WO2005093430A1

WO2005093430A1 - 蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法、アミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法、アミロイド関連疾患の治療薬又は診断薬を探索する方法

Info

Publication number: WO2005093430A1
Application number: PCT/JP2005/005410
Authority: WO
Inventors: Masayoshi Tachibana; Hiromi Nonaka; Hiroshi Kase
Original assignee: Fuence Co., Ltd.
Priority date: 2004-03-25
Filing date: 2005-03-24
Publication date: 2005-10-06
Also published as: CA2561246A1; EP1729132A1; JPWO2005093430A1; US20080003691A1; EP1729132A4

Abstract

　力センサーを用いて、アミロイド蛋白質の凝集の過程を張力及び／又は弾性の変化としてリアルタイムに検出測定するための手段を提供するために検討を行ったところ、本発明により、メカノケミカル式センサーを用いて蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法が提供された。更に本発明により、当該方法を用いてアミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法、ならびにアミロイド関連疾患の治療薬または診断薬をスクリーニングする方法が提供された。本発明の方法は、新規なアミロイド病の治療薬・診断薬を得る目的に資するものであると考えられる。

Description

明細書

蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法、アミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法、アミロイド関連疾患の治療薬又は診断薬を探索する方法

技術分野

[0001] 本発明は、メカノケミカル式センサーを用いて蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法に関する。更に本発明は、メカノケミカル式センサーを用いて蛋白質のァミロイド性の構造変化を検出することにより、アミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法、ならびにアミロイド関連疾患の治療薬または診断薬を探索する方法に関する。

背景技術

[0002] アルッノ、イマ一病や免疫細胞性アミロイド一シス、反応性アミロイド一シス、家族性アミロイド一シスなどを含むアミロイド関連疾患は、蛋白質の誤った折りたたみ構造に起因する疾患である。アルッノ、イマ一病の進行を一時的に遅らせる薬剤はある力これらのアミロイド関連の疾患は難治性であることが多い。現在ヒトにおいて、約 20の蛋白質が誤った折りたたみ構造力アミロイド線維を形成することが知られているが、それらの約 20の蛋白質は互ヽに相同性を有しな!/ヽ蛋白質である。

[0003] 上記の構造を有するアミロイドは繊維状蛋白質であり、アミロイド繊維はある病的な条件下で血管や他の組織に枕積することにより機能障害を引き起こす。アミロイド繊維は、数千の非共有結合で結合した蛋白質あるいはペプチドから構成される、層状の /3シート構造を有している。このアミロイド性の構造変化を阻害することで、アミロイド蛋白質の不安定性を増加することにより、疾患を抑制することができる可能性が示唆されている（P. Hammarstromら、 Science, 2001, 293, 2459)。以上のように、アミロイド蛋白質の構造変化を検出することは重要であり、アミロイド性の構造変化を抑制する化合物を探索することによりアミロイド関連疾患の治療薬が見つ力る可能性がある。

[0004] アミロイド蛋白質の凝集の活性評価およびスクリーニングは、従来から濁度の測定（ J. Jarrettら、 Biochemistry, 1993, 32, 4693)、チオフラビン T結合部位の測定（H. Naikiら、 Lab. Invest., 1991, 65, 104、 H. LeVine, Protein Sci., 1993, 2, 404)、コンゴレッド染色（E. M. Castanoら、 Biochem. Biophys. Res. Commun" 1986, 141, 782)、蛍光法（T.H.J. Huangら、 J. Mol. Biol, 1997, 269, 214)、ラマンスペクトルによる散乱光の測定（T. Miuraら、 Biochemistry, 2000, 39, 7024)、 NMRあるいは電子顕微鏡での観察法（X. Wuら、第 224回 ACS National meeting and Exposition, 2002、 C. Soto ら、 J. Biol.Chem., 1995, 270, 3063)などの手段により行われてきた。

[0005] これらの方法においては、通常数時間から一週間ほど力 4ナて蛋白質の凝集を作製して検出しているので、評価に時間が力かるという問題がある。従って、短時間でアミロイド蛋白質の凝集を検出できるセンサーを用いれば、活性を効率的に評価することができる。

[0006] またこれらの方法は、凝集した結果を観察および測定すると、う手法であるために、凝集の過程を、張力及び Z又は弾性の変化を指標として力センサーなどを用いてリアルタイムに測定可能な手段はな、。

