WO1989009613A1 - Protective agent for radiation hazard - Google Patents

Description

明 細 書 放 射 線 障 害 防 護 剤 〔産業上の利用分野〕

本発明は、 人間用又は動物用の新規な医薬に関す る も の であ り 、 さ ら に詳 し く 言えば、 各種の放射線照射に よ る 障害の防護作用 を有する薬剤あ る い は放射線照射に よ り 惹起 さ れる造血機能障害等の回復を促進する薬剤に関 する 。

〔背景技術〕

近来、 医療用 に用 い られる 高エネルギーの X線、 ァ 線 等、 電磁波、 あ る いは宇宙線、 更に太陽光線に含まれる 紫外線な どの放射線に よ る障害、 特に悪性腫瘍、 癌、 白 血病に対する放射線照射療法における放射線に よ り 惹起 さ れる障害が問題視さ れてい る 。 放射線療法は、 外科手 術 と 並んで癌治療の根本的治療法であ る が、 放射線被曝 に よ る患者の早期障害の出現が、 放射線療法の有用性へ の評価、 期待を減弱せ しめてい る 。 早期障害に は、 造血 機能障害、 臓器、 皮膚、 粘膜に生 じ る線維化な どの局所 的障害、 消化器障害な.どがあ る が、 特に造血機能障害の 軽滅 * 回復は、 患者の予後、 延命期間の向上に必須であ かかる 放射線照射に よ り 惹起 される様 々 な障害を防護 で き る予防 · 治療剤を開発で き れば、 放射線療法に おい て患部に照射で き る放射線量を飛躍的に増量する こ と が 可能と な り 、 放射線に よ る癌の治療効果を更に高める こ と に寄与する こ と がで き る 。

これら放射線に よ る、 皮 J の紅斑、 色素沈着な どの初 期効杲、 皮膚の放射線火傷、 造血機能障害、 老化促進、 寿命の短縮な どの晚凳効杲、 ま た特に、 放射線療法が原 因 と な っ て発生する二次的な発癌の危険な どか ら患者を いかに防護する かは重要な課題であ る 。

また放射線取扱奢、 原子炉従事者の放射線被暴、 更に フ ロ ン ガス等に よ る上空の成層圏に あ る オ ゾン層破壊の ため、 よ り 強力な紫外線の被曝な どに よ る遺伝的影響、 発癌作用等に よ り 癌患者の増加が懸念されている 。

人間の皮膚は 280~ 320nmの波長の紫外線に敏感で、 特 に 305〜 310nmの領域の紫 線が皮膚癌を起こすと い う 。 こ の波長域の紫外線を吸収する オ ゾン層の破壊は地上に 降 り 注 ぐ紫外線を増加さ せ、 上記の よ う に皮膚癌の増大 につながる こ と が論議されているが、 かよ う な放-射線拔 曝の障害を、 予防 · 治療する薬剤を開癸する こ と も重要 な課題と な っ て き てい る 。

放射線被爆から生体を防護する薬剤 と して、 徒来、 含 硫ァ ミ ン化合物等が検討されて き たが、 臨床上適用 され る までに至っ ていない。 最近、 放射線障害防護剤 と して 米国で、 Amif ost ine (Walter Reed Army Inst-製 ） の臨- 床治験がな さ れて い る が、 副作用 の点で問題が存在す o

〔尧明の開示〕 本発明者 ら は、 Am if os tineの よ う な化学療法剤 と は異 な り 、 ま た生体に本来存在す る 防御能を増強す る よ う な 薬剤を 開発す る こ と を 目 的 と し て、 安全性の高い天然由 来の各種 ^ プチ ド類にっ き 、 放射線障害を 防護す る た め の予防 · 治療剤 と し て有用 な物質 を鋭意探索 し た。

そ の結果、 血清胸腺因子（Facteur thymique ser ique) と し て知 ら れ る ノ ナペ プチ ド（以下 FTSと 略記す る ） お よ びそ の誘導体又は それ ら の塩類が X線照射マ ウ ス の死亡 を確実に阻止 し、 生存な い し延命 さ せ る こ と を 見出 し た 本発明 は、 かかる 知見に基づいて な さ れた も の であ り 、 X線、 ァ 線、 紫外線な どに よ る 各種障害 を 防護す る ため の予防 · 治療剤 を提供す る も の であ る 。

本発明者 ら は ^に F T Sが多発性硬化症、 ギ ラ ン · パ レ 一症候群、 炎症性神経炎、 多発性神絰炎な どや他の免疫 性脱髄疾患な どの免疫不全を'伴 う 各種疾患の治療剤 と し て好適であ る こ と を 見出 し、 こ の よ う な治療剤 を 提供 し たが （特開昭 58-52225)、 FTSと し て知 ら れ る ノ ナぺ プチ ドが、 放射線障害 を 防護す る ため の予防、 治療効果を有 す る と い う 事実は、 従来技術か ら は全 く 予期 し得な い こ と であ り 、 本発明者 らに よ っ て初め て見出 さ れた こ と で あ る 。 か く し て本発明は、 下記の ア ミ ノ 酸配列 を有す る ノ ナペ プチ ド

pGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn

又は、 そ の C末端の ァ ス パ ラ ギ ン の カ ルボ キ シル基に お け る エ ス テル、 ア ミ ド又は、 そ れ ら の薬学的 に 許容 し得 る塩を有效成分と し て含有する こ と を特徵 と する放射線 障害防護剤を提供する も のであ る 。

