WO1998038305A1

WO1998038305A1 - Proteine physiologiquement active provenant de mammiferes

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Publication number: WO1998038305A1
Application number: PCT/JP1998/000835
Authority: WO
Inventors: Yusuke Nakamura; Toshihiro Tanaka; Shuichi Tsukada
Original assignee: Japan Tobacco Inc.
Priority date: 1997-02-28
Filing date: 1998-02-27
Publication date: 1998-09-03
Also published as: US20030083486A1; AU6118398A; CA2282557A1; EP0974651A4; EP0974651A1; JPH10295388A; US6710171B1; US20020128459A1

Description

明細 ΐ 哺乳動物由来生理活性夕ンパク

抟術分野

本発明は、哺乳動物由来の新規生理活性タンパク及び該夕ンパクをコ一ドする

D N Α並びに該夕ンパクに反応性を有する抗体に関する。

高生活水準社会における現代病とも言え、精力的な治療方法の開発は勿論のこと、罹患に対する予防索としての日常における生活管理が重要視されるいわゆる成人病として、高血圧症や糖尿病と並んで動脈硬化症がある。

動脈硬化症は、動脈の内膜におこる病理的変化（例えば、 ①内膜への平滑筋細胞の浸潤増殖、 ②コラーゲン、エラスチン及び酸性ムコ多糖類の質的及び量的変化、 ③増殖した平滑筋細胞及び組織に着床したマクロファージ系細胞の細胞質内への脂質蓄積による細胞の泡沫化）に起因して始まる病変である。そのような病変を一因として、（ 1 ) 内膜に形成した泡沫細胞の形成により、内膜表面に脂肪斑の形成され、（2 ) 脂質の蓄積が組織間（中膜深部）にもおよび、繊維性増殖や石灰化を伴って内膜表面が硝子様の厚い皮膜で覆われ、（3 ) 組織内に出血や壊死が起こり、血栓の形成、石灰化及び脂質結晶の析出からなる複合病変を来す。このような病変は、やがて全身の動脈に分布し、動脈の内腔を狭め、また病変部位が嚢状となり血管壁の弾力性が喪失することにより血管の硬化が起こり血管の走行にうねりを生じさせ、正常な血流の阻害を来すこととなる。

これまでの疫学的研究から、動脈硬化症の発症のリスクファクターとして、年齢（ほぼ 3 0歳代以降）、高コレステロール血症、低 H D L—コレステロール血症、収縮期高血圧、肥満、ヘモグロビン高値及び糖尿病などが挙げられている。また、発症を誘発することとなる生体内因子の動態として、アドレナリンの分泌

、トロンボキサン A 2の増加、プロス夕サイクリンの減少、血清過酸化脂質の増加、遊離脂肪酸の増加、血小板の増加、フイブリノ一ゲンの増加、血液凝固因子 (X II及び X I II) の増加、組織プラスミンの減少、プロスタグランジンの増加、アンチトロンビン II Iの減少、血清 L D Lの増加、血清 H D Lの減少、インスリンの増加、及びレ二ンの増加などが挙げられている。

これまでの研究成果からは、動脈硬化症は、年齢や肥満といった身体的条件、他の疾患との併発、並びに多くの生体内因子の動態異常といった複数の条件が複雑に関係して起こるものであるということまでしか明らかにされていないのが実情である。

動脈硬化症の治療は、その目的から（ 1 ) 動脈硬化の退縮させ、動脈硬化発症を防ぐための、生活習慣及び肥満等の身体的異常を是正することによる予防的治療（例えば、食事療法や運動療法など）、並びに（2 ) 動脈硬化症の進行により起こる血管閉塞症状の除去及び血栓ないし塞栓による血管内腔閉塞症状発症の予防のための薬剤による治療あるレ、は外科的治療に分けられる。

上述のとおり、動脈硬化症が、特に決め手となる病因が明確でない疾患であることから、薬剤による治療においては、対症療法的な治療しかないのが現状である。即ち、原因としてアドレナリン等のカテコールアミン系物質の亢進が疑われる時は/?プロッカーを、プロスタグランジン系物質に対してはエイコサペンタン酸を、過酸化脂質に対してはビタミン Eを、血栓にはゥロキナーゼをといったように薬剤を適用する。今日のところ、動脈硬化症の治療に特に有効な薬剤は未だ提供されていないのが現状である。

一方、動脈血管閉塞症状の外科的治療としては、血管造影による所見に基づく経皮的冠動脈形成術（P T C A； Percutaneous Transluminal Coronary Angiopl asty) が、血管内腔の拡大のための有効な手段として臨床的に普及している。 P T C Aは、 1 9 7 7年のグレンツィッグ（Gruntzig) によ初めての臨床応用以来、目覚ましい進歩並びに普及を遂げ、その施行数は我が国においても急速に増加した。 - -

P T C Aは、太いカテーテル内に、先端にバル一ンを有する細いカテーテルを通し、この細いカテーテルを冠動脈閉塞部位に揷入し、バルーンを膨らませることにより閉塞（狭窄）部位を拡張させる方法である。

しかしながら、 P T C Aによる内腔拡大治療においては、施行後数力月以内に、約 3 0〜 5 0 %の症例で動脈の施術部位に再狭窄が起こり、この再狭窄が P T C Aによる治療における大きな弱点となっている。

この再狭窄は、 P T C Aによる閉塞部位の拡大に不可避である血管壁の傷害に応じて起こる傷害部位の修復反応に基づく新生内膜増殖の増幅によるものと考えられている。この再狭窄予防のために、各種薬剤の適用が試みられているが、現在のところそれらの薬剤が有効であるという報告はほとんどされていない。

上述のように、今日のところ、動脈硬化症の再発及び再狭窄の発現の防止を含めた、動脈硬化症の根本的な治療及び予防の方法は確立されておらず、動脈硬化症発症及び進行の原因を解明し、その有効な治療及び予防方法並びに治療薬及び予防薬が開発、提供されることが熱望されている。

P T C A施行後に発現する冠動脈再狭窄は、新生内膜増殖ないし内膜肥厚などの病理学的所見から、動脈硬化症の臨床的モデルとして捉えられている。従って、 P T C A後の再狭窄部位の血管壁の組織性状を診断し、正常な血管壁の組織性状と病理学的にまた遺伝子レベルで比較研究することによりその差異を明らかにすることは、再狭窄ひいては動脈硬化症の発症の原因及び因子を特定するための有効な手段である。

そのような比較研究においては、ディファレンシャルディスプレー（Differen tial Display) 法 (ヌクレイヅクアシッド - リサ一チ (Nucleic Acids Research) , 第 21巻，第 18号，第 4272〜4280頁， 1993年及びサイエンス（Science) , 第 257 卷，第 967〜971頁， 1992年）と呼ばれる遺伝子工学技術を使った遺伝子レベルでの比較検討が有用である。

具体的には、ゥサギなどの大型哺乳動物の冠動脈に PTC Aを施し、 PTCA 施行後の施術部位の内膜組織における遺伝子の発現状態をディファレンシャルデイスブレー法を用いて調べ、 PT C Aを施さない場合の内膜組織での遺伝子発現状態と比較することにより、 PTC A施行後に特異的に発現あるいは発現の増加が見られる遺伝子を探索するものである。発明の開示

P T C A施行後に特異的に発現あるいは発現が増加する遺伝子及び該遺伝子に由来するタンパク分子は、動脈硬化症及び再狭窄に密接に関与している可能性を有している。本発明は、そのような動脈硬化症あるいは冠動脈再狭窄において特異的に発現する遺伝子及びタンパク分子を特定することにより、動脈硬化症及び再狭窄の発症予防並びに治療のため薬剤及び方法を提供するものである。

本発明者らは、動脈硬化症及び冠動脈再狭窄に特異的な遺伝子の解析に関して鋭意研究した結果、 PTCA施行後の比較的初期（1〜7日目）に発現の増加が見られる新規な 2つのタンパク分子（クロ一ン BA0306及び B A 2303 ) をコードする遺伝子を見出し本発明を完成するに到った。

本発明の 2つの新規なタンパクコーディング遺伝子は、各々下記のような特徴を有し、 PTCA施行後に特異的に発現する遺伝子であり、動脈硬化症及び/または冠動脈再狭窄に発症及び進行に関連する遺伝子と考えられる。

クローン BA0306は、次のような特徴を有する。

( 1 ) 冠動脈に対する P T C A施行後約 1 ~ 7日目に発現の増加（ 4曰目にピ —ク）が見られる。

(2) ノーザンブロッテイング（Nothern Blotting) により、種々のヒト組織において約 3.5k及び約 4.4kのバンドとして mRNAの発現が認められる。

(3) 10ケ所の推定上の膜貫通領域を有する。 (4) 酵母の酸化ストレス耐性夕ンパク（S. serevisiae Oxidative stress resistance protein)、酵母の亜鉛/カドミウム耐性タンパク（Zinc/Cadmium resistance protein) ^¾t ィ-; ^ン生夕ンノク (Heavy metal ion resis tance protein)等とアミノ酸配列相同性を有する。

(5) ヒト及びゥサギに由来する分子は、各々配列番号 10及び配列番号 8に記載されるアミノ酸配列を有する。マウスに由来する分子は、配列番号 28に記載されるアミノ酸配列を含む。

このような特徴から、クローン BA0306は、動脈硬化症/再狭窄進行の過程で関与することが明らかにされている一酸化窒素（NO) などの活性酸素に対して阻害的に作用するものと考えられる。

クローン BA2303は、次のような特徴を有する。

(1)冠動脈に対する PTC A施行後 1日目にから発現の増加が見られ、 2〜 4曰目に最大の発現として 7曰目まで発現が確認される。

(2) ノーザンブロヅティングにより、種々のヒト組織におい約 3.9k及び約 2 .lkのバンドとして mRNAの発現が認められる。

(3) 7ケ所の推定上の膜貫通領域を有する。

(4) ヒト及びマウスに由来する分子は、各々配列番号 4及び配列番号 6に記載されるアミノ酸配列を有し、またゥサギに由来する分子は、配列番号 2に記載されるアミノ酸配列を含んでいる。

このような特徴から、クロ一ン 2303は、動脈硬化症/再狭窄発症あるいは進行の過程で関与する生体内リガンドと結合して受けた特定のシグナルを、細胞内の G蛋白質（GTP結合蛋白質）を介して形質膜あるいは細胞質面にある効果器に伝達するための G蛋白質共役型受容体であると考えられる。

従って、本発明の遺伝子（DNA) 、タンパク若しくはそのフラグメント及び本発明のタンパクに反応性を有する抗体またはその一部は、動脈硬化症の治療及び予防並びに P T C A等による動脈閉塞症状の治療後の再狭窄の治療及び予防のための該遺伝子またはタンパク分子を夕一ゲヅ卜しとた桀剤閧発において極めて有用である。まさこ、該 D N Aは、それ自体アンチセンス医薬品として有用であり、該夕ンパクの細胞外領域フラグメントは、例えば可溶性レセプ夕一医薬品として、該抗体及びその一部は、抗体医薬品として有用である。

さらに、本発明の遺伝子（D N A ) 、タンパク、及び抗体は、本発明のタンパクと相互作用を有するタンパク（リガンド）の探索、該リガンドの機能の解明、並びに該リガンドを夕ーゲットとした治療薬を開発するための試薬として有用である。

また、本発明の D N Aの態様の一つであるゥサギあるいはマウス由来の D N A の遺伝子情報をもとに、それらに対応する内在性遺伝子を破壊（不活性化）することによりモデル動物（ノックアウト動物）を作成することが可能である。同様に、本発明の D N A態様の 1つであるヒト由来の D N Aをマウス等のヒト以外の哺乳動物に導入することによりモデル動物としてのトランスジエニック動物を作製することができる。これらのモデル動物の物理学的、生物学的、病理学的及び遺伝子的特徴を分析することにより、本発明に係る遺伝子及び夕ンパクの機能を解明することが可能となる。

さらに、そのようにして内在性遺伝子が破壊された該モデル動物と該トランスジエニック動物を交配することにより、本発明のヒト由来遺伝子のみを有するモデル動物を作成することが可能である。このモデル動物に、該導入されたヒト遺伝子をターゲットとした薬剤（化合物、抗体等）を投与することにより、その薬剤の治療学的効果を評価することが可能となる。

本発明は、即ち、下記の D N A、タンパク、発現ベクター、形質転換体、抗体、医薬組成物、トランスジエニックマウス、及びノックアウトマウスを初めて提供するものである。

( 1 ) 配列番号 4に記載されるアミノ酸配列を有するタンパクをコードする D N A。 ( 2 ) 配列番号 4に記載されるアミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメントをコードする DNA。

(3)配列番号 3に記載される塩基配列の塩基番号 97乃至 1419の塩基配列を有する DNA。

(4)配列番号 3に記載される塩基配列を有する DNAにス卜リンジヱン卜な条件下でハイブリダィズする D N A。

( 5 ) 配列番号 4に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク。

( 6 ) 配列番号 4に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメン

(7)前記（5) に記載のタンパクの細胞外領域とヒトの免疫グロブリン（I ) の重鎖の定常領域または定常領域の一部とからなる融合タンパク。

(8)前記（1) 乃至前記（4) のいずれかに記載の DNAを含む発現ぺク夕 ο

(9)前記（8) に記載の発現べク夕一で形質転換された形質転換細胞。

(10)前記（5) に記載のタンパクまたは前記（6) に記載のタンパクフラグメントに反応性を有する抗体または抗体の一部。

(11)抗体が、モノクローナル抗体であることを特徴とする前記（10) に記載の抗体または抗体の一部。

(12)前記（6) に記載のタンパクフラグメント若しくは前記（7) に記載の融合タンパク及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

(13) 前記（10) または前記（11) に記載の抗体若しくは抗体の一部及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

(14)配列番号 10に記載されるアミノ酸配列を有するタンパクをコードする DNA。 (15) 配列番号 10に記載されるアミノ酸配歹 ijを有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメン卜をコ一ドする DNA。

(16) 配列番号 9に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 1785の塩基配列を有する DNA。

(17) 配列番号 9に記載される塩基配列を有する DN Aにストリンジェントな条件下でハイプリダイズする D N A。

(18) 配列番号 10に記載されるアミノ酸配列または該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク。

(19) 配列番号 10に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメント。

(20) 前記（ 18) に記載のタンパクの細胞外領域とヒ卜の免疫グロブリン ( I g) の重鎖の定常領域または定常領域の一部とからなる融合タンパク。

(21) 前記（14) 乃至前記（17) のいずれかに記載の DN Aを含む発現ベクター。

(22) 前記（21) に記載の発現ベクターで形質転換された形質転換細胞。

(23) 前記（ 18) に記載のタンパクまたは前記（19) に記載のタンパクフラグメントに反応性を有する抗体または抗体の一部。

(24) 抗体が、モノクローナル抗体であることを特徴とする前記（23) に記載の抗体または抗体の一部。

(25) 前記（ 19) に記載の夕ンパクフラグメント若しくは前記（20) に記載の融合タンパク及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

(26) 前記（ 23 ) または前記（24) に記載の抗体若しくは抗体の一部及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

(27) 配列番号 3に記載される塩基配列の塩基番号 97乃至 1419の塩基配列を有する DN Aを含むヒト由来の DN Aが、マウスの内在性遺伝子に組み込まれていることを特徴とするトランスジエニックマウス。

( 2 8 ) 配列番号 9に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 1 7 8 5の塩基配列を有する D NAを含むヒト由来の D N Aが、マウスの内在性遺伝子に組み込まれていることを特徴とするトランスジエニックマウス。

( 2 9 ) 配列番号 6に記載されるアミノ酸配列を有するマウス由来のタンパクが産生されないように、該夕ンパクをコードするマウスの内在性遺伝子が不活性化されていることを特徴とするノックアウトマウス。

( 3 0 ) 配列番号 2 8に記載されるアミノ酸配列を含むマウス由来のタンパクが産生されないように、該夕ンパクをコードするマウスの内在性遺伝子が不活性化されていることを特徴とするノックァゥトマウス。

以下、本発明で用いる語句の意味並びに本発明のタンパク、タンパクフラグメント、融合タンパク、 D N A、抗体、トランスジエニックマウス、及びノックァゥトマウスの一般的製造方法並びにを明らかにすることにより、本発明を詳細に説明する。

本発明の「タンパク」は、ヒト、ゥサギ、マウスなどの哺乳動物由来のタンパク及びそのフラグメントであり、好ましくはヒト由来のタンパク及びそのフラグメントである。

特に好ましい態様としては、（ 1 ) 配列番号 4に記載されるアミノ酸配列または該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク、（2 ) 配列番号 4に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメント、（3 ) 配列番号 1 0に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列を有するタンパク、及び（4 ) 配列番号 1 0に記載されるアミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のァミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメントを挙げることができる。

ここで「細胞外領域」とは以下のような意味を有するものである。即ち、 G蛋白質共役型受容体あるいは細胞膜表面分子のような細胞膜貫性通夕ンパクは、膜の脂質二重層を- 1.回または数回貫通する疎水性べプチド領域により膜と連結し、全体として細胞外領域（extracellular region)^ 膜貫通領域（transmembrane reg ion)及び細胞質領域（cytoplasmic region)の 3つの主領域から構成される構造をとっている。さらにそのような膜貫通性タンパクは、モノマ一（monomer) として、または、同一のアミノ酸配列を有するもう 1本の鎖あるいは異なるアミノ酸配列を有する鎖とともにそれぞれホモダイマ—（homodimer) 、ヘテロダイマ—（het erodimer) あるいはオリゴマ— rigomer)を形成して存在する。

本発明において用いられる「細胞外領域」とは、前述のような膜貫通性タンパクの全体構造のうち、該膜タンパクが保持されている膜の外界側に存在する部分構造（部分配列）を意味し、換言すれば、膜内に取り込まれている領域（膜貫通領域）及び該膜内の領域に引き続いて細胞質内に存在する領域（細胞内領域）以外の領域が細胞外領域に該当する。また、本発明における細胞外領域は、所望応じその N末端及び/または C末端に、膜貫通領域及び/または細胞内を構成するアミノ酸配列に由来する 1乃至 5のアミノ酸が付加されていてもよい。

ここで「実質的に同一のアミノ酸配列を有する」とは、配列番号 4または 1 0 に示されるアミノ酸配列を含むタンパクと実質的に同等の生物学的性質を有する限り、該アミノ酸配列中の複数個のアミノ酸、好ましくは 1乃至 1 0個のアミノ酸、特に好ましくは 1乃至 5個のアミノ酸が置換、欠失及び Zまたは修飾されているアミノ酸配列を有するタンパク、並びに該アミノ酸配列に、複数個のァミノ酸、好ましくは 1乃至 1 0個のアミノ酸、特に好ましくは 1乃至 5個のアミノ酸が付加されたアミノ酸配列を有するタンパクをも包含することを意味する。

なお、本願明細書または図面においてアミノ酸を表記するために用いられるァルフアベッ卜の三文字あるいは一文字は、各々次に示すアミノ酸を意味する。 (Gly/G) グリシン、（Ala/A) ァラニン、（Val/V) ノリン、（Leu/L) ロイシン、（Ile/I) イソロイシン、（Ser/S) セリン、（ThrZT) スレオニン、（ 05

11

Asp/D) ァスパラギン酸、（Glu/E) グルタミン酸、（Asn/N) ァスパラギン、 (Glu/Q) グルタミン、（Lys/K) リジン、（Arg/R) アルギニン、（Cys/C) システィン、（Met/M) メチォニン、 (Phe/F) フエ二ルァラニン、（Tyr/Y) チロシン、（TrpZW) トリブトファン、（His/H) ヒスチジン、（Pro/P) プロリン。

本発明における「ヒトの免疫グロブリン（I g) の重鎖の定常領域または定常領域の一部」とは、ヒ卜由来の免疫グロブリンの重鎖（Heavy Chain, H鎖）の定常領域（Constant region) 、 F c領域またはそれらの一部を意味する。該免疫グロプリンは、どのようなクラス及びサブクラスに属する免疫グロプリンであつてもよく、具体的には、 IgG (I gGl、 I gG2、 I gG3及び I gG4) 、 I gM、 I gA (I gAl及び I gA2)、 I g D及び I g Eを挙げることができる。好ましくは、 I gG (I gGl、 I gG2、 I gG3若しくは IgG4 ) または I gMである。本発明における特に好ましい例としては、ヒト由来の I gG (I gGl、 I gG2、 I gG3若しくは I gG4) に属する免疫グロプリンである。

免疫グロブリンは、 2つの相同な軽鎖（Light Chain, L鎖）と 2つの相同な重鎖（Heavy Chain, H鎖）の 4つの鎖が、ジスルフィド結合（S— S結合）で結合した Y字形の構造単位を有する。軽鎖は、軽鎖可変領域（VL) 及び軽鎖定常領域（CL) から構成される。重鎖は、重鎖可変領域（VH) と重鎖定常領域（C H) から構成される。

重鎖定常領域は、クラス（I gG、 I gM、 I gA、 I gD及び I gE) 並びにサブクラス（I gGl、 I gG2、 I gG3、 I gG4、 I gAl及び I gA 2) 毎に各々固有のアミノ酸配列を有するいくつかのドメインから構成される。

I gG (I gGl、 I gG2、 I gG3及び I gG4) の重鎖は、 N末端から順に、 VH、 CHI ドメイン、ヒンジ領域、 CH2ドメイン及び CH3ドメインから構成される。同様に I gGlの重鎖は、 N末端から順に、 VH、 C^ l ドメイシ、ヒンジ領域、〇ァ，2ドメイン及び ( ァ，3ドメインから構成される。 IgG2の重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cy₂lドメイン、ヒンジ領域、 Cァ ₂2ドメイン及び C ァ ₂3ドメインから構成される。 I gG3の重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cr 31ドメイン、ヒンジ領域、 Cァ ₃2ドメイン及び Cァ ₃3ドメインから構成される。 I gG4の重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cァ ₄1 ドメイン、ヒンジ領域、 C ァ ₄2ドメイン及び Cァ ₄3ドメインから構成される。

I gAの重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cひ 1 ドメイン、ヒンジ領域、 Cひ 2 ドメイン及び Cひ 3ドメインから構成される。

同様に I gAlの重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cひ， 1 ドメイン、ヒンジ領域、 0^,2ドメイン及び ( ひ>3ドメインから構成される。 IgA2の重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cひ ₂1ドメイン、ヒンジ領域、 Co: ₂2ドメイン及び Cひ 23ドメインから構成される。

I gDの重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Cd l ドメイン、ヒンジ領域、 Cd 2ドメイン及び Cc53ドメインから構成される。

IgMの重鎖は、 N末端から順に、 VH、 C /1ドメイン、 C〃2ドメイン、 C 〃3ドメイン及び C〃4ドメインから構成され、 I gG、 1 §八及び1 0に見られるようなヒンジ領域を有しない。

IgEの重鎖は、 N末端から順に、 VH、 Ce lドメイン、 Ce2ドメイン、 C £3ドメイン及び Cs4ドメインから構成され、 I gG、 I gA及び IgDに見られるようなヒンジ領域を有しない。

さらに、 I gGを例に挙げるならば、 I gGをパパインで処理すると、 2つの重鎖を連結させているヒンジ領域中に存在するジスルフイド結合のやや N末端側で切断されて、 VH及び CH1からなる重鎖断片と 1つの軽鎖がジスルフィド結合で連結した 2つの相同な Fab、並びにヒンジ領域、 CH2ドメイン及び CH3ドメインからなる 2つの相同な重鎖断片がジスルフィド結合で連結した 1つの F c を生ずる（以上、「免疫学イラストレイテッド」、原書第 2版、第〜 75頁、 1 992年、南江堂.発行、及び「最新医科学の焦点「免疫系の認識機構」」、第 4 7頁、 1991年、南江堂発行など参照）。

