JPH06135849A - 心臓組織・細胞の損傷・破壊に対する予防・治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】アミノ酸：ｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ
−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎを有するノ
ナペプチド又は、そのＣ末端のアスパラギンのカルボキ
シル基におけるエステル、アミド又はそれら各化合物の
薬学的に許容し得る塩又はそれら各化合物と金属との結
合物を有効成分として含有する。 【効果】上記化合物は心臓組織・細胞の損傷・破壊およ
び心臓機能の低下に対する予防・治療剤として有効であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、人間用又は動物用の新
規な医薬に関するものであり、さらに詳しく言えば、外
来異物・薬物による心臓組織・細胞の損傷・破壊および
それらによる傷害に対し、予防、治療するのに有用な藥
剤に関する。

【０００２】

【背景技術】心臓は動物生体の中枢器官の１つであり、
外来異物による心臓組織・細胞の損傷・破壊および心臓
機能の低下は重大・危急である。各種心臓病薬、血圧調
節薬、向精神薬、抗菌・抗ウイルス剤・抗生物質、抗癌
剤等の化学療法剤ほかによる薬物療法、また、先天的・
遺伝的な心臓損傷あるいは細菌・ウイルスの感染、放射
線照射等による心臓組織・細胞の損傷・破壊や心臓の機
能低下から心臓を防護し、それらによる傷害を治療する
ための薬剤の開発が望まれてきている。しかしながら、
そのような薬剤はこれまでに提供されていない。。ま
た、各種の要因による、あるいは要因不明の種々の心筋
炎、心筋症、心内・外膜炎等について、これらを予防・
治療する薬剤として、特異的に有効なものはなく、新た
な人間用または動物用の医薬の開発が期待されている。

【０００３】薬物投与により惹起される心臓組織・細胞
の損傷・破壊および心臓機能の低下等の副作用を防護し
得る予防・治療剤の開発は、薬物療法においてヒトある
いは動物に使用し得る薬剤の投与量を増量することを可
能とし、各種の心臓病、高血圧、低血圧、各種の感染
症、癌、免疫疾患、代謝病ほか各種疾患の薬物療法また
心臓移植などにおける治療効果を更に高めることを可能
にするので、極めて重要なことである。

【０００４】

【発明の開示】本発明者らは、生体に本来存在する生体
防御能を増強するような薬剤を開発することを目的とし
て、安全性の高い天然由来の各種ペプチド類につき、心
臓組織・細胞の損傷・破壊および心臓機能の低下等を防
護するための予防・治療剤として有用な物質を鋭意探索
した結果、血清胸腺因子（Ｆａｃｔｅｕｒ ｔｈｙｍｉ
ｑｕｅ ｓｅｒｉｑｕｅ、以下ＦＴＳと略記する）とし
て知られるノナペプチドおよびその誘導体又はそれらの
塩類又はそれら各化合物と金属との結合物がキニジン等
各種抗不整脈剤等心臓病薬、降圧剤、昇圧剤、抗凝固
剤、甲状腺ホルモン、インスリン、ビタミンＤ、エタノ
ール、イミプラミン等向精神薬、抗生物質、アドリアマ
イシン、５−ＦＵ、サイクロホスファミド等抗癌剤など
を投与されたマウス、ラット、ハムスター、スナネズ
ミ、モルモット、ウサギ、イヌ、サル、バブーンに惹起
される心臓組織・細胞の損傷・破壊および心臓機能の低
下を防護し、これらの傷害を予防・治療すること、さら
にはこれらを原因とする動物の死亡を阻止することを見
出した。

【０００５】また細菌、ウイルスの感染、放射線照射等
によるマウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、モル
モット、ネコ、イヌ、ニワトリ、七面鳥等の心臓組織・
細胞の損傷・破壊および心機能の低下あるいは先天的
に、自然に発症するこのような症状を防護し、傷害を予
防・治療することさらにはこれらを原因とする動物の死
亡を阻止することを見出した。本発明はかかる知見に基
づいてなされたものであり、各種薬剤の生体投与、細菌
・ウイルスの感染、放射線照射等により惹起される心臓
の傷害を防護するための予防・治療剤を提供するもので
ある。 更に本発明は、心臓の虚血時また虚血後の再灌
流時におこる組織・細胞の損傷・破壊および心臓機能の
低下あるいは先天的、自然発生的心臓障害の悪化を防護
する予防・治療剤を提供するものである。更に本発明
は、心臓移植手術の際の心臓保存中に生じる組織・細胞
の傷害、心臓の機能低下を防護する方法を提供するもの
である。

