WO2001028581A1 - Compositions medicinales pouvant inhiber gvhd - Google Patents

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WO2001028581A1
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stem cell
gvhd
peripheral blood
transplantation
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Motoyuki Kataoka
Kaname Yamamoto
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Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent for graft-versus-host disease (hereinafter abbreviated as GVHD) containing human granulocyte colony-stimulating factor (hereinafter abbreviated as G-CSF) as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to a pharmaceutical composition containing G-CSF as an active ingredient, which is effective for treating GV HD occurring after peripheral blood stem cell transplantation.
  • GVHD graft-versus-host disease
  • G-CSF human granulocyte colony-stimulating factor
  • hematopoietic stem cell transplantation has been widely performed for the treatment of hematopoietic tumors, solid tumors, leukemia, and aplastic anemia.
  • Hematopoietic stem cell transplantation depends on stem cell source and donor selection, allogeneic bone marrow transplantation between relatives and unrelated persons, peripheral blood stem cell transplantation, umbilical cord blood stem cell transplantation, autologous bone marrow transplantation performed by the individual, peripheral blood stem cell transplantation , And cord blood stem cell transplantation.
  • allogeneic bone marrow transplantation is a widely used treatment, but it has problems such as a heavy burden on donors due to bone marrow collection.
  • Allogeneic peripheral blood stem cell transplantation has advantages such as less burden on donors when collecting hematopoietic stem cells and quick recovery of neutrophils and platelets in the recipient.
  • peripheral blood stem cell transplantation also causes GVHD similarly to bone marrow transplantation, and its control is a problem.
  • GVHD is a general term for diseases caused by an immune response that occurs in transferred or transplanted immunocompetent cells against host tissues. It is thought that the main cause is that immunocompetent cells such as mature T cells contained in the peripheral blood to be transferred or transplanted cause an immune response to the tissues of the recipient.
  • GVHD has acute and chronic diseases, such as cutaneous symptoms, diarrhea, jaundice, etc., and sometimes causes serious effects that are fatal.
  • immunosuppressants such as methotrexate-cyclosporin A and by removing mature T cells from transplanted cells (grafts).
  • methotrexate-cyclosporin A When using methotrexate-cyclosporin A, the side effects of these on the living body are a major problem.
  • the side effect of cyclosporin A is strong nephrotoxicity, and the side effect of methotrexet is myelosuppression.
  • GVHD could be suppressed by removing mature ⁇ cells from the transplanted cell group, but the antitumor effect was reduced, such as recurrence of leukemia (Blood, 78: 2120-2123, 1991). reference). Therefore, T cell ablation therapy must address antitumor effects.
  • G-CSF granulocyte colony-stimulating factor
  • the peripheral blood stem cell group used for transplantation has a significantly lower stem cell ratio and a different stem cell property compared to the bone marrow cell group.
  • the mechanism of action to suppress GVHD after transplantation is thought to be different from that of bone marrow transplantation.
  • G-CSF is administered to donors to induce peripheral blood stem cells because peripheral blood has a much smaller number of hematopoietic stem cells than bone marrow. It has been reported that the cell population from is favorable for protection against infection and antitumor effect, but more careful analysis is required for induction and exacerbation of GV HD.
  • the present inventors have found that administration of G-CSF to recipients after allogeneic peripheral blood transplantation can suppress GVHD without causing any unexpected side effects, and completed the present invention. did.
  • FIG. 1 is a graph showing the effect of G-CSF administration on the survival rate of recipient mice into which splenocytes of a donor mouse administered G-CSF have been transferred via the tail vein.
  • FIG. 2 is a graph showing the effect of G-CSF administration on the ratio of NKl.1-positive CD8-positive cells in peripheral blood mononuclear cells after splenocyte transplantation into recipient mice.
  • the vertical axis of the graph indicates the percentage (%) of NK1.1-positive CD8-positive cells in peripheral blood mononuclear cells.
  • the horizontal axis indicates the number of days elapsed after transplantation.
  • the present inventors previously inactivated X-rays of spleen cells containing stem cells (hereinafter referred to as SPCs) induced by administering G-CSF to donor mice to inactivate the function of immunocompetent cells.
  • GVHD was developed by transplantation into recipient mice.
  • G—CSF was administered to recipient mice after SPC transplantation, the life was prolonged compared to the control group (G-CSF non-administered group), but this phenomenon was considered to be due to suppression of GVHD development (see Experimental Example 1).