即ち、本発明における「免疫グロブリンの重鎖の定常領域の一部」とは、上述のような構造的特徴を有する免疫グロプリンの重鎖の定常領域の一部を意味し、好ましくは、 C 1 ドメインを欠く定常領域または Fc領域である。具体的には、 I gG、 I gAまたは I gDの場合には、各々のヒンジ領域、 C2ドメイン及び C 3ドメインからなる領域が挙げられ、 I gMまたは I gEの場合には、各々の C2ドメイン、 C3ドメイン及び C4ドメインからなる領域が挙げられる。とりわけ好ましい例としては、ヒト由来の I gG 1の F c領域を挙げることができる o

本発明の「融合タンパク」とは、前記の定義されるとおりの本発明のタンパクの細胞外領域と該「ヒ卜の免疫グロブリン（I g) の重鎖の定常領域または定常領域の一部」とからなる融合ポリペプチドである。好ましくは本発明のタンパクの細胞外領域とヒト I gGの重鎖の定常領域の一部との融合ポリべプチドであり、特に好ましくは本発明の夕ンパクの細胞外領域とヒト I gGの重鎖のヒンジ領域、 CH2ドメイン及び CH3ドメインからなる領域（F c) との融合ポリべプチドである。なお、 I gGとしては、 I gGlが好ましい。また、本発明のタンパクとしては、ヒト、マウスまたはラット（好ましくはヒト）に由来するタンパクが好ましい。

本発明の融合タンパクは、前述のような I gG等の免疫グロリンの定常領域の一部（例えば、 Fc) を融合パートナーとして有することから、該免疫グロプリン断片に特異的に結合するというプロティン Aの性質を用いたァフィ二ティー力ラムクロマトグラフィーを用いることにより該融合タンパクを極めて容易に精製することが可能であるという点で利点を有する。さらに、種々の免疫グロブリンの F cに対する種々の抗体が提供されていることから、該 F cに対する抗体を用いて、該融合ポリべプチドのィムノアヅセィを簡便に行うことができる。

本発明のタンパク、タンパクフラグメント及び融合タンパクは、後述するような遺伝子組換え技術のほか、化学的合成法、細胞培養方法等のような当該技術的分野において知られる公知の方法あるいはその修飾方法を適宜用いることにより製造することができる。

本発明の DNAは、前述の本発明のタンパクをコ一ドする DNAであって、本発明のタンパクをコードし得るいかなる塩基配列をも包含する。好ましくは、本発明のヒト由来の夕ンパクをコ一ドする DN Aである。具体的な態様としては、下記の DN Aが挙げられる。

(1)配列番号 4に記載されるアミノ酸配列を各々有するタンパク、該タンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメント、あるいはそれらのタンパクあるいはフラグメン卜のアミノ酸配列中に複数個のアミノ酸、好ましくは 1乃至 10 個のアミノ酸、特に好ましくは 1乃至 5個のアミノ酸を置換、欠失及び/または修飾するか、若しくは該アミノ酸配列に複数個のアミノ酸、好ましくは 1乃至 1 0個のアミノ酸、特に好ましくは 1乃至 5個のアミノ酸を挿入することによって得られる生物学的同等物を各々コードする DNA。

(2)配列番号 10に記載されるアミノ酸配列を各々有するタンパク、該夕ンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメント、あるいはそれらのタンパクあるいはフラグメントのァミノ酸配列中に複数個のアミノ酸、好ましくは 1乃至 1 0個のアミノ酸、特に好ましくは 1乃至 5個のアミノ酸を置換、欠失及び/または修飾するか、若しくは該アミノ酸配列に複数個のアミノ酸、好ましくは 1乃至 10個のアミノ酸、特に好ましくは 1乃至 5個のアミノ酸を挿入することによつて得られる生物学的同等物を各々コ一ドする DNA。

(3)配列番号 3に記載される塩基配列を有する DNAにストリンジ： ϋントな条件下でハイブリダィズする D N A。

(4)配列番号 9に記載される塩基配列を有する DNAにストリンジェン卜な条件下でハイブリダィズする D NA。

より具体的には.、 ( 1 ) 配列番号 3に記載される塩基配列の塩基番号 97乃至 1419の塩基配列を有する DNA、 (2) 配列番号 3に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 14 1 9の塩基配列を含 ?DNA、 (3) 配列番号 9に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 1 Ί 85の塩基配列を有する DNA、及び（4) 配列番号 9に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 1 785の塩基配列を含む DN Aである。

本発明の DN Aは、ゲノミック DN Aまたは cDN Aのいずれをも包含する。また、該 DNAは、同一のアミノ酸をコードするコドンであればどのようなコドンから構成される DN Aを含む。

ここで「ストリンジェントな条件下」としては、例えば、次のような条件を挙げることができる。例えば、 50塩基以上のプローブを用い、 0.9%NaCl下でハイブリダィゼーシヨンを行う場合には、、 50%の解離を生ずる温度（Tm) の目安を下記計算式から求め、ハイブリダィゼ一シヨンの温度を下記計算式のように設定することができる。

Tm = 82.3°C + 0.41x (G+C) % -500/n -0.61 x (フオルムアミド）％

(nはプローブの塩基数を示す。）

温度 =Tm— 25°C

また、 100塩基以上のプロ一プ（G+C=40〜50%の場合）を用いる場合には、 Tm が下記（ 1) 及び（2) のように変化することを目安する。

( 1) 1%ミスマッチ毎に、丁111が約1°(下がる。

(2) フオルムアミド 1 %毎に、 Tmが 0.6〜0。7°C下がる。

従って、完全相補鎖の組み合わせの場合の温度条件は下記のようにすることができる。

(A) 65〜75。C (フオルムアミド無添加）

(B) 35〜45。C (50%フオルムアミド存在下）また、不完全相補鎖の組み合わせの場合の温度条件は下記のようにすることができる。 -.

(A) 45〜55°C (フオルムアミド無添加）

(B) 35〜42°C (30%フオルムアミド存在下）

また、 23塩基以下のプローブを用いる場合の温度条件は、 37°Cとすることもできるし、また下記計算式を目安とすることもできる。

温度 =2°Cx (A+Tの数） +4°Cx (C+Gの数） — 5°C

また、本発明の DNAは、いかなる方法で得られるものであってもよい。例えば mRNAから調製される相補 DNA ( cDNA)、ゲノム DNAから調製される DNA、化学合成によって得られる DNA、 RNAまたは DNAを铸型として P CR法で増幅させて得られる DN Aおよびこれらの方法を適当に組み合わせて構築される DN Aをも全て包含するものである。

本発明のタンパクをコ一ドする DNAは、常法に従って本発明のタンパクの m RNAから c DNAをクロ一ン化する方法、ゲノム DN Aを単離してスプライシング処理する方法、化学合成する方法等により取得することができる。

(1) 例えば、本発明のタンパクの mRNAから cDNAをクローン化する方法としては、以下の方法が例示される。

まず、本発明のタンパクを発現 ·産生する前述のような組織あるいは細胞から該本発明のタンパクをコードする mRNAを調製する。 mRNAの調製は、例えばグァニジンチオシァネート法（チヤ一グウィン（Chirgwin) ら、バイオケミストリ一（Biochemistry)、第 18巻、第 5294頁、 1979年）、熱フエノ一ル法もしくは AG PC法等の公知の方法を用いて調製した全 RN Aをオリゴ（d T) セルロースやポリ U—セファロ一ス等によるァフィ二ティクロマトグラフィ —にかけることによって行うことができる。

次いで得られた mRNAを鍊型として、例えば逆転写酵素を用いる等の公知の方法、例えばォカャマらの方法（モレキュラーセルバイオロジー（Mol.Cell.Bio 1·) 、第 2卷、第 1 6 1頁、 1982年及び同誌第 3卷、第 280頁、 1983 年）やホフマン-—(Hoffman) らの方法（ジーン（Gene) 、第 25卷、第 263頁、 1983年）等により cDNA鎖を合成し、 c D N Aの二本鎖 c D N Aへの変換を行う。この cDNAをプラスミドベクタ一もしくはファージベクタ一に組み込み、大腸菌を形質転換して、あるいはインビトロパッケージング後、大腸菌に形質移入（トランスフエクト）することにより cDNAライブラリーを作製する。ここで用いられるプラスミドべク夕一としては、宿主内で複製保持されるものであれば特に制限されず、また用いられるファ一ジベクタ一としても宿主内で増殖できるものであれば良い。常法的に用いられるクロ一ニング用ベクターとして pUC 19、人 gt l 0、人 g t 1 1等が例示される。ただし、後述の免疫学的スクリーニングに供する場合は、宿主内で本発明のタンパクをコ一ドする遺伝子を発現させうるプロモ一夕一を有したベクタ一であることが好ましい。

プラスミドに cDNAを組み込む方法としては、例えばマニアテイス（Maniat is) らの方法（モレキュラークロ一ニング、ァ ·ラボラトリ一 'マニュアル（Mo lecular Cloning, A Laboratory Manual , second edition) 、コ——ノレドスフ。リングハ一バーラボラトリ一（Cold Spring Harbor Laboratory) 、第 1.53頁、 198 9年）に記載の方法などが挙げられる。また、ファージベクタ一に cDNAを組み込む方法としては、ヒユン（Hyunh) らの方法（DN Aクロ一ニング、ブラクティカルアブローチ（DM Cloning, a practical approach) 、第 1卷、第 49頁、 1 985年）などが挙げられる。簡便には、市販のクローニングキット（例えば、宝酒造製等）を用いることもできる。このようにして得られる組換えプラスミドやファージベクタ一は、原核細胞（例えば、 E. c 01 i ： HB 10 1、 DH5 ひまたは MC 1061/P 3等）等の適当な宿主に導入する。

プラスミドを宿主に導入する方法としては、（モレキュラークロ一ニング、ァ ♦ラボラトリ一 ·マ二ユアリレ (Molecular Cloning, A Laboratory Manual , seco nd edition) 、コールドスプリングハ一バーラボラトリ一（Cold Spring Harbor Laboratory) 、第 1.74頁、 1989年）に記載の塩化カルシウム法または塩化力ルシゥム /塩化ルビジウム法、エレクトロボレ一シヨン法等が挙げられる。また、ファージベクタ一を宿主に導入する方法としてはファ一ジ DN Aをインビト口パッケージングした後、増殖させた宿主に導入する方法等が例示される。インビトロパッケージングは、市販のインビトロパッケージングキット（例えば、ストラタジーン製、アマシャム製等）を用いることによって簡便に行うことができる上記の方法によって作製された cDNAライブラリーから、本発明のタンパクをコードする cDN Aを単離する方法は、一般的な cDNAスクリ一ニング法を組み合わせることによって行うことができる。

例えば、別個に本発明のタンパクのアミノ酸配列に対応すると考えられるオリゴヌクレオチドを化学合成したのち、これを³² Pでラベルしてプローブとなし、公知のコロニ一ハイブリダィゼ一シヨン法（クランシュ夕イン（Cnmstein) ら、プロシ一デイングスォブナショナルアカデミーォブサイエンス（Proc. Natl. Acid. Sci. USA) 、第 72卷、第 3961頁、 1975年）またはプラークハイプリ夕ィゼ一シヨン法 (Molecular Cloning, A Laboratory Manual , second edi tion , Cold Spring Harbor Laboratory, 第 2.108頁、 1989年）により、目的の cDN Aを含有するクローンをスクリニングする方法、 P CRプライマ一を作製し本発明の夕ンパクの特定領域を P C R法により増幅し、該領域をコ一ドする DN A断片を有するクローンを選択する方法等が挙げられる。

また、 cDNAを発現しうるべクタ一（例えば、人 g t 1 1ファ一ジベクタ一 ) を用いて作製した cDNAライブラリ一を用いる場合には、本発明のタンパクに反応性を有する抗体を用いる抗原抗体反応を利用して、目的のクローンを選択することができる。大量にクローンを処理する場合には、 PCR法を利用したスクリ一ニング法を用いることが好ましい。

この様にして得られた DNAの塩基配列はマキサム 'ギルバート法（マキサム (Maxam) ら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 第 74卷、第 560頁、 1977 年）あるいはファージ M 13を用いたジデォキシヌクレオチド合成鎖停止の方法 (サンガー（Sanger) ら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 第 74巻、第 5463

〜5467頁、 1977年）によって決定することができる。本発明のタンパクをコードする遺伝子は、その全部または一部を上記のようにして得られるクロ一ンから制限酵素等により切り出すことにより取得できる。

(2) また、前述のような本発明のタンパクを発現する細胞に由来するゲノム DN Aから本発明の夕ンパクをコードする DN Aを単離することによる調製方法としては、例えば以下の方法が例示される。該細胞を好ましくは SDSまたはプ口テナ一ゼ K等を用いて溶解し、フエノールによる抽出を反復して DN Aの脱蛋白質を行う。 RNAを好ましくはリボヌクレア一ゼにより消化する。得られる D Aを適当な制限酵素により部分消化し、得られる DNA断片を適当なファ一ジまたはコスミドで増幅しライブラリーを作成する。そして目的の配列を有するクローンを、例えば放射性標識された DNAプローブを用いる方法等により検出し、該クローンから本発明のタンパクをコードする遺伝子の全部または一部を制限酵素等により切り出し取得する。

(3) また、化学的合成による本発明の DNAの製造は、配列番号 1、 3、 5 、 7、 9または 27に記載される塩基配列を.もとにして、常法に従って行うことができる。

さらに本発明は、上述の本発明のタンパクをコ一ドする DN Aを含有する組換えべクタ一に関する。本発明の組換えべクタ一としては、原核細胞及び/または真核細胞の各種の宿主内で複製保持または自己増殖できるものであれば特に制限されず、プラスミドベクターおよびファ一ジベクターが包含される。

当該組換えべクタ一は、簡便には当業界において入手可能な組換え用ベクター (プラスミド DNAおよびバクテリアファージ DNA) に本発明のタンパクをコ一ドする DN Aを常法により連結することによって調製することができる。用いられる組換え用べク夕一として具体的には、大腸菌由来のプラスミドとして例えば pBR322、 pBR325、 pUC12、 pUC13、 pUC19など、酵母由来プラスミドとして例えば pSH19、 pSH15など、枯草菌由来プラスミドとして例えば pUB110、 pTP5、 ρ C194 などが例示される。また、ファージとしては、入ファージなどのバクテリオファージが、さらにレトロウイルス、ヮクシニヤウィルス、核多角体ウィルスなどの動物や昆虫のウィルス（pVL1393、インビトロゲン製）が例示される。

本発明のタンパクをコードする D N Aを発現させ本発明の夕ンパクを生産させる目的においては、発現べクタ一が有用である。発現べクタ一としては、原核細胞および/または真核細胞の各種の宿主細胞中で本発明のタンパクをコードする遺伝子を発現し、これら蛋白質を生産する機能を有するものであれば特に制限されない。例えば、 pMAL C2 、 pEF-BOS (ヌクレイックァシヅドリサ一チ（Nucleic Acid Research) 、第 1 8卷、第 5 3 2 2頁、 1 9 9 0年等）あるいは pME18S ( 実験医学別冊「遺伝子工学ハンドブック」、 1 9 9 2年等）等を挙げることができる。

宿主細胞として細菌、特に大腸菌を用いる場合、一般に発現べクタ一は少なくともプロモ一夕一—ォペレ一夕一領域、閧始コドン、本発明のタンパクをコードする D N A、終止コドン、夕一ミネ一夕一領域および複製可能単位から構成される。

宿主として酵母、動物細胞または昆虫細胞を用いる場合、発現べクタ一は少なくともプロモーター、開始コドン、本発明の夕ンパクをコードする D N A、終止コドンを含んでいることが好ましい。またシグナルぺプチドをコードする D N A 、ェンハンサー配列、本発明のタンパクをコードする遺伝子の 5，側および 3，側の非翻訳領域、スプライシング接合部、ポリアデニレ一シヨン部位、選択マ一力一領域または複製可能単位などを含んでいてもよい。また、目的に応じて通常用いられる遺伝子増幅遺伝子（マーカ一）を含んでいてもよい。

細菌中で本発明の夕ンパクを発現させるためのプロモ一夕一一オペレーター領域は、プロモ一夕一、ォペレ一夕一および Shine- Dalgarno(SD) 配列（例えば、 AAGGなど）を.含むものである。例えば宿主がェシエリキア属菌の場合、好適には Trpプロモ一夕一、 lacプロモ一夕一、 recAプロモ一夕一、 APL プロモー夕一、 lppプロモ一夕一、 t a cプロモー夕一などを含むものが例示される。酵母中で本発明の夕ンパクを発現させるためのプロモ一夕一としては、 PH05プロモ一夕一、 PGKプロモ一夕一、 GAPプロモ一夕一、 ADHプロモーターが挙げられ、宿主がバチルス属菌の場合は、 SL 01プロモ一夕一、 S P 02プロモ一夕一、 p e nPプロモ一夕一などが挙げられる。また、宿主が哺乳動物細胞等の真核細胞である場合、 S V40由来のプロモ一夕一、レトロウイルスのプロモ一夕一、ヒートショックプロモー夕一などが挙げられる。好ましくは、 SV— 40、レトロウイルスである。しかし、特にこれらに限定されるものではない。また、発現にはェンハンサ一の利用も効果的な方法である。

好適な閧始コドンとしては、メチォニンコドン（ATG) が例示される。

終止コドンとしては、常用の終止コドン（例えば、 TAG、 TGA、 TAA) が例示される。

夕一ミネ一夕一領域としては、通常用いられる天然または合成の夕一ミネ一夕一を用いることができる。

複製可能単位とは、宿主細胞中でその全 D N A配列を複製することができる能力をもつ DNAを言い、天然のプラスミド、人工的に修飾されたプラスミド（天然のプラスミドから調製された DNAフラグメント）および合成プラスミド等が含まれる。好適なプラスミドとしては、 E. coliではプラスミド pBR 322、もしくはその人工的修飾物（pBR 322を適当な制限酵素で処理して得られる DNAフラグメント）が、酵母では酵母 2 //プラスミド、もしくは酵母染色体 D NAが、また哺乳動物細胞ではプラスミド pRSVneo ATCC 37198、プラスミド pSV 2dhfr ATCC 37145s プラスミド pdBPV- MMTneo ATCC 37224、プラスミド pSV2neo A TCC 37149等があげられる。ェンハンサ一配列、ポリアデニレ一ション部位およびスブライシング接合部位については、例えぱそれぞれ SV40に由来するもの等、当業者において通常使用されるものを用いることができる。

選択マ一カーとしては、通常使用されるものを常法により用いることができる。例えばテトラサイクリン、アンビシリン、またはカナマイシン等の抗生物質耐性遺伝子等が例示される。

遺伝子増幅遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダク夕一ゼ（DHFR) 遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、グルタミン酸合成酵素遺伝子、アデノシンデァミナ一ゼ遺伝子、オル二チンデカルボキシラ一ゼ遺伝子、ヒグロマイシン一 B—ホスホトランスフェラ一ゼ遺伝子、ァスパルラートトランス力ルバミラ一ゼ遺伝子等を例示することができる。

本発明の発現べクタ一は、少なくとも、上述のプロモーター、開始コドン、本発明のタンパクをコードする DNA、終止コドンおよび夕一ミネ一夕一領域を連続的かつ環状に適当な複製可能単位に連結することによって調製することができる。またこの際、所望により制限酵素での消化や T4DNAリガ一ゼを用いるラィゲ一シヨン等の常法により適当な DN Aフラグメント（例えば、リンカ一、他のリストリクシヨンサイトなど）を用いることができる。

本発明の形質転換細胞は、上述の発現べクタ一を宿主細胞に導入することにより調製することができる。

本発明で用いられる宿主細胞としては、前記の発現ベクターに適合し、形質転換されうるものであれば特に限定されず、本発明の技術分野において通常使用される天然細胞あるいは人工的に樹立された組換細胞など種々の細胞（例えば、細菌（ェシエリキア属菌、バチルス属菌）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属など）、動物細胞または昆虫細胞など）が例示される。

好ましくは大腸菌あるいは動物細胞であり、具体的には大腸菌（DH5ひ、 T B 1、 HB 101等）、マウス由来細胞（COP、 L、 C 127、 Sp2/0、 O 98/38305

23

NS— 1または N I H 3 T 3等）、ラヅト由来細胞、ハムスター由来細胞（ΒΗ Κおよび CHO等-) 、サル由来細胞（COS l、 COS 3, COS 7^ CV 1および Ve 1 o等）およびヒト由来細胞（He 1 a、 2倍体線維芽細胞に由来する細胞、 HEK293細胞、ミエ口一マ細胞および Nama 1 wa等）などが例示される発現ベクターの宿主細胞への導入（形質転換（形質移入））は従来公知の方法を用いて行うことができる。

例えば、細菌 (E.coliヽ Bacillus subtil is 等）の場合は、例えば Cohen らの方法（Proc. Natl. Acad. Sci. USA.、第 69卷、第 2 1 10頁、 1972年）、プロトプラスト法（Mol. Gen. Genet.、第 1 68卷、第 1 1 1頁、 1979年 ) やコンビテント法（ジャーナルォブモレキュラーバイオロジー（J. MoL Biol .) 、第 56卷、第 209頁、 1971年）によって、 Saccharomyces cerevisia eの場合は、例えばハイネン（Hinnen) らの方法（Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 、第 75卷、第 1927頁、 1978年）やリチウム法（J. Bacteriol. 、第 153卷、第 163頁、 1983年）によって、動物細胞の場合は、例えばグラハム（Graham) の方法（バイロロジ一（Virology) 、第 52卷、第 456頁、 1 973年）、昆虫細胞の場合は、例えばサマーズ（Summers) らの方法（Mol. C ell. Biol., 第 3卷、第 21 56〜第 2 165頁、 1983年）によってそれぞれ形質転換することができる。

本発明の夕ンパクは、上記の如く調製される発現べクタ一を含む形質転換細胞 (以下、形質移入体を包含する意味で使用する。）を栄養培地で培養することによって製造することができる。

栄養培地は、宿主細胞（形質転換体）の生育に必要な炭素源、無機窒素源もしくは有機窒素源を含でいることが好ましい。炭素源としては、例えばグルコース、デキストラン、可溶性デンプン、ショ糖などが、無機窒素源もしくは有機窒素源としては、例えばアンモニゥム塩類、硝酸塩類、アミノ酸、コーンスチープ · リカ一、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などが例示される。また所望こより他の栄養素（例えば、無機塩（例えば塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウム）、ビタミン類、抗生物質（例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、アンピシリン、カナマイシン等）など）を含んでいてもよい。

培養は当業界において知られている方法により行われる。培養条件、例えば温度、培地の pHおよび培養時間は、本発明のタンパクが大量に生産されるように適宜選択される。

なお、下記に宿主細胞に応じて用いられる具体的な培地および培養条件を例示するが、何らこれらに限定されるものではない。

宿主が細菌、放線菌、酵母、糸状菌である場合、例えば上記栄養源を含有する液体培地が適当である。好ましくは、 pHが 5〜8である培地である。

宿主が E. coli の場合、好ましい培地として LB培地、 M9培地（ミラ一（Mi Her) ら、 Exp. Mol. Genet, Cold Spring Harbor Laboratory_s 第 431頁、 1972年）等が例示される。かかる場合、培養は、必要により通気、撹拌しながら、通常 14〜43°C、約 3~ 24時間行うことができる。

宿主が Bacillus属菌の場合、必要により通気、撹拌をしながら、通常 30〜4 0°C、約 16〜96時間行うことができる。

宿主が酵母である場合、培地として、例えば Burkholder最小培（ボスチアン（ Bostian) 、 Proc. Natl. Acad. Sci. USAヽ第 77卷、第 4505頁、 1980 年）が挙げられ、 pHは 5〜 8であることが望ましい。培養は通常約 20〜 35 °Cで約 14〜144時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。宿主が動物細胞の場合、培地として例えば約 5〜 20%の胎児牛血清を含む M EM培地（サイエンス（Science) 、第 122巻、第 501頁、 1952年）、 D MEM培地（バイロロジ一（Virology) 、第 8巻、第 396頁、 1959 年）、 RPMI 1640培地（J. Am. Med. Assoc.、第 199巻、第 5 19頁、 19 W