発明の開示

[0007] そこで本発明の課題は、力センサーを用いて、アミロイド蛋白質の凝集の過程を張力及び Z又は弾性の変化としてリアルタイムに検出測定するための手段を提供することである。それによつてアミロイド蛋白質の凝集に伴う構造変化を、簡便かつ短時間で検出することが可能となる。

[0008] 本発明者らは、アミロイド蛋白質カゝらなる試料膜に披検物質を添加したときに生じるアミロイド性の構造変化を、試料膜の張力及び Z又は弾性変化により検出できることを見出すことにより本発明を完成するに至った。本発明の方法は、多数の物質の中から、効率よくアミロイド蛋白質の構造変化に影響を与える活性をもつ物質を探索するのに有効であると考えられる。

[0009] よって本発明は、アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質、前記蛋白質の断片、前記蛋白質の変異体、タグ化した前記蛋白質、又は前記蛋白質に対する抗体蛋白質よりなる試料膜を基板上に形成し、当該試料膜を有する当該基板を力センサーに配置し、披検サンプルを当該試料膜に作用させた際の当該試料膜の張力及び Z又は弾性の変化を当該力センサーにより検出することからなる、蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法を提供するものである。

[0010] 更に本発明は、アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質、前記蛋白質の断片、前記蛋白質の変異体、タグ化した前記蛋白質、又は前記蛋白質に対する抗体蛋白質よりなる試料膜を基板上に形成し、当該試料膜を有する当該基板を力センサーに配置し

、披検サンプルを当該試料膜に作用させた際の当該試料膜の張力及び Z又は弾性の変化を当該力センサーにより検出することからなる、アミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法を提供するものである。

[0011] 更に本発明は、アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質、前記蛋白質の断片、前記蛋白質の変異体、タグ化した前記蛋白質、又は前記蛋白質に対する抗体蛋白質よりなる試料膜を基板上に形成し、当該試料膜を有する当該基板を力センサーに配置し

、披検サンプルを当該試料膜に作用させた際の当該試料膜の張力及び Z又は弾性の変化を当該力センサーにより検出することからなる、アミロイド関連疾患の治療薬又は診断薬を探索する方法を提供するものである。

[0012] 本発明により、メカノケミカル式センサーを用いて蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法、当該方法を用いてアミロイド関連疾患の治療薬または診断薬をスクリー-ングする方法、ならびにアミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法が提供された。本発明の方法は、新規なアミロイド病の治療薬' 診断薬を得る目的に資するものであると考えられる。

図面の簡単な説明

[0013] [図 1]図 1は、アミロイド β (1-42)の張力及び弾性変化に対する ZnClおよび EDTAの

2

効果を示した図である。

[図 2]図 2は、アミロイド |8 (1— 42)の張力及び弾性変化に対する ZnClの濃度依存性

2

を示した図である。

[図 3]図 3は、アミロイド |8 (1— 42)の張力及び弾性変化に対する CuClおよび EDTAの

2

効果を示した図である。

[図 4]図 4は、 α -シヌクレインの張力および弾性変化に対する ZnClの濃度依存性を

2

示した図である。

発明を実施するための最良の形態 [0014] 従来はアミロイド蛋白質の凝集を作成することによりアミロイド蛋白質の凝集活性を検出していたが、従来の方法は手間と時間を多く必要とするものであった。本発明は力センサーを使用することにより、簡便かつリアルタイムにアミロイド蛋白質の構造変化を検出することを可能としたものである。

[0015] 本願明細書において、「アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質」とは、特異な層状の βシート構造からなるアミロイド繊維を形成するような構造変化起こす蛋白質を意味するものであり、力かる蛋白質はアミロイド関連疾患の原因となる。アミロイド性の構造変化を起こすことが知られている蛋白質の例として、これらに限定するものではないが、アミロイド j8蛋白質、免疫グロブリン軽鎖蛋白質、アミロイド A蛋白質、トランスサィレチン蛋白質、リソザィム、 BriL蛋白質、シスタチン C蛋白質、スクレイピー蛋白質、 j8 2ミクログロブリン、アポリポプロテイン Al、ゲルゾリン、ランゲルハンス島アミロイド蛋白質、フイブリノ一ゲン、プロラタチン、インシュリン、カルシトニン、心房性ナトリウムぺプチド、 α—シヌクリン、プリオン蛋白質、ハンチンチン蛋白質、スーパーオキサイドジスムターゼ、 α ΐ—アンチキモトリプシ及びタウ蛋白質などを挙げることができる。この中でもアミロイド β蛋白質は、アミロイド性の構造変化を起こす代表的な蛋白質として良く知られている。