本発明において使用される前記の ノ ナぺ プチ ドは-、 - 通 常べプチ ド合成に慣用 されている液相.又は固相における ペプチ ド合成法に よ り 、 困難な く 製造する こ と ができ る (これらの方法について-は、 特開昭 54— 16425号公報、 USP. 4301065を参照されたい） 。 あ る いはまた、 遺伝子 工学的、 細胞工学的手法に よ っ て も調製する こ と がで き る

本凳明において使用 される前記の ノ ナペ プチ ドの C末 端の ァ ス パ ラ ギ ン の 力 ル ポ キ シ ル基 に お け る エ ス テ ル は 薬学的に許容し得る カルボ ン酸のエ ス テル類であ り 、 そ の例 と し て は 、 メ チ ルエ ス テ ル、 ' ェ チ メレエ ス テ ル、 ブ ロ ピ ルエ ス テ メレ、 イ ソ プ ロ ビ Jレエ ス テ ル、 n — ブ チ Jレエ ス テ ル.、 イ ソ ブチ ル エ ス テ ル、. tert— ブチ ル エ ス テ ル、 n 一-ペ ン チ ル エ ス テ ル、 イ ソ ペ ン チ jレエ ス テ ル、 ネ オ ペ ン チ レ-エ ス テ メレ 、 tert—ペ ン チメレエ ス テ ジレ 、 n —へ キ シ ノレ エ ス テ メレ 、 sec—へ キ シ レ エ ス テ メレ 、 -へ ブ チ レ エ ス テ リレ 、 ォ ク チ ノレエ ス テノレ 、 s ec— ォ ク チ ソレエ ス テノレ 、 ter t— ォ ク チノレ エ ス テ ル 、 ノ ニソレ エ ス テ ノレ 、 デ シノレ エ ス テ ル 、 ゥ ン デ シ ノレエ ス テ ル、 ド デ シルエ ス テ ル、 ト リ デ シルエ ス テ ル、 テ ト ラ デ シ ルエ ス テ レ、 へ キ サ デ シ ル エ ス テ ル、 ォ ク タ デ シ ル エ ス テ ル、 ノ ナ デ シ レエ ス テ ル、 エ イ コ シ レエ ス テ ジレ 、 ^ ク ロ ペ ン チ レエ ス テ jレ、 シ ク ロ へ キ シノレ エ ス テル、 シ ク ロ へ プ チ ル エ ス テ ジレ 、 シ ク ロ ォ ク チ ル ェ ス テ ル、 ァ リ ル エ ス テ ル、 イ ソ ブ ロ ぺ ニ ル エ ス テ ル、 ベ ン ジ ル エ ス テ ル、 0 — 、 m — 、 又は p — ク ロ ノレベ ン ジ レ エ ス テ ソレ、 0 — 、 m — 、 又 は p — フ ノレ オ ノレべ ン ジ レ エ ス テ ル、 0 — 、 m — 、 又 は p — ブ ロ ム べ ン ジル エ ス テ ル、 o — 、 m — 、 又 は p — ョ ー ド ベ ン ジ ル エ ス テ ル、 0 — 、 m ― 、 又 は p — メ チ ノレ ベ ン ジリレ エ ス テ レ 、 0 — 、 m — 、 又は p — ェ チ ノレ べ ン ジ ノレ エ ス テ ノレ 、 o — 、 m — 、 又は p ー ィ ソ プ ロ ビルべ ン ジル エ ス テ ノレ、 シ ン ナ ミ ル エ ス テ ル ア ミ ノ エ チ ル エ ス テ ル、 0 — 、 m — 、 又は p — ァ ミ ノ べ ン ジ ル エ ス テ ル、 0 — 、 m — 、 又は p — 二 ト ロ べ ン ジ ル エ ス テ ノレ、 0 — 、 m — 、 又は p — メ ト キ シ ベ ン ジ ノレ エ ス テ ル 、 0 — 、 m — 、 又 は p — エ ト キ シ ベ ン ジル エ ス テ ル o — 、 m — 、 又は p — ア ミ ノ フ エ ネ チ ル エ ス テ メレ 、 な 一 フ レ フ リ ノレ エ ス テ ノレ 、 な 一 チ ェ ニ ノレ メ チ ノレ エ ス テ ノレ 、 _a 一 ピ リ ジ ル メ チ ル エ ス テ ル、 一 ピ リ ジル ェ チ ル エ ス テ ル、 ピ ペ リ ジ ノ メ チ ル エ ス テ ル、 な ー ピ ペ リ ジ ル メ チ ル エ ス テ ノレ、 モ ノレ ホ リ ノ エ チ ノレ エ ス テ レ、 な 一 モ ノレ ホ リ ニ ル メ チ ル エ ス テ ル な ど力 sあ げ ら れ る 。

