WO2006011823A1 - Agent immunostimulateur et interférogène - Google Patents

Agent immunostimulateur et interférogène Download PDF

Info

Publication number
WO2006011823A1
WO2006011823A1 PCT/RU2004/000242 RU2004000242W WO2006011823A1 WO 2006011823 A1 WO2006011823 A1 WO 2006011823A1 RU 2004000242 W RU2004000242 W RU 2004000242W WO 2006011823 A1 WO2006011823 A1 WO 2006011823A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
activity
interferonogenous
acid
agents
salts
Prior art date
Application number
PCT/RU2004/000242
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Valery Aleksandrovich Marchukov
Sergei Alekseevich Selkov
Aleksandr Nikolaevich Chernobrovy
Aleksandr Vasilievich Seljutin
Dmitry Igorevich Sokolov
Original Assignee
Akciju Sabiedriba 'olainfarm'
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Akciju Sabiedriba 'olainfarm' filed Critical Akciju Sabiedriba 'olainfarm'
Priority to UAA200604494A priority Critical patent/UA79908C2/uk
Priority to PCT/RU2004/000242 priority patent/WO2006011823A1/ru
Priority to EP04808945A priority patent/EP1759703A4/en
Priority to EA200600428A priority patent/EA200600428A1/ru
Publication of WO2006011823A1 publication Critical patent/WO2006011823A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants

Definitions

  • the invention relates to the field of biology and medicine, to the creation of new biologically active substances and is intended for use as immunostimulating and interferonogenic agents for therapeutic, prophylactic and research purposes.
  • lymphocytes naturally killer cells
  • Search 5 is carried out among various classes of natural and synthetic compounds, including the adamantane derivatives
  • the drug "Midantan” (1-adamantylamine hydrochloride) is used to treat parkinsonism. In addition, it exhibits an antiviral effect against type A influenza virus (ibid., T.1, C.142).
  • ⁇ -methyl- ⁇ - (1-adamantyl) methylamine hydrochloride which is the 15th substance of the drug “remtadin”, is effective against type A influenza virus (ibid., T.2, C.325), but information on its activity for treatment Parkinsonism is absent.
  • polymer analogues may lose biological properties characteristic of low molecular weight structures.
  • poly - 2 - vinylpyridine - N - oxide and some other N-oxides are well known for their anti-silicic activity; at the same time, polymers containing an N - oxide group, shielded
  • the drug "polimer” found not only a prolonged action against influenza A virus, but also (unlike polymer compounds adamantylamine) antiviral activity against herpes viruses type I and Il, tick-borne encephalitis. It 5 induces interferon and has an immunostimulating effect.
  • the drug "polimer” is used mainly for the prevention and treatment of these viral infections (RF patent Ns 2071323, Mcl.6 A61 K 31/785; A61 K 9/06, 9/20 "Antiviral drug” POLYPEM ", published on 10.01. 1997; Ershov F.I. Antiviral drugs, M .: Medicine, 1998, ⁇ york ⁇ .141-142)
  • This drug is closest to the claimed compounds for their intended purpose and chemical composition, it is selected as a prototype.
  • the objective of the invention is the creation of new polymeric compounds with immunostimulating and interferonogenic effects.
  • the carboxyl-containing copolymers are selected from the group: polyvinylaminosuccinic acid, a copolymer of vinyl alcohol and N-vinylaminosuccinic acid, a copolymer of N-vinylpyrrolidone and N-vinylaminosuccinic acid.
  • PVASK Polyvinylaminosuccinic Acid
  • I 5 is better than 5 - 50
  • a method for producing polymer salts of 3,5-dimethyl -1-adamantyl ammonium consists in reacting a carboxyl-containing (co) polymer in an aqueous medium with 3,5 - dimethyl -1 - adamantylamine at 15-25 C 0 , with stirring for 0.5-1 h and the introduction of equimolar ratios of the reagents in terms of the actual or specified content of carboxyl groups in ( co) for example, followed by
  • the general starting reagent in the synthesis of polymer salts of 3,5-dimethyl-1-adamantylamine can be obtained and used as an intermediate in the synthesis of its hydrochloride, or can be isolated from commercial hydrochloride (memantine) by treatment with a 5% aqueous solution of sodium hydroxide followed by extraction with diethyl ether or chloroform. Then ether (chloroform) is distilled off, and 3,5-dimethyl-1-adamantylamine is distilled in vacuo. The resulting 3,5-dimethyl-1-adamantylamine does not change its biological activity and
  • the polymer base 25 compositionally homogeneous (in chemical composition and molecular weight) carboxyl-containing water-soluble non-toxic (co) polymers were selected:
  • the molecular weight of the polymers used is within 20-80 kDa, the number of carboxyl-containing units in (co) is from 1 to 100 mol%.
  • the salt formation reaction of 3,5 - dimethyl-1-adamantylamine with carboxyl-containing polymers is carried out in an aqueous medium at a temperature of 15-25 C 0 with stirring for 0.5-1 h and the introduction of equimolar ratios of the reagents in terms of the actual (or calculated) content carboxyl groups in (co) polymer, followed by separation of salts from the solution by precipitation into acetone, or methyl ethyl ketone, or into a mixture of ethyl alcohol and diethyl ether, or into a mixture of diethyl ether and benzene, or using one of
  • the obtained compounds are polymeric salts of polycarboxylic acids and 3,5-dimethyl-1-adamantylamine (3,5-dimethyl-1-adamantylammonium - (DM AAM).
  • DM AAM 3,5-dimethyl-1-adamantylamine
  • Example 1 In a reactor (flask) equipped with a stirrer, 0.858 g of poly-N-vinylaminosuccinic acid (PVASK) and 30 cm 3 of distilled water are charged. After the polymer has dissolved, 1.074 g of 3,5-dimethyl-1-adamantylamine (DMAAM) is introduced. The initial molar ratio of zo BACK: DMAAM is 1: 1. The reaction is conducted at a temperature of 15 0 C for 1 hour, after which the reaction mixture was poured in 30 cm 3 of ethanol and the product was isolated by precipitation into a mixture of benzene - diethyl ether (1: 3 ratio).
  • PVASK poly-N-vinylaminosuccinic acid
  • DMAAM 3,5-dimethyl-1-adamantylamine
  • the precipitate is filtered off, washed diethyl ether and dried at 30-35 ° C / 6.65 Pa. According to the results of elemental analysis and potentiometric titration, the content of DMAAM in the obtained salt was 54.32 mass%, which corresponds to the content of units of 3,5 dimethyl-1-adamantyl-ammonium salt of vinylaminosuccinic acid (BACK-DMAAM) 95% mol%.
  • the product yield (PVASK-DMAAM) was 89%.
  • the characteristic viscosity of the polymer salt solution in HCI concentration with (HCI) of 0.1 mol / DM 3 at 25
  • C has a value of 0 in .ZU
  • Example 2 The process is carried out as described in Example i, but 1.0 g of a copolymer of vinyl alcohol with N-vinylaminosuccinic acid (BC - BACK) is loaded into the flask (BACK content is 25 mol%, i.e. 52 mass%, 0.520 g), and 20 cm 3 of distilled water, then include a stirrer. After complete dissolution of the copolymer, 0.650 g of 3,5-dimethyl-1- is charged.
  • BC - BACK a copolymer of vinyl alcohol with N-vinylaminosuccinic acid
  • DMAAM 15 adamantylamine
  • the initial equimolar ratio of BACK: DMAAM is 1: 1.
  • the process is carried out at room (20-25 C 0 ) temperature for 0.5 h until complete homogenization of the aqueous reaction medium.
  • the reaction product is isolated by precipitation from solution in acetone, filtered off, washed with acetone and diethyl ether and dried.
  • the DMAAM content in the obtained salt was 39.42 mass%, which corresponds to 25 mol% of BACK - DMAAM units (units of 3,5-dimethyl-1-adamantylammonium salt of N-vinylaminosuccinic acid).
  • the yield of product (BC -BACK - DMAAM) is 95%.
  • Example 3 The process is carried out similarly to Example 1, but 0.991 g of a copolymer of N-vinylpyrrolidone with N-vinyl-amino-succinic acid (VP-VASK) containing BACK units is charged into the reaction flask 27 mol% and 50 cm 3 of distilled water. After the polymer has dissolved, 0.4 g of DMAAM is added. The reaction is conducted at a temperature of 20 0 C for 40 minutes. The reaction product is isolated by freeze-drying (freeze-drying) the solution, washed with diethyl ether and dried at 30-35 ° C / 6.65 Pa.
  • VP-VASK N-vinyl-amino-succinic acid
  • the resulting polymer salt contains 28.75 wt.% DMAAM, corresponding to 27 mol% of salt units of VASK-DMAAM in the VP-VASK-DMAAM copolymer.
  • the product yield is 93%.
  • the value of the characteristic viscosity of the solution in HCI concentration c (HCI) of 0.1 mol / DM 3 is at 25 ° C
  • Immunocompetent cells - natural killer cells belong to the system of natural resistance of the human body. Determining the state of a given part of the immune system provides important information about the state of the body's immune status. To assess the state of this link of the immune system, depending on the presence of the studied compounds, a functional test was used to determine the ability of EC cells to lyse target cells of K-562 tumor myeloblast culture, the identification of which was carried out with
  • the activity of EK cells was determined in accordance with the number of “killed” K-562 target cells, evaluated by the intensity of fluorescence in the region characteristic of the killed cells and in relation to the result in the control (i.e., in the absence of EK cells).
  • the level of the effect of the studied drugs on the activity of EC cells was evaluated by the ratio of the activity of EC cells treated with the drugs to the activity of untreated EC cells during the lysis of target cells of the K-562 test culture line. To select doses and concentrations of drugs when studying their activity
  • the ability to induce interferon characterizes one of the levels of the protective action of the body. Induction of interferon by cells when exposed to any drugs characterizes the interferon-inducing activity of the drugs.
  • the maximum concentration of compounds used was 50 ⁇ g / ml (in terms of DMAAM), which corresponds to the minimum toxic dose of drugs for peripheral blood mononuclear cells and a test culture.
  • the interferon-inducing activity of the preparations (Table 2) is expressed in international units (ME) of the antiviral activity of interferon against the virus of vesicular stomatitis. It was determined by calibrating the standard activity of test interferon IFN- ⁇ Table 2. Interferon-inducing activity of peripheral blood mononuclear cells (EC cells) depending on the presence of DMAAM compounds
  • polymer compounds DMAAM have greater interferonogenic activity than POLIREM (prototype), tested under the same conditions for comparison.
  • the proposed polymer compounds have a significant immunostimulating and interferonogenic effect. They are promising for correcting the activity of immunocompetent cells of peripheral blood mononuclear cells - natural killers and interferon-inducing activity of blood mononuclear cells, that is, to increase the level of functional activity of the human immune system. Determination of toxic properties of compounds.
  • the toxicity level of the claimed compounds was evaluated according to the generally accepted indicator of acute toxicity - the average lethal 5 (average lethal) dose of the LD 5 o drug.
  • the study was carried out with a single oral administration of 18-20 g Balb weighing 130 to White rats and 130 130 white rats - 250 g (females) and 225-370 g (males).
  • the preparations were administered to mice in the dose range of 250–1100 mg / kg, and to rats in the range of 480–2315 mg / kg. ⁇ . It was established that the LDs values of the claimed polymer compounds
  • DMAAM for mice are in the range from 445 to 806 mg / kg, and for rats in the range from 647 to 1180 mg / kg, depending on the qualitative and quantitative composition of the polymer salts.
  • the proposed tools meet all the requirements for the invention - they are new, not obvious to a specialist (have an inventive step) and are industrially applicable.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

