Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques renfermant des extraits végétaux de /Je/te de Nuit (Mirabilis jalapa) contre l'inflammation et la sécheresse cutanée de toute origine.
Pour assurer pleinement sa fonction physiologique de barrière contre les agressions extérieures, la peau, et plus particulièrement le stratum comeum, doit avoir une parfaite intégrité et un bon état d'hydratation.
Les sensations de gêne ressenties localement lors d'épisodes inflammatoires, sont dues à la désormais trilogie classique (Arthus 1903) des signes cardinaux suivants: érythème, œdème et douleur.
L'inflammation cutanée est le résultats de tout un faisceau d'agressions du monde extérieur sur notre peau: pollution chimique, exposition normale ou exagérée au rayonnement UN solaires ou artificiels, réaction de défense contre des bactéries.... Les mécanismes bioclώniques déclenchés par ces agressions et qui entraînent le phénomène d'inflammation sont très nombreux mais, dans le cadre de cette demande brevet, il est possible de citer:
> La péroxydation des membranes cellulaires qui d'une part détruises les cellules concernées et d'autre part, libère des enzymes et autres molécules intracellulaires dans le milieu extraceUulaire en le perturbant dans son métabolisme normal,
> La libération de prostaglandines à partir de la dégradation de l'acide arachidonique des phospholipides membranaires,
> L'augmentation de la perte insensible en eau à cause la destruction de l'homogénéité du tissu cellulaire, ce qui provoque en retour un assèchement de la surface cutanée et don, de favoriser et d'aggraver les différentes agression citées ci-dessus, provoquant ainsi un cercle vicieux dont il est difficile de sortir.
A partir de ces brèves données, il est évident que toute intervention, par voie topique ou générale, capable de diminuer l'intensité de ces manifestations permet d'obtenir des effets apaisants plus ou moins importants, mais toujours recherchés dans les situations douloureuses.
L'industrie cosmétique est donc tout à fait dans son rôle quand elle recherche en permanence de nouveaux concepts et produits capables de prévenir ou de diminuer la sécheresse cutanée de toutes origines.
L'objet de cette demande de brevet réside dans la découverte, et dans la démonstration, qu'une nouvelle solution peut être proposée dans les cas de sécheresse cutanée, et ceci, quelles qu'en soient les causes.
En effet, nous avons découvert que les extraits de Re//e de Nuit (Mirabilis jalapa), appliqués de manière topique à des concentrations appropriées, étaient capables de s'opposer au dessèchement de la peau.
La Belle de Nuit (Mirabilis jalapa), de la famille des Nyctaginacées, est originaire du Pérou et mesure de 0.6 à 0.9 mètres Ses fleurs, qui peuvent être rouges, roses, jaunes ou blanches éclosent de juin à octobre, sont connues pour dégager un parfum très agréable qui attire les papillons.
A part l'intérêt décoratif de sa floraison et son feuillage, à ce jour, la Belle de Nuit
(Mirabilis jalapa) a été utilisée dans différents axes industriels comme source permettant la production:
> de protéines à activités antivirales générales dans le règne animal et végétal (EP00504919, EP00504919, EP00504919, US05340732, US05648234, DE69213282, DE69213282, JP63123386, US05348865, US05723326),
> d'antibiotiques de synthèse (US06020312, US05885782, US05602097, US05482928),
> protéines contenant de la saporine (US05916772),
> produits à activité insecticide (US05885569). ou dans des axes thérapeutiques comme:
> régulateur de la glycémie chez les diabétiques (US06103242),
> traitement de cancers rebelles (CNO 1197646 A) .
Son utilisation à l'échelle industrielle, en terme de quantité et de reproductibilité de qualité entre les différentes sources d'approvisionnement est aisée car cette plante se cultive au soleil, sans besoins spécifiques comme qualité de sol et car elle tolère très bien la sécheresse ainsi que le gel (jusqu'à moins 5°C).
Les fleurs de la Belle de Nuit sont également très connue pour leur particularité de ne s'ouvrir qu'en fin d'après midi et, contrairement à la plupart des autres fleurs, de rester ouvertes pendant la nuit, embaumant ainsi les nuits d'été.
Pour réaliser les extraits à partir des racines, après broyage au moyen de matériel standard (broyeur à couteaux ou à marteaux), la granulométrie du matériel obtenu doit être comprise entre 0,2 et 5,0 mm.
L'extraction peut alors être réalisée par macération de 20 grammes de broyât dans
100 ml d'eau purifiée pendant 4 à 10 jours, à la température de 15-20°C,
En ce qui concerne la tige, la feuille et la fleur de, l'extraction peut se faire directement sans broyage comme ci-dessus.
Après filtration de l'extrait obtenu, on recueille environ 75 ml d'un liquide vert-brun clair à vert-brun foncé.
