WO1995018108A1 - Utilisation de derives 2-mercapto-imidazole substitues en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procede de preparation et leurs applications en pharmacie, cosmetique ou alimentaire - Google Patents

Utilisation de derives 2-mercapto-imidazole substitues en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procede de preparation et leurs applications en pharmacie, cosmetique ou alimentaire Download PDF

Info

Publication number
WO1995018108A1
WO1995018108A1 PCT/FR1994/001514 FR9401514W WO9518108A1 WO 1995018108 A1 WO1995018108 A1 WO 1995018108A1 FR 9401514 W FR9401514 W FR 9401514W WO 9518108 A1 WO9518108 A1 WO 9518108A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
ppm
aralkyl
lower alkyl
represents hydrogen
substituted aralkyl
Prior art date
Application number
PCT/FR1994/001514
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Claude Y. Yadan
Jinzhu Xu
Marc E. Moutet
Jean R. Chaudiere
Original Assignee
Bioxytech
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioxytech filed Critical Bioxytech
Priority to JP51780995A priority Critical patent/JP4024848B2/ja
Priority to AU13204/95A priority patent/AU696834B2/en
Priority to EP95904589A priority patent/EP0686149B1/fr
Priority to DE69430473T priority patent/DE69430473T2/de
Publication of WO1995018108A1 publication Critical patent/WO1995018108A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/66—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/84—Sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present invention relates to the use of 2-mercapto-imidazole derivatives substituted in position 4 (or 5) as antioxidant agents as well as their preparation process and pharmaceutical, cosmetic or food compositions comprising their application.
  • the antioxidant properties of the new 2-mercapto-imidazole derivatives which are the subject of the present invention, are similar to that of L- (-t -) - ergothionein, which is one of them.
  • L - (+) - ergothionein a natural molecule with a 2-mercapto-imidazole structure, is biosynthesized by certain ergot fungi, such as Claviceps purpurea (see C. TANRET; CR Acad. Sci .; (1909) ; 149; pages 222-224).
  • L - (+) - ergothionein is rare in the living world insofar as it is composed of a 2-mercaptoimidazole nucleus and a betaine (see GG SKELLERN; in "Sulfur-containing Drugs and related organic compounds: Chemistry, Biochemistry and Toxicology "LA DAMANI Eds .; Ellis Horwood Lim .; (1989); Vol.l, part B, Chap. 3; pages 49-89).
  • Man is auxotrophic for ergothionein, which is exclusively supplied to him by food.
  • Physiological concentrations of ergothionein vary between (0.1-2.0 mmol) in erythrocytes, liver, kidney, seminal fluid and the lens without cataracts.
  • ergothionein like most 2-mercapto-imidazole derivatives, forms very stable complexes with divalent metals such as Cu ++ , Hg ++ , Zn ++ , Co ++ and Ni ++ (see DP HANLON; J. Med. Chem .; (1971); 14; page 1084 and N. MOTOHASHI et al .; Chem. Pharm. Bull .; (1974); 22; pages 654-657).
  • ergothionein does not stimulate the peroxidation of polyunsaturated fatty acids in the presence of metal salts (Fe ++) (see D. AKANMU et al .; Arch. Biochem Biophys .; (1991); 288; pages 10-16), which is consistent with its inactivating chelating properties, as well as with its majority thione structure.
  • metal salts Fe ++
  • Another advantage of using antioxidants with a 2-mercapto-imidazole structure is their very high stability in aerated aqueous solution. Indeed, the tautomeric balance of the 2-mercapto-imidazole derivatives being completely displaced towards the thione form in solution (see E.
  • the rapid reduction of ferrylmyoglobin (Mb ⁇ ) could be an essential mechanism for the protection of muscle tissue, in general, and of cardiac tissue, in particular, by ergothioneine, during oxidative stress and in particular during reperfusion. post-ischemic. It was shown on a post-ischemic reperfusion model of isolated rat heart, only after 15 min. Ischemia, ergothioneine (100 ⁇ molars) limited the importance of cell necrosis evaluated by measuring the lactate dehydrogenase activity of the effluent (see A. ARDUINI et al .; Arch. Biochem. Biophys .; (1990); 281; pages 41-43).
  • the present invention aims to solve the new technical problem consisting in the supply of new compounds having good antioxidant activity and preferably also cytoprotective, thus making it possible to constitute a valuable active principle in the context of pharmaceutical, cosmetic or food compositions.
  • the invention also aims to solve the new technical problem stated above according to a solution also providing a process for the preparation of these compounds which is easy to use, with good yields.
  • the invention proposes a new method of introducing sulfur, in position 2, onto an imidazole nucleus, the mechanism of which would be similar to a mechanism of the Nucleophilic Addition-Opening-Reclosing Cycle (ANORC) type.
  • the operating conditions of this new method are sufficiently gentle to allow the integrity of a chiral center, in particular that of the carbon of an amino acid, to be maintained.
  • the present invention relates to the use of 2-mercapto-imidazole derivatives substituted in position 4 (or 5) of the following general chemical formula (I):
  • R 1 represents hydrogen, lower alkyl, an aralkyl or substituted aralkyl group
  • R2 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl; knowing that at least one of R ⁇ and R2 represents hydrogen;
  • R 3 represents - (CH 2 ) n COR; - (CH 2 ) n N + (R5R 6 R 7 ), X ⁇ ; -CH 2 CH (COR 4 ) N + - (R5R6R7 X " ;
  • R4 represents -ORg; -NHR5; - ⁇ -amino acid, preferably - ⁇ -natural amino acid; -NHCH2CH 2 S ⁇ 3-, Y +; -NHCH2CH 2 CO 2 -, Y + ;
  • R5 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • R5 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • R7 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • Rg represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • n 1 or 2
  • X- represents an anion of a cosmetically, pharmaceutically or food-acceptable acid
  • Y + represents a cation of a cosmetically, pharmaceutically or food-acceptable base, with the exclusion of L-ergothionein, as antioxidant agents.
  • alkyl group or lower alkyl, alkoxy, or lower alkoxy, acyl or amino acyl, carboxyl, preferably means linear or branched groups comprising 1 to 6 carbon atoms;
  • the substituted term, affecting the aryl or aralkyl groups means that these are substituted on the aromatic part by one or more identical or different groups chosen from lower alkyl, lower alkoxy, hydroxy, amino, carboxyl or by one or more atoms hydrogen;
  • the invention also covers the addition salts with a pharmaceutically, cosmetically or food-acceptable base of the above-mentioned compounds of formula (I);
  • the invention also covers the addition salts with a pharmaceutically, cosmetically or food acceptable acid of the above-mentioned compounds of formula (I).
  • a pharmaceutically, cosmetically or alimentai ⁇ rely acceptable acids, there may be mentioned, without implied limitation, hydrochloric, hydrobromic, hydroiodic, sulfuric, tartaric, methanesulfonic, trifluoromethanesulfonic, etc. acids.
  • the present invention relates to the use of the aforementioned compounds of formula (I) for the manufacture of a pharmaceutical composition with antioxidant activity, in particular for the treatment of a pathology involving an associated oxidative stress overproduction of oxidizing free radicals and / or intracellular decompartmentalization of the pool of certain transition metals such as iron, copper or manganese.
  • the present invention relates to the use of the abovementioned compounds of formula (I) for the manufacture of a pharmaceutical composition for the prevention of tissue damage induced by ischemia or post-ischemic reperfusion, and in especially the prevention of myocardial infarction, and prevention of postischemic cardiac arrhythmias source of ventricular fibrillation; for the prevention of tissue damage such as edema, necrosis and fibrosis associated with an overproduction of free radicals, comprising in particular the treatment of intoxication with xenobiotics such as, for example, paraquat, diquat, anthracyclines or nitrofurans; or pathologies associated with oxidative stress at the erythrocyte level, in particular falcifona anemia, thalassemia, glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency diseases and malaria; or for protection against irradiation by ionizing X or gamma rays, as well as UV rays; or protection in
  • the present invention relates to the use of the above-mentioned compounds of formula (I) for the manufacture of cosmetic compositions with antioxidant activity, in particular for protection against UV rays.
  • the present invention relates to the use of the above-mentioned compounds of formula (I) for the manufacture of food compositions with antioxidant activity.
  • the 2-mercaptoimidazole of formula (I) mentioned above is present in an amount between 0.1 and 5% by weight relative to the total weight of the final composition, preferably between 0, 1 and 1% by weight.
  • the present invention relates to the use of the composition in the form of a unit dose which can comprise from 1 to 500 mg, of 2-mercapto-imidazole derivative, optionally in a pharmaceutically acceptable excipient, vehicle or support.
  • the present invention also provides a pharmaceutical, cosmetic or food composition, in particular with antioxidant activity, characterized in that it comprises, as active ingredient, at least one 2-mercapto-imidazole compound of formula general (I) below:
  • R represents hydrogen, lower alkyl, an aralkyl or substituted aralkyl group
  • R2 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl; knowing that at least one of and R2 represents hydrogen;
  • R 3 represents - (CH 2 ) nCOR 4 ; - (CH 2 ) n N + (R 5 R 6 R7), X " ; -CH 2 CH (COR 4 ) N + - (R 5 R 6 R 7 ), X-;
  • R4 represents -ORg; -NHR5; - ⁇ -amino acid, preferably - ⁇ -natural amino acid; -NHCH 2 CH 2 S ⁇ 3-, Y +; -NHCH 2 CH 2 CO 2 -, Y + ;
  • R5 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • R represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • R7 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • Rg represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • n 1 or 2
  • X ⁇ represents an anion of a cosmetically, pharmaceutically or food-acceptable acid
  • Y + represents a cation of a cosmetically, pharmaceutically or food-acceptable base, with the exclusion of L-ergothionein, optionally in a pharmaceutically, cosmetically or food-acceptable excipient, support or vehicle.
  • the present invention also covers a process for the manufacture of 2-mercapto-imidazole of general formula (I) below:
  • R j represents hydrogen, lower alkyl, an aralkyl or substituted aralkyl group
  • R2 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl; knowing that at least one of Rj ⁇ and R2 represents hydrogen;
  • R 3 represents - (CH 2 ) n COR4; - (CH 2 ) ⁇ N + (R5R6R7), X ⁇ ; -CH CH (COR4) N + - (R 5 R 6 R 7 ), X-;
  • R4 represents -ORg; -NHR5; - ⁇ -amino acid, preferably - ⁇ -natural amino acid; -NHCH 2 CH 2 S ⁇ 3-, Y + ; -NHCH 2 CH 2 C ⁇ 2 - Y + ;
  • R5 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • Rg represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • R7 represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • Rg represents hydrogen, lower alkyl, aralkyl or substituted aralkyl
  • n 1 or 2
  • X- represents an anion of a cosmetically, pharmaceutically or food-acceptable acid
  • Y + represents a cation of a cosmetically, pharmaceutically or ali ⁇ mentally acceptable base, characterized in that it comprises the following essential steps: a) prepare or use an imidazole derivative substituted in position 4 (or 5) possibly protected; if necessary optically active;
  • the abovementioned carbocation scavenger is a mercaptan, preferably an alkyl or an aryl mercaptan, and even better ⁇ -mercaptopropionic acid.
  • the above-mentioned base is preferably sodium bicarbonate, an amine or an alkylamine such as for example diethylamine or triethylamine.
  • the aforementioned polar solvent can be chosen from an ethereal solvent such as for example ethyl ether or tetrahydrofuran, or an alcohol such as for example methanol.
  • the abovementioned basic hydrolysis is carried out with an inorganic base, such as for example sodium hydroxide or lithine, or organic such as an amine, an alkylamine, in particular diethyl or triethylamine, in particular in solution in a polar solvent, preferably comprising a water / alcohol mixture, in particular methanol.
  • an inorganic base such as for example sodium hydroxide or lithine
  • organic such as an amine, an alkylamine, in particular diethyl or triethylamine, in particular in solution in a polar solvent, preferably comprising a water / alcohol mixture, in particular methanol.
  • the above-mentioned acid hydrolysis is carried out using a solution of strong concentrated acid, at a pH of less than 2, in the presence of a carbocation scavenger, in particular a mercaptan, preferably in large excess.
  • the protection of the abovementioned sulfur substituents is carried out by means of a haloformate, preferably an alkyl or phenyl haloformate, for example ethyl or phenyl chloroformate;
  • the transformation into trialkylammonium compound is carried out by means of an alkylating agent such as for example an alkyl halide or sulphate, in particular methyl iodide or dimethyl sulphate.
  • an optically active starting compound which is hydrolyzed by means of an acidic solution concentrated at a pH below 2 and in the presence a carbocation scavenger, preferably a mercaptan, in large excess.
  • the present invention provides new 2-mercapto-imidazole derivatives substituted in position 4 (or 5) of the following general formula (I):
  • the 2-mercaptoimidazole compounds substituted in position 4 (or 5) of the above formula (I) constitute valuable antioxidant agents. In this context, they constitute precious active agents during a therapeutic application.
  • the therapeutic applications of the compounds of general structure I include all the pathologies involving oxidative stress associated with an overproduction of oxidizing free radicals and / or with an intracellular decomposition of the pool of certain transition metals such as iron, copper or manganese for example.
  • this application notably includes the treatment of intoxication with xenobiotics such as, for example, paraquat, diquat, anthracyclines or nitrofurans;
  • the aforementioned derivatives of formula (I) of the invention will advantageously be presented in the form of a unit dose.
  • a unit dose which may comprise from 1 to 500 mg of 2-mercapto-imidazole derivatives, optionally in a pharmaceutically acceptable excipient, vehicle or support.
  • the 2-mercapto-imidazole derivatives substituted in position 4 (or 5) of the above general formula (I) make it possible to carry out the therapeutic applications stated above and more particularly: * the prevention of tissue damage induced by ischemia and / or post-ischemic reperfusion, and in particular the prevention of myocardial infarction and those of post-ischemic cardiac arrhythmias which are a source of ventricular fibrillation; 5
  • this application notably includes the treatment of intoxication with xenobiotics such as, for example, paraquat, diquat, anthracyclines or nitro- furans; * pathologies associated with oxidative stress at the erythrocyte level, in particular sickle cell anemia, thalassemia, glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency diseases and malaria;
  • FIG. 2 shows the effect of the compound of the invention reference BXT-52021 on the release of lactate dehydrogenase (LDH) and creatine phosphokinase (CPK) in an isolated and perfused rat heart, subjected to ischemia-reperfusion , with the periods respectively for the control and the compound of the invention BXT-52021 for LDH in black and CPK in white respectively, with on the ordinate the enzymatic activity obtained in unit / liter.
  • the figures I, II and III mean respectively:
  • LA periods; IIA; IIIA; IVA mean respectively:
  • - IIA 12 min after the infusion with the compound BXT-52021 (2 ⁇ M);
  • - IIIA 5 min after post-ischemic reperfusion with BXT-52021 (2 ⁇ M);
  • FIG. 3 shows the effect of the compound of the invention reference BXT 52053 on the release of creatine phosphokinase (CPK) in a rat heart, isolated and perfused, subjected to ischemistry-reperfusion, with on the ordinate the total amount CPK released (expressed in milli-units of enzymatic activity per milligram of heart and per minute).
  • the effect of compound BXT 52053 is further compared to that of albumin (BSA) and L - (+) - ergothionein.
  • FIG. 4 represents the effects of the compounds of the invention references BXT 52051 and BXT 52052 on the percentage of recovery of the pressure developed during the reperfusion of an isolated rat heart subjected to a period of ischemia, with abscissa the reperfusion time expressed in minutes and on the ordinate the percentage of recovery of the developed pressure.
  • Mass spectra were recorded on a Nermag R10-10B instrument.
  • the ionization mode used is either electron impact (EI) at 70 electron volts, or chemical ionization (IC) in ammonia, or fast atom bombardment (FAB) on a glycerol matrix.
  • EI electron impact
  • IC chemical ionization
  • FAB fast atom bombardment
  • Example 1 Preparation of 3- (2'-mercapto-imidazol-4'-yl) -propanoate of ethyl: BXT 52021 A / Preparation of the ethyl ester of urocanic acid:
  • Ethyl 3- (imidazol-4'-yl) -propanoate (1.30g; 7.7mmol) is mixed with sodium bicarbonate (3.90g; 46.4mmol) in 20ml of deionized water and 20ml d ethyl ether at room temperature. Under vigorous stirring, phenyl chlorothionoformate (Lancaster; 2.70 ml; 19.5 mmol) is added. The reaction mixture is stirred for 5 h at room temperature. The organic phase is decanted, then washed with a saturated NaCl solution (2X20ml) and the solvent is evaporated under reduced pressure.
  • the desired product is obtained after purification by liquid chromatography on a silica column (eluent: ethyl acetate / ethanol 3/1) (161 mg, 58%).
  • the methyl ester of 2'-mercapto-N ⁇ , N ⁇ -dimethyl-L - (+) - histidine is prepared according to the following preparation method:
  • N-methylpiperazine (10g; lOOmmoles) and 2-chloroethanol (8,05g; lOOmmoles) were stirred at 100 ° C for 4h.
  • the solvent is evaporated under reduced pressure.
  • the desired compound is obtained after purification by chromatography on an alumina column (Merck R; Aluminum Oxide 90; 63-200 ⁇ m; eluent: Ethyl acetate) in the form of a colorless oil. Efficiency: 75%
  • N, N'-dicyclohexylurea was removed by filtration and the filtrate cooled to 10 ° C, was added a solution of taurine (0.5 g; 4 mmol) in 10ml of deionized water, containing sodium bicarbonate (0 , 34g; 4mmoles).
  • the reaction mixture is stirred for 1 h at room temperature.
  • the desired compound is obtained, after purification by chromatography on a grafted silica column (Merck R; RP-8; 40-63 ⁇ m) with a 9/1 water-methanol eluent. It is recrystallized from a methanol / ethanol mixture. (yield: 60%).
  • the ester / - • -méthoxybenzylique carnitine prepared from carnitine (0.81 g; 5 mmol) and chloride.
  • -Methoxybenzyl (0.79 g; 5 mmol) in 30ml of anhydrous DMF at 80 ° C for 5 h, is mixed with the activated ester of 3- (2'-mercaptoimidazol-4'-yl) propanoic acid prepared previously.
  • the reaction mixture is then treated with diisopropylethylamine (1.0 ml; 5.8 mmol) at room temperature for 16 h.
  • the N, N'-dicyclohexylurea is filtered, and the solvent is evaporated under reduced pressure.
  • the capacity of the molecules of the present invention to trap ferrylmyoglobin is demonstrated by a kinetic measurement of the disappearance of ferrylmyoglobin at 590 nm, at pH 7.3 and at 25 ° C.
  • the pH 7.3 buffer is obtained by titration of 50 mM potassium phosphate, containing 0.1 mM diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA).
  • DTPA diethylenetriaminepentaacetic acid
  • Ferrylmyoglobin is formed by incubating, in the buffer defined above, 50 ⁇ M of metmyoglobin (purified from horse heart) with 200 ⁇ M of hydrogen peroxide (H-2O2) for 4 minutes at 25 ° C.
  • the reaction medium is then supplemented with a molecule according to the present invention (at 25 or 100 ⁇ M in final concentration), and the kinetics of disappearance of ferrylmyoglobin are monitored for 5 minutes, at a length of absorbance wave equal to 590 nm.
  • glucose-6-phosphate dehydrogenase purified from Leuconostoc mesenteroides
  • a 50 mM potassium phosphate buffer pH 7.0 an amount of glucose-6-phosphate dehydrogenase (purified from Leuconostoc mesenteroides) is incubated, for 5 minutes at 37 ° C., at the final concentration of 1, 2 U / ml, in the presence of 4.5 ⁇ M copper sulphate and 360 ⁇ M ascorbate, in the presence or absence of a molecule described in the present invention (at 25 ⁇ M).
  • the glucose-6-phosphate dehydrogenase activity is then assayed at 37 ° C. by measuring the increase in absorbance at 340 nm for 7 minutes.
  • the results obtained are presented in Table 3. They are expressed as a percentage of the glucose-6-phosphate dehydrogenase activity assayed under the same experimental conditions, in the absence of the Cu (II) / ascorbate / ⁇ 2 system and of the molecule tested.
  • EXAMPLE 15 PREVENTION OF DNA DEGRADATION BY THE Fef ⁇ ) -CITRATE / H 2 O 2 / ASCORBATE SYSTEM: Double stranded DNA (purified from phage) in 50 mM potassium phosphate buffer pH 7.3 lambda) at 10 ug / ml was incubated for 1 hour at 37 ° C with 20 .mu.M of the Fe -citrate, 200 microM and 200 microM H2O2 ascorbate in the presence or absence of a molecule described in the present invention (at 100 ⁇ M).
  • Example 16 INHIBITION OF CARDIAC NECROSIS INDUCED BY A DTSCHEMIA-REPERFUSION PERIOD: CASE OF COMPOUND BXT 52021
  • a sodium heparinate solution is injected intraperitoneally (40 units / 100 g) into male Sprague-Dawley rats weighing between 250 and 350 grams. The rats are anesthetized with ether 30 minutes later. The heart is then quickly removed and it is then perfused according to the Langendorff method (see O. LANGENDORFF; Pfl ⁇ gers Arch. Physiol. Kunststoff. Tiere; (1895); 61; page 291), under electrical stimulation of frequency 300 / min.
  • the perfusion solution balanced with 95% oxygen and 5% carbon dioxide, consists of a modified Krebs-Henseleit buffer (pH 7.4), the composition of which is as follows: NaCl 118 M, KC1 4, 7mM, MgSO. 1.2 mM, 1 mM CaCl 2 , 1.2 mM KH 2 PO 4 , 25 mM NaHCOg and 11 mM glucose. The entire assembly is thermostatically controlled at 37 * C.
  • heart rate heart rate
  • systolic and telediastolic ventricular pressures the difference of which expresses the developed pressure
  • minimum and maximum slopes of pressure variations as a function of time the following hemodynamic parameters: heart rate, systolic and telediastolic ventricular pressures (the difference of which expresses the developed pressure), minimum and maximum slopes of pressure variations as a function of time.
  • the heart is subjected to a period of ischemia by stopping the infusion and stopping the electrical stimulation.
  • the reperfusion is then triggered with restarting of the electrical stimulation when the ventricular pressure reaches a maximum value (peak of myocardial contracture due to ischemia).
  • the study of BXT-52021 in this experimental model is carried out by perfusing the heart with the perfusion medium containing 2 ⁇ M of BXT-52021 for 12 minutes prior to the period of ischemia, as well as during reperfusion.
  • the alteration of myocardial tissue is evaluated by determining the concentration in the perfusate of two cytosolic enzymes released in the perfusion medium, creatine phosphokinase (CPK) and lactate dehydrogenase.
  • CPK creatine phosphokinase
  • lactate dehydrogenase lactate dehydrogenase
  • Example 17 INHIBITION OF CARDIAC NECROSIS INDUCED BY A PERIOD OF ISCHEMIA-REPERFUSION: CASE OF COMPOUND BXT 52053
  • the damage to myocardial tissue due to ischemia and / or reperfusion is assessed by determining the total amount of creatine phosphokinase (CPK) released in the perfusate during the reperfusion period.
  • CPK creatine phosphokinase
  • the results are expressed in milliunits of enzymatic activity per milligram of heart and per minute.
  • the protection of the myocardial tissue is then demonstrated by a reduction in the total amount of CPK released in the perfusate during the 30 minutes of reperfusion.
  • Example 18 IMPROVEMENT OF THE RECOVERY OF THE DEVELOPED PRESSURE OF A HEART SUBJECT TO A DTSCHEMIA-REPERFUSION PERIOD:
  • the study of BXT-52051 and BXT-52052 is carried out by perfusing the heart with the perfusion medium containing 10 ⁇ M of BXT-52051 or 2 ⁇ M of BXT- 52052 for 12 minutes before the ischemia period, as well as during reperfusion.
  • the alteration of cardiac function is evaluated from the measurement of hemodynamic parameters (ventricular systolic and telediastolic pressure) by determining over time the percentage of recovery of the developed pressure (difference between systolic and telediastolic pressure) during reperfusion. , compared to that recorded just before the ischemia period (stabilized developed pressure). The results are shown in Figure 4.

