WO1992013542A1 - Application de polymeres biologiquement actifs pour l'obtention d'un medicament pour le traitement d'infections a retrovirus - Google Patents

Application de polymeres biologiquement actifs pour l'obtention d'un medicament pour le traitement d'infections a retrovirus Download PDF

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WO1992013542A1
WO1992013542A1 PCT/FR1992/000079 FR9200079W WO9213542A1 WO 1992013542 A1 WO1992013542 A1 WO 1992013542A1 FR 9200079 W FR9200079 W FR 9200079W WO 9213542 A1 WO9213542 A1 WO 9213542A1
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WO
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polymer
acid
hydroxy
application according
polymerization
Prior art date
Application number
PCT/FR1992/000079
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Inventor
Schmuel Ben-Sasson
Marc Lemaitre
John R. Regan
Aurélio Zerial
Original Assignee
Rhone-Poulenc Rorer S.A.
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Filing date
Publication date
Application filed by Rhone-Poulenc Rorer S.A. filed Critical Rhone-Poulenc Rorer S.A.
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A61K31/775—Phenolic resins

Definitions

  • the present invention relates to obtaining a medicament useful for the prophylaxis and the therapeutic treatment of retrovirus infections and more especially for the prophylaxis and the therapeutic treatment of AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) and associated syndromes ARC ( AIDS related complex)].
  • AIDS immunodeficiency syndrome
  • ARC AIDS related complex
  • prophylaxis we mean the treatment of subjects who have been exposed to human immunodeficiency viruses (HIVs), in particular asymptomatic seropositive people, who are at risk of developing the disease in the months and years to come after primary infection.
  • HIVs human immunodeficiency viruses
  • this medicament contains one or more products from the class of biologically active aromatic polymers.
  • these polymers have an alkylaryl structure and comprise 5 to 50 repeating aromatic units capable of forming a linear skeleton having a helical secondary structure in which the diameter of said structure is less than 3 times the maximum diameter of the aryl group composing the skeleton.
  • a class of polymers constituting the medicament according to the present invention is composed of a substituted mononuclear aromatic nucleus forming the repeating units of the chain. These units are called "monomer units”.
  • Another class corresponds to substantially linear polymers
  • a third class of substantially linear polymers having a helical structure as mentioned above consists of polymers in which the repeating unit contains at least 3 aromatic rings identical substituted and linked to each other by an alkylene bridge. These polymers are firstly prepared by forming the multimer (trimer, tetramer - of the monomeric form) then by polymerization of the multimer. In some cases, a simple dimerization of the multimer will be sufficient to produce a polymer according to the invention.
  • the units of this third class of polymers are called "multimer units".
  • the polymers according to the invention contain approximately 5 to 50 aromatic cyclic units
  • the polymers consisting of trimer units contain approximately 2 to 16 of these units
  • the polymers consisting of tetramer units contain approximately 2 to 12 tetramer units.
  • the aryl group of the alkylaryl structure of the polymer backbone is substituted by hydroxy, carboxy, carboxyalkyl substituents, the alkyl part of which can be substituted by a hydroxy or carboxyalkyl radical.
  • the monomer units corresponding to the present invention can be represented by the general formula:
  • X is a hydroxy, alkyloxy (containing 1 to 4 carbon atoms) or benzyloxy radical and Y is a hydrogen atom, or else X and Y represent hydroxy radicals respectively located in the meta position '' in relation to each other and R is a carboxy, carboxyalkyl radical (optionally substituted by a hydroxy radical), carboxyalkyloxy, sulfo, sulfoalkyl, sulfoalkyloxy, phosphono, phosphonoalkyl or phosphonoalkyloxy, it being understood that the alkyl portions contain 1 or 2 carbon atoms.
  • the polymers of the first class mentioned above can be represented by the structure:
  • R in the form of a salt or ester, in which X, Y and R are defined as above, R 'represents a hydrogen atom or an alkyl radical containing 1 to 6 carbon atoms and z is an integer ranging from 3 to 48.
  • the polymers of the second class mentioned above can be obtained from the dimer structure:
  • X, Y, R and R ′ are defined as above and z is an integer ranging from 1 to 23.
  • the polymers used for the preparation of a medicament according to the present invention can be used in free form or in form of their salts, their esters or their hydrates, which also come within the scope of the present invention.
  • the salts which can be used are the pharmaceutically acceptable salts.
  • the other salts can be used as intermediates for the preparation of the product per se or of another pharmaceutically acceptable salt, by exchange reaction.
  • pharmaceutically acceptable salts can be chosen from the salts formed with nitrogen bases such as in particular ammonia, benzathine, procaine, diethanolamine, choline, N-methylglucamine, or derivatives thereof.
  • the pharmaceutically acceptable salts can also be chosen from metal salts, for example aluminum, calcium, lithium, magnesium, potassium, sodium, zinc salts, etc.
  • the salts of the polymers used according to the invention can be prepared by adding an aqueous solution of the base to a suspension of the polymer in water and then removing the water under reduced pressure.
  • the monomer of general formula (I) is an ester
  • the remainder of the ester is a straight or branched alkyl radical containing 1 to 7 carbon atoms.
  • the polymers consisting of a mononuclear aromatic cyclic unit can be prepared by polymerization of the monomer compound of general formula (I), with formaldehyde, another alkylaldehyde or a precursor in trimer or polymer form, in a non-medium. oxidizing in the presence of a mineral or organic acid.
  • the molar ratio of the monomer relative to the aldehyde can be of the order of approximately 5: 1 to 1:10, preferably approximately 2: 1 to approximately 1: 3, the ratio close to 10: 9 being preferred.
  • the reaction is carried out at a temperature in the region of 50 to 150 ° C., under atmospheric pressure, for a period of 10 minutes to approximately 5 hours.
  • Such a reaction generally leads to a mixture of polymers, which may optionally include polymers with more than 50 or less than 5 aromatic rings. but the quantity of polymer having from 5 to 50 aromatic cyclic patterns is quite predominant. A determined fraction of the polymer mixture can then be separated by chromatography.
  • Polymers including in their chain the dimer unit defined above, as repeating unit can be prepared by reaction of the monomer compound of general formula (I) with formaldehyde, another alkylaldehyde or a precursor in trimer or polymer form, in non-oxidizing medium in the presence of a mineral or organic acid, under conditions favoring the formation of the dimer.
  • a method for preparing such a dimer is described by Smith & al., Anal. Chem., 21 (11). 1334 (1949). Generally, one operates in the presence of an excess of the aromatic derivative. The reaction is carried out in a short time, the unreacted product is eliminated, thus making it possible to obtain a dimer of homogeneous structure.
  • the dimer can be polymerized by reaction with formaldehyde, another alkylaldehyde or a precursor in trimer or polymer form in a non-oxidizing medium in the presence of a final or organic acid.
  • the molar ratio of the dimer to the ldehyde can be of the order of about 5: 1 to 1:10, preferably about 2: 1 to about 1: 3, with a ratio in the region of 10: 9 being preferred.
  • the reaction is carried out at a temperature in the region of 50 to 150 ° C., under atmospheric pressure, for a period of 10 minutes to approximately 5 hours.
  • Such a reaction generally results in a mixture of polymers, which may optionally comprise polymers with more than 25 or less than 3 aromatic dimer units; but the quantity of polymer having from 3 to 25 aromatic dimer units is completely predominant.