[0016] そして力かる蛋白質のアミロイド性の構造変化を、該蛋白質力なる試料膜の機械的特性の変化により検出する点に本発明の最も顕著な特徴がある。本発明において試料膜の機械的特性の変化を、張力のみ、弾力のみあるいは張力と弾力の両者を指標として測定する態様が可能であるが、本発明は上記の特定の態様に限定されるものではない。

[0017] 本発明においてはまず、アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質力なる試料膜を基板上に形成する。形成される試料膜の大きさは、好ましくは、縦は 50 mから 1000 μ m、横は 200 μ mから 2000 μ m、厚さは 0.3 μ mから 10 μ mの範囲内であるが、その範囲内に特に限定されるものではない。また本発明における基板とは、その上に試料膜が作製されることによって試料膜を測定装置に移動することを可能とする適切な膜の支持体であり、該基板の材料や大きさは特に限定されるものではな、。

[0018] なおアミロイド性の構造変化を起こす蛋白質のみならず、該蛋白質の断片や変異体蛋白質も、アミロイド性の構造変化を起こす活性を維持している限り使用することができる。また検出の便宜のために該蛋白質はタグを付した物でも良い。更に該蛋白質に対する抗体蛋白質から膜を形成しても良ぐ形成した抗体蛋白質からなる膜に該蛋白質を結合させたものを用いても、同様の効果を得ることができる。

[0019] 力かる蛋白質の試料膜を作製する方法としては、エレクトロスプレー (静電噴霧）により試料を堆積させて薄膜を形成させる ESD法や、溶液を乾燥させることにより膜を形成させる乾燥法などを挙げることができる。力かる技術は当業者にとって周知のものであり、適宜改変して本発明の目的に使用することができる。そのような技術を開示した文献の一例として、特表 2002-511792号公報に記載されている、巨大生体分子を含む不揮発性物質の堆積物を、静電噴霧によって製造する方法を挙げることができる。

[0020] また特開 2003— 136005号公報には、生体高分子などの活性を保持したまま固定して薄膜やスポットを作製するための装置が記載されている。更に特表 2002-5033 32号公報には、プロテインや DNAと結合するリガンドを測定するための方法及び装置が記載されて、る。特表 2002— 503332号公報に記載されて、る装置によると、生体高分子などから構成された試料膜に対する化学物質の作用を機械化学的 (メカノケミカル的）に測定することが可能である。よって、特表 2002— 503332号公報に記載されている装置により、試料膜の張力及び Z又は弾性の変化を検出することは、本発明において好ましい態様である。

[0021] なお、蛋白質とリガンドの相互作用を測定するために、蛋白質膜の弾力特性を測定するメカノケミカル的な方法は、 V.N,Morozov and T Ya Morozova (1992)

Anal.Biochem., 201:68— 79及び V.N'Morozov and T Ya Morozova (1984) FEBS Letters, 175:299-302に記載されており、当業者はこれらの文献の記載を参考にして適宜改変を行い、本発明を実施することができる。

[0022] また上記基板と試料膜との間に水溶性ポリマーからなる中間層を設けることは本発明にお、て好ま、態様である。下記の実施例にお!ヽては 1.2%ポリビニルピロリドン（ PVP)をこのような中間層として用いている。力かる中間層を設けることにより、基板から試料膜を取り外すことが容易となる。中間層として PVPを用いる場合には、 PVPの濃度は 0.1%力 5%、好ましくは 0.3%力 2%の範囲内である力 PVPの濃度は特に限定されるものではない。また、他の水溶性ポリマーを使用することも可能である。

[0023] なおこの中間層として使用することができる材料の例として、特表 2002— 503332 号公報に記載されているように、（1)ポリアクリルアミド又はポリエチレングリコールのような水溶性のポリマーの層、（2)メルカプトエタノールにより還元される二硫ィ匕物のボンドを有するポリマー力成る層、（3)堆積される生物学的分子に対する接着性が低ぐ炭素を相当に分散させた層、および (4)低融点のカーボンポリマーの導電性の組成の層、を挙げることができる。