Les solvants d'extraction cités ci-dessus ne sont pas limitatifs et peuvent être choisis parmi l'eau, le propylène glycol, le butylène glycol, la glycérine, le polyéthylène glycol, les éthers méthyliques ou éthyliques des diglycols, les polyols cycliques, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les alcools (méthanol, éthanol, propanol, butanol), ou tout mélange de ces solvants.
Par ailleurs, il est possible de réaliser ces extraits par d'autres procédés comme, par exemple, la simple décoction, la lixiviation, l'extraction sous reflux, l'extraction au moyen d'ultrasons ou de micro-ondes ou enfin au moyen de techniques à contre courant, sans que cette liste soit limitative.
L'analyse des extraits pat HPLC montrent principlement la présence de β-amyrine et de sitostérol, comprises entre 1 et 100 ppm. Quelles que soient les origines des plantes ayant servi à faire l'extraction, ces valeurs se retrouvent dans les tous extraits obtenus, ce qui facilite l'exploitation industrielle de la Belle de nuit dans l'utilisation industrielle décrite dans cette demande de brevet.
Les extraits obtenus avec un quelconque protocole énoncé ci-dessus, peuvent être utilisés dans des préparations comme celles données ci-dessous à titre d'exemple, sans que ceci soit limitatif.
Exemple 1: Crème de soin du visage
Brij® 721 '2,4
NolopoR S72 2,6
Prostéayl-15 8,0
Propylène glycol 3,0
Carbopol® 941 0,25
Triéthanolamine 0,25
Extrait de Belle de Nuit (Mirabilis jalapa) 0,1
Eau & conservateurs QSP 100g
Exemple 2: Crème antirides
Polysorbate 60 3,8
Stéarate de sorbitan 2,0
Alcool cétylique 1,5
Huile de vaseline 13
Extrait de Belle de Nuit (Mirabilis jalapa) 1,5
Eau & conservateurs QSP 100g
Exemple 3: Lait corporel déodorant
Crillet 3 2,5
Νovol 0,9
Fluilan 2,5
Carbopol 940 0,3
Cire d'abeille 2,0
Triéthanolamine 0,1
Glycérine 5,0
Extrait de Belle de Nuit (Mirabilis jalapa) 1,0
Eau & conservateurs QSP 100g
Les effets des extraits de Belle de Nuit sont démontrés dans les exemple suivants.
Exemple 4: Inhibition de la lipoperoxydatioi) i de liposomes in vivo
Ce test consiste à oxyder, pendant 18 heures à 45°C, des liposomes en suspension par un mélange H2O2 / FeCl2 / KSCN, en l'absence (groupe témoin) ou en présence de différentes concentrations (0,3 %, 1,0 %, 3,0 % et 10 %) de l'extrait de Belle de Nuit
(Mirabilis jalapa).
La détermination de la quantité de diènes conjuguées formés se fait par mesure spectrophotométrique réalisée à 234 nm.
Le tableau suivant montre les valeurs des mesures (D.O.) réalisées lors de cinq expérimentations indépendantes, ainsi que la moyenne des mesures et le pourcentage d'inhibition calculé.
Essai N° : 1 2 3 4 5 Moyenne Δ %
Témoin 1,200 1,253 1,184 1,157 1,139 1.187 -
Extrait 0,1 % 1,051 1,181 1,068 1,022 1,037 1,072 - 9,1
Extrait 1,0 % 0,851 0,813 0,868 0,822 0,837 0,838 - 29 A
Extrait 3.0 % 0,597 0,606 0,585 0,571 0,587 0,589 - 50,4
Extrait 10 % 0,380 0,376 0,350 0,369 0,310 0,357 - 69,9
Ces résultats démontrent clairement que ce sont les seuls extraits de -δe//e de Nuit qui possèdent une très forte action protectrice contre les péroxydations lipidiques de membranes apparentées aux membranes cellulaires puisque les témoins réalisés sans ces essais ne présentent aucun effet.
De plus, cet effet est incontestablement concentration-dépendant, ce qui prouve que c'est bien aux extraits testés que l'on peut attribuer l'effet observé. Exemple 5: Inhibition de la libération de PGEi» induit par les TJV-B in vitro Des fîbroblastes humains normaux sont mis en culture de manière classique. Lorsque la confluence est obtenue, les produits à tester (les mêmes extraits que dans l'exemple précédent et aspirine) et de leur solvant sont mis au contact (par ajout dans le milieu de culture ) des cellules pendant 24 heures.
Le milieu de culture (est donc les produits à tester) est jeté et remplacé par du tampon seul. Les cellules sont alors irradiées (50mJ.cnï2) par des UV-B. Après cette irradiation, le tampon est remplacé par le milieu de culture contenant les produits à tester ou leur solvant, dans les mêmes conditions qu'avant l'irradiation, pour une période de 24heures.