Abstract

L'invention concerne des derivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5). Ces dérivés 2-mercapto-imidazole sont de la formule générale (I), dans laquelle R1, R2, R5, R6, R7, R8 représentent l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué; sachant qu'au moins un parmi R1 et R2 représente l'hydrogène; R3 représente -(CH2)nCOR4; -(CH2)nN+(R5R6R7),X-; -CH2CH(COR4)N+-(R5R6R7),X-; R4 représente -OR8; -NHR5; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2SO3-,Y+; -NHCH¿2?CH2CO2?-,Y+¿; -OCH¿2?CH2N?+(CH¿3)3,X?-; (a), -¿, (b), (c), n = 1 ou 2; X- représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou alimentairement acceptable, Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou alimentairement acceptable. Ces composés sont utiles comme agents antioxydants et comme principes actifs d'une composition pharmaceutique, cosmétique ou alimentaire à activité antioxydante.

Description

Utilisation de dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 ( u 5) comme agents antioxydants, leur procédé de préparation et leurs applications en pharmacie, cosmétique ou alimentaire
La présente invention concerne l'utilisation de dérivés 2-mercapto- imidazole substitués en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants ainsi que leur procédé de préparation et des compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou ali¬ mentaires en comportant application.
ETAT DE L'ART ANTERIEUR:
Plusieurs dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 ou 5 par un groupement carbonylé (cétonique, carboxylique ou amide) ont révélé une activité antioxydante (voir R.C. SMITH et coll. ; Biochem. Pharmacol. ; (1987) ; 36 ; 9 ; pages 1457-1460) et anti-inflammatoire (voir S. MAEDA et coll. ; Chem. Pharm. Bull. ; (1984) ; 32 ; pages 2536-2543).
Les propriétés antioxydantes des nouveaux dérivés 2-mercapto- imidazole, qui font l'objet de la présente invention, s'apparentent à celle de la L- (-t-)-ergothionéine, qui en fait partie.
La L-(+)-ergothionéine, molécule naturelle possédant une structure 2-mercapto-imidazole, est biosynthétisee par certains champignons de l'ergot de seigle, tels Claviceps purpurea (voir C. TANRET; C.R. Acad. Sci.; (1909); 149; pages 222-224). La structure chimique de la L-(+)-ergothionéine est rare dans le monde vivant dans la mesure où elle est composée d'un noyau 2-mercapto- imidazole et d'une bétaine (voir G.G. SKELLERN; in "Sulfur-containing Drugs and related organic compounds: Chemistry, Biochemistry and Toxicology" L.A. DAMANI Eds.; Ellis Horwood Lim.; (1989); Vol.l, part B, Chap. 3; pages 49-89). L'homme est auxotrophe pour l'ergothionéine, qui lui est exclusivement apportée par voie alimentaire. Les concentrations physiologiques d'ergothionéine varient entre (0,1-2,0 mmolaires) dans les érythrocytes, le foie, le rein, le fluide séminal et le cristallin sans cataracte. Bien que le rôle biologique de l'ergothionéine reste incertain, ses propriétés antioxydantes sont bien documentées (voir P.E. Hartman; Meth. Enzymol.; (1990); 186; pages 310-318 et D. AKANMU et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1991); 288; pages 10-16). En conditions physiologiques (concentrations et pH), elle ne réagit pas avec le peroxyde d'hydrogène H2O2 ni avec l'anion superoxyde O2 - (voir D. AKANMU et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1991); 288; pages 10-16). Par contre, elle réagit avec les radicaux OH- produits par radiolyse puisée (voir M. ROUGEE et coll.; Photochem. Photobiol.; (1988); 47; pages 485-489) ou via la réaction de Fenton (voir D. AKANMU et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1991); 288; pages 10-16) avec une cinétique proche de la vitesse de diffusion limite ; elle réagit avec l'acide hypochloreux HOC1 empêchant ainsi l'inactivation de l'αl-antitrypsine (voir D. AKANMU et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1991); 288; pages 10-16) ; et inhibe la photoproduction d'oxygène singulet par quenching des états excités de photo- sensibilisateurs tels que le rose Bengal (voir S.S. SPICER et coll.; Proc. Soc. Exp. Biol. Med.; (1951); 77; page 418). De plus l'ergothionéine, comme la plupart des dérivés 2-mercapto-imidazole, forme des complexes très stables avec les métaux divalents tels que Cu++, Hg++, Zn++, Co++ et Ni++ (voir D.P. HANLON; J. Med. Chem.; (1971); 14; page 1084 et N. MOTOHASHI et coll.; Chem. Pharm. Bull.; (1974); 22; pages 654-657). Contrairement à de nombreux alkylmercaptans RSH tels que par exemple le glutathion ou la cystéine, l'ergothionéine ne stimule pas la peroxydation des acides gras poly-insaturés en présence de sels métalliques (Fe++) (voir D. AKANMU et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1991); 288; pages 10-16), ce qui est en accord avec ses propriétés de chélateur inactivant, ainsi qu'avec sa structure thione majoritaire. Un autre des avantages que présente l'utilisation d'antioxydants de structure 2-mercapto-imidazole est leur très grande stabilité en solution aqueuse aérée. En effet, l'équilibre tautomérique des dérivés 2-mercapto-imidazole étant totalement déplacé vers la forme thione en solution (voir E. BOJARSKA-OLEJNIK et coll.; Mag. Res. Chem.; (1985); 23; pages 166- 169), l'atome de soufre du noyau 2-mercapto-imidazole ne réagit pratiquement pas avec l'oxygène dissous. Encore un autre des avantages que présente l'utilisation d'antioxydants de structure 2-mercapto-imidazole est que leurs disulfures ne sont pas stables en présence d'autre mercaptan tel que par exemple la cystéine, la cystéamine, le glutathion ou l'acide lipoique. A des concentrations micromolaires, l'ergothionéine ainsi que certains dérivés 2-mercapto-imidazole, inhibent, de manière efficace, la formation de methémoglobine à partir d'oxyhémoglobine incubée en présence de nitrite de sodium in vitro (voir R.C. SMITH et coll.; Biochem. Pharmacol.; (1987); 36; 9; pages 1457-1460 et R.A. MORTENSEN; Arch. Biochem. Biophys.; (1953); 46; pages 241-243). Elle réduit les formes ferryl des protéines héminiques qui sont produites en présence de peroxyde d'hydrogène H2O2 à pH physiologique (voir A. ARDUINI et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1990); 281; pages 41-43). La réduction rapide de ferrylmyoglobine (Mb^) pourrait être un mécanisme essentiel de protection du tissu musculaire, en général, et du tissu cardiaque, en particulier, par l'ergothionéine, lors d'un stress oxydant et en particulier lors d'une reperfusion post-ischémique. Il a été montré sur un modèle de reperfusion post-ischémique de coeur de rat isolé, qu'après 15 min. d'ischémie, l'ergothionéine (100 μmolaires) limitait l'importance de la nécrose cellulaire évaluée par la mesure de l'activité lactate-deshydrogénase de l'effluent (voir A. ARDUINI et coll.; Arch. Biochem. Biophys.; (1990); 281; pages 41-43).
Sur le plan chimique, l'accès aux dérivés 2-mercapto-imidazole a été réalisé selon deux voies principales, à savoir:
* génération du noyau 2-mercapto-imidazole soit par réaction d'un dérivé α-amino-cétonique avec le thiocyanate de potassium (voir S. MAEDA et coll.; Chem. Pharm. Bull.; (1984); 32; pages 2536-2543 et Y. ISOMURA et coll.; Chem. Pharm. Bull.; (1984); 32; pages 152-165 ainsi que J. FERNANDEZ- BOLANOS et coll.; Anales de Quimica; (1974); 70; pages 94-95)); soit par réaction d'un dérivé α-halogèno-cétonique avec la thiourée ou l'un de ses dérivés ; * introduction du soufre, en position 2, sur un noyau imidazole soit par addition nucléophile d'un dérivé soufré sur un noyau imidazole électrophile (voir S. ITO; J. Org. Chem.; (1985); 50; pages 3636-3638), soit par addition électrophile de soufre sur un noyau imidazole nucléophile (voir B.L. BENAC et coll.; Org. Synthesis; coll.vol. VII; pages 195-196).
DESCRIPTION DE L'INVENTION :
La présente invention a pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture de nouveaux composés ayant une bonne activité antioxydante et de préférence également cytoprotectrice, permettant ainsi de constituer un principe actif précieux dans le cadre de compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires. L'invention a également pour but de résoudre le nouveau problème technique énoncé ci-dessus selon une solution fournissant également un procédé de préparation de ces composés aisé à mettre en oeuvre, avec de bons rendements.
Le problème technique énoncé ci-dessus est résolu pour la première fois, d'une manière simultanée par la présente invention selon une solution simple, avec un procédé de préparation relativement aisé à mettre en oeuvre et fournissant de bons rendements, ainsi qu'un produit d'une extrême pureté, en particulier optique.
En effet, l'invention propose une nouvelle méthode d'introduction du soufre, en position 2, sur un noyau imidazole dont le mécanisme s'apparenterait à un mécanisme du type Addition Nucléophile-Ouverture-Refermeture du Cycle (ANORC). Les conditions opératoires de cette nouvelle méthode sont suffisamment douces pour permettre de maintenir l'intégrité d'un centre chiral, en particulier celui du carbone d'un amino-acide. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne l'utili¬ sation de dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) de formule chimique générale (I) suivante :
Figure imgf000006_0001
dans laquelle :
Ri représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un groupement aralkyle ou aralkyle substitué ;
R2 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; sachant qu'au moins un parmi R^ et R2 représente l'hydrogène;
R3 représente -(CH2)nCOR ; -(CH2)nN+(R5R6R7), X~ ; -CH2CH(COR4)N+- (R5R6R7 X" ; R4 représente -ORg ; -NHR5 ; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2Sθ3-,Y+; -NHCH2CH2CO2-,Y+;
-0CH2CH2N+(CH3)3, X-;
Figure imgf000007_0001
R5 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R5 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
n= 1 ou 2
X- représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable,
Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable, à l'exclusion de la L-ergothionéine, comme agents antioxydants.
Dans le cadre de la description et des revendications : - par groupement alkyle, ou alkyle inférieur, alkoxy, ou alkoxy infé¬ rieur, acyle ou amino acyle, carboxyle, on entend de préférence des groupements linéaires ou ramifiés comprenant 1 à 6 atomes de carbone ;
- le terme substitué, affectant les groupements aryles ou aralkyles, signifie que ceux-ci sont substitués sur la partie aromatique par un ou plusieurs groupements identiques ou différents choisis parmi alkyle inférieur, alkoxy inférieur, hydroxy, amino, carboxyle ou par un ou plusieurs atomes d'hydrogène ;
- lorsque Rg représente un atome d'hydrogène, l'invention couvre également les sels d'addition à une base pharmaceutiquement, cosmétiquement ou alimentairement acceptable des composés de formule (I) précités ;
- lorsque R5, R ou R7 représente un atome d'hydrogène, l'invention couvre également les sels d'addition à un acide pharmaceutiquement, cosmétiquement ou alimentairement acceptable des composés de formule (I) précités. Parmi les acides pharmaceutiquement, cosmétiquement ou alimentai¬ rement acceptables, on peut citer, à titre non limitatif, les acides chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique, tartrique, méthanesulfonique, trifluorométhanesulfonique, etc..
Parmi les bases pharmaceutiquement, cosmétiquement et alimentaire- ment aceptables, que l'on peut le cas échéant ajouter aux composés pour lesquels Rg est un atome d'hydrogène pour obtenir un sel, on peut citer, à titre non limitatif, les hydroxydes de sodium, de potassium, les carbonates de métaux alcalins ou aicalino-terreux ou des bases organiques comme la triéthylamine ou l'arginine, etc. Selon un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne l'utilisation des composés précités de formule (I) pour la fabrication d'une composition pharmaceutique à activité antioxydante, en particulier pour le trai¬ tement d'une pathologie impliquant un stress oxydant associé à une surproduction de radicaux libres oxydants et/ou à une décompartimentation intracellulaire du pool de certains métaux de transition tels que le fer, le cuivre ou le manganèse.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne l'utilisation des composés précités de formule (I) pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour la prévention des altérations tissulaires induites par une ischémie ou une reperfusion post-ischémique, et en particulier la prévention d'infarctus du myocarde, et la prévention des arythmies cardiaques postischémiques source de fibrillation ventriculaire ; pour la prévention des altérations tissulaires telles qu'oedème, nécroses et fïbroses associées à une surproduction de radicaux libres, comprenant notamment le traitement d'intoxications par les xénobiotiques tels que par exemple le paraquat, le diquat, les anthracyclines ou les nitrofurannes ; ou les pathologies associées à un stress oxydant au niveau érythrocytaire, en particulier l'anémie falcifoπne, la thalassémie, les maladies de déficience en glucose-6-phosphate déshydrogénase et la malaria ; ou pour la protection contre l'irradiation par des rayons ionisants X ou gamma, ainsi que les rayons UV ; ou la protection dans des milieux de conservation de greffons, comme par exemple le -coeur, le foie, le rein ou le poumon, en transplantation d'organes.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne l'utilisation des composés de formule (I) précitée pour la fabrication de compositions cosmétiques à activité antioxydante, en particulier pour la protection contre les rayons UV.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne l'utilisation des composés de formule (I) précitée pour la fabrication de compositions alimentaires à activité antioxydante. Selon un autre mode de réalisation avantageux, le 2-mercapto- imidazole de formule (I) précitée est présent en une quantité comprise entre 0,1 et 5 % en poids par rapport au poids total de la composition finale, de préférence entre 0,1 et 1 % en poids.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne l'utilisation de la composition sous forme de dose unitaire pouvant comprendre de 1 à 500 mg, de dérivé 2-mercapto-imidazole, éventuellement dans un excipient, véhicule ou support pharmaceutiquement acceptable.