  • the recipient mice in the G-CSF administration group tended to improve compared to the control group.
  • the control recipient mice developed GVHD after SPC transplantation, but markedly increased NK1. ⁇ and CD8 + cells in peripheral blood mononuclear cells as compared to normal mice.
  • CD56 + CD8 + cells that are positive for both human NK markers and CD8 T cell markers, such as NK1.1 + and CD8 + cells have cytotoxic effects (J. Immunol-(2000) , 164 (3), 1148-1152), these NK1.1 + and CD8 + cells are also likely to have cytotoxic effects, suggesting that these cells are strongly involved in the development of GVHD .
  • G—CSF administration In the recipient mice, GVHD was suppressed depending on the dose of G—CSF, and peripheral blood NK1.1 + and CD8 + cells were reduced (see Experimental Example 2). From these results, it was discovered that administration of G-CSF to recipient mice after SPC transplantation suppressed GVHD.
  • peripheral blood stem cell transplantation In experiments of peripheral blood stem cell transplantation, spleen stem cells have been used in place of peripheral blood stem cells (Blood, Vol 93, No 12 (June 15), 1999: P4071-4078), and peripheral blood stem cell transplantation and spleen
  • stem cell transplantation When compared with stem cell transplantation, the increase in stem cell induction in peripheral blood and spleen cells after G-CSF administration, stem cell surface antigen, and the incidence of GVHD in recipients after cell transfer were observed. Since they were similar, it is presumed that peripheral blood stem cell transplantation has the same GVHD suppression effect as spleen stem cell transplantation.
  • G-CSF which is an active ingredient of the present invention, can be used as long as it is highly purified human G-CSF. Specifically, it has substantially the same biological activity as that of mammals, especially human G-CSF, and is of natural origin, obtained by genetic recombination, and obtained. G—Includes chemically modified CSF. G-CSF obtained by the genetic recombination method has the same amino acid sequence as natural G-CSF, or has one or more amino acids missing, substituted, or added in the amino acid sequence example. Including those having the biological activity.
  • the G-CSF in the present invention may be produced by any method, such as those obtained by culturing a cell line of a human tumor cell and extracting and separating and purifying it from various cell lines, or E. coli, It is produced in yeast, Chinese hamster ovary (CHO) cells, C127 cells, etc., extracted and separated and purified by various methods. Most preferably, it is produced by a CHO cell using a genetic recombination method.
  • the GVHD inhibitor of the present invention may contain a suspending agent, a solubilizing agent, a stabilizing agent, a tonicity agent, a preservative, an anti-adsorption agent, etc., as necessary according to the administration method and dosage form.
  • a suspending agent include, for example, methylcellulose, polysorbate 80, hydroxyethylcellulose, gum arabic, tragacanth powder, sodium carboxymethylcellulose, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, and the like.
  • the adjuvant examples include polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polysorbate 80, nicotinamide, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, magrogol, castor oil fatty acid ethyl ester, and the like.
  • examples include serum albumin, dextran 40, methylcellulose, gelatin, sodium sulfite, sodium metasulfite, etc.
  • examples of the tonicity agent include D-mannitol, sorbitol, and the like.
  • the preservative examples include methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, sorbic acid, phenol, cresol, and cresol closol
  • examples of the anti-adsorption agent include human serum albumin. , Lecithin, dextran, ethylene oxide / propylene oxide copolymer, hydroxypropyl cellulose, methyl cellulose, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyethylene glycol and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention containing human G-CSF as an active ingredient is suitable for injection (subcutaneous, intradermal, intramuscular, intravenous and intraperitoneal) or for transdermal, transmucosal and nasal administration.
  • a dosage form suitable for oral administration tablettes, capsules, granules, liquids, suspensions, etc.).
  • the pharmaceutical composition of the present invention containing human G-CSF as an active ingredient is effective for suppressing acute GVHD and chronic GVHD.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is considered to be effective not only for suppressing GVHD after peripheral blood stem cell transplantation but also for suppressing GVHD after transplantation of other hematopoietic stem cells except bone marrow cell transplantation.
  • the dose and frequency of G-CSF contained in a preparation containing GC SF as an active ingredient can be determined in consideration of the condition of the target patient, but is usually 0.1 / ⁇ 9 / 3 ⁇ 4 per adult: 9 ⁇ 100 ⁇ 9/9, preferably [or l tg / kg to: 1 times the formulation containing LOAtg / kg of human G-CSF in 1 day, but c may be administered noon evening 3 times 2 times or morning morning and evening
  • the present invention is limited by the content, administration route, administration frequency, etc. of human G-CSF It is not something to be done.
