UA99766C2 - NOVEL FUNCTIONALLY ACTIVE, HIGHLY PURIFIED, STABLE PEG-INTERFERON ALPHA CONJUGATE REPRESENTED BY ONE POSITIONAL ISOMER PEG- NaH WITH REDUCED IMMUNOGENITY, PROLONGED BIOLOGICAL ACTION, USEFUL FOR MEDICINAL USE, WITH IMPROVED PHARMACOKINETIC PARAMETERS AND IMMUNOBIOLOGICAL AGENT BASED THEREON - Google Patents
NOVEL FUNCTIONALLY ACTIVE, HIGHLY PURIFIED, STABLE PEG-INTERFERON ALPHA CONJUGATE REPRESENTED BY ONE POSITIONAL ISOMER PEG- NaH WITH REDUCED IMMUNOGENITY, PROLONGED BIOLOGICAL ACTION, USEFUL FOR MEDICINAL USE, WITH IMPROVED PHARMACOKINETIC PARAMETERS AND IMMUNOBIOLOGICAL AGENT BASED THEREON Download PDFInfo
- Publication number
- UA99766C2 UA99766C2 UAA201015114A UAA201015114A UA99766C2 UA 99766 C2 UA99766 C2 UA 99766C2 UA A201015114 A UAA201015114 A UA A201015114A UA A201015114 A UAA201015114 A UA A201015114A UA 99766 C2 UA99766 C2 UA 99766C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- peg
- ifn
- conjugate
- formula
- hepatitis
- Prior art date
Links
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title abstract description 13
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 title abstract 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title abstract 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010054979 Secondary immunodeficiency Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 58
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 11
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 6
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 6
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 claims description 2
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 claims description 2
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 2
- 101150070878 Ereg gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150086986 Pigu gene Proteins 0.000 claims 1
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 claims 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 claims 1
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 9
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 abstract description 5
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 18
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 16
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 15
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 14
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 13
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 11
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 10
- -1 tresylate Chemical compound 0.000 description 9
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 6
- 108010092851 peginterferon alfa-2b Proteins 0.000 description 6
- 229940106366 pegintron Drugs 0.000 description 6
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical class CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 4
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 2
- 238000012454 limulus amebocyte lysate test Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N valeric aldehyde Natural products CCCCC=O HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical compound C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- FKOKUHFZNIUSLW-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxypropyl stearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(C)O FKOKUHFZNIUSLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDXQWYKOKYUQDN-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical class OC1CC(=O)NC1=O JDXQWYKOKYUQDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 4-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical class CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 101100291267 Drosophila melanogaster Miga gene Proteins 0.000 description 1
- 229920005682 EO-PO block copolymer Polymers 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 description 1
- 241000202943 Hernandia sonora Species 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 239000012480 LAL reagent Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010023849 Laryngeal papilloma Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000021394 Veia Species 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- AZHSSKPUVBVXLK-UHFFFAOYSA-N ethane-1,1-diol Chemical class CC(O)O AZHSSKPUVBVXLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004090 etiopathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229920001973 fluoroelastomer Polymers 0.000 description 1
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004811 fluoropolymer Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHUSDOQQWJGJQS-UHFFFAOYSA-N glycerol 1,2-dioctadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC UHUSDOQQWJGJQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229950000038 interferon alfa Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000009000 laryngeal papillomatosis Diseases 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003509 long acting drug Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000019988 mead Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940093625 propylene glycol monostearate Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940001482 sodium sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- FDRPZJWMPZUHBN-UHFFFAOYSA-N triazin-2-ium;chloride Chemical class Cl.C1=CN=NN=C1 FDRPZJWMPZUHBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Даний винахід належить до фармацевтики і медицини, а саме, до нових фізіологічно активних кон'югатів інтерферону, зокрема, до нових кон'югатів інтерферону з поліетиленгліколем, що можна використовувати в медицині, наприклад, для лікування вірусних, імунних і онкологічних захворювань.This invention belongs to pharmaceuticals and medicine, namely, to new physiologically active conjugates of interferon, in particular, to new conjugates of interferon with polyethylene glycol, which can be used in medicine, for example, for the treatment of viral, immune and oncological diseases.
Інтерферони (ІФН) - це група біологічно активних білків або глікопротеїдів, що продукуються різними клітинами у відповідь на вірусну інфекцію або при впливі на клітини деяких хімічних і біологічних речовин (Ізаас5 8 І іпдетап, 1957; Ревзіка еї аї., 2007). Зв'язування ІФН із клітинними рецепторами приводить до індукції синтезу цілого ряду внутрішньоклітинних білків, що опосередковують противірусну, імуномодулюючу та антипроліферативну дію ІФН (РезікКа еї аї., 2004;Interferons (IFNs) are a group of biologically active proteins or glycoproteins produced by various cells in response to a viral infection or when cells are exposed to certain chemical and biological substances (Izaas5 8 I ipdetap, 1957; Revzika ei ai., 2007). The binding of IFN to cellular receptors leads to the induction of the synthesis of a number of intracellular proteins that mediate the antiviral, immunomodulatory and antiproliferative effects of IFN (RezikKa ei ai., 2004;
Веків2, 2004).Vekiv2, 2004).
Гени різних ІФН людини були клоновані і експресовані в бактеріальних і тваринних клітинах, в результаті було отримано та очищено багато рекомбінантних ІФН (РебікКа еї а!., 2004; Ревзіка, 2007).The genes of various human IFNs were cloned and expressed in bacterial and animal cells, as a result, many recombinant IFNs were obtained and purified (RebikKa ei a!., 2004; Revzika, 2007).
Лікарські препарати, що містять рекомбінантні ІФН, застосовуються в клінічній практиці для лікування цілого ряду вірусних, онкологічних і імунних захворювань (РебзікКа еї аї!., 2004; Спемаїіе? 5. РаулоївКу, 2009).Medicinal preparations containing recombinant IFNs are used in clinical practice for the treatment of a number of viral, oncological and immune diseases (RebzikKa ei ai!., 2004; Spemaiie? 5. RauloivKu, 2009).
На даний час препарати на основі ІФН застосовуються в клінічній практиці для лікування цілого ряду вірусних, онкологічних і імунних захворювань (Ревзіка еї аї., 2004). Найбільш широке використання препарати ІФН одержали для лікування вірусних гепатитів (Спемаїіе? 5. Раулої5Ку, 2009), що представляють одну з найбільш серйозних соціальних проблем. На даний час у світі нараховується близько 350 млн. хронічно хворих гепатитом В та 170 млн. хворих гепатитом С (МагсейПп, 2009). Захворювання гепатитом С в більшості випадків набуває хронічного плину з формуванням тяжких наслідків - цирозу печінки і гепатоцелюлярної карциноми (Мод 5. Гіапоу, 2008). За даними ВООЗ з 1961 року в США і країнах Західної Європи хронічні гепатити і цирози печінки, як причина смерті, перемістилися з 10 на 5 місце (МагсейПп, 2009). Відомо також застосування препаратів, що містять ІФН-с для лікування ряду лейкозів і солідних пухлин, у тому числі рецидивної меланоми (Викому»зкКі еї аї., 2002; Оесапігів еї аї., 2002; Оіпа5-Сагдата єї а!., 2006).Currently, preparations based on IFN are used in clinical practice for the treatment of a number of viral, oncological and immune diseases (Revzika, 2004). IFN drugs are most widely used for the treatment of viral hepatitis (Spemaiie? 5. Rauloi5Ku, 2009), which represent one of the most serious social problems. Currently, there are about 350 million chronic hepatitis B patients and 170 million hepatitis C patients in the world (MagseyPp, 2009). Hepatitis C disease in most cases takes a chronic course with the formation of severe consequences - cirrhosis of the liver and hepatocellular carcinoma (Mod 5. Giapou, 2008). According to WHO data, since 1961 in the USA and Western European countries, chronic hepatitis and liver cirrhosis have moved from 10th to 5th place as a cause of death (MagseyPp, 2009). The use of preparations containing IFN-c for the treatment of a number of leukemias and solid tumors, including recurrent melanoma, is also known (Vykomu»zkKi ei ai., 2002; Oesapigiv ei ai., 2002; Oipa5-Sagdata ei a!., 2006) .
Ефективність дії препаратів нативних ІФН обмежена швидким усмоктуванням з підшкірних тканин, великим об'ємом розподілу, відносно низькою стабільністю, коротким періодом напіввиведення, високою імуногенністю і токсичністю (УМіЇ5, 1990). В результаті, протягом декількох годин після введення спостерігається швидке падіння концентрації ІФН у плазмі крові, при цьому інтерферон не визначається в плазмі вже через 24 години після ін'єкції (Спагеїці еї аїЇ., 1999). Зниження концентрації інтерферону створює умови для поновлення реплікації вірусу і збільшення концентрації вірусних частинок (Гат еї аї., 1997). Тому виникає необхідність частих введень препарату для досягнення ефективних терапевтичних концентрацій у плазмі крові, що призводить до виникнення дозозалежних побічних ефектів. Внаслідок зазначених особливостей монотерапія хронічного гепатиту С (ХГС) ІФН- а265 протягом 12 міс. приводила до стійкої вірусологічної відповіді усього у 15-20 Фо пацієнтів, у хворих з генотипом їв і високим вірусологічним навантаженням ефективність препарату не спостерігалася зовсім (МеНиїспіпзоп еї аї., 1998).The effectiveness of native IFN preparations is limited by rapid absorption from subcutaneous tissues, large volume of distribution, relatively low stability, short half-life, high immunogenicity and toxicity (UMiY5, 1990). As a result, within a few hours after the injection, a rapid drop in the concentration of IFN in the blood plasma is observed, while interferon is not detected in the plasma already 24 hours after the injection (Spageitsi et al., 1999). A decrease in the concentration of interferon creates conditions for the renewal of virus replication and an increase in the concentration of viral particles (Hat ei ai., 1997). Therefore, there is a need for frequent administration of the drug to achieve effective therapeutic concentrations in the blood plasma, which leads to the occurrence of dose-dependent side effects. As a result of the mentioned features, monotherapy of chronic hepatitis C (CHC) with IFN-a265 for 12 months. led to a stable virological response in only 15-20 Fo patients, in patients with the yiv genotype and a high virological load, the effectiveness of the drug was not observed at all (MeNiispipsop ei ai., 1998).
Терапевтична ефективність ІФН може бути підвищена при використанні препаратів пролонгованої дії, зокрема, "ПЕГильованих" ІФН (Маптрз еї а!., 2001; Надлуаппізв еї аї., 2004; 7ец?ет еї аї., 2001).The therapeutic effectiveness of IFN can be increased when using long-acting drugs, in particular, "PEGylated" IFN (Maptrz ei a!., 2001; Nadluappizv ei ai., 2004; 7ets?et ei ai., 2001).
Одержання ПЕГильованих ІФН полягає в хімічному зв'язуванні молекули інтерферону з полімером - монометоксиполіетиленгліколем (МПЕГ), що складається з повторюваних субодиниць етиленоксиду з метоксигрупою на одному кінці і гідроксильною групою - на іншому. Молекула мПЕГ може мати різну молекулярну масу і стереохімічну структуру (лінійна або розгалужена). Для проведення реакціїThe production of PEGylated IFN consists in the chemical binding of an interferon molecule with a polymer - monomethoxy polyethylene glycol (MPEG), which consists of repeating subunits of ethylene oxide with a methoxy group at one end and a hydroxyl group at the other. The mPEG molecule can have a different molecular weight and stereochemical structure (linear or branched). To carry out the reaction
ПЕГилювання гідроксильну групу на кінці мпПЕеЕГ активують різними реактивними функціональними групами. Активований мПЕГ може ковалентно зв'язуватися з білком в одному або в кількох місцях, що залежить від природи активованої групи та умов реакції (7аїїр5Ку 8 Ниггі5, 1997; Кобегів еї аї., 2002).PEGylation hydroxyl group at the end of mpPEeEG is activated by various reactive functional groups. Activated mPEG can covalently bind to the protein in one or more places, which depends on the nature of the activated group and the reaction conditions (7aiir5Ku 8 Niggi5, 1997; Kobegiv ei ai., 2002).
ПЕГилювання ІФН приводить до поліпшення фармакокінетики, збільшення часу напіввиведення з крові, зниження коливань концентрації в крові, зниження імуногенності і токсичності, збільшення активності іп мімо (при зниженні активності іп міїго); збільшення стабільності (січе еї аї., 2000; Кедау еї а!., 2001).PEGylation of IFN leads to an improvement in pharmacokinetics, an increase in the half-life from the blood, a decrease in blood concentration fluctuations, a decrease in immunogenicity and toxicity, an increase in the activity of ip mimo (with a decrease in the activity of ip miigo); increasing stability (siche ei ai., 2000; Kedau ei a!., 2001).
Зниження активності в системі іп міо прямо залежить від молекулярної маси використовуваногоThe decrease in activity in the ip myo system directly depends on the molecular weight of the substance used
ПЕГ. Приєднання невеликих молекул ПЕГ з молекулярною масою х 5000 Да викликає незначні зміни активності іп міго (Огасе еї аї., 2005). Фармакодинамічні і фармакокінетичні властивості ПЕгГИЛЬОВаНнИХ білків, що містять ПЕГ з такою масою, і немодифікованих білків практично не відрізняються.PEG. The addition of small molecules of PEG with a molecular weight of 5000 Da causes slight changes in the activity of ip migo (Ogase et al., 2005). The pharmacodynamic and pharmacokinetic properties of PEGylated proteins containing PEG with this mass and unmodified proteins practically do not differ.
Приєднання ПЕГ з більшою молекулярною масою і множинними ділянками приводить до значного зниження біоактивності іп міо, в результаті неефективного зв'язування з рецептором, однак у цьому випадку спостерігається поліпшення фармакокінетичних і фармакодинамічних властивостейThe addition of PEG with a higher molecular weight and multiple sites leads to a significant decrease in the bioactivity of ip mio, as a result of ineffective binding to the receptor, however, in this case, an improvement in pharmacokinetic and pharmacodynamic properties is observed
ПЕГильованих білків (Оеєеїдадо еї аїІ., 1992), що в результаті приводить до збільшення біологічної активності іп мімо (Вайоп 8 ВепйпоЇїд, 1998). Форма ПЕГ також впливає на біоактивність і фармакокінетичні властивості - кон'югат з лінійним ПЕГ поширюється на більший об'єм, ніж з ПЕГ, що має розгалужену структуру (Саїсеї еї аї., 2003).of PEGylated proteins (Oyeeiidado ei aili., 1992), which as a result leads to an increase in the biological activity of ip mimo (Vyop 8 Veypoiid, 1998). The form of PEG also affects the bioactivity and pharmacokinetic properties - the conjugate with linear PEG spreads over a larger volume than with PEG, which has a branched structure (Saisei et al., 2003).
Противірусна активність і біологічні властивості кон'югатів ПЕГ-ІФН у значній мірі залежать також від використовуваних активованих мПЕГ, функціональні групи яких відрізняються за здатністю модифікувати різні амінокислотні залишки білка і за типом утворених з білком хімічних зв'язків (Корегіб еї аІ., 2002). При одержанні ПЕГильованих білків найбільш широке застосування знайшли активованіAntiviral activity and biological properties of PEG-IFN conjugates also depend to a large extent on the activated mPEGs used, the functional groups of which differ in their ability to modify various amino acid residues of the protein and in the type of chemical bonds formed with the protein (A.I. Koregib, 2002) . In the preparation of PEGylated proteins, activated proteins are most widely used
МПЕГиИ, здатні зв'язуватися з вільними аміногрупами білків (сукцинімідилкарбонатні, сукцинімідилсукцинатні, трезилатні, триазинові, гідроксисукцинімідні ефіри, ацетальдегіди та ін.).MPEGs capable of binding to free amino groups of proteins (succinimidyl carbonate, succinimidyl succinate, tresylate, triazine, hydroxysuccinimide esters, acetaldehydes, etc.).
З рівня техніки відомі різні кон'югати ПЕГ-ІФН.Various PEG-IFN conjugates are known from the prior art.