  • a determined fraction of the polymer mixture can then be separated by chromatography.
  • the dimer can also be polymerized by a sequential series of dimerizations making it possible to obtain, for example, tetramers, octamers, etc.
  • dimers can be dimerized again to form tetramers; dimers and tetramers can react to give hexamers.
  • the dimer By applying controlled reaction conditions producing the dimer exclusively, it is possible to prepare the alkylaryl chain of the polymers. For example by the action of an aryl anion on an aryl halide. The resulting dimer can then be converted into an aryl anion which can be reacted with another aryl halide. This process can be used for the production of polymers with a specific degree of polymerization.
  • Polymers including in their chain the multimere unit defined above, as a repeating unit can be prepared by reacting the monomer compound of general formula (I) with formaldehyde, another alkylaldehyde or a precursor in trimer or polymer form. , in a non-oxidizing medium in the presence of a mineral or organic acid, under conditions favoring the formation of the desired multimer. Generally, one operates in the presence of an excess of the aromatic derivative. The reaction takes place in a short time, the unreacted product is eliminated, thus making it possible to obtain a multimer of heterogeneous structure.
  • the expected multimer can be separated from the mixture of multimers by chromatography.
  • the multimer thus obtained can be polymerized by reaction with formaldehyde or another alkylaldehyde in a non-oxidizing medium in the presence of a mineral or organic acid.
  • the molar ratio of the multimer to the aldehyde can be of the order of approximately 5: 1 to 1:10, preferably approximately 2: 1 to approximately 1: 3, the ratio close to 10: 9 being preferred.
  • the reaction is generally carried out at a temperature in the region of 50 to 150 ° C., under atmospheric pressure, for a period of 10 minutes to approximately 5 hours.
  • Such a reaction generally leads to a mixture of polymers, possibly even comprising polymers with more than 50 or less than 5 aromatic cyclic units; but the quantity of polymer having from 5 to 50 aromatic cyclic units is completely predominant.
  • the desired polymers can be isolated from the polymer blend by chromatography.
  • Polymers of very specific dimensions can be prepared by dimerization of dimers and / or multimers of different dimensions prepared according to the above methods.
  • a homogeneous polymer of 15 aromatic cyclic units can be obtained by dimerization of an octamer of homogeneous structure (itself prepared by 3 successive dimerizations of the monomer) and of a heptomer of homogeneous structure (prepared by dimerization of the trimer and tetramer).
  • the polymers prepared via the dimer and / or the multimers have a more regular repetitive structure which can also lead to a more regular secondary helical structure.
  • the regularity of the propeller increases with the number of cyclic units included in the multimere unit.
  • polymers used according to the invention inhibit the cytopathogenic effect and the multiplication of the HIV virus, in cell cultures, at concentrations devoid of cytostatic effect.
  • the tests were carried out in a permissive cell line (human lymphoblastoid cells CEM).
  • the products to be tested are dissolved in a proportion of 1 mg / ml in distilled water or optionally in a dimethylformamide (or dimethylsulfoxide) - water mixture [10 - 90 by volume].
  • Stock solutions are diluted to the desired concentration using isotonic phosphate buffer (TPI).
  • TPI isotonic phosphate buffer
  • the test is carried out on the lymphoblastoid line CEM clone 13.
  • CEM clone 13 In a 96-well microplate 25 ⁇ l / well of a solution of product to be tested or of isotonic phosphate buffer (TPI) are deposited in the case of the controls. Products are studied at different concentrations
  • the test is carried out in duplicate: one part on infected cells, to determine the antiviral activity and the other part on uninfected cells, to determine the cytotoxicity of the products.
  • the first series of 3 wells is infected with HIV (100 ⁇ l per well of a suspension of LAV-1-BRU virus Barré-Sinoussi et al. Science, 220.
  • the wells still containing the cells (infected or non-infected), receive 20 ⁇ l of a solution of MTT (4,5-di methylthiazol-2-yl 2,5-diphenyl tetrazolium bromide) at 7 mg / ml in isotonic phosphate buffer. During an incubation period of 3 hours, MTT is converted to a formazan salt (blue) inside living cells and in proportion to their number, while nothing appears in the wells containing only cells dead. 100 ⁇ l of isopropanol (containing 0.04 mol / 1 of hydrochloric acid) are then added and the microplates are agitated until the formazan blue is dissolved. The absorption at 540 nm is read with an automatic reader of ELISA reactions in microplates. Under these conditions the infected cells are lysed at about 60-70% compared to the uninfected cells.
  • MTT 4,5-di methylthiazol-2-yl 2,5-diphenyl
  • DO treated and inf. Cell
  • DO untreated and inf. Cell
  • DO treated and non-inf. Cell
  • DO untreated and inf. Cell
  • Viral multiplication was determined by assaying the HIV virus reverse transcriptase.
  • reverse transcriptase The activity of reverse transcriptase is measured directly on 50 ⁇ l of culture supernatant. 10 ⁇ l of buffer containing 0.5 M of KC1,
  • DTT dithiotreitol
  • newt X-100 5 mM of dithiotreitol (DTT) and 0.5% of newt X-100 are added to all the microwells containing the 50 ⁇ l of supernatant to be tested.
  • polyadenylic acid - thymidylic acid (poly rA-oligo dT) are then added.
  • the microplate is covered with a plastic film and incubated for 60 minutes at 37 ° C.
  • the reaction is stopped by adding 20 ⁇ l of an ice-cold solution of 120 mM Na P O in 60% of trichloroacetic acid and the samples are placed for 15 minutes on the ice bed.
  • the precipitates are filtered through glass fibers using a cell washer (Skatro) and the filters are washed with a solution of 12 mM Na P.O in 5% trichloroacetic acid.
  • the filters are dried and the radioactivity is counted after adding a scintillating liquid.
  • the TI reverse transcriptase activity is proportional to the amount of acid-precipitable radioactivity.
  • % Inhibition of viral production is calculated using the formula: cpm supernatants of treated cells and inf.
  • the p24 protein assays are carried out using an ELISA kit (Du Pont de Nemours) used according to the manufacturer's instructions.
  • the present invention relates to obtaining a pharmaceutical composition containing at least one polymer as defined above, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants.
  • compositions according to the invention are capable of inhibiting the replication of retroviruses and therefore of reducing the progression to the disease or of reducing its severity in infected subjects.
  • compositions according to the invention are capable of preventing or slowing the progression of subjects infected with retroviruses towards an aggravated stage of the disease.
  • preventive is meant preventing development in subjects with immunodeficiency and / or infected with retrovirus.
  • compositions will be adapted to the particular case of the digestive tract of the immunocompromised.
  • compositions can be used orally, parenterally or rectally.
  • the sterile compositions for parenteral administration may preferably be aqueous or non-aqueous solutions, suspensions or emulsions.
  • solvent or vehicle water, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils, in particular olive oil, injectable organic esters, for example ethyl oleate or other organic solvents can be used. suitable.
  • These compositions can also contain adjuvants, in particular wetting agents, isotonizers, emulsifiers, dispersants and stabilizers. Sterilization can be done in several ways, for example by aseptic filtration, by incorporating sterilizing agents into the composition, by irradiation or by heating. They can also be prepared in the form of sterile solid compositions which can be dissolved at the time of use in a sterile injectable medium.