  • the administration when neutrophil counts increased somewhat (for example, several 5000 / mm 3 or more neutrophils)
  • the timing of starting administration of G—CSF is not particularly limited.
  • 6- to 10-week-old male C57BL / 6N donor mice (Charles River Japan) were given G—CSF (Chugai Pharmaceutical), 100 ⁇ g / kg for 4 days in the morning (8: 00-10: 00) and evening (16) : 00-18: 00) Twice, and on the morning of the fifth day, stem cells were induced in the spleen by subcutaneous administration.
  • Splenocytes of donor mice (2.5 ⁇ 10 7 cells / head) were administered to 6- to 10-week-old female BALB / C recipient mice (Charles River Japan, Japan) exposed to lethal radiation (X-ray; 850R) was transferred from the tail vein.
  • G-CSF 10, 30, or 100 g / kg was subcutaneously administered to recipient mice for 7 days from the day after the transfer, followed by a 2-day rest and a 5-day dosing schedule repeated during the study period.
  • the control group was administered a diluent of G-CSF (Vehicle: 0.01% Tween20 (Nikko Chemical), 5 * mannii! Il (Nacalai Tesque) solution).
  • the incidence of GV HD in the recipient mice was compared with the survival rate and changes in body weight. The results for the survival rate are shown in FIG. As is evident from the results, the average survival time of the control group (vehicle group) recipient mice was 17.0 soils and 2.71 days.
  • peripheral blood cell group of recipient mice on day 19 of cell transfer used in Experimental Example 1 was examined by flow cytometry (FACScan: Becton Dickinson). . Approximately 20 L of peripheral blood was collected from the dorsal metatarsal vein of each group of mice, and PE-conjugated anti-CD8 antibody and FITC-conjugated
  • the ratio of NK1.1 +, CD8 + cells was detected as 14.6 in the control group, but when 0- ⁇ 3 ⁇ was administered, 10 9 / 3 ⁇ 4: 10.6 in the 9 group and 10.0 in the 30Atg / kg group.
  • the dose was also reduced in the 100 X g / kg group to 9.0, depending on the dose, and the group showed about half the value of the control group.
  • This NK1.1 + and CD8 + cell group does not appear when normal mice (BALB / c, C57BL / 6N) or syngeneic C57BL / 6N are used in recipient mice.
  • a strong inverse correlation was found between the composition ratio of + and CD8 + cells and the survival rate of mice.
  • NKl.r, CD8 + cells are a group of cells that play a central role in the development of GVHD. Therefore, it is considered that in vivo administration of G-CSF suppressed the appearance of NKl.r, CD8 + cells showing cytotoxic effects and suppressed the onset of GVHD.
  • Human G—CSF (lOmM phosphate buffer PH7.0) 50 g / mL with O.lmg / mL of polysorbate 20 (Tween20: polyoxyethylene sorbin monolaurate) as a nonionic surfactant
  • Teween20 polyoxyethylene sorbin monolaurate
  • the obtained solution was filled in a sterilized vial bottle, stoppered with a similarly sterilized rubber stopper, and subsequently wrapped around with an aluminum cap to obtain a solution solution for injection.
  • this Injectable preparations are stored in the following cool lot:
  • Human G—CSF (lOmM phosphate buffer pH 7.0) 100 g / ml of non-ionic surfactant polysorbate 80 (Tween80: polyoxyethylene sorbin monooleate) was adjusted to O.lmg / mL.
  • Teween80 polyoxyethylene sorbin monooleate
  • the obtained solution was filled in a sterile-treated vial bottle, stoppered with a similarly sterilized rubber stopper, and subsequently wrapped around with an aluminum cap to obtain a solution preparation for injection. Store this injectable formulation in a cool place no more than 10.
  • Human G-CSF (10m phosphate buffer pH 7.0) 50g / ml and non-ionic surfactant polysorbate 20 (Tween20: polyoxyethylene sorbin monolaurate) 0.1mg / mL, HSA 10mg / mL and After adding and dissolving mannitol to a concentration of 50 mg / ml, the solution is sterilized by filtration through a membrane filter having a pore size of 0.22 tm. The obtained solution was filled into a sterilized vial, a rubber stopper similarly sterilized was half-stopped, and lyophilized to obtain a lyophilized preparation for injection. This freeze-drying agent for injection should be stored at a temperature lower than room temperature and dissolved in distilled water for injection before use.