ま た、 本発明 に おいて使用 さ れ る 前記の ノ ナペ プチ ド の C 末端の ァ スノく ラ ギ ン の 力 ルポ キ シル基に おけ る ア ミ ド は、 薬学的 に許容 し得る カ ルボ ン酸の ア ミ ド類であ り そ の 例 と し て は 、 ア ミ ド 、 メ チ，ル ア ミ ド 、 ェ チ ル ア ミ ド ブ ロ ピ ル ア ミ ド、 イ ソ ブ ロ ピ ル ア ミ ド 、 η — ブ チ ル ア ミ -ド 、 イ ソ ブ チ ル ア ミ ド、 t e r t— ブ チ ル ア ミ ド 、 n — ペ ン チ ル ア ミ ド 、 イ ソ ペ ン チ ル ア ミ ド 、 ネ オ ペ ン チ ル ア ミ ド t e r t—ペ ン チ ソレ ア ミ ド、 n —へ キ シ レア ミ ド、 s e c—へ キ シ ルア ミ ド 、 へ ブ チ ルア ミ ド 、 ォ ク チ ル ア ミ ド 、 s e c ー ォ ク チ ル ア ミ ド、 t e r t— ォ ク チ ル ア ミ ド、 ノ ニ ル ア ミ ド、 デ シルア ミ ド、 ゥ ン デ シルア ミ ド 、 ド デ シ ル ア ミ ド . ト リ デ シル ア ミ ド 、 テ ト ラ デ シル ア ミ ド 、 へ キ サ デ シ ル ア ミ ド、 ォ ク タ デ シルア ミ ド、 ノ ナ デ シル ア ミ ド、 エ イ コ シ ノレア ミ ド、 シ ク ロ ペ ン チ ノレ ア ミ ド、 シ ク ロ へ キ シノレ ア ミ ド、 シ ク ロ へ プ チ ルア ミ ド、 シ ク ロ ォ ク チ ル ア ミ ド ァ リ ノ kア ミ ド、 イ ソ ブ ロ ぺ ニル ア ミ ド、 ベ ン ジル ア ミ ド 0 —、 m — 、 又 は p —ク ロ ルべ ン ジ ル ア ミ ド、 0 —、 m 一、 又は p —フ ル オ ルべ ン ジ ルア ミ ド、 0 —、 m —、 又 は P - ブ ロ ム べ ン ジルア ミ ド、 o —、 m —、 又は p — ョ ー ドベ ン ジル ア ミ ド、 0 — 、 m—、 又は p — メ チ ルベ ン ジ ルア ミ ド、 o —、 m —、 又は p —ェ チルベ ン ジノレア ミ ド、 o —、 m — 、 又 は p —イ ソ プ ロ ピルべ ン ジル ア ミ ド シン ナ ミ ルア ミ ド、 ア ミ ノ エ チルア ミ ド、 0 —、 m—、 又は- P — ァ ミ ノ べ ン ジ ルア ミ ド 、 0 —、 m —、 —文は p — ニ ト ロ べ ン ジル ア ミ ド、 0 —、 m—、 又は p - メ ト キ シ ベ ン ジル ア ミ ド、 0 -、 m —、 又は p —エ ト キ シ ベ ン ジ ル ア ミ ド 、 0 —、 m — 、 又は p —ァ ミ ノ フ エ ネ チ ル ア ミ ド 、 な ー フ ソレ フ リ ソレ ア ミ ド 、 な 一チ ェ ニ リレ メ チ ル ア ミ ド cr — ピ リ ジル メ チ ルア ミ ド 、 な 一 ピ リ ジルェ チ ル ア ミ ド ピ ペ リ ジ ノ メ チ ル ア ミ ド、 ー ピペ リ ジル メ チ ル ア ミ ド モ ゾレ ホ リ ノ ェ チ ル ア ミ ド 、 '一モ リレ ホ リ ニ レ メ チ ゾレ ア ミ ド、 メ ト キ シ カ ル ボ 二 ル ー （ 一 メ ル カ ブ ト メ チ ル） メ チ ル ア ミ ド 、 エ ト キ シ カ ル ボ 二 ル ー （ な 一 メ ル カ ブ ト メ チ ル） メ チ ル ア ミ ド な どがあ げ ら れ る 。

ま た、 前述の薬学的に許容 し得 る 塩 と し て は、 前記の ノ ナ ぺ プチ ド の ア ミ ノ 基に おけ る 酸付加塩お よ びカ ルボ キ シ ル基に お け る 塩基塩があ げ ら れ る 。 酸付加塩 と し て は、 有機酸又は無機酸 と の各塩があ げ ら れ、 それ ら の例 と し て は、 例え ば、 ギ酸、 酢酸、 プ ロ ビオ ン酸、 ト ¹ j フ ルォ ロ 齚酸、 酒石酸、 フ マ ル酸、 り ん ご酸、 マ レ イ ン酸 し ゅ う 酸、 ナ フ ト ェ酸な どの カ ル ボ ン 酸 と の塩、 メ タ ン ス ル ホ ン酸、 p — ト ノレ エ ン ス ル ホ ン酸、 ナ フ タ レ ン ス ジレ ホ ン酸な どの ス ル ホ ン酸 と の塩、 塩酸、 硫酸、 硝酸、 リ ン酸な どの無機酸 と の塩、 があ げ ら れ る 。