  • compositions for oral administration tablets, pills, powders or granules can be used.
  • the active product according to the invention (optionally combined with another pharmaceutically compatible product) is mixed with one or more inert diluents or adjuvants, such as sucrose, lactose or starch.
  • these compositions can also include substances other than diluents, for example a lubricant such as magnesium stearate.
  • pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs containing inert diluents such as water or paraffin oil can be used.
  • These compositions can also include substances other than diluents, for example wetting, sweetening or flavoring products.
  • compositions for rectal administration are suppositories or rectal capsules, which contain, in addition to the active principle, excipients such as cocoa butter, semi-synthetic glycerides or polyethylene glycols.
  • the doctor will determine the dosage he considers most appropriate based on the age, weight and factors specific to the product and the subject to be treated. Generally in adults the doses are between 50 and 500 mg per injection in 1 to 4 injections per day, intravenously.
  • trioxane in 20 cm of acetic acid at 90 ° C.
  • the reaction mixture is heated for 2 hours, cooled to room temperature, diluted with water and filtered.
  • the solid product obtained is washed with water, dissolved in ammonia and concentrated to dryness, under heat, under reduced pressure.
  • trioxane 14.61 mmol
  • trioxane (16.29 mmol) is added to 2.5 g of 4-hydroxy benzoic acid (18.1 mmol) heated to 90 ° C., then the mixture is stirred
  • trioxane 14.61 mmol
  • trioxane 13.38 mmol
  • 4-hydroxy-mandelic acid 14.88 mmol
  • 0.5 cm of a 4-1 mixture (by volume) of acetic acid / sulfuric acid (concentrated) is added and the reaction mixture is heated for 20 minutes at 90 ° C, then cooled to room temperature, diluted with water and filtered.
  • the solid product is dissolved in a dilute aqueous ammonia solution and concentrated to dryness under reduced pressure at a temperature less than or equal to 40 ° C.
  • Step 1 formation of the dimer.
  • Step 2 polymerization of the dimer.
  • Example 1 1 20% sulfuric acid concentrated in acetic acid. The mixture is heated at 90 ° C for 2 hours, poured over ice water and filtered. The solid obtained is washed with water and dissolved in an aqueous ammonia solution. The expected polymer is obtained after dry concentration under reduced pressure at a temperature less than or equal to 45 ° C.
  • phenethylsulfonic are mixed in 1.5 cm of acetic acid subjected to a stream of hydrochloric gas for 10 seconds.
  • the mixture is heated at 90 ° C for 2 hours then concentrated to dryness under reduced pressure.
  • the residue is dissolved in an aqueous ammonia solution.
  • the solution obtained is concentrated to dryness under reduced pressure to give the expected polymer in the form of an ammonium salt.
  • 4-hydroxyphenethylsulfonic acid can be obtained in the following manner:
  • a mixture of 0.42 g of 4-hydroxyethyl phenethylsulfonate in 8 cm * -5 of an aqueous solution of 12% hydrochloric acid is stirred at room temperature for about 18 hours, then heated to 100 ° C. for 5 hours and concentrated to dryness under reduced pressure to give 4-hydroxyphenethylsulfonic acid.
  • 4-hydroxyethyl phenethylsulfonate can be obtained in the following manner:
  • 4-hydroxy benzyl phosphonic acid can be obtained in the following manner:
  • the dibutyl 4-benzyloxybenzyl phosphonate can be obtained in the following manner:

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Abstract

Application de polymères aromatiques biologiquement actifs ayant une structure alcoylaryle comprenant 5 à 50 unités aromatiques répétitives, capables de former un squelette linéaire de structure secondaire hélicoïdale, pour obtenir un médicament destiné au traitement préventif et/ou curatif des infections à rétrovirus.

Description

APPLICATION DE POLYMERES BIOLOGIQUEMENT ACTIFS POUR L'OBTENTION D'UN MEDICAMENT POUR LE TRAITEMENT D'INFECTIONS A RETROVIRUS
La présente invention concerne l'obtention d'un médicament utile pour la prophylaxie et le traitement thérapeutique d'infections à 5 retrovirus et plus spécialement pour la prophylaxie et le traitement thérapeutique du SIDA (syndrome d'immunodéficience acquise) et de syndromes associés ARC (AIDS related complex) ] .
Par prophylaxie nous sous entendons le traitement de sujets qui ont été exposés aux virus HIVs (human immunodeficiency virus) , en 10 particulier les séropositifs asymptomatiques, qui présentent le risque de développer la maladie dans les mois et les années à venir après la primoinfection.
Selon l'invention, ce médicament contient un ou plusieurs produits de la classe des polymères aromatiques biologiquement actifs.
15 Plus particulièrement ces polymères ont une structure alcoylaryle et comprennent 5 à 50 unités aromatiques répétitives capables de former un squelette linéaire ayant une structure secondaire hélicoïdale dans laquelle le diamètre de ladite structure est inférieur à 3 fois le diamètre maximum du groupe aryle composant le squelette.
20 L'activité antithrombotique de ces polymères a déjà été mise en évidence et décrite dans la demande de brevet WO 9107183.
Une classe de polymères constituant le médicament selon la présente invention est composée d'un noyau aromatique mononucléaire substitué formant les unités répétitives de la chaine. Ces unités sont appelées 25 "unités monomères".
Une autre classe correspond aux polymères substantiellement linéaires
* *_} ayant une stucture hélicoïdale telle que mentionnée ci-dessus, constituée d'unités répétitives de 2 cycles aromatiques mononucléaires substitués et liés entre eux par un pont alcoylène. De 30 préférence, les positions des substituants de chaque cycle, ont la même orientation (ortho, meta ou para) par rapport au pont alcoylène. Ces polymères sont obtenus par formation du dimère à partir de l'imité monomère, puis polymérisation. Les unités de cette seconde classe de polymères sont appellées "unités dimères". Les polymères ainsi préparés contiennent environ de 3 à 25 unités dimères.
Une troisième classe de polymères substantiellement linéaires ayant une stucture hélicoïdale telle que mentionnée ci-dessus est constituée de polymères dans lesquels le motif répétitif contient au moins 3 cycles aromatiques substitués de façon identiques et liés entre eux par un pont alcoylène. Ces polymères sont préparés dans un premier temps par formation du multimère (trimère, tétramère — de la forme monomère) puis par polymérisation du multimer. Dans certains cas une simple dimérisation du multimer sera suffisante pour produire un polymère selon l'invention. Les unités de cette troisème classe de polymères sont appellées "unités multimères". Dans la mesure où les polymères selon l'invention contiennent environ 5 à 50 motifs cycliques aromatiques, les polymères constitués d'unités trimères contiennent environ 2 à 16 de ces unités, les polymères constitués d'unités tétramères contiennent environ 2 à 12 motifs tétramères.
Le groupe aryle de la structure alcoylaryle du squelette des polymè- res est substitué par des substituants hydroxy, carboxy, carboxyal- coyle dont la partie alcoyle peut être substituée par un radical hydroxy ou carboxyalcoylox .
