメーター TM300 (Courage +Khazaka社製）で測定し、角質バリア機能を評価し 7こ。

V、ずれの実験につ、ても、マウス 4匹ずつにつ!、て行った。

[0047] 結果を図 2に示した。図 2中のデータは、平均値士標準誤差 (mean士 S. E. )で示した。統計解析は、 Student' s t- test (Stat View J- 4.02、 Abacus Concepts Inc.)にて行った。危険率 5%未満 (p< 0. 05)の場合、有意差ありとした。ここで、白三角は U VB照射を行わな力つたもの（2—1)を、 Xは GPIGSを除いた溶液を用いたもの（2— 2) (比較例）を、黒ダイヤ形は本願実施例のもの（2— 3)をそれぞれ示してヽる。

(2— 2)および（2— 3)の水分蒸散量は共に、連続的な UVB照射により経日的に上昇したものの、その上昇率は、（2— 3) (本発明）の方が（2— 2) (比較例）より低かつた。特に、 UVB照射後 4日目以降における（2— 3) (本発明）の水分蒸散量は、 (2 - 2) (比較例）と比較して有意に低力つた。このことから GPIGSは、 UVB照射によつて損傷した角質バリア機能に対して改善効果を示すことが明らかとなった。 [0048] (実施例 4)

lOmgの GPIGSに、ハイビスヮコー 104 (和光純薬工業社製） 1. Og、プロピレングジ =3—ノレ 20. Ogゝジイソプロノノ一ノレァミン 1. lgゝゲンタミシン液 1. Ogゝ精製水 76 . 7g、ハイビスヮコー 104 (和光純薬工業社製）に精製水 20gを加えて混和して軟膏を作製した。この軟膏を実施例 1および実施例 2と同様の処理をしたマウスに塗布したところ、それぞれの皮膚炎の改善が認められた。

[0049] (実施例 5)

lOmgまたは 30mgの GPIGSに、ハイビスヮコー 104 (和光純薬工業製）を lOOmg 、大塚注射用水を 7. 8mL、エタノーノレを 2mL、 INの HC1を 50 Lおよび 5Mの Na OHを 50 μ L、加えて混和し、それぞれ、 lmg/mL, 3mgZmLの 2種類の濃度の GPIGS軟膏 (順に、（3— 3)、（3— 4)とする）を調整した。これらの軟膏を実施例 1と同様の処理をしたマウスに塗布した。その結果を図 3に示した。

図 3中、（3— 3)は lmgZmLの GPIGS軟膏（3— 3)を塗布した群を、（3— 4)は 3 mgZmLの GPIGS軟膏（3—4)を塗布した群を、（3— 1)は DNFB溶液に代えて、（アセトン：ォリーブオイル = 3： 1)溶液を塗布した群を、 (3- 2)は GPIGS軟膏（3— 3 )力も GPIGSを除、た軟膏を塗布した他は（3— 3)と同様に処置した群 (比較例）を、それぞれ示している。

[0050] ここで、（3— 2)の水分蒸散量は 8. 42gZm²Zhrであり、（3— 1) 1. 83g/mVhr と比較して有意に増大した。このことから、実施例 1と同様に、 DNFB溶液を塗布したマウスの皮膚では角質バリア機能が著しく低下していることが確認できた。さらに、（3 - 3) (本発明）の水分蒸散量は 5. 23g/mV r, (3—4) (本発明）の水分蒸散量は 3. 89gZm²Zhrであり、それぞれ、（3— 2) (比較例）と比較して有意に減少した。このことから GPIGSは、皮膚炎によって損傷した角質バリア機能に対して改善効果を示すことが明らかとなった。また、（3— 3)と（3— 4)との比較力も明らかな通り、濃度依存的な角質バリア機能の改善作用が認められ、その作用は 3mgZmLの濃度でより効果的であった。

[0051] (実施例 6)

実施例 1において、 GPIGSの変わりにイソロイシルグリシルセリン（以下、「IGS」と示すことがある）を用いて lmgZmLの濃度の IGS溶液 (6)を作製し、他は同様に行つた。図 4に示すように IGSもまた GPIGSと同様に皮膚炎によって損傷した角質バリァ機能に対して改善効果を示した。

図 4中、（4— 3)は lmgZmLの IGS溶液 (6)を塗布した群 (本発明）を、（4—1)は DNFB溶液に代えて（アセトン:ォリーブオイル = 3 : 1)溶液を塗布した群を、 (4- 2) は IGS溶液カゝら IGSを除、た溶液を塗布した他は (4— 3)と同様に処置した群 (比較例）をそれぞれ示している。