  • the pharmaceutical composition containing human G-CSF as an active ingredient of the present invention is considered to be effective not only for suppressing acute GVHD and chronic GVHD but also for suppressing GVHD after umbilical cord blood stem cell transplantation.

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Description

明細書
GVHD抑制用医薬組成物 [技術分野]
本発明はヒト顆粒球コロニー刺激因子 （以下 G— CSFと略す） を有効成分と する移植片対宿主病 （graft -versus -host disease) (以下 GVHDと略す） の治療剤に関する。 更に詳細には、 本発明は、 末梢血幹細胞移植後に生じる GV HDの治療に有効な G— C SFを有効成分とする医薬組成物に関する。
[背景技術]
近年、 造血器腫瘍や固形癌、 白血病、 再生不良性貧血の治療の目的で広く造血 幹細胞移殖が行われている。 造血幹細胞移植は幹細胞ソースの違いやドナーの選 択によって、 血縁者、 非血縁者間の同種骨髄移植、 末梢血幹細胞移植、 臍帯血幹 細胞移植、 また本人によって行われる自家骨髄移植、 末梢血幹細胞移植、 および 臍帯血幹細胞移植等がある。 これらの造血幹細胞移植のうち、 同種骨髄移植は普 及した治療法であるが、 骨髄採取に伴うドナーへの負担が大きいなどの問題があ る。
最近は、 ドナーへの負担が大きい同種骨髄移植に代えて、 同種末梢血幹細胞移 植の臨床応用が進んでいる。 同種末梢血幹細胞移植は、 造血幹細胞採取の際にド ナ一の負担が少ないこと、 レシピエントの好中球や血小板の回復が早いこと等の 利点がある。 しかしながら、 末梢血幹細胞移植も、 骨髄移植と同様に GVHDを 起すため、 その制御が問題となっている。
GVHDは移入又は移植された免疫担当細胞が、 宿主の組織に対して起す免疫 反応により生じる疾患の総称である。 移入または移植される末梢血中に含まれる 成熟 T細胞等の免疫担当細胞がレシピエントの組織に対して免疫応答を起こすこ とが主な原因であると考えられている。 GVHDは急性及び慢性の疾患があり、 その症状としては皮膚症状、 下痢、 黄疸等があり、 時には致死的となる重篤な作 用を発現する。 これまで GVHDを抑制するにはメトトレキセートゃシクロスポリン A等の免 疫抑制剤を用いる方法と、 移植細胞群 （移植片） から成熟 T細胞を除去する方法 とが使用されている。 メトトレキセートゃシクロスポリン Aを用いる場合にはそ れらが生体に及ぼす副作用が大きな問題となっている。 シクロスポリン Aの副作 用は強い腎毒性であり、 メトトレキセ一卜の副作用は骨髄抑制である。
また、 移植細胞群から成熟 τ細胞を取り除く方法により GVHDが抑制可能で あつたが、 白血病の再発が認められるなど抗腫瘍効果が減弱するという欠点があ つた （Blood, 78 ： 2120-2123, 1991参照）。 従って、 T細胞除去療法は抗 腫瘍効果への対応が必要である。
ドナーに顆粒球コロニー刺激因子 （G— CS F) を投与して誘導した造血幹細 胞をレシピエントに移植し、 その後のレシピエントの GVHDに及ぼす影響につ いて様々な研究が行われている。 ヒトに G— C S Fを投与すると単球又は CD4- CD8" β +細胞が増加し、これらの細胞は Τ細胞の増殖能を抑制しうることが報告 されている（臨床免疫、 30(6) :833-838, 1998参照）。他家骨髄移植（Allo-BMT) 後 G— C S Fを投与すると、 急性 GVHDの発症が G— C S F非投与群に比べて 抑制される傾向が報告されている （Int. J. Hematol..62 ： 235, 1995参 照） 。 しかしながら、 移植に用いる末梢血幹細胞群は骨髄細胞群と比較すると、 幹細胞比率が著しく低く、 また幹細胞の性状等も異なるため、 末梢血幹細胞移植 後に生じる GVHDを抑制する作用機序は骨髄移植によるそれと異なると考えら れている。
