UA78215C2 - Preparation possessing anticancer, detoxifying, and radioprotection activities - Google Patents
Preparation possessing anticancer, detoxifying, and radioprotection activities Download PDFInfo
- Publication number
- UA78215C2 UA78215C2 UA2004010639A UA2004010639A UA78215C2 UA 78215 C2 UA78215 C2 UA 78215C2 UA 2004010639 A UA2004010639 A UA 2004010639A UA 2004010639 A UA2004010639 A UA 2004010639A UA 78215 C2 UA78215 C2 UA 78215C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- drug
- dna
- npk
- mice
- preparation
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 6
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title abstract 2
- 230000001950 radioprotection Effects 0.000 title abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 48
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 102000008297 Nuclear Matrix-Associated Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010035916 Nuclear Matrix-Associated Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 210000000299 nuclear matrix Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 45
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 12
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 10
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 10
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- SGDBTWWWUNNDEQ-UHFFFAOYSA-N Merphalan Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 2
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 2
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 229950004157 sarcolysin Drugs 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 2
- 241000881711 Acipenser sturio Species 0.000 description 1
- 208000001395 Acute radiation syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 206010068142 Radiation sickness syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- LQNGOIZVRFNQLO-UHFFFAOYSA-N methyl 7,8-dihydroxy-6-[2-(8-hydroxy-5,7-dimethoxy-4,9-dioxobenzo[f][1]benzofuran-2-yl)ethyl]-1-oxoisochromene-3-carboxylate Chemical compound O=C1C2=C(O)C(OC)=CC(OC)=C2C(=O)C2=C1OC(CCC=1C=C3C=C(OC(=O)C3=C(O)C=1O)C(=O)OC)=C2 LQNGOIZVRFNQLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід відноситься до медицини, зокрема, фармакології, і може бути використаний в клінічній практиці для 2 лікування злоякісних новоутворень.The invention relates to medicine, in particular, pharmacology, and can be used in clinical practice for the treatment of malignant neoplasms.
Сучасна медицина має у своєму розпорядженні досить великий арсенал лікарських препаратів для хіміотерапії пухлин. В основному хіміотерапевтичні засоби представлені групою цитостатичних препаратів, серед яких найбільш поширеними й ефективними є алкілувальні цитостатики типу циклофосфану, хлорбутину і сарколізину. Через більш низьку цитостатичну, антипроліферативну активності в меншому ступені 70 застосовуються препарати з групи антиметаболітів (азатіоприн, фторурацил та ін.). Природні протипухлинні препарати рослинного (колхіцин та ін.) і бактеріального (руброміцин та ін.) походження мають також обмежене застосування через високу токсичність і вузький терапевтичний спектр дії (лікування деяких різновидів пухлин, переважно з екзофітним ростом). В даний час на фармацевтичному ринку протипухлинних препаратів відсутні лікарські засоби, що мають комплексну фармакологічну дію, а саме, мають власну протипухлинну активність у 72 поєднанні з радіопротекторною і антитоксичною дією при проведенні комплексної хіміотерапії, переважно, з використанням алкілувальних цитостатиків і рентгенотерапії пухлин.Modern medicine has at its disposal a rather large arsenal of drugs for chemotherapy of tumors. Basically, chemotherapeutic agents are represented by a group of cytostatic drugs, among which the most common and effective are alkylating cytostatics such as cyclophosphane, chlorbutin, and sarcolysin. Due to lower cytostatic, antiproliferative activity, 70 drugs are used to a lesser extent from the group of antimetabolites (azathioprine, fluorouracil, etc.). Natural anticancer drugs of plant (colchicine, etc.) and bacterial (rubromycin, etc.) origin also have limited use due to high toxicity and a narrow therapeutic spectrum of action (treatment of some types of tumors, mainly with exophytic growth). Currently, there are no drugs on the pharmaceutical market of antitumor drugs that have a complex pharmacological effect, namely, have their own antitumor activity in combination with radioprotective and antitoxic effects during complex chemotherapy, mainly with the use of alkylating cytostatics and X-ray therapy of tumors.
Відоме використання алкілувальних цитостатиків типу циклофосфану, що мають широкий терапевтичний спектр, для терапії найбільш поширених злоякісних новоутворень: раку легень, раку молочної залози, сарком, раку яєчників та ін. М.Д. Машковский, Лекарственнье средства, ч.І, М., Медицина, 1993, с.498-499; с.501-5021. Недоліком даних препаратів є їхня висока токсичність і пригнічувальний вплив на лейкопоез.The use of cyclophosphane-type alkylating cytostatics, which have a wide therapeutic spectrum, is known for the treatment of the most common malignant neoplasms: lung cancer, breast cancer, sarcoma, ovarian cancer, etc. M.D. Mashkovsky, Medicines, part I, M., Medicine, 1993, p. 498-499; pp. 501-5021. The disadvantage of these drugs is their high toxicity and suppressive effect on leukopoiesis.
Розвиток лейкопенії є небезпечним ускладненням в терапії злоякісних новоутворень цитостатиками, тому що створює загрозу розвитку кровотеч, зниження імунологічної резистентності і поширення суперінфекції. Практично будь-яка інфекція на тлі проведення цитостатичної терапії, наприклад, циклофосфаном чи сарколізином, може викликати септичні ускладнення, що практично не піддаються лікуванню сучасними антибактеріальними с препаратами, тому що відсутні клітинні і гуморальні механізми природної резистентності через пригнічення Ге) цитостатиками.The development of leukopenia is a dangerous complication in the therapy of malignant neoplasms with cytostatics, because it creates a threat of bleeding, a decrease in immunological resistance and the spread of superinfection. Virtually any infection against the background of cytostatic therapy, for example, with cyclophosphane or sarcolysin, can cause septic complications that are practically not amenable to treatment with modern antibacterial drugs, because there are no cellular and humoral mechanisms of natural resistance due to suppression of He) by cytostatics.