【０００６】本発明者らは先にＦＴＳとして知られるノ
ナペプチドが多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、炎
症性神経炎、多発性神経炎などや他の免疫性脱髄疾患な
どの免疫不全を伴う各種疾患の治療剤として、また老化
防止、細胞賦活、老人病予防・治療のための薬剤として
好適であることを見出し、このような治療剤を提供した
（特開昭５８−５２２２５、特開平１−３１６３２
８）。ここに、ＦＴＳとして知られるノナペプチドが、
薬剤投与、放射線照射、細菌・ウイルス感染、虚血、心
臓移植等による心臓障害たとえば、種々の心筋炎、心筋
症、心内・外膜炎、狭心症、心不全、心筋梗塞、川崎病
等々の疾患を防護するための予防、治療効果を有すると
いう事実はまた心臓移植手術の際、心停止液にノナペプ
チドを添加することにより心臓の傷害を低減できるとい
う事実は、従来技術からは全く予期し得ないことであ
り、本発明者らによって初めて見出されたことである。

【０００７】本発明は、下記のアミノ酸配列 ｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ を有するノナペプチド又は、そのＣ末端のアスパラギン
のカルボキシル基におけるエステル、アミド又はそれら
各化合物の薬学的に許容し得る塩又はそれら各化合物と
金属との結合物を有効成分として含有することを特徴と
する心臓組織・細胞の損傷・破壊および心臓機能の低下
に対する予防・治療剤を提供するものである。

【０００８】本発明において使用される前記のノナペプ
チドは公知物質であって、通常ペプチド合成に慣用され
ている液相又は固相におけるペプチド合成法により、困
難なく製造することができる（製造方法については、、
詳細には、特開昭５４−１６４２５号公報、ＵＳＰ４，
３０１，０６５に記載されている）。あるいはまた、こ
のノナペプチドは、遺伝子工学的、細胞工学的手法によ
っても調製することができる。

【０００９】本発明において使用される前記のノナペプ
チドのＣ末端のアスバラギンのカルボキシル基における
エステルは、薬学的に許容し得るカルボン酸のエステル
類であり、その例としては、メチルエステル、エチルエ
ステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ｎ
−ブチルエステル、イソブチルエステル、ｔｅｒｔ−ブ
チルエステル、ｎ−ペンチルエステル、イソペンチルエ
ステル、ネオペンチルエステル、ｔｅｒｔ−ペンチルエ
ステル、ｎ−ヘキシルエステル、ｓｅｃ−ヘキシルエス
テル、ヘプチルエステル、オクチルエステル、ｓｅｃ−
オクチルエステル、ｔｅｒｔ−オクチルエステル、ノニ
ルエステル、デシルエステル、ウンデシルエステル、ド
デシルエステル、トリデシルエステル、テトラデシルエ
ステル、ヘキサデシルエステル、オクタデシルエステ
ル、ノナデシルエステル、エイコシルエステル、シクロ
ペンチルエステル、シクロヘキシルエステル、シクロヘ
プチルエステル、シクロオクチルエステル、アリルエス
テル、イソプロペニルエステル、ベンジルエステル、ｏ
−、ｍ−、又はｐ−クロルベンジルエステル、ｏ−、ｍ
−、又はｐ−フルオルベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、
又はｐ−ブロムベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ
−ヨードベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メチ
ルベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エチルベン
ジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−イソプロピルベン
ジルエステル、シンナミルエステル、アミノエチルエス
テル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノベンジルエステル、
ｏ−、ｍ−、又はｐ−ニトロベンジルエステル、ｏ−、
ｍ−、又はｐ−メトキシベンジルエステル、ｏ−、ｍ
−、又はｐ−エトキシベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、
又はｐ−アミノフエネチルエステル、α−フルフリルエ
ステル、α−チエニルメチルエステル、α−ピリジルメ
チルエステル、α−ピリジルエチルエステル、ピペリジ
ノメチルエステル、α−ピペリジルメチルエステル、モ
ルホリノエチルエステル、α−モルホリニルメチルエス
テルなどがあげられる。