Les motifs monomères répondant à la présente invention peuvent être représentés par la formule générale :
Figure imgf000004_0001
un sel ou un ester, dans laquelle X est un radical hydroxy, alcoyloxy (contenant 1 à 4 atomes de carbone) ou benzyloxy et Y est un atome d'hydrogène, ou bien X et Y représentent des radicaux hydroxy respectivement situés en position meta l'un par rapport à l'autre et R est un radical carboxy, carboxyalcoyle (éventuellement substitué par un radical hydroxy) , carboxyalcoylox , sulfo, sulfoalcoyle, suifoalcoyloxy, phosphono, phosphonoalcoyle ou phosphonoalcoyloxy, étant entendu que les portions alcoyle contiennent 1 ou 2 atomes de carbone.
Les polymères de la première classe citée ci-dessus pourront être représentés par la structure :
Figure imgf000005_0001
sous forme de sel ou d'ester, dans laquelle X, Y et R sont définis comme précédemment, R' représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 à 6 atomes de carbone et z est un nombre entier allant de 3 à 48.
Les polymères de la seconde classe citée ci-dessus pourront être obtenus à partir de la structure dimère :
Figure imgf000005_0002
sous forme de sel ou d'ester, dans laquelle X, Y, R et R' sont défi¬ nis comme précédemment et z est un nombre entier allant de 1 à 23.
Les polymères utilisés pour la préparation d'un médicament selon la présente invention peuvent être utilisés sous forme libre ou sous forme de leurs sels de leurs esters ou de leurs hydrates, qui entrent également dans le cadre de la présente invention. Les sels pouvant être utilisés sont les sels pharmaceutiquement acceptables. Les autres sels peuvent être utilisés à titre d'intermédiaires pour la préparation du produit en soi ou d'un autre sel pharmaceutiquement acceptable, par réaction d'échange.
A titre d'exemple, des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être choisis parmi les sels formés avec les bases azotées comme notamment ammoniac, benzathine, procaïne, diéthanolamine, choline, N-méthylglucamine, ou des dérivés de celles-ci. Les sels pharmaceutiquement acceptables peuvent également être choisis parmi les sels métalliques, par exemple sels d'aluminium, de calcium, de lithium, de magnésium, de potassium, de sodium, de zinc ...
Les sels des polymères utilisés selon l'invention, peuvent être préparés par addition d'une solution aqueuse de la base à une suspension du polymère dans l'eau puis élimination de l'eau sous pression réduite. ~"~~~
Lorsque le monomère de formule générale (I) "est un ester, le reste de l'ester est un radical alcoyle droit ou ramifiée contenant 1 à 7 atomes de carbone.
D'une façon générale les polymères constitués d'une unité cyclique aromatique mononucléaire peuvent être préparés par polymérisation du composé monomère de formule générale (I) , avec le formaldéhyde, un autre alcoylaldéhyde ou un précurseur sous forme trimère ou polymère, dans un milieu non oxydant en présence d'un acide minéral ou organique. Le rapport molaire du monomère par rapport à 1'aldéhyde peut être de 1'ordre d'environ 5:1 à 1:10, de préférence environ 2:1 à environ 1:3, le rapport voisin de 10:9 étant préféré. La réaction s'effectue à une température voisine de 50 à 150°C, sous pression atmosphérique, pendant une durée de 10 minutes à environ 5 heures. Une telle réaction conduit généralement à un mélange de polymères, pouvant éventuellement comprendre des polymères à plus de 50 ou moins de 5 cycles aromatiques . mais la quantité de polymère ayant de 5 à 50 motifs cycliques aromatiques est tout à fait prédominante. Une fraction déterminée du mélange des polymères peut être alors séparée par chro atographie.
Les polymères incluant dans leur chaîne l'unité dimère définie pré- cédemment, comme motif répétitif, peuvent être préparés par réaction du composé monomère de formule générale (I) avec le formaldéhyde, un autre alcoylaldëhyde ou un précurseur sous forme trimère ou polymère, en milieu non oxydant en présence d'un acide minéral ou organique, dans des conditions favorisant la formation du dimère. Une méthode pour préparer un tel dimère est décrite par Smith & coll., Anal. Chem., 21(11). 1334 (1949). Généralement, on opère en présence d'un excès du dérivé aromatique. La réaction s'effectue en un temps court, le produit n'ayant pas réagi est éliminé, permettant ainsi d'obtenir un dimère de structure homogène.
Le dimère peut être polymérisé par réaction avec le formaldéhyde, un autre alcoylaldëhyde ou un précurseur sous forme trimère ou polymère en milieu non oxydant en présence d'un acideT jfinéral ou organique. Le rapport molaire du dimère par rapport à 1' ldéhyde peut être de 1'ordre d'environ 5:1 à 1:10, de préférence environ 2:1 à environ 1:3, le rapport voisin de 10:9 étant préféré. La réaction s'effectue à une température voisine de 50 à 150°C, sous pression atmosphérique, pendant une durée de 10 minutes à environ 5 heures. Une telle réaction conduit généralement à un mélange de polymères, pouvant éventuellement comprendre des polymères à plus de 25 ou moins de 3 motifs dimères aromatiques; mais la quantité de polymère ayant de 3 à 25 motifs dimères aromatiques est tout à fait prédominante. Une fraction déterminée du mélange des polymères peut être alors séparée par chromatographie.
Selon un autre mode de préparation, le dimère peut aussi être poly- mérisé par une série séquentielle de dimérisations permettant d'ob¬ tenir par exemple des tétramères, des octamères, ...En utilisant ainsi des conditions contrôlées, il est possible de produire des polymères de structure homogène d'une dimension prévisible et bien définie. Par exemple, des dimères peuvent être à nouveau dimérisés pour former des tétramères; des dimères et des tétramères peuvent réagir pour donner des hexamères .
En appliquant des conditions de réaction contrôlées produisant exclu- sivement le dimère, il est possible de préparer l'enchaînement alcoy¬ laryle des polymères. Par exemple par action d'un anion arylique sur un halogénure arylique. Le dimère résultant peut alors être converti en un anion arylique qui pourra être mis en réaction avec un autre halogénure arylique. Ce procédé peut être employé pour la production de polymères ayant un degrés précis de polymérisation.
Les polymères incluant dans leur chaîne l'unité multimere définie précédemment, comme motif répétitif, peuvent être préparés par réac¬ tion du composé monomère de formule générale (I) avec le formaldéhy¬ de, un autre alcoylaldëhyde ou un précurseur sous forme trimère ou polymère, en milieu non oxydant en présence d'un acide minéral ou organique, dans des conditions favorisant la formation du multimere désiré. Généralement, on opère en présence d'un excès du dérivé aromatique. La réaction s'effectue en un temps court, le produit n'ayant pas réagi est éliminé, permettant ainsi d'obtenir un multimere de structure hétérogène. Le multimere attendu peut être séparé du mélange des multimères par chromatographie.
Le multimere ainsi obtenu peut être polymérisé par réaction avec le formaldéhyde ou un autre alcoylaldëhyde en milieu non oxydant en présence d'un acide minéral ou organique. Le rapport molaire du multimere par rapport à l'aldéhyde peut être de l'ordre d'environ 5:1 à 1:10, de préférence environ 2:1 à environ 1:3, le rapport voisin de 10:9 étant préféré. La réaction s'effectue généralement à une température voisine de 50 à 150°C, sous pression atmosphérique, pendant une durée de 10 minutes à environ 5 heures. Une telle réac- tion conduit généralement à un mélange de polymères, pouvant éven¬ tuellement comprendre des polymères à plus de 50 ou moins de 5 motifs cycliques aromatiques; mais la quantité de polymère ayant de 5 à 50 motifs cycliques aromatiques est tout à fait prédominante. Les polymères désirés peuvent être isolés du mélange des polymères par chromatographie.