5 Иммуностимулирующее и интерфероногенное средство
Область техники.
Изобретение относится к области биологии и медицины, к созданию ю новых биологически активных веществ и предназначено для использования в качестве иммуностмулирующих и интерфероногенных средств в лечебных, профилактических и исследовательских целях.
Уровень техники.
15
Известны многие иммуностимулирующие и интерфероногенные средства, описанные, как в справочных изданиях (см., например, М.Д.Машковский «Лeкapcтвeнныe средства, M. «Hoвaя вoлнa», 2002 г.; Ю.Ф.Крылов ((Энциклопедия лекарств/регистр лекарственных средств
20 Poccии», M., 2000 г), так и в специальной литературе. Наиболее известные из этих средств - Ларифан, Ридостин, Кагоцел, Рогаксин, Гозалидон, Саврац, Мегасин, Амиксин, Циклоферон, Неовир, Амплиген, Полудан, Полигуацил. Из препаратов предложенных в последнее время следует отметить Полирем - противовирусное средство, который обладает
25 интерфероногенными свойствами и способностью усиливать цитотоксическую функцию лимфоцитов (натуральных киллеров).
Многие из них широко и эффективно используются в медицинской практике, например, Ликопид и Циклоферон успешно применяются при терапии широкого спектра вирусных инфекций. При этом, как и все зо лекарственные средства, иммуностимулирующие и интерфероногенные средства помимо лечебного эффекта оказывают различные по силе, направленности и длительности побочные действия. Кроме того, длительный прием одного и того же средства ведет к привыканию организма, эффективность его действия со временем заметно снижается.
Поэтому происходит постоянный поиск новых средств, более эффективных, менее токсичных, имеющих более длительное и направленное действие и меньшие побочные последствия. Поиск 5 проводится среди различных классов природных и синтетических соединений и, в том числе, в ряду производных адамантана
Известен препарат «мeмaнтин», представляющий собой гидрохлорид
3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaминa и рекомендуемый при болезни Паркинсона
(М.Д.Машковский «Лeкapcтвeнныe средства*, в 2-х т.. «Hoвaя вoлнa», Ю 2002, T.1. C.143).
Препарат «мидaнтaн» ( гидрохлорид 1-aдaмaнтилaминa) применяют для лечения паркинсонизма. Кроме того, он проявляет противовирусное действие в отношении вируса гриппа типа А (там же, T.1, С.142).
Гидрохлорид α-мeтил-α-(1-aдaмaнтил)мeтилaминa, являющийся 15 субстанцией препарата «peмaнтaдин», эффективен в отношении вируса гриппа типа А, (там же, T.2, С.325), но сведения об его активности для лечения паркинсонизма отсутствуют.
Приведенный краткий обзор биологических свойств аминопроизводных адамантана показывает, что даже неглубокое 20 структурное изменение этих гомологов и изомеров приводит к весьма существенным и неоднозначным, заранее неочевидным для специалиста изменениям в их свойствах.
Перечисленные средства достаточно эффективны по указанным направлениям применения, но быстро выводятся из организма. Это 25 требует частого их приема или увеличения дозы, что вызывает нежелательные побочные эффекты, интоксикацию организма (там же,
C.142, 143, 325).
Известно также, что эффективность терапевтического действия физиологически активного вещества в результате его присоединения к зо полимеру может существенно изменяться. Получение полимерной структуры физиологически активного вещества может приводить как к приобретению новых свойств, усилению имеющихся свойств, так и к потере физиологической активности. Так, антибактериальная активность продукта взаимодействия канамицина с диальдеrиддексτраном, в котором антибиотик присоединен ковалентной связью, близка к активности исходного канамицина. В то же время присоединение к диальдегиддекстрану ампициллина сопровождается значительным (в 10 - 5 15 раз) снижением активности антибиотика. Различная степень снижения активности антибиотиков канамицина и ампициллина при присоединении к диальдегиддекстрану зависит от влияния структуры полимерной молекулы на гидролитическую устойчивость связи даже одного типа (Снежко В. А. и др. - Антибиотики, 1972, T. 17, N°1 , C.48-52). ю В ряде случаев полимерные аналоги могут утрачивать биологические свойства, характерные для низкомолекулярных структур. Так, например, хорошо известен своей противосиликозной активностью поли — 2 - винилпиридин - N - оксид и некоторые другие N-окиси, в то же время полимеры, содержащие N - оксидную группировку, экранированную
15 алкильным радикалом, не обладают такой активностью (Разводовский Е.Ф. в сб. Успехи химии и физики полимеров, M.:.Xимия,1973, С.305).
Как показывает анализ известных разработок, частично перечисленных ниже, поиск и исследование новых полимерных соединений в ряду аминопроизводных адамантана перспективен для существенного
20 усиления биологических свойств в сравнении с исходным низкомолекулярным аминосоединением, для продления времени его эффективного действия и для расширения спектра биологической активности. Однако, к сожалению, до настоящего времени этот поиск основан не на точном теоретическом анализе, а на интуиции
25 исследователя и многочисленных опытах.
Неожиданной и удачной находкой оказались полимерные соединения адамантиламина (а.с.СССР Ns 523618, Мкл. C08F 8/32, 1975) и полимерные соли α - мeтил-α-(1-aдaмaнтил)мeтилaминa (а. с. СССР NQ 640544, Мкл. C08F 220/04, C08F 8/32, 1978), обладающие зо пролонгированным противовирусным действием в отношении вируса гриппа типа А. В частности, на основе сополимера винилового спирта с N-виниламидоянтарной кислотой и α - мeтил-α-(1-aдaмaнтил)мeтилaминa получена их полимерная соль, представляющая субстанцию препарата «пoлиpeм». У препарата «пoлиpeм» обнаружено не только пролонгированное действие в отношении вируса гриппа А, но и (в отличие от полимерных соединений адамантиламина) противовирусная активность в отношении вирусов герпеса I и Il типов, клещевого энцефалита. Он 5 индуцирует интерферон и оказывает иммуностимулирующее действие. Препарат «пoлиpeм» применяют, в основном, для профилактики и лечения указанных вирусных инфекций (патент РФ Ns 2071323, Mкл.6 A61 К 31/785; A61 K 9/06, 9/20 «Пpoтивoвиpycный препарат «ПOЛИPEM», опубликован 10.01.1997; Ершов Ф.И. Антивирусные препараты, M.: Медицина, 1998, ιо С.141-142)