【００１０】また、本発明において使用される前記のノ
ナペプチドのＣ末端のアスパラギンのカルボキシル基に
おけるアミドは、薬学的に許容し得るカルボン酸のアミ
ド類であり、その例としては、アミド、メチルアミド、
エチルアミド、プロピルアミド、イソプロピルアミド、
ｎ−ブチルアミド、イソブチルアミド、ｔｅｒｔ−ブチ
ルアミド、ｎ−ペンチルアミド、イソペンチルアミド、
ネオペンチルアミド、ｔｅｒｔ−ベンチルアミド、ｎ−
ヘキシルアミド、ｓｅｃ−ヘキシルアミド、ヘプチルア
ミド、オクチルアミド、ｓｅｃ−オクチルアミド、ｔｅ
ｒｔ−オクチルアミド、ノニルアミド、デシルアミド、
ウンデシルアミド、ドデシルアミド、トリデシルアミ
ド、テトラデシルアミド、ヘキサデシルアミド、オクタ
デシルアミド、ノナデシルアミド、エイコシルアミド、
シクロペンチルアミド、シクロヘキシルアミド、シクロ
ヘプチルアミド、シクロオクチルアミド、アリルアミ
ド、イソプロペニルアミド、ベンジルアミド、ｏ−、ｍ
−、又はｐ−クロルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又は
ｐ−フルオルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ブ
ロムベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ヨードベン
ジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メチルベンジルアミ
ド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エチルベンジルアミド、ｏ
−、ｍ−、又はｐ−イソプロピルベンジルアミド、シン
ナミルアミド、アミノエチルアミド、ｏ−、ｍ−、又は
ｐ−アミノベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ニト
ロベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メトキシベン
ジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エトキシベンジルア
ミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノフエネチルアミド、
α−フルフリルアミド、α−チエニルメチルアミド、α
−ピリジルメチルアミド、α−ピリジルエチルアミド、
ピペリジノメチルアミド、α−ピペリジルメチルアミ
ド、モルホリノエチルアミド、α−モルホリニルメチル
アミド、メトキシカルボニル−（α−メルカプトメチ
ル）メチルアミド、エトキシカルボニル−（α−メルカ
プトメチル）メチルアミドなどがあげられる。

【００１１】また、前述の薬学的に許容し得る塩として
は、前記のノナペプチドのアミノ基における酸付加塩お
よびカルボキシル基における塩基塩があげられる。酸付
加塩としては、有機酸又は無機酸との各塩があげられ、
それらの例としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン
酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、フマル酸、りんご酸、
マレイン酸、しゅう酸、ナフトエ酸などのカルボン酸と
の塩、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナ
フタレンスルホン酸などのスルホン酸との塩、塩酸、硫
酸、硝酸、リン酸などの無機酸との塩、があげられる。

【００１２】上記の塩基塩としては、無機塩基との塩す
なわち、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモ
ニウム塩、あるいは有機塩基との塩すなわち、アミンと
の塩があげられ、それらの例としては、リチウム塩、ナ
トリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム
塩、トリエチルアミン塩、エタノールアミン塩、トリス
塩、ジシクロヘキシルアミン塩などがあげられる。

【００１３】前記の各化合物と金属との結合物における
金属としては亜鉛、鉄、マグネシウム、コバルト、ニッ
ケル、クロム、金、ゲルマニウム、ガリウム、カリウ
ム、カルシウム、アルミニウム、銅、マンガン、セレン
などの１価、２価、３価、４価の金属が例示される。

【００１４】本発明に係わる心臓組織・細胞の損傷・破
壊、心臓機能の低下等の障害の予防・治療剤は、その剤
型に応じて通常慣用の製剤手段を用いて調製される。す
なわち、上記のノナペプチドならびにそのエステル又は
アミド誘導体もしくはそれらの塩類又はそれら各化合物
と金属との結合物から選ばれた有効成分物質を、適宜、
薬学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤などを用い
て、適当な剤形に調製する。剤形は外用、経口投与、非
経口投与等々の投与経路に適した種々の剤形とすること
ができる。

【００１５】本発明に係わる心臓組織・細胞の損傷・破
壊、心臓機能の低下等の障害の予防・治療剤の効果は下
記の如き試験により確認されている。

【００１６】すなわち、マウス、ラット、ハムスター、
スナネズミ、モルモット、イヌ、サル、バブーン等哺乳
動物を用い、これらの動物に対し、ジギタリス等の強心
剤、ベラパミル等の心不全用剤、各種の抗不整脈用剤、
降圧剤、昇圧剤、クロルプロマジンや三環系抗うつ剤等
の向精神薬、イソプロテレノールのような鎮暈剤、エピ
ネフリンやノルエピネフリンのような副腎ホルモン剤、
抗菌剤、抗ウイルス剤などの抗生物質、アドリアマイシ
ン、ダウノマイシンおよびこれら同族類の抗癌剤さらに
その他の抗癌剤の所定量を経口あるいは非経口で投与
し、一定期間経時的に血液検査、尿検査などを行い、心
臓逸脱酵素のクレアチンホスフォキナーゼ（ＣＰＫ）、
ラクテートデヒドロゲナーゼ（乳酸脱水素酵素、ＬＤ
Ｈ）、α−ヒドロキシブチリックデヒドロゲナーゼ（α
−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ、ＨＢＤ）、またミ
オシン軽鎖、キヌレニン、組織トロンボプラスチン、カ
ルシウムなどを測定し、その際、上記のノナペプチドの
所定量をこれら薬剤の投与に先立って、あるいは投与直
後から、連日あるいは隔日に、所定の期間、腹腔内注
射、皮下注、筋注、静注、経口などの各種の投与ルート
で投与し、対照群とノナペプチド投与群との間の血液、
尿検査値、体重測定値さらには生存率などを比較・観察
した。