末梢血中には、 骨髄に比較して造血幹細胞数が極めて少ないため、 ドナ一に G -CSFを投与して末梢血幹細胞を誘導することが行われているが、 G— C S F 投与群のドナーからの細胞群は感染防御ゃ抗腫瘍作用には好都合であるが、 G V HDの誘導と増悪に関してはさらに慎重な解析が望まれていることが報告されて いる。 特にドナ一に対する G—CS Fのインビボでの投与と、 それによつて誘導 された末梢血幹細胞の移植後に生じるレシピエン卜の慢性 GVHDとの関連につ いては未だ十分に解析されていない （Hematology & Oncology 37 (5) ： 425-432,1998参照 このような状況において、 副作用が少なく、 しかも同種末梢血幹細胞移植後に 生じ得る GVHDを有効に抑制する方法、 又はそのための薬剤の開発が望まれて いた。
[発明の開示]
本発明者等は同種末梢血移植を行った後に、 レシピエントに対して G— CSF を投与することによって、 意外にも格別の副作用も生じさせることなく GVHD を抑制できることを見出し、 本発明を完成した。
[図面の簡単な説明]
図 1は G— C S Fを投与したドナーマウスの脾細胞を尾静脈から移入したレ シピエントマウスへの、 G— CSF投与が生存率に及ぼす影響を示すグラフであ る。
図 2はレシピエントマウスへの脾細胞移植後における、 末梢血単核球中の N Kl. 1陽性 CD 8陽性細胞の比率に及ぼす、 G— CSF投与の影響を示すグラ フである。 グラフの縦軸は、 末梢血単核球中の NK1. 1陽性 CD 8陽性細胞の 比率 （％) を示す。 横軸は移植後の経過日数を示す。
本発明者等は、 ドナーマウスに G— CS Fを投与して誘導した幹細胞を含む脾 臓細胞 （以後 S PCという） を、 予め X線照射して免疫担当細胞の機能を失活さ せたレシピエントマウスに移植して GVHDを発症させた。 S P C移植後 G— C SFをレシピエン卜マウスに投与すると、 対照群 （G— CS F非投与群） に比べ 延命したが、 この現象は GVHD発症抑制によると考えられた（実験例 1参照）。
GVHDの発症をレシピエントマウスの脱毛程度で判定すると、 G— C S F投 与群のレシピエントマウスは対照群に比べては改善傾向にあった。 対照群のレシ ピエントマウスは S P C移植後 GVHDを発症するが、 末梢血単核球中に正常マ ウスに比べて NK1. Γ , CD8+細胞の著しい増加が認められた。 NK1.1+ ,CD8+細胞 のように、 ヒト NKマ一カーと CD8T細胞マーカー両方が陽性である CD56 + CD8 +細胞が細胞傷害作用を有していることから（J. Immunol - (2000) , 164 (3) , 1148-1152)、 この NK1.1+,CD8+細胞も細胞傷害作用を有している可能性が高 く、 この細胞が GVHDの発症に強く関与していると考えられる。 G— CS F投与 レシピエントマウスは G— C S Fの投与量に依存して GVHDが抑制され、 末梢 血中 NK1.1+,CD8+細胞が減少していた （実験例 2参照）。 このような結果から S PC移植後のレシピエントマウスに G— CSFを投与することにより GVHDを 抑制することが発見された。 末梢血幹細胞移植の実験では、 脾臓幹細胞が末梢血 幹細胞の代わりに用レ られており（Blood, Vol 93, No 12 (June 15) , 1999： P4071-4078), 又、 末梢血幹細胞移植と脾臓幹細胞移植とを比較した場合、 G -CS F投与後の末梢血中と脾臓細胞中との幹細胞の誘導増加現象、 幹細胞の細 胞表面抗原、 および細胞移入後のレシピエントにおける GVHDの発症状況が類 似していた為、 末梢血幹細胞移植においても脾臓幹細胞移植と同様の GVHD抑 制効果があると推測される。
[発明を実施するための好ましい形態]
本発明の有効成分である G— C S Fは高度に精製されたヒト G— C S Fであれ ば全て使用できる。 具体的には、 哺乳動物、 特にヒト G— CSFと実質的に同じ 生物学的活性を有するものであり、 天然由来のもの、 および遺伝子組換え法によ つて得られたもの、 又、 得られた G— C S Fを化学修飾したものを含む。 遺伝子 組換え法によって得られる G— CSFには天然の G— CSFとァミノ酸配列が同 じであるもの、あるいは該アミノ酸配列例中の 1または 2以上のアミノ酸を欠如、 置換、 付加したもので前記生物学的活性を有するものを含む。
本発明における G— CSFは、 いかなる方法で製造されたものでもよく、 ヒト 腫瘍細胞の細胞株を培養し、 これから種々の方法で抽出し分離精製したもの、 あ るいは遺伝子工学的手法により大腸菌、 ィ一スト菌、 チャイニーズハムスター卵 巣 （CHO) 細胞、 C127細胞などに産生せしめ、 種々の方法で抽出し分離精製した ものが用いられる。最も好ましくは CHO細胞によって遺伝子組換え法を用いて生 産されたものである。 （例えば、 特公平 1— 44200号公報、 特公平 2— 5395号公 報、特開昭 62— 129298号公報、特開昭 62— 132899号公報、特開昭 62— 236488 号公報、 特開昭 64— 85098号公報に記載されたものを含む。）