Этот препарат наиболее близок к заявляемым соединениям по назначению и химическому составу, он выбран в качестве прототипа.
Задача изобретения.
15 Задачей изобретения является создание новых полимерных соединений, обладающих иммуностимулирующим и интерфероногенным действием.
Решение задачи.
20 Поставленная задача решена путем применения в качестве иммуностимулирующего и интерфероногенного средства солей 3,5- димeтил-1-aдaмaнтилaммoния и водорастворимых карбоксилсодержащих (co)пoлимepoв общей формулы
Figure imgf000006_0001
где т и п - мольные %, т = 100 - п , зо а карбоксилсодержащие сополимеры выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота, сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты. 1) Поливиниламиносукциновая кислота (ПВАСК)
Figure imgf000007_0001
10
2) Сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты (BC)m - (BACK)n
Ri — CH2 — CH — ; R2 = - CH2 - CH - п = 1-99,
I 5 лучше 5 - 50
Figure imgf000007_0002
СО - (CH2)2 - 0 3) Сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты (BП)m - (BACK)n
- n = 1- 99, лучше 5 - 50
Figure imgf000007_0003
СО - (CH2)2 -
H2C CH2 0 ВОЗМОЖНОСТЬ получения средних и кислых солей ПВАСК с заявленными свойствами соответствуют значения п = 1-100
В сополимерах (BC)nл - (BACK)n и (BП)m - (BACK)n значения т и п в соответствии с реакционной способностью мономеров и используемым методом получения полимеров могут быть в диапазоне n = 1 - 99 и m = 100 - п.
Эффективный уровень комплекса иммуностимулирующей и интерфероногенной активности достигается при значениях п > 5, а увеличение значений п свыше 50 мало влияет на изменение уровня активности. Поэтому для обеспечения заявляемых свойств полимерных солей необходимо и достаточно использование значения п = 5 - 50.
Предложенные соли впервые заявлены в международной заявке PCT/RUOЗ/00417 от 23 сентября 2003 г, которая будет опубликована в феврале 2005 г. В ней подробно описаны структуры этих солей, их синтез, идентификация, а также - результаты исследования биологических свойств. Авторам удалось выявить в предложенных соединениях только противовирусную активность в отношении вирусов гриппа типа А и типа В. При этом существенным преимуществом этих веществ является их пролонгированное действие, позволяющее применять их для щадящего лечения и профилактики гриппа. В заявке нет никаких предположений о возможном наличии у них иммуностимулирующих и интерфероногенных свойств. Эти свойства никак на связаны с противовирусной активностью и не вытекают явным образом из известного уровня знаний в этой области.
Раскрытие сущности изобретения.
Сущность изобретения поясняеютприведенные далее сведения, а именно:
- общий способ синтеза заявленных солей; - 3 примера синтеза (для каждой из заявленных солей);
- идентификация полученных соединений;
- определение биологических свойств синтезированных солей (иммуностимулирующая активность, интерфероногенная активность и токсичность).
Общий способ синтеза предложенных солей Способ получения полимерных солей 3,5 -диметил -1-aдaмaнтил- аммония заключается во взаимодействии карбоксилсодержащего (co)пoлимepa в водной среде с 3,5 - диметил -1 - адамантиламином при 15-25 C0, при перемешивании в течение 0,5-1 ч и введении эквимольных соотношений реагентов в пересчете на фактическое или заданное содержание карбоксильных групп в (co)пoлимepe с последующим
5 выделением из раствора путем осаждения или с применением одного из видов распылительной или сублимационной сушки.
Общий исходный реагент в синтезе полимерных солей 3,5-димeтил-1- адамантиламин может быть получен и использован как промежуточный продукт в синтезе его гидрохлорида, или может быть выделен из ю товарного гидрохлорида (мемантина) путем обработки 5%-ным водным раствором гидроксида натрия с последующей экстракцией диэтиловым эфиром или хлороформом. Затем эфир (хлороформ) отгоняют, а 3,5- димeтил-1-aдaмaнтилaмин перегоняют в вакууме. Полученный 3,5- димeтил-1-aдaмaнтилaмин не изменяет своей биологической активности и
15 представляет собой бесцветную маслянистую жидкость, нерастворимую в воде, но растворимую в диметилсульфоксиде, а также в концентрированных и разбавленных уксусной и соляной кислотах.
Чистоту полученного 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaминa оценивали по данным элементного анализа и инфракрасной спектроскопии. Результаты
20 элементного анализа C12H21N:
Вычислено, %: C=80,37; H=11 ,80; N=7.81. Найдено, %: C=80,41 ; H=11 ,95; N=7.70.
В качестве второй составляющей - полимерной основы выбраны 25 композиционно однородные (по химическому составу и молекулярной массе) карбоксилсодержащие водорастворимые нетоксичные (co)пoлимepы :
1) поливиниламиносукциновая кислота (ПВАСК),
2) сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой зо кислоты (ВС) m - (BACK)n,
3) сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты (ВП) m - (BACK) п, Перечисленные полимеры можно получить по известной ранее описанной методике (Николаев А.Ф. и др. Журнал прикладной химии, 1970, T. 43, Ns 6, С. 1339 -1343; Николаев А.Ф. и др. Высокомолекулярные соединения, 1972, T. 14A, Ns 11 , С. 2368 -2370).
5 Молекулярная масса используемых полимеров - в пределах 20-80 кДа, число карбоксилсодержащих звеньев в (co)пoлимepax от 1 до 100 мoль%.