【００１７】またＸ線やγ線などの放射線を照射したマ
ウス等、また脳・心筋ウイルス（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍ
ｙｃａｒｄｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、エンテロウイルス
（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、コクサッキーウイルス
（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス
（ｐａｒｖｏ ｖｉｒｕｓ）などを感染させたマウス、
ラット、イヌ等、また心筋症を自然発症するマウス、ゴ
ールデン・シリアンハムスター、七面鳥等、さらに心臓
を傷害する各種ウイルスの感染したネコ、イヌ、ニワト
リなど、さらにまた自己免疫性の心筋炎、心筋症を惹起
させたマウス、ラット、モルモットなどを実験動物とし
て用意し、上記と同様の試験を行った。

【００１８】これらの試験結果によると、対照群マウ
ス、ラット、ハムスターに関しては、薬剤の投与量の増
加に応じて、あるいは心筋炎、心筋症の発症に従い、心
臓組織損傷・破壊の程度が増し、心臓逸脱酵素の量の増
大あるいは減少が一定の期間認められ、更には死亡に至
るものが現れるのに対して、ノナペプチド投与群におい
ては、心臓逸脱酵素の量の増大あるいは減少が抑制され
るか、あるいは、正常化すること、さらに死亡を阻止す
ることが認められた。

【００１９】一方、心臓機能を電気生理学的に検討する
ことによっても、また各動物の心臓採取による組織の生
化学的検査（Ｃａ量、組織トロンボプラスチン、アクト
ミオシン−ＡＴＰアーゼ活性などの測定）を行うことに
よっても、ノナペプチド投与群において各パラメーター
は、対照群に比べて、正常コントロール動物に近いか正
常化した値をとることが示された。さらに心臓を虚血に
したラット、イヌにおいて、再灌流し、その時の心機能
の回復の状況およびＣＰＫ，ＬＤＨ、ＨＢＤ、ミオシン
軽鎖、キヌレニン、組織トロンボプラスチン、Ｃａなど
を測定すると、前記のノナペプチド投与群には大動脈血
流の増量、心臓逸脱酵素の正常化が認められた。また、
心臓標本の組織化学的病理学的検査においても、ノナペ
プチド投与群には、正常化が認められた。

【００２０】本発明に係わる薬剤における有効成分物
質、ノナペプチドの毒性を検討するため、マウスに対
し、有効成分物質１００ｍｇ／ｋｇを連日１４日間皮下
投与したが外見的異常は何ら認められなかった。また、
ラットに対し、上記有効成分物質３０ｍｇ／ｋｇ連日２
１日間、皮下投与したが、外見的にも血清生化学的にも
異常は認められず、また、病理解剖を行った結果でも、
何ら異常は認められなかった。このように、本発明に係
わる薬剤は、きわめて毒性の少ない安全な薬剤であり、
長期間投与することが可能である。

【００２１】本発明に係わる薬剤を投与することができ
る対象動物としては、例えばヒトをはじめとし、ウシ、
ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコなどの
家畜、ライオン、ゾウ、キリン、クマ、ゴリラ、サル、
チンパンジーなどの動物園等で飼育されている哺乳類動
物、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、モルモ
ットほか種々の実験動物、ニワトリ、七面鳥などの家禽
類、ペット用の鳥類、爬虫類、両棲類、魚類などがあげ
られる。

【００２２】その投与量はこれら動物の体重１ｋｇあた
り通常、０．１μｇ〜５００ｍｇ／日で、これらは、例
えば、１日１回〜６回に分割投与してもよく、また投与
対象動物の年齢、病状などにより適宜投与量を増減する
ことができる。その投与経路は特に限定されないが、静
脈内、筋肉内、皮内、皮下いずれの経路によっても注射
投与することができる。また、軟膏剤を調製することに
より、眼部、口腔内、鼻腔内、皮膚などに塗布すること
ができ、坐薬やゼリー剤、点眼剤、点鼻剤、鼻口腔吸収
剤、エアロゾル剤、噴霧剤、経口剤などとして投与する
こともできる。