Зараз найбільш ефективним способом при лікуванні солідних пухлин є у рентгенотерапія (Е. Браунвальд,Currently, the most effective method in the treatment of solid tumors is x-ray therapy (E. Braunwald,
Внутренние болезни, 2т., М., Медицина, 1993, с.501-505), однак вона має також значний процент ускладнень, насамперед зв'язаних з імуносупресією, пригніченням білого паростка крові і розвитком суперінфекції. оInternal diseases, 2 vols., M., Medicine, 1993, p.501-505), but it also has a significant percentage of complications, primarily associated with immunosuppression, inhibition of white blood cells and the development of superinfection. at
Найбільш близьким до препарату, що заявляється, прототипом, є препарат "Дезоксинат", що представляє «- собою натрієву сіль двоспиральної дезоксирибонуклеїнової кислоти, одержувану з молочка осетрових риб, частково деполімеризовану за допомогою ультразвуку до молекулярної маси 2,7-4,0 х10?дальтон. Вміст ДНК у см препараті більше 9095, як домішки в препараті присутні РНК (від З до 5905) і білки негістонового типу, зв'язані (ее) з ДНК (ФС 42-3924-00). Препарат має антитоксичну і радіопротекторну дію і використовується як стимулятор лейкопоезу при хіміопроменевій терапії, що проводиться онкологічним хворим. Препарат випускається у виді - 0,595 розчину і призначений для підшкірного і внутрішньом'язового введення з розрахунку 75мг активної речовини незалежно від віку хворого.The closest to the claimed drug, the prototype, is the drug "Desoxinate", which is "a sodium salt of double-helical deoxyribonucleic acid, obtained from the milk of sturgeon fish, partially depolymerized with the help of ultrasound to a molecular weight of 2.7-4.0 x10? color blind The content of DNA in the cm preparation is more than 9095, as impurities in the preparation there are RNA (from C to 5905) and proteins of the non-histone type, bound (ee) to DNA (FS 42-3924-00). The drug has an antitoxic and radioprotective effect and is used as a stimulator of leukopoiesis during chemoradiation therapy, which is carried out by cancer patients. The drug is produced in the form of a 0.595 solution and is intended for subcutaneous and intramuscular administration at the rate of 75 mg of the active substance, regardless of the patient's age.
Недоліками "Дезоксинату" є: « дю - ДНК, що міститься в "Дезоксинаті, не має видової специфічності, гетерологічна і тому може викликати -о алергійні і пірогенні реакції, що виявляються у виді підвищення температури. З цієї причини препарат не може с бути введений внутрішньовенно через можливий розвиток анафілактичного шоку, що часто спостерігається при :з» внутрішньовенних інфузіях видонеспецифічних біологічних субстанцій. - "Дезоксинат не має власної протипухлинної активності і тому застосовується лише як допоміжний лейкостимулюючий препарат для профілактики мієлодепресій при хіміопроменевій терапії онкологічних хворих. -1 395 При цьому, лейкостимулюючий ефект розвивається повільно і стійкі зміни спостерігаються Через 4-10 днів.The disadvantages of "Desoxinate" are: "du - DNA contained in "Desoxinate" does not have species specificity, is heterologous and therefore can cause allergic and pyrogenic reactions, manifested in the form of an increase in temperature. For this reason, the drug cannot be administered intravenously due to the possible development of anaphylactic shock, which is often observed with intravenous infusions of species-specific biological substances. - "Desoxinate does not have its own antitumor activity and is therefore used only as an auxiliary leukostimulating drug for the prevention of myelosuppression during chemoradiation therapy of cancer patients. -1 395 At the same time, the leukostimulating effect develops slowly and permanent changes are observed after 4-10 days.
Радіопротекторний ефект "Дезоксинату носить непрямий характер і спрямований на корекцію лейкопенії і (ее) стимуляцію імунітету, що розвиваються при гострій променевій хворобі ІІ-ІЇ ступеня тяжкості. юю Технічною задачею даного винаходу є створення препарату з видоспецифічної сировини, що має протипухлинну, антитоксичну і радіопротекторну дію. - 70 Поставлена технічна задача досягається пропонованим препаратом на основі фрагментованного до сп 200-2000 пар нуклеотидів нуклеопротеїдного комплексу, виділеного з плаценти людини, який містить, у Уомас.: двоспіральну ДНК 40-80, білки ядерного матриксу 20-60.The radioprotective effect of "Desoxinate" is indirect and is aimed at correcting leukopenia and (ee) stimulation of immunity, which develop in acute radiation sickness of the II-II degree of severity. The technical task of this invention is to create a preparation from species-specific raw materials that has antitumor, antitoxic and radioprotective properties - 70 The technical task is achieved by the proposed drug based on a nucleoprotein complex fragmented to sp 200-2000 pairs of nucleotides, isolated from the human placenta, which contains, in Uomas.: double-helical DNA 40-80, nuclear matrix proteins 20-60.
ГФ! Препарат, що заявляється, одержують у такий спосіб.GF! The claimed drug is obtained in the following way.