[0024] その後上記試料膜を構成する蛋白質を架橋することにより該蛋白質を固定化することができ、力かる架橋を行うことは試料膜の膜としての形態や強度を保つ目的においても有効である。生物学的分子を重合するために利用できる架橋試薬は当業者に良く知られており、例えば、 Hermanson et al, Immobilized Affinity Ligand

Techniques Academic Press, New York, 1991を参照することができる。

[0025] 蛋白質を架橋するために使用する試薬としては、下記の実施例で使用しているグルタルアルデヒドは最も好適である。その他に、 1ーェチルー 3—（ 3—ジメチルァミノ）ピ口ピルカルボジイミド（EDC)などのゼロ長架橋試薬、ジメチルアジピンイミデート（ DMA)などのホモ二価性架橋試薬、スクシンィミジル 3—（2—ピリジルジチォ）プロピオネート（SPDP)などのへテロ二価性架橋試薬、 4-アジドー 2—-トロフエ-ルビオシチン -4--トロフエ-ルエステルなどの三価性架橋試薬を挙げることができる力それらに限定されるものではない。また架橋反応を行う時間も特に限定されるものではなぐ下記の実施例のダルタルアルデヒドの架橋時間は 5分間である力 0から 3時間程度の範囲内で最適の条件を適宜選択することができる。

[0026] その様にして作製した試料膜を、例えば特表 2002— 503332号公報記載の検出装置に配置し、適切な緩衝液中に浸すことにより、試料膜に披験サンプルを作用させる準備を行う。ここで使用する緩衝液としては、本技術分野で一般的に使用されて V、る Hepes緩衝液や Tris緩衝液などを使用することができる力それらに限定されるものではない。緩衝液の pHも特に限定されるものではなぐ pH3から pH9程度の範囲内で適切な _PHを適宜選択することができる。 [0027] また上記緩衝液は適切な塩強度を有することも可能であり、下記の実施例のように 0.15M程度の塩ィ匕ナトリウムを緩衝液に添加することは本発明にお、て好ま U、態様である。しかし塩強度を与えるための電解質を添加しな、で測定を行うことも可能であると考えられ、カゝかる態様も本発明の範囲内である。また添加する電解質も塩化ナトリウムに限定されるものではない。

[0028] 上記の緩衝液を一定流速で流して試料膜の張力を安定化させた後に、試験を行う対象である披験サンプルを含む緩衝液に置換して試料膜に作用させる。披験サンプル添加前と後における試料膜の張力及び Z又は弾性変化を力センサーにより測定し、アミロイド蛋白質の構造変化への影響を評価する。張力及び z又は弾性の変化は力センサーにより、好ましくはメカノケミカル式センサーにより測定することが可能である。なおメカノケミカル式センサーによる測定を、特表 2002-503332号公報に記載されて!、る装置を用いて行うことは、本発明にお、て特に好ま U、態様である。

[0029] なお蛋白質のアミロイド性の構造変化に対する影響を検討するための披験サンプルとして、種々の物質を採用することができる。その様な披験サンプルとなる物質の例として、蛋白質、ペプチド、アミノ酸、糖、脂質、核酸、金属及び有機化合物などを挙げることができる力それらに特に限定されるものではない。

[0030] 本発明の方法により、アミロイド蛋白質の張力及び Z又は弾性変化を、速やかに且つリアルタイムで検出することができる。よって、多くのサンプルにおけるアミロイド性の構造変化を効率的に評価できるために、アミロイド性の構造変化を阻害する物質の探索に費やす時間を大幅に短縮することができ、容易に多数の物質の中からかかる活性を有する物質を選別することができる。またアミロイド性の構造変化を阻害する物質は、アミロイド病に対する治療薬又は診断薬の良い候補と成り得る。具体的には、アミロイド性の構造変化を阻害する物質が得られたならば、更に安全性の検討などを行い、新規なアミロイド病に対する治療薬を開発することが可能であると考えられる実施例

[0031] 下記の実施例や図面を用いて本発明を更に詳しく説明するが、その記載は本発明の範囲を何ら限定するものではな、。 [0032] 実施例 1:アミロイド βの張力及び弾件栾化に針する ZnClの効果