ここで、（4— 2)の水分蒸散量は 9. 29gZm²Zhrであり、（4—1) 1. 83g/mVhr と比較して有意に増大した。このことから、実施例 1と同様に、 DNFB溶液を塗布したマウスの皮膚では角質バリア機能が著しく低下していることが確認できた。さらに、（4 - 3) (本発明）の水分蒸散量は 5. 57gZm²Zhrであり、（4— 2) (比較例）と比較して有意に減少した。このことから GPIGSは、皮膚炎によって損傷した角質バリア機能に対して改善効果を示すことが明らかとなった。

(実施例 7)

lOmgの GPIGSまたは IGSに、ハイビスヮコー 104 (和光純薬工業性）を 100mg、大塚注射用水を 7. 8mL、エタノーノレを 2mL、 INの HC1を 50 Lおよび 5Mの NaO Hを 50 /z L、加えて混和し、それぞれ、軟膏（5— 3、 5—4)を調整した。これらの軟膏を実施例 3と同様の処理をしたマウスに塗布したところ、図 5に示すように、 GPIGS軟膏（5— 3)および IGS軟膏（5— 4)は、ずれも UVB照射によって損傷した角質バリア機能に対して改善効果を示した。

図 5中、（5— 3)は lmgZmLの GPIGS軟膏を塗布した群（本発明）を、（5— 4)は 1 mgZmLの IGS軟膏を塗布した群 (本発明）を、（5— 1)は UVB照射を行わな力つた群を、（5— 2)は（5— 3)力も GPIGSを除、た軟膏を塗布した他は（5— 3)と同様に処置した群 (比較例）を、それぞれ示している。

(5— 2)〜（5— 4)の水分蒸散量は共に、連続的な UVB照射により経日的に上昇したものの、その上昇率は、（5— 3) (本発明）、 (5-4) (本発明）の方が（5— 2) (比較例)より低力つた。また、 UVB照射後 1日目力 10日目までの総水分蒸散量について、（5— 1)に対する（5— 2) (比較例）の増加率を 100%とした場合、 (5- 3) (本発明）および（5— 4) (本発明）の増加率はそれぞれ 82. 1%および 55. 4%であり、いずれも明らかに抑制された。これらのことから GPIGSおよび IGSは、 UVB照射によつて損傷した角質バリア機能に対して改善効果を示すことが明らかとなった。

Claims

請求の範囲

[1] イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプ口リルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルトレオニル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシル単位力なる群力選ばれる少なくとも 1種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

[2] イソ口イシルグリシルセリル単位、プロリルイソ口イシルグリシル単位およびグリシルプ口リルイソロイシルグリシルセリル単位カゝらなる群カゝら選ばれる少なくとも 1種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1 種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

[3] イソ口イシルグリシルセリル単位および/またはプロリルイソ口イシルグリシル単位を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1 種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

[4] イソロイシルグリシルセリル単位を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩からなる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

[5] 下記式（1)で表される水溶性ペプチド、およびその水溶性塩力もなる群より選択される少なくとも 1種を含有する紫外線皮膚炎抑止剤。

式 (1)

Gly Pro lie— Gly— X

(式（1)中、 Xはヒドロキシル基含有アミノ酸単位である。 )

[6] 前記式（1)中の Xは Serまたは Thrである、請求項 5に記載の紫外線皮膚炎抑止剤。

[7] 前記水溶性ペプチドは、 3〜8個のアミノ酸由来のものである、請求項 1〜6のいずれ力 1項に記載の紫外線皮膚炎抑止剤。

[8] イソロイシルグリシルセリル単位、プロリルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプ口リルイソロイシルグリシルセリル単位、グリシルプロリルイソロイシルグリシルトレオニル単位、プロリルイソロイシルグリシル単位およびグリシルプロリルイソロイシルグリシル単位力なる群力選ばれる少なくとも 1種以上を含む水溶性ペプチド、ならびにこれらの水溶性塩力なる群より選択される少なくとも 1種を含有するアトピー性皮膚炎抑止剤。

[9] 下記式（1)で表される水溶性ペプチド、およびその水溶性塩力もなる群より選択される少なくとも 1種を 3mgZml以上の濃度で含有する溶液である、アトピー性皮膚炎抑止剤。

式 (1)

Gly Pro lie— Gly— X

(式（1)中、 Xはヒドロキシル基含有アミノ酸単位である。 )

[10] 軟膏である、請求項 8に記載のアトピー性皮膚炎抑止剤。

[11] 固体状である、請求項 8に記載のアトピー性皮膚炎抑止剤。