Плаценту від здорових породілей, перевірену на гепатит, ВІЛ-інфекцію і сифіліс, заморожують і зберігають о при -202С7 в окремому стерильному поліетиленовому пакеті, супроводжуваному санітарно-гігієнічним паспортом, до моменту одержання препарату (умовна назва "Панаген"), але не більше 1 року з моменту заготівлі. 6о Після накопичення необхідної кількості, плаценту розморожують протягом 5-6 годин, промивають, гомогенизують у 10ММ трис-НСІЇ буфері (рН 7,5), що містить їмМ ЕДТА. В одержаний гомогенат додають додецилсульфат натрію до кінцевої концентрації 295 та інкубують при 659С протягом 6-24 годин. До одержаного лізату додають хлорид натрію до кінцевої концентрації 2М та інкубують протягом 3-12 годин при 6520. Після інкубації лізат центрифугують при 9000х9 протягом 10 хвилин. До одержаного супернатанту додають рівний бо об'єм ацетону, охолодженого до ї102С, для осадження нуклеопротеїдного комплексу (НПК). Одержаний НПК -Д-Placenta from healthy parturients, tested for hepatitis, HIV infection and syphilis, is frozen and stored at -202С7 in a separate sterile polyethylene bag, accompanied by a sanitary and hygienic passport, until the moment of receiving the drug (provisional name "Panagen"), but no more than 1 year from the moment of procurement. 6o After accumulating the necessary amount, the placenta is thawed for 5-6 hours, washed, homogenized in 10 mM Tris-NSII buffer (pH 7.5) containing 1 mM EDTA. Sodium dodecyl sulfate is added to the resulting homogenate to a final concentration of 295 and incubated at 659C for 6-24 hours. Sodium chloride is added to the resulting lysate to a final concentration of 2M and incubated for 3-12 hours at 6520. After incubation, the lysate is centrifuged at 9000x9 for 10 minutes. An equal volume of acetone, cooled to 1102С, is added to the resulting supernatant to precipitate the nucleoprotein complex (NPK). Received NPC -D-
тричі промивають охолодженим ацетоном і 9бе етиловим спиртом для видалення незв'язаних з ДНК низькомолекулярних білків і пептидів. Очищений НПК розчиняють при 652С в 10мМ трис-НСЇІ буфері (рН 7,5), що містить 1ММ ЕДТА, потім розчин центрифугують при 9000х9 протягом 10 хвилин, супернатант фільтрують крізь скляний фільтр із діаметром пір 120мкм і піддають його дії ультразвуку з частотою 11-44кГц для фрагментаціїwashed three times with cooled acetone and 9be ethyl alcohol to remove low-molecular-weight proteins and peptides not bound to DNA. The purified NPK is dissolved at 652C in 10mM Tris-HCII buffer (pH 7.5) containing 1Mm EDTA, then the solution is centrifuged at 9000 x 9 for 10 minutes, the supernatant is filtered through a glass filter with a pore diameter of 120μm and subjected to ultrasound with a frequency of 11- 44kHz for fragmentation
НПК. Глибину фрагментації контролюють за допомогою електрофореза і по досягненні необхідного діапазону в. межах 200-2000 пар нуклеотидів процес впливу ультразвуком зупиняють. Розчин фрагментованого НПК центрифугують при. 9000х9 протягом 10 хвилин, потім додають двократний об'єм охолодженого 962 етилового спирту. Осаджений НПК промивають 702 етиловим спиртом і після його висушування одержують препарат, що 70 заявляється.NPC The depth of fragmentation is controlled using electrophoresis and when the required range is reached. within 200-2000 pairs of nucleotides, the process of exposure to ultrasound is stopped. The fragmented NPK solution is centrifuged at 9000x9 for 10 minutes, then add twice the volume of cooled 962 ethyl alcohol. The precipitated NPK is washed with 702 ethyl alcohol and after it is dried, the claimed preparation is obtained.
Вихід цільового продукту складає 0,3-0,595 від вихідної сировини, вміст основної речовини (нуклеопротеїдного комплексу) складає 095,0-99,595. Молекулярна маса нуклеопротеїдного комплексу - 1,5х10бдальтон. Перед використанням, препарат розчиняють у фармацевтично прийнятному розчиннику до вмісту основної речовини 0,5-4,095. Як фармацевтично прийнятний розчинник використовують переважно фосфатну чи трис-НСІ буферну суміш, фізіологічний розчин.The yield of the target product is 0.3-0.595 of the raw material, the content of the main substance (nucleoprotein complex) is 095.0-99.595. The molecular weight of the nucleoprotein complex is 1.5x10 bdalton. Before use, the drug is dissolved in a pharmaceutically acceptable solvent to a content of the main substance of 0.5-4.095. As a pharmaceutically acceptable solvent, phosphate or Tris-HCl buffer mixture, physiological solution are used.
