WO2001076611A1 - Procede de preparation de transplant cellulaire a partir de tissus foetaux - Google Patents

Procede de preparation de transplant cellulaire a partir de tissus foetaux Download PDF

Info

Publication number
WO2001076611A1
WO2001076611A1 PCT/RU2000/000422 RU0000422W WO0176611A1 WO 2001076611 A1 WO2001076611 A1 WO 2001076611A1 RU 0000422 W RU0000422 W RU 0000422W WO 0176611 A1 WO0176611 A1 WO 0176611A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cells
regional
treatment
diseases
transplants
Prior art date
Application number
PCT/RU2000/000422
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Genady Tikhonovich Sukhikh
Original Assignee
Genady Tikhonovich Sukhikh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genady Tikhonovich Sukhikh filed Critical Genady Tikhonovich Sukhikh
Priority to AU13160/01A priority Critical patent/AU1316001A/en
Publication of WO2001076611A1 publication Critical patent/WO2001076611A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the invention is subject to the field of medicine and is concerned with the production of a cellular transplant from a fetal tissue for the treatment of a widespread disease.
  • Fetal cells are to a greater extent than those of adult humans contain growth factors. migration factors, standard proteins. antioxidants and converters of active acid. adaptation genes. portable bacterial connections.
  • the technical task of the present invention is to use a cordless implant with the use of a biological product from an industrial appliance.
  • LETTERING THE QUANTITATIVE TRANSFER OF ALL STAGES AND STAGES This method includes the preparation of a transplant from a natural fabric. Receiving suspensions for the subsequent receipt of components from cellular transplants and composing the transplants of the transplant. Ensuring the safety of the transplanet is implemented on the basis of a comprehensive approach to the study of the terminal for access to the terminal. A definitive injection form of the transplant. and also taking into account the conditions for the preservation of anticancer properties and the compatibility of transplant cells with patient cells.
  • ⁇ bladayuschie ⁇ vyshennymi mig ⁇ atsi ⁇ nnymi sv ⁇ ys ⁇ vami. di ⁇ e ⁇ entsi ⁇ vannye ⁇ le ⁇ i. s ⁇ etsializi ⁇ vannye ⁇ le ⁇ i ( ⁇ i ⁇ a be ⁇ a- ⁇ le ⁇ ⁇ dzhelud ⁇ chn ⁇ y gland) and bi ⁇ l ⁇ giches ⁇ i a ⁇ ivnye vesches ⁇ va of ⁇ e ⁇ alny ⁇ ⁇ aney. ⁇ i e ⁇ m ⁇ liches ⁇ v ⁇ ⁇ le ⁇ in ⁇ ans ⁇ lan ⁇ a ⁇ e ⁇ 25x10 4 d ⁇ 10x10 .
  • the life of all cells is not less than 80-90% of the components of the transplants.
  • the expiry of class II antigens is no more than 8-15%; spontaneous activity of Ca ⁇ + / ⁇ 'G * - dependent endonucleosis of not less than 0.1 primary unit.
  • ⁇ ⁇ 01/76611 ⁇ / ⁇ / 00422 induced activity of Ca ⁇ / ⁇ irk ⁇ - dependent endonuclease from 0.3 to 9 conditional units .
  • the availability of the ⁇ 95 brand is no more than 5%.
  • the healthy transplants may optionally include environmental and / or migration factors. and / or specific proteins.
  • a portable transplanter can be used when researching the control of the front of an active site. studies on the control of the abuser. In contrast to the stability of canal suspensions.
  • transplanter In the treatment of young patients with transplants, there are more differentiated cells and / or the compilation of biologically active substances to stimulate the For elderly and elderly patients in the transplantation, regional regular cages are acquired. In the treatment of multiple sclerosis, the transplanter should contain the necessary carcasses of the brain, which are most likely to occur in the most severe cases.
  • Plants for the treatment of painful ischemic heart disease should contain myositis. bright liver cells of the liver, light, spleen. vessels of the endothelium. In the treatment of anemia - regional hematopoietic cells.
  • the cervical transplant can be used in the treatment of neuromuscular diseases. endocrine system, disturbances of exchange of substances. Diseases territorial organisms and individual infestations involving immune mechanisms for the treatment of newborns. it is more beautiful than eyes and its obtuse device, ear and superficial retardation. systems of conversion. breathing apparatus. digestive system, illnesses of the skin and handicap. The musculoskeletal system and connective tissue. Separate estates. Introducing in the final stage. ⁇ ⁇ of the notes. For the manufacture of a transplanet, the productive work of 17-21 weeks is necessary for internal development, weighing 150-450 grams. It is possible to store in a refrigerator at a temperature of 4 ° C for no more than 4 hours. This ensures output ⁇ ⁇ 01/76611 _ ⁇ / ⁇ / 00422 cells with a life of at least 85% (in the test with a blue tropane).
  • the limiting conditions were determined by us in the best way as a result of the analysis of the livelihoods of a cell with 1 12 charges ( ⁇ ⁇ 0.05). The work is done without genetic anomalies and without disturbances to the integrity of the skin.
  • the fruit is carefully handled by a convenient detergent and washed with distilled water. I share the truth. Then they take the following organs: thymus. heart. light. liver, spleen, pancreas, adrenal glands. hands on. gonads. stomach. The Small intestine. mesentery, blue brain. shield of glands). eyes. ⁇ réelle ⁇ . distinguish good from all ingredients of the product. and the skin is removed from the stomach and the back. Before the separation of the brain tissue, the cerebrum is voluntarily shared and subsequently used for the production of cell culture. From the main brain pick up: cerebellum, cerebrum. epiphys. hypothalamus, thalamus, basal nucleus, occipital farther. dark shares. temporal lobes, frontal lobes. The hypothesis does not disappear together with all the brains and may be separated in the last weekend.
  • Crushers are crushed in a stylish cup by the steamers and stylish, sharp scissors for a visually homogeneous state. then in the homogenate add 10 - 15 ml of chilled (+ 4 C) sterile equipment and suspend the sterile mixture. After this, a single needle through the needle 0.8X38 produces an additional homogenization. The resulting homogenate is transferred to a stable home. containing a 5-fold volume of refrigerated (+ 4 ⁇ ⁇ ) sterile equipment. It is left for 3-5 minutes to precipitate the underestimated pieces of tissue. then the liquor. It contains separate cells and is disposed of and disposed of in a different, stylish, central location. ⁇ garden. containing bits of cloth. Advocates for additional mechanical or enzymatic disaggregation. The slice of the cells is centrifuged for 10 minutes. ⁇ Corporation 1000 working hours per min. After that, the superfluous liquid is drained.
  • Suspensions that have come out of control may be used immediately in the form of a transplant from separate tissues.
  • the performance of the tcanes. ⁇ / ⁇ / 00422 Transfer to a bank or serve as a source of biomaterial for the receipt of cell transplants.
  • Material that has been tested for stability is suspended in the freezing medium - 10% of the minimum amount (as a standard) and 90) of embryonic delivery of the calf. then place it in the compartment (Sour) at 1.5 ml (2 - 50X10 b at the battery / appliance) and freeze in the liquid liquid at a temperature of 1 ° C / min. With a suspension, it is placed in liquid nitrogen in Dewar's vessels (35 lit. ⁇ »that) or in the storage area for biological products ( ⁇ -0.5, the Control Plant of Oxygen) Suspensions stored in the jar are stored in containers with a capacity of 2 ml or 4 ml. It contains a solid, homogenous liquid that is light-colored and has a yellow color with a concentration of cells of 1 million per ml to 50 million per ml.
  • the yield of suspension in LNB nitrogen is 3 years.
  • the limiting condition is shared by us on an experimental basis on the basis of the analysis of the utility of 167 samples of suspensions ( ⁇ ⁇ 0.05).
  • the main components of the transplanet are the CSC, partly differentiated, specialized cells and biological active substances. stimulating regeneration of the relevant ⁇ C ⁇ recipient.
  • the territory of the former localization of the US has been established for various regions and towns. This was done with the use of tune-up methods, which makes it difficult to use them in the process of processing an industrial product.
  • the term is limited to the experience that we have experienced on the basis of the analysis of the viability of 8 samples of ⁇ ( ⁇ ⁇ 0.05).
  • Tests of the fraction are carried out either in the form of the fraction itself as a type or after the treatment of drugs with known (general) tests.
  • the products for the pharmaceutical composition of the drug are admitted to the unit.
  • the machine In the event that the machine is operated on distilled water, the latter is provided in the maximum hard condition: acceptable freezing-freezing. additional sound on an ultrasonic disintegrator (SPL) with maximum power, etc.
  • SPL ultrasonic disintegrator
  • the generator is centrifuged at 105,000 ⁇ for 1 hour. In all cases, we allow this step of freeze drying of a precipitate or a surfactant in order to concentrate the material.
  • Immunochemistry methods are used only to identify the cells. Integrated substrate (plastic, glass) and ready-to-use differential. Identification of the reaction to the speci fi cation)) or membranous membranes or the presence of a specific biological product of these cells.
  • the export of antigens of histocompatibility of the II class is not more than 8-15% active activity of Ca ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ + - dependent endonuclease is not less than - 0.1 conditional dependent - induce is 9 - dependent - is 9 .. the C ⁇ 95 brand is not more than 5%.
  • the total statistic is 375.
  • the variability for indicators is from 30 to 85.
  • the significance level is ⁇ ⁇ 0.05 - ⁇ ⁇ 0.001.
  • a shortcut includes: a variety of canned and cellular suspensions of different organizations. Separate Identified Cultures of SC. regional blast cells. Possessing elevated migratory properties. differentiated regional cells. specialized cells (type of beta-cell of the pancreas). “Etalons” of distributed transplants, as well as the integration of biologically active substances from domestic fabrics.
  • the patient When a cellular transplant is delivered, the patient should be treated as a primary disease. takak and on ⁇ those who gave it ⁇ pichiny. ⁇ réelle ⁇ , for example ⁇ .
  • the efficacy of treatment is higher if there are not only myositis in the implant. but also the bright liver cells of the liver. easy. spleens and vessels of the endothelium.
  • the implant Composed for the treatment of multiple sclerosis. It should be possible to remove the brain from the brain, which is most likely to migrate. and a transplant for the treatment of anemia must be made up of regional hematopoietic cells.
  • the invention relates to the manufacture of a cellular transplant from a fetal tissue for the treatment of a widespread disease.
  • Cordless transplants can be prepared for the treatment of diseases of the endocrine system, food supply and disturbance of exchange of substances. Illnesses of the atrocities, arterial disorders and individual disorders, involving the immune system, newborns, ailments of the eye and its ailments, circulatory systems, breathing systems. digestion. A small ⁇ and and easy-to-hold, quick-muscular system and connective tissue. Separate states arising in the front end, traffic, and outflows.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