Préparation de polymères homogènes particuliers :
Des polymères de dimensions très spécifique peuvent être préparés par dimérisation des dimères et/ou des multimères de différentes dimensions préparés selon les méthodes ci-dessus. Par exemple un polymère homogène de 15 unités cycliques aromatiques peut être obtenu par dimérisation d'un octamère de structure homogène (lui-même préparé par 3 dimérisations successives du monomère) et d'un hepta- mère de structure homogène (préparé par dimérisation du trimère et du tétramère) .
Par comparaison au polymère obtenu directement à partir du monomère, il est entendu que les polymères préparés par 1'intermédiaire du dimère et/ou des multimères possèdent une structure répétitive plus régulière qui peut conduire à une structure hélicoïdale secondaire plus régulière aussi. La régularité de l'hélice augmente avec le nombre d'unités cycliques comprises dans l'unité multimere.
L'activité anti-rétrovirus des polymères définis précédemment a été mise en évidence dans les tests qui suivent.
II a été démontré que les polymères utilisés selon 1'invention inhi¬ bent l'effet cytopathogene et la multiplication du virus HIV, en cultures cellulaires, à des concentrations dépourvues d'effet cytostatique.
Les tests ont été mis en oeuvre dans une lignée cellulaire permissive (cellules lymphoblastoïdes humaines CEM) .
Les produits à tester sont mis en solution à raison de 1 mg/ml dans de l'eau distillée ou éventuellement dans un mélange diméthylformamide (ou diméthylsulfoxyde) - eau [10 - 90 en volumes].
Les solutions-mères sont diluées à la concentration voulue au moyen de tampon phosphate isotonique (TPI) . Les activités ont été dosées à des concentrations allant de 100 à 0,03 μg/ml.
Le test est réalisé sur la lignée lymphoblastoïde CEM clone 13. Dans une microplaque de 96 puits on dépose 25 μl/puits d'une solution de produit à tester ou de tampon phosphate isotonique (TPI) dans le cas des contrôles. Les produits sont étudiés à différentes concentrations
(souvent 8) , à raison de 6 puits par concentration. On ajoute alors
125 μl d'une suspension de cellules CEM dans le milieu RPMI
[contenant 10 % de sérum de veau foetal, 100 U/ml de pénicilline, 100
4 μg/ml de streptomycine et 2 μmoles/ml de glutamine (8x10 cellules par ml)3 et les microplaques sont incubées une heure à 37°C, sous une atmosphère contenant 5 % de gaz carbonique. L'essai est fait en double : une partie sur cellules infectées, pour la détermination de l'activité antivirale et l'autre partie sur cellules non infectées, pour déterminer la cytotoxité des produits. On infecte la première série de 3 puits avec HIV (100 μl par puits d'une suspension de virus LAV-1-BRU Barré-Sinoussi et coll.. Science, 220. 868 (1983) contenant environ 200 TCID50) tandis que l'autre série de 3 puits reçoit 100 μl de milieu RPMI tel que défini précédemment. Après 7 jours d'incuba¬ tion, 100 μl de surnageant sont prélevés et seront utilisés par la suite pour le dosage de la reverse transcriptase et de l'antigène p24. La viabilité cellulaire est déterminée selon une modification de la technique décrite par R. PAUWELS et coll., J. Virol. Meth., 2Û. 309-321 (1988).
Les puits, contenant encore les cellules (infectées ou non infectées), reçoivent 20 μl d'une solution de MTT (bromure de 4,5-di méthylthiazol-2-yl 2,5-diphényl tétrazolium) à 7 mg/ml dans du tampon phosphate isotonique. Pendant une période d'incubation de 3 heures, le MTT est converti en un sel de formazan (bleu) à l'intérieur des cellules vivantes et proportionnellement à leur nombre, alors que rien n'apparaît dans les puits ne contenant plus que des cellules mortes. On ajoute alors 100 μl d'isopropanol (contenant 0,04 mole/1 d'acide chlorhydrique) et les microplaques sont agitées jusqu'à la solubilisation du bleu de formazan. L'absorption à 540 nm est lue avec un lecteur automatique de réactions ELISA en microplaques. Dans ces conditions les cellules infectées sont lysées à environ 60-70 % par rapport aux cellules non infectées.
La formule :
DO (cell. traitées et inf.) - DO (cell. non traitées et inf.) DO (cell. traitées et non inf.) - DO (cell. non traitées et inf.)
permet de calculer le taux de protection (%) d'un produit déterminé.
Les résultats figurent ci-après dans le tableau I.
La multiplication virale a été déterminée par dosage de la transcriptase inverse du virus HIV.
L'activité de la transcriptase inverse est mesurée directement sur 50 μl de surnageant de culture. 10 μl de tampon contenant 0,5 M de KC1,
5 mM de dithiotreitol (DTT) et 0,5 % de triton X-100 sont ajoutés à tous les micropuits contenant les 50 μl de surnageant à tester. 40 μl de tampon contenant les 1,25 mM d'éthylène gly- col-bis ( -aminoéthyl éther) (EGTA) , 0,125 M de Tris.HCl pH 7,8, 12,5
3 mM de MgCl_, 3 μCi de ( H) thymidine triphosphate (TTP) , 0,05 DO-,...
2 260 d'acide polyadénylique - acide thymidylique (poly rA-oligo dT) sont ajoutés ensuite. La micro-plaque est couverte au moyen d'un film plastique et incubée 60 minutes à 37°C.
On arrête la réaction en ajoutant 20 μl d'une solution glacée de 120 mM de Na P O dans 60 % d'acide trichloracétique et les échantillons sont placés 15 minutes sur le lit de glace.
Les précipités sont filtrés sur fibres de verre en utilisant un laveur de cellules (Skatro ) et les filtres sont lavés avec une solution de 12 mM de Na P.O dans 5 % d'acide trichloracétique.
Les filtres sont séchés et la radioactivité est comptée après ajout d'un liquide scintillant.
L'activité transcriptase inverse TI est proportionnelle à la quantité de radioactivité acido-précipitable. Le % d'inhibition de la production virale est calculé au moyen de la formule : cpm surnageants de cellules traitées et inf.
1 - cpm surnageants de cellules non traitées et inf.
Enfin il a été également montré par le dosage de l'antigène p24, que les polymères utilisés selon la présente invention inhibent la réplication du virus.
Les dosages de la protéine p24 sont effectués au moyen d'un kit ELISA (Du Pont de Nemours) utilisé selon les indications du fabricant.
Les résultats obtenus dans les dosages de la trancriptase inverse et dans les dosages de la protéine p24 sont donnés ci-après dans le tableau I.
Figure imgf000012_0001
Tableau 1
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Ces résultats mettent notamment en évidence 1'inhibition totale de la production de transcriptase inverse et de protéine p24 dans le cas des produits des exemples 3, 5, 6 et 7. De plus les polymères utilisés selon l'invention présentent un intérêt considérable du fait de leur absence de toxicité à des concentrations élevées.