Реакцию солеобразования 3,5 - димeтил-1-aдaмaнтилaминa с карбоксилсодержащими полимерами проводят в водной среде при температуре 15-25 C0 при перемешивании в течение 0,5 -1 ч и введении ю эквимольных соотношений реагентов в пересчете на фактическое (или расчетное) содержание карбоксильных групп в (co)пoлимepe с последующим выделением солей из раствора путем осаждения в ацетон, или в метилэтилкетон, или в смесь этилового спирта и диэтилового эфира, или в смесь диэтилового эфира и бензола, или с применением одного из
15 видов распылительной или сублимационной сушки. Полученные соединения представляют собой полимерные соли поликарбоновых кислот и 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaминa (3,5 - димeтил-1- адамантиламмония - (ДМ AAM). Состав и строение полученных солей устанавливали по данным элементного анализа, ИК -спектроскопии,
20 потенциометрического титрования в неводной среде.
Способ синтеза и дальнейшие примеры подробно описаны также в международной заявке PCT/RU03Ю0417 от 23..09.03.
Примеры синтеза заявленных солей.
25
Пример 1. В реактор (колбу) , снабженный мешалкой, загружают 0,858 г поли-N-виниламиносукциновой кислоты (ПВАСК) и 30 см3 дистиллированной воды. После растворения полимера вводят 1 ,074г 3,5- димeтил-1-aдaмaнтилaминa (ДМААМ). Исходное мольное соотношение зо BACK: ДМААМ составляет 1 :1. Реакцию ведут при температуре 15 C0 в течение 1 ч, после чего в реакционную смесь приливают 30 см3 этилового спирта и продукт выделяют осаждением в смесь бензол - диэтиловый эфир (соотношение 1 :3). Осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и сушат при 30-35 C°/6,65 Па. По результатам элементного анализа и потенциометрического титрования содержание ДМААМ в полученной соли 54,32 мacc%, что соответствует содержанию звеньев 3,5 димeтил-1-aдaмaнтил-aммoниeвoй соли виниламиносукциновой кислоты (BACK -ДМААМ) 95% мoль%. Выход продукта (ПВАСК-ДМААМ) составил 89%. Характеристическая вязкость раствора полимерной соли в HCI концентрации с (HCI) 0,1 моль/дм3 при 25
C0 имеет значение .ЗУв
[η] 0,1MHCi = 30 cм3/г.
ю Пример 2 . Процесс проводят, как описано в Примереi, но в колбу загружают 1 ,0 г сополимера винилового спирта с N-виниламиносукциновой кислотой (ВС - BACK) (содержание BACK - 25 мoль%, т.е. 52 мacc%, 0,520 г.), и 20 см3 дистиллированной воды, затем включают мешалку. После полного растворения сополимера загружают 0,650 г 3,5-димeтил-1-
15 адамантиламина (ДМААМ), исходное эквимольное соотношение BACK : ДМААМ составляет 1 :1. Процесс ведут при комнатной (20-25 C0) температуре в течение 0,5 ч до полной гомогенизации водной реакционной среды. Продукт реакции выделяют осаждением из раствора в ацетон, отфильтровывают, промывают ацетоном и диэтиловым эфиром и сушат
20 при 30-35 C0 /6,65 Па. По результатам элементного анализа и потенциометрического титрования содержание ДМААМ в полученной соли - 39,42 мacc%, что соответствует 25 мoль% звеньев BACK - ДМААМ (звеньев 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaммoниeвoй соли N-виниламино- сукциновой кислоты). Выход продукта (ВС -BACK - ДМААМ) - 95%.
25 Характеристическая вязкость раствора полимерной соли в HCI концентрации c(HCI) 0,1 моль/дм3 составляет при 25° С
[T] Jо iмнсι = 14 cм3/г.
Пример 3 - Процесс ведут аналогично Примеру 1 , но в реакционную колбу загружают 0,991 г сополимера N-винилпирролидона с зо N-винил-аминосукциновой кислотой (ВП-ВАСК) с содержанием звеньев BACK 27 мoль% и 50 см3 дистиллированной воды. После растворения полимера вводят 0,4 г ДМААМ. Реакцию проводят при температуре 20 C0 в течение 40 минут. Продукт реакции выделяют лиофильной (сублимационной) сушкой раствора, промывают диэтиловым эфиром и сушат при 30-35 C°/6,65 Па. Полученная полимерная соль содержит 28,75 мacc.% ДМААМ, соответствующее 27 мoль% звеньев солевых ВАСК-ДМААМ в сополимере ВП -ВАСК-ДМААМ. Выход продукта - 93%. Величина характеристической вязкости раствора в HCI концентрации c(HCI) 0,1 моль/дм3 составляет при 25° С
.-:> ю [T|J o,iмнcι = 16 cм3/г.
Все полученные полимерные соли 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaммoния представляют собой белые аморфные порошки, растворимые в воде, в разбавленной уксусной и соляной кислотах, в диметилсульфоксиде. 15 Они практически нерастворимы в 95%-этилoвoм спирте, в диэтиловом эфире. Значения характеристической вязкости растворов полимерных солей в водном растворе HCI с концентрацией C(HCI) = 0,1 моль/дм3 при 25 C0 находятся в диапазоне 10-30 cм3/г.
20 Идентификация полученных соединений.
В ИК-спектрах сухих полимерных соединений, составляющих предмет изобретения, наблюдаются полосы поглощения при 1560 - 1610 см"1, соответствующие валентным колебаниям связи C-O ионизированной
25 группы -COO " при образовании солевой связи, обнаруживаются полосы поглощения при 800 см"1, характеризующие наличие N+ H3 групп аммонийной соли, и отсутствует (или снижена интенсивность относительно исходного полимера) полоса поглощения при 1720 см"1, соответствующая неионизированным -COOH группам в полимере. зо В ИК-спектре полученных солей имеются также полосы поглощения при 1350 см"1 и 1000 см "1, характерные для адамантановой структуры. Определение биологических свойств предложенных соединений.
Иммуностимулирующая активность. Определение действия предложенных соединений на функциональную активность 5 иммунокомпетентных клеток человека.
Иммунокомпетентные клетки - естественные киллеры (ЕК-клетки) относятся к системе естественной резистентности организма человека. Определение состояния данного звена иммунной системы дает важную ю информацию о состоянии иммунного статуса организма. Для оценки состояния данного звена иммунной системы в зависимости от присутствия исследуемых соединений использовали функциональный тест- определение способности ЕК-клеток лизировать клетки-мишени культуры опухолевых миелобластов K-562, идентификацию которых проводили с