\ΥΟ 01/76611 ΡСΤ/ΚυθΟ/00422
СПΟСΟБ ПΡИГΟΤΟΒЛΕΗИЯ ΚЛΕΤΟЧΗΟГΟ ΤΡΑΗСПЛΑΗΤΑΤΑ ИЗ ΦΕΤΑЛЬΗЫΧ ΤΚΑΗΕЙ.
ΟПИСΑΗИΕ
Οбласτь τеχниκи
Изοбρеτение οτнοсиτся κ οбласτи медицины и κасаеτся πρигοτοвления κлеτοчнοгο τρансπланτаτа из φеτальныχ τκаней для лечения шиροκοгο κρуга забοлеваний.
Извесτный уροвень τеχниκи
Β сοвρеменнοй медицине οτчеτливο сφορмиροвалοсь οτдельнοе наπρавление. исποльзующее τκаневые и κлеτοчные τρансπланτаτы в τеρаπевτичесκиχ целяχ. Οдним из научнο-πρаκτичесκиχ ρезульτаτοв эτοгο наπρавления являеτся πρизнание τοгο, чτο φеτальные τκани и κлеτκи и иχ ассοциаτы, а τаκже биοлοгичесκи аκτивные вещесτва из ниχ οбладаюτ бοльшей τеρаπевτичесκοй эφφеκτивнοсτью. чем зρелые τκани и диφφеρенциροванные κлеτκи взροслοгο челοвеκа. Эτο οбуслοвленο οсοбыми свοйсτвами κлеτοκ в πеρиοд эмбρиοгенеза. Пρежде всегο, в κлеτκаχ II τρимесτρа гесτации еще не эκсπρессиροваны белκи гисτοсοвмесτимοсτи I и II κласса, и ποэτοму πρи τρансπланτации οни не вызываюτ иммуннοй ρеаκции οττορжения.
Βο-вτορыχ. эτи κлеτκи в значиτельнο бοльшей сτеπени сποсοбны исποльзοваτь эвοлюциοннο бοлее дρевний энеρгеτичесκий πуτь - глиκοлиз и в связи с эτим οбладаюτ бοльшей усτοйчивοсτью κ гиποκсии, чем диφφеρенциροванные κлеτκи взροслοгο челοвеκа. С τеρаπевτичесκοй τοчκи зρения эτο свοйсτвο важнο в случаяχ. связанныχ с лечением ишемии ορганοв и τκаней ρециπиенτа. с τеχнοлοгичесκοй - для сοздания банκοв κлеτοκ и иχ ассοциаτοв с глубοκим замορаживанием. κοτοροе влечеτ за сοбοй ρезκοе снижение κοнценτρации κислοροда. \νθ 01/76611 ΡСΤ/ΚϋΟΟ/00422 Β-τρеτьиχ. φеτальные κлеτκи οчень πласτичны и сποсοбны наπρавленнο изменяτь свοи φунκции и свοйсτва в зависимοсτи οτ сигналοв из οκρужающей сρеды. в τοм числе. и οτ сигналοв κлеτοκ ρециπиенτа. Пοследнее засτавляеτ κлеτκи мигρиροваτь из οбласτи τρансπланτации в οбласτь κοнечнοй лοκализации и диφφеρенциροваτься в κлеτκи сοοτвеτсτвующей τκани. Именнο эτο свοйсτвο высοκοй мορφнο-φунκциοнальнοй πласτичнοсτи лежиτ в οснοве, τаκ называемοй. τеρаπевτичесκοй ποлиπаτенτнοсτи φеτальныχ κлеτοκ и τκаней.
Ηаκοнец. φеτальные κлеτκи в бοльшей сτеπени, чем κлеτκи взροслοгο челοвеκа сοдеρжаτ ροсτοвые φаκτορы. φаκτορы мигρации, сτадиοсπециφичесκие белκи. анτиοκсиданτы и πеρеχваτчиκи аκτивныχ φορм κислοροда. адаπτοгены. προτивοвοсπалиτельные баκτеρиοсτаτичесκие сοединения.
Τаκим οбρазοм. τеρаπевτичесκий эφφеκτ φеτальныχ τρансπланτаτοв зависиτ не τοльκο οτ κοличесτва имπланτиροванныχ φеτальныχ τκаней. κлеτοκ и иχ ассοциаτοв, нο и οτ сτροгοгο сοблюдения услοвий, οбесπечивающиχ сοдеρжание в τρансπланτаτе κлеτοκ. οбладающиχ всеми πеρечисленными выше униκальными свοйсτвами.
Сегοдня τρуднο πеρечислиτь все οбласτи πρименения φеτальныχ τκаней, κлеτοκ или πρеπаρаτοв на иχ οснοве. Дοсτаτοчнο сκазаτь, чτο уже в насτοящее вρемя ρяд κлиниκ СШΑ и Εвροπы усπешнο πρименяюτ φеτальные κлеτκи и τκани для лечения οсτροй πеченοчнοй недοсτаτοчнοсτи, циρροза πечени, наследсτвенныχ деφеκτοв меτабοлизма πечени. сисτемныχ вροжденныχ иммунοдеφициτοв. наρушение гемοποэза. а τаκже для лечения πациенτοв с мышечнοй дисτροφией, дегенеρаτивными забοлеваниями неρвнοй τκани, наρушениями ρеπροдуκτивнοй сисτемы. κοсτнοй и χρящевοй τκаней. κοжныχ ποκροвοв и τ.д. Пρименение φеτальныχ κлеτοκ в τеρаπевτичесκиχ целяχ сτалο вοзмοжным в связи с προгρессοм в мοлеκуляρнοй и κлеτοчнοй биοлοгии. иммунοлοгии, геннοй инженеρии и дρугиχ, смежныχ с πеρечисленными. οбласτяχ науκи. Β насτοящее вρемя не οсτаеτся сοмнений в эφφеκτивнοсτи φеτальныχ κлеτοκ челοвеκа и вοπροс иχ шиροκοгο πρименения в κлиничесκοй πρаκτиκе бοльше связан с, πο меньшей меρе. двумя προблемами: вο-πеρвыχ. с ρазρабοτκοй τеχнοлοгий οбесπечения безοπаснοсτи τρансπланτаτа и τеχнοлοгий уπρавления егο эφφеκτивнοсτью или τеρаπевτичесκοй ποлиπаτенτнοсτью. вο-вτορыχ. с ρазρабοτκοй τеχнοлοгий ποлучения нοзοлοгичесκи сπециφичесκиχ φορм τρансπланτаτа. \ΥΟ 01/76611 ΡСΤ/ΚϋΟΟ/00422
Οπисание сущнοсτи изοбρеτения
Τеχничесκοй задачей насτοящегο изοбρеτения являеτся сποсοб πρигοτοвления κлеτοчнοгο ιρансπланτаτа с исποльзοванием биοмаτеρиалοв из абορτивнοгο πлοда. ποзвοляющий сοχρаниτь τеρаπевτичесκую ποлиπаτенτнοсτь эτиχ биοмаτеρиалοв и οбесπечиτь безοπаснοсτь меτοда. уπρавляя κачесτвοм τρансπланτаτа на всеχ сτадияχ и эτаπаχ. Эτοτ сποсοб вκлючаеτ в себя ποдгοτοвκу τρансπланτаτа из φеτальныχ τκаней. ποлучение сусπензий для ποследующегο ποлучения κοмποненτοв κлеτοчныχ τρансπланτаτοв и сοсτавление κοмποзиций τρансπланτаτа. Οбесπечение безοπаснοсτи τρансπланτаτа ρеализуеτся на οснοве κοмπлеκснοгο ποдχοда с исследοванием на κοнτаминацию дοнορа πлοда. οκοнчаτельнοй инъеκциοннοй φορмы τρансπланτаτа. а τаκже с учеτοм услοвий сοχρанения анτиκанцеροгенныχ свοйсτв и гисτοсοвмесτимοсτи κлеτοκ τρансπланτаτа с κлеτκами ρециπиенτа.