更に本発明の GVHD抑制剤については、 その投与方法や剤型に応じて必要に より、 懸濁化剤、 溶解補助剤、 安定化剤、 等張化剤、 保存剤、 吸着防止剤等を添 加することができる。 ここで、 懸濁化剤の例としては例えばメチルセルロース、 ポリソルベート 80、 ヒドロキシェチルセルロース、 アラビアゴム、 トラガント末、 カルポキシメチルセルロースナトリウム、 ポリオキシエチレンソルビ夕ンモノラ ウレ一ト等を挙げることができ、 溶液補助剤としては例えばポリオキシエチレン 硬化ヒマシ油、 ポリソルベート 80、 ニコチン酸アミド、 ポリオキシエチレンソル ビタンモノラウレート、 マグロゴール、 ヒマシ油脂肪酸ェチルエステル等を挙げ ることができ、安定化剤としては例えばヒト血清アルブミン、デキストラン 40、 メチルセルロース、 ゼラチン、 亜硫酸ナトリウム、 メタ亜硫酸ナトリウム等を挙 げることができ、 等張化剤としては例えば D—マンニトール、 ソルビトール等を 挙げることができ、 また、 保存剤としては例えばパラォキシ安息香酸メチル、 パ ラオキシ安息香酸ェチル、 ソルビン酸、 フエノール、 クレゾ一ル、 クロ口クレゾ —ル等を挙げることができ、 更に、 吸着防止剤としては例えばヒト血清アルブミ ン、 レシチン、 デキストラン、 エチレンオキサイド ·プロピレンオキサイド共重 合体、 ヒドロキシプロピルセルロース、 メチルセルロース、 ポリオキシエチレン 硬化ヒマシ油、 ポリエチレングリコール等をあげることができる。
本発明のヒト G— CSFを有効成分とする医薬組成物は、 注射剤（皮下、 皮内、 筋肉内、 静脈内および腹腔内） として、 または経皮、 経粘膜、 経鼻等の投与に適 した剤形、 又は経口投与に適した剤形 （錠剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 液剤、 懸濁 剤等） であっても良い。
本発明のヒト G— CSFを有効成分とする医薬組成物は、 急性 GVHD及び慢性 GVHDの抑制に有効である。 又、 本発明の医薬組成物は、 末梢血幹細胞移植後 の GVHDだけでなく、 骨髄細胞移植を除く他の造血幹細胞移植後の GVHDの 抑制にも有効であると考えられる。
G-C S Fを有効成分とする製剤に含まれる G— C S Fの投与量、 投与回数は 対象の疾患患者の病状を配慮して決めることができるが、 通常成人一人当たり 0.1/^9/¾：9〜100^9/ 9、好ましく【ま l tg/kg〜： LOAtg/kgのヒト G— C S Fを 含有する製剤を 1日に 1回、朝夕 2回あるいは朝昼夕 3回投与することができる c しかし本発明はヒト G— CSFの含有量、 投与経路、 投与回数等によって限定さ れるものではない。 造血幹細胞移植時の好中球数の増加促進が目的で G— C S F を投与する場合には、 好中球数がある程度増加した時 （例えば好中球数 5000/ mm3以上） には投与を中止する必要があるが、 GVHDを抑制する目的で G— C SFを投与する場合には、 好中球数がある程度増加していても GVHDを抑制す る為に投与を続けることが可能である。 又、 G— CS Fの投与開始時期も特に限 定されない。
本発明を、 以下の実験例及び実施例により、 更に詳細に説明する。
(実験例 1 )
延命効果の実験
6〜10週齢の雄性 C57BL/6Nドナーマウス （日本チャールズリバ一） に G— CS F (中外製薬） ，100^g/kg を 4 日間、 朝（8:00〜10:00) 夕（16:00〜 18:00)2回、 さらに 5 日目の朝、 皮下投与して脾臓中に幹細胞を誘導した。 致 死量の放射線照射（X線； 850R)を施した 6〜 10週齢の雌性 BALB/C レシピエ ン トマウス （ 日本チャールズリ バ一） に、 ドナーマウスの脾細胞 (2.5X107cells/head) を尾静脈から移入した。 さらに、 レシピエントマウス に G— C S F ,10,30あるいは 100 g/kgを移入翌日より 7 日間皮下投与した 後、 2日間の休薬と 5日間の投与スケジュールを検討期間中繰り返した。 対照群 には G— CSFの希釈用液 （Vehicle： 0.01 %Tween20 (二ッコゥケミカル）、 5*マンニ! ^一ル（ナカライテスク）溶液） を投与した。 レシピエントマウスの GV HDの発症は生存率と体重の変化で比較検討した。 生存率についての結果を図 1に示した。 