Selon un deuxième aspect, la présente invention fournit également une composition pharmaceutique, cosmétique ou alimentaire, en particulier à activité antioxydante, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre d'ingrédient actif, au moins un composé 2-mercapto-imidazole de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000010_0001
dans laquelle :
R représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un groupement aralkyle ou aralkyle substitué ;
R2 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; sachant qu'au moins un parmi et R2 représente l'hydrogène ;
R3 représente -(CH2)nCOR4 ; -(CH2)nN+(R5R6R7), X" ; -CH2CH(COR4)N+- (R5R6R7), X- ;
R4 représente -ORg ; -NHR5 ; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2Sθ3-,Y+; -NHCH2CH2CO2-,Y+;
-0CH2CH2N+(CH3)3, X-;
Figure imgf000010_0002
R5 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; R représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
n= 1 ou 2
X~ représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali— mentairement acceptable,
Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable, à l'exclusion de la L-ergothionéine, éventuellement dans un excipient, support ou véhicule pharmaceutiquement, cosmétiquement ou alimentairement acceptable.
D'autres modes de réalisation particuliers de cette composition appa¬ raissent clairement à partir de la description précédente et apparaitront aussi claire¬ ment à un homme de l'art à partir de la description suivante, incluant les exemples. Selon un troisième aspect, la présente invention couvre également un procédé de fabrication de 2-mercapto-imidazole de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000011_0001
dans laquelle :
Rj représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un groupement aralkyle ou aralkyle substitué ;
R2 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; sachant qu'au moins un parmi Rj^ et R2 représente l'hydrogène ;
R3 représente -(CH2)nCOR4 ; -(CH2)πN+(R5R6R7), X~ ; -CH CH(COR4)N+- (R5R6R7), X- ;
R4 représente -ORg ; -NHR5 ; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2Sθ3-,Y+; -NHCH2CH2Cθ2--Y+;
-0CH2CH2N+(CH3)3, X-; '
Figure imgf000012_0001
R5 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
n= 1 ou 2
X- représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable,
Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes essentielles suivantes : a) préparer ou utiliser un dérivé imidazole substitué en position 4 (ou 5) éventuellement protégé; si nécessaire optiquement actif ;
b) traiter ce dérivé imidazole par un halogénothionoformiate d'alkyle, d'alkènyle ou d'aryle, en milieu basique dans un solvant polaire ;
c) puis, selon les cas : i - pour la préparation de composés de formule (I) précédente, dans lesquels R^ présente les définitions précitées à la condition que R^, R^ et R ne sont pas tous simultanément autres que l'hydrogène, hydrolyser en milieu basique, ou en milieu acide en présence d'un piégeur de carbocation ;
ii - pour la préparation des composés de formule (I) précitée dans lesquels R^, R^ et R^ sont simultanément autres que l'hydrogène, protéger le substituant soufré, puis transformer le composé protégé en un composé trialkylammonium et hydrolyser en milieu basique, ou en milieu acide en présence d'un piégeur de carbocation, de préférence en milieu acide en présence d'un piégeur de carbocation si l'on veut préserver l'activité optique d'un centre chiral préexistant.
Selon un mode de réalisation avantageux de ce procédé, celui-ci est caractérisé en ce que le piégeur de carbocation précité est un mercaptan, de préfé¬ rence un alkyle ou un aryle mercaptan, et encore mieux l'acide β-mercapto- propionique.
Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, la base précitée est de préférence le bicarbonate de sodium, une aminé ou une alkylamine telle que par exemple la diéthylamine ou la triéthylamine.
Selon un autre mode de réalisation particulier, le solvant polaire précité peut être choisi parmi un solvant éthéré comme par exemple l'éther éthylique ou le tétrahydrofuranne, ou un alcool comme par exemple le méthanol.
Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, l'hydrolyse basique précitée est réalisée avec une base inorganique, telle que par exemple la soude ou la lithine, ou organique telle qu'une aminé, une alkylamine, en particulier la diéthyle ou la triéthylamine, en particulier en solution dans un solvant polaire, de préférence comprenant un mélange eau/alcool, en particulier le méthanol. Selon un autre mode de réalisation avantageux, l'hydrolyse acide précitée est réalisée à l'aide d'une solution d'acide fort concentré, à pH inférieur à 2, en présence d'un piégeur de carbocation, en particulier un mercaptan, de préférence en large excès.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, la protection des substituants soufrés précités est effectuée au moyen d'un halogénoformiate, de préférence un halogénoformiate d'alkyle ou de phényle, par exemple le chloro- formiate d'éthyle ou de phényle ; la transformation en composé trialkylammonium est réalisée au moyen d'un agent alkylant comme par exemple un halogénure ou sulfate d'alkyle, en particulier l'iodure de méthyle ou le sulfate de diméthyle.
Selon une autre caractéristique particulièrement avantageuse, dans le cadre de la préparation d'un dérivé final optiquement actif, on utilise un composé de départ optiquement actif qui est hydrolyse au moyen d'une solution acide con¬ centrée à pH inférieur à 2 et en présence d'un piégeur de carbocation, de préférence un mercaptan, en large excès.
Selon un quatrième aspect, la présente invention fournit de nouveaux dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) de la formule (I) générale suivante :
R
Figure imgf000014_0001
dans laquelle :
R]_, R2 et R3 sont tels que définis à la revendication 1 et n=2, étant entendu que :
a) lorsque R4 = -ORg alors Rj^ et R2 ne peuvent représenter simultanément l'hydrogène,
b) lorsque Rj et R2 représentent simultanément l'hydrogène et lorsque R4 = -ORg alors R5, R et R7 ne peuvent représenter simultanément l'hydrogène ; c) lorsque R3 = -CH2CH(COR4)N+(R5R6R7), X" et R4 = OH; OMe alors R5, Rg, et R7 ne peuvent représenter simultanément un groupement méthyle.
d) lorsque R3 = -(CH2)2N+(R5R R7), X~; alors R5, Rg et R7 ne peuvent représenter simultanément l'hydrogène.
Comme il a été dit précédemment, les composés 2-mercapto- imidazole substitués en position 4 (ou 5) de la formule (I) précitée constituent de précieux agents antioxydants. Dans ce cadre, ils constituent de précieux agents actifs lors d'une application thérapeutique.
D'une manière générale, les applications thérapeutiques des composés de structure générale I incluent toutes les pathologies impliquant un stress oxydant associées à une surproduction de radicaux libres oxydants et/ou à une décompartimentation intracellulaire du pool de certains métaux de transition tels que le fer, le cuivre ou le manganèse par exemple.
Plus spécifiquement, elles incluent:
* la prévention des altérations tissulaires induites par une ischémie et/ou une reperfusion post-ischémique, et en particulier la prévention d'infarctus du myocarde, et celle des arythmies cardiaques post-ischémiques source de fibrillation ventriculaire ;
* la prévention des altérations tissulaires telles qu'oedème, nécroses et fibroses associées à une surproduction de radicaux libres : cette application inclue notamment le traitement d'intoxications par des xénobiotiques tels que par exemple le paraquat, le diquat, les anthracyclines ou les nitrofuranes ;
* les pathologies associées à un stress oxydant au niveau érythrocytaire, en particulier l'anémie falciforme, la thalassémie, les maladies de déficience en glucose-6-ρhosphate deshydrogénase et la malaria ;
* la protection contre l'irradiation par des rayons ionisants X ou gamma, ainsi que par des rayons UV ;
* la protection, dans des milieux de conservation, de greffons, comme par exemple le coeur, le foie, le rein ou le poumon, en transplantation d'organes.
Dans cette application thérapeutique, les dérivés de formule (I) précitée de l'invention seront avantageusement présentés sous forme de dose unitaire pouvant comprendre de 1 à 500 mg de dérivés 2-mercapto-imidazole, éventuelle¬ ment dans un excipient, véhicule ou support pharmaceutiquement acceptable.
De tels excipients, véhicules ou supports pharmaceutiquement accep¬ tables sont bien connus de l'homme de l'art et ne sont donc pas détaillés ici. Les activités antioxydante et thérapeutique ou pharmacologique des dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) de la formule (I) précitée ont été mises en évidence selon des tests sûrs et fiables bien reconnus par l'homme de l'art et qui comprennent :
a) le test de réduction de la ferry lmyoglobine ;
b) le test de prévention de l'inactivation de la glutathion peroxydase par l'acide hypochloreux ;
c) le test de prévention de l'inactivation de la glucose-6-phosphate Deshydrogénase par le système Cu(II)/ascorbate/θ2 ;
d) le test de prévention de la dégradation de l'ADN par le système Fe(II)- citrate/H2θ2/ascorbate ;
e) le test d'inhibition de la nécrose cardiaque induite par une période d'ischémie- reperfusion;
f) le test de protection de la fonction mécanique (ventriculaire) d'un coeur soumis à une période d'ischémie.
Compte tenu de ces activités antioxydante et thérapeutique/ pharmacologique, les dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) de la formule (I) générale précitée permettent de réaliser les applications thérapeutiques précédemment énoncées et plus particulièrement : * la prévention des altérations tissulaires induites par une ischémie et/ou une reperfusion post-ischémique, et en particulier la prévention d'infarctus du myocarde et celles des arythmies cardiaques post-ischémiques qui sont source de fibrillation ventriculaire ; 5
* la prévention des altérations tissulaires telles qu'oedème, nécroses et fibroses associées à une surproduction de radicaux libres: cette application inclue notamment le traitement d'intoxications par des xénobiotiques tels que par exemple le paraquat, le diquat, les anthracyclines ou les nitro-furannes ; * les pathologies associées à un stress oxydant au niveau érythrocytaire, en particulier l'anémie falciforme, la thalassémie, les maladies de déficience en glucose-6-phosphate deshydrogénase et la malaria ;
* la protection contre l'irradiation par des rayons ionisants X ou gamma, ainsi que par des rayons UV ; * la protection, dans des milieux de conservation, de greffons, comme par exemple le coeur, le foie, le rein ou le poumon, en transplantation d'organes.
D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à divers exemples non limitatifs donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids sauf indication contraire.
Dans les figures annexées,
- la figure 1 représente les courbes de réduction de la ferrylmyoglobine avec en abscisse le temps exprimé en minute et en ordonnée l'absorbance à
- la figure 2 représente l'effet du composé de l'invention référence BXT-52021 sur la libération de la lactate deshydrogénase (LDH) et la créatine phosphokinase (CPK) dans un coeur de rat isolé et perfusé, soumis à une ischémie-reperfusion, avec en abscisse les périodes respectivement pour le contrôle et le composé de l'invention BXT-52021 pour la LDH en noir et la CPK en blanc, avec en ordonnée l'activité enzymatique obtenue en unité/liltre. Pour le contrôle, les chiffres I, II et III signifient respectivement :
