WO1993020697A1 - Process for producing microbial natural enemy of nematode by utilizing whole plant body - Google Patents

Process for producing microbial natural enemy of nematode by utilizing whole plant body Download PDF

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Ruriko Ikeda
Hiroshi Kawada
Takanori Kasumimoto
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Nematech Co., Ltd.
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    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom

Definitions

  • the present invention relates to the production of an absolutely parasitic natural enemy microorganism of a plant parasitic nematode that causes damage to crops.
  • this microorganism it is slightly vegetative near the soil of the cultivated crop. It is common practice to inoculate a nematode infested with a substance, cultivate it for a long period of two months or more, and collect microorganisms that have grown from the roots. However, its production efficiency is low and it cannot be used for agricultural production. In addition, plant roots or simple root systems transformed with Agrobacterium are aseptically cultured on agar or other media, and nematodes infested with microorganisms are aseptically inoculated and controlled. Although it is possible to grow them in a confined environment, the productivity is not better than that using soil.
  • the nematode infestation site is limited only to the vicinity of the root growth point, and there is a limit to the response depending on the cultivated area and the type of plant. Also, due to the large amount of nematode inoculation, large root obstruction caused a serious problem in the roots. Was.
  • the inventors of the present invention easily invaded nematodes having natural enemy microorganisms attached not only to the roots, which were conventionally used as production sites, but also to the stems or leaves, and the natural enemy microorganisms were also entrapped there. I found that it could be produced. That is, natural enemy microorganisms adhere to the aqueous solution of polysaccharides and their derivatives, suspend fe-parasitic nematodes, and soak the whole plant. Or spray this nematode suspension. It may be lighter than water Buries the whole plant in an organic carrier and inoculates a nematode to which natural enemy microorganisms adhere from above. By these methods, nematodes to which natural enemy microorganisms adhere are infested on leaves and stems.
  • the present inventors have found that by cultivating under appropriate temperature control, it is possible to obtain a larger number of target natural enemy microorganisms than in the past, and have completed the present invention.
  • the present invention is a method for producing a natural enemy microorganism by infiltrating a plant parasitic nematode to which a natural enemy microorganism is attached into the whole plant including the foliage. Then, the plant parasitic nematode to which the natural enemy microorganisms are attached is suspended in the polysaccharide and its derivative to immerse the whole plant, or the nematode is penetrated into the whole plant by spraying it on the whole plant.
  • a method for producing natural enemy microorganisms and burying the whole plant in an inorganic or organic carrier lighter than water, suspending nematodes with natural enemy microorganisms attached to water and adding from above, After invading the whole, it removes the carrier and produces nematode natural enemy microorganisms.
  • a root-knot nematode or a cyst nematode that is root-fixing is suitable.
  • Plants can be used as long as these parasitic plants are used.
  • polysaccharides and derivatives thereof to be used include agar, dielan gum and carboxymethyl cellulose.
  • organic carrier include micropaloon, which is a burner of coal, coke, and the like, and examples of the organic carrier, include ground rice hulls and peat moss.
  • nematodes to which bacteria belonging to the genus Pastria were attached were inoculated as natural enemies.
  • the inoculation method was as follows: add a sweet potato nematode with natural enemy microorganisms attached to a 0.2% agar water solution so as to bring the number of insect heads to 600 per 1 m1, and immerse the plant with the microballoons removed. did. This was put in a polyethylene bag and kept moist and allowed to stand at room temperature. This solution was sprayed on the whole plant, similarly placed in a polyethylene bag and kept moist and left at room temperature.
  • a microballoon is placed on the plant cultivated by the microphone mouth balloon until the plant is buried, and a nematode suspension solution with natural enemy microorganisms attached is added from above on the plant, and a sufficient amount is rinsed after adding 100 plants per plant. After watering, the nematodes were dispersed in the soil. 2 days after nematode inoculation

