UA78968C2 - Nucleotide sequence for gene therapy of hiv-infected patients by expression of membrane-anchored gp41 peptides - Google Patents
Nucleotide sequence for gene therapy of hiv-infected patients by expression of membrane-anchored gp41 peptides Download PDFInfo
- Publication number
- UA78968C2 UA78968C2 UA2002065189A UA2002065189A UA78968C2 UA 78968 C2 UA78968 C2 UA 78968C2 UA 2002065189 A UA2002065189 A UA 2002065189A UA 2002065189 A UA2002065189 A UA 2002065189A UA 78968 C2 UA78968 C2 UA 78968C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- nucleotide sequence
- hiv
- protein
- fact
- vector
- Prior art date
Links
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 30
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 title abstract 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 40
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 19
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims abstract 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 9
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 7
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 4
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101001092125 Homo sapiens Replication protein A 70 kDa DNA-binding subunit Proteins 0.000 claims description 2
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims description 2
- 102000057074 human RPA1 Human genes 0.000 claims description 2
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 claims description 2
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 claims description 2
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims 2
- 108010032605 Nerve Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 claims 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 claims 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 12
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 102100020873 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 102000016355 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010092372 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241001068263 Replication competent viruses Species 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 235000019994 cava Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 108010055790 immunoglobulin B Proteins 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Опис винаходу
Винахід стосується генотерапії ВІЛ-інфікованих пацієнтів шляхом експресії мембрано-анкерованих др41 2 пептидів. Вперше стали доступні лікувальні вектори, які кодують злитий протеїн, що містить похідне др41 пептиду ВІЛ і карбокситермінальний трансмембранний анкер, що зв'язані за допомогою гнучкого лінкеру.
Було запропоновано дуже велике різноманіття терапевтичних підходів до лікування ВІЛ інфекцій. Однак, одержані активні речовини мають досить низьку толерантність у багатьох пацієнтів. Постійно, для покращення лікування СНІДу, ведеться пошук нових місць впливу і активних речовин з різною токсичністю. В цьому 70 контексті, були запропоновані різні підходи генотерапевтичного інгібування різних стадії реплікації ВІЛ (порівняй Зого Т. 5 МеїйНаї), М. Тгапегив. Зсі. 18, 277-289 (1977).
Ума ек аї. (МУйЛа, С.Т. Зпидаге, Ю.С. ОСгеепуеїї, Т.К. МсОрапа!ї, С.В. 5 Майцйпемув, Т.). Ргос. Май. Асай. зЗсі
О.5.А. 91, 9770-9774 (1994)3| запропонували терапевтичний підхід, що грунтується на спостереженні, що пептиди, які є похідними трансмембранного протеїну др41 (порівняй 5ЕО ІЮ МО: 4 відповідний цифровий код «400», у відповідності з Стандартом УМІРО 5Т. 25: 4) ВІЛ, такий як, наприклад, пептид 1-20, раніше відомий як ОР178, може ефективно інгібувати злиття ВІЛ і проникнення в клітину. 7-20 є пептидом, який перекривається з
С-термінальним повторюваним гептадом, одного з двох доменів (порівняй позиції 539-589 і 622-662 5ЕО ІЮ МО: 4| в ектодомені др41, і може ефективно інгібувати інфекцію ВІЛ іп мійго |М/еіззепирогп, МУ., ЮОеззеп., А.,
Наїтізоп, 5.С. ЗКепеї, 9.9 КУМПеу, О.С. Майте 387, 426-430 (1997); Спап, О.С. Разв, О., Вегдег, У.М. 5 Кіт, Р.5.
Се//89. 263-273 (1997); Еигціа, В.А., УМіІд, СТ., М/епо У 8: Му/еївв, СО. Маї. Зігисі. Вісі. 5, 276-279 (19983).
В контексті клінічних досліджень |КИру, 9У.М., НорКіпе 5., МепеНа, Т.М. ей а). Маї. Мей. 4, 1302-1307 (1998)), у випадку короткострокового призначення Т-20 забезпечується безпечне і ефективне інгібування реплікації ВІЛ. Однак, для досягнення антивірусного ефекту необхідні досить великі кількості пептиду і, оскільки, пептид має досить погану біодоступність при оральному призначенні, досить малий час напіврозкладу, с його виробництво у великих об'ємах залишається досить дорогим, ціль винаходу полягає у внутрішньоклітинній (3 імунізації з використанням пептиду, який є похідним др41, шляхом генотерапії.
Винахідники вперше клонували послідовності, що кодують 1-20 5 ІКЕ5Б-МЕО-Саззеце (ІКЕ5: Сайт внутрішньорібосомального проникнення; МЕО: Ген стійкості до неоміцину) ретровірусного вектору МРІМ (порівняй Фігура 1, Ніїаіпдег ей аІ,, Нит. Сепе Тпег. 9 (1998) 33-42). Для стимулювання секреції Т-20, з со одного боку, пептид експресується безпосередньо за сигнальним пептидом людського рецептору Ге) низькоспорідненого нереального фактору росту (І МОЕК Репзе еї а). Нитап Сепе Тпегару 8 (1997) 1815) (Конструкти М85 і Ме86), і з іншого боку був вибраний конструкт, який містить кодуючи послідовності о мембранотранслокаційного сигналу (тів) похідного фактору росту фібробласту Капосі (амінокислоти 43-58 в тіз со протеїні; Коіаз, М., ЮОопапце, 9.Р., Тап, 2., Піп, М.7. Маї ВіоїесппоЇї. 16, 370-375 (1998)) у фреймі 120 3о (порівняй конструкти М89 і МОО на Фігурі 1). Використовуючи ці конструкти, продукували ретровірусні вектори в шляхом трансфекції клітин Ріоепіх |Огідпапі, Р., Кіпвеїа, Т., Мепсагеїїї, А. еї а). Сапсег Кевз. 58, 14-19 (1998)), і надосадкову рідину використовували для інфікування клітин Т-хелперів лінії РМ-1 (Вош-Набрів, О.С. еї аї., У. Мігої. 68 6006-6013 (1994)). В якості контролю використовували МРІМ вектор, який містив ген « стійкості до неоміцину, в якості чужорідного гену. Після відбору 5418, культуральну масу інфікували ВІЛ-1, З який одержували з провірусних клонів Мі 4-3 |Адаспі, А., СепдеІтап Н.Е., Коепід, 5., Боїкв, Т., МУШеу, К., с Карзоп, А. 8 Магпіп, М.А., У. Мігої. 59 284-291 (1986))| або МІ 4-3/СЕР |ММеїКег, К., Наїтіз, М., Сагаеї, В. 5
Із» Кгайзвіїсн, Н.О. ., МігоіЇ. 72, 8833-8840 (1998)). Ці два клони відрізняються наступним, у випадку Мі 4-3/5ЕР, замість пеї протеїну експресуеться протеїн з зеленою флуоресценцією (СЕР), так що реплікацію ВІЛ-1 можна аналізувати виходячи з продукування р24 антигену і/або шляхом проточної цитометрії. Всупереч усьому, в експресії 7-20 пептиду використовується згадані вище ретровірусні векторні конструкти, що, однак, не і призводить до антивірусної активності будь якого типу.
Ге | З використанням цих конструктів була клонована послідовність, що кодує, інтнегрін-зв'язуючий КОЮ пептид у фреймі з областю, що кодує 1-20. Продукування з використанням цих конструктів грунтувалось на припущені, що о КО основа може підтримувати секрецію пептидів на мембрані клітини. Однак, навіть з КОЮ, що секретує 7-20
Ге»! 20 пептид (порівняй Фігуру 1, М86), все ж спостерігалось відновлення ВіІЛ-реплікації. В межах контексту представленого винаходу, неочікувано було встановлено, що продукування р24 і поширення Мі 4-3/5ЕР може со значно зменшуватись, якщо експресується злитий протеїн, який на додаток до амінотермінального др41 пептиду, містить трансмембранний анкер приєднаний карбокситермінально через гнучкий лінкер. В цьому контексті, термін "др41 пептид" означає фрагмент др41 протеїну ВІЛ або його фрагмент, варіант або мутант. 59 Наприклад, було встановлено, що продукування р24 можна зменшити більше ніж в десять в другій ступені
ГФ) раз, якщо РМ-1 перетворюється ретровірусним вектором, який експресує злитий протеїн, в якому 7-20 т С-термінально через гнучкий пептидний лінкер з'єднаний з трансмембранним пептидом (мембрано закріпляючий домен, М5О) (порівняй Фігуру 1, М87), де злитий протеїн має послідовність показану на ЗЕО ІЮО МО: 2. во Об'єктом представленого винаходу є нуклеотидна послідовність загальної формули б5 в БР РІ- Ніде МО - 2, ш ній н-їй поаначає У анець нешнатидчо! гпослідаяності, ні поаначає У йржць нухлітидної пехслідовнеєті. тар фрагмент, що коду сибнальння пептид, вир обичовлює певно виспрасапзного лептиду у ендоппалвмагазний ретинол, "Ег сррагяент, що кадус фрагнлетт дра гротежу ВІЛ сркеренаїнно БІЛ-Т, вкнія містить стсмент з гелтвд павторнаванану обіпаюєти, "Ме фрсапеннт, со кодує тренсмезйранний анкар маьерачнога Претеїну тапу-і1, і "Нора" фрагмент. ще ходує лосгдавність прітеїну, який є гнучкиви пінкерн, що 'єдкУє г'яптидм, Що Кедуються "в: "МС.
Послідовність, що кодує сигнальний пептид, є похідною людських неімунногенних протеїнів, що переважно вибирають з групи, що містить послідовності, які кодують сигнальні пептиди клітинно-мембранних протеїнів, таких як, наприклад, (людський) рецептор низькоспорідненого нереального фактору росту (ІМОЕК), рецептор інтерлейкіну-2 (І--2К) і рецептору гранулоцитмакрофаг колонійстимулюючого фактору (ЗМ-С5ЕК).
В якості тренсмембранних анкерів мембранного протеїну типу-1 (тобто, мембранного протеїну, чий М-кінець розташований зовні і С-кінець розташований всередині клітини), використовуються протеїни, чиї цитоплазматичні домени будуть видалені, з одержання будь яких небажаних передач сигналу через протеїн. сч
Виходячи з попередніх досліджень, це можна пояснити тим, що з експресованих областей не проявляється Го) трансдукція сигналу, і вони не олігомеризують з іншими подібними мембранними протеїнами і таким чином опосередковано впливають на функції клітини. Переважно, розглядаються пептиди з групи, що містить трансмембранну область І МОЕК або СОЗ34. Нуклеотидна послідовність, переважно, містить як М2О нуклеотидну послідовність, що кодує ці трансмембранні анкери і/або нуклеотидну послідовність, що кодує фрагменти з со видаленим цитоплазматичним доменом. (се)
Згідно з винаходом, можливе використання в якості гнучких лінкерів всіх гнучких пептидів, які здатні гнучко з'єднувати др41 пептид і трансмембранний анкер, таких як, наприклад, петля імуноглобуліну б (Ід), Ф лінкер людського Р-глікопротеїну |С.А. Нгусупа еї аї., Віоспетізігу 37 13660-13673 (1998)) С-термінальний с лінкер людського реплікаційного протеїну А (АзКРА; сії. О.М. дасобрз еї аї., 9). Віотої. ММК14, 321-331 (1999), і лінкер паратироїд гормон-залежного протеїну ІМ. МУеїдіег ег а. РЕВ5 ЇІей. 444, 239-244 (1999)). Лінкер, - переважно, має довжину до 30 амінокислот. Таким чином, нуклеотидна послідовність приведеної вище формули згідно з винаходом містить область в нуклеотидній послідовності, що кодує такий лінкер, переважно, петлю Ідс, що відповідає нуклеотидам 1636-1683 на ЗЕО ІЮ МО: 1. «
Як вже згадувалось, РІ кодує пептид (позначений як др41 пептид), який відповідає послідовності частини з 70 ВІЛ-др41 -протеїну (порівняй ЗЕО І МО: 4, включаючи др4ї1 протеїн ВІЛ квазівидів (плакований)), який с вибирають з області, яка включає дві гептад повторювані області (порівняй позиції амінокислот 539-589 і :з» 622-662 в ЗЕО ІО МО: З і 4). В цьому контексті "ВІЛ" включає всі типи ВІЛ, особливо ВІЛ-1. В цьому контексті, наприклад, очікується, що використання ВІЛ-2 др41 пептиду буде призводити до перехресної реактивності з
ВІЛ-1 і навпаки. - 75 др41 Пептиди, що кодуються РІ, переважно, мають мінімальну довжину в 28 амінокислот, так що РІ включає принаймні 84 нуклеотида. В межах контексту представленого винаходу, зокрема, в якості РІ використовується (ее) послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує амінокислотну послідовність представлену в ЗЕО ІО МО: 2 з позиції со 31 до 66 (відповідає пептиду 1-20), переважно, послідовність представлена в ЗЕО ІЮ МО: 1 для нуклеотидів з 1528 до 1635. Відповідно до особливого втілення, пептид, що кодується РІ, має максимальну довжину 40
Ге) 50 амінокислот, що відповідає максимальній довжині в 120 основ кодуючої області РІ. со Згідно з особливим втіленням, нуклеотидна послідовність загальної формули "ЗР-РІ-Ніпде- МБО" має послідовність приведену в 5ЗЕО ІЮ МО: 1 з нуклеотидами з 1438 до 1773, які кодують злитий протеїн приведений в ЗЕО І МО: 2.
Наступним об'єктом винаходу є злитий протеїн, що кодується в кожному випадку за допомогою приведених вище векторів/нуклеотидних послідовностей, загальної формули
ГФ) МН»-вр-й-піпде-тва-СООН,
ГФ я щкій ян; "Яна аканта льний епнайч ць лпратвну 60 б5
"сон газяачає кярЯсконтермиальний кнець приутеїне, "Бр" сьсчвльниВ "н1тнд, ЯКНй обжмовпює перянен: вкслрераданого петьду ж вндоплазьатичний ретикелим, г Фрагмент пра вбротагїну ОБЧУП, оямий овмкоплать осепавнт о гептяд павлдрнаваою сблактна, "тат трансювчнювньий анкер мембранного гірсиетну яигу-, 7170 пп пратоїн, який є гнучким лінюєрам. щіз з'єднує лептиди "Й? | "па".
Що стосується визначень "зр", "й", "піпде" і "тва", посилання стосуються приведених вище визначень елементів послідовності "ЗР", ТІ, "Ніпде" і "М50О", де структура і функціональні характеристики злитого протеїну і/або окремих часткових областей протеїну вже загадувались.
Згідно з переважним втіленням, злитий протеїн має амінокислотну послідовність приведену в ЗЕО ІЮ МО: 2. 79 Злитий протеїн (Ч-піпде-тва") одержують шляхом відщіплення сигнального пептиду, що має послідовність приведену в ЗЕО ІЮО МО: 2 з позиції 31 до позиції 111.
Також в об'єм винаходу включені гомологи і/або варіанти і фрагменти згаданого вище злитого протеїну, які по суті мають ту ж саму фармакологічну і біологічну дію і/або імуногенність і нуклеотидні послідовності, що кодують ці гомологи і фрагменти. В цьому контексті, терміни "гомологи" і "варіанти" означають послідовності, які відрізняються від природних послідовностей або відомих на сьогоднішній день частин послідовностей, замінами, делеціями або вставками індивідуальних амінокислот. В цьому контексті, зокрема, включені гомологи, варіанти і фрагменти протеїну приведеного в ЗЕО ІЮО МО: 2 і нуклеотидних послідовностей, що їх кодують.
Винахід в подальшому стосується вектору, якій містить одну з приведених вище нуклеотидних послідовностей. Вектор, переважно, є ретровірусним вектором. с
Згідно з переважним втіленням винаходу, вектор має структуру приведену на Фігурі 1. Вектор-вставка г) загальної формули "ЗР-РІ-Ніпде-М5О", що кодує злитий протеїн згідно з винаходом, переважно, має нуклеотидну послідовність приведену в ЗЕО ІЮО МО: 1. приклад згаданого вище вектору депонований в Німецьку колекцію мікроорганізмів і культур клітин |Сегтап СоїІесіоп ої Місгоогдапізтв апа Сеїї Сийигез (05М72), Мазспегодег
Мед 1Б, 38124 ВгипемісК, Сегтапу, 11.11.1999, під номером ОМ 13139) згідно з Будапештською угодою. со
Згаданий вище вектор можна використати для іп міго трансфекування Т-лімфоцитів і кровотворних стволових Ге клітин, після чого ці трансфековані клітини можна призначати ВІЛ-інфікованим пацієнтам для терапевтичного лікування. Вектори згідно з винаходом є особливо придатними для використання (тобто, для безпосереднього (іп Ме мімо) використання) при генотерапевтичному лікуванні ВІЛ-інфікованих пацієнтів, в цьому випадку переважними є ду вектори націлені на тропізм, тобто, особливо по відношенню до ВІЛ націлених клітин (СО4-- клітин). Винахід в
Зо подальшому стосується генотерапевтичного медикаменту, який містить згаданий вище вектор. -
Винахід пояснюється далі більш детально, з посиланням на приклади.
Приклади
Клітини і віруси «
Неї а-, 293- і Рпоепіх-Атрпо клітини культивували в середовищі Дульбекко (Оцрессоз Меаішт) (сбірсо,
Раївієу, Сгеаї Вгійїаіп), яке доповнювали 1095 ембріональної бичачої сироватки (ЕС5; бідта, Оеівзеппоїеп, в) с Сегтапу). РМ-1 культивували в КРМІ з 1095 ЕС5. Вірусні клони МІ 4-3/5ЕР, МІ 4-Зепу-СЕР і рМІ 4-3 вже були "» описані вище. (МІ 4-3: МУУеїКег К., Наїтіз, М., Сагаеї, В. 5: Кгацйевіїст, Н.О. 9. МігоЇї. 72, 8833-8840 (1998); " МІ 4-2епу-СЕР: Не, у. Спеп, М., БРаглап, М., еї аїЇ. Майте 385, 645-649) (1997). Використовували псевдотипований епу-вільний клон Мі 4-Зепу-ЗЕР, плазміди ром, рамМШепуКРЇ, реМІШепуУмИО2 |і ремМШепуУНнхХВ2 (УмеїКег, В., Наїтіз, М., Сагаеї, В. 5 Кгайзвіїст, Н.С. У. Мігої. 72, 8833-8840 (1998); Не, 9. - Спеп, М., Раглап, М., еї а). Маїшге 385, 645-649) (1997); моп Іаег, О., Тротвоп, 5., Моді, В., еї аї., 9.
Го! Міго! 72, 1424-1430(1998)). Ці плазміди містять М5М (вірус вазикулярного стоматиту) Г-КкДНК або кКДНК ВІЛ оболонки Д-Р, Ми2 і НХВО. ік Інфікуючи реплікаційно-відповідні віруси одержували шляхом трансфекування Мі 4-3 або МІ4-3/3ЕР-ОМА
Ге» 20 клітин Неїа. Псевдотиповані реплікаційно-невідповідні ВІЛ одержували шляхом спів-трансфекування рМІ 4-Зепу-ОРР і одного з оболонко-зкспресуемих плазмідів 293-клітин. Ретровірусні вектори вводили в РПоепіх со вмісні клітини, як описано вище |Сгідпапі, Е., Кіпзеїа, Т., Мепсагеїї, А., еї аі., Сапсег Кезв. 58, 14-19 (1998)).
Клонування ретровірусних векторів
М85 і М86: Послідовність, що кодує сигнальний пептид людського рецептору низькоспорідненого 22 нереального фактору росту (МОБ) ампліфікували за допомогою іолімеразної ланцюгової реакції (РСЕ)
ГФ) починаючи з вектору ді М використовуючи іраймери ЗРМон- (Послідовність ІЮ МО: 5) і 5РВаІ2 (ЗЕО ІЮО МО: 6), вставляючи Мої! сайт зозщеплення в 5" кінець і ВаїІЇ сайт розщеплення в 3' кінець (а! М: Рензе еї аї!., Нитап де Сепе ТПегару 8 (1997) 1815). Послідовність, що кодує злиття-інгібуючий пептид ампліфікували Мі 4-3 використовуючи праймер Т20Ваін- (М85; 5ЕО ІО МО: 7) або Т20Вді-КОО- (М86; ЗЕО ІЮ МО: 8) і Т2ОНіпа- (ЗЕО 60 МО р: 9), вставляючи ВоїЇ сайт розщеплення в 5' кінець і НіпаїїЇ сайт розщеплення в 3' кінець. Фрагменти зшивали у вектор рВіпезстгірік5 дигеруючи Мої і НіпапІ.
М87 і М88: Трансмембранний домен 4 МОгК ампліфікували а М використовуючи 5' праймер, який також містив піпде-область мишачого Ід важкого ланцюгу і Ваді сайт розщеплення (піпдеТМВаїн; 5ЕО ІЮО МО: 10), і З" праймер ретровірусного вектору ЯМ (03-; послідовність ІЮ МО: 11). Цей РСК продукт вставляли разом з бо сигнальним пептидом РСЕВ продукту (ЗРМОоНн/ЗРВОЇ-) у вектор рВішевстгірік5 (після дигерування Моїй і Ніпай, і послідовність 120 (виходячи з МІ 4-3) надалі вставляли як РСК продукт, який містить фланкуючий Ваї|! сайт розщеплення (використовуючи РСК праймер Т20Ваїк, що відповідає ЗЕО ІЮ МО: 7 (дивіться вище) і Т20Ва1-, що відповідає 5ЕО ІЮ МО: 12).
М89 ї МО90: Послідовність, що кодує 120, з мембранотранслокаційний сигнал (тів) ампліфікували Мі 4-3 використовуючи праймер КОО-Т20Мої- (М89; ЗЕО ІЮО МО: 13) або Т20Мої- (М90; 5ЕО ІО МО: 14) і Т20тівНіпа- (ЗЕБЕО ІО МО: 15). В 5 праймері присутній Мої сайт розщеплення і в 3 праймер містить Ніпаї сайт розщеплення. Мембранотранслокаційний сигнал (тів) вводили в З праймер. Продукт вводили в вектор рВіпезстірікЗ дигеруючи Моїй і НіпагйІЇ. 70 Гени, що кодують різні Т20-злиті протеїни переносили як Мої! х Ніпаїїї фрагменти разом з роїо-ІКЕЗ з 5Е1
МІМ у вектор МРІМ |Ніїаіпдег е( аі., Нит. Сепе Тег. 9 (1998) 33-42).
Інфікування ВІЛ
РМ-1-клітини (5х10"в 0,5мл) інфікували від 3000 до 6000 ТСІОБО (5095 доза інфікування культури тканини) реплікаційно-відповідного ВІЛ. Для аналізу р24, продукуючи середовище замінювали на 5 день, клітини 75 інкубували протягом ночі, і досліджували вільні від клітин залишки використовуючи р24 ЕГІ5А, як описано вище
ІКопмаїїпКа, .)., І Щегеї, М.А., УУеїКег, К., еф аїЇ. 9. МігоІї. 69, 7180-7186 (1995) Результати досліджень приведені на Фіг.2.
Зараження МІ 4-3/5ЕР контролювали в моменти, що визначали виходячи з значень аналізу проточної цитомерії РАСзсаїїриг (Вескіоп БОіскіпзоп, Неїдеїрего, Септапу). Для цієї цілі, РМ-1 (з і без векторів МРІМ м М85-М87) інфікували 0,01 тої (тої: багаторазове інфікування; характеризується інфікуванням клітини рядом вірусних часточок) МІ-4/ЗЕР і аналізували за допомогою проточної цитометрії на 4, 7 і 10 день. Відсоток
ЕСЕР-позитивних і, таким чином, ВІЛ-інфікованих клітини показаний на Фіг. З по порядку різних культур.
Визначений поріг становить приблизно 0,195 позитивних клітин.
Визначення механізму дії Га
Визначення стадії, на якій відбувається інгібування реплікації ВІЛ, "один цикл" інфікування проводили клоном МІ 4-Зепу-ЗЕР. Клон МІ 4-Зепу-ЗЕР, завдяки мутації в епу-гені, є реплікаційно-дефектним і експресує і9)
СЕР замість пеї. Для одержання інфекційних віріонів, вектор псевдотипували з оболонками трьох різних ВІЛ клонів (НХВ, МИ2 ії ОБК-Р) ї з б протеїном вірусу васкулярного стоматиту (МОМ б). НХВ класифікували як
Т-тропічний, з використанням співрецептору СХСКА, в той час як МИ2 і ОК-РЇ. є М-тропічними і використовують ее) ССВ-5. епм-Гени згаданих останніх двох клонів клонували безпосередньо з первинного ВІЛ ізоляту (Не, у., Спеп,
У., Раггап, М. еї а). Майте 385, 645-649 (1997)). Ці ВІЛ псевдотипи здатні до "одного циклу" інфікування, що о не поширюється на всю культуру. В РМ1/М87 клітинах (тобто, в клітинах, які трансфекуються вектором згідно з Ге»! винаходом, що кодує мембрано-анкерований 1-20 злитий протеїн) інфікування інгібується більш сильно завдяки трьом різним ВІЛ оболонкам, з коефіцієнтом 15-30, ніж у випадку М5М-З псевдотипованих, в яких не со спостерігається суттєве інгібування (порівняй Фігура 4). -
Тільки подібний вільному 17-20 пептиду (порівняй МУМУйПа СТ. ей а). Ргос. Май. Асай. Зсі. ОБА 91, 9770-9774), генетично експресований мембрано-анкерований Т-20 злитий протеїн також інгібує проникнення, що медіюється оболонками різних ВІЛ варіантів. Ці результати ясно показують, що вірусінгібуюча стадія « проникнення вірусу медіюється ВІЛ-епу, що дуже ймовірно є приводом для мембранного злиття. Всі стадії
ВІЛ-реплікації не впливають на подальше проникнення вірусу. - с Ці дослідження показали, що мембрано-анкерований др41 пептид ефективно інгібує реплікацію ВІЛ, в той час з» як чистий др41 пептид є не ефективним. п
Claims (21)
1. Нуклеотидна послідовність, що характеризується загальною формулою со р - ЕІ - Ніпде - МО, Ге) в якій "БР"-фрагмент, що кодує сигнальний пептид, який обумовлює перенос експресованого пептиду у іа ендоплазматичний ретикулум, со "БІ'-фрагмент, що кодує фрагмент др4і1 протеїну ВІЛ (переважно ВІЛ-1), який містить сегмент з гептадповторюваною областю (Періай гереаб, "М50р"-фрагмент, що кодує трансмембранний анкер мембранного протеїну типу-1, і "Ніпде"-фрагмент, що кодує послідовність протеїну, який є гнучким лінкером, що з'єднує пептиди, що кодуються "РІ" і "МО". (Ф,
2. Нуклеотидна послідовність за пунктом 1, що характеризується тим, що 5Р є послідовністю, яка кодує ка сигнальний пептид рецептора фактора росту нервів з низькою афінністю (ЇМО), рецептора інтерлейкіну-2 (1--2К) і рецептора колонієстимулюючого фактора гранулоцитів та макрофагів (ЗМ-С5ЕК). 60
3. Нуклеотидна послідовність за пунктом 1 або 2, що характеризується тим, що МО є послідовністю, яка кодує трансмембранний анкер І МОСК, або СОЗ4, або їх фрагмент.
4. Нуклеотидна послідовність за пунктами 1-3, що характеризується тим, що Ппіпде є послідовністю, яка кодує лінкер імуноглобуліну (з (дб) людського Р-глікопротеїну, людського реплікаційного протеїну А і протеїну, зв'язаного з паратиреоїдним гормоном. 65
5. Нуклеотидна послідовність за пунктами 1-4, що характеризується тим, що РІ кодує амінокислотну послідовність, приведену в ЗЕО ІЮО МО: 2 з позиції 31 до позиції 66.
6. Нуклеотидна послідовність за пунктом 5, що характеризується тим, що вона включає послідовність, приведену в ЗЕО ІЮО МО: 1 з нуклеотиду 1528 до нуклеотиду 1635.
7. Нуклеотидна послідовність за пунктами 1-6, що характеризується тим, що вона включає послідовність, приведену в ЗЕО ІЮ МО: 1 з нуклеотиду 1528 до нуклеотиду 1773.
8. Вектор, що характеризується тим, що він містить нуклеотидну послідовність за пунктами 1-7.
9. Вектор за пунктом 8, що характеризується тим, що він є ретровірусним вектором.
10. Вектор за пунктом 9, що характеризується тим, що його структура приведена на Фігурі 1.
11. Вектор за пунктом 10, що характеризується тим, що він містить нуклеотидну послідовність, приведену в у/0 ЗЕЯО МО: 1.
12. Вектор за пунктом 11, депонований під номером О5М 13139.
13. Застосування вектора згідно з пунктами 8-12 для іп міго трансфекування Т-лімфоцитів і кровотворних стовбурових клітин.
14. Застосування вектора згідно з пунктами 8-12 для генотерапевтичного лікування пацієнтів, інфікованих
75. ВІЛ.
15. Генотерапевтичний медикамент, що містить вектор за пунктами 8-12.
16. Застосування Т-лімфоцитів або кровотворних стовбурових клітин, які трансфековані вектором згідно з пунктами 8-12, для генотерапевтичного лікування пацієнтів, інфікованих ВІЛ.
17. Генотерапевтичний медикамент, що містить Т-лімфоцити або кровотворні стовбурові клітини, які 2о трансфековані вектором за пунктами 8-12.
18. Протеїн загальної формули "зр-ї-піпде-тза", який кодується нуклеотидною послідовністю за пунктами 1-7, в якому "вр", "і", "піпде" і "тва" мають значення, вказані в пункті 1.
19. Протеїн згідно з пунктом 18, що характеризується тим, що він має послідовність, приведену в 5ЕО ІЮ МО: 2. с
20. Протеїн загальної формули "Ті-піпде-тва", який кодується нуклеотидною послідовністю згідно з пунктами 1-7, в якому "і", "піпде" і "тва" мають значення, вказані в пункті 1. (8)
21. Протеїн згідно з пунктом 20, що характеризується тим, що він має послідовність, приведену в 5ЕО ІЮ МО: 2 з позиції 31 до позиції 111. с (Се) (22)
с м. -
с . и? -І (ее) се) б 50 ІЧ е) Ф) іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19957838A DE19957838C2 (de) | 1999-11-25 | 1999-11-25 | Gentherapie von HIV-Infizierten durch Expression von Membran-verankerten gp41-Peptiden |
| PCT/EP2000/011733 WO2001037881A2 (de) | 1999-11-25 | 2000-11-24 | Gentherapie von hiv-infizierten durch expression von membran-verankerten gp41-peptiden |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA78968C2 true UA78968C2 (en) | 2007-05-10 |
Family
ID=7931006
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002065189A UA78968C2 (en) | 1999-11-25 | 2000-11-24 | Nucleotide sequence for gene therapy of hiv-infected patients by expression of membrane-anchored gp41 peptides |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7790870B1 (uk) |
| EP (1) | EP1234044B1 (uk) |
| JP (1) | JP2003529339A (uk) |
| KR (1) | KR100840430B1 (uk) |
| CN (1) | CN1425072A (uk) |
| AT (1) | ATE412757T1 (uk) |
| AU (1) | AU3004101A (uk) |
| BR (1) | BR0015942A (uk) |
| CA (1) | CA2392468A1 (uk) |
| CZ (1) | CZ20021764A3 (uk) |
| DE (2) | DE19957838C2 (uk) |
| EA (1) | EA006434B1 (uk) |
| ES (1) | ES2315247T3 (uk) |
| HK (1) | HK1049186B (uk) |
| HU (1) | HUP0203518A2 (uk) |
| NO (1) | NO20022468L (uk) |
| PL (1) | PL358785A1 (uk) |
| SK (1) | SK7132002A3 (uk) |
| UA (1) | UA78968C2 (uk) |
| WO (1) | WO2001037881A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA200204710B (uk) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10257770A1 (de) * | 2002-12-10 | 2004-07-08 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Expression von Peptiden des zytoplasmatischen Bereiches von HIV-gp41 zur Hemmung viraler Infektionen |
| CA2548483A1 (en) * | 2003-08-26 | 2005-03-10 | Uwe Fiebig | Induction of antiviral neutralizing antibodies in humans and animals |
| WO2005056804A1 (ja) * | 2003-12-11 | 2005-06-23 | Takara Bio Inc. | レセプターの機能の調節方法 |
| GB0422439D0 (en) * | 2004-10-08 | 2004-11-10 | European Molecular Biology Lab Embl | Inhibitors of infection |
| JP2008528480A (ja) * | 2005-01-24 | 2008-07-31 | イエダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | 免疫調節用ＨＩＶ−１ｇｐ４１融合ペプチド |
| EP4397748A1 (en) * | 2021-08-30 | 2024-07-10 | Kanglin Biotechnology (Hangzhou) Co., Ltd. | Gene sequence construct for gene therapy for hiv infection |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4935233A (en) * | 1985-12-02 | 1990-06-19 | G. D. Searle And Company | Covalently linked polypeptide cell modulators |
| US5851828A (en) * | 1991-03-07 | 1998-12-22 | The General Hospital Corporation | Targeted cytolysis of HIV-infected cells by chimeric CD4 receptor-bearing cells |
| ES2202368T3 (es) * | 1994-09-08 | 2004-04-01 | Vision 7 Gmbh | Hibridos vectoriales retrovirales y su uso para la transferencia genica. |
| WO1996030523A2 (en) * | 1995-03-31 | 1996-10-03 | Hans Wolf | Antigen presentation system based on retrovirus-like particles |
| FR2762851B1 (fr) * | 1997-04-30 | 1999-10-29 | Inst Nat Sante Rech Med | Construction et expression d'enveloppe chimerique de retrovirus par des vecteurs et compositions pharmaceutiques les contenant |
| WO2000045833A1 (en) * | 1999-02-02 | 2000-08-10 | Uab Research Foundation, The | Hiv drug resistance system |
-
1999
- 1999-11-25 DE DE19957838A patent/DE19957838C2/de not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-11-24 SK SK713-2002A patent/SK7132002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2000-11-24 CZ CZ20021764A patent/CZ20021764A3/cs unknown
- 2000-11-24 JP JP2001539494A patent/JP2003529339A/ja active Pending
- 2000-11-24 ES ES00990613T patent/ES2315247T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-24 CA CA002392468A patent/CA2392468A1/en not_active Abandoned
- 2000-11-24 KR KR1020027006648A patent/KR100840430B1/ko active IP Right Grant
- 2000-11-24 CN CN00818655A patent/CN1425072A/zh active Pending
- 2000-11-24 BR BR0015942-5A patent/BR0015942A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-11-24 AT AT00990613T patent/ATE412757T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-11-24 UA UA2002065189A patent/UA78968C2/uk unknown
- 2000-11-24 PL PL00358785A patent/PL358785A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-11-24 EP EP00990613A patent/EP1234044B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-24 AU AU30041/01A patent/AU3004101A/en not_active Abandoned
- 2000-11-24 HU HU0203518A patent/HUP0203518A2/hu unknown
- 2000-11-24 US US10/148,064 patent/US7790870B1/en active Active
- 2000-11-24 DE DE50015431T patent/DE50015431D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-11-24 EA EA200200598A patent/EA006434B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-11-24 WO PCT/EP2000/011733 patent/WO2001037881A2/de active Application Filing
-
2002
- 2002-05-24 NO NO20022468A patent/NO20022468L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-06-12 ZA ZA200204710A patent/ZA200204710B/xx unknown
-
2003
- 2003-02-24 HK HK03101383.0A patent/HK1049186B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP0203518A2 (en) | 2003-02-28 |
| CZ20021764A3 (cs) | 2003-02-12 |
| AU3004101A (en) | 2001-06-04 |
| EA006434B1 (ru) | 2005-12-29 |
| KR100840430B1 (ko) | 2008-06-20 |
| EP1234044A2 (de) | 2002-08-28 |
| PL358785A1 (en) | 2004-08-23 |
| WO2001037881A9 (de) | 2002-11-07 |
| DE19957838A1 (de) | 2001-06-13 |
| DE50015431D1 (de) | 2008-12-11 |
| DE19957838C2 (de) | 2002-11-21 |
| EA200200598A1 (ru) | 2002-12-26 |
| NO20022468D0 (no) | 2002-05-24 |
| HK1049186B (zh) | 2009-02-27 |
| BR0015942A (pt) | 2002-08-27 |
| WO2001037881A3 (de) | 2001-12-13 |
| CA2392468A1 (en) | 2001-05-31 |
| WO2001037881A2 (de) | 2001-05-31 |
| EP1234044B1 (de) | 2008-10-29 |
| US7790870B1 (en) | 2010-09-07 |
| CN1425072A (zh) | 2003-06-18 |
| JP2003529339A (ja) | 2003-10-07 |
| HK1049186A1 (en) | 2003-05-02 |
| NO20022468L (no) | 2002-07-22 |
| ES2315247T3 (es) | 2009-04-01 |
| ZA200204710B (en) | 2003-05-15 |
| ATE412757T1 (de) | 2008-11-15 |
| KR20020060752A (ko) | 2002-07-18 |
| SK7132002A3 (en) | 2002-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10226538B2 (en) | Methods and compositions relating to improved lentiviral vectors and their applications | |
| CA2148934C (en) | Targetable vector particles | |
| US9260725B2 (en) | Methods and compositions relating to improved lentiviral vector production systems | |
| US5643756A (en) | Fusion glycoproteins | |
| WO1989005349A1 (en) | Method of combating viral infections | |
| DK175613B1 (da) | Virusvektor, der koder for et glycoprotein fra det virus, der er ansvarligt for AIDS, vaccine, der omfatter virusvektoren eller glycoproteinet, samt antistof mod glycoproteinet | |
| CN112442514B (zh) | 慢病毒包装载体系统、慢病毒及其构建方法、试剂盒 | |
| EP2078726A1 (en) | Secretable HIV entry inhibitory peptides for therapy of HIV infection | |
| UA78968C2 (en) | Nucleotide sequence for gene therapy of hiv-infected patients by expression of membrane-anchored gp41 peptides | |
| Pfeiffer et al. | Effects of signal peptide exchange on HIV-1 glycoprotein expression and viral infectivity in mammalian cells | |
| CN114478713B (zh) | 一种cmv包膜蛋白包装慢病毒载体及其应用 | |
| US6712612B1 (en) | Safe and stable retroviral helper cell line and related compositions and methods | |
| AU622129B2 (en) | Vector for the expression of proteins of the hiv-2 virus, one of the casual agents of aids, cell culture infected or transformed by this vector, proteins obtained, vaccine and antibodies obtained | |
| JPH01500962A (ja) | ウィルスベクター及びエイズ原因ウィルスのｆ蛋白質をコードするｄｎａ組換え体、該ベクターにより感染された細胞培養物、上記蛋白質の製造方法、得られた蛋白質、ワクチン及び得られた抗体 | |
| EP0502179A1 (en) | Enhanced expression of viral proteins in drosophila cells | |
| US20060067948A1 (en) | Viral vectors | |
| EP1130089A1 (en) | Composition comprising membrane virus subviral target and fusion particles and vaccine comprising said composition | |
| HASELTINE et al. | RETROVIRUSES IN HUMAN LYMPHOMA/LEUKEMIA, M. MIWA ET AL.(EDS.), JAPAN SCI. SOC. PRESS, TOKYO/VNU SCIENCE PRESS, UTRECHT, PP. 187-196, 1985 | |
| Harboring | Efficient Gene Delivery to Quiescent Interleukin-2 (IL-2) | |
| CA2229515A1 (en) | Expression of a foamy virus envelope protein |