25

6 7年）、 1 9 9培地（proc. Soc. Exp. Biol . Med.ヽ第 7 3巻、第 1頁、 1 9 5 0年）等を用ることができる。培地の p Hは約 6〜 8であるのが好ましく、培養は通常約 3 0〜4 0 °Cで約 1 5〜7 2時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。

宿主が昆虫細胞の場合、例えば胎児牛血清を含む Grace' s 培地（Pro Natl . Acad. Sci . USA, 第 8 2卷、第 8 4 0 4頁、 1 9 8 5年）等が挙げられ、その p Hは約 5〜 8であるのが好ましい。培養は通常約 2 0〜4 0 °Cで 1 5〜 1 0 0時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。

本発明のタンパクの内、膜貫通性タンパクの状態で発現させることを目的とする場合には、上述のような形質転換細胞、特に動物細胞を培養することにより、その細胞表面に目的分子を高発現させることが可能である。一方、本発明のタンパクを、細胞外領域夕ンパクフラグメントのような可溶性夕ンパクとして製造する場合には、当該細胞外領域をコードする D N Aを用いて上述のように形質転換体を調製し、該形質転換体を培養することにより培養上清中に分泌させることにより製造することができる。

すなわち、得られた培養物を濾過または遠心分離等の方法で培養濾液（上清）を得、該培養濾液から天然または合成蛋白質を精製並びに単離するために一般に用いられる常法に従って該本発明の夕ンパクを精製、単離する。

単離、精製方法としては、例えば塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、ドデシル硫酸ナトリウム一ポリアクリルアミドゲル電気泳動など分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーゃヒドロキシルァパタイトク口マトグラフィ一などの荷電を利用する方法、ァフィ二ティ一クロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体ク口マトグラフィ一などの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。

一方、本発明のタンパクが培養された形質転換体のペリブラズムまたは細胞質内に存在する場合は、培養物を濾過または遠心分離などの常法に付 bて菌体あるいは細胞を集め、 -獰当な緩衝液に懸濁し、例えば超音波ゃリゾチーム及び凍結融解などの方法で細胞等の細胞壁および/または細胞膜を破壊した後、遠心分離やろ過などの方法で本発明のタンパクを含有する膜画分を得る。該膜画分をトライトン— X 1 0 0等の界面活性剤を用いて可溶化して粗溶液を得る。そして、当該粗溶液を先に例示したような常法を用いることにより、単離、精製することができる。

本発明における「トランスジエニックマウス」は、上述のような方法に従って調製できる本発明のマウス以外の動物種のタンパク（非自己のタンパク）をコ一ドする D N A ( c D N Aまたはゲノミック D N A) がマウスの内在性遺伝子座上にインテグレート（integrate) されているトランスジエニックマウスマウスであり、該トランスジエニックマウスは、体内に該非自己のタンパクを発現、分泌する。

該トランスジエニックマウスは、トランスジエニック動物の製造において通常使用されるような常法（例えば、最新動物細胞実験マニュアル、エル .アイ ·シ一発行、第 7章、第 3 6 1〜第 4 0 8頁、 1 9 9 0年を参照）に従って作製することが可能である。

具体的には、例えば、正常マウス胚盤胞（blastcyst) のから取得した胚性幹細胞（Embryonic Stem Cell, ES Cell) を、例えば、ヒト由来の本発明のタンパクをコードする遺伝子が発現可能なように挿入された発現べク夕一で形質転換する。該本発明のヒト由来のタンパクをコードする遺伝子が内在性遺伝子上にィンテグレートされた E S細胞を常法により選別する。次いで、選別した E S細胞を、別の正常マウスから取得した受精卵（肺盤胞）にマイクロインジェクションする (Proc. Natl. Acad. Sci . USA, Vol.77, No. 12, pp.7380-7384, 1980；米国特許第 4，873，191号公報）。該胚盤胞を仮親としての別の正常マウスの子宮に移植する。そうして該仮親マウスから、フアウンダ一マウス（子マウス）が生まれる。該フアウンダ一マウスを正常マウスと交配させることによりヘロトランスジエニックマウスを得る。該ヘテロ（heterogeneic) トランスジエニックマウス同士を交配することにより、メンデルの法則に従って、ホモ（homogeneic) トランスジエニックマウスが得られる。

本発明の「ノックアウトマウス」は、マウス由来の本発明のタンパクをコードする内在性遺伝子がノックアウト（不活性化）されたマウスであり、例えば相同組換えを応用したポジティブネガティブセレクション法を用いて作製することができる（米国特許第 5，464，764号公報、同 5, 487, 992号公報、同 5, 627, 059号公報、 Proc . Natl . Acad. Sci . USA, Vol .86， 8932-8935, 1989、 Nature, Vol .342, 4 35-438， 1989など) 。

本発明における「抗体」とは、ポリクロ一ナル抗体（抗血清）あるいはモノク口一ナル抗体を意味し、好ましくはモノクローナル抗体である。

具体的には、前述の本発明のタンパクまたはそのフラグメントに反応性を有する抗体である。

本発明の「抗体」は、本発明のタンパク（天然体、組換体、合成物）、該夕ンパクを発現している細胞、あるいは前述のような遺伝子組換技術により目的タンパクをその細胞表面に高発現させた形質転換体を免疫原（抗原）として、マウス、ラット、ハムスター、モルモットあるいはゥサギ等の哺乳動物に免疫して得られる天然型抗体、遺伝子組換技術を用いて製造され得るキメラ抗体及びヒト型抗体（CDR- grafted抗体）、並びにヒト抗体産生トランスジエニック動物等を用いて製造され得るヒト抗体も包含する。

またモノクローナル抗体の場合には、 I g G、 I g M、 I g A I g Dあるいは I g E等のいずれのアイソタイプを有するモノクロ一ナル抗体をも包含する。好ましくは、 I g Gまたは I g Mである。

本発明で言うポリクロ一ナル抗体（抗血清）あるいはモノクロ一ナル抗体は、既存の一般的な製造方法によって製造することができる。即ち、例えば、前記の O 98 3 5

28 ような免疫原（抗原）を、必要に応じてフロイントアジュバント（Freund' s Adj uvant) とともに、—哺乳動物、好ましくは、マウス、ラット、ハムス夕一、モルモット、ゥサギ、ネコ、ィヌ、ブ夕、ャギ、ゥマあるいはゥシ、より好ましくはマウス、ラット、ハムス夕一、モルモットまたはゥサギに免疫する。ポリクロ一ナル抗体は、該免疫感作動物から得た血清から取得することができる。またモノクローナル抗体は、該免疫感作動物から得た該抗体産生細胞と自己抗体産生能のない骨髄腫系細胞（ミエローマ細胞）からハイプリド一マを調製し、該ハイプリドーマをクローン化し、哺乳動物の免疫に用いた抗原に対して特異的親和性を示すモノクローナル抗体を産生するクローンを選択することによって製造される。モノクローナル抗体は、具体的には下記のようにして製造することができる。即ち、前述のような本発明のタンパクあるいは該夕ンパクを発現している細胞等を免疫原として、該免疫原を、必要に応じてフロイントアジュバント（Freund' s Adjuvant) とともに、マウス、ラット、ハムスター、モルモヅトあるいはゥサギ、好ましくはマウス、ラットあるいはハムス夕一（ヒト抗体産生トランスジェニックマウスのような他の動物由来の抗体を産生するように作出されたトランスジエニック動物を含む）の皮下内、筋肉内、静脈内、フッドパッド内あるいは腹腔内に 1乃至数回注射するかあるいは移植することにより免疫感作を施す。通常、初回免疫から約 1乃至 1 4日毎に 1乃至 4回免疫を行って、最終免疫より約 1 乃至 5日後に免疫感作された該哺乳動物から抗体産生細胞が取得される。

モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマの調製は、ケ一ラ一及びミルシユタインらの方法（ネィチヤ一（Nature )、第 2 5 6巻、第 4 9 5〜第 4 9 7頁、 1 9 7 5年）及びそれに準じる修飾方法に従って行うことができる。即ち、前述の如く免疫感作された哺乳動物から取得される脾臓、リンパ節、骨髄あるいは扁桃等、好ましくは脾臓に含まれる抗体産生細胞と、好ましくはマウス、ラット、モルモット、ハムス夕一、ゥサギまたはヒト等の哺乳動物、より好ましくはマウス、ラットまたはヒト由来の自己抗体産生能のないミエローマ細胞との細胞融合させることにより調製される。

細胞融合に用いられるミエ口一マ細胞としては、例えばマウス由来ミエローマ P3/X63- AG8.653 ( 653 ) 、 P3/NSI/l-Ag4-l (NS- 1 ) 、 P3/X63-Ag8.Ul (P 3 U l) 、 SP2/0-Agl4 (Sp 2/0、 Sp 2) 、 PAI、 FOあるいは BW5147、ラット由来ミエ口一マ 210RCY3- Ag.2.3.、ヒト由来ミエローマ U-266AR1、 GM1500-6TG-A1-2 、 UC729- 6、 CEM-AGR, D1R11あるいは CEM- T15を使用することができる。

モノクローナル抗体を産生するハイブリド一マクローンのスクリ一ニングは、ハイプリド一マを、例えばマイクロタイ夕一プレート中で培養し、増殖の見られたゥ：ルの培養上清の前述のマウス免疫感作で用いた免疫抗原に対する反応性を、例えば R I Aや E L I S A等の酵素免疫測定法によって測定することにより行なうことができる。

ハイプリド一マからのモノクローナル抗体の製造は、ハイプリドーマをインビトロ、またはマウス、ラット、モルモット、ハムス夕一またはゥサギ等、好ましくはマウスまたはラット、より好ましくはマウスの腹水中等でのインビボで行い

、得られた培養上清、または哺乳動物の腹水から単離することにより行うことができる。

インビトロで培養する場合には、培養する細胞種の特性、試験研究の目的及び培養方法等の種々条件に合わせて、ハイブリド一マを増殖、維持及び保存させ、培養上清中にモノクローナル抗体を産生させるために用いられるような既知栄養培地あるいは既知の基本培地から誘導調製されるあらゆる栄養培地を用いて実施することが可能である。

基本培地としては、例えば、 Ham' F 12培地、 MCDB 153培地あるいは低カルシウム MEM培地等の低カルシウム培地及び MCDB 104培地、 ME M培地、 D— MEM培地、 RPMI 1640培地、 A S F 104培地あるいは R D培地等の高カルシウム培地等が挙げられ、該基本培地は、目的に応じて、例えば血清、ホルモン、サイト力イン及び/または種々無機あるいは有機物質等を含有することができる。

モノクローナル抗体の単離、精製は、上述の培養上清あるいは腹水を、飽和硫酸アンモニゥム、ュ一グロブリン沈澱法、力プロイン酸法、力プリル酸法、ィォン交換クロマトグラフィー（0 £八または0 £ 5 2等）、抗ィムノグロブリンカラムあるいはプロティン Aカラム等のァフィ二ティカラムクロマトグラフィ一に供すること等により行うことができる。

本発明における「キメラ抗体」は、遺伝子工学的に作製されるモノクローナル抗体であって、具体的には、例えば、その可変領域がマウスィムノグロブリン由来の可変領域であり、かつその定常領域がヒトイムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴とするマウス/ヒトキメラモノクローナル抗体等のキメラモノクローナル抗体を意味する。

ヒトイムノグロブリン由来の定常領域は、 I g G、 I g M、 I g A、 I g D及び I g E等のアイソタイプにより各々固有のアミノ酸配列を有するが、本発明における組換キメラモノクローナル抗体の定常領域はいずれのアイソタイプに属するヒトイムノグログリンの定常領域であってもよい。好ましくは、ヒト I g Gの定常領域である。

本発明におけるキメラモノクロ一ナル抗体は、例えば以下のようにして製造することができる。しかしながら、そのような製造方法に限定されるものでないことは言うまでもない。

例えば、マウス/ヒトキメラモノクローナル抗体は、実験医学（臨時増刊号）、第 1 . 6巻、第 1 0号、 1 9 8 8年及び特公平 3— 7 3 2 8 0号公報等を参照しながら作製することができる。即ち、マウスモノクローナル抗体を産生するハィプリド一マから単離した該マウスモノクローナル抗体をコ一ドする D N Aから取得した活性な VH遺伝子（ H鎖可変領域をコードする再配列された V D J遺伝子 ) の下流に、ヒトイムノグロムリンをコードする D N Aから取得した CH遺伝子（ H鎖定常領域をコードする C遺伝子）を、また該ハイプリドーマから単離したマウスモノクローナル抗体を.コードする DN Aから取得した活性な VL遺伝子（L鎖可変領域をコ一ド: Tる再配列された V J遺伝子）の下流にヒトイムノグロムリンをコードする DNAから取得した CL遺伝子（L鎖定常領域をコードする C遺伝子）を、各々発現可能なように配列して 1つ又は別々の発現べクタ一に挿入し、該発現べク夕一で宿主細胞を形質転換し、該形質転換細胞を培養することにより作製することができる。

具体的には、まず、マウスモノクロ一ナル抗体産生ハイプリドーマから常法により DNAを抽出後、該 DNAを適切な制限酵素（例えば EcoRI、 Hind III等）を用いて消化し、電気泳動に付して（例えば 0. 7%ァガロースゲル使用 ) サザンブロット法を行う。泳動したゲルを例えばェチジゥムブ口マイド等で染色し、写真撮影後、マ一カーの位置を付し、ゲルを 2回水洗し、 0. 25M H C 1溶液に 15分間浸す。次いで、 0. 4Nの NaOH溶液に 10分間浸し、その間緩やかに振盪する。常法により、フィル夕一に移し、 4時間後フィルターを回収して 2 X S S Cで 2回洗浄する。フィルターを十分乾燥した後、ペイキング (75°C、 3時間）を行う。ペイキング終了後に、該フィル夕一を 0. l xSS C/0. 1%SDS溶液に入れ、 65°Cで 30分間処理する。次いで、 3xSS C/0. 1%SDS溶液に浸す。得られたフィルターをプレハイブリダィゼ一シヨン液と共にビニール袋に入れ、 65°Cで 3〜4時間処理する。

次に、この中に³² P標識したプローブ D N A及びハイブリダィゼ一シヨン液を入れ、 65 °Cで 12時間程度反応させる。ハイブリダィゼ一シヨン終了後、適切な塩濃度、反応温度および時間（例えば、 2XSSC— 0. 1 %SD S溶液、室温、 10分間）のもとで、フィル夕一を洗う。該フィル夕一をビニール袋に入れ、 2XSSCを少量加え、密封し、オートラジオグラフィ一を行う。

上記サザンプロット法により、マウスモノクローナル抗体の H鎖及び L鎖を各々コードする再配列された VD J遺伝子及び V J遺伝子を同定する。同定した D NA断片を含む領域をショ糖密度勾配遠心にて分画し、ファージベクタ一（例えば、 Charon 4A、 Charon 28、え EMBL3、 AEMBL4等）に組み込み、該ファージベクターで大腸菌（例えば、 LE392、 NM539等）を形質転換し、ゲノムライブラリーを作製する。そのゲノムライブラリ一を適当なプローブ（H鎖 J遺伝子、 L鎖（） J遺伝子等）を用いて、例えばベントンデイビス法（サイエンス (Science), 第 196卷、第 180〜第 182頁、 1977年）に従って、ブラークハイプリダイゼ一シヨンを行い、再配列された VD J遺伝子あるいは V J遺伝子を各々含むポジティブクローンを得る。得られたクローンの制限酵素地図を作製し、塩基配列を決定し、目的とする再配列された VH(VDJ)遺伝子あるいは VL( VJ)遺伝子を含む遺伝子が得られていることを確認する。

一方、キメラ化に用いるヒト CH遺伝子及びヒト CL遺伝子を別に単離する。例えば、ヒト I gGl とのキメラ抗体を作製する場合には、 CH遺伝子である Cァ 1 遺伝子と CL遺伝子である C A:遺伝子を単離する。これらの遺伝子はマウス免疫グロブリン遺伝子とヒト免疫グロプリン遺伝子の塩基配列の高い相同性を利用してヒト Cァ 1遺伝子及びヒト C 遺伝子に相当するマウス Cァ 1遺伝子及びマウス C 遺伝子をプローブとして用い、ヒトゲノムライブラリーから単離することによつて得ることができる。

具体的には、例えば、クロ一ン I g 146 (プロシーディングスナショナルァ力デミーォブサイエンス（Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 第 75卷、第 4709 〜第 4713頁、 1978年）からの3 1)の11:111(1111—：6&111111断片とクローン ME P 10 (プロシ一ディングスナショナルアカデミーォブサイエンス（P roc. Natl. Acad. Sci. USA)ヽ第 78卷、第 474〜第 478頁、 1981年）からの 6. 8 kbの E c oR I断片をプローブとして用い、ヒトのラムダ Charon 4Aの Haelll— Alulゲノムライブラリ一（セル（Cell)、第 15卷、第 11 57〜第 1 1 74頁、 1 978年）中から、ヒト CA:遺伝子を含み、ェンハンサ —領域を保持している DNA断片を単離する。また、ヒト Cァ 1遺伝子は、例えばヒト胎児肝細胞 D N Aを H i n d 111で切断し、ァガロ一スゲル電気泳動で分画した後、 5 . 9 k bのバンドを人 7 8 8に挿入し、前記のプローブを用いて単離する ο - このようにして単離されたマウス VH遺伝子とマウス VL遺伝子、及びヒト CH遺伝子とヒト CL遺伝子を用いて、プロモーター領域及びェンハンサー領域などを考慮しながらマウス VH遺伝子の下流にヒト CH遺伝子を、またマウス VL遺伝子の下流にヒト CL遺伝子を、適切な制限酵素及び D N Aリガ一ゼを用いて、例えば p S V 2 g p tあるいは p S V 2 n e o等の発現べクタ一に常法に従って組み込む。この際、マウス VH遺伝子/ヒト CH遺伝子とマウス VL遺伝子/ヒト CL遺伝子のキメラ遺伝子は、一つの発現ベクターに同時に配置されてもよいし、各々別個の発現ベクターに配置することもできる。

このようにして作製したキメラ遺伝子挿入発現ぺク夕一を、例えば P3X63 'Ag8' 653 細胞あるいは SP210細胞といった、自らは抗体を産生していない骨髄腫細胞にプロトプラスト融合法、 D E A E—デキストラン法、リン酸カルシウム法あるいは電気穿孔法等により導入する。形質転換細胞は、発現ベクターに導入された薬物耐性遺伝子に対応する薬物含有培地中での培養により選別し、目的とするキメラモノクローナル抗体産生細胞を取得する。

このようにして選別された抗体産生細胞の培養上清中から目的のキメラモノク口一ナル抗体を取得する。

本発明における「ヒト型抗体（CDR- grafted抗体）」は、遺伝子工学的に作製されるモノクローナル抗体であって、具体的には、例えば、その超可変領域の相補性決定領域の一部または全部がマウスモノク口一ナル抗体に由来する超可変領域の相補性決定領域であり、その可変領域の枠組領域がヒトイムノグロプリン由来の可変領域の枠組領域であり、かつその定常領域がヒトイムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴とするヒト型モノクローナル抗体を意味する。

ここで、超可変領域の相補性決定領域とは、抗体の可変領域中の超可変領域に存在し、抗原と相補的に直接結合する部位である 3つの領域（Complementarity- determining residue； C D R 1 _s CDR2、 CDR3) を指し、また可変領域の枠組領域とは、 1 3つ相補性決定領域の前後に介在する比較的保存された 4つの領域（Framework； F R 1、 FR2、 FR3、 FR4) を指す。

換言すれば、例えばマウスモノク口一ナル抗体の超可変領域の相補性決定領域の一部または全部以外の全ての領域が、ヒトイムノグロプリンの対応領域と置き代わったモノクローナル抗体を意味する。

ヒトイムノグロブリン由来の定常領域は、 I gG、 I gM、 I As I gD及び I gE等のアイソタイプにより各々固有のアミノ酸配列を有するが、本発明におけるヒト型モノクローナル抗体の定常領域はいずれのアイソタイプに属するヒトイムノグログリンの定常領域であってもよい。好ましくは、ヒト I gGの定常領域である。また、ヒトイムノグロブリン由来の可変領域の枠組領域についても限定されるものではない。

本発明におけるヒト型モノクローナル抗体は、例えば以下のようにして製造することができる。しかしながら、そのような製造方法に限定されるものでないことは言うまでもない。

例えば、マウスモノクローナル抗体に由来する組換ヒト型モノクローナル抗体は、特表平 4一 506458号公報及び特開昭 62— 296890号公報等を参照して、遺伝子工学的に作製することができる。即ち、マウスモノクローナル抗体を産生するハイプリドーマから、少なくとも 1つのマウス H鎖 CDR遺伝子と該マウス H鎖 C D R遺伝子に対応する少なくとも 1つのマウス L鎖 C D R遺伝子を単離し、またヒトイムノグロプリン遺伝子から前記マウス H鎖 C D Rに対応するヒト H鎖 CD R以外の全領域をコードするヒト H鎖遺伝子と、前マウス L鎖 C DRに対応するヒト L鎖 CD R以外の全領域をコードするヒト L鎖遺伝子を単離する。

単離した該マウス H鎖 CD R遺伝子と該ヒト H鎖遺伝子を発現可能なように適当な発現べク夕一に導入し、同様に該マウス L鎖 CD R遺伝子と該ヒト L鎖遺伝子を発現可能なように適当なもう 1つの発現べク夕一に導入する。または、該マウス H鎖 CD R遺伝子/ヒト H鎖遺伝子とマウス L鎖 CD R遺伝子/ヒト L鎖遺伝子を同一の発現べク夕一に発現可能なように導入することもできる。このようにして作製された発現ベクターで宿主細胞を形質転換することによりヒト型モノクロ一ナル抗体産生形質転換細胞を得、該形質転換細胞を培養することにより培養上清中から目的のヒト型モノクローナル抗体を得る。

本発明における「ヒト抗体」とは、ィムノグロブリンを構成する H鎖の可変領域及び H鎖の定常領域並びに L鎖の可変領域及び L鎖の定常領域を含む全ての領域がヒトイムノグロプリンをコ一ドする遺伝子に由来するィムノグロブリンである。

ヒト抗体は、常法に従って、例えば、少なくともヒトイムノグロブリン遺伝子をマウス等のヒト以外の哺乳動物の遺伝子座中に組込むことにより作製されたトランスジヱニック動物を、抗原で免疫感作することにより、前述したポリクロ一ナル抗体あるいはモノクローナル抗体の作製法と同様にして製造することができる。例えば、ヒト抗体を産生するトランスジエニックマウスは、ネィチャージェネティヅクス（Nature Genetics), 第 15卷、第 146〜第 156頁、 1997年；ネィチャージエネティヅクス、第 7卷、第 13〜第 21頁、 1994年；特表平 4— 504365号公報；国際出願公開 WO 94/25585号公報；日経サィエンス、 6月号、第 40〜第 50頁、 1995年；ネィチヤ一（Nature)、第 3 68卷、第 856〜第 859頁、 1994年；及び特表平 6— 500233号公報に記載の方法に従って作製することができる。

本発明における「抗体の一部」とは、前述の本発明における抗体、好ましくはモノクローナル抗体の一部分の領域を意味し、具体的には F (ab，） ₂、 Fa b' 、 Fab、 Fv (variable fragment of antibodyリ、 sFv、 d s F v (d i sulphide stabilised Fv) あるいは dAb (single domain antibody) である ( エキスパ一ト ·オピニオン ·オン · テラピュ一ティック ·パテンッ（Exp. Opin. Ther. Patents ) , 第 6巻，第 5号，第 441〜456頁， 1996年）。