上記の塩基塩 と し て は、 無機塩基 と の塩す な わ ち 、 ァ ル カ リ 金属塩、 ア ル カ リ 土類金属塩、 ア ン モ ニ ゥ ム塩、 あ る い は有機塩基 と の塩す な わ ち、 ァ ミ ン と の塩があ げ られ、 それ ら の例 と し て は、 リ チ ウ ム塩、 ナ ト リ ウ ム塩 カ リ ウ ム塩、 カ ル シ ウ ム塩、 ア ン モ ニ ゥ ム塩、 ト リ ェ チ ル ァ ミ ン 塩、 エ タ ノ ー ル ア ミ ン 塩、 ト リ ス 塩、 ジ シ ク ロ へ キ シ ル ァ ミ ン塩な どがあ げ ら れ る 。

本発明に係る 放射線.障害防護剤は、 そ の剤型に応 じ て 通常.慣用 の製剤手段を用 いて調製 さ れ る 。 す な わ ち、 上 記の ノ ナベ プチ ド な ら びに そ の エ ス テル又 は ア ミ ド誘導 体 も し く は それ ら の塩類か ら選ばれた有効成分物質 を、 適宜、 薬学的に許容 し得る 担体、 賦形剤、 希釈剤な どを 用 い て、 適当 な剤形に調製す る 。 剤型 は外用 、 経 口 投与 , 非経口投与等々 の投与経路に適した種種の剤形と する こ どがで き る 。

本発明に係る放射線障害防護剤の効果は下記の如き実 験に よ り 確認されている。 すなわち、 マ ウ ス、 ラ ッ ト 、 モルモ ッ ト 等哺乳動物ほかに X線照射装置 （島津製作所 製、 信愛 250 E )を用いて放射線を全身照射 した後、 30日 の生存率を求め、 その際、 上記の ノ ナペプチ ドの所定量 を放射線照射に先立っ て、 あ る いは、 照射直後か ら連 B あ る いは隔 日 に、 所定の期間、 腹腔内、 静注、 筋注、 皮 下注、 経口 な どの各種の投与ルー ト で投与 し、 動物の体 重を測定 し、 その生死を観察 した。 こ の実験結果に よ る と 、 た と えば対照群マ ウ スが全例死亡したのに対 して、 本癸明 に係 薬剤投与群では照射線量に応 じ て、 4 0 ~ 1 0 0 %の生存率である こ と が認め られ、 また、 薬剤投与 群においては、 死亡例のみについて も、 対照群に比べて 有意なあ る い は著明な延命効果が認め られた。 体重につ いても、 また、 薬剤投年群は、 対照群に比べて、 体重滅 少を有意に抑制 した。

—方、 致死線量あ る いは致死量以下の線量の放射線を 動物に全身照射したのち、 一定期間の血球数の変化を経 時的に測定 し、 造血機能障害回復.に対する薬剤の促進効 杲を調べた。 指標と した血球は、 赤血球、 網状赤血球、 リ ンパ球や好中球等の白血球、 血小板、 ヘモ グ ロ ビ ン、 へマ ト ク リ ッ ト 等であ る 。 本癸明に係る薬剤の投与に よ り 、 顕著に、 放射線照射に よ る これ ら血球の瘃少が抑制 さ れ、 ま た正常域に 回復す る のが促進 さ れ る こ と が認め ら れた。 更に薬剤投与群の免疫担当細胞の免疫応答、 即 ち脾臓細胞の コ ン カ ナ パ リ ン A (Con A) に対す る 応答能 胸腺細胞の ィ ン タ ー ロ イ キ ン一 1 (IL一 1 ：)に対す る 反応 性は、 全例死亡ま での間、 経 日 的に調べた と こ ろ 、 対照 群に比較 し て明 ら かに上回 る こ と が認め ら れた。 ま た免 疫担当細胞の液性因子の産生能、 す な わ ち 、 腹腔マ ク ロ フ ァ ー ジ （ M j^ ) の IL— 1 産生能、 脾臓細胞、 腹腔 の コ ロ ニ ー刺激因子（colony stimulating factor , CSF) 産生能 は、 同 じ く 、 対照群に比較 し て薬剤投与群が上回 つ て レ、 る こ と が認め ら れた。 即 ち 、 れ ら の知見に よ り 明 ら かな ご と く 、 本癸明に係る 薬剤は、 骨髄や脾臓等の 造血臓器に作用 し て、 造血機能障害の抑制効果あ る い は 回復促進効果を有す る 結果、 動物の延命あ る い は救命効 杲 を発揮す る も の と 解 さ れ、 放射線障害の予防 · 治療剤 と し て価値あ る 薬剤であ る 。