15 помощью флуоресцентной метки. Активность ЕК-клеток определяли в соответствии с количеством «yбитыx» ими клеток-мишеней K-562, оцениваемым по интенсивности флуоресцентного свечения в характерной для убитых клеток области и по отношению к результату в контроле (т.е. в отсутствие ЕК-клеток).
20 Уровень воздействия исследуемых препаратов на активность ЕК- клеток оценивали по величине отношения активности ЕК-клеток, обработанных препаратами, к активности необработанных ЕК-клеток в процессе лизиса клеток-мишеней тест-культуры линии K-562. Для выбора доз и концентраций препаратов при изучении их активности
25 была предварительно определена их минимальная токсическая доза в отношении клеток-мишеней и мононуклеаров периферической крови. Эта доза не превышала 50 мкг/мл (в пересчете на ДМААМ).
В результате исследований обнаружено, что при исходной низкой функциональной активности иммунокомпетентных клеток естественных зо киллеров (ЕК-клеток) мононуклеаров периферической крови применение предложенных солей 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaммoния приводит к ее (функциональной активности) увеличению (Таблица 1). Это характеризует существенное иммуностимулирующее действие предложенных веществ Причем иммуностимулирующее действие в большей степени проявляется у полимерных соединений (ПВАСК-ДМААМ, BC-BAC К-Д MAAM, ВП-ВАСК- ДМААМ), и с увеличением концентрации препаратов усиливается их стимулирующее влияние на активность ЕК-клеток. Таблица 1 Изменение активности ЕК-клеток в присутствии соединений 3,5-димeтил-1 -адамантиламина.
Figure imgf000014_0001
Интерферониндуцирующая активность предложенных соединений.
Способность к индукции интерферона характеризует один из уровней защитного действия организма. Индукция интерферона клетками при воздействии на них какими-либо препаратами характеризует интерферониндуцирующую активность препаратов.
Для определения интерфероногенного действия препаратов заявленных соединений исследовали их действие в условиях iп vitго в отношении клеток естественных киллеров (ЕК-клеток) периферической крови человека (доноров) при их спонтанной и индуцированной интерфероногенной активности.
Максимальная концентрация соединений использована 50 мкг/мл (в пересчете на ДМААМ), что соответствует минимальной токсической дозе препаратов для мононуклеаров периферической крови и тест-культуры.
Интерферониндуцирующая активность препаратов (Таблица 2) выражена в международных единицах (ME) противовирусной активности интерферона в отношении вируса везикулярного стоматита. Её опре- деляли по калибровке стандартной активности тест-интерферона ИФН-α Таблица 2. Инτерферониндуцирующая активность мононуклеаров периферической крови (ЕК-клеток) в зависимости от присутствия соединений ДМААМ
Figure imgf000015_0001
Результаты определений, представленные в Таблице 2, показывают, что предложенные соединения обладают достаточно эффективным уровнем индукции интерферона мононуклеарами периферической крови . При этом интерферониндуцирующая активность предложенных полимерных соединений ПВАСК-ДМААМ, ВС-ВАСК-ДМААМ, ВП-ВАСК- ДМААМ в 1 ,5-1 ,6 раза превосходит активность низкомолекулярного гидрохлорида ГХ-ДМААМ.
Важно отметить, что полимерные соединения ДМААМ имеют большую интерфероногенную активность, чем ПОЛИРЕМ (прототип), испытанный в тех же условиях для сравнения.
Таким образом, предложенные полимерные соединения обладают заметным иммуностимулирующим и интерфероногенным действием. Они перспективны для коррекции активности иммунокомпетентных клеток мононуклеаров периферической крови - естественных киллеров и интерферониндуцирующей активности мононуклеаров крови, то есть для повышения уровня функциональной активности иммунной системы человека. Определение токсических свойств соединений.
Уровень токсичности заявленных соединений оценивали по общепринятому показателю острой токсичности - среднесмертельной 5 (среднелетальной) дозы препарата ЛД5o- Изучение проведено при однократном пероральном введении белым мышам обоего пола линии «Balb» массой 18-20 г и белым крысам линии «Bиcтap» массой 130 - 250 г (самки) и 225-370 г (самцы). Препараты вводили мышам в диапазоне доз 250 - 1100 мг/кг, а крысам в диапазоне 480 - 2315 мг/кг. ιо Установлено, что значения ЛДsо заявленных полимерных соединений
ДМААМ для мышей находятся в диапазоне от 445 до 806 мг/кг, а для крыс в диапазоне от 647 до 1180 мг/кг в зависимости от качественного и количественного состава полимерных солей.
Эти результаты показали, что заявленные полимерные соли 15 обладают меньшей токсичностью по сравнению с мемантином (ЛД5o для мышей 363 мг/кг) при введении животным препаратов с эквимольной дозой содержания в них 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaминa.
Предложенные соли в соответствии с установленными для мышей и крыс показателями токсичности относятся к малотоксичным соединениям
20
Промышленная применимость.
Приведенные в разделах «pacкpытиe сущности изобретения* и определение биологических свойств предложенных coлeй» сведения
25 доказывают, что синтез заявленных солей вполне осуществим описанными в заявке средствами. Полученные соединения однозначно идентифицируются методами ИК-спектроскопии, элементного анализа и потенциометрического титрования. Предложенные соединения имеют высокую иммуностимулирующую и интерфероногенную активность. Эта зо активность заметно выше, чем у прототипа - полирема.
В процессе сравнительных исследований авторами впервые выявлена некоторая иммуностимулирующая и интерфероногенная активность низкомолекулярного соединения из предложенных соединений - гидрохлорида 3,5-димeτил - 1 - адамантиламина, которая значительно ниже активности предложенных полимеров.
Таким образом предложенные средства соответствуют всем требованиям, предъявляемым к изобретению - они новы, неочевидны для специалиста (имеют изобретательский уровень) и промышленно применимы.