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Description

¾Μ 糸田 植物全体を用いた線虫の天敵微生物生産方法 技 術 分 野
本発明は作物に被害をもたらす植物寄生線虫の絶対寄生性天敵 微生物の生産に関するものである。 技 術 背 景
線虫の被害を回避するためには、 化学的防除方法と耕種的防除 方法が用いられてきたが、 簡便、 安価で換金性の高い作物を連作 せざるを得ない経済的背景から、 化学的防除方法が広く使われて きた。 しかし、 化学防除剤の多量の処理による環境汚染への懸念 から、 新たな防除方法の 1 つと して天敵微生物を用いる方法も検 討されつつある。
その中で線虫の絶対寄生菌である細菌の一群パス ト リ ァ属細菌
( P a s t e u r i a s p p . ) は特定の線虫にのみ寄生し、 熱や化学物質に対しても比較的耐性が高く長期間の保存ができる ことから、 高い安全性と使用しやすい利点を有し注目 されている。 しかし、 絶対寄生菌であること、 運動能力を有しないことから、 線虫に寄生させ多量に増殖させることは極めて困難であった。
本微生物の増殖に関しては栽培している作物の土壌^傍に微生 物を寄生させた線虫を接種して 2 ヶ月以上の長期間栽培をし、 根 から増殖した微生物を回収する方法が普通に行われている。 しか し生産効率が悪く、 農業の生産場面に利用し得るものではない。 その他には、 ァグロノ クテリゥム （ A g r o b a c t e r i u m ) によリ形質転換させた植物根や単なる根系を無菌的に寒天等の培 地上で培養し、 微生物の寄生した線虫を無菌的に接種し、 制御さ れた環境下で増殖させることも可能であるが、 生産性は土壌を使 用したものよりも優れるものではない。
また、 従来から植物寄生性線虫の増殖は、 根部によってのみな され当然のこととして線虫寄生菌は植物の根だけを利用し増殖し ていた。
一般に、 線虫の侵入部位は根の生長点近傍だけに限定され、 栽 培面積や、 植物の種類等による対応には限度がある。 また、 多量 の線虫接種によ リ、 根部の大きな障害は作物を維持していく上に おいても植物あたリの線虫接種頭数を限定させざるをえず生産向 上は困難であった。
本発明者らは、 従来生産の場と して用いられていた根だけでな く、 茎部もしくは葉部にも天敵微生物が付着した線虫を容易に侵 入させ、 そこにおいても天敵微生物を生産させ得ることを見いだ した。 すなわち、 多糖類及びその誘導体の水溶液に天敵微生物が 付着し fe植物寄生性の線虫を懸濁させ、 植物全体を浸漬する。 も しく はこの線虫懸濁液を噴霧する。 また水より軽い無機質もしく は有機質担体中に植物全体を埋め、 その上から天敵微生物が付着 した線虫を接種する。 これらの方法によ り天敵微生物が付着した 線虫を葉や茎に寄生させる。
適切な温度管理下で栽培することによ り従来よ り多量に目的と する天敵微生物を取得し得ることを見いだし本発明を完成させた。
発 明 の 開 示
すなわち、 本発明は、 茎葉部を含む植物全体に、 天敵微生物の 付着した植物寄生性線虫を侵入させ、 天敵微生物を生産させる方 法である。 そして、 天敵微生物の付着した植物寄生性線虫を、 多 糖類及びその誘導体に懸濁し植物全体を浸潰させるか、 もしく は 植物全体に噴霧することによって線虫を植物全体に侵入させ線虫 の天敵微生物を生産させる方法、 および、 植物全体を水よ り軽い 無機質もしく は有機質担体中に埋没させ、 天敵微生物の付着した 線虫を水に懸濁し上部よ り添加し、 線虫を植物全体に侵入させた のち、 担体を除き線虫の天敵微生物を生産させる方法である。
本発明に係わる線虫は根内定着性のネコブ線虫類、 も しくはシ ス ト線虫類が適している。
植物はこれらの寄生する植物であればすべて使用可能である。 使用する多糖類及びその誘導体と しては、 寒天、 ジエランガム カルボキシメチルセルロース等があげられる。 また水よ り軽い無 機質担体としては石炭、 コークス等の燃えかすであるマイクロパ ルーン等が、 有機質担体と しては粉碎した籾がら、 ピー トモス等 があげられる。 発明を実施するための最良の形態
次に本発明を実施例によ りさらに詳細に説明する。
実施例 1
線虫の茎部および葉部への侵入
マイク口パル一ンに種子を播種し 1 0 日間栽培し双葉が出て茎 ♦ 葉の区別がつく ようになった時点で天敵微生物としてパス 卜 リア 属細菌の付着した線虫を接種した。 接種方法は、 0 . 2 %寒天水 溶液に天敵微生物の付着したサヅマイモネコブ線虫を 1 m 1 あた リ 6 0 0頭になるように添加しマイ クロバルーンを取り除いた植 物をその中に浸漬した。 これをポリエチレンの袋にいれ保湿して 室温に静置した。 またこの溶液を植物全体に噴霧し同様にポリェ チレンの袋にいれ保湿して室温に放置した。
またマイク口バルーンで栽培している植物の上から植物が埋没 するまでマイ クロバルーンをかけその上から天敵微生物の付着し た線虫懸濁水溶液を植物あたり 1 0 0頭かけ添加後十分量濯水し、 線虫を土壌内に分散させた。 線虫接種 2 日後
、 1 5 %アンチホルミンで 5分洗浄し、 水で洗浄後酸性フクシン 液につけ、 沸騰させた。 適度に冷えたところで酸性グリセリ ンで 脱色した。 各サンプルの茎部、 葉部に侵入した線虫数を調査した 結果を表 1 に示す。
表 1
Figure imgf000007_0001
実施例 2
茎葉部利用による線虫の天敵微生物の生産
1 / 1 0 0 0 0 a ポッ トの半分に黒ポク土をいれ、 卜マ ト、 ナ ス、 ジャガイモの苗を移植し栽培した。 茎葉部が約 1 5 c mにな つたと ころでマイ ク ロバルーンをポッ トに加え天敵微生物 （ P a s t e u r i a s p ) 付着線虫を各植物に 1 0 0 0 0頭づっ接 種しその後十分量権水した。 5 日後、 ポッ トに大量の水をいれ比 重の違いによ りマイ ク ロバルーンを取り除いた。 2 5 度で 8週間 栽培した。 栽培後、 根 · 茎葉を別々に採取しホモジナイ ズし、 ホ モジナイズ液をろ別後、 顕微鏡下で生産された天敵微生物を計測 した。 結果を表 2 に示す。 表 2
Figure imgf000008_0001
産業上の利用可能性
本発明にょ リ従来生産の困難であった植物寄生性線虫の天敵で ある絶対寄生細菌を効率的に生産することが可能になった。

Claims

言青 求 の 範 囲
1 . 茎葉部を含む植物全体に、 天敵微生物の付着した植物寄生 性線虫を侵入させ、 天敵微生物を生産させる方法。
2 . 天敵微生物の付着した植物寄生性線虫を、 多糖類及びその 誘導体に懸濁し植物全体を浸潰させるか、 も し く は植物全体に嘖 霧するこ とによって線虫を植物全体に侵入させ線虫の天敵微生物 を生産させる方法。
3 . 植物全体を水よ り軽い無機質も し く は有機質担体中に埋没 させ、 天敵微生物の付着した線虫を水に懸濁し上部よ り添加し、 線虫を植物全体に侵入させたのち、 担体を除き線虫の天敵微生物 を生産させる方法。
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