2

アミロイド (1-42) (Bachem AG, Bubendorf, Switzerland)を 0.1%アンモニア水に 1 mg/mLの濃度で溶解し、その溶液を特表 2002-511792号公報に記載された静電噴霧を行う装置、あるいは特開 2003-136005号公報に記載された固定化装置を用いて乾燥空気中で噴霧し、縦 400 m横 800 mの孔をもつマスクを透過させ、静電噴霧法（ESD法）により厚さ 1 μ mの膜を 1.2%ポリビュルピロリドン上に作成し、ダルタルァルデヒドで蛋白質の架橋を行った。

[0033] この膜を、メカノケミカル式センサーを有する特表 2002-503332号公報あるいは米国特許 US6033913号公報に記載されている装置上に配置し、 0.15 M NaClを含む 10 mM Hepes pH7.4緩衝液 (以下、緩衝液と略す）中に浸した。緩衝液を、検出装置上に存在する膜上に 0.1から 0.2 mL/minの流速で流し、張力を安定させた。その後、同じ流速で、上記緩衝液中に溶解した ZnCl溶液を流し、張力および弾性の変化を検

2

出した（図 1)。図 1のグラフにおける変動は、 ZnClによりアミロイド |8 (1— 42)の膜の等

2

方性張力とコンプライアンス (剛性の逆数)が著しく増加することを示している。

[0034] 一方、キレーターである EDTAにより ZnCl溶液添加前の状態に戻ることから、 ZnCl

2 2 の作用は可逆的であると考えられる。図 1において一様な状態、即ち水平線が立ち上がるところは、試料膜に張力が加わった時点を示し、振動している箇所においてコンプライアンスの検出を行なっている。図 1の結果は、本発明により、アミロイド j8 (1- 42)と ZnClとの特別な相互作用を数分で検出できることを示したものである。ここにお

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ける特別な相互作用とは、 X. Huangら（J. Biol. Chem., 1997, 272, 26464)、 C.S. Atwoodら（J. Biol. Chem., 1998, 273, 12817)あるいは R.A. Chernyら（Neuron, 2001, 30, 665)など多数の報告と考え合わせると、 Zn²⁺が引き起こすアミロイド |8 (1— 42)の凝集と考えられる。

[0035] 更に ZnClの濃度を O.OlmMから 3mMまで変えて測定することにより、 ZnClの濃度の

2 2 影響を検討した（図 2)。その結果図 2に示されるように、 ZnCl溶液に応じた弾性の変

2

化の大きさは、濃度依存的である。

[0036] 実施例 2:アミロイド βの張力及び弾件栾化に針する CuClの効果

2

アミロイド ι8 (1— 42)の膜を、実施例 1に記載したように調製し、同様に検出装置上に配置し、緩衝液に溶解した CuClの張力および弾性の変化を検討した（図 3)。実施

2

例 1と同様に、 CuClにおいても、濃度依存的な張力および弾性の変化が認められ、

2

EDTAにより張力は添加前の状態にほぼ回復した。 Zn²⁺と同様に、 Cu²⁺においても、ァミロイド j8の凝集を容易にすることが報告されている。その様な知見は、本法において検出されている現象がアミロイド βの凝集であることを補強するものである。

[0037] 実施例 3 : α -シヌクレインの張力および弾性変化に対する ZnClの効果

2

α -シヌクレイン（BIOMOL International LP, PA, USA)の膜を実施例 1に記載したように作製し、検出装置上に配置した。緩衝液に溶解した ZnClの張力および弾性の

2

変化を検討した（図 4)。その結果、実施例 1と同様に、ひ-シヌクレインにおいても、 ZnClによる濃度依存的な張力および弾性の変化が認められた。なお EDTAにより張

2

力は添加前の状態にほぼ回復した。

産業上の利用可能性

[0038] 本発明により、メカノケミカル式センサーを用いて蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法が提供された。更に上記検出方法を用いてアミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法、ならびにアミロイド関連疾患の治療薬または診断薬を探索する方法が提供された。本発明の方法は、新規なアミロイド病の治療薬'診断薬を得る目的に資するものであると考えられる。

Claims

請求の範囲

[1] アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質、前記蛋白質の断片、前記蛋白質の変異体、タグ化した前記蛋白質、又は前記蛋白質に対する抗体蛋白質よりなる試料膜を基板上に形成し、当該試料膜を有する当該基板を力センサーに配置し、披検サンプルを当該試料膜に作用させた際の当該試料膜の張力及び Z又は弾性の変化を当該カセンサーにより検出することからなる、蛋白質のアミロイド性の構造変化を検出する方法。