ま た、 担癌マ ウ ス の放射線に よ る 治療実験の際、 放射 線照射の前か ら、 あ る い は照射後 よ り 本発明 に係る 薬剤 を投 す る と 抗癌効果の増強が見 ら れ、 ま た そ の投与に よ り 放射線照射で惹起さ れ る 副作用が減少 し、 癌の治療 • に用 'レ、 う る 放射線の線量を効果的に増量す る こ と が可能 と な る 。 更に放射線照射に よ り 、 マ ウ ス は癌に な る こ と が知 ら れて い る が、 本発明 に係る 薬剤の一定期間の投与 に よ り 、 マ ウ ス の放射線発癌が阻止 さ れ る 。

本発明 に係る 薬剤に お け る 有効成分物質の毒性 を検討 する ため、 マウ ス に対 し、 有効成分物質 l O O m s Z fe を連 日 14日 間皮下投与 したが外見的に何ら異常は見 られなか つ た。 ま た、 ラ ッ ト に対 し、 有勃成分物質 30ms/も 2連日 21日 間、 皮下投与 したが、 外見的に も血清生化学的に も， ま た病理解剖を行っ た結果でも、 何 ら異常は見られなか つ た。 こ の よ う に、 本堯明に係る薬剤は、 き わめて毒性 の少ない安全な薬剤であ り 、 長期間投与する こ と が可能 て め 。

本発明に係る薬剤を投与する こ と ができ る対象動物と しては、 例えば ヒ ト 及びゥ シ、 ゥ マ、 ブタ 、 ヒ ッ ジ、 ャ ギ、 ゥサギ、 ィ ヌ、 ネ コ な どの家畜、 ラ イ オ ン、 ゾゥ、 キ リ ン、 ク マ、 ゴ リ ラ 、 サル、 チ ンノ ン ジ一な どの動物 園等で飼育されてい る哺乳類動物、 マ ウ ス、 ラ ッ ト 、 モ ルモ ッ ト ほか各種の実験動物、 ニ ヮ ト リ な どの家禽類、 ぺ ッ ト 用の鳥類、 爬虫類、 両棲類、 魚類な どがあげ られ る 。 その投与量は これ ら動物の体重 1 お あた り 通常、 0 .

500ms 日 で、 こ れ ら は、 例えば、 1 日 1 回〜 6 回 に分割投与 しても よ く 、 ま た投与対象者の年令、 病状な どに よ り 適宜投与量を増滅する こ と がで き る 。 その投与 経路は特に限定されな.いが、 静脈内、 筋肉内、 皮内、 皮 下に注射投与する こ と も でき る。' また軟耷剤を調製する こ と に よ り 、 眼部、 口腔内、 募腔内、 皮虜な どに塗布す る こ と ができ、 坐薬やゼ リ ー剤、 点眼剤、 点箅剤、 鼻口 腔吸収剤、 エア ロ ゾル剤、 噴霧剤、 経口剤な ど と して投 与する こ と も で き る 。 有効成分物質の生体内での急速な 分解あ る い は不活性化を阻止する ため に、 有効成分物質 を適当な製剤成分、 た と えば、 ア ル コ ー ル性、 レ シ チ ン な どの油性、 脂肪性の生理的に無害な固体ま た は液体材 料あ る い はそれ ら の懸濁物 リ ボ ソ ー ム な どを用 いて製剤 と し長時間活性が持銃する製剤 と する こ と も で き る 。 本発明に係る薬剤は、 他の薬剤、 た と えば免疫賦活剤 () biological response modif ierと 白血球滅少回復作 用 を有する と い う グル タ チ オ ン製剤、 ア デニ ン製剤、 セ フ ァ ラ ン チ ン製剤な ど と と も に投孚する こ と がで き 、 ま た、 これ ら を製剤中に添加 し、 合剤 と して臨床効果を高 める こ と がで き る 。

以下に実施例お よ び実験例を記載 し、 本発明 を よ り 詳 細に説明する が、 本発明は こ れ ら各例に よ っ て限定さ れ る も の で は な レヽ 。

実施例 1 注射用バ イ ア ル製剤

FTS'CH₃C00H'2H₂0(三井製薬工業社製） 1 を蒸留水に 溶解 し、 除菌 ロ 過 し、 パイ ア ル内 に充てん し、 凍結乾瘵 した。

実施例 2 注射用 ア ン ブル製剤

FTS*CH₃C00H'2H₂0(三井製薬工業社製） 5 mgfを生理食塩 水に溶解 し、 除菌 ロ過 し、 ア ン ブル内に充てん した。 実施例 3 皮下注射用注射剤

FTS.CH₃C00H*2H₂0(三井製薬工業社製）を単位投与量あ た り 2 ragを 2 % カ ル ボ キ シ メ チ ル セ ル ロ ー ス PBS( リ ン 酸 緩衝生理食塩水） 溶液中に懸濁 し、 大豆ホ ス フ ァ チ ドか ら な る Lipomal (Huhtamaki Oy Le i ras Pharmaceuticals 社製） あ る いは静脈用水中油型乳濁液であ る Intra l ipid ( Cutter Laboratories社製) と.混合 した。 Lipomalを用 いる場合は、 FTS溶解 PBS溶液と L i poma lは等量ずつ混ぜ 合わせた。