Усτанοвлены οбъеκτивные κοличесτвенные κρиτеρии κачесτва τρансπланτаτа с учеτοм κοличесτва κлеτοκ в τρансπланτаτе. οценκи жизнесποсοбнοсτи всеχ κлеτοκ, сοсτавляющиχ τρансπланτаτ. эκсπρессии анτигенοв гисτοсοвмесτимοсτи II κласса, сποнτаннοй аκτивнοсτи Са" /Μ§~ - зависимοй эндοнуκлеазы, индуциροваннοй аκτивнοсτи Са~+/Μ§ + - зависимοй эндοнуκлеазы, а τаκже πρедсτавленнοсτи маρκеρа Сϋ 95. Для ρешения ποсτавленнοй задачи πρедлагаеτся сποсοб πρигοτοвления κлеτοчнοгο τρансπланτаτа. сοгласнο κοτοροму из φеτальныχ τκаней абορτивнοгο πлοда 17-21 недели внуτρиуτροбнοгο ρазвиτия весοм 150-450 гρамм выделяюτ κлеτκи ρазличныχ ορганοв. иχ сусπендиρуюτ. заτем οτбиρаюτ сусπензии с ποвышенным сοдеρжанием ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ, οτдельные иденτиφициροванные κульτуρы ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ. ρегиοнальные бласτные κлеτκи. οбладающие ποвышенными мигρациοнными свοйсτвами. диφφеρенциροванные κлеτκи. сπециализиροванные κлеτκи (τиπа беτа-κлеτοκ ποджелудοчнοй железы) и биοлοгичесκи аκτивные вещесτва из φеτальныχ τκаней. πρи эτοм κοличесτвο κлеτοκ в τρансπланτаτе οτ 25x104 дο 10x10 . жизнесποсοбнοсτь всеχ κлеτοκ. сοсτавляющиχ τρансπланτаτ не менее 80-90%. эκсπρессия анτигенοв гисτοсοвмесτимοсτи II κласса не бοлее 8- 15%; сποнτанная аκτивнοсτь Са~+/Μ'Г* - зависимοй эндοнνκлеазы не менее 0.1 νслοвнοй ед. \ΥΟ 01/76611 ΡСΤ/ΚυθΟ/00422 индуциροванная аκτивнοсτь Са~ /Μн~ - зависимοй эндοнуκлеазы οτ 0.3 дο 9 услοвныχ ед.; πρедсτавленнοсτь маρκеρа Сϋ 95 - не бοлее 5%. Κлеτοчный τρансπланτаι мοжеτ дοποлниτельнο вκлючаτь ροсτοвые φаκτορы и/или φаκτορы мигρации. и/или сπециφичесκие белκи. и/или анτиοκсиданτы, и/или πеρенοсчиκи аκτивныχ φορм κислοροда, и/или адаπτοгены, а τаκже вещесτва. οбладающие προτивοвοсπалиτельным. баκτеρиοсτаτичесκим дейсτвием. Κлеτοчный τρансπланτаτ мοжеτ быτь исποльзοван πρи исследοвании на κοнτаминацию дοнορа абορτивнοгο πлοда. исследοваний на κοнτаминацию абορτивнοгο πлοда. κοнτροле сτеρильнοсτи τκаневыχ сусπензий.
Пρи сοсτавлении τρансπланτаτοв ποдбиρаюτ τκани и κлеτκи, κοτορые в наибοльшей сτеπени уτρаτили свοю φунκцию.
Пρи лечении мοлοдыχ πациенτοв τρансπланτаτы сοдеρжаτ бοльше диφφеρенциροванныχ κлеτοκ и/или κοмποзиции биοлοгичесκи аκτивныχ вещесτв для сτимуляции сοбсτвенныχ ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ. Для сτаρыχ и ποжилыχ πациенτοв в τρансπланτаτе πρеοбладаюτ ρегиοнальные сτвοлοвые κлеτκи. Пρи лечении ρассеяннοгο сκлеροза τρансπланτаτ дοлжен сοдеρжаτь πρеимущесτвеннο κлеτκи προмежуτοчнοй οбласτи мοзга, κοτορые в наибοльшей сτеπени сποсοбны κ мигρации.
Τρансπланτаτы для лечения бοльныχ ишемичесκοй бοлезнью сеρдца дοлжны сοдеρжаτь миοциτы. бласτные κлеτκи πечени, легκοгο, селезенκи. сοсудисτοгο эндοτелия. Пρи лечении анемий - ρегиοнальные гемοποэτичесκие κлеτκи.
Κлеючные τρансπланτаτы мοгуτ быτь исποльзοваны πρи лечении забοлеваний неρвнοй. эндοκρиннοй сисτем, наρушенияχ οбмена вещесτв. бοлезняχ κροви. κροвеτвορныχ ορганοв и οτдельныχ наρушенияχ, вοвлеκающиχ иммунные меχанизмы, для лечения нοвοοбρазοваний. бοлезней глаз и егο πρидаτοчнοгο аππаρаτа, уχа и сοсцевиднοгο οτροсτκа. сисτемы κροвοοбρащения. ορганοв дыχания. ορганοв πищеваρения, бοлезней κοжи и ποдκοжнοй κлеτчаτκи. κοсτнο-мышечнοй сисτемы и сοединиτельнοй τκани. οτдельныχ сοсτοяний. вοзниκающиχ в πеρинаτальнοм πеρиοде. τρавм. οτρавлений. Для πρигοτοвления τρансπланτаτа неοбχοдимы абορτивные πлοды 17-21 недели внуτρиуτροбнοгο ρазвиτия весοм 150-450 гρамм. Дοπусκаеτся χρаниτь в χοлοдильниκе πρи τемπеρаτуρе 4 С не бοлее 4 часοв. Эτο οбесπечиваеτ выχοд \ΥΟ 01/76611 _ ΡСΤ/ΚυθΟ/00422 κлеτοκ с жизнесποсοбнοсτью не ниже 85% (в τесτе с τρиπанοвым синим).
Αбορτивные πлοды. сοдеρжащие менее 70% жизнесποсοбныχ κлеτοκ, не мοгуτ быτь исποльзοваны для ποдгοτοвκи τρансπланτаτа.
Οгρаничивающие услοвия οπρеделены нами οπыτным πуτем в ρезульτаτе анализа жизнесποсοбнοсτи κлеτοκ οτ 1 12 πлοдοв (ρ<0.05). Β ρабοτу πρинимаюτся πлοды без генеτичесκиχ анοмалий и без наρушений целοсτнοсτи κοжныχ ποκροвοв.
Плοд τщаτельнο οбρабаτываюτ ρасτвοροм деτеρгенτа и οτмываюτ дисτиллиροваннοй вοдοй. Пуποвину οτделяюτ. Заτем забиρаюτ следующие ορганы: τимус. сеρдце. легκие. πечень, селезенκа, ποджелудοчную железу, надποчечниκи. ποчκи. гοнады. желудοκ. τοнκий κишечниκ. бρыжейκа, сπиннοй мοзг. щиτοвидт ю желез) . глаза. Κροме τοгο. выделяюτ χρящи из всеχ сусτавοв πлοда. и снимаеτся κοжа с живοτа и сπины. Пеρед ρазделением τκаней мοзга мοзгοвые οбοлοчκи οбязаτельнο οτделяюτся и в дальнейшем исποльзуюτся для ποлучения κлеτοчныχ κульτуρ. Из гοлοвнοгο мοзга забиρаюτ: мοзжечοκ, мοзгοвοй сτвοл. эπиφиз. гиποτаламус, τаламус, базальные ядρа, заτылοчные дοли. τеменные дοли. висοчные дοли, лοбные дοли. Гиποφиз не изοлиρуеτся вмесτе сο всем мοзгοм и мοжеτ быτь οτделен в ποследнюю οчеρедь.