その結果から明らかなように、 対照群 （Vehicle群） のレシピエン トマウスの平均生存日数は 17.0土 2.71日であつたが、 G— CS Fを皮下投与す ると、 10 Xg/kg群力 24.3±1.05 曰（pく 0.05)、 30 ^ g/kg群力 37.4 ± 3.91 日（pく 0.005)、 さらに 100^g/kg群が、 33.0±1.15 曰（p<0.001)と、 対照群 に比べて有意な延命効果が認められた。 この延命効果は G— CS F30Wg/kg投 与群が最も強かった。 死亡したマウスは GVHD発症の指標である体重減少が認 められた。 従って、 これらマウスの死因は GVHDによると考えられた。 また、 本検討で明らかとなった G— CS Fの皮下投与による延命効果は GVHDの発生 抑制に起因したと考えられる。
(実験例 2 )
細胞増殖抑制の実験
GVHDに関与する細胞群を特定することを目的に、 実験例 1で用いた、 細胞 移入 19 日目のレシピエントマウスの末梢血中細胞群をフローサイトメトリー (FACScan :べクトンディキンソン） で検討した。末梢血は約 20 Lをそれぞれ の群のマウスの背側中足静脈から採取し、 PE 結合抗 CD8 抗体， FITC 結合抗
NK1.1抗体 （ファーミンジェン） で 4で，30分間染色した後、 0.75%塩化アン モニゥム Tris— HC1バッファーで溶血を行った後に、 FACS用培地（20%FCS、 0.1% NaN3, lOmM PBS) で 2回洗浄し、 FACScan を用いて細胞比率を解析し た。 結果を図 2に示す。
その結果によれば、 NK1.1+,CD8+細胞の比率は対照群で 14.6も検出されたが、 0—〇3?を投与すると 10 9/¾：9群で10.6 、 30Atg/kg群で 10.0も、 100 X g/kg群で 9.0 と投与量に依存して減少し、 群は対照群の約半分の 値を示した。 この NK1.1+,CD8+細胞群は正常マウス （BALB/c,C57BL/6N) ある いはレシピエントマウスに同系の C57BL/6N を用いた場合は出現が認められな レ また、 NK1.1+,CD8+細胞の構成比率はマウスの生存率と強い逆相関性が認 められた。 これらの結果から、 NKl.r,CD8+細胞は GVHDの発生に中心的な役 割を担う細胞群であると考えられる。 従って、 G— CSFのインビポ投与は細胞 傷害作用を示す NKl.r,CD8+細胞の出現を抑え、 GVHD発症を抑制したと考え られる。
(実施例 1) 製剤例
ヒト G— CSF (lOmMリン酸緩衝液 PH7.0) 50 g/mLに非イオン界面活性 剤であるポリソルべ一ト 20 (Tween20：ポリオキシエチレンソルビンモノラウ レート） を O.lmg/mLとなるように加え、 NaClにて浸透圧を 1にあわせた後、 0.22 mのポアサイズを有するメンブランフィルタ一で濾過滅菌する。得られた 溶液を滅菌処理を施したバイアル瓶中に充填し、 同様に滅菌処理したゴム栓で打 栓し、 続いてアルミニウムキャップにて巻き締めて注射用溶液製剤を得た。 この 注射用製剤は lot:以下の冷喑所に保存する。
(実施例 2) 製剤例
ヒト G— C S F (lOmMリン酸緩衝液 pH7.0) 100 g/mlに非ィォン界面活性 剤であるポリソルベート 80 (Tween80：ポリオキシエチレンソルビンモノォレ エート） を O.lmg/mLとなるように加え、 NaClにて浸透圧を 1にあわせた後、 0.22 mのポアサイズを有するメンブランフィルターで濾過滅菌する。得られた 溶液を滅菌処理を施したパイアル瓶中に充填し、 同様に滅菌処理したゴム栓で打 栓し、 続いてアルミニウムキャップにて巻き締めて注射用溶液製剤を得た。 この 注射用製剤は 10 以下の冷喑所に保存する。
(実施例 3) 製剤例
ヒト G— CS F (10m リン酸緩衝液 pH7.0) 50 g/mlに非イオン界面活性 剤であるポリソルベート 20 (Tween20：ポリオキシエチレンソルビンモノラウ レート） 0.1mg/mL、 HSA 10mg/mL及びマンニトール 50mg/mlとなるように加 えて溶解した後、 0.22 tmのポアサイズを有するメンブランフィルターで濾過滅 菌する。 得られた溶液を滅菌処理を施したバイアル瓶に充填し、 同様に滅菌処理 したゴム栓を半打栓し、 凍結乾燥を行い注射用凍結乾燥剤を得た。 この注射用凍 結乾燥剤は室温以下の温度条件に保存し、 注射用蒸留水にて用時溶解して使用す る。
[産業上の利用分野]
本発明のヒト G— CSFを有効成分とする医薬組成物は、 急性 GVHD及び慢 性 G V H Dの抑制に有効であるばかりでなく、 臍帯血幹細胞移植後の G V H Dも 抑制可能であると考えられる。