I ntra l ip i dを用レ、る場合は、 FTS溶解 PBS溶液 2.5rai2、 Tween 80CSigma Chem i ca 1 s社製） 0 · 1 及び Intral ip id 4.6mJ2を混ぜ合わせた。

実施例 4 リ ボ ソ ー ム製剤

'リ ボ ソ ー ム製剤に は、 電荷の異な る 3種穎があ り 、 そ れ らが、 更に構造上から、 4 種類に分類される 。

電荷は中性、 陽性、 陰性の 3 種であ り 、 構造的に は多 重層リ ボ ソ ー ム （MLV、 mul t i lame l lar ves ic le) 、 / さ な一枚膜 リ ポ ソ ー ム （SUV、 smal 1 uni larael lar ves i- c 1 e ) 、 および大き な一枚膜 リ ボ ソ ー ム （ LU V、 l a r g e uni lamellar vesicle).、 更に LIIV に近似の構造を有 しな カ ら数枚膜のもの ( R E V _v reverse-phase evaporat ion vesicle)の 4種鎮カ 知られてい る 。

① FTS 封入中性電荷 リ ボソ ー ム

ホ ス フ ァ チ ジル コ リ .ン類、 ス フ イ ン ゴ ミ エ リ ン等の リ ン脂質、 およ びコ レ ス テ ロ ー ルの ク ロ 口 ホ ル ム溶液を モ ル比 2 ： 1 、 4 ： 1 、 あ る いは 1 ： 1 と な る よ う に混合 し 、 一旦溶媒 を滅圧留去 し た も の に 、 脂質量 に 対 し 1/100- 1/1000¾ S: C FTS PBS ( リ ン酸緩衝生理食塩水） 溶液を添加 し、 Vortex mixerにて十分混和する と 、 MLV が得 られた。

更に、 リ ン脂質の相転移温度（Tc)以上で超音波処理す る こ と に よ り SUV が得 られた。

得 られた SUVに塩化カ ル シ ゥ ム水溶液を加え、 37。Cで 1 時間イ ン キ ュ ベー ト して融合さ せた後、 EDTAを添加 し 37。Cで 30分間ィ ン キュベー ト して Ca ^{+ +}を除 く と、 LUVカ 得 られた。

REV の調製法は以下の通 り であ る 。 すなわ ち脂質の ク . 口 口 ホ ル ム溶液か ら溶媒を減圧留去 し た後、 ジ ェ チ ル ェ 一テ ルを適当量加えて充分に溶解 した も のに、 FTSの PBS 溶液を加え、 超音波処理する と 均一な単相の溶液 と な つ た。 得 られた溶液を室温に て減圧濃縮 した後、 PB S溶液 を加え、 Vor-t ex m i xerに て充分に混和する と、 REV;^得 られた。

② FTS 封入陽性電荷 リ ボ ソ ー ム

脂質の構成成分が異な る だけで、 調製方法は上記中性 電荷 リ ポ ソ一'ム の場合 と 同様であ る 。

ホ ス フ ァ チ ジ レ コ リ ン類、 ス フ ィ ン ゴ ミ エ リ ン等の リ ン脂質、 コ レ ス テ ロ一ノレ、 およ びス テア リ ル ァ ミ ン等の 陽性電荷の高級脂肪族.ア ミ ン を モ ル比で 7 ： 2 ： 1 又は 4 ： 1 ： 1 で混合 し て、 脂質成分 と し、 同様の方法で FTS を封入 した。

③ FTS 封入陰性電荷 リ ボ ソ ー ム

ホ ス フ ァ チ ジル コ リ ン類、 ス フ イ ン ゴ ミ エ リ ン等の リ ン脂質、 コ レ ス テ ロ ー ルお よ びジ セ チ ル ホ ス フ ェ ー ト 、 ス ル フ ァ チ ド等の陰性電荷の高級脂肪族エ ス テ ル等を モ ル比で 7 ： 2 ： 1 又は 4 ： 1 ： 1 で混合 して、 脂貧成分 と し、 同様の方法で FTSを封入した。

実施例 5 軟 耷 剤

FTS*CH₃C00H'2H₂0(三井製薬工業社製） 2 を精製水に 溶解 した。 次に白色ワ セ リ ン 25 、 ス テ ア リ ルア ルコ ー ル 202、 HCO-60 4 ？ およ びモ ノ ス テ ア リ ン 酸 グ リ セ リ ン 1 9 を と り 、 混和 して予め調製 した プ ロ ピ レ ン グ リ コー ル 12 、 ノくラ オキ シ安息香酸メ チ ル 0.1 s、 パラ ォ キ シ安 息香酸プロ ビル O.lgの水溶液（FTS含有） を加えて十分に 混和し、 乳液と した後、 冷却 して固化する まで混和操作 を続けて調製した。