Відомий кон'югат ПЕГ-ІФН-ага з лінійним ПЕГ з молекулярною масою 1-5000 Да (патент США Мо 5382657, 1995). Для кон'югації використовували етандіольні похідні МПЕГ, реакцію проводили при рн-т0 при кімнатній температурі протягом 0,5-4 годин. Для проведення реакції ПЕГилювання ІФН використовували Зх кратний надлишок ПЕГ. У використовуваних умовах зв'язування ПЕГ з ІФН відбувалося через стерично доступні вільні аміногрупи різних лізинів (ІГу5-31, І уз133, І уз134, І уз23,A known conjugate of PEG-IFN-aga with linear PEG with a molecular weight of 1-5000 Da (US patent Mo 5382657, 1995). For conjugation, ethanediol derivatives of MPEG were used, the reaction was carried out at pH-t0 at room temperature for 0.5-4 hours. A 3-fold excess of PEG was used to carry out the IFN PEGylation reaction. Under the conditions used, binding of PEG to IFN occurred through sterically accessible free amino groups of various lysines (IGu5-31, I uz133, I uz134, I uz23,
Губз131, Гуз121, Гувз70, І уз83, І уз49 і Гу 112) з утворенням карбамідного зв'язку (МопкКаїгепП еї аї., 1997). Таким чином, отриманий кон'югат ПЕГ-ІФН-о2а складався із суміші позиційних ізомерів, де кожний ізомер містив один ПЕГ. В порівнянні з немодифікованим ІФН питома противірусна активність ізомерів варіювала від 6 95 (для І у5112) до 40 95 (для Гуз133). Сумарна питома активність отриманого кон'югата, що складається з 11 ізомерів, складала 34 95 від немодифікованого ІФН. Активність отриманих кон'югатів іп міго також залежала від молекулярної маси ПЕГ і варіювала від 45 95 (дляGubz131, Guz121, Guvz70, I uz83, I uz49 and Gu 112) with the formation of a urea bond (MopkKaighepP ei ai., 1997). Thus, the obtained PEG-IFN-o2a conjugate consisted of a mixture of positional isomers, where each isomer contained one PEG. In comparison with unmodified IFN, the specific antiviral activity of the isomers varied from 6 95 (for I u5112) to 40 95 (for Guz133). The total specific activity of the obtained conjugate, consisting of 11 isomers, was 34 95 of unmodified IFN. The activity of the obtained IP migo conjugates also depended on the molecular weight of PEG and varied from 45 to 95 (for
ПЕГ - 2500 Да) до 25 95 (у випадку ПЕГ - 10000 Да). Недоліками отриманого кон'югата є: 1. використання етандіол-активованих мПЕГ з низькою молекулярною масою (х:5000 Да), в результаті чого фармакокінетичні параметри отриманого кон'югата ПЕГ-ІФН і немодифікованого ІФН відрізнялися незначно, у зв'язку з чим даний кон'югат не знайшов застосування в клініці; 2. утворення великої кількості позиційних ізомерів з різною питомою активністю, у яких ПЕГ був зв'язаний з молекулою ІФН через вільні аміногрупи різних лізинів.PEG - 2500 Da) to 25 95 (in the case of PEG - 10000 Da). The disadvantages of the obtained conjugate are: 1. the use of ethanediol-activated mPEG with a low molecular weight (x: 5000 Da), as a result of which the pharmacokinetic parameters of the obtained PEG-IFN conjugate and unmodified IFN differed slightly, in connection with which this the conjugate has not been used in the clinic; 2. formation of a large number of positional isomers with different specific activities, in which PEG was bound to the IFN molecule through free amino groups of various lysines.
Відомі кон'югати ПЕГ-ІФН-о2Б, отримані при кон'югації нативного ІФН-а260 з лінійною (патент РосіїKnown conjugates PEG-IFN-o2B, obtained by conjugation of native IFN-a260 with linear (patent of Russia
Мо 2311930, 2004) або розгалуженою (патент Росії Мео2382048, 2008) похідною мПЕГ з молекулярною масою 13000-17000 Да. Реакцію проводили при рН 9,5 протягом 60 годин (для лінійного МПЕГ) або при рН 7,5 протягом 12 годин (для розгалуженого мПЕГ), використовуючи 50-100 кратний молярний надлишок активованого ПЕГ. В результаті були отримані кон'югати ПЕГ-ІФН, сумарна противірусна активність якого варіювала від 29 до 38 95 від активності немодифікованого ІФН. Дані про стабільність зв'язку, кількість позиційних ізомерів і їх питому противірусну активність не приведено. Недоліками отриманих кон'югатів є: 1. використання трезил-похідних активованого мПЕГ з часом напівжиття у водних розчинах - менше 20 хв. Раніше було показано, що при взаємодії трезилат-похідних ПЕГ з білками, крім стабільних амідних зв'язків через аміногрупи, утворяться також нестабільні сульфаматні зв'язки (саї5 а Вирреїі, 1995); 2. зв'язування трезил-активованих ПЕГ з білками відбувається через усі стерично доступні вільні аміногрупи лізину (Кобегіз еї а!., 2002), що приводить до утворення декількох позиційних ізомерів; 3. проведення реакції ПЕГилювання ІФН при високих значеннях рН (рн-10) протягом тривалого часу (60 годин) може привести до зміни структури ІФН; 4. значний надлишок активованого ПЕГ при проведенні реакції ПЕГилювання ІФН (молярне співвідношення ПЕГ/білок складало 50-100/1) приводить до високої вартості отриманого продукту.Mo 2311930, 2004) or a branched (Russian patent Meo 2382048, 2008) mPEG derivative with a molecular weight of 13,000-17,000 Da. The reaction was carried out at pH 9.5 for 60 hours (for linear mPEG) or at pH 7.5 for 12 hours (for branched mPEG), using a 50-100-fold molar excess of activated PEG. As a result, PEG-IFN conjugates were obtained, the total antiviral activity of which varied from 29 to 38 95 of the activity of unmodified IFN. Data on bond stability, the number of positional isomers and their specific antiviral activity are not given. The disadvantages of the obtained conjugates are: 1. the use of tresyl derivatives of activated mPEG with a half-life in aqueous solutions of less than 20 min. Earlier, it was shown that during the interaction of tresylate-derivatives of PEG with proteins, in addition to stable amide bonds through amino groups, unstable sulfamate bonds are also formed (sai5 and Virreii, 1995); 2. binding of tresyl-activated PEGs to proteins occurs through all sterically available free amino groups of lysine (Kobegiz et al., 2002), which leads to the formation of several positional isomers; 3. carrying out the IFN PEGylation reaction at high pH values (pH-10) for a long time (60 hours) can lead to a change in the IFN structure; 4. a significant excess of activated PEG during the IFN PEGylation reaction (the PEG/protein molar ratio was 50-100/1) leads to a high cost of the obtained product.
Відомий кон'югат ПЕГ-ІФН-а2Б6, отриманий при зв'язуванні нативного ІФН-а26 з розгалуженою триазиновою похідною мПЕГ з молекулярною масою 7500-35000 Да (патент Росії Мо 2298560, 2004), сумарна противірусна активність якого складала 6,4 95 від активності немодифікованого ІФН. Даних про стабільність зв'язку, кількість позиційних ізомерів і їх питому противірусну активність не приведено.The known conjugate PEG-IFN-a2B6, obtained by binding native IFN-a26 to a branched triazine derivative mPEG with a molecular weight of 7500-35000 Da (Russian patent Mo 2298560, 2004), the total antiviral activity of which was 6.4 95 from activity of unmodified IFN. Data on bond stability, the number of positional isomers and their specific antiviral activity are not provided.
Недоліками отриманого кон'югата є: 1. використання триазин-хлорид похідних активованого мПЕГ, що крім вільних аміногруп здатні зв'язуватися з функціональними групами інших амінокислот - серину, тирозину, треоніну і гістидину, що приводить до появи ряду ізомерів, частина з яких характеризується нестабільним зв'язком. Більш того, триазинові похідні на даний час не використовуються через їх високу токсичність (Мегопезе 5The disadvantages of the obtained conjugate are: 1. the use of triazine-chloride derivatives of activated mPEG, which, in addition to free amino groups, are able to bind to the functional groups of other amino acids - serine, tyrosine, threonine and histidine, which leads to the appearance of a number of isomers, some of which are characterized unstable connection. Moreover, triazine derivatives are currently not used due to their high toxicity (Megopeze 5
Разиї, 2005); 2. низька питома активність кон'югата ПЕГ-ІФН.Razii, 2005); 2. low specific activity of the PEG-IFN conjugate.
Відомий кон'югат ПЕГ-ІФН-с2а, отриманий при кон'югації ІФН-а2а з розгалуженим ПЕГ з молекулярною масою 40 кДа (патент Росії Мо 2180595, 1997). Для кон'югації використовували М- гідроксисукцинімід-ефірну похідну МПЕГ, що вибірково взаємодіє з доступними вільними аміногрупами білка з утворенням стабільного амідного зв'язку. Реакцію проводили при рН 9 при 4 "С протягом 2 годин при співвідношенні мПЕГ/білок рівному трьом. Реакцію зупиняли та очищення отриманого кон'югата проводили на сорбенті Ргасіоде ЕМО СМ 650 (М). Вихід очищеного кон'югата складав 40- 4595. У цьому випадку був отриманий кон'югат ІФН-ПЕГ, що складається з 6 позиційних ізомерів, кожний з який був зв'язаний з однією молекулою ПЕГ стабільним зв'язком через вільні аміногрупи лізинів - Гу531, Губ121, Гуз131, Гуз134, І уз70 і І уз83 (Вайоп еї аї., 2001; Еозег еї аї., 2003). Ізомери,The known conjugate PEG-IFN-c2a, obtained by conjugation of IFN-a2a with branched PEG with a molecular weight of 40 kDa (Russian patent Mo 2180595, 1997). For conjugation, M-hydroxysuccinimide ester derivative MPEG was used, which selectively interacts with available free amino groups of the protein with the formation of a stable amide bond. The reaction was carried out at pH 9 at 4 "C for 2 hours with a ratio of mPEG/protein equal to three. The reaction was stopped and the purification of the obtained conjugate was carried out on the Rgasiode EMO CM 650 (M) sorbent. The yield of the purified conjugate was 40-4595. in this case, an IFN-PEG conjugate consisting of 6 positional isomers was obtained, each of which was connected to one PEG molecule by a stable bond through free amino groups of lysines - Gu531, Gub121, Guz131, Guz134, I uz70 and I uz83 (Vyop et al., 2001; Eozeg et al., 2003). Isomers,
зв'язані з ПЕГ через лізини в положенні 31, 121, 131 і 134, у сумі складали 94 95. Активність сумарного кон'югата, що складається з 6 позиційних ізомерів, складала 1-7 95 від нативного ІФН-сг2а (Ваїйоп еї аї., 2001; Вошезійп еї аї., 2006). Незважаючи на низьку противірусну активність іп міго, даний кон'югат в порівнянні з немодифікованим ІФН мав поліпшені фармакокінетичні властивості (5іїма еї аї., 2006,linked to PEG through lysines in position 31, 121, 131 and 134, in total amounted to 94 95. The activity of the total conjugate, consisting of 6 positional isomers, was 1-7 95 from native IFN-sg2a (Vaiyop ei ai ., 2001; Vosheziip ei ai., 2006). Despite the low antiviral activity of ip migo, this conjugate compared to unmodified IFN had improved pharmacokinetic properties (5iima ei ai., 2006,
Вошевзіїйп еї аї., 2006), і на даний час використовується в клініці під назвою "Пегасис" (виробництво фірми "Хоффманн-Ля Рош).Voshevziip ei ai., 2006), and is currently used in the clinic under the name "Pegasis" (manufactured by the company "Hoffmann-La Roche").
Недоліками отриманого кон'югата є: 1. використання М-гідроксисукцинімід-ефір активованого ПЕГ, що зв'язується з усіма стерично доступними аміногрупами, в результаті отриманий кон'югат представляв суміш з 6 ізомерів, що відрізняються питомою активністю. 2. низька противірусна питома активність отриманого кон'югата іп міо.The disadvantages of the obtained conjugate are: 1. the use of M-hydroxysuccinimide-ester of activated PEG, which binds to all sterically accessible amino groups, as a result, the obtained conjugate represented a mixture of 6 isomers differing in specific activity. 2. low antiviral specific activity of the received ip myo conjugate.
Прототипом даного винаходу є кон'югат ПЕГ-ІФН-са2р, описаний у патенті США Мо 5951974, 1999).The prototype of this invention is the PEG-IFN-sa2r conjugate, described in US patent No. 5951974, 1999).
Для реакції ПЕГилювання використовували лінійний мПЕГ, активований сукцинімідил карбонатною групою (5С-ТРЕС) з молекулярною масою від 5000 до 12000Да. За описаним методом був отриманий кон'югат ІФН із ПЕГ з молекулярною масою 12кДа, що на даний час застосовується в клініці для лікування вірусних гепатитів - препарат "Пегінтрон" (фірма "ЗПпегіпд-Ріосдп", США).For the PEGylation reaction, linear mPEG activated by a succinimidyl carbonate group (5C-TRES) with a molecular weight of 5000 to 12000 Da was used. According to the described method, a conjugate of IFN with PEG with a molecular weight of 12 kDa was obtained, which is currently used in the clinic for the treatment of viral hepatitis - the drug "Pegintron" (the company "ZPPegipd-Riosdp", USA).
Встановлено, що отриманий кон'югат ПЕГ-ІФН-с26 (препарат "Пегінтрон") складається з 13 позиційних ізомерів, кожний з який містить одну молекулу ПЕГ, приєднану до різних ділянок молекули білка (У/апод еї аї. 2000; Сгасе еї аї., 2001; Моипдвіег єї аї.,, 2002). Було показано, що молекула ПЕГ була зв'язана з інтерфероном не тільки через вільні аміногрупи лізинів (І у531 Гуз 49, І уз83, І уг121,It was established that the obtained PEG-IFN-c26 conjugate (the "Pegintron" drug) consists of 13 positional isomers, each of which contains one PEG molecule attached to different parts of the protein molecule (U/apod ei ai. 2000; Sgase ei ai ., 2001; Moipdvieg eyi ai.,, 2002). It was shown that the PEG molecule was bound to interferon not only through free amino groups of lysines (I u531 Guz 49, I uz83, I ug121,
Гуз131, Гуз133, Губ134 і І уз164) і М- кінцевого цистеїну (Субі), але і через імідазольне кільце гістидину (Ніз7, Ніз34), тирозину (Туї129) ії ОН-групу серину (5ег163). Вміст окремих ізомерів варіював від 0,8 (Тупт29) до 47 95 (Ніх34). Противірусна активність сумарного препарату Пегінтрону, що складається з 13 позиційних ізомерів, складала 2895 від нативного білка. Питома активність окремих ізомерів варіювала від 11 до 37 95 від нативного ІФН-а2Ь (уоипозгег еї аї., 2002). Найбільша питома активність була в основного ізомеру, скон'югованого з ПЕГ через Ніз34, що складала 37 95 від нативного білка.Guz131, Guz133, Gub134 and I uz164) and M-terminal cysteine (Subi), but also through the imidazole ring of histidine (Niz7, Niz34), tyrosine (Tui129) and the OH group of serine (5eg163). The content of individual isomers varied from 0.8 (Tupt29) to 47.95 (Nikh34). The antiviral activity of the total preparation of Pegintron, consisting of 13 positional isomers, was 2895 times that of the native protein. The specific activity of individual isomers varied from 11 to 37 95 of the native IFN-a2b (Uoipozgeg ei ai., 2002). The highest specific activity was in the main isomer conjugated with PEG through Niz34, which was 37 95 of the native protein.
Вільні аміногрупи ІФН були з'єднані з ПЕГ через стабільний зв'язок, тоді як в основному ізомері, що складає приблизно 4795, ПЕГ був з'єднаний з імідазольним кільцем гістидину (Ніз34) через нестабільний (у водних розчинах) карбаматний зв'язок (Корбегіз еї аї!., 2002).The free amino groups of IFN were linked to PEG through a stable bond, whereas in the major isomer, approximately 4795, PEG was linked to the imidazole ring of histidine (Niz34) through an unstable (in aqueous solutions) carbamate bond ( Korbegiz ei ai!., 2002).
Фармакокінетичні параметри отриманого кон'югата були краще, ніж у немодифікованого ІФН (5іїма еїа!., 2006).Pharmacokinetic parameters of the obtained conjugate were better than those of unmodified IFN (5iima eia!., 2006).
Недоліками отриманого кон'югата є: 1. використання сукцинімідил карбонат активованого ПЕГ, що зв'язується не тільки з вільними аміногрупами ІФН, але і з функціональними групами інших амінокислот. В результаті отриманий кон'югат складався із суміші 13 позиційних ізомерів, що відрізняються противірусною питомою активністю; 2. утворення нестабільного імідазол-карбонатного (карбаматного) зв'язку в основному (Нівб-34) ізомері кон'югата ПЕГ-ІФН приводить до того, що при потраплянні в організм препарату "Пегінтрон" гідролізується і вивільняється нативний ІФН, що чинить біологічну дію. Таким чином, препарат "Пегінтрон" найкраще розцінювати як про-ліки, які після введення в організм розщеплюються з утворенням активного інтерферону (Розіег, 2004). Через нестабільність ПЕГ-ІФН у розчині, лікарська форма "Пегінтрону" зберігається тільки у вигляді ліофільно-висушеного порошку.The disadvantages of the resulting conjugate are: 1. the use of succinimidyl carbonate activated PEG, which binds not only to free amino groups of IFN, but also to functional groups of other amino acids. As a result, the resulting conjugate consisted of a mixture of 13 positional isomers differing in specific antiviral activity; 2. the formation of an unstable imidazole-carbonate (carbamate) bond in the main (Nivb-34) isomer of the PEG-IFN conjugate leads to the fact that when the drug "Pegintron" enters the body, it is hydrolyzed and the native IFN is released, which has a biological effect . Thus, the drug "Pegintron" is best regarded as a pro-drug, which, after being injected into the body, is cleaved with the formation of active interferon (Rozieg, 2004). Due to the instability of PEG-IFN in solution, the dosage form of "Pegintron" is stored only in the form of a freeze-dried powder.
Задача даного винаходу полягала в одержанні нового стабільного кон'югата ПЕГильованого ІФН, з активністю ІФН альфа, що складається з одного позиційного ізомеру, з поліпшеною стабільністю, зі зниженої імуногенністю, з поліпшеними фармакокінетичними параметрами, з оптимальним поєднанням параметрів молекулярної маси ПЕГ і противірусної активності, придатного для створення лікарського препарату медичного призначення, що сприяє розширенню арсеналу лікарських засобів заданої спрямованості, фармацевтичної композиції на основі отриманого ПЕГ-ІФН.The task of this invention was to obtain a new stable conjugate of PEGylated IFN, with IFN alpha activity, consisting of one positional isomer, with improved stability, with reduced immunogenicity, with improved pharmacokinetic parameters, with an optimal combination of PEG molecular weight parameters and antiviral activity. suitable for the creation of a medicinal drug for medical purposes, which contributes to the expansion of the arsenal of drugs of a given focus, a pharmaceutical composition based on the obtained PEG-IFN.
Поставлена задача вирішується створенням нової молекули функціонально активного кон'югатаThe task is solved by creating a new functionally active conjugate molecule
ПЕГ-ІФН з активністю інтерферон-альфа, у якому лінійна молекула ПЕГ з молекулярною масою від 10 до 40000 Да зв'язана з молекулою ІФН-са стабільним зв'язком строго через альфа аміногрупу М- кінцевого цистеїну так, що загальна формула кон'югата ПЕГ-ІФН із лінійним мПЕГ являє собою наступну сполуку (1):PEG-IFN with interferon-alpha activity, in which a linear PEG molecule with a molecular weight of 10 to 40,000 Da is linked to an IFN-sa molecule by a stable bond strictly through the alpha amino group of the M-terminal cysteine so that the general formula of the conjugate PEG-IFN with linear mPEG is the following compound (1):
СН, Я о-сни-снА-ро Я снд-к «НА -ІЕМ (І), п т де: п - цілі значення від 227 до 10000; т - ціле число 24;SN, I o-sny-snA-ro I snd-k "NA -IEM (I), p t where: p - whole values from 227 to 10000; t - integer 24;
ІЕМ - природний або рекомбінантний поліпептид, що має активність ІФН-альфа.IEM is a natural or recombinant polypeptide that has IFN-alpha activity.
В отриманому кон'югаті лінійний ПЕГ з молекулярною масою 10000-40000Да зв'язаний з альфа аміногрупою М- кінцевої амінокислоти ІФН.In the resulting conjugate, linear PEG with a molecular weight of 10,000-40,000Da is connected to the alpha amino group of the M-terminal amino acid of IFN.
Вибірковість модифікації ІФН строго за альфа-аміногрупою М- кінцевої амінокислоти досягається за рахунок використання альдегід-активованих мПЕГ загальної формули (ІІ) і проведення реакціїThe selectivity of IFN modification strictly according to the alpha-amino group of the M-terminal amino acid is achieved by using aldehyde-activated mPEGs of the general formula (II) and carrying out the reaction
ПЕГилювання при рНеб: сн. Я о-сни-сн-о Ясно (І) п т1 нн де: п - цілі значення від 227 до 10000, так що молекулярна маса ПЕГ складає приблизно 10000- 40000 Да; т - ціле число 24.PEGylation at рНеб: sn. I o-sny-sn-o Clearly (I) p t1 nn where: p - whole values from 227 to 10,000, so that the molecular weight of PEG is approximately 10,000-40,000 Da; t is an integer of 24.
Оптимальне співвідношення параметрів молекулярної маси ПЕГ і противірусної активності досягається за рахунок використання активованого мПЕГ (Ії) зі значенням тг24.The optimal ratio of PEG molecular weight parameters and antiviral activity is achieved due to the use of activated mPEG (II) with a value of tg24.
Зниження імуногенності, токсичності і поліпшення фармакокінетичних параметрів досягається за рахунок збільшення молекулярної маси приєднаного ПЕГ.Reduction of immunogenicity, toxicity and improvement of pharmacokinetic parameters is achieved by increasing the molecular weight of the attached PEG.
Новим в порівнянні з прототипом є: 1. для одержання кон'югата ПЕГ-ІФН використані альдегідні похідні активованих мПЕГ; 2. структурна формула кон'югата ПЕГ-ІФН; 3. отриманий кон'югат ПЕГ-ІФН представлений одним позиційним ізомером; 4. стабільний зв'язок між молекулою ПЕГ і молекулою ІФН; 5. збільшення молекулярної маси кон'югата ПЕГ-ІФН за рахунок розміру приєднаного ПЕГ, 6. поліпшені фармакокінетичні параметри.The following are new compared to the prototype: 1. aldehyde derivatives of activated mPEG were used to obtain the PEG-IFN conjugate; 2. structural formula of PEG-IFN conjugate; 3. the obtained PEG-IFN conjugate is represented by one positional isomer; 4. stable connection between the PEG molecule and the IFN molecule; 5. an increase in the molecular weight of the PEG-IFN conjugate due to the size of the attached PEG, 6. improved pharmacokinetic parameters.
Для одержання заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН був використаний рекомбінантний ІФН-с20 людини (виробництво ЗАТ "Біокад") і бутир- або пентальалдегідні похідні мПЕГ формули (ІІ) з молекулярною масою 20000 Да.Recombinant human IFN-c20 (manufactured by CJSC "Biokad") and butyric or pentaalaldehyde derivatives of mPEG of formula (II) with a molecular weight of 20,000 Da were used to obtain the claimed PEG-IFN conjugate.
Реакцію кон'югування проводили при рН нижче 6,0 у присутності агента, що відновлює, при температурі, рівній або нижче 20 "С. Молярне співвідношення ПЕГ/білок складало 2,5-5/1. Контроль утворення кон'югата ПЕГ-ІФН проводили за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі (ПААГ) у присутності додецилсульфату натрію (ДДС) в умовах, що відновлюють, і зворотно-фазної високоефективної хроматографії (З3Ф ВЕРХ). Очищення моноПЕГ-ІФН від продуктів реакції, немодифікованого ІФН і від небажаних форм ПЕГ-ІФН, що містять дві і більше молекул ПЕГ на молекулу білка, проводили за допомогою хроматографії на катіонообмінних сорбентах. Елюцію мОонНОоПЕГ-ІФН проводили градієнтом концентрації хлористого натрію від 0,05 до 0,2 г в буферному розчині з рН нижче 6. Очищений препарат моноПЕГ-ІФН діалізували проти 10-50 мМ буферного розчину з рН 4-5, додавали солі або полісахариди, або багатоатомні спирти, або полівінілпіролідони, або моносахариди, або аміносахари, або білки, або амінокислоти та неіонні детергенти і зберігали в пластикових або скляних флаконах із силіконізованою поверхнею при температурі 4:52 "С.The conjugation reaction was carried out at a pH below 6.0 in the presence of a reducing agent at a temperature equal to or below 20 "C. The molar ratio of PEG/protein was 2.5-5/1. Control of the formation of the PEG-IFN conjugate was performed using polyacrylamide gel electrophoresis (PAAG) in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS) under reducing conditions and reversed-phase high-performance chromatography (3F HPLC). Purification of monoPEG-IFN from reaction products, unmodified IFN, and unwanted forms of PEG- IFN containing two or more PEG molecules per protein molecule was performed using chromatography on cation-exchange sorbents. The elution of mOonNOoPEG-IFN was carried out with a gradient of sodium chloride concentration from 0.05 to 0.2 g in a buffer solution with a pH below 6. Purified monoPEG preparation -IFN was dialyzed against 10-50 mM buffer solution with pH 4-5, salts or polysaccharides, or polyhydric alcohols, or polyvinylpyrrolidones, or monosaccharides, or aminosugars, or proteins, or amino acids and nonionic dete were added rgents and stored in plastic or glass vials with a siliconized surface at a temperature of 4:52 "C.
Для характеристики отриманого кон'югата моноПЕГ-ІФН-о2ор досліджували його чистоту, гомогенність, фізико-хімічні, біологічні ії фармакокінетичні параметри в порівнянні з немодифікованимTo characterize the obtained monoPEG-IFN-o2or conjugate, its purity, homogeneity, physicochemical, biological, and pharmacokinetic parameters were investigated in comparison with the unmodified
ІФН.IFN
Пропонований винахід ілюструється фігурами графічного зображення, де представлені:The proposed invention is illustrated by figures of a graphic image, which present:
Фіг 1. Кінетика утворення кон'югата ІФН-о2р при проведенні реакції з використанням бутиральдегідної похідної МПЕГ.Fig. 1. Kinetics of the formation of the IFN-o2p conjugate during the reaction using the butyraldehyde derivative of MPEG.
Фіг. 2. Зворотнофазна ВЕРХ кон'югата ПЕГ-ІФН-о2Б5 на колонці "Зуттеїгу С18" (4,6 х 150 мм).Fig. 2. Reverse-phase HPLC of the PEG-IFN-o2B5 conjugate on the Zutteigu S18 column (4.6 x 150 mm).
Фіг. 3. Електрофоретичний аналіз кон'югата ПЕГ-ІФН-о2Б в порівнянні з немодифікованим ІФН-с26.Fig. 3. Electrophoretic analysis of the PEG-IFN-o2B conjugate in comparison with unmodified IFN-c26.
Фіг. 4. МАГОЇ мас-спектри немодифікованого ІФН-с265 і кон'югата ПЕГ-ІФН-о2б.Fig. 4. MAGO mass spectra of unmodified IFN-c265 and PEG-IFN-o2b conjugate.
Фіг. 5. Локалізація сайту ПЕГилювання в кон'югаті ПЕГ-ІФН-с2Б. Порівняння мас-спектрів триптичних пептидів немодифікованого ІФН-со2б (А) і кон'югата ПЕГ-рчІФН-а2 (У) у діапазоні т/2 1200- 1400.Fig. 5. Localization of the PEGylation site in the PEG-IFN-c2B conjugate. Comparison of mass spectra of tryptic peptides of unmodified IFN-co2b (A) and PEG-rcIFN-a2 conjugate (U) in the range of t/2 1200-1400.
Фіг. 6. Термостабільність кон'югата ПЕГ-ІФН-О2.Fig. 6. Thermostability of PEG-IFN-O2 conjugate.
Фіг. 7. Протеолітична стабільність кон'югата ПЕГ-ІФН-а25 при обробці трипсином.Fig. 7. Proteolytic stability of the PEG-IFN-a25 conjugate upon treatment with trypsin.
Фіг. 8. Імуногенність кон'югата ПЕГ-ІФН-а2Б в порівнянні з немодифікованим ІФН-а2б.Fig. 8. Immunogenicity of the PEG-IFN-a2B conjugate compared to unmodified IFN-a2b.
Фіг. 9. Фармакокінетика кон'югата ПЕГ-ІФН-о25 в порівнянні з немодифікованим ІФН-а26.Fig. 9. Pharmacokinetics of the PEG-IFN-a25 conjugate in comparison with unmodified IFN-a26.
Приклади конкретного виконання способу одержання ПЕГ-ІФН-о2оЬ і дослідження його властивостей приведені нижче.Examples of a specific implementation of the method of obtaining PEG-IFN-o2oB and studying its properties are given below.
Кон'югати ПЕГ-ІФН-а2 формули (І), що є об'єктом даного винаходу, можуть бути використані для одержання лікарських засобів для профілактики і/або лікування вірусних захворювань, оскільки крім високої стабільності і зниженої імуногенності мають високе значення противірусної активності. Також фармацевтичні композиції, що містять в якості активного інгредієнта ефективну кількість кон'югата формули (І) і отримані відомими методами, що застосовують у фармацевтиці, можуть використовуватися як окремо, так і разом з іншими терапевтичними засобами (наприклад, рибавірин) для профілактики і/або лікування вірусних захворювань (хронічний активний гепатит (зокрема,PEG-IFN-a2 conjugates of formula (I), which are the object of this invention, can be used to obtain drugs for the prevention and/or treatment of viral diseases, because in addition to high stability and reduced immunogenicity, they have a high value of antiviral activity. Also, pharmaceutical compositions containing as an active ingredient an effective amount of the conjugate of formula (I) and obtained by known methods used in pharmaceuticals can be used both separately and together with other therapeutic agents (for example, ribavirin) for prevention and/ or treatment of viral diseases (chronic active hepatitis (in particular,
гепатити В і С) (дау єї аї.,, 2006; МеНиїспізоп еї аї!., 2009). Об'єктом даного винаходу також є спосіб профілактики і/або лікування вірусних захворювань, наприклад, гепатиту С і гепатиту В, що включає введення терапевтично ефективної кількості заявленого кон'югата формули (1).hepatitis B and C) (Dau et al., 2006; MeNiispizop et al., 2009). The object of this invention is also a method of prevention and/or treatment of viral diseases, for example, hepatitis C and hepatitis B, which includes the introduction of a therapeutically effective amount of the declared conjugate of formula (1).
З рівня техніки відомо також використання ІФН-є і ПЕГильованих інтерферонів-а в якості імуномодуляторів для лікування онкологічних захворювань, зокрема, волосатоклітинного лейкозу, папіломатозу гортані, меланоми, ниркової карциноми, мієлолейкозів, саркоми Капоши (Оесаїгі5 еї аї., 2002; ВикомувкКі єї аї!., 2002; Оіпіаз-Сагдата єї аї., 2006; І одцаї еї а!., 2008; КаєнНіег єї аї., 2010). На підставі відомого з рівня техніки етіопатогенеза даних захворювань і застосування ІФН-а, а також з кон'югатів для їх профілактики і/або лікування, об'єктами даного винаходу є також лікарські засоби і фармацевтичні композиції, що містять заявлений кон'югат ПЕГ-ІФН-Яй в ефективній кількості, що мають антипроліферативну і імуномодулюючу дію, що можуть застосовуватися для профілактики і/або лікування онкологічних захворювань і захворювань, що супроводжуються первинними або вторинними імунодефіцитними станами, а також об'єктом даного винаходу є спосіб профілактики і/або лікування онкологічних захворювань і захворювань, що супроводжуються первинними або вторинними імунодефіцитними станами, що включає введення терапевтично ефективної кількості кон'югата ПЕГ-The use of IFN-γ and PEGylated interferons-α as immunomodulators for the treatment of oncological diseases, in particular, hairy cell leukemia, laryngeal papillomatosis, melanoma, renal carcinoma, myeloid leukemia, Kaposi's sarcoma, is also known from the state of the art (Oesaigi5 ei ai., 2002; VykomuvkKi ei ai !., 2002; Oipiaz-Saghdata, 2006; I odtsai, 2008; KayenNieg, 2010). On the basis of the etiopathogenesis of these diseases known from the state of the art and the use of IFN-α, as well as conjugates for their prevention and/or treatment, the objects of this invention are also medicinal products and pharmaceutical compositions containing the claimed conjugate PEG- IFN-Yai in an effective amount, having an antiproliferative and immunomodulatory effect, which can be used for the prevention and/or treatment of oncological diseases and diseases accompanied by primary or secondary immunodeficiency states, as well as the object of this invention is a method of prevention and/or treatment oncological diseases and diseases accompanied by primary or secondary immunodeficiency states, which includes the introduction of a therapeutically effective amount of the conjugate PEG-
ІФН-а формули (1).IFN-a formula (1).
Кон'югат формули (І) з необов'язковим фармакологічно прийнятним наповнювачем, розріджувачем іМабо фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами вводять внутрішньовенно, підшкірно, внутрішньом'язово або яким-небудь іншим придатним способом, наприклад, у вигляді капсул, сиропу, спрея, краплин, ін'єкції або супозиторія. Шлях введення змінюють в залежності, наприклад, від симптомів і віку, частоту введення та інтервал між введеннями змінюють в залежності від захворювання і його тяжкості або від мети (терапевтичне або профілактичне використання), ефективна кількість активного початку ПЕГ-ІФН-й вибирається з урахуванням вищевикладених факторів.The conjugate of formula (I) with an optional pharmacologically acceptable filler, diluent and Mabo pharmaceutically acceptable excipients is administered intravenously, subcutaneously, intramuscularly or in any other suitable way, for example, in the form of capsules, syrup, spray, drops, etc. injection or suppository. The route of administration is changed depending, for example, on symptoms and age, the frequency of administration and the interval between administrations are changed depending on the disease and its severity or on the purpose (therapeutic or prophylactic use), the effective amount of the active beginning of PEG-IFN-th is selected taking into account the above factors
У якості фармацевтично прийнятних допоміжних компонентів, що можуть входити у фармацевтичну композицію з ПЕГ-ІФН-а2, можна використати: буферні солі (наприклад, ацетатний, цитратний, водень-карбонатний, фосфатний буфери), стабілізатори (наприклад, полісорбати, ЕДТА, полівінілпіролідони, декстрани, ЧСА, ефіри параоксибензойної кислоти, спирти (наприклад, бензиловий спирт), феноли, сорбінова кислота), компонент, що знезаражує (наприклад, бензиловий спирт), регулятор осмотичного тиску (наприклад, хлорид натрію, хлорид калію, поліоли, наприклад, гліцерин, арабітол, сорбітол, »манітол, лактоза, декстран), сурфактанти (наприклад, ЧСА, полівінілпіролідон, лецитин, Твін 80, поліоксіетилен-поліоксипропілен сополімер, казеїн), поверхнево- активні речовини (наприклад, блок-сополімери етиленоксиду і пропіленоксиду, пропіленоксиду і етиленоксиду, сорбітанмонолаурат, складний ефір сорбіту, складний ефір жирної кислоти полігліцирину, кокамід ОЕА лаурилсульфат, алканоламід, стеарит поліоксіетиленпропіленгліколю, лауриновий ефір поліоксіетилену, цетиловий ефір поліоксіетилену, полісорбат, моностеарат гліцерину, дистеарат гліцерину, монопальмітат сорбіту, сорбітанмоноолеат поліоксіетилену, сорбітанмонолаурат поліоксіетилену і моностеарат пропіленгліколю), антиоксиданти (наприклад,As pharmaceutically acceptable auxiliary components that can be included in a pharmaceutical composition with PEG-IFN-a2, you can use: buffer salts (for example, acetate, citrate, hydrogen carbonate, phosphate buffers), stabilizers (for example, polysorbates, EDTA, polyvinylpyrrolidone, Dextrans, CSA, paraoxybenzoic acid esters, alcohols (e.g. benzyl alcohol), phenols, sorbic acid), disinfectant component (e.g. benzyl alcohol), osmotic pressure regulator (e.g. sodium chloride, potassium chloride, polyols, e.g. glycerin , arabitol, sorbitol, »mannitol, lactose, dextran), surfactants (for example, ChSA, polyvinylpyrrolidone, lecithin, Tween 80, polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer, casein), surfactants (for example, block copolymers of ethylene oxide and propylene oxide, propylene oxide and ethylene oxide, sorbitan monolaurate, sorbitol ester, polyglycerin fatty acid ester, cocamide OEA lauryl sulfate, alkanolamide, polyoxyethylene propyl stearate lenglycol, polyoxyethylene lauric ether, polyoxyethylene cetyl ether, polysorbate, glycerol monostearate, glycerol distearate, sorbitol monopalmitate, polyoxyethylene sorbitan monooleate, polyoxyethylene sorbitan monolaurate and propylene glycol monostearate), antioxidants (for example,
Трилон Б, І-цистеїн, сульфіт натрію, аскорбат натрію, глутатіон, 2-меркаптоетанол, дитіотриїтол, цистеїнгідрохлорид моногідрат, аскорбінова кислота) і розріджувачі (наприклад, вода).Trilon B, I-cysteine, sodium sulfite, sodium ascorbate, glutathione, 2-mercaptoethanol, dithiotriitol, cysteine hydrochloride monohydrate, ascorbic acid) and diluents (eg, water).
Приклад 1Example 1
Одержання кон'югата ПЕГ-ІФН-а2Ь з використанням бутиральдегідної похідної МПЕГPreparation of the PEG-IFN-a2b conjugate using the butyraldehyde derivative of MPEG
До 785 мл буферного розчину (100 мМ натрій-ацетату, 150 мМ натрію хлористого, рН 5,0), що містить рекомбінантний ІФН-а2 в концентрації 1,7 мг/мл, додавали 16 мл 1М розчину ціаноборгідриду натрію, перемішували і додавали 5 г сухої бутиральдегідної похідної ПЕГ з молекулярною масою 20000 дальтон. Суміш ретельно перемішували і інкубували протягом 22 годин при температурі 1753 "С. Через різні проміжки часу з реакційної суміші відбирали аліквоти по 50 мкл і аналізували кінетику утворення кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 за допомогою методу електрофорезу в ПААГ у присутностіTo 785 ml of a buffer solution (100 mM sodium acetate, 150 mM sodium chloride, pH 5.0) containing recombinant IFN-α2 at a concentration of 1.7 mg/ml, 16 ml of a 1 M solution of sodium cyanoborohydride was added, mixed and 5 g of dry butyraldehyde PEG derivative with a molecular weight of 20,000 daltons. The mixture was thoroughly mixed and incubated for 22 hours at a temperature of 1753 "C. After different intervals of time, aliquots of 50 μl were taken from the reaction mixture and the kinetics of the formation of the PEG-IFN-α2 conjugate was analyzed using the electrophoresis method in PAGE in the presence
ДДС. Для цього до відібраної проби додавали 1/3 об'єму буфера, що містить 125 мМ Трис-НСЇ, рН 6,8, 95 гліцерин, З 96 ДДС, 0,005 95 бромфеноловий синій, і нагрівали З хв. на киплячій водяній бані.VAT To do this, 1/3 of the buffer volume containing 125 mM Tris-HCl, pH 6.8, 95 glycerol, C 96 DDS, 0.005 95 bromophenol blue was added to the selected sample, and heated for 3 min. in a boiling water bath.
Проби в об'ємі 5 мкл вносили в лунки підготовлених пластин ПААГ і проводили електрофорез у 12,5 95Samples in a volume of 5 μl were introduced into the wells of the prepared PAAG plates and electrophoresis was performed at 12.5 95
ПААГ у присутності ДДС. По закінченні електрофорезу гель офарблювали за допомогою Кумасі К-250.PAAG in the presence of VAT. After electrophoresis, the gel was stained with Coomassie K-250.
Кінетика утворення кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 представлена на фіг. 1. У момент часу, коли вміст ПЕГ-ІФН складав більше 70 95, реакційну суміш розводили в 10 разів 5 мМ натрій-ацетатним буфером, рН 5,0.The kinetics of PEG-IFN-o2 conjugate formation is shown in Fig. 1. At the time when the content of PEG-IFN was more than 70 95, the reaction mixture was diluted 10 times with 5 mM sodium acetate buffer, pH 5.0.
Приклад 2Example 2
Одержання кон'югата ПЕГ-ІФН-а265 з використанням пентальальдегідної похідної МПЕГPreparation of the PEG-IFN-a265 conjugate using the pentaaldehyde derivative of MPEG
До 100 мл буферного розчину (100 мМ натрій-ацетату, 150 мМ натрію хлористого, рН 5,5), що містить рекомбінантний ІФН-4250 в концентрації 2,2 мг/мл, додавали 2,05 мл 1 М розчину ціаноборгідриду натрію, перемішували і додавали 0,9 г сухої пентальдегідної похідної ПЕГ з молекулярною масою 20000 дальтон. Суміш ретельно перемішували і інкубували протягом 24 годин при температурі 622 "С. Через різні проміжки часу з реакційної суміші відбирали аліквоти по 50 мкл і аналізували кінетику утворення кон'югата ПЕГ-ІФН за допомогою методу електрофорезу в ПААГ, як описано в прикладі 1. У момент часу, коли вміст ПЕГ-ІФН складав більше 70 95, реакційну суміш розводили в 10 разів 5 мМ натрій-ацетатним буфером, рН 5,0.To 100 ml of a buffer solution (100 mM sodium acetate, 150 mM sodium chloride, pH 5.5) containing recombinant IFN-4250 at a concentration of 2.2 mg/ml, 2.05 ml of a 1 M solution of sodium cyanoborohydride was added, mixed and added 0.9 g of dry pentaldehyde PEG derivative with a molecular weight of 20,000 daltons. The mixture was thoroughly mixed and incubated for 24 hours at a temperature of 622 °C. After different intervals of time, aliquots of 50 μl were taken from the reaction mixture and the kinetics of the formation of the PEG-IFN conjugate was analyzed using the PAGE electrophoresis method, as described in example 1. at the time when the content of PEG-IFN was more than 70 95, the reaction mixture was diluted 10 times with 5 mM sodium acetate buffer, pH 5.0.
Приклад ЗExample C
Очищення кон'югатамоноПЕГ-ІФН-Я25 за допомогою іонообмінної хроматографії на катіонообмінному сорбентіPurification of conjugate monoPEG-IFN-YA25 using ion exchange chromatography on a cation exchange sorbent
Розведений розчин, отриманий у прикладі 1, наносили на колонку з катіонообмінним сорбентом (СМ-сефароза, 300 мл), врівноваженим 5 мМ натрій-ацетатним буфером, рН 5,0, (буфер А) зі швидкістю 5 мл/хв. Колонку із сорбентом промивали послідовно буфером А і буфером А, що містить градієнт концентрації Масі від 0,05 до 0,2 М. З кожної фракції відбирали аліквоти для аналізу проб методом електрофорезу в ПААГ, як описано в прикладі 1. Фракції, що містять моноПЕГильований кон'югат ПЕГ-ІФН-а2, поєднували, діалізували проти 10 об'ємів 20 мМ натрій-ацетатного буфера, що містить 150 мМ натрію хлористого, проводили стерильну фільтрацію і зберігали при температурі 42 26.The diluted solution obtained in example 1 was applied to a column with a cation-exchange sorbent (CM-Sepharose, 300 ml) equilibrated with 5 mM sodium acetate buffer, pH 5.0 (buffer A) at a rate of 5 ml/min. The column with the sorbent was washed sequentially with buffer A and buffer A containing a Mass concentration gradient from 0.05 to 0.2 M. Aliquots were taken from each fraction for sample analysis by electrophoresis in PAAG, as described in example 1. Fractions containing monoPEGylated PEG-IFN-a2 conjugate was combined, dialyzed against 10 volumes of 20 mM sodium acetate buffer containing 150 mM sodium chloride, sterile filtered and stored at a temperature of 42 26.
Приклад 4Example 4
Очищення кон'югатамоноПЕГ-ІФН-Я25 за допомогою іонообмінної хроматографії на катіонообмінному сорбентіPurification of conjugate monoPEG-IFN-YA25 using ion exchange chromatography on a cation exchange sorbent
Розведений розчин, отриманий у прикладі 2, наносили на колонку з катіонообмінним сорбентом (5Р-сефароза, 50 мл), врівноваженим 5 мМ натрій-ацетатним буфером, рН 5,0, (буфер А) зі швидкістю мл/хв. Колонку із сорбентом промивали послідовно буфером "А" і буфером А, що містить градієнт концентрації Масі від 0,03 до 0,3 М. З кожної фракції відбирали аліквоти для аналізу проб методом електрофорезу в ПААГ, як описано в прикладі 1. Фракції, що містять моноПЕГильований кон'югатThe diluted solution obtained in example 2 was applied to a column with a cation-exchange sorbent (5P-Sepharose, 50 ml) equilibrated with 5 mM sodium acetate buffer, pH 5.0 (buffer A) at a rate of ml/min. The column with the sorbent was washed sequentially with buffer "A" and buffer A containing a Mass concentration gradient from 0.03 to 0.3 M. From each fraction, aliquots were taken for sample analysis by electrophoresis in PAGE, as described in example 1. Fractions that contain a monoPEGylated conjugate
ПЕГ-ІФН-а2, поєднували, діалізували проти 10 об'ємів 20 мМ натрій-ацетатного буфера, що містить 150 мм натрію хлористого, проводили стерильну фільтрацію і зберігали при температурі 4ж2 "б.PEG-IFN-α2 was combined, dialyzed against 10 volumes of 20 mM sodium acetate buffer containing 150 mM sodium chloride, sterile filtered and stored at a temperature of 4°C.
Приклад 5Example 5
Аналіз кон'югата ПЕГ-ІФН-а26 за допомогою методу зворотно-фазної високоефективної рідинної хроматографіїAnalysis of the PEG-IFN-α26 conjugate using the reverse-phase high-performance liquid chromatography method
Кон'югат ПЕГ-ІФН-о2, отриманий за п. 3, розводили 20 мМ натрій-ацетатним буфером, рН 5,0, до концентрації 0,1 мг/мл ії 100 мкл отриманої проби вносили на колонку Зуттеїгу С18 (4,6 х 150 мм).The PEG-IFN-o2 conjugate, obtained according to item 3, was diluted with 20 mM sodium acetate buffer, pH 5.0, to a concentration of 0.1 mg/ml, and 100 μl of the obtained sample was applied to a Zutteig C18 column (4.6 x 150 mm).
Дослідження проводили на хроматографі "Вгееле" фірми МУМаїег при 214 нм. З результатів, представлених на фіг. 2, випливає, що за даними ЗФ ВЕРХ чистота заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 складає більше 99 95.The research was carried out on a "Vgeele" chromatograph of the MUMaieg company at 214 nm. From the results presented in fig. 2, it follows that, according to ZF HPLC, the purity of the declared PEG-IFN-a2 conjugate is more than 99 95.
Приклад 6Example 6
Визначення рівня ендотоксинівDetermination of the level of endotoxins
Вміст бактеріальних ендотоксинів (БЕ) у пробах кон'югата ПЕГ-ІФН-а2, приготовлених зап. Зіп. 4, визначали іп міго за допомогою ЛАЛ-теста (модифікація гель-тромб тест) відповідно до вимог ЗФС 42- 0002-00. У роботі використовували діагностичний багатокомпонентний набір фірми Авзосіа(е5 ої САРЕThe content of bacterial endotoxins (BE) in samples of the PEG-IFN-a2 conjugate prepared by Zip. 4, IMP was determined using the LAL test (modified gel-thrombus test) in accordance with the requirements of ZFS 42-0002-00. In the work, a diagnostic multicomponent set of Avzosia (e5 oi SARE) was used
СОЮ, Іпс. ЛАЛ-реактив РУКОТЕЇ ІФ с чутливістю 0,03 ЕЕ/мл, контрольний стандарт ендотоксину (КСЕ, 0,5 мкг у флаконі), воду для ЛАЛ-теста. З результатів, представлених у табл. 1, видно, що вмістSOY, Ips. LAL reagent RUKOTEI IF with a sensitivity of 0.03 EE/ml, endotoxin control standard (CSE, 0.5 μg in a vial), water for the LAL test. From the results presented in the table. 1, it can be seen that the content
БЕ в пробах кон'югата складає менше 1,5 одиниць ендотоксину (ОЕ) на мг білка, що набагато нижче рівня БЕ, припустимого для медичних препаратів на основі рекомбінантних білків.BE in conjugate samples is less than 1.5 units of endotoxin (OE) per mg of protein, which is much lower than the level of BE acceptable for medical preparations based on recombinant proteins.
Таблиця 1Table 1
Вміст бактеріальних ендотоксинів у кон'югаті ПЕГ-ІФН-а2The content of bacterial endotoxins in the PEG-IFN-a2 conjugate
Приклад 7Example 7
Електрофоретичний аналіз кон'югата ПЕГ-ІФН-са2Б в порівнянні з немодифікованим ІФН-саБElectrophoretic analysis of the PEG-IFN-sa2B conjugate in comparison with unmodified IFN-saB
Пробу кон'югата ПЕГ-ІФН, отриману за п. 3, аналізували методом електрофорезу в ПААГ, як описано в п. 1. Електрофорез проводили з навантаженням на лунку 40 мкг білка в умовах, що не редукують. Фарбування білків у гелі проводили барвником Кумасі К-250. Одночасно проводили електрофорез немодифікованого ІФН-а2. Кон'югат ПЕГ-ІФН був представлений однією смугою (фіг. З, трек 1). З електрофореграм кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 і немодифікованого ІФН-а2, представлених на фії 3, видно, що кон'югат ПЕГ-ІФН-са має більш високу молекулярну масу, ніж рчІФН-а (фіг. З, треки 1 і 2).The PEG-IFN conjugate sample obtained according to item 3 was analyzed by electrophoresis in PAGE as described in item 1. Electrophoresis was performed with a load of 40 μg of protein per well under non-reducing conditions. Proteins in the gel were stained with Kumasi K-250 dye. At the same time, electrophoresis of unmodified IFN-α2 was performed. The PEG-IFN conjugate was represented by one band (Fig. C, track 1). From the electrophoregrams of the PEG-IFN-o2 conjugate and unmodified IFN-a2, presented in figure 3, it is clear that the PEG-IFN-a conjugate has a higher molecular weight than rchIFN-a (Fig. C, tracks 1 and 2).
Слід зазначити, що методом ЕФ точне значення молекулярної маси для ПЕГильованих білків визначити не можна, тому що приєднання гідрофільної молекули ПЕГ до білка значно збільшує радіусIt should be noted that the exact value of the molecular weight for PEGylated proteins cannot be determined by the EF method, because the attachment of the hydrophilic PEG molecule to the protein significantly increases the radius
Стокса комплексу, що утворився. В результаті просування комплексу ПЕГ-білок у гелі сповільнюється, і значення його молекулярної маси виявляється значно вище, ніж сума молекулярних мас білка і ПЕГ.Stokes of the resulting complex. As a result, the advancement of the PEG-protein complex in the gel slows down, and the value of its molecular weight turns out to be much higher than the sum of the molecular weights of the protein and PEG.
Приклад 8Example 8
Визначення молекулярної маси кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 в порівнянні з немодифікованим ІФН-с2 методом мас-спектрометри 1 мкл проби кон'югата ПЕГ-ІФН, отриманої за п. 3, і 0,3 мкл розчину 2,5-дигідроксибензойної кислоти (Аїагісй, 10 мг х мл" у 20 95 ацетонітрилі у воді з 0,595 ТФО) змішували і висушували на повітрі. Аналогічним способом готували пробу немодифованого ІФН-а2.Determination of the molecular weight of the PEG-IFN-o2 conjugate in comparison with unmodified IFN-c2 by the mass spectrometer method of 1 μl of the PEG-IFN conjugate sample obtained according to item 3 and 0.3 μl of 2,5-dihydroxybenzoic acid solution (Ayagis, 10 mg x ml" in 20 95 acetonitrile in water with 0.595 TFO) were mixed and dried in air. A sample of unmodified IFN-a2 was prepared in a similar way.
Мас-спектри були отримані на МАГ ОіІ-час-пролітному мас-спектрометрі ОКгайех І! ВКОКЕК (Німеччина), оснащеному УФ лазером (Ма). Мас-спектри отримані в режимі позитивних іонів, у лінійному режимі, погрішність виміру середньої маси не перевищує 10-15 Да.Mass spectra were obtained on the MAG OiI time-of-flight mass spectrometer OKgayeh I! VKOKEK (Germany), equipped with a UV laser (Ma). Mass spectra were obtained in the mode of positive ions, in the linear mode, the error of the measurement of the average mass does not exceed 10-15 Da.
Результати з мас-спектрометричного аналізу немодифікованого рчІФН-о2 і кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 у діапазоні т/7 від 10000-50000 приведені на фіг. 4. З фіг. 4А видно, що мас-спектр рчІФН-о2 містить основний пік, що відповідає однозарядному іону (МІ" з молекулярною масою 19295 Да.The results of the mass spectrometric analysis of unmodified rchIFN-o2 and the PEG-IFN-o2 conjugate in the range of t/7 from 10,000-50,000 are shown in Fig. 4. From fig. 4A shows that the mass spectrum of rchIFN-o2 contains the main peak corresponding to a singly charged ion (MI" with a molecular weight of 19295 Da.
У мас-спектрі кон'югата ПЕГ-ІФН-о2, приведеному на фіг. З В, представлений розмитий основний пік, що відповідає однозарядному іону МІ" з молекулярною масою 40498 Да. Розмитість піка пов'язана з гетерогенністю препаратів монометоксиПЕГ. Для кон'югата ПЕГ-ІФН виміряне значення т/: у максимумі піка (40498 Да) збігається з розрахунковими даними по сумі молекулярних мас ІФН-о2 (19295 Да) і приєднаного ПЕГ (20000 Да).In the mass spectrum of the PEG-IFN-o2 conjugate shown in fig. From B, a blurred main peak corresponding to the singly charged MI" ion with a molecular mass of 40498 Da is presented. The blurring of the peak is associated with the heterogeneity of monomethoxyPEG preparations. For the PEG-IFN conjugate, the measured value of t/: in the maximum of the peak (40498 Da) coincides with calculated data on the sum of the molecular masses of IFN-o2 (19,295 Da) and attached PEG (20,000 Da).
Приклад 9 Локалізація сайту ПЕГилювання в кон'югатіпЕ Г-ІФН-о2ЬExample 9 Localization of the PEGylation site in the H-IFN-o2b conjugate
До 5 мкл проби кон'югата ПЕГ-ІФН, отриманої за п. 3, додавали 5 мкл розчину модифікованого трипсину (Рготеда) у 0,05 М МНАНСО:» з концентрацією 15 мкг х мл". Гідроліз проводили протягом 16 годин при 37 "С, потім до розчину додавали 10 мкл 0,5 95 ТФО в 10 95 розчині ацетонітрилу у воді і ретельно перемішували. Аналогічним способом готували пробу немодифованого ІФН. Отримані розчини використовували для одержання МАГ ОІ-мас-спектрів.To 5 μl of the PEG-IFN conjugate sample obtained according to item 3, 5 μl of a solution of modified trypsin (Rgoteda) in 0.05 M MNANSO:" with a concentration of 15 μg x ml was added." Hydrolysis was carried out for 16 hours at 37 " C, then 10 μl of 0.5 95 TFO in a 10 95 solution of acetonitrile in water was added to the solution and mixed thoroughly. A sample of unmodified IFN was prepared in a similar way. The resulting solutions were used to obtain MAG OI mass spectra.
Локалізацію сайту зв'язування ПЕГ з молекулою ІФН визначали шляхом порівняння мас-спектрів триптичного гідролізату кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 і немодифікованого рчіІФН-а2. У триптичному гідролізаті кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 повинний бути відсутнім пептид, що відповідає ділянці білка, по якому відбулася модифікація. У табл. 2 представлені мас-спектри експериментальних триптичних пептидів для немодифікованого ІФН-Яй і кон'югата ПЕГ-ІФН-42. З таблиці видно, що мас-спектри триптичних пептидів немодифікованого ІФН-425 практично збігаються з мас-спектрами триптичних пептидів кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 (табл. 2), але в триптичному переварі кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 відсутній пептид з молекулярною масою 1313,649, що є присутнім у триптичному переварі немодифікованого рчІФН-а2 (див. також фіг. 5). Відповідно до аналізу теоретичних мас триптичного гідролізату ІФН-а2 пік з т/7 1313,649 відповідає М- кінцевому пептиду білка (табл. 2). Його відсутність у триптичному переварі кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 свідчить про модифікацію М- кінцевого пептиду, що, ставши важче на масу ПЕГ, перебуває за межами досліджуваної області спектра. Зв'язування ПЕГ з молекулою ІФН відбулося по єдиній вільній аміногрупі, що присутня у цьому пептиді - по аміногрупі М- кінцевого цистеїну.The localization of the binding site of PEG with the IFN molecule was determined by comparing the mass spectra of the tryptic hydrolyzate of the PEG-IFN-o2 conjugate and unmodified rchiIFN-a2. In the tryptic hydrolyzate of the PEG-IFN-a2 conjugate, the peptide corresponding to the part of the protein on which the modification took place must be absent. In the table 2 presents the mass spectra of experimental tryptic peptides for unmodified IFN-Yai and PEG-IFN-42 conjugate. The table shows that the mass spectra of tryptic peptides of unmodified IFN-425 practically coincide with the mass spectra of tryptic peptides of the PEG-IFN-a2 conjugate (Table 2), but the peptide is missing in the tryptic digest of the PEG-IFN-a2 conjugate with a molecular weight of 1313.649, which is present in a tryptic digest of unmodified rchIFN-α2 (see also Fig. 5). According to the analysis of the theoretical masses of tryptic IFN-a2 hydrolyzate, the peak with t/7 1313.649 corresponds to the M-terminal peptide of the protein (Table 2). Its absence in the tryptic digestion of the PEG-IFN-o2 conjugate indicates a modification of the M-terminal peptide, which, having become heavier per mass of PEG, is outside the studied range of the spectrum. Binding of PEG to the IFN molecule took place via the only free amino group present in this peptide - via the amino group M- of the terminal cysteine.
Таблиця 2Table 2
Експериментальні мас-спектри триптичних пептидів кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 і немодифікованогоExperimental mass spectra of tryptic peptides of the PEG-IFN-α2 conjugate and unmodified
ІФН-а2 в порівнянні з теоретичними значеннямиIFN-a2 in comparison with theoretical values
Експериментально виявлені пептиди г. 131349 | -:Б - 1/ 1313,6266 | 1-12 |СОІРОТНІОВЗАЇ Г-З:ЗExperimentally discovered peptides of 131349 | -:B - 1/ 1313.6266 | 1-12 |SOIROTNIOVZAI G-Z:Z
Приклад 10 Визначення специфічної противірусної активності кон'югата ПЕГ-ІФН-с2рExample 10 Determination of the specific antiviral activity of the PEG-IFN-c2p conjugate
У пробах, отриманих за п. З і за п. 4, досліджували противірусну специфічну активність відповідно до протоколу, описаного в Європейській фармакопеї з використанням культури клітин, що перевиваються, МВОК, чутливих до інтерферону альфатипу і вірусу везикулярного стоматиту (М5М). У табл. З представлені результати дослідження противірусної активності. Як стандарт був використаний міжнародний референс стандарт. З табл. З видно, що, незважаючи на приєднання молекули ПЕГ з молекулярною масою 20000 Да, противірусна активність отриманих кон'югатів складає 42-45 905 від активності немодифікованого ІФН-а2. Слід зазначити, що кон'югат ПЕГ-ІФН, описаний у способі- прототипі, що містить ПЕГ з молекулярною масою 12000 Да, мав більш низьку активність (28-30 9).Antiviral specific activity was studied in the samples obtained according to point C and point 4 according to the protocol described in the European Pharmacopoeia using a culture of transfected cells, MVOK, sensitive to alpha-type interferon and vesicular stomatitis virus (M5M). In the table The results of the study of antiviral activity are presented. The international reference standard was used as a standard. From the table It can be seen that, despite the addition of a PEG molecule with a molecular weight of 20,000 Da, the antiviral activity of the obtained conjugates is 42-45,905 times the activity of unmodified IFN-a2. It should be noted that the PEG-IFN conjugate described in the prototype method containing PEG with a molecular weight of 12,000 Da had lower activity (28-30 9).
Таблиця ЗTable C
Питома противірусна активність кон'югата ПЕГ-ІФН-о2 в порівнянні з немодифікованим ІФН-а2 до від активності немодифікованого мою Р рояThe specific antiviral activity of the PEG-IFN-α2 conjugate in comparison with unmodified IFN-α2 to the activity of unmodified my P roi
Приклад 11 Дослідження термостабільності кон'югата ПЕГ-ІФН-а25 мл проби кон'югата ПЕГ-ІФН, отриманого за п. 3, поміщали у водяну баню при температурі (50:-2)7С і через різні інтервали часу досліджували появу мутності в розчині білка, вимірюючи оптичну густину при 340 нм. Аналогічно проводили дослідження термостабільності немодифікованого ІФН-а2.Example 11 Study of the thermal stability of the PEG-IFN-a conjugate 25 ml of the sample of the PEG-IFN conjugate obtained according to item 3 was placed in a water bath at a temperature of (50:-2)7С and after different time intervals the appearance of turbidity in the solution was investigated protein, measuring the optical density at 340 nm. Thermostability of unmodified IFN-a2 was studied similarly.
Утворення нерозчинних агрегатів білка приводило до появи мутності і до збільшення оптичної густини при 340 нм. На фіг. 6 представлені результати дослідження. За період спостереження (28 годин) кон'югат ПЕГ-ІФН-а42 залишався стабільним, тоді як немодифікований ІФН-а25 через 28 годин практично весь випав в осад.The formation of insoluble protein aggregates led to the appearance of turbidity and an increase in optical density at 340 nm. In fig. 6 presents the results of the study. During the observation period (28 hours), the PEG-IFN-α42 conjugate remained stable, while the unmodified IFN-α25 almost all precipitated after 28 hours.
Таким чином, отримані дані дозволяють зробити висновок про значне збільшення термостабільності кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 в порівнянні з немодифікованим білком.Thus, the obtained data allow us to draw a conclusion about a significant increase in the thermal stability of the PEG-IFN-a2 conjugate compared to the unmodified protein.
Приклад 12Example 12
Дослідження протеолітичної стабільності кон'югата ПЕГ-ІФН-о260 при обробці трипсиномStudy of the proteolytic stability of the PEG-IFN-o260 conjugate when treated with trypsin
До 1 мл кон'югата ПЕГ-ІФН, отриманого за п. 3, додавали 150 мкл М трис-НСІ буфера, рН 8,5, 2 мкл 0,5 М розчину Сас» і 15 мкл трипсину (Рготеда) з концентрацією 20 мкг/мл. Проби інкубували при 37 "С. Через певні проміжки часу відбирали аліквоти в 100 мкл і додавали 150 мкл 0,5 95 розчину трифтороцтової кислоти для зупинки реакції. Аналогічно готували проби, що містять немодифікованийTo 1 ml of the PEG-IFN conjugate obtained according to item 3, 150 μl of M Tris-HCI buffer, pH 8.5, 2 μl of 0.5 M solution of Sas" and 15 μl of trypsin (Rgoted) with a concentration of 20 μg were added / ml. Samples were incubated at 37 "C. After certain time intervals, aliquots of 100 μl were taken and 150 μl of 0.5 95 trifluoroacetic acid solution was added to stop the reaction. Samples containing unmodified
ІФН-а2. Далі проби аналізували за допомогою зворотно-фазової ВЕРХ і визначали площу основного піка. Результати дослідження, приведені на фіг. 7, показують, що при обробці трипсином протеолітична стабільність кон'югата ПЕГ-ІФН-а2 вище, ніж у немодифікованого ІФН-а26.IFN-a2. The samples were then analyzed by reverse-phase HPLC and the area of the main peak was determined. The results of the study shown in Fig. 7, show that upon treatment with trypsin, the proteolytic stability of the PEG-IFN-α2 conjugate is higher than that of unmodified IFN-α26.
Приклад 13 Визначення стабільності кон'югата ПЕГ-ІФН-а265 при зберіганніExample 13 Determination of the stability of the PEG-IFN-a265 conjugate during storage
З проби, отриманої за п. 3, відбирали аліквоти в стерильні пробірки з кришками, типу "Еппендорф".From the sample obtained according to point 3, aliquots were taken into sterile tubes with lids, of the "Eppendorf" type.
Концентрація білка в кон'югаті ПЕГ-ІФН-42 складала 1 мг/мл. Проби поміщали в холодильник при температурі (б-2)"С. Через певні проміжки часу відбирали проби та аналізували специфічну противірусну активність і гомогенність препарату за допомогою ЗФ ВЕРХ і електрофорезу (ЕФ) у ПААГ у присутності ДДС в умовах, що не редукують, як описано в п. 1.3 даних табл. 4 видно, що при зберіганні при температурі (6:22)"С кон'югат ПЕГ-ІФН-а2 стабільний протягом, щонайменш, 24 місяців.The protein concentration in the PEG-IFN-42 conjugate was 1 mg/ml. The samples were placed in a refrigerator at a temperature of (b-2)"C. After certain time intervals, samples were taken and the specific antiviral activity and homogeneity of the drug were analyzed using ZF HPLC and electrophoresis (EF) in PAGE in the presence of DDS under non-reducing conditions, as described in point 1.3 of the data in Table 4, it can be seen that when stored at a temperature of (6:22)"C, the PEG-IFN-a2 conjugate is stable for at least 24 months.
Таблиця 4Table 4
Стабільність кон'югата ПЕГ-ІФН-о26 при температурі (622370 мети Го 13 1 6 1 9 1 12 1 18 | 24The stability of the PEG-IFN-o26 conjugate at temperature (622370 goals Go 13 1 6 1 9 1 12 1 18 | 24
Гомогенність, 90Homogeneity, 90
Си зав зле |за сао сое | ол золYou are too bad |for sao soe | ol zol
Гомогенність, 9оHomogeneity, 9o
Приклад 14 Дослідження імуногенності кон'югата ПЕГ-ІФН-а2БExample 14 Study of the immunogenicity of the PEG-IFN-a2B conjugate
Кон'югати ПЕГ-ІФН, отримані за п. З і за п. 4, розводили до концентрації 5 млн. МО/мл і вводили по 200 мкл (1 млн. МО/миша) внутрішньом'язово мишам ІСК з масою тіла 20-22 г 1 раз на тиждень, протягом 5 тижнів (5 груп по 5 мишей у групі). Паралельно готували пробу немодифікованого ІФнН і вводили аналогічним образом мишам також у дозі 1 млн. Наприкінці п'ятого тижня у тварин відбирали кров за допомогою ретроорбітальної пункції. Сироватку крові отримували стандартним методом. Титр антитіл у сироватках, отриманих в результаті імунізації мишей немодифікованим ІФН і кон'югатамиThe PEG-IFN conjugates obtained according to item C and item 4 were diluted to a concentration of 5 million IU/ml and injected 200 μl (1 million IU/mouse) intramuscularly into ISK mice with a body weight of 20 22 g once a week for 5 weeks (5 groups of 5 mice per group). In parallel, a sample of unmodified IFnN was prepared and administered to mice in a similar manner, also in a dose of 1 million. At the end of the fifth week, blood was taken from the animals using a retroorbital puncture. Blood serum was obtained by a standard method. Titer of antibodies in sera obtained as a result of immunization of mice with unmodified IFN and conjugates
ПЕГ-ІФН, визначали за допомогою прямого твердофазного імуноферментного методу (ІФА). Для цього в лунки мікропланшета вносили по 100 мкл розчину немодифікованого ІФН-42 у концентрації 200 нг/100 мкл. Антисироватки, отримані від різних груп тварин, вносили в лунки планшета в серії з послідовних розведень у два рази. Для детекції імунного комплексу, що утворився, використовували антимишачі імуноглобуліни, скон'юговані з пероксидазою. Титр антисироватки після введення немодифікованого ІФН складав 1/1024. Титр антисироваток після введення кон'югатів ПЕГ-ІФН складав 1/128. Результати дослідження представлені на фіг. 8.PEG-IFN was determined using a direct solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). For this, 100 μl of a solution of unmodified IFN-42 at a concentration of 200 ng/100 μl was added to the wells of the microplate. Antisera obtained from different groups of animals were introduced into the wells of the tablet in a series of two-fold serial dilutions. Anti-mouse immunoglobulins conjugated with peroxidase were used to detect the formed immune complex. Antiserum titer after administration of unmodified IFN was 1/1024. The titer of antisera after administration of PEG-IFN conjugates was 1/128. The results of the study are presented in fig. 8.
Таким чином, з отриманих результатів випливає, що імуногенність отриманих кон'югатів ПЕГ-ІФН- а2 у 8 разів нижче, ніж у немодифікованого ІФН.Thus, it follows from the obtained results that the immunogenicity of the obtained PEG-IFN-α2 conjugates is 8 times lower than that of unmodified IFN.
Приклад 15 Дослідження фармакокінетики кон'югата ПЕГ-ІФН-а2рExample 15 Study of the pharmacokinetics of the conjugate PEG-IFN-a2r
Пробу ккон'югата ПЕГ-ІФН, отриманого за прикладом 3, у дозі 1 млн. МО вводили внутрішньочеревно мишам-самцям. Паралельно іншій групі мишей вводили немодифікований ІФН-а2.A sample of the PEG-IFN conjugate obtained according to example 3 in a dose of 1 million IU was administered intraperitoneally to male mice. In parallel, another group of mice was injected with unmodified IFN-α2.
Через певні проміжки часу у тварин відбирали кров за допомогою ретроорбітальної пункції. Сироватку крові одержували стандартним методом. Наявність інтерферону в сироватці визначали за противірусною активністю. Результати фармакокінетики представлені на фіг. 9. З результатів випливає, що заявлений кон'югат ПЕГ-ІФН-42 має значний пролонгований ефект. При введенні нативного ІФН-а2 його вміст у крові тварин досягав максимуму через 1 годину після введення, а потім дуже швидко знижувався. При введенні кон'югата ПЕГ-ІФН, максимальний вміст ІФН у крові тварин спостерігався через 12 годин (фіг. 9), і цей рівень зберігався протягом 50 годин, і тільки потім відбувалося повільне зниження вмісту ІФН-а2 протягом 350 годин.After certain time intervals, blood was collected from the animals by means of retroorbital puncture. Blood serum was obtained by a standard method. The presence of interferon in serum was determined by antiviral activity. The results of pharmacokinetics are presented in fig. 9. The results show that the declared PEG-IFN-42 conjugate has a significant prolonged effect. When native IFN-a2 was administered, its content in the blood of animals reached a maximum 1 hour after administration, and then decreased very quickly. When the PEG-IFN conjugate was administered, the maximum content of IFN in the blood of animals was observed after 12 hours (Fig. 9), and this level was maintained for 50 hours, and only then there was a slow decrease in the content of IFN-a2 during 350 hours.
Площа під кривою (АОС) для заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН більш ніж у 50 разів перевищувала відповідне значення для немодифікованого ІФН. Потрібно відзначити, що для описаного в способі- прототипі кон'югата ПЕГ-ІФН-а2р, зв'язаного з ПЕГ з молекулярною масою 12000 Да, величина АОС перевищувала величину АОС для ІФН усього в 3-10 разів.The area under the curve (AUC) for the claimed PEG-IFN conjugate was more than 50 times higher than the corresponding value for unmodified IFN. It should be noted that for the PEG-IFN-α2p conjugate described in the prototype method, bound to PEG with a molecular weight of 12,000 Da, the value of AOS exceeded the value of AOS for IFN by only 3-10 times.
Виходячи з отриманих результатів (фіг. 9), були розраховані основні фармакокінетичні параметри для заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН-о2. Результати показали, що всмоктування з місця введення, об'єм розподілу, кліренс кон'югата ПЕГ-ІФН значно уповільнені в порівнянні з немодифікованим ІФН, що і забезпечило тривалу циркуляцію заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН у крові (більше 14 днів).Based on the obtained results (Fig. 9), the main pharmacokinetic parameters for the claimed PEG-IFN-o2 conjugate were calculated. The results showed that the absorption from the injection site, the volume of distribution, and the clearance of the PEG-IFN conjugate were significantly slowed down compared to unmodified IFN, which ensured long-term circulation of the declared PEG-IFN conjugate in the blood (more than 14 days).
Приклад 16Example 16
Порівняльна характеристика заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН-с2Б в порівнянні з кон'югатом ПЕГ-Comparative characteristics of the declared conjugate PEG-IFN-c2B in comparison with the conjugate PEG-
ІФН-а2Б0, що описаний в способі-прототипіIFN-a2B0, which is described in the prototype method
Проведено порівняння структури, основних фізико-хімічних та фармакокінетичних параметрів заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН-а25 в порівнянні з кон'югатом ПЕГ-ІФН-са2р, що описаний в способі- прототипі (табл. 5). Дані, що представлені в табл. 5, свідчать про значне покращення властивостей заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН в порівнянні з кон'югатом зі способу-прототипу.A comparison of the structure, main physicochemical and pharmacokinetic parameters of the claimed PEG-IFN-a25 conjugate was made in comparison with the PEG-IFN-sa2r conjugate described in the prototype method (Table 5). The data presented in the table. 5, indicate a significant improvement in the properties of the claimed PEG-IFN conjugate compared to the conjugate from the prototype method.
Таблиця 5Table 5
Основні фізико-хімічні і фармакокінетичні параметри заявленого кон'югатаThe main physicochemical and pharmacokinetic parameters of the declared conjugate
ПЕГ-ІФН-о2 в порівнянні з кон'югатом ПЕГ-ІФН-а2, що описаний в способі-прототипі (патент США Мо 5951974)PEG-IFN-o2 in comparison with the PEG-IFN-a2 conjugate described in the prototype method (US patent Mo 5951974)
Кон'югат, що описаний в способі-The conjugate described in method-
Заявлений кон'югат ПЕГ-ІФН прототипі (патент США Мо 5951974)The declared conjugate PEG-IFN prototype (US patent Mo 5951974)
Молекулярна масаMolecular weight
Структурна формула дет тот Інтерферон їе ак Х кон'югата ПЕГ-ІФН"У З альфагр НС о; Інтерферон альфа 2рThe structural formula of the interferon ee ac X conjugate of PEG-IFN"U Z alfagr NS o; Interferon alfa 2r
Питома активність, 90 ізомерівSpecific activity, 90 isomers
Тип зв'язку ПЕГ з стабі Й Нестабільний (для основного біпком табільний ізомеру, зв'язаного з ПЕГ черезThe type of connection of PEG with stable Y Unstable (for the main bicom stable isomer connected to PEG through
Ніз34 розчинахNiz34 solutions
Відношення АОС ПЕГ- х- Структурна формула кон'югата ПЕГ-ІФН, що отриманий за способом-прототипом, дана за посиланням "МНО Огид Іпгоптайоп", 2001, м. 15, М. 3-4, р. 206.The ratio of AOS PEG-x- The structural formula of the PEG-IFN conjugate, obtained by the prototype method, is given by reference "MNO Ogyd Ipgoptaiop", 2001, m. 15, M. 3-4, p. 206.
Приклад 17Example 17
Приклади фармацевтичних композицій на основі заявленого кон'югата ПЕГ-ІФН-а2р (А)Examples of pharmaceutical compositions based on the claimed conjugate PEG-IFN-a2r (A)
ПЕГ-ІФН-а2Б за п. З 10-500 мкгPEG-IFN-a2B according to paragraph C 10-500 μg
Натрій-ацетат тригідрат 1-5 мгSodium acetate trihydrate 1-5 mg
Оцтова кислота крижана до рн 5,0Glacial acetic acid to pH 5.0
Натрій хлористий 8-9 мгSodium chloride 8-9 mg
Полісорбат 80 0,01-0,1 мгPolysorbate 80 0.01-0.1 mg
ЕДТА динатрієва сіль 0,01-0,1 мгEDTA disodium salt 0.01-0.1 mg
Вода для ін'єкцій 1,0 мл (Б)Water for injections 1.0 ml (B)
ПЕГ-ІФН-о2Б за п. 4 10-500 мкгPEG-IFN-o2B according to item 4 10-500 μg
Натрій-ацетат 0,4-2,0 мгSodium acetate 0.4-2.0 mg
Оцтова кислота до рН 5,5Acetic acid to pH 5.5
Манітол 50 мгMannitol 50 mg
Декстран 15-30 мгDextran 15-30 mg
Полісорбат 80 0,01-0,1 мгPolysorbate 80 0.01-0.1 mg
ЕДТА динатрієва сіль 0,01-0,1EDTA disodium salt 0.01-0.1
Вода для ін'єкцій 1,0 мл (В)Water for injections 1.0 ml (B)
ПЕГ-ІФН-о2Б за п. 4 10-500 мкгPEG-IFN-o2B according to item 4 10-500 μg
Натрій-ацетат 0,4-2,0 мгSodium acetate 0.4-2.0 mg
Оцтова кислота до рН 5,5Acetic acid to pH 5.5
Манітол 50 мгMannitol 50 mg
Альбумін людини 10-12,5 мгHuman albumin 10-12.5 mg
Полісорбат 80 0,01-0,1 мгPolysorbate 80 0.01-0.1 mg
ЕДТА динатрієва сіль 0,01-0,1EDTA disodium salt 0.01-0.1
Вода для ін'єкцій 1,0 млWater for injections 1.0 ml
Приклад 18 Упакування в контейнер лікарського засобу, що містить ПЕГ-ІФН-а2рExample 18 Packaging in a container of a medicinal product containing PEG-IFN-a2r
Лікарський засіб, що включає ефективну кількість заявленого ПЕГ-ІФН-а25 (Приклад 17), розливають у стерильних умовах по 0,5, 0,8, 1,0 і 1,2 мл (для дозування 100 мкг/мл), по 0,5, 0,6, 0,75 і 0,9 мл (для дозування 200 мкг/мл), по 0,5, 0,6, 0,8, 1,0 їі 1,2 мл (для дозування 300 мкг/мл) у шприци з нейтрального скла | гідролітичного класу, з упаяними голками, покритими ковпачками захисними еластичними або твердими, закупорені наконечниками на поршні з бутилкаучуку, ламінованого фторполімером.The medicinal product, which includes an effective amount of the declared PEG-IFN-a25 (Example 17), is bottled under sterile conditions in 0.5, 0.8, 1.0 and 1.2 ml (for a dosage of 100 μg/ml), in 0 .5, 0.6, 0.75 and 0.9 ml (for a dosage of 200 μg/ml), 0.5, 0.6, 0.8, 1.0 and 1.2 ml each (for a dosage of 300 μg /ml) in syringes made of neutral glass hydrolytic class, with soldered needles, covered with protective elastic or hard caps, closed with tips on a piston made of butyl rubber laminated with fluoropolymer.
Приклад 19 Упакування в контейнер лікарського засобу, що містить ПЕГ-ІФН-с2ЬExample 19 Packaging in a container of a medicinal product containing PEG-IFN-c2b
Лікарський засіб, що включає ефективну кількість ПЕГ-інтерферону альфа-25 (Приклад 17), розливають у стерильних умовах по 0,5, 0,8, 1,0 і 1,2 мл (для дозування 100 мкг/мл), по 0,5, 0,6, 0,75 іThe medicinal product, which includes an effective amount of PEG-interferon alfa-25 (Example 17), is bottled under sterile conditions in 0.5, 0.8, 1.0 and 1.2 ml (for a dosage of 100 μg/ml), in 0 .5, 0.6, 0.75 and
0,9 мл (для дозування 200 мкг/мл), по 0,5, 0,6, 0,8, 1,0 і 1,2 мл (для дозування 300 мкг/мл) у флакони з нейтрального скла І гідролітичного класу, закупорені фторгумовими або бутилгумовими пробками з тефлоновим покриттям, обтиснутими алюмінієвими ковпачками.0.9 ml (for a dosage of 200 μg/ml), 0.5, 0.6, 0.8, 1.0 and 1.2 ml each (for a dosage of 300 μg/ml) in vials made of neutral glass of the I hydrolytic class , closed with fluororubber or butyl rubber stoppers with Teflon coating, crimped with aluminum caps.
Приклад 20Example 20
Набір, що включає упакований в контейнери лікарський засіб, який містить ПЕГ-ІФН-а25A kit including a container-packaged medicinal product containing PEG-IFN-a25
Набір містить по 1 або 4 шприци в комплекті з поршнем (1 або 4, відповідно) /флакона в контурному комірковому упакуванні з плівки полімерної разом з інструкцією по застосуванню, що поміщають у пачку з картону.The set contains 1 or 4 syringes complete with a piston (1 or 4, respectively)/vial in contour cell packaging made of polymer film together with instructions for use, which are placed in a cardboard pack.
Джерела інформації:Sources:
Патент Росії Ме 2311930, 2004; Патент Росії Мо 2382048, 2008; Патент Росії Мо 2298560, 2004;Russian Patent Me 2311930, 2004; Patent of Russia Mo 2382048, 2008; Russian Patent No. 2298560, 2004;
Патент Росії Мо 2180595, 2005; Патент США Мо 5951974, 1999;Russian Patent No. 2180595, 2005; US Patent Mo 5951974, 1999;
Вайоп Р., Вепйоїа мМУ., (1998), "Роїуєїпуїєпе аїусо!І-сопішдаїєд рпаптасецшісаї! ргоїєїпв", РНагт., Зсі.Vayop R., Vepyoia mMU., (1998), "Roiueipuiepe aiuso!I-sopishdaied rpaptasetsshisai! rgoieipv", RNagt., Zsi.
Тесппої. Тодау, 1,352-356.Thespians Todau, 1,352-356.
Ваїйоп Р., Раїегопі А., 5спапйег С. А., єї аї., (2001). "Вайопаї девзідп ої а роїепі, Іопд-Іавіїпд Топт ої іпїепйегоп: а 40-КОа Бргапсней роїуєїпуієпе діусоІ-сопішдаїєд іпіепегоп аірнпа-га їопйпе Неаїтепі оїVaiyop R., Raiegopi A., 5spapieg S. A., Yei Ai., (2001). "Vaiopai devzidp oi a roiepi, Iopd-Iaviipd Topt oi ipiepiegop: a 40-KOa Brgapsney roiueipuiepe diusoI-sopishdaiyed ipiepegop airnpa-ga iopype Neaitepi oi
Пераїййів С". Віосопіца. Спет. /12:195-202.Peraiyiv S". Viosopitsa. Spet. /12:195-202.
Веківл, у)., Зсптеівзег, Н., Негпапаеєл, У., Соідтап, М. О., 7о00п К. С., (2004), "Нитап ІпіепегопеVekivl, y., Zspteivzeg, N., Negpapaeel, U., Soidtap, M. O., 7o0p K. S., (2004), "Nytap Ipiepegope
АІрпа, Веїа апа Отеда". СтоулА Расіогв, Мої. 22 (4), рр. 243-251.AIrpa, Veia apa Oteda". StoulA Rasiogv, Moi. 22 (4), pp. 243-251.
Вошезіїп А., Катаг М., Запагез-зацйпе К, єї аї. (2006). "Редуїайоп ої ІРМ-а апа Апіїміга! Асіїмйу", /Vosheziip A., Katag M., Zapagez-zatsype K, Yeyi Ai. (2006). "Reduiaiop oi IRM-a apa Apiimiga! Asiimyu", /
Іпіенегоп «СуїоКіпе ВНез. 26:849-853.Ipienegop "SuioKipe VNez. 26:849-853.
ВикКомувкі В., Ег5іоїй М. 5., Сіоге М. Е., Метипаїйїв .). у)., Атаїйо В., Сиріа 5. К., Тепаїег С. І. (2002). "Реауїаїед іпіепегоп аМйа-2Б інєаїтепі ог раїйєпів м/йй 5оїїй Шштоге: а рпазе ІІ зішау", Сііп. Опсої., 2002:20(18):3841-3849.Vykkomuvki V., Eg5ioy M. 5., Sioge M. E., Metypaiyiv .). y)., Ataiyo V., Syria 5. K., Tepayeg S. I. (2002). "Reauiaied ipiepegop aMya-2B ineaitepi og raiyepiv m/yy 5oiy Shshtoge: a rpase II zishau", Siip. Opsoi., 2002:20(18):3841-3849.
Саїїсеїї Р., Мегопезе ЕР. М (2003), "РпаптасокКіпеїїс апа бБіодівзійршіоп ргорепіє5 ої роїу(еїпуієпе діусої)-ргоївіп сопійдаїев", Адм. ЮОга. Оеєїїм. Нем.;55(10): 1261-77.Saiyiseii R., Megopeze ER. M (2003), "RpaptasokKipeiis apa bBiodivziirshiop rgorepie5 oi roiu(eipuiepe diusoi)-rgoivip sopiidaiev", Adm. JuOga Oh my German; 55(10): 1261-77.
СНагеїші Е., Вовіаїпа І., Стедоіге М., Рауєп У. І., Рциіо! А., Ігореї у., Ноціп Сс., Сапа! Р. А. (1999) "Рпаптасокіпеїїс тоаве! гог аІрна іпіептегоп адтіпівієтед зирбсшапеоивіу". ВГ. у. Сііп. Рпагтасо).; 47: 365- 371.Snageishi E., Voviaipa I., Stedoige M., Rauep U.I., Rciio! A., Igorei u., Notsip Ss., Sapa! R. A. (1999) "Rpaptasokipeiis toave! gog aIrna ipieptegop adtipiviyeted zirbsshapeoiiviu". VG in. Siip. Rpagtaso).; 47: 365-371.
Спемаїгег 5., РаулоївКу у. М., 2009, "Іпіепегопз апа іНеїг изе іп регвівіепі міга! іптесіопв".Spemaiheg 5., RauloivKu u. M., 2009, "Ipiepegopz apa iNeig ize ip regviviepi miga! iptesiopv".
Напар. Ехр. Рпагтасої.; (189):203-41.For example Ex. Rpagtasoi.; (189):203-41.
Оесайв М., Запіпнапат 5., О'Вуте К (2002). "Роїепіа! ої іпїепегоп-аІрна іп зоїїй штоигв: рай 17",Oesaiv M., Zapipnapat 5., O'Wute K (2002). "Royepia! oi ipiepegop-aIrna ip zoiiy stoigv: rai 17",
Віобгодв. 2002;16(4):261-81.Trade 2002;16(4):261-81.
Оеїдадо С., Егапсів 0., Різпег С. Е (1992) "Тне изез апа ргорепіевз ої РЕС-ІпкКеа ргоївїп5", Стії. Неу.Oeidado S., Egapsiv 0., Rizpeg S.E (1992) "Tne izez apa rgorepievz oi RES-IpkKea rgoivip5", Stii. Neu.
Тег. Огид Саїтіег Бузі, 9 (1992) 249-304.Tag. Abomination Saitieg Boozy, 9 (1992) 249-304.
Еозег 5, Зспаспег А, Ууеуег КА, Вгиддег О, Оіеїе! Е, Мапі 5, ЗспгейтіиПег Т. (2003), "ІбоЇІайоп, втисішга! спагасієгігайоп, апа апіїміга! асіїмпу ої розпйопаї! ізхотег5 ої топоредуїаїей іпіепегоп аІрпа-га (РЕСАБУ5Б)". Ргоївіп Ехрг. Ритії., 30(1):78-87.Eozeg 5, Zspaspeg A, Uueueg KA, Vgyddeg O, Oieie! E, Mapi 5, ZspgeitiiPeg T. (2003), "IboYIayop, vtysishga! spagasiegigayop, apa apiimiga! asiimpu oi rospyopai! izhoteg5 oi toporeduiaiei ipiepegop aIrpa-ga (RESABU5B)". Rgoivip Ehrg. Rytii., 30(1):78-87.
Еовієї Са. В. (2004) "Редуїаїєд іпіепегопе: спетісаї апа сіїпіса! аїйегепсев". АІйтепі Рпаптасої. ТНег.; 20: 825-830.Eoviei Sa. V. (2004) "Reduiaied ipiepegope: spetisai apa siipisa! aiiyegepsev". AIitepi Rpaptasaoi. TNeg.; 20: 825-830.
Се Р., Рапд 9. МУ., Вошгієг-Рапів В., єї а. (2000) "Редуїаїєд іпіепегоп-аірнагр: рнаптасокіпеїїсв, рпаптасодупатісв, заїеїу, апа ргеїїтіпагу ейПісасу даїа". Сіп. Рнагтасої. ТНег.; 68: 556-67.Se R., Rapd 9. MU., Voshgieg-Rapiv V., Yei a. (2000). Sep. Rnagtasoi TNeg.; 68: 556-67.
Стасе М., Моипдбієг 5., СіЩШіп (з., єї аі. (2001) "Змисіига! апа Біоіодіс сНагасієгіганоп ої редуїаїєйд гесотбіпапі ІРМ-аІрнагрь". у. Іптепегоп СуюкКіпе Нев., 21: 1103-1115.Stase M., Moipdbieg 5., SiShShip (z., ei ai. (2001) "Zmysiiga! apa Bioiodis sNagasiegiganop oii reduiaiieid gesotbipapi IRM-aIrnagr". y. Iptepegop SuyukKipe Nev., 21: 1103-1115.
Стасе, М. 9., І ее, 5., Вгад5Нам, 5., Спартап, »., єї аї., (2005) "Зйе ої РЕСуїЇайоп апа роїуєїпуїепе діусо! тоїЇесціеє 5і7е айепиаїе іпіепегоп-а апіїмігаІ! апа апііргоїїегайме асіїмціеєв ІШгоцди те ЧАК/5ТАТ відпаїїпу раїймау", у. Віої. Снет., 280 6327 6336.Stase, M. 9., I ee, 5., Vgad5Nam, 5., Spartap, »., ei ai., (2005) "Zye oi RESuiYaiop apa roiueipuiepe diuso! toiIescieee 5i7e ayepiaiie ipiepegop-a apiimigaI! apa apiirgoiiiegaime asiimtsieev Ishgotsdi te CHAK/5TAT vidpaiipu raiymau", u. Vioi Snet., 280 6327 6336.
Ізаасв, А. апа Гіпаептапи, у. (1957), "Мігив іптепПегепсе: пе іпіепегоп", Ргос. В. ос. Меад., 147: 258- 267.Izaasv, A. apa Hypaeptapy, u. (1957), "Migyv iptepPegepse: pe ipiepegop", Rgos. V. os. Mead., 147: 258-267.
Уау Н. еї аї., (2006) "Редіпіенегоп апа Вірамігіп ог Спгопіс Нераїйів С", Те Мем Епдіапа 4. ої теаїсіпе, том 356, стор. 1269-1271, 2006.Uau N. ei ai., (2006) "Redipienegop apa Viramigip og Spgopis Neraiiv S", Te Mem Epdiapa 4. oi teaisipe, vol. 356, p. 1269-1271, 2006.
Каєніег К. С., зопаак У. К., Зспадепаоті 0., Наизсніга А. (2010), "Редуїаїей іпіепегопе: ргозресів огKayenieg K. S., Zopaak U. K., Zspadepaoti 0., Naizsnyga A. (2010), "Reduiaiei ipiepegope: rgozresiv og
Те изе іп їйе адіимапі апа раїІайїме ІНегару ої теїавзіаййс теІапота", Єиг. У. Сапсег. 2010,46(1):41-6.Te ize ip oliye adiimapi apa raiIayime INEgaru oi teiavziayis teIapota", Yeig. U. Sapseg. 2010,46(1):41-6.
Іат М. Р., Ріїтак 0., Зрегаїаків В., І а А. Н, М/пПєу Т. Е., І аудеп Т. У). (1997), "ЕНесі ої орезйу оп рпаптасокіпеїйсз апа Біоіодіс епесі ої іпіїепПегоп-аїІрна іп Нераїйів С", бід. бів. 5сі.; 42(1): 178-85.Iat M. R., Riitak 0., Zregaiakiv V., I a A. N, M/pPeu T. E., I audep T. U). (1997). beat 5th century; 42(1): 178-85.
Мапп5 М. Р., МеНиїспізоп У. Сї., Сбогаоп 5. С, еї а. (2001) " Редіпіенегоп аїга-2Ь ріив тірамігп сотрагед мій іпіенегоп ага-2ь рів пірамітп ог іпіна! ігеаїтепі ої спгопіс пераїййів С: а гапдоті ва ігіа!".Mapp5 M. R., MeNiispizop U. Si., Sbogaop 5. S, ei a. (2001).
І апсеї, 358: 958-65.I apsei, 358: 958-65.
Магсеїіїп Р. (2009) "Нераййів В апа пераййів С іп2009", І імег Іпіегпаййопаї!., 29(51): 1-8.Magseiiip R. (2009) "Neraiyiv V apa peraiyiv S ip2009", I imeg Ipiegpayiopai!., 29(51): 1-8.
МопкКагзй 5. Р., Ма У., Адііопе А., Вайоп Р., еї а!., (2007), "Розйопа! Ізотег5 ої МопоредуїаївйMopkKagzy 5. R., Ma U., Adiiope A., Vaiop R., ei a!., (2007), "Rozyope! Isoteg5 oi Moporeduiaivy
Іпіепегоп со-га: ІзоЇайоп, СНагасієгігайоп, апа Віоіодіса! Асіїмпу", Апа|уііса! Віоспетівігу, 247:434-440.Ipiepegop so-ha: IzoYayop, SNagasiegigayop, apa Viioodisa! Asiimpu", Apa|uiisa! Viospetivigu, 247:434-440.
МеНшисніпзоп у., (зогадоп 5. С., ЗСПІН Е. В. єї а!., (1998), ""піенегоп аїГа-2Ь аіопе ог іп сотбріпайоп м/їй пірамігіп ав іпіна! ігеаїтепі юг спгопіс перайів С" ТМ. Епа). У. Мед. Мої. 339, 21,1485-1492.MeNshisnipzop u., (zogadop 5. S., ZSPIN E.V. eyi a!., (1998), ""pienegop aiGa-2b aiope og ip sotbripayop m/iy piramihip av ipina! igeaitepi yug spgopis peraiiv S" TM. Epa). U. Med. Moi. 339, 21, 1485-1492.
МеНиїснізоп .. еї аї., (2009) "Редіпіенегоп АїГа-25 ог АІга-2а м/йп Ківамігіп тог Тгеайтепі ої Нерайіз СMeNiisnizop .. ei ai., (2009) "Redipienegop AIGa-25 og AIga-2a m/yp Kivamigip tog Tgeaytepi oi Nerayiz S
Іптесіоп", Те Мем Епдіапа .). ої тедісіпе, том 361, стор. 580-593, 2009.Iptesiope", Te Mem Epdiapa.). oi Tedisipe, volume 361, pages 580-593, 2009.
Моаі А. А., Папа Т. у. (2008), "Нераїйів С: а сіїпіса! гтеміем", Огаї. Оів.м. 14(1): 10-4.Moai A. A., Papa T. u. (2008), "Neraiiov S: a siipisa! gtemiem", Ohai. Oiv.m. 14(1): 10-4.
РезіКа, 5., Кгаизе, С. О., УМакег М. К (2004), "І"птепегопв, іпсегегоп-ІїКе суїоКіпев, апа ІНеїг тесеріогв",ReziKa, 5., Kgaize, S. O., UMakeg M. K (2004), "I"ptepegopv, ipsegegop-IiKe suioKipev, apa INeig teseriogv",
Іттипоіодіса! Неміємв, 202: 8-32.Ittypoiodis! Nemiemv, 202: 8-32.
Резіка, 5. (2007). "ТНе іпіенегопе: 50 уєагв апйег іІНеїг аізсомегу, ІШТеге ів тис тоге Юю Івагп", у. Віої.Rezika, 5. (2007). "TNe ipienegope: 50 uyeagv apyeg iINEig aizsomegu, ISHtege iv tys toge Yuyu Ivagp", u. Vioi
Спет., 135;282(28):20047-51.Spet., 135;282(28):20047-51.
Резіка, 5. (2007). "Ринітісаноп апа сіопіпа ої іптепегоп аІрна", Ст Тор Містобвіо! Іттипої.; 316:23-37.Rezika, 5. (2007). "Rynitisanop apa siopipa oi iptepegop aIrna", St Tor Mistobvio! And so on.; 316:23-37.
Оціпіаз-Сагдата А., Капіагціап Н. М., Сіїез Е., Мегзіомзек 5. (2006), "Редуїаївд іпіепегоп Іегару ог раїйєепів мій РНийЙадеїрніа спготовзоте-педаїїме туеіІоргоїНегаїйме аібзогдегв". Зетіп Тптотр Нетозві., 2006;32(4 РІ 2):409-16.Otsipiaz-Sagdata A., Kapiagciap N.M., Siyez E., Megziomzek 5. (2006), "Reduiaivd ipiepegop Iegaru og raiyeepiv mii RniyYadeirnia spgotozote-pedaiime tueiIorgoiNegaiime aibzogdegv". Zetip Tptotr Netozvi., 2006;32(4 RI 2):409-16.
Ведау К. К., УупднІ Т. Г., РосКгоз Р. 9., З5пйтап М., Емегзоп 0. еї а!., 2001, "Епісасу апа заїеїгу ої редуїаїєа (40-Ка) іптепегоп о-г2а сотрагей ул іпіепегоп со-г2а іп попсіг"поїїс раїїєепібв мій спгопіс пераїййівVedau K. K., UupdnI T. G., RosKgoz R. 9., Z5pytap M., Emegzop 0. ei a!., 2001, "Episasu apa zaieigu oi reduiaiiea (40-Ka) iptepegop o-g2a sotragei ul ipiepegop so-g2a ip popsig"poiis raiiiieepibv my spgopis peraiiiiv
С", Нерайіоаду, 33, 433-438.S", Neraiioadu, 33, 433-438.
Вобепз М. у., ВепіЧем М. 0., Наїтіз У. М. (200239" Спетівігу тог реріїде апа ргоївіп РЕСуїЇайоп". АдмVobepz M. u., Vepichem M. 0., Naitiz U. M. (200239 "Spetivigu tog reriide apa rgoivip RESuiYaiop". Adm
Огиг2 Овіїм ВНем., 54(4):459-76.Ogyg2 Oviim VNem., 54(4):459-76.
Зіма М., Роо у)., ММадпег Р. еї аї. (2006) "А гтапдотівзей Ша! (о сотраге рНаптасокКіпеїс, рпаптасодупатіс, апа апіїміга! еПесів редіпіепйегоп аїга-25 апа редіпіенегоп аїга-га іп раїепів м/п спгопіс пера С (СОМРАКЕ)", Уоитаї Нераїйоіоду, 45: 204-213.Zima M., Roo u)., MMadpeg R. ei ai. (2006).
М/апод, У. -5., Моиповівг 5., Ваийвсй 9., 2папд В., МеМетаг С, Муз 0. Р. (2000), "Ідепійісайноп ої Те та)цог розійопаї ізхотег ої редуїаїед іпіепегоп аірна-2р" Віоспетівігу, 2000, 39(35): 10634-10640.M/apod, U. -5., Moipovivg 5., Vaiyvsy 9., 2papd V., MeMetag S, Muz 0. R. (2000), "Idepiyisainop oi Te ta)tsog roziyopai izhoteg oi reduiaied ipiepegop airna-2r" Viospetivhigu, 2000, 39(35): 10634-10640.
М в В. 9. "Сіїпіса! Рнаптасоіоду ої іпіепПегопв". Сіїп Рнаптасокіп. 1990; 19:390-399.M in V. 9. "Siipisa! Rnaptasoiodu oi ipiepPegopv". Siip Rnaptasokip. 1990; 19:390-399.
Уоипдвівї 5., Мапд У. 5., Ссгасе М, Вайзспі .., Вогаєпз В., МУувзз 0. Б. (2002). " Бігисішиге, Біоіоаду, апаUoipdvivi 5., Mapd U. 5., Ssgase M, Vaizspi .., Vogaepz V., MUuvzz 0. B. (2002). " Bigisishige, Bioioadu, apa
Іегареціїс ітріїсайоп5 ої реадуїаїед іпіенегоп аіїрпа-25" Сит Ріапт Оезв.:8(24):2139-2157. гаїрзКу 5 (1995). "Рипсійопаїїгед роїу(еійпуієпе діусої) їТог ргерагайоп ої бБіоіодісаПу геїємапі сопійдаїев", Віосопі. Снет. 6, 150-165. 7ейгет 5., Неаїйсоїе У. Е., Майіп М., Мієтопи К., Моді М. (2001), "Редіпїіепнегоп ага-га (40 Коба) топоїПпегару: а помеї адепі г спгопіс пераїййі5 С «(Пегару", Ехреп Оріп Іпмевіїд ЮОгидв, 10 (12):2201-2213.Iegaretsiis itriisaiop5 oi readuiaied ipienegop aiirpa-25" Syt Riapt Oezv.:8(24):2139-2157. gairzKu 5 (1995). "Ripsiopaiiged roiu(eijpuiepe diusoi) iTog rgeragaiop oi bBioiodisaPu geiiemapi sopiidai, Viosopi, Sev. 6". 150-165. 7eyget 5., Neaiysoie U.E., Mayip M., Mietopi K., Modi M. (2001), "Redipiiepnegop aga-ha (40 Koba) topoiPpegaru: a pomei adepi g spgopis peraiii5 S "(Pegaru ", Ekhrep Orip Ipmeviid YuOgidv, 10 (12):2201-2213.
Час ПЕ млювання содина) клан х Е ес щи ко й в зейTime PE threshing grain) clan x Ees shchi ko and v zey
Ж сних ННSame dreams NN
Кінетика утворення кон'югата ІФН-а2і при проведенні реакції їз застосуванням бутиральдегідної похідної мПпЕГKinetics of the formation of the IFN-a2i conjugate during the reaction using the butyraldehyde derivative mPPEG
Фіг. 1 і ї Я К 4 ї х 7 ЕК дек ї | й - х ВОЮ щ ва . ші ше НІ ве ї ! днини А КМ дя я и ! Ї у. гFig. 1 and th I K 4 th x 7 EK dec th | y - x VOYU shva . shi she NO ve i ! dnyni A KM dya i i ! She has Mr
Кн ши а | я о «а Ї НН ї- З вл ! щі ща В ; | ся ШЕ кшщ кВ ще ЇЇ жов є і : у ово. 1 аюKn shi a | i o "a І NN і- Z вl ! shchi shcha B ; | sya SHE kshsh kV still HER zhov is also: in ovo. 1 ayu
ОА ей вдо воб оюдб зап. лу озвля ЗБ звоб до ФМю аOA ey wdo vob oyudb zap. lu zvlya ZB zob to FMu a
КТ (хва Площа за Млоші о ВасеіУї 5 Ва ї р і й СУК !KT (hva Area for Mloshi o VaseiUi 5 Va i r i i SUK !
ЗиЯ оо 186 ою 2 11367 | ЯМІ | 9957 | 96735 | 530 «фіг. 5. Зворотно-фазова ВЕРХ кон'югата ПЕГ-НОН оо яз колові "бувивену СІ (4бх 150 мм)ZyYa oo 186 oyu 2 11367 | YAMI | 9957 | 96735 | 530 "fig. 5. Reverse-phase HPLC of the PEG-NON conjugate with circular "buvyvenu SI" (4 x 150 mm)
Ва оOh
ШОК я - подSHOCK I - pod
ПЕГАФН що о в - с. в ше 000000 ша ша че 0! ни ши ОО що нн вхPEGAFN what about in - p. in she 000000 sha sha che 0! ny shi OO what nn vh
ВК АVK A
. й ИН и М. and IN and M
ОЖММ . 3 СО яOJMM. 3 SO i
Фіг. 3, Електрофоретичний аналіз ков'ютата ПЕГ-ІФН-яов к порівнянні з немодифікованим ІФІ-аов, Зпектрофорез проводили з умовах, що не рудукують.Fig. 3, Electrophoretic analysis of the conjugate of PEG-IFN-aov in comparison with unmodified IFI-aov, Spectrophoresis was carried out under non-reducing conditions.
Фарбовування пластин ПААГ проволиля барвником Кумассі К-250,Staining of PAAG provolyl plates with Coomassie K-250 dye,
Треки:Tracks:
Мік - Шики-ствидарти молекулярних мас; трек 1 - в лунку внесено ЧО мкг кон'ютата НЕГАФН-аді; трек 2 - в лунку внесено 40 мкг немодифікованого ФН-агів.Mick - Shiki-stvidarts of molecular masses; track 1 - CHO μg of NEGAFN-adi conjugate was introduced into the well; track 2 - 40 μg of unmodified FN-ag was added to the well.
т спе нини о пил п в і ві пі пи п пп в й і. !t spe nyny o pil p v i vi pi pi p pp v y i. !
Ж 7 Нативний т : 1 вва : їх КЕ ї : хі Н і ;Zh 7 Native t: 1 vva: ikh KE i: khi N i;
Я і :Me and:
І : 3 Я : ї : як ЕйИ : 3 Я : и : as Ey
В й ЕV and E
ШУ в гSchool of Education in
С шШьК Я ЕС шШК I E
ЖЕ В У ; я. і і ї г НЕРАВН х ЇSAME IN IN ; I. i i i r UNEQUAL x Y
Ж ще 3 ЯThere are 3 more
З хх ї і. щ 8 ЩЕFrom xx and i. sh 8 MORE
ВК Є 5 ЗVK There are 5 Z
ТЕ В ї :THESE:
Е Бах ОеЙ е ї її ! ї о вена они Ши і: ре пулу дну ек ооо в вис днк и ни в З вн ки нн оон ТІТКА тки -E Bach OeY e her! y o vena they Shi i: re pulu dnu ek ooo v vys dnk i ny v Z vn ki nn oon TITKA tki -
У ще я а ж як що ще о.I still have, but what else is there?
ЩЕMORE
Янг; Я, МАТОМ мас-снектри вемодифікованого НОН-В Її ков ютата ПЕСАФИ ВYang; I, MOTHER of the mas-snektra of the modified NON-B Her cov utata PESAFY B
А) -немолицнковцнни вененНяХВ (83 -кон'югає ПЕГ- БНО,A) -nemolytsnkovtsny venenNyaHV (83 -conjugates PEG-BNO,
!!
Ей Е; АEy E; AND
ЩО а в 5 М й «Е Во- Й ее 5WHAT is in 5 M and "E Vo- Y ee 5
Й я г ад яAnd I'm sorry
З в що в | : й :With what in | : and :
З | | тWith | | t
М. т ! ; І . й їM. t! ; And. and eat
І Й нн чи н ши йI Y nn or n shi y
З їй що х Б гWith her what x B g
Фон й йBackground, etc
ТЕ ї - «е .TE i - «e .
Е.. І :E.. And:
Гн і я а. о 5 юю | І- : і є : а Гой й 2. ч | х : т В : - у ї. і Й; Н ! ' ! о: 29 ЯБО01580 1661 130 136001980Hn and I a. at 5 o'clock And- : and there is : and Goy and 2. h | х : т В : - у и. and Y; N ! ' ! o: 29 YaBO01580 1661 130 136001980
ПиЯPiYa
Фіг. 5. Локалізація сайту ПЕГилювання: в ков'югаті ПЕТ Н-о20. Порівняння мас- ецпектрів триптичних пептидів немонифікованого ФН-азЬ (А і кон'югата ПЕГУрчЧІЮН- 26 ЄВ) в дизхвалові пх 1200-1900 реквВНе та ра ад , и 5 і ва вFig. 5. Localization of the PEGylation site: in the PET H-o20 conjugate. Comparison of the mass spectra of tryptic peptides of non-monized FN-azb (A and conjugate PEGURchCHIUN-26 ЕВ) in dischvalov ph 1200-1900 rekvVNe and raad , and 5 and va in
З хо ПА: : З ван пр фноеть ії о 5 ЕТ. т 20 25 30Z ho PA: : Z van pr fnoet ii o 5 ET. t 20 25 30
Че інкубиції (годнне «Віки. Доспідженві термастабічьності кон 'юваха ПЕ ФВ пра темперітурі (03 ИЄ зло. - о. ее ак ов - шина о ПЕС ес»Che of incubation (worthy "Ages. Dospijhenvi termastabichnisti con 'yuvakha PE PV pra temperature (03 IE zlo. - o. ee ak ov - shin o PES es"
ВМО шо Ше щ в 704 ЯVMO sho She sh in 704 Ya
Е Сени, ТФІТчХЛЬ "м ше жк ж ШТ ще РМ, С З ЗE Seny, ТФХХЛХ "m she zhk z ShT even RM, S Z Z
Час (содаTime (soda
Фіг. 7, Дослідження протеолітичної скабільності кон'ютата ПЕГАФНАООВ при обробці трипенномМFig. 7, Study of the proteolytic stability of PEGAFNAOOV conjugate when treated with trypenM
Зелена лінія « конлогат ПЕР-АФНЯЮЬ;Green line « conglot PER-AFNYAYU;
Червова лінія « немодифікований ФЕН егВ тав 1. ад ПЕРЧФеНоЬWorm line « unmodified FEN egB tav 1. ad PERCHFeNoB
Шу з "ж я. у Дис 8020000 МО млуголамаShu from the same i. in Dis 8020000 MO Mlugolam
З 04 ск 5 о ТФІнсЬ виFrom 04 sk 5 o'clock TFInsШ you
КЗ Ти й АС БОЮ Цю Ма роди сн, ціKZ You and AS FIGHT This Ma born dream, these
Є : Їх вах -ї ; Ку й 0) 5О 100 150 200 250 Д300 350There are: Their vah -y; Ku y 0) 5О 100 150 200 250 D300 350
Час (години) «іт, 8 Фармакокінетика ксн'ютата ПЕР-ФН-аОЬ ово порівнянні З немодифікованим ФЕВTime (hours) "it, 8 Pharmacokinetics of the extract of PER-FN-aOb is comparable to unmodified FEV
Claims (25)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010129824/10A RU2447083C1 (en) | 2010-07-20 | 2010-07-20 | NOVEL FUNCTIONALLY ACTIVE, HIGHLY PURE, STABLE CONJUGATE OF INTERFERON α WITH POLYETHYLENE GLYCOL, REPRESENTED BY ONE PEG- NαH-IFN POSITIONAL ISOMER, WITH IMPROVED IMMUNOGENICITY, WITH PROLONGED BIOLOGICAL ACTION, SUITABLE FOR MEDICAL APPLICATION, AND IMMUNOLOGICAL AGENT BASED THEREON |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA99766C2 true UA99766C2 (en) | 2012-09-25 |
Family
ID=45497062
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA201015114A UA99766C2 (en) | 2010-07-20 | 2010-12-15 | NOVEL FUNCTIONALLY ACTIVE, HIGHLY PURIFIED, STABLE PEG-INTERFERON ALPHA CONJUGATE REPRESENTED BY ONE POSITIONAL ISOMER PEG- NaH WITH REDUCED IMMUNOGENITY, PROLONGED BIOLOGICAL ACTION, USEFUL FOR MEDICINAL USE, WITH IMPROVED PHARMACOKINETIC PARAMETERS AND IMMUNOBIOLOGICAL AGENT BASED THEREON |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR101586372B1 (en) |
CN (1) | CN102617736B (en) |
AR (1) | AR087227A1 (en) |
BR (1) | BRPI1101565A2 (en) |
CO (1) | CO6680611A2 (en) |
CR (1) | CR20130021A (en) |
CU (1) | CU24193B1 (en) |
DO (1) | DOP2013000002A (en) |
EA (1) | EA020257B1 (en) |
EC (1) | ECSP13012398A (en) |
HK (1) | HK1170504A1 (en) |
MX (1) | MX2011007458A (en) |
MY (1) | MY168784A (en) |
NI (1) | NI201300008A (en) |
PE (1) | PE20131034A1 (en) |
RU (1) | RU2447083C1 (en) |
SG (1) | SG187117A1 (en) |
UA (1) | UA99766C2 (en) |
UY (1) | UY33525A (en) |
WO (1) | WO2012011836A1 (en) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2515913C1 (en) * | 2013-03-22 | 2014-05-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | HYBRID PROTEIN HAVING PROLONGED ACTION, BASED ON RECOMBINANT HUMAN INTERFERON ALPHA-2 (VARIANTS), METHOD OF ITS PRODUCTION AND STRAIN OF Saccharomyces cerevisiae FOR IMPLEMENTING THIS METHOD (VERSIONS) |
EA021643B1 (en) * | 2013-03-28 | 2015-07-30 | Илья Александрович МАРКОВ | Monopegylated interferon-alpha of linear structure and a pharmaceutical composition for preparing a medicament having interferon-alpha activity |
EA021610B1 (en) * | 2013-03-28 | 2015-07-30 | Илья Александрович МАРКОВ | Liquid antiviral formulation |
CN103463623B (en) * | 2013-09-03 | 2015-09-09 | 长春海伯尔生物技术有限责任公司 | A kind of Peg-IFN alpha-2b injection and preparation method thereof |
RU2554761C1 (en) * | 2014-05-13 | 2015-06-27 | Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" | Anti-enteroviral and immunostimulating agent |
RU2572800C1 (en) * | 2014-09-22 | 2016-01-20 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | New formulation containing polyethylene glycol (peg) conjugated interferon alpha-2beta characterised by less painful administration |
EA029498B1 (en) * | 2015-11-24 | 2018-04-30 | Учреждение Белорусского государственного университета "Научно-исследовательский институт физико-химических проблем" (НИИ ФХП БГУ) | ANTI-TUMOUR DRUG BASED ON RECOMBINANT INTERFERON ALPHA-2b IN THE FORM OF MICROPARTICLES FOR PARENTERAL ADMINISTRATION |
RU2678332C1 (en) | 2017-09-08 | 2019-01-28 | Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") | Pegylated interferon lambda with high bioaccessability in oral use and method for production thereof |
EP4139343A4 (en) * | 2020-04-20 | 2024-06-12 | National Research Council of Canada | Recombinant interferon |
CN114392237B (en) * | 2021-12-28 | 2024-02-02 | 上海允英生物医药科技有限公司 | Freeze-dried virus preparation and preparation method thereof |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5951974A (en) * | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
US20030053982A1 (en) * | 1994-09-26 | 2003-03-20 | Kinstler Olaf B. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
JP2758154B2 (en) * | 1995-04-06 | 1998-05-28 | エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー | Liquid preparations containing interferon |
TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
AP2005003246A0 (en) * | 2002-09-09 | 2005-03-31 | Nektar Therapeutics Al Corp | Water-soluble polymer alkanals |
RU2311930C2 (en) * | 2004-04-30 | 2007-12-10 | Закрытое акционерное общество "ВЕРОФАРМ" | Pagylated interferon against viral infection |
JP2008509889A (en) * | 2004-06-30 | 2008-04-03 | イージェン コーポレーション | PEGylated interferon alpha-1b |
DE602006013151D1 (en) * | 2005-07-19 | 2010-05-06 | Nektar Therapeutics | METHOD FOR PRODUCING POLYMERMALIMIDES |
US8840882B2 (en) * | 2006-06-23 | 2014-09-23 | Quintessence Biosciences, Inc. | Modified ribonucleases |
CN101491682A (en) * | 2008-04-30 | 2009-07-29 | 北京凯正生物工程发展有限责任公司 | PEG-IFN omega conjugate and preparation technique thereof |
CN101591387A (en) * | 2008-05-28 | 2009-12-02 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | PEG-IFN omega conjugate |
CN101514229B (en) * | 2009-04-03 | 2012-05-09 | 海南四环心脑血管药物研究院有限公司 | Human interferon alpha derivative and polyethylene glycol modified substance thereof |
-
2010
- 2010-07-20 RU RU2010129824/10A patent/RU2447083C1/en active
- 2010-09-24 SG SG2013003801A patent/SG187117A1/en unknown
- 2010-09-24 PE PE2013000084A patent/PE20131034A1/en not_active Application Discontinuation
- 2010-09-24 MY MYPI2013000216A patent/MY168784A/en unknown
- 2010-09-24 CU CUP2013000013A patent/CU24193B1/en active IP Right Grant
- 2010-09-24 WO PCT/RU2010/000529 patent/WO2012011836A1/en active Application Filing
- 2010-09-24 KR KR1020137001858A patent/KR101586372B1/en not_active IP Right Cessation
- 2010-12-15 UA UAA201015114A patent/UA99766C2/en unknown
-
2011
- 2011-04-01 BR BRPI1101565-9A patent/BRPI1101565A2/en not_active IP Right Cessation
- 2011-06-21 EA EA201100809A patent/EA020257B1/en not_active IP Right Cessation
- 2011-07-12 MX MX2011007458A patent/MX2011007458A/en active IP Right Grant
- 2011-07-19 AR ARP110102606A patent/AR087227A1/en unknown
- 2011-07-19 CN CN201110214149.6A patent/CN102617736B/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-07-20 UY UY0001033525A patent/UY33525A/en unknown
-
2012
- 2012-11-07 HK HK12111241.0A patent/HK1170504A1/en not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-01-04 DO DO2013000002A patent/DOP2013000002A/en unknown
- 2013-01-18 NI NI201300008A patent/NI201300008A/en unknown
- 2013-01-18 EC ECSP13012398 patent/ECSP13012398A/en unknown
- 2013-01-18 CR CR20130021A patent/CR20130021A/en unknown
- 2013-01-18 CO CO13009157A patent/CO6680611A2/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EA201100809A1 (en) | 2012-01-30 |
RU2010129824A (en) | 2012-01-27 |
CU24193B1 (en) | 2016-09-30 |
KR20130056885A (en) | 2013-05-30 |
CO6680611A2 (en) | 2013-05-31 |
ECSP13012398A (en) | 2013-05-31 |
PE20131034A1 (en) | 2013-09-27 |
MX2011007458A (en) | 2012-01-19 |
SG187117A1 (en) | 2013-02-28 |
NI201300008A (en) | 2014-05-26 |
DOP2013000002A (en) | 2013-09-15 |
AR087227A1 (en) | 2014-03-12 |
WO2012011836A1 (en) | 2012-01-26 |
BRPI1101565A2 (en) | 2012-12-04 |
RU2447083C1 (en) | 2012-04-10 |
CN102617736B (en) | 2015-11-25 |
HK1170504A1 (en) | 2013-03-01 |
UY33525A (en) | 2012-02-29 |
CR20130021A (en) | 2013-02-20 |
KR101586372B1 (en) | 2016-01-18 |
EA020257B1 (en) | 2014-09-30 |
CU20130013A7 (en) | 2013-04-19 |
CN102617736A (en) | 2012-08-01 |
MY168784A (en) | 2018-12-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA99766C2 (en) | NOVEL FUNCTIONALLY ACTIVE, HIGHLY PURIFIED, STABLE PEG-INTERFERON ALPHA CONJUGATE REPRESENTED BY ONE POSITIONAL ISOMER PEG- NaH WITH REDUCED IMMUNOGENITY, PROLONGED BIOLOGICAL ACTION, USEFUL FOR MEDICINAL USE, WITH IMPROVED PHARMACOKINETIC PARAMETERS AND IMMUNOBIOLOGICAL AGENT BASED THEREON | |
AU656212B2 (en) | Asialoglycoprotein-conjugated medicinal agent | |
US6583267B2 (en) | Chemically modified polypeptides | |
JP2980569B2 (en) | Interferon complex | |
RU2446173C1 (en) | New functional, high-purity stable conjugate of granulocyte colony-stimulating factor (g-csf) and polyethylene glycol with prolonged biological action, applicable for medical purposes, and based immunobiological agent | |
WO2015090162A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising adalimumab | |
JP2002540065A (en) | GCSF conjugate | |
JPH0770195A (en) | Sugar-modified interferon | |
US20110158943A1 (en) | Interferon alpha 2b modified by polyethylene glycol, the preparation and use thereof | |
BRPI0622128A2 (en) | polyethylene glycol-g-csf conjugate | |
US20210268117A1 (en) | Methods of generating a pegylated il-11 composition | |
Jo et al. | Long-acting interferon-α 2a modified with a trimer-structured polyethylene glycol: Preparation, in vitro bioactivity, in vivo stability and pharmacokinetics | |
US20100239532A1 (en) | Interferon alpha2a modified by polyethylene glycol, the preparation and use thereof | |
EP0598905A1 (en) | STABILIZED IL-1$g(a) PHARMACEUTICAL PREPARATION | |
RU2576372C2 (en) | PEG-MODIFIED HUMAN INTERFERON β-1a MOLECULE WITH ANTIVIRAL, IMMUNOMODULATORY AND ANTIPROLIFERATIVE ACTIVITY, WITH IMPROVED STABILITY, REDUCED IMMUNOGENICITY, IMPROVED PHARMACOKINETIC AND PHARMACODYNAMIC PARAMETERS, SUITABLE FOR MEDICAL USE, AND IMMUNOBIOLOGICAL FORMULATION BASED THEREON | |
EA006368B1 (en) | Chemically-modified progenipoietin conjugates | |
EA022617B1 (en) | Monopegylated interferon-alpha of branched structure and a pharmaceutical composition for preparing a medicament having interferon-alpha activity | |
EA021643B1 (en) | Monopegylated interferon-alpha of linear structure and a pharmaceutical composition for preparing a medicament having interferon-alpha activity | |
US20150329601A1 (en) | Methoxypolyethyleneglycol succinimidyl propionate modified recombinant Ganoderma Lucidum immunoregulatory protein, preparing method and application thereof | |
AU2004233543A1 (en) | GCSF Conjugates | |
JPH07233199A (en) | Granular colony stiumulating factor derivative |