Claims

Формула изобретения.
1. Применение полимерных солей 3,5-димeтил-1-aдaмaнтилaммoния и водорастворимых карбоксилсодержащих (co)пoлимepoв общей формулы
Figure imgf000018_0001
ιо где т и п - мoльныe%, т = 100 - п, а карбоксилсодержащие (co)пoлимepы выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота, сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты, 15 в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств
2. Применение по п.1 , отличающееся тем, что в качестве карбоксилсодержащего полимера выбрана поливиниламиносукциновая кислота (ПВАСК), где п = 1 - 100 мoль%, лучше п = 5 - 100 мoль%, 0
3. Применение по п.1 , отличающееся тем, что в качестве карбоксилсодержащего полимера выбран сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты (BC)m - (BACK)n, где п = 1-99 мoль%, лучше п = 5 - 50 мoль%, 5
4. Применение по п.1 , отличающееся тем, что в качестве карбоксилсодержащего полимера выбран сополимер N-винил- пирролидона, и N-виниламиносукциновой кислоты (BП)m - (BACK)n, где п = 1 - 99 мoль%, лучше п = 5 - 50 мoль%, 0
5. Лекарственное средство, отличающееся тем, что в качестве иммуностимулирующего и интерфероногенного вещества использовано соединение по. любому из пп. 1 - 4
PCT/RU2004/000242 2004-06-24 2004-06-24 Agent immunostimulateur et interférogène WO2006011823A1 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAA200604494A UA79908C2 (en) 2004-06-24 2004-06-24 Application of polymeric salts 3,5-dimethyl-1-adamantilammonium as immunostimulative and interferonogenous agent
PCT/RU2004/000242 WO2006011823A1 (fr) 2004-06-24 2004-06-24 Agent immunostimulateur et interférogène
EP04808945A EP1759703A4 (en) 2004-06-24 2004-06-24 IMMUNOSTIMULATING AGENT AND INTERF ROGEN
EA200600428A EA200600428A1 (ru) 2004-06-24 2004-06-24 Иммуностимулирующее и интерфероногенное средство

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2004/000242 WO2006011823A1 (fr) 2004-06-24 2004-06-24 Agent immunostimulateur et interférogène

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006011823A1 true WO2006011823A1 (fr) 2006-02-02