- I = fin de stabilisation ;
- II = 5 min après reperfusion ; - III = 15 min après reperfusion.
Pour le composé BXT-52021, les périodes LA ; IIA ; IIIA ; IVA signifient respectivement :
- IA : fin de stabilisation ;
- IIA = 12 min après la perfusion par le composé BXT-52021 (2 μM) ; - IIIA = 5 min après reperfusion post-ischémique avec BXT-52021 (2 μM) ;
- IVA : 15 min après reperfusion post-ischémique avec BXT-52021 (2 M).
- la figure 3 représente l'effet du composé de l'invention référence BXT 52053 sur la libération de la créatine phosphokinase (CPK) dans un coeur de rat, isolé et perfusé, soumis à une ischemie-reperfusion, avec en ordonnée la quantité totale de CPK libérée (exprimée en milli-unités d'activité enzymatique par milligramme de coeur et par minute). L'effet du composé BXT 52053 est en outre comparé à celui de l'albumine (BSA) et de la L-(+)-ergothionéine.
- la figure 4 représente les effets des composés de l'invention références BXT 52051 et BXT 52052 sur le pourcentage de récupération de la pression développée lors de la reperfusion d'un coeur de rat isolé soumis à une période d'ischémie, avec en abscisse le temps de reperfusion exprimé en minute et en ordonnée le pourcentage de récupération de la pression développée.
PARTIE EXPERIMENTALE :
Toutes les réactions ont été effectuées sous atmosphère inerte d'azote, sauf exception notifiée.
Les spectres de masse ont été enregistrés sur un appareil Nermag R10- 10B. Le mode d'ionisation utilisé est soit l'impact électronique (El) à 70 électrons- volts, soit l'ionisation chimique (IC) dans l'ammoniac, soit le bombardement par atomes rapides (FAB) sur une matrice glycérol.
Les spectres ^H et ^C RMN ont été enregistrés sur un appareil Varian
Gemini-200. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au tétraméthylsilane. Les multiplicités sont exprimées comme suit: "s" pour singulet,
"si" pour singulet large, "d" pour doublet, "t" pour triplet, "q" pour quadruplet et
"m" pour multiplet.
Les points de fusion (pPC) ont été enregistrés sur un appareil Gallenkamp et sont donnés non corrigés. Le pouvoir rotatoire (αr>) a été mesuré sur un appareil Perkin Elmer
241 à 25*C sur la raie D du sodium.
Les purifications par chromatographie liquide sur colonne ont été effectuées, selon les cas, avec de la silice Merck^ Si60 F254 ou avec de la cellulose microcristalline Merck^. V Exemples de synthèse de composés répondant à la formule générale I:
Exemple 1: Préparation du 3-(2'-mercapto-imidazol-4'-yl)-propanoate d'έthyle: BXT 52021 A/ Préparation de l'ester éthylique de l'acide urocanique:
L'acide urocanique (Aldrich; 5,52g; 40 -mmoles) est suspendu dans 100ml d'éthanol absolu. Le monohydrate de l'acide paratoluènesulfonique (Janssen; 8,36g; 44mmoles) est additionné. Le mélange est chauffé au reflux pendant 12 h. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu est repris par 50 ml d'une solution aqueuse saturée de NaHQ>3 et 75ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est séparée, lavée par le même volume d'une solution aqueuse saturée de NaCl (2X50ml). Après séchage de la phase organique sur MgSθ4 et filtration, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu ainsi obtenu sous forme d'un solide blanc, est pur (85%).
Caractéristiques physiques :
* point de Fusion : 79*C
* RMN !H ( 200MHz, CDC13) :
1,30 ppm (t; 3H; J=7,16Hz); 4,22 ppm (q; 2H; J=7,16Hz); 6,41 ppm (d; IH; J=15,80Hz); 7,31 ppm (s, IH); 7,60 ppm (d, IH; J=15,80Hz); 7,72 ppm (s; IH); 10,16 ppm (si; IH).
B/ Préparation du 3-(imidazol-4'-vP-propanoate d'éthyle: Le composé précédent (1,40g; 8,4mmoles) dissous dans 25ml d'éthanol absolu est hydrogéné sous pression (2b) en présence de palladium 10% sur charbon (Aldrich; lOOmg) pendant 2h à température ambiante. La suspension est ensuite filtrée sur frite; le solvant est évaporé sous pression réduite. Le composé ainsi obtenu, sous forme d'huile, est utilisé tel quel pour l'étape suivante (rendement: 99%).
Caractéristiques physiques :
* RMN !H ( 200MHz, CDCI3) :
1,21 ppm (t; 2H; J=7,16Hz); 2,64 ppm (t; 2H; J=7,32Hz); 2,92 ppm (t; 2H; J=7,32Hz); 4,10 ppm (q; 2H; J=7,16Hz); 6,78 ppm ( d; IH; J=l,06Hz); 7,53 ppm (d; IH; J=l,06Hz); 10,49 ppm (si; IH). * RMN 13C ( 50MHz, CDCI3) :
14,35 ppm (q); 22,27 ppm (t); 34,37 ppm (t); 60,88 ppm (t); 117,99 ppm (d); 135,27 ppm ( d); 136,06 ppm (s); 174,10 ppm (s).
C/ Préparation du 3-(2'-mercapto-imidazol-4'-vD-propanoate d'éthyle: BXT 52021
Le 3-(imidazol-4'-yl)-propanoate d'éthyle (1,30g; 7,7mmoles) est mélangé avec du bicarbonate de sodium (3,90g; 46,4mmoles) dans 20ml d'eau déionisée et 20ml d'éther éthylique à température ambiante. Sous une agitation vigoureuse, le chlorothionoformiate de phényle (Lancaster; 2,70ml; 19,5mmoles) est additionné. Le mélange réactionnel est agité pendant 5h à température ambiante. La phase organique est décantée, puis lavée avec une solution saturée de NaCl (2X20ml) et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu est repris dans 20ml de méthanol et la solution ainsi obtenue est traitée par de la triéthylamine (Janssen; 3,35ml; 24,0mmoles) pendant 16h à température ambiante. Après évaporation du solvant, le produit désiré est obtenu après purification par chromatographie sur colonne de silice (éluant: AcOEt/Cyclohexane 3/2). (rendement: 75%)
Caractéristiques physiques : * point de Fusion : 152-154#C (CH3CO2E
* RMN iH ( 200MHz, DMSO-dg) :
1,15 ppm (t, 3H, J = 7,26Hz) ; 2,58 ppm (m, 4H) ; 4,04 ppm (q, 2H, J = 7,26Hz) ; 6,53 ppm (s, IH) ; 11,67 ppm (s, IH) ; 11,88 ppm (s, IH).
* RMN 13C ( 50MHz, DMSO-dg) : 14,05 ppm (q) ; 19,92 ppm (t) ; 32,16 ppm (t) ; 60,28 ppm (t); 111,70 ppm (d) ; 128,21 ppm (s) ; 160,67 ppm (s) ; 172,18 ppm (s).
Exemple 2: Préparation de l'acide 3-(2'-mercapto-imidazol-4'-yl)- propanoiαue: BXT 52020 Le 3-(2'-mercapto-imidazol-4'-yl)-propanoate d'éthyle (200mg; Immole), dissous dans 10ml d'un mélange THF/eau (1/1), est saponifié par de la lithine (Aldrich; 84mg; 2mmoles) à température ambiante pendant 16h. Après neutralisation du milieu réactionnel et évaporation à sec, le produit désiré est obtenu après recristallisation dans l'éthanol absolu, (rendement: 93%). Caractéristiques physiques:
* point de Fusion : 204,5-206,5*C (H2O)
* RMN *H (200MHz, CD3OD) :
2,57 ppm (m, 2H) ; 2,73 ppm (m, 2H) ; 6,56 ppm (s, IH). * RMN 13C ( 50MHz, CD3OD) :
21,23 ppm (t) ; 33,67 ppm (t) ; 113,51 ppm (d) ; 131,14 ppm (s) ; 160,31 ppm (s) ; 176,24 ppm (t).
Exemple 3 : Préparation du 3-(2'-mercapto-imidazol-4'-yl)-propanamide : BXT 52029
Le 3-(2'-mercaρto-imidazol-4'-yl)-propanoate d'éthyle (320 mg,
145 mmoles) est traité avec 10 ml d'une solution aqueuse d'ammoniaque (20 %) pendant 20 h. à température ambiante. Le solvant est évaporé sous pression réduite.
Le produit désiré est obtenu après purification par chromatographie liquide sur colonne de silice (éluant: acétate d'éthyle/éthanol 3/1) (161 mg, 58 %).
Caractéristiques physiques :
* point de Fusion : 213-215#C ( CH3CH2OH)
* RMN XH ( 200MHz, DMSO-dg) : 2,29 ppm (t, 2H, J = 8,26Hz) ; 2,50 ppm (t, 2H, J = 8,26Hz ); 6,83 ppm (s, IH) ; 7,31 ppm (s, IH) ; 11,63 ppm (s, IH) ; 11,81 ppm (s, IH).
Exemple 4 : Préparation de la 2-(2'-mercapto-imidazol-4'-yl)-éthylamine : BXT 52022 A/Préparation de la 2-(2'-mercapto-irnidazol-4'-vD-Nα-carboxyéthyléthyl- amine :
La 2-(imidazol-4'-yl)-Nα-carboxyéthyléthylamine, obtenue selon la procédure usuelle, est traitée de la même façon que dans l'étape C de l'exemple 1. Le produit ainsi obtenu est utilisé tel quel pour l'étape suivante.
B/Préparation de la 2-f2'-mercapto-imidazol-4'-vn-éthylamine : BXT 52022 Le composé obtenu précédemment est hydrolyse par chauffage, au reflux, dans une solution d'acide chlorhydrique concentrée pendant 12h. Le produit désiré est obtenu après recristallisation dans du méthanol. Caractéristiques physiques :
* point de Fusion : 249-251 C ( H2O)
* RMN XH ( 200MHz, D2O)
2,85 ppm (t, 2H, J = 6,96Hz) ; 3,17 ppm (t, 2H, J = 6,96Hz) ; 6,77 ppm (s, IH). * SM ( El, 70e V) : 143 (M+, 23%) ; 114 (24%) ; 36 (100%).
Exemple 5 : Préparation de la 2-(2'-mercapto-imidazol-4'-yl)-N.N- diméthyléthylamine : BXT 52026
Préparation de la 2-fimidazol-4'-vO-N.N-diméthyléthylamine: A une solution de dichlorhydrate d'histamine (Aldrich, 9,1 g ;
50 mmoles) dans 150 ml d'eau déionisée est ajoutée une solution aqueuse de formaldéhyde (37 % ; 111 ml) et du palladium à 10 % sur charbon (0,29 g). Le mélange est agité vigoureusement sous pression d'hydrogène (5 bars) pendant 6 h. Le catalyseur est filtré puis rincé à l'eau déionisée. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit désiré est obtenu sous forme d'une huile (12,7 g) qui est utilisée tel quelle pour la prochaine étape.
Caractéristiques physiques :
* RMN XH ( 200MHz, D2O) 3,18 ppm (t, 2H, J = 7,50Hz) ; 3,44 ppm (t, 2H, J = 7,50Hz) ; 7,33 ppm (s, IH) ; 8,60 ppm (s, IH).
Préparation de la 2-C2'-mercapto-imidazol-4'-yl)- N.N-diméthyléthylamine : BXT 52026 Le produit précèdent, traité selon la même procédure que celle décrite pour l'étape C de l'exemple 1, conduit au composé désiré (34%).
Caractéristiques physiques :
* RMN !H ( 200MHz, D2O) 2,28 ppm (s, 6H) ; 2,68 ppm (m, 4H) ; 6,64 ppm (s, IH). Exemple 6 : Préparation de la 2'-mercapto-Nα.Nα-diméthyl-L-(+)- histidine : BXT 52040
L'ester méthylique de la 2'-mercapto-Nα,Nα-diméthyl-L-(+)- histidine est préparé selon la méthode de préparation suivante:
A - Préparation du dichlorhvdrate de l'ester méthylique de L-f+)-Nα.Nα- diméthylhistidine :
A une solution du dichlorhydrate de l'ester méthylique de la L-(+)- histidine (Janssen; 18,16 g ; 75 mmoles) dans 150 ml d'eau déionisée est ajoutée une solution aqueuse de formaldéhyde 37 % (Janssen ; 12,29 g ; 150 mmoles). -Le mélange est hydrogéné sous pression (7b) en présence de Palladium sur charbon 10 % (Aldrich; 1,0 g) pendant 5 h à température ambiante. Le catalyseur est filtré puis rincé à l'eau ; le filtrat est évaporé à sec sous vide pour donner le produit attendu sous forme d'une huile (20,3 g) qui est utilisée directement dans l'étape suivante.
Caractéristiques physiques :
* RMN *H (200MHz, D2O) : 2,91 ppm (s ; 6H) ; 3,50 ppm (m ; 2H) ; 3,72 ppm (s ; 3H) ; 4,48 ppm (dd ; J=5,54- 9,04Hz ; IH) ; 7,38 ppm (s ; IH) ; 8,61 ppm (s ; IH).
B - Préparation de l'ester méthylique de la L-f+)-2'-mercapto-Nα.Nα- diméthylhistidine :
Le dichlorhydrate de l'ester méthylique de la L-(+)-Nα»N - diméthylhistidine (60,0 g ; 222 mmoles) est dissous dans 750 ml d'eau déionisée. Du bicarbonate de sodium solide ( Labosi ; 130,5 g ; 1,55 moles) est ajouté lentement, suivi de 750 ml de THF. Sous agitation vigoureuse et à une température comprise entre 5-10'C, le chlorothionoformiate de phényle (Lancaster ; 76ml ; 555 mmoles) est additionné pendant 30 min. Le mélange réactionnel est agité, à température ambiante, pendant 260 h. La phase aqueuse est décantée puis extraite avec du chlorure de méthylène (3X150 ml). Les phases organiques sont rassemblées puis évaporées à sec sous vide, à température ambiante. Le résidu est, ensuite, purifié par chromatographie sur colonne de silice en utilisant un gradient d'élution (AcOEt-AcOEt/MeOH=100 96-95/5) pour donner 24,0 g d'un produit pur. Ce produit (5,0 g) est suspendu dans 150 ml de chlorure de méthylène puis filtré. Le résidu obtenu après évaporation du solvant du filtrat conduit à 4,42 g d'un produit énantiomériquement pur (Rendement = 42 %).
-La pureté énantiomérique est déterminée par ^H RMN dans CDCI3 avec 3 mg d'échantillon et 10 mg de Eu(tfc)3-
Caractéristiques physiques :
* pF : 170-171'C
* RMN XH (200MHz, CDCI3) : 2,39 ppm (s ; 6H) ; 2,78 ppm (d ; J=7,3Hz ; 2H) ; 3,38 ppm (t ; J=7,30Hz ; IH) ; 3,72 ppm (s ; 3H) ; 6,44 ppm (s ; IH) ; 10,08 ppm (si ; IH) ; 10,24 (si ; IH).
* RMN 13C (50MHz, DMSO) : 24,52 ppm (t) ; 41,03 ppm (q) ; 51,03 ppm (d) ; 65,04 ppm (q) ; 112,74 ppm (d) ; 126,13 ppm (s) ; 160,35 ppm (s) ; 171,17 ppm (s). * SM (El, 70Ev) :
229 (M+, 25), 170 (8), 116 (100).
* αD (c = 1,0 ; MeOH) = +31,2*
L'ester méthylique de la 2'-mercapto-Nα,Nα-diméthyl-L-(-i-)- histidine ainsi obtenu est alors saponifié à l'aide d'hydroxyde de lithium selon la procédure habituelle, (rendement: 80%)
Caractéristiques physiques :
* point de Fusion : 274*C (dec.) * RMN !H ( 200MHz, D2O) :
2,83 ppm (s; 6H); 3,03 ppm (dd; IH; J=8,14-15,60Hz); 3,17 ppm (dd; IH; J=5,54-15,60Hz); 3,75 ppm (dd; IH; J=5,54-8,14Hz); 6,76 ppm (s, IH).
Exemple 7: Préparation de la N-2-r3'-(2"-mercaptoimidazol-4"-v-)- propanoyl-oxyl-éthyl-N'-méthylpipérazine: BXT 52055
A/ Préparation de la N-(2-hydroxyéthyl)-N'-méthylpipérazine:
La N-méthylpipérazine (10g; lOOmmoles) et le 2-chloroéthanol (8,05g; lOOmmoles) sont agités à 100*C pendant 4h. Le milieu réactionnel, très visqueux, est additionné de 250ml d'acétone et la suspension résultante est neutralisée par 15ml de triéthylamine. Après filtration du chlorhydrate de triéthylamine, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le composé désiré est obtenu après purification par chromatographie sur colonne d'alumine ( Merck R; Aluminium Oxide 90; 63- 200μm; éluant: Acétate d'éthyle) sous la forme d'une huile incolore. Rendement: 75%