Les surnageants sont prélevés et leur concentration en PGE2 est déterminée par une méthode classique (Kit Cayman).
Les extraits de Belle de Nuit ont été testés aux mêmes concentrations que celles de l'exemple 4, un témoin positif a été réalisé en utilisant de l'aspirine (inhibiteur de la cycloxygénase) à la concentration de 0,0001%; le témoin négatif étant réalisés en testant le solvant du produit testé.
Le tableau suivant montre les valeurs des mesures (concentration mesurée dans le surnageant en PGE2 (ng.ml"1) ramenée au nombre de cellules présentes) observées lors de trois expérimentations indépendantes, ainsi que leur moyenne des mesures et le pourcentage d'inhibition calculé.
Essai N° : 1 2 3 Moyenne Δ DO Inhibition %
Témoin non irradiées 0,14 0,17 0,15 0,153 -
Témoin irradiées 2,58 3,42 3,44 3.147 2.994 -
Extrait 0,1 % 2,45 3,10 3,44 2,997 2.844 - 5,0
Extrait 1,0 % 1,87 2,41 1,84 2,039 1.886 - 37,0
Extrait 3.0 % 1,45 1,97 1,71 1,710 1.557 - 47,9
Extrait 10 % 1,05 1,40 1,51 1,320 1.167 - 61,0
Aspirine l.ltf4 % 0,64 0,68 0,99 0.770 0.617 - 79,4
Ce test est validé par:
> La forte libération de PGE à la suite de l'irradiation aux UV-B puisque l'on observe une concentration 20 fois supérieure à celle du surnageant de s cellules non irradiée,
> La forte inhibition de l'aspirine (1.10"*%) qui atteint 78 %.
Les autres résultats démontrent clairement que ce sont les seuls extraits de Belle de
Nuit qui possèdent une très forte action protectrice contre la libération de PGE2 puisque les témoins réalisés sans ces essais ne présentent aucun effet.
De plus, cet effet est incontestablement concentration-dépendant, ce qui prouve que c'est bien aux extraits testés que l'on peut attribuer l'effet observé.
Exemple 6: Effet hydratant in vivo
Cet exemple démontre l'effet hydratant cutané obtenu, in vivo, sur les jambes de 15 volontaires adultes de sexe féminin. Le pouvoir hydratant de l'extrait de Belle de
Nuit (Mirabilis jalapa) faisant l'objet de cette demande de brevet, incorporé aux concentrations de 0,3, 3,0 et 7,0% dans la crème de soins du visage décrite dans l'exemple N°l, a été comparé à celui d'un placebo (soit la même crème mais sans extrait de _5et7e de Nuit) et à une absence de traitement.
Ce test peut être brièvement décrit comme suit. Le niveau d'hydratation de la peau est mesuré par la capacité électrique cutanée au moyen d'un coméomètre (Courage et Khazaka, modèle CM 820), technique classiquement utilisée en cosmétologie. En effet, les propriétés électriques des couches superficielles de la peau sont fortement liées à sa teneur en eau.
Cinq sites indépendants sont repérés à l'aide d'adhésifs et de marquages au stylo puis, après une période de 20 minutes de repos en position assise, les mêmes mesures que celles faites au T0 sont réalisées en triplicate, sur chaque site.
Chaque crème étudié (placebo et extrait de Belle de Nuit à différentes concentrations) est alors appliquée jusqu'à complète pénétration, sur un site indépendant, à raison de 20 μl par site.
Le cinquième site précédemment repéré ne reçoit aucun produit.
Les volontaires restent au repos.
Trois mesures par site sont effectuées toutes les heures, et cela, pendant 6 heures.
La température et l'hygrométrie de la pièce où le test est réalisé sont maintenues constantes tout au long du test.
Deux essais différents ont été réalisés: le premier a utilisé un extrait réalisé à partir de fleurs (tableau 4-1) quand le second a testé un extrait d'un mélange de tige et de feuille (tableau 4-2) de Belle de Nuit.