【００２３】前記の有効成分物質の生体内での急速な分
解あるいは不活性化を阻止するために、前記の有効成分
物質を適当な製剤成分、たとえば、アルコール性物質、
レシチンなどの油性、脂肪性の生理的に無害な固体また
は液体の材料あるいはそれらの懸濁物、リポソームなど
を用いて製剤とし長時間活性が持続する製剤とすること
もできる。

【００２４】本発明に係わる薬剤は、他の薬剤、たとえ
ば免疫賦活剤等 ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｓｐｏｎｓ
ｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒや各種の心臓病薬、血圧調節薬、
化学療法剤などとともに投与することができ、また、こ
れらを製剤中に添加し、合剤として臨床効果を高めるこ
ともできる。

【００２５】以下に実施例および実験例を記載し、本発
明をより詳細に説明するが、本発明はこれら各例によっ
て限定されるものではない。以下の各実施例、実験例に
おいて、前記のノナペプチドをＦＴＳと略記する。

【００２６】

【実施例】

実施例１ 注射用バイアル製剤 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ（三井製薬工業社
製）１ｍｇを蒸留水に溶解し、除菌ロ過し、バイアル内
に充てんし、凍結乾燥した。

【００２７】実施例２ 注射用アンプル製剤 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ（三井製薬工業社
製）５ｍｇを生理食塩水に溶解し、除菌ロ過し、アンプ
ル内に充てんした。

【００２８】実施例３ 皮下注射用注射剤 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ（三井製薬工業社
製）を単位投与量あたり２ｍｇを２％カルボキシメチル
セルロースＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）溶液中に懸
濁し、大豆ホスフアチドからなるＬｉｐｏｍａｌ（Ｈｕ
ｈｔａｍａｋｉＯｙ／Ｌｅｉｒａｓ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌｓ社製）あるいは静脈用水中油型乳濁液で
あるＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｃｕｔｔｅｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ社製）と混合した。Ｌｉｐｏｍａｌを用
いる場合は、ＦＴＳ溶液ＰＢＳ溶液とＬｉｐｏｍａｌは
等量ずつ混ぜ合わせた。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄを用いる
場合は、ＦＴＳ溶解ＰＢＳ溶液２．５ｍｌ、Ｔｗｅｅｎ
８０（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）０．１
ｍｌ及びＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ４．６ｍｌを混ぜ合わせ
た。

【００２９】実施例４ リポソーム製剤 リポソーム製剤には、電荷の異なる３種類があり、それ
らが、更に構造上から、４種類に分類される。電荷は中
性、陽性、陰性の３種であり、構造的には多重層リポソ
ーム（ＭＬＶ、ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉ
ｃｌｅ）、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ、ｓｍａｌ
ｌ ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ）、およ
び大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ、ｌａｒｇｅ ｕｎ
ｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ）、更にＬＵＶに
近似の構造を有しながら数枚膜のもの（ＲＥＶ、ｒｅｖ
ｅｒｓｅ−ｐｈａｓｅ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ ｖｅ
ｓｉｃｌｅ）の４種類が知られている。

【００３０】 ＦＴＳ封入中性電荷リポソーム ホスフアチジルコリン類、スフインゴミエリン等のリン
脂質、およびコレステロールのクロロホルム溶液をモル
比２：１、４：１、あるいは１：１となるように混合
し、一旦溶媒を減圧留去したものに、脂質量に対し１／
１００〜１／１０００当量のＦＴＳのＰＢＳ（リン酸緩
衝生理食塩水）溶液を添加し、Ｖｏｒｔｅｘ ｍｉｘｅ
ｒにて十分混和すると、ＭＬＶが得られた。

【００３１】更に、リン脂質の相転移温度（Ｔｃ）以上
で超音波処理することによりＳＵＶが得られた。

【００３２】得られたＳＵＶに塩化カルシウム水溶液を
加え、３７℃で１時間インキュベートして融合させた
後、ＥＤＴＡを添加し、３７℃で３０分間インキュベー
トしてＣａ^＋＋を除くと、ＬＵＶが得られた。

【００３３】ＲＥＶの調製は次のとおりにして行った。
脂質のクロロホルム溶液から溶媒を減圧留去した後、ジ
エチルエーテルを適当量加えて充分に溶解したものに、
ＦＴＳのＰＢＳ溶液を加え、超音波処理し、均一な単相
の溶液とし、得られた溶液を室温にて減圧濃縮した後、
ＰＢＳ溶液を加えＶｏｒｔｅｘｍｉｘｅｒにて充分に混
和することにより、ＲＥＶが得られた。