Caractéristiques physiques:
* RMN !H (200MHZ, CDC13) : 2,20 ppm (s; 3H); 2,39 ppm (m; 8H); 2,46 ppm (t; 2H; J= 5,5Hz); 3,41 ppm (si; IH); 3,54 ppm (t; 2H; J= 5,5Hz).
B/ Préparation de la N-2-[3'-(2"-mercaptoimidazol-4"-yl)-propanoyloxy]- éthyl-N'-méthyl-pipérazine: BXT 52055 Le dérivé 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoate de méthyle, préparé selon la procédure décrite dans l'exemple 1, ( 0,35g; l,88mmoles) finement broyé est placé dans de la N-(2-hydroxyéthyl)-N'-méthylpipérazine ( 5,0g; 35mmoles) en présence de cyanure de potassium (0,12g; l,88mmoles). Le milieu réactionnel est agité à 100#C pendant 15h. Après distillation de la N-(2-hydroxyéthyl)-N'- methylpiperazine, en excès, sous pression réduite ( p= 0,5mm de Hg; T*= 100*C), le résidu est chromatographie sur colonne d'alumine ( Merck R; Aluminium Oxide 90; 63-200μm; éluant: Acétate d'éthyle/Méthanol 6/1). Le composé désiré est obtenu, après recristallisation dans l'acétate d'éthyle, avec un rendement de 80%.
Caractéristiques physiques:
* pF : 172-174'C (acétate d'éthyle)
* RMN !H (200MHz, CD3COCD3 + D2O) :
2,15 ppm (s; 3H); 2,43 ppm (m; 8H); 2,58 ppm (t; 2H; J= 5,6Hz); 2,69 ppm (m; 4H); 4,16 ppm (t; 2H; J= 5,6Hz); 6,61 ppm (s; IH). * RMN 13C (50MHz, D2O) :
22,29 ppm; 35,20 ppm; 46,88 ppm; 54,38 ppm; 55,83 ppm; 58,01 ppm; 64,66 ppm; 115,65 ppm; 115,88 ppm; 132,57 ppm; 157,81 ppm; 177,66 ppm. * SM (IC; NH3) : 299 (MH+; 100%); 281 (20%); 267 (85%); 250 (34%); 233 (20%); 187 (15%); 172 (18%); 145 (18%); 127 (30%).
Exemple 8: Préparation de l'acide 2-r3'-(2"-mercaptoimidazoI-4"-yl)- propanamidol-éthanesulfonique : BXT 52053
A une solution de l'acide 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoique BXT 52020 (0,69g; 4mmoles), et de N-hydroxysuccinimide (0,46g; 4mmoles) dans 30ml de THF anhydre, à 0-5*C et sous agitation, est additionnée goutte à goutte une solution de N,N-dicyclohexylcarbodiimide (0,84g; 4mmoles) dans 10ml de THF. L'agitation est maintenue pendant 16h à cette température. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le résidu solide est repris dans 30ml d'acétone anhydre. La N,N'-dicyclohexylurée est éliminée par filtration et le filtrat, refroidi à 10*C, est additionné d'une solution de taurine (0,5g; 4mmoles) dans 10ml d'eau déionisée, contenant du bicarbonate de sodium (0,34g; 4mmoles). Le mélange réactionnel est agité pendant lh à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé désiré est obtenu, après purification par chromatographie sur colonne de silice greffée ( Merck R; RP-8; 40-63μm) avec un éluant eau-méthanol 9/1. Il est recristallisé dans un mélange méthanol/éthanol. ( rendement: 60%).
Caractéristiques physiques:
* pF : 210*C (dec.)
* RMN !H (200MHz, D2O) : 2,47 ppm (t; 2H; J= 7,1Hz); 2,74 ppm (t; 2H; J= 7,1Hz); 2,96 ppm (t; 2H; J= 6,8Hz); 3,47 ppm (t; 2H; J= 6,8Hz); 6,62 ppm (s; IH).
* RMN 13C (50MHz, D2O) :
23,09 ppm; 37,02 ppm; 37,67 ppm; 52,35 ppm; 115,91 ppm; 116,03 ppm; 132,47 ppm; 157,66 ppm; 177,59 ppm. * SM (FAB négatif; glycérol) :
278 (M~; 100%); 255 (10%); 183 (64%); 124 (14%). Exemple 9: Préparation du chlorure de 3-f2'-mercaptoimidazol-4'-vD- propanoate de choline: BXT 52054
A/ Préparation du 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoate de 2-(N,N- diméthylamino)-éthyle:
Une solution du 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoate d'éthyle (voir l'exemple 1) (1,40g; 7mmoles) dans 20ml de 2-(N,N-diméthylamino)-éthanol est chauffée en présence de cyanure de potassium (0,75g; 3,9mmoles) à 80#C pendant
4h. Après évaporation du 2-(N,N-diméthylamino)-éthanol sous pression réduite, le produit désiré est obtenu et utilisé tel quel pour l'étape suivante.
B/ Préparation du 3-(l'-tert-butoxycarbonyl-2'-tert-butoxycarbonylthio- imidazol-4'-yl)-propanoate de 2-(N,N-diméthylamino)-éthyle:
A une solution du produit précédent dans 50ml de chlorure de méthylène sont additionnés le pyrocarbonate de di-tert-butyle (3,3g; 15mmoles) et de la triéthylamine (5ml; 36mmoles) ainsi que de la 4-diméthylaminopyridine (lOmg). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 2h. Après addition de 30ml d'eau, la phase organique est décantée, séchée sur sulfate de magnésium et filtrée. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de silice ( éluant: acétone) pour conduire au produit désiré, obtenu sous d'une huile incolore. Rendement global pour ces 2 étapes: 75%
Caractéristiques physiques: * RMN *H (200MHz, CDC13) :
1,46 ppm (s; 9H); 1,57 ppm (s; 9H); 2,25 ppm (s; 6H); 2,53 ppm (t; 2H; J= 5,86Hz); 2,69 ppm (m; 2H); 2,86 ppm (m; 2H); 4,16 ppm (t; 2H; J= 5,86Hz); 7,33 ppm (s, IH).
* RMN 13C (50MHz, CDCI3) : 28,00 ppm; 28,30 ppm; 33,30 ppm; 45,98 ppm; 58,04 ppm; 62,62 ppm; 86,18 ppm; 87,12 ppm; 119,15 ppm; 135,74 ppm; 142,17 ppm; 147,14 ppm; 165,80 ppm; 173,45 ppm.
* SM (IC; NH3) :
444 (MH+; 100%); 344 (18%). C/ Préparation de l'iodure de 3-(l'-tert-butoxycarbonyl-2'-tert-butoxy- carbonylthioimidazol-4'-yl)-propanoate de choline:
Une solution du 3-(l'-tert-butoxycarbonyl-2'-rert-butoxycarbonylthio- imidazol-4'-yl)-propanoate de 2-(N,N-diméthylamino)-éthyle (0,81g; l,8mmoles) dans 20ml de THF est traitée avec de l'iodure de méthyle (0,6ml; 9,6mmoles) à température ambiante pendant 2h. L'excès d'iodure de méthyle ainsi que le solvant sont évaporés sous pression réduite pour conduire au produit désiré qui est suffisamment pur pour être utilisé tel quel pour l'étape suivante. Rendement: 100%
Caractéristiques physiques:
* RMN !H (200MHz, CDCI3) :
1,44 ppm (s; 9H); 1,56 ppm (s; 9H); 2,73 ppm (m; 2H); 2,86 ppm (m; 2H); 3,48 ppm (s; 9H); 4,06 ppm (m; 2H); 4,55 ppm (m; 2H); 7,37 ppm (s; IH). * RMN 13C (50MHz, CDCI3) :
23,23 ppm; 27,98 ppm; 28,38 ppm; 33,41 ppm; 55,11 ppm; 58,27 ppm; 65,45 ppm; 86,63 ppm; 87,64 ppm; 119,50 ppm; 135,62 ppm; 141,48 ppm; 146,98 ppm; 165,71 ppm; 172,41 ppm.
* SM (FAB positif; glycérol) : 458 (M+)
D/ Préparation du chlorure de 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoate de choline:
Le précédent composé (1,07g; l,8mmoles) est mis en solution dans 7,5ml de chlorure de méthylène puis traité avec 7,5ml d'acide trifluoroacétique à température ambiante pendant 2h. Après évaporation du solvant et de l'acide trifluoroacétique, en excès,sous pression réduite, le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de silice ( éluant: Acétate d'éthyle-Méthanol 2/1) pour conduire au produit désiré. Rendement: 77%
Caractéristiques physiques:
* RMN !H (200MHz, D2O) : 2,75 ppm (m; 4H); 3,11 ppm (s; 9H); 3,64 ppm (m; 2H); 4,48 ppm (m; 2H); 6,65 ppm (s; IH).
* RMN 13C (50MHz, D2O) :
22,16 ppm; 35,07 ppm; 56,28 ppm; 61,00 ppm; 67,42 ppm; 115,90 ppm; 132,41 ppm; 157,96 ppm; 176,53 ppm.
* SM (FAB positif; glycérol) : 258 (M+)
Exemple 10: Préparation du 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoate de carnitine: BXT 52052
A une solution de l'acide 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)-propanoique (voir l'exemple 2) (0,86g; 5mmoles) et de N-hydroxysuccinimide (0,60g; 5,2mmoles) dans 80ml de THF est additionné le dicyclohexylcarbodiimide (1,1g; 5,3mmoles). Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 5h. -Le solvant est évaporé sous pression réduite pour conduire au mélange de l'ester activé désiré et de la N,N'-dicyclohexylurée, qui sera utilisé tel quel pour l'étape suivante.
L'ester /-•-méthoxybenzylique de carnitine, préparé à partir de carnitine (0,81g; 5mmoles) et de chlorure de .-méthoxybenzyle (0,79g; 5mmoles) dans 30ml de DMF anhydre à 80*C pendant 5h, est mélangé avec l'ester activé de l'acide 3-(2'-mercaptoimidazol-4'-yl)propanoique préparé précédemment. Le mélange réactionnel est ensuite traité avec de la diisopropyléthylamine (1,0ml; 5,8mmoles) à température ambiante pendant 16h. La N,N'-dicyclohexylurée est filtrée, et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu ainsi obtenu est traité avec 7,5ml de l'acide 3-mercaptopropionique et 7,5ml d'acide trifluoroacétique à température ambiante pendant 2h. L'acide trifluoroacétique est évaporé sous pression réduite. Le résidu est repris avec 30ml d'eau. L'excès d'acide 3- mercaptopropionique est extrait avec de l'éther éthylique (3x20ml). La solution aqueuse est neutralisée à l'aide de bicarbonate de sodium puis lyophilisée. Le composé désiré est obtenu, après purification par chromatographie sur colonne de silice greffée (Merck R; Diol; 40-63,0-31) avec un éluant acétate d'éthyle-méthanol 1/3. Rendement global: 30% Caractéristiques physiques: * pF : 81'C
* RMN XH (200MHz, D2O) :
2.39 ppm (dd; IH; J= 7,44-15,53Hz); 2,53 pm (dd; IH; J= 5,67-15,53Hz); 2,75 ppm (m; 4H); 3,06 ppm (s; 9H); 3,53 ppm (d; IH; J= 14,38Hz); 3,75 ppm (dd; IH;
J= 8,46-14,38Hz); 5,55 ppm (m; IH); 6,66 ppm (s; IH).
* RMN 13C (50MHz, D2O) :
22,19 ppm; 35,54 ppm; 42,74 ppm; 56,30 ppm; 69,82 ppm; 70,81 ppm; 116,20 ppm; 132,53 ppm; 160,65 ppm; 176,22 ppm; 179,33 ppm. * SM (FAB positif; glycérol) :
316 (MH+)
* [α]D : -36,r (c=l,0; H2O).
Exemple 11: Préparation du chlorure de Pester 2-(triméthylammonium)- éthyliαue de la 2'-mercapto-histidine : BXT 52058
A/ Préparation de l'ester méthylique de la N- ,N- - bis-terbutyloxycarbonyl-L- histidine:
A un mélange du dichlorhydrate de l'ester méthylique de la L-histidine (4,84g; 20mmoles) dans un mélange eau-THF (20/40) est ajouté le carbonate de sodium (9,33g; 88mmoles). En agitant vigoureusement le mélange obtenu, est additonné le pyrocarbonate de di-terbutyle (10g; 46mmoles). Après l,5h d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est décanté. La phase aqueuse est extraite avec 50ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques de décantation et d'extraction sont rassemblées, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie liquide sur colonne de silice (éluant: Acétate d'éthyle-cyclohexane 1/1) Rendement: 78%
Caractéristiques physiques:
* RMN !H (200MHz, CDCI3) :
1.40 ppm (s; 9H); 1,57 ppm (s; 9H); 3,02 ppm (d; 2H; J=5,34Hz); 3,70 ppm (s; 3H); 4,54 ppm (m; IH); 5,68 ppm (d; IH; J=8,06Hz); 7,11 ppm (d; IH; J=l,02Hz); 7,96 ppm (d; IH, J=l,02Hz). * RMN 13C (50MHz, CDCI3) :
28,033 ppppmm; 28,47 ppm; 30,39 ppm; 52,54 ppm; 53,39 ppm; 80,04 ppm; 85,94 ppm 1;: 114,98 ppm; 137,40 ppm; 139,09 ppm; 147,35 ppm; 156,00 ppm; 172,89 ppm
B/ Préparation de l'ester méthylique de la 2'-mercapto-Nα-terbutyloxycarbonyl- L-histidine:
Le produit désire est obtenu selon une procédure similaire à celle décrite dans la partie C de l'exemple 1. Rendement: 32%
Caractéristiques physiques: * pF : 73-75#C
* RMN !H (200MHz, CDCI3) : 1,39 ppm (s; 9H); 2,96 ppm (dd; IH; J=7,60-15,40Hz); 3,04 ppm (dd; IH; J=7,60-15,40Hz); 3,74 ppm (s; 3H); 4,57 ppm (m; IH); 5,55 ppm (d; IH; J=6,76Hz); 6,58 ppm (s; IH); 11,46 ppm (s; IH); 11,53 ppm (s; IH).
* RMN 13C (50MHz, CDCI3) :
26,26 ppm; 28,08 ppm; 51,90 ppm 52,78 ppm; 78,67 ppm; 110,58 ppm; 125,12 ppm; 155,73 ppm; 160,56 ppm; 172,50 ppm.
C/ Préparation de l'ester 2-(N,N-diméthylamino)-éthylique de l'acide 3-(l'- terbutyloxycarbonyl-2'-terbutyloxycarbonylthio-imidazol-4'-yl)-2-terbutyl- oxycarbonyl-amino-propanoïque : A une solution du précédent produit (760mg; l,9mmoles) dans 5ml de 2-
(N,N-diméthylamino)-éthanol est additionné du cyanure de potassium (0,25g; l,3mmoles). Le mélange réactionnel est chauffé à 80*C pendant 2h. L'excès de 2- (N,N-diméthylamino)-éthanol est distillé. Le résidu de distillation est repris avec 10ml de chlorure de méthylène. Le pyrocarbonate de di-terbutyle (1,09g; 5mmoles) et la triéthylamine (0,83ml; όmmoles) sont ajoutés à cette solution. Le mélange ainsi obtenu est traité avec de la 4-diméthylaminopyridine (5mg) à température ambiante pendant lh. Le solvant est évaporé sous pression réduite.
Le produit brut est purifié par chromatographie liquide sur colonne de silice (éluant: Acétone) Rendement: 38%
Caractéristiques physiques:
* RMN H (200MHZ, CDC13) : 1,35 ppm (s; 9H); 1,41 ppm (s; 9H); 1,52 ppm (s; 9H); 2,18 ppm (s; 6H); 2,48 ppm (t; 2H; J=5,78Hz); 2,99 ppm (d; 2H; J=5,12Hz); 4,15 ppm (m; 2H); 4,50 ppm (m; IH); 5,54 ppm (d; IH; J=8,06Hz); 7,34 ppm (s; IH).
* RMN 13C (50MHz, CDCI3) :
27,93 ppm; 28,24 ppm; 28,49 ppm; 30,60 ppm; 45,87 ppm; 53,33 ppm; 57,77 ppm; 63,35 ppm; 80,03 ppm; 86,38 ppm; 87,15 ppm; 120,44 ppm; 136,00 ppm; 138,61 ppm; 146,96 ppm; 155,94 ppm; 165,54 ppm; 172,26 ppm.
D/ Préparation du chlorure de l'ester 2-(triméthylammonium)-éthylique de la 2'- mercapto-histidine : BXT 52058 Une solution du produit précédent (560mg; l,0mmoles) dans 8ml de THF est traitée avec de l'iodure de méthyle (0,10ml; l,6mmoles) à température ambiante pendant 2h. L'excès d'iodure de méthyle ainsi que le solvant sont évaporés sous pression réduite. Une solution du résidu ainsi obtenu dans 10ml de chlorure de méthylène est percolée avec de l'acide chlorhydrique gazeux pendant lh à température ambiante. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit obtenu est recristallisé dans un mélange éther éthylique-éthanol. Rendement: 80%