Family

ID=35786482

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2004/000242 WO2006011823A1 (fr) 2004-06-24 2004-06-24 Agent immunostimulateur et interférogène

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP1759703A4 (ru)
EA (1) EA200600428A1 (ru)
UA (1) UA79908C2 (ru)
WO (1) WO2006011823A1 (ru)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4014672A1 (de) * 1990-05-08 1991-11-14 Werner E G Prof Dr Mueller Verwendung von adamantan-derivaten zur zytoprotektion von nicht-infizierten und virus-infizierten lymphozyten als auch anderen zelltypen
RU2071323C1 (ru) * 1994-09-30 1997-01-10 Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет) Противовирусный препарат "полирем"
RU99113462A (ru) * 1996-12-23 2001-05-20 Корнинг Инкорпорейтед 2-адамантилбензопираны, составы и (со)полимерные матрицы, их содержащие
RU2185822C2 (ru) * 2000-08-01 2002-07-27 Общество с ограниченной ответственностью "Фармаген" Препарат для лечения и профилактики вирусных заболеваний
US6613507B1 (en) * 2000-03-21 2003-09-02 Yu-an Chang Boraadamantane compounds for the treatment of pathogenic viruses and other medical applications
RU2219916C2 (ru) * 1995-08-25 2003-12-27 Мерц Фарма Гмбх Унд Ко. Кгаа Применение производных аминоадамантана в качестве иммунорегуляторов

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA200600427A1 (ru) * 2003-09-23 2006-12-29 Акционерное Общество "Олайнфарм" Полимерные соли 3,5-диметил-1-адамантиламмония и их применение в качестве противовирусных средств

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4014672A1 (de) * 1990-05-08 1991-11-14 Werner E G Prof Dr Mueller Verwendung von adamantan-derivaten zur zytoprotektion von nicht-infizierten und virus-infizierten lymphozyten als auch anderen zelltypen
RU2071323C1 (ru) * 1994-09-30 1997-01-10 Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет) Противовирусный препарат "полирем"
RU2219916C2 (ru) * 1995-08-25 2003-12-27 Мерц Фарма Гмбх Унд Ко. Кгаа Применение производных аминоадамантана в качестве иммунорегуляторов
RU99113462A (ru) * 1996-12-23 2001-05-20 Корнинг Инкорпорейтед 2-адамантилбензопираны, составы и (со)полимерные матрицы, их содержащие
US6613507B1 (en) * 2000-03-21 2003-09-02 Yu-an Chang Boraadamantane compounds for the treatment of pathogenic viruses and other medical applications
RU2185822C2 (ru) * 2000-08-01 2002-07-27 Общество с ограниченной ответственностью "Фармаген" Препарат для лечения и профилактики вирусных заболеваний

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE MEDLINE [online] KOZCLETSKAIA K.N. ET AL: "Structure and antiviral activity adamantane-containing", XP003016314, Database accession no. (NLM14598476) *
See also references of EP1759703A4 *
VOPR VIRUSOL, vol. 48, no. 5, September 2003 (2003-09-01), pages 19 - 26 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP1759703A1 (en) 2007-03-07
UA79908C2 (en) 2007-07-25
EA200600428A1 (ru) 2007-04-27
EP1759703A4 (en) 2007-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7569559B2 (en) Nitric oxide-releasing molecules
DE69534974T2 (de) Arzneizusammensetzung enthaltend stickstoffoxydfreisetzende polysaccharide
JPH07252193A (ja) 抗腫瘍性、抗ウイルス性、抗レトロウイルス性および殺虫性スペルミン誘導体
US10485824B2 (en) Cationic polyamines for treatment of viruses
EP0459632A1 (en) Composition and method for controlling cholesterol
CN100494223C (zh) 季胺盐改性的壳聚糖亲核no供体的合成方法
WO2009145594A2 (ko) 약물전달체
CN101829338A (zh) 基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药及其制备方法
WO2006011823A1 (fr) Agent immunostimulateur et interférogène
DE10065710A1 (de) Arzneimittel enthaltend ein Polyamin als Wirksubstanz
EP0616813B1 (en) Antitumor mitoxantrone polymeric compositions
Eropkin et al. Synthesis and biological activity of water-soluble polymer complexes of arbidol
JPS6330886B2 (ru)
EP1669379B1 (en) 3,5-dimethyl-1-adamantyl-ammonium polymeric salts and the use thereof in the form of antiviral agents
Puzyrkov et al. Polymer-analogous transformations of poly (N-vinylpyrrolidone) to produce new complexing macromolecular systems
RU2608304C1 (ru) Амфифильные полимерные металлокомплексы и способ их получения
EP2207819B1 (en) Anti-microbial polymers and their compositions
RU2015993C1 (ru) Сополимер 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона, обладающий противоопухолевой активностью
RU2394618C2 (ru) Водорастворимые полимерные комплексы арбидола
US10351644B2 (en) Antiviral drug
WO2002032974A2 (en) Polymer and its use for the treatment and/or prevention of hyperphosphoremia
RU2172632C1 (ru) Способ получения иммунотропного противовирусного препарата
EP3928798A1 (en) Polymer-cargo-complexes comprising cross-linked copolymers and cargo molecules
RU2533113C1 (ru) Сополимеры на основе n-винилпирролидона в форме фармацевтически приемлемых солей кислот
WO2022023435A1 (en) Sulfated and sulfonated dendritic polyglycerols and use thereof as broad-spectrum virucidal agents

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2004808945

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200600428

Country of ref document: EA

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2004808945

Country of ref document: EP