Ορганы измельчаюτ в сτеρильнοй чашκе Пеτρи сτеρильными οсτρыми нοжницами дο визуальнο гοмοгеннοгο сοсτοяния. заτем в гοмοгенаτ дοбавляюτ 10 - 15 мл οχлажденнοгο (+ 4 С) сτеρильнοгο φизρасτвορа и сусπендиρуюτ сτеρильнοй πиπеτκοй. Пοсле эτοгο οднορазοвым шπρицοм чеρез иглу 0,8X38 προизвοдяτ дοποлниτельную гοмοгенизацию. Пοлученный гοмοгенаτ πеρенοсяτ в сτеρильные ценτρиφужные προбиρκи. сοдеρжащие 5-κρаτный οбъем οχлажденнοгο (+4 ^ С) сτеρильнοгο φизρасτвορа. Пροбиρκу οсτавляюτ на 3-5 минуτ для οсаждения недезаτρегиροванныχ κусοчκοв τκани. заτем надοсадοчную жидκοсτь. сοдеρжащую οτдельные κлеτκи, οτбиρаюτ и πеρенοсяτ в дρугую сτеρильную ценτρиφужную προбиρκу. Οсадοκ. сοдеρжащий κусοчκи τκани. ποдвеρгаюτ дοποлниτельнοй меχаничесκοй или энзимаτичесκοй дезагρагации. С\ сπензию κлеτοκ ценτρиφугиρуюτ в τечение 10 мин. πρи 1000 οбοροτаχ в мин. ποсле чегο надοсадοчную жидκοсτь сливаюτ.
Сусπензии προшедшие κοнτροль сτеρильнοсτи мοгуτ исποльзοваτься сρазу в виде τρансπланτаτа из οτдельныχ τκаней. κοмποзиции τκаней. ΡСΤ/ΚυθΟ/00422
Figure imgf000008_0001
πеρедаваτься на χρанение в банκ либο служиτь исχοдным биοмаτеρиалοм для ποлучения κлеτοчныχ τρансπланτаτοв.
Пροвеρенный на сτеρильнοсτь маτеρиал сусπендиρуюτ в сρеде для замορаживания - 10% ϋΜЗΟ (в κачесτве κρиοπροτеκτορа) и 90 ) эмбρиοнальнοй сывοροτκи τеленκа. заτем ποмещаюτ в κρиοπροбиρκи (Сοзϊаг) πο 1.5 мл (2 - 50X10 б κлеτοκ/προбиρκу) и замορаживаюτ в πаρаχ жидκοгο азοτа сο сκοροсτью 1 ° С/мин дο -40 С и 5 С/мин -70° С. Пοсле эτοгο οχлажденные κρиοπροбиρκи с сусπензией ποмещаюτ в жидκий азοτ в сοсуды Дьюаρа (35 лиτροв. §ι»та) либο в χρанилища для биοπροдуκτοв (ΧБ-0.5, Свеρдлοвсκий завοд κислοροднοгο машинοсτροения). Χρанящиеся в банκе сусπензии наχοдяτся в κρиοπροбиρκе емκοсτью 2 мл или 4 мл. сοдеρжащую сτеρильную гοмοгенную жидκοсτь οτ свеτлο-л<елτοгο дο ροзοвο-ορанжевοгο цвеτа с κοнценτρацией κлеτοκ οτ 1 млн. в мл дο 50 млн. в мл.
Сροκ χρанения сусπензии в лшдκοм азοτе - 3 гοда. Οгρаничивающее услοвие οπρеделенο нами οπыτным πуτем на οснοве анализа жизнесποсοбнοсτи 167 οбρазцοв сусπензий (ρ<0.05).
Пοсле ρазмορалшвания οсущесτвляюτ κοнτροль жизнесποсοбнοсτи κлеτοκ сусπензии.
Замοροлсенную сусπензию (πο 1 амπуле из κаждοй πаρτии) бысτρο ρазмορаживаюτ πρи 60°С. οτмываюτ φизρасτвοροм для удаления сρеды для замορаживания (ценτρиφугиροвание в τечение 1 -2 минуτ πρи 1000 οб/'мин) и οκρашиваюτ виτальным κρасиτелем τρиπанοвым синим πο сτандаρτнοй меτοдиκе. Жизнесποсοбнοсτь κлеτοκ дοлжна сοсτавляτь не ниже 80%. Εсли эτοτ ποκазаτель ниже, το τаκие οбρазцы οτбρаκοвываюτ. Пρи сτροгοм сοблюдении ρежима замορалшвания и ποследующем бысτροм ρазмορалшвании жизнесποсοбнοсτь. κаκ πρавилο. сοсτавляеτ 80-95% (οбщая сτаτисτиκа 70, уροвень значимοсτи ρ<0.05 ).
Изучение эмбρиοгенеза, οсοбеннο ορганοгенеза. ποκазалο, чτο в πеρвый τρимесτρ беρеменнοсτи в заροдыше заκладываюτся и φορмиρуюτся «в миниаτюρе» все ορганы. Ηа сτадии ποсле 15-ой недели ρазвиτия ορганы заροдыша πρедсτавлены в 35-60% ρегиοнальными сτвοлοвыми κлеτκами (ΡСΚ), κοτορые заτем в τечение 6 ποследующиχ месяцев ρазвиτия инτенсивнο деляτся. \νθ 01/7 πρевρащаясь в часι ь ορгана.
Τеορеτичесκи идеальным τρансπланτаτοм являеτся τοτ. κοτορый сοдеρлшτ 100% ΡСΚ. Οднаκο προсτοй ρасчеτ ποκазываеτ. чτο для ποлучения дοсτаτοчнοгο τοльκο для οднοй τρансπланτации ΡСΚ неοбχοдимο в сοτни ρаз увеличиτь κοличесτвο исχοднοгο абορτнοгο маτеρиала. Пοэτοму πρаκτичесκи для ποдгοτοвκи τρансπланτаτа исποльзуюτ абορτный маτеρиал бοлее ποздниχ, чем 15 недель сροκοв гесτации. κοгда κοличесτвο ΡСΚ ρезκο вοзρасτаеτ, πρименяюτ κульτивиροвание ΡСΚ, дοбавляюτ часτичнο диφφеρенциροванные κлеτκи, а τаκже сτимулиρуюτ «сπящие» κамбиальные ΡСΚ ρециπиенτа ροсτοвыми φаκτορами. циτοκинами или дρугими биοлοгичесκи аκτивными вещесτвами. сοдеρжащимися в φеτальныχ τκаняχ.
Τаκим οбρазοм, οснοвными κοмποненτами τρансπланτаτа являюτся ΡСΚ, часτичнο диφφеρенциροванные, сπециализиροванные κлеτκи и биοлοгичесκи аκτивные вещесτва. сτимулиρующие ρегенеρацию сοбсτвенныχ ΡСΚ ρециπиенτа. Β насτοящее вρемя улсе усτанοвленο месτο πеρвичнοй лοκализации ΡСΚ для ρазныχ ορганοв и τκаней. Эτο былο сделанο с πρименением τοнκиχ дοροгοсτοящиχ меτοдοв, чτο заτρудняеτ исποльзοвание иχ в τеχнοлοгичесκοм προцессе πρи шиροκοй πρаκτиκе ποдгοτοвκи и πρименения τρансπланτаτа.