Caractéristiques physiques: * pF : 141*C (décomposé)
* RMN !H (200MHZ, D2O) :
3,10 ppm (s; 9H); 3,16 ppm (d; 2H; J=7,50Hz); 3,65 ppm (m; 2H); 4,40 ppm (t; IH; J=7,50Hz); 4,65 ppm (m; 2H); 6,85 ppm (s; IH). TT/ ESSAIS DEMONTRANT L'ACπVITE THERAPEUTIQUE/ PHARMACOLOGIQUE :
Les protocoles opératoires décrits ci-après permettent de démontrer l'activité thérapeutique/pharmacologique revendiquée des composés de l'invention de formule (I) précitée.
Exemple 12 : PIEGEAGE DE LA FERRYLMYOGLOBINE :
La capacité des molécules de la présente invention à piéger la ferrylmyoglobine, est mise en évidence par une mesure cinétique de la disparition de la ferrylmyoglobine à 590 nm, à pH 7,3 et à 25*C.
Le tampon pH 7,3 est obtenu par titration de phosphate de potassium 50 mM, contenant 0,1 mM d'acide diéthylènetriaminepentaacétique (DTPA).
La ferrylmyoglobine est formée en incubant, dans le tampon défini précédemment, 50 μM de metmyoglobine (purifiée à partir de coeur de cheval) avec 200 μM de peroxyde d'hydrogène (H-2O2) pendant 4 minutes à 25*C.
L'excès de H2O2 est ensuite détruit en ajoutant environ 220 U/ml de catalase dans ce milieu réactionnel.
Cinq minutes après ajout de H2O2, on supplémente alors le milieu réactionnel avec une molécule selon la présente invention (à 25 ou 100 μM en concentration finale), et on suit la cinétique de disparition de la ferrylmyoglobine pendant 5 minutes, à une longueur d'onde d'absorbance égale à 590 nm.
Un exemple des cinétiques expérimentales obtenues dans cette étude est présenté sur la figure 1 dans le cas du BXT-52021. L'effet de la molécule testée est mesuré en déterminant le pourcentage de ferrylmyoglobine piégée au temps 2 minutes, la valeur de 100 % étant déterminée en l'absence de la molécule, dans les mêmes conditions expérimentales. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1. Ces résultats montrent que les molécules décrites dans la présente invention piègent très efficacement la ferrylmyoglobine. Exemple 13 : PREVENTION DE L'INACTIVATION DE LA GLUTATHION PEROXYDASE PAR L'ACIDE HYPOCHLOREUX :
Dans un tampon phosphate de potassium 50 mM pH 7,0 contenant
0,1 mM de DTPA, une quantité de glutathion peroxydase érythrocy taire d'origine bovine est mise à incuber, pendant 2 minutes à 37*C, à la concentration finale de
1,5 U/ml, en présence de 10 μM d'acide hypochloreux, en présence ou non d'une molécule décrite dans la présente invention (à 25 μM).
Au bout de 2 minutes d'incubation, on ajoute alors 100 μl de ce milieu réactionnel dans 1,5 ml de tampon Tris 50 mM pH 7,6 (à 37*C) contenant 0,1 mM de DTPA, 0,165 mM de β-NADPH, 2,2 mM de glutathion réduit et 1,1 U/ml glutathion disulfure réductase.
Puis après ajout de 50 μl d'hydroperoxyde de t-butyle à 6,6 mM, l'activité glutathion peroxydase est dosée à 37*C en mesurant pendant 2 minutes la diminution d'absorbance à 340 nm. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 2. Ils sont exprimés en pourcentage de l'activité glutathion peroxydase dosée dans les mêmes conditions expérimentales, en l'absence d'acide hypochloreux et de la molécule testée.
Ces résultats montrent que les molécules décrites dans la présente invention bloquent très efficacement l'inactivation de la glutathion peroxydase par l'acide hypochloreux.
Exemple 14 : PREVENTION DE L'INACTIVATION DE LA GLUCOSE-6- PHOSPHATE DESHYDROGENASE PAR LE SYSTEME CuflD/ ASCORBATE/O7
Dans un tampon phosphate de potassium 50 mM pH 7,0, une quantité de glucose-6-phosphate deshydrogénase (purifiée à partir de Leuconostoc mesenteroides) est mise à incuber, pendant 5 minutes à 37*C, à la concentration finale de 1,2 U/ml, en présence de sulfate de cuivre à 4,5 μM et d'ascorbate à 360 μM, en présence ou non d'une molécule décrite dans la présente invention (à 25 μM).
Au bout de 5minutes d'incubation, on ajoute alors 20 μl de ce milieu réactionnel dans 980 μl de tampon Tris 50 mM pH 7,5 (à 37*C) contenant 0,380 mM de β-NADP+, 3,3 mM de glucose-6-phosphate et 6,3 mM de chlorure de magnésium.
Puis l'activité glucose-6-phosphate deshydrogénase est dosée à 37*C en mesurant pendant 7 minutes l'augmentation d'absorbance à 340 nm. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3. Ils sont exprimés en pourcentage de l'activité glucose-6-phosphate deshydrogénase dosée dans les mêmes conditions expérimentales, en l'absence du système Cu(II)/ascorbate/θ2 et de la molécule testée.
Ces résultats montrent que les molécules décrites dans la présente invention bloquent très efficacement l'inactivation de la glucose-6-phosphate deshydrogénase par le système Cu(II)/ascorbate/θ2.
Exemple 15 : PREVENTION DE LA DEGRADATION D'ADN PAR LE SYSTEME Fefπ)-CITRATE/H2O2/ASCORBATE : Dans un tampon phosphate de potassium 50 mM pH 7,3, de l'ADN double brin (purifié à partir de phage lambda) à 10 μg/ml est mis à incuber, pendant 1 heure à 37*C, avec 20 μM du complexe Fe -citrate, 200 μM de H2O2 et 200 μM d'ascorbate, en présence ou non d'une molécule décrite dans la présente invention (à 100 μM). Au bout de cette heure d'incubation, 220 U/ml de catalase sont alors ajoutées au milieu réactionnel et l'intégrité de l'ADN est mesurée par spectrofluorimétrie après ajout dans le milieu réactionnel de 10 μl d'une solution de bromure d'éthidium à 5 mM (longueur d'onde d'excitation : 510 nm ; longueur d'onde d'émission: 590 nm). L'effet de la molécule testée est mesuré en déterminant le pourcentage d'ADN intact, la valeur prise égale à 100% étant déterminée dans les mêmes conditions expérimentales, en l'absence du système Fe(II)-citrate/H2θ2/ascorbate et de la molécule testée.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 4. Ces résultats montrent que les molécules de la présente invention préviennent très significativement la dégradation d'ADN par le système Fe(II)- citrate/H2θ2/ascorbate. Exemple 16 : INHIBITION DE LA NECROSE CARDIAQUE INDUITE PAR UNE PERIODE DTSCHEMIE-REPERFUSION : CAS DU COMPOSE BXT 52021
L'effet cardioprotecteur des molécules décrites dans la présente invention a été mis en évidence dans un modèle expérimental de coeur isolé perfusé.
Une solution d'héparinate de sodium est injectée par voie intrapéritonéale (40 unités/100 g) à des rats mâles Sprague-Dawley de poids compris entre 250 et 350 grammes. Les rats sont anesthésiés à l'éther 30 minutes après. Le coeur est alors prélevé rapidement et il est ensuite perfusé selon la méthode de Langendorff (voir O. LANGENDORFF; Pflϋgers Arch. Physiol. Mensch. Tiere; (1895); 61; page 291), sous stimulation électrique de fréquence 300/min. La solution de perfusion, équilibrée avec 95 % d'oxygène et 5 % de gaz carbonique, est constituée par un tampon de Krebs-Henseleit (pH 7,4) modifié, dont la composition est la suivante : NaCl 118 M, KC1 4,7mM, MgSO. 1,2 mM, CaCl2 1 mM, KH2PO4 1,2 mM, NaHCOg 25mM et glucose 11 mM. L'ensemble du montage est thermostaté à 37*C.
L'état de fonctionnement du coeur est suivi par la mesure des paramètres hémodynamiques suivants: fréquence cardiaque, pressions ventriculaires systolique et télédiastolique (dont la différence exprime la pression développée), pentes minimale et maximale des variations de pressions en fonction du temps.
Lorsque ces paramètres hémodynamiques sont stabilisés (soit environ 30 minutes après le démarrage de la perfusion), le coeur est soumis à une période d'ischémie par arrêt de la perfusion et arrêt de la stimulation électrique. La reperfusion est ensuite déclenchée avec remise en route de la stimulation électrique lorsque la pression ventriculaire atteint une valeur maximale (pic de contracture myocardique dû à l'ischémie).
L'étude du BXT-52021 dans ce modèle expérimental est effectuée en perfusant le coeur avec le milieu de perfusion contenant 2 μM de BXT-52021 pendant 12 minutes préalablement à la période d'ischémie, ainsi que lors de la reperfusion.
A l'examen des résultats obtenus en enregistrant les paramètres hémodynamiques cités précédemment, on constate que lorsque le coeur est soumis à une ischemie-reperfusion, sa pression télédiastolique augmente et sa pression systolique diminue, alors que celle-ci est maintenue en présence du BXT-52021.
En outre, l'altération du tissu myocardique est évaluée en déterminant la concentration dans le perfusat de deux enzymes cytosoliques libérées dans le milieu de perfusion, la créatine phosphokinase (CPK) et la lactate deshydrogénase
(LDH). Les concentrations de ces deux enzymes sont exprimées en unités d'activité enzymatique par litre de perfusat.
Ainsi, en effectuant la mesure au cours du temps de ces deux paramètres, l'altération du tissu myocardique (due à l'ischémie-reper-fusion) ou sa protection (effet du BXT-52021) sont mises en évidence respectivement par une augmentation ou une diminution des concentrations en CPK et en LDH dans le perfusat.
Les résultats sont présentés sur la figure 2.
Ces résultats montrent que les molécules selon la présente invention permettent de protéger très efficacement les cellules myocardiques d'une nécrose due à une ischémie ou à une reperfusion post-ischémique.
Exemple 17: INHIBITION DE LA NECROSE CARDIAQUE INDUITE PAR UNE PERIODE D 'ISCHEMIE-REPERFUSION : CAS DU COMPOSE BXT 52053
Dans le même modèle expérimental que celui décrit dans l'exemple 16, on a modifié la composition de la solution de perfusion de telle manière qu'elle contienne CaCl2 2,5 mM et MgCl2 2,4 mM (toutes choses étant égales par ailleurs). L'effet du BXT-52053 est alors comparé à celui de l'albumine et de la
L-ergothionéine.
Cette étude est effectuée en perfusant le coeur avec la solution de perfusion contenant 20 μM de BXT-52053, ou 600 μM d'albumine (BSA), ou 100 μM de L-ergothionéine, pendant les 12 minutes précédant la période d'ischémie, puis pendant les 30 premières minutes de reperfusion post-ischémique
L'altération du tissu myocardique due à l'ischémie et/ou à la reperfusion est évaluée en déterminant la quantité totale de créatine phosphokinase (CPK) libérée dans le perfusat pendant la période de reperfusion. Les résultats sont exprimés en milliunités d'activité enzymatique par milligramme de coeur et par minute. La protection du tissu myocardique est alors mise en évidence par une diminution de la quantité totale de CPK libérée dans le perfusat pendant les 30 minutes de reperfusion.
-Les résultats sont présentés sur la figure 3.
Ces résultats montrent que l'albumine ou la L-ergothionéine n'ont pas d'effet significatif alors que les molécules selon la présente invention permettent de protéger très efficacement les myocytes cardiaques et par conséquent de diminuer l'étendue de la nécrose cardiaque due à une ischémie et/ou à une reperfusion post-ischémique.
Exemple 18: AMELIORATION DE LA RECUPERATION DE LA PRESSION DEVELOPPEE D'UN COEUR SOUMIS A UNE PERIODE DTSCHEMIE-REPERFUSION :
Dans le même modèle expérimental que celui décrit dans l'exemple 17, l'étude du BXT-52051 et du BXT-52052 est effectuée en perfusant le coeur avec le milieu de perfusion contenant 10 μM de BXT-52051 ou 2 μM de BXT-52052 pendant 12 minutes préalablement à la période d'ischémie, ainsi que lors de la reperfusion.
L'altération de la fonction cardiaque est évaluée à partir de la mesure de paramètres hemodynamiques (pressions systolique et télédiastolique ventriculaires) en déterminant au cours du temps le pourcentage de récupération de la pression développée (différence entre pression systolique et télédiastolique) lors de la reperfusion, par rapport à celle enregistrée juste avant la période d'ischémie (pression développée stabilisée). Les résultats sont présentés sur la figure 4.
A l'examen des résultats obtenus, on constate que lorsque le coeur est soumis à une ischemie-reperfusion, la pression développée ventriculaire remonte lentement jusqu'à une valeur seuil, alors qu'elle est récupérée beaucoup plus rapidement et atteint une valeur supérieure en présence du BXT-52051 ou du BXT-52052.
Ces résultats montrent que les molécules selon la présente invention permettent d'améliorer la récupération de la fonction ventriculaire du coeur lorsque celui-ci est soumis à une ischémie puis reperfusé. TABLEAU 1
Figure imgf000039_0001
TABLEAU 2
Figure imgf000040_0001
TABLEAU 3
Figure imgf000041_0001
TABLEAU 4
Figure imgf000042_0001
-TABLEAU DES COMPOSES DECRITS-
Figure imgf000043_0001
RI R2 R3 Exemple n* N#BXT
H H (CH2)2CO2Et 1 52021
H H (CH2)2CO2H 2 52020
H H (CH2)2CONH2 3 52029
H H (CH2)2NH2 4 52022
H H (CH2)2N(Me)2 5 52026
H H CH2CH(COOH)N(Me)2 6 52040
Figure imgf000043_0002
H H (CH2)2CONHCH2CH2SO3-,Y+ 8 52053
H H (CH2)2C00CH2CH2 N+(CH3)3, X- 52054
H H (CH2)2COO-carnitine 10 52052
H H CH2CH(NH2)C0°( H2)2N+(CH3)3,X- 11 52058