D'un intérêt particulier sont notamment les polymères suivants :
- polymère issu de la polymérisation de l'acide dihydroxy-2,4 benzoïque;
- polymère issu de la polymérisation de l'acide hydroxy-4 phénylacétique;
- polymère issu de la polymérisation de l'acide (carboxy-3 hydroxy- 4)benzyl-3 hydroxy-2 benzoïque;
- polymère issu de la polymérisation de l'acide (hydroxy-4 phényl)-3 propionique;
- polymère issu de la polymérisation de 1'acide hydroxy-4 phénoxy- acétique.
La présente invention concerne 1'obtention d'une composition pharmaceutique contenant au moins un polymère tel que défini précédemment, à l'état pur ou sous forme d'association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables.
Les compositions pharmaceutiques selon 1'invention sont capables d'inhiber la réplication des retrovirus et donc de réduire la progression vers la maladie ou de diminuer sa gravité chez les sujets infectés.
Notamment dans le cas des infections par le HIV, en inhibant la réplication de ce virus, elles sont capables de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets infectés. Les compositions pharmaceutiques selon 1'invention sont susceptibles d'empêcher ou de ralentir l'évolution des sujets infectés par retrovirus vers un stade aggravé de la maladie.
Elles peuvent être utilisées à titre préventif ou curatif. Par "préventif" on entend le fait de prévenir l'évolution chez des sujets présentant une immunodéficience et/ou infectés par retrovirus.
Bien entendu, la constitution de ces compositions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des immunodéprimés.
Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale ou rectale.
Les compositions stériles pour administration parentérale peuvent être de préférence des solutions aqueuses ou non aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer l'eau, le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle ou d'autres solvants organiques convenables. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, isotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple par filtration aseptisante, en incorporant à la composition des agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans un milieu stérile injectable.
Comme composition solides pour l'administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention (éventuellement associé à un autre produit pharmaceutiquement compa¬ tible) est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifinat tel que le stéarate de magnésium. Comme compositions liquides pour l'administration orale, on peut utiliser des émulsions pharmaceutiquement acceptables, des solutions, des suspensions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.
Les compositions pour administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le beurre de cacao, des glycérideε semi-synthétiques ou des polyéthylèneglycols.
D'une manière générale, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction de l'âge, du poids et des facteurs propres au produit et au sujet à traiter. Généralement chez l'adulte les doses sont comprises entre 50 et 500 mg par injection en 1 à 4 injections par jour, par voie intraveineuse.
Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la préparation des produits utilisés selon l'invention.
Exemple 1
3 On ajoute 1 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré - 95-98% en poids) , à 5 g (36,2 mmoles) d'acide salicylique (acide hydroxy-2 benzoïque) et 1,09 g (36,3 mmoles) de
3 trioxane dans 20 cm d'acide acétique à 90°C. Le mélange réactionnel est chauffé pendant 2 heures, refroidi à la température ambiante, dilué à l'eau et filtré. Le produit solide obtenu est lavé à l'eau, dissous dans l'ammoniaque et concentré à sec, a la chaleur, sous pression réduite.
Exemple 2
3 2,5 g d'acide dihydroxy-2,6 benzoïque (16,2 mmoles) dans 10 cm d'acide acétique sont chauffés à 90°C jusqu'à l'obtention d'une solution limpide. A l'écart de la chaleur, on ajoute 0,44 g de trio-
3 xane (14,61 mmoles) et agite pendant 2 minutes puis ajoute 0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré) . La solution est chauffée à 90°C pendant 1 heure, re¬ froidie, diluée à l'eau et filtrée. Le produit solide est lavé à l'eau, dilué avec une solution d'ammoniaque (3-1 en volumes - H O/NH OH concentré) , filtré et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Exemple 3
On ajoute 0,44 g de trioxane (14,61 mmoles) à une solution chauffée a
90°C de 2,5 g d'acide dihydroxy-2,4 benzoïque (16,2 mmoles) dans 10 3 cm d'acide acétique, puis agite le mélange pendant 2 minutes. 3 0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfu¬ rique (concentré) est ajouté et le mélange réactionnel est chauffé à 90°C pendant 2 heures, refroidi à température ambiante, dilué à l'eau et filtré. Le produit solide est lavé à l'eau, dissous dans une solution aqueuse diluée d'ammoniaque, filtré et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Exemple 4
On ajoute 0,49 g de trioxane (16,29 mmoles) à 2,5 g d'acide hydroxy-4 benzoïque (18,1 mmoles) chauffés à 90°C, puis agite le mélange
3 pendant 2 minutes. 0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré) est ajouté et le mélange réac¬ tionnel est chauffé pendant 3 heures, puis refroidi à température ambiante, versé dans l'eau et filtré. Le produit solide est dissous dans une solution aqueuse diluée d'ammoniaque, filtré et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Ex mple 5
On ajoute 0,44 g de trioxane (14,61 mmoles) à 2,5 g d'acide dihydro- xy-3,5 benzoïque (16,2 mmoles) dans 14 cm d'acide acétique chauffé à 90CC, puis agite le mélange pendant 5 minutes. 0,5 cm d'un mélange
4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré) est ajouté et le mélange reactionnel est agité pendant 3 heures, puis refroidi à température ambiante, dilué à l'eau et filtré. Le produit solide est dissous dans une solution aqueuse diluée d'ammoniaque, filtré et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Exemple 6
On ajoute 0,44 g de trioxane (14,61 mmoles) à 2,5 g d'acide hydroxy-4
3 phénylacetique (16,4 mmoles) dans 10 cm d'acide acétique chauffé à
3 90°C. 0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré) est ajouté et le mélange reactionnel est chauffé pendant 2 heures, puis refroidi à température ambiante, dilué à l'eau et filtré. Le produit solide est dissous dans une solution aqueuse diluée d'ammoniaque et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Exemple 7
On ajoute 0,40 g de trioxane (13,38 mmoles)"^T_ ,5 g d'acide hydroxy-4 phénoxyacétique (14,79 mmoles) dans 10 Gm d'acide acétique chauffé à
3 90°C. 0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré) est ajouté et le mélange reactionnel est chauffé pendant 30 minutes, puis refroidi à température ambiante, dilué à l'eau et filtré. Le produit solide est dissous dans une solution aqueuse diluée d'ammoniaque et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Exemple 8
On ajoute 0,40 g de trioxane (13,38 mmoles) à 2,5 g d'acide hydroxy-4 mandélique (14,88 mmoles) dans 10 cm d'acide acétique chauffé à 90°C. 0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfurique (concentré) est ajouté et le mélange reactionnel est chauffé pendant 20 minutes à 90 °C, puis refroidi à température am- biante, dilué à l'eau et filtré. Le produit solide est dissous dans une solution aqueuse diluée d'ammoniaque et concentré à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 40°C.
Exemple 9
Etape n° 1 : formation du dimère.
40 g d'acide salicylique (0,29 mole) et 3,5 g de trioxane (0,1164
3 mole) dans 50 cm d'acide acétique sont chauffés à 95°C jusqu'à ce que tout l'acide salicylique soit dissous. A l'écart de la chaleur,
3 on ajoute 0,5 g d'acide sulfurique dans 2,5 cm d'acide acétique.