実施例 6 坐 剤 ·

FTS.CH₃C00H*2H₂0(三井製薬工業社製） 10^を予め加温 したハー ド フ ア ツ 卜 に分散 し、 全量を 2 sと した。

実施例 7 経身用 カ プ セ ル剤

FTS 0.05msfを無菌条件下で 29。95m9の ミ グ リ オル 812中 性油 （ダイ ナマ イ ト ノ ー ベル社製） に溶解 した。 こ の溶 液を常用の単位投与用投与器に充填 し、 これを使用前に 駆動カ プ セ ル に装着 した。

実施例 8 点 鼻 剤- 蒸留水に以下の量の リ ン酸二水素ナ ト リ ウ ム、 リ ン酸 水素ニナ ト リ ゥ ム 、 塩化ナ ト リ ゥ ム及び EDTA— ジナ ト リ ゥ ム 塩を室籙に て溶解 した。 こ の溶液に FTSを溶解 し、 メ ン ブ ラ ン フ ィ ル タ ー に よ り ^過 した。 F T S O.lOra?

リ ン酸一水素ナ ト リ ウム ' 2H₂0 0.30m リ ン酸ニ水素ナ ト リ ウム · 12H₂0 10.10 塩化ベンザルコニゥ ム O.lOra? エチ レンジァ ミ ン,四酢酸—ジナ ト

リ ウ ム塩 （EDTA) 0.50m^ 塩化ナ ト リ ウム 4.50^ 蒸 留 水 987.60^ PH 値 5.0±0.3 実施例 9 経鼻用 ス プ レ ー製剤

" FTS'CH₃C00H'2H₂0(三井製薬工業社製） 2 m₉を ヒ ド ロ キ シ プ ロ ピ ル セ ル ロ ー ス 又 は ヒ ド ロ キ シ プ ロ ビ ル メ チ ル セ ル ロ ー ス に懸濁 し 、 噴霧製剤機に て ス プ レ ー用剤 と し た。

以下に、 本発明の薬剤に関する薬理実験、 毒性実験の 例を掲げる 。

実験例 1 800レ ン 卜 ゲン（ R )照射マ ウ ス に おける効果 雄性 10週令の C3H/Heマ ウ ス を 1 群 10〜 15匹用意 した。 X線照射装置 （島津製作所社製 信愛 250 E )を用 い て マ ウ ス に 8 分間、 全身照射を行っ た。 実施例 1 で用 いた FTS * CH ₃ C00H ' 2H ₂0をマ ウ ス に、 1 日 1 回 ずつ、 皮 下投孚 し、 14日 間連統投与 した。 前投与群は、 照射の 2 曰 前よ り 投牟を開始 した。 後投与群は、 照射直後第 1 回 目 の投与を行っ た。 対照群 と し て 、 ピ シ バ ニ ー ル 1 KEを 照射直後 1 回だけ皮下投与 した群及び生理食塩水を連 日 投与する群を用意 した。 結果を表 1 に示す。 表 1 から明 らかな よ う に、 本発明に係る薬剤は、 放射線照射に よ る

—マ ウ スの死亡を、 明瞭に、 予防あ る いは阻止する こ と が 示され、 放射線障害の予防 · 治療剤 と して価値が明 らか に された。 特に前投与群の場合は、 その効果はよ り.顕著 な も のであ っ た。

表 1 8 0 0 R X線照射マウ スにおける効果

使 用 X 線照射後の 日 数及び生存数 (：曰） 投 与 動物数 10 1 1 12 13 14 15 16 17 18 19 20 25 30 生理食塩水 10 10 10 9 8 . 8 3 1 0 薬剤前投与

15 15 15 15 15 15 14 13 1 1 1 1 1 1 9 9 9 薬剤後投与

n9 15 15 15 15 14 13 10 8 6 6 6 6 5 5 ピシバニ一ル

1 KE後投与 10 10 10 9 7 7 5 1 0

実験例 2 900 R照射マ ウ ス における効果

実施例 1 と 同様に して 9 分間 X線照射後、 0、 1、 2、 3 4、 5、 7、 8、 9、 10、 11、 12日 目 に計 12回、 1 日 1 回、 100 の FTS*CH₃C00H*2H₂0をマウ スに皮下投与した。 結 杲を表 2 に示す。 FTS投与群は 900R と い う 高い放射線量 被曝に対 して延命 した。

表 2 9 0 0 R X線照射マウ スにおける効果

使 用 X線照射後の 日 数及び生存数 （日） 投 与 動物数 9 10 1 1 12 13 14 15 16 18 20 21 23 生理食塩水 15 15 13 13 4 . 3 0 薬剤後投与 15 15 13 12 12 7 4 3 2 2 2 1 0