Claims

請求の範囲
1. 有効成分としての G— CSF及び医薬用担体とからなる、 骨髄細胞移植を 除く造血幹細胞移植後に生じる GVHDを抑制する医薬組成物。
2. 上記造血幹細胞移植が末梢血幹細胞移植である請求項 1記載の医薬組成物
3. 骨髄細胞移植を除く造血幹細胞移植後の患者に有効量の G— C S Fを投与 することからなる、 造血幹細胞移植後に生じる GVDHを抑制する方法。
4. 上記造血幹細胞移植が末梢血幹細胞移植である請求項 3記載の方法
5. 骨髄細胞移植を除く造血幹細胞移植後に生じる GVHDを抑制する医薬組 成物を調製するための G— CSFの使用。
6. 上記造血幹細胞移植が末梢血幹細胞移植である請求項 5記載の G— C S F の使用
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016516985A (ja) * 2013-03-15 2016-06-09 ティゲニクス、エセ、ア、ウＴｉＧｅｎｉｘ，Ｓ．Ａ．Ｕ． 細胞治療に対する臨床反応を決定するためのリンパ球バイオマーカー

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN112156110B (zh) * 2020-09-15 2022-10-14 上海交通大学医学院 Cd8+抑制性t细胞在免疫调节中的应用及诱导方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL107483A0 (en) * 1993-11-03 1994-02-27 Yeda Res & Dev Bone marrow transplantation
US5800539A (en) * 1995-11-08 1998-09-01 Emory University Method of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation without graft failure or graft vs. host disease
DE19549232C2 (de) * 1995-12-20 1998-05-20 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von G-CSF in Kombination mit einem Chemotherapeutikum bei der Behandlung von Erkrankungen, die eine periphere Stammzelltransplantation erfordern
US5880090A (en) * 1997-09-19 1999-03-09 The Hope Heart Institute Treatment of vascular graft implants with G-CSF

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 124, no. 17, 22 April 1996, Columbus, Ohio, US; abstract no. 221547Q, M. HIROKAWA ET AL.: "Modulation of allogeneic immune responses by filgrastim (recombinant human granulocyte colony-stimulating factor) in bone marrow transplantation" page 315-316; XP002935887 *
INT. J. HEMATOLOGY, vol. 62, no. 4, 1995, pages 235 - 241 *
O. RINGDEN ET AL.: "Peripheral blood stem cell transplantation from unrelated donors: A comparison with marrow transplantation", BLOOD, vol. 94, no. 2, July 1999 (1999-07-01), pages 455 - 464, XP002935888 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016516985A (ja) * 2013-03-15 2016-06-09 ティゲニクス、エセ、ア、ウＴｉＧｅｎｉｘ，Ｓ．Ａ．Ｕ． 細胞治療に対する臨床反応を決定するためのリンパ球バイオマーカー

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