【００３４】 ＦＴＳ封入陽性電荷リポソーム 脂質の構成成分が異なるだけで、調製方法は上記の中性
電荷リポソームの場合と同様である。

【００３５】ホスフアチジルコリン類、スフインゴミエ
リン等のリン脂質、コレステロール、およびステアリル
アミン等の陽性電荷の高級脂肪族アミンをモル比で７：
２：１又は４：１：１で混合して、脂質成分とし、同様
の方法でＦＴＳを封入した。

【００３６】 ＦＴＳ封入陰性電荷リポソーム ホスフアチジルコリン類、スフインゴミエリン等のリン
脂質、コレステロールおよびジセチルホスフエート、ス
ルフアチド等の陰性電荷の高級脂肪族エステル等をモル
比で７：２：１又は４：１：１で混合して、脂質成分と
し、上記と同様の方法でＦＴＳを封入した。

【００３７】実施例５ 軟膏剤 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ（三井製薬工業社
製）２ｍｇを精製水に溶解した。次に白色ワセリン２５
ｇ、ステアリルアルコール２０ｇ、ＨＣＯ−６０４ｇお
よびモノステアリン酸グリセリン１ｇをとり、混和して
予め調製したプロピレングリコール１２ｇ、パラオキシ
安息香酸メチル０．１ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル
０．１ｇの水溶液（ＦＴＳ含有）を加えて充分に混和
し、乳液とした後、冷却して固化するまで混和操作を続
けて軟膏剤を調製した。

【００３８】実施例６ 坐剤 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ（三井製薬工業社
製）１０ｍｇを予め加温したハードファットに分散し、
全量を２ｇとした。

【００３９】実施例７ 経鼻用カプセル剤 ＦＴＳ０．０５ｍｇを無菌条件下で２９．９５ｍｇのミ
グリオル８１２中性油（ダイナマイトノーベル社製）に
溶解した。この溶液を常用の単位投与用投与器に充填
し、これを使用前に駆動カプセルに装着した。

【００４０】実施例８ 点鼻剤 蒸留水に対し、以下の処方にしたがいリン酸二水素ナト
リウム、リン酸水素二ナトリウム、塩化ナトリウム及び
ＥＤＴＡ−ジナトリウム塩を室温にて溶解し、この溶液
にＦＴＳを溶解し、メンブランフィルターにより濾過し
た。

【００４１】 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ ０．１０ ｍｇ リン酸一水素ナトリウム・２Ｈ_２Ｏ ０．３０ｍｇ リン酸二水素ナトリウム・１２Ｈ_２Ｏ １０．１０ｍｇ 塩化ベンザルコニウム ０．１０ｍｇ エチレンジアミン四酢酸−ジナトリウム塩（ＥＤＴＡ） ０．５０ｍｇ 塩化ナトリウム ４．５０ｍｇ 蒸留水 ９８７．６０ｍｇ ｐＨ値 ５．０±０．３

【００４２】実施例９ 経鼻用スプレー製剤 ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ（三井製薬工業社
製）２ｍｇをヒドロキシプロピルセルロース又はヒドロ
キシプロピルメチルセルロースに懸濁し、噴霧製剤機に
てスプレー用剤とした。

【００４３】以下に、本発明の薬剤に関する薬理実験、
毒性実験の例を掲げる。

【実験例】

実験例１ アドリアマイシン投与マウスにおける効果 雄性・９週令のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウス（日本ＳＬＣ）を
３群に分け用意した。第１群のマウス５匹にはアドリア
マイシン（協和発酵）１２ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与２日前
から７日間連続、ＦＴＳ・ＣＨ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ
（以下各実験例の記載中、ＦＴＳ物質と略記する）を生
理食塩水に溶かし、１日１回１０μｇずつ皮下投与し
た。第２群のマウス５匹には第１群のＦＴＳ物質のかわ
りに、生理食塩水を０．１ｍｌずつ皮下投与した。第３
群の４匹のマウスには生理食塩水のみを７日間連続皮下
投与し、正常コントロール群とした。