Après 5 minutes, le mélange est versé dans 2 litres d'eau et agité pendant environ 30 minutes puis filtré. Le solide obtenu est dilué
3 avec 200 cm d'un mélange 1-1 acide acétique/eau, filtré, puis dilué par l'eau, filtré à nouveau, lavé et séché sous pression réduite.
Etape n°2 : polymérisation du dimère.
0,5 cm d'un mélange 4-1 (en volumes) d'acide acétique/acide sulfu¬ rique (concentré) est ajouté à 1,5 g de l'acide disalicylique obtenu précédemment [acide (carboxy-3 hydroxy-4)benzyl-3 hydroxy-2 benzoïque] (5,21 moles) et 0,47 g de trioxane (15,63 moles) dans 10
3 cm d'acide acétique. Le mélange reactionnel est chauffé pendant environ 4 heures à 90°C, puis refroidi à température ambiante, dilué à l'eau et filtré. Le résidu est dilué par une solution aqueuse diluée d'ammoniaque, concentré sur bain d'huile à 90°C et concentré à sec sous pression réduite.
Exemple 10
A une solution de 2,50 g d'acide (hydroxy-4 phényl)-3 propionique
(15,1 mmoles) et de 0,407 g de trioxane-1 ,3,5 (4,52 mmoles) dans
3 3 10 cm d'acide acétique à 90°C, on ajoute 0,5 cm d'une solution à
20% d'acide sulfurique concentré dans l'acide acétique. Le mélange est chauffé à 90°C pendant 2 heures, versé sur de l'eau glacée et filtré. Le solide obtenu est lavé à l'eau et dissous dans une solution aqueuse d'ammoniaque. Le polymère attendu est obtenu après concentration à sec sous pression réduite à une température inférieure ou égale à 45°C. Exemple 1 1
Une solution d'acide hydroxy-4 phénoxyacétique et d'acide chlorhy- drique concentré (2 gouttes) dans 30 cm de méthanol est agitée pendant 18 heures à température ambiante. L'hydroxy-4 phénoxy acétate de méthyle est obtenu après concentration à sec sous pression réduite et utilisé tel quel dans les étapes ultérieures.
Une solution de 0,5 cm d'une solution à 20% d'acide sulfurique concentré dans l'acide acétique est ajoutée à une solution de 2,50 g d'hydroxy-4 phénoxy acétate de méthyle (13,7 mmoles) et de 0,37 g de trioxane-1 ,3,5 (4,12 mmoles) dans 10 cm d'acide acétique à 90°C. Le mélange est chauffé à 90°C pendant 30 minutes, versé sur de l'eau glacée et filtré. Le solide obtenu est lavé abondemment à l'eau et séché sous pression réduite pour donner le polymère attendu.
Exemple, 12
Une solution de 3,45 g d'acide hydroxy-4 phénoxyacétique et d'acide chlorhydrique concentré (2 gouttes) dans 25 cm d'heptanol-1 est agitée pendant 18 heures à température ambiante. L'hydroxy-4 phénoxy acétate d'heptyle est obtenu après concentration à sec sous pression réduite et utilisé tel quel dans les étapes ultérieures.
3 Une solution de 0,5 cm d'une solution à 20% d'acide sulfurique concentré dans l'acide acétique est ajoutée à une solution de 2,50 g d'hydroxy-4 phénoxy acétate d'heptyle (9,39 mmoles) et de trioxa- ne-1,3,5 dans 10 cm d'acide acétique à 90°C. Le mélange est chauffé à 90°C pendant 30 minutes, versé sur de l'eau glacée et filtré. Le solide obtenu est lavé abondemment à l'eau et séché sous pression réduite. Le résidu obtenu est trituré dans l'éther éthylique puis l'hexane pour donner le polymère attendu.
Exemple 13
0,045 g de trioxane (1,5 mmoles) et 0,34 g d'acide hydroxy-4
3 phénéthylsulfonique sont mélangés dans 1 ,5 cm d'acide acétique soumis à un courant de gaz chlorhydrique pendant 10 secondes. Le mélange est chauffé à 90°C pendant 2 heures puis concentré à sec sous pression réduite. Le résidu est dissous dans une solution aqueuse d'ammoniaque. La solution obtenue est concentrée à sec sous pression réduite pour donner le polymère attendu sous forme de sel d'ammonium.
L'acide hydroxy-4 phénéthylsulfonique peut être obtenu de la manière suivante :
Un mélange de 0,42 g d'hydroxy-4 phénéthylsulfonate d'éthyle dans 8 cm*-5 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 12 % est agité à température ambiante pendant environ 18 heures, puis chauffé à 100°C pendant 5 heures et concentré à sec sous pression réduite pour donner 1'acide hydroxy-4 phénéthylsulfonique.
L'hydroxy-4 phénéthylsulfonate d'éthyle peut être obtenu de la manière suivante :
Une solution de 1,43 g de benzyloxy-4 phénéthylsulfonate d'éthyle dans 25 cm*-* d'acétate d'éthyle est additionnée de 0,25 g de palladium sur charbon (à 10 %) et le mélange est agité pendant 3 heures sous une pression de 2 atmosphères d'hydrogène. Le mélange est filtré et concentré à sec sous pression réduite pour donner l'hydroxy-4 phénéthylsulfonate d'éthyle.
Le benzyloxy-4 phénéthylsulfonate d'éthyle peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 4,84 g de benzyloxy-4 phénéthylsulfonate de sodium et de 0,5 cm*-5 de diméthylformamide dans 40 cm*-* de toluène, on ajoute goutte à goutte 1 ,35 cm3 de chlorure de thionyle et le mélange est chauffé à 90°C pendant environ 5 heures. Le mélange est refroidi à température ambiante puis additionné par portions à une solution de 30 cm*-5 d'éthanol absolu et de 15 cm*-* de pyridine à -2Q°C. Le mélange est agité pendant 5 heures puis la température est laissée remonter à 0°C. Le mélange est dilué par de l'acétate d'éthyle et une solution d'acide chlorhydrique à 10%. La phase organique est séparée et lavée par de l'acide chlorhydrique dilué, de l'eau, puis lavée par une solution de bicarbonate de sodium, par de la saumure et séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée à sec sous pression réduite pour donner le benzyloxy-4 phénéthylsulfonate d'éthyle.
Le benzyloxy-4 phénéthylsulfonate de sodium peut être préparé de la manière suivante :
Un mélange de 11 ,8 g de bromure de benzyloxy-4 phénéthyle et de 8,91 g de sulfite de sodium dans 40 cm^ d'alcool t.butylique et 80 cm3 d'eau est chauffé au reflux pendant 40 heures puis refroidi à température ambiante et filtré. Le solide est lavé par de l'eau et de l'éther éthylique pour donner le benzyloxy-4 phénéthylsulfonate de sodium.
Le bromure de benzyloxy-4 phénéthyle peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 8,29 g de benzyloxy-4 phénéthyl alcool et de 24,1 g tétrabromure de carbone dans 150 cm*-5 d'éther éthylique on ajoute par petites portions, 19,0 g de triphénylphosphine et le mélange ainsi obtenu est agité pendant environ 3 heures. Le surnageant est décanté, le solide est lavé avec de l'éther éthylique et les phases organiques réunies sont concentrées à sec sous pression réduite. Le produit brut est purifié par passage sur gel de silice pour donner le bromure de benzyloxy-4 phénéthyle.