Визначальними суттєвими відмінностями препарату, що заявляється, від препарату-прототипу є таке: - препарат, що заявляється, містить нативний, видоспецифічний фрагментований нуклеопротеїдний комплекс, що складається з д.с.ДНК і зв'язаних з нею білків ядерного матриксу, при співвідношенні: д.с.ДНК - 40-8095, білки 20-6095, що дозволяє розширити спектр терапевтичної активності препарату: останній має власну протипухлинну активність у поєднанні з прямою радіопротекторною і антитоксичною дією (лейкостимулюючою); - за рахунок визначеної глибини фрагментації нуклеопротеїдного комплексу (200-2000 пар нуклеотидів) препарат, що заявляється, можна віднести до нативних препаратів, що містять повний набір фрагментів геному людини і, відповідно, при терапії онкологічних захворювань у людини препарат має замісну, рецепторно-опосередковану, генно-репаративу функцію, а також анаболічну і трофічну. У прототипі ступінь сч фрагментації вище (молекулярно-масовий розподіл знаходиться в інтервалі 2,7-4,0 х1Обдальтон), що робить Го) препарат більш віддаленим від нативних препаратів, що містять фрагменти геному, до того ж біологічна сировина не видоспецифічна, гетерологічна і, відповідно, при терапії онкологічних захворювань у людини функція препарату буде лише анаболічною чи трофічною; ю - препарат, що заявляється, через видоспецифічність і гомологічність біологічного матеріалу (плацента людини) може вводитися внутрішньовенно, завдяки чому лейкостимулюючий ефект при сполученні з «- хіміотерапією цитостатиками розвивається швидше і більш виражений.The defining essential differences of the claimed drug from the prototype drug are as follows: - the claimed drug contains a native, species-specific fragmented nucleoprotein complex consisting of d.s.DNA and proteins of the nuclear matrix associated with it, in the ratio: d.s.DNA - 40-8095, proteins 20-6095, which allows to expand the spectrum of therapeutic activity of the drug: the latter has its own antitumor activity in combination with direct radioprotective and antitoxic action (leukostimulating); - due to the determined depth of fragmentation of the nucleoprotein complex (200-2000 pairs of nucleotides), the claimed drug can be attributed to native drugs containing a complete set of fragments of the human genome and, accordingly, in the treatment of oncological diseases in humans, the drug has a substitute, receptor-mediated , gene-reparative function, as well as anabolic and trophic. In the prototype, the degree of fragmentation is higher (the molecular mass distribution is in the range of 2.7-4.0 x 1 Obdalton), which makes the drug more distant from native drugs containing genome fragments, besides, the biological raw material is not species-specific, heterologous and , accordingly, in the treatment of oncological diseases in humans, the function of the drug will be only anabolic or trophic; yu - the claimed drug, due to the species specificity and homology of the biological material (human placenta) can be administered intravenously, thanks to which the leukostimulating effect when combined with chemotherapy with cytostatics develops faster and is more pronounced.
Відомі препарати з плаценти людици, застосовувані для стимуляції процесів регенерації раневих поверхонь с різної етіології а також використовувані для лікування виразкової хвороби шлунка, переважно, у виді (ее) екстрактів для внутрішньом'язових і підшкірних ін'єкцій Машковский М Д. Лекарственнье средства. Ч.І, Ч.ІІ. - 12-е изд., перераб., испр. и доп. - М., 1996). Однак, з доступних джерел не виявлено відомостей про препарат, - аналогічний тому, що заявляється, який має вищезгадану комплексну фармакологічну активність.Known preparations from the human placenta, used to stimulate the regeneration of wound surfaces of various etiologies and also used for the treatment of gastric ulcer, mainly in the form of (ee) extracts for intramuscular and subcutaneous injections. Mashkovskii M. D. Medicines. Ch.I, Ch.II. - 12th ed., revised, ed. and additional - M., 1996). However, no information was found from the available sources about the drug - similar to the one claimed, which has the above-mentioned complex pharmacological activity.
Протипухлинна активність препарату, що заявляється, досліджена на моделі іп мімо. Лінійноспецифичну пухлину ГА-1, підтримувану в асцитній формі на мишах лінії А/Зп, трансплантували внутрішньом'язово (10 5 « дю пухлинних клітин) сингенним мишам А/5Зп. Через б днів цим самим мишам протягом 11 днів вводили - внутрішньочеревинно препарат, що заявляється, одержаний із плаценти людини, і НПК, одержаний з печінки с мишей лінії СВА; як контроль використовували фізіологічний розчин. Експериментальні тварини були розділені :з» на групи: 1-а група. Контрольні миші, введення фізіологічного розчину. 2-а група. Експериментальні миші, введення НПК із плаценти людини (доза 0,5мг на мишу щодня). - 15 З-я група. Експериментальні миші, введення НПК із печінки мишей лінії СВА (доза 0,5мг на мишу щодня). со з - сл 000 оиахоов работ 0 Ріохоб 0 Ріоєомо 0 РіохооThe antitumor activity of the claimed drug was studied on the ip mimo model. Lineage-specific tumor HA-1, maintained in ascites form in mice of the A/Zp line, was transplanted intramuscularly (10 5 " of tumor cells) into syngeneic A/5Zp mice. After b days, these same mice were injected intraperitoneally for 11 days with the claimed drug obtained from the human placenta, and NPK obtained from the liver of mice of the SBA line; physiological saline was used as a control. Experimental animals were divided into groups: 1st group. Control mice, saline injection. 2nd group. Experimental mice, introduction of NPC from the human placenta (dose 0.5 mg per mouse daily). - 15 th group. Experimental mice, introduction of NPK from the liver of mice of the SBA line (dose of 0.5 mg per mouse daily). Sat, Sun - Sat 000 Oiahoov rabot 0 Riohob 0 Rioeomo 0 Riohoo
С веотврнатоюю Реаоов | гаосол 0 Резсосов й ен НН о 1 об'єм пухлини на 21 день після щеплення пухлини; іме)With veotvrnatoya Reaoov | gaosol 0 Rezsosov and EN NN about 1 tumor volume on the 21st day after tumor inoculation; name)
Як видно з представлених даних, препарат, що заявляється, з плаценти людини і НПК із печінки мишей 60 мають протипухлинну дію, однак, протипухлинна дія препарату, що заявляється, має видоспецифічність і більш виражена.As can be seen from the presented data, the claimed drug from the human placenta and the NPK from the liver of mice 60 have an antitumor effect, however, the antitumor effect of the claimed drug is species-specific and more pronounced.