【００４４】アドリアマイシン投与後７日目にエーテル
麻酔下に、マウスの腋下大動静脈を切断し、採血し、常
法により血清生化学検査を行った。正常コントロール群
の血清ＣＰＫ値は１４１±３２ｍＵ／ｍｌであり、ＬＤ
Ｈ値は２０８６±１１２ｍＵ／ｍｌであった。アドリア
マイシン＋生食投与群の植は、ＣＰＫ；２８２±７０、
ＬＤＨ；１６１４±２１０であった。これに対しアドリ
アマイシン＋ＦＴＳ物質投与群の値は、ＣＰＫ；９９±
３、ＬＤＨ；２０６５±２３４であった。ＦＴＳ物質投
与群と生食投与群との間には、ＣＰＫについてはｐ＜
０．０１、ＬＤＨについてはｐ＜０．０５で有意差があ
り、ＦＴＳ物質投与群は血清生化学値が正常化すること
が示され、心臓組織の破壊・損傷が、ＦＴＳ物質投与に
より阻止されることが明らかにされた。

【００４５】実験例２ エトポシド投与マウスにおける
効果 実験例１におけるアドリアマイシンのかわりに、エトポ
シド（日本化薬）を２０ｍｇ／ｋｇマウスに投与した。
他の条件は実験例１とすべて同じである。正常コントロ
ール群の血清ＣＰＫ値は１４１±３２ｍＵ／ｍｌであ
り、ＬＤＨ値は２０８６±１１２ｍＵ／ｍｌであった。
エトポシド＋生食投与群の値は、ＣＰＫ；８３±１０、
ＬＤＨ；１６０９±１７１であった。これに対しエトポ
シド＋ＦＴＳ物質投与群の値は、ＣＰＫ；１１３±１
０、ＬＤＨ；２７１４±１７１であった。ＦＴＳ物質投
与群と生食投与群との間には、ＣＰＫについてはｐ＜
０．０１、ＬＤＨについてはｐ＜０．０１で有意差があ
り、ＦＴＳ物質投与群は心臓損傷のパラメーターを改善
することが示された。

【００４６】実験例３ 放射線照射マウスにおける効果 実施例１におけるアドリアマイシンのかわりに、８００
ＲのＸ線をマウスに照射した。他の条件は実験例１とす
べて同じである。正常コントロール群の血清ＣＰＫ値は
１４１±３２ｍＵ／ｍｌであり、ＬＤＨ値は２０８６±
１１２Ｕ／ｍｌであった。Ｘ線＋生食投与群の値は、Ｃ
ＰＫ；８２±１６、ＬＤＨ；２４５２±２５８であっ
た。れに対しＸ線＋ＦＴＳ物質投与群の値はＣＰＫ；１
５４±４１、２４２５±２４１であった。ＦＴＳ物質投
与群と生食投与群との間にはＣＰＫにおいてｐ＜０．０
１で有意差があり、ＦＴＳ物質投与群は心臓損傷のパラ
メーターを正常化することが示された。

【００４７】実験例４ アドリアマイシン投与マウスの
ＦＴＳ物質投による死亡阻止、延命効果 雄性９週令のＢＡＬＢ／ｃマウス（日本クレア）を各群
２０匹、６群に分け用意した。第１群のマウスにはアド
リアマイシン（協和発酵）１２ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与７
日前から７日間連続、ＦＴＳ物質を生食に溶かし、１日
１回０．１μｇずつ皮下投与した。第２群のマウスには
第１群に投与したＦＴＳ物質の用量を１．０μｇにか
え、他の条件はすべて同じで処置した。以下第３群には
ＦＴＳ物質を１０μｇ、第４群には１００μｇ、第５群
には１０００μｇ投与した。第６群のマウスには生理食
塩水のみを７日間連続皮下投与し、正常コントロール群
とした。経日的に各群のマウスの生存数を調べた。結果
を表１に示す。ＦＴＳ物質はアドリアマイシン投与によ
る急性的な死亡をよく阻止することが明らかにされた。

【００４８】実験例５ アドリアマイシン投与マウスの
ＦＴＳ物質投与による死亡阻止、延命効果 実験例４と同様にして、ＢＡＬＢ／ｃマウス各群２０
匹、４群に分け用意し、第１群のマウスにはアドリアマ
イシン１２ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与７日前から７日間連
続、ＦＴＳ物質を１日１回１０μｇずつ皮下投与した。
第２群のマウスにはアドリアマイシン投与３日前から３
日間連続、ＦＴＳ物質を１０μｇずつ皮下投与した。第
３群にはアドリアマイシン投与１日前から１日、ＦＴＳ
物質を１０μｇ皮下投与した。第４群には生理食塩水の
みを７日間連続皮下投与し、正常コントロール群とし
た。経日的に各群のマウスの生存数を調べた。結果を表
２に示す。実験例４と同様、ＦＴＳ物質の薬効が確認さ
れた。