実験例 3 600 R照射マ ウ ス における効果

実施例 1 、 '2 と 同様に して X線を 6 分間マ ウ ス に照射 し た。 照射の 2 日 前よ り 、 連銃 14 S 間、 薬剤 と して、 FTS*CH₃C00H。2H₂0を I 日 1 回、 100/^ずつ皮下投与 した。 致死線量以下の X線照射であ つ たが、 19日 後に対照群は 生存数が 10匹中 4 匹と な り 半数以上が死亡したが、 薬剤 投与群は 10匹中 10匹全例が生存 した。 結果を表 3 に示す

表 3 6 0 0 R X線照射マウ スにおける効果

使 用 X線照射後の 日 数及び生存数 c曰：） 投 与 動物数 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 30 生理食塩水

投与 10 10 10 10 9 8 8 7 7 6 5 5 4 4 薬剤前投与

l OOM 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

実験例 4 血液検査

実験例 3 で行っ た生死観察用マ ウ ス に対する照射 ど は 別に、 血液検査を経 日 的 に行 う た め の マ ウ ス に対 し、 600 R の X線照射を行っ た。 さ ら に、 別の群のマ ウ ス を 用意し、 こ の群に対 しては 400 R の X線照射を行っ た。

600 R照射群、 400 R照射群のそれぞれについて各 2 群に 分け、 前記薬剤 l OOit 前投与群と対照群と した。 各マウ ス について経日 的に採血し、 常法に よ り 、 その白血球数 CWBC) , 赤血球数（EBC：)、 網状赤血球数（RET：)、 血小板数 (PLT), へ モ グ ロ ビ ン数 (HGB), へ マ ト ク リ ツ ト 値（HCT) を測定 した。

代表例を表 4 に示すが。 薬剤投与に よ り 、 X線照射マ ウ スの各血液パ ラ メ ータ 一は、 対照群に比 して明 らかに 改善さ れている こ と が認め られた。

表 4 血 液 検 査 血 液 パ ラ メ 一 夕 一

処 置 動物数 WB C RBC RET p L T HGB H C τ 正 常 群 3 52.6±9.4 749.3土 7.5 26.0±6.6 556。3±28.8 13。3士 0.1 41。2±0。3

X線 600R、 生食、 7日目 5 3。8士 1.6 547.0土 26.8 13.2土 5.4 162.8土 5.3 9,6±0。3 30.3土し 0

X線 600R、 薬剤、 7日目 5 34.2±25.2* 691.8土 96.1* 24.6士 10.9 372.0± 174.7* 12.3±1.9* 39.1±5。5**

X線 400R、 生食、 14日目 3 3.3±0,9 397.0士 160.2 U.0±4.5 76.6士 35.4 6.0±2.1 22.0±8.8

X線霍、 薬剤、 14日目 3 522.7士 21.7 30.0±6.5* 240.6土 14.3** 8.8士 0.3 29.8±1.4

T検定： *Pく 0.05, **P<0.01, ***P<0.001

実験例 5 .体重測定

実験例 3 の各実験群のマ.ウ ス の体重を連 日 測定 し、 体 重変化を観察 した。 結杲を表 5 に示すが、 薬剤投与群は 対照群に比べ、 歴然と体重が上回 っ ている こ と が認め ら れた。

表 5 体 体重 (?) 〔平均値土 S.D.〕 (動物数）

T検定： ***Ρ<0.001, **Ρ<0.01

実験例 6 毒性試験

ddY系 5 週令錐性マ ウ ス 1 群 5 匹に、 有効成分物質 50 m /fe3及び lOOmg/fesをそれぞれ連日 14日間、 皮下投与 したが、 何ら毒性は見 られなかっ た。

実験例 7 毒性試験

5 週令の ウ ィ ス タ ーラ ッ ト 1 群 10匹に、 有効成分物質

を連日 21日 間、 皮下投与 したが、 何 ら'毒性は見 られなかっ た。

以上述べたよ う に、 従来、 わずかに使用 されてい る 白 血球減少回復用剤以外殆 ど有効な薬剤が存在 しない、 放 射線障害を防護する ための医療領域において、 本凳明に 係る薬剤は、 免疫系あ る いは生体防御系を ¾性化する こ と に よ り 放射線障害に対 し優れた予防 · 治療効果を も た らす点で画期的な も のであ る 。 また、 本発明において使 用する ノ ナペ プチ ド（FTS) は動物由来のぺブチ ドであ り 天然物質であ る ので、 類似のア ミ ノ 酸配列を持つ FTS類 縁体 （アナ ロ ー グ） と 異な り 、 生体において も全 く 無毒 であ り 、 抗原性、 アナ フ ラ キ シー シ ョ ッ ク な どの問題も 存在 しない。 従っ て、 本発明に係る薬剤は、 安全かつ有 用 な人間用 、 動物用 の.医薬 と し て使用す る こ と がで き る 。

Claims

5H 求 の 範 囲 下記のァ ミ ノ 酸配列

pGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn を有す る ノ ナぺ プチ ド又は、 そ の C 末端の ァ ス ノ、' ラ ギ ン の カ ルボ キ シル基に お け る エ ス テル、 ア ミ ド又は、 それ ら の薬学的に許容 し得る 塩を有効成分 と し て含有す る こ と を特徵 と す る 放射線障害防護剤。