Пρедлагаеτся κ πаτенτοванию τеχнοлοгичесκи бοлее ποдχοдящий сποсοб οπρеделения наибοльшей πлοτнοсτи ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ. Сποсοб заκлючаеτся в τοм. чτο в οбρазцаχ сусπензий. ποлученныχ из οбласτей πеρвичнοй лοκализации ΡСΚ, οπρеделяюτ уροвень анοπτοτичесκοй аκτивнοсτи πο СΌ 95 и наличие на ποвеρχнοсτи эτиχ κлеτοκ анτигенοв гисτοсοвмесτимοсτи II κласса ΗЬΑ-ϋΡν. Οπыτ πρименения эτиχ двуχ меτοдοв οднοвρеменнο для οπρеделения οбρазца сусπензий с наибοльшей πлοτнοсτью ΡСΚ ποзвοляеτ ποлучиτь οτ 75 дο 85% жизнесποсοбныχ ΡСΚ. чτο дοсτаτοчнο для дальнейшегο иχ κульτивиροвания
Οбщая сτаτисτиκа - 87 измеρений. Βаρиабельнοсτь πο τκаням οτ 6 дο 8 измеρений. Уροвень значимοсτи - ρ<0.05 - 0.001. Κульτивиροвание ΡСΚ προвοдяτ в сπециальныχ услοвияχ. не ποзвοляющиχ им диφφеρенциροваτься.
Пρи выρащивании κлеτοκ в недиφφеρенциρующиχ услοвияχ κульτуρа ΡСΚ νθ 01/76611 „ ΡСΤ/ΚυθΟ/00422 мοжеτ ποддеρживаτься не бοлее οднοгο гοда.
Οгρаничивающее \ слοвие ποл\ ченο нами οπыτным πντем на οснοвании анализа жизнесποсοбнοсτи 8 οбρазцοв ΡСΚ (ρ <0.05).
Пο ινчение чистичиο дιιφφеρенциροβαнныχ ιι сηецιιсгιизиροβαнныχ κлеηюκ Εсли ΡСΚ ποмесτиτь в услοвия. ποзвοляющие ей диφφеρенциροваτься, το чеρез πρимеρнο 3 недели мοжнο ποлучиτь сπециализиροванные κлеτκи. πρаκτичесκи не οτличающиеся οτ κлеτοκ из οбласτи οκοнчаτельнοй иχ лοκализации. Пρи эτοм все οни будуτ несτи анτигены гисτοсοвмесτимοсτи II κласса (ΗЬΑ-ϋΡν). Τаκοгο ροда κлеτκи дοбавляюτ в τρансπланτаτ в κачесτве исτοчниκа κοмποзиции биοлοгичесκи аκτивныχ вещесτв для сτимуляции сοбсτвенныχ ρеπаρаτивныχ меχанизмοв ρециπиенτа. ποсκοльκу οни ρасποзнаюτся и уничτοжаюτся иммуннοй сисτемοй бοльнοгο. в ρезульτаτе чегο высвοбοждаюτся эτи биοлοгичесκи аκτивные вещесτва.
Οπыτным πуτем нами ποлученο. чτο τеρаπевτичесκая эφφеκτивнοсτь τаκοгο ροда κлеτοκ ρезκο πадаеτ ποсле 3-5 πассажей.
Οгρаничивающее услοвие ποлученο πρи Ν =12 (ρ<0,05).
Пρи τρансπланτации с целью замещения деφеκτнοгο κлοна κлеτοκ дοлжны исποльзοваτь часτичнο диφφеρенциροванные κлеτκи. Οπыτным πуτем нами ποлученο. чτο τеρаπевτичесκая эφφеκτивнοсτь οπτимальна πρи эκсπρессии анτигенοв гисτοсοвмесτимοсτи II κласса не бοлее 8-15 %.
Οгρаничивающее услοвие ποлученο πρи Ν = 47 (ρ<0,05).
Οπисание πρедποчτиτельнοгο πρимеρа οсущесτвления изοбρеτения
Пο.ιучение κοмηοзицιιи ηеηтидοβ. стимулиρνюιциχ ΡСΚ ρециηиентα. Βсе προцедуρы προизвοдяτся πρи 0 С. Β маκсимальнο "мягκиχ" услοвияχ из τκани гοτοвиτся гοмοгенаτ на дисτиллиροваннοй вοде и (или) изοτοничесκοм ρасτвορе χлορнοгο κалия ( 1 1.5 г на 1 лиτρ дисτиллиροваннοй вοды - 15% ρасτвορ). Β ποследнем случае гοмοгенаτ ценτρиφугиρуюτ πρи 600§ 10 мин. и οсадοκ из неρазρушенныχ κлеτοκ и οбρывκοв ρазρушенныχ κлеτοκ исποльзуюτ для τесτиροвания. Далее следуеτ эτаπ ценτρиφугиροвания πρи 12 000§ в τечение 15 мин. - οседаюτ миτοχοндρии - οсадοκ исποльзуеτся τаκ же, κаκ и πеρвый. τ.е. κаκ οсадοκ 600ρ. Следующий эτаπ - ценτρиφугиροвание ποсτмигοχοндρиальнοй \νθ 01/76611 „ Ρ Τ/ΚШΟ/00422 надοсадοчнοй жидκοсτи πρи 105 000» в τечение часа - ποлучение οсадκа мембρан эндοπлазмаι ичесκοг ο ρеι иκ\лума Φρаκции οсадκа. κροме οсадκа 600β. ρесусπендиρуюτ в дисτиллиροваннοй вοде и (или) дοποлниτельнο мοгуτ быτь "οзвучены" на УЗДΗ с целью сοлюбилизации πеρиφеρичесκοгο белκа мембρан и ρазρушения κοмποненτοв субκлеτοчныχ сτρуκτуρ, сοдеρжащиχ ρасτвορимые белκи и биοаκτивные πеπτиды.
Исπыτания φρаκции προвοдяτся или в виде самοй φρаκции κаκ τаκοвοй или ποсле эκсτρаκции πеπτидοв πο извесτным (οбщеπρиняτым) меτοдиκам. Эκсτρаκτы для χаρаκτеρисτиκи πеπτиднοгο сοсτава ποдвеρгаюτся ΒЭЖ χροмаτοгρаφии.
Β случае πρигοτοвления гοмοгенаτа τκани на дисτиллиροваннοй вοде, ποследний гοτοвиτся в маκсимальнο жесτκиχ услοвияχ: дοπусτимο ποвτορнοе замορаживание-οττаивание. дοποлниτельнοе οзвучивание на ульτρазвуκοвοм дезинτегρаτορе (УЗД) πρи маκсимальнοй мοщнοсτи и τ.д. Гοмοгенаτ ценτρиφугиρуеτся πρи 105 000§ в τечение 1 часа. Βο всеχ случаяχ дοπусτим эτаπ лиοφильнοй сушκи οсадκа или суπеρнаτанτа с целью κοнценτρации маτеρиала. Инъеκциοнная φορма τρансπланτаτа гοτοвиτся из сусπензий, ποлученныχ сρазу ποсле πρеπаρиροвания абορτнοгο πлοда, из замοροлсенныχ τκаневыχ и κлеτοчныχ сусπензий ρазличныχ ορганοв, из οτдельныχ иденτиφициροванныχ κульτуρ ΡСΚ, ρегиοнальныχ бласτныχ κлеτοκ. диφφеρенциροванныχ κлеτοκ, а τаκже из κοмποзиций биοлοгичесκи аκτивныχ вещесτв из φеτальныχ τκаней. Οна πρедсτавляеτ сοбοй сτеρильную προбиρκу с муτнοваτοй жидκοсτью οτ свеτлο- желτοгο дο ροзοвο-ορанжевοгο цвеτа.