Радіопротекторна активність препарату, що заявляється, досліджена на моделі іп мімо. 4-х місячних самок мишей СВА опромінювали на гамма-установці дозою опромінення У8Орад. 4 групи мишей опромінювали одночасно в одному контейнері. Кожна група складалася з 10 тварин: 65 1. 1-а група. Контрольні миші. 2. 2-а група. Миші, яким за 30 хвилин до опромінення внутрішньочеревинно вводили по 1мг НПК, одержаного з печінки мишей лінії СВА.The radioprotective activity of the claimed drug was studied on the ip mimo model. 4-month-old female SVA mice were irradiated at a gamma installation with a dose of U8Orad radiation. 4 groups of mice were irradiated simultaneously in one container. Each group consisted of 10 animals: 65 1. 1st group. Control mice. 2. 2nd group. Mice that 30 minutes before irradiation were injected intraperitoneally with 1 mg of NPK obtained from the liver of mice of the SBA line.
З. З-я група. Миші, яким через 30 хвилин після опромінення внутрішньочеревинно вводили по 1мг НПК, одержаного з печінки мишей лінії СВА, а на другий і третій день після опромінення - в дозі 0,5мг. 4. 4-а група. Миші, яким через 30 хвилин після опромінення внутрішньочеревинно вводили по 1мг НПК, одержаного з плаценти людини (композиція, що заявляється), а на другий і третій день після опромінення - в дозі 0О,5мг.Z. 3rd group. Mice that, 30 minutes after irradiation, were injected intraperitoneally with 1 mg of NPK obtained from the liver of mice of the SBA line, and on the second and third day after irradiation - in a dose of 0.5 mg. 4. 4th group. Mice that 30 minutes after irradiation were injected intraperitoneally with 1 mg of NPC obtained from the human placenta (composition claimed), and on the second and third day after irradiation - in a dose of 0.5 mg.
Одержані результати представлені в таблиці 2. вв ртнертитя 5 юю юю ів 751 вл | лою | то в | яю | юю в юю юю 751 лю | юю юю) вв яю юю в ло во во сч 6101 ю| юю о в уюію 86,11 юю 7» | 7 1ю|фю|ю 7» юю ю зо я | 1 ю|ю|» е- 7» вів 7» | 1ю|»| в сч в) во) вою соThe obtained results are presented in table 2. lard | then in | I am | yuyu in yuyu yuyu 751 liu | yuyu yuyu) vvy yuyu yuyu v lo vo vo sch 6101 yu| yuyu o in yuyuyu 86,11 yuyu 7» | 7 1ю|фю|ю 7" юю ю зо я | 1 yu|yu|» e- 7" led 7" | 1у|»| in sch c) voi so
З Табл.2 видно, що препарат, що заявляється, має як пряму радіопротекторну дію (введення до ї- опромінення), так і вторинну радіопротекторну дію, спрямовану на зниження пострадіаційних біологічних ефектів (введення препарату після опромінення). Радіопротекторні властивості препарату, що заявляється, залежать від видової специфічності НПК і максимальні при використанні для його виділення гомологічної біологічної « сировини.It can be seen from Table 2 that the claimed drug has both a direct radioprotective effect (administration before irradiation) and a secondary radioprotective effect aimed at reducing post-radiation biological effects (administration of the drug after irradiation). The radioprotective properties of the claimed preparation depend on the species specificity of the NPK and are maximal when using homologous biological "raw material" for its selection.
Антитоксичні властивості препарату, що заявляється, досліджені на моделі відновлення кількості - с лейкоцитів, що одержували цитостатик - циклофосфан. а Методика "» Мишам-самцям лінії А/5п внутрішньочеревинно однократно вводили циклофосфан (ЦФ) у дозі 200мг/кп Двом групам мишей (по 12 у кожній) за добу до ЦФ і після нього щодня внутрішньочеревинно вводили розчини НПК з плаценти людини і НПК із печінки мишей лінії А/Зп по 5Омкг на мишу. На 3, 5 і 7 добу після введення ЦФ по 4 -і миші з кожної групи умертвляли декапітацією, забирали кров і підраховували кількість лейкоцитів у камері бо Горяєва. Як контроль (вихідна кількість лейкоцитів) використовували інтактних мишей такої же статі та віку.The antitoxic properties of the claimed drug were studied on the model of recovery of the number of leukocytes that received cytostatic cyclophosphan. a Methodology "» Male mice of the A/5p line were injected intraperitoneally with cyclophosphane (CF) once at a dose of 200 mg/kg. Two groups of mice (12 each) were injected intraperitoneally with solutions of NPC from the human placenta and NPC from the human placenta one day before and after of the livers of mice of the A/Zp line at 5 Ωkg per mouse. On the 3rd, 5th, and 7th day after the introduction of CF, 4 mice from each group were killed by decapitation, blood was collected and the number of leukocytes was counted in the Goryaev chamber. As a control (initial number of leukocytes) used intact mice of the same sex and age.
Результати ко 2 миші з 12, що одержували тільки ЦФ, загинули на 5-й день після введення ЦФ. У групах мишей, що у 20 одержували, крім ЦФ, нуклепротеїдні комплекси, загибелі не було.Results: 2 mice out of 12 that received CF alone died on day 5 after CF administration. There were no deaths in the groups of mice that received, in addition to CF, nucleoprotein complexes.
На Фігурі видно, що на З добу після введення ЦФ кількість лейкоцитів у крові тварин була різко зниженою і сл складала близько 690 від кількості лейкоцитів у інтактних мишей. При цьому введення НПК не перешкоджало зниженню кількості лейкоцитів, тобто, не перешкоджало дії цитостатика. Однак, їхнє відновлення істотно прискорилося на тлі введення НПК з печінки мишей: кількість лейкоцитів на 7 добу вже перевищувала середні значення інтактного контролю, тоді як у мишей, що не одержували НПК, вона складала близько 7095 від вихідного. НПК з плаценти людини мав трохи менший ефект, однак значно перевищував показники у о контрольних тварин, які не одержували препарату, що заявляється. іме) Таким чином, препарат, що заявляється, має антитоксичну дію, а саме, стимулює лейкопоез після його пригнічення цитостатиками. Антитоксичні властивості препарату, що заявляється, також залежать від видової 60 специфічності і максимальні при використанні для виділення НПК гомологічної біологічної сировини.The figure shows that on the 3rd day after the introduction of CF, the number of leukocytes in the blood of animals was sharply reduced and was about 690 times the number of leukocytes in intact mice. At the same time, the introduction of NPK did not prevent the decrease in the number of leukocytes, that is, it did not prevent the action of the cytostatic agent. However, their recovery was significantly accelerated against the background of the introduction of NPK from the liver of mice: the number of leukocytes on the 7th day already exceeded the average values of the intact control, while in mice that did not receive NPK, it was about 7095 from the original. PPC from the human placenta had a slightly smaller effect, but significantly exceeded the indicators in o control animals that did not receive the claimed drug. име) Thus, the claimed drug has an antitoxic effect, namely, it stimulates leukopoiesis after its suppression by cytostatics. The antitoxic properties of the claimed drug also depend on species specificity and are maximal when used for the isolation of homologous biological raw materials.
Винахід ілюструється наступними конкретними прикладами одержання препарату, що заявляється.The invention is illustrated by the following specific examples of obtaining the claimed drug.
Приклад 1Example 1
Плаценту (250г) розморожують протягом 5 годин, потім гомогенізують у гомогенізаторі з 250мл 10ММ трис-НСІ буфера (рН 7,5), що містить 1ММ ЕДТА. До одержаного гомогенату додають додецилсульфат натрію до 65 кінцевої концентрації 290мас. та інкубують при 6593 протягом 24 годин. До одержаного лізату додають хлорид натрію до кінцевої концентрації 2М та інкубують 12 годин при 652С. Після інкубації лізат центрифугують приThe placenta (250 g) is thawed for 5 hours, then homogenized in a homogenizer with 250 ml of 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 1 mM EDTA. Sodium dodecyl sulfate is added to the obtained homogenate to 65% of the final concentration of 290 mass. and incubated at 6593 for 24 hours. Sodium chloride is added to the resulting lysate to a final concentration of 2M and incubated for 12 hours at 652C. After incubation, the lysate is centrifuged at
9000х9 протягом 10 хвилин. До одержаного супернатанту додають рівний об'єм ацетону, охолодженого до -109С, для осадження нуклеопротеїдного комплексу (НПК). Одержаний НПК тричі промивають охолодженим ацетоном і 962 етиловим спиртом для видалення незв'язаних із ДНК низькомолекулярних білків і пептидів.9000x9 for 10 minutes. An equal volume of acetone, cooled to -109C, is added to the resulting supernatant to precipitate the nucleoprotein complex (NPK). The obtained NPK is washed three times with cooled acetone and 962 ethyl alcohol to remove low-molecular-weight proteins and peptides not bound to DNA.
Очищений НПК розчиняють при 652С в 1л 10мММ трис-НСІ буфера (рН 7,5), що містить ТММ ЕДТА, потім розчин центрифугують при 9000х9 протягом 10 хвилин, супернатант фільтрують крізь скляний фільтр із діаметром пір 120мкм і діють на нього ультразвуком у режимі 11кГц для фрагментації НПК. Розчин фрагментованого НПК центрифугують при 9000х49 протягом 10 хвилин, потім додають двократний об'єм охолодженого 962 етилового спирту. Осаджений НПК промивають 702 етиловим спиртом і після його висушування одержують препарат, що 70 заявляється, на основі нуклеопротеїдного комплексу зі ступенем фрагментації 200 пар нуклеотидів такого складу, у Фомас.: днк во, білки ядерного матриксу 20.The purified NPK is dissolved at 652C in 1 liter of 10mM Tris-HCI buffer (pH 7.5) containing TMM EDTA, then the solution is centrifuged at 9000x9 for 10 minutes, the supernatant is filtered through a glass filter with a pore diameter of 120μm and treated with ultrasound in the 11kHz mode for NPC fragmentation. The fragmented NPK solution is centrifuged at 9000x49 for 10 minutes, then a double volume of cooled 962 ethyl alcohol is added. The precipitated NPK is washed with 702 ethyl alcohol and after drying, the claimed preparation is obtained, based on a nucleoprotein complex with a degree of fragmentation of 200 pairs of nucleotides of this composition, in Fomas.: DNA, proteins of the nuclear matrix 20.
Вихід цільового продукту складає 0,37905, вміст основної речовини - 98,5905.The yield of the target product is 0.37905, the content of the main substance is 98.5905.
Приклад 2Example 2
Плаценту (250г) розморожують протягом б годин, потім гомогенізують у гомогенізаторі з 250мл 10ММ трис-НСІ буфера (рН 7,5), що містить 1ММ ЕДТА. До одержаного гомогенату додають додецилсульфат натрію до кінцевої концентрації 29омас. та інкубують при 659 протягом б годин. До одержаного лізату додають хлорид натрію до кінцевої концентрації 2М та інкубують З години при 652С. Після інкубації лізат центрифугують при 9000х9 протягом 10 хвилин. До одержаного супернатанту додають рівний об'єм ацетону, охолодженого до -02С, для осадження НПК. Одержаний НПК тричі промивають охолодженим ацетоном і 962 етиловим спиртом для видалення незв'язаних із ДНК низькомолекулярних білків і пептидів. Очищений НПК розчиняють при 652 в с 1л10ММ трис-НСЇІ буфера (рН 7,5), що містить 1мМ ЕДТА, потім розчин центрифугують при 9000х9 протягом 10. (9 хвилин, супернатант фільтрують крізь скляний фільтр із діаметром пір 120мкм і діють на нього ультразвуком у режимі 44кГц для фрагментації НПК. Розчин фрагментованого НПК центрифугують при 9000 хд протягом 10 хвилин, потім додають двократний об'єм охолодженого 962 етилового спирту. Осаджений НПК промивають 709 ою 20 етиловим спиртом і після його висушування одержують препарат, що заявляється, на основі НПК зі ступенем фрагментації 2000 пар нуклеотидів, який містить, у Уомас.: «- днк 4096, с білки ядерного матриксу 6095. (ее)The placenta (250 g) is thawed for two hours, then homogenized in a homogenizer with 250 ml of 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 1 mM EDTA. Add sodium dodecyl sulfate to the resulting homogenate to a final concentration of 29%. and incubated at 659 for b hours. Sodium chloride is added to the resulting lysate to a final concentration of 2M and incubated for 3 hours at 652C. After incubation, the lysate is centrifuged at 9000 x 9 for 10 minutes. An equal volume of acetone, cooled to -02С, is added to the obtained supernatant for precipitation of NPK. The obtained NPK is washed three times with cooled acetone and 962 ethyl alcohol to remove low-molecular-weight proteins and peptides not bound to DNA. The purified NPK is dissolved at 652 V with 1 L of 10 mM Tris-HCII buffer (pH 7.5) containing 1 mM EDTA, then the solution is centrifuged at 9000 x 9 for 10. (9 minutes), the supernatant is filtered through a glass filter with a pore diameter of 120 μm and treated with ultrasound in the 44kHz mode for NPC fragmentation. The fragmented NPC solution is centrifuged at 9000 x for 10 minutes, then a double volume of cooled 962 ethyl alcohol is added. The precipitated NPC is washed with 709% 20% ethyl alcohol and after drying, the claimed NPC-based preparation is obtained with a degree of fragmentation of 2000 pairs of nucleotides, which contains, in Uomas.: "- DNA 4096, nuclear matrix proteins 6095. (ee)
Зо Вихід цільового продукту складає 0,390, вміст основної речовини - 9595. ї-The yield of the target product is 0.390, the content of the main substance is 9595.
Приклад ЗExample C
Плаценту (250г) розморожують протягом 5 годин, потім гомогенізують у гомогенізаторі з 250мл 10ММ трис-НСІ буфера (рН 7,5), що містить 1ММ ЕДТА. До одержаного гомогенату додають додецилсульфат натрію до « кінцевої концентрації 29омас. та інкубують при 6593 протягом 12 годин. До одержаного лізату додають хлорид 50 натрію до кінцевої концентрації 2М та інкубують б годин при 6520. Після інкубації лізат центрифугують при З с 9000х9 протягом 10 хвилин. До одержаного супернатанту додають рівний об'єм ацетону, охолодженого до :з» -09С, для осадження НПК. Одержаний НПК тричі промивають охолодженим ацетоном і 962 етиловим спиртом для видалення незв'язаних із ДНК низькомолекулярних білків і пептидів. Очищений НПК розчиняють при 659 в 1л 10мММ трис-НСЇ буфера (рН 7,5), що містить ТММ ЕДТА, потім розчин центрифугують при 9000х9 протягом 10 -І хвилин, супернатант фільтрують крізь скляний фільтр із діаметром пір 120мкм і діють на нього ультразвуком у режимі 22кГц для фрагментації НПК. Розчин фрагментованого НПК центрифугують при 9000 хд протягом 10 бо хвилин, потім додають двократний об'єм охолодженого 962 етилового спирту. Осаджений НПК промивають 702 км етиловим спиртом і після його висушування одержують препарат, що заявляється, на основі НПК зі ступенем цу фрагментації 1000 пар нуклеотидів такого складу, у Уомас.: с днк бо, білки ядерного матриксу 40. 5 Вихід цільового продукту складає 0,595, вміст основної речовини - 99,590.The placenta (250 g) is thawed for 5 hours, then homogenized in a homogenizer with 250 ml of 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 1 mM EDTA. Sodium dodecyl sulfate is added to the resulting homogenate to a final concentration of 29%. and incubated at 6593 for 12 hours. Add 50% sodium chloride to the resulting lysate to a final concentration of 2M and incubate for 6520 hours. After incubation, the lysate is centrifuged at 9000 x 9 for 10 minutes. An equal volume of acetone, cooled to -09C, is added to the resulting supernatant to precipitate NPK. The obtained NPK is washed three times with cooled acetone and 962 ethyl alcohol to remove low-molecular-weight proteins and peptides not bound to DNA. The purified NPK is dissolved at 659 in 1 L of 10 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing TMM EDTA, then the solution is centrifuged at 9000 x 9 for 10 minutes, the supernatant is filtered through a glass filter with a pore diameter of 120 μm and is sonicated in 22kHz mode for PC fragmentation. The fragmented NPK solution is centrifuged at 9000 rpm for 10 minutes, then a double volume of cooled 962 ethyl alcohol is added. The precipitated NPK is washed with 702 km of ethyl alcohol, and after drying, the claimed preparation is obtained, based on NPK with a degree of fragmentation of 1000 pairs of nucleotides of the following composition, in Uomas.: with DNA, proteins of the nuclear matrix 40. 5 The yield of the target product is 0.595, the content of the main substance - 99.590.
Використання пропонованого препарату дозволить, у порівнянні з прототипом, розширити спектр (Ф) фармацевтичної активності, тому що препарат, що заявляється, має власну протипухлинну активність, а такожThe use of the proposed drug will allow, in comparison with the prototype, to expand the spectrum (F) of pharmaceutical activity, because the claimed drug has its own antitumor activity, as well as
Ге знизити побічні ускладнення хіміопроменевої терапії при сукупному застосуванні, за рахунок антитоксичних і радіопротекторних властивостей препарату, що заявляється.It is possible to reduce the side complications of chemoradiation therapy with combined use, due to the antitoxic and radioprotective properties of the claimed drug.
Claims (1)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003115627/15A RU2234323C1 (en) | 2003-05-27 | 2003-05-27 | Preparation eliciting antitumor, antitoxic and radioprotecting effect |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA78215C2 true UA78215C2 (en) | 2007-03-15 |
Family
ID=33414496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2004010639A UA78215C2 (en) | 2003-05-27 | 2004-01-28 | Preparation possessing anticancer, detoxifying, and radioprotection activities |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2234323C1 (en) |
| UA (1) | UA78215C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2002840A2 (en) * | 2006-01-16 | 2008-12-17 | Shurdov, Mikhail Arkadievich | Method for treating oncological diseases |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2322264C1 (en) * | 2006-07-27 | 2008-04-20 | Михаил Аркадьевич Шурдов | Method for treating diseases |
| RU2345792C2 (en) * | 2007-04-03 | 2009-02-10 | Михаил Аркадьевич Шурдов | Method of cancer treatment |
| RU2498821C1 (en) * | 2012-04-10 | 2013-11-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (Новосибирский государственный университет, НГУ) | Method for stimulating endogenous production of cytokines and hemopoietins |
-
2003
- 2003-05-27 RU RU2003115627/15A patent/RU2234323C1/en active IP Right Revival
-
2004
- 2004-01-28 UA UA2004010639A patent/UA78215C2/en unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2002840A2 (en) * | 2006-01-16 | 2008-12-17 | Shurdov, Mikhail Arkadievich | Method for treating oncological diseases |
| EP2002840A4 (en) * | 2006-01-16 | 2011-07-13 | Shurdov Mihail Arkadievich | Method for treating oncological diseases |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2234323C1 (en) | 2004-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TW386877B (en) | Antitumour compositions containing taxane derivatives | |
| CZ20023228A3 (en) | Pharmaceutical preparations used for inducing blood vessel-damaging effect | |
| US6720011B1 (en) | Injectable composition for cancer treatment | |
| UA78215C2 (en) | Preparation possessing anticancer, detoxifying, and radioprotection activities | |
| CN110664807B (en) | Pharmaceutical composition with synergistic anti-melanoma efficacy and application thereof | |
| RU94045930A (en) | Proteins, dna, vector, cell, methods of preparing and purification of protein, pharmaceutical composition | |
| WO2010008317A1 (en) | Agent for activating stem cells | |
| RU2484830C1 (en) | Method of treating cadmium radiation injury and method for producing preparation for cadmium radiation injury | |
| DE3344086C2 (en) | ||
| CN110075269A (en) | Murabutide causes to apply in marrow, small intestine and splenic injury protective agents in preparation ionising radiation | |
| RU2240793C1 (en) | Anti-tumor agent | |
| CN106854223A (en) | Mustargen quercetin derivative and its production and use | |
| CN110664817A (en) | Application of hepcidin antagonist LDN193189 and derivatives thereof in preparation of medicines | |
| CN113384574A (en) | Application of levistilide A in preparation of anti-gastric cancer drugs | |
| CN106668061B (en) | A kind of anticancer pharmaceutical composition containing cis-platinum | |
| CN112891341A (en) | Application of GL-V9 and anthracycline antibiotics in preparation of leukemia treatment drug | |
| EP1881838B1 (en) | Antitumor agent on the base of bcg vaccine, method for its preparation and its use | |
| US5939404A (en) | Cancer metastasis inhibitor containing a streptococcus agalactiae Ia type or Ib type surface polysaccharide as a main ingredient | |
| CN114642675B (en) | Application of L-sorbose in preparing medicine for treating tumor | |
| RU2023446C1 (en) | Antimetastatic drug | |
| PL195815B1 (en) | Method of receiving bacteriofage strain featuring increased affinity for eucariotic cells, compounds containing such bacteriofage strain and bacteriofage application | |
| RU2077888C1 (en) | Method of treatment of radiation disease in animals | |
| CN113150067B (en) | GSDME inhibitor and application thereof in prevention and treatment of tumor chemotherapy-induced digestive tract injury | |
| JP2007326814A (en) | Treatment for cancer having resistance to radiotherapy | |
| CS212234B2 (en) | Method of making the immunotherapeutical means against the infection decease uf urine and digesting ways |