【００４９】実験例６ アドリアマイシン投与ラットに
おける効果 雄性９週令のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（日
本ＳＬＣ）を３群に分け、各群３匹ずつを用意した。第
１群のラットには、アドリアマイシン（協和発酵）２．
５ｍｇ／ｋｇを週１回、６週間連続、静脈内投与した。
第２群には、初回のアドリアマイシン投与２日前から７
日間、更に２回目から６回目までのアドリアマイシン投
与の際、その２日前から３日間、ＦＴＳ物質を生理食塩
水に溶解したものを背部皮下に投与した。第３群には生
理食塩水のみを背部皮下に投与し、正常コントロール群
とした。投与日時は、第２群と同様である。

【００５０】アドリアマイシン投与後５週目にエーテル
麻酔下、下大静脈より採血し、常法により血清生化学検
査を行った。正常コントロール群の血清ＣＰＫ値は１１
４０±２４６ ｍＵ／ｍｌであり、ＬＤＨ値は３３４７
±３９ｌｍＵ／ｍｌであった。アドリアマイシン＋生食
投与群の血清ＣＰＫ値は１４９２±１９２ｍＵ／ｍｌ、
ＬＤＨ値は５１３５±９４５ｍＵ／ｍｌであった。これ
に対し、アドリアマイシン＋ＦＴＳ物質投与群の血清Ｃ
ＰＫ値は１１６３±６３ｍＵ／ｍｌ、ＬＤＨ値は３７１
３±３７２ｍＵ／ｍｌであった。アドリアマイシン＋生
食投与群に対するアドリアマイシン＋ＦＴＳ物質投与群
の有意差検定の結果、ＣＰＫ値についてはｐ＜０．０
５、ＬＤＨ値についてはｐ＜０．０１の危険率で有意な
増加抑制が認められた。

【００５１】また血清中Ｃａ値は、正常コントロール群
では９．３±０．４ｍｇ／ｄｌ、アドリアマイシン＋生
食投与群で１０．７±０．３ｍｇ／ｄｌ、アドリアマイ
シン＋ＦＴＳ物質投与群で８．８±０．７ｍｇ／ｄｌで
あった。アドリアマイシン＋生食投与群に対するアドリ
アマイシン＋ＦＴＳ物質投与群の有意差検定の結果、ｐ
＜０．０１の危険率で、有意な増加抑制が認められ、Ｆ
ＴＳ物質投与群は以上のように心臓損傷のパラメーター
を改善することが認められた。

【００５２】実験例７ 毒性試験 ｄｄｙ系５週令雄性マウス１群５匹に、有効成分物質５
０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇをそれぞれ連日１４
日間、皮下投与したが、何ら毒性は見られなかった。

【００５３】実験例８ 毒性試験 ５週令のウイスターラット１群１０匹に、有効成分物質
３０ｍｇ／ｋｇを連日２１日間、皮下投与したが、何ら
毒性は認められなかった。

【００５４】以上述べたように、各種の薬物療法、放射
線照射、細菌、ウイルス感染などの外来異物に基づくあ
るいは先天的・遺伝的な心臓組織・細胞の損傷・破壊、
また心臓の機能低下などから心臓を防護し、傷害を治療
するための薬剤、より具体的には、各種の要因による、
あるいは要因不明の種々の心筋炎、心筋症、心内・外膜
炎等を予防・治療する薬剤はこれまでに実用化されてい
ないが、本発明に係わる薬剤は、直接的に、あるいは間
接的に種々の作用を通して生体防御系を活性化して、上
記のような心臓組織・細胞の損傷・破壊、心臓の機能低
下等に対し優れた予防・治療効果をもたらす点で画期的
なものである。また、本発明において使用するノナペブ
チド（ＦＴＳ）は動物由来のペプチドであり天然物質で
あるので、類似のアミノ散配列を持つＦＴＳ類縁体（ア
ナローグ）と異なり、生体においても全く無害であり、
抗原性、アナフラキシーショックなどの問題も存在しな
い。従って、本発明に係わる薬剤は、安全かつ有用な人
間用、動物用の医薬として使用することができる。

【表１】

【表２】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記のアミノ酸配列 ｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−
   Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ を有するノナペプチド又は、そのＣ末端のアスパラギン
   のカルボキシル基におけるエステル、アミド又はそれら
   各化合物の薬学的に許容し得る塩又はそれら各化合物と
   金属との結合物を有効成分として含有することを特徴と
   する心臓組織・細胞の損傷・破壊および心臓機能の低下
   に対する予防・治療剤。