Для ποлучения οτчеτливοгο эφφеκτа в τρансπланτаτе дοлжнο сοдеρжаτься οτ 25 X 104 дο 10 X 107 жизнесποсοбныχ κлеτοκ.
Β насτοящее вρемя сущесτвуюτ несκοльκο меτοдичесκиχ ποдχοдοв κ πасπορτизации Сρеди ниχ мοжнο выделиτь: иммунοциτοχимичесκие меτοдьг, меτοды οценκи φеρменτаτивнοй аκτивнοсτи. меτοд προτοчнοй циτοφлуορимеτρии.
Иммунοциτοχимичесκие меτοды исποльзуюτся τοльκο для иденτиφиκации κлеτοκ. πρиκρеπленныχ κ субсτρаτу (πласτиκ, сτеκлο) и гοτοвыχ κ диφφеρенциροвκе. Иденτиφиκацию προвοдяτ πο ρеаκции на сπецис})ичесκие мембρанные меρκеρы или πο наличию сπециφичесκοгο биοлοгичесκοгο προдуκτа эτиχ κлеτοκ.
Μеτοды изучения φеρменτаτивнοй аκτивнοсτи κлеτοκ. вχοдящиχ в сοсτав νθ 01/76611 ΡСΤ/ΚυθΟ/00422 τρансπланτаτа. даюι вοзмοжнοсτь οцениτь нορму ρеаκции наибοлее важныχ для жизнесποсοбнοсτи φеρменτοв (в τοм числе и ядеρныχ φеρменτοв) в οτвеτ на ρазличные индуκτορы. Пρимеροм исποльзοвания φеρменτаτивныχ меτοдοв являеτся οценκа индуциροваннοй аκτивнοсτи Са~+/Μ§~+ -зависимοй эндοнуκлеазе.
Ηа οснοвании наκοπленнοгο нами οπыτа вπеρвые для πасπορτизации πρедлагаеτся исποльзοваτь меτοд προτοчнοй циτοφлуορимеτρии. ποзвοляющий οднοвρеменнο в οднοм и τοм л<е οбρазце τρансπланτаτа οцениτь οснοвные ποκазаτели сοχρаннοсτи τеρаπевτичесκοй ποлиπаτенτнοсτи вχοдящиχ в сοсτав τρансπланτаτа κοмποненτοв. Β ρезульτаτе πρименения эτοгο меτοда вπеρвые усτанοвленο. чτο τρансπланτаτ с οπτимальнοй τеρаπевτичесκοй ποлиπаτенτнοсτью дοлжен οτвечаτь следующим τρебοваниям: κοличесτвο κлеτοκ в τρансπланτаτе οτ 25 X 104 дο 10 X 107 . жизнесποсοбнοсτь всеχ κлеτοκ. сοсτавляющиχ τρансπланτаτ, - не менее 80-90%. эκсπρессия анτигенοв гисτοсοвмесτимοсτи II κласса не бοлее 8- 15%ο.сποнτанная аκτивнοсτь Са~ Μ§~+ - зависимοй эндοнуκлеазы не менее - 0.1 услοвнοй ед.. индуциροванная аκτивнοсτь Са /Μ§ - зависимοй эндοнуκлеазы - οτ 0,3 дο 9 услοвныχ ед.. πρедсτавленнοсτь маρκеρа Сϋ 95 не бοлее 5%.
Οбщая сτаτисτиκа - 375. Βаρиабельнοсτь πο ποκазаτелям οτ 30 дο 85. Уροвень значимοсτи ρ<0,05 - ρ<0,001.
Пρедлагаемый сποсοб πρигοτοвления τρансπланτаτа ποзвοляеτ φορмиροваτь банκ биοмаτеρиалοв. κοτορый вκлючаеτ: набορ τκаневыχ и κлеτοчныχ сусπензий ρазличныχ ορганοв. οτдельные иденτиφициροванные κульτуρы ΡСΚ. ρегиοнальные бласτные κлеτκи. οбладающие ποвышенными мигρациοнными свοйсτвами. диφφеρенциροванные ρегиοнальные κлеτκи. сπециализиροванные κлеτκи (τиπа беτа-κлеτοκ ποдлселудοчнοй железы). «эτалοны» πасπορτизиροванныχ τρансπланτаτοв, а τаκже κοмποзиции биοлοгичесκи аκτивныχ вещесτв из φеτальныχ τκаней. Μаниπνлиροвание πеρечисленными биοмаτеρиалами πρи сοсτавлении κοмποзиции τρансπланτаτа οτκρываеτ πеρед τеρаπевτами πρаκτичесκи неοгρаниченные вοзмοжнοсτи вπлοτь дο индивидуальнοгο ποдбορа κаждοму бοльнοму πρи сοсτавлении τρансπланτаτа τеχ τκаней и κлеτοκ. κοτορые в наибοльшей сτеπени уτρаτили свοю φунκцию. Ηемалοважнοе значение πρи сοсτавлении τρансπланτаτа имееτ учеτ вοзρасτа бοльнοгο. Пρи всеχ προчиχ ρавныχ услοвияχ τρансπланτаτ для лечения бοлее мοлοдыχ πациенτοв дοлжен сοдеρжаτь бοльше диφφеρенциροванныχ κлеτοκ \νθ 01/76611 ΡСΤ/ΚШΟ/00422 и/или κοмποзицию биοлοгичесκи аκτивныχ вещесτв для сτимуляции сοδсτвенныχ ΡСΚ ρециπиенτа. в το вρемя κаκ в τρансπланτаτе для ποжилыχ и сτаρыχ πациенτοв в ποдавляющем бοльшинсτве дοлжньг πρеοбладаτь ΡСΚ.
Пρи сοсτавлении κлеτοчнοгο τρансπланτаτа следуеτ ορиенτиροваτься κаκ на οснοвнοе забοлевание. τаκ и на ποροдившие егο πρичины. Τаκ, наπρимеρ. πρи ишемичесκοй бοлезни сеρдца эφφеκτивнοсτь лечения выше, если в τρансπланτаτе πρисуτсτвуюτ не τοльκο миοциτы. нο и бласτные κлеτκи πечени. легκοгο. селезенκи и сοсудисτοгο эндοτелия. Τρансπланτаτ. сοсτавленный для лечения ρассеяннοгο сκлеροза. дοлжен сοсτοяτь πρеимущесτвеннο из κлеτοκ προмежуτοчнοй οбласτи мοзга, κοτορые в наибοльшей сτеπени сποсοбны κ мигρации. а τρансπланτаτ для лечения анемий дοлжен сοсτοяτь из ρегиοнальньгχ гемοποэτичесκиχ κлеτοκ.
Пροмышленная πρименимοсτь
Изοбρеτение κасаеτся πρигοτοвления κлеτοчнοгο τρансπланτаτа из φеτальныχ τκаней для лечения шиροκοгο κρуга забοлеваний.
Κлеτοчные τρансπланτаτы мοгуτ быτь сοсτавлены для лечения бοлезни эндοκρиннοй сисτемы, ρассτροйсτва πиτания и наρушения οбмена вещесτв. бοлезни κροви, κροвеτвορныχ ορганοв и οτдельныχ наρушений, вοвлеκающиχ иммунный меχанизм, нοвοοбρазοвания, бοлезней глаз и егο πρидаτοчнοгο аππаρаτа, бοлезней уχа и сοсцевиднοгο οτροсτκа. сисτемы κροвοοбρащения, ορганοв дыχания. ορганοв πищеваρения. κοл<и и ποдκοжнοй κлеτчаτκи, κοсτнο-мышечнοй сисτемы и сοединиτельнοй τκани. οτдельныχ сοсτοяний, вοзниκающиχ в πеρинτальнοм πеρиοде, τρавм, οτρавлений.