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation de dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) de formule (V) générale suivante :
Figure imgf000044_0001
dans laquelle :
R- représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un groupement aralkyle ou aralkyle substitué ;
R2 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; sachant qu'au moins un parmi R^ et R2 représente l'hydrogène ;
R3 représente -(CH2)πCOR4 ; -(CH2)nN+(R5RgR7), X~ ; -CH2CH(COR4)N+- (R5R6R7), X- ;
R4 représente -ORg ; -NHR5 ; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2Sθ3-,Y+; -NHCH2CH2Cθ2-,Y+;
-0CH2CH2N+(CH3)3, X-;
Figure imgf000044_0002
— O R5 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
n= 1 ou 2
X- représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable,
Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali— mentairement acceptable, à l'exclusion de la L-ergothionéine, comme agents antioxydants.
2. Utilisation selon la revendication 1, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique à activité antixoydante, en particulier pour le trai- tement d'une pathologie impliquant un stress oxydant associée à une surproduction de radicaux libres oxydants et/ou à une décompartimentation intracellulaire du pool de certains métaux de transition tels que le fer, le cuivre ou le manganèse.
3. Utilisation selon la revendication 2, pour la fabrication d'une com¬ position pharmaceutique pour la prévention des altérations tissulaires induites par une ischémie et/ou une reperfusion post-ischémique, et en particulier la prévention d'infarctus du myocarde, et la prévention des arythmies cardiaques post- ischémiques source de fibrillation ventriculaire ; pour la prévention des altérations tissulaires telles qu'oedème, nécroses et fibroses associées à une surproduction de radicaux libres, comprenant notamment le traitement d'intoxications par les xéno- biotiques tels que par exemple le paraquat, le diquat, les anthracyclines ou les nitrofurannes ; ou les pathologies associées à un stress oxydant au niveau érythro- cytaire, en particulier l'anémie falciforme, la thalassémie, les maladies de déficience en glucose-6-phosphate deshydrogénase et la malaria ; ou pour la pro¬ tection contre l'irradiation par des rayons ionisants X ou gamma, ainsi que les rayons UV ; ou la protection dans des milieux de conservation de greffons, comme par exemple le coeur, le foie, le rein ou le poumon, en transplantation d'organes.
4. Utilisation selon la revendication 1, pour la fabrication de compo¬ sitions cosmétiques à activité antioxydante, en particulier pour la protection contre les rayons UV.
5. Utilisation selon la revendication 1, pour la fabrication de compo¬ sitions alimentaires à activité antioxydante.
6. Utilisation selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisée en ce que le 2-mercapto-imidazole précité est présent en une quantité comprise entre 0,1 et 5 % en poids par rapport au poids total de la composition finale, de préfé¬ rence entre 0,1 et 1 % en poids.
7. Utilisation selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que la composition est sous forme de dose unitaire pouvant comprendre de 1 à 500 mg, de dérivé 2-mercapto-imidazole, éventuellement dans un excipient, véhicule ou support pharmaceutiquement acceptable.
8. Composition pharmaceutique, cosmétique ou alimentaire, en parti¬ culier à activité antioxydante, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre d'ingrédient actif, au moins un composé 2-mercapto-imidazole de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000046_0001
dans laquelle :
Ri représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un groupement aralkyle ou aralkyle substitué ;
R2 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; sachant qu'au moins un parmi R^ et R2 représente l'hydrogène ; R3 représente -(CH2)nCOR4 ; -(CH2)n +(R5RgR7), X" ; -CH2CH(COR4)N+- (R5R6R7), X- ;
R4 représente -ORg ; -NHR5 ; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2S03-,Y+; -NHCH2CH2Cθ2-,Y+;
-0CH2CH2N+(CH3)3, X-;
Figure imgf000047_0001
R5 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
n= 1 ou 2
X- représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable,
Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable, à l'exclusion de la L-ergothionéine, éventuellement dans un excipient, support ou véhicule pharmaceutiquement, cosmétiquement ou alimentairement acceptable.
9. Procédé de fabrication de 2-mercapto-imidazole de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000048_0001
dans laquelle :
Ri représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un groupement aralkyle ou aralkyle substitué ;
R2 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ; sachant qu'au moins un parmi Ri et R2 représente l'hydrogène ;
R3 représente -(CH2)nCOR4 ; -(CH2)nN+(R5RgR7), X" ; -CH2CH(COR4)N+- (R5RgR7), " ;
R4 représente -ORg ; -NHR5 ; -α-aminoacide, de préférence -α-aminoacide naturel; -NHCH2CH2Sθ3-,Y+; -NHCH2CH2Cθ2-,Y+;
-0CH2CH2N+(CH3)3, X-;
Figure imgf000048_0002
— O Rζ représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
R7 représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
Rg représente l'hydrogène, un alkyle inférieur, un aralkyle ou aralkyle substitué ;
n= 1 ou 2
X~ représente un anion d'un acide cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali¬ mentairement acceptable,
Y+ représente un cation d'une base cosmétiquement, pharmaceutiquement ou ali— mentairement acceptable, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes essentielles suivantes :
a) préparer ou utiliser un dérivé imidazole substitué en position 4 (ou 5) éventuellement protégé ; si nécessaire optiquement actif ;
b) traiter ce dérivé imidazole par un halogénothionoformiate d'alkyle, d'alkènyle ou d'aryle, en milieu basique dans un solvant polaire ;
c) puis, selon les cas : i - pour la préparation de composés de formule (I) précédente, dans lesquels R3 présente les définitions précitées à la condition que R5, Rg et R7 ne sont pas tous simultanément autres que l'hydrogène, hydrolyser en milieu basique, ou en milieu acide en présence d'un piégeur de carbocation ;
ii - pour la préparation des composés de formule (I) précitée dans lesquels R5, Rg et R7 sont simultanément autres que l'hydrogène, protéger le substituant soufré, puis transformer le composé protégé en un composé trialkylammonium et hydrolyser en milieu basique, ou en milieu acide en présence d'un piégeur de carbocation.
10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le piégeur de carbocation précité est un mercaptan, de préférence un alkyle ou aryle mercaptan, et encore mieux l'acide β-mercaptopropionique.
11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que la base précitée est de préférence le bicarbonate de sodium, une aminé ou une alkylamine telle que par exemple la diéthy lamine ou la triéthylamine.
12. Procédé selon l'une des revendications à 9 à 11, caractérisé en ce que le solvant polaire précité peut être choisi parmi un solvant éthéré comme par exemple l'éther éthylique ou le tétrahydrofuranne, ou un alcool comme par exemple le méthanol.
13. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'hydrolyse basique précitée est réalisée avec une base inorganique, telle que par exemple la soude ou la lithine, ou organique telle qu'une aminé, une alkylamine, en particulier la diéthyle ou la triéthylamine, en particulier en solution dans un solvant polaire, de préférence comprenant un mélange eau/alcool, en particulier le méthanol.
14. Procédé selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que l'hydrolyse acide est réalisée à l'aide d'une solution d'acide fort concentré, à pH inférieur à 2, en présence d'un piégeur de carbocation en particulier un mercaptan, de préférence en large excès.
15. Procédé selon l'une des revendications 9 à 14, caractérisé en ce que la protection des substituants soufrés précités est effectuée au moyen d'un halogénoformiate, de préférence un halogénoformiate d'alkyle ou de phényle par exemple le chloroformiate d'éthyle ou de phényle ; et la transformation en composé trialkylammonium est réalisée au moyen d'un agent alkylant comme par exemple un halogenure ou un sulfate d'alkyle, en particulier l'iodure de méthyle, ou le sulfate de di éthyle.
16. Procédé selon l'une des revendications 9 à 15, caractérisé en ce que dans le cadre de la préparation d'un dérivé final optiquement actif, on utilise un composé de départ optiquement actif qui est hydrolyse au moyen d'une solution acide concentrée à pH inférieur à 2 et en présence d'un piégeur de carbocation, de préférence un mercaptan, en large excès.
17. Dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) de la formule (I) générale suivante :
Figure imgf000051_0001
dans laquelle :
R , R2 et R3 sont tels que définis à la revendication 1 et n=2, étant entendu que :
a) lorsque R4 = -ORg alors Ri et R2 ne peuvent représenter simultanément l'hydrogène,
b) lorsque Ri et R2 représentent simultanément l'hydrogène et lorsque R4 = -ORg alors R5, Rg et R7 ne peuvent représenter simultanément l'hydrogène ;
c) lorsque R3 = -CH2CH(COR4)N+(R5R R7), X~ et R4 = OH; OMe alors Rζ, Rg, et R7 ne peuvent représenter simultanément un groupement méthyle.
d) lorsque R3 = -(CH2)2N+(R5RgR7), X~; alors R5, Rg et R7 ne peuvent représenter simultanément l'hydrogène.
PCT/FR1994/001514 1993-12-24 1994-12-22 Utilisation de derives 2-mercapto-imidazole substitues en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procede de preparation et leurs applications en pharmacie, cosmetique ou alimentaire WO1995018108A1 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP51780995A JP4024848B2 (ja) 1993-12-24 1994-12-22 ４位（または５位）で置換された２−メルカプトイミダゾール誘導体の酸化防止剤としての使用、調製法および医薬、化粧品または食品産業への応用
AU13204/95A AU696834B2 (en) 1993-12-24 1994-12-22 Use of 2-mercapto-imidazole derivatives substituted in position 4 (or 5) as antioxidizing agents, method of preparation and applications in the pharmaceutical, cosmetic or food industries
EP95904589A EP0686149B1 (fr) 1993-12-24 1994-12-22 Utilisation de derives 2-mercapto-imidazole substitues en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procede de preparation et leurs applications en pharmacie, cosmetique ou alimentaire
DE69430473T DE69430473T2 (de) 1993-12-24 1994-12-22 Verwendung von in 4-(oder 5-) substituierten 2-mercaptoimidazolderivat als antioxidantien, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung in der pharmazie, in der kosmetik und in lebensmitteln