[2] 前記力センサーが、メカノケミカル式センサーである、請求項 1記載の方法。

[3] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質が、アミロイド |8蛋白質、免疫グロプリン軽鎖蛋白質、アミロイド A蛋白質、トランスサイレチン蛋白質、リソザィム、 BriL蛋白質、シスタチン C蛋白質、スクレイピー蛋白質、 j8 2ミクログロブリン、ァポリポプロティン Al、ゲルゾリン、ランゲルハンス島アミロイド蛋白質、フイブリノ一ゲン、プロラタチン、インシュリン、カルシトニン、心房性ナトリウムペプチド、 α—シヌクリン、プリオン蛋白質、ハンチンチン蛋白質、スーパーオキサイドジスムターゼ、 OC 1 アンチキモトリプシン及びタウ蛋白質力もなる群力も選択された蛋白質である、請求項 1記載の方法。

[4] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質がアミロイド β蛋白質である、請求項 3 記載の方法。

[5] アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質、前記蛋白質の断片、前記蛋白質の変異体、タグ化した前記蛋白質、又は前記蛋白質に対する抗体蛋白質よりなる試料膜を基板上に形成し、当該試料膜を有する当該基板を力センサーに配置し、披検サンプルを当該試料膜に作用させた際の当該試料膜の張力及び Ζ又は弾性の変化を当該カセンサーにより検出することからなる、アミロイド性の構造変化に影響を与える活性を有する物質を探索する方法。

[6] 前記力センサーが、メカノケミカル式センサーである、請求項 5記載の方法。

[7] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質が、アミロイド |8蛋白質、免疫グロプリン軽鎖蛋白質、アミロイド Α蛋白質、トランスサイレチン蛋白質、リソザィム、 BriL蛋白質、シスタチン C蛋白質、スクレイピー蛋白質、 j8 2ミクログロブリン、ァポリポプロティン Al、ゲルゾリン、ランゲルハンス島アミロイド蛋白質、フイブリノ一ゲン、プロラタチン、インシュリン、カルシトニン、心房性ナトリウムペプチド、 α—シヌクリン、プリオン蛋白質、ハンチンチン蛋白質、スーパーオキサイドジスムターゼ、 OC 1 アンチキモトリプシン及びタウ蛋白質力もなる群力も選択された蛋白質である、請求項 5記載の方法。

[8] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質がアミロイド β蛋白質である、請求項 7 記載の方法。

[9] アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質、前記蛋白質の断片、前記蛋白質の変異体、タグ化した前記蛋白質、又は前記蛋白質に対する抗体蛋白質よりなる試料膜を基板上に形成し、当該試料膜を有する当該基板を力センサーに配置し、披検サンプルを当該試料膜に作用させた際の当該試料膜の張力及び Ζ又は弾性の変化を当該カセンサーにより検出することからなる、アミロイド関連疾患の治療薬又は診断薬を探索する方法。

[10] 前記力センサーが、メカノケミカル式センサーである、請求項 9記載の方法。

[11] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質が、アミロイド |8蛋白質、免疫グロプリン軽鎖蛋白質、アミロイド Α蛋白質、トランスサイレチン蛋白質、リソザィム、 BriL蛋白質、シスタチン C蛋白質、スクレイピー蛋白質、 j8 2ミクログロブリン、ァポリポプロティン Al、ゲルゾリン、ランゲルハンス島アミロイド蛋白質、フイブリノ一ゲン、プロラタチン、インシュリン、カルシトニン、心房性ナトリウムペプチド、 α—シヌクリン、プリオン蛋白質、ハンチンチン蛋白質、スーパーオキサイドジスムターゼ、 OC 1 アンチキモトリプシン及びタウ蛋白質力もなる群力も選択された蛋白質である、請求項 9記載の方法。

[12] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質がアミロイド β蛋白質である、請求項 1 1記載の方法。

[13] アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質力なる試料膜。

[14] 前記アミロイド性の構造変化を起こす蛋白質がアミロイド β蛋白質である、請求項 1 3記載の試料膜。

[15] 静電噴霧法によりアミロイド β蛋白質を堆積させることにより形成された、請求項 14 記載の試料膜。