Tableau 6-1
T O T+1H T+2H T+3H T+4H T+5H T+6H
Rien 0 - 0,3 - 0,7 - 0,4 0,0 - 0,2 + 0,4
Placebo 0 + 0,2 0,5 + 1,1 + 1,0 + 1,2 + 0,7
Extrait 0,3 % 0 + 8,8 + 11,0 + 13,4 + 14,3 + 11,5 + 9,6
Extrait 1,0 % 0 + 15,6 + 21,3 + 23,8 + 26,9 + 25,7 + 22,7
Extrait 10 % 0 + 24,1 + 30,0 + 32,1 + 30,7 + 29,1 + 30,0
Tableau 6-2
T O T+1H T+2H T+3H T+4H T+5H T-6H
Rien 0 - 0,3 - 0,7 - 0,4 0,0 - 0,2 + 0,4
Placebo 0 + 0,2 0,5 + 1,1 + 1,0 + 1,2 +- 0,7
Extrait 0,03 % 0 + 12,7 + 11,5 + 12,8 + 14,0 + 14,3 + 10,9
Extrait 1,0 % 0 + 16,0 + 18,7 + 23,8 + 28,1 + 28,2 + 25,6
Extrait 10 % 0 + 22,1 + 23,7 + 26,9 + 34,7 + 34,1 + 30,8
Les deux crèmes contenant les extraits de Belle de Nuit démontrent clairement un fort pouvoir hydratant puisque non seulement, selon le type d'extrait testé, l'hydratation cutanée est augmentée de 30% à 35% par rapport au début de l'essai mais, de plus, elle est soutenue puisque l'effet est particulièrement évident pendant au moins les six heures que durent le test.
Un dernier argument qui confirme le rôle des extraits de Belle de Nuit dans l'effet observé réside dans le fait que, dans les mêmes conditions, la crème placebo (sans extrait de Belle de Nuit), ne présente aucun effet hydratant, tout comme il est possible de le constater lorsque aucun produit n'est appliqué.
En raison de l'activité démontrée ci-dessus, les extraits de Belle de Nuit (Mirabilis jalapa) peuvent être utilisées tels quels ou dans des préparations cosmétiques ou deπnophaπnaceutiques pour tous les soins de la peau et spécialement pour lutter contre les conséquences des agressions cutanées quotidiennes de toute origine
(physiologique, climatique, pollution, exposition aux UN solaires naturels ou UN artificiels ....) qui induisent des phénomènes inflanτmatoires et une sécheresse cutanée.
Ces extraits et ces préparations cosmétiques et dermopharmaceutiques ont donc des effets bénéfiques anti-vieillissement et antirides, prolongeant ainsi la souplesse et la fonction protectrice de la peau.
La concentration en sitostérol des extraits de Belle de nuit (Mirabilis jalapa), dénommés ci-après les Extraits pour simplifier le texte, est comprise entre 0,1 et 20 ppm, préférentiellement entre 1 et 10 ppm (p/p).
La concentration des Extraits peut varier entre 0.1 % et 50 % (p/p), préférentiellement entre 1 % et 30 % (p/p) dans la composition cosmétique ou dermopharmaceutique fini.
Les Extraits sont incorporés toute forme galénique employée en cosmétique ou deπnopharmacie: émulsions H/E et E/H, laits, lotions, pommades, lotions capillaires, shampooings, savons, poudres, sticks et crayons, sprays, huiles corporelles, sans que cette liste soit limitative.
Les Extraits sont utilisés sous forme de solution, de dispersion, d'émulsion, ou encapsulé dans des vecteurs comme les macro-, micro- ou nanocapsules, des liposomes ou des chylomicrons, ou inclus dans des macro-, micro- ou nanoparticules, ou dans des microéponges, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux. Les Extraits sont incorporés dans tout autre ingrédient habituellement utilisé: lipides d'extraction et/ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, principes actifs hydro- ou liposolubles, extraits végétaux, extraits tissulaires, extraits marins, filtres solaires, antioxydants.
Les Extraits sont utilisés dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques; leur conférant des effets bénéfiques anti-vieillissement et antirides qui prolongent la souplesse et la fonction protectrice de la peau; et qui sont donc utilisées pour tous les soins de la peau, des muqueuses, des phanères ou du cuir chevelu, spécialement pour lutter contre les conséquences des agressions cutanées quotidiennes de toute origine (physiologique, climatique, pollution, exposition aux UN solaires naturels ou UN artificiels ....) qui induisent des phénomènes inflammatoires et une sécheresse cutanée.
Les Extraits sont utihsés tels quels, ou incorporés dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques pour la préparation d'un médicament, leur conférant des effets bénéfiques anti-vieillissement et antirides qui prolongent la souplesse et la fonction protectrice de la peau; et qui sont donc utilisées pour tous les soins de la peau, des muqueuses, des phanères ou du cuir chevelu, spécialement pour lutter contre les conséquences des agressions cutanées quotidiennes de toute origine (physiologique, climatique, pollution, exposition aux UN solaires naturels ou UN artificiels ....)qui induisent des phénomènes iriflammatoires et une sécheresse cutanée.
Les Extraits sont utilisés seuls ou incorporés dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques, liés ou incorporés ou absorbés ou adsorbés sous forme de macro-, micro- et nanoparticules ou dans des macro-, micro- et nanocapsules, dans les textiles, fibres synthétiques ou naturelles, laines et tout matériaux susceptibles d'être utilisé pour réaliser des vêtements et sous-vêtements de jour ou de nuit, directement au contact de la peau ou de des cheveux pour en permettre une délivrance topique continue.