ここで、「F ( b， ) ₂」及び「F a b ' 」とは、ィムノグロプリン（モノク口一ナル抗体）を、蛋白分解酵素であるペプシンあるいはパパイン等で処理することにより製造され、ヒンジ領域中の 2本の H鎖間に存在するジスルフィド結合の前後で消化されて生成される抗体フラグメントを意味する。例えば、 I g Gをパパインで処理すると、ヒンジ領域中の 2本の H鎖間に存在するジスルフィド結合の上流で切断されて VL ( L鎖可変領域）と C L ( L鎖定常領域）からなる L鎖、及び VH ( H鎖可変領域）と CHァ 1 ( H鎖定常領域中のァ 1領域）とからなる H 鎖フラグメントが C末端領域でジスルフィド結合により結合した相同な 2つの抗体フラグメントを製造することができる。これら 2つの相同な抗体フラグメントを各々 F a b，という。また I g Gをペプシンで処理すると、ヒンジ領域中の 2 本の H鎖間に存在するジスルフィド結合の下流で切断されて前記 2つの F a b，がヒンジ領域でつながったものよりやや大きい抗体フラグメントを製造することができる。この抗体フラグメントを F ( a b ⁵ ) ₂という。

本発明の「医薬組成物」とは、前記で定義される本発明のタンパク、夕ンパクフラグメント、融合タンパク、抗体または抗体の一部のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とからなる医薬組成物である。

ここで「薬学的に許容され得る担体」とは、賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等が挙げられる。そのような担体の一つ以上を用いることにより、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、注射剤、液剤、カプセル剤、トロ一剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤あるいはシロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。これらの医薬組成物は、経口あるいは非経口的に投与することができる。非経口投与のためのその他の形態としては、一つまたはそれ以上の活性物質を含み、常法により処方される外用液剤、腸溶内投与のための坐剤およびべッサリーなどが含まれる。投与量は、患者の年齢、性別、体重及び症状、治療効果、投与方法、処理時間、あるいは該医薬組成物に含有される活性成分（前記ポリペプチドや抗体など）の種類などにより異なるが、通常成人一人当たり、一回につき 10 /gから lOOOmg ( あるいは 10〃gから 500mg) の範囲で投与することができる。しかしながら、投与量は種々の条件により変動するため、上記投与量より少ない量で十分な場合もあり、また上記の範囲を越える投与量が必要な場合もある。

とりわけ注射剤の場合には、例えば生理食塩水あるいは市販の注射用蒸留水等の非毒性の薬学的に許容され得る担体中に 0 . 1 抗体/111 1担体~ 1 O m g 抗体/ m 1担体の濃度となるように溶解または懸濁することにより製造することができる。このようにして製造された注射剤は、処置を必要とするヒト患者に対し、 1回の投与において 1 k g体重あたり、 l g〜 1 0 O m gの割合で、好ましくは 5 0 g〜5 O m gの割合で、 1日あたり 1回〜数回投与することができる。投与の形態としては、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射あるいは腹腔内注射のような医療上適当な投与形態が例示できる。好ましくは静脈内注射である。

また、注射剤は、場合により、非水性の希釈剤（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリ一ブ油のような植物油、エタノールのようなァルコール類など）、懸濁剤あるいは乳濁剤として調製することもできる。

そのような注射剤の無菌化は、バクテリア保留フィル夕一を通す濾過滅菌、殺菌剤の配合または照射により行うことができる。注射剤は、用時調製の形態として製造することができる。即ち、凍結乾燥法などによって無菌の固体組成物とし、使用前に無菌の注射用蒸留水または他の溶媒に溶解して使用することができる本発明の医薬組成物は、動脈硬化症の治療及び予防並びに P T C A等による動脈閉塞症状の治療後の再狭窄の治療及び予防に用いることができる。図面の簡単な説明

図 1は、 RT—-： P CRで得られたゥサギ B A2303 cDNAのゲル電気泳動像を示す写真である。

図中の数字は、バルーンカテーテルによる動脈内膜剥離処理から動脈摘出までに経た日数を示し、即ち cDN Aの経時的な発現状態を示す。

図 2は、 RT— P CRで得られたゥサギ BA0306 cDNAのゲル電気泳動像を示す写真である。

図中の数字は、バル一ンカテーテルによる動脈内膜剥離処理から動脈摘出までに経た日数を示し、即ち c D N Aの経時的な発現状態を示す。

図 3は、疎水性/親水性プロットによる、ゥサギ BA2303タンパクを構成するアミノ酸残基の疎水性/親水性の状態を示す図。

図 4は、疎水性/親水性プロットによる、ヒト BA0306タンパクを構成するアミノ酸残基の疎水性//親水性の状態を示す図。

図 5は、疎水性ノ親水性プロットによる、ヒト BA2303タンパクを構成するアミノ酸残基の疎水性/親水性の状態を示す図。

図 6は、ノーザンプロッティングによる、種々ヒト組織でのヒト BA2303 の mRN Aの発現状態を示す写真である。

図 7は、ノーザンプロヅテイングによる、種々ヒト組織でのヒト B AO 306 の mRN Aの発現状態を示す写真である。

図 8は、疎水性/親水性プロットによる、マウス BA 2303タンパクを構成するアミノ酸残基の疎水性/親水性の状態を示す図。

図 9は、ゥサギ、ヒト及びマウス由来の B A 2303タンパク分子のアミノ酸相同性を示す図。

図 10は、ゥサギ、ヒト及びマウス由来の BA0306タンパク分子のァミノ酸相同性を示す図。

図 1 1は、マウス由来 BA2303タンパクをコードするェクソンを含むマウスゲノミヅク DNAの構造及びノックァゥトマウス作製のための夕一ゲティングベクタ —の構造を模式的.に示す図。

図 12は、マウス由来 BA0306夕ンパクをコ一ドするェクソンを含むマウスゲノミック DN Aの構造及びノックァゥトマウス作製のための夕一ゲティングベクタ —の構造を模式的に示す図。発明を実施するための最良の形態

以下、実施例を以て本発明をさらに詳細に説明するが、本発明が該実施例に記載される態様のみに限定されるものではないことは言うまでもない。

実施例 1 P T C A施行による大動脈内莫剥離ゥサギモデルの作成

実験医学 ·増刊、「循環研究プロトコ一ル」、第 14卷、第 12号、第 87頁、 1996に記載される方法に従って、日本白色ゥサギの胸膜大動脈に外科的手術によりバルーンカテ一テルを挿入し、バルーンを膨らませ P T CA処理を施した。 PTCA施術後、 1日目から 6力月目まで経時的に施術部位を含む動脈を摘出した。

実施例 2 摘出大動脈からの全 RN Aの調製

PT C A施術後、 1、 2、 4、 7、 14、 23、 30、 54、 112及び 13 7曰目に大動脈を摘出し、各々の試料から、トリゾール（TMZ0L) 試薬（GIBC0 BRL製）を用いて、常法により全 RNAを取得した。

また、 PTCAを施術しない正常な日本白色ゥサギから摘出した大動脈から、同様にして全 RN Aを取得した。

実施例 3 cDNAの合成

実施例 2で得た全 RN Aの経時的試料（各々 2 1、濃度 l ig/ml) または mRNA (各々 2 1、濃度 0.5〃g/ml) を、 DEPC (diethyl pirocar bonate) 処理した蒸留水（8 1) に溶解し、次いで、アンカープライマ一（G T15 A、 1 /1、濃度 25pmo を加え全量 10〃1とし、 65°Cで 5 分間ィンキュベ一卜した。ィンキュベ一ト後すぐに氷上に静置した。

次いで、 5x7ァ一ストストランドバッファ一（first strand bufferヽ JLL I 、く組成 > : 0.25Mのトリス塩酸 (pH7.5)、 0.375Mの塩化カリウム、 0.05Mの DTT 及び 0.015Mの塩化マグネシウム）、 0.1Mの DTT ( 2 / 1 )、 250 Mの dNT P (1〃1) 、蒸留水（1〃1) 及び逆転写酵素（Superscript Gibco BRL製、 1〃1、濃度20011/〃1) を加えて全量を 20 /1とした。 42°0で1時間ィンキュベ一トした後、 DEPC H₂0 ( 30〃 1 ) を加えて全量を 50〃 1とし、 c DNAを合成した。

実施例 4 遺伝子の経時的発現の分析

PTCA施行後の遺伝子の経時的な発現状態を、ディファレンシャルディスプレ一法（ヌクレイックァシッド ■ リサーチ（Nucleic Acids Research), 第 21卷，第 18号，第 4272〜4280頁， 1993年及びサイエンス（Science) ，第 257卷，第 967〜 971頁， 1992年）及び RT— PCR法（Reverse transcription- polymerase chai n reaction；実験医学，増刊、「P C Rとその応用」、第 8巻、第 9号、 199 0年；及び「遺伝子増幅 PCR法 ·基礎と新しい展開」、共立出版株式会社発行、 1992年）を用いて常法に従って解析した。

ディファレンシャルディスプレー法での P CRで使用するテンプレートは、実施例 3で調製した cDNA (経時的試料の各々）を 100倍に希釈したものを用いた。 mRNAから合成した cDNA (経時的試料の各々）の場合には、 50倍希釈物を用いた。

該テンプレ一卜 cDNA (各々 2〃 1) に、蒸留水（10.75〃 1) 、 10 EX Taq緩衝液（2 1) 、 25〃Mの dNTP (1.5〃 1) 、アービタリープライマ一 (arbitary primer, 配列： GATCAATCGC、 1〃 1、濃度： 25pmol/〃 1 ) 、アンカ —プライマ一（ 1〃 1、濃度： 25pmol/〃 1)、 EX Taq DNAポリメラ一ゼ（0· 25〃 1)、及びひ 35S d ATP (1.5〃 1、 1 OmCi/m アマシャム製）とを加え全量をとし、 P CRを行った。該 P CRは、 95°Cで 3分間、 40°Cで 5分間及び 72°Cで 5分間からなる反応を 1サイクル、 95°Cで 30秒間、 40 °Cで 2分間及び 7_2°Cで 1分間からなる反応を 40サイクル、並びに 72°Cで 5 分間の反応を行った後、 4°Cに保持した。

得られた各々の PCR産物に、反応停止緩衝液（stop buff er、 5〃1、 <組成〉：ホルムアミド（30ml)、キシレンシァノール（3 Omg) 、ブロモフェノールブルー（10mg) 、 0.51の£0丁八（200〃 1、 ρΗδ.Ο) ) を加えた後、 3.5〃 1を分取し、 6%ァクリルアミドゲル（組成： 50 Oml中に尿素（240 g) 、 10xTBE (50ml) 、 40%ァクリルアミド（75ml、 38%モノアクリルアミドと 2%ビスアクリルアミドの混合物））を用いてシークェンスゲル電気泳動を行った。この結果、発現状態に特に経時的変化が見られる 2種類のバンドが確認された。

該 2つの DNA断片をゲルから切り出し、常法（実験医学 ·別冊、「遺伝子ェ学ハンドブック」、羊土社発行、 1992年）に従って、各々配列番号 11 (1 78 bp) 及び 12 (167bp) に記載される塩基配列を有する 2つの D N A 断片を単離した。それぞれ BA2303 (配列番号 11)及び BA0306 (配列番号 12) と命名した。

得られた 2つの DNA断片を含む DN Aの経時的発現状態を確認するために、実施例 3で調製した cDNA (各々の経時的試料）をテンプレートとして RT— PCRを行った。

BA2303については、フォーヮ一ドプライマ一（forward primer)及びリバースプライマ一（reverse primer) として、各々配列番号 13及び 14に記載の合成 DNAを用いた。

B A 0306については、フォーヮ一ドプライマ一及びリバースプライマ一として、各々配列番号 21及び 22に記載の合成 DNAを用いた。

各々のテンプレート c DNA (各々 3 /1) に、 10 Xフォ一ゲルシュ夕イン緩衝液（Vogelstein bufferヽ 2.5〃 1)、 2.5mMの dNTP (1.5〃 1)、フォ一ワードプライマ一（ 1〃 1、濃度： 25pmol/〃 1)、リバースプライマ一（ 1 〃1、濃度： 25_pmol/〃l) 、？ァクチンプライマ一混合物（^-actin prime r mix、濃度：各々 25pmol/〃 1) 、 EX Taq MAポリメラ-ゼ（0,2〃 1 ) を加え、全量を 25〃 1に調製し、 RT— PCRを行った。反応は、 94°Cで 2分間、並びに 94°Cで 3秒間、 55°Cで 30秒間及び 72°Cで 1分間のからなる反応を 35サイクル、また 72°Cで 3分間行い、 4°Cで保持した。

得られた各々の PCR産物を、電気泳動に供した。結果を、図 1 (BA230 3)及び図 2 (BA0306) に示す。

BA2303は、 PTCA処理による血管内皮剥離後、 1日目から発現が上昇し、約 2〜4日目を最大にして、約 7日目まで発現していることが確認された。

BA0306は、 PTCA処理による血管内皮剥離後、約 4日目を最大にして、 1〜約 7日目まで発現していることが確認された。

実施例 5 長鎖 cDNAの取得

実施例 4で得られた 2つの cDN A断片（BA2303及び B AO 306) を含む長鎖 c DNAを取得するために、 Race法（Rapid amplification ends) による P CRを行った（プロシ一ディングス ·ォブ ·ナショナル 'アカデミー ' ォブ 'サイエンス（Pro Natl. Acad. Sci. USA)、第 85卷、第 8998〜9002頁、 1988年及び「遺伝子増幅 PC R法 ·基礎ど新しい展開」、共立出版株式会社発行、 1992年) 。

該 PCRは、実施例 4で得られた各々の cDNA断片をテンプレートとし、マラソン cDNA増幅キヅト（Marathon cDNA Amplification Kit、クローンテック (CL0NTECH)製）を用いて、 2回行った。

BA2303については、（1) 配列番号 15及び 19に記載される合成 DN Aをプライマ一として用いた P CR、 (2) 配列番号 16及び 20に記載される合成 DNAをプライマ一として用いた PCR、次いで、（3) 配列番号 17及び 19に記載される合成 DNAをプライマーとして用いた PCR、及び（4) 配列番号 18及び 20に記載される合成 DNAをプライマ一として用いた PCRを行つた。 -—

BA0306については、（1) 配列番号 23及び 19に記載される合成 DN Aをプライマーとして用いた PC R、 (2) 配列番号 24及び 20に記載される合成 DNAをプライマ一として用いた P CR、次いで、（3) 配列番号 25及び 19に記載される合成 DNAをプライマ一として用いた PCR、及び（4) 配列番号 26及び 20に記載される合成 DNAをプライマ一として用いた P CRを行つた。

上記 PC Rの結果、各々配列番号 1 (BA2303)及び 7 (BA0306) に記載の DN Aを得た。

推定ァミノ酸配列に基づき親水性/疎水性プロット及び P SORTを用いて解祈したところ、 BA2303は 7回膜貫通領域を有する蛋白であることが示唆された（図 3) 。

実施例 6 ヒト由来遺伝子の取得

実施例 5で得られたゥサギ由来遺伝子（BA2303及び B AO 306) をプローブとして用い、コロニーハイブリダィゼ一シヨン法を用いて常法（実験医学 '別冊、「遺伝子工学ハンドブック」、羊土社発行、 1992年）により、ヒト cD N Aライブラリ一（Fetal Brain、 STMTAGENE製、コード：937-227) をスクリ一ニングし、配列番号 3 (BA 2303) 及び 9 ( B A 0306 ) に記載される塩基配列を有するヒトホモログを取得した。

BA0306の推定アミノ酸配列に基づき親水性/疎水性プロット及び PSO RTを用いて解析したところ、 BA0306は 10回膜貫通領域を有する蛋白であることが示唆された（図 4) 。また、 BA2303は、実施例 5で得たゥサギ由来遺伝子と同様に 7回膜貫通領域を有することが示唆された（図 5) 。

得られた各々のヒト由来 DN Aをプローブとして、また Human Multiple Tissu e Northern Blot (CLONTECH製、コード：#7760-1、 #7759-1) を用い、ヒ卜の種々での該 2つの遺伝子由来の mRN Aの発現状態を調べた。

BA2303の. mRNAの発現は、種々のヒト組織で、約 3.9k及び約 2. Ikのバンドとして認められた（図 6) 。

BA0306についても、同様に種々の組織で、約 3.5k及び約 4.4kのバンドとして検出された（図 7) 。

既知タンパクとのホモロジ一検索の結果、ヒト BA0306は、酵母の酸化ス卜レス耐性夕ンノヽ。ク (S. serevisiae; Oxidative stress resistance protein) 、酵母の亜鉛/力ドミゥム耐性タンパク（Zinc/Cadmium resistance protein) 及び重金属イオン耐性タンパク（Heavy metal ion resistance protein) 等とアミノ酸配列相同性を有することが確認された。

実施例 7 マウス由来 BA2303遺伝子の取得

実施例 6と同様にして、ゥサギ由来 BA2303遺伝子をプロ一ブとして用い、マウス cDNAライブラリー（ STRATAGENE製、コード： 936-309) から配列番号 5に記載される塩基配列を有するマウスホモログを取得した。コーディング領域から演繹されるのアミノ酸は、配列番号 6に記載した。

得られたマウス B A 2303の推定アミノ酸配列に基づき親水性ノ疎水性プロット及び P SORTを用いて解析したところ、ゥサギ B A 2303及びヒト BA 2303と同様に 7回膜貫通領域を有することが示唆された（図 8) 。

本発明のゥサギ、ヒト及びマウス由来の BA2303は、互いに高いアミノ酸配列相同性を有することが確認された（図 9) 。

実施例 8 マウス由来 BA0306遺伝子の取得

実施例 6と同様にして、ゥサギ由来 BA0306遺伝子をプローブとして用い、マウス cDN Aライブラリ一（STRATAGENE製、コード： 936-309) から配列番号 27に記載される塩基配列を有するマウスホモログを取得した。コーディング領域から演繹されるのアミノ酸は、配列番号 28に記載した。

本発明のゥサギ、ヒト及びマウス由来の B AO 306は、互いに高いアミノ酸配列相同性を有することが確認された（図 1 0 )。

実施例 9 ヒト由来 B A 2 3 0 3に対する抗ペプチド抗体の調製

配列番号 4に記載されるアミノ酸配列中のアミノ酸番号 3 5乃至 4 9のァミノ酸配列を有するオリゴぺプチド (Gln-Asp-Ala-Gln-Gly-Gln-Arg-Ile-Gly-His-Ph e-Glu-Phe-His-Gly) を合成した。該ペプチドをフロインド完全アジュバントとともにゥサギ（2羽）に各々 3回免疫した。各免疫における該ゥサギの血清中の抗体価を、該ペプチド（l〃g/well) を各ゥエルにコ一ティングしたマイクロプレ一ト及び西洋ヮサビペルォキシダ一ゼで標識したャギ抗ゥサギ IgGを用いた ELSAにより、 0D492での蛍光強度を測定することにより分析した。抗体価は、 0D492 での蛍光強度が 0.2以下となる血清希釈倍率として決定した。その結果、一方のゥサギ Aでは、免疫前（3-5ml) では 50倍以下、 1回目の免疫後（16ml) では 30，600倍、 2回目の免疫後（25ml) では 40, 900倍、また 3回目の免疫後（23ml) では 41，10 0倍であり、免疫回数に依存して抗体価が上がっていることが確認された。他方のゥサギ Bでは、免疫前（3- 5ml) では 50倍以下、 1回目の免疫後（25ml) では 149 ，200倍、 2回目の免疫後（25ml) では 327，500倍、また 3回目の免疫後（25ml) では 500, 000倍以上であり、同様に抗体価が上がり、該ペプチドに対する抗体が生成されていることが確認された。

次に、ゥサギ A及び Bの各々に 4回目の免疫を施した。 4回目の免疫後の抗体価は、ゥサギ Aでは 46, 500倍であり、またゥサギ Bでは 3回目の免疫後の値と同じく 500, 000倍以上であった。次いで、 4回目の免疫後にゥサギ Aから採取した血清を、免疫原に用いたぺプチドを担体に吸着させて作製したァフィ二ティ一カラムで精製した。精製後のゥサギ Aの血清の抗体価は、 69，800倍であった。

実施例 1 0 ヒト由来 B A 2 3 0 3の組換え融合タンパクの調製

本実施例における融合夕ンパクは、マルト一ス結合タンパク（Maltose Bindin g Protein, MB P ) をコードする D N Aが挿入されている発現用プラスミド pMA L-C2 (ニューィングランドバイオラボ（New England Bio Labs. ； NEB) 製）を用いて、 MBPとの融合タンパクとして調製した。なお、実験操作は、—該 NEB社製品の取り扱い説明書- (カタログ番号： #800、 rprotein Fusion & Purification Sy stemj、 Ver.3.03, 1994年 12月改訂）並びに基本的な遺伝子組換え操作方法に従つて行った。

前記実施例でクロ一ニングしたヒト由来 BA2303をコードする DNA (配列番号 3) を錶型として、 N末端アミノ酸（アミノ酸番号 22 (Gly) 乃至 171 (Hi s) ) に対応する DNA配列を含み、 5' 末端及び 3，末端に各々 EcoRI切断部位配列及び Hindlll切断部位配列が付加された DNAを、常法に従って P CRにより増幅した。 5，プライマ一及び 3，プライマ一としては、各々配列番号 29及び配列番号 30に記載の塩基配列を有するオリゴ DNAを用いた。

一方、前記の発現用プラスミド pMAL- C2 (New England Bio Labs.製、 MBPをコードする DNAが挿入されている）を、 EcoRI及び Hindlllで切断して DNA断片を回収した。市販の DNAライゲ一シヨンキットを用いて、前記で調製したヒト由来 B A 2303の P CR産物を、このプラスミド pMAL-C2にライゲ一シヨンした後、得られた発現べクタ一で大腸菌 TB 1を形質転換した。形質転換体コロニ —から大腸菌発現用プラスミドを大量に調製した。

アンピシリン及びグルコースを含む LBブロス（1L) に、該形質転換コロニ —の培養液（ 1/100量）を加え、 O.D.が〜 0.5となるように振とう培養した。次いで、最終濃度が 0.3mMとなるように I PTG (Isopropanol- ?-D-thiogalact opyranoside) を加え、さらに振とう培養（3時間）を行った。培養液を遠心分離して上清を除き、沈殿した菌体を冷カラムバッファ一（50ml、組成： 20m Mの Tr i s— HC1、 200mMの NaCl、 1 mMの E D T A、及び 10 m Mのメルカプトエタノール）に懸濁させた。またプロテア一ゼによる分解を抑えるため 0. 1Mの PMSF (50 1、 Phenylmethylsulfonyl Fluoride) を添加した。

以下の操作は特に断わりのない限り氷冷下で行った。得られた菌体の懸濁液を、氷冷下で超音波処理して菌体を破壊した。次いで、遠心分離（ 9000rpm、 1 5乃至 30分間） -により、可溶性画分を回収した。得られた可溶性画分の蛋白量氷冷力ラムバッファ一で希釈し、カラムアプライ用のサンプルとした。

アミロースレジン（Amylose resin、 15ml, BI0RAD製）を簡易カラム、φ2 . 5 10 cm) に詰め、 8カラム量の氷冷カラムバッファ一で洗浄し平衡化した。ポンプを用いて流速が lml/分となるように保ちながら、前記で取得したサンプルをカラムにロードし、氷冷カラムバッファ一でゲルを洗浄した。

融合タンパク質の溶出を、 1 OmMのマルト一スを含む氷冷カラムバッファ一で行い、分画した。各々の画分について SD S— PAGEを行い、また抗 MB P 血清（New England Bio Labs.製）に対するウエスタンブロッテイングを行い融合タンパク質の分析を行った。ウエスタンプロッティングにおいて融合タンパク質の完全長と思われる付近にバンドを示す画分を有効画分とした。次に、この有効画分について更に高度精製を行った。得られた MBPZBA 2303融合タンパクを含む溶液に、 lmg/mlのファクタ一 Xa (Factor Xa、 5〃1) 添力 tlして 24時間ィンキュベ一卜することにより、融合タンパクを切断できる。該切断の確認は、 SDS— PAGE及び抗 MBP血清を用いたウエスタンプロッティングにより行う。

実施例 11 ヒト由来 B A 2303に対する抗体の調製

実施例 10で調製したヒト由来 BA 2303の N末端の約 150アミノ酸（ァミノ酸番号 22 (Gly) 乃至 171 (His) ) からなる組換え夕ンパクを免疫原として用いた。該組換えタンパクを、フロインド完全アジュバントとともにゥサギ（2羽 ) に免疫した。該ゥサギの血清中の抗体価を、該ペプチド（l〃g/well) を各ゥェルにコ一ティングしたマイクロプレート及び西洋ヮサビペルォキシダ一ゼで標識したャギ抗ゥサギ IgGを用いた ELSAにより、 0D492での蛍光強度を測定することにより分析した。抗体価は、 0D492での蛍光強度が 0.2以下となる血清希釈倍率として決定した。その結果、一方のゥサギにおいては、免疫前（3-5ml) では 50倍以下であったが、免疫後（18ml) では 316, 900倍であり抗体価が上がっていることが確認された。他方のゥサギでは、免疫前（3-5ml) では 50倍以下であり、免疫後（2 3ml)では 312，300倍であり同様に抗体価が上がっており、該組換えタンパクに対する抗体が生成されていることが確認された。

実施例 12 組換えヒト由来 B A 2303発現用ベクターの構築

前記実施例でクロ一ニングしたヒト由来 B A 2303をコードする DN A (配列番号 3) を錡型として、塩基番号 77乃至 1419迄の DN A (オープンリーデイングフレーム（open reading frame; 0RF) の全領域を含む）を含み、 5，末端及び 3' 末端の各々に Xbal切断部位配列が付加された DN Aを、常法により PCRにより増幅させた。 5，プライマー及び 3，プライマ一としては、各々配列番号 3 1及び配列番号 32に記載の塩基配列を有するオリゴ D N Aを用いた。

得られた PCR産物を、市販の DNAライゲ一シヨンキットを用いて、発現用プラスミド pcDNA (Invitrogen製）の Xbal切断部位に揷入し、組換えヒト由来 BA 2303発現用べクタ一を構築した。この発現べクタ一で COS細胞などの高等真核生物由来の宿主細胞を形質転換し、形質転換コロニ一をセレクションすることにより形質転換細胞を得る。得られる形質転換細胞を 10%FCS含有 DMEM培地等の適切な栄養培地中で培養することにより該形質転換細胞表面にヒト由来 B A 2303 を高発現させることができる。

実施例 13 ゥサギ由来 B A0306の組換えタンパクの調製

前記実施例でクローニングしたゥサギ由来 0306をコードする DNA (配列番号 7) を踌型として、塩基番号 2017 (He) 乃至 2196 (Met)迄の配列を含み、 5³末端及び 3'末端に各々 BamHI切断部位及び Sail切断部位が付加された DN Aを、常法に従って P CRにより増幅した。なお、ゥサギ由来の該塩基配列（塩基番号 2017 (He) 乃至 2196 (Met) ) によりコードされるアミノ酸配列（60アミノ酸残基）は、ヒト由来 BA0306の対応アミノ酸配列（配列番号 10のアミノ酸番号 535乃至 594) と 58アミノ酸残基が同一である。本 PCRでは、 5，ブライマ一及び 3，プライマ一として、各々配列番号 3 3及び配列番号 3 4に記載の塩基配列を有するォ -リゴ D N Aを用いた。

一方、発現プラスミド pQE-32 (QIA発現タイプ IVコンストラクト、 QUIAGEN製）を、 BamHI及び Sai lで消化し、切断末端を平滑化した。

pQE-32の取り扱いマニュアルに従って、上記で得られた P C R産物を、市販の D N Aライゲ一シヨンキヅトを用いて pQE- 32の BamHI及び Sailによる平滑末端に挿入した。得られた組換えヒト 0 3 0 6用発現べクタ一を、 PQE-32R7- 15と命名した次いで、得られた pQE- 32R7- 15を用いて、常法に従って、 E. coli (XL-1 blue M RF' ) を形質転換し、形質転換クローンを選別した（実験医学 '別冊、「遺伝子ェ学ハンドブック」、 P.46- 51、羊土社、 1992を参照できる）。得られた形質転換細胞を、アンピシリン及びグルコースを含む L B培地に、該形質転換コロニーの培養液を加え、 O.D.値を確認しながら 3 7 °Cで振とう培養した。次いで、最終濃度が liiiMとなるように I P T G ( Isopropanol- ?-D-thiogalactopyranoside) をカロ、さらに 4時間（3 7 °C) 振とう培養を行った。

培養液を遠心分離して上清を除き、沈殿した菌体をカラムバッファーに懸濁させた。得られた菌体の懸濁液を、氷冷下で超音波処理して菌体を破壊した。次いで、遠心分離により、可溶性画分を回収した。得られた可溶性画分の蛋白量氷冷カラムバッファ一で希釈し、カラムアプライ用のサンプルとした。

得られたサンプルを、カラムバヅファーで洗浄し平衡化した N i -NTAレジンカラムにアプライして、カラムバッファ一で洗浄した。溶出画分を集め組換えゥサギ由来 0 3 0 6タンパク断片を取得した。

実施例 1 4 ヒト由来 B A O 3 0 6に対する抗体の調製

実施例 1 3で調製した組換えゥサギ由来 0 3 0 6タンパク断片を免疫原として用いた。該組換えタンパクを、フロインド完全アジュバントとともにニヮトリに免疫した。該ニヮトリの血清中の抗体価を、該組換え蛋白（l〃g/well) を各ゥヱルにコ一ティングしたマイクロプレート及び西洋ヮサビペルォキシダ一ゼで標識した抗ニヮトリ抗体を用いた ELSAにより、蛍光強度を測定することにより分析し、抗体価が上がっていることを確認し、該組換えタンパクに対する抗体が生成されていることが確認された。

さらに、得られた抗血清を用いたゥヱスタンプロッテイングにより、本実施例で免疫原として用いたゥサギ由来 B A O 3 0 6タンパク断片並びに先に調製した組換えヒト由来 B A O 3 0 6タンパクも検出でき、本抗血清がヒト由来 B A O 3 0 6タンパクにも交叉反応性を示すことが確認された。

実施例 1 5 マウス B A 2 3 0 3遺伝子ノックァゥトマウスの作製

マウスの B A 2 3 0 3タンパクをコードする内在性遺伝子が不活性化されたノックァゥトマウスを下記のようにして作製した。

( 1 ) 夕一ゲティングベクタ一の構築

マウス BA2303タンパクをコードする内在性遺伝子を相同組換え（日経サイェンス、 1994年 5月号、第 52-62頁）により不活性化（ノックアウト）するための夕一ゲティングベクタ一を下記のようにして構築した。

前記実施例でクロ一ニングしたマウス BA2303夕ンパクをコードする cDNA (配列番号 5 ) を^{3 2} Pで標識して常法に従ってハイブリダィゼ一シヨン用プローブを作製した。このプローブを用いて、コスミドマウスゲノミック DNAライブラリ一（「ラボマニュアルヒトゲノムマツビング」、堀雅明及び中村祐輔編集、丸善出版と同様の方法で作製した。）をスクリーニングし、マウス BA2303タンパクをコードするェクソン（El , E2及び E3) を含むマウスゲノミック DNAクローンを取得した。該ゲノミック DNAの構造を模式的に示した図を図 1 1に示す。

プラスミドにサブクローニングしたゲノミック DNAを SacI Iで消化して、ェクソン 1 (E1) からェクソン 1 (E1) とェクソン 2 (E2) との間のイントロンにまたがる 124bpの領域切取り、代りに制限酵素処理して平滑末端化した 1143bpのネオマイシン耐性遺伝子（「neo」、ポジティブセレクションマ一力一として）を挿入、連結した。

一方、プラスミ.ド pBluescript II SK (-)を、 SacIIで消化し、切断部位にチミジンキナーゼ遺伝子（「TK」、ネガティブセレクションマ一力一として）を挿入、連結した。次いで、この pBluescript II SK (-)を Xbalで消化し、この切断部位に前記で作製した neo遺伝子が挿入されたマウス BA2303のゲノミック MAを挿入、連結した。

(2) 夕一ゲティングベクタ一の E S細胞への導入

15%ゥシ胎児血清を含有する DMEM培地中で培養したマウス胚性幹細胞（ES細胞； embryonic stem cell) (Nature, Vol.362, p.Z55-258, 1993及び Nature, Vol.3 26， p.292-295, 1987) をトリプシンで処理して単一細胞とした後、リン酸緩衝液で 3回洗浄して細胞濃度を 1 X 10⁷細胞/ηΐに調製した。細胞懸濁液 lmlあたり 25 igの前記夕一ゲティングベクタ一を加え、 350V/cm (25 ^F) の条件下で電気パルスを 1回かけた。次いで、シャーレ（10cm) に 1 X 10⁷細胞の ES細胞を播種し維持培地中で 1日培養した後、培地を選択培地（G418(250〃g/ml)及び 2〃Mのガンシクロビルを含有する）に交換した。以後 2日毎に培地交換を行い培養した。夕 —ゲティングベクター導入から 10曰目に、マイクロピペットを用いて、顕微鏡下で 540個のネオマイシン耐性 ES細胞クローンを取得した。得られた ES細胞クロ —ンを、 Feeder細胞を敷いた 24穴プレートで各々別々に培養することにより、 54 0個のネオマイシン耐性 ES細胞のレプリカを取得した。

(3) ノックアウト E S細胞のスクリーニング

得られたネオマイシン耐性 ES細胞の各々について、相同組換えによるマウス BA 2303タンパクをコードする内在性遺伝子の破壊（ノックアウト）が起こっているか否かを PCRにより確認した。

PCRは、各々のネオマイシン耐性 ES細胞から抽出したゲノミック DNAを鎵型とし、（ 1) neo遺伝子の配列を基に設計した 2つのプライマ一（配列番号 36及び 37) 、及び（2) 夕一ゲティングベクタ一中に挿入したマウス BA2303の DNA の外側のマウス BA2303のゲノミック DNA配列を基に設計した 2つのプライマー（配列番号 3 5及び 3- .8 ) を用いて行った。 DNAの精製は、自動 DNA精製ロボット（クボタ製）を用いた。その結果、試験したの ES細胞クローンのうち、数クローンにおいて目的の P C R産物が得られた。これら各々のクローンのさらなる選別は、ゲノミックサザンブロッティングにより行うことができる。各々のクローンのゲノミック DNAを抽出し、制限酵素で消化後、ァガロースゲルで電気泳動を行う。これをナイロンメンブランにトランスファ一し、マウス BA2303タンパクのゲノミック DNA配列を基に作製したプローブを用いて、ハイブリダィゼ一シヨンを行う。該プローブは、相同組み換えが起こる部位より外側の配列であって、変異型ゲノムと通常型ゲノムをサイズ的に見分けられるような部位の配列を基に設計する。そのようにして選別されたノックァゥト ES細胞クローンを下記に述べるノックァゥトマウスの作製に用いる。

( 4 ) ノックアウトマウスの作製

前記で得たマウス BA2303タンパクをコードする内在性遺伝子が相同組換えにより不活性化（ノックアウト）された ES細胞を、 C57BL6マウス（日本チャールズリバ一製）の雄雌を交配して得た胚盤胞に 1胚あたり 1 5個ずつ注入（マイクロインジェクシヨン）する。注入直後に、偽妊娠処理してから 2.5日目の仮親 ICRマウス（日本クレア製）の子宮に子宮の片側あたり約 1 0個ずつの胚盤胞を移植する。そうして目的のキメラマウスを得ることができる。次いで得られたキメラマウスを正常 C57BL6マウスと交配し、 ES細胞由来の毛色遺伝子によるァグーチ（agou ti) 色のマウスを得る。

実施例 1 6 マウス B A 0 3 0 6遺伝子ノヅクァゥ卜マウスの作製

( 1 ) 夕一ゲティングベクタ一の構築

マウス BA0306タンパクをコ一ドする内在性遺伝子を相同組換え（日経サイェンス、 1994年 5月号、第 52- 62頁）により不活性化（ノックアウト）するための夕一ゲティングベクタ一を下記のようにして構築した。前記実施例でクロ一ニングしたマウス BA0306タンパクをコードする cDNA (配列番号 2 7 ) を^{3 2} Pで標識して常法に従ってハイブリダィゼ一シヨン用プロ一ブを作製した。このプローブを用いて、 129SVJマウスゲノミック DNAライブラリ一（Str atagene製）をスクリーニングし、マウス BA0306タンパクをコードするェクソン（ exon I, II , I I I , IV及び V) を含むマウスゲノミック DNAクロ一ンを取得した。プラスミド pBluescript I I SK (-)を Xhol及び Hindll lで消化することにより作成した Xhol及び Hindll l切断部位に、同じく Xhol及び Hindi I Iで消化して切り出したチミジンキナ一ゼ遺伝子（「TK」、ネガティブセレクションマーカーとして）を挿入、連結した。次いで、 pBluescript I I SK (-)の Notl切断部位に、前記のマウス M0306ゲノミック DNA (ェクソン I乃至 Vを含む）を挿入、連結した。次に、 Bam HI及び Xholで処理して切り出し、平滑末端化したネオマイシン耐性遺伝子（「ne o」、ポジティブセレクションマーカーとして）を、マウス BA0306ゲノミック DNA のェクソン V中の Aor51HI切断部位の挿入、連結した。最後に pBluescript I I SK( -）を SacI Iで切断して線状化して夕ーゲティングベクタ一とした。

作製した夕ゲティングベクタ一の構造を模式的に示す図を図 1 2に示す。

( 2 ) 夕一ゲティングぺク夕一の E S細胞への導入

15 ゥシ胎児血清を含有する DMEM培地中で培養したマウス胚性幹細胞（ES細胞； embryonic stem cell、 1 x 1 0 ⁸細胞) (Nature, Vol.362, p.255-258, 1993及び Nature, Vol .326, p.292-295, 1987) をトリブシンで処理して単一細胞とした後、リン酸緩衝液で 3回洗浄して細胞濃度を 1 X 1 0 ⁷細胞/ mlに調製した。細胞懸濁液 l mlあたり 25 gの前記夕ーゲティングベクタ一を加え、 350V/cm (25 /F) の条件下で電気パルスを 1回かけた。次いで、シャーレ（10cm) に I x l O ⁷細胞の ES細胞を播種し維持培地中で 1日培養した後、培地を選択培地（G418(250 g/ ml)及び 2〃Mのガンシクロビルを含有する）に交換した。以後 2日毎に培地交換を行い培養した。夕一ゲティングベクター導入から 1 0曰目に、マイクロピペットを用いて、顕微鏡下で 573個のネオマイシン耐性 ES細胞クローンを取得した。得られた ES細胞クロ一ンを、 Feeder細胞を敷いた 24穴プレートで各々別々に培養することにより、 5?3個のネオマイシン耐性 ES細胞のレプリカを取得した

( 3 ) ノックアウト E S細胞のスクリーニング

得られたネオマイシン耐性 ES細胞の各々について、相同組換えによるマウス BA 0306タンパクをコードする内在性遺伝子の破壊（ノックアウト）が起こっているか否かをゲノミックサザンブロッティングにより確認した。

ゲノミックサザンブロッティングは、各々のネオマイシン耐性 ES細胞から抽出したゲノミック DNAの EcoRIで切断断片について、下記の 2つのプロ一ブを用いて常法により行った。

(プローブ 1 )

配列番号 3 9及び 4 0に記載される 2つのプライマ一を用いて増幅される 5 ' 側 D N Aを用いた。

(プローブ 2 )

配列番号 4 1及び 4 2に記載される 2つのプライマーを用いて増幅される 3，側 D N Aを用いた。

なお、 DNAの精製は、自動 DNA S製ロボット（クボ夕製）を用いた。

E S細胞中の BA0306をコ一ドする内在性遺伝子が、夕一ゲティングベクタ一により正常に夕一ゲティングされいる場合には、ィンテグレートされた neo遺伝子を挟んで 5 ' 側及び 3 ' 側の遺伝子が各々 7 Kb及び 5 Kbとして検出される。

その結果、 3つの ES細胞クローン（各々 0-16-9、 0-22- 11及び 0-22-18と命名）で、目的とするノヅクアウトが起こっていることが確認され、この ES細胞クロ一ンを下記に述べるノックァゥトマウスの作製に用いた。

( 4 ) ノックァゥトマウスの作製

前記で得たマウス BA0306タンパクをコードする内在性遺伝子が相同組換えにより不活性化（ノックアウト）された ES細胞クローンの各々を、 C57BL6マウス（日本チャールズリバ一製）の雄雌を交配して得た胚 ¾1胞に 1胚あたり 1 5個ずつ注入（マイクロイン-ジェクシヨン）した。注入直後に、偽妊娠処理してから 2.5日目の仮親 ICRマウス（日本クレア製）の子宮に子宮の片側あたり約 1 0個ずつの胚盤胞を移植した。その結果、下記のとおり各々の ES細胞クローンについて、ノックアウトキメラマウスを得た。

<クロ一ン 0-16- 9>

(総注入細胞数） 8 3細胞

(産児数） 1 3匹

(キメラマウス） 7匹

(毛色への貢献度が 80 以上のキメラマウス） 2匹

<クローン 0-22- 11 >

(総注入細胞数） 2 0 2細胞

(産児数） 1 2匹

(キメラマウス） 3匹

(毛色への貢献度が 80%以上のキヌラマウス） 3匹

<クローン 0-22- 18>

(総注入細胞数） 1 4 8細胞

(産児数） 9匹

(キメラマウス） 5匹

次いで得られた各々のキメラマウスを正常 C57BL6マウスと交配し、 ES細胞由来の毛色遺伝子によるァグーチ（agouti ) 色のマウスを得た。産業上の利用可能性

本発明は、動脈硬化症あるいは冠動脈再狭窄において特異的に発現し、動脈硬化症及び再狭窄の発症及び進行の過程に密接に関与している可能性を有する下記のような特徴を有する 2つの新規生理活性タンパク分子（B A 0 3 0 6及び B A 2303) 及びそれらのフラグメント、該夕ンパク分子をコードする遺伝子（D NA) 、該分子に反応性を有する抗体及びそのフラグメント、並びに該夕ンパク分子や抗体からなる医薬組成物を提供するものである。

下記のような特徴を有し、動脈硬化称/再狭窄進行の過程で関与することが明らかにされている一酸化窒素（NO) などの活性酸素に対して阻害的に作用するものと考えられる分子。

( 1) 冠動脈に対する PTCA施行後約 1〜7日目に発現の増加（4日目にピーク）が見られる。

(2) ノーザンブロッテイングにより、種々のヒト組織において約 3.5k及び約 4.4kのバンドとして mRNAの発現が認められる。

(3) 10ケ所の推定上の膜貫通領域を有する。

(4) 酵母の酸化ストレス耐性タンパク（S. serevisiae; Oxidative stress resistance protein) 、酵母の亜鉛 Zカドミウム耐性タンパク（Zinc/Cadmium resistance protein) び£ ¾ィ才ン Sf†生夕ンノ、。ク (Heavy metal ion resis tance protein) 等とアミノ酸配列相同性を有する。

下記のような特徴を有し、動脈硬化症/再狭窄発症あるいは進行の過程で関与する生体内リガンドと結合して受けた特定のシグナルを、細胞内の G蛋白質（GT P結合蛋白質）を介して形質膜あるいは細胞質面にある効果器に伝達するための G 蛋白質共役型受容体であると考えられる分子。

( 1) 冠動脈に対する PTCA施行後 1日目にから発現の増加が見られ、 2〜 4日目に最大の発現として 7日目まで発現が確認される。

(2) ノーザンブロッテイングにより、種々のヒト組織におい約 3.9k及び約 2 .lkのバンドとして mRNAの発現が認められる。

(3) 7ケ所の推定上の膜貫通領域を有する。従って、本発明の遺伝子（D N A ) 、タンパク若しくはそのフラグメント及び本発明の夕ンパク-に反応性を有する抗体またはその一部は、動脈硬化症の治療及び予防並びに P T C A等による動脈閉塞症状の治療後の再狭窄の治療及び予防のための該遺伝子またはタンパク分子を夕ーゲットしとた薬剤開発において極めて有用である。また、該 D N Aは、それ自体アンチセンス医薬品として有用であり、該夕ンパクの細胞外領域フラグメントは、例えば可溶性レセプ夕一医薬品として、該抗体及びその一部は、抗体医薬品として有用である。

さらに、そのようにして内在性遺伝子が破壊された該モデル動物と該トランスジエニック動物を交配することにより、本発明のヒト由来遺伝子のみを有するモデル動物を作成することが可能である。このモデル動物に、該導入されたヒト遺伝子をターゲットとした薬剤（化合物、抗体等）を投与することにより、その薬剤の治療学的効果を評価することが可能となる。配列表 "

(1) 出願人氏名-:日本たばこ産業株式会社

(2)発明の名称：哺乳動物由来生理活性タンパク

( 3 )整理番号： J l— 002PCT

( ) 出願番号：

(5) 出願日：

(6)優先権のもととなった出願をした国名および出願番号：

日本国平成 9年特許願第 62259号

日本国平成 1 0年 2月 2 5日提出の特許願（整理番号 J98- 0048)

(7)優先日：平成 9年 2月 28曰

( 8 ) 配列の数： 42 配列番号： 1

配列の長さ： 1399

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（3'末端塩基配列を含む cDNA)

起源

生物名：ゥサギ

配列の特徴

特徴を表す記号： CDS

存在位置： 1 .. 1158

特徴を決定した方法： E

配列：

GTC AGA ATC AAC AAC ATA GCA GTA GCT GTA GGA AAA GAA GCT 42 Val Arg l ie Asn Asn l ie Ala Val Ala Val Gly Lys Glu Ala

1 - . 5 10

AAA CTT TAC CTG TTC CAA GCC CAG GAA TGG CTG AAG CTG CAG 84 Lys Leu Tyr Leu Phe Gin Ala Gin Glu Trp Leu Lys Leu Gin 15 20 25

GAA AGC AGT CAT GAT TAC AGC TGT CAT GAA AAA TTA TCC AAA 126 Glu Ser Ser His Asp Tyr Ser Cys His Glu Lys Leu Ser Lys

30 35 40

GCC CAA TTG ACA ATG ACC ATG AAC CAG AGT GAA CAT AAT ATG 168 Ala Gin Leu Thr Met Thr Met Asn Gin Ser Glu His Asn Met

45 50 55

ACA GTG TCC CAG ATT CCA TCT CCA CAA ACG TGG CAC GTG TTT 210 Thr Val Ser Gin He Pro Ser Pro Gin Thr Trp His Val Phe

60 65 70

TAT GCA GAC AAG TAT ACA TGC CGA GTT GAC GAG GAG AAT TGG 252 Tyr Ala Asp Lys Tyr Thr Cys Arg Val Asp Glu Glu Asn Trp

75 80

CAA GTG GAA GAT ATC CCA TTT GAA ATG GTG TTA CTA AAC CCA 294 Gin Val Glu Asp l ie Pro Phe Glu Met Val Leu Leu Asn Pro 85 90 95

GAT GCT GAA GGA AAT CCG TTT GAT CAT TTT GGT GCT GGA GAA 336 Asp Ala Glu Gly Asn Pro Phe Asp His Phe Gly Ala Gly Glu

100 105 110

TCT GGG TTA CAT GAG TTC TTT TTC CTC CTA GTC CTA GTG TAC 378 Ser Gly Leu His Glu Phe Phe Phe Leu Leu Val Leu Val Tyr

115 120 125 TTT GTG ACT GCT TGC ATT TAT GCG CAG TCA TTG TGG CAG GCT 420 Phe Val Thr Ala- .Cys l ie Tyr Ala Gin Ser Leu Trp Gin Ala

130 135 140

CTT AAG AAA GGA GGG CCC ATG CAC ATG ATT CTA AAG GTG CTG 462 Leu Lys Lys Gly Gly Pro Met His Met l ie Leu Lys Val Leu

145 150

ACA ACT GCA CTG CTG TTG CAA GCT GGT TCA GCT GTA GCT AAT 504 Thr Thr Ala Leu Leu Leu Gin Ala Gly Ser Ala Val Ala Asn 155 160 165

TAC ATC CAT TTC TCC AGT TAC TCC AAA GAT GGA ATC GGG GTA 546 Tyr l ie His Phe Ser Ser Tyr Ser Lys Asp Gly l ie Gly Val

170 175 180

CCT TTT ATG GGA AGC TTG GCA GAA TTT TTT GAC ATC GCT TCC 588 Pro Phe Met Gly Ser Leu Ala Glu Phe Phe Asp l ie Ala Ser

185 190 195

CAA ATT CAG ATG TTA TAC CTG CTT CTG AGT CTG TGC ATG GGC 630 Gin l ie Gin Met Leu Tyr Leu Leu Leu Ser Leu Cys Met Gly

200 205 210

TGG ACC ATA GTC AGG ATG AAG AAG TCT CAA AGC AGA CCT CTC 672 Trp Thr l ie Val Arg Met Lys Lys Ser Gin Ser Arg Pro Leu

215 220

CAG TGG GAT TCG ACC CCT GCC TCC ACT GGC ATT GCC GTG TTC 714 Gin Trp Asp Ser Thr Pro Ala Ser Thr Gly l ie Ala Val Phe 225 230 235

ATT GTC CTG ACA CAG AGT GTT TTG CTG CTT TGG GAA CAG TTT 756 l ie Val Leu Thr Gin Ser Val Leu Leu Leu Trp Glu Gin Phe 240 245 250

GAA GAT ACC GGT. CAT CAT AGC TCC CAT TCA CAC CAC AAC TTA 798 Glu Asp Thr Gly His His Ser Ser His Ser His His Asn Leu

255 260 265

GCA GGG ATC CTT CTG ATC GTT TTA AGA ATT TGC CTG GCA TTG 840 Ala Gly l ie Leu Leu l ie Val Leu Arg l ie Cys Leu Ala Leu

270 275 280

TCA TTA GGC TGT GGA CTC TAT CAG ATC ATC ACA GTG GAG AGG 882 Ser Leu Gly Cys Gly Leu Tyr Gin l ie l ie Thr Val Glu Arg

285 290

AGC ACA CTC AAA AGG GAG TTC TAC ATC ACA TTT GCC AAA GGC 924 Ser Thr Leu Lys Arg Glu Phe Tyr l ie Thr Phe Ala Lys Gly 295 300 305

TGT ATC TTA TGG TTT TTG TGC CAT CCA AGT CTG GCA TGC ATT 966 Cys lie Leu Trp Phe Leu Cys His Pro Ser Leu Ala Cys l ie

310 315 320

TCT GTC ATT TTT AAT GAC TAC C AGA GAT AAG GTT ATT ACA 1008 Ser Val l ie Phe Asn Asp Tyr Gin Arg Asp Lys Val l ie Thr

325 330 335

ATA GGT GTT ATC CTT GGC CAG TCT GTT GCC ATG GTT ATC CTC 1050 l ie Gly Val l ie Leu Gly Gin Ser Val Ala Met Val l ie Leu

340 345 350

TAC AGA CTC TTT CTC TCC CAC AGT CTA TAC TGG GAA GTT TCT 1092 Tyr Arg Leu Phe Leu Ser His Ser Leu Tyr Trp Glu Val Ser

355 360

TCC CTT TCC TCA GTA ACA CTA CCA CTG ACC GTA TCG TCT GGA 1134 Ser Leu Ser Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr Val Ser Ser Gly 365 - - 370 375

CAC AAA AGC CGC CCT CAT TTC TGA TACTTGATTT CTGTGGAAAA 1178 His Lys Ser Arg Pro His Phe

380 385

GAAAAGTGAA GGGGTTAAAA GAGTGCAATA AGGACCCAAA TACAGTGACT 1228 TTTTTTTCAT ACATTTGGTA TGAAAAATCG AATAGCAAAA GCAGAGCATG 1278 TTTCTGTGAT AACTGCATTT AAGCAGTACC AAAACTGAAC AAAGGTAATA 1328 ACTGAAATGT TTTAAAATAC ATGTAAACAA TAAACTTTCA GGAAATTCTG 1378 TTGTTAAAAA AAAAAAAAAA C 1399 配列番号： 2

配列の長さ： 385

配列の型：アミノ酸

トポロジー：直鎖状

配列の種類：タンパク質

配列：

Val Arg l ie Asn Asn He Ala Val Ala Val Gly Lys Glu Ala

1 5 10

Lys Leu Tyr Leu Phe Gin Ala Gin Glu Trp Leu Lys Leu Gin 15 20 25

Glu Ser Ser His Asp Tyr Ser Cys His Glu Lys Leu Ser Lys

30 35 40

Ala Gin Leu Thr Met Thr Met Asn Gin Ser Glu His Asn Met

45 50 55

Thr Val Ser Gin l ie Pro Ser Pro Gin Thr Trp His Val Phe

60 65 70 osz on

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G9

S0£8£/86 O Glu Asp Thr Gly His His Ser Ser His Ser His His Asn Leu

255 -- 260 265

Ala Gly lie Leu Leu lie Val Leu Arg lie Cys Leu Ala Leu

270 275 280

Ser Leu Gly Cys Gly Leu Tyr Gin He lie Thr Val Glu Arg

285 290

Ser Thr Leu Lys Arg Glu Phe Tyr lie Thr Phe Ala Lys Gly 295 300 305

Cys He Leu Trp Phe Leu Cys His Pro Ser Leu Ala Cys He

310 315 320

Ser Val lie Phe Asn Asp Tyr Gin Arg Asp Lys Val lie Thr

325 330 335 lie Gly Val lie Leu Gly Gin Ser Val Ala Met Val lie Leu

340 345 350

Tyr Arg Leu Phe Leu Ser His Ser Leu Tyr Trp Glu Val Ser

355 360

Ser Leu Ser Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr Val Ser Ser Gly 365 370 375

His Lys Ser Arg Pro His Phe

380 385

配列番号： 3

配列の長さ： 2130

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（5'末端及び 3'末端塩基配列を含む cDNA) 起源

生物名：ヒト

配列の特徴

特徴を表す記号： CDS

存在位置： 97 . . 1419

特徴を決定した方法： E

配列：

CTCCGGCGCC CACCCCGCCT CCCCCAGCTG CCGACGTGGG GCGGGCAGCC 50 GCCGGCGGCT GGGAGCCGAG GCGTCGGTGC AGACCTGGAG ACGGGC 96 ATG GGG GGG CTG CGG CTG CTG GCT GTG GCC 126 Met Gly Gly Leu Arg Leu Leu Ala ,Val Ala

1 5 10

CTC ACG TGC TGC TGG TGG CCG CAG GGC AGC CAG GGT AAG ACC 168 Leu Thr Cys Cys Trp Trp Pro Gin Gly Ser Gin Gly Lys Thr

15 20

CTG CGG GGC AGC TTC AGC AGC ACC GCG GCC CAG GAC GCC CAG 210 Leu Arg Gly Ser Phe Ser Ser Thr Ala Ala Gin Asp Ala Gin 25 30 35

GGC CAG CGC ATC GGC CAC TTC GAG TTC CAT GGT GAC CAT GCT 252 Gly Gin Arg lie Gly His Phe Glu Phe His Gly Asp His Ala

40 45 50

CTT CTG TGT GTC AGA ATC AAC AAC ATA GCA GTA GCT GTT GGA 294 Leu Leu Cys Val Arg lie Asn Asn lie Ala Val Ala Val Gly

55 60 65

AAA GAA GCT AAA CTC TAC CTG TTC C GCC CAG GAA TGG CTA 336 Lys Glu Ala Lys Leu Tyr Leu Phe Gin Ala Gin Glu Trp Leu 70 75 80

AAG CTA CAG CAA. AGC AGT CAT GGT TAT AGC TGT AGT GAA AAA 378 Lys Leu Gin Gin Ser Ser His Gly Tyr Ser Cys Ser Glu Lys

85 90

TTA TCC AAA GCT CAG TTG ACA ATG ACC ATG AAC CAG ACC GAA 420 Leu Ser Lys Ala Gin Leu Thr Met Thr Met Asn Gin Thr Glu 95 100 105

CAT AAT CTG ACA GTG TCC CAG ATT CCG TCT CCA CAA ACG TGG 462 His Asn Leu Thr Val Ser Gin l ie Pro Ser Pro Gin Thr Trp

110 115 120

CAT GTG TTT TAT GCA GAC AAG TAT ACA TGC CAA GAT GAC AAG 504 His Val Phe Tyr Ala Asp Lys Tyr Thr Cys Gin Asp Asp Lys

125 130 135

GAG AAT TCT CAG GTG GAA GAT ATC CCA TTT GAA ATG GTG TTA 546 Glu Asn Ser Gin Val Glu Asp l ie Pro Phe Glu Met Val Leu

140 145 150

CTA AAC CCA GAT GCC GAA GGG AAT CCA TTT GAT CAT TTT AGT 588 Leu Asn Pro Asp Ala Glu Gly Asn Pro Phe Asp His Phe Ser

155 160

GCT GGA GAA TCT GGG TTA CAT GAG TTC TTT TTC CTC CTA GTC 630 Ala Gly Glu Ser Gly Leu His Glu Phe Phe Phe Leu Leu Val 165 170 175

CTA GTG TAC TTT GTG ATT GCT TGC ATT TAT GCT CAA TCA TTG 672 Leu Val Tyr Phe Val l ie Ala Cys lie Tyr Ala Gin Ser Leu

180 185 190

TGG CAG GCT ATT AAG AAA GGC GGA CCC ATG CAC ATG ATT TTA 714 Trp Gin Ala l ie Lys Lys Gly Gly Pro Met His Met l ie Leu

195 - . 200 205

AAG GTT CTG ACA ACT GCA TTG CTG TTA CAA GCT GGT TCA GCT 756 Lys Val Leu Thr Thr Ala Leu Leu Leu Gin Ala Gly Ser Ala

210 215 220

TTA GCT AAT TAC ATT CAT TTC TCC AGT TAC TCC AAA GAT GGA 798 Leu Ala Asn Tyr l ie His Phe Ser Ser Tyr Ser Lys Asp Gly

225 230

ATA GGG GTA CCA TTT ATG GGA AGT TTG GCA GAA TTT TTT GAC 840 l ie Gly Val Pro Phe Met Gly Ser Leu Ala Glu Phe Phe Asp 235 240 245

ATC GCT TCC CAA ATT CAG ATG TTA TAC TTA CTT TTG AGT CTA 882 He Ala Ser Gin lie Gin Met Leu Tyr Leu Leu Leu Ser Leu

250 255 260

TGC ATG GGT TGG ACA ATA GTC AGA ATG AAG AAG TCT CAA AGC 924 Cys Met Gly Trp Thr l ie Val Arg Met Lys Lys Ser Gin Ser

265 270 275

AGA CCT CTC CAG TGG GAT TCT ACG CCT GCA TCC ACT GGC ATT 966 Arg Pro Leu Gin Trp Asp Ser Thr Pro Ala Ser Thr Gly l ie

280 285 290

GCA GTA TTC ATT GTC ATG ACA CAG AGT GTT TTG CTA CTT TGG 1008 Ala Val Phe l ie Val Met Thr Gin Ser Val Leu Leu Leu Trp

295 300

GAA CAG TTT GAA GAT ATC AGT CAT CAT AGC TAC CAT TCA CAC 1050 Glu Gin Phe Glu Asp lie Ser His His Ser Tyr His Ser His 305 310 315 CAC AAC TTA GCA GGG ATC CTC CTA ATT GTT CTA AGA ATT TGC 1092 His Asn Leu Ala. Gly l ie Leu Leu l ie Val Leu Arg l ie Cys

320 325 330

CTA GCA TTG TCA TTA GGC TGT GGA CTC TAT CAG ATC ATC ACA 1134 Leu Ala Leu Ser Leu Gly Cys Gly Leu Tyr Gin He l ie Thr

335 340 345

GTG GAG AGA AGT ACA CTC AAA AGG GAG TTC TAC ATC ACA TTT 1176 Val Glu Arg Ser Thr Leu Lys Arg Glu Phe Tyr l ie Thr Phe

350 355 360

GCC AAA GGC TGT ATC TTG TGG TTT TTA TGC CAT CCA GTT CTT 1218 Ala Lys Gly Cys l ie Leu Trp Phe Leu Cys His Pro Val Leu

365 370

GCA TGC ATT TCT GTC ATT TTT AGC GAC TAC C AGA GAC AAG 1260 Ala Cys l ie Ser Val l ie Phe Ser Asp Tyr Gin Arg Asp Lys 375 380 385

GTT ATT ACA ATA GGT GTT ATC CTT TGC CAG TCT GTT TCC ATG 1302 Val l ie Thr l ie Gly Val l ie Leu Cys Gin Ser Val Ser Met

390 395 400

GTT ATT CTC TAC AGA CTC TTT CTG TCT CAC AGT CTA TAC TGG 1344 Val l ie Leu Tyr Arg Leu Phe Leu Ser His Ser Leu Tyr Trp

405 410 415

GAA GTT TCT TCA CTT TCT TCA GTA ACA CTA CCA CTG ACC ATA 1386 Glu Val Ser Ser Leu Ser Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr l ie

420 425 430

TCA TCT GGA CAC AAA AGT CGC CCT CAT TTC TGA TACTTGATTT 1429 Ser Ser Gly His Lys Ser Arg Pro His Phe 435 440

TTGTTGAGAG GAAAAGTGAA TTGGTTAAAA GAGTGCAATA AGGATCCAAA 1479

TACAGTGACT TTTTTTTCAT ACATTTAGTA TGAAAACTTG AACAGCGAAA 1529

GCAGAGCATG TTATTTATAT AACTGCATTT AAGCAGTACC AAGACTGAAA 1579

AAAAAGGTAA TAAATGAAAT GTTTTGAAAT ATACTTAAAC AACAAACTTT 1629

GAAGAAAGTG TTGTTATAAA ATTATTGAAG CGATTTCTAT GTGGAAATAA 1679

ATGTGAAAAA TAAAACTATG ATATTTTGGT AAAATATTCA CCACTTATAA 1729

TGCCTCATCT TAATAGCTAA CTCASGTTTA ATARTCTTAT AAAAAGTAAT 1779

CAGTTAAATG AATACTTGCT TATAAATATC TAAACTAATC CACTTTATGA 1829

AATCAGTGTT ATACATTGAA TTTTAAAACT GCTGCCTTTT ATGCCTTTAA 1879

GGAAAATGTT TTTCCCTATT TTGAATTTTA AAGGAATTGA AATTCCTCCC 1929

6GAAATTAAT ATAAATAGGG TTCCCCGTTA AATGAAATAA ACCCTGGTTT 1979

AATTGGTGGG GTGGAATTAA TNCNCCCAAT TTTTTCCCGN CCCTTTTTTG 2029

GGGNCNCATT TTCCGGGTTT TAANCCTTGA ATAAACCAAA GGGTTTTTGN 2079

AAAAACCCTT TTTTTGAAAA AAAATTAAAA CCTTNANTTN CCTTTACCCN 2129

G 2130 配列番号： 4

配列の長さ： 440

配列の型：アミノ酸

トポロジー：直鎖状

配列の種類：タンパク質

配列：

Met Gly Gly Leu Arg Leu Leu Ala Val Ala Leu Thr Cys Cys

1 5 10

Trp Trp Pro Gin Gly Ser Gin Gly Lys Thr Leu Arg Gly Ser 15 20 25 on soz ooz

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240 245 250 lie Gin Met Leu Tyr Leu Leu Leu Ser Leu Cys Met Gly Trp

255 260 265

Thr lie Val Arg Met Lys Lys Ser Gin Ser Arg Pro Leu Gin

270 275 280

Trp Asp Ser Thr Pro Ala Ser Thr Gly lie Ala Val Phe lie

285 290 Val Met Thr Gin Ser Val Leu Leu Leu Trp Glu Gin Phe Glu 295 300 305

Asp lie Ser His His Ser Tyr His Ser His His Asn Leu Ala

310 315 320

Gly lie Leu Leu lie Val Leu Arg lie Cys Leu Ala Leu Ser

325 330 335

Leu Gly Cys Gly Leu Tyr Gin lie lie Thr Val Glu Arg Ser

340 345 350

Thr Leu Lys Arg Glu Phe Tyr lie Thr Phe Ala Lys Gly Cys

355 360 lie Leu Trp Phe Leu Cys His Pro Val Leu Ala Cys lie Ser 365 370 375

Val lie Phe Ser Asp Tyr Gin Arg Asp Lys Val lie Thr lie 380 385 390 Gly Val lie Leu Cys Gin Ser Val Ser Met Val He Leu Tyr

395 . 400 405

Arg Leu Phe Leu Ser His Ser Leu Tyr Trp Glu Val Ser Ser

410 415 420

Leu Ser Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr lie Ser Ser Gly His

425 430

Lys Ser Arg Pro His Phe

435 440

配列番号： 5

配列の長さ： 1918

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

生物名：マウス

配列の特徴

特徴を表す記号： CDS

存在位置 : 82 .. 1383

特徴を決定した方法： E

配列：

GGCACGAGCC GCCCTCTGCT GCCGACGTGG GCTGCAGGCC GCAGGCGGTT 50 GCCGGGCGAG CAAACGGAGC GGGCGGCGGG C ATG GGC 87

Met Gly

1

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130 135 140

CTC CTC AAC CCG GAC GCC GAG GGA AAC CCG CTG GAT CAT TTT 549 Leu Leu Asn Pro Asp Ala Glu Gly Asn Pro Leu Asp His Phe

145 150 155

AGC GCC AGA GAG TCC GGG CTC CAC GAG TTC TTT TTC CTC CTC 591 Ser Ala Arg Glu Ser Gly Leu His Glu Phe Phe Phe Leu Leu

160 165 170

GTC CTA GTG TAC TTT GTG ACT GCG TGC ATC TAT GCG CAG TCT 633 Val Leu Val Tyr Phe Val Thr Ala Cys l ie Tyr Ala Gin Ser

175 180

CTG TGG CAG GCT ATG AAG AAG GGA GGA CCC ATG CAC ACC ATC 675 Leu Trp Gin Ala Met Lys Lys Gly Gly Pro Met His Thr l ie 185 190 195

TTA AAG GTC CTC ACC ACT GCA CTG CTG CTT CAA GCT GCT TCA 717 Leu Lys Val Leu Thr Thr Ala Leu Leu Leu Gin Ala Ala Ser

200 205 210

GCC TTA GCT AAT TAC ATC CAC TTG TCC AGG TAC TCC AGA GAT 759 Ala Leu Ala Asn Tyr l ie His Leu Ser Arg Tyr Ser Arg Asp

215 220 225

GGG CTA GGA GTG CCT CTC ATA GGA AGC CTG GCA GAA GTT TTT 801 Gly Leu Gly Val Pro Leu l ie Gly Ser Leu Ala Glu Val Phe

230 235 240

GAC ATT GCC TCC CAA ATT CAG ATG CTG TAC CTG CTT CTG AGC 843 Asp l ie Ala Ser Gin l ie Gin Met Leu Tyr Leu Leu Leu Ser 245 250

CTG TGT ATG GGC TGG ACA ATA GTG CGG ATG AAG AAG TCG CAG 885 Leu Cys Met Gly Trp Thr l ie Val Arg Met Lys Lys Ser Gin 255 260 265

AGC AGA CCG CTC CAG TGG GAC TCG ACA CCC GCG TCC ACG GGC 927 Ser Arg Pro Leu Gin Trp Asp Ser Thr Pro Ala Ser Thr Gly

270 275 280

ATC GCA GTT TTC ATY GTC ATC ACA CAG AGC ATT TTG CTA CTY 969 l ie Ala Val Phe l ie Val l ie Thr Gin Ser l ie Leu Leu Leu

285 290 295

TGG GAG CAG TTT GAA GAC ACC AGT CAC CAC AGC GCA CAT TCA 1011 Trp Glu Gin Phe Glu Asp Thr Ser His His Ser Ala His Ser

300 305 310

CAC CGC AGC TTA GCC GGG CTC TTG CTG ATT GTC TTA CGG ATC 1053 His Arg Ser Leu Ala Gly Leu Leu Leu l ie Val Leu Arg l ie

315 320

TGC CTG GCG CTG TCG CTG GGC TGC GGA CTT TAC CAG GTC ATC 1095 Cys Leu Ala Leu Ser Leu Gly Cys Gly Leu Tyr Gin Val l ie 325 330 335

ACA GTG GAG AGG AGC GCG CTC AAG AGA GAG TTC TAC ATC ACG 1137 Thr Val Glu Arg Ser Ala Leu Lys Arg Glu Phe Tyr l ie Thr

340 345 350

TTT GCC AAG GGC TGC ATC CTG TGG TTC TTG TGC CAG CCA GCG 1179 Phe Ala Lys Gly Cys l ie Leu Trp Phe Leu Cys Gin Pro Ala

355 360 365

CTC GCA TGC ATT GCT GTC GCT TTT AAT GAC TAC CAA AGA GAT 1221 s I一.

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145 150 155

Ser Ala Arg Glu Ser Gly Leu His Glu Phe Phe Phe Leu Leu

160 165 170

Val Leu Val Tyr Phe Val Thr Ala Cys lie Tyr Ala Gin Ser

175 180 Leu Trp Gin Ala Met Lys Lys Gly Gly Pro Met His Thr lie 185 190 195

Leu Lys Val Leu Thr Thr Ala Leu Leu Leu Gin Ala Ala Ser

200 205 210

Ala Leu Ala Asn Tyr lie His Leu Ser Arg Tyr Ser Arg Asp

215 220 225

Gly Leu Gly Val Pro Leu lie Gly Ser Leu Ala Glu Val Phe

230 235 240

Asp lie Ala Ser Gin lie Gin Met Leu Tyr Leu Leu Leu Ser

245 250 Leu Cys Met Gly Trp Thr lie Val Arg Met Lys Lys Ser Gin 255 260 265

Ser Arg Pro Leu Gin Trp Asp Ser Thr Pro Ala Ser Thr Gly

270 275 280

He Ala Val Phe lie Val l ie Thr Gin Ser lie Leu Leu Leu

285 290 295

Trp Glu Gin Phe Glu Asp Thr Ser His His Ser Ala His Ser

300 305 310

His Arg Ser Leu Ala Gly Leu Leu Leu lie Val Leu Arg lie 315 320

Cys Leu Ala Leu- Ser Leu Gly Cys Gly Leu Tyr Gin Val l ie 325 330 335

Thr Val Glu Arg Ser Ala Leu Lys Arg Glu Phe Tyr l ie Thr

340 345 350

Phe Ala Lys Gly Cys lie Leu Trp Phe Leu Cys Gin Pro Ala

355 360 365

Leu Ala Cys l ie Ala Val Ala Phe Asn Asp Tyr Gin Arg Asp

370 375 380

Lys Leu l ie Thr Val Gly Val l ie Leu Cys Gin Ala Val Ala

385 390

Met Val l ie Leu Tyr Arg Leu Phe Leu Ser His Ser Leu Tyr 395 400 405

Trp Glu Val Ser Ser Leu Ser Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr

410 415 420

He Ser Ser Ala His Arg Gly Arg Pro His Phe

425 430

配列番号： 7

配列の長さ： 2857

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

生物名：ゥサギ

配列の特徴特徴を表す記号： CDS

存在位置： 41& .. . 2199

特徴を決定した方法： E

配列：

GTGTTACTGT GTTTCACTAA ATGTTTGAAG GCTGTCGGAC TTTTTGAATC 50 ATATGATCTC CTGAAAGTAG TTCACATTGT TCAGTTCGTT TTTATATTAA 100 AACTTGGGAC TGCATTTTTT ATGGTTTTGT TTCAAAAGCC ATTTTCTTCT 150 GGGAAAACTA TTACCAAACA CCAGTGGATC ACAATATTTA AACATGCAGT 200 TGCCGGGTGT ATCATTTCAC TCTTGTGGTT TTTTGGCCTT ACCCTTTGTG 250 GACCACTAAG GACTTTGCTG CTGTTTGAAC ACAGTGAAAT TGTTGTCATC 300 TCGCTCCTCA GTGTTTTGTT CACCAGTTCT GGAGGAGGAC CAGCAAAGAC 350 AAGAGGGGCT GCTTTTTTCA TCATTGCTGT GATCTGTTTA TTGCTTTTTG 400 ACAATGATGA TCTC 414

ATG GCT AAA ATG GCA GAA CAC CCT GAA GGA CAT CAT GAC AGT 456 Met Ala Lys Met Ala Glu His Pro Glu Gly His His Asp Ser

1 5 10

GCT CTA ACT CAC ATG CTT TAC ACA GCC ATT GCC TTC TTA GGT 498 Ala Leu Thr His Met Leu Tyr Thr Ala l ie Ala Phe Leu Gly

15 20 25

GTG GCA GAT CAC AAG GGT GGA GTA TTG TTG CTA GTA CTG GCT 540 Val Ala Asp His Lys Gly Gly Val Leu Leu Leu Val Leu Ala

30 35 40

TTG TGT TGT AAA GTT GGT TTT CAC ACA GCT TCC AGA AAA CTC 582 Leu Cys Cys Lys Val Gly Phe His Thr Ala Ser Arg Lys Leu

45 50 55 TCT ATA GAT GTT GGG GGA GCC AAA CGT CTT CAA GCT TTA TCC 624 08ΐ L \ 0L\

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Phe Phe lie Leu- -Ser Ala Asn l ie Leu Ser Ser Pro Ser Lys

185 190 195

AGG GGG CAG AAG GGC ACC CTG ATT GGA TAC TCT CCT GAA GGA 1044

Arg Gly Gin Lys Gly Thr Leu l ie Gly Tyr Ser Pro Glu Gly

200 205 210

GCA CCT CTT TAC AAC TTC ATG GGG GAT GCT TTT CAG CAC AGC 1086

Ala Pro Leu Tyr Asn Phe Met Gly Asp Ala Phe Gin His Ser

215 220

TCA CAG TCC GTG CCT CGG TTT ATT AAG GAA TCG CTG AAA CAG 1128

Ser Gin Ser Val Pro Arg Phe l ie Lys Glu Ser Leu Lys Gin 225 230 235

ATT CTT GAG GAG AGT GAC TCT AGG CAG ATC TTT TAC TTC TTG 1170 l ie Leu Glu Glu Ser Asp Ser Arg Gin l ie Phe Tyr Phe Leu

240 245 250

TGC TTG AAT CTG CTT TTT ACC TTT GTG GAA TTA TTC TAT GGA 1212

Cys Leu Asn Leu Leu Phe Thr Phe Val Glu Leu Phe Tyr Gly

255 260 265

GTG CTG ACG AAT AGT CTG GGT CTG ATC TCA GAT GGC TTT CAC 1254

Val Leu Thr Asn Ser Leu Gly Leu l ie Ser Asp Gly Phe His

270 275 280

ATG CTC TTT GAC TGC TCT GCC TTG GTC ATG GGA CTT TTT GCT 1296

Met Leu Phe Asp Cys Ser Ala Leu Val Met Gly Leu Phe Ala

285 290

GCC CTG ATG AGT AGA TGG AAA GCA ACT CGG ATT TTC TCC TAC 1338

Ala Leu Met Ser Arg Trp Lys Ala Thr Arg l ie Phe Ser Tyr 295 300 305

GGG TAT GGC CGA ATA GAA ATT CTT TCT GGA TTT ATT AAT GGA 1380

Gly Tyr Gly Arg l ie Glu He Leu Ser Gly Phe l ie Asn Gly

310 315 320

CTT TTT CTA ATA GTA ATA GCT TTT TTT GTG TTT ATG GAG TCA 1422 Leu Phe Leu l ie Val l ie Ala Phe Phe Val Phe Met Glu Ser

325 330 335

GTT GCC AGA TTG ATT GAT CCT CCG GAA TTA GAC ACA AAC ATG 1464 Val Ala Arg Leu l ie Asp Pro Pro Glu Leu Asp Thr Asn Met

340 345 350

CTA ACA CCA GTG TCA GTT GGA GGG CTG ATA GTA AAC CTT ATT 1506 Leu Thr Pro Val Ser Val Gly Gly Leu l ie Val Asn Leu He

355 360

GGT ATC TGT GCC TTT AGC CAC GCC CAT AAT CAC ACC CAT GGA 1548 Gly l ie Cys Ala Phe Ser His Ala His Asn His Thr His Gly 365 370 375

TCT TCC C GGA AGC TGT CAC TCA TCC GAT CAC AGC CAT TCA 1590 Ser Ser Gin Gly Ser Cys His Ser Ser Asp His Ser His Ser

380 385 390

CAC CAC ATG CAT GGA CAC AGT GAC CAT GGA CAT GGT CAC AGC 1632 His His Met His Gly His Ser Asp His Gly His Gly His Ser

395 400 405

CAT GGA TCC CCA GGC GGC GGC ATG AAT GCT AAC ATG AGG GGT 1674 His Gly Ser Pro Gly Gly Gly Met Asn Ala Asn Met Arg Gly

410 415 420

GTG TTT TTC CAT GTT TTG GCA GAC ACG CTT GGC AGT ATT GGT 1716 Val Phe Phe His Val Leu Ala Asp Thr Leu Gly Ser l ie Gly

- .425 430

GTG ATT GTA TTT ACA GTT TTT ATA GAG CAG TTT GGG TGG TTC 1758 Val l ie Val Phe Thr Val Phe l ie Glu Gin Phe Gly Trp Phe 435 440 445

ATT GCG GAT CCC CTC TGT TCT CTC TTT ATT GCT GTA TTA ATA 1800 l ie Ala Asp Pro Leu Cys Ser Leu Phe lie Ala Val Leu l ie

450 455 460

TTT CTC AGT GTT GTC CCA CTG ATC AAA GAT GCC TGT CAG GTT 1842 Phe Leu Ser Val Val Pro Leu l ie Lys Asp Ala Cys Gin Val

465 470 475

CTA CTT TTG AGA CTG CCA CCA GAG TAT GAA AAA GAA CTA CAT 1884 Leu Leu Leu Arg Leu Pro Pro Glu Tyr Glu Lys Glu Leu His

480 485 490

ATT GCT TTA GAA AAG ATA CAA AAA ATT GAR GGA TTA ATA TCA 1926 l ie Ala Leu Glu Lys l ie Gin Lys lie Glu Gly Leu l ie Ser

495 500

TAC CGA GAT CCT CAT TTC TGG CGC CAT TCT GCC AGT ATT GTG 1968 Tyr Arg Asp Pro His Phe Trp Arg His Ser Ala Ser He Val 505 510 515

GCA GGA ACA ATT CAT ATA CAA GTG ACA TCT GAT GTG CTA GAA 2010 Ala Gly Thr l ie His l ie Gin Val Thr Ser Asp Val Leu Glu

520 525 530

CAA AGA ATA GTA CAG CAG GTT ACA GGA ATA CTT AAA GAT GCA 2052 Gin Arg lie Val Gin Gin Val Thr Gly l ie Leu Lys Asp Ala

535 540 545

配列の長さ： 594

配列の型：ァミノ変

トポロジー：直鎖状

配列の種類：タンパク質

配列：

Met Ala Lys Met Ala Glu His Pro Glu Gly His His Asp Ser

1 5 10

Ala Leu Thr His Met Leu Tyr Thr Ala l ie Ala Phe Leu Gly

15 20 25

Val Ala Asp His Lys Gly Gly Val Leu Leu Leu Val Leu Ala

30 35 40

Leu Cys Cys Lys Val Gly Phe His Thr Ala Ser Arg Lys Leu

45 50 55

Ser lie Asp Val Gly Gly Ala Lys Arg Leu Gin Ala Leu Ser

60 65 70

His Leu Val Ser Val Leu Leu Leu Cys Pro Trp Val l ie Val

75 80 Leu Ser Met Thr Thr Glu Ser Lys Val Glu Ser Trp Phe Ser 85 90 95

Leu lie Met Pro Phe Thr Met Val l ie Phe Phe Val Xaa l ie

100 105 110

Leu Asp Phe Tyr Val Asp Ser l ie Cys Ser Val Lys Met Glu

115 120 125

Val Ser Lys Cys Ala Arg Tyr Gly Ser Leu Pro l ie Phe l ie

130 135 140

Ser Ala Leu Leu Phe Gly Asn Phe Trp Thr His Pro He Thr s nig

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Ala Gly Thr l ie His l ie Gin Val Thr Ser Asp Val Leu Glu

520 525 530

Gin Arg l ie Val Gin Gin Val Thr Gly l ie Leu Lys Asp Ala

535 540 545

Gly Val Asn Asn Leu Thr l ie Gin Val Glu Lys Glu Ala Tyr

550 555 560

Phe Gin His Met Ser Gly Leu Ser Thr Gly Phe His Asp Val

565 570 Leu Ala Met Thr Lys Gin Met Glu Ser Met Lys Tyr Cys Lys 575 580 585

Asp Gly Thr Tyr lie Met

590

配列番号： 9

配列の長さ： 2519

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（3'末端塩基配列を含む cDNA) 起源

生物名：ヒト

配列の特徴

特徴を表す記号： CDS

存在位置：に. 1785

特徴を決定した方法： E

配列： P

90

ATG GCT AAA ATG GCT GAA CAC CCT GAA GGA CAT CAT GAC AGT 42 Met Ala Lys Met -Ala Glu His Pro Glu Gly His His Asp Ser

1 5 10

GCT CTA ACT CAT ATG CTT TAC ACA GCC ATT GCC TTC TTA GGT 84 Ala Leu Thr His Met Leu Tyr Thr Ala l ie Ala Phe Leu Gly 15 20 25

GTG GCA GAT CAC AAG GGT GGA GTA TTA TTG CTA GTA CTG GCT 126 Val Ala Asp His Lys Gly Gly Val Leu Leu Leu Val Leu Ala

30 35 40

TTG TGT TGT AAA GTT GGT TTT CAT ACA GCT TCC AGA AAG CTC 168 Leu Cys Cys Lys Val Gly Phe His Thr Ala Ser Arg Lys Leu

45 50 55

TCT GTC GAC GTT GGT GGA GCT AAA CGT CTT C GCT TTA TCT 210 Ser Val Asp Val Gly Gly Ala Lys Arg Leu Gin Ala Leu Ser

60 65 70

CAT CTT GTT TCT GTG CTT CTC TTG TGC CCA TGG GTC ATT GTT 252 His Leu Val Ser Val Leu Leu Leu Cys Pro Trp Val l ie Val

75 80

CTT TCT GTG ACA ACT GAG AGT AAA GTG GAG TCT TGG YTT TCT 294 Leu Ser Val Thr Thr Glu Ser Lys Val Glu Ser Trp Xaa Ser 85 90 95

CTC ATT ATG CCT TTT GCA ACG GTT ATC TTT TTT GTC ATG ATC 336 Leu l ie Met Pro Phe Ala Thr Val l ie Phe Phe Val Met l ie

100 105 110

CTG GAT TTC TAC GTG GAT TCC ATT TGT TCA GTC AAA ATG GAA 378 Leu Asp Phe Tyr Val Asp Ser l ie Cys Ser Val Lys Met Glu 115 120 125

GTT TCC AAA TGT GCT CGT TAT GGA TCC TTT CCC ATT TTT ATT 420 Val Ser Lys Cys Ala Arg Tyr Gly Ser Phe Pro l ie Phe l ie

130 135 140

AGT GCT CTC CTT TTT GGA AAT TTT TGG ACA CAT CCA ATA ACA 462 Ser Ala Leu Leu Phe Gly Asn Phe Trp Thr His Pro l ie Thr

145 150

GAC CAG CTT CGG GCT ATG AAC AAA GCA GCA CAC CAG GAG AGC 504 Asp Gin Leu Arg Ala Met Asn Lys Ala Ala His Gin Glu Ser 155 160 165

ACT GAA CAC GTC CTG TCT GGA GGA GTG GTA GTG AGT GCT ATA 546 Thr Glu His Val Leu Ser Gly Gly Val Val Val Ser Ala l ie

170 175 180

TTC TTC ATT TTG TCT GCC AAT ATC TTA TCA TCT CCC TCT AAG 588 Phe Phe l ie Leu Ser Ala Asn l ie Leu Ser Ser Pro Ser Lys

185 190 195

AGA GGA CAA AAA GGT ACC CTT ATT GGA TAT TCT CCT GAA GGA 630 Arg Gly Gin Lys Gly Thr Leu l ie Gly Tyr Ser Pro Glu Gly

200 205 210

ACA CCT CTT TAT AAC TTC ATG GGT GAT GCT TTT CAG CAT AGC 672 Thr Pro Leu Tyr Asn Phe Met Gly Asp Ala Phe Gin His Ser

215 220

TCT CAA TCG ATC CCT AGG TTT ATT AAG GAA TCA CTA AAA CAA 714 Ser Gin Ser l ie Pro Arg Phe He Lys Glu Ser Leu Lys Gin 225 230 235

ATT CTT GAG GAG AGT GAC TCT AGG CAG ATC TTT TAC TTC TTG 756 l ie Leu Glu Glu Ser Asp Ser Arg Gin lie Phe Tyr Phe Leu

240 - - 245 250

TGC TTG AAT CTG CTT TTT ACC TTT GTG GAA TTA TTC TAT GGC 798 Cys Leu Asn Leu Leu Phe Thr Phe Val Glu Leu Phe Tyr Gly

255 260 265

GTG CTG ACC AAT AGT CTG GGC CTG ATC TCG GAT GGA TTC CAC 840 Val Leu Thr Asn Ser Leu Gly Leu l ie Ser Asp Gly Phe His

270 275 280

ATG CTT TTT GAC TGC TCT GCT TTA GTC ATG GGA CTT TTT GCT 882 Met Leu Phe Asp Cys Ser Ala Leu Val Met Gly Leu Phe Ala

285 290

GCC CTG ATG AGT AGG TGG AAA GCC ACT CGG ATT TTC TCC TAT 924 Ala Leu Met Ser Arg Trp Lys Ala Thr Arg l ie Phe Ser Tyr 295 300 305

GGG TAC GGC CGA ATA GAA ATT CTG TCT GGA TTT ATT AAT GGA 966 Gly Tyr Gly Arg lie Glu He Leu Ser Gly Phe lie Asn Gly

310 315 320

CTT TTT CTA ATA GTA ATA GCG TTT TTT GTG TTT ATG GAG TCA 1008 Leu Phe Leu l ie Val lie Ala Phe Phe Val Phe Met Glu Ser

325 330 335

GTG GCT ARA TTG ATT GAT CCT CCA GAA TTA GAC ACT CAC ATG 1050 Val Ala Xaa Leu lie Asp Pro Pro Glu Leu Asp Thr His Met

340 345 350

TTA ACA CCA GTY TCA GTT GGA GGG CTG ATA GTA AAC CTT ATT 1092 Leu Thr Pro Val Ser Val Gly Gly Leu lie Val Asn Leu l ie

355 360 GGT ATC TGT GCC TTT AGC CAT GCC CAT AGC CAT GCC CAT GGA 1134 Gly l ie Cys Ala-Phe Ser His Ala His Ser His Ala His Gly 365 370 375

GCT TCT CAA GGA AGC TGT CAC TCA TCT GAT CAC AGC CAT TCA 1176 Ala Ser Gin Gly Ser Cys His Ser Ser Asp His Ser His Ser

380 385 390

CAY CAT ATG CAT GGA CAC AGT GAC CAT GGG CAT GGT CAC AGC 1218 His His Met His Gly His Ser Asp His Gly His Gly His Ser

395 400 405

CAC GGA TCT GCG GGT GGA GGC ATG AAT GCT AAC ATG AGG GGT 1260 His Gly Ser Ala Gly Gly Gly Met Asn Ala Asn Met Arg Gly

410 415 420

GTA TTT YTA CAT GTT TTG GCA GAT ACW CTT GGC AGC ATT GGT 1302 Val Phe Leu His Val Leu Ala Asp Thr Leu Gly Ser lie Gly

425 430

GTG ATT GTA TCC ACA GTT TTT ATA GAG CAG TTT GGA TGG TTC 1344 Val lie Val Ser Thr Val Phe l ie Glu Gin Phe Gly Trp Phe 435 440 445

ATC GCT GAC CCA CTC TGT TCT CTT TTT ATT GCT ATA TTA ATA 1386 lie Ala Asp Pro Leu Cys Ser Leu Phe lie Ala l ie Leu l ie

450 455 460

TTT CTC AGT GTT GTT CCA CTG ATT AAA GAT GCC TGC CAG GTT 1428 Phe Leu Ser Val Val Pro Leu l ie Lys Asp Ala Cys Gin Val

465 470 475

TTA CTC CTG AGA TTG CCA CCA GAA TAT GGA AAA GAA CTA CAT 1470 Leu Leu Leu Arg Leu Pro Pro Glu Tyr Gly Lys Glu Leu His 480 485 490

ATT GCT TTA GAA - AAG ATA CAG NAA ATT GAA GGA TTA ATA TCA 1512 l ie Ala Leu Glu Lys l ie Gin Xaa l ie Glu Gly Leu lie Ser

495 500

TAC CGA GAC CCT CAT TTT TGG CGT CAT TYT GCT AGT ATT GTG 1554 Tyr Arg Asp Pro His Phe Trp Arg His Xaa Ala Ser l ie Val 505 510 515

GCA GGA ACA ATT CAT ATA CAG GTG ACA TYT GAT GTG CTA GAA 1596 Ala Gly Thr l ie His l ie Gin Val The Xaa Asp Val Leu Glu

520 525 530

CAA AGA ATA GTA CRG CAG GTT ACA GGA ATA CTT AAA GAT GCT 1638 Gin Arg l ie Val Xaa Gin Val Thr Gly lie Leu Lys Asp Ala

535 540 545

GGA GTA AAC AAT TTA ACA ATT CAA GTG GAA AAG GAG GCA TAC 1680 Gly Val Asn Asn Leu Thr l ie Gin Val Glu Lys Glu Ala Tyr

550 555 560

TTT CAA CAT ATG TYT GGC CTA AGT ACT GGA TTT CAT GAT GTT 1722 Phe Gin His Met Xaa Gly Leu Ser Thr Gly Phe His Asp Val

565 570

CTG GCT ATG ACA AAA CAA ATG GAA TCC ATG AAA TAC TGC AAA 1764 Leu Ala Met Thr Lys Gin Met Glu Ser Met Lys Tyr Cys Lys 575 580 585

GAT GGT ACT TAC ATC ATG TGA GATAACTCAA GAATTACCCC 1805 Asp Gly Thr Tyr l ie Met

590

TGGAGAATAA ACAATGAAGA TTAAATGACT CAGTATTTGT AATATTGCCA 1855 98/38305

_ 95

GAAGGATAAA AATTACACAT TAACTGTACA GAAACAGAGT TCCCTACTAC 1905 " TGGATCAAGG AATCtTTCTT GAAGGAAATT TAAATACAGA ATGAAACATT 1955 AATGGTAAAA GTGGAGTAAT TATTTAAATT ATGTGTATAA AAGGAATCAA 2005 ATTTTGAGTA AACATGATGT ATTACATCAT CTTCAAAAAT AGATATGATG 2055 GATTCTAGTG AAGACCAAAA TTACTTCTGT TTACTTTCTA TCAGGAAGCA 2105 TCTCCATTGT AAATATGTAT TTACATGTTT ATTACAAAGA CCCAAATGAA 2155 AAATTTTTAG TCCATTTTTT GCATAGCCTA AAGATAAAAT AGGAATAAAA 2205 GTTCTATATT TATGGGATTT TCTGTATATA AAACTGGTTT CTAATTATAA 2255 CTTAAGTCCA TTAAGTAAAA TCTGTATTGC CACTTTAAAT GTAAACTAAA 2305 TTATTTGGGA GAAACTTCAA CCACTGATAT GAGATAAGCA ATGAGAATAG 2355 GGAAGTGTAT AACATCACAG TTTTTGATGT ATTACAAAAA TCAACCACTT 2405 TATAAAATAA ATTTTTTTTA CTTTTGGTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 2455 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAG CGGCCGCTGA ATTCTAGNTA GAATTCAGCG 2505 GCCGCTGAAT NCTA 2519 配列番号： 10

配列の長さ： 594

配列の型：アミノ酸

トポロジー：直鎖状

配列の種類：タンパク質

配列：

Met Ala Lys Met Ala Glu His Pro Glu Gly His His Asp Ser

1 5 10

Ala Leu Thr His Met Leu Tyr Thr Ala l ie Ala Phe Leu Gly

15 20 25

Val Ala Asp His Lys Gly Gly Val Leu Leu Leu Val Leu Ala

30 35 40 Leu Cys Cys Lys Val Gly Phe His Thr Ala Ser Arg Lys Leu

45 - . 50 55

Ser Val Asp Val Gly Gly Ala Lys Arg Leu Gin Ala Leu Ser

60 65 70

His Leu Val Ser Val Leu Leu Leu Cys Pro Trp Val l ie Val

75 80 Leu Ser Val Thr Thr Glu Ser Lys Val Glu Ser Trp Xaa Ser 85 90 95

Leu lie Met Pro Phe Ala Thr Val lie Phe Phe Val Met l ie

100 105 110

Leu Asp Phe Tyr Val Asp Ser l ie Cys Ser Val Lys Met Glu

115 120 125

Val Ser Lys Cys Ala Arg Tyr Gly Ser Phe Pro lie Phe l ie

130 135 140

Ser Ala Leu Leu Phe Gly Asn Phe Trp Thr His Pro l ie Thr

145 150 Asp Gin Leu Arg Ala Met Asn Lys Ala Ala His Gin Glu Ser 155 160 165

Thr Glu His Val Leu Ser Gly Gly Val Val Val Ser Ala l ie

170 175 180

Phe Phe lie Leu Ser Ala Asn l ie Leu Ser Ser Pro Ser Lys

185 190 195

Arg Gly Gin Lys Gly Thr Leu l ie Gly Tyr Ser Pro Glu Gly

200 205 210

Thr Pro Leu Tyr Asn Phe Met Gly Asp Ala Phe Gin His Ser

215 220 W 05

97

Ser Gin Ser l ie Pro Arg Phe l ie Lys Glu Ser Leu Lys Gin

225 - - 230 235

l ie Leu Glu Glu Ser Asp Ser Arg Gin l ie Phe Tyr Phe Leu

240 245 250

Cys Leu Asn Leu Leu Phe Thr Phe Val Glu Leu Phe Tyr Gly

255 260 265

Val Leu Thr Asn Ser Leu Gly Leu l ie Ser Asp Gly Phe His

270 275 280

Met Leu Phe Asp Cys Ser Ala Leu Val Met Gly Leu Phe Ala

285 290 Ala Leu Met Ser Arg Trp Lys Ala Thr Arg He Phe Ser Tyr 295 300 305

Gly Tyr Gly Arg l ie Glu l ie Leu Ser Gly Phe lie Asn Gly

310 315 320

Leu Phe Leu He Val lie Ala Phe Phe Val Phe Met Glu Ser

325 330 335

Val Ala Xaa Leu lie Asp Pro Pro Glu Leu Asp Thr His Met

340 345 350

Leu Thr Pro Val Ser Val Gly Gly Leu l ie Val Asn Leu l ie

355 360 Gly l ie Cys Ala Phe Ser His Ala His Ser His Ala His Gly 365 370 375

Ala Ser Gin Gly Ser Cys His Ser Ser Asp His Ser His Ser

380 385 390

His His Met His Gly His Ser Asp His Gly His Gly His Ser

395 400 405 38305

_ 98

His Gly Ser Ala Gly Gly Gly Met Asn Ala Asn Met Arg Gly

410· . 415 420

Val Phe Leu His Val Leu Ala Asp Thr Leu Gly Ser lie Gly

425 430 Val l ie Val Ser Thr Val Phe l ie Glu Gin Phe Gly Trp Phe 435 440 445

l ie Ala Asp Pro Leu Cys Ser Leu Phe l ie Ala lie Leu l ie

450 455 460

Phe Leu Ser Val Val Pro Leu He Lys Asp Ala Cys Gin Val

465 470 475

Leu Leu Leu Arg Leu Pro Pro Glu Tyr Gly Lys Glu Leu His

480 485 490 l ie Ala Leu Glu Lys lie Gin Xaa l ie Glu Gly Leu lie Ser

495 500 Tyr Arg Asp Pro His Phe Trp Arg His Xaa Ala Ser He Val 505 510 515

Ala Gly Thr l ie His l ie Gin Val The Xaa Asp Val Leu Glu

520 525 530

Gin Arg He Val Xaa Gin Val Thr Gly lie Leu Lys Asp Ala

535 540 545

Gly Val Asn Asn Leu Thr l ie Gin Val Glu Lys Glu Ala Tyr

550 555 560

Phe Gin His Met Xaa Gly Leu Ser Thr Gly Phe His Asp Val

565 570 Leu Ala Met Thr Lys Gin Met Glu Ser Met Lys Tyr Cys Lys 575 580 585 Asp Gly Thr Tyr He Met

590 - - 配列番号： 11

配列の長さ： 178

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（cDNA断片）

起源

生物名：ゥサギ

配列：

GTTTTTTTTT TTTTTCATAC ATTTGGTATG AAACATCGAA TAGCAAAAGC 50 AGANCATGTT TCTGTATNAC TGCATTTAAG CAGTACCAAA ACTGAANAAA 100 GGTAATAACT GAAATGTTTT AAAATACATG TAAACAATAA ACTTTCAGGA 150 AATTCTGTTG TTAAAAAAAA AAAAAAAC 178 配列番号： 12

配列の長さ： 167

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（cDNA断片）

起源

生物名：ゥサギ

配列：

CTTGATTGCC ACCTTAAATG TAAACTAAAT TATTTGAGAG AAACTTCAAC 50 CACTGATATG ACATAAGCAG TGAGAACAGG GAGTCTATAA CATTACAGTT 100 TTGGATGTTA CCAAAACCAA CCACTCTGTA AAATAAATTT TTTACTTTTG 150 TAAAAAAAAA AAAAAAC 167 配列番号： 13

配列の長さ： 24

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 24

特徴を決定した方法： E

配列：

TCATACATTT GGTATGAAAC ATCG 24 配列番号： 14

配列の長さ： 24

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 24

特徴を決定した方法： E

配列：

TTTTTTTAAC AACAGAATTT CCTG 24 配列番号： 15

配列の長さ 'ΛΊ - ·

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . , 27

特徴を決定した方法.： E

配列：

AATTTCCTGA AAGTTTATTG TTTACAT 27 配列番号： 16

配列の長さ： 25

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 25

特徴を決定した方法： E

配列：

GAAACATGCT CTGCTTTTGC TATTC 25 配列番号： 17

配列の長さ： 27 P

102 配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖 - - トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 27

特徴を決定した方法： E

配列：

ATCCCTGCTA AGTTGTGGTG TGAATGG 27 配列番号： 18

配列の長さ：

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 27

特徴を決定した方法： E

配列：

TCTGCTTTGA GACTTCTTCA TCCTGAC 27 配列番号： 19

配列の長さ： 27

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DM)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 27

特徴を決定した方法： E

配列：

CCATCCTAAT ACGACTCACT ATAGGGC 27 配列番号： 20

配列の長さ： 23

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 23

特徴を決定した方法： E

配列：

ACTCACTATA GGGCTCGAGC GGC 23 配列番号： 21

配列の長さ： 22

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA) 配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 22

特徴を決定した方法： E

配列：

TTGATTGCCA CCTTAAATGT AA 22 配列番号： 22

配列の長さ： 22

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 22

特徴を決定した方法： E

配列：

GTGGTTGGTT TTGGTAACAT CC 22 配列番号： 23

配列の長さ： 25

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind 存在位置： 1 . . 25

特徴を決定した方法： E

配列：

GTTATAGACT CCCTGTTCTC ACTGC 25 配列番号： 24

配列の長さ： 25

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 25

特徴を決定した方法： E

配列：

AGACTCCCTG TTCTCACTGC TTATG 25 配列番号： 25

配列の長さ： 27

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 MA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 27

特徴を決定した方法： E 配列：

ATCTTCACTG CTCACATCGG GGGTAAT 27 配列番号： 26

配列の長さ： 23

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 23

特徴を決定した方法： E

配列：

TCACTGCTCA CATCGGGGGT AAT 23 配列番号： 27

配列の長さ： 1703

配列の型：核酸

鎖の数：二本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（5'末端塩基配列を含む cDNA)

起源

生物名：マウス

配列の特徴

特徴を表す記号： CDS

存在位置： 10 . . 1703

特徴を決定した方法： E 配列：

GATGATCTC 9 ATG GCA AAG ATG GCT GAA CAC CCG GAA GGA CAT CAT GAT AGT 51 Met Ala Lys Met Ala Glu His Pro Glu Gly His His Asp Ser

1 5 10

GCT CTA ACT CAC ATG CTC TAT ACA GCC ATT GCC TTT TTA GGG 93 Ala Leu Thr His Met Leu Tyr Thr Ala Thr Ala Phe Leu Gly 15 20 25

GTG GCA GAT CAC AAG GGT GGA GTA CTC TTG CTG GTG CTG GCT 135 Val Ala Asp His Lys Gly Gly Val Leu Leu Leu Val Leu Ala

30 35 40

TTA TGT TGT AAA GTT GGT TTT CAT ACG GCT TCC AGA AAG CTC 177 Leu Cys Cys Lys Val Gly Phe His Thr Ala Ser Arg Lys Leu

45 50 55

TCT ATA GAT GTT GGT GGA GCT AAG CGC CTT CAG GCC TTA TCT 219 Ser He Asp Val Gly Gly Ala Lys Arg Leu Gin Ala Leu Ser

60 65 70

CAG CTT GTT TCT GTG TTT CTC CTG TGC CCA TGG GTG ATT GTC 261 Gin Leu Val Ser Val Phe Leu Leu Cys Pro Trp Val He Val

75 80

CTT TCT GTG ACA ACT GAA AGT AAG GTT GAG TCT TGG TTC TCT 303 Leu Ser Val Thr Thr Glu Ser Lys Val Glu Ser Trp Phe Ser 85 90 95

CTC ATC ATG CCT TTC ACC ACA GTC ATC TTT T"，T GTC ATG ATC 345 Leu l ie Met Pro Phe Thr Thr Val l ie Phe Phe Val Met l ie

100 105 110 CTG GAT TTC TAT ATG GAT TCT GTT TGT TCA GTC AAA ATG GAC 387

Leu Asp Phe Tyr Met Asp Ser Val Cys Ser Val Lys Met Asp

115 120 125

GTG TCC AAA TGT GCC CGC TAT GGG TCC TTT CCC ATT TTT ATT 429

Val Ser Lys Cys Ala Arg Tyr Gly Ser Phe Pro l ie Phe l ie

130 135 140

AGT GCC CTC CTG TTT CGA AAT TTC TGG ACA CAC CCA ATA ACA 471

Ser Ala Leu Leu Phe Gly Asn Phe Trp Thr His Pro l ie Thr

145 150

GAC CAA CTC CGG GCT ATG AAC AGA GCA GCA CAC CAG GAG AGC 513

Asp Gin Leu Arg Ala Met Asn Arg Ala Ala His Gin Glu Ser

155 160 165

ACA GAA CAC GTC CTG TCT GGA GGA GTG GTA GTG AGC GCT GTG 555

Thr Glu His Val Leu Ser Gly Gly Val Val Val Ser Ala Val

170 175 180

TTC TTC ATT TTG TCG GCC AAC ATT CTA TCA TCT CCC TCT AAG 597

Phe Phe He Leu Ser Ala Asn l ie Leu Ser Ser Pro Ser Lys

185 190 195

AGA GGA CAG AAA GGT ACC CTT ATT GGA TAT TCT CCT GAA GGA 639

Arg Gly Gin Lys Gly Thr Leu l ie Gly Tyr Ser Pro Glu Gly

200 205 210

ACA CCA CTC TAT CAC TTC ATG GGG GAC GCT TTT CAG CAC AGC 681

Thr Pro Leu Tyr His Phe Met Gly Asp Ala Phe Gin His Ser

215 220

TCT CAG TCG GTG CCT AGG TTC ATT AAG GAC TCA CTA AAG CAG 723

Ser Gin Ser Val Pro Arg Phe l ie Lys Asp Ser Leu Lys Gin 225 230 235

GTT CTC GAG GAG AGC GAC TCT AGG CAG ATC TTT TAC TTC TTG 765

Val Leu Glu Glu Ser Asp Ser Arg Gin lie Phe Tyr Phe Leu

240 245 250

TGC TTG AAT CTG CTT TTT ACC TTT GTG GAG TTG TTC TAT GGC 807 Cys Leu Asn Leu Leu Phe Thr Phe Val Glu Leu Phe Tyr Gly

255 260 265

GTG CTA ACC AAC AGT CTA GGC CTG ATC TCA GAT GGA TTT CAC 849 Val Leu Thr Asn Ser Leu Gly Leu l ie Ser Asp Gly Phe His

270 275 280

ATG CTC TTT GAC TGC TCG GCT TTG GTC ATG GGA CTG TTT GCT 891 Met Leu Phe Asp Cys Ser Ala Leu Val Mey Gly Leu Phe Ala

285 290

GCC CTG ATG AGC CGC TGG AAA GCC ACC CGG ATT TTC TCC TAT 933 Ala Leu Met Ser Arg Trp Lys Ala Thr Arg l ie Phe Ser Tyr 295 300 305

GGG TAT GGC CGA ATA GAG ATT CTC TCT GGC TTT ATT AAT GGG 975 Gly Tyr Gly Arg lie Glu l ie Leu Ser Gly Phe He Asn Gly

310 315 320

CTT TTT CTG ATC GTG ATA GCA TTT TTT GTG TTT ATG GAA TCA 1017 Leu Phe Leu l ie Val l ie Ala Phe Phe Val Phe Met Glu Ser

325 330 335

GTG GCT AGA CTG ATC GAT CCT CCG GAA CTA GAC ACA AAC ATG 1059 Val Ala Arg Leu l ie Asp Pro Pro Glu Leu Asp Thr Asn Met

340 345 350

CTG ACA CCA GTT TCC GTC GCA GGG CTG ATA GTA AAC CTT ATT 1101 Leu Thr Pro Val Ser Val Gly Gly Leu lie Val Asn Leu l ie

355 360

GGT ATC TGT GCC TTC AGC CAC GCC CAC AGC CAT GGC CAT GGC 1143 Gly He Cys Ala Phe Ser His Ala His Ser His Gly His Gly 365 370 375

GCT TCT CAA GGA AAC TGC CAC TCT GAT CAC GGC CAT TCA CAC 1185 Ala Ser Gin Gly Asn Cys His Ser Asp His Gly His Ser His

380 385 390

CAT GCA CAT GGA CAC GGC CAT GAT CAC GGT CAC AGC CAC GGC 1227 His Ala His Gly His Gly His Asp His Gly His Ser His Gly

395 400 405

TTC ACG GGT GGA GGC ATG AAT GCG AAC ATG AGG GGT GTA TTT 1269 Phe Thr Gly Gly Gly Met Asn Ala Asn Met Arg Gly Val Phe

410 415 420

CTC CAT GTG TTG GCA GAC ACA CTG GGC AGC ATC GGC GTG ATT 1311 Leu His Val Leu Ala Asp Thr Leu Gly Ser He Gly Val He

425 430

GTG TCC ACA GTT CTC ATA GAG CAG TTT GGA TGG TTC ATT GCT 1353 Val Ser Thr Val Leu lie Glu Gin Phe Gly Trp Phe l ie Ala 435 440 445

GAT CCC CTG TGT TCT CTT TTT ATT GCC GTG TTG ATA TTT CTC 1395 Asp Pro Leu Cys Ser Leu Phe He Ala Val Leu lie Phe Leu

450 455 460

AGT GTG ATC CCA CTG ATT AAA GAT GCC TGT CAA GTT CTA CTT 1437 Ser Val lie Pro Leu He Lys Asp Ala Cys Gin Val Leu Leu

465 470 475 CTG AGA CTA CCA CCT GAC CAT GAA AAA GAA CTG CAT ATT GCT 1479 Leu Arg Leu Pro- Pro Asp His Glu Lys Glu Leu His l ie Ala

480 485 490

TTA GAA AAG ATA CAG AAA ATT GAG GGA TTA ATA TCA TAC CGA 1521 Leu Glu Lys He Gin Lys l ie Phe Gly Leu He Ser Tyr Arg

495 500

GAC CCT CAT TTT TGG CGC CAT TCT GCC AGT ATT GTA GCG GGA 1563 Asp Pro His Phe Trp Arg His Ser Ala Ser l ie Val Ala Gly 505 510 515

ACA ATT CAT ATA CAA GTG ACA TCT GAG GTG CTG GAG CAG AGA 1605 Thr lie His l ie Gin Val Thr Ser Glu Val Leu Glu Gin Arg

520 525 530

ATT GTA CAG CAG GTT ACA GGG ATA CTT AM GAT GCA GGA GTA 1647 l ie Val Gin Gin Val Thr Gly l ie Leu Lys Asp Ala Gly Val

535 540 545

AAC AAC CTA ACC ATA CAA GTG GAA AAG GAG GCA TAC TTT CAG 1689 Asn Asn Leu Thr lie Gin Val Glu Lys Glu Ala Tyr Phe Gin

550 555 560

CAT ATG TCC GGC CT 1703 His Met Ser Gly

配列番号： 28

配列の長さ： 564

配列の型：アミノ酸

トポロジー：直鎖状

配列の種類：タンパク質

配列： 08T 9At 02,1 i ¾iv s i ^το ^io s 八 STH J¾

S9I 091 99t

J9S n^g u^g STH ^IV ^IV Say usy ν\ Say 1197 u^g dsy

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S0£8€/86 ΟΛ Phe Phe lie Leu Ser Ala Asn lie Leu Ser Ser Pro Ser Lys

185 - . 190 195

Arg Gly Gin Lys Gly Thr Leu lie Gly Tyr Ser Pro Glu Gly

200 205 210

Thr Pro Leu Tyr His Phe Met Gly Asp Ala Phe Gin His Ser

215 220 Ser Gin Ser Val Pro Arg Phe l ie Lys Asp Ser Leu Lys Gin 225 230 235

Val Leu Glu Glu Ser Asp Ser Arg Gin lie Phe Tyr Phe Leu

240 245 250

Cys Leu Asn Leu Leu Phe Thr Phe Val Glu Leu Phe Tyr Gly

255 260 265

Val Leu Thr Asn Ser Leu Gly Leu lie Ser Asp Gly Phe His

270 275 280

Met Leu Phe Asp Cys Ser Ala Leu Val Mey Gly Leu Phe Ala

285 290 Ala Leu Met Ser Arg Trp Lys Ala Thr Arg He Phe Ser Tyr 295 300 305

Gly Tyr Gly Arg lie Glu He Leu Ser Gly Phe lie Asn Gly

310 315 320

Leu Phe Leu lie Val lie Ala Phe Phe Val Phe Met Glu Ser

325 330 335

Val Ala Arg Leu lie Asp Pro Pro Glu Leu Asp Thr Asn Met

340 345 350

Leu Thr Pro Val Ser Val Gly Gly Leu lie Val Asn Leu lie

355 360 Gly lie Cys Ala Phe Ser His Ala His Ser His Gly His Gly

365 - - 370 375

Ala Ser Gin Gly Asn Cys His Ser Asp His Gly His Ser His

380 385 390

His Ala His Gly His Gly His Asp His Gly His Ser His Gly

395 400 405

Phe Thr Gly Gly Gly Met Asn Ala Asn Met Arg Gly Val Phe

410 415 420

Leu His Val Leu Ala Asp Thr Leu Gly Ser lie Gly Val lie

425 430 Val Ser Thr Val Leu lie Glu Gin Phe Gly Trp Phe lie Ala 435 440 445

Asp Pro Leu Cys Ser Leu Phe lie Ala Val Leu lie Phe Leu

450 455 460

Ser Val lie Pro Leu lie Lys Asp Ala Cys Gin Val Leu Leu

465 470 475

Leu Arg Leu Pro Pro Asp His Glu Lys Glu Leu His lie Ala

480 485 490

Leu Glu Lys l ie Gin Lys l ie Phe Gly Leu lie Ser Tyr Arg

495 500 Asp Pro His Phe Trp Arg His Ser Ala Ser lie Val Ala Gly 505 510 515

Thr lie His l ie Gin Val Thr Ser Glu Val Leu Glu Gin Arg

520 525 530 lie Val Gin Gin Val Thr Gly l ie Leu Lys Asp Ala Gly Val

535 540 545 Asn Asn Leu Thr lie Gin Val Glu Lys Glu Ala Tyr Phe Gin 550 - 555 560

His Met Ser Gly

配列番号： 29

配列の長さ： 29

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 29

特徴を決定した方法： E

配列：

GGGAATTCAT GGGTAAGACC CTGCGGGGC 29 配列番号： 30

配列の長さ： 35

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 35

特徴を決定した方法： E

配列： GGAAGCTTTC ACTCATGTAA CCCAGATTCT CCAGC 35 配列番号： 31 - - 配列の長さ： 35

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 35

特徴を決定した方法： E

配列：

GGTTTTCTAG AGCTCGTGCA GACCTGGAGA CGGGC 35 配列番号： 32

配列の長さ： 39

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DM)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 39

特徴を決定した方法： E

配列：

GGGTTTTCTA GATCTTCAGA AATGAGGGCG ACTTTTGTG 39 配列番号： 33 配列の長さ： 29

配列の型：核酸- - 鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 29

特徴を決定した方法： E

配列：

GGGATCCGCA TAGTACAGCA GGTTACAGG 29 配列番号： 34

配列の長さ： 29

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 29

特徴を决定した方法： E

配列：

GGTCGACCCT TTAAAATACA TAACTCAAA 29 配列番号： 35

配列の長さ： 30

配列の型：核酸鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 30

特徴を決定した方法： E

配列：

AATGTATGCA GTATGGAAAT GGAAAGTTGC 30 配列番号： 36

配列の長さ： 28

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 28

特徴を決定した方法： E

配列：

CGAATGGGCT GACCGCTTCC TCGTGCTT 28 配列番号： 37

配列の長さ： 30

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴 - - 特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 30

特徴を決定した方法： E

配列：

CGGCAGGAGC AAGGTGAGAT GACAGGAGAT 30 配列番号： 38

配列の長さ： 30

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DM)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 30

特徴を決定した方法： E

配列：

TTACAGTGTC AGGAATAAAG GCTATGCTTC 30 配列番号： 39

配列の長さ： 20

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . :- 20

特徴を決定した方法： E

配列：

GACTCGATCT CATGGCAAAG 20 配列番号： 40

配列の長さ： 21

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 21

特徴を決定した方法： E

配列：

TAGAGCATGT GAGTTAGAGC A 21 配列番号： 1

配列の長さ： 21

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 21 特徴を決定した方法： E

配列： - CCAACATTCT ATCATCTCCC T 21 配列番号： 2

配列の長さ： 19

配列の型：核酸

鎖の数：一本鎖

トポロジー：直鎖状

配列の種類：他の核酸（合成 DNA)

配列の特徴

特徴を表す記号： primer bind

存在位置： 1 . . 19

特徴を決定した方法： E

配列：

AGCGGCTCAT CAGGGCAGC 19

Claims

請求の範囲

I . 配列番号 4に記載されるアミノ酸配列を有するタンパクをコードする DN A。

2. 配列番号 4に記載されるァミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメントをコードする DNA。

3. 配列番号 3に記載される塩基配列の塩基番号 97乃至 1419の塩基配列を有する DNA。

4. 配列番号 3に記載される塩基配列を有する DNAにストリンジントな条件下でハイブリダィズする DNA。

5. 配列番号 4に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク。

6. 配列番号 4に記載されるァミノ酸配列または該ァミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメント ο

7. 請求項 5に記載のタンパクの細胞外領域とヒトの免疫グロブリン（I g) の重鎖の定常領域または定常領域の一部とからなる融合タンパク。

8. 請求項 1乃至請求項 4のいずれかに記載の DN Aを含む発現ぺク夕一。

9. 請求項 8に記載の発現ベクターで形質転換された形質転換細胞。

10. 請求項 5に記載のタンパクまたは請求項 6に記載のタンパクフラグメントに反応性を有する抗体または抗体の一部。

I I. 抗体が、モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項 10に記載の抗体または抗体の一部。

12. 請求項 6に記載のタンパクフラグメント若しくは請求項 7に記載の融合タンパク及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

13. 請求項 10または請求項 11に記載の抗体若しくは抗体の一部及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

1 4 . 配列番号 1 0に記載されるアミノ酸配列を有するタンパクをコードする

1 5 . 配列番号 1 0に記載されるアミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメントをコードする D N A。

1 6 . 配列番号 9に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 1 7 8 5の塩基配列を有する D N A。

1 7 . 配列番号 9に記載される塩基配列を有する D N Aにストリンジェン卜な条件下でハイブリダイズする D N A。

1 8 . 配列番号 1 0に記載されるアミノ酸配列または該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク。

1 9 . 配列番号 1 0に記載されるアミノ酸配列または該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパクの細胞外領域からなるタンパクフラグメン卜。

2 0 . 請求項 1 8に記載のタンパクの細胞外領域とヒトの免疫グロブリン（I g ) の重鎖の定常領域または定常領域の一部とからなる融合夕ンパク。

2 1 . 請求項 1 4乃至請求項 1 7のいずれかに記載の D N Aを含む発現べクタ ο

2 2 . 請求項 2 1に記載の発現ベクターで形質転換された形質転換細胞。

2 3 . 請求項 1 8に記載のタンパクまたは請求項 1 9に記載のタンパクフラグメントに反応性を有する抗体または抗体の一部。

2 4 . 抗体が、モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項 2 3に記載の抗体または抗体の一部。

2 5 . 請求項 1 9に記載のタンパクフラグメント若しくは請求項 2 0に記載の融合タンパク及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

2 6 . 請求項 2 3または請求項 2 4に記載の抗体若しくは抗体の一部及び薬学的に許容され得る担体を含んでなる医薬組成物。

2 7 . 配列番号- 3に記載される塩基配列の塩基番号 9 7乃至 1 4 1 9の塩基配列を有する D N Aを含むヒ卜由来の D N Aが、マウスの内在性遺伝子に組み込まれていることを特徴とするトランスジエニックマウス。

2 8 . 配列番号 9に記載される塩基配列の塩基番号 1乃至 1 7 8 5の塩基配列を有する D NAを含むヒト由来の D N Aが、マウスの内在性遺伝子に組み込まれていることを特徴とするトランスジエニックマウス。

2 9 . 配列番号 6に記載されるアミノ酸配列を有するマウス由来のタンパクが産生されないように、該夕ンパクをコードするマウスの内在性遺伝子が不活性化されていることを特徴とするノックァゥトマウス。

3 0 . 配列番号 2 8に記載されるアミノ酸配列を含むマウス由来のタンパクが産生されないように、該夕ンパクをコ一ドするマウスの内在性遺伝子が不活性化されていることを特徴とするノックァゥトマウス。