Le benzyloxy-4 phénéthyl alcool peut être obtenu de la manière suivante :
Un mélange de 15,02 g d'hydroxy-4 phénéthyl alcool de 13,6 cm*-5 de bromure de benzyle et de 75,1 g de carbonate de potassium dans 250 cm*-5 d'acétone est chauffé au reflux pendant environ 4 heures. Le mélange reactionnel est refroidi et versé dans un mélange d'éther éthylique et d'eau. La phase organique est lavée avec de l'eau, avec une solution IN de soude, puis par de la saumure et séchée sur sulfate de magnésium. Après filtration et concentration à sec sous pression réduite, on obtient le benzyloxy-4 phénéthyl alcool. Exemple 1 4
A un mélange de 0,446 g d'acide hydroxy-4 benzyl phosphonique et de 0,0641 g (2,1 mmoles) de trioxane dans 4 cm3 d'acide acétique à 90°C, est ajoutée 0,5 cm3 d'une solution saturée d'acide chlorhydrique dans l'acide acétique. Le mélange est agité à 90°C pendant 2 heures. Le gaz chlorhydrique est introduit rapidement et le chauffage est poursuivi pendant 1 heure. Le mélange est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu est dissous dans une solution aqueuse d'hydroxyde d'ammonium et la solution ainsi obtenue est concentrée à sec sous pression réduite pour donner le polymère attendu sous forme de son sel d'ammonium.
L'acide hydroxy-4 benzyl phosphonique peut être obtenu de la manière suivante :
Un mélange de 1,77 g d'hydroxy-4 benzyl phosphonate de dibutyle dans 30 cm*-5 d'acide chlorhydrique à 18 %, est chauffé au reflux pendant environ 18 heures, puis concentré à sec sous pression réduite. Après trituration dans l'hexane, on obtient l'acide hydroxy-4 benzyl phosphonique.
L'hydroxy-4 benzyl phosphonate de dibutyle peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 4,07 g de benzyloxy-4 benzyl phosphonate de di¬ butyle dans 60 cm*-5 d'acétate d'éthyle, on ajoute 0,41 g de palladium sur charbon (à 10 %) et le mélange est agité sous une pression d'hydrogène de 1,7 atmosphère, pendant environ 20 heures. Le mélange est filtré, concentré à sec sous pression réduite et le résidu est purifié par Chromatographie Liquide Haute Performances CLHP, e"n éluant avec un gradient de 50-65 % d'acétate d'éthyle dans l'hexane, pour donner l' hydroxy-4 benzyl phosphonate de dibutyle.
Le benzyloxy-4 benzyl phosphonate de dibutyle peut être obtenu de la manière suivante :
Un mélange de 4,99 g de chlorure de benzyloxy-4 benzyle et de tri- n.butyl phosphite est chauffé à 50CC pendant environ 4 heures, tout en éliminant le chlorure de butyle. Le mélange est refroidi à la température ambiante et le produit brut est purifié par HPLC sur silice en éluant avec de l'acétate d'éthyle à 25 % dans l'hexane, pour donner le benzyloxy-4 benzyl phosphonate de dibutyle.
Exemple 15
En opérant comme décrit dans les exemples précédents, on prépare les polymères suivants :
- polymère issu de la polymérisation de l'acide (méthoxy-4 phényl)-3 propionique;
- polymère issu de la polymérisation de l'acide (benzyloxy-4 phény1)-3 propionique;
- polymère issu de la polymérisation de l'acide méthoxy-4 phénoxy¬ acétique;
- polymère issu de la polymérisation de l'acide benzyloxy-4 phénoxy¬ acétique.
L'exemple suivant décrit une composition pharmaceutique selon la présente invention.
Exemple
On prépare selon la technique habituelle, une solution injectable contenant :
- polymère obtenu par polymérisation de l'acide hydroxy-4 phénoxyacétique sous forme de son sel d'ammonium 100 mg
- eau pour préparation in ectable qsp 3 ml

Claims

REVENDICATIONS
1 - Application de polymères aromatiques biologiquement actifs ayant une stucture alcoylaryle comprenant 5 à 50 unités aromatiques répétitives, capables de former un squelette linéaire de structure secondaire hélicoïdale, dans laquelle le diamètre de ladite structure est inférieur à 3 fois le diamètre maximum du groupe aryle, pour obtenir un médicament destiné au traitement préventif et/ou curatif des infections à retrovirus.
2 - Application selon la revendication 1 , caractérisée en ce que le polymère est défini par la formule générale :
Figure imgf000031_0001
dans laquelle X est un radical hydroxy, alcoyloxy (contenant 1 à 4 atomes de carbone) ou benzyloxy et Y est un atome d'hydrogène ou bien X et Y sont identiques et représentent des radicaux hydroxy situés respectivement en position meta l'un par rapport à l'autre, R est un radical carboxy, carboxyalcoyle (éventuellement substitué par un radical hydroxy) , carboxyalcoyloxy, sulfo, sulfoalcoyle, sulfo- alcoyloxy, phosphono, phosphonoalcoyle ou phosphonoalcoyloxy, les portions alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone, R' représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 à 6 atomes de carbone et z est un nombre entier allant de 3 à 48, ainsi que ses sels, ses hydrates et ses esters dont le reste est un radical alcoyle droit ou ramifié contenant 1 à 7 atomes de carbone.
3 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est constitué d'un motif répétitif de structure dimère représenté par la formule générale :
Figure imgf000032_0001
dans laquelle X, Y, R et R' sont définis comme dans la revendication 2 et z est un nombre entier allant de 1 à 23, ainsi que ses sels, ses hydrates et ses esters dont le reste est un radical alcoyle droit ou ramifié contenant 1 à 7 atomes de carbone.
4 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est constitué d'un motif répétitif contenant au moins 3 cycles aromatiques de structure générale :
Figure imgf000032_0002
dans laquelle X, Y et R sont définis comme dans la revendication 2, ainsi que leurs esters tels que définis dans la revendication 2, ces cycles étant liés entre eux par un pont alcoylène -CR'R'- pour lequel R' est défini comme pour la revendication 2, ainsi que ses sels et ses hydrates.
5 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est issu de la polymérisation de l'acide dihydroxy-2,4 benzoïque.
6 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est issu de la polymérisation de l'acide hydroxy-4 phënylacétique.
7 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est issu de la polymérisation de l'acide (carboxy-3 hydroxy-4)benzyl-3 hydroxy-2 benzoïque.
8 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est issu de la polymérisation de l'acide (hydroxy-4 phényl)-3 propionique.
9 - Application selon la revendication 1 caractérisée en ce que le polymère est issu de la polymérisation de l'acide hydroxy-4 phénoxyacétique
10- Application d'un polymère selon l'une des revendications 1 à 9, pour obtenir un médicament destiné au traitement préventif et/ou curatif du SIDA ou de syndromes analogues.
11 - Préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement préventif et/ou curatif des infections à retrovirus contenant au moins un polymère défini dans l'une des revendications 1 à 9.
12- Préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement préventif et/ou curatif du SIDA ou de syndromes analogues, contenant au moins un polymère défini dans l'une des revendications 1 à 9.
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