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9315637A FR2714380B1 (fr) 1993-12-24 1993-12-24 Utilisation de dérivés 2-mercapto-imidazole substitués en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procédé de préparation et leurs applications en pharmacie, cosmétique ou alimentaire.
FR93/15637 1993-12-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1995018108A1 true WO1995018108A1 (fr) 1995-07-06

Family

ID=9454389

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR1994/001514 WO1995018108A1 (fr) 1993-12-24 1994-12-22 Utilisation de derives 2-mercapto-imidazole substitues en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procede de preparation et leurs applications en pharmacie, cosmetique ou alimentaire

Country Status (8)

Country Link
US (1) US6056965A (fr)
EP (2) EP1041067A3 (fr)
JP (2) JP4024848B2 (fr)
AU (1) AU696834B2 (fr)
CA (1) CA2156490A1 (fr)
DE (1) DE69430473T2 (fr)
FR (1) FR2714380B1 (fr)
WO (1) WO1995018108A1 (fr)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207658B1 (en) 1996-01-11 2001-03-27 University Of Florida Research Foundation, Inc. Preservation of tissue during removal storage and implantation
WO2002061421A2 (fr) * 2001-02-01 2002-08-08 Florian Lang Procede de depistage permettant l'identification de medicaments pour le traitement ou la prophylaxie de maladies declenchees par des excitants intracellulaires
WO2011042478A1 (fr) 2009-10-06 2011-04-14 Tetrahedron Procede de synthese de la 2-thiohistidine et analogues

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2769838B1 (fr) * 1997-10-16 2000-04-07 Roc Sa Utilisation de derives d'azole pour la preparation d'une composition dermatologique ou cosmetologique
FR2809000B1 (fr) * 2000-05-18 2002-08-09 Oreal Utilisation d'ergothioneine et/ou de ses derives comme agent anti-pollution
FR2910808B1 (fr) * 2006-12-29 2009-04-10 Lvmh Rech Utilisation en cosmetique de la l-2-thiohistidine ou d'un de ses derives comme agent depigmentant.
EP2134198A4 (fr) * 2007-03-07 2012-08-29 Robert B Beelman Utilisation d'ergothionéine en tant qu'agent de conservation dans des aliments et des boissons
US7767826B2 (en) * 2007-10-05 2010-08-03 Pharmatech International, Inc. Process for the synthesis of L-(+)-ergothioneine
JP5170420B2 (ja) * 2008-06-26 2013-03-27 ライオン株式会社 体幹用デオドラント剤
EP2362726B1 (fr) * 2008-10-14 2018-08-08 Bioelectron Technology Corporation Traitement d'affections liées au stress oxydatif, notamment de la néphropathie aux produits de contraste, des radiolésions et des perturbations de la fonction des globules rouges
US9428463B1 (en) 2015-03-13 2016-08-30 Mironova Innovations, Llc Nα, Nα, Nα-trialkyl histidine derivatives useful for the preparation of ergothioneine compounds
KR101909831B1 (ko) * 2017-08-28 2018-10-18 한국외국어대학교 연구산학협력단 반응성 산소종을 포함하는 박테리오파아지의 생산량 증가 조성물 및 방법
US11504355B2 (en) 2018-03-05 2022-11-22 Mironova Innovations, Llc Ergothioneine compositions and methods for maintaining and/or increasing vitamin C levels in cells and organisms

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1184710A (fr) * 1957-09-21 1959-07-24 Cfmc Nouveaux dérivés imidazoliques, leurs procédés de fabrication et leurs applications
US4898878A (en) * 1987-10-02 1990-02-06 The Board Of Regents Of The University Of Washington Antioxidant thiohistidine compounds

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE440596B (sv) * 1980-04-03 1985-08-12 Paul Goran Sigvard Lindroos Forfarande for framstellning av ett heme-koncentrat ur en blandning av heme och blodsubstans erhallen vid spaltning av hemoglobin
JPS6346458A (ja) * 1987-07-22 1988-02-27 Fuji Photo Film Co Ltd ハロゲン化銀カラ−反転反射プリント感光材料の処理方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1184710A (fr) * 1957-09-21 1959-07-24 Cfmc Nouveaux dérivés imidazoliques, leurs procédés de fabrication et leurs applications
US4898878A (en) * 1987-10-02 1990-02-06 The Board Of Regents Of The University Of Washington Antioxidant thiohistidine compounds

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. ARDUINI ET AL.: "The Reduction of Ferryl Myoglobin by Ergothioneine: A Novel Function for Ergothioneine", ARCH. BIOCHEM. BIOPHYS., vol. 281, no. 1, 15 August 1990 (1990-08-15), pages 41 - 43 *
D. AKANMU ET AL.: "The Antioxidant Action of Ergothioneine", ARCH. BIOCHEM. BIOPHYS., vol. 288, no. 1, July 1991 (1991-07-01), pages 10 - 16 *
R.A.F. BULLERWELL ET AL.: "2-Mercaptoglyoxalines. Part VIII. The Preparation of 2-Mercaptoglyoxalines from Glutamic Acid.", JOURNAL OF THE CHEMICAL SOCIETY, 1954, LETCHWORTH GB, pages 3283 - 3287 *
R.C. SMITH ET AL.: "Antioxidant Properties of 2-Imidazolones and 2-Imidazolthiones", BIOCHEM. PHARMACOL., vol. 36, no. 9, 1 May 1987 (1987-05-01), OXFORD GB, pages 1457 - 1460 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207658B1 (en) 1996-01-11 2001-03-27 University Of Florida Research Foundation, Inc. Preservation of tissue during removal storage and implantation
WO2002061421A2 (fr) * 2001-02-01 2002-08-08 Florian Lang Procede de depistage permettant l'identification de medicaments pour le traitement ou la prophylaxie de maladies declenchees par des excitants intracellulaires
WO2002061421A3 (fr) * 2001-02-01 2003-10-30 Florian Lang Procede de depistage permettant l'identification de medicaments pour le traitement ou la prophylaxie de maladies declenchees par des excitants intracellulaires
WO2011042478A1 (fr) 2009-10-06 2011-04-14 Tetrahedron Procede de synthese de la 2-thiohistidine et analogues
US8835477B2 (en) 2009-10-06 2014-09-16 Tetrahedron Method for the synthesis of 2-thiohistidine and the like

Also Published As

Publication number Publication date
EP1041067A2 (fr) 2000-10-04
DE69430473D1 (de) 2002-05-29
DE69430473T2 (de) 2003-01-09
JP4024848B2 (ja) 2007-12-19
JP2006232847A (ja) 2006-09-07
FR2714380B1 (fr) 1996-05-24
FR2714380A1 (fr) 1995-06-30
JPH08511036A (ja) 1996-11-19
EP1041067A3 (fr) 2003-11-19
AU696834B2 (en) 1998-09-17
AU1320495A (en) 1995-07-17
EP0686149A1 (fr) 1995-12-13
CA2156490A1 (fr) 1995-07-06
US6056965A (en) 2000-05-02
EP0686149B1 (fr) 2002-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0686149B1 (fr) Utilisation de derives 2-mercapto-imidazole substitues en position 4 (ou 5) comme agents antioxydants, leur procede de preparation et leurs applications en pharmacie, cosmetique ou alimentaire
EP0656890B1 (fr) Nouveau procede de preparation de l'ergothioneine
EP2486020B1 (fr) Procede de synthese de l'ergothioneine et analogues
WO2000059899A1 (fr) Nouveaux derives de l'acide lipoïque et les compositions pharmaceutiques les contenant
FR2663934A1 (fr) Nouveaux derives de l'acide 4 - amino butyrique, leur procede de preparation et les preparations pharmaceutiques qui les contiennent.
JP2002530396A (ja) スカベンジャー化合物
WO1986005783A1 (fr) Amides de l'acide para-methoxycinnamique et urocanique et leurs utilisation comme filtres solaires
EP0755925B1 (fr) Nouveaux dérivés de N,N'-di(aralkyl)-N,N'-di(2-azaaralkyl)alkylène diamine et leur utilisation dans des compositions pharmaceutiques et cosmétiques
WO1991017146A1 (fr) Nouveaux composes agonistes du recepteur h3 de l'histamine a usage therapeutique, compositions pharmaceutiques agissant comme agonistes dudit recepteur et procede de preparation
EP1296943A1 (fr) Derives d'aminoacides et leur application a titre de medicaments
FR2780404A1 (fr) Nouveaux derives de nitrone, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2000071118A1 (fr) Composes inhibiteurs specifiques de la phospholipase a¿2?
CA2292248C (fr) Nouveaux derives de 1,2-dithiolane, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2680508A1 (fr) Nouveaux composes amidiques des 1-(alcoxybenzyl)piperazines, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
EP2486019B1 (fr) Procede de synthese de la 2-thiohistidine et analogues
CH639075A5 (fr) Ethers dibenzyliques substitues actifs sur le plan therapeutique.
EP0446133B1 (fr) Nouveaux dérivés de la 4H-pyrrolo[1,2-a]thieno[3,2-f][1,4]-diazépine leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0962453A1 (fr) Nouveaux dérivés d'histidine, procédé de préparation et utilisations
FR2646853A1 (fr) Nouveaux derives polypeptidiques d'aminophenylpyridazinones, leurs procedes de preparation, medicaments les contenant, utiles notamment pour le traitement des maladies cardiovasculaires
FR2707086A1 (fr) Procédé de préparation de l'ergothionéine.

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AU CA JP US

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1995904589

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2156490

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 1995 507329

Country of ref document: US

Date of ref document: 19950823

Kind code of ref document: A

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1995904589

Country of ref document: EP

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 1995904589

Country of ref document: EP