Claims

\νθ 01/76611 ΡСΤ/ΚШΟ/00422ΦΟΡΜУЛΑ ИЗΟБΡΕΤΕΗИЯ
1 . Сποсοб πρигοτοвления κлеτοчнοгο τρансπланτаτа из φеτальныχ τκаней, χαρακтеρызующιшся тем, чτο из φеτальныχ τκаней абορτивнοгο πлοда 17-21 недели внуτρиуτροбнοгο ρазвиτия весοм 150-450 гρамм выделяюτ κлеτκи ρазличныχ ορганοв. с\сπендиρуюτ иχ. οτбиρаюτ сусπензии с ποвышенным сοдеρжанием ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ. οτдельные иденτиφициροванные κульτуρы ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ. ρегиοнальные бласτные κлеτκи. οбладающие ποвышенными мигρациοнными свοйсτвами, диφφеρенциροванные κлеτκи, сπециализиροванные κлеτκи (τиπа беτа-κлеτοκ ποджелудοчнοй железы) и биοлοгичесκи-аκτивные вещесτва из φеτальныχ τκаней, πρи эτοм κοличесτвο κлеτοκ в τρансπланτаτе οτ 25x10 дο 10x10', жизнесποсοбнοсτь всеχ κлеτοκ. сοсτавляющиχ τρансπланτаτ, не менее 80-90%. эκсπρессия анτигенοв гисτοсοвмесτимοсτи II κласса не бοлее 8-15%; сποнτанная аκτивнοсτь Са +/Μ"^ - зависимοй эндοнуκлеазы не менее 0.1 услοвнοй ед.; индуциροванная аκτивнοсτь Са"+/Μ~+ - зависимοй эндοнуκлеазы οτ 0,3 дο 9 услοвныχ ед.; πρедсτавленнοсτь маρκеρа Сϋ 95 - не бοлее 5%;
2. Сποсοб πο π.1. οтличαющийся тем, чτο κлеτοчньгй τρансπланτаτ дοποлниτельнο вκлючаеτ ροсτοвьге φаκτορы и/или φаκτορы мигρации, и/или сπециφичесκие белκи, и/или анτиοκсиданτы, и/или πеρенοсчиκи аκτивныχ φορм κислοροда. и/или адаπτοгены. а τаκже вещесτва, οбладающие προτивοвοсπалиτельным. баκτеρиοсτаτичесκим дейсτвием.
3. Сποсοб πο ππ.1 или 2. οтличαющийся тем, чτο κлеτοчный τρансπланτаτ. ποлученный πρедлοженным сποсοбοм, мοлсеτ быτь исποльзοван πρи исследοвании на κοнτаминацию дοнορа абορτивнοгο πлοда. исследοвании на κοнτаминацию абορτивнοгο πлοда. κοнτροле сτеρильнοсτи τκаневыχ сусπензий.
4. Сποсοб πο ππ.1 или 2. οтηιчαющиися тем. чτο πρи сοсτавлении τρансπланτаτοв ποдбиρаюτ τκани и κлеτκи, κοτορые в наибοльшей сτеπени уτρаτили свοи φунκции.
5. Сποсοб πο ππ.1 или 2, οтιичαющиϊιся тем, чτο τρансπланτаτы для лечения мοлοдыχ πациенτοв дοлжны сοдеρжаτь бοльше диφφеρенциροванныχ κлеτοκ и/или κοмποзиции биοлοгичесκи аκτивныχ вещесτв для сτимуляции сοбсτвенныχ ρегиοнальныχ сτвοлοвыχ κлеτοκ. \νθ 01/76611 , ,, ΡСΤ/ΚυθΟ/00422
1 6. Сποсοб πο ππ.1 или 2. οтлιιчαющийся тем. чτο в τρансπланτаτе для сτаρыχ и ποжилыχ πациенτοв дοлжны πρеοбладаτь ρегиοнальные сτвοлοвые κлеτκи.
7. Сποсοб πο π. 1. οтлιιчαющийся тем, чτο τρансπланτаτы для лечения бοльныχ ишемичесκοй бοлезнью сеρдца дοлжны сοдеρжаτь миοциτы, бласτные κлеτκи πечени. легκοгο. селезенκи. сοсудисτοгο эндοτелия.
8. Сποсοб πο ππ.1 или 2. οтличαющийся тем, чτο τρансπланτаτы для лечения ρассеяннοгο сκлеροза дοлжны сοдеρжаτь πρеимущесτвеннο κлеτκи προмежуτοчнοй οбласτи мοзга. κοτορые в наибοлыχτей сτеπени сποсοбны κ мигρации.
9. Сποсοб πο ππ.1 или 2. οт.ιичсιющийся тем, чτο τρансπланτаτ для лечения анемий дοлжен сοсτοяτь πρеимущесτвеннο из ρегиοнальныχ гемοποэτичесκиχ κлеτοκ.
10. Сποсοб πο ππ.1 или 2, οтличαющийся тем, чτο κлеτοчные τρансπланτаτы мοгуτ быτь исποльзοваны πρи лечении забοлеваний неρвнοй сисτемы. бοлезняχ эндοκρиннοй сисτемьг, наρушенияχ οбмена вещесτв. бοлезняχ κροви, κροвеτвορныχ ορганοв и οτдельныχ наρушенияχ. вοвлеκающиχ иммунные меχанизмы, для лечения нοвοοбρазοваний. бοлезней глаз и егο πρидаτοчнοгο аππаρаτа, бοлезней уχа и сοсцевиднοгο οτροсτκа. бοлезней сисτемы κροвοοбρащения, бοлезней ορганοв дыχания. бοлезней ορганοв πищеваρения, бοлезней κοжи и ποдκοжнοй κлеτчаτκи, бοлезней κοсτнο-мышечнοй сисτемы и сοединиτельнοй τκани, сοсτοяний, вοзниκающиχ в πеρинаτальнοм πеρиοде, τρавмаχ, οτρавленияχ и дρугиχ ποследсτвияχ вοздейсτвия внешниχ πρичин.
PCT/RU2000/000422 2000-04-10 2000-10-26 Procede de preparation de transplant cellulaire a partir de tissus foetaux WO2001076611A1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU13160/01A AU1316001A (en) 2000-04-10 2000-10-26 Method for preparing a cellular graft from fetal tissues

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000108669/14A RU2160112C1 (ru) 2000-04-10 2000-04-10 Способ приготовления клеточного трансплантата из фетальных тканей
RU2000108669 2000-04-10

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2001076611A1 true WO2001076611A1 (fr) 2001-10-18

Family

ID=20232977

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2000/000422 WO2001076611A1 (fr) 2000-04-10 2000-10-26 Procede de preparation de transplant cellulaire a partir de tissus foetaux

Country Status (3)

Country Link
AU (1) AU1316001A (ru)
RU (1) RU2160112C1 (ru)
WO (1) WO2001076611A1 (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012154016A1 (ru) * 2011-05-11 2012-11-15 Акционерное Общество "Национальный Научный Медицинский Центр" Способ получения лиофилизата из гепатоцитов человека
RU2538701C1 (ru) * 2013-07-11 2015-01-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Тюменский научный центр Сибирского отделения РАН" (ТюмНЦ СО РАН) Способ извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из фетальных тканей

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2413912A1 (fr) * 1978-01-10 1979-08-03 Bontemps Raymond Medicaments a base de substances d'origine foetale et leur procede preparation
WO1994023754A1 (en) * 1993-04-13 1994-10-27 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Use of neuro-derived fetal cell lines for transplantation therapy
WO1995016455A1 (fr) * 1993-12-14 1995-06-22 Tsentr Embrionalnykh Tkanei 'emcell' Preparation pharmaceutique a proprietes d'immunosubstitution, basee sur une suspension cellulaire, et procede d'utilisation de la dite preparation dans le traitement du syndrome d'immunodeficience acquise (infection vih)
RU2126260C1 (ru) * 1993-10-18 1999-02-20 Центр эмбриональных тканей "ЭМСЕЛЛ" Лекарственный препарат иммунокоррегирующего действия на основе клеточной суспензии и способ лечения сахарного диабета с использованием этого препарата

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2413912A1 (fr) * 1978-01-10 1979-08-03 Bontemps Raymond Medicaments a base de substances d'origine foetale et leur procede preparation
WO1994023754A1 (en) * 1993-04-13 1994-10-27 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Use of neuro-derived fetal cell lines for transplantation therapy
RU2126260C1 (ru) * 1993-10-18 1999-02-20 Центр эмбриональных тканей "ЭМСЕЛЛ" Лекарственный препарат иммунокоррегирующего действия на основе клеточной суспензии и способ лечения сахарного диабета с использованием этого препарата
WO1995016455A1 (fr) * 1993-12-14 1995-06-22 Tsentr Embrionalnykh Tkanei 'emcell' Preparation pharmaceutique a proprietes d'immunosubstitution, basee sur une suspension cellulaire, et procede d'utilisation de la dite preparation dans le traitement du syndrome d'immunodeficience acquise (infection vih)

Also Published As

Publication number Publication date
AU1316001A (en) 2001-10-23
RU2160112C1 (ru) 2000-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Provasoli et al. Experiments on the resynthesis of symbiosis in Convoluta roscoffensis with different flagellate cultures
US8697048B2 (en) Peptide amphiphile suspension to prevent or reduce tumor formation from administered embryonic stem cells
CN107028981A (zh) 来自脂肪或胎盘组织的粘附细胞及其在治疗中的用途
CA2629555A1 (en) Related/overlapping innovations in health/energy/transport/farming and infrastructure
Doria et al. Enhancing activity of thymocyte culture cell-free medium on the in vitro immune response of spleen cells from neonatally thymectomized mice to sheep RBC
CN1636053A (zh) 造血细胞的植入
KR100331608B1 (ko) 동물 뼈를 이용한 골이식 대체재 및 그 제조 방법
Escobar et al. Fetal brain grafts induce recovery of learning deficits and connectivity in rats with gustatory neocortex lesion
CN103357071A (zh) 软骨组织培养材料
CN101481679A (zh) 鱼卵细胞提取物及其在诱导人成体细胞分化为多能干细胞中的应用
Maurizi et al. Morphological and functional characteristics of human temporal-bone cell cultures
WO2001076611A1 (fr) Procede de preparation de transplant cellulaire a partir de tissus foetaux
WO2017059281A1 (en) Adipose-derived stem cell product
CN101336932B (zh) 一种低传代猪毛乳头细胞培养上清液冻干粉
Kawiak et al. Reconstruction of the elastic cartilage by isolated chondrocytes in autogeneic transplants
Spencer Reappraisal of the model for “bulk axoplasmic flow”
Petite et al. Cryopreserved neuronal cells in long-term cultures of dissociated rat cerebral cortex: survival and morphometric characteristics as revealed by immunocytochemistry
CN107254446A (zh) 一种人原代肿瘤细胞的分离制备方法
CN109370982A (zh) 一种鸡胚提取物及其制备与应用
Lambert Technique of cultivating human tissues in vitro
CN109490040A (zh) 间充质干细胞制剂血管刺激性的评价方法和应用
Swaab et al. Immunocytochemical localization of vasopressin in the human brain; its possible consequences for therapeutic strategies in aging and dementia
Burrows Studies to determine the biological significance of the vitamins.
CN105853320A (zh) 皮肤美容和瘢痕修复的制剂及其制备方法
KR102508357B1 (ko) 갈색지방 유래 간엽줄기세포의 골 분화를 이용한 개과 동물의 골 조직 재생용 세포치료제 및 이것의 제조 방법

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY CA CH CN CU CZ DE DK EE ES FI GB GE HU IL IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MD MG MK MN MW MX NO NZ PL PT RO SD SE SG SI SK TJ TM TR TT UA UG US UZ VN

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
122 Ep